JP6908531B2 - アルデヒドに基づく固定溶液における長時間浸漬を用いる、組織試料固定法 - Google Patents
アルデヒドに基づく固定溶液における長時間浸漬を用いる、組織試料固定法 Download PDFInfo
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Description
本明細書において、2015年1月27日に提出された米国仮特許出願第62/108,248号の利益を請求し、その内容全体を本明細書に援用する。
本出願は、組織試料を保存するための固定法に関する。
適切な医学診断および患者の安全には、染色前の適切な固定が必要である。臨床診断目的のための固定の最も一般的な方法は、室温で、10%中性緩衝ホルマリン(NBF)に組織試料を浸漬することである。不運なことに、多くの下流分析法は、NBF中で費やされた時間に非常に感受性である。例えば、相当な長期間、ホルマリンに曝露されている組織は、しばしば、続く組織化学的プロセスでうまく働かない。例えば、広く発現される癌マーカータンパク質p53は、6〜24時間の間、ホルムアルデヒド中で固定されると、モノクローナル抗体PAb1801に対する反応性のすべてを次第に失う。Silvestriniら, 87 J. Nat. Cancer Inst. 1020(1995)。同様に、診断に重要な上皮細胞マーカータンパク質、ケラチンは、組織を最長24時間、ホルムアルデヒド中で固定すると、次第に、モノクローナル抗ケラチン抗体と結合できなくなる。Battifora & Kopinski, 34 J. Histochem. Cytochem. 1095−1100(1986)。他の抗体が、室温のNBF中での固定に感受性であり、これには、例えば、リンパ球抗原、ビメンチン、デスミン、ニューロフィラメント、サイトケラチン、S100タンパク質、前立腺特異的抗原、サイログロブリン、および癌胎児抗原が含まれる。Leong & Gilham, 4 Pathology 266−268(1989)。同様に、核酸分析はしばしば、固定時間に感受性である。Srinivasan, Am J Pathol., 第161巻, 第6号, p.1961−71(2002); O’Learyら, 26 Histochem. J. 337−346(1994); Greerら, 95 Am. J. Clin. Pathol. 117−124(1991); F. Karisenら, 71 Lab. Invest. 604−611(1994)を参照されたい。他の研究者らは、いくつかのタンパク質に対する翻訳後修飾、例えばリン酸化が、長期室温NBF曝露に感受性であることを示してきている。Muellerら, PLoS One, Vol. 6(8): e23780(2011)を参照されたい。
例えば、修飾酵素の作用を停止するため、迅速凍結法を用いることが知られる。Lawsonら Cryobiology, 第62巻, 第2号, 115−22(2011)を参照されたい。迅速凍結は、こうした酵素の作用を最初に遅延させうるが、試料の融解に際してこれらの作用を完全に阻害はせず、そしてしたがって不安定なバイオマーカーの損失を常には改善しない。さらに、迅速凍結法は、商業的組織学実験室では一般的には用いられず、そしてしたがって、完全に異なる試薬および系の導入が必要になるであろう。
本発明は、組織試料をアルデヒド固定に供する際に、バイオマーカーを保存するための改善された方法に関する。典型的には、最長14日間、架橋が起こることを阻害する有意な拡散を伴うことなく、アルデヒドに基づく固定溶液が組織試料の実質的に全横断面全体に拡散することを可能にするために有効な期間、アルデヒドに基づく固定溶液および組織試料を、第一の温度範囲で、互いに接触させる。第一の温度または温度範囲で固定液に曝露した後、組織試料を第二のより高い温度に、架橋を誘導するために十分な第二の期間、曝露する。該方法は、組織形態、抗体反応性、および不安定なバイオマーカーの優れた保存を維持しながら、組織試料の固定後プロセシングを、最長14日間、そしておそらくはそれより長く、遅延させることを可能にする。
本開示の多様な例のレビューを容易にするため、略語および特定の用語の以下の説明を提供する:
H&E:ヘマトキシリンおよびエオジン染色。
IHC:免疫組織化学。
ISH:in situハイブリダイゼーション。
アフィニティ組織化学:分析物結合性実体が、抗体、抗体断片、または核酸プローブ以外の剤である、組織化学的方法。
分析物:試料中で特異的に検出しようとする実体(例えば分子、分子群、巨大分子、細胞内構造、または細胞)。
・特異的にリン酸化されたアミノ酸残基、例えばリン酸化ヒスチジン(抗ホスホHis)、リン酸化セリン(抗ホスホSer)、リン酸化スレオニン(抗ホスホThr)、およびリン酸化チロシン(抗ホスホTyr)に特異的な抗体;ならびに
・リン酸化アミノ酸を含有する特定の抗原、例えばセリン473でリン酸化されたAktに特異的な抗体(抗ホスホAkt(Ser473))
が含まれる。
in situハイブリダイゼーション:分析物が核酸であり、そして分析物結合性実体が分析物核酸に相補的な核酸プローブを含む、組織化学法。
キナーゼ阻害剤:キナーゼがリン酸結合の形成を触媒する能力を特異的に阻害するいずれの分子。
ヌクレアーゼ阻害剤:ヌクレアーゼが核酸のヌクレオチドサブユニット間のホスホジエステル結合の切断を触媒する能力を特異的に阻害するいずれの分子。
ペプチド:用語「ペプチド」は、オリゴペプチドおよびポリペプチドを含む、アミド結合によってともに連結される2またはそれより多いアミノ酸のいずれの配置を含むと意図される。アミノ酸がアルファアミノ酸である場合、L−光学異性体またはD−光学異性体のいずれかが使用可能である。
ホスファターゼ阻害剤:ホスファターゼがリン酸結合を切断する能力を特異的に阻害するいずれの分子。
プロテアーゼ阻害剤:プロテアーゼがペプチド結合の切断を触媒する能力を特異的に阻害するいずれの分子。
固定は、続く検査のため、細胞性試料を保存する。化学固定は、試料を、ある体積の化学固定液中に浸漬することを含む。固定液は、組織試料全体に拡散し、そして可能な限り生存細胞のものと近い構造を(化学的および構造的の両方で)保存する。架橋固定液、典型的にはアルデヒドは、試料に存在する内因性生物学的分子、例えばタンパク質および核酸の間に共有化学結合を生成する。ホルムアルデヒドは、組織学において、最も一般的に用いられる固定液である。ホルムアルデヒドは、固定のため、多様な濃度で使用可能であるが、主に10%中性緩衝ホルマリン(NBF)として用いられ、これは水性リン酸緩衝生理食塩水溶液中、約3.7%のホルムアルデヒドである。パラホルムアルデヒドは、ホルムアルデヒドの重合された型であり、加熱されると脱重合してホルマリンを提供する。グルタルアルデヒドは、ホルムアルデヒドと同様に機能するが、分子がより大きく、膜を通じた拡散速度はより緩慢である。グルタルアルデヒド固定は、より強固であるかまたは緊密に連結された固定産物を提供し、迅速でそして不可逆的な変化を引き起こし、優れた全体の細胞質および核詳細を提供するが、免疫組織化学染色には理想的ではない。いくつかの固定プロトコルは、ホルムアルデヒドおよびグルタルアルデヒドの組み合わせを用いる。グリオキサールおよびアクロレインは、より一般的に用いられないアルデヒドである。多くの他のアルデヒドに基づく固定液もまた知られる。
原理的には、組織試料および細胞学試料を含めて、アルデヒドに基づく固定液で固定可能ないかなる細胞性試料タイプでも、本発明の方法が使用可能である。
本発明の方法は、アルデヒドに基づく固定液で有用である。特定の態様において、固定液は、アルデヒドに基づく架橋固定液、例えばグルタルアルデヒドおよび/またはホルマリンに基づく溶液である。浸漬固定にしばしば用いられるアルデヒドの例には:
・ホルムアルデヒド(大部分の組織に関しては5〜10%ホルマリンの標準作業濃度であるが、ある組織に関しては、20%ホルマリンもの高濃度が用いられる);
・グリオキサール(標準作業濃度、17〜86mM);
・グルタルアルデヒド(標準作業濃度、200mM)
が含まれる。
特定の開示される態様は、多工程の、典型的には2工程の、アルデヒドに基づく固定溶液を用いた、組織試料の注入/拡散のための組織固定プロセスに関する。第一のプロセシング工程の間、固定液が試料の横断面全体に実質的に拡散することを可能にする条件下で、アルデヒドに基づく固定溶液で試料を処理する。この第一の工程を、実質的に完全な組織注入/拡散を達成する第一の期間、および第一の温度で、固定液組成物を用いて行う。第二の工程は、第二のより高い温度で、組織試料を固定液組成物に供して、架橋が起こることを可能にするためのものである。操作中、第一および第二のプロセシング工程を、長期間の経過に渡って、典型的には約2日より長く行う。以下の実施例に示すように、プロセスを最長14日間検証しているが、それよりもさらに長く延長可能であるようである。
VI. さらなる組織プロセシング
本明細書において、句「さらなる組織プロセシング」は、保存および/または分析のため、固定組織試料を調製するために用いる、アルデヒド固定後のいずれのプロセスを含むものとする。多くのこうしたプロセスが周知であり、そして一般の当業者によってよく理解されるであろう。例えば、亜鉛ホルマリン、Helly固定液およびHollande固定液を用いたプロトコルは、多様な混入物質を取り除くため、固定後に水洗浄を必要とする。BouinおよびB−5のいくつかのプロトコルは、プロセシング前に、70%エタノール中で固定試料を保存するよう示唆する。さらに、いくつかの標本は、炭酸カルシウムまたはリン酸カルシウム沈着のため、マイクロトーム上で切断することが困難である可能性があり、そしてしたがって、脱灰を必要としうる。他の固定後組織プロセシングが一般の当業者に周知であろう。
本明細書に開示するプロセスおよび組成物によって得た固定組織試料を、いずれの染色系、ならびに組織化学、アフィニティ組織化学、免疫組織化学およびin situハイブリダイゼーションの分野で知られるプロトコルとともに用いてもよい。本発明はまた、多様な自動化染色系とともに用いてもよく、これらには、Ventana Medical Systems, Inc.(例えば、VENTANA HE600、SYMPHONY、BENCHMARK、およびDISCOVERYシリーズ自動化プラットホーム)、Dako(例えば、COVERSTAINER、OMNIS、AUTOSTAINER、およびARTISANシリーズ自動化スライド染色装置)によって市販されるもの、およびLEICA STシリーズ染色装置などが含まれる。例示的な系は、すべて、本明細書に援用される、米国特許第6,352,861号、米国特許第5,654,200号、米国特許第6,582,962号、米国特許第6,296,809号、および米国特許第5,595,707号に開示される。自動化系および方法に関するさらなる情報はまた、本明細書に援用されるPCT/US2009/067042に見出されうる。
実施例1:低温保護帯域
浸漬温度を取り巻く9パネルマトリックスを形成するため、7、10または15℃で、それぞれ2、4または6時間、4mm Calu3異種移植片腫瘍コアを冷却ホルマリンに入れた。低温浸漬が完了した後、腫瘍を直ちに、45℃の温かいホルマリンに2時間浸漬した。次いで、一晩サイクルにセットされた標準的組織プロセッサ中で、試料をさらにプロセシングした。組織を半分にスライスし、そして組織の端および中央が現れるように、切断面を下にして包埋した。対照組織は、2温度プロトコル(2時間4℃+2時間45℃)で固定された同じ腫瘍の比較片およびRTで24時間固定された腫瘍片からなった。次いで、組織を、Ventana DISCOVERY XT自動化染色装置上、OptiView DAB染色キット(Ventana Medical Systems, Inc.)を用い、1:50希釈の抗pAKT(CST#4060)で染色した。結果を図1に示す。見て取れるように、4℃および7℃の間にはわずかな相違しかないが、10℃および15℃では明らかな変化が見られた。これは、4℃から数℃高いかまたは低いプロトコルが最適な結果を与えることを示唆する。
Calu3異種移植片腫瘍を採取し、そして10分間未満の低温虚血時間で、実験に使用した。使い捨て生検デバイスを用いて、腫瘍中心を4mm取り、すべての腫瘍がほぼ同サイズであることを確実にした。試料をどのくらい長く低温ホルマリンに入れておけるかを試験するため、Calu3腫瘍片(4mm厚を超えない)を4℃ホルマリンに最長14日間入れた。低温浸漬が完了した後、腫瘍を直ちに45℃で2時間、温かいホルマリンに浸漬した。次いで、一晩サイクルにセットされた標準的組織プロセッサ中で、試料をさらにプロセシングした。組織を半分にスライスし、そして組織の端および中央が現れるように、切断面を下にして包埋した。
本固定プロセスの実社会適用を立証するため、輸送研究を行った。総数20のCalu−3異種移植片腫瘍および20のヒト扁桃腺腫瘍を収集した。5つのCalu−3腫瘍および5つの扁桃腺試料を1週間で輸送するように、試料は、交互に配置した。試験した輸送スケジュールを、以下の表2に再現する:
5つのCalu−3腫瘍を各々2試料に分けた。腫瘍の半分を、制御された固定に関する陽性対照として、2+2法によって固定した。腫瘍のもう半分を組織学カセット内に入れ、そしてカセットにラベルして、そしてこれを標本容器内に装填した。午後に到着したヒト扁桃腺試料に関して、その午後にこの処置を反復した。標本容器にデータロガーを付け、そしてより優れた絶縁のため、上部および下部に含有されるスタイロフォームグリッドに入れた。組み立てた後、スタイロフォームブロックを、凍結挿入物を有する、小さいまたはより大きい輸送容器のいずれかに入れた。試料を輸送し、そして受け取った後、組織をさらに2時間、加熱したホルマリンに入れ、一晩でワックスブロックにプロセシングし、そして多様なIHCマーカーに関して染色した。
輸送2のセットアップは、データロガーを一晩冷蔵庫に入れて冷やすことを除いて、輸送1と本質的に同じであった。試料を輸送1と同一の方式で採取し、そしてデータロガーを冷蔵庫からおよそ10分間取り出した。輸送中の標本容器の温度を図4に提示する。温度プロファイルからわかるように、2つの温度スパイクが観察され、この時点で試料を採取し、そして輸送容器内に入れた。第一のスパイクは異種移植片採取に相当し、そして第二のスパイクは、扁桃腺試料を採取した数時間後であった。しかし、温度スパイクは7℃の少し上であった。
輸送2および3の間で、収集処置をわずかに修飾して、全収集処置に関して、温度を7℃未満に維持しうるかどうかを決定した。この輸送のため、データロガーは決して冷蔵庫から取り出さず、標本容器のみを出した。例えば、Calu−3腫瘍を小さいバッチで受け取った(一度に2〜3)。対応する数の標本容器を、化学フード下に入れ、そして腫瘍切片を作製し、カセットにラベル付けし、容器の蓋にクリップし、そして5分以内に冷蔵庫に戻した。標本容器を冷却したデータロガー内に直接入れ、そしてデータロガーを開始した。すべての試料をこの方式でプロセシングした際、対応する標本容器を含むデータロガーをフォームパッキングに入れ、そして輸送ボックスに入れた。輸送ボックスは、あらかじめ条件付けされており、そして試料を待っていた。見て取れるように、すべてのデータロガーは、5.5℃未満の温度を記録した。輸送4は、輸送3と本質的に同一であった。
ヒト扁桃腺−ヒト扁桃腺試料をヘマトキシリンおよびエオジンで染色して、輸送プロセス全体で何らかの組織形態問題が存在するかどうかを決定した。試料を、2+2固定プロトコルで固定した対照組織に比較した。輸送したすべての扁桃腺試料は、試験したいかなる条件でも、視覚的な欠損を伴わず、優れた形態を有した(上部H&Eパネルを参照されたい)。ヒト扁桃腺組織を、検証データにしたがって、PD−L1、FoxP3およびCD68でもまた染色した。すべての組織を、すべての輸送シナリオで、2+2プロトコルで固定した対象組織と同一に染色した。図7は、試験した組織サブセットから代表的な染色を示す。さらに、24時間固定と比較した際、輸送試料は、FoxP3陽性細胞の有意により優れた保存を示した。図8および9を参照されたい。
Calu3異種移植片を、表3に示すような多様な条件下で、10%NBF中で固定し、そしてH&E染色によって形態に関して評価した。表3において「熱」は、45℃1時間を示す。「冷」は4℃を示す。試料を、+、++、または+++スケールでスコア付けし、この場合、+は劣った形態であり、そして+++は最高の形態である。
さらに、試料をpAktに関して免疫組織化学的に染色した。結果を図12A〜12Kに示す。これらの結果は、短時間の低温浸漬であっても、形態または不安定マーカーの許容されない損失を伴わずに、長期間室温保存を可能にすることを立証する。
核酸(例えばmRNAおよびmiRNA)は、標準的な24時間室温固定に感受性でありうることが以前、立証されてきている。例えばUS 2012−0214195を参照されたい。これを例示するため、2つのmiRNA、miR−21およびmiR−200cの保存を、標準的な24時間室温固定および低温浸漬後、45℃での1時間の固定を用いて評価した。同じヒト扁桃腺臓器の4mm厚片を、室温(21〜24℃)10%中性緩衝ホルマリンに24時間、またはそうでなければ4℃ホルマリンに2時間、その後45℃ホルマリンに1時間(冷/熱)のいずれかに入れた。扁桃腺試料を、各ターゲットに特異的なDNAプローブ配列を用いて、miR−21またはmiR−200cの発現に関して探査した。プローブ配列の適用後、銀検出キットを用いて、VENTANA DISCOVERY XT自動化染色装置上に存在する、結合プローブの検出を行った。冷/熱固定は、試料中の特異的シグナルの量の増加を生じ、miRNA種がよりよく保存されたことが示された。結果を図13に示す。これらの結果は、RNA分子(例えばmRNAおよびmiRNA)の保存が、組織試料内への固定溶液の拡散を可能にするために十分な期間、低温固定溶液に組織試料を曝露することによって、改善可能であることを示す。したがって、核酸分析が望まれる組織試料を保存するため、上に概略するような固定プロトコルを用いることが提唱される。これを行うための予言的実施例を以下に提供する。
Claims (40)
- (a)第一の期間、第一の温度範囲で、アルデヒドに基づく固定溶液と、組織試料を接触させておき、ここで該第一の温度範囲は、該アルデヒドに基づく固定溶液の凍結点より上から10℃未満までであり、そして該第一の期間は72時間〜14日間である;そして
(b)該第一の期間の後、20℃から55℃未満の第二の温度範囲で、該アルデヒドに基づく固定溶液が該組織試料の固定の誘導を可能にするために十分な第二の期間、該アルデヒドに基づく固定溶液と、該組織試料を接触させておく
を含む、組織固定法。 - (a)および(b)を、さらなる組織プロセシングを行う前に完了させる、請求項1の方法。
- 前記組織固定法が(a)および(b)からなる、請求項1の方法。
- 前記第一の温度範囲が0℃〜7℃である、請求項1〜3のいずれか1項の方法。
- 前記第一の温度範囲が2℃〜5℃である、請求項1〜3のいずれか1項の方法。
- 前記第一の温度範囲が4℃である、請求項1〜3のいずれか1項の方法。
- 前記第二の温度範囲が20℃〜50℃である、請求項1〜6のいずれか1項の方法。
- 前記第二の温度範囲が35℃〜45℃である、請求項1〜6のいずれか1項の方法。
- 前記第二の期間が15分〜4時間である、請求項1〜8のいずれか1項の方法。
- 前記第二の期間が15分間〜3時間である、請求項1〜8のいずれか1項の方法。
- (a)前記第一の温度範囲で、前記第一の期間、第一のホルマリン溶液中に前記組織試料を浸漬し、ここで該第一の期間は72時間〜14日間である;そして
(b)前記第二の温度範囲で、前記第二の期間、第二のホルマリン溶液中に該組織試料を浸漬する、ここで該第二の期間は15分間〜4時間である
からなる、請求項1〜10のいずれか1項の方法。 - (a)第一の温度範囲の温度で、ある体積のアルデヒドに基づく固定溶液中に、固定されていない組織試料を浸漬し、ここで該第一の温度範囲は、アルデヒドに基づく固定溶液の凍結点より上でありそして10℃未満までである;そして
(b)以下:
(b1)少なくとも該アルデヒドに基づく固定溶液が実質的に組織試料全体に拡散する第一の期間、該アルデヒドに基づく固定溶液の該温度が第一の温度範囲内にあり;そして
(b2)(b1)の後、該アルデヒドに基づく固定溶液の該温度を、第二の期間、第二の温度範囲の温度に上昇させる、ここで該第二の温度範囲は20℃〜28℃であり、そして該第二の期間は該組織試料の固定を可能にするために十分である
の結果をもたらす条件下で、該アルデヒドに基づく固定液中に浸漬した該組織試料を保存する
を含む
ここで、該第一の期間および該第二の期間の合計は72時間〜14日間であり、該第一の期間は少なくとも72時間である
組織固定法。 - 前記第二の期間が少なくとも1時間である、請求項12の方法。
- 前記第一の温度範囲が2℃〜5℃である、請求項12または13の方法。
- 前記第一の温度範囲が4℃である、請求項12〜14のいずれか1項の方法。
- (b1)および(b2)の間、能動的な加熱または冷却なしに、前記組織試料を前記第二の温度範囲内の周囲温度で保存する、請求項12〜15のいずれか1項の方法。
- 前記アルデヒドに基づく前記固定溶液の温度を、能動的冷却によって、前記第一の期間、前記第一の温度範囲に保持し、そして次いで、該第一の期間後、能動的冷却を取り除き、そして20℃〜28℃の範囲の周囲温度を有する部屋で前記組織試料を保存することによって、該組織試料を能動的に加熱することなく、該アルデヒドに基づく固定溶液の該温度を該第二の温度範囲に上昇させる、請求項12〜15のいずれか1項の方法。
- 前記アルデヒドに基づく固定溶液は低級アルキルアルデヒドを含む、請求項1〜17のいずれか1項の方法。
- 前記低級アルキルアルデヒドがホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、グリオキサール、またはその組み合わせである、請求項18の方法。
- 前記アルデヒドに基づく固定溶液が10%中性緩衝ホルマリンである、請求項18の方法。
- 前記アルデヒドに基づく固定溶液が、有効量の外因性に添加されるホスファターゼ阻害剤またはキナーゼ阻害剤を含有しない、請求項1〜20のいずれか1項の方法。
- 前記アルデヒドに基づく固定溶液が、有効量のホスファターゼ阻害剤、キナーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、またはヌクレアーゼ阻害剤を含有しない、請求項1〜20のいずれか1項の方法。
- 前記組織試料が臨床的組織試料である、請求項1〜22のいずれか1項の方法。
- 前記アルデヒドに基づく固定溶液がホルマリンを含む、請求項1〜19および21〜23のいずれか1項の方法。
- 請求項1〜24のいずれか1項の方法によって得られる固定組織試料。
- 組織試料を染色するための組織化学法であって、分析物結合性実体の分析物への結合がおこり、そして該分析物結合性実体が結合している該分析物に近接して、固定組織試料上に検出可能マーカーの沈着がおこる方式で、請求項25記載の固定組織試料を分析物結合性実体と接触させる工程を含む、前記組織化学法。
- 前記分析物がペプチドを含み、そして前記分析物結合性実体が該分析物に特異的に結合する抗体、該分析物に特異的に結合する抗体断片、または該分析物に特異的に結合する操作された特異的結合構造である、請求項26の方法。
- 前記分析物が翻訳後修飾を含有するタンパク質であり、そして前記分析物結合性実体が該翻訳後修飾を欠くタンパク質に結合しない、請求項26の方法。
- 前記翻訳後修飾がリン酸化タンパク質である、請求項28の方法。
- 前記分析物が核酸を含み、そして前記分析物結合性実体が該分析物の核酸配列に相補的である核酸プローブである、請求項26の方法。
- 前記固定組織試料が臨床組織試料であり、そして前記分析物が疾患状態または障害のバイオマーカーである、請求項26〜30のいずれか1項の方法。
- 前記分析物が、癌の診断、予後、または予測バイオマーカーである、請求項31の方法。
- 前記バイオマーカーが癌の進行の予測である、請求項32の方法。
- 前記バイオマーカーが治療経過に対する癌の反応の予測である、請求項32の方法。
- 前記固定組織試料を、自動化染色プラットホーム上で、前記分析物結合性実体と接触させる、請求項26〜34のいずれか1項の方法。
- 請求項26〜35のいずれか1項の方法にしたがって得られた組織化学的染色固定組織試料。
- 組織試料中の分析物を検出する方法であって:
請求項36の組織化学的染色固定組織試料を得る;そして
該組織化学的染色固定組織試料上に沈着した検出可能標識の存在を検出する
を含む、前記方法。 - 癌を診断または予後診断するための方法であって:
請求項36の組織化学的染色固定組織試料を得る、ここで分析物は癌の診断または予後バイオマーカーである;
該組織化学的染色固定組織試料上に沈着した検出可能標識を測定する;そして
該検出可能標識の量または存在を、診断または予後と相関させる
を含む、前記方法。 - 癌が進行する可能性を予測するための方法であって:
請求項36の組織化学的染色固定組織試料を得る、ここで該組織試料は臨床組織試料であり、そして分析物は癌の進行に関する予測バイオマーカーである;
該組織化学的染色固定組織試料上に沈着した検出可能標識を測定する;そして
該検出可能標識の量または存在を、癌が進行する可能性と相関させる
を含む、前記方法。 - 特定の治療経過に対する癌の反応を予測するための方法であって:
請求項36の組織化学的染色固定組織試料を得る、ここで該組織試料は臨床組織試料であり、そして分析物は治療経過に対する癌の反応を予測するバイオマーカーである;
該組織化学的染色固定組織試料上に沈着した検出可能標識を測定する;そして
該検出可能標識の量または存在を、癌が治療経過に反応する可能性と相関させる
を含む、前記方法。
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