JP7007364B2 - エストロゲン受容体esr1変異の検出用のマルチプレックス対立遺伝子特異的pcrアッセイ - Google Patents
エストロゲン受容体esr1変異の検出用のマルチプレックス対立遺伝子特異的pcrアッセイ Download PDFInfo
- Publication number
- JP7007364B2 JP7007364B2 JP2019507932A JP2019507932A JP7007364B2 JP 7007364 B2 JP7007364 B2 JP 7007364B2 JP 2019507932 A JP2019507932 A JP 2019507932A JP 2019507932 A JP2019507932 A JP 2019507932A JP 7007364 B2 JP7007364 B2 JP 7007364B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- esr1
- specific
- primer pair
- seq
- primer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/72—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
- C07K14/721—Steroid/thyroid hormone superfamily, e.g. GR, EcR, androgen receptor, oestrogen receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
- G01N2800/7023—(Hyper)proliferation
- G01N2800/7028—Cancer
Description
I.序論
ヒトエストロゲン受容体(ESR1)中の変異の存在を検出するためのマルチプレックスPCRアッセイが提供される。それらの変異は、初回投与された時にはホルモン療法に感受性であったホルモン応答性癌(ESR1陽性および/またはプロゲステロン受容体陽性)を有する癌患者における、ホルモン療法に対する耐性に関連付けられている。これらのアッセイは、非侵襲性のサンプル(例えば血液、血漿、血清、尿等)を使って実施することが可能であり、そのため多数の組織生検を採取することなくホルモン療法中の患者に反復試験を実施することができる。
用語「エストロゲン受容体」、「ER」および「ESR1」は、本明細書中異なって指摘されない限り相互交換可能に用いられる。ESR1はERタンパク質をコードする遺伝子を指すためにも用いることができる。
核酸増幅用のサンプルは、核酸を含む疑いのある任意源から得ることができる。サンプルはホルマリン固定パラフィン包埋組織(FFPET)、組織生検または培養細胞(例えば患者から得られるかまたは対照を表すもの)から採取することができる。ある態様では、サンプルは非侵襲性の方法で、例えば尿、皮膚、スワブ、唾液、血液または血液画分から得られる。
ホルモン感受性腫瘍は一般にホルモン療法で処置される。ホルモン非感受性腫瘍は典型的にはホルモン療法に応答しない。用語「ホルモン療法」は、腫瘍の成長に影響を及ぼすホルモンの作用を阻止する様々な治療法に適用する。しかしながら、ある種の子宮癌と腎臓癌のような症例には、プロゲステロンまたはそれの合成種が処方される。
核酸サンプルは、例えば核酸増幅を使った、例えば任意のプライマー依存性増幅法を使った、検出と定量に用いることができる。ある態様では、予備的な逆転写工程が実施される(RT-PCRとも呼ばれるが、リアルタイムPCRと混同してはならない)。例えばHierro他(2006)72:7148を参照のこと。本明細書中で用いる用語「qRT-PCR」は、逆転写と定量的PCRを指す。この両反応は中断を伴わずに、例えば試薬を添加するための中断を伴わずに、単一のチューブ中で実施できる。例えば、ポリTプライマーを使って、ポリAテールを有するサンプル中の全mRNAを逆転写することができ、ランダムオリゴヌクレオチドを使用することができ、またはcDNAに逆転写される特定の標的転写物に特異的であるプライマーを設計することができる。cDNAまたはサンプル由来DNAは、定量的増幅(リアルタイムまたは定量的PCR、すなわちRT-PCRまたはqPCR)用に意図される最初の鋳型を成すことができる。qPCRは、PCR工程の各サイクルの間に生成される生成物の信頼できる検出と測定を可能にする。そのような技術は当業界で周知であり、キットと試薬は例えばRoche Molecular Systems社、Life Technologies社、Bio-Rad社等から市販されており、例えばPfaffl (2010) Methods: The ongoing evolution of qPCR、第50巻を参照のこと。別々の逆転写酵素と耐熱性DNAポリメラーゼを、例えば二段階反応(逆転写の後にDNAポリメラーゼの添加と増幅を行う)または組み合わせ反応(両酵素を一度に添加する)で使用することができる。ある態様では、逆転写酵素活性とDNA鋳型依存性活性の両方を有する耐熱性ポリメラーゼを用いて標的核酸が増幅される。典型的な酵素としては、Tth DNAポリメラーゼ、C.thermポリメラーゼ系、およびUS 20140170730とUS 20140051126に開示されたものが挙げられる。
本発明は、ESR1変異を検出するためのマルチプレックス対立遺伝子特異的PCRを実施するためのキットを提供する。該キットは、本明細書に記載される特定のESR1変異を特異的に検出するためのプライマーとプローブを含有する。
アッセイ設計
ESR1遺伝子中の18種の変異を検出するためのマルチプレックス対立遺伝子特異的PCRを設計した。検出される変異を表1に示す。
表1.ESR1変異
表2.プライマーとプローブ配列
変異体シグナルが野生型に比較して確実に高感度でかつ特異的に検出できるようにするプライマーを選択した。ESR1 K303R変異およびL536_D538>P変異に特異的であるように設計したプライマー対とプローブを用いて、野生型DNAに対し1:1600の比(野生型160,000コピー中変異型DNA100コピー)で添加された変異型鋳型を検出し、または野生型DNAのみで検出した。対立遺伝子特異的増幅と検出はコバスz(cobas z)(登録商標)480上で実施した。データは増幅サイクル数対蛍光シグナルをプロットしたCt曲線により表示した(増幅産物の検出を示す)。
プライマー対とプローブセットを、特異性を決定するためおよび別のESR1変異を検出しないことを保証するために多重形式(マルチプレックス)で試験した。個々のサンプル混合物を表1に列挙する18種の変異体の各々に対して調製し、該混合物は変異型DNAを野生型に対して1:1の比で添加して調製した(各々5000コピー)。18種の変異すべてに特異的であるプライマー対とプローブを添加した。図3は、ESR1 P535Hに対して高特異性を有する典型的Ct曲線を示す。25~30辺りにCtを有する最も左側2本の曲線は、サンプル中に存在するESR1 P535H変異の特異的検出を表す(薄い矢印で示される)。その他のプライマー対とプローブのCtは、はるかに遅延したCtを有する(2つの黒矢印の間に示される)。
各変異に対して一定範囲の鋳型濃度に渡って、検出の直線性も認められた。一例として、ESR1 S341Lに特異的なプライマー対とプローブを用いて、10,000コピーの野生型バックグラウンド中5~5000コピーの変異体鋳型を増幅させた。その結果を表3に示す。それは当該アッセイが高度に直線性を持つことを示す。
血漿成分が干渉するかどうかを調べるために血漿バックグラウンド中で該アッセイを試験した。変異型DNAを1000コピー数において2 mL正常(野生型)血漿に添加した。DNAをcobas(登録商標)DNAサンプル調製キットを使って抽出した。0.5 mL血漿からのものに相当するDNAを各PCR反応に加えた。プライマー対とプローブセットを各変異に対応して添加した。典型的な結果を表4に示す。このデータは、変異型DNAが野生型血漿バックグラウンド中で高感度で検出できることを示す。
変異型配列に対して優れた特異性を示す対立遺伝子特異的プライマーを、上記基準に基づいて選択した。それらのデータを表5に示し、表中にプライマー名とカッコ内に配列番号を示す。ボールド体は、下記の表6のアッセイ構成において選択性と特異性を示したプライマーを指摘するが、その他の組み合わせも上手く機能する。
表5:選択される対立遺伝子特異的プライマー
最小数の反応容器中で最大数の変異を検出するために高度に多重化されたアッセイを設計しようと試みた。3容器アッセイの例を下表6と7に示す。エクソン8変異を、コモン正プライマーとプローブの使用を可能にするために一緒にグループ化した。当業者は、所望であれば、例えばシーケンシングを使ってまたは変異特異的プローブを用いるPCRを使って、変異陽性シグナルを生じる正確なエクソン8変異を同定する方法を知っているだろう。
表6:対立遺伝子特異的マルチプレックスESR1変異のための典型的アッセイ構成
癌患者からの142本のFFPETサンプル(乳癌、リンパ節、肺、骨)からcobas(登録商標)DNAサンプル調製キットを使ってDNAを抽出した。DNA(50 ng/反応)を、本明細書に記載の通りにマルチプレックス対立遺伝子特異的PCR(二通りに実施)によりESR1変異について分析した。結果を図4Aと4Bに示す。1サンプル(IN008)がE380Q変異に関して陽性であると認められ、これはE380Q変異陽性対照(MC)と類似した増幅成長曲線を示した(図4A参照)。図4Bは、E380Q変異陽性対照のない同一データを示す。ddPCRを使って結果を確認した。
臨床血漿サンプル(2 mL血漿)を、アロマターゼ阻害剤での治療中に再発したまたは断薬後12か月以内に再発した103名の閉経後転移乳癌患者から採取した。cobas(登録商標)cfDNAサンプル調製キットを使ってDNAを抽出し、本明細書に記載のマルチプレックス対立遺伝子特異的PCRによりESR1変異について分析した。図5に示されるように、試験した3サンプルがD538G陽性であった。図5は、51本のサンプルのうち、3本がD538G陽性であり、48本がD538野生型であることを示した。D538G変異陽性対照と非鋳型対照も図示されており、D538G陽性サンプルは明確に識別可能であるプロファイルを示した。ddPCRを使って結果を確認した。
Claims (7)
- 3つの容器:
(i) ESR1 V422DelVに特異的なプライマー対、ESR1 S463Pに特異的なプライマー対、ESR1 L536Hに特異的なプライマー対、ESR1 L536Pに特異的なプライマー対、ESR1 L536Qに特異的なプライマー対、L536Rに特異的なプライマー対、及びESR1 D538Gに特異的なプライマー対を保有する第一容器
(ii) ESR1 K303Rに特異的なプライマー対、ESR1 E380Qに特異的なプライマー対、ESR1 L536_D538>Pに特異的なプライマー対、ESR1 Y537Cに特異的なプライマー対、ESR1 Y537Nに特異的なプライマー対、およびESR1 Y537Sに特異的なプライマー対を保有する第二容器;および
(iii) ESR1 S341Lに特異的なプライマー対、ESR1 L429Vに特異的なプライマー対、ESR1 V533Mに特異的なプライマー対、ESR1 V534Eに特異的なプライマー対、およびESR1 P535Hに特異的なプライマー対を保有する第三容器
を含むキットであって、各容器が、
ESR1遺伝子中の異なる配列に特異的な2以上のプローブ、ここで各プローブがフルオロフォアとクエンチャーで標識されており;
内在性コントロール配列に特異的なプライマー対;および
内在性コントロール配列に特異的であり、且つフルオロフォアとクエンチャーで標識されており、そして配列番号24, 113, 134, 158, 178, 264, 261, 262, 285, 286, 298, 314, 394, 407, 31, 42, 90, 415, 447, 469, 476, 477, 481, 528, 59, 60, 70, 231, 235, 237, 245, 350および388の配列を有するオリゴヌクレオチドを含む、プローブ
を保有する、前記キット。 - 各容器が、3~4のプローブを保有する、請求項1に記載のキット。
- 少なくとも1のプライマーが、修飾された非天然ヌクレオチドを含む、請求項1又は2に記載のキット。
- 各容器がさらに、熱安定性DNAポリメラーゼを保有する、請求項1~3のいずれか一項に記載のキット。
- 個体からのサンプル中の2以上のESR1変異の有無を決定する方法であって、
(i) 該個体からサンプルを採取し;
(ii) マルチプレックスアレル特異的PCRを実施して2以上のESR1変異の有無を決定し、ここでマルチプレックスアレル特異的PCRが、3つの容器で行われ、ESR1変異の有無が、以下の3つの容器で決定され:
(i) 第一容器においてESR1 V422DelV、ESR1 S463P、ESR1 L536H、ESR1 L536P、ESR1 L536Q、L536R、及びESR1 D538G;
(ii) 第二容器において、ESR1 K303R、ESR1 E380Q、ESR1 L536_D538>P、ESR1 Y537C、ESR1 Y537N、及びESR1 Y537S、
(iii) 第三容器において、ESR1 S341L、ESR1 L429V、ESR1 V533M、ESR1 V534EおよびESR1 P535H
そしてここで前記容器が、配列番号24, 113, 134, 158, 178, 264, 261, 262, 285, 286, 298, 314, 394, 407, 31, 42, 90, 415, 447, 469, 476, 477, 481, 528, 59, 60, 70, 231, 235, 237, 245, 350および388の配列を有するオリゴヌクレオチドを含む、前記方法。 - 前記個体が乳癌を患い、そしてホルモン治療を受けている、請求項5に記載の方法。
- マルチプレックスアレル特異的PCRを行って、10以上のESR1変異の有無を決定する、請求項5又6に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662376799P | 2016-08-18 | 2016-08-18 | |
US62/376,799 | 2016-08-18 | ||
PCT/EP2017/070903 WO2018033615A1 (en) | 2016-08-18 | 2017-08-18 | Multiplex allele specific pcr assays for detection of estrogen receptor esr1 mutations |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019531061A JP2019531061A (ja) | 2019-10-31 |
JP7007364B2 true JP7007364B2 (ja) | 2022-02-10 |
Family
ID=59686946
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019507932A Active JP7007364B2 (ja) | 2016-08-18 | 2017-08-18 | エストロゲン受容体esr1変異の検出用のマルチプレックス対立遺伝子特異的pcrアッセイ |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20180051325A1 (ja) |
EP (1) | EP3500681B1 (ja) |
JP (1) | JP7007364B2 (ja) |
CN (1) | CN109790568B (ja) |
ES (1) | ES2864999T3 (ja) |
WO (1) | WO2018033615A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018186687A1 (ko) * | 2017-04-04 | 2018-10-11 | 주식회사 젠큐릭스 | 생물학적 시료의 핵산 품질을 결정하는 방법 |
CN110452988A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-11-15 | 武汉友芝友医疗科技股份有限公司 | 检测esr1基因突变的引物组、试剂、试剂盒和方法 |
KR20220085748A (ko) * | 2020-12-15 | 2022-06-22 | 주식회사 제노픽스 | 유방암 유전자 돌연변이 초고감도 선택적 증폭 방법 및 이를 위한 조성물 |
WO2023086970A2 (en) * | 2021-11-12 | 2023-05-19 | Arna Genomics Us Incorporated | Methods and compositions for analyzing nucleic acids and nucleases in a body fluid as indicators of disease |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013056178A2 (en) | 2011-10-14 | 2013-04-18 | Foundation Medicine, Inc. | Novel estrogen receptor mutations and uses thereof |
WO2015093948A2 (en) | 2013-12-17 | 2015-06-25 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut-Antoni van Leeuwenhoek Ziekenhuis | Means and methods for typing a breast cancer patient and assigning therapy based on the typing |
WO2015136017A1 (en) | 2014-03-13 | 2015-09-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods and compositions for modulating estrogen receptor mutants |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7363168B2 (en) | 2001-10-02 | 2008-04-22 | Stratagene California | Adaptive baseline algorithm for quantitative PCR |
JP6144697B2 (ja) | 2011-12-08 | 2017-06-07 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 改善された活性を有するdnaポリメラーゼ |
JP6356694B2 (ja) | 2012-12-13 | 2018-07-11 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 改善された活性を有するdnaポリメラーゼ |
CN104120178B (zh) * | 2014-07-03 | 2016-04-20 | 陕西佰美基因股份有限公司 | 一种基于荧光pcr技术检测esr1基因突变的方法 |
-
2017
- 2017-08-18 JP JP2019507932A patent/JP7007364B2/ja active Active
- 2017-08-18 ES ES17755486T patent/ES2864999T3/es active Active
- 2017-08-18 WO PCT/EP2017/070903 patent/WO2018033615A1/en unknown
- 2017-08-18 US US15/681,039 patent/US20180051325A1/en not_active Abandoned
- 2017-08-18 EP EP17755486.2A patent/EP3500681B1/en active Active
- 2017-08-18 CN CN201780050054.0A patent/CN109790568B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013056178A2 (en) | 2011-10-14 | 2013-04-18 | Foundation Medicine, Inc. | Novel estrogen receptor mutations and uses thereof |
WO2015093948A2 (en) | 2013-12-17 | 2015-06-25 | Stichting Het Nederlands Kanker Instituut-Antoni van Leeuwenhoek Ziekenhuis | Means and methods for typing a breast cancer patient and assigning therapy based on the typing |
WO2015136017A1 (en) | 2014-03-13 | 2015-09-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Methods and compositions for modulating estrogen receptor mutants |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Jiaxin Niu,OncoTargets and Therapy,Vol:8,Page(s):3323-3328 |
Peilu Wang ,CLINICAL CANCER RESEARCH,2016年03月01日,Vol:22,No:5,Page(s):1130 - 1137 |
Ting Wang,EXPERIMENTAL AND MOLECULAR PATHOLOGY,2015年,Vol:98,No:2,Page(s):152-157 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2019531061A (ja) | 2019-10-31 |
EP3500681A1 (en) | 2019-06-26 |
CN109790568A (zh) | 2019-05-21 |
WO2018033615A1 (en) | 2018-02-22 |
EP3500681B1 (en) | 2021-01-20 |
ES2864999T3 (es) | 2021-10-14 |
CN109790568B (zh) | 2022-09-20 |
US20180051325A1 (en) | 2018-02-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7007364B2 (ja) | エストロゲン受容体esr1変異の検出用のマルチプレックス対立遺伝子特異的pcrアッセイ | |
EP3455375B1 (en) | Detection of met exon 14 deletions | |
US10947593B2 (en) | Biomarkers for premature birth | |
EP3755813B1 (en) | Improved detection of microsatellite instability | |
AU2005250479B2 (en) | Diagnosing or predicting the course of breast cancer | |
EP3305909B1 (en) | Systemic lupus erythematosus biomarker and diagnostic kit thereof | |
US20190177770A1 (en) | Detection of nucleic acids from platelet enriched plasma samples | |
JP7335871B2 (ja) | 短い核酸の多重検出 | |
EP3455368B1 (en) | Methods and compositions for classifying dlbcl |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190301 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200727 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210817 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211104 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20211207 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220106 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7007364 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |