JP6952350B2 - インスリン分泌促進剤又はインスリン抵抗性改善剤 - Google Patents

Description

本発明は、後述する式（Ｉ）で表される化合物及びその薬理学的に許容される塩（以下、これらを総称して「本件硫酸化合物類」ということがある）から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有する、インスリン分泌の促進用剤又はインスリン抵抗性の改善用剤や、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有する、インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患の予防用剤又は改善用剤や、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有する、ＧＡＴＡにより調節される転写の活性化剤に関する。

糖尿病は、持続的な高血糖状態を伴う疾患である。世界保健機関（ＷＨＯ）によると、世界の糖尿病患者数は年々増加しており、２０１４年時点では、４億２２００万人に達しているとの研究結果を明らかにしている。糖尿病患者数の増加に伴い、糖尿病治療薬の市場規模も拡大しており、日・米・欧における糖尿病治療薬の市場規模は、２０１４年時点では、３兆５０００億円を超えている。

インスリンは、膵臓から体内に分泌されるホルモンの一種であり、血糖値を低下させる作用を有する。糖尿病における持続的な高血糖は、遺伝的要因や環境的要因により、インスリンが欠乏したり、その作用が阻害された結果生じることが知られている。

糖尿病の治療は、軽症の場合、主に、食事療法、運動療法、肥満等の体質改善などが行われる。症状がさらに進行した場合、インスリン、インスリン分泌促進作用を有する物質、又はインスリン抵抗性の改善作用を有する物質を注射して、血糖値をコントロールする薬物療法が行われる。インスリン分泌促進作用を有する物質として、例えば、ピロリジジン化合物（特許文献１）、ポリグリセリン脂肪酸エステル（特許文献２）、ロズマリン酸（特許文献３）等が報告されている。また、インスリン抵抗性の改善作用を有する物質として、例えば、リンゴ果実圧搾残渣及びローズマリー抽出物（特許文献４）、トラニラスト（Ｎ−(３，４−ジメトキシシンナモイル)アントラニル酸）（特許文献５）、アディポネクチン（特許文献６）等が報告されている。しかしながら、本件硫酸化合物類と、インスリン分泌促進作用やインスリン抵抗性改善作用との関連性についてはこれまで知られていなかった。

特開２０１６−３４９２９号公報 特開２０１２−１４０４０６号公報 特開２００５−１３９１３６号公報 特開２０１６−０００７０７号公報 特開２００９−１２０６０７号公報 国際公開２００３／６３８９４号パンフレット

本発明の課題は、インスリン分泌を効果的に促進する作用を有するインスリン分泌促進剤や、インスリン抵抗性を効果的に改善する作用を有するインスリン抵抗性改善剤や、インスリン分泌を効果的に促進したり、インスリン抵抗性を効果的に改善することにより、血糖降下を効果的に促進する作用を有する、インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患の予防又は改善剤や、ＧＡＴＡにより調節される転写レベルを上昇させる作用を有する活性化剤を提供することにある。

本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究を続けている。その過程において、本件硫酸化合物類が、インスリン分泌を効果的に促進する作用を有すること、インスリン抵抗性を効果的に改善する作用を有すること、血糖降下を効果的に促進する作用を有することを、及びＧＡＴＡにより調節される転写レベルを上昇させる作用を有することを、たまたま見いだし、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は以下のとおりである。
〔１〕下記式（Ｉ）

（式中、Ａは、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のアルキルカルボニル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアリール基、置換若しくは無置換のキノリニル基、置換若しくは無置換のウンベリフェリル基、又は置換若しくは無置換のステロイド残基を表し、上記各基が置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−６アルキル基、フェニル基、置換フェニル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−６アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基を意味する）
で表される化合物及びその薬理学的に許容される塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とするインスリン分泌促進剤又はインスリン抵抗性改善剤。
〔２〕化合物が、下記のいずれかの化合物であることを特徴とする上記〔１〕に記載のインスリン分泌促進剤又はインスリン抵抗性改善剤。

〔３〕経口投与することを特徴とする上記〔１〕又は〔２〕に記載のインスリン分泌促進剤又はインスリン抵抗性改善剤。
〔４〕下記式（Ｉ）

（式中、Ａは、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のアルキルカルボニル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアリール基、置換若しくは無置換のキノリニル基、置換若しくは無置換のウンベリフェリル基、又は置換若しくは無置換のステロイド残基を表し、上記各基が置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−６アルキル基、フェニル基、置換フェニル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−６アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基を意味する）
で表される化合物及びその薬理学的に許容される塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする、インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患の予防又は改善剤。
〔５〕化合物が、下記のいずれかの化合物であることを特徴とする上記〔４〕に記載の予防又は改善剤。

〔６〕経口投与することを特徴とする上記〔４〕又は〔５〕に記載の予防又は改善剤。
〔７〕インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患が、糖尿病であることを特徴とする上記〔４〕〜〔６〕のいずれかに記載の予防又は改善剤。
〔８〕下記式（Ｉ）

（式中、Ａは、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のアルキルカルボニル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアリール基、置換若しくは無置換のキノリニル基、置換若しくは無置換のウンベリフェリル基、又は置換若しくは無置換のステロイド残基を表し、上記各基が置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−６アルキル基、フェニル基、置換フェニル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−６アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基を意味する）
で表される化合物及びその薬理学的に許容される塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ＧＡＴＡにより調節される転写の活性化剤。
〔９〕化合物が、下記の化合物であることを特徴とする上記〔８〕に記載の活性化剤。

また本発明の実施の他の形態として、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物を、インスリン分泌低下に起因する疾患の予防又は改善（治療）剤を必要とする患者に投与することにより、インスリン分泌低下に起因する疾患を予防又は改善（治療）する方法や、インスリン分泌低下に起因する疾患の予防又は改善（治療）剤として使用するための、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物や、インスリン分泌低下に起因する疾患の予防又は改善（治療）における使用のための、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物や、インスリン分泌低下に起因する疾患の予防又は改善（治療）剤を製造するための、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物の使用を挙げることができる。

また本発明の実施の他の形態として、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物を、インスリン抵抗性に起因する疾患の予防又は改善（治療）を必要とする患者に投与することにより、インスリン抵抗性に起因する疾患を予防又は改善（治療）する方法や、インスリン抵抗性に起因する疾患の予防又は改善（治療）剤として使用するための、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物や、インスリン抵抗性に起因する疾患の予防又は改善（治療）における使用のための、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物や、インスリン抵抗性に起因する疾患の予防又は改善（治療）剤を製造するための、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物の使用を挙げることができる。

また本発明の実施の他の形態として、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物を、ＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下に起因する疾患の予防又は改善（治療）を必要とする患者に投与することにより、ＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下に起因する疾患を予防又は改善（治療）する方法や、ＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下に起因する疾患の予防又は改善（治療）剤として使用するための、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物や、ＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下に起因する疾患の予防又は改善（治療）における使用のための、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物や、ＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下に起因する疾患の予防又は改善（治療）剤を製造するための、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物の使用を挙げることができる。

本発明によると、インスリン分泌を効果的に促進させたり、インスリン抵抗性を効果的に改善させたり、血糖降下を効果的に促進させたり、ＧＡＴＡにより調節される転写を活性化させることにより、インスリン分泌低下、インスリン感受性低下、高血糖、及び／又はＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下を抑制又は予防し、インスリン分泌、インスリンに対する感受性、及び／又は血糖値を正常に調節することができるため、インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患や、ＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下に起因する疾患の予防又は改善（治療）に有用である。

グルコースで刺激したラットランゲルハンス氏島（「ラ氏島」、「膵ラ氏島」、「膵島」ともいう）由来細胞株ＩＮＳ−１ｅを、本件硫酸化合物類（硫酸ナトリウムフェニル［ＰＳ］）存在下又は非存在下（溶媒の脱イオン水［Ｈ_２Ｏ］存在下）で培養したときのインスリン濃度（分泌量）を測定した結果を示す図である。図中の「＊」は、統計学的に有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。 グルコースで刺激したマウス膵ラ氏島を、本件硫酸化合物類（硫酸ナトリウムフェニル［１００μＭ ＰＳ］）存在下又は非存在下（溶媒の脱イオン水［Control］存在下）で培養したときのインスリン分泌量（図２Ａ）、タンパク質量で補正したインスリン分泌量（図２Ｂ）、当該マウス膵ラ氏島における全インスリン含量（図２Ｃ）、及びインスリン分泌率（全インスリン量に対する分泌したインスリンの割合）（図２Ｄ）を測定した結果を示す図である。図中の「＊」は、統計学的に有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。 図３Ａは、グルコースで刺激したＩＮＳ−１ｅ細胞を、８種類の本件硫酸化合物類（硫酸ナトリウムフェニル［ＰＳ］、硫酸カリウムｐ−クレゾール［＃１］、硫酸カリウムｐ−クロロフェノール［＃８］、硫酸カリウムｐ−ニトロフェノール［＃１１］、硫酸カリウムｏ−クレゾール［＃１４］、硫酸カリウムキノリノール［＃２１］、硫酸カリウム１−ナフトール［＃２２］、及び４−硫酸カリウムジヒドロフェルラ酸［＃２４］）存在下、又は非存在下（溶媒の脱イオン水［ｄＨ２Ｏ］存在下）で培養したときの、タンパク質量で補正したインスリン分泌量を測定した結果を示す図である。図３Ｂは、グルコースで刺激したＩＮＳ−１ｅ細胞を、９種類の本件硫酸化合物類（硫酸カリウム２−ナフトール［＃２０］、硫酸カリウムアンドロステロン［＃２３］、硫酸カリウムシクロヘキサノール［＃３４］、硫酸カリウムテストステロン［＃３５］、硫酸カリウム２−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド［＃３７］、硫酸カリウムｏ−メトキシフェニル［＃４２］、硫酸カリウム４−エチルフェニル［＃４８］、硫酸カリウムバニリン［＃５０］、及び硫酸カリウムチロシン［＃６９］）存在下、又は非存在下（溶媒のジメチルスルホキシド［ＤＭＳＯ］存在下）で培養したときの、タンパク質量で補正したインスリン分泌量を測定した結果を示す図である。図中の「＊」及び「＊＊」は、コントロールの溶媒（脱イオン水又はＤＭＳＯ）に対して、それぞれ統計学的に有意差（ｐ＜０．０５、及びｐ＜０．０１）があることを示す。 硫酸ナトリウムフェニルを投与した糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ マウス）（図中の「ＰＳ」）、又は硫酸ナトリウムフェニル非投与（溶媒の脱イオン水投与）のＫＫ−Ａｙ マウス（図中の「水」）を、グルコース負荷試験（ＧＴＴ；Glucose Tolerance Test）し、血中インスリン濃度を測定した結果を示す図である。横軸は、グルコース負荷後の経過時間（分）を示す。また、図中の「＊」は、統計学的に有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。 硫酸ナトリウムフェニルを投与したＫＫ−Ａｙ マウス（図中の「ＰＳ」）、又は硫酸ナトリウムフェニル非投与（溶媒の脱イオン水投与）のＫＫ−Ａｙ マウス（図中の「水」）を、インスリン負荷試験（ＩＰＴＴ；Insulin Tolerance Test）し、血糖値レベルを測定した結果を示す図である。横軸は、インスリン負荷後の経過時間（分）を示す。縦軸の「血糖値レベル」は、インスリン負荷直後（０分）の血糖値を１としたときの相対値として示す。また、図中の「＊」は、統計学的に有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。 腎臓由来エリスロポエチン産生細胞（ＲＥＰ細胞；renal erythropoietin-producing cell）株を、本件硫酸化合物類（硫酸ナトリウムフェニル［ＰＳ］）存在下又は非存在下（溶媒の脱イオン水［Ｈ_２Ｏ］存在下）で培養したときのＧＡＴＡによる転写活性化レベルを測定した結果を示す図である。

本発明のインスリン分泌促進剤は、「インスリン分泌を促進するため」という用途が限定された、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有する剤（以下、「本件インスリン分泌促進剤」ということがある）であり、また、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、「インスリン抵抗性を改善するため」という用途が限定された、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有する剤（以下、「本件インスリン抵抗性改善剤」ということがある）であり、また、本発明のインスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患の予防又は改善剤は、「インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患を予防又は改善するため」という用途が限定された、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有する剤（以下、「本件予防／改善剤」ということがある）であり、また、本発明のＧＡＴＡにより調節される転写の活性化剤は、「ＧＡＴＡにより調節される転写を活性化するため」という用途が限定された、本件硫酸化合物類から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有する剤（以下、「本件転写活性化剤」ということがある）である（これら剤を総称して、「本件剤」ということがある）。本件剤には、医薬品（インスリン分泌促進用製剤、インスリン抵抗性改善［治療］用製剤、インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患の予防用又は改善［治療］用製剤、ＧＡＴＡにより調節される転写の活性用製剤）の他、健康補助食品、保健機能食品、サプリメント等の特定の機能を有し、健康維持などを目的として摂食される医薬品類似の（食品）組成物や機能性食品も含まれる。

本発明において、「インスリン分泌促進」とは、膵島由来の細胞（β細胞等）から分泌されるインスリンの量（例えば、血中のグルコース濃度の上昇に伴い分泌されるインスリンの量）が増加することを意味する。「インスリン分泌促進」の有無は、グルコース負荷試験（ＧＴＴ；Glucose Tolerance Test）を行い、インスリン濃度を測定することにより確認・評価することができる。

本発明において、「インスリン抵抗性」とは、インスリンの感受性、より具体的には、インスリンの作用効果が低下（悪化）した状態を意味する。「インスリン抵抗性」は、インスリン受容体数の減少、インスリン拮抗物質の増加、インスリン受容体を介する細胞内へのシグナル伝達レベルの低下等が要因となる。「インスリン抵抗性」の有無は、インスリン負荷試験（ＩＰＴＴ；Insulin Tolerance Test）を行い、血糖値を測定することにより確認・評価することができる。

本発明において、「ＧＡＴＡにより調節される転写の活性化」とは、哺乳動物（例えば、ヒト）細胞において、転写因子である少なくとも１種類のＧＡＴＡタンパク質が調節する遺伝子の転写（ｍＲＮＡの発現）レベルが、活性化（増加）することを意味する。かかるＧＡＴＡタンパク質としては、具体的には、ＧＡＴＡ−１、ＧＡＴＡ−２、ＧＡＴＡ−３、ＧＡＴＡ−４、ＧＡＴＡ−５及びＧＡＴＡ−６タンパク質を挙げることができる。

本発明において用いられる化合物は、下記式（Ｉ）で表される化合物及びその薬理学的に許容される塩から選択される１種又は２種以上の化合物である。

（式中、Ａは、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のアルキルカルボニル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアリール基、置換若しくは無置換のキノリニル基、置換若しくは無置換のウンベリフェリル基、又は置換若しくは無置換のステロイド残基を表し、上記各基が置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−６アルキル基、フェニル基、置換フェニル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−６アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基を意味する）
以下、置換若しくは無置換のアルキル基、置換若しくは無置換のアルキルカルボニル基、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のアリール基、置換若しくは無置換のキノリニル基、置換若しくは無置換のウンベリフェリル基、及び置換若しくは無置換のステロイド残基の各々を官能基ということがある。

前記に加えて、本発明の別の態様として、Ａは、置換若しくは無置換のＣ_１−６アルキル基、置換若しくは無置換のＣ_１−６アルキルカルボニル基、置換若しくは無置換のＣ_３−８シクロアルキル基、置換若しくは無置換のフェニル基、置換若しくは無置換のナフチル基、置換若しくは無置換のフェニルＣ_１−６アルキル基、置換若しくは無置換のキノリニル基、置換若しくは無置換のウンベリフェリル基、置換若しくは無置換のアンドロステロン残基、置換若しくは無置換のデヒドロエピアンドロステロン残基、置換若しくは無置換のテストステロン残基、置換若しくは無置換のジヒドロテストステロン残基、置換若しくは無置換のエストロン残基、置換若しくは無置換のエストラジオール残基、又は置換若しくは無置換のエストリオール残基を表し、上記各基が置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−６アルキル基、フェニル基、置換フェニル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−６アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基を意味する。

本発明の更に別の態様として、Ａは、置換若しくは無置換のＣ_１−４アルキル基、置換若しくは無置換のＣ_１−４アルキルカルボニル基、無置換のＣ_５−６シクロアルキル基、置換若しくは無置換のフェニル基、置換若しくは無置換のナフチル基、置換若しくは無置換のキノリニル基、置換若しくは無置換のウンベリフェリル基、置換若しくは無置換のアンドロステロン残基、又は置換若しくは無置換のテストステロン残基を表し、上記各基が置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−４アルキル基、フェニル基、Ｃ_１−４アルコキシ置換フェニル基、Ｃ_１−４アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−４アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−４アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−４アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−４アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−４アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基を意味する。

本発明の更に別の態様として、Ａは、メトキシフェニル置換Ｃ_１−４アルキル基、フェニル置換Ｃ_１−４アルキルカルボニル基、無置換のＣ_５−６シクロアルキル基、置換若しくは無置換のフェニル基（置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−４アルキル基、ニトロ基、ハロゲン原子、Ｃ_１−４アルコキシ基、カルボキシ−Ｃ_１−４アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−４アルキル基、ヒドロキシ基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−４アルキル基、カルボキシ−Ｃ_１−４アルキル基、カルボキシ基、ヒドロキシ−Ｃ_１−４アルキル基、アセチル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−４アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基である）、無置換のナフチル基、無置換のキノリニル基、置換若しくは無置換のウンベリフェリル基（置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−４アルキル基である）、無置換のアンドロステロン残基、又は無置換のテストステロン残基を表す。

上記式（Ｉ）で表される化合物の薬理学的に許容される塩には、アンモニウム塩、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩；アルミニウム塩、亜鉛塩、鉄塩等の金属塩；トリエチルアミン、エタノールアミン、モルホリン、ピペリジン、ジシクロへキシルアミン等の有機アミンとの塩；アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸との塩などが含まれ、そのような塩としては、具体的には、硫酸ナトリウムフェニル、硫酸カリウムフェニル、硫酸カルシウムフェニル、硫酸マグネシウムフェニル、硫酸アンモニウムフェニル、硫酸テトラメチルアンモニウムフェニル、硫酸アルミニウムフェニル、硫酸亜鉛フェニル、硫酸トリエチルアミンフェニル、硫酸ピペリジンフェニル、及び硫酸モルホリンフェニル、硫酸カリウムｏ−クレゾール、硫酸カリウムｐ−ニトロフェノール、硫酸カリウムｐ−クロロフェノール、硫酸カリウムキノリノール、硫酸カリウム１−ナフトール、硫酸カリウム２−ナフトール、硫酸カリウム４−メチルウンベリフェリル、硫酸カリウムアンドロステロン、硫酸カリウムｐ−クレゾール、硫酸カリウムバニリン、硫酸カリウムチロシン、４−硫酸カリウムジヒドロフェルラ酸、硫酸カリウム２−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド、硫酸カリウムシクロヘキサノール、硫酸カリウム４−エチルフェニル、硫酸カリウムテストステロン、硫酸カリウムｏ−メトキシフェニル、硫酸カリウム４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニルグリコール、硫酸カリウムホモバニリン、４−ヒドロキシ安息香酸−４−Ｏ−硫酸カリウム、硫酸カリウムチロソール、硫酸カリウムウンベリフェリル、硫酸カリウム４−メトキシフェニルエタノール、硫酸カリウムカテコール、硫酸カリウムｐ−ヒドロキシフェノール、４−ヒドロキシブタン酸−Ｏ−硫酸カリウム、２，４−ジヒドロキシアセトフェノン ２−硫酸カリウム、及び３，４−ジヒドロキシフェニルグリコール Ｏ−硫酸カリウムを挙げることができる。

本発明において、「アルキル基」は、−Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１（式中、ｎは自然数である）で表される直鎖若しくは分岐鎖の１価の基を意味する。例えば、炭素数１〜２０のアルキル基（Ｃ_１-２０アルキル基）、炭素数１〜１６のアルキル基（Ｃ_１-１６アルキル基）、炭素数１〜１２のアルキル基（Ｃ_１-１２アルキル基）、炭素数１〜８のアルキル基（Ｃ_１-８アルキル基）、炭素数１〜６のアルキル基（Ｃ_１-６アルキル基）、炭素数１〜４のアルキル基（Ｃ_１-４アルキル基）等を挙げることができる。具体的なアルキル基として、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基（ｔ−ブチル基）、ペンチル基、イソペンチル基（３−メチルブチル基）、ｓｅｃ−ペンチル基（１−メチルブチル基）、３−ペンチル基（１−エチルプロピル基）、ｔｅｒｔ−ペンチル基（１，１−ジメチルプロピル基）、ヘキシル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、オクチル基、イソオクチル基、及び１−メチルヘプチル基等が例示される。

本発明において、「アルキルカルボニル基」は、前記アルキル基にカルボニル基が結合した１価の基、即ち、−ＣＯ−Ｃ_ｎＨ_２ｎ＋１（式中、ｎは自然数である）で表される１価の基を意味する。例えば、アルキル基部分の炭素数が１〜２０のアルキルカルボニル基（Ｃ_１-２０アルキルカルボニル基）、アルキル基部分の炭素数が１〜１６のアルキルカルボニル基（Ｃ_１-１６アルキルカルボニル基）、アルキル基部分の炭素数が１〜１２のアルキルカルボニル基（Ｃ_１-１２アルキルカルボニル基）、アルキル基部分の炭素数が１〜８のアルキルカルボニル基（Ｃ_１-８アルキルカルボニル基）、アルキル基部分の炭素数が１〜６のアルキルカルボニル基（Ｃ_１-６アルキルカルボニル基）、アルキル基部分の炭素数が１〜４のアルキルカルボニル基（Ｃ_１-４アルキルカルボニル基）等を挙げることができる。具体的なアルキル基として、アセチル基、プロピオニル基、ブタノイル基（ブチリル基）、ｓｅｃ−ブチルカルボニル基、イソブチルカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブチルカルボニル基（ｔ−ブチルカルボニル基）、ペンタノイル基、イソペンチルカルボニル基（３−メチルブチルカルボニル基）、ｓｅｃ−ペンチルカルボニル基（１−メチルブチルカルボニル基）、３−ペンチルカルボニル基（１−エチルプロピルカルボニル基）、ｔｅｒｔ−ペンチルカルボニル基（１，１−ジメチルプロピルカルボニル基）、ヘキサノイル基、２−メチルペンチルカルボニル基、３−メチルペンチルカルボニル基、２，２−ジメチルブチルカルボニル基、２，３−ジメチルブチルカルボニル基、オクタノイル基、イソオクチルカルボニル基、及び１−メチルヘプチルカルボニル基等が例示される。

本発明において、「シクロアルキル基」は、シクロアルカン（飽和な単環式の炭化水素）の任意の環炭素原子（ring carbon atom）から一個の水素原子を除去することにより得られる一価の基、即ち、Ｃ_ｎＨ_２ｎー１−（式中、ｎは３以上の自然数である）で表される環状アルカンの一価の基を意味する。例えば、炭素数３〜２０のシクロアルキル基（Ｃ_３-２０シクロアルキル基）、炭素数３〜１６のシクロアルキル基（Ｃ_３-１６シクロアルキル基）、炭素数３〜１２のシクロアルキル基（Ｃ_３-１２シクロアルキル基）、炭素数３〜８のシクロアルキル基（Ｃ_３-８シクロアルキル基）、炭素数３〜６のシクロアルキル基（Ｃ_３-６シクロアルキル基）、炭素数５〜６のアルキル基（Ｃ_５-６アルキル基）等を挙げることができる。具体的なシクロアルキル基として、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、及びシクロオクチル基等を例示することができる。

本発明において、「アリール基」は、単環式または多環式の芳香族の炭化水素の任意の環炭素原子から一個の水素原子を除去することにより得られる一価の基を意味する。具体的なアリール基として、フェニル基、トリル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、１−アントラセニル基、２−アントラセニル基、１−フェナントレニル基、２−フェナントレニル基、１−ピレニル基、及び２−ピレニル基等が例示される。

本発明において、「キノリニル基」は、キノリンの任意の環炭素原子の一個の水素原子を除去することにより得られる一価の基を意味する。例えば、２−キノリニル基、３−キノリニル基、４−キノリニル基、５−キノリニル基、６−キノリニル基、７−キノリニル基、８−キノリニル基を挙げることができる。

本発明において、「ウンベリフェリル基」は、７−クマリニル基と同義である。

本発明において、「ステロイド残基」は、ステロイド骨格の環構造中に少なくとも１個のヒドロキシ基を有するステロイド化合物、例えば、３位及び１７位の少なくとも一方にヒドロキシ基を有するステロイド化合物、から一個のヒドロキシ基を除去することにより得られる一価の基を意味する。かかるステロイド化合物としては、アンドロステロン、コレステロール、コール酸、エステロン、デヒドロエピアンドステロン、エストラジオール、エストリオール、テストステロン、及びジヒドロテストステロン等が例示される。

本発明において、「アルコキシ基」は、「−Ｏ−アルキル基」で表される基を意味する。アルキル基は前記のとおりの意味を有する。例えば、炭素数１〜２０のアルコキシ基（Ｃ_１-２０アルコキシ基）、炭素数１〜１６のアルコキシ基（Ｃ_１-１６アルコキシ基）、炭素数１〜１２のアルコキシ基（Ｃ_１-１２アルコキシ基）、炭素数１〜８のアルコキシ基（Ｃ_１-８アルコキシ基）、炭素数１〜６のアルコキシ基（Ｃ_１-６アルコキシ基）、炭素数１〜４のアルコキシ基（Ｃ_１-４アルコキシ基）等を挙げることができる。具体的なアルコキシ基として、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基（ｔ−ブトキシ基）、ペントキシ基、イソペントキシ基（３−メチルブトキシ基）、ｓｅｃ−ペントキシ基（１−メチルブトキシ基）、３−ペントキシ基（１−エチルプロポキシ基）、ｔｅｒｔ−ペントキシ基（１，１−ジメチルプロポキシ基）、ヘキソキシ基、２−メチルペントキシ基、３−メチルペントキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、オクトキシ基、イソオクトキシ基、及び１−メチルヘプトキシ基等が例示される。

本発明において、「ハロゲン原子」は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、及びヨウ素原子のいずれかを意味する。

本発明において、「カルボキシアルキル基」は、アルキル基の任意の炭素原子に結合している１個の水素原子が１個のカルボキシ基に置き換わった基を意味する。アルキル基は前記のとおりの意味を有する。かかるカルボキシアルキル基として、例えば、カルボキシ−Ｃ_１-１２アルキル基，カルボキシ−Ｃ_１-８アルキル基，カルボキシ−Ｃ_１−６アルキル基、及びカルボキシ−Ｃ_１-４アルキル基を挙げることができる。カルボキシがアルキル基の末端の炭素原子に結合しているカルボキシアルキル基、例えば、−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、及び−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＯＨ、が好ましい。なお、カルボキシアルキル基におけるカルボキシのＨは、Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ、Ｃａ、Ｚｎ、Ｆｅ等の金属原子によって置き換わっていてもよい（例えば、−ＣＯＯＫ、及び−ＣＯＯＮａ）。

本発明において、「ヒドロキシアルキル基」は、アルキル基の任意の炭素原子に結合している１個の水素原子が１個のヒドロキシ基に置き換わった基を意味する。アルキル基は前記のとおりの意味を有する。かかるヒドロキシアルキル基として、例えば、ヒドロキシ−Ｃ_１-１２アルキル基，ヒドロキシ−Ｃ_１-８アルキル基，ヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、及びヒドロキシ−Ｃ_１-４アルキル基を挙げることができる。ヒドロキシがアルキル基の末端の炭素原子に結合しているヒドロキシアルキル基、例えば、−ＣＨ_２−ＯＨ、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＯＨ、及び−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＯＨ、が好ましい。

本発明において、「ジヒドロキシアルキル基」は、アルキル基の任意の炭素原子に結合している２個の水素原子が２個のヒドロキシ基に置き換わった基を意味する。前記２個の水素原子は、同一の炭素原子でも異なる炭素原子でもよい。アルキル基は前記のとおりの意味を有する。かかるジヒドロキシアルキル基として、例えば、ジヒドロキシ−Ｃ_１-１２アルキル基，ジヒドロキシ−Ｃ_１-８アルキル基，ジヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、及びジヒドロキシ−Ｃ_１-４アルキル基を挙げることができる。かかるジヒドロキシアルキル基の例として、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_２−ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＯＨ、及び−ＣＨ（ＣＨ_２−ＯＨ）−ＣＨ_２−ＯＨを挙げることができる。

本発明において、「カルバモイルアルキル基」は、アルキル基の任意の炭素原子に結合している１個の水素原子が１個のカルバモイル（−ＣＯＮＨ_２）基に置き換わった基を意味する。アルキル基は前記のとおりの意味を有する。かかるカルバモイルアルキル基として、例えば、カルバモイル−Ｃ_１-１２アルキル基，カルバモイル−Ｃ_１-８アルキル基，カルバモイル−Ｃ_１−６アルキル基、及びカルバモイル−Ｃ_１-４アルキル基を挙げることができる。カルバモイルがアルキル基の末端の炭素原子に結合しているカルバモイルアルキル基、例えば、−ＣＨ_２−ＣＯＮＨ_２、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＮＨ_２、及び−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯＮＨ_２、が好ましい。

本発明において、「末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたアルキル基」は、アルキル基の末端の炭素原子がカルボキシ基及びアミノ基によって置換されたアルキル基を意味する。アルキル基は前記のとおりの意味を有する。かかる末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたアルキル基として、末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−１２アルキル基、末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−８アルキル基、末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基、及び末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−４アルキル基を挙げることができる。なお、カ末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたアルキル基におけるカルボキシのＨは、Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ、Ｃａ、Ｚｎ、Ｆｅ等の金属原子によって置き換わっていてもよい（例えば、−ＣＯＯＫ、及び−ＣＯＯＮａ）。

本発明において、ある官能基について「置換又は無置換」という場合には、その官能基が置換基を有しない場合と１又は２以上の置換基を有する場合とがあることを示している。ある官能基が置換基を有する場合、結合する置換基の個数、置換位置、及び種類は特に限定されない。ある官能基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。本発明において、ある官能基が置換基を有する場合、置換基の例としては、アルキル基、アリール基、置換アリール基、アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシアルキル基、ヒドロキシアルキル基、ジヒドロキシアルキル基、カルバモイルアルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたアルキル基を挙げることができる。これらの置換基は前記のとおりの意味を有する。

また、本発明において、ある官能基が置換基を有する場合、置換基の例としては、Ｃ_１−６アルキル基、フェニル基、置換フェニル基、Ｃ_１−６アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−６アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基を挙げることができる。

更に、本発明において、ある官能基が置換基を有する場合、置換基の例としては、Ｃ_１−４アルキル基、フェニル基、Ｃ_１−４アルコキシ置換フェニル基、Ｃ_１−４アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−４アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−４アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−４アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−４アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−４アルキル基を挙げることができる。

更に加えて、本発明において、ある官能基が置換基を有する場合、置換基の例としては、Ｃ_１−４アルキル基の置換基としてメトキシフェニル基、Ｃ_１−４アルキルカルボニル基の置換基としてフェニル基、フェニル基の置換基としてＣ_１−４アルキル基、ニトロ基、ハロゲン原子、Ｃ_１−４アルコキシ基、カルボキシ−Ｃ_１−４アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−４アルキル基、ヒドロキシ基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−４アルキル基、カルボキシ−Ｃ_１−４アルキル基、カルボキシ基、ヒドロキシ−Ｃ_１−４アルキル基、アセチル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−４アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基、並びにウンベリフェリル基の置換基としてＣ_１−４アルキル基を挙げることができる。

本発明において用いられる式（Ｉ）で表される化合物及びその薬理学的に許容される塩の中に、幾何異性体、光学異性体等の立体異性体が存在する場合は、当該異性体、ラセミ体等の化合物はすべて本発明の化合物の範囲に包含される。

式（Ｉ）で表される本発明化合物の具体例を以下に示す。

本件剤は、必要に応じて、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、等張剤、添加剤、被覆剤、可溶化剤、潤滑剤、滑走剤、溶解補助剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等の配合成分がさらに添加されたものを例示することができる。かかる配合成分としては、具体的に、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。

本件予防／改善剤の予防又は改善対象の疾患である、インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患としては、膵臓から産生されるインスリンの分泌低下や、インスリンの抵抗性に起因して生じる疾患であればよく、例えば、肥満、耐糖能不全、高脂血症、糖尿病（例えば、１型糖尿病、２型糖尿病、膵性糖尿病）、高血糖症、高血圧、糖尿病神経障害、糖尿病腎症、糖尿病網膜症、浮腫、不安定糖尿病、脂肪萎縮、インスリンアレルギー、インスリノーマを挙げることができ、これらの中でも糖尿病が好ましい。

上記本件硫酸化合物類は、インスリン分泌、特にグルコース刺激によるインスリン分泌を効果的に促進する作用や、インスリン抵抗性を効果的に改善する作用や、血糖降下を効果的に促進する作用を有する。したがって、本件硫酸化合物類を有効成分として含有する本件インスリン分泌促進剤又は本件インスリン抵抗性改善剤は、前述のインスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患の予防用若しくは改善用剤に有利に適用することができる。本件インスリン分泌促進剤、本件インスリン抵抗性改善剤、又は本件予防／改善剤を用いると、インスリン分泌低下、インスリンに対する感受性低下（悪化）、及び／又は高血糖を抑制又は予防し、インスリン分泌、インスリンに対する感受性、及び／又は血糖値を正常に調節することができる。

また、上記本件硫酸化合物類は、ＧＡＴＡにより調節される転写を活性化する作用を有する。したがって、本件硫酸化合物類を有効成分として含有する本件転写活性化剤は、ＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下に起因する疾患の予防又は改善剤に有利に適用することができる。本明細書において、「ＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下に起因する疾患」としては、ＧＡＴＡタンパク質の変異や、ＧＡＴＡタンパク質の結合配列（ＧＡＴＡ配列）の変異等が要因となり、ＧＡＴＡ配列の下流に位置する遺伝子の転写（ｍＲＮＡの発現）レベルが低下することに起因する疾患であればよく、具体的には、前述のインスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する具体的な疾患のうち、ＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下に起因して生じる疾患の他、ＧＡＴＡ（好ましくはＧＡＴＡ２又はＧＡＴＡ−３）のハプロ不全（例えば、副甲状腺機能低下症、感音性難聴、腎形成不全等）を挙げることができる。

本件剤の投与形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液などの剤型で投与する経口投与や、溶液、乳剤、懸濁液などの剤型を注射、又はスプレー剤の型で鼻孔内投与する非経口投与を挙げることができ、経口投与が好ましい。

本件剤の投与量は、年齢、体重、性別、症状、薬剤への感受性等に応じて適宜決定される。通常、１μｇ〜２００ｍｇ／ｄａｙの投与量の範囲で、好ましくは２μｇ〜２０００μｇ／ｄａｙの投与量の範囲で、より好ましくは３〜２００μｇ／ｄａｙの投与量の範囲で、さらに好ましくは４〜２０μｇ／ｄａｙの投与量の範囲で、一日あたり単回又は複数回（例えば、２〜４回）に分けて投与されるが、症状の改善の状況に応じて投与量を調節してよい。

本件硫酸化合物類は、化学合成、微生物による生産、酵素による生産等のいずれの公知の方法によっても製造することができるが、市販品を用いることもできる。例えば、本件硫酸化合物類として硫酸カリウムフェニルを用いる場合、文献（J.Feigenbaum and C.A.Neuberg J Am Chem Soc.,63,p.3529-3530(1941)）に記載の「Simplified Method for the Preparation of Aromatic Sulfuric Acid Esters（芳香族硫酸エステルの簡易合成法）」にしたがって製造することができる。すなわち、氷冷した、フェノールのジメチルアニリン溶液に、均一にかき混ぜながら、塩化スルホン酸（ＨＳＯ_３Ｃｌ）を滴下する。次いで、強アルカリ性の水酸化カリウム水溶液を等量加えてアルカリ性溶液とした後、固形部分を吸引により濾別し、エーテルで十二分に洗浄する。エステル塩を残留物から熱アルコール（９５％）で抽出し、アルコール溶液を加熱した漏斗で濾過した後、放冷して得られる結晶を濾取し、冷アルコールで洗浄する。最少量の熱水から再結晶して、白色の純粋な目的物（硫酸カリウムフェニル）を得ることができる。また、本件硫酸化合物類として硫酸ナトリウムフェニルを用いる場合、上述の芳香族硫酸エステルの簡易合成法において、水酸化カリウム水溶液に代えて水酸化ナトリウム水溶液を用いる方法や、本実施例に記載の合成方法にしたがって製造することができる。

前記製造方法によって、目的とする本件硫酸化合物類に対応するフェノール化合物を出発原料として、下記の化合物を製造することができる。

１）Ｘ＝２，４−ジニトロ
２）Ｘ＝２，５−ジニトロ
３）Ｘ＝２，３，４，５，６−ペンタフルオロ
４）Ｘ＝４−ニトロ
５）Ｘ＝２−ニトロ
６）Ｘ＝３−ニトロ
７）Ｘ＝３−クロロ
８）Ｘ＝４−クロロ
９）Ｘ＝２，４−ジメチル
また、目的とするアルキルサルフェートに対応するアルコールを出発原料として、前記製造方法と同様にして、下記の硫酸アルキル類を製造することができる。

１０）Ｘ＝−ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３
１１）Ｘ＝−ＣＨ_２（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３
更に、式（Ｉ）におけるＡがフェニル基及びアルキル基以外の官能基の場合についても、目的とする本件硫酸化合物類に対応する、ヒドロキシ基を有する化合物を用いて、式（Ｉ）におけるＡがフェニル基及びアルキル基以外の官能基を有する本件硫酸化合物類を製造することができる。以下に製造された本件硫酸化合物類を記載する。

以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。

［材料］
１．硫酸ナトリウムフェニル
硫酸ナトリウムフェニルは、以下の〔１〕〜〔４〕に示す手順にしたがって製造されたものを、ナミキ商事株式会社から入手した。

〔１〕イソブチルアルコール（１）に塩化スルフリル(ＳＯ_２Ｃｌ_２)を添加して、イソブチルクロロサルフェート（２）を得た。
〔２〕ヘキサメチルジシラザンナトリウム（ＮａＨＭＤＳ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液にフェノールを溶解したものに、−７８℃に冷却下で、撹拌しながらイソブチルクロロサルフェート（２）を滴加して、フェニルイソブチルサルフェート（３）を含む反応混合液を得た。
〔３〕フェニルイソブチルサルフェート（３）を含む反応混合液を徐々に室温に戻し、撹拌しながら、ナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）のメタノール溶液を添加した。
〔４〕減圧下で溶媒を除去し、残留物をエタノールで再結晶し、白色結晶として硫酸ナトリウムフェニル（４）を得た。

２．フェニルサルフェート類縁体の合成法
以下に代表例としてo-クレゾールサルフェートカリウムの合成法を示す。その他のサルフェート体の合成には合成原料に対応するフェノール類（またはアルコール類）を合成原料に用いることで目的のサルフェート体が得られる。また、合成に用いる合成原料、反応試薬は一般的な市販品である。

ｏ−クレゾールサルフェートカリウムの合成

ネジ付試験管（２５φｘ１５０ｍｍ）に撹拌子を入れ、ｏ−クレゾール（１０ｍｍｏｌ)と三酸化硫黄-ピリジン錯体（１１ｍｍｏｌ）とピリジン（５ｍＬ）を混合し、キャップで封管し、４５℃で２時間撹拌した。室温に戻し、氷冷下にて反応液を水酸化カリウム水溶液（１Ｍ、５０ｍＬ）中にゆっくり滴下した。次に、イソプロパノールを約２００ｍＬ加えて冷蔵庫に終夜静置した。析出物を桐山ロートで濾取し、イソプロパノールで洗浄した。得られた固体を２００ｍＬフラスコに移し、エタノール:水＝３:１の溶液を約１００ｍＬ加え、超音波照射及び湯浴（＞８０℃）による十分な加熱溶解を行った。不溶物を濾過し、濾液を冷蔵庫に終夜静置した。析出物を濾取し、前述の溶解・沈殿操作を繰り返すことにより目的のｏ−クレゾールサルフェートカリウムを得た（白色粉末、収率：２１％）。生成物は^１Ｈ−ＮＭＲ、元素分析により同定した。（参考文献： Edwards, D. R.; Lohman, D. C.; Wolfenden, R. J. Am. Chem. Soc. 2012, 134, 525.）
元素分析（Ｃ_７Ｈ_７ＫＯ_４Ｓ）
計算値：Ｃ，３７．１５；Ｈ，３．１２．
実測値：Ｃ，３７．０４；Ｈ，３．１１．
^１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）d：７．３６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．２９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．２，７．６Ｈｚ），７．２５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．２，７．６Ｈｚ），２．３３（ｓ，３Ｈ）

３．ラ氏島由来細胞株及びラ氏島、並びに腎臓由来細胞株
ラットランゲルハンス氏島（ラ氏島、膵島）由来細胞株ＩＮＳ−１ｅは、１ｍＭ ピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ グルタミン、５０μＭ β-メルカプトエタノール（以上、すべてSigma-Aldrich社製）、１００Ｕ／ｍＬ ペニシリン（GIBCO社製）、１００μｇ／ｍＬ ストレプトマイシン（GIBCO社製）、及び１０％ 非動化ＦＢＳ（GIBCO社製）を含むＲＰＭＩ１６４０（GIBCO社製）培養液中で５％ＣＯ_２／２０％Ｏ_２、３７℃条件下で培養・維持した。また、マウス膵ラ氏島は、５．５ｍＭ グルコース、０．５％ ＢＳＡ（bovine serum albumin）、１００μｇ／ｍＬ ストレプトマイシン（GIBCO社製）、及び１０％ 非動化ＦＢＳ（GIBCO社製）を含むＲＰＭＩ１６４０（GIBCO社製）培養液中で５％ＣＯ_２／２０％Ｏ_２、湿度９５％、３７℃条件下で培養・維持した。また、ＲＥＰ細胞株は、１００Ｕ／ｍＬ ペニシリン（GIBCO社製）、１００μｇ／ｍＬ ストレプトマイシン（GIBCO社製）、及び１０％ 非動化ＦＢＳ（GIBCO社製）を含むＤＭＥＭ（GIBCO社製）培養液（以下、単に「１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ培養液」という）中で５％ＣＯ_２／２０％Ｏ_２、湿度９５％、３７℃条件下で培養・維持した。

［実施例１］
１．本件硫酸化合物類がインスリン分泌促進作用を有することの確認１
本件硫酸化合物類がインスリン分泌促進作用を有することを確認するために、ＩＮＳ−１ｅ細胞、及びマウス膵ラ氏島を用いて解析した。

１−１ 方法
１−１−１ ＩＮＳ−１ｅ細胞を用いた解析
グルコース刺激によるインスリン分泌は、文献（Santini, E. et al., Diabetes 53 Suppl. 3:S79-S83, 2004）に記載の方法にしたがって行った。すなわち、１２穴プレートにＩＮＳ−１ｅ細胞を１０万個まき、４８時間培養した後、硫酸ナトリウムフェニルを、最終濃度１００μＭになるように培養液に添加し、更に２４時間培養した。その後、当該細胞をＫＲＢ（Krebs Ringer bicarbonate）バッファー（１３５ｍＭ 塩化ナトリウム、３．６ｍＭ 塩化カリウム、５ｍＭ 炭酸水素ナトリウム、０．５ｍＭ リン酸二水素ナトリウム、０．５ｍＭ 塩化マグネシウム、１．５ｍＭ 塩化カルシウム、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ［ｐＨ ７．４］、及び０．１％ ＢＳＡ）中で１時間培養した後、新しいＫＲＢバッファーで２回細胞を洗浄し、１１ｍＭ グルコースを含むＫＲＢバッファー中でさらに１時間培養した。その後、培養上清（ＫＲＢバッファー）を回収し、培養上清中のインスリン濃度を、ラットインスリンＥＬＩＳＡキット(Mercodia社製)を用いて測定した。なお、硫酸ナトリウムフェニルに代えてコントロールとして蒸留水を用いた。

１−１−２ マウス膵ラ氏島を用いた解析
３０個のマウス膵ラ氏島を、１１週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスから文献（Takahashi,I. et al.,J Diabetes Investig. 3(4):362-370, 2012）に記載の方法にしたがって単離し、硫酸ナトリウムフェニルを、最終濃度１００μＭになるように培養液に添加し、４８時間培養した。その後、当該ラ氏島を、２．８ｍＭ グルコースを含むＫＲＢバッファー中で１時間培養し、１１ｍＭ グルコースを含む新しいＫＲＢバッファーに交換した後、さらに１時間培養した。その後、培養上清中のインスリン濃度を、ラットインスリンＥＬＩＳＡキット（Mercodia社製）を用いて測定した。また、培養上清中の全タンパク質量は、ＢＣＡタンパク質定量用試薬（Micro-BCA Protein Assay Reagent、PIERCE社製）を用いて測定した。なお、硫酸ナトリウムフェニルに代えてコントロールとして蒸留水を用いた。

１−２ 結果
グルコースで刺激したＩＮＳ−１ｅ細胞を、硫酸ナトリウムフェニル存在下で培養すると、硫酸ナトリウムフェニル非存在下で培養した場合と比べ、分泌されるインスリン量が増加することが示された（図１参照）。また、グルコースで刺激したマウス膵ラ氏島を、硫酸ナトリウムフェニル存在下で培養した場合も同様に、分泌されるインスリン量が増加することが示された（図２参照）。

［実施例２］
２．本件硫酸化合物類がインスリン分泌促進作用を有することの確認２
硫酸フェニル以外の本件硫酸化合物類についても、グルコース刺激によるインスリン分泌を増加させる作用を有することを確認するために、１６種類の本件硫酸化合物類（硫酸カリウムｐ−クレゾール、硫酸カリウムｐ−クロロフェノール、硫酸カリウムｐ−ニトロフェノール、硫酸カリウムｏ−クレゾール、硫酸カリウムキノリノール、硫酸カリウム１−ナフトール、４−硫酸カリウムジヒドロフェルラ酸、硫酸カリウム２−ナフトール、硫酸カリウムアンドロステロン、硫酸カリウムシクロヘキサノール、硫酸カリウムテストステロン、硫酸カリウム２−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド、硫酸カリウムｏ−メトキシフェニル、硫酸カリウム４−エチルフェニル、硫酸カリウムバニリン、及び硫酸カリウムチロシン）を用い、実施例１の上記「１−１−１」の項目に記載の方法にしたがって解析を行った。
その結果、グルコースで刺激したＩＮＳ−１ｅ細胞を、上記１６種類の本件硫酸化合物類存在下で培養すると、上記１６種類の本件硫酸化合物類非存在下で培養した場合と比べ、分泌されるインスリン量が増加することが示された（図３参照）。
以上の結果は、本件硫酸化合物類（例えば、硫酸フェニル、硫酸ｐ−クレゾール、硫酸ｐ−クロロフェノール、硫酸ｐ−ニトロフェノール、硫酸ｏ−クレゾール、硫酸キノリノール、硫酸１−ナフトール、４−硫酸ジヒドロフェルラ酸、硫酸２−ナフトール、硫酸アンドロステロン、硫酸シクロヘキサノール、硫酸テストステロン、硫酸２−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド、硫酸ｏ−メトキシフェニル、硫酸４−エチルフェニル、硫酸バニリン、硫酸チロシン等）は、ラ氏島において、グルコース刺激によるインスリン分泌を増加させる作用を有することを示している。

［実施例３］
３．本件硫酸化合物類がインスリン分泌低下やインスリン抵抗性に起因する疾患に有用であることの確認
本件硫酸化合物類が、インスリン分泌低下やインスリン抵抗性に起因する疾患に有用であることを確認するために、実施例１及び２において、インスリン分泌を増加させる作用を有することを具体的に示した本件硫酸化合物類のうち、代表例として硫酸ナトリウムフェニルを用い、糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ マウス）を用いて解析した。

３−１ 方法
３−１−１ グルコース負荷試験（ＧＴＴ）
ＫＫ−Ａｙ マウス６週齢（CLEA Japan,Inc）に、０．１％ 硫酸ナトリウムフェニルを含む水、又は硫酸ナトリウムフェニル不含の水を給水ボトルで与え、５週間後に定法にしたがってＧＴＴ（２ｇグルコース／マウス体重［ｋｇ］）、及び血中インスリン濃度の測定を行った。

３−１−２ インスリン負荷試験（ＩＰＴＴ）
ＫＫ−Ａｙ マウス６週齢（CLEA Japan,Inc）に、０．１％ 硫酸ナトリウムフェニルを含む水、又は硫酸ナトリウムフェニル不含の水を給水ボトルで与え、５週間後に定法にしたがってＩＰＴＴ（１Ｕ インスリン／マウス体重［ｋｇ］）、及び血糖値の測定を行った。

３−２ 結果
硫酸ナトリウムフェニルを投与したＫＫ−Ａｙ マウスに、グルコース負荷させると、硫酸ナトリウムフェニル非投与のＫＫ−Ａｙ マウスに、グルコース負荷させた場合と比べ、血中インスリン濃度が増加することが示された（図４参照）。
この結果から、硫酸フェニルは、インビボ（糖尿病モデルＫＫ−Ａｙ マウス）において、グルコース刺激によるインスリン分泌を増加させる作用を有することが示された。

また、硫酸ナトリウムフェニルを投与したＫＫ−Ａｙ マウスに、インスリン負荷させると、硫酸ナトリウムフェニル非投与のＫＫ−Ａｙ マウスに、インスリン負荷させた場合と比べ、血糖値レベルが低下することが示された（図５参照）。
この結果は、硫酸フェニルは、インビボ（糖尿病モデルＫＫ−Ａｙ マウス）において、インスリン抵抗性を改善する作用を有することを示している。

実施例１〜３の結果をまとめると、本件硫酸化合物類は、ラ氏島のインスリン分泌を促進したり、インスリン抵抗性を改善することにより、血糖降下を促進すると考えられる。

［実施例４］
４．本件硫酸化合物類がＧＡＴＡによる転写活性化を促進する作用を有することの確認
本件硫酸化合物類によるインスリン分泌促進作用又はインスリン抵抗性改善作用が、どのようなメカニズムで生じるかについて解析するために、本件硫酸化合物類を用いて、４５種類の転写因子によるｍＲＮＡの発現レベルの変化を解析した。

４−１ 方法
以下の手順〔１〕〜〔７〕に従って行った。
〔１〕Cignal transduction 45 pathways plate（QIAGEN社製）に、１ウェル当たり１５０μＬのOpti-MEM I（GIBCO社製）を加え、軽く前後させることにより、各ウェル表面上に乾燥状態で付着した２種類のルシフェラーゼレポーターベクター（４５種類の転写因子に応答して発現するホタル［firefly］ルシフェラーゼレポーターベクター、及び恒常的に発現するウミシイタケ［renilla］ルシフェラーゼレポーターベクター）を溶解した。
〔２〕０．６μＬのLipofectamin 2000（Invitrogen社製）を、５０μＬのOpti-MEM Iに加え、室温で５分間インキュベートした後、かかるLipofectamin 2000／Opti-MEM I溶液を、上記〔１〕で調製した各ウェルに５０μＬずつ加え、室温で２０分間インキュベートした。
〔３〕ＲＥＰ細胞を、３×１０^４個／５０μＬの濃度となるように、抗生物質（ペニシリン及びストレプトマイシン）不含の１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ培養液中に懸濁し、各ウェルに５０μＬずつ播種し、２４時間培養した。
〔４〕各ウェルの培養液を、１００μＭの硫酸ナトリウムフェニルを含む０．５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ培養液１００μＬ、又はコントロールとして硫酸ナトリウムフェニル不含の１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ培養液１００μＬに交換し、６時間培養した。
〔５〕培養液を除去し、１００μＬのＰＢＳで細胞を洗浄した。
〔６〕細胞溶解用試薬であるＰＬＢ（Passive Lysis Buffer）を１倍量各ウェルに添加し、室温で１５分間インキュベートした。
〔７〕Dual Luciferase Reporter Assay System（Promega社製）を使用してルシフェラーゼレポーターアッセイを行い、Fire fly及びRenillaのルシフェラーゼ量の測定は、ルミノメーターLumat LB9507（NERTHOLD TECHNOLOGIES社製）を用いて行った。転写活性化レベルは、Fireflyルシフェラーゼ量を、内部コントロールであるRenillaルシフェラーゼ量で割ることにより算出した（図６の縦軸参照）。

４−２ 結果
ＲＥＰ細胞を、硫酸ナトリウムフェニル存在下で培養すると、硫酸ナトリウムフェニル非存在下で培養した場合と比べ、ＧＡＴＡにより調節されるｍＲＮＡの発現レベルが上昇することが示された（図６参照）。
この結果は、硫酸フェニル等の本件硫酸化合物類が、ＧＡＴＡにより調節される転写を活性化する作用を有することを示している。
また、実施例１〜３の結果を総合すると、本件硫酸化合物類が、ＧＡＴＡにより調節される転写を活性化した結果、氏島のインスリン分泌を促進したり、インスリン抵抗性を改善したと推測される。

本発明は、インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患、或いはＧＡＴＡにより調節される転写レベルの低下に起因する疾患の予防又は改善（治療）に資するものである。

Claims (9)

1. 下記式（Ｉ）
   

   

   （式中、Ａは、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のフェニル基、置換若しくは無置換のナフチル基、置換若しくは無置換のキノリニル基、又は置換若しくは無置換のステロイド残基を表し、上記各基が置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−６アルキル基、フェニル基、Ｃ _１−６アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−６アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基を意味する）
   で表される化合物及びその薬理学的に許容される塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とするインスリン分泌促進剤又はインスリン抵抗性改善剤。
2. 化合物が、下記のいずれかの化合物であることを特徴とする請求項１に記載のインスリン分泌促進剤又はインスリン抵抗性改善剤。
   

   
3. 経口投与することを特徴とする請求項１又は２に記載のインスリン分泌促進剤又はインスリン抵抗性改善剤。
4. 下記式（Ｉ）
   

   

   （式中、Ａは、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のフェニル基、置換若しくは無置換のナフチル基、置換若しくは無置換のキノリニル基、又は置換若しくは無置換のステロイド残基を表し、上記各基が置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−６アルキル基、フェニル基、Ｃ _１−６アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−６アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基を意味する）
   で表される化合物及びその薬理学的に許容される塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする、インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患の予防又は改善剤。
5. 化合物が、下記のいずれかの化合物であることを特徴とする請求項４に記載の予防又は改善剤。
   

   
6. 経口投与することを特徴とする請求項４又は５に記載の予防又は改善剤。
7. インスリン分泌低下又はインスリン抵抗性に起因する疾患が、糖尿病であることを特徴とする請求項４〜６のいずれかに記載の予防又は改善剤。
8. 下記式（Ｉ）
   

   

   （式中、Ａは、置換若しくは無置換のシクロアルキル基、置換若しくは無置換のフェニル基、置換若しくは無置換のナフチル基、置換若しくは無置換のキノリニル基、又は置換若しくは無置換のステロイド残基を表し、上記各基が置換基を有する場合、当該置換基は、Ｃ_１−６アルキル基、フェニル基、Ｃ _１−６アルコキシ基、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルデヒド基、アセチル基、カルボキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、ジヒドロキシ−Ｃ_１−６アルキル基、カルバモイル−Ｃ_１−６アルキル基、並びに末端の炭素原子がカルボキシ及びアミノによって置換されたＣ_１−６アルキル基からなる群より選択される１若しくは２以上の基を意味する）
   で表される化合物及びその薬理学的に許容される塩から選択される１種又は２種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする、ＧＡＴＡにより調節される転写の活性化剤。
9. 化合物が、下記の化合物であることを特徴とする請求項８に記載の活性化剤。
   

   

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