JP6864131B1

JP6864131B1 - Ｌ−エルゴチオネイン含有組成物

Info

Publication number: JP6864131B1
Application number: JP2020036577A
Authority: JP
Inventors: 豪仲谷; 菜々実仲島
Original assignee: Nagase and Co Ltd
Current assignee: Nagase and Co Ltd
Priority date: 2020-03-04
Filing date: 2020-03-04
Publication date: 2021-04-28
Anticipated expiration: 2040-03-04
Also published as: EP4115881A4; KR20220149718A; JPWO2021177397A1; EP4115881A1; CA3170408A1; CN115209895A; WO2021177397A1; US20230126387A1; JP2021138640A; TW202146013A; BR112022017415A2

Abstract

【課題】Ｌ−エルゴチオネイン（ＥＧＴ）とＮ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジン（ＤＴＨ）とが共存する組成物において、該組成物の着色を抑制することが可能となる。【解決手段】ＥＧＴ、及び、ＤＴＨを含有する組成物であって、該ＤＴＨの含有量が、低減されてなる組成物を調製する。【選択図】図１

Description

本発明は、Ｌ−エルゴチオネイン（ＥＧＴ）を含有する組成物に関する。より詳細には、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジン（ＤＴＨ）の存在下において、Ｌ−エルゴチオネイン（ＥＧＴ）の安定性を高めた組成物、及び、その製造方法に関する。

Ｌ−エルゴチオネイン（本明細書では「ＥＧＴ」と表記する場合がある）は含硫アミノ酸の一種であり、抗酸化能をはじめとする多様な生理活性を有することが知られている。

例えば非特許文献１では、ＥＧＴが、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）とアジュバントとからなるガンワクチンによる免疫治療の効果を向上させる作用を有することが記載されている。特許文献１では、ＥＧＴが細菌による感染症を治療する作用を有することが記載されている。特許文献１の実験１では、５ｍＭ及び５０ｍＭのＥＧＴが大腸菌の増殖を抑制することが確認されていることから、特許文献１に記載の細菌の感染症抑制は、ＥＧＴが細菌の増殖を直接に抑制することによるものだと理解できる。

非特許文献２では、トールライク受容体リガンドによる刺激条件下でのマウス骨髄由来マクロファージによるサイトカイン（ＩＬ−６、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１β、ＩＬ−１０）の生産が、１０ｍＭのＥＧＴにより促進され、１ｍＭのＥＧＴでは促進されないこと、及び、Ｆ４／８０マクロファージとＯＴ−ＩＩＣＤ４^＋Ｔ細胞との共培養において、ＯＴ−ＩＩＣＤ４^＋Ｔ細胞のＴｈ１７極性化が３０ｍＭのＥＧＴにより促進されることが記載されている。このように非特許文献２では、１０ｍＭ以上の高濃度のＥＧＴがマクロファージを活性化させることが記載されている。

非特許文献３は、ＥＧＴの生理活性についての総説である。非特許文献３ではＥＧＴは動物及び植物の体内に吸収・蓄積されることが記載されている。

ＷＯ２０１９／０８９８７８

Ｓ．Ｙｏｓｈｉｄａｅｔａｌ．，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：６７１（２０１９）ＰＬｏＳＯＮＥ１２（１）：ｅ０１６９３６０玉川大学農学部研究教育紀要第１号：１７−４１（２０１６）

しかしながら、ＥＧＴを含有する組成物における製剤安定性については、未だに十分に検討されていない状況である。特に、ＥＧＴを含有する組成物における、共存する他の成分による影響については、詳細な報告がなされていない。

前記課題に鑑み、鋭意検討を行った結果、ＥＧＴを含有する組成物において、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジン（ＤＴＨ）が共存する場合に、ＥＧＴが不安定化し、それに伴い、ＥＧＴを含有する組成物の着色が生じるという、これまでに報告の無い新規な課題が見出された。

この新規な課題に対して、ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物において、ＤＴＨの含有量を低減させることにより、ＥＧＴの安定性を高め、組成物の着色を抑制できることを見出し、本発明を完成させるに至った。

すなわち、本発明は、下記に掲げる組成物を提供する。

項１．
Ｌ−エルゴチオネイン、及び、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンを含有する組成物であって、
該Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量が、低減されてなる、組成物。

項２．
前記Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量が低減されることにより、前記組成物の着色が抑制されてなる、項１に記載の組成物。

項３．
前記Ｌ−エルゴチオネイン１００質量部に対して、前記Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量が、５０質量部以下である、項１又は２に記載の組成物。

項４．
前記Ｌ−エルゴチオネイン１００質量部に対して、前記Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量が、０．０００１質量部以上である、項１〜３のいずれか１に記載の組成物。

項５．
前記Ｌ−エルゴチオネイン１００質量部に対して、前記Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量が、０．０５質量部以上である、項１〜４のいずれか１に記載の組成物。

項６．
Ｌ−エルゴチオネイン、及び、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンを含有する組成物であって、
該Ｌ−エルゴチオネイン１００質量部に対して、該Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量が、５０質量部以下である、
前記組成物の着色を抑制するための組成物。

また、本発明は、下記に掲げる製造方法に関する。

項７．
Ｌ−エルゴチオネイン、及び、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンを含有し、着色が抑制された組成物の製造方法であって、
該Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量を低減させる工程を含む方法。

また、本発明は、下記に掲げる方法に関する。

項８．
Ｌ−エルゴチオネイン、及び、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンを含有する組成物であって、
該Ｌ−エルゴチオネイン１００質量部に対して、該Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量が、５０質量部以下とすることによる、
前記組成物に対して着色抑制効果を付与する方法。

ＥＧＴの安定性に影響を与える成分として、ＤＴＨが見出されたことにより、ＥＧＴとＤＴＨとが共存する組成物において、ＤＴＨの含有量を低減することにより、製剤安定性を高め、組成物の着色を抑制することが可能となる。

図１は、試験例１における、ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物の安定性評価結果を示すグラフである。図２は、試験例２における、ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物の着色抑制試験の結果を示すグラフである。図３は、試験例２における、ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物の着色抑制試験の結果を示すグラフである。

本発明の組成物は、Ｌ−エルゴチオネイン（ＥＧＴ）、及び、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジン（ＤＴＨ）を含有するものであって、ＤＴＨの含有量が低減されてなる。

［Ｌ−エルゴチオネイン（ＥＧＴ）］
ＥＧＴは、ヒスチジン誘導体（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−Ｌ−２−チオヒスチジン）であり、その構造は次式（１）で表される。

ＥＧＴは、合成法、抽出法、発酵法等の公知の方法により得ることも可能であり、市販品を入手して用いることも可能である。

ＥＧＴの市販品としては、Ｌ−エルゴチオネイン（テトラエドロン社製）等が挙げられる。

［Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジン（ＤＴＨ）］
ＤＴＨは、ＥＧＴの類縁体であり、その構造は次式（２）で表される。

ＤＴＨは、合成法、抽出法、発酵法等の公知の方法により得ることも可能であり、市販品を入手して用いることも可能である。

ＤＴＨの市販品としては、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジン（テトラエドロン社製）等が挙げられる。

ＥＧＴ及び／又はＤＴＨは、遊離体の形態であってもよく、塩の形態であってもよい。ＥＧＴ及び／又はＤＴＨの塩は、これらの構造におけるカルボキシル基で形成された塩であってもよいし、トリメチルアミノ基又はジメチルアミノ基で形成された塩であってもよい。また、Ｌ−エルゴチオネイン又はＬ−エルゴチオネイン類縁体は水和物等の溶媒和物であってもよい。

ＥＧＴ及び／又はＤＴＨの塩としては、薬理学的に又は生理学的に許容される塩であれば、特に制限されないが、具体的には、有機酸塩、無機酸塩、有機塩基、又は無機塩基が挙げられる。有機酸塩としては、例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酪酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩等のモノカルボン酸塩；フマル酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩等の多価カルボン酸塩；乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩等のオキシカルボン酸塩；メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トシル酸塩等の有機スルホン酸塩が例示される。無機酸塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩が例示される。有機塩基との塩としては、例えば、メチルアミン、トリエチルアミン、トリエタノールアミン、ジエタノールアミン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、トリピリジン、ピコリン、エチレンジアミン等の有機アミンとの塩が挙げられる。無機塩基との塩としては、例えば、アンモニウム塩；ナトリウム又はカリウム等のアルカリ金属、カルシウム又はマグネシウム等のアルカリ土類金属、アルミニウム等の金属との塩等の各種の塩が挙げられる。これらのＥＧＴ及び／又はＤＴＨの塩は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を任意に組み合わせて使用してもよい。「薬学的に又は生理学的に許容される塩」には、塩の溶媒和物又は水和物を含んでいてもよい。

下記の実施例において、本発明者らは、ＥＧＴを含有する組成物において、ＤＴＨが共存する場合に、ＥＧＴが不安定化し、それに伴い、ＥＧＴを含有する組成物の着色が生じるという、これまでに報告の無い新規な課題を見出している。さらに、本発明者らは、ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物において、ＤＴＨの含有量を低減させることにより、ＥＧＴの安定性を高め、組成物の着色を抑制できることを見出している。ＥＧＴを含有する組成物にＤＴＨが共存する態様は特に限定されず、例えば、ＥＧＴを含有する組成物に対してＤＴＨが添加されていてもよく、抽出法における夾雑物、合成法、発酵法等における副生成物等により内在的に含有していてもよい。

本発明の組成物において、着色が抑制されているとは、ＥＧＴ及びＤＴＨを等量で含有する組成物に対して、同じｐＨ条件で、ＤＴＨの含有量を低減させることにより、４００ｎｍの吸光度が低減することを言う。４００ｎｍの吸光度の低減は、公知の分光光度計を用いて求めることが可能である。４００ｎｍの吸光度の低減は、例えば、ＥＧＴ及びＤＴＨを等量で含有する組成物に対して、少なくとも５％の低減率であることが好ましく、少なくとも１０％の低減率であることがより好ましい。

本発明の組成物において、ＥＧＴ及びＤＴＨの含有比率は、組成物の着色抑制の観点、及び、ＥＧＴの安定性の観点から、ＥＧＴ１００質量部に対して、ＤＴＨの含有量が、５０質量部以下であることが好ましく、４０質量部以下であることがより好ましく、３０質量部以下であることが更に好ましく、２０質量部以下であることが特に好ましく、１０質量部以下であることが最も好ましい。

また、本発明の組成物において、ＥＧＴ及びＤＴＨの含有比率は、組成物の生産効率等の観点から、ＥＧＴ１００質量部に対して、ＤＴＨの含有量が、０．０００１質量部以上であることが好ましく、０．００１質量部以上であることがより好ましく、０．００５質量部以上であることが更に好ましく、０．０１質量部以上であることが特に好ましく、０．０５質量部以上であることが最も好ましい。

また、本発明の組成物において、ＥＧＴ及びＤＴＨの含有比率は、組成物の着色抑制の観点、ＥＧＴの安定性の観点、及び、組成物の生産効率等の観点から、ＥＧＴ１００質量部に対して、ＤＴＨの含有量が、０．０００１〜５０質量部であることが好ましく、０．００１〜４０質量部であることがより好ましく、０．００５〜３０質量部であることが更に好ましく、０．０１〜２０質量部であることが特に好ましく、０．０５〜１０質量部であることが最も好ましい。

また、本発明の組成物において、ＥＧＴの含有量は、製剤の形態や、用途、他の成分の種類や含有量等により適宜調整され、限定はされないが、例えば、組成物全量に対して、０．０００００１質量％以上とすることができ、０．０００００５質量％以上、０．００００１質量％以上、０．００００５質量％以上、０．０００１質量％以上、０．０００５質量％以上、０．００１質量％以上等が挙げられる。また、ＥＧＴの含有量は、例えば、組成物全量に対して、９９．９９９質量％以下とすることができ、９９．９質量％以下、９９．５質量％以下、９９質量％以下、９８．５質量％以下、９８質量％以下等が挙げられる。別の実施態様において、液状製剤として調製される場合、限定はされないが、ＥＧＴの含有量は、例えば、組成物全量に対して、８０質量％以下とすることができ、７０質量％以下、６０質量％以下、５０質量％以下、４０質量％以下、３０質量％以下、２０質量％以下、１０質量％以下、５質量％以下、１質量％以下等が挙げられる。

［用途］
ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物において、ＤＴＨの含有量を低減させることにより、ＥＧＴの安定性を高めることができるため、本発明は、上記組成物の着色を抑制するために用いることが可能である。

また、上記の通り、ＥＧＴは、抗酸化能をはじめとする多様な生理活性を有することが知られている。ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物においても、本発明を用いることにより、ＥＧＴの安定性を高め、その分解を抑制することができるため、ＥＧＴが本来有する生理活性を損なうことなく発揮することが可能となる。

ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物においても、本発明を用いることにより、ＥＧＴが本来有する生理活性である、抗酸化用、脳機能改善用、抗老化用、眼疾患用、美白用、紫外線吸収用、メラニン産生抑制用、活性酸素種の消去用、エラスターゼ活性阻害用、シワ形成抑制用、肌のたるみ抑制用、肌のシミの形成抑制用、眼周囲のクマ抑制用、紫外線による肌ダメージ軽減（光老化の抑制）用、乾燥肌用、敏感肌用、毛髪改善用、オートファジー促進用等に好適に用いることが可能となる。

本発明の組成物は、更に飲食品、機能性表示食品、特定保健食品、医薬部外品、医薬品、化粧品、日用品、飼料等に使用可能な有効成分や添加剤を適宜配合することができ、また、当該品目で使用される公知の製剤化方法により、適宜製剤化することができる。

化粧品や日用品としては、例えば、化粧水、乳液、ジェル、美容液、クリーム、日焼け止めクリーム、パック、マスク、ファンデーション、おしろい、浴用剤、ボディローション、シャンプー、リンス、ヘアトリートメント、ヘアコンディショナー、整髪料、ヘアトニック、歯磨き粉、マウスウォッシュ等に製剤化することが可能である。

［製剤］
本発明の組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤などの固形製剤；または液剤、シロップ剤、注射剤、クリーム、ローション、ペースト、軟膏、エマルジョン（水中油型エマルジョン、油中水型エマルジョン、多重エマルジョン、ミクロエマルジョン、ＰＥＴ−エマルジョン、ピッカリング・エマルジョン）、ゲル（ヒドロゲル、アルコールゲル）、懸濁液などの液状製剤として経口または非経口的（外用を含む）に投与することもできる。固形製剤には、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤；液状製剤には、溶剤、溶解補助剤、乳化剤、乳化安定剤、増粘剤、保湿剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤などを用いることができる。また必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、香料などの添加物を用いることもできる。

賦形剤としては、例えば、ソルビトール、マンニトール、キシリトールなどの糖アルコール、ブドウ糖、白糖、乳糖、果糖などの糖類、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、リン酸水素カルシウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、β−シクロデキストリン、軽質無水ケイ酸、酸化チタン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、タルク、カオリン、オリーブ油などが挙げられる。

結合剤としては、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのセルロース誘導体、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、アクリル酸系高分子、ゼラチン、アラビアゴム、プルラン、アルファー化デンプン、カンテン、トラガント、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステルなどが挙げられる。

崩壊剤としては、例えば、デンプン、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチ、部分アルファー化デンプンなどが挙げられる。

溶剤としては、例えば、水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油などが挙げられる。

滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ポリオキシル、セタノール、タルク、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ジメチルポリシロキサン、ミツロウ、サラシミツロウなどが挙げられる。

溶解補助剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムなどが挙げられる。

懸濁化剤・乳化剤としては、例えば、ステアリルアミン、トリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリンなどの界面活性剤；例えばポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどの親水性高分子；例えばシェラックロウ、ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、環状ラノリン、ラノリンワックス、キャンデリラロウ、モクロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックスなどワックス類などが挙げられる。

等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトールなどが挙げられる。

緩衝剤としては、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩などの緩衝液などが挙げられる。

防腐剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸などが挙げられる。

抗酸化剤としては、例えば、亜硫酸塩、アスコルビン酸などが挙げられる。

本発明の組成物を固形製剤とする場合、当該分野で公知の製造方法を用いることができる。例えば、組成物を練合し、スクリーンを通過させることで成型する押出造粒物を、粉砕し、整粒する方法、前記組成物に練合水を加え、バーチカルグラニュレーターによって成型する攪拌造粒の後に、コーミルを用いて粉砕・篩過する方法が挙げられる。また、前記製剤組成物をローラーコンパクターで圧縮した後、ロールグラニュレーターで粉砕し篩過する方法が挙げられる。また、撹拌造粒の後に、流動層乾燥する方法が挙げられる。また、例えば、直打により製造する場合には、組成物を混合した後、直接、打錠機に投入して打錠すればよい。

［飲食品］
本発明の組成物は、飲食品組成物としても使用することができ、食品または機能性食品に含有させて提供され得る。このような食品または機能性食品としては、米飯；そば、うどん、はるさめ、中華麺、即席麺、カップ麺を含む各種の麺類；清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料、スポーツ飲料等の飲料；カレールー、シチュー、各種スープ類；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；飴、クッキー、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、その他の焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、はんぺん、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、ドレッシング、味噌、醤油、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、ふりかけ、漬物；その他種々の形態の健康・栄養補助食品・機能性表示食品・特定保健用食品などが例示される。

また、本発明の組成物を含有するサプリメント（散剤、顆粒剤、ソフトカプセル、ハードカプセル、錠剤、チュアブル錠、速崩錠、シロップ、液剤等）を調製してもよい。

また、ペットなどの動物用の餌に対して本発明の組成物を含有させることもできる。

飲食品には、必要に応じて、添加物が加えられる。このような添加物としては、例えばブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、トレハロース、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、マンニトール、デキストリン、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、、ビタミンＢ類、、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、界面活性剤、色素、香料、保存剤などが挙げられる。

本発明の組成物は、各種症状や状態の改善・予防・向上等の表示が許可されている飲食品ために用いることができる。ここで、本発明において、症状や状態の改善・予防・向上等の表示が許可されている飲食品とは、国や公共団体が許可・指定している効能を有する飲食品であり、例えば、機能性表示食品、特定保健食品等の保健機能食品、特別用途食品等である。なお、状況や時代、各国の制度により名称や規程が変化するが、本質的に同じであるものは本発明に含まれる。

本発明において、本発明の組成物の配合量は、特に制限されず、適用の目的（対象疾患や症状の種類等）、適用対象部位、適用者の性別や年齢、飲食品、機能性表示食品、特定保健食品、医薬部外品、医薬品、化粧品、日用品又は飼料等の製品形態、これらの投与又は摂取方法や回数、嗜好等に応じて適宜設定される。

本発明の組成物を使用する場合には、ＥＧＴが本来有する生理活性を発揮できる有効量を１日当たりの摂取量（適用量）とすることが可能である。例えば、健常の成人が摂取（適用）する場合、ＥＧＴの１日当たりの摂取量（適用量）は、例えば、０．００５〜４，０００ｍｇ、好ましくは０．１〜３，０００ｍｇ、より好ましくは０．５〜２，０００ｍｇ、更に好ましくは１〜１，０００ｍｇ、特に好ましくは２〜５００ｍｇ、最も好ましくは３〜３００ｍｇで使用することができる。

また本発明の組成物を飲食品として用いる場合は、限定はされないが、ＥＧＴが本来有する生理活性を表示できる観点からは、機能性食品とすることが好ましく、機能性食品のなかでも機能性表示食品、栄養機能食品、栄養補助食品、特定保健用食品が挙げられるが、用途を明確に表示できる点で機能性表示食品が好ましい。

［適用対象者］
本発明の組成物が適用される対象者は、ＥＧＴが本来有する生理活性を必要とする年代であれば、特に制限されないが、仕事等の生活環境からストレスを受けやすい年代である３０歳頃以上であってもよく、ホルモンバランスの変化や生活環境の変化等により身体の変化を感じやすい年代である中年齢者（４５歳頃以上５５歳未満）であってもよく、高年齢者（５５歳以上）であってもよい。

［ｐＨ］
本発明の組成物のｐＨは、他の配合成分の種類及び含有量、製剤形態、使用方法等に応じて適宜設定され、薬学的又は生理学的に許容できる範囲であれば制限されないが、例えば、ｐＨ２〜１０とすることができる。本発明の効果を安定的に発揮する観点から、本発明の組成物のｐＨは、例えば、ｐＨ２〜１０、ｐＨ２〜９、ｐＨ２〜８、ｐＨ２〜７、ｐＨ３〜１０、ｐＨ３〜９、ｐＨ３〜８、ｐＨ３〜７、ｐＨ４〜１０、ｐＨ４〜９、ｐＨ４〜８、ｐＨ４〜７、ｐＨ５〜１０、ｐＨ５〜９、ｐＨ５〜８、ｐＨ５〜７、ｐＨ６〜１０、ｐＨ６〜９、ｐＨ６〜８、ｐＨ６〜７等とすることが可能である。

［ＥＧＴ及びＤＴＨを含有し、着色が抑制された組成物の製造方法］
本発明において、ＥＧＴ及びＤＴＨを含有し、着色が抑制された組成物の製造方法は、ＤＴＨの含有量を低減させる工程を含む。

ＤＴＨの含有量を低減させる工程は、ＤＴＨ含有量が低減される限り、公知のどのような手段であっても利用することができる。例えば、ＥＧＴとＤＴＨとを混合し、組成物を調製する場合は、ＥＧＴに対するＤＴＨの含有比率を低減させる工程を採用することができる。ＥＧＴ及びＤＴＨの含有比率については、上記に準じる。

上記製造方法は、更に、ｐＨを調整する工程を含むことが可能である。至適なｐＨの数値範囲については、上記に準じる。

［ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物に対して着色抑制効果を付与する方法］
本発明において、ＥＧＴ、及び、ＤＨＴを含有する組成物であって、
該ＥＧＴ１００質量部に対して、該ＤＨＴの含有量が、５０質量部以下とすることによる、前記組成物に対して着色抑制効果を付与する方法を提供することも可能である。ＥＧＴ及びＤＴＨの好ましい含有比率については、上記に準じる。

次に、実施例や試験例により本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例や試験例に限定されるものではない。

（試験例１．ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物における安定性評価１）
Ｌ−エルゴチオネイン（ＥＧＴ）及びＮ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジン（ＤＴＨ）を含む組成物について、種々のｐＨ条件下における保存安定性を下記の通り調べた。

ＥＧＴ、ＤＴＨの終濃度、及びｐＨが表１の通りになるよう、ＥＧＴ（テトラエドロン社製）及びＤＴＨ（テトラエドロン社製）をｐＨ３、４、５、６、７、８、９、又は、１０のＢｒｉｔｔｏｎ−ＲｏｂｉｎｓｏｎＢｕｆｆｅｒ（終濃度３０ｍＭ）に溶解し、ｐＨ及び濃度の異なるＤＴＨとＥＧＴの混合溶液を３．０ｍｌ調製した。

ｐＨの調整に用いた広域緩衝液であるＢｒｉｔｔｏｎ−ＲｏｂｉｎｓｏｎＢｕｆｆｅｒは、次の要領で調製した。ホウ酸＋リン酸＋酢酸混合溶液（終濃度各２００ｍＭ）を２０ｍｌ分取し、１ＮＮａＯＨでｐＨ３、４、５、６、７、８、９、又は、１０にそれぞれ調整後、水を用いて４０ｍｌにメスアップすることで、ｐＨ３〜１０の３００ｍＭ（各１００ｍＭ）Ｂｒｉｔｔｏｎ−ＲｏｂｉｎｓｏｎＢｕｆｆｅｒとした。さらに、Ｂｒｉｔｔｏｎ−ＲｏｂｉｎｓｏｎＢｕｆｆｅｒの終濃度が３０ｍＭとなるように、各ｐＨの３００ｍＭＢｒｉｔｔｏｎ−Ｒｏｂｉｎｓｏｎｂｕｆｆｅｒと水を用いてＥＧＴとＤＴＨを溶解させることで、表１のＥＧＴ及びＤＴＨ混合溶液を調製した。

表１記載のＥＧＴ及びＤＴＨ混合溶液をサンプル番号一つにつき、１．０ｍｌずつ２本のチューブに移し、それぞれ３０℃、または７０℃で２１日間静置した。開始直後（０日目）、８日目、１４日目、及び、２１日目にチューブの写真を撮影することで溶液の色の変化を記録し、さらに１００μｌずつサンプリングを行い、表２記載の条件で高速液体クロマトグラフィー（島津製作所社製）を用いたＥＧＴとＤＴＨの定量に供した。図１は、１４日目に撮影した溶液の写真である。

図１に示される通り、７０℃で１４日間保存したサンプルのうち、ＥＧＴ１００ｍｇ／Ｌ＋ＤＴＨ２０ｍｇ／Ｌ、ＥＧＴ１００ｍｇ／Ｌ＋ＤＴＨ５０ｍｇ／Ｌ、ＥＧＴ１００ｍｇ／Ｌ＋ＤＴＨ１００ｍｇ／Ｌの試験区のサンプルにおいて、無色透明から茶褐色への溶液の着色が確認された。また、ＤＴＨ濃度の増加に伴い着色の度合いは強くなった。また、ＤＴＨ保存期間の増加に伴い着色の度合いは強くなった。以上より、本試験例により、ＥＧＴ及びＤＴＨの混合溶液が着色するという課題が初めて確認された。

（試験例２．ＥＧＴ及びＤＴＨを含有する組成物における着色抑制評価１）
試験例１の結果、ＥＧＴ及びＤＴＨの混合溶液が着色するという新規な課題が見出されたため、この変色の程度を吸光度測定により数値化すると同時に、ＥＧＴとＤＴＨの濃度を様々に検討することで、着色の抑制方法を探索した。

試験例１と同様に、ＥＧＴ（テトラエドロン社製）及びＤＴＨ（テトラエドロン社製）の終濃度が表３及び表４に示す濃度かつｐＨになるようにＢｒｉｔｔｏｎ−ＲｏｂｉｎｓｏｎＢｕｆｆｅｒ（終濃度３０ｍＭ）に溶解し、２．０ｍｌのＥＧＴ及びＤＴＨ混合溶液を調整した。

表３及び表４に記載のＥＧＴ及びＤＴＨ混合溶液各１．５ｍｌを２．０ｍｌチューブに移し、溶液の蒸散防止としてミネラルオイルを２００μｌずつ液面に重層した。調製したサンプルを７０℃で２８日間静置し、開始直後（０日目）、４日目、７日目、１４日目、２１日目、２８日目に２００μｌずつ９６ｗｅｌｌマイクロプレートに採取し、ＭＵＬＴＩＳＫＡＮＧＯ（ＴｈｅｒｍｏＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）を用いて２５０〜８００ｎｍの吸光度測定を行った。図２は、表３のサンプルを対象とした吸光度測定により得られたデータのうち、４００ｎｍの吸光度データを用いて作成した。さらに、吸光度測定後のサンプル１００μｌを使用して、表２記載の条件で高速液体クロマトグラフィー（島津製作所社製）を用いたＥＧＴとＤＴＨの定量も行った。

表３のサンプルを用いた着色抑制評価試験の結果が図２である。図２に示される通り、ＥＧＴ１００ｍｇ／Ｌ＋ＤＴＨ５０ｍｇ／Ｌのサンプルでは全てのｐＨ区で、時間経過とともに着色度合いを示す４００ｎｍの吸光度（Ａ４００値）が増加し、実施例１で確認されたＥＧＴ及びＤＴＨ混合溶液の着色を吸光度からも確認できた。さらに、様々なＤＴＨ濃度を検討した結果、全てのｐＨ区でＤＴＨ濃度を低下させることでＡ４００値が低下することが確認できた。限定はされないが、特に、ＥＧＴ１００質量部に対しＤＴＨを２０質量部以下の含有比率にすることで経時的な着色が顕著に抑制されることを見出した。各サンプルのＥＧＴの定量結果から、着色と同様に、ＤＴＨ濃度を低下させることでＥＧＴの分解を抑制できることも示された。

また、表４に示すＥＧＴ及びＤＴＨ混合溶液を用いた着色抑制評価試験においても、表３のサンプルと同傾向の結果が得られた。結果を図３に示す。具体的には、全てのｐＨ区でＤＴＨ濃度を低下させることでＡ４００値が低下することが確認でき、特に、ＥＧＴ１００質量部に対しＤＴＨを２０質量部以下の含有比率にすることで経時的な着色が顕著に抑制できることが確認された。

Claims

Ｌ−エルゴチオネイン、及び、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンを含有し、
該Ｌ−エルゴチオネイン１００質量部に対して、該Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量が、５０質量部以下である、組成物。
前記Ｌ−エルゴチオネイン１００質量部に対して、前記Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量が、０．０００１質量部以上である、請求項１に記載の組成物。
前記Ｌ−エルゴチオネイン１００質量部に対して、前記Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量が、０．０５質量部以上である、請求項１又は２に記載の組成物。
Ｌ−エルゴチオネイン、及び、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンを含有し、着色が抑制された組成物の製造方法であって、
該Ｌ−エルゴチオネイン１００質量部に対して、該Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量を、５０質量部以下とする工程を含む方法。
Ｌ−エルゴチオネイン、及び、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンを含有する組成物において、該Ｌ−エルゴチオネイン１００質量部に対して、該Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−２−チオヒスチジンの含有量を、５０質量部以下とする工程を含む、
該組成物に対して着色抑制効果を付与する方法。