JP7054325B2 - 抗菌及び抗ウイルス用組成物 - Google Patents
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Description
アスコフィラム乾燥粉末800gに、50容量%のエタノール水溶液8Lを加え、室温で緩やかに撹拌しながら1時間抽出した。得られた抽出液を遠心管に移し、遠心分離により上澄み液と沈殿物に分けた。この沈殿物を回収し、50容量%のエタノール水溶液8Lを加え、室温で緩やかに撹拌しながら1時間抽出した。得られた抽出液を遠心管に移し、遠心分離により上澄み液と沈殿物に分けた。計2回の抽出及び遠心分離により得られた上澄み液を合わせて吸引ろ過し、ろ液として計約16Lの抽出液を得た。この抽出液を、分画分子量1万の限外ろ過膜(商品名:FB02-VC-FUSO181;ダイセンメンブレンシステムズ社)を用いて限外ろ過し、濃縮液量が5Lになった時点で水5Lを加えてろ過を続け、濃縮液量が再び5Lになった時点で限外ろ過を終了した。濃縮液はロータリーエバポレーターを用いて減圧下、約60℃で濃縮し、次に濃縮物を凍結乾燥して黒褐色粉末状のアスコフィラム・ノドサム抽出物(試作品)約73gを得た。
(1)原材料
1)アスコフィラム・ノドサム抽出物(試作品)
2)1,3-ブタンジオール(和光純薬工業社製)
3)2-エチルヘキシルグリセリルエーテル(LG Household & Healthcare社製)
4)カプリン酸モノグリセリド(商品名:ポエムM-200;理研ビタミン社製)
5)エタノール(和光純薬工業社製)
上記原材料を用いて作製した抗菌及び抗ウイルス用組成物1~6の配合組成を表1に示す。この内、抗ウイルス用組成物1~3は本発明に係る実施例であり、抗ウイルス用組成物4~6は、それらに対する比較例である。
抗菌及び抗ウイルス用組成物1~6を評価するため、これらを検体として下記(1)~(5)の各試験を行った。結果を表2に示す。
ノロウイルスの代替としてFeline calicivirus F-9 ATCC VR-782(ネコカリシウイルス)を試験に用いた。検体各0.1gを量りとり、これに精製水を加えて希釈し100mLに定容した。この溶液1mLにウイルス浮遊液0.1mLを接種し、室温で5分間保存後ウイルス感染価を測定した。測定では、保存後の上記溶液を10倍ずつ階段希釈したものを、6穴プラスチックプレートに増殖したCrFK(ネコ腎臓由来細胞)に0.1mLずつ接種して34℃で1時間吸着した後、これに寒天培地を加えて34℃で3日間培養してプラックを計数することにより、TCID50(50%組織培養感染量)を算出して、試験液1mLあたりのウイルス感染価に換算した。結果は、以下の評価基準に従って記号化した。
○:logTCID50/mL ≦ 2.5 (十分な不活化効果あり)
×:logTCID50/mL > 2.5 (不活化効果弱い)
Escherichia coli NBRC 3972(大腸菌)をSCD液体培地に植菌し、37℃で24時間振とう培養したものを前培養液とし、これを最終濃度が1×105CFU/mLとなるように希釈した。次に、48穴マイクロプレートの各ウェルに、SCD液体培地890μL、希釈した前培養液100μL、及び最終濃度が3600~62.5ppmとなるように100%メタノールで検体を段階希釈した溶液10μLを分注し、37℃で24時間静置培養した。培養後、各ウェル中の菌の生育を液の濁りとして目視で確認し、最小発育阻止濃度(MIC)を求めた。結果は、以下の評価基準に従って記号化した。
○:MIC ≦ 1000ppm (十分な抗菌効果あり)
×:MIC > 1000ppm (抗菌効果弱い)
Aspegillus brasiliensis NBRC 9455(クロカビ)を、ポリソルベート80を0.05質量%の割合で添加した生理食塩水に浮遊させ、約1×108CFU/mLの胞子を含む浮遊液を調製し、この浮遊液から滅菌ガーゼで菌糸を除き、胞子懸濁液を調製した。この胞子懸濁液を最終濃度が1×105CFU/mLになるように希釈した。次に、48穴マイクロプレートの各ウェルに、SCD液体培地890μL、希釈した胞子懸濁液を100μL、及び最終濃度が3600~62.5ppmとなるように100%メタノールで検体を段階希釈した溶液10μLを分注し、25℃で6日間静置培養した。培養後、各ウェル中の菌糸の生育を目視で確認し、最小発育阻止濃度(MIC)を求めた。結果は、以下の評価基準に従って記号化した。
○:MIC ≦ 1000ppm (十分な抗菌効果あり)
×:MIC > 1000ppm (抗菌効果弱い)
検体を100%メタノールにて0.1質量%に希釈した溶液に5×5cmの綿製滅菌ガーゼを5秒間浸漬し、室温でメタノールを完全に除去し、試験布とした。この試験布について、大腸菌に対する抗菌活性をJIS L1902(繊維製品の抗菌性試験方法・抗菌効果)の定量試験法(菌液吸収法)に基づいて測定した。結果は、以下の評価基準に従って記号化した。
○:静菌活性値 ≧ 2.0 (十分な抗菌効果あり)
×:静菌活性値 < 2.0 (抗菌効果弱い)
各検体の1質量%水溶液を調製し、水溶液100μLを直径1cmのパッチテスト用絆創膏で男女各5人の被験者の前腕部に、24時間貼付けた後、皮膚刺激性の有無を評価した。結果は、以下の評価基準に従って記号化した。
○:紅斑を示した被験者が1人以下
×:紅斑を示した被験者が2人以上
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