JP6986772B2

JP6986772B2 - Lipid single layer coated nanoparticles for drug delivery

Info

Publication number: JP6986772B2
Application number: JP2020062370A
Authority: JP
Inventors: 浩良川上; 章一郎朝山; 祐太郎浅羽; 志幸松帆; 良輔篠原
Original assignee: Tokyo Metropolitan Public University Corp
Current assignee: Tokyo Metropolitan Public University Corp
Priority date: 2016-05-09
Filing date: 2020-03-31
Publication date: 2021-12-22
Anticipated expiration: 2036-05-09
Also published as: JP2020109119A

Description

本出願は、生分解性ポリマー及び薬剤を含むコア、及び当該コアを被覆する脂質単分子層を含む、単層被覆型ナノ粒子複合体に関する。当該複合体は、その表面にターゲッティング分子を結合しているものであってもよい。あるいは、当該複合体は、その表面にプラスミドＤＮＡが吸着または結合しているものであってもよい。本出願はさらに、当該複合体を含む医薬組成物に関する。 The present application relates to a monolayer-coated nanoparticle composite containing a core containing a biodegradable polymer and a drug, and a lipid monomolecular layer covering the core. The complex may have a targeting molecule bonded to its surface. Alternatively, the complex may have plasmid DNA adsorbed or bound to its surface. The application further relates to pharmaceutical compositions containing such complexes.

中枢神経系疾患の発病原因の１つとして、脳の神経細胞内で活性酸素種が増加することにより細胞の変性やアポトーシスが誘導される事象が指摘されている。脳神経細胞内に抗酸化剤を送達させ、脳内で抗酸化を行うことでこれら神経変性疾患の治療へのアプローチとなることが期待される。しかし、脳内に抗酸化剤を送達させるにあたり、血液脳関門（ＢＢＢ）と呼ばれる障壁が存在する。ＢＢＢは脳血管内皮細胞がタイトジャンクションによって密に結合した構造をしており、脳毛細血管から神経細胞へのあらゆる物質の侵入を物理的に阻害している。脳神経細胞内に抗酸化剤を送達するにあたっては、ＢＢＢを通過するためのドラッグデザインが必須であるが、この目的を達成可能なキャリアは少なく、さらなる研究開発が臨まれている。 As one of the causes of central nervous system diseases, it has been pointed out that the increase of reactive oxygen species in nerve cells of the brain induces cell degeneration and apoptosis. It is expected to be an approach to the treatment of these neurodegenerative diseases by delivering antioxidants into brain nerve cells and performing antioxidants in the brain. However, there is a barrier called the blood-brain barrier (BBB) in delivering antioxidants into the brain. BBB has a structure in which cerebral vascular endothelial cells are tightly bound by tight junctions, and physically inhibits the invasion of all substances from cerebral capillaries into nerve cells. In order to deliver antioxidants into brain nerve cells, a drug design for passing through the BBB is indispensable, but there are few carriers that can achieve this purpose, and further research and development is underway.

ところで、１９６０年代以降、ヒストンのアセチル化と緊密なクロマチン構造のリモデリングが、遺伝子誘導と関係していることが認識されてきたが、遺伝子が転写因子とヒストンアセチル化によって転写活性化される分子機序がよく理解されるようになったのは、つい最近のことである。遺伝子発現制御にはクロマチン構造の変化が重要であり、このようにクロマチンの構造変化により遺伝子発現の制御を行う機構はエピジェネティクス機構と呼ばれている。クロマチン構造は前述したヒストンアセチル化やＤＮＡ／ヒストンのメチル化などの後天的な化学修飾により変化し、この後天的修飾は様々な要因で起こり得るものである。また、近年ではエピジェネティクな異常が疾患の発症、病理の悪化に関係することが報告されており、疾患治療においてはエピジェネティクな異常を正常化することを考慮に入れる必要がある。 By the way, since the 1960s, it has been recognized that histone acetylation and remodeling of close chromatin structure are related to gene induction, but molecules in which genes are transcriptionally activated by transcription factors and histone acetylation. Only recently has the mechanism been well understood. Changes in chromatin structure are important for gene expression control, and the mechanism for controlling gene expression by chromatin structural changes is called the epigenetic mechanism. The chromatin structure is changed by the above-mentioned acquired chemical modification such as histone acetylation and DNA / histone methylation, and this acquired modification can occur due to various factors. In recent years, it has been reported that epigenetic abnormalities are related to the onset of diseases and worsening of pathology, and it is necessary to take into consideration the normalization of epigenetic abnormalities in the treatment of diseases.

生分解性ポリマーおよび脂質を含む粒子を用いて薬剤または遺伝子を送達する試みが当該技術分野においてなされてきた（特許文献１及び２、非特許文献１及び２）。また、生分解性ポリマーおよび脂質を含む粒子を用いて薬剤を送達する試みにおいて、特定の細胞や組織への送達を意図して脂質に細胞表面レセプターのリガンドを結合させる試みがなされている（非特許文献３〜６）。 Attempts have been made in the art to deliver drugs or genes using particles containing biodegradable polymers and lipids (Patent Documents 1 and 2, Non-Patent Documents 1 and 2). In addition, in an attempt to deliver a drug using particles containing a biodegradable polymer and a lipid, an attempt has been made to bind a ligand of a cell surface receptor to the lipid with the intention of delivering it to a specific cell or tissue (non-). Patent Documents 3 to 6).

しかし、経鼻投与のために最適化された粒子の構成は検討されておらず、また、薬剤および遺伝子の両方を送達して、エピジェネティクス制御による遺伝子発現制御を行う試みもなされていない。 However, the composition of particles optimized for nasal administration has not been investigated, and no attempt has been made to deliver both drugs and genes to control gene expression by epigenetic control.

特表２０１４−５２６４４２号公報Special Table 2014-526442A 特表２０１０−５２３５９５号公報Special Table 2010-523595 Gazette

Rajendran JC Bose, et al., Int. J. Nanomedicine, 2015, Vol.10, p.5367-5382Rajendran JC Bose, et al., Int. J. Nanomedicine, 2015, Vol.10, p.5367-5382 Qui Zhong, et al., Journal of Nanobiotechnology, 2010, Vol.8, p.6Qui Zhong, et al., Journal of Nanobiotechnology, 2010, Vol.8, p.6 Peng Zhang et al., ONCOLOGY LETTERS, 2015, Vol.9, p.1065-1072Peng Zhang et al., ONCOLOGY LETTERS, 2015, Vol.9, p.1065-1072 Jinsong Ding et al., RSC Advances, 2015, Vol.5, p.16931-16939Jinsong Ding et al., RSC Advances, 2015, Vol.5, p.16931-16939 Cai L et al., Journal of nanoscience and nanotechnology, 2015, Vol.15 p.4792-4798Cai L et al., Journal of nanoscience and nanotechnology, 2015, Vol.15 p.4792-4798 Jun Chen et al., Biomaterials, 2013, Vol.34, p.3870-3881Jun Chen et al., Biomaterials, 2013, Vol.34, p.3870-3881

上述のように、脳神経細胞内への薬剤の送達や、エピジェネティックな異常に対する治療のための、新しいドラッグデザインの開発が求められている。本出願は、生分解性ポリマーおよび脂質を含むナノ粒子について、これらのドラッグデザイン開発の観点から適したキャリアを提供する。すなわち、本出願は、生分解性ポリマー及び薬剤を含むコア、及び当該コアを被覆する脂質単分子層を含む、単層被覆型ナノ粒子複合体を提供する。当該複合体は、その表面にターゲッティング分子を結合しているものであってもよい。あるいは、当該複合体は、その表面にプラスミドＤＮＡが吸着または結合しているものであってもよい。本出願はさらに、当該複合体を含む医薬組成物を提供する。 As mentioned above, there is a need to develop new drug designs for the delivery of drugs into the intracellular nerve cells and the treatment of epigenetic abnormalities. The present application provides suitable carriers for nanoparticles containing biodegradable polymers and lipids from the viewpoint of developing these drug designs. That is, the present application provides a monolayer-coated nanoparticle composite containing a core containing a biodegradable polymer and a drug, and a lipid monomolecular layer covering the core. The complex may have a targeting molecule bonded to its surface. Alternatively, the complex may have plasmid DNA adsorbed or bound to its surface. The present application further provides a pharmaceutical composition comprising the complex.

以上に鑑み、本件の発明者は、生分解性ポリマーおよび脂質を含むナノ粒子キャリアに注目し、研究を開始した。鋭意検討の結果、経鼻投与による神経保護のための複合体およびエピジェネティクス制御するための複合体として適したキャリアの構成を見いだした。当該知見に基づいて、本発明は完成された。 In view of the above, the inventor of this case focused on nanoparticle carriers containing biodegradable polymers and lipids and started research. As a result of diligent studies, we have found a suitable carrier composition as a complex for neuroprotection by nasal administration and a complex for controlling epigenetics. Based on this finding, the present invention has been completed.

すなわち、一態様において、本発明は以下のとおりであってよい。 That is, in one aspect, the present invention may be as follows.

［１］経鼻投与による神経保護のための複合体であって、単層被覆型ナノ粒子、薬剤、およびターゲッティング分子を含み、
ここで、当該脂質単層被覆型ナノ粒子は、生分解性ポリマーを含むコア及び当該コアをコートする脂質単分子層を含み、
当該薬剤は、生分解性ポリマーを含むコア中に存在し、そして
当該ターゲッティング分子は、当該脂質単層被覆型ナノ粒子の表面に結合している、前記複合体。 [1] A complex for neuroprotection by nasal administration, which contains single layer coated nanoparticles, drugs, and targeting molecules.
Here, the lipid single layer coated nanoparticles include a core containing a biodegradable polymer and a lipid single molecular layer coating the core.
The complex, wherein the agent is present in a core containing a biodegradable polymer, and the targeting molecule is attached to the surface of the lipid monolayer-coated nanoparticles.

［２］生分解性ポリマーが、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン、およびキトサン、からなる群より選択される、上記［１］に記載の複合体。 [2] The biodegradable polymer is selected from the group consisting of polylactic acid, polyglycolic acid, poly (lactide-co-glycolide) copolymer, polycaprolactone, polydioxanone, and chitosan, according to the above [1]. Complex of.

［３］脂質が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で修飾されたジアシルホスファチジルエタノールアミンである、
ここで、当該アシル基は、炭素数が１２〜２０の飽和または不飽和アシル基であり；そして、
当該ポリエチレングリコールは、分子量２，０００〜１００，０００であり、一方の末端はジアシルホスファチジルエタノールアミンのアミノ基に連結しており、および、他方の末端においてタンパク質と連結可能な基を有するものである；
上記［１］又は［２］に記載の複合体。 [3] The lipid is diacylphosphatidylethanolamine modified with polyethylene glycol (PEG).
Here, the acyl group is a saturated or unsaturated acyl group having 12 to 20 carbon atoms;
The polyethylene glycol has a molecular weight of 2,000 to 100,000, one end linked to an amino group of diacylphosphatidylethanolamine, and the other end having a group ligable to a protein. ;
The complex according to the above [1] or [2].

［４］ターゲッティング分子が、ラクトフェリンまたはコムギ胚芽凝集素であり、そして当該ターゲッティング分子は、当該脂質と共有結合することにより、当該脂質単層被覆型ナノ粒子の表面に結合している、上記［１］〜［３］のいずれか１項に記載の複合体。 [4] The targeting molecule is lactoferrin or wheat germ agglutinin, and the targeting molecule is covalently bound to the lipid to the surface of the lipid monolayer-coated nanoparticles, as described above [1]. ] To the complex according to any one of [3].

［５］薬剤が、抗酸化剤であり、当該抗酸化剤は以下：ポルフィリン系抗酸化剤、フタロシアニン系抗酸化剤、アスコルビン酸、グルタチオン、尿酸、メラトニン、ウロビリノーゲン、トコフェロール類、トコトリエノール類、カロテノイド、キサントフィル類、ポリフェノール、フラボノイド類、からなる群より選択される、上記［１］〜［４］のいずれか１項に記載の複合体。 [5] The drug is an antioxidant, and the antioxidants are as follows: porphyrin antioxidant, phthalocyanine antioxidant, ascorbic acid, glutathione, uric acid, melatonin, urobilinogen, tocopherols, tocotrienols, carotenoids, The complex according to any one of the above [1] to [4], which is selected from the group consisting of xanthophils, polyphenols, and flavonoids.

［６］抗酸化剤が、ポルフィリン系抗酸化剤であり、当該ポルフィリン系抗酸化剤は、
下記式（Ｉ）で表されるカチオン性金属ポルフィリン錯体： [6] The antioxidant is a porphyrin-based antioxidant, and the porphyrin-based antioxidant is
Cationic metal porphyrin complex represented by the following formula (I):

（式中、
Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、
Ａｒ_１、Ａｒ_２、Ａｒ_３、およびＡｒ_４、はそれぞれ独立して無置換のまたは置換基を有してもよい炭素環式または複素環式芳香族基を示し、そしてＡｒ_１、Ａｒ_２、Ａｒ_３、およびＡｒ_４、の少なくとも１つはカチオン性の基を有する芳香族基である）；および
下記式（ＩＩ）で表されるカチオン性金属ポルフィリンダイマー： (During the ceremony,
M represents a metal atom for forming a complex,
Ar ₁ , Ar ₂ , Ar ₃ , and Ar ₄ , respectively, represent carbocyclic or heterocyclic aromatic groups that may independently have unsubstituted or substituents, respectively, and Ar ₁ , Ar ₂ , Ar 2. At _{least one of Ar 3} and Ar ₄ is an aromatic group having a cationic group); and a cationic metal porphyrin dimer represented by the following formula (II):

（式中、
Ｍは錯体を形成するための金属原子を示し、
Ａｒ_１およびＡｒ_１’はピリジンを示し、ここでピリジンの１位はＸに、４位がポルフ
ィリンにそれぞれ結合しており、
Ａｒ_２、Ａｒ_３、およびＡｒ_４、並びに、Ａｒ_２’、Ａｒ_３’、およびＡｒ_４’、はそれぞれ独立して無置換のまたは置換基を有してもよい炭素環式または複素環式芳香族基を示し、
Ｘは、−ＣＨ_２−フェニル−ＣＨ_２−であるか、下記式（ＩＩＩ）ないし（Ｖ）のいずれかで表される：
−Ｃ_２Ｈ_４−（ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２）_ａ− ・・・・（ＩＩＩ）
（式中、ａは、１〜１０の整数を示す）
−Ｃ_２Ｈ_４−（ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２）ｂ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２− ・・・（ＩＶ）
−Ｃ_３Ｈ_６−（ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２）ｂ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２− ・・・（Ｖ）
（式中、ｂは３〜５の整数を示す））
からなる群より選択される、上記［５］に記載の複合体。 (During the ceremony,
M represents a metal atom for forming a complex,
Ar ₁ and Ar 1 _'represents a pyridine, wherein 1-position of the pyridine to X, and 4-position respectively bonded to the porphyrin,
Ar ₂ , Ar ₃ , and Ar ₄ , and Ar ₂ ', Ar ₃ ', and Ar ₄ ', respectively, may independently have an unsubstituted or a substituent aromatic or heterocyclic aromatic. Indicates a tribe,
X is -CH ₂ -phenyl-CH _2- or is represented by any of the following formulas (III) to (V):
_{_{_{-C 2 H 4 - (NH-}}} CH 2 CH 2) a - ···· (III)
(In the formula, a indicates an integer of 1 to 10)
_{_{_{_{-C 2 H 4 - (NH-}}}} CH 2 CH 2 CH 2) b-NH-CH 2 CH 2 - ··· (IV)
-C ₃ H _6- (NH-CH ₂ CH ₂ CH ₂ ) b-NH-CH ₂ CH ₂ CH ₂ -... (V)
(In the formula, b indicates an integer of 3 to 5))
The complex according to the above [5], which is selected from the group consisting of.

［７］上記［１］ないし［６］のいずれか１項に記載の複合体を含む、医薬組成物。 [7] A pharmaceutical composition comprising the complex according to any one of the above [1] to [6].

［８］脳疾患を治療するための、上記［１］ないし［６］のいずれか１項に記載の複合体を含む、医薬組成物。 [8] A pharmaceutical composition comprising the complex according to any one of the above [1] to [6] for treating a brain disease.

［９］薬剤と遺伝子を対象に共送達することによりエピジェネティクス制御するための複合体であって、当該複合体は脂質単層被覆型ナノ粒子、薬剤、およびプラスミドＤＮＡを含み、
ここで、当該脂質単層被覆型ナノ粒子は、生分解性ポリマーを含むコア及び当該コアをコートする脂質単分子層を含み、
当該薬剤は生分解性ポリマーを含むコア中に存在し、そして、
当該プラスミドＤＮＡは、当該脂質単層被覆型ナノ粒子の表面に吸着または結合している、前記複合体。 [9] A complex for controlling epigenetics by co-delivering a drug and a gene to a subject, the complex containing lipid monolayer-coated nanoparticles, a drug, and plasmid DNA.
Here, the lipid single layer coated nanoparticles include a core containing a biodegradable polymer and a lipid single molecular layer coating the core.
The agent is present in the core containing the biodegradable polymer and
The plasmid DNA is the complex that is adsorbed or bound to the surface of the lipid monolayer-coated nanoparticles.

［１０］生分解性ポリマーが、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン、およびキトサン、からなる群より選択される、上記［９］に記載の複合体。 [10] The biodegradable polymer is selected from the group consisting of polylactic acid, polyglycolic acid, poly (lactide-co-glycolide) copolymer, polycaprolactone, polydioxanone, and chitosan, according to the above [9]. Complex of.

［１１］脂質が、以下：
ステアリルアミン；
１，２−ジオレオイルオキシ−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）；
ジアシルホスファチジルエタノールアミン；
Ｎ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；
１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；
オレイルアミン；および
１，２−ジミリストイルオキシプロピル−３−ジメチルヒドロキシエチルアンモニウム（ＤＭＲＩＥ）；
からなる群より選択される、上記［９］又は［１０］に記載の複合体。 [11] Lipids are as follows:
Stearylamine;
1,2-dioleoyloxy-3-trimethylammonium propane (DOTAP);
Diacylphosphatidylethanolamine;
N- (2,3-dioreyloxy) propyl-N, N, N-trimethylammonium (DOTMA);
1,2-Giorail-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE);
Oleylamine; and 1,2-dimyristyloxypropyl-3-dimethylhydroxyethylammonium (DMRIE);
The complex according to the above [9] or [10], which is selected from the group consisting of.

［１２］ジアシルホスファチジルエタノールアミンが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で修飾されたジアシルホスファチジルエタノールアミンであり、
ここで、当該アシル基は、炭素数が１２〜２０の飽和または不飽和アシル基であり；そして、
当該ポリエチレングリコールは、分子量２，０００〜１００，０００であり、一方の末端
はジアシルホスファチジルエタノールアミンのアミノ基に連結しており、および、他方の末端においてリガンドと結合している；
上記［１１］に記載の複合体。 [12] The diacylphosphatidylethanolamine is a diacylphosphatidylethanolamine modified with polyethylene glycol (PEG).
Here, the acyl group is a saturated or unsaturated acyl group having 12 to 20 carbon atoms;
The polyethylene glycol has a molecular weight of 2,000 to 100,000, one end linked to the amino group of diacylphosphatidylethanolamine, and the other end bound to a ligand;
The complex according to the above [11].

［１３］薬剤が、以下：
ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤；
ヒストンメチル化酵素阻害剤；および
ヒストン脱メチル化酵素阻害剤；からなる群より選択される、上記［９］〜［１２］のいずれか１項に記載の複合体。 [13] The drug is as follows:
Histone deacetylase inhibitor;
The complex according to any one of the above [9] to [12], which is selected from the group consisting of a histone methylase inhibitor; and a histone demethylase inhibitor;

［１４］プラスミドＤＮＡが、以下：
エピジェネティクスの制御に関わる酵素またはタンパク質をコードするＤＮＡ；
エピジェネティクスの制御に関わる酵素またはタンパク質の発現を抑制するアンチセンス核酸または二本鎖ＲＮＡをコードするＤＮＡ；および
エピジェネティクスの制御に関わる酵素またはタンパク質に結合する抗体またはそのフラグメントをコードするＤＮＡ；
からなる群より選択されるＤＮＡを含む、上記［９］〜［１３］のいずれか１項に記載の複合体。 [14] The plasmid DNA is as follows:
DNA encoding enzymes or proteins involved in the regulation of epigenetics;
DNA encoding an antisense nucleic acid or double-stranded RNA that suppresses the expression of enzymes or proteins involved in the regulation of epigenetics; and DNA encoding antibodies or fragments thereof that bind to enzymes or proteins involved in the regulation of epigenetics. ;
The complex according to any one of the above [9] to [13], which comprises a DNA selected from the group consisting of.

［１５］上記［９］〜［１５］のいずれか１項に記載の複合体を含む、医薬組成物。 [15] A pharmaceutical composition comprising the complex according to any one of the above [9] to [15].

本発明の複合体は、生分解性ポリマーのコアを脂質単層で被覆した構造を有することにより、安定性が向上しており、薬剤および／またはプラスミドＤＮＡを目的の組織に送達するためのキャリアとして有用である。 The complex of the present invention has a structure in which the core of the biodegradable polymer is coated with a single layer of lipid, so that the stability is improved, and the carrier for delivering the drug and / or the plasmid DNA to the target tissue. It is useful as.

図１は、ラクトフェリン（Ｌｆ）修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の模式図である。FIG. 1 is a schematic diagram of lactoferrin (Lf) -modified MnP-containing lipid single-layer coated particles. 図２は、エピジェネティクス制御するための脂質単層被覆型粒子の模式図である。FIG. 2 is a schematic diagram of lipid single layer coated particles for controlling epigenetics.

以下に本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本明細書で特段に定義されない限り、本発明に関連して用いられる科学用語および技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。 The present invention will be specifically described below, but the present invention is not limited thereto. Unless otherwise defined herein, scientific and technical terms used in the context of the present invention shall have meaning generally understood by one of ordinary skill in the art.

経鼻投与による神経保護のための複合体
一態様において、本出願は、経鼻投与による神経保護のための複合体であって、脂質単層被覆型ナノ粒子、薬剤、およびターゲッティング分子を含む、前記複合体に関する。当該脂質単層被覆型ナノ粒子は生分解性ポリマーを含むコア及び当該コアをコートする脂質単分子層を含み、当該薬剤は生分解性ポリマーを含むコア中に存在し、そして、当該ターゲッティング分子は当該脂質単層被覆型ナノ粒子の表面に結合している。 Complex for nasal neuroprotection In one aspect, the present application is a complex for nasal neuroprotection, comprising lipid monolayer coated nanoparticles, agents, and targeting molecules. With respect to the complex. The lipid monolayer-coated nanoparticles include a core containing a biodegradable polymer and a lipid monomolecular layer coating the core, the agent is present in the core containing the biodegradable polymer, and the targeting molecule is It is bound to the surface of the lipid single layer coated nanoparticles.

脂質単層被覆型ナノ粒子、薬剤、およびターゲッティング分子で構成される複合体を調製する手順は、図１の模式図に示される構造が調製される限りにおいて特に制限はない。例えば、生分解性ポリマーおよび薬剤の溶液を、脂質溶液中に滴下し、合わせた溶液を超音波処理により粒子を形成することで、薬剤を含む脂質単層被覆型ナノ粒子を形成することができる。ターゲッティング分子を、当該脂質単層被覆型ナノ粒子の表面に共有結合させることで、脂質単層被覆型ナノ粒子をターゲティング分子で修飾することができる。複
合体を形成する条件は、当業者が適宜選択することができる。 The procedure for preparing a complex composed of lipid monolayer-coated nanoparticles, a drug, and a targeting molecule is not particularly limited as long as the structure shown in the schematic diagram of FIG. 1 is prepared. For example, a solution of a biodegradable polymer and a drug is dropped into a lipid solution, and the combined solution is ultrasonically treated to form particles, whereby lipid single-layer coated nanoparticles containing the drug can be formed. .. By covalently bonding the targeting molecule to the surface of the lipid single layer coated nanoparticles, the lipid single layer coated nanoparticles can be modified with the targeting molecule. The conditions for forming the complex can be appropriately selected by those skilled in the art.

単層被覆型ナノ粒子のコアとなる生分解性ポリマー、単層被覆型ナノ粒子のコアをコートする脂質、薬剤、およびターゲッティング分子としては、以下に詳述するものを用いることができる。 Biodegradable polymers that form the core of single-layer coated nanoparticles, lipids, agents, and targeting molecules that coat the core of single-layer coated nanoparticles can be those described in detail below.

生分解性ポリマーは、特に限定されないが、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン、およびキトサン、からなる群より選択される生分解性ポリマーである。 The biodegradable polymer is not particularly limited, but is a biodegradable polymer selected from the group consisting of polylactic acid, polyglycolic acid, poly (lactide-co-glycolide) copolymer, polycaprolactone, polydioxanone, and chitosan. be.

経鼻投与による神経保護のための複合体について用いられる脂質は、ポリエチレングリコールで修飾されたジアシルホスファチジルエタノールアミンであり、当該アシル基は、炭素数が１２〜２０、好ましくは炭素数が１６〜２０、さらに好ましくは炭素数が１８の飽和または不飽和アシル基であり、そして、当該ポリエチレングリコールは分子量（Ｍｗ）２，０００〜１００，０００、好ましくは５，０００〜８０，０００、５，０００〜５０，０００、または８，０００〜３０，０００、であり、一方の末端はジアシルホスファチジルエタノールアミンのアミノ基に連結しており、および、他方の末端においてタンパク質と連結可能な基を有する。 The lipid used for the complex for neuroprotection by nasal administration is diacylphosphatidylethanolamine modified with polyethylene glycol, the acyl group having 12-20 carbon atoms, preferably 16-20 carbon atoms. More preferably, it is a saturated or unsaturated acyl group having 18 carbon atoms, and the polyethylene glycol has a molecular weight (Mw) of 2,000 to 100,000, preferably 5,000 to 80,000, 5,000 to. It is 50,000, or 8,000 to 30,000, with one end linked to the amino group of the diacylphosphatidylethanolamine and the other end having a group ligable to the protein.

上記のような脂質の具体例としては、以下の構造を有する脂質が挙げられる。 Specific examples of the above-mentioned lipids include lipids having the following structures.

［式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、Ｃ_{１３−１９}アルキルまたはＣ_{１３−１９}アルケニル、好ましくはＣ_{１５−１９}アルキルまたはＣ_{１５−１９}アルケニル、さらに好ましくはＣ_１７アルキルであり；
Ｒ^３は、タンパク質と連結可能な基であり；
ｎは、５０〜２２００の間の整数、好ましくは１００〜１８００、１００〜１０００、１５０〜７００、または１５０〜４００の間の整数である］
「タンパク質と連結可能な基」は、タンパク質のアミノ基、カルボキシル基またはチオール基と共有結合可能な基であれば特に限定されないが、例えば、アミノ基、カルボキシル基、マレイミド基、アルデヒド基、が挙げられる。 [During the ceremony,
R ¹ and R ² are independently C _13-19 alkyl or C _13-19 alkenyl, preferably C _15-19 alkyl or C _15-19 alkenyl, more preferably C ₁₇ alkyl;
R ³ is capable of linking groups to proteins;
n is an integer between 50 and 2, preferably an integer between 100 and 1800, 100 and 1000, 150 and 700, or 150 and 400].
The "group that can be linked to the protein" is not particularly limited as long as it is a group that can be covalently bonded to an amino group, a carboxyl group or a thiol group of the protein, and examples thereof include an amino group, a carboxyl group, a maleimide group and an aldehyde group. Be done.

経鼻投与による神経保護のための複合体について用いられるターゲッティング分子は、鼻腔内の細胞に存在するレセプターに対するリガンドであれば特に限定されないが、例えば、ラクトフェリン、コムギ胚芽凝集素が挙げられる。ターゲッティング分子は、上記脂質におけるタンパク質と連結可能な基と共有結合を形成することで、脂質単層被覆型ナノ粒子の表面に提示される。 The targeting molecule used for the complex for nerve protection by nasal administration is not particularly limited as long as it is a ligand for a receptor present in cells in the nasal cavity, and examples thereof include lactoferrin and wheat germ agglutinin. The targeting molecule is presented on the surface of the lipid monolayer-coated nanoparticles by forming a covalent bond with a group that can be linked to the protein in the lipid.

経鼻投与による神経保護のための複合体について用いられる薬剤は、特に限定されないが、抗酸化剤がこれに含まれる。抗酸化剤の例として、例えば、ポルフィリン系抗酸化剤
、フタロシアニン系抗酸化剤、アスコルビン酸、グルタチオン、尿酸、メラトニン、ウロビリノーゲン、トコフェロール類、トコトリエノール類、カロテノイド、キサントフィル類、ポリフェノール、フラボノイド類、が挙げられる。 The agent used for the complex for neuroprotection by nasal administration is not particularly limited, but includes an antioxidant. Examples of antioxidants include porphyrin antioxidants, phthalocyanine antioxidants, ascorbic acid, glutathione, uric acid, melatonin, urobilinogen, tocopherols, tocotrienols, carotenoids, xanthophils, polyphenols, flavonoids. Will be.

ポルフィリン系抗酸化剤として、例えば、カチオン性金属ポルフィリン錯体またはカチオン性金属ポルフィリンダイマーが挙げられる。 Examples of the porphyrin-based antioxidant include a cationic metal porphyrin complex or a cationic metal porphyrin dimer.

カチオン性金属ポルフィリン錯体は、下記の式（Ｉ）： The cationic metal porphyrin complex has the following formula (I):

で表される化合物であってもよい。 It may be a compound represented by.

前記式（Ｉ）における中心金属Ｍは、特に制限はないが、好ましくは遷移金属である。例えば、中心金属Ｍは、マンガン原子、ニッケル原子、鉄原子、銅原子、コバルト原子、および亜鉛原子からなる群より選択することができる。さらに好ましい中心金属はマンガン原子である。 The central metal M in the formula (I) is not particularly limited, but is preferably a transition metal. For example, the central metal M can be selected from the group consisting of a manganese atom, a nickel atom, an iron atom, a copper atom, a cobalt atom, and a zinc atom. A more preferred central metal is the manganese atom.

前記式（Ｉ）におけるＡｒ_１、Ａｒ_２、Ａｒ_３、およびＡｒ_４、はそれぞれ独立して無置換のまたは置換基を有してもよい炭素環式または複素環式芳香族基である。当該芳香族基は、単環式のものでも、多環式のものでも、あるいは、縮合環式のものであってもよい。炭素環式の芳香族基としては例えば、炭素数６〜３６、好ましくは６〜２０の単環式、多環式、または縮合環式の炭素環式芳香族基が挙げられる。これには例えば、ベンゼン環、ナフタレン環などから誘導される基が挙げられる。複素環式の芳香族基としては、１個または２個以上の窒素原子、酸素原子または硫黄原子を有する５〜１０員の単環式、多環式、または縮合環式の複素環から誘導される基である。これには例えば、イミダゾール環、ピリジン環、ピリミジン環、アゾール環などから誘導される基である。好ましい芳香族基としては、フェニル基や２−イミダゾリル基などが挙げられる。 _{Ar 1} , Ar ₂ , Ar ₃ , and Ar ₄ in the above formula (I) are carbocyclic or heterocyclic aromatic groups which may independently have an unsubstituted or a substituent, respectively. The aromatic group may be of a monocyclic type, a polycyclic type, or a condensed ring type. Examples of the carbocyclic aromatic group include monocyclic, polycyclic, or fused ring type aromatic groups having 6 to 36 carbon atoms, preferably 6 to 20 carbon atoms. This includes, for example, a group derived from a benzene ring, a naphthalene ring and the like. Heterocyclic aromatic groups are derived from 5- to 10-membered monocyclic, polycyclic, or fused-cyclic heterocycles having one or more nitrogen, oxygen, or sulfur atoms. It is a base. This is, for example, a group derived from an imidazole ring, a pyridine ring, a pyrimidine ring, an azole ring, or the like. Preferred aromatic groups include a phenyl group, a 2-imidazolyl group and the like.

前記式（Ｉ）のＡｒ_１、Ａｒ_２、Ａｒ_３、およびＡｒ_４の少なくとも１つはカチオン性の基を有する芳香族基である。芳香族基が有するカチオン性の基としては、炭素数１〜２０、好ましくは炭素数１〜１０、さらに好ましくは炭素数１〜５程度の直鎖状または分枝状のアルキル基などによりカチオン化されたアンモニウム基やスルホニウム基などが挙げられるが、第四級アンモニウム基が好ましい。これらのカチオン性の基は芳香族基に直接結合していてもよいが、炭素数１〜２０、好ましくは炭素数１〜１０、さらに好ましくは炭素数１〜５程度の直鎖状または分枝状のアルキレン基を解して結合していてもよい、また、カチオン性の基は芳香族基の置換基として有していてもよいが、芳香族基の異種原子、好ましくは窒素原子が炭素数１〜２０、好ましくは炭素数１〜１０、さらに好ましくは
１〜５程度の直鎖状または分枝状のアルキル基などによりカチオン化されたものであってもよい。このような芳香族基としては、例えば、４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアミノフェニル基、４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアミノフェニル基などの４−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリ低級アルキルアミノフェニル基、Ｎ−メチル−４−ピリジル基、Ｎ−エチル−４−ピリジル基などのＮ−低級アルキル−４−ピジリル基、Ｎ，Ｎ’−ジ置換イミダゾール基などが挙げられる。また、これらのカチオン性の基を有する芳香族基が、フェニル基やナフチル基などの炭素環式芳香族基に直接またはアルキレン基、アミド基、またはエステル基などを解して結合した基となっていてもよい。 _{At least one of Ar 1} , Ar ₂ , Ar ₃ , and Ar ₄ of the formula (I) is an aromatic group having a cationic group. The cationic group of the aromatic group is cationized with a linear or branched alkyl group having 1 to 20 carbon atoms, preferably 1 to 10 carbon atoms, and more preferably 1 to 5 carbon atoms. Examples thereof include an ammonium group and a sulfonium group, but a quaternary ammonium group is preferable. These cationic groups may be directly bonded to an aromatic group, but may be linear or branched with 1 to 20 carbon atoms, preferably 1 to 10 carbon atoms, and more preferably 1 to 5 carbon atoms. The alkylene group may be disassembled and bonded, or the cationic group may be used as a substituent of the aromatic group, but the heteroatom of the aromatic group, preferably the nitrogen atom, is carbon. It may be cationized with a linear or branched alkyl group having a number of 1 to 20, preferably 1 to 10 carbon atoms, and more preferably 1 to 5 carbon atoms. Examples of such an aromatic group include 4-N, N, N-trilower alkylamino such as 4-N, N, N-trimethylaminophenyl group and 4-N, N, N-triethylaminophenyl group. Examples thereof include an N-lower alkyl-4-pyridyl group such as a phenyl group, an N-methyl-4-pyridyl group and an N-ethyl-4-pyridyl group, and an N, N'-di-substituted imidazole group. Further, these aromatic groups having a cationic group become a group directly bonded to a carbocyclic aromatic group such as a phenyl group or a naphthyl group or by decomposing an alkylene group, an amide group, an ester group or the like. May be.

これらの芳香族基は、置換基を有していてもよい。芳香族基が有していてもよい置換基としては、炭素数１〜２０、好ましくは炭素数１〜１０、さらに好ましくは１〜５の直鎖状または分枝状のアルキル基、アミノ基、前記したアルキル基で置換されているアミノ基、前記したアルキル基を含むアルコキシ基などが挙げられる。 These aromatic groups may have a substituent. Substituents that the aromatic group may have include linear or branched alkyl groups and amino groups having 1 to 20 carbon atoms, preferably 1 to 10 carbon atoms, and more preferably 1 to 5 carbon atoms. Examples thereof include an amino group substituted with the above-mentioned alkyl group, an alkoxy group containing the above-mentioned alkyl group, and the like.

カチオン性金属ポルフィリンダイマーは、下記の式（ＩＩ）： The cationic metal porphyrin dimer has the following formula (II):

前記式（ＩＩ）における中心金属Ｍは、特に制限はないが、好ましくは遷移金属である。例えば、中心金属Ｍは、マンガン原子、ニッケル原子、鉄原子、銅原子、コバルト原子、および亜鉛原子からなる群より選択することができる。さらに好ましい中心金属はマンガン原子である。 The central metal M in the formula (II) is not particularly limited, but is preferably a transition metal. For example, the central metal M can be selected from the group consisting of a manganese atom, a nickel atom, an iron atom, a copper atom, a cobalt atom, and a zinc atom. A more preferred central metal is the manganese atom.

前記式（ＩＩ）におけるＡｒ_１およびＡｒ_１’はピリジンを示し、ここでピリジンの１位はＸに、４位がポルフィリンにそれぞれ結合している。 Wherein Ar ₁ and Ar 1 _'in formula (II) represents a pyridine, wherein 1-position of the pyridine is in X, 4-position are respectively coupled to the porphyrin.

前記式（ＩＩ）におけるｒ_２、Ａｒ_３、およびＡｒ_４、並びに、Ａｒ_２’、Ａｒ_３’、およびＡｒ_４’、はそれぞれ独立して無置換のまたは置換基を有してもよい炭素環式または複素環式芳香族基である。当該芳香族基は、単環式のものでも、多環式のものでも、あるいは、縮合環式のものであってもよい。炭素環式の芳香族基としては例えば、炭素数６〜３６、好ましくは６〜２０の単環式、多環式、または縮合環式の炭素環式芳香族基が挙げられる。これには例えば、ベンゼン環、ナフタレン環などから誘導される基が挙げられる。複素環式の芳香族基としては、１個または２個異常の窒素原子、酸素原子または硫黄原子を有する５〜１０員の単環式、多環式、または縮合環式の複素環から誘導される基である。これには例えば、ピリジン環、ピリミジン環、アゾール環などおから誘導される基である。好ましい芳香族基としては、フェニル基や４−ピリジル基などが挙げられる。 _R 2, Ar ₃ in the formula (II), and Ar _4, _{_{and, Ar 2 ', Ar 3'}} , and Ar ₄ ', carbocyclic ring which may have each independently an unsubstituted or substituted group Formula or heterocyclic aromatic group. The aromatic group may be of a monocyclic type, a polycyclic type, or a condensed ring type. Examples of the carbocyclic aromatic group include monocyclic, polycyclic, or fused ring type aromatic groups having 6 to 36 carbon atoms, preferably 6 to 20 carbon atoms. This includes, for example, a group derived from a benzene ring, a naphthalene ring and the like. Heterocyclic aromatic groups are derived from 5- to 10-membered monocyclic, polycyclic, or fused-cyclic heterocycles with one or two anomalous nitrogen, oxygen, or sulfur atoms. It is a base. This is a group derived from okara, for example, a pyridine ring, a pyrimidine ring, an azole ring and the like. Preferred aromatic groups include a phenyl group, a 4-pyridyl group and the like.

前記式（ＩＩ）において、Ｘは、−ＣＨ_２−フェニル−ＣＨ_２−であるか、下記式（ＩＩＩ）ないし（Ｖ）のいずれかで表される：
−Ｃ_２Ｈ_４−（ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２）_ａ− ・・・・（ＩＩＩ）
（式中、ａは、１〜１０の整数を示す）
−Ｃ_２Ｈ_４−（ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２）ｂ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２− ・・・（ＩＶ）
−Ｃ_３Ｈ_６−（ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２）ｂ−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２− ・・・（Ｖ）
（式中、ｂは３〜５の整数を示す）
好ましくは、Ｘは−ＣＨ_２−フェニル−ＣＨ_２−である。 In the formula (II), X is -CH ₂ -phenyl-CH _2- or is represented by any of the following formulas (III) to (V):
_{_{_{-C 2 H 4 - (NH-}}} CH 2 CH 2) a - ···· (III)
(In the formula, a indicates an integer of 1 to 10)
_{_{_{_{-C 2 H 4 - (NH-}}}} CH 2 CH 2 CH 2) b-NH-CH 2 CH 2 - ··· (IV)
-C ₃ H _6- (NH-CH ₂ CH ₂ CH ₂ ) b-NH-CH ₂ CH ₂ CH ₂ -... (V)
(In the formula, b indicates an integer of 3 to 5)
Preferably, X is −CH ₂ − phenyl − CH ₂ −.

経鼻投与による神経保護のための複合体を含む医薬組成物
別の態様において、本出願は、上記の経鼻投与による神経保護のための複合体を含む医薬組成物に関する。 Pharmaceutical Compositions Containing Complexes for Neuroprotection by Nasal Administration In another aspect, the present application relates to pharmaceutical compositions comprising the complex for neuroprotection by nasal administration described above.

経鼻投与は、鼻腔内への噴霧または吸引により行うことができる。鼻腔内への噴霧は、所定の容量の複合体を、空気又は人体に悪影響のないガス（窒素ガス、アルゴンガス、二酸化炭素ガス、代替フロンガス等）とともに鼻腔内へ噴霧することにより達成できる。噴霧は、当該技術分野において通常用いられている経鼻投与用器具を使用することができる。吸引による経鼻投与は、本発明の組成物の一定量をカプセルまたはブリスターパック等に充填し、これを吸引器具に装着して吸引することにより行うことができる。 Nasal administration can be performed by spraying or inhaling into the nasal cavity. Spraying into the nasal cavity can be achieved by spraying a predetermined volume of the complex into the nasal cavity together with air or a gas that does not adversely affect the human body (nitrogen gas, argon gas, carbon dioxide gas, alternative freon gas, etc.). For spraying, nasal administration devices commonly used in the art can be used. Nasal administration by suction can be performed by filling a certain amount of the composition of the present invention in a capsule, a blister pack, or the like, attaching the capsule to a suction device, and sucking the composition.

経鼻投与のための医薬組成物は、本発明の複合体の他、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、保存剤、防腐剤等を含んでいてもよい。 In addition to the complex of the present invention, the pharmaceutical composition for nasal administration may contain a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, preservative, preservative and the like.

経鼻投与による神経保護のための複合体を含む医薬組成物の有効投与量は病態や患者により相違するが、一般には、薬剤がポルフィリン系抗酸化剤である場合、１日あたり抗酸化剤が１μｇ〜１ｇになるように投与することができる。本発明の医薬組成物は、１回で投与する、１日数回にわけて投与する、あるいは、連続的に投与する。医師をはじめとする医療従事者は、患者の属性および／または病態等に応じて、本発明の医薬組成物の投与量、投与間隔、投与時間、投与手順、投与部位等の用法または用量を適宜決定することができる。そのようにして適宜決定される用法または用量で投与される本発明の医薬組成物もまた、本発明の範囲内である。 The effective dose of the pharmaceutical composition containing the complex for neuroprotection by nasal administration varies depending on the pathological condition and the patient, but in general, when the drug is a porphyrin-based antioxidant, the antioxidant is used per day. It can be administered so as to be 1 μg to 1 g. The pharmaceutical composition of the present invention is administered once, divided into several times a day, or continuously. A medical professional including a doctor appropriately adjusts the dosage, administration interval, administration time, administration procedure, administration site, etc. of the pharmaceutical composition of the present invention according to the attributes and / or pathological conditions of the patient. Can be decided. The pharmaceutical compositions of the invention, which are administered in such dosages or dosages as appropriate, are also within the scope of the invention.

本発明の、経鼻投与による神経保護のための複合体を含む医薬組成物による予防や治療に適する疾患としては、脳への薬剤送達が治療のために好ましい疾患が挙げられる。このような疾患の例としては、特に限定されるものではないが、アルツハイマー型認知症やパーキンソン病などの脳疾患が挙げられる。 Diseases suitable for prevention or treatment with a pharmaceutical composition containing a complex for neuroprotection by nasal administration of the present invention include diseases in which drug delivery to the brain is preferable for treatment. Examples of such diseases include, but are not limited to, brain diseases such as Alzheimer-type dementia and Parkinson's disease.

エピジェネティクス制御するための複合体
一態様において、本出願は、薬剤と遺伝子を対象に共送達することによりエピジェネティクス制御するための複合体であって、脂質単層被覆型ナノ粒子、薬剤、およびプラスミドＤＮＡを含む、前記複合体に関する。当該脂質単層被覆型ナノ粒子は生分解性ポリマーを含むコア及び当該コアをコートする脂質単分子層を含み、当該薬剤は生分解性ポリマーを含むコア中に存在し、そして、当該プラスミドＤＮＡは当該脂質単層被覆型ナノ粒子の
表面に吸着または結合している。 Complex for controlling epigenetics In one aspect, the present application is a complex for controlling epigenetics by co-delivering a drug and a gene to a subject, and is a lipid monolayer-coated nanoparticles, a drug. , And the complex comprising plasmid DNA. The lipid monolayer-coated nanoparticles include a core containing a biodegradable polymer and a lipid monomolecular layer coating the core, the agent is present in the core containing the biodegradable polymer, and the plasmid DNA is present. It is adsorbed or bound to the surface of the lipid single layer coated nanoparticles.

脂質単層被覆型ナノ粒子、薬剤、およびプラスミドＤＮＡで構成される複合体を調製する手順は、図２の模式図に示される構造が調製される限りにおいて特に制限はない。例えば、生分解性ポリマー、薬剤および脂質の溶液に貧溶媒を添加した後、撹拌して粒子を形成することで、薬剤を含む脂質単層被覆型ナノ粒子を形成することができる。プラスミドＤＮＡと脂質単層被覆型ナノ粒子とを混合して、当該脂質単層被覆型ナノ粒子の表面に吸着または結合させることで、プラスミドＤＮＡと脂質単層被覆型ナノ粒子を複合化することができる。複合体を形成する条件は、当業者が適宜選択することができる。 The procedure for preparing a complex composed of lipid monolayer-coated nanoparticles, a drug, and plasmid DNA is not particularly limited as long as the structure shown in the schematic diagram of FIG. 2 is prepared. For example, by adding a poor solvent to a solution of a biodegradable polymer, a drug and a lipid, and then stirring the particles to form particles, the lipid single-layer coated nanoparticles containing the drug can be formed. The plasmid DNA and the lipid single layer-coated nanoparticles can be complexed by mixing the plasmid DNA and the lipid single layer-coated nanoparticles and adsorbing or binding to the surface of the lipid single layer-coated nanoparticles. can. The conditions for forming the complex can be appropriately selected by those skilled in the art.

エピジェネティクス制御するための複合体について用いられる脂質は、生分解性ポリマー粒子の表面上で単分子層を形成可能な脂質であれば、特に限定されないが、例えば、以下：
ステアリルアミン；
１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）；
ジアシルホスファチジルエタノールアミン；
Ｎ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；
１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；
オレイルアミン；
１，２−ジミリストイルオキシプロピル−３−ジメチルヒドロキシエチルアンモニウム（ＤＭＲＩＥ）；
が挙げられる。 The lipid used for the complex for controlling epigenetics is not particularly limited as long as it is a lipid capable of forming a monomolecular layer on the surface of the biodegradable polymer particles, and for example, the following:
Stearylamine;
1,2-Giore oil-3-trimethylammonium propane (DOTAP);
Diacylphosphatidylethanolamine;
N- (2,3-dioreyloxy) propyl-N, N, N-trimethylammonium (DOTMA);
1,2-Giorail-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE);
Oleylamine;
1,2-Dimiristyloxypropyl-3-dimethylhydroxyethylammonium (DMRIE);
Can be mentioned.

ジアシルホスファチジルエタノールアミンは、上記「経鼻投与による神経保護のための複合体」の項目において記載した、ポリエチレングリコールで修飾されたジアシルホスファチジルエタノールアミンであってもよい。この場合において、ポリエチレングリコールの一方の末端はジアシルホスファチジルエタノールアミンのアミノ基に連結しており、および、他方の末端においてリガンドと結合している。リガンドは、特に限定されないが、本発明の複合体を送達することが好ましい細胞、組織等に存在するリガンドであってよい。一態様において、リガンドと結合しているポリエチレングリコールで修飾されたジアシルホスファチジルエタノールアミンは、以下の構造を有する脂質であってよい。 The diacylphosphatidylethanolamine may be the polyethylene glycol-modified diacylphosphatidylethanolamine described in the above section "Complex for nerve protection by nasal administration". In this case, one end of the polyethylene glycol is linked to the amino group of the diacylphosphatidylethanolamine, and the other end is bound to the ligand. The ligand is not particularly limited, but may be a ligand present in cells, tissues, etc., in which it is preferable to deliver the complex of the present invention. In one embodiment, the diacylphosphatidylethanolamine modified with polyethylene glycol bound to the ligand may be a lipid having the following structure.

［式中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、Ｃ_{１３−１９}アルキルまたはＣ_{１３−１９}アルケニル、好ましくはＣ_{１５−１９}アルキルまたはＣ_{１５−１９}アルケニル、さらに好ましくはＣ_１７アルキルであり；
Ｒ^３は、リガンドである；
ｎは、５０〜２２００の間の整数、好ましくは１００〜１８００、１００〜１０００、１５０〜７００、または１５０〜４００の間の整数である］
エピジェネティクス制御するための複合体について用いられる薬剤は、特に限定されないが、例えば、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（例えば、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、スラミン（Suramin））、ヒストンメチル化酵素阻害剤（例えば、ＥＺＨ２の阻害剤で
あるEPZ005687（１−シクロペンチル−Ｎ−［（１，２−ジヒドロ−４，６−ジメチル−
２−オキソ−３−ピリジニル）メチル］−６−[４−（４−モルホリニルメチル）フェニ
ル］−１Ｈ−インダゾール−４−カルボキサミド））、ヒストン脱メチル化酵素阻害剤（例えば、アデノシン−２’，３’−ジアルデヒド（Adox））が挙げられる。 [During the ceremony,
R ¹ and R ² are independently C _13-19 alkyl or C _13-19 alkenyl, preferably C _15-19 alkyl or C _15-19 alkenyl, more preferably C ₁₇ alkyl;
R ³ is a ligand;
n is an integer between 50 and 2, preferably an integer between 100 and 1800, 100 and 1000, 150 and 700, or 150 and 400].
The drug used for the complex for controlling epigenetics is not particularly limited, but is, for example, a histone deacetylase inhibitor (eg, tricostatin A (TSA), suramin), histone methylase inhibitor. Agents (eg, EPZ005687, an inhibitor of EZH2 (1-cyclopentyl-N-[(1,2-dihydro-4,6-dimethyl-)
2-oxo-3-pyridinyl) methyl] -6- [4- (4-morpholinylmethyl) phenyl] -1H-indazole-4-carboxamide)), histone demethylase inhibitor (eg, adenosine-2) ', 3'-dialdehyde (Adox)) can be mentioned.

プラスミドＤＮＡは、本願の複合体に含まれるプラスミドＤＮＡは、特に限定されないが、本願の複合体を適用する対象において、酵素またはタンパク質の発現量または活性を変調することができるものである。このようなプラスミドＤＮＡとして、例えば、酵素またはタンパク質をコードするＤＮＡ；対象において酵素またはタンパク質の発現を抑制するアンチセンス核酸または二本鎖ＲＮＡをコードするＤＮＡ；あるいは、酵素またはタンパク質に結合する抗体またはそのフラグメントをコードするＤＮＡ；を含むプラスミドＤＮＡが挙げられる。 The plasmid DNA is not particularly limited as the plasmid DNA contained in the complex of the present application, but can modulate the expression level or activity of an enzyme or protein in a subject to which the complex of the present application is applied. Such plasmid DNA may include, for example, DNA encoding an enzyme or protein; DNA encoding an antisense nucleic acid or double-stranded RNA that suppresses expression of the enzyme or protein in a subject; or an antibody or antibody that binds to the enzyme or protein. Included is plasmid DNA containing the DNA encoding the fragment.

酵素またはタンパク質をコードするＤＮＡを含むプラスミドＤＮＡは、本願の複合体が適用された対象において当該酵素またはタンパク質を発現する。それにより、当該酵素またはタンパク質の発現量を増加させることができる。 A plasmid DNA containing DNA encoding an enzyme or protein expresses the enzyme or protein in a subject to which the complex of the present application has been applied. Thereby, the expression level of the enzyme or protein can be increased.

対象において酵素またはタンパク質の発現を抑制するアンチセンス核酸または二本鎖ＲＮＡをコードするＤＮＡを含むプラスミドＤＮＡは、本願の複合体が適用された対象においてアンチセンス核酸または二本鎖ＲＮＡを発現する。それにより、アンチセンス核酸の作用またはＲＮＡ干渉の作用に基づいて、当該酵素またはタンパク質の発現を抑制することができる。 A plasmid DNA containing an antisense nucleic acid or DNA encoding a double-stranded RNA that suppresses the expression of an enzyme or protein in a subject expresses the antisense nucleic acid or double-stranded RNA in a subject to which the complex of the present application has been applied. Thereby, the expression of the enzyme or protein can be suppressed based on the action of antisense nucleic acid or the action of RNA interference.

酵素またはタンパク質に結合する抗体またはそのフラグメントをコードするＤＮＡは、本願の複合体が適用された対象において当該酵素またはタンパク質に結合する抗体またはそのフラグメントを発現する。それにより、当該酵素またはタンパク質の活性が抑制または亢進する。特定の酵素またはタンパク質に結合する抗体またはそのフラグメントは当業者に周知の方法により作製することができ、またそれらをコードするＤＮＡも当業者は適宜同定することができる。抗体のフラグメントは、特に限定されないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｓｃＦｖが含まれる。 The DNA encoding the antibody or fragment thereof that binds to the enzyme or protein expresses the antibody or fragment thereof that binds to the enzyme or protein in the subject to which the complex of the present application is applied. As a result, the activity of the enzyme or protein is suppressed or enhanced. Antibodies or fragments thereof that bind to specific enzymes or proteins can be prepared by methods well known to those skilled in the art, and DNA encoding them can also be appropriately identified by those skilled in the art. The antibody fragment is not particularly limited, and includes Fab, F (ab') ₂ , Fab', Fv, and scFv.

エピジェネティクス制御するための複合体を含む医薬組成物
別の態様において、本出願は、上記のエピジェネティクス制御するための複合体を含む医薬組成物に関する。 Pharmaceutical Compositions Containing Complexes for Controlling Epigenetics In another aspect, the present application relates to pharmaceutical compositions comprising the complex for controlling epigenetics described above.

本発明の医薬組成物は、経口投与、または、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、もしくは経直腸投与などの非経口投与により投与することができる。経口投与に適した製剤には、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、溶液剤、シロップ剤などが挙げられる。非経口投与に適した製剤として、本発明の医薬組成物を無菌溶液または坐剤として調
製してもよい。本発明の医薬組成物は公知の方法により製剤化することができ、投与方法や患者により適宜製剤することができる。例えば、本発明の医薬組成物は、本発明の抗酸化剤と遺伝子を対象に共送達するための複合体を有効成分として含有し、これに製薬上許容される担体、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着香料、着色剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などと共に公知の方法により製剤化することができる。 The pharmaceutical composition of the present invention can be administered by oral administration or parenteral administration such as intravenous administration, intraperitoneal administration, subcutaneous administration, intramuscular administration, or transrectal administration. Formulations suitable for oral administration include tablets, capsules, powders, granules, solutions, syrups and the like. The pharmaceutical composition of the present invention may be prepared as a sterile solution or a suppository as a preparation suitable for parenteral administration. The pharmaceutical composition of the present invention can be formulated by a known method, and can be appropriately formulated depending on the administration method and the patient. For example, the pharmaceutical composition of the present invention contains a complex for co-delivering the gene with the antioxidant of the present invention as an active ingredient, and a pharmaceutically acceptable carrier, for example, an excipient, etc. It can be formulated by a known method together with a binder, a disintegrant, a lubricant, a flavoring agent, a coloring agent, a solubilizing agent, a suspending agent, a coating agent and the like.

本発明の医薬組成物の有効投与量は、病態や患者により相違するが、一般的には、１日あたり抗酸化剤が１μｇ〜１ｇ、プラスミドＤＮＡが０．６ｍｇ〜６００ｍｇになるように投与することができる。本発明の医薬組成物は、１回で投与する、１日数回にわけて投与する。あるいは、連続的に投与する。医師をはじめとする医療従事者は、患者の属性および／または病態等に応じて、本発明の医薬組成物の投与量、投与間隔、投与時間、投与手順、投与部位等の用法または用量を適宜決定することができる。そのようにして適宜決定される用法または用量で投与される本発明の医薬組成物もまた、本発明の範囲内である。 The effective dose of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the pathological condition and the patient, but generally, the antioxidant is administered in an amount of 1 μg to 1 g and the plasmid DNA is administered in an amount of 0.6 mg to 600 mg per day. be able to. The pharmaceutical composition of the present invention is administered once, and is divided into several times a day. Alternatively, it is administered continuously. A medical professional including a doctor appropriately adjusts the dosage, administration interval, administration time, administration procedure, administration site, etc. of the pharmaceutical composition of the present invention according to the attributes and / or pathological conditions of the patient. Can be decided. The pharmaceutical compositions of the invention, which are administered in such dosages or dosages as appropriate, are also within the scope of the invention.

本発明の抗酸化剤と遺伝子を対象に共送達するための複合体を有効成分とする医薬組成物による予防や治療に適する疾患としては、エピジェネティクスの異常で引き起こされる疾患が挙げられる。このような疾患の例としては、特に限定されるものではないが、例えば炎症性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの炎症性疾患、大腸がん、乳がん、糖尿病、アルツハイマー型認知症等が挙げられる。 Diseases suitable for prevention or treatment with a pharmaceutical composition containing the complex for co-delivery of the antioxidant and the gene of the present invention as an active ingredient include diseases caused by abnormal epigenetics. Examples of such diseases include, but are not limited to, inflammatory diseases such as inflammatory lung disease (COPD), colorectal cancer, breast cancer, diabetes, Alzheimer-type dementia, and the like.

以下に本発明の具体例を示す。これらの具体例は、本発明を理解するための説明を提供することを目的とするものであって、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。 Specific examples of the present invention are shown below. These specific examples are intended to provide an explanation for understanding the present invention, and are not intended to limit the scope of the present invention.

実施例１：ＭｎｄＭＩｍＰ _３Ｐの製造
（１）Ｈ _２ＭＩｍＰ _３Ｐ（５−（１−メチルイミダゾール−２−イル）−１０，１５，２０−トリフェニル−２１Ｈ,２３Ｈ−ポルフィリン）の合成
５００ｍｌの三つ口フラスコにプロピオン酸３００ｍｌを加え、１７０℃にて３０分間攪拌・還流した。温度一定後、ベンズアルデヒド７．８６ｍｌ、１−メチル−２−イミダゾールカルボキシアルデヒド４．０ｇを加え、続いて精製したピロールを８ｍｌ加えた。１時間加熱攪拌後、９０℃まで放冷し、エチレングリコール２００ｍｌを滴下した。室温まで放冷した後、冷蔵庫で一晩静置した。冷却後の溶液を吸引濾過し、冷やしたメタノール洗浄した後に紫粉末の６種類のポルフィリンからなる混合物を回収した。得られたポルフィリンの混合物を、シリカゲルクロマトグラフィーによりメタノール：クロロホルム＝１：２０の溶媒で溶出させ、２番目に溶出してきたＨ_２ＭＩｍＰ_３Ｐを回収した。ロータリーエバポレーターで分画の溶媒を留去し、目的のポルフィリンを得た。
（２）Ｈ _２ｄＭＩｍＰ _３Ｐ（５−（１，３−ジメチルイミダゾリウム−２−イル）−１０，１５，２０−トリフェニル−２１Ｈ,２３Ｈ−ポルフィリン）の合成
前記（１）で得たポルフィリンＨ_２ＭＩｍＰ_３Ｐをクロロホルム１０ｍｌに溶解させ、１００ｍｌ三つ口フラスコに加え、続いてヨードメタン１０ｍｌを加え、４０℃で１８時間還流した。ロータリーエバポレーターにより、反応混合物の溶媒を留去し、目的物となるＨ_２ｄＭＩｍＰ_３Ｐを回収した。合成の確認は、^１Ｈ−ＮＭＲとＵＶ−ｖｉｓスペクトルで行った。 Example 1: MndMImP ₃ P of manufacture _{_{(1) H 2 MImP 3 P}} (5- (1- methyl-imidazol-2-yl) -10,15,20 triphenyl-21H, 23H-porphyrin) synthesis 500ml of 300 ml of propionic acid was added to the three-necked flask, and the mixture was stirred and refluxed at 170 ° C. for 30 minutes. After constant temperature, 7.86 ml of benzaldehyde and 4.0 g of 1-methyl-2-imidazole carboxylaldehyde were added, followed by 8 ml of purified pyrrole. After heating and stirring for 1 hour, the mixture was allowed to cool to 90 ° C., and 200 ml of ethylene glycol was added dropwise. After allowing to cool to room temperature, it was allowed to stand in the refrigerator overnight. The cooled solution was suction filtered and washed with chilled methanol, and then a mixture of 6 types of porphyrins in purple powder was recovered. The obtained porphyrin mixture was eluted with a solvent of methanol: chloroform = 1: 20 by silica gel chromatography, and the second eluted H ₂ MImP ₃ P was recovered. The solvent for fractionation was distilled off with a rotary evaporator to obtain the desired porphyrin.
_{_{(2) H 2 dMImP 3 P}} (5- (1,3- dimethyl-imidazolium-2-yl) -10,15,20 triphenyl-21H, 23H-porphyrin) porphyrin obtained in Synthesis above (1) H ₂ MImP ₃ P was dissolved in 10 ml of chloroform, added to a 100 ml three-necked flask, subsequently 10 ml of iodomethane was added, and the mixture was refluxed at 40 ° C. for 18 hours. A rotary evaporator, the solvent of the reaction mixture was distilled off to recover the the target compound _H 2 _dMImP ₃ P. The synthesis was confirmed by ¹ H-NMR and UV-vis spectra.

Ｈ_２ｄＭＩｍＰ_３Ｐの極大吸収波長：λｍａｘ４６３ｎｍ（ｓｏｒｅｔ帯）
Ｈ_２ｄＭＩｍＰ_３Ｐの^１Ｈ−ＮＭＲ：９．１０（２Ｈ）（ジメチルイミダゾリウムの４，５位の水素原子）８．９０（４Ｈ）（ピロールのβ位の水素原子）８．７６（４Ｈ）（ピロールのβ位水素原子）８．２１（６Ｈ）（フェニル基のオルト位の水素原子）７．８
１（９Ｈ）（フェニル基のメタ、パラ位の水素原子）−２．６３（２Ｈ）（環内部の水素原子）
（３）Ｈ _２ｄＭＩｍＰ _３ＰへのＭｎ導入
１００ｍｌの三つ口フラスコに前記（２）で得られたＨ_２ｄＭＩｍＰ３Ｐを加えて、メタノールに溶解させた後、１０当量の酢酸マンガン４水和物を加え、５０℃で加熱還流し、ＵＶ−可視スペクトルを用いてポルフィリンのソーレー帯のシフトおよび吸光度変化から金属導入の確認ができるまで反応を行った。反応終了後、エバポレートすることで溶媒を留去した。得られた固体を水に再溶解させ、ヘキサフルオロリン酸アンモニウムを適量加え、吸引濾過し、濾紙上の緑色固体を回収した。ろ物を適量のメタノールに溶解させ、イオン交換樹脂（Ｃｌ⁻）を用いたカラムを行い、ＭｎポルフィリンのカウンターイオンをＣｌ⁻に交換した。合成の確認はＵＶスペクトル測定およびＦＡＢ−ＭＡＳＳで行った。結果を次に示す。 H ₂ dMImP ₃ P of maximum absorption wavelength: λmax 463nm (soret band)
H ₂ dMImP ₃ P of ^{1 H-NMR: 9.10 (2H} ) ( dimethyl imidazolium 4,5-position hydrogen atom) 8.90 (4H) (β-position hydrogen atom of the pyrrole) 8.76 (4H ) (Hydrogen atom at β-position of pyrrol) 8.21 (6H) (Hydrogen atom at ortho-position of phenyl group) 7.8
1 (9H) (Phenyl group meta, hydrogen atom at para position) -2.63 (2H) (hydrogen atom inside the ring)
_₍₃₎ H 2 dMImP 3 the three-necked flask Mn introduction 100ml to P by adding _H 2 DMImP3P obtained in (2), was dissolved in methanol, 10 equivalents of manganese acetate tetrahydrate Was heated and refluxed at 50 ° C., and the reaction was carried out using the UV-visible spectrum until the metal introduction could be confirmed from the shift of the Soret band of porphyrin and the change in absorbance. After completion of the reaction, the solvent was distilled off by evaporating. The obtained solid was redissolved in water, an appropriate amount of ammonium hexafluorophosphate was added, suction filtration was performed, and the green solid on the filter paper was recovered. The filter was dissolved in an appropriate amount of methanol, ^{a column was carried out using an ion exchange resin (Cl −} ), and the counter ion of Mn porphyrin was exchanged with ^{Cl −.} Confirmation of synthesis was performed by UV spectrum measurement and FAB-MASS. The results are shown below.

Ｈ_２ｄＭＩｍＰ_３Ｐの極大吸収波長：４６７ｎｍ（ｓｏｒｅｔ帯）ＦＡＢ−ＭＡＳＳ測定において、目的物の分子量である６８６にピークが観測された。 H ₂ dMImP ₃ P of maximum absorption wavelength: 467 nm (Soret band) in FAB-MASS measurement, peaks were observed at 686 which is the molecular weight of the target product.

ＭｎｄＭＩｍＰ_３Ｐの構造式： MndMImP ₃ P structural formula:

なお、実施例２以降は、“ＭｎｄＭＩｍＰ_３Ｐ”を単に“ＭｎＰ”と記載することがある。 In Examples 2 and later, may be referred to as "MndMImP ₃ P" simply "MnP".

実施例２：ラクトフェリン（Ｌｆ）修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の合成
（１）ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の調製
次式： Example 2: Synthesis of lactoferrin (Lf) -modified MnP-containing lipid single-layer coated particles (1) Preparation of MnP-containing lipid single-layer coated particles The following formula:

で表されるＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００−Ｍａｌ３．７５ｍｇと、４ｗｔ％エタノール３．７５ｍｌを１０ｍｌバイアル瓶に加え、６５℃で加熱することで完全に溶解させた。溶解後、１００ｍｌビーカー中で、蒸留水（ＤＷ）で１００ｍｌまでメスアップした（ａ）。ＰＬＧＡ（ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体／Mw 10000）２５ｍｇとＭ
ｎＰ０．５ｍｇをアセトニトリル１０ｍｌに加え、スターラー攪拌している上記（ａ）にピペッターで滴下した。滴下後、５分間超音波処理し、粒子を形成した。形成した粒子の含まれる溶液を５０ｍｌ遠沈管２本に移し入れ、遠心分離（１２５００ｒｐｍ，２０分×２回）により粒子の精製を行うことでＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子分散液を得た。粒径は１１１±２５ｎｍ、ゼータ電位は−６４ｍＶの値を示した。
（２）Ｌｆのチオール化
Ｌｆ３１．２ｍｇをホウ酸バッファー（ＢＢ：０．１Ｍ，ｐＨ８．５）１ｍｌに加え、冷蔵庫内で３時間攪拌した。２−イミノチオラン１ｍｇをＢＢ２ｍｌに溶解し、上記のＬｆを含む溶液に１００μｌ添加し、Ｎ_２フロー下で１時間反応させた。反応終了後、ＢＢ４ｍｌを追加し、１００μｌサンプリングした。その後、リン酸バッファー（ＰＢ：５０ｍＭ，ｐＨ７．４）１００ｍｌを加えた２００ｍｌビーカーで分画分子量１０ｋＤａの透析膜を用い、３日間透析を行った。反応後溶液を遠心分離（１４５００ｒｐｍ，４℃，２０分×２回）し、上澄を回収することで凝集体を除去した。また、反応後溶液として１００μｌサンプリングした。 3.75 mg of DSPE-PEG2000-Mal represented by (1) and 3.75 ml of 4 wt% ethanol were added to a 10 ml vial and heated at 65 ° C. to completely dissolve them. After dissolution, the volume was increased to 100 ml with distilled water (DW) in a 100 ml beaker (a). PLGA (poly (lactide-co-glycolide) copolymer / Mw 10000) 25 mg and M
0.5 mg of nP was added to 10 ml of acetonitrile, and the mixture was added dropwise to (a) above, which was stirred by a stirrer, with a pipettor. After the dropping, ultrasonic treatment was performed for 5 minutes to form particles. The solution containing the formed particles was transferred to two 50 ml centrifuge tubes, and the particles were purified by centrifugation (12500 rpm, 20 minutes × 2 times) to obtain a MnP-containing lipid single-layer coated particle dispersion. The particle size was 111 ± 25 nm, and the zeta potential was −64 mV.
(2) Lf thiolated Lf 31.2 mg of boric acid buffer (BB: 0.1M, pH8.5) was added to 1 ml, and stirred for 3 hours in a refrigerator. 1 mg of 2-iminothiolane was dissolved in 2 ml of BB, 100 μl was added to the above solution containing Lf, and the mixture was reacted under _{N 2 flow for 1 hour.} After completion of the reaction, 4 ml of BB was added and 100 μl was sampled. Then, dialysis was performed for 3 days using a dialysis membrane having a molecular weight cut-off of 10 kDa in a 200 ml beaker containing 100 ml of phosphate buffer (PB: 50 mM, pH 7.4). After the reaction, the solution was centrifuged (14500 rpm, 4 ° C., 20 minutes × 2 times), and the supernatant was collected to remove aggregates. In addition, 100 μl was sampled as a solution after the reaction.

反応前後のサンプリングした溶液でアミノ基定量及びチオール基定量を行い、チオール化率を次式： Amino group quantification and thiol group quantification were performed with the sampled solution before and after the reaction, and the thiolation rate was calculated by the following formula:

により算出した。反応後のＬｆのチオール化率は５６％と算出された。
（３）Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の合成
チオール化したＬｆとＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の表面に存在するマレイミド基のモル比が２：１になるように、チオール化したＬｆ溶液３０μｌとＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子分散液１．８ｍｌを１０ｍｌバイアル瓶中で、室温で１０時間攪拌させた。反応後、フリーのＬｆを除くために遠心分離（１２５００ｒｐｍ，２０分間，４℃×２回）で精製を行うことでＬｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子分散液を得た。上澄溶液を分注しておき、上澄溶液中に含まれるタンパク量を定量することで、ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子へのＬｆ修飾量を算出した。粒子１つあたり、１４４個のＬｆが修飾されている結果となった。粒径は１７１±４８ｎｍ、ゼータ電位は−１５ｍＶの値を示した。 Calculated by The thiolation rate of Lf after the reaction was calculated to be 56%.
(3) Synthesis of Lf-modified MnP-containing lipid single-layer coated particles Thiolization was performed so that the molar ratio of the maleimide group present on the surface of the thiolated Lf and the MnP-containing lipid single-layer coated particles was 2: 1. 30 μl of the Lf solution and 1.8 ml of the MnP-containing lipid single-layer coated particle dispersion were stirred in a 10 ml vial at room temperature for 10 hours. After the reaction, purification was performed by centrifugation (12500 rpm, 20 minutes, 4 ° C. × 2 times) to remove free Lf to obtain an Lf-modified MnP-containing lipid single-layer coated particle dispersion. The supernatant solution was dispensed and the amount of protein contained in the supernatant solution was quantified to calculate the amount of Lf modification to the MnP-containing lipid single-layer coated particles. The result was that 144 Lf were modified per particle. The particle size was 171 ± 48 nm, and the zeta potential was -15 mV.

実施例３：Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の細胞表面への結合評価
細胞表面への結合評価は、ＰＣ１２細胞（ラット副腎髄質由来細胞）を用いて行った。ＰＣ１２細胞の培養は、１０％ＨＳ、５％ＦＢＳ、１％抗生物質含有ＤＭＥＭ培地にて５％ＣＯ_２、４℃の条件で行った。コンフルエントになった細胞を計測して、２×１０^４細胞／ウェルの細胞密度で４８ウェルプレート上に播種し、２４時間インキュベーター内で培養した。ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子、Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子を各種濃度が１０μＭになるように添加し、４時間培養後、培地を除去し、３度の培地洗浄により細胞膜にリガンドとレセプターの相互作用以外で付着している各種粒子を除去した。洗浄後、１００μｌ／ウェルのcell lysisで細胞を溶解させ、細胞溶解液をサンプル管に回収した。細胞溶解液の上清をサンプルとし、細胞表面に結合した金属ポルフィリンを、ＵＶ−ｖｉｓスペクトルによって定量した。 Example 3: Evaluation of binding of Lf-modified MnP-containing lipid monolayer-coated particles to the cell surface Evaluation of binding to the cell surface was performed using PC12 cells (rat adrenal medulla-derived cells). PC12 cells were cultured in DMEM medium containing 10% HS, 5% FBS, and 1% antibiotic under _{the conditions of 5% CO 2} , 4 ° C. Confluent cells were measured, seeded on 48-well plates at a cell density of ^{2 × 10 4 cells / well and cultured in an incubator for 24 hours.} MnP-containing lipid single-layer-coated particles and Lf-modified MnP-containing lipid single-layer-coated particles were added so as to have various concentrations of 10 μM, and after culturing for 4 hours, the medium was removed, and the ligand was added to the cell membrane by washing the medium three times. Various particles adhering to the particles other than the interaction between the cells and the receptors were removed. After washing, cells were lysed by 100 μl / well cytolysis, and the cytolytic solution was collected in a sample tube. Using the supernatant of the cytolytic solution as a sample, the metallic porphyrin bound to the cell surface was quantified by the UV-vis spectrum.

Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の細胞膜表面への結合量は、０．１６±０．０４μｇ／ｍｇタンパク質となった。これは、ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の０．０３±０．００５μｇ／ｍｇタンパク質と比較して５倍程度増加した。 The amount of Lf-modified MnP-containing lipid monolayer-coated particles bound to the cell membrane surface was 0.16 ± 0.04 μg / mg protein. This was increased by about 5 times as compared with the 0.03 ± 0.005 μg / mg protein of the MnP-containing lipid monolayer-coated particles.

実施例４：Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の細胞膜内への取り込み評価
細胞膜内への取り込み評価は、ＰＣ１２細胞（ラット副腎髄質由来細胞）を用いて行った。ＰＣ１２細胞の培養は１０％ＨＳ、５％ＦＢＳ、１％抗生物質含有ＤＭＥＭ培地にて５％ＣＯ_２、３７℃の条件で行った。コンフルエントになった細胞を計測して、２×１０^４細胞／ウェルの細胞密度で４８ウェルプレート上に播種し、２４時間インキュベーター内で培養した。ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子、Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子を各種濃度が１０μＭになるように添加し、４時間培養後、培地を除去し、ＰＢＳ（−）洗浄により細胞膜に付着している各種粒子を除去した。洗浄後、１００μｌ／ウェルのcell lysisで細胞を溶解させ、細胞溶解液をサンプル管に回収した。細胞溶解液の上清をサンプルとし、細胞内に取り込まれている金属ポルフィリンを、ＵＶ−ｖｉｓスペクトルによって定量した。 Example 4: Evaluation of uptake of Lf-modified MnP-containing lipid monolayer-coated particles into the cell membrane Evaluation of uptake into the cell membrane was performed using PC12 cells (rat adrenal medulla-derived cells). PC12 cells were cultured in DMEM medium containing 10% HS, 5% FBS and 1% antibiotic under _{the conditions of 5% CO 2} and 37 ° C. Confluent cells were measured, seeded on 48-well plates at a cell density of ^{2 × 10 4 cells / well and cultured in an incubator for 24 hours.} MnP-containing lipid single-layer-coated particles and Lf-modified MnP-containing lipid single-layer-coated particles were added so as to have various concentrations of 10 μM, and after culturing for 4 hours, the medium was removed and adhered to the cell membrane by PBS (-) washing. Various particles were removed. After washing, cells were lysed by 100 μl / well cytolysis, and the cytolytic solution was collected in a sample tube. Using the supernatant of the cytolytic solution as a sample, the metal porphyrin incorporated into the cells was quantified by the UV-vis spectrum.

Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の細胞膜内への取り込み量は、０．２６±０．０７μｇ／ｍｇタンパク質となった。これは、ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の０．０４±０．０２μｇ／ｍｇタンパク質と比較して、７倍程度増加した。 The amount of Lf-modified MnP-containing lipid monolayer-coated particles incorporated into the cell membrane was 0.26 ± 0.07 μg / mg protein. This was increased by about 7 times as compared with the 0.04 ± 0.02 μg / mg protein of the MnP-containing lipid monolayer-coated particles.

実施例５：Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子のトランスサイトーシス評価
トランスサイトーシス評価は、ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞（ヒト気道上皮細胞）を用いて行った。ＢＥＡＳ−２Ｂ細胞の培養は５％ＦＢＳ、１％抗生物質含有ＤＭＥＭ培地にて５％ＣＯ_２、３７℃の条件で行った。コンフルエントになった細胞を計測して、２×１０^４ｃ細胞／ウェルの細胞密度でトランスウェルプレートの上層に播種し、下層には、蒸留水を１００μｌ添加し、２４時間インキュベーター内で培養した。ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子、Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子を各種濃度が１０μＭになるように添加し、４時間培養後、上層に播種した細胞内をトランスサイトーシスし、下層に送達された各種粒子中に含まれる金属ポルフィリンを、ＵＶ−ｖｉｓスペクトルによって定量した。 Example 5: Transcytosis evaluation of Lf-modified MnP-containing lipid monolayer-coated particles Transcytosis evaluation was performed using BEAS-2B cells (human airway epithelial cells). BEAS-2B cells were cultured in DMEM medium containing 5% FBS and 1% antibiotic under _{the conditions of 5% CO 2} and 37 ° C. The confluent cells were measured ^{and seeded at a cell density of 2 × 10 4} c cells / well on the upper layer of the transwell plate, 100 μl of distilled water was added to the lower layer, and the cells were cultured in an incubator for 24 hours. MnP-containing lipid single-layer-coated particles and Lf-modified MnP-containing lipid single-layer-coated particles were added so that various concentrations were 10 μM, and after culturing for 4 hours, the intracellular seeded in the upper layer was transcytosed to the lower layer. Metallic porphyrins contained in the various delivered particles were quantified by UV-vis spectra.

Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子のトランスサイトーシスにより、下層に送達された粒子中のＭｎＰ量は、０．４±０．０３μｇ／ｍｇタンパク質となった。これは、ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の０．０７±０．０１μｇ／ｍｇタンパク質と比較して、６倍程度増加した。 By transcytosis of Lf-modified MnP-containing lipid monolayer-coated particles, the amount of MnP in the particles delivered to the lower layer was 0.4 ± 0.03 μg / mg protein. This was increased by about 6 times as compared with the 0.07 ± 0.01 μg / mg protein of the MnP-containing lipid monolayer-coated particles.

実施例６：Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子の神経細胞保護効果
神経細胞保護効果の評価は、ＰＣ１２細胞（ラット副腎髄質由来細胞）を用いて行った。ＰＣ１２細胞の培養は１０％ＨＳ、５％ＦＢＳ、１％抗生物質含有ＤＭＥＭ培地にて５％ＣＯ_２、３７℃の条件で行った。コンフルエントになった細胞を計測して、１×１０^４細胞／ウェルの細胞密度で９６ウェルプレート上に播種し、２４時間インキュベーター内で培養した。ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子、Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子を各種濃度が１０μＭになるように添加し、４時間培養後、培地を除去し、パラコート（１，１’−ジメチル−４，４’−ジピリジニウムジクロリド）を培地中濃度が３００μＭになるように添加した。２４時間インキュベート後、培地を交換し、アラマーブルーを１０μｌ／ウェルで加え、４時間インキュベートした。インキュベート後、プレートリーダーを用いて、波長５７０ｎｍ及び５９０ｎｍの吸光度を測定することで細胞生存率を算出した。
パラコートを添加した細胞群では、細胞生存率は、８９±３％まで低下し、Ｌｆ修飾ＭｎＰ含有脂質単層被覆型粒子を前添加した細胞群においては、細胞生存率が１０３±１％まで向上し、神経細胞保護効果が示された。 Example 6: Neuronal protective effect of Lf-modified MnP-containing lipid monolayer-coated particles The neuronal protective effect was evaluated using PC12 cells (rat adrenal medulla-derived cells). PC12 cells were cultured in DMEM medium containing 10% HS, 5% FBS and 1% antibiotic under _{the conditions of 5% CO 2} and 37 ° C. Confluent cells were measured, seeded on 96-well plates at a cell density of ^{1 × 10 4 cells / well and cultured in an incubator for 24 hours.} MnP-containing lipid single-layer-coated particles and Lf-modified MnP-containing lipid single-layer-coated particles were added so as to have various concentrations of 10 μM, and after culturing for 4 hours, the medium was removed and paraquat (1,1'-dimethyl- 4,4'-Dipyridinium dichloride) was added so that the concentration in the medium was 300 μM. After incubating for 24 hours, the medium was changed, Alamar Blue was added at 10 μl / well, and the mixture was incubated for 4 hours. After incubation, cell viability was calculated by measuring the absorbance at wavelengths of 570 nm and 590 nm using a plate reader.
In the cell group to which paraquat was added, the cell viability decreased to 89 ± 3%, and in the cell group to which the Lf-modified MnP-containing lipid monolayer-coated particles were pre-added, the cell viability was improved to 103 ± 1%. However, it was shown to have a protective effect on nerve cells.

実施例７：脂質単層被覆型粒子の調製
ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤であるトリコスタチンＡ（ＴＳＡ）（２．５ｍｇ）、ＰＬＧＡ（２５ｍｇ）及びステアリルアミン（３．７５ｍｇ）はアセトン（２５００μＬ）に溶解し、１５分静置した。この溶液に対し、エタノール／蒸留水（５０／５０％，ｖ
／ｖ）混合溶媒１２００μＬを２ｍＬ／分で滴下し、４００ｒｐｍで５分間撹拌した。本溶液は蒸留水１０ｍＬに滴下し、目的の粒子懸濁液を得、粒子懸濁液は１３０００ｒｐｍ／２０ｍｉｎの遠心分離により精製した。脂質単層被覆型粒子へのＴＳＡ封入はＵＶ−ｖｉｓスペクトルにより評価し、３．５μｇ／１ｍｇＮＰｓの封入量となった。最後に、脂質単層被覆型粒子はプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）と複合化した。脂質単層被覆型粒子へのｐＤＮＡの複合化は、アガロースゲル電気泳動により評価し、電荷比（＋／−）が２以降でｐＤＮＡのバンドの完全な消失が認められ、脂質単層被覆型粒子との複合化が確認された。 Example 7: Preparation of lipid monolayer-coated particles Trichostatin A (TSA) (2.5 mg), PLGA (25 mg) and stearylamine (3.75 mg), which are histone deacetylase inhibitors, are acetone (2500 μL). It was dissolved in and allowed to stand for 15 minutes. Ethanol / distilled water (50/50%, v) for this solution
/ V) 1200 μL of the mixed solvent was added dropwise at 2 mL / min, and the mixture was stirred at 400 rpm for 5 minutes. This solution was added dropwise to 10 mL of distilled water to obtain the desired particle suspension, and the particle suspension was purified by centrifugation at 13000 rpm / 20 min. The TSA encapsulation in the lipid single layer coated particles was evaluated by the UV-vis spectrum, and the encapsulation amount was 3.5 μg / 1 mg NPs. Finally, the lipid monolayer-coated particles were complexed with plasmid DNA (pDNA). Complexity of pDNA to lipid single layer coated particles was evaluated by agarose gel electrophoresis, and complete disappearance of the pDNA band was observed when the charge ratio (+/-) was 2 or later, and the lipid single layer coated particles were observed. It was confirmed that it was compounded with.

実施例８：脂質単層被覆型粒子の機能評価
実施例７において調製した脂質単層被覆型粒子及びｐＤＮＡと複合化した脂質単層被覆型粒子の粒径・ゼータ電位を、動的光散乱法（ＤＬＳ）により測定した。また、ｐＤＮＡと複合化していない脂質単層被覆型粒子単体の粒径の経時変化もＤＬＳにより評価した。脂質単層被覆型粒子の粒径は８３．４±２０．８ｎｍ、ゼータ電位は５４．７０ｍＶの値を示した。ｐＤＮＡと複合化した脂質単層被覆型粒子の粒径は１１５．９±２２．０ｎｍ、ゼータ電位は１８．０８ｍＶの値を示した。調製から一か月経過した粒子の粒径は８５．６±２２．５ｎｍ、ゼータ電位は５２．３４ｍＶの値を示した。 Example 8: Functional evaluation of lipid single layer coated particles The particle size and zeta potential of the lipid single layer coated particles prepared in Example 7 and the lipid single layer coated particles complexed with pDNA are measured by a dynamic light scattering method. Measured by (DLS). In addition, the change over time in the particle size of the lipid single layer-coated particles that were not complexed with pDNA was also evaluated by DLS. The particle size of the lipid single-layer coated particles was 83.4 ± 20.8 nm, and the zeta potential was 54.70 mV. The particle size of the lipid single-layer coated particles complexed with pDNA was 115.9 ± 22.0 nm, and the zeta potential was 18.08 mV. One month after the preparation, the particle size of the particles was 85.6 ± 22.5 nm, and the zeta potential was 52.34 mV.

実施例９：脂質単層被覆型粒子の遺伝子発現
脂質単層被覆型粒子を、ｐＤＮＡとしてｐＧＬ３（プロメガ）を用いて、実施例７と同様の方法で調製した。 Example 9 Gene Expression of Lipid Single Layer Coated Particles Lipid single layer coated particles were prepared in the same manner as in Example 7 using pGL3 (promega) as pDNA.

ＨｅＬａ細胞は１×１０^４細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。一晩のインキュベート後、培地交換を行い、ルシフェラーゼをコードしたｐＤＮＡであるｐＧＬ３（プロメガ）と複合化した脂質単層被覆型粒子を添加した。サンプル添加から２４時間後、培地除去後にＰＢＳ（＋）により細胞を洗浄し、新鮮な培地を添加し、４８時間インキュベートした。インキュベート後、培地を除去し、細胞はＰＢＳ（＋）により洗浄した。その後、細胞は５×cell lysis（２０μＬ）を添加することにより溶解させた。各種サンプルの化学発光は、ルシフェラーゼ基質（１００μＬ）を各ｗｅｌｌに添加し、ルミノメーターにより測定した。ｐＧＬ３と複合化した脂質単層被覆型粒子を添加した細胞において遺伝子発現が示された。 HeLa cells were seeded in 96-well plates at ^{1 × 10 4 cells / well.} After overnight incubation, medium exchange was performed and lipid monolayer-coated particles complexed with pGL3 (promega), a pDNA encoding luciferase, were added. Twenty-four hours after sample addition, cells were washed with PBS (+) after media removal, fresh medium was added and incubated for 48 hours. After incubation, medium was removed and cells were washed with PBS (+). The cells were then lysed by adding 5 × cell lysis (20 μL). Chemiluminescence of various samples was measured by adding a luciferase substrate (100 μL) to each well and using a luminometer. Gene expression was shown in cells supplemented with lipid monolayer-coated particles complexed with pGL3.

実施例１０：脂質単層被覆型粒子の細胞毒性評価
脂質単層被覆型粒子を、ｐＤＮＡとしてヒストンアセチル化酵素をコードしたｐＤＮＡを用い、ＴＳＡを含めずに、実施例７と同様の方法で調製した。 Example 10: Evaluation of Cytotoxicity of Lipid Single Layer Coated Particles Lipid single layer coated particles were prepared by the same method as in Example 7 using pDNA encoding histone acetylase as pDNA, without including TSA. did.

ＨｅＬａ細胞は１×１０^４細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。一晩のインキュベート後、培地交換を行い、ヒストンアセチル化酵素をコードしたｐＤＮＡと複合化した薬剤を含まない脂質単層被覆型粒子を添加した。サンプル添加から２４時間後、培地除去後にＰＢＳ（＋）により細胞を洗浄し、新鮮な培地を添加し、４８時間インキュベートした。インキュベート後、培地交換を行い、各ウェルにアラマーブルー（１０μＬ）を添加し添加し４時間インキュベートした。インキュベート後、吸光度（５７０ｎｍ／６００ｎｍ）はプレートリーダーにより測定し、細胞生存率は未処理の細胞の吸光度（５７０ｎｍ／６００ｎｍ）の相対比として算出した。ｐＤＮＡと複合化した薬剤を含まない脂質単層被覆型粒子を添加した細胞において、電荷比（＋／−）が４まで全くの毒性を示さなかった。 HeLa cells were seeded in 96-well plates at ^{1 × 10 4 cells / well.} After overnight incubation, medium exchange was performed and drug-free lipid monolayer-coated particles complexed with pDNA encoding histone acetylases were added. Twenty-four hours after sample addition, cells were washed with PBS (+) after media removal, fresh medium was added and incubated for 48 hours. After incubation, the medium was exchanged, and Alamar Blue (10 μL) was added to each well and incubated for 4 hours. After incubation, the absorbance (570 nm / 600 nm) was measured with a plate reader and the cell viability was calculated as a relative ratio of the absorbance (570 nm / 600 nm) of untreated cells. In cells supplemented with lipid monolayer-coated particles containing no drug complexed with pDNA, no toxicity was shown up to a charge ratio (+/-) of 4.

実施例１１：細胞内エピジェネティクス評価
脂質単層被覆型粒子を、ｐＤＮＡとしてヒストンアセチル化酵素をコードしたｐＤＮＡを用いて、実施例７と同様の方法で調製した。 Example 11: Evaluation of intracellular epigenetics Lipid monolayer-coated particles were prepared in the same manner as in Example 7 using pDNA encoding histone acetylase as pDNA.

ＨｅＬａ細胞は１×１０^５細胞／ウェルで１２ウェルプレートに播種した。一晩のインキュベート後、培地交換を行い、ヒストンアセチル化酵素をコードしたｐＤＮＡと複合化したＴＳＡ脂質単層被覆型粒子を添加した。サンプル添加から２４時間後、培地除去後にＰＢＳ（＋）により細胞を洗浄し、新鮮な培地を添加し、４８時間インキュベートした。インキュベート後、細胞は５×cell lysis（２００μＬ）を添加することにより溶解させた。２×サンプルバッファー（メルカプトエタノールを含まない）は各ウェルに等量添加し、最終濃度が１０％となる様にメルカプトエタノールを添加した。その後、ウェスタンブロットに用いるサンプルは、９５℃で５分間、熱処理することにより得た。脂質単層被覆型粒子を添加した細胞におけるヒストンアセチル化量はウェスタンブロット法により評価した。ヒストンアセチル化（Ａｃ−Ｈ３Ｋ９）量はヒストンアセチル化酵素をコードしたｐＤＮＡと複合化したＴＳＡ含有脂質単層被覆型粒子を添加した細胞において、未処理の細胞と比較して１．７５倍となった。 HeLa cells were seeded on a 12-well plate at ^{1 × 10 5 cells / well.} After overnight incubation, medium exchange was performed and TSA lipid monolayer-coated particles complexed with pDNA encoding histone acetylases were added. Twenty-four hours after sample addition, cells were washed with PBS (+) after media removal, fresh medium was added and incubated for 48 hours. After incubation, cells were lysed by adding 5 × cell lysis (200 μL). 2 × sample buffer (without mercaptoethanol) was added in equal amounts to each well, and mercaptoethanol was added so that the final concentration was 10%. Then, the sample used for Western blotting was obtained by heat treatment at 95 ° C. for 5 minutes. The amount of histone acetylation in cells supplemented with lipid monolayer-coated particles was evaluated by Western blotting. The amount of histone acetylation (Ac-H3K9) was 1.75 times higher in cells supplemented with TSA-containing lipid monolayer-coated particles complexed with histone acetylase-encoding pDNA than in untreated cells. rice field.

本発明の複合体は、生分解性ポリマーのコアを脂質単層で被覆した構造を有することにより、安定性が向上しており、薬剤および／またはプラスミドＤＮＡを目的の組織に送達するためのキャリアとして有用である。特に、血液脳関門の作用により、これまで薬剤の送達が難しかった脳内への薬剤送達や、持続的な効果の発現が必要なエピジェネティクス制御による治療のための医薬組成物として利用できる点で有用である。 The complex of the present invention has a structure in which the core of the biodegradable polymer is coated with a single layer of lipid, so that the stability is improved, and the carrier for delivering the drug and / or the plasmid DNA to the target tissue. It is useful as. In particular, it can be used as a pharmaceutical composition for the delivery of drugs into the brain, which has been difficult to deliver due to the action of the blood-brain barrier, and for the treatment by epigenetic control, which requires the development of sustained effects. Is useful in.

Claims

薬剤と遺伝子を対象に共送達することによりエピジェネティクス制御するための複合体であって、当該複合体は脂質単層被覆型ナノ粒子、薬剤、およびプラスミドＤＮＡを含み、
ここで、当該脂質単層被覆型ナノ粒子は、生分解性ポリマーを含むコア及び当該コアをコートする脂質単分子層を含み、
当該薬剤は生分解性ポリマーを含むコア中に存在し、そして、
当該プラスミドＤＮＡは、当該脂質単層被覆型ナノ粒子の表面に吸着または結合している、前記複合体。 A complex for controlling epigenetics by co-delivering a drug and a gene to a subject, the complex containing lipid monolayer-coated nanoparticles, the drug, and plasmid DNA.
Here, the lipid single layer coated nanoparticles include a core containing a biodegradable polymer and a lipid single molecular layer coating the core.
The agent is present in the core containing the biodegradable polymer and
The plasmid DNA is the complex that is adsorbed or bound to the surface of the lipid monolayer-coated nanoparticles.

生分解性ポリマーが、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノン、およびキトサン、からなる群より選択される、請求項１に記載の複合体。 The complex according to claim 1, wherein the biodegradable polymer is selected from the group consisting of polylactic acid, polyglycolic acid, poly (lactide-co-glycolide) copolymer, polycaprolactone, polydioxanone, and chitosan.

脂質が、以下：
ステアリルアミン；
１，２−ジオレオイルオキシ−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）；
ジアシルホスファチジルエタノールアミン；
Ｎ−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；
１，２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；
オレイルアミン；および
１，２−ジミリストイルオキシプロピル−３−ジメチルヒドロキシエチルアンモニウム（ＤＭＲＩＥ）；
からなる群より選択される、請求項１又は２に記載の複合体。 Lipids are below:
Stearylamine;
1,2-dioleoyloxy-3-trimethylammonium propane (DOTAP);
Diacylphosphatidylethanolamine;
N- (2,3-dioreyloxy) propyl-N, N, N-trimethylammonium (DOTMA);
1,2-Giorail-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (DOPE);
Oleylamine; and 1,2-dimyristyloxypropyl-3-dimethylhydroxyethylammonium (DMRIE);
The complex according to claim 1 or 2, selected from the group consisting of.

ジアシルホスファチジルエタノールアミンが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で修飾されたジアシルホスファチジルエタノールアミンであり、
ここで、当該アシル基は、炭素数が１２〜２０の飽和または不飽和アシル基であり；そして、
当該ポリエチレングリコールは、分子量２，０００〜１００，０００であり、一方の末端はジアシルホスファチジルエタノールアミンのアミノ基に連結しており、および、他方の末端においてリガンドと結合している；
請求項３に記載の複合体。 The diacylphosphatidylethanolamine is a diacylphosphatidylethanolamine modified with polyethylene glycol (PEG).
Here, the acyl group is a saturated or unsaturated acyl group having 12 to 20 carbon atoms;
The polyethylene glycol has a molecular weight of 2,000 to 100,000, one end linked to the amino group of diacylphosphatidylethanolamine, and the other end bound to a ligand;
The complex according to claim 3.

薬剤が、以下：
ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤；
ヒストンメチル化酵素阻害剤；および
ヒストン脱メチル化酵素阻害剤；からなる群より選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の複合体。 The drug is below:
Histone deacetylase inhibitor;
The complex according to any one of claims 1 to 4, selected from the group consisting of a histone methylase inhibitor; and a histone demethylase inhibitor;

プラスミドＤＮＡが、以下：
エピジェネティクスの制御に関わる酵素またはタンパク質をコードするＤＮＡ；
エピジェネティクスの制御に関わる酵素またはタンパク質の発現を抑制するアンチセンス核酸または二本鎖ＲＮＡをコードするＤＮＡ；および
エピジェネティクスの制御に関わる酵素またはタンパク質に結合する抗体またはそのフラグメントをコードするＤＮＡ；
からなる群より選択されるＤＮＡを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の複合体。 The plasmid DNA is as follows:
DNA encoding enzymes or proteins involved in the regulation of epigenetics;
DNA encoding an antisense nucleic acid or double-stranded RNA that suppresses the expression of enzymes or proteins involved in the regulation of epigenetics; and DNA encoding antibodies or fragments thereof that bind to enzymes or proteins involved in the regulation of epigenetics. ;
The complex according to any one of claims 1 to 5, which comprises a DNA selected from the group consisting of.

請求項１〜６のいずれか１項に記載の複合体を含む、医薬組成物。 A pharmaceutical composition comprising the complex according to any one of claims 1 to 6.