JP6862442B2 - 植物材料から低分子rna濃縮水性抽出物を得る方法および方法に由来する抽出物 - Google Patents
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Description
a)植物材料を水に接触させるステップと、
b)エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム(EDTA)を、a)で得た混合物に添加し、混合物のpHを10.5〜11の間にするステップと、
c)次に、b)で得た混合物のpHを6〜8の間の値に調節するステップと、
d)c)で得た混合物を、植物材料を除去するようにおよび水性粗抽出物(aqueous raw extract)を回収するように精製するステップと、ならびに
e)最大長150ヌクレオチドの低分子RNA濃縮水性抽出物を得るために、水性粗抽出物の少なくとも1回の濾過を行い、そのpHをチェックして、必要であれば、6〜8の間の値に、好ましくは6〜6.5の間に調節するステップ、
を含む方法である。
低分子RNAに関して濃縮されたイネ科のコメ胚芽(イネ)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物を、イネ科(以前のgraminaceae)のコメ(イネ)から得る。
方法の実施におけるpHおよび酵素的加水分解の影響に関する試験
本発明に従う方法の実施におけるpHの影響を試験するために、異なるpH値および異なるタイプの植物に関して抽出試験を行った。
低分子RNAに関して濃縮されたマメ科のレンズマメ(レンズエスクレンタ)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物をレンズマメ(レンズエスクレンタ)から得る。
実施例3に従う抽出物(レンズマメ)中のDNAの非存在に関する試験
本発明に従う抽出物中で得られた核酸が実際にRNAであり、より詳しくは低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)であり、DNAではないことを確認するために、DNAを特異的に分解するDNアーゼ(OPTIZYME(商標)、Fisher Bioreagent)を使用する試験を、供給元によって推奨されるプロトコールに従って実施した。
低分子RNAに関して濃縮されたアオイ科のオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物を、ハイビスカスエスクレンツス種のオクラの実から得る。
オクラ(ハイビスカスエスクレンツス)から低分子RNAを抽出する方法の実施におけるEDTA処置ステップの役割の証明
低分子量RNAの抽出におけるEDTA処置ステップの役割を証明する目的で、本発明に従う方法の特定の必須のステップを、抽出物を低分子量RNAに関して濃縮することが不可能となるように改変することによって、ハイビスカスエスクレンツスの実の抽出物を得た。
低分子RNAに関して濃縮されたパンヤ科のバオバブ(アダンソニアディギタータ)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物を、アダンソニアディギタータ種のバオバブから得る。
バオバブ(アダンソニアディギタータ)からの低分子RNAの抽出方法の実施に関するEDTA処置ステップの役割の証明
低分子量RNAの抽出におけるEDTA処置ステップの役割を証明する目的で、本発明に従う方法の特定の必須のステップを、抽出物を低分子量RNAに関して濃縮することが不可能となるように改変することによって、バオバブ(アダンソニアディギタータ)の抽出物を同様に得た。
オクラ(ハイビスカスエスクレンツス)およびバオバブ(アダンソニアディギタータ)の抽出物の調製における最終pHの影響に関する試験
抽出物を低分子量RNAに関して濃縮するために、抽出方法を、最終のpH調節ステップを除き、実施例5および7と同じ操作条件下で実施する。
低分子RNAに関して濃縮されたウリ科のカボチャ(ペポカボチャ)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物を、ウリ科のカボチャ(ペポカボチャ)から得る。
低分子RNAに関して濃縮されたアカザ科または擬穀類科のキヌア(ケノポディウムキヌア)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物を、アカザ科または擬穀類科のキヌアケノポディウムキヌアから得る。
低分子RNAに関して濃縮されたバラ科のバラ(ロサケンチフォリア)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物を、バラ科のバラ(ロサケンチフォリア)から得る。本実施例において、新鮮な花全部を使用する。
低分子RNAに関して濃縮されたミカン科のビターオレンジの花(ダイダイ)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物を、ミカン科のビターオレンジの花(ダイダイ)から得る。本実施例において、新鮮な花全部を使用する。
低分子RNAに関して濃縮されたユリ(リリウムカンディダム)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物を、ユリ科のシロユリの球根(リリウムカンディダム)から得る。
低分子RNAに関して濃縮されたユリ科のユリ(リリウムティグリヌム)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物を、ユリ科のオニユリの球根(リリウムティグリヌム)から得る。
低分子RNAに関して濃縮されたトケイソウ科のパッションフルーツ(パッシフローラアラタ)の抽出物の調製
低分子量RNA(最大長150ヌクレオチドを有する)濃縮水性抽出物を、トケイソウ科のパッションフルーツ(パッシフローラアラタ)から得る。
− ビタミンAおよび特にレチノイン酸、レチノール、プロピオン酸レチノール、パルミチン酸レチノール;
− ビタミンB3およびより詳しくはニコチンアミド、ニコチン酸トコフェロール;
− ビタミンB5、ビタミンB6、ビタミンB12、パンテノール;
− ビタミンC、特にアスコルビン酸、アスコルビルグルコシド、テトラパルミチン酸アスコルビル、アスコルビルリン酸マグネシウムおよびナトリウム;
− ビタミンE、F、H、K、PP、コエンザイムQ10;
− メタロプロテナーゼ阻害剤、またはTIMPの活性化剤;
− DHEA、その前駆体および誘導体;
− アルギニン、オルニチン、ヒドロキシプロリン、ジパルミチン酸ヒドロキシプロリン、パルミトイルグリシン、ヒドロキシリジン、メチオニンおよびその誘導体、N−アシル化アミノ酸化合物などのアミノ酸;
− ジ、トリ、テトラ、ペンタ、およびヘキサペプチドならびにその親油性誘導体を含む天然または合成ペプチド、その異性体誘導体、ならびに金属イオン(例えば、銅、亜鉛、マンガン、マグネシウム、およびその他)などの他の種と錯体を形成するその誘導体、からなる群から選択することができる。例として、MATRIXYL(登録商標)、ARGIRELINE(登録商標)、CHRONOGEN(商標)、LAMINIXYL IS(商標)、PEPTIDE Q10(商標)、COLLAXYL(商標)(フランス国特許第2827170号、ASHLAND(登録商標))、PEPTIDE VINCI 01(商標)(フランス国特許第2837098号、ASHLAND(登録商標))、PEPTIDE VINCI 02(商標)(フランス国特許第2841781号、ASHLAND(登録商標))、ATPeptide(商標)(フランス国特許第2846883号、ASHLAND(登録商標))の名称で商業的に知られているペプチド、またはASHLAND(登録商標)からATPeptide(商標)の名称で販売されている、配列Arg−Gly−Ser−NH2を有する合成ペプチド;
− GP4G(商標)(フランス国特許第2817748号、ASHLAND(登録商標))の名称で販売されているアルテミアサリーナ(Artemia salina)の抽出物;
− 亜麻種子抽出物(Lipigenine(商標)、フランス国特許第2956818号、ASHLAND(登録商標))、ダイズ、スペルト、ブドウのつる、ナタネ、亜麻種子、コメ、トウモロコシ、エンドウの抽出物などの植物ペプチド抽出物;
− 酵母抽出物、例えばDynagen(商標)(フランス国特許第2951946号、ASHLAND(登録商標))、またはActopontine(登録商標)(フランス国特許第2944526号、ASHLAND(登録商標));
− デヒドロ酢酸(DHA);
− 合成または天然起源のフィトステロール;
− サリチル酸およびその誘導体、αおよびβヒドロキシ酸、シラノール;
− アミノ糖、グルコサミン、D−グルコサミン、N−アセチルグルコサミン、N−アセチル−D−グルコサミン、マンノサミン、N−アセチルマンノサミン、ガラクトサミン、N−アセチルガラクトサミン;
− ポリフェノール、イソフラボン、フラボノイドの抽出物、例えばブドウ抽出物、マツ抽出物、オリーブ抽出物;
− セラミドまたはリン脂質、動物起源の油、例えばスクアレンまたはスクアラン;スイートアーモンド、コプラ、トウゴマ、ホホバ、オリーブ、ナタネ、落花生、ヒマワリ種子、コムギ胚芽、トウモロコシ胚芽、ダイズ、ワタ、アルファルファ、ポピー、カボチャ、マツヨイグサ、キビ、オオムギ、ライムギ、ベニバナ、パッションフラワー、ヘーゼルナッツ、ヤシ、杏仁、アボカド、およびカレンデュラオイル;エトキシル化植物油、シアバターなどの脂質;
− 全てのUVスクリーンおよび日焼け止め、
− 環状AMPおよびその誘導体、アデニレートシクラーゼ酵素の活性化剤、およびホスホジエステラーゼ酵素阻害剤、センテラアジアチカ(Centella asiatica)抽出物、アシアチコシドおよびアシアチン酸、メチルキサンチン、テイン、カフェインおよびその誘導体、テオフィリン、テオブロミン、フォースコリン、エスクリンおよびエスクロシド、ACE阻害剤、Val−Trpペプチド、ニューロペプチドY阻害剤、エンケファリン、イチョウ(Ginkgo biloba)抽出物、ヤマノイモ抽出物(dioscorea)、ルチン、イェルバマテ抽出物、ガラナ抽出物、オリゴ糖、多糖、カルニチン、ツタ抽出物、ヒバマタ抽出物、ウツボグサ(Prunella vulgaris)加水分解抽出物、ケイカンカ(Celosia cristata)加水分解抽出物、アノゲイススレイオカルプス(Anogeissus leiocarpus)抽出物、キャッサバ(Manihot utilissima)葉の抽出物、パルミトイルカルニチン、カルノシン、タウリン、ニワトコ抽出物、ダルス(Palmaria palmata)抽出物などの藻類抽出物、を挙げることができる。
1.相Aを透明になるまで主容器中でホモジナイズする;
2.25℃で、相Bに散布し、均一になるまで10分間ホモジナイズする;
3.25℃で、相Cを異なるビーカーに調製し、均一になるまで混合する。相Dに散布し、均一になるまで十分に混合する;
4.25℃で、相C+Dを主容器に添加して、均一になるまで混合する;
5.25℃で、相Eを主容器に添加し、均一になるまで混合する;
6.25℃で、相Fを予め混合し、これを主容器に添加して、均一になるまで混合する;
7.25℃で停止する。
1.相Aを主容器中でホモジナイズして、75〜80℃での加熱を開始する;
2.30℃で、相Bに散布し、加熱しながらホモジナイズする;
3.異なるビーカーにおいて、相Cを調製し、75〜80℃で均一になるまで加熱する;
4.75℃で、相Cを主容器に添加して、10分間ホモジナイズする;
5.温度を冷却させ、相Dを65℃で添加する。十分に混合して10分間ホモジナイズする;
6.相Eを主容器に添加する前に予め混合する;
7.相Eを60℃で添加する。十分に混合して10分間ホモジナイズする;
8.35℃で、相Fを予め混合してから添加し、十分に混合する;
9.相Gを主容器に添加する前に予め混合する;
10.相Gを35℃で添加する。十分に混合してホモジナイズする;
11.異なるビーカーにおいて、相Hを調製し、Natrosol(商標)を周囲温度で水中に散布し、調製物全体を60℃で加熱しながらホモジナイズする;
12.相Hを30℃で添加する。十分に混合してホモジナイズする;
13.25℃で停止する。
1.周囲温度のビーカーに相Aの成分を秤取り、混合する。相Bを散布してホモジナイズする;
2.周囲温度で、相Cに散布し、調製物全体をホモジナイズし続ける;
3.周囲温度で、相Dを相ABCに添加し、ホモジナイズし続ける;
4.周囲温度で、相Eを添加し、ホモジナイズする;
5.周囲温度で、相Fを添加し、調製物全体をホモジナイズする;
6.周囲温度で、相Gを添加し、均一になるまで混合する;
7.25℃で停止する。
1.25℃で、相Aを主容器中でホモジナイズする;
2.25℃で、相Bに散布し、均一になるまで十分に混合する;
3.25℃で、相Cを添加して、均一になるまで十分に混合する;
4.異なるビーカーにおいて相Dを予め混合し、25℃で主容器に添加する;
5.25℃で、相Eを主容器に添加し、十分に混合する;
6.相Fを予め混合し、徐々に添加する。均一になるまで十分混合する;
7.異なるビーカーにおいて相Gを予め混合し、主容器に均一になるまで添加する;
8.25℃で停止する。
1.主容器に水を添加して、ハイローヘリックスブレードによって混合を開始する;
2.成分の残りを順に添加し、それぞれの添加の間に混合する。
I型およびIII型コラーゲンの試験による真皮の細胞外マトリクスに及ぼす実施例5、6および9に従うオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の抽出物の効果の評価
本試験の目的は、真皮の細胞外マトリクスに及ぼすオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の3つの抽出物の効果を比較することである。実施例5に従って得た低分子量RNAに関して濃縮された第一の抽出物、実施例6に従って得た第二の抽出物(EDTA処置の非存在下)、および実施例9に従って沈殿後に得られた最後の抽出物。
直径6mmのヒト皮膚の生検を、特定の培地(DMEM 1g/L、HAMF12、SVF、および抗生物質)の存在下、6ウェルプレートに入れたインサート上で抽出物ビボでの培養で維持する。生検を48時間培養して、実施例5、6および9に従うオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の抽出物を、PBSで1/100もしくは3/100に希釈して、または1容積%および3容積%の最終濃度でそれぞれ、1日2回適用する。対照条件を、1×PBSを使用して作製する。生検表面に載せたおよそ20μLの液滴の形態で適用を行う。次に、生検をホルムアルデヒドで固定した後、パラフィンに包埋する。厚さ4μmの皮膚切片を調製する。マイクロ波インキュベーションによって特定の部位を露出後にI型およびIII型コラーゲンの標識を実施した後、トリプシンによる処置を行う。I型コラーゲン特異的ウサギポリクローナル抗体(Rockland,Ref.600−401−103−0.5)、III型コラーゲン特異的ウサギポリクローナル抗体(Rockland,Ref.600−401−105−0,5)、次に蛍光体に結合させた抗ウサギ二次抗体(Invitrogen,Ref.A21206)を使用して免疫標識を実施する。次に、生検を落射蛍光顕微鏡(Zeiss Axiovert 200M顕微鏡)下で調べる。得られた写真に基づいて、ソフトウェアVolocity(登録商標)画像解析ソフトウェア(PerkinElmer,Inc.)により蛍光の定量を実施した。
実施例5に従って得た低分子RNAに関して濃縮されたオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の1%および3%抽出物による処置により、抽出物ビボ試験に関して、1×PBSによって処置した対照条件と比較して、ならびに実施例6(EDTA処置を行わない)および9(沈殿後に得られた)に従って得たオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の抽出物による処置と比較して、I型およびIII型コラーゲンの発現の有意な増加を観察することが可能である。
低分子RNA(実施例5)に関して濃縮されたオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の1%および3%抽出物は、低分子RNA(実施例6および9)に関して濃縮されていないハイビスカスエスクレンツスの2つの抽出物と比較して、ヒトの抽出物ビボ皮膚においてより多くのI型およびIII型コラーゲンの発現を刺激する。
I型およびIII型コラーゲンの試験による真皮の細胞外マトリクスに及ぼす実施例7、8および9に従うバオバブ(アダンソニアディギタータ)抽出物の効果の評価
本試験の目的は、真皮の細胞外マトリクスに及ぼすバオバブ(アダンソニアディギタータ)の3つの抽出物の効果を比較することである。実施例7に従って得た低分子量RNAに関して濃縮された第一の抽出物、実施例8に従って得た第二の抽出物(EDTA処置を行わない)、および実施例9に従って沈殿後に得た最後の抽出物。
直径6mmのヒト皮膚生検を、特定の培地(DMEM 1g/L、HAMF12、SVF、および抗生物質)の存在下、6ウェルプレートに入れたインサート上で抽出物ビボでの培養で維持する。生検を48時間培養して、実施例7、8および9に従うバオバブ(アダンソニアディギタータ)の抽出物を、PBSで1/100および3/100に希釈して、または1容積%および3容積%の最終濃度でそれぞれ、1日2回適用する。対照条件を1×PBSを使用して作製する。生検表面に載せたおよそ20μLの液滴の形態で適用を行う。次に、生検をホルムアルデヒドで固定した後、パラフィンに包埋する。厚さ4μmの皮膚切片を調製する。マイクロ波インキュベーションによって特定の部位を露出後にI型およびIII型コラーゲンの標識を実施した後、トリプシンによる処置を行う。I型コラーゲン特異的ウサギポリクローナル抗体(Rockland,Ref.600−401−103−0.5)、III型コラーゲン特異的ウサギポリクローナル抗体(Rockland,Ref.600−401−105−0.5)、次に蛍光体に結合させた抗ウサギ二次抗体(Invitrogen,Ref.A21206)を使用して免疫標識を実施する。次に、生検を落射蛍光顕微鏡(Zeiss Axiovert 200M顕微鏡)下で調べる。得られた写真に基づいて、ソフトウェアVolocity(登録商標)画像解析ソフトウェア(PerkinElmer,Inc.)により蛍光の定量を実施した。
実施例7に従って得た低分子RNAに関して濃縮されたバオバブ(アダンソニアディギタータ)の1%抽出物による処置により、抽出物ビボ試験に関して、1×PBSによって処置した対照条件と比較して、ならびに実施例8(EDTA処置を行わない)および9(沈殿後に得られた)に従って得たアダンソニアディギタータの1%抽出物による処置と比較して、I型コラーゲンの発現の有意な増加を観察することが可能である。
低分子RNA(実施例7)に関して濃縮されたバオバブ(アダンソニアディギタータ)の1%抽出物は、低分子RNAに関して濃縮されていないアダンソニアディギタータの1%抽出物(実施例8および9)と比較して、抽出物ビボでヒト皮膚においてより多くのI型コラーゲンの発現を刺激する。
ヒアルロンナンシンターゼ2(HAS2)の試験による真皮のヒアルロン酸の合成に及ぼす実施例7、8および9に従うバオバブ(アダンソニアディギタータ)の抽出物の効果の評価
本試験の目的は、ヒアルロン酸の合成に関係する酵素であるHAS2の発現に及ぼすバオバブ(アダンソニアディギタータ)の3つの抽出物の効果を比較することである。低分子量RNAに関して濃縮された第一の抽出物を実施例7に従って得て、第二の抽出物を実施例8(EDTA処置を行わない)に従って得て、および最後の抽出物を実施例9に従って沈殿後に得る。
ヒト線維芽細胞を特定の培地において培養し、長期間の処置(32回を超える継代)のために培養において維持する。各継代時に、細胞の一部を凍結する。次に、2つの正反対の継代、すなわち継代8回(若い継代)および継代32回(老齢の継代)を選択する。融解後、老齢または非老齢の線維芽細胞を、培養培地で1/100に希釈したまたは最終濃度1容積%の実施例7、8、および9に従うバオバブ(アダンソニアディギタータ)の抽出物によって48時間(1日2回適用)処置する。実施例7、8、および9に従うアダンソニアディギタータの3つの1%抽出物によって処置したまたは処置していない老齢または非老齢線維芽細胞におけるHAS2発現の評価を、免疫標識によって観察する。
図4Aに例証するように、継代8回(若いと考えられる継代回数)の線維芽細胞では、実施例7に従って得た最大長150ヌクレオチドの低分子RNAに関して濃縮されたバオバブ(アダンソニアディギタータ)の1%抽出物による処置により、無処置条件と比較して、ならびに実施例8(EDTA処置を行わない)および9(沈殿後に得られた)に従って得たアダンソニアディギタータの1%抽出物による処置と比較して、HAS2発現の有意な増加を観察することが可能である。
最大長150ヌクレオチドの低分子RNAに関して濃縮されたバオバブ(アダンソニアディギタータ)の1%抽出物(実施例7)は、無処置条件と比較して、ならびに実施例8(EDTA処置を行わない)および9(沈殿後に得られた)に従って得たアダンソニアディギタータの抽出物と比較して、線維芽細胞においてより多くのHAS2発現を刺激する。
ヒアルロン酸の発現レベルに及ぼす実施例5に従うオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の抽出物および実施例7に従うバオバブ(アダンソニアディギタータ)の抽出物の効果の評価
本試験の目的は、ヒアルロン酸の発現に及ぼす、実施例5および7に従ってそれぞれ得られたオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)およびバオバブ(アダンソニアディギタータ)の最大長150ヌクレオチドの低分子量RNA濃縮抽出物の効果を標識によって可視化することである。
直径6mmのヒト皮膚生検を、特定の培地(DMEM 1g/L、HAMF12、SVF、および抗生物質)の存在下、6ウェルプレートに入れたインサート上で抽出物ビボでの培養で維持する。生検を48時間培養して、PBSで1容積%に希釈した、実施例5および7(それぞれ)に従うオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の抽出物もしくはバオバブ(アダンソニアディギタータ)の抽出物、または対照条件の1×PBSを1日2回適用する。生検表面に載せたおよそ20μLの液滴の形態で適用を行う。次に、生検をホルムアルデヒドで固定した後、パラフィンに包埋する。厚さ4μmの皮膚切片を調製する。切片を、ヒアルロン酸特異的ビオチン化タンパク質(Coger,ref:400−763−1A)の存在下、次に蛍光体に結合させたストレプトアビジン(Invitrogen,Ref:S32354)の存在下でインキュベートする。次に、生検を落射蛍光顕微鏡(Zeiss Axiovert 200M顕微鏡)下で調べる。得られた写真に基づいて、ソフトウェアVolocity(登録商標)画像解析ソフトウェア(PerkinElmer,Inc.)を使用して、蛍光の定量を実施した。
実施例5および7に従ってそれぞれ得られた低分子RNAに関して濃縮されたオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の抽出物またはバオバブ(アダンソニアディギタータ)の抽出物による処置により、1×PBSで処置した対照条件と比較して、表皮または真皮におけるヒアルロン酸発現の有意な増加を観察することが可能である。
最大長150ヌクレオチドの低分子RNAに関して濃縮されたオクラ(ハイビスカスエスクレンツス)の抽出物およびバオバブ(アダンソニアディギタータ)の抽出物(実施例5および7に従う)は、1×PBSによって処置した対照条件と比較して、抽出物ビボでヒト皮膚におけるヒアルロン酸発現を刺激する。
出願時の特許請求の範囲は以下の通りです。
[請求項1]
植物材料から最大長150ヌクレオチドの低分子RNA濃縮水性抽出物を得る方法であって、
a)前記植物材料を水に接触させるステップと、
b)エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム(EDTA)を、10.5〜11の間のpHで、a)で得た混合物に添加するステップと、
c)次に、b)で得た前記混合物のpHをpH6〜8の間の値に調節するステップと、
d)残留固形植物材料を除去するようにおよび精製された水性粗抽出物を得るように、c)で得た前記混合物を精製するステップと、
e)pHをチェックして、必要に応じて6〜8の間の値、好ましくは6〜6.5の間の値に再調節するステップ
を含む方法。
[請求項2]
ステップa)において、植物材料を4重量%〜20重量%の植物材料/水の比率で水に接触させる、請求項1に記載の方法。
[請求項3]
ステップb)のエチレンジアミン四酢酸四ナトリウム(EDTA)処置が、温度20〜80℃で少なくとも1時間の攪拌時間で実施される、請求項1または2のいずれか1項に記載の方法。
[請求項4]
ステップd)において、c)で得た前記混合物を遠心分離する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
[請求項5]
ステップe)の前に、d)で得た水性粗抽出物の少なくとも1回の濾過、好ましくは濾過のカットオフを20〜50μmから0.1〜0.30μmへと低下させることによって水性粗抽出物の連続的な濾過を実施する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
[請求項6]
ステップc)の前に、b)で得た前記混合物に対して直接、またはb)で得た前記混合物の遠心分離後の上清に対して実施される追加の加水分解ステップ、ならびに45〜65℃の間の温度および6〜8.5の間のpHにおける、少なくとも1時間の、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、および/またはプロテアーゼから選択される少なくとも1つの酵素の作用による前記残留植物材料の除去を含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
[請求項7]
前記加水分解ステップの直後に、またはステップe)の前の前記連続的な濾過ステップのうちの2つのステップの間に実施される、酵素を65〜80℃の間の温度で少なくとも1時間不活化するステップを含む、請求項6に記載の方法。
[請求項8]
10〜20g/kgの濃度の珪藻土またはシリカを、ステップd)の前に前記混合物に添加する、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
[請求項9]
EDTA四ナトリウムの濃度が2〜15mMの間、好ましくは10mMである、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
[請求項10]
前記植物材料を、ステップa)で水に接触させる前に破砕する、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
[請求項11]
前記植物材料が、種子、果実、球根、花、葉、根、胚から、または油かすおよびビールかすから選択される植物の一部である、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
[請求項12]
前記植物材料が、トケイソウ科(Passifloraceae)、アオイ科(Malvaceae)、ザクロ科(Punicaceae)、マタタビ科(Actinidiaceae)、フトモモ科(Myrtaceae)、フクギ科(Clusiaceae)、パパイア科(Caricaceae)、キントラノオ科(Malphigiaceae)、ツツジ科(Ericaceae)、スグリ科(Grossulariaceae)、ナス科(Solanaceae)、イネ科(Poaceae)、マメ科(Fabaceae)、アオイ科(Malvaceae)、パンヤ科(Bombacaceae)、ウリ科(Cucurbitaceae)、アカザ科(Chenopodiaceae)、バラ科(Rosaceae)、ミカン科(Rutaceae)、ユリ科(Liliaceae)、アヤメ科(Iridaceae)、ヒガンバナ科(Amaryllidaceae)、ネギ科(Alliaceae)から選択される、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
[請求項13]
前記植物材料が、種ハイビスカスエスクレンツス(Hibiscus esculentus)(オクラ)、アダンソニアディギタータ(Adansonia digitata)(バオバブ)、ケノポディウムキノア(Chenopodium quinoa)(キヌア)、レンズエスクレンタ(Lens esculenta)(レンズマメ)、イネ(Oryza sativa)(コメ胚芽)、ペポカボチャ(Cucurbita pepo)(カボチャ)、ロサケンチフォリア(Rosa centifolia)(バラ)、ダイダイ(Citrus aurantium)(ビターオレンジツリー)、リリウムカンディダム(Lilium candidum)(ユリ)またはリリウムティグリヌム(Lilium tigrinum)(オニユリ)、パッシフローラアラタ(Passiflora alata)(パッションフラワー)から選択される、請求項12に記載の方法。
[請求項14]
前記抽出物の総重量と比較して重量で、5〜60g/kgの乾燥抽出物、10〜1000mg/kgの最大長150ヌクレオチドの低分子RNA、0.5〜30g/kgのタンパク質断片、および0.5〜50g/kgの糖を含み、DNAを含まない、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法によって得ることができる、最大長150ヌクレオチドの低分子RNAに関して濃縮された植物材料の水性抽出物。
[請求項15]
溶媒で希釈され、前記抽出物の総重量と比較して重量で、5〜35g/kgの乾燥抽出物、0.5〜20g/kgのタンパク質断片、0.5〜30g/kgの糖、および10〜500mg/kgの最大長150ヌクレオチドの低分子RNAを含む、請求項14に記載の抽出物。
[請求項16]
アンチエイジング活性剤としての請求項13〜15のいずれか1項に記載の前記抽出物の有効量と、生理的に許容される媒体とを含む組成物。
[請求項17]
前記抽出物が、前記組成物の総重量の1重量%〜5重量%の間の濃度で存在する、請求項16に記載の組成物。
[請求項18]
皮膚に局所適用されるために処方される、請求項16〜18のいずれか1項に記載の組成物。
[請求項19]
皮膚の加齢の徴候に対処するための、請求項16〜18のいずれか1項に記載の前記組成物の化粧品における使用。
[請求項20]
皮膚の水和を改善するための、請求項16〜18のいずれか1項に記載の前記組成物の化粧品における使用。
Claims (16)
- 植物材料から最大長150ヌクレオチドの低分子RNA濃縮水性抽出物を得る方法であって、
a)前記植物材料を水に接触させるステップと、
b)エチレンジアミン四酢酸四ナトリウム(EDTA)を、10.5〜11の間のpHで、a)で得た混合物に添加するステップと、
c)次に、b)で得た前記混合物のpHをpH6〜8の間の値に調節するステップと、
d)残留固形植物材料を除去するようにおよび精製された水性粗抽出物を得るように、c)で得た前記混合物を精製するステップと、
e)pHをチェックして、必要に応じて6〜8の間の値に再調節するステップ
を含む方法。 - ステップa)において、植物材料を4重量%〜20重量%の植物材料/水の比率で水に接触させる、請求項1に記載の方法。
- ステップb)のエチレンジアミン四酢酸四ナトリウム(EDTA)処置が、温度20〜80℃で少なくとも1時間の攪拌時間で実施される、請求項1または2のいずれか1項に記載の方法。
- ステップd)において、c)で得た前記混合物を遠心分離する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- ステップe)の前に、d)で得た水性粗抽出物の少なくとも1回の濾過を実施する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- ステップc)の前に、b)で得た前記混合物に対して直接、またはb)で得た前記混合物の遠心分離後の上清に対して実施される追加の加水分解ステップ、ならびに45〜65℃の間の温度および6〜8.5の間のpHにおける、少なくとも1時間の、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、および/またはプロテアーゼから選択される少なくとも1つの酵素の作用による前記残留植物材料の除去を含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記加水分解ステップの直後に、またはステップe)の前の前記連続的な濾過ステップのうちの2つのステップの間に実施される、酵素を65〜80℃の間の温度で少なくとも1時間不活化するステップを含む、請求項6に記載の方法。
- 10〜20g/kgの濃度の珪藻土またはシリカを、ステップd)の前に前記混合物に添加する、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- EDTA四ナトリウムの濃度が2〜15mMの間である、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 前記植物材料を、ステップa)で水に接触させる前に破砕する、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記植物材料が、種子、果実、球根、花、葉、根、胚から、または油かすおよびビールかすから選択される植物の一部である、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 前記植物材料が、トケイソウ科(Passifloraceae)、アオイ科(Malvaceae)、ザクロ科(Punicaceae)、マタタビ科(Actinidiaceae)、フトモモ科(Myrtaceae)、フクギ科(Clusiaceae)、パパイア科(Caricaceae)、キントラノオ科(Malphigiaceae)、ツツジ科(Ericaceae)、スグリ科(Grossulariaceae)、ナス科(Solanaceae)、イネ科(Poaceae)、マメ科(Fabaceae)、アオイ科(Malvaceae)、パンヤ科(Bombacaceae)、ウリ科(Cucurbitaceae)、アカザ科(Chenopodiaceae)、バラ科(Rosaceae)、ミカン科(Rutaceae)、ユリ科(Liliaceae)、アヤメ科(Iridaceae)、ヒガンバナ科(Amaryllidaceae)、ネギ科(Alliaceae)から選択される、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記植物材料が、種ハイビスカスエスクレンツス(Hibiscus esculentus)(オクラ)、アダンソニアディギタータ(Adansonia digitata)(バオバブ)、ケノポディウムキノア(Chenopodium quinoa)(キヌア)、レンズエスクレンタ(Lens esculenta)(レンズマメ)、イネ(Oryza sativa)(コメ胚芽)、ペポカボチャ(Cucurbita pepo)(カボチャ)、ロサケンチフォリア(Rosa centifolia)(バラ)、ダイダイ(Citrus aurantium)(ビターオレンジツリー)、リリウムカンディダム(Lilium candidum)(ユリ)またはリリウムティグリヌム(Lilium tigrinum)(オニユリ)、パッシフローラアラタ(Passiflora alata)(パッションフラワー)から選択される、請求項12に記載の方法。
- ステップe)において、pHをチェックして、必要に応じて6〜6.5の間の値に再調節するステップを含む、請求項1に記載の方法。
- ステップe)の前に、濾過のカットオフを20〜50μmから0.1〜0.30μmへと低下させることによって水性粗抽出物の連続的な濾過を実施する、請求項5に記載の方法。
- 前記EDTA四ナトリウムの濃度が10mMである、請求項9に記載の方法。
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