JP6820823B2 - Stable IgG4-based binder formulation - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、全体が参照によって本明細書に組み入れられる２０１２年３月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／６１５，５３９号の優先権を主張するものである。 Cross-reference to related applications This application claims the priority of US Provisional Patent Application No. 61 / 615,539 filed on March 26, 2012, which is incorporated herein by reference in its entirety.

ヒトＬＩＧＨＴ抗原は、慢性炎症性自己免疫疾患のプロセスに関与してきた１つの潜在的なサイトカイン標的である。ＴＮＦスーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）のリガンドのメンバーとして、ＬＩＧＨＴはＴＮＦＳＦ１４またはＣＤ２５８としても知られる。ＬＩＧＨＴは、厳密に調節される様式で活性化の際にＴ細胞の表面上に発現される。しかしながら、ＬＩＧＨＴはまた、未熟な樹状細胞の表面上ならびに腸のＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上に検出可能なレベルで構成的に存在する。ＬＩＧＨＴは、リンホトキシンβ受容体（ＬＴβＲ）、ヘルペスウイルス進入メディエータ（ＨＶＥＭ）、およびデコイ受容体３（ＤｃＲ３）などの３つのＴＮＦスーパーファミリー受容体に結合することにより、その生物学的効果を媒介する。ＬＩＧＨＴを発現するリンパ球は、ヒトにおいてＩＢＤ様症状を誘導する可能性があり、ＬＩＧＨＴ発現の増加は、活動性クローン病および移植片対宿主疾患のような他の炎症障害を有する患者において観察された。 Human LIGHT antigens are one potential cytokine target that has been involved in the process of chronic inflammatory autoimmune diseases. As a member of the ligands of the TNF superfamily (TNFSF), LIGHT is also known as TNFSF14 or CD258. LIGHT is expressed on the surface of T cells upon activation in a tightly regulated manner. However, LIGHT is also constitutively present at detectable levels on the surface of immature dendritic cells and on intestinal T cells and natural killer (NK) cells. LIGHT mediates its biological effects by binding to three TNF superfamily receptors such as lymphotoxin β receptor (LTβR), herpesvirus entry mediator (HVEM), and decoy receptor 3 (DcR3). .. Lymphocytes expressing LIGHT can induce IBD-like symptoms in humans, and increased LIGHT expression is observed in patients with other inflammatory disorders such as active Crohn's disease and graft-versus-host disease. It was.

パーキットリンパ腫受容体（ＢＬＲ１）としても知られるＣＸＣＲ５、ＣＤ１８５、ＭＤＲ１５、およびＭＧＣ１１７３４７は、ＣＸＣケモカイン受容体ファミリーのメンバーであるＧタンパク質共役受容体である。プロセッシングされていないＣＸＣＲ５前駆体は、３７２アミノ酸の長さであり、４２Ｋ_Dの分子量を有する。ＣＸＣＲ５は、特定の解剖
学的区画内でのＢ細胞の移動および局在化における役割を有する。末梢リンパ節を欠くノックアウトマウスは、より少ないパイアー斑を有し、低下したＢ細胞レベルを有する。ＢＬＣとしても知られるＣＸＣＬ１３は、ＣＸＣＲ５のリガンドである。ＣＸＣＬ１３は、Ｂ細胞の化学誘引物質である。 CXCR5, CD185, MDR15, and MGC117347, also known as Burkitt lymphoma receptors (BLR1), are G protein-coupled receptors that are members of the CXC chemokine receptor family. The unprocessed CXCR5 precursor is 372 amino acids long and has a molecular weight of 42 K _D. CXCR5 has a role in the migration and localization of B cells within a particular anatomical compartment. Knockout mice lacking peripheral lymph nodes have fewer Pier plaques and reduced B cell levels. CXCL13, also known as BLC, is a ligand for CXCR5. CXCL13 is a chemical attractant for B cells.

抗ＬＩＧＨＴ結合剤および抗ＣＸＣＲ５結合剤はそれぞれ治療的に関連し、これらの結合剤のそれぞれを、炎症疾患の処置のために、対象、特に、ヒト対象に投与することができる医薬品に製剤化する必要がある。 Anti-LIGHT binding agents and anti-CXCR5 binding agents are each therapeutically related, and each of these binding agents is formulated into a drug that can be administered to a subject, particularly a human subject, for the treatment of inflammatory diseases. There is a need.

静脈内または皮下投与にとって好適な抗ＬＩＧＨＴ結合剤または抗ＣＸＣＲ５結合剤を含有する医薬製剤を開発するためには、結合剤を約２０ｍｇ／ｍＬ以上、通常は約１００〜１５０ｍｇ／ｍＬ、およびさらには最大で２５０ｍｇ／ｍＬに濃縮しなければならない。そのような高濃度では、粘度の増加、ｐＨのシフト、溶液の色の変化、ならびに眼に見える、および眼に見えない粒子の形成などの多くの合併症が生じ得る。 In order to develop a pharmaceutical formulation containing an anti-LIGHT binder or an anti-CXCR5 binder suitable for intravenous or subcutaneous administration, the binder should be about 20 mg / mL or more, usually about 100-150 mg / mL, and even more. It should be concentrated to a maximum of 250 mg / mL. At such high concentrations, many complications can occur, such as increased viscosity, pH shifts, changes in solution color, and the formation of visible and invisible particles.

これらの結合剤の製剤化は、これらの薬剤がそのような高濃度では凝集する傾向が高いという事実によってさらに複雑化される。 The formulation of these binders is further complicated by the fact that these agents are more likely to aggregate at such high concentrations.

ＩｇＧ４抗体の製剤化は、ＩｇＧ４抗体は溶液中では高濃度で半分子を形成する傾向があるという事実によってさらに複雑化される。しかしながら、ＩｇＧ４抗体は、それらが低下したエフェクター機能を有するため、治療対象となる。 The formulation of IgG4 antibodies is further complicated by the fact that IgG4 antibodies tend to form half molecules at high concentrations in solution. However, IgG4 antibodies are therapeutic targets because they have reduced effector function.

これらの必要性および他の必要性を満たすために、高度に安定なＩｇＧ４結合剤製剤が
本発明で提供される。高度に安定なＩｇＧ４結合剤製剤は、驚くべきことに、製剤のｐＨが約ｐＨ６以下かつ結合剤の等電点（ｐＩ）以下である、ＩｇＧ４結合剤とクエン酸バッファーとを含む液体および凍結乾燥粉末の形態で見出された。これらの製剤は、製剤中の抗体などの結合剤の濃度を増加させる際に抗体などの結合剤の二量体化をもたらすことが多い従来の製剤化を向上させる。特に、本発明の製剤は、製剤中の成分である、凝集体、半分子、分解産物、低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、ならびに抗体などの結合剤の酸性、塩基性、および中性アイソフォームの再構成を含む望ましくない副産物の量を減少させる。 To meet these and other needs, highly stable IgG4 binder formulations are provided in the present invention. Highly stable IgG4 binder formulations are surprisingly liquids and freeze-dried containing IgG4 binders and citrate buffers where the pH of the formulation is below pH 6 and below the isoelectric point (pI) of the binder. Found in powder form. These formulations improve conventional formulation, which often results in dimerization of the binder, such as antibody, in increasing the concentration of the binder, such as antibody, in the formulation. In particular, the preparation of the present invention comprises the acidic and basic components of the preparation, such as aggregates, hemimolecules, degradation products, low molecular weight proteins (LMWP), high molecular weight proteins (HMWP), and binders such as antibodies. And reduce the amount of unwanted by-products, including the reconstruction of neutral isoforms.

ある態様において、本発明は、ＩｇＧ４抗体のＦｃ領域の少なくとも一部を含む結合剤；および緩衝剤としての約５〜約５０ｍＭのクエン酸塩を含む安定な製剤であって、製剤のｐＨが約ｐＨ６以下かつ結合剤のｐＩ以下である、前記製剤を提供する。本発明のある実施形態においては、結合剤は抗体である。 In some embodiments, the invention is a stable formulation comprising a binder comprising at least a portion of the Fc region of an IgG4 antibody; and a citrate of about 5 to about 50 mM as a buffer, wherein the pH of the formulation is about. Provided are the above-mentioned preparation having a pH of 6 or less and a binder pI or less. In certain embodiments of the invention, the binder is an antibody.

本発明のある実施形態においては、結合剤または抗体がリンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ヘルペスウイルス進入メディエータについてヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄと競合する、リンパ球上で発現される受容体（ＬＩＧＨＴ）に結合する。本発明の特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤または抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号１、２および３のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域は配列番号４、５および６のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む。本発明の他の特定の実施形態においては、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体である。 In certain embodiments of the invention, a receptor expressed on lymphocytes (LIGHT) in which the binding agent or antibody is phosphotoxin-like, exhibits inducible expression, and competes with herpesviral glycoprotein D for herpesvirus entry mediators. ). In certain embodiments of the invention, the anti-LIGHT binding agent or antibody comprises heavy chain variable regions and light chain variable regions, the heavy chain variable regions being complementary containing the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2 and 3. It comprises determining regions (CDRs), and the light chain variable region comprises CDRs comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6. In another particular embodiment of the invention, the antibody is a fully human IgG4 anti-LIGHT antibody comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.

本発明のある実施形態においては、結合剤または抗体は、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型（ＣＸＣＲ５）に結合する。本発明の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤または抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は配列番号１５、１６および１７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域は配列番号１８、１９および２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲを含む。本発明の他の特定の実施形態においては、抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体である。 In certain embodiments of the invention, the binder or antibody binds to CXC chemokine receptor type 5 (CXCR5). In certain embodiments of the invention, the anti-CXCR5 binding agent or antibody comprises heavy chain variable regions and light chain variable regions, the heavy chain variable regions being complementary containing the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 15, 16 and 17. It comprises determining regions (CDRs) and the light chain variable region comprises CDRs comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 18, 19 and 20. In another particular embodiment of the invention, the antibody is a humanized IgG4 anti-CXCR5 antibody comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26.

本発明のある実施形態においては、抗体濃度は、約５〜約２８０ｍｇ／ｍＬである。本発明のある特定の実施形態においては、抗体濃度は、約１５０ｍｇ／ｍＬである。本発明の他の特定の実施形態においては、抗体濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬである。本発明のさらに特定の実施形態においては、抗体濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬである。本発明のまた、さらに特定の実施形態においては、抗体濃度は、約１００ｍｇ／ｍＬである。 In certain embodiments of the invention, the antibody concentration is from about 5 to about 280 mg / mL. In certain embodiments of the invention, the antibody concentration is about 150 mg / mL. In another particular embodiment of the invention, the antibody concentration is about 50 mg / mL. In a more specific embodiment of the invention, the antibody concentration is about 20 mg / mL. In a further specific embodiment of the invention, the antibody concentration is about 100 mg / mL.

本発明のある実施形態においては、クエン酸濃度は、約５〜約１５ｍＭである。本発明のいくつかの実施形態においては、クエン酸濃度は、約１０ｍＭである。本発明のいくつかの実施形態においては、クエン酸バッファーは、クエン酸ナトリウム二水和物である。 In certain embodiments of the invention, the citric acid concentration is about 5 to about 15 mM. In some embodiments of the invention, the citric acid concentration is about 10 mM. In some embodiments of the invention, the citrate buffer is sodium citrate dihydrate.

本発明のある実施形態においては、製剤のｐＨは、約ｐＨ５〜約ｐＨ６である。本発明の特定の実施形態においては、製剤のｐＨは、約ｐＨ５．０、約ｐＨ５．５、および約ｐＨ６．０からなる群から選択される。 In certain embodiments of the invention, the pH of the formulation is from about pH 5 to about pH 6. In certain embodiments of the invention, the pH of the formulation is selected from the group consisting of about pH 5.0, about pH 5.5, and about pH 6.0.

本発明のある特定の実施形態においては、結合剤または抗体のｐＩは、約６．８〜約７．２である。本発明の代替的な特定の実施形態においては、結合剤または抗体のｐＩは、約７．６〜約８．４である。 In certain embodiments of the invention, the pI of the binder or antibody is from about 6.8 to about 7.2. In certain alternative embodiments of the invention, the pI of the binder or antibody is from about 7.6 to about 8.4.

本発明のある特定の実施形態においては、製剤は、界面活性剤をさらに含む。本発明のある特定の実施形態においては、界面活性剤の濃度は、約０．００１％ｗ／ｖ〜約０．１％ｗ／ｖである。本発明のある実施形態においては、界面活性剤はポリソルベートである。本発明のある特定の実施形態においては、ポリソルベートは、ポリソルベート２０である。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、ポリソルベート２０の濃度は、約０．００５％ｗ／ｖである。本発明の代替的な特定の実施形態においては、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０１％ｗ／ｖである。本発明のさらに代替的な特定の実施形態においては、ポリソルベート２０の濃度は、約０．０２％ｗ／ｖである。 In certain embodiments of the invention, the formulation further comprises a surfactant. In certain embodiments of the invention, the concentration of surfactant is from about 0.001% w / v to about 0.1% w / v. In certain embodiments of the invention, the surfactant is polysorbate. In certain embodiments of the invention, the polysorbate is polysorbate 20. In some particular embodiments of the invention, the concentration of polysorbate 20 is about 0.005% w / v. In an alternative particular embodiment of the invention, the concentration of polysorbate 20 is about 0.01% w / v. In a particular alternative embodiment of the invention, the concentration of polysorbate 20 is about 0.02% w / v.

本発明のある実施形態においては、製剤は、等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）をさらに含む。本発明のある特定の実施形態においては、等張化剤の濃度は、約０．１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである。本発明のある特定の実施形態においては、等張化剤はサッカライドである。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、サッカライドはマンニトールである。本発明の他の特定の実施形態においては、マンニトールの濃度は、約１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである。本発明のまた、さらに他の特定の実施形態においては、マンニトールの濃度は約４％である。本発明の代替的な特定の実施形態においては、サッカライドはスクロースである。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約５％ｗ／ｖである。本発明の代替的な特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約６％ｗ／ｖである。本発明のまた、さらに他の特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約４．５％ｗ／ｖである。本発明のさらに特定の代替的な実施形態においては、等張化剤は塩化ナトリウムである。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、塩化ナトリウムの濃度は、約０．０１％〜約１％である。本発明のいくつかの特定の実施形態においては、塩化ナトリウムの濃度は約０．２％である。本発明の他の特定の実施形態においては、等張化剤は、スクロースと塩化ナトリウムとの組合せである。本発明の特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖである。本発明の他の特定の実施形態においては、塩化ナトリウムの濃度は約０．０１％〜約１％である。本発明の代替的な特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約６％ｗ／ｖであり、塩化ナトリウムの濃度は約０．２％である。本発明のまた、さらに代替的な特定の実施形態においては、スクロースの濃度は約４．５％ｗ／ｖであり、塩化ナトリウムの濃度は約０．２％である。 In certain embodiments of the invention, the formulation further comprises a tonicity agent. In certain embodiments of the invention, the concentration of the tonicity agent is from about 0.1% w / v to about 10% w / v. In certain embodiments of the invention, the tonicity agent is saccharides. In some particular embodiments of the invention, the saccharide is mannitol. In another particular embodiment of the invention, the concentration of mannitol is from about 1% w / v to about 10% w / v. In yet another particular embodiment of the invention, the concentration of mannitol is about 4%. In certain alternative embodiments of the invention, the saccharide is sucrose. In some particular embodiments of the invention, the concentration of sucrose is from about 1% w / v to about 10% w / v. In some particular embodiments of the invention, the concentration of sucrose is about 5% w / v. In an alternative particular embodiment of the invention, the concentration of sucrose is about 6% w / v. In yet another particular embodiment of the invention, the concentration of sucrose is about 4.5% w / v. In a more specific alternative embodiment of the invention, the tonicity agent is sodium chloride. In some particular embodiments of the invention, the concentration of sodium chloride is from about 0.01% to about 1%. In some particular embodiments of the invention, the concentration of sodium chloride is about 0.2%. In another particular embodiment of the invention, the tonicity agent is a combination of sucrose and sodium chloride. In certain embodiments of the invention, the concentration of sucrose is from about 1% w / v to about 10% w / v. In another particular embodiment of the invention, the concentration of sodium chloride is from about 0.01% to about 1%. In an alternative particular embodiment of the invention, the concentration of sucrose is about 6% w / v and the concentration of sodium chloride is about 0.2%. In a particular alternative embodiment of the present invention, the concentration of sucrose is about 4.5% w / v and the concentration of sodium chloride is about 0.2%.

本発明のある実施形態においては、製剤はアミノ酸をさらに含む。本発明のある特定の実施形態においては、アミノ酸濃度は約０．１％ｗ／ｖ〜約５％ｗ／ｖである。本発明のある特定の実施形態においては、アミノ酸はプロリンまたはアルギニンである。本発明の特定の実施形態においては、プロリンまたはアルギニン濃度は約１％ｗ／ｖ〜約２％ｗ／ｖである。本発明の他の特定の実施形態においては、プロリン濃度は約１．５％ｗ／ｖである。本発明の代替的な特定の実施形態においては、アルギニン濃度は約１％ｗ／ｖである。 In certain embodiments of the invention, the formulation further comprises an amino acid. In certain embodiments of the invention, the amino acid concentration is from about 0.1% w / v to about 5% w / v. In certain embodiments of the invention, the amino acid is proline or arginine. In certain embodiments of the invention, the proline or arginine concentration is from about 1% w / v to about 2% w / v. In another particular embodiment of the invention, the proline concentration is about 1.5% w / v. In certain alternative embodiments of the invention, the arginine concentration is about 1% w / v.

本発明のある実施形態においては、製剤は液体製剤である。本発明の他の特定の実施形態においては、製剤は凍結乾燥製剤である。 In certain embodiments of the invention, the formulation is a liquid formulation. In another particular embodiment of the invention, the formulation is a lyophilized formulation.

本発明のある実施形態においては、製剤は＋５℃で少なくとも６カ月間安定である。本発明の代替的な実施形態においては、製剤は＋５℃で少なくとも９カ月間安定である。 In certain embodiments of the invention, the formulation is stable at + 5 ° C. for at least 6 months. In an alternative embodiment of the invention, the formulation is stable at + 5 ° C. for at least 9 months.

本発明のある実施形態においては、製剤は、ｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に抗ＬＩＧＨＴ抗体を含む参照抗ＬＩＧＨＴ製剤またはｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に抗ＬＩＧＨＴ抗体を含む参照抗ＣＸＣＲ５製剤と比較して、凝集体、半分子、分解産物
、低分子量タンパク質、高分子量タンパク質および抗体の酸性／塩基性／中性アイソフォームの再構成からなる群から選択される少なくとも１つの副産物の量の減少を示す。 In certain embodiments of the invention, the formulation comprises a reference anti-LIGHT antibody comprising an anti-LIGHT antibody in a pH 7.3 phosphate buffered saline or a reference anti-LIGHT antibody comprising an anti-LIGHT antibody in a pH 7.3 phosphate buffered saline. At least one by-product selected from the group consisting of acid / basic / neutral isoform reconstitution of aggregates, hemimolecules, degradation products, low molecular weight proteins, high molecular weight proteins and antibodies compared to anti-CXCR5 formulations. Shows a decrease in the amount of.

本発明のある特定の実施形態においては、本発明は、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約１５０ｍｇ／ｍＬの完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．００５％のポリソルベート２０；および
ｄ）約４％のマンニトール
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、皮下投与にとって好適な安定な液体抗体製剤を提供する。 In certain embodiments of the invention, the invention
a) Approximately 150 mg / mL fully human IgG4 anti-LIGHT (lymphocyte-like, inducible expression) comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8; Antibodies expressed by T lymphocytes that compete with HSV glycoprotein D for HVEM;
b) Approximately 10 mM citric acid buffer;
c) provides a stable liquid antibody formulation suitable for subcutaneous administration, containing about 0.005% polysorbate 20; and d) about 4% mannitol and having a pH of the formulation of about pH 5.5.

本発明の他の特定の実施形態においては、本発明は、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約５０ｍｇ／ｍＬの完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；および
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、静脈内投与にとって好適な安定な液体抗体製剤を提供する。 In another particular embodiment of the invention, the invention
a) Approximately 50 mg / mL fully human IgG4 anti-LIGHT (lymphocyte-like, inducible expression) comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8; Antibodies expressed by T lymphocytes that compete with HSV glycoprotein D for HVEM;
b) about 10 mM citric acid buffer; and c) about 0.01% polysorbate 20;
To provide a stable liquid antibody formulation suitable for intravenous administration, wherein the pH of the formulation is about pH 5.5.

本発明のまた、さらに他の特定の実施形態においては、本発明は、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約５０ｍｇ／ｍＬの完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；
ｄ）約５％のスクロース；および
ｅ）約１．５％のプロリン；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、静脈内投与にとって好適な安定な凍結乾燥抗体製剤を提供する。 In yet another particular embodiment of the invention, the invention is:
a) Approximately 50 mg / mL fully human IgG4 anti-LIGHT (lymphocyte-like, inducible expression) comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8; Antibodies expressed by T lymphocytes that compete with HSV glycoprotein D for HVEM;
b) Approximately 10 mM citric acid buffer;
c) Approximately 0.01% polysorbate 20;
d) about 5% sucrose; and e) about 1.5% proline;
To provide a stable lyophilized antibody preparation suitable for intravenous administration, wherein the pH of the preparation is about pH 5.5.

本発明の代替的な特定の実施形態においては、本発明は、
ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約２０ｍｇ／ｍＬのヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０２％のポリソルベート２０；
ｄ）約６％のスクロース；および
ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。 In certain alternative embodiments of the invention, the invention
a) Approximately 20 mg / mL humanized IgG4 anti-CXCR5 (C-X-C chemokine receptor type 5) antibody comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26. ;
b) Approximately 10 mM citric acid buffer;
c) Approximately 0.02% polysorbate 20;
d) about 6% sucrose; and e) about 0.2% sodium chloride;
To provide a stable antibody formulation comprising, and the pH of the formulation being about pH 6.0.

本発明のさらなる代替的な特定の実施形態においては、本発明は、
ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、約１００ｍｇ／ｍＬのヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；
ｄ）約４．５％のスクロース；
ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；および
ｆ）約１％のアルギニン；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。 In a further alternative specific embodiment of the invention, the invention
a) Approximately 100 mg / mL humanized IgG4 anti-CXCR5 (C-X-C chemokine receptor type 5) antibody comprising a heavy chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26. ;
b) Approximately 10 mM citric acid buffer;
c) Approximately 0.01% polysorbate 20;
d) Approximately 4.5% sucrose;
e) about 0.2% sodium chloride; and f) about 1% arginine;
To provide a stable antibody formulation comprising, and the pH of the formulation being about pH 6.0.

本発明のある実施形態においては、本発明は、１）請求項のいずれか一項に記載の製剤、ならびに２）製剤の投与および使用に関するラベルまたは指示書を含む容器を含むキットを提供する。本発明のある実施形態においては、ラベルは、以下のもの：製剤の投与のための指示書、製剤の使用のための指示書、製剤の保存条件に関する指示書、製剤および／もしくはキットのロット番号およびバッチ番号に関する情報、製剤の組成に関する情報、安全性情報、製剤の投与と関連する、可能性のある有害反応、二次的効果、および／もしくは副作用に関する情報、または製剤の可能性のある適応症および／もしくは禁忌に関する情報のうちの１つまたは複数を含む。 In certain embodiments of the invention, the invention provides a kit comprising 1) the formulation according to any one of the claims, and 2) a container comprising a label or instructions for administration and use of the formulation. In certain embodiments of the invention, the labels are as follows: instructions for administration of the formulation, instructions for use of the formulation, instructions for storage conditions of the formulation, lot number of the formulation and / or kit. And information about the batch number, information about the composition of the formulation, safety information, information about possible adverse reactions, secondary effects, and / or side effects associated with administration of the formulation, or potential indications for the formulation. Contains one or more of the information regarding the disease and / or contraindications.

本発明のある実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を含むシリンジ、カートリッジ、バイアル、アンプル、またはオートインジェクターのような充填済みデバイスまたは充填済み容器を提供する。ある他の実施形態においては、本発明は、そのような充填済みシリンジ、カートリッジ、バイアル、アンプル、またはオートインジェクターを含むキットを提供する。 In certain embodiments of the invention, the invention provides a pre-filled device or pre-filled container such as a syringe, cartridge, vial, ampoule, or autoinjector containing the formulation of the invention. In certain other embodiments, the invention provides a kit comprising such a filled syringe, cartridge, vial, ampoule, or autoinjector.

ある実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、炎症性腸疾患を処置するための方法を提供する。 In certain embodiments, the present invention provides a method for treating inflammatory bowel disease, comprising administering the formulation of the present invention to a subject in need thereof.

他の実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、関節リウマチを処置するための方法を提供する。 In other embodiments, the invention provides a method for treating rheumatoid arthritis, comprising administering the formulation of the invention to a subject in need thereof.

ある実施形態においては、本発明は、ヒトまたは動物の身体の診断または処置の方法における使用のための製剤を提供する。特定の実施形態においては、製剤は、炎症性腸疾患の処置において用いられる。代替的な実施形態においては、製剤は、関節リウマチの処置において用いられる。 In certain embodiments, the present invention provides formulations for use in methods of diagnosing or treating the human or animal body. In certain embodiments, the formulation is used in the treatment of inflammatory bowel disease. In an alternative embodiment, the formulation is used in the treatment of rheumatoid arthritis.

本発明のある実施形態においては、本発明は、本発明の製剤を調製するための方法であって、製剤の成分を混合すること、およびｐＨを調整することを含み、調製が滅菌条件下で行われるか、または製剤が成分の混合およびｐＨ調整もしくはその両方の後に滅菌される、前記方法を提供する。 In certain embodiments of the invention, the invention is a method for preparing a formulation of the invention, comprising mixing the components of the formulation and adjusting the pH, the preparation under sterile conditions. The above method is provided, which is performed or the formulation is sterilized after mixing the ingredients and / or pH adjustment.

本発明のある特定の実施形態においては、本発明は、ａ）抗ＬＩＧＨＴ結合剤を用意すること；ｂ）約５〜約５０ｍＭのクエン酸バッファー中に抗ＬＩＧＨＴ結合剤を再懸濁すること；およびｃ）製剤のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．０に調整することを含む、安定な抗体製剤を調製するための方法を提供する。 In certain embodiments of the invention, the invention a) prepares an anti-LIGHT binder; b) resuspends the anti-LIGHT binder in about 5-5 mM citrate buffer; And c) To provide a method for preparing a stable antibody formulation, which comprises adjusting the pH of the formulation to about pH 5.0 to about pH 6.0.

５．５ｍｇ／ｍＬの濃度でｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に製剤化された、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体の等電点（ｐＩ）を決定するために用いられた変性等電点電気泳動実験の結果を示すゲルの写真である（「元の製剤」、「ＰＢＳ製剤」、または「参照ロット」）。レーン１および５：ＩＥＦ Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ Ｈｉｇｈ Ｒａｎｇｅ ｐＩ ５〜１０．５；レーン２および４：参照ロットの第１のバッチ；レーン３および４：参照ロットの第２のバッチ。ｐＩ値は数値で示される。Complete containing a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 formulated in phosphate buffered saline at a concentration of 5.5 mg / mL at pH 7.3. Photographs of gels showing the results of denatured isoelectric focusing experiments used to determine the isoelectric point (pI) of human IgG4 anti-LIGHT antibodies ("original formulation", "PBS formulation", or "PBS formulation". Reference lot "). Lanes 1 and 5: IEF Calibration Kit High Range pI 5 to 10.5; Lanes 2 and 4: First batch of reference lots; Lanes 3 and 4: Second batch of reference lots. The pI value is indicated numerically. 還元および非還元条件下で異なる参照ロットバッチを比較したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。レーン１および１０：Ｂｉｏｒａｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｐｌｕｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｎｄａｒｄ；レーン５：空；レーン２：非還元条件下での参照ロットの第１のバッチ；レーン３および４：非還元条件下での参照ロットの第２のバッチ；レーン６：還元条件下での参照ロットの第１のバッチ；レーン７および８：還元条件下での参照ロットの第２のバッチ；ならびにレーン９：システム対照。サイズは行内の数値により示される。It is a photograph of SDS-PAGE gel comparing different reference lot batches under reduced and non-reducing conditions. Lanes 1 and 10: Biorad Precision Plus Protein Badge; Lane 5: Empty; Lane 2: First batch of reference lot under non-reducing conditions; Lanes 3 and 4: Second batch of reference lot under non-reducing conditions Batch; Lane 6: First batch of reference lot under reducing conditions; Lanes 7 and 8: Second batch of reference lot under reducing conditions; and Lane 9: System control. The size is indicated by the number in the line. 参照ロットの第１および第２のバッチの抗原結合活性を決定するために用いられたＥＬＩＳＡグラフを示す図である。FIG. 5 shows an ELISA graph used to determine the antigen binding activity of the first and second batches of a reference lot. 参照ロットの第１のバッチのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）のクロマトグラムを示す図である。図４に示されるように、ＳＥＣは高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、例えば、ダイマー／オリゴマー（ＲＲＴ０．８）または凝集体、および低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）または分解産物を検出した。参照ロットバッチの第１のバッチは、９７％の純度のモノマー含量を有していた。It is a figure which shows the chromatogram of the size exclusion chromatography (SEC) of the 1st batch of a reference lot. As shown in FIG. 4, SEC detected high molecular weight proteins (HMWP), such as dimers / oligomers (RRT0.8) or aggregates, and low molecular weight proteins (LMWP) or degradation products. The first batch of reference lot batches had a monomer content of 97% purity. 参照ロットの第１のバッチに関する弱陽イオン交換クロマトグラムを示す図である。図５に示されるように、酸性、中性、および塩基性アイソフォームの再構成が安定性試験の間に起こった。参照ロットの第１のバッチは、４２．３／５５．６／１．９％の酸性／中性／塩基性アイソフォームの分布を有していた。It is a figure which shows the weak cation exchange chromatogram for the first batch of a reference lot. As shown in FIG. 5, reconstruction of acidic, neutral, and basic isoforms occurred during the stability test. The first batch of reference lots had a distribution of 42.3 / 55.6 / 1.9% acidic / neutral / basic isoforms. 参照ロットの第１のバッチの示差走査熱量測定サーモグラムを示す図である。図６に示されるように、３つのドメインの抗体は、６８℃、７５℃および７８℃で開裂した。It is a figure which shows the differential scanning calorimetry thermogram of the 1st batch of a reference lot. As shown in FIG. 6, antibodies in the three domains were cleaved at 68 ° C, 75 ° C and 78 ° C. 濾過されていない参照ロットの第１のバッチの動的光散乱パターンを示す図である。ＤＬＳを用いて、参照ロット抗体モノマーの第１のバッチおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。It is a figure which shows the dynamic light scattering pattern of the 1st batch of an unfiltered reference lot. The DLS was used to determine the hydrodynamic diameter of the first batch of reference lot antibody monomers and potential soluble aggregates. 濾過された参照ロットの第１のバッチの動的光散乱パターンを示す図である。ＤＬＳを用いて、参照ロット抗体モノマーの第１のバッチおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。It is a figure which shows the dynamic light scattering pattern of the 1st batch of a filtered reference lot. The DLS was used to determine the hydrodynamic diameter of the first batch of reference lot antibody monomers and potential soluble aggregates. 高い抗体濃度の製剤のための医薬品製造プロセスのフローダイアグラムである。It is a flow diagram of a drug manufacturing process for a preparation with a high antibody concentration. 製剤１４の動的光散乱パターンを示す図である。ＤＬＳを用いて、抗体モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。It is a figure which shows the dynamic light scattering pattern of the formulation 14. DLS was used to determine the hydrodynamic diameter of antibody monomers and potential soluble aggregates. リードＣＸＣＲ５抗体のｐＩ（等電点）を決定するための等電点電気泳動の結果を示すゲルの写真である。レーン１、６：ＩＥＦ Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ Ｈｉｇｈ Ｒａｎｇｅ ｐＩ Ｋｉｔ；レーン２、４：参照標準リード抗体ＬＰ０８０３１；およびレーン３、５：リード抗体原薬、ＲＳＮ０１５１。6 is a photograph of a gel showing the results of isoelectric focusing to determine the pI (isoelectric point) of a lead CXCR5 antibody. Lanes 1, 6: IEF Calibration High Range pI Kit; Lanes 2, 4: Reference standard read antibody LP08031; and Lanes 3, 5: read antibody drug substance, RSN0151. 還元および非還元条件下で異なる原薬バッチを比較したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。また、ゲルを用いて、リードＣＸＣＲ５抗体の分子量、および任意の凝集体の存在を決定した。It is a photograph of SDS-PAGE gel comparing different API batches under reducing and non-reducing conditions. The gel was also used to determine the molecular weight of the lead CXCR5 antibody and the presence of any aggregates. ＣＸＣＲ５抗原の２８マーのペプチドへのリードＣＸＣＲ５抗体の抗原結合活性を決定するために用いられたＥＬＩＳＡグラフである。Read of CXCR5 antigen to 28-mer peptide is an ELISA graph used to determine the antigen-binding activity of a CXCR5 antibody. ストレスを加えたリードＣＸＣＲ５抗体のＳＥＣクロマトグラムである。ＳＥＣは、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、例えば、ダイマー／オリゴマーまたは凝集体および低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）または分解産物を検出することができた。リードＣＸＣＲ５抗体は、９９％の純度のモノマー含量を有していた。SEC chromatogram of stressed reed CXCR5 antibody. The SEC was able to detect high molecular weight proteins (HMWP), such as dimers / oligomers or aggregates and low molecular weight proteins (LMWP) or degradation products. The lead CXCR5 antibody had a monomer content of 99% purity. リードＣＸＣＲ５抗体の酸性、中性、および塩基性アイソフォームを決定するために用いられたＷＣＸクロマトグラムである。リードＣＸＣＲ５抗体は、１４／８５／１％の酸性／中性／塩基性アイソフォームの分布を有していた。A WCX chromatogram used to determine the acidic, neutral, and basic isoforms of the lead CXCR5 antibody. The lead CXCR5 antibody had a distribution of 14/85/1% acidic / neutral / basic isoforms. 抗体モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定するために用いられたＤＬＳ測定である。A DLS measurement used to determine the hydrodynamic diameter of antibody monomers and potential soluble aggregates. 酢酸バッファーｐＨ５．０（左）およびｐＨ５．５（右）中；それぞれのｖ．ＷＦＩ（注射用水）および熱ストレス後のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。この図面は、酢酸塩が好適なバッファー系であることを示す。Acetic acid buffer pH 5.0 (left) and pH 5.5 (right); It is a photograph of the lead CXCR5 antibody after WFI (water for injection) and heat stress. This drawing shows that acetate is a suitable buffer system. ヒスチジンバッファーｐＨ６．０（左）、ｐＨ５．５（中央）、およびｐＨ５．０（右）中；それぞれのｖ．ＷＦＩ（注射用水）および熱ストレス後のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。この図面は、ヒスチジンが好適なバッファーであることを示す。In histidine buffer pH 6.0 (left), pH 5.5 (center), and pH 5.0 (right); v. It is a photograph of the lead CXCR5 antibody after WFI (water for injection) and heat stress. This drawing shows that histidine is a suitable buffer. ＵＦ／ＤＦ（左）後および濾過（右）後；それぞれのｖ．ＷＦＩ（注射用水）および熱ストレス後のＴＲＩＳバッファーｐＨ７．５中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。この図面は、ＴＲＩＳが不適合バッファー系であることを示す。After UF / DF (left) and after filtration (right); v. It is a photograph of the lead CXCR5 antibody in TRIS buffer pH 7.5 after WFI (water for injection) and heat stress. This drawing shows that TRIS is a non-conforming buffer system. ＵＦ／ＤＦおよび濾過後のクエン酸バッファーｐＨ６．０中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。It is a photograph of the lead CXCR5 antibody in UF / DF and the citrate buffer pH 6.0 after filtration. ＵＦ／ＤＦおよび濾過後の酢酸バッファーｐＨ５．５中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。It is a photograph of the lead CXCR5 antibody in UF / DF and the acetate buffer pH 5.5 after filtration. ＵＦ／ＤＦおよび濾過後のコハク酸バッファーｐＨ５．０中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。It is a photograph of the lead CXCR5 antibody in UF / DF and filtered succinate buffer pH 5.0. ＵＦ／ＤＦおよび濾過後のヒスチジンバッファーｐＨ５．０中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。It is a photograph of the lead CXCR5 antibody in UF / DF and histidine buffer pH 5.0 after filtration. ＵＦ／ＤＦおよび濾過後のアルギニンバッファーｐＨ６．０中のリードＣＸＣＲ５抗体の写真である。It is a photograph of the lead CXCR5 antibody in UF / DF and arginine buffer pH 6.0 after filtration. 機械的ストレス（３５０ｒｐｍ、２．５ｈ、ＲＴ）後の、異なる界面活性剤を含む（界面活性剤、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、Ｌｕｔｒｏｌ Ｆ６８、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ４０、Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ１５、およびＳＤＳを含まない）リードＣＸＣＲ５抗体ＬＡ＿０９＿０１６溶液の外観の写真である。Lead CXCR5 antibody containing different surfactants (without surfactant, polysorbate 20, polysorbate 80, Lutrol F68, Cremophor RH40, Solutol HS15, and SDS) after mechanical stress (350 rpm, 2.5 h, RT) It is a photograph of the appearance of the LA_09_016 solution. ＳＥＣにより分析された、加速条件下でのダイマーの増加を示すグラフである。４つ全部のヒスチジン製剤中での３カ月の保存後に最大で１０％のダイマー形成の増加を見ることができる。酢酸製剤は、最大で６％のダイマー含量の増加を示した。４つ全部のクエン酸製剤において、ダイマー濃度は、＋４０℃で３カ月後でも２％未満であった。It is a graph which shows the increase of dimer under the acceleration condition analyzed by SEC. Up to 10% increase in dimer formation can be seen after 3 months of storage in all four histidine formulations. Acetic acid preparations showed up to 6% increase in dimer content. In all four citric acid preparations, the dimer concentration was less than 2% at + 40 ° C. even after 3 months. ＷＣＸにより分析された、加速条件下での塩基性アイソフォームの増加を示すグラフである。ヒスチジンは、加速条件下ではリードＣＸＣＲ５抗体安定性に関してより悪い。４つ全部の酢酸製剤について、塩基性アイソフォームのわずかな増加を見ることができる。興味深いことに、４つのクエン酸製剤を識別することはできなかった。FIG. 5 is a graph showing the increase in basic isoforms under accelerated conditions, analyzed by WCX. Histidine is worse with respect to lead CXCR5 antibody stability under accelerated conditions. A slight increase in basic isoforms can be seen for all four acetic acid preparations. Interestingly, it was not possible to distinguish between the four citric acid preparations. ＷＣＸにより分析された、加速条件下での中性アイソフォームの減少を示すグラフである。この図面は、ヒスチジン製剤に関する中性アイソフォームの強力な減少を示す。わずかな減少が酢酸塩において見られた。クエン酸塩はほとんど影響されなかった。FIG. 5 is a graph showing the reduction of neutral isoforms under accelerated conditions, analyzed by WCX. This drawing shows a strong reduction in neutral isoforms for histidine formulations. A slight decrease was seen in acetate. Citrate was largely unaffected. 加速条件下でのクエン酸バッファー中の４つ全部の製剤（Ａ〜Ｄ）のデルタｐＨを示す図である。最もｐＨを安定化する製剤はクエン酸緩衝化されたものであり、特に、製剤ＢおよびＤである。It is a figure which shows the delta pH of all four preparations (A to D) in the citrate buffer under the accelerated condition. The most pH-stabilizing formulations are those that are citrate-buffered, especially formulations B and D. 加速条件下での酢酸バッファー中の４つ全部の製剤（Ａ〜Ｄ）のデルタｐＨを示す図である。リードＣＸＣＲ５抗体の酢酸緩衝溶液中では、ｐＨはより高い値に向かってシフトした。It is a figure which shows the delta pH of all four preparations (A to D) in acetic acid buffer under accelerated conditions. In the acetate buffer solution of the lead CXCR5 antibody, the pH shifted towards higher values. 加速条件下でのヒスチジンバッファー中の４つ全部の製剤（Ａ〜Ｄ）のデルタｐＨを示す図である。リードＣＸＣＲ５抗体のヒスチジン緩衝溶液中では、ｐＨはわずかに低下していた。FIG. 5 shows the delta pH of all four formulations (A to D) in histidine buffer under accelerated conditions. The pH of the lead CXCR5 antibody was slightly reduced in the histidine buffer solution. ４０℃で３カ月の保存後のＣＸＣＲ５ ＬＡ＿０９＿０２７ Ａ〜Ｄの流体力学直径を示すグラフである。クエン酸緩衝製剤は、製剤Ｃにおいては３週間後に、および製剤Ａにおいては保存の６週間後にほんのわずかな凝集体を示した。同様に、製剤Ｂにおいてもいくらかの凝集体を３カ月後に検出することができた。しかし、酢酸緩衝製剤と比較して、その量は非常に少なかった。It is a graph which shows the hydrodynamic diameter of CXCR5 LA_09_027 A to D after storage at 40 degreeC for 3 months. The citrate buffer formulation showed very slight aggregates in Formulation C after 3 weeks and in Formulation A after 6 weeks of storage. Similarly, in formulation B, some aggregates could be detected after 3 months. However, the amount was very small compared to the acetate buffer preparation. ４０℃で３カ月の保存後のＣＸＣＲ５ ＬＡ＿０９＿０２８ Ａ〜Ｄの流体力学直径を示すグラフである。酢酸緩衝製剤Ｃは、３週間後に２００ｎｍ未満のいくらかの凝集体を示した。製剤Ａは、３カ月後にいくらかの凝集体を示した。It is a graph which shows the hydrodynamic diameter of CXCR5 LA_09_028 A to D after storage at 40 degreeC for 3 months. Acetate buffer formulation C showed some aggregates below 200 nm after 3 weeks. Formulation A showed some aggregates after 3 months. Ｚ平均に対する、リードＣＸＣＲ５抗体濃度の増加の効果を示すチャートである。リードＣＸＣＲ５抗体は、抗体の濃度を増加させることにより、流体力学直径（Ｚ平均）の有意な増加を示した。6 is a chart showing the effect of increasing the lead CXCR5 antibody concentration on the Z average. The lead CXCR5 antibody showed a significant increase in hydrodynamic diameter (Z mean) by increasing the antibody concentration. 熱ストレス後の１００ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体でのＺ平均に対する異なる安定剤（添加剤）の効果を示すチャートである。熱ストレスの前後でＺ平均を測定した。安定化効果は試験した全ての添加剤と同様であったが、Ｚ平均の増加は、安定剤としてアミノ酸（アルギニン、リシン、またはグリシン）を用いることにより全体的に低下した。リシンは、ストレス後のより高い含量の凝集体のため排除された。アルギニンは、グリシンよりも良好な効果を示した。FIG. 5 is a chart showing the effect of different stabilizers (additives) on Z mean with 100 mg / mL lead CXCR5 antibody after heat stress. The Z average was measured before and after heat stress. The stabilizing effect was similar to all the additives tested, but the increase in Z-average was reduced overall by using amino acids (arginine, lysine, or glycine) as stabilizers. Lysine was eliminated due to the higher content of aggregates after stress. Arginine showed a better effect than glycine. 機械的ストレス後の１００ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体でのＺ平均に対する異なる安定剤の効果を示すチャートである。Ｚ平均を、機械的ストレスの前後で測定した。Ｚ平均の同じ低下が、アミノ酸の存在下で見られた。スクロースは、機械的ストレスに対する、トレハロースよりも良好な保護効果を有していた。アルギニンおよびグリシンは、ＮａＣｌと共により良好に機能した。FIG. 5 is a chart showing the effect of different stabilizers on Z mean with 100 mg / mL lead CXCR5 antibody after mechanical stress. The Z mean was measured before and after mechanical stress. The same reduction in Z mean was seen in the presence of amino acids. Sucrose had a better protective effect than trehalose against mechanical stress. Arginine and glycine worked better with NaCl. 機械的ストレスの前（Ａ）および機械的ストレスの後（Ｂ）のｐＨ６の１０ｍＭクエン酸バッファー中に製剤化されたリードＣＸＣＲ５抗体の、ＤＬＳにより測定された、粒径分布を示すグラフのセットである。ＤＳの機械的ストレスの後に、ＤＬＳによってより高分子量の種が測定された。In a set of graphs showing particle size distribution measured by DLS of lead CXCR5 antibody formulated in 10 mM citrate buffer at pH 6 before (A) and after mechanical stress (B). is there. After mechanical stress on the DS, higher molecular weight seeds were measured by DLS. 機械的ストレスの前（Ａ）および後（Ｂ）のリードＣＸＣＲ５抗体医薬品プロトタイプ製剤（Ａ〜Ｄ；表１１１）の、ＤＬＳにより測定された、粒径分布を示すグラフのセットである。A set of graphs showing particle size distribution measured by DLS for the lead CXCR5 antibody drug prototype formulations (AD; Table 111) before (A) and after (B) mechanical stress.

Ａ．定義
別途定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。 A. Definitions Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art.

本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、本文が別途明確に記載しない限り、複数の参照も含むことが本明細書で指摘される。 As used herein and in the appended claims, the singular forms "a," "an," and "the" are used herein to include multiple references unless otherwise explicitly stated in the text. be pointed out.

用語「約」または「およそ」は、所与の値または範囲の５％以内（または１％以下）のような１０％以内を意味する。 The term "about" or "approximately" means within 10%, such as within 5% (or less than 1%) of a given value or range.

用語「投与する」または「投与」は、粘膜、皮内、静脈内、皮下、筋肉内送達および／または本明細書に記載されるか、もしくは当業界で公知の物理的送達の任意の他の方法などにより、体外に存在するような物質（例えば、本発明の製剤）を患者に注入するか、またはさもなければ物理的に送達する動作を指す。ある疾患、またはその症状を処置しようとする場合、物質の投与は、典型的には、疾患またはその症状の開始後に行われる。疾患またはその症状を予防しようとする場合、物質の投与は、典型的には、疾患またはその症状の開始前に行われる。 The term "administer" or "administer" is used for mucosal, intradermal, intravenous, subcutaneous, intramuscular delivery and / or any other physical delivery described herein or known in the art. It refers to the action of injecting a substance (eg, the formulation of the present invention) that exists outside the body into a patient or physically delivering it by a method or the like. When attempting to treat a disease or its symptoms, administration of the substance is typically performed after the onset of the disease or its symptoms. When trying to prevent a disease or its symptoms, administration of the substance is typically given prior to the onset of the disease or its symptoms.

ポリペプチドの文脈において、用語「類似体」は、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体と類似するか、もしくは同一の機能を有するが、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもし
くはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体の類似するか、もしくは同一のアミノ酸配列を含む必要はなく、またはＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体の類似するか、もしくは同一の構造を有するポリペプチドを指す。類似するアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、以下のこと：（ａ）本明細書に記載のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド（例えば、それぞれ、配列番号９もしくは配列番号１４）、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体のアミノ酸配列と少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド；（ｂ）少なくとも５アミノ酸残基、少なくとも１０アミノ酸残基、少なくとも１５アミノ酸残基、少なくとも２０アミノ酸残基、少なくとも２５アミノ酸残基、少なくとも４０アミノ酸残基、少なくとも５０アミノ酸残基、少なくとも６０アミノ酸残基、少なくとも７０アミノ酸残基、少なくとも８０アミノ酸残基、少なくとも９０アミノ酸残基、少なくとも１００アミノ酸残基、少なくとも１２５アミノ酸残基、もしくは少なくとも１５０アミノ酸残基の本明細書に記載のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体（またはそのＶＨもしくはＶＬ領域）をコードするヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．を参照されたい）；および（ｃ）本明細書に記載のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体（またはそのＶＨもしくはＶＬ領域）をコードするヌクレオチド配列と少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、もしくは少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によりコードされるポリペプチド、のうちの少なくとも１つを満たすポリペプチドを指す。ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体と類似する構造を有するポリペプチドとは、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドの断片、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５エピトープ、または抗ＬＩＧＨＴもしくは抗ＣＸＣＲ５抗体の類似する二次、三次または四次構造を有するポリペプチドを指す。ポリペプチドの構造を、限定されるものではないが、Ｘ線結晶学、核磁気共鳴、および結晶電子顕微鏡などの当業者には公知の方法により決定することができる。 In the context of polypeptides, the term "similar" is similar to or has the same function as a LIGHT or CXCR5 polypeptide, a fragment of a LIGHT or CXCR5 polypeptide, a LIGHT or CXCR5 epitope, or an anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibody. However, it does not have to contain a similar or identical amino acid sequence to a LIGHT or CXCR5 polypeptide, a fragment of a LIGHT or CXCR5 polypeptide, a LIGHT or CXCR5 epitope, or an anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibody, or a LIGHT or CXCR5 polypeptide. , A fragment of a LIGHT or CXCR5 polypeptide, a LIGHT or CXCR5 epitope, or a polypeptide having a similar or identical structure to an anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibody. Polypeptides having similar amino acid sequences include: (a) Fragments of the LIGHT or CXCR5 polypeptides described herein (eg, SEQ ID NO: 9 or SEQ ID NO: 14, respectively), LIGHT or CXCR5 polypeptides. , LIGHT or CXCR5 epitope, or at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 55%, at least 60%, at least 65%, at least with the amino acid sequence of the anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibody. Polypeptides having amino acid sequences that are 70%, at least 75%, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 95%, or at least 99% identical; (b) at least 5 amino acid residues, at least 10 amino acid residues Group, at least 15 amino acid residues, at least 20 amino acid residues, at least 25 amino acid residues, at least 40 amino acid residues, at least 50 amino acid residues, at least 60 amino acid residues, at least 70 amino acid residues, at least 80 amino acid residues, A fragment of the LIGHT or CXCR5 polypeptide, LIGHT or CXCR5 polypeptide described herein, LIGHT or CXCR5 epitope, at least 90 amino acid residues, at least 100 amino acid residues, at least 125 amino acid residues, or at least 150 amino acid residues. Alternatively, a polypeptide encoded by a nucleotide sequence that hybridizes under stringent conditions to a nucleotide sequence encoding an anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibody (or its VH or VL region) (eg, Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A. Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold
Spring Harbor, N.M. Y. Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N. et al. Y. (See); and (c) a LIGHT or CXCR5 polypeptide, a fragment of a LIGHT or CXCR5 polypeptide, a LIGHT or CXCR5 epitope, or an anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibody (or its VH or VL region) as described herein. And at least 30%, at least 35%, at least 40%, at least 45%, at least 50%, at least 55%, at least 60%, at least 65%, at least 70%, at least 75%, at least 80%, with the nucleotide sequence encoding Refers to a polypeptide that satisfies at least one of a polypeptide encoded by a nucleotide sequence that is at least 85%, at least 90%, at least 95%, or at least 99% identical. A LIGHT or CXCR5 polypeptide, a LIGHT or CXCR5 polypeptide fragment, a LIGHT or CXCR5 epitope, or a polypeptide having a structure similar to an anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibody is a LIGHT or CXCR5 polypeptide, LIGHT or CXCR5 polypeptide fragment. , LIGHT or CXCR5 epitope, or a polypeptide having a similar secondary, tertiary or quaternary structure of an anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibody. The structure of a polypeptide can be determined by methods known to those of skill in the art, such as, but not limited to, X-ray crystallography, nuclear magnetic resonance, and crystal electron microscopy.

２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するために、配列を、最適な比較のために整列させる（例えば、第２のアミノ酸または核酸配列との最適なアラインメントのために第１のアミノ酸または核酸配列の配列中にギャップを導入することができる）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と同じ
アミノ酸残基またはヌクレオチドにより占有される場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、配列により共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同一の重複する位置の数／全位置数Ｘ１００％）。一実施形態においては、２つの配列は同じ長さである。 To determine the percent identity of two amino acid sequences or two nucleic acid sequences, the sequences are aligned for optimal comparison (eg, first for optimal alignment with a second amino acid or nucleic acid sequence). A gap can be introduced into the sequence of the amino acid or nucleic acid sequence of The amino acid residues or nucleotides are then compared at the corresponding amino acid or nucleotide positions. If a position in the first sequence is occupied by the same amino acid residue or nucleotide as the corresponding position in the second sequence, the molecule is identical at that position. The percent identity between two sequences is a function of the number of identical positions shared by the sequences (ie,% identity = number of identical overlapping positions / total number of positions x 100%). In one embodiment, the two sequences are the same length.

２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間の同一性パーセントの決定を、数学的アルゴリズムを用いて達成することもできる。２つの配列の比較に用いられる数学的アルゴリズムの非限定例は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３〜５８７７頁として改変された、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ、１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２２６４〜２２６８頁のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３頁のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム中に組込まれている。対象の核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得るために、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、ＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータセット、例えば、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実施することができる。対象のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータセット、例えば、スコア５０、ワード長＝３を用いて実施することができる。比較のためのギャップ付アラインメントを得るために、ギャップ付ＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９〜３４０２頁に記載のように用いることができる。あるいは、ＰＳＩ ＢＬＡＳＴを用いて、分子間の距離関係を検出する反復検索を実施することができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、ギャップ付ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ Ｂｌａｓｔプログラムを用いる場合、対応するプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを用いることができる（例えば、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖのワールドワイドウェブ上のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ
ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。配列の比較に用いられる数学的アルゴリズムの別の非限定例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ ４：１１〜１７頁のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部である、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを用いる場合、ＰＡＭ１２０重み残基表（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを用いることができる。 Determining the percentage of identity between two sequences (eg, amino acid or nucleic acid sequences) can also be achieved using mathematical algorithms. Non-limiting examples of mathematical algorithms used to compare two sequences are described in Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. S. A. 90: 5873-5877, modified by Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S. S. A. 87: The algorithm on pages 2264 to 2268. Such algorithms are described in Altschul et al., 1990, J. Mol. Mol. Biol. 215: Incorporated in the NBLAST and XBLAST programs on page 403. To obtain a nucleotide sequence homologous to the nucleic acid molecule of interest, a BLAST nucleotide search can be performed using the NBLAST nucleotide program parameter set, eg, score = 100, word length = 12. To obtain an amino acid sequence homologous to the protein molecule of interest, a BLAST protein search can be performed using the XBLAST program parameter set, eg, score 50, word length = 3. To obtain a gap alignment for comparison, Gap BLAST was described by Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. It can be used as described on pages 25: 3389-3402. Alternatively, PSI BLAST can be used to perform an iterative search to detect intermolecular distance relationships (ibid.). When using BLAST, Gap BLAST, and PSI Blast programs, the default parameters of the corresponding programs (eg, XBLAST and NBLAST) can be used (eg, National Center on the worldwide web of ncbi.nlm.nih.gov).
For Biotechnology Information (NCBI)). Another non-limiting example of the mathematical algorithm used for sequence comparison is the algorithm of Myers and Miller, 1988, CABIOS 4: 11-17. Such an algorithm is incorporated into the ALIGN program (version 2.0), which is part of the GCG Sequence Alignment Software Package. When using the ALIGN program to compare amino acid sequences, a PAM120 weight residue table, 12 gap length penalties, and 4 gap penalties can be used.

２つの配列間の同一性パーセントを、可能なギャップを用いるか、または用いずに、上記のものと類似する技術を用いて決定することができる。同一性パーセントを算出する際に、典型的には、正確な一致だけを計数する。 The percent identity between the two sequences can be determined using techniques similar to those described above, with or without possible gaps. When calculating the percent identity, typically only exact matches are counted.

「アンタゴニスト」または「阻害剤」とは、標的分子の１つまたは複数の生物活性を阻害することができる分子を指す。アンタゴニストは、リガンドによる活性化された細胞を無力化するか、もしくは殺傷することにより、および／または受容体もしくはリガンド活性化（例えば、チロシンキナーゼ活性化）または受容体へのリガンド結合後のシグナル伝達を妨害することにより、受容体のリガンドへの結合およびその逆を妨害することができる。アンタゴニストは、受容体−リガンド相互作用を完全に遮断するか、またはそのような相互作用を実質的に低下させることができる。アンタゴニストによる介入の全てのそのような点を、本発明の目的にとって等価であると考えるべきである。 By "antagonist" or "inhibitor" is a molecule capable of inhibiting the biological activity of one or more of the target molecules. Antagonists signal transduction by incapacitating or killing ligand-activated cells and / or after receptor or ligand activation (eg, tyrosine kinase activation) or ligand binding to the receptor. Can interfere with the binding of the receptor to the ligand and vice versa. Antagonists can either completely block the receptor-ligand interaction or substantially reduce such interaction. All such aspects of antagonist intervention should be considered equivalent for the purposes of the present invention.

例えば、ＬＩＧＨＴの「アンタゴニスト」または「阻害剤」とは、ＬＩＧＨＴを発現する細胞中またはＬＩＧＨＴ受容体のようなＬＩＧＨＴリガンドを発現する細胞中などにおける、ＬＩＧＨＴの１つまたは複数の生物活性を阻害するか、またはさもなければ減少さ
せることができる分子を指す。例えば、ある実施形態においては、本発明の抗体は、該抗体を、細胞表面に発現されるＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３）を有する細胞と接触させた場合に、該細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、および／またはＲＡＮＴＥＳの分泌を阻害するか、またはさもなければ減少させるアンタゴニスト抗体である。いくつかの実施形態においては、ＬＩＧＨＴのアンタゴニスト（例えば、本発明のアンタゴニスト抗体）は、例えば、ＬＩＧＨＴ受容体を発現する細胞の活性化および／または細胞シグナリング経路を阻害するか、またはさもなければ減少させることにより作用し、それによって、アンタゴニストの非存在下でのＬＩＧＨＴ媒介性生物活性と比較して細胞のＬＩＧＨＴ媒介性生物活性を阻害することができる。本発明のある実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、完全ヒト、モノクローナル、アンタゴニスト抗ＬＩＧＨＴ抗体のような、完全ヒト、アンタゴニスト抗ＬＩＧＨＴ抗体である。 For example, a LIGHT "antagonist" or "inhibitor" inhibits one or more biological activities of LIGHT, such as in cells expressing LIGHT or in cells expressing a LIGHT ligand such as a LIGHT receptor. Or refers to molecules that can otherwise be reduced. For example, in certain embodiments, the antibodies of the invention are when the antibody is contacted with a cell having a LIGHT receptor expressed on the cell surface (eg, HVEM, LTβR and / or DcR3). An antagonist antibody that inhibits or otherwise reduces the secretion of CCL20, IL-8, and / or RANTES from. In some embodiments, the antagonist of LIGHT (eg, the antagonist antibody of the invention) inhibits or otherwise reduces the activation and / or cellular signaling pathway of cells expressing the LIGHT receptor. It acts by allowing it to inhibit the LIGHT-mediated biological activity of the cell as compared to the LIGHT-mediated biological activity in the absence of the antagonist. In certain embodiments of the invention, the anti-LIGHT antibody is a fully human, antagonist anti-LIGHT antibody, such as a fully human, monoclonal, antagonist anti-LIGHT antibody.

例えば、ＣＸＣＲ５の「アンタゴニスト」または「阻害剤」とは、ＣＸＣＲ５による、シグナリングのような１つまたは複数の生物活性を阻害することができる分子を指す。かくして、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＬ１３もしくはＣＸＣＲ５の他のリガンド、またはＣＸＣＲ５と、ＣＸＣＬ１３のようなそのリガンドとの複合体に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）；ＣＸＣＲ５と、ＣＸＣＬ１３のようなリガンドとの相互作用と拮抗するＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３のアミノ酸配列変異体または誘導体；場合により、免疫グロブリン領域（例えば、イムノアドヘシン）のような異種分子に融合された可溶性ＣＸＣＲ５；別の受容体または生物分子と関連するＣＸＣＲ５を含む複合体；ＣＸＣＲ５に結合する合成または天然の配列ペプチドなどが、本発明の範囲内に含まれる。 For example, an "antagonist" or "inhibitor" of CXCR5 refers to a molecule capable of inhibiting one or more biological activities such as signaling by CXCR5. Thus, an antagonist that binds to a complex of CXCR5, CXCL13 or another ligand of CXCR5, or CXCR5 and that ligand such as CXCL13 (eg, a neutralizing antibody); interaction of CXCR5 with a ligand such as CXCL13. Amino acid sequence variants or derivatives of CXCR5 or CXCL13 that antagonize; optionally soluble CXCR5 fused to a heterologous molecule such as an immunoglobulin region (eg, immunoadhesin); CXCR5 associated with another receptor or biomolecule Complexes comprising; synthetic or naturally sequence peptides that bind to CXCR5, and the like are included within the scope of the invention.

用語「抗体」、「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」は、本明細書で互換的に用いることができる。用語、抗体は、限定されるものではないが、合成抗体、モノクローナル抗体、組換え産生された抗体、多特異的抗体（二特異的抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、イントラボディ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、一特異的、二特異的などを含む）、ラクダ化抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および上記のいずれかのエピトープ結合断片を含む。特に、抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、ＬＩＧＨＴ抗原（例えば、抗ＬＩＧＨＴ抗体の１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ））またはＣＸＣＲ５抗原（例えば、抗ＣＸＣＲ５抗体の１つまたは複数の相補性決定領域（ＣＤＲ））に特異的に結合する抗原結合部位を含有する抗原結合ドメインまたは分子を含む。抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５抗体は、免疫グロブリン分子の任意の型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）のものであってもよい。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、完全ヒトモノクローナル抗ＬＩＧＨＴ抗体のような完全ヒト抗体である。ある実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ＩｇＧ抗体、ヒトＩｇＧ４抗体である。あるいは、いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト化モノクローナル抗ＣＸＣＲ５抗体のようなヒト化抗体である。ある実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＩｇＧ抗体、ヒト化ＩｇＧ４抗体である。 The terms "antibody", "immunoglobulin" or "Ig" can be used interchangeably herein. Terms and antibodies are, but are not limited to, synthetic antibodies, monoclonal antibodies, recombinantly produced antibodies, multispecific antibodies (including bispecific antibodies), human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies, intra. Body, single-stranded Fv (scFv) (including, for example, monospecific, bispecific, etc.), camelized antibody, Fab fragment, F (ab') fragment, disulfide-bound Fv (sdFv), anti-idiotype (anti-idiotype) Id) Contains antibodies and any of the above epitope-binding fragments. In particular, the antibody is an immunoglobulin molecule and an immunologically active portion of the immunoglobulin molecule, i.e. a LIGHT antigen (eg, one or more complementarity determining regions (CDRs) of an anti-LIGHT antibody) or a CXCR5 antigen (eg, eg. , Includes an antigen binding domain or molecule containing an antigen binding site that specifically binds to one or more complementarity determining regions (CDRs) of an anti-CXCR5 antibody. Anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibodies can be any type of immunoglobulin molecule (eg, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA and IgY), any class (eg, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 and IgA2), Alternatively, it may be of any subclass (eg, IgG2a and IgG2b). In some embodiments, the anti-LIGHT antibody is a fully human antibody, such as a fully human monoclonal anti-LIGHT antibody. In certain embodiments, the anti-LIGHT antibody is an IgG antibody, a human IgG4 antibody. Alternatively, in some embodiments, the anti-CXCR5 antibody is a humanized antibody, such as a humanized monoclonal anti-CXCR5 antibody. In certain embodiments, the anti-CXCR5 antibody is an IgG antibody, a humanized IgG4 antibody.

本明細書で用いられる用語「抗ＬＩＧＨＴ抗体」は、限定されるものではないが、ＬＩＧＨＴのそのリガンドへの結合を阻害するか、もしくは実質的に減少させるか、またはＬＩＧＨＴ活性を阻害する分子などの、本明細書に定義されるヒトＬＩＧＨＴに特異的に結合する抗体またはそれに由来するポリペプチド（誘導体）を意味する。 As used herein, the term "anti-LIGHT antibody" includes, but is not limited to, molecules that inhibit or substantially reduce the binding of LIGHT to its ligand, or inhibit LIGHT activity. Means an antibody that specifically binds to human Ligand as defined herein or a polypeptide (derivative) derived thereto.

本明細書で用いられる用語「抗ＣＸＣＲ５抗体」は、限定されるものではないが、ＣＸＣＲ５のそのリガンドへの結合を阻害するか、もしくは実質的に減少させるか、またはＣ
ＸＣＲ５活性を阻害する分子などの、本明細書に定義されるヒトＣＸＣＲ５に特異的に結合する抗体またはそれに由来するポリペプチド（誘導体）を意味する。 The term "anti-CXCR5 antibody" as used herein is, but is not limited to, inhibiting or substantially reducing the binding of CXCR5 to its ligand, or C.
It means an antibody that specifically binds to human CXCR5 as defined herein, or a polypeptide (derivative) derived thereto, such as a molecule that inhibits XCR5 activity.

用語「Ｂ細胞活性」は、局部的であってよい、正常より高いＢ細胞活性、または抗体発現、Ｂｒｕｔｏｎのチロシンキナーゼの存在もしくは活性、ＣＤ１９の発現もしくは存在、Ｂ細胞活性化因子の発現もしくは存在などのような、Ｂ細胞の生物学的顕在化もしくは機能の証拠を意味する。 The term "B cell activity" may be localized, higher than normal B cell activity, or antibody expression, Bruton's tyrosine kinase presence or activity, CD19 expression or presence, B cell activator expression or presence. Means evidence of biological manifestation or function of B cells, such as.

用語「結合剤」は、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５、またはその変異体もしくは断片に結合するか、または特異的に結合する、抗体、ｓｉＲＮＡ、核酸、アプタマー、タンパク質、または低分子有機化合物のような任意の分子を意味する。 The term "binding agent" is any molecule such as an antibody, siRNA, nucleic acid, aptamer, protein, or small organic compound that binds to or specifically binds to LIGHT or CXCR5, or a variant or fragment thereof. Means.

用語「副産物」は、所与の製剤中の、抗体のような治療的／予防的結合剤の割合を減少または縮小させる望ましくない生成物を含む。例えば、典型的な副産物としては、抗体の凝集体、例えば、脱アミド化もしくは加水分解による抗体の分解により産生された抗体の断片、またはその混合物が挙げられる。典型的には、凝集体は、モノマー抗体よりも大きい分子量を有する複合体である。抗体分解産物は、例えば、脱アミド化または加水分解によりもたらされた、例えば、抗体の断片を含んでもよい。典型的には、分解産物は、モノマー抗体よりも低い分子量を有する複合体である。ＩｇＧ抗体の場合、そのような分解産物は、約１５０ｋＤ未満である。 The term "by-product" includes an undesired product that reduces or reduces the proportion of therapeutic / prophylactic binders such as antibodies in a given formulation. For example, typical by-products include antibody aggregates, eg, antibody fragments produced by degradation of the antibody by deamidation or hydrolysis, or mixtures thereof. Typically, the aggregate is a complex with a higher molecular weight than the monomeric antibody. The antibody degradation products may include, for example, fragments of the antibody resulting from, for example, deamidation or hydrolysis. Typically, the degradation product is a complex with a lower molecular weight than the monomeric antibody. In the case of IgG antibodies, such degradation products are less than about 150 kDa.

用語「組成物」および「製剤」は、場合により、特定量の特定構成成分（例えば、抗ＬＩＧＨＴ抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体）を含有する生成物、ならびに場合により特定量の特定構成成分の組合せから直接または間接に生じる任意の生成物を包含することが意図される。 The terms "composition" and "formulation" are, in some cases, directly from a product containing a particular amount of a particular component (eg, an anti-LIGHT antibody or an anti-CXCR5 antibody), and optionally a combination of a particular amount of the particular component. Alternatively, it is intended to include any product that occurs indirectly.

用語「定常領域」または「定常ドメイン」とは、抗体の抗原への結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用のような様々なエフェクター機能を示す軽鎖および重鎖のカルボキシ末端部分を指す。この用語は、抗原結合部位を含有する、免疫グロブリンの他の部分、可変ドメインと比較して、より多くの保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインと、軽鎖のＣＨＬドメインとを含有する。 The term "constant region" or "constant domain" is the carboxy terminus of the light and heavy chains that is not directly involved in the binding of the antibody to the antigen but exhibits various effector functions such as interaction with Fc receptors. Refers to the part. The term refers to other parts of an immunoglobulin that contain an antigen-binding site, a portion of an immunoglobulin molecule that has more conserved amino acid sequences compared to the variable domain. The constant domain contains the CH1, CH2 and CH3 domains of the heavy chain and the CHL domain of the light chain.

用語「ＣＸＣＲ５」は、リンパ球、特に、Ｂ細胞、特に、ナイーブなＢ細胞上に見出される天然に存在する公知の分子；そのような細胞から単離されたそのような分子；公知の材料および手段を用いて、ＣＸＣＲ５をコードする核酸を用いて組換え的に製造されたそのような分子；ならびにＣＸＣＬ１３結合のような本発明の実施と関連する特徴および特性を保持する細胞外（ＥＣ）ドメインのようなＣＸＣＲ５の部分に関する。可溶性ＣＸＣＲ５分子は、一般に、分子の最初の約６０アミノ酸、すなわち、ＣＸＣＲ５のアミノ末端部分を含む、ＣＸＣＲ５のＥＣドメインから本質的になってもよい。 The term "CXCR5" refers to naturally occurring known molecules found on lymphocytes, especially B cells, especially naive B cells; such molecules isolated from such cells; known materials and Such molecules recombinantly produced using nucleic acids encoding CXCR5 by means; as well as extracellular (EC) domains that retain features and properties associated with the practice of the invention, such as CXCL13 binding. With respect to the part of CXCR5 such as. Soluble CXCR5 molecules may generally consist essentially of the EC domain of CXCR5, which comprises the first approximately 60 amino acids of the molecule, i.e., the amino-terminal portion of CXCR5.

ＣＸＣＲ５は、非無差別受容体である。ＣＸＣＬ１３はＣＸＣＲ５のリガンドであり、濾胞樹状細胞のような間質細胞上、およびリンパ組織中で構成的に発現される。ＣＸＣＬ１３はＢ細胞およびＢ細胞濾胞性ヘルパーＴ細胞、ＴＦＨと呼ばれるＴ細胞の小サブセットを特異的に誘引する。免疫系におけるＴ細胞集団とＢ細胞集団との多くの相互作用を考慮すると、これは予想外のことではない。さらに、活性化Ｔ細胞は、ＣＸＣＲ５発現を誘導するか、または上方調節する。リンパ球の三次異所性胚中心（ＧＣ）への浸潤は、疾患重症度の増加およびそのような非定型リンパ節様構造と共に存在する特定の障害における寛容の破綻と良好に相関することがわかった。ＣＸＣＲ５−／−およびＣＸＣＬ１３−／−マウスのようなｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルを用いた場合、受容体またはリガンドの非
存在は、ＴおよびＢ細胞局在化の変化、およびことによると相互作用のため、ＧＣの微細な構造の変化をもたらす。これらのマウスはまた、発達中の重症コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）に対しても保護される。ＣＸＣＲ５は、ＲＡの発症と関連する成熟Ｂ細胞上で選択的に発現されるため、この受容体の遮断は罹患した個体における関節炎を発症させる応答を変調する。生物学的製剤（すなわち、抗ＴＮＦαおよび抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブ）を用いる関節リウマチの処置は、臨床的に有効であることを示した；特に、Ｂ細胞指向性療法にある患者は、臨床兆候および症状の長期間続く向上を示した。成熟Ｂ細胞およびＢ細胞ヘルパーＴ細胞上でのみ発現されるＣＸＣＲ５の選択的標的化は、Ｂ細胞の発生に影響しないか、または患者を免疫不全にしない。リツキシマブと違って、本発明の抗ＣＸＣＲ５抗体は、細胞傷害性を媒介しない中和抗体である。 CXCR5 is a non-discriminatory receptor. CXCL13 is a ligand for CXCR5 and is constitutively expressed on stromal cells such as follicular dendritic cells and in lymphoid tissues. CXCL13 specifically attracts B cells and B cell follicular helper T cells, a small subset of T cells called TFH. This is not unexpected given the many interactions between T and B cell populations in the immune system. In addition, activated T cells induce or upregulate CXCR5 expression. Infiltration of lymphocytes into the tertiary ectopic germinal center (GC) has been found to correlate well with increased disease severity and disruption of tolerance in certain disorders present with such atypical lymph node-like structures. It was. When using in vivo mouse models such as CXCR5-/-and CXCL13-/-mice, the absence of receptors or ligands is due to altered T and B cell localization and possibly interactions. It brings about minute structural changes in GC. These mice are also protected against developing severe collagen-induced arthritis (CIA). Since CXCR5 is selectively expressed on mature B cells associated with the development of RA, blockade of this receptor modulates the response that causes arthritis in affected individuals. Treatment of rheumatoid arthritis with biopharmacy (ie, anti-TNFα and anti-CD20 antibody, rituximab) has been shown to be clinically effective; in particular, patients on B cell-directed therapy have clinical signs and It showed a long-lasting improvement in symptoms. Selective targeting of CXCR5, expressed only on mature B cells and B cell helper T cells, does not affect B cell development or cause immunodeficiency in patients. Unlike rituximab, the anti-CXCR5 antibody of the invention is a neutralizing antibody that does not mediate cytotoxicity.

「ＣＸＣＲ５疾患」は、ＣＸＣＬ１３もしくは他のＣＸＣＲ５リガンドの過剰発現もしくはレベルの増加、Ｂ細胞レベルの増加、Ｂ細胞活性のレベルの増加、ＣＸＣＲ５レベルの増加、またはＣＸＣＲ５の不適切な代謝および活性を特徴とするか、またはそれらにより引き起こされる、病気、障害、疾患、状態、異変などである。 "CXCR5 disease" is characterized by overexpression or increased levels of CXCL13 or other CXCR5 ligands, increased B cell levels, increased levels of B cell activity, increased levels of CXCR5, or inappropriate metabolism and activity of CXCR5. Or diseases, disorders, diseases, conditions, abnormalities, etc. caused by them.

用語「エピトープ」とは、抗体のような結合剤の１つまたは複数の抗原結合領域に結合することができ、免疫応答を惹起することができる、ヒトなどの哺乳動物のような動物における抗原性または免疫原性活性を有する、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド、またはＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチド断片のような抗原の表面上の局在化された領域を指す。免疫原性活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を惹起するポリペプチドの一部である。抗原性活性を有するエピトープは、例えば、免疫アッセイのような、当業界で周知の任意の方法により決定された場合、抗体が特異的に結合するポリペプチドの一部である。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。エピトープは通常、アミノ酸または糖側鎖のような化学的に活性な分子表面基からなり、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有する。エピトープに寄与するポリペプチドの領域は、ポリペプチドの連続するアミノ酸であってもよく、またはエピトープはポリペプチドの２つ以上の非連続領域に由来してもよい。エピトープは、抗原の三次元表面特性であっても、またはなくてもよい。ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴまたはＣＸＣＲ５エピトープは、三次元表面特性のＬＩＧＨＴまたはＣＸＣＲ５ポリペプチド（例えば、トリマー形態のＬＩＧＨＴポリペプチド）である。他の実施形態においては、ＬＩＧＨＴエピトープは、線状特性のＬＩＧＨＴまたはＣＸＣＲ５ポリペプチド（例えば、トリマー形態またはモノマー形態のＬＩＧＨＴポリペプチド）である。抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５抗体は、モノマー（変性）形態のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５のエピトープ、トリマー（天然）形態のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５のエピトープ、またはモノマー（変性）形態およびトリマー（天然）形態の両方のＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５に特異的に結合することができる。特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、トリマー形態のＬＩＧＨＴのエピトープに特異的に結合するが、モノマー形態のＬＩＧＨＴには特異的に結合しない。 The term "epitope" is antigenic in animals such as mammals, such as humans, which can bind to one or more antigen-binding regions of a binding agent such as an antibody and elicit an immune response. Alternatively, it refers to a localized region on the surface of an antigen such as a LIGHT or CXCR5 polypeptide, or a LIGHT or CXCR5 polypeptide fragment, which has immunogenic activity. Epitopes with immunogenic activity are some of the polypeptides that elicit an antibody response in animals. An epitope having antigenic activity is part of a polypeptide to which an antibody specifically binds when determined by any method well known in the art, such as an immunoassay. Antigenic epitopes do not necessarily have to be immunogenic. Epitopes usually consist of chemically active molecular surface groups such as amino acids or sugar side chains and have specific three-dimensional structural properties as well as specific charge properties. The region of the polypeptide that contributes to the epitope may be a contiguous amino acid of the polypeptide, or the epitope may be derived from two or more discontinuous regions of the polypeptide. The epitope may or may not be a three-dimensional surface property of the antigen. In certain embodiments, the LIGHT or CXCR5 epitope is a LIGHT or CXCR5 polypeptide with three-dimensional surface properties (eg, a LIGHT polypeptide in trimmer form). In other embodiments, the LIGHT epitope is a LIGHT or CXCR5 polypeptide with linear properties (eg, a LIGHT polypeptide in trimmer or monomeric form). Anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibodies are epitopes of LIGHT or CXCR5 in monomeric (denatured) form, epitopes of LIGHT or CXCR5 in trimmer (natural) form, or LIGHT or CXCR5 in both monomeric (denatured) and trimmer (natural) forms Can specifically bind to. In certain embodiments, the anti-LIGHT antibody specifically binds to the epitope of the trimmer form of LIGHT, but not the monomer form of LIGHT.

用語「添加剤」とは、薬物のための、賦形剤、ビヒクル、保存剤、結合剤、安定化剤などとして一般的に用いられる不活性物質を指し、限定されるものではないが、タンパク質（例えば、血清アルブミンなど）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、グリシン、ヒスチジンなど）、脂肪酸およびリン脂質（例えば、スルホン酸アルキル、カプリレートなど）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、ポリソルベート、非イオン性界面活性剤など）、サッカライド（例えば、スクロース、マルトース、トレハロースなど）ならびにポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトールなど）が挙げられる。また、全体が参照により本明細書に組み入れられるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．も参照されたい。 The term "additive" refers to, but is not limited to, a protein that is commonly used as an excipient, vehicle, preservative, binder, stabilizer, etc. for a drug. (Eg, serum albumin, etc.), amino acids (eg, aspartic acid, glutamic acid, lysine, arginine, glycine, histidine, etc.), fatty acids and phospholipids (eg, alkyl sulfonate, caprilate, etc.), surfactants (eg, SDS) , Polysorbates, nonionic surfactants, etc.), saccharides (eg, sucrose, maltose, trehalose, etc.) and polyols (eg, mannitol, sorbitol, etc.). Also, Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Ltd., which is incorporated herein by reference in its entirety. , Easton, Pa. See also.

ペプチドまたはポリペプチドの文脈において、用語「断片」とは、完全長より少ないアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを指す。そのような断片は、例えば、アミノ末端でのトランケーション、カルボキシ末端でのトランケーション、および／またはアミノ酸配列からの残基の内部的欠失から生じてもよい。断片は、例えば、代替的ＲＮＡスプライシングまたはｉｎ ｖｉｖｏでのプロテアーゼ活性から生じてもよい。ある実施形態においては、ｈＬＩＧＨＴまたはｈＣＸＣＲ５断片は、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドまたはＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドに特異的に結合する抗体のアミノ酸配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも６０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも７０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１００個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続するアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続するアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続するアミノ酸残基、または少なくとも２５０個の連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。特定の実施形態においては、ＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５ポリペプチドまたはＬＩＧＨＴもしくはＣＸＣＲ５抗原に特異的に結合する抗体の断片は、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つの機能を保持する。 In the context of a peptide or polypeptide, the term "fragment" refers to a peptide or polypeptide that contains an amino acid sequence that is less than full length. Such fragments may result, for example, from truncation at the amino terminus, truncation at the carboxy terminus, and / or internal deletion of residues from the amino acid sequence. Fragments may result, for example, from alternative RNA splicing or protease activity in vivo. In certain embodiments, the hLIGHT or hCXCR5 fragment is at least 5 contiguous amino acid residues, at least 10 contiguous, of the amino acid sequence of an antibody that specifically binds to a LIGHT or CXCR5 polypeptide or LIGHT or CXCR5 polypeptide. Amino acid residues, at least 15 consecutive amino acid residues, at least 20 consecutive amino acid residues, at least 25 consecutive amino acid residues, at least 40 consecutive amino acid residues, at least 50 consecutive amino acids Amino acid residues, at least 60 contiguous amino acid residues, at least 70 contiguous amino acid residues, at least 80 contiguous amino acid residues, at least 90 contiguous amino acid residues, at least 100 contiguous Amino acid residues, at least 125 consecutive amino acid residues, at least 150 consecutive amino acid residues, at least 175 consecutive amino acid residues, at least 200 consecutive amino acid residues, or at least 250 consecutive amino acids Contains a polypeptide containing the amino acid sequence of the amino acid residue. In certain embodiments, fragments of a LIGHT or CXCR5 polypeptide or antibody that specifically binds to a LIGHT or CXCR5 antigen retain at least one, at least two, or at least three functions of the polypeptide or antibody.

用語「完全ヒト抗体」または「ヒト抗体」は本明細書で互換的に用いられ、ヒト可変領域と、ことによると、ヒト定常領域を含む抗体を指す。特定の実施形態においては、この用語は、ヒト起源の可変領域と定常領域とを含む抗体を指す。「完全ヒト」抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴポリペプチドに結合し、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン核酸配列の天然に存在する体細胞変異体である核酸配列によりコードされる抗体も包含してもよい。特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、完全ヒト抗体である。用語「完全ヒト抗体」は、Ｋａｂａｔらにより記載されたヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に対応する可変および定常領域を有する抗体を含む（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ
ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２頁を参照されたい）。完全ヒト抗体を製造する方法は、当業界で公知である。 The terms "fully human antibody" or "human antibody" are used interchangeably herein to refer to an antibody that comprises a human variable region and possibly a human constant region. In certain embodiments, the term refers to an antibody that comprises a variable region and a constant region of human origin. A "fully human" anti-LIGHT antibody, in certain embodiments, also includes an antibody that binds to a LIGHT polypeptide and is encoded by a nucleic acid sequence that is a naturally occurring somatic variant of a human germline immunoglobulin nucleic acid sequence. You may. In certain embodiments, the anti-LIGHT antibody is a fully human antibody. The term "fully human antibody" comprises an antibody having variable and constant regions corresponding to the human germline immunoglobulin sequence described by Kabat et al. (Kabat et al. (1991) Sequences of Healths of Immunological Interest, 5th Edition, US Department of Health
and Human Services, NIH Publication No. See pages 91-3242). Methods for producing fully human antibodies are known in the art.

語句「組換えヒト抗体」は、宿主細胞中にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックおよび／もしくはトランスクロモソーマルである動物（例えば、マウスもしくはウシ）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７〜６２９５頁を参照されたい）のような、組換え手段により調製、発現、作出、もしくは単離されたヒト抗体またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、作出、もしくは単離された抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有してもよい（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２頁を参照されたい）。しかしながら、ある実施形態においては、そのような組換えヒト抗体を、ｉｎ ｖ
ｉｔｒｏ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックである動物を用いる場合、ｉｎ ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）にかけ、かくして、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、それと関連するが、ｉｎ ｖｉｖｏではヒト抗体生殖細胞系列レパートリー中に自然には存在しなくてもよい。 The phrase "recombinant human antibody" is an antibody expressed using a recombinant expression vector transfected into a host cell, an antibody isolated from a recombinant combinatorial human antibody library, and transgenic for a human immunoglobulin gene. And / or antibodies isolated from animals that are transchromosomals (eg, mice or cows) (eg, Taylor, LD et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20: 6287-6295. Prepared, expressed, produced by recombinant means, or prepared, expressed, produced by any other means, including splicing of isolated human antibodies or human immunoglobulin gene sequences onto other DNA sequences. , Or an isolated antibody. Such recombinant human antibodies may have variable and constant regions derived from human germline immunoglobulin sequences (Kabat, EA et al. (1991) Sequences).
of Proteins of Immunological Interest, 5th Edition, U.S.A. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. See pages 91-3242). However, in certain embodiments, such recombinant human antibodies are used inv.
Itro mutagenesis (or in vivo somatic cell mutagenesis when using animals that are transgenic with respect to human Ig sequences), thus the amino acid sequences of the VH and VL regions of the recombinant antibody are human germline VH. And related to the VL sequence, but may not be naturally present in the human antibody germline repertoire in vivo.

「ＩｇＧ４結合剤」または「ＩｇＧ４ Ｆｃ領域の少なくとも一部を含む結合剤」は両方とも、ＩｇＧ４ Ｆｃの少なくとも断片を含む本明細書に記載の結合剤を指す。ある実施形態においては、断片は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域の１０、２０、３０、４０、５０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０または２２０アミノ酸を含む。他の実施形態においては、断片は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域の１０〜５０、５０〜１００、１００〜１５０、または１５０〜２００アミノ酸を含む。他の実施形態においては、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域の部分は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域に対する特定の相同性を有してもよい。例えば、ＩｇＧ４結合剤は、ＩｇＧ４ Ｆｃ領域に対する５０、６０、７０、８０、９０、９３、９５、９６、９７、９８、９９％より高い、または１００％の相同性を有するタンパク質の一部を含んでもよい。ＩｇＧ４の例示的なＦｃ領域は、本明細書を通じて記載される。 Both "IgG4 binder" or "binder containing at least a portion of the IgG4 Fc region" refer to a binder described herein comprising at least a fragment of IgG4 Fc. In certain embodiments, the fragment contains 10, 20, 30, 40, 50, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210 or 220 amino acids of the IgG4 Fc region. Including. In other embodiments, the fragment comprises 10-50, 50-100, 100-150, or 150-200 amino acids of the IgG4 Fc region. In other embodiments, the portion of the IgG4 Fc region may have specific homology to the IgG4 Fc region. For example, an IgG4 binder comprises a portion of a protein that has greater than 50, 60, 70, 80, 90, 93, 95, 96, 97, 98, 99% or 100% homology to the IgG4 Fc region. It may be. An exemplary Fc region of IgG4 is described herein.

用語「重鎖」は、抗体を参照して用いられる場合、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、アルファ（α）、デルタ（Δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）およびミュー（μ）と呼ばれる５つの異なる型を指す。これらの異なる型の重鎖は当業界で周知であり、それぞれ、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む、５つのクラスの抗体、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭを生じる。いくつかの実施形態においては、重鎖は、ヒト重鎖である。 The term "heavy chain", when used with reference to an antibody, is based on the amino acid sequence of the heavy chain constant domain, alpha (α), delta (Δ), epsilon (ε), gamma (γ) and mu (μ). ) Refers to five different types. These different types of heavy chains are well known in the art and are five classes of antibodies, including four subclasses of IgG, namely IgG1, IgG1, IgG3, and IgG4, IgA, IgD, IgE, IgG, respectively. And IgM. In some embodiments, the heavy chain is a human heavy chain.

「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、ヒト抗体と比較して、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（抗体のＦ_v、Ｆ_ab、Ｆ_ab'、Ｆ_(ab')2または他の標的結合サブ配列など）である。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全部または実質的に全部が、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全部または実質的に全部が、ヒト免疫グロブリン鋳型配列のものである、１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全部を含む。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆ_c）の少なくとも一部、典型的には、選択されたヒ
ト免疫グロブリン鋳型のものを含んでもよい。一般に、目標は、ヒトにおける免疫原性が最小である抗体分子を有することである。かくして、１つまたは複数のＣＤＲ中の１つまたは複数のアミノ酸を、１つまたは複数のＣＤＲの、ＣＸＣＲ５またはＣＸＣＬ１３への特異的結合機能を実質的に最小化することなく、ヒト宿主に対する免疫原性が低いものに変化させることもできる。あるいは、ＦＲは、非ヒトであってもよいが、最も免疫原性であるこれらのアミノ酸を、免疫原性が低いものと置きかえる。それにも拘らず、上記で考察されたＣＤＲ移植は、ヒト化抗体を得るための唯一の方法ではない。例えば、ＣＤＲ領域だけの改変はＣＤＲループの三次元構造および抗体のそのリガンドに対する全体の親和性を決定する際に役割を果たすフレームワーク残基にとって一般的ではないため、ＣＤＲ領域だけの改変では不十分であり得る。従って、非ヒト親抗体分子が、ヒトに対する免疫原性が低いものとなるように改変され、ヒト抗体との全体的配列同一性が常に必要ではないような任意の手段を実施することができる。従って、例えば、ごくわずかの残基、特に、抗体分子上に露出され、分子内に埋まらず、従って、宿主免疫系にとって容易に接近可能ではない残基のわずかな置換により、ヒト化を達成することもできる。そのような方法は、抗体分子上の「可動性」または「可撓性」残基の置換に関して本明細書で教示されており、その目標は、抗体のそのエピトープまたは決定基に対する特異性を含むことなく、得られる分子の免疫原性を低下させるか、または削ぐことである。例えば、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ ７（６）８０５〜８１４頁、１９９４；Ｍｏｌ Ｉｍｍ
４４：１９８６〜１９８８頁、２００７；Ｓｉｍら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５１：２２９６頁（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１頁（１９８７）；Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：４２８５頁（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５１：２６２３頁（１９９３）、ＷＯ２００６／０４２３３３および米国特許第５，８６９，６１９号を参照されたい。 Nonhuman "Humanized" forms (e.g., murine) antibodies compared to human antibodies, containing sequences from non-human immunoglobulin are chimeric immunoglobulins, immunoglobulin chains or fragments thereof (antibody F _v , _Fab , _Fab' , F _{(ab') 2} or other target-binding subsequences). In general, humanized antibodies correspond to those of non-human immunoglobulins in all or substantially all of the CDR regions and all or substantially all of the FR regions are those of human immunoglobulin template sequences. One, typically including substantially all of the two variable domains. The humanized antibody may also include at least a portion of the immunoglobulin constant region (F _c ), typically one of the selected human immunoglobulin template. In general, the goal is to have an antibody molecule that has minimal immunogenicity in humans. Thus, one or more amino acids in one or more CDRs are immunogenic to a human host without substantially minimizing the specific binding function of one or more CDRs to CXCR5 or CXCL13. It can also be changed to a lesser one. Alternatively, FR replaces these most immunogenic amino acids with those with low immunogenicity, although they may be non-human. Nevertheless, the CDR transplantation discussed above is not the only way to obtain humanized antibodies. For example, modifying the CDR regions alone is not common because it is not common for framework residues that play a role in determining the three-dimensional structure of the CDR loops and the overall affinity of the antibody for its ligands. Can be sufficient. Thus, any means can be implemented such that the non-human parent antibody molecule is modified to be less immunogenic to humans and overall sequence identity with human antibodies is not always required. Thus, for example, humanization is achieved by slight substitutions of very few residues, in particular those that are exposed on the antibody molecule and are not embedded in the molecule and are therefore not readily accessible to the host immune system. You can also do it. Such methods are taught herein with respect to the substitution of "mobile" or "flexible" residues on an antibody molecule, the goal of which includes specificity of the antibody for its epitope or determinant. Without reducing or scraping the immunogenicity of the resulting molecule. For example, Studnikka et al., Prot Eng 7 (6) pp. 805-814, 1994; Mol Imm.
44: 1986-1988, 2007; Sim et al., J Immunol 151: 2296 (1993); Chothia et al., J Mol Biol 196: 901 (1987); Carter et al., Proc Natl Acad Sci USA 89: 4285 (1992). ); Presta et al., J Immunol 151: 2623 (1993), WO 2006/042333 and US Pat. No. 5,869,619.

抗体のような、「単離された」または「精製された」結合剤は、結合剤が由来する細胞もしくは組織供給源に由来する細胞材料もしくは他の汚染タンパク質を実質的に含まないか、または化学的に合成された場合には化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない。例えば、用語「細胞材料を実質的に含まない」は、抗体が、それが単離されるか、または組換え的に産生される細胞の細胞成分から分離される抗体の調製物を含む。かくして、細胞材料の実質的に含まない抗体は、約３０％、２０％、１０％、または５％（乾燥重量で）未満の異種タンパク質（本明細書では「汚染タンパク質」とも呼ばれる）を有する抗体の調製物を含む。抗体が組換え産生される場合、それは培養培地を実質的に含まない、すなわち、培養培地がタンパク質調製物の約２０％、１０％、または５％未満の容量であるのも望ましい。抗体が化学的合成により産生される場合、いくつかの実施形態においては、それは化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない、すなわち、それはタンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離される。従って、抗体のそのような調製物は、約３０％、２０％、１０％、５％（乾燥重量で）未満の、対象の抗体以外の化学的前駆体または化合物を有する。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５抗体は、単離または精製される。 "Isolated" or "purified" binding agents, such as antibodies, are substantially free of cell material or other contaminating proteins from the cell or tissue source from which the binding agent is derived, or. When chemically synthesized, it is substantially free of chemical precursors or other chemicals. For example, the term "substantially free of cellular material" includes a preparation of an antibody in which the antibody is isolated from the cellular components of the cell from which it is isolated or recombinantly produced. Thus, antibodies that are substantially free of cellular material are antibodies that have less than about 30%, 20%, 10%, or 5% (by dry weight) heterologous proteins (also referred to herein as "contaminated proteins"). Includes preparations for. If the antibody is recombinantly produced, it is substantially free of culture medium, i.e. it is also desirable that the culture medium be in volume of about 20%, 10%, or less than 5% of the protein preparation. When an antibody is produced by chemical synthesis, in some embodiments it is substantially free of chemical precursors or other chemicals, i.e. it is a chemical precursor or chemical precursor involved in the synthesis of a protein. Separated from other chemicals. Thus, such preparations of antibodies have less than about 30%, 20%, 10%, 5% (by dry weight) chemical precursors or compounds other than the antibody of interest. In some embodiments, the anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibody is isolated or purified.

用語「ヒトＬＩＧＨＴ」、「ｈＬＩＧＨＴ」または「ｈＬＩＧＨＴポリペプチド」および同様の用語は、配列番号９のアミノ酸配列を含むポリペプチド（「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は本明細書では互換的に用いられる）およびそのＳＮＰ変異体を含む関連ポリペプチドを指す。関連ポリペプチドは、いくつかの実施形態においては、ＬＩＧＨＴ活性を保持する、および／または抗ＬＩＧＨＴ免疫応答を生成するのに十分である、対立遺伝子変異体（例えば、ＳＮＰ変異体）；スプライス変異体；断片；誘導体；置換、欠失、および挿入変異体；融合ポリペプチド；ならびに種間相同体を含む。また、抗ＬＩＧＨＴ免疫応答を生成するのに十分である可溶性形態のＬＩＧＨＴも包含される。当業者であれば理解できるように、エピトープは、順に、より大きいポリペプチドの一部である、より大きいポリペプチド断片の一部である、より大きい抗原の一部であるため、抗体のような抗ＬＩＧＨＴ結合剤は、ＬＩＧＨＴポリペプチド、ポリペプチド断片、抗原および／またはエピトープに結合することができる。ｈＬＩＧＨＴは、トリマー（天然）またはモノマー（変性）形態で存在してもよい。 The terms "human LIGHT", "hLIGHT" or "hLIGHT polypeptide" and similar terms are compatible herein with a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 ("polypeptide", "peptide" and "protein" are compatible herein. (Used) and related polypeptides containing its SNP variants. The relevant polypeptide, in some embodiments, is sufficient to retain LIGHT activity and / or generate an anti-LIGHT immune response, allelic variants (eg, SNP variants); splice variants. Includes fragments; derivatives; substitutions, deletions, and insertion variants; fusion polypeptides; and interspecific homologues. Also included are soluble forms of LIGHT that are sufficient to generate an anti-LIGHT immune response. As will be appreciated by those skilled in the art, epitopes, in turn, are like antibodies because they are part of a larger polypeptide, part of a larger polypeptide fragment, part of a larger antigen. The anti-LIGHT binding agent can bind to LIGHT polypeptides, polypeptide fragments, antigens and / or epitopes. hLIGHT may be present in trimmer (natural) or monomeric (modified) form.

用語「ヒトＣＸＣＲ５」、「ｈＣＸＣＲ５」または「ｈＣＸＣＲ５ポリペプチド」および同様の用語は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むポリペプチド（「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は本明細書では互換的に用いられる）およびそのＳＮＰ変異体を含む関連ポリペプチドを指す。関連ポリペプチドは、いくつかの実施形態においては、ＣＸＣＲ５活性を保持する、および／または抗ＣＸＣＲ５免疫応答を生成するのに十分である、対立遺伝子変異体（例えば、ＳＮＰ変異体）；スプライス変異体；断片；誘導体；置換、欠失、および挿入変異体；融合ポリペプチド；ならびに種間相同体を含む。また、抗ＣＸＣＲ５免疫応答を生成するのに十分である可溶性形態のＣＸＣＲ５も包含される。当業者であれば理解できるように、エピトープは、順に、より大きいポリペプチドの一部である、より大きいポリペプチド断片の一部である、より大きい抗原の一部であるため、抗体のような抗ＣＸＣＲ５結合剤は、ＣＸＣＲ５ポリペプチド、ポリペプチド断片、抗原および／またはエピトープに結合することができる。 The terms "human CXCR5", "hCXCR5" or "hCXCR5 polypeptide" and similar terms are compatible herein with a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 ("polypeptide", "peptide" and "protein" are compatible herein. (Used) and related polypeptides containing its SNP variants. The relevant polypeptide, in some embodiments, is sufficient to retain CXCR5 activity and / or generate an anti-CXCR5 immune response, allelic variants (eg, SNP variants); splice variants. Includes fragments; derivatives; substitutions, deletions, and insertion variants; fusion polypeptides; and interspecific homologues. Also included are soluble forms of CXCR5 that are sufficient to generate an anti-CXCR5 immune response. As will be appreciated by those skilled in the art, epitopes, in turn, are like antibodies because they are part of a larger polypeptide, part of a larger polypeptide fragment, part of a larger antigen. The anti-CXCR5 binding agent can bind to CXCR5 polypeptides, polypeptide fragments, antigens and / or epitopes.

用語「Ｋａｂａｔ番号付け」および同様の用語は当業界で認識されており、抗体、またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基より可変性（すなわち、超可変性）であるアミノ酸残基の番号付けシステムを指す（Ｋａｂａｔら（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２〜３９１頁およびＫａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ
ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２頁）。重鎖可変領域については、超可変領域は、典型的には、ＣＤＲ１のアミノ酸３１位から３５位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０位〜６５位、およびＣＤＲ３のアミノ酸９５位〜１０２位の範囲である。軽鎖可変領域については、超可変領域は、典型的には、ＣＤＲ１のアミノ酸２４〜３４位、ＣＤＲ２のアミノ酸５０〜５６位、およびＣＤＲ３のアミノ酸８９〜９７位の範囲である。 The term "Kabat numbering" and similar terms are recognized in the art and are more variable (ie, hypervariable) than other amino acid residues in the heavy and light chain variable regions of the antibody, or its antigen binding portion. ) (Kabat et al. (1971) Ann. NY Acad. Sci. 190: 382-391 pages and Kabat et al. (1991) Terms of Proteins of Immunological Information, 5th edition, U.S.A. S. Department of Health
and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). For heavy chain variable regions, the hypervariable region typically ranges from amino acid positions 31 to 35 of CDR1, amino acids 50 to 65 of CDR2, and amino acids 95 to 102 of CDR3. For the light chain variable region, the hypervariable region typically ranges from amino acids 24-34 of CDR1, amino acids 50-56 of CDR2, and amino acids 89-97 of CDR3.

抗体を参照して用いられる場合、用語「軽鎖」とは、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）またはラムダ（λ）と呼ばれる２つの異なる型を指す。軽鎖アミノ酸配列は当業界で周知である。いくつかの実施形態においては、軽鎖はヒト軽鎖である。 When used with reference to an antibody, the term "light chain" refers to two different types called kappa (κ) or lambda (λ) based on the amino acid sequence of the constant domain. The light chain amino acid sequence is well known in the art. In some embodiments, the light chain is a human light chain.

用語「管理する」、「管理すること」および「管理」とは、感染の治癒をもたらさない、対象が治療（例えば、予防剤または治療剤）から導かれる有益な効果を指す。ある実施形態においては、対象は、疾患の進行または悪化を防止するために、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患（例えば、慢性腸疾患、ＩＢＤ、クローン病、潰瘍性大腸炎、もしくはＧＶＨＤ）またはＣＸＣＲ５媒介性疾患（例えば、関節リウマチ）、その１つまたは複数の症状を「管理する」ための１つまたは複数の治療（例えば、本発明の製剤のような、予防剤または治療剤）を投与される。 The terms "manage", "manage" and "manage" refer to beneficial effects that the subject derives from a treatment (eg, a prophylactic or therapeutic agent) that does not result in cure of the infection. In certain embodiments, the subject has a LIGHT-mediated disease (eg, chronic bowel disease, IBD, Crohn's disease, inflammatory bowelitis, or GVHD) or CXCR5-mediated disease (eg, chronic bowel disease, IBD, Crohn's disease, ulcerative colitis, or GVHD) to prevent progression or exacerbation of the disease For example, rheumatoid arthritis), one or more treatments (eg, prophylactic or therapeutic agents, such as the formulations of the present invention) to "manage" one or more of its symptoms.

用語「モノクローナル抗体」とは、同種または実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、それぞれのモノクローナル抗体は、典型的には、抗原上の単一のエピトープを認識する。いくつかの実施形態においては、「モノクローナル抗体」は、単一のハイブリドーマまたは他の細胞により産生される抗体である。用語「モノクローナル」は、抗体を作製するための任意の特定の方法に限定されない。例えば、モノクローナル抗体を、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５頁（１９７５）に記載のハイブリドーマ法により作製するか、またはファージライブラリーから単離することができる。クローン細胞系およびそれにより発現されるモノクローナル抗体の調製のための他の方法は、当業界で周知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）第５版；Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋの第１１章を参照されたい）。 The term "monoclonal antibody" refers to an antibody obtained from a population of allogeneic or substantially homologous antibodies, each monoclonal antibody typically recognizing a single epitope on an antigen. In some embodiments, a "monoclonal antibody" is an antibody produced by a single hybridoma or other cell. The term "monoclonal" is not limited to any particular method for making an antibody. For example, monoclonal antibodies can be made by the hybridoma method described in Kohler et al., Nature, 256: 495 (1975), or isolated from a phage library. Other methods for the preparation of clonal cell lines and the monoclonal antibodies expressed thereby are well known in the art (eg, Short Protocols in Molecular Biology (2002) 5th Edition; Ausubel et al. (E.), John Wiley). See Chapter 11 of and Sons, New York).

用語「薬学的に許容される」とは、連邦もしくは州政府の規制当局によって認可されるか、または米国薬局方、欧州薬局方もしくは動物、より特には、ヒトにおける使用のための他の一般的に認識される薬局方に列挙されることを意味する。 The term "pharmacologically acceptable" is approved by federal or state government regulators, or is used by the United States Pharmacopeia, the European Pharmacopoeia or animals, and more particularly in humans. It means that it is listed in the Pharmacopoeia recognized by.

「薬学的に許容される添加剤」とは、同意できるか、または都合のよい剤形を調製するための、モノクローナル抗体のような活性分子と組合わされる任意の不活性物質を意味する。「薬学的に許容される添加剤」は、用いられる用量および濃度でレシピエントに対して非毒性的であり、モノクローナル抗体を含む製剤の他の構成成分と適合する添加剤である。 "Pharmaceutically acceptable additive" means any inactive substance combined with an active molecule, such as a monoclonal antibody, for the preparation of an acceptable or convenient dosage form. A "pharmaceutically acceptable additive" is an additive that is non-toxic to the recipient at the dose and concentration used and is compatible with the other components of the formulation containing the monoclonal antibody.

用語「防止する」、「防止すること」および「防止」とは、本明細書に提供される治療または治療の組合せ（例えば、本発明の製剤のような、予防剤または治療剤の組合せ）の投与の結果生じる、ＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患および／またはそれ
と関連する症状の発生、再発、開始または拡散の全体的または部分的阻害を指す。 The terms "prevent", "prevent" and "prevention" refer to the treatment or combination of treatments provided herein (eg, a combination of prophylactic or therapeutic agents, such as the formulations of the present invention). Refers to the total or partial inhibition of the development, recurrence, initiation or spread of LIGHT-mediated or CXCR5-mediated disease and / or related symptoms resulting from administration.

用語「予防剤」とは、対象におけるＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患および／またはそれと関連する症状の発生、再発、開始または拡散を全体的または部分的に阻害することができる任意の薬剤を指す。ある実施形態においては、用語「予防剤」とは、本発明の製剤を指す。ある他の実施形態においては、用語「予防剤」とは、本発明の製剤以外の薬剤を指す。いくつかの実施形態においては、予防剤は、ＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患および／またはそれと関連する症状を防止するか、またはＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患および／またはそれと関連する症状の開始、発生、進行および／もしくは重症度を妨げるために有用であることが知られるか、または用いられてきたか、または現在用いられている薬剤である。特定の実施形態においては、予防剤は、完全ヒト抗ＬＩＧＨＴモノクローナル抗体のような完全ヒト抗ＬＩＧＨＴ抗体、またはヒト化抗ＣＸＣＲ５モノクローナル抗体のようなヒト化抗ＣＸＣＲ５抗体である。 The term "preventive agent" refers to any agent capable of totally or partially inhibiting the development, recurrence, initiation or spread of LIGHT-mediated or CXCR5-mediated disease and / or associated symptoms in a subject. .. In certain embodiments, the term "preventive agent" refers to the formulation of the invention. In certain other embodiments, the term "preventive agent" refers to an agent other than the formulations of the present invention. In some embodiments, the prophylactic agent prevents LIGHT-mediated or CXCR5-mediated disease and / or associated symptoms, or initiates LIGHT-mediated or CXCR5-mediated disease and / or associated symptoms. , Drugs known to be useful, have been used, or are currently used to prevent development, progression and / or severity. In certain embodiments, the prophylactic agent is a fully human anti-LIGHT antibody, such as a fully human anti-LIGHT monoclonal antibody, or a humanized anti-CXCR5 antibody, such as a humanized anti-CXCR5 monoclonal antibody.

用語「ＬＩＧＨＴ抗原」とは、抗体のような結合剤が特異的に結合するＬＩＧＨＴポリペプチドの部分を指す。ＬＩＧＨＴ抗原はまた、抗体のような結合剤が特異的に結合する、ＬＩＧＨＴポリペプチドの類似体もしくは誘導体またはその断片も指す。いくつかの実施形態においては、ＬＩＧＨＴ抗原は、モノマーＬＩＧＨＴ抗原またはトリマーＬＩＧＨＴ抗原である。エピトープに寄与するＬＩＧＨＴポリペプチドの領域は、ポリペプチドの連続するアミノ酸であってもよく、またはエピトープはポリペプチドの２つ以上の非連続的領域に由来してもよい。このエピトープは、抗原の三次元表面特性であってもよく、またはそうでなくてもよい。免疫応答を惹起することができるＬＩＧＨＴ抗原の表面上の局在化された領域は、ＬＩＧＨＴエピトープである。このエピトープは、抗原の三次元表面特性であってもよいか、またはそうでなくてもよい。 The term "LIGHT antigen" refers to a portion of a LIGHT polypeptide to which a binder such as an antibody specifically binds. LIGHT antigens also refer to analogs or derivatives of LIGHT polypeptides or fragments thereof to which a binder such as an antibody specifically binds. In some embodiments, the LIGHT antigen is a monomeric LIGHT antigen or a trimmer LIGHT antigen. The region of the LIGHT polypeptide that contributes to the epitope may be a contiguous amino acid of the polypeptide, or the epitope may be derived from two or more discontinuous regions of the polypeptide. This epitope may or may not be the three-dimensional surface property of the antigen. A localized region on the surface of a LIGHT antigen that can elicit an immune response is a LIGHT epitope. This epitope may or may not be the three-dimensional surface property of the antigen.

用語「ＣＸＣＲ５抗原」とは、抗体のような結合剤が特異的に結合するＣＸＣＲ５ポリペプチドの部分を指す。ＣＸＣＲ５抗原はまた、抗体のような結合剤が特異的に結合するＣＸＣＲ５ポリペプチドの類似体もしくは誘導体またはその断片も指す。エピトープに寄与するＣＸＣＲ５ポリペプチドの領域は、ポリペプチドの連続するアミノ酸であってもよく、またはエピトープはポリペプチドの２つ以上の非連続的領域に由来してもよい。このエピトープは、抗原の三次元表面特性であってもよく、またはそうでなくてもよい。免疫応答を惹起することができるＣＸＣＲ５抗原の表面上の局在化された領域は、ＣＸＣＲ５エピトープである。このエピトープは、抗原の三次元表面特性であってもよいか、またはそうでなくてもよい。 The term "CXCR5 antigen" refers to the portion of the CXCR5 polypeptide to which a binder such as an antibody specifically binds. The CXCR5 antigen also refers to an analog or derivative of a CXCR5 polypeptide or a fragment thereof to which a binder such as an antibody specifically binds. The region of the CXCR5 polypeptide that contributes to the epitope may be a contiguous amino acid of the polypeptide, or the epitope may be derived from two or more discontinuous regions of the polypeptide. This epitope may or may not be the three-dimensional surface property of the antigen. A localized region on the surface of the CXCR5 antigen that can elicit an immune response is the CXCR5 epitope. This epitope may or may not be the three-dimensional surface property of the antigen.

用語「ＬＩＧＨＴ媒介性疾患」および「ＬＩＧＨＴ媒介性障害」は、互換的に用いられ、ＬＩＧＨＴにより完全もしくは部分的に引き起こされるか、またはＬＩＧＨＴの結果である任意の疾患を指す。ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴは、細胞の表面上に異常（例えば、高度に）発現される。いくつかの実施形態においては、ＬＩＧＨＴは特別な細胞型上で異常に上方調節され得る。他の実施形態においては、ＬＩＧＨＴのＬＩＧＨＴリガンドへの結合により、正常な、異常な、または過剰の細胞シグナリングが引き起こされる。ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴリガンドは、例えば、結腸上皮細胞のような細胞の表面上に発現される、ＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、またはＤＣＲ３）である。ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患は、クローン病（ＣＤ）または潰瘍性大腸炎（ＵＣ）のような、慢性腸疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。他の実施形態においては、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）である。 The terms "LIGHT-mediated disease" and "LIGHT-mediated disorder" are used interchangeably and refer to any disease that is completely or partially caused by LIGHT or is the result of LIGHT. In certain embodiments, LIGHT is abnormally (eg, highly) expressed on the surface of the cell. In some embodiments, LIGHT can be abnormally upregulated on special cell types. In other embodiments, binding of LIGHT to the LIGHT ligand causes normal, abnormal, or excessive cell signaling. In certain embodiments, the LIGHT ligand is a LIGHT receptor (eg, HVEM, LTβR, or DCR3) that is expressed on the surface of a cell, such as colonic epithelial cells. In certain embodiments, the LIGHT-mediated disease is chronic bowel disease, inflammatory bowel disease (IBD), such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC). In another embodiment, the LIGHT-mediated disease is graft-versus-host disease (GVHD).

用語「ＣＸＣＲ５媒介性疾患」および「ＣＸＣＲ５媒介性障害」は、互換的に用いられ、ＣＸＣＲ５により完全もしくは部分的に引き起こされるか、またはＣＸＣＲ５の結果で
ある任意の疾患を指す。ある実施形態においては、ＣＸＣＲ５は、細胞の表面上に異常（例えば、高度に）発現される。いくつかの実施形態においては、ＣＸＣＲ５は特別な細胞型上で異常に上方調節され得る。他の実施形態においては、ＣＸＣＲ５のＣＸＣＲ５リガンドへの結合により、正常な、異常な、または過剰の細胞シグナリングが引き起こされる。ある実施形態においては、ＣＸＣＲ５リガンドは、ＣＸＣＬ１３である。ある実施形態においては、ＣＸＣＲ５媒介性疾患は、関節リウマチ（ＲＡ）である。 The terms "CXCR5-mediated disease" and "CXCR5-mediated disorder" are used interchangeably and refer to any disease that is completely or partially caused by CXCR5 or is the result of CXCR5. In certain embodiments, CXCR5 is abnormally (eg, highly) expressed on the surface of the cell. In some embodiments, CXCR5 can be abnormally upregulated on a particular cell type. In other embodiments, binding of CXCR5 to the CXCR5 ligand causes normal, abnormal, or excessive cell signaling. In certain embodiments, the CXCR5 ligand is CXCL13. In certain embodiments, the CXCR5-mediated disease is rheumatoid arthritis (RA).

用語「サッカライド」とは、多価アルコールの誘導体である分子のクラスを指す。サッカライドは、一般的には炭水化物と呼ばれ、異なる量の糖（サッカライド）単位、例えば、モノサッカライド、ジサッカライド、およびポリサッカライドを含有してもよい。 The term "saccharide" refers to a class of molecules that are derivatives of polyhydric alcohols. Saccharides are commonly referred to as carbohydrates and may contain different amounts of sugar (saccharide) units, such as monosaccharides, dissaccharides, and polysaccharides.

用語「特異的に結合する」または「特異的に結合すること」とは、ある抗原またはその断片には特異的に結合するが、他の抗原には特異的に結合しないことを意味する。例えば、抗原に特異的に結合する抗体は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ＢＩＡＣＯＲＥ、または当業界で公知の他のアッセイにより決定された場合、より低い親和性で他のペプチドまたはポリペプチドに結合することができる。抗原に特異的に結合する抗体またはその変異体もしくは断片は、関連する抗原と交差反応性であってもよい。いくつかの実施形態においては、抗原に特異的に結合する抗体またはその変異体もしくは断片は、他の抗原と交差反応しない。ＬＩＧＨＴまたはＣＸＣＲ５抗原に特異的に結合する抗体またはその変異体もしくは断片を、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ、または当業者には公知の他の技術により同定することができる。典型的には、特異的または選択的反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、より典型的には、バックグラウンドの１０倍を超える。例えば、抗体特異性に関する考察については、Ｐａｕｌ（編）、１９８９、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第２版、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、３３２〜３３６頁を参照されたい。 The term "specifically binds" or "specifically binds" means that it specifically binds to one antigen or fragment thereof, but not to another antigen. For example, an antibody that specifically binds to an antigen has a lower affinity when determined, for example, by a radioimmunoassay (RIA), an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), BIACORE, or another assay known in the art. Can bind to other peptides or polypeptides. An antibody or variant or fragment thereof that specifically binds to an antigen may be cross-reactive with the associated antigen. In some embodiments, an antibody or variant or fragment thereof that specifically binds to an antigen does not cross-react with other antigens. Antibodies or variants or fragments thereof that specifically bind the LIGHT or CXCR5 antigen can be identified by, for example, immunoassays, BIAcore, or other techniques known to those of skill in the art. Typically, the specific or selective response is at least twice the background signal or noise, and more typically more than ten times the background. For example, for discussion of antibody specificity, see Paul (eds.), 1989, Fundamental Immunology, 2nd Edition, Raven Press, New York, pp. 332-336.

「安定な」または「安定化された」製剤は、その中の抗体のような結合剤が、保存時にその物理的安定性、同一性、完全性、および／または化学的安定性、同一性、完全性、および／または生物活性を本質的に保持するものである。タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術が当業界で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、２４７〜３０１頁、Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ（編）、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９〜９０頁（１９９３）に概説されている。安定性を、選択された期間にわたって、選択された温度および他の保存条件で測定することができる。安定性を、視覚的検査、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＩＥＦ、ＨＰＳＥＣ、ＲＦＦＩＴ、およびカッパ／ラムダＥＬＩＳＡからなる群から選択される少なくとも１つの方法により決定することができる。例えば、抗体が、色および／もしくは透明度の視覚的検査の際に、またはＵＶ光散乱、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、もしくは（高速）サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）により測定された場合、凝集、沈降、および／または変性の兆候を示さない場合、それは医薬製剤中で「その物理的安定性を保持する」。いくつかの実施形態においては、本発明の製剤を用いる場合、ＨＰＳＥＣまたは凝集形成を測定するための任意の他の好適な方法により測定された場合、５％以下、典型的には、４％以下、典型的には、３％以下、より典型的には、２％以下、および特に１％以下の抗体が凝集体を形成する。例えば、抗体モノマーが特定の製剤中、特定の保存条件下で特定の所定の期間後に、約９０％、典型的には、約９５％、特に、約９８％の純度を有する場合、抗体は特定の製剤中で安定であると考えられる。化学的に変化した形態のタンパク質を検出および定量することにより、化学的安定性を評価することができる。化学的変化は、例えば、（ＨＰ）ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および／またはマトリックス支援レーザー脱離イオン化／飛行時間質量分析（ＭＡＬＤＩ／Ｔ
ＯＦ ＭＳ）を用いて評価することができるサイズ改変（例えば、クリッピング）を含んでもよい。他の型の化学的変化としては、例えば、イオン交換クロマトグラフィーにより評価することができる電荷変化（例えば、脱アミド化の結果として起こる）が挙げられる。例えば、抗原結合アッセイまたはウイルス中和アッセイにおいて決定された場合、所与の時間での抗体の生物活性が、医薬製剤が調製された時間で示された生物活性の少なくとも約９０％（アッセイの誤差の範囲内）である場合、抗体は所与の時間で医薬製剤中で「その生物活性を保持する」。 A "stable" or "stabilized" formulation is one in which an antibody-like binding agent has its physical stability, identity, completeness, and / or chemical stability, identity, upon storage. It essentially retains completeness and / or biological activity. Various analytical techniques for measuring protein stability are available in the art, such as Peptide and Protein Drug Delivery, pp. 247-301, Vincent Lee (eds.), Marcel Dekker, Inc. , New York, N.K. Y. , Pubs. (1991) and Jones, A. et al. Adv. Drug Delivery Rev. It is outlined on pages 10:29-90 (1993). Stability can be measured over a selected period of time at selected temperatures and other storage conditions. Stability can be determined by at least one method selected from the group consisting of visual examination, SDS-PAGE, IEF, HPSEC, RFFIT, and Kappa / Lambda ELISA. For example, aggregation, precipitation, and / / when the antibody is measured during a visual examination of color and / or transparency, or by UV light scattering, SDS-PAGE, or (fast) size exclusion chromatography (HPSEC). Or if it shows no signs of degeneration, it "retains its physical stability" in the pharmaceutical formulation. In some embodiments, when the formulations of the present invention are used, 5% or less, typically 4% or less, as measured by HPSEC or any other suitable method for measuring aggregation formation. , Typically 3% or less, more typically 2% or less, and especially 1% or less of the antibody form aggregates. For example, an antibody is specific if the antibody monomer has a purity of about 90%, typically about 95%, especially about 98%, in a particular formulation, after a particular predetermined period under certain storage conditions. It is considered to be stable in the formulation of. Chemical stability can be assessed by detecting and quantifying chemically altered forms of protein. Chemical changes include, for example, (HP) SEC, SDS-PAGE, and / or matrix-assisted laser desorption / ionization / time-of-flight mass spectrometry (MALDI / T).
It may include size modifications (eg, clipping) that can be evaluated using OF MS). Other types of chemical changes include, for example, charge changes that can be assessed by ion exchange chromatography (eg, occurring as a result of deamidation). For example, when determined in an antigen binding assay or virus neutralization assay, the biological activity of the antibody at a given time is at least about 90% of the biological activity indicated at the time the pharmaceutical formulation was prepared (assay error). If so, the antibody "retains its biological activity" in the pharmaceutical formulation at a given time.

用語「対象」および「患者」は互換的に用いられる。本明細書で用いられる場合、対象は、典型的には、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）または霊長類（例えば、サルおよびヒト）、およびいくつかの実施形態においては、ヒトのような哺乳動物である。一実施形態においては、対象は、ＬＩＧＨＴ媒介性またはＣＸＣＲ５媒介性疾患を有する、ヒトのような哺乳動物である。別の実施形態においては、対象は、ＬＩＧＨＴ媒介性またはＣＸＣＲ５媒介性疾患を発症する危険性がある、ヒトのような哺乳動物である。 The terms "subject" and "patient" are used interchangeably. As used herein, subjects are typically non-primates (eg, cows, pigs, horses, cats, dogs, rats, etc.) or primates (eg, monkeys and humans), and some. In embodiments, it is a mammal such as a human. In one embodiment, the subject is a mammal, such as a human, having a LIGHT-mediated or CXCR5-mediated disease. In another embodiment, the subject is a mammal, such as a human, at risk of developing a LIGHT-mediated or CXCR5-mediated disease.

用語「治療上有効量」とは、所与の疾患および／またはそれと関連する症状の重症度および／または持続期間を軽減および／または改善するのに十分である治療（例えば、本発明の製剤）の量を指す。この用語はまた、所与の疾患の前進もしくは進行の軽減もしくは改善、所与の疾患の再発、発症もしくは開始の軽減もしくは改善、および／または別の治療（例えば、本発明の製剤以外の治療）の予防もしくは治療効果の改善もしくは増強にとって必要な量も包含する。いくつかの実施形態においては、本発明の抗体の治療上有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ（対象の体重１ｋｇあたりの抗体のｍｇ）〜約１００ｍｇ／ｋｇである。ある実施形態においては、本明細書で提供される抗体の治療上有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇまたは約１００ｍｇ／ｋｇ（またはその中の範囲）である。いくつかの実施形態においては、本明細書で用いられる「治療上有効量」はまた、特殊な結果（例えば、細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、もしくはＲＡＮＴＥＳの分泌の阻害のような、細胞のＬＩＧＨＴ生物活性の阻害；またはＣＸＣＬ１３への結合のような、細胞のＣＸＣＲ５生物活性の阻害）を達成する本発明の抗体の量も指す。 The term "therapeutically effective amount" is a treatment that is sufficient to reduce and / or ameliorate the severity and / or duration of a given disease and / or symptoms associated therewith (eg, formulations of the invention). Refers to the amount of. The term also refers to reducing or ameliorating the advancement or progression of a given disease, reducing or ameliorating the recurrence, onset or onset of a given disease, and / or another treatment (eg, a treatment other than the formulations of the invention). It also includes the amount necessary for the prevention or improvement or enhancement of the therapeutic effect of. In some embodiments, the therapeutically effective amount of the antibody of the invention is from about 0.1 mg / kg (mg of antibody per kg body weight of subject) to about 100 mg / kg. In certain embodiments, therapeutically effective amounts of the antibodies provided herein are about 0.1 mg / kg, about 0.5 mg / kg, about 1 mg / kg, 3 mg / kg, 5 mg / kg, about 10 mg. / Kg, about 15 mg / kg, about 20 mg / kg, about 25 mg / kg, about 30 mg / kg, about 35 mg / kg, about 40 mg / kg, about 45 mg / kg, about 50 mg / kg, about 60 mg / kg, about 70 mg / Kg, about 80 mg / kg, about 90 mg / kg or about 100 mg / kg (or a range thereof). In some embodiments, the "therapeutically effective amount" as used herein is also a particular result, such as inhibition of the secretion of CCL20, IL-8, or RANTES from the cell. It also refers to the amount of antibody of the invention that achieves inhibition of LIGHT biological activity; or inhibition of cellular CXCR5 biological activity, such as binding to CXCL13.

用語「治療剤」とは、ＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患および／またはそれと関連する症状の処置、管理または改善において用いることができる任意の薬剤を指す。ある実施形態においては、用語「治療剤」とは、本発明の製剤を指す。ある他の実施形態においては、用語「治療剤」とは、本発明の製剤以外の薬剤を指す。いくつかの実施形態においては、治療剤は、ＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患またはそれと関連する１つもしくは複数の症状の処置、管理または改善にとって有用であることが知られるか、またはそのために用いられてきた、またはそのために現在用いられている薬剤である。 The term "therapeutic agent" refers to any agent that can be used in the treatment, management or amelioration of LIGHT-mediated or CXCR5-mediated diseases and / or symptoms associated therewith. In certain embodiments, the term "therapeutic agent" refers to the formulation of the invention. In certain other embodiments, the term "therapeutic agent" refers to an agent other than the formulation of the invention. In some embodiments, therapeutic agents are known to be useful for the treatment, management or amelioration of LIGHT-mediated or CXCR5-mediated disease or one or more symptoms associated therewith, or are used therefor. Drugs that have been or are currently used for that purpose.

用語「治療」とは、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患（例えば、ＩＢＤもしくはＧＶＨＤ）またはＣＸＣＲ５媒介性疾患（例えば、関節リウマチ）の防止、管理、処置、および／または改善において用いることができる任意のプロトコール、方法、および／または薬剤を指す。ある実施形態においては、用語「複数の治療」および「治療」とは、生物学的治療、支持的治療、および／または医療関係者のような当業者には公知のＬＩＧＨＴ媒介性もしくはＣＸＣＲ５媒介性疾患の防止、管理、処置、および／もしくは改善において有用な他の治療を指す。 The term "treatment" is any protocol, method that can be used in the prevention, management, treatment, and / or amelioration of LIGHT-mediated disease (eg, IBD or GVHD) or CXCR5-mediated disease (eg, rheumatoid arthritis). , And / or refers to a drug. In certain embodiments, the terms "multiple treatments" and "treatments" are LIGHT-mediated or CXCR5-mediated, known to those of skill in the art, such as biological treatments, supportive treatments, and / or medical personnel. Refers to other treatments that are useful in the prevention, management, treatment, and / or amelioration of the disease.

用語「処置する」、「処置」および「処置すること」とは、１つまたは複数の治療の投与（限定されるものではないが、本発明の製剤のような１つまたは複数の予防剤または治療剤の投与など）の結果生じる、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患（例えば、慢性腸疾患、ＩＢＤもしくはＧＶＨＤ）またはＣＸＣＲ５媒介性疾患（例えば、関節リウマチ）の進行、重症度、および／または持続期間の軽減または改善を指す。ＬＩＧＨＴに関する特定の実施形態においては、そのような用語は、ＬＩＧＨＴのＨＶＥＭへの結合の減少もしくは阻害、ＬＩＧＨＴのＬＴβＲへの結合の減少もしくは阻害、ＬＩＧＨＴのＤｃＲ３への結合の減少もしくは阻害、対象のＬＩＧＨＴ受容体を発現する細胞からのＣＣＬ２０の産生もしくは分泌の減少もしくは阻害、対象のＬＩＧＨＴ受容体を発現する細胞からのＩＬ−８の産生もしくは分泌の減少もしくは阻害、対象のＬＩＧＨＴ受容体を発現する細胞からのＲＡＮＴＥＳの産生もしくは分泌の減少もしくは阻害、および／または慢性腸疾患、ＩＢＤもしくはＧＶＨＤのような、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患と関連する１つまたは複数の症状の阻害もしくは軽減を指す。ＣＸＣＲ５に関する特定の実施形態においては、そのような用語は、ＣＸＣＲ５のＣＸＣＬ１３への結合の減少もしくは阻害、および／または関節リウマチのような、ＣＸＣＲ５媒介性疾患と関連する１つまたは複数の症状の阻害もしくは軽減を指す。 The terms "treat," "treat," and "treat" refer to the administration of one or more treatments (but not limited to, one or more prophylactic agents such as the formulations of the invention). Reducing the progression, severity, and / or duration of LIGHT-mediated disease (eg, chronic bowel disease, IBD or GVHD) or CXCR5-mediated disease (eg, rheumatoid arthritis) resulting from the administration of therapeutic agents or Refers to improvement. In certain embodiments relating to LIGHT, such terms include reducing or inhibiting the binding of LIGHT to HVEM, reducing or inhibiting the binding of LIGHT to LTβR, reducing or inhibiting the binding of LIGHT to DcR3, the subject. Decrease or inhibit CCL20 production or secretion from cells expressing the LIGHT receptor, decrease or inhibit IL-8 production or secretion from cells expressing the LIGHT receptor of interest, express the LIGHT receptor of interest Refers to the reduction or inhibition of the production or secretion of RANTES from cells and / or the inhibition or alleviation of one or more symptoms associated with a LIGHT-mediated disease such as chronic intestinal disease, IBD or GVHD. In certain embodiments relating to CXCR5, such terms include diminished or inhibited binding of CXCR5 to CXCL13 and / or inhibition of one or more symptoms associated with CXCR5-mediated disease, such as rheumatoid arthritis. Or it refers to mitigation.

用語「可変領域」または「可変ドメイン」とは、結合において用いられる抗体間で配列およびその特定の抗原に対するそれぞれの特定の抗体の特異性が大きく異なる、軽鎖および重鎖の一部、典型的には、重鎖中のアミノ末端の約１２０〜１３０アミノ酸および軽鎖中の約１００〜１１０アミノ酸を指す。配列の変動性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれるこれらの領域に集中するが、可変ドメイン中のより高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。軽鎖および重鎖のＣＤＲは主に、抗体の抗原との相互作用を担う。アミノ酸位置の番号付けは、Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）第５版（「Ｋａｂａｔら」）に記載のようなＥＵ指数によるものである。いくつかの実施形態においては、可変領域は、ヒト可変領域である。 The term "variable region" or "variable domain" is a portion of a light chain and a heavy chain, typically where the sequences and the specificity of each particular antibody for that particular antigen differ greatly between the antibodies used in binding. Refers to about 120-130 amino acids at the amino terminus in the heavy chain and about 100-110 amino acids in the light chain. Sequence variability is concentrated in these regions called complementarity determining regions (CDRs), while the more highly conserved regions in the variable domain are called framework regions (FRs). Light and heavy chain CDRs are primarily responsible for the interaction of the antibody with the antigen. Amino acid positions are numbered by Kabat et al. (1991) Sequences.
It is based on the EU index as described in the 5th edition ("Kabat et al.") Of protein of immunological intervention (US Department of Health and Human Services, Washington, DC). In some embodiments, the variable region is a human variable region.

Ｂ．製剤および製剤成分
以前に述べた通り、本発明の製剤は驚くべきことに、製剤のｐＨが約ｐＨ６以下かつ結合剤の等電点（ｐＩ）以下である、ＩｇＧ４結合剤とクエン酸バッファーとを含む液体および凍結乾燥粉末の形態で見出された。本発明の製剤は、製剤中の結合剤の濃度を増加させる際に望ましくない副産物を形成する、従来のＩｇＧ４結合剤製剤（例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）製剤）と比較して有意な改良を提供する。特に、本発明の製剤は、製剤中に減少した量の凝集体、半分子、分解産物、低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、ならびに酸性、塩基性、および中性アイソフォームの結合剤の再構成を有する。 B. Formulations and Ingredients As mentioned earlier, the formulations of the present invention surprisingly contain IgG4 binders and citrate buffers where the pH of the formulation is below pH 6 and below the isoelectric point (pI) of the binder. Found in the form of liquids containing and lyophilized powders. The formulations of the present invention are significant compared to conventional IgG4 binder formulations (eg, phosphate buffered saline (PBS) formulations) that form unwanted by-products when increasing the concentration of binder in the formulation. Providing improvements. In particular, the formulations of the present invention contain reduced amounts of aggregates, hemimolecules, degradation products, low molecular weight proteins (LMWP), ultra high molecular weight proteins (HMWP), and acidic, basic, and neutral isoforms in the formulation. Has a reconstitution of the binder.

ｉ．抗ＬＩＧＨＴ結合剤、ならびにその変異体および断片
ある実施形態においては、本発明の製剤は、抗ＬＩＧＨＴ結合剤を含む。結合剤は、ＬＩＧＨＴ、またはその変異体もしくは断片に結合するか、または特異的に結合する、抗体、ｓｉＲＮＡ、核酸、アプタマー、タンパク質、または低分子有機化合物のような任意の分子であってもよい。いくつかの実施形態においては、結合剤は、抗ＬＩＧＨＴ抗体、またはその変異体、またはその抗原結合断片である。抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）タンパク質、ポリペプチド断片、またはエピトープに特異的に結合する。ＬＩＧＨＴ分子は、任意の種に由来するものであってもよ
い。いくつかの実施形態においては、ＬＩＧＨＴ分子は、本明細書で「ｈＬＩＧＨＴ」として知られる、ヒトに由来するものである。ｈＬＩＧＨＴは以下のアミノ酸配列：
1 MEESVVRPSV FVVDGQTDIP FTRLGRSHRR QSCSVARVGL GLLLLLMGAG
51 LAVQGWFLLQ LHWRLGEMVT RLPDGPAGSW EQLTQERRSH EVNPAAHLTG
101 ANSSLTGSGG PLLWETQLGL AFLRGLSYHD GALVVTKAGY YYIYSKVQLG
150 GVGCPLGLAS TITHGLYKRT PRYPEELELL VSQQSPCGRA TSSSRVWWDS
200 SFLGGVVHLE AGEEVVVRVL DERLVRLRDG TRSYFGAFMV (配列番号9)
を有し、配列番号９として同定される。 i. Anti-LIGHT Binders, and Variants and Fragments thereof In certain embodiments, the formulations of the present invention comprise anti-LIGHT binders. The binding agent may be any molecule such as an antibody, siRNA, nucleic acid, aptamer, protein, or small organic compound that binds to or specifically binds to LIGHT, or a variant or fragment thereof. .. In some embodiments, the binder is an anti-LIGHT antibody, or variant thereof, or an antigen-binding fragment thereof. Anti-LIGHT antibodies are specific for LIGHT (lymphocyte-like, inducible expression, T lymphocyte-expressed receptor that competes with HSV glycoprotein D for HVEM) protein, polypeptide fragment, or epitope. Join. The LIGHT molecule may be of any species. In some embodiments, the LIGHT molecule is derived from humans, known herein as "hLIGHT". hLIGHT has the following amino acid sequence:
1 MEESVVRPSV FVVDGQTDIP FTRLGRSHRR QSCSVARVGL GLLLLLMGAG
51 LAVQGWFLLQ LHWRLGEMVT RLPDGPAGSW EQLTQERRSH EVNPAAHLTG
101 ANSSLTGSGG PLLWETQLGL AFLRGLSYHD GALVVTKAGY YYIYSKVQLG
150 GVGCPLGLAS TITHGLYKRT PRYPEELELL VSQQSPCGRA TSSSRVWWDS
200 SFLGGVVHLE AGEEVVVRVL DERLVRLRDG TRSYFGAFMV (SEQ ID NO: 9)
Is identified as SEQ ID NO: 9.

ある例示的実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、またはその変異体またはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ＬＩＧＨＴのその受容体との結合を防止し、ＬＩＧＨＴ生物活性（例えば、ＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、および／またはＤｃＲ３）のようなＬＩＧＨＴリガンドを発現する細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、またはＲＡＮＴＥＳのＬＩＧＨＴにより媒介される産生または分泌）を阻害する。 In certain exemplary embodiments, the anti-LIGHT antibody is a humanized antibody, a fully human antibody, or a variant thereof or an antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the anti-LIGHT antibody prevents the binding of LIGHT to its receptor and LIGHT bioactivity such as LIGHT bioactivity (eg, HVEM, LTβR, and / or DcR3). Inhibits LIGHT-mediated production or secretion of CCL20, IL-8, or RANTES from cells expressing the ligand.

ある特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＨＣＤＲ１−ＧＹＮＷＨ（配列番号１）；
ＨＣＤＲ２−ＥＩＴＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号２）；または
ＨＣＤＲ３−ＥＩＡＶＡＧＴＧＹＹＧＭＤＶ（配列番号３）
のいずれか１つまたは複数のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。 In certain embodiments, the anti-LIGHT antibody has the following complementarity determining regions (CDRs):
HCDR1-GYNWH (SEQ ID NO: 1);
HCDR2-EITHSGSTNYNPSLKS (SEQ ID NO: 2); or HCDR3-EIAVAGTGYYGMDV (SEQ ID NO: 3)
Includes a heavy chain variable region (VH) comprising any one or more of the amino acid sequences of.

他の特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＬＣＤＲ１−ＲＡＳＱＧＩＮＳＡＦＡ（配列番号４）；
ＬＣＤＲ２−ＤＡＳＳＬＥＳ（配列番号５）；または
ＬＣＤＲ３−ＱＱＦＮＳＹＰＬＴ（配列番号６）
のいずれか１つまたは複数のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。 In other specific embodiments, the anti-LIGHT antibody has the following complementarity determining regions (CDRs):
LCDR1-RASQGINSAFA (SEQ ID NO: 4);
LCDR2-DASSLESS (SEQ ID NO: 5); or LCDR3-QQFNSYSPLT (SEQ ID NO: 6)
Contains a light chain variable region (VL) comprising any one or more of the amino acid sequences of.

１つの特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号１、２および３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。 In one particular embodiment, the anti-LIGHT antibody comprises a heavy chain variable region (VH) comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2 and 3.

別の特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号４、５および６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。 In another particular embodiment, the anti-LIGHT antibody comprises a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6.

より特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号１、２および３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号４、５および６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。 In a more specific embodiment, the anti-LIGHT antibody comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2 and 3; and a light chain variable region comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6.

特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列：
1 QVQLQQWGAG LLKPSETLSL TCAVYGGSFS GYNWHWIRQP PGKGLEWIGE
51 ITHSGSTNYN PSLKSRVTIS VDTSKNQFSL KLSSVTAADT AVYYCVREIA
101 VAGTGYYGMD VWGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL
151 VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT
201 KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFEGGP SVFLFPPKPK
251 DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS
301 TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV
351 YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL
401 DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLG (配列番号7)
を含む重鎖を含む。
１〜１２２位：重鎖の可変領域（ＶＨ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による相補性決定領域）に下線を付ける。
１２３〜４４８位：ヒトＩｇＧ４の定常領域（Ｋａｂａｔの番号付けによる、２つの突然変異Ｓ２４１ＰおよびＬ２４８Ｅを含む、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＧＨＧ４＿ＨＵＭＡＮ）。 In certain embodiments, the anti-LIGHT antibody comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7.
1 QVQLQQWGAG LLKPSETLSL TCAVYGGSFS GYNWH WIRQP PGKGLEWIG E
51 ITHSGSTNYN PSLKS RVTIS VDTSKNQFSL KLSSVTAADT AVYYCVR EIA
101 VAGTGYYGMD V WGQGTTVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL
151 VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT
201 KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFEGGP SVFLFPPKPK
251 DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS
301 TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV
351 YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL
401 DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLG (SEQ ID NO: 7)
Includes heavy chains containing.
Positions 1-122: Variable region of heavy chain (VH). Underline the CDRs (Complementarity determining regions as defined by Kabat).
Positions 123-448: a constant region of human IgG4 (SwissProt IGHG4_HUMAN containing two mutations S241P and L248E, numbered by Kabat).

他の特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号８のアミノ酸配列：
1 AIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQGIN SAFAWYQQKP GKAPKLLIYD
51 ASSLESGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ FNSYPLTFGG
101 GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV
151 DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG
201 LSSPVTKSFN RGEC (配列番号8)
を含む軽鎖を含む。
１〜１０７位：軽鎖の可変領域（ＶＬ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による相補性決定領域）に下線を付ける。
１０８〜２１４位：ヒトＣκの定常領域。 In other specific embodiments, the anti-LIGHT antibody comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
1 AIQLTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQGIN SAFA WYQQKP GKAPKLLIY D
51 ASSLES GVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYC QQ FNSYPLT FGG
101 GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV
151 DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG
201 LSSPVTKSFN RGEC (SEQ ID NO: 8)
Includes a light chain containing.
Positions 1-107: Variable region of the light chain (VL). Underline the CDRs (Complementarity determining regions as defined by Kabat).
Positions 108-214: constant region of human Cκ.

さらなる実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。 In a further embodiment, the anti-LIGHT antibody comprises a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.

ある実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号１１の核酸配列によりコードされていてもよい、配列番号１０のアミノ酸配列に由来する重鎖を含む。 In certain embodiments, the anti-LIGHT antibody comprises a heavy chain derived from the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, which may be encoded by the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 11.

アミノ酸１〜１９：シグナルペプチド
アミノ酸２０〜１４１：１２４Ｆ１９ｋ２可変領域（ＶＨ）
アミノ酸１４２〜最後：ｈＩｇＧ４ ＰＥ定常領域
核酸１〜５７：シグナルペプチドをコードする核酸
核酸５８〜４２３：１２４Ｆ１９ｋ２可変領域（ＶＨ）をコードする核酸
核酸４２４〜最後：ｈＩｇＧ４ ＰＥ定常領域をコードする核酸。 Amino Acids 1-19: Signal Peptide Amino Acids 20-141: 124F19k2 Variable Region (VH)
Amino Acids 142-Last: hIgG4 PE Constant Region Nucleic Acids 1-57: Nucleic Acids Encoding Signal Peptides Nucleic Acids 58-423: 124 F19k2 Nucleic Acids Encoding Variable Regions (VH) Nucleic Acids 424-Last: Nucleic Acids Encoding the hIgG4 PE Constant Region.

代替的な特定の実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号１３の核酸配列によりコードされていてもよい、配列番号１２のアミノ酸配列に由来する軽鎖を含む。
アミノ酸１〜２２：シグナルペプチド
アミノ酸２３〜１２９：１２４Ｆ１９ｋ２可変領域（ＶＬ）
アミノ酸１３０〜最後：ｈカッパ定常領域
核酸１〜６６：シグナルペプチドをコードする核酸
核酸６７〜３８７：１２４Ｆ１９ｋ２可変領域（ＶＬ）をコードする核酸
核酸３８８〜最後：ｈカッパ定常領域をコードする核酸。 In certain alternative embodiments, the anti-LIGHT antibody comprises a light chain derived from the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, which may be encoded by the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 13.
Amino Acids 1-22: Signal Peptide Amino Acids 23-129: 124F19k2 Variable Region (VL)
Amino Acids 130-Last: h Kappa Constant Region Nucleic Acids 1-66: Nucleic Acids Encoding Signal Peptides Nucleic Acids 67-387: 124 F19k2 Nucleic Acids Nucleic Acids Encoding Variable Regions (VL) Nucleic Acids 388-Last: Nucleic Acids Encoding the h-Kappa Constant Regions.

本発明の一実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は完全ヒト抗体である。完全ヒト抗体アイソタイプの例としては、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが挙げられる。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ＩｇＧ抗体である。４つの形態のＩｇＧが存在する。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、ＩｇＧ４抗体である。本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、完全ヒトＩｇＧ４抗体である。 In one embodiment of the invention, the anti-LIGHT antibody is a fully human antibody. Examples of fully human antibody isotypes include IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM. In some embodiments, the anti-LIGHT antibody is an IgG antibody. There are four forms of IgG. In some embodiments, the anti-LIGHT antibody is an IgG4 antibody. In some embodiments of the invention, the anti-LIGHT antibody is a fully human IgG4 antibody.

いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ定常領域をさらに含む。いくつかの実施形態においては、定常領域は、ヒトＩｇＧ４定常領域である。さらなる実施形態においては、定常領域は、改変されたヒトＩｇＧ４定常領域である。他の実施形態においては、定常領域は、ヒトＣκ定常領域である。 In some embodiments, the anti-LIGHT antibody further comprises a constant region, eg, a human IgG constant region. In some embodiments, the constant region is human IgG4 constant region. In a further embodiment, the constant region is a modified human IgG4 constant region. In other embodiments, the constant region is the human Cκ constant region.

本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗Ｌ
ＩＧＨＴ抗体（「リードＬＩＧＨＴ抗体」）である。本発明の代替的な実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号１、２および３のアミノ酸配列を含む３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域が配列番号４、５および６のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体である。配列番号７を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号８を含む軽鎖アミノ酸配列とを含む抗ＬＩＧＨＴ抗体などの、抗ＬＩＧＨＴ抗体の同定、単離、調製、および特性評価は、参照により本明細書に組み入れられるＰＣＴ公開ＷＯ２００８／０２７３３８に対応する、米国特許第８，０５８，４０２号に詳細に記載されている。 In some embodiments of the invention, the anti-LIGHT antibody is a fully human IgG4 anti-L containing a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8.
It is an IGHT antibody (“lead LIGHT antibody”). In an alternative embodiment of the invention, the anti-LIGHT antibody comprises a heavy chain variable region and a light chain variable region, the heavy chain variable region having three complementarities comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2 and 3. A fully human IgG4 anti-LIGHT antibody comprising determining regions (CDRs) and three CDRs in which the light chain variable region comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6. Identification, isolation, preparation, and characterization of anti-LIGHT antibodies, such as anti-LIGHT antibodies comprising a heavy chain amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 7 and a light chain amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 8, are herein by reference. It is described in detail in US Pat. No. 8,058,402, which corresponds to PCT Publication WO 2008/027338 incorporated in.

本発明の製剤のある実施形態は、抗体のような、抗ＬＩＧＨＴ結合剤の変異体も含む。具体的には、本発明の製剤は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体である抗ＬＩＧＨＴ抗体の変異体を含む。抗ＬＩＧＨＴ抗体の変異体は、その高い類似性に基づいて類似する物理化学的特性を有し、従って、本発明の範囲内にも含まれる。変異体は、抗ＬＩＧＨＴ抗体と少なくとも９５％、少なくとも９７％、例えば、少なくとも９８％または９９％相同であり、ＬＩＧＨＴポリペプチド、ＬＩＧＨＴポリペプチド断片、またはＬＩＧＨＴエピトープへの結合について競合することができるアミノ酸配列を有する抗体と定義される。いくつかの実施形態においては、変異体は、ＬＩＧＨＴ生物活性（例えば、ＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、および／またはＤｃＲ３）のようなＬＩＧＨＴリガンドを発現する細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、またはＲＡＮＴＥＳのＬＩＧＨＴにより媒介される産生または分泌）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害する。結合に関する標的との競合の決定を、当業者には公知の日常的な方法により行うことができる。いくつかの実施形態においては、変異体はヒト抗体であり、いくつかの実施形態においては、ＩｇＧ４分子である。いくつかの実施形態においては、変異体は、リード抗体とアミノ酸配列において少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である。用語「変異体」とは、抗ＬＩＧＨＴ抗体のアミノ酸配列と比較して１つまたは複数のアミノ酸により変化したアミノ酸配列を含む抗体を指す。変異体は、アミノ酸置換、改変、付加、および欠失などの保存的配列改変を有してもよい。 Certain embodiments of the formulations of the invention also include variants of anti-LIGHT binders, such as antibodies. Specifically, the preparation of the present invention is a variant of an anti-LIGHT antibody, which is a fully human IgG4 anti-LIGHT antibody containing a heavy chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8. including. Variants of anti-LIGHT antibodies have similar physicochemical properties based on their high similarity and are therefore also within the scope of the present invention. Amino acids that are at least 95%, at least 97%, eg, at least 98% or 99% homologous to an anti-LIGHT antibody and can compete for binding to a LIGHT polypeptide, LIGHT polypeptide fragment, or LIGHT epitope. Defined as an antibody having a sequence. In some embodiments, the variant is CCL20, IL-8, from cells expressing a LIGHT ligand such as LIGHT biological activity (eg, HVEM, LTβR, and / or DcR3). Or improve, neutralize, or otherwise inhibit the LIGHT-mediated production or secretion of RANTES. Determining competition with a target for binding can be made by routine methods known to those of skill in the art. In some embodiments, the variant is a human antibody and in some embodiments, an IgG4 molecule. In some embodiments, the variant is at least 95%, 96%, 97%, 98% or 99% identical in amino acid sequence to the lead antibody. The term "mutant" refers to an antibody that comprises an amino acid sequence that has been altered by one or more amino acids as compared to the amino acid sequence of an anti-LIGHT antibody. Variants may have conservative sequence modifications such as amino acid substitutions, modifications, additions, and deletions.

改変の例としては、限定されるものではないが、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解的切断、および細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結が挙げられる。アミノ酸改変を、抗体をコードする核酸中での部位特異的突然変異誘発、分子クローニング、オリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発、および無作為ＰＣＲ媒介性突然変異誘発のような、当業界で公知の標準的な技術により導入することができる。保存的アミノ酸置換としては、アミノ酸残基が類似する構造的または化学的特性を有するアミノ酸残基で置きかえられたものが挙げられる。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当業界で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ−分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン）が挙げられる。上記で用いられたもの以外のアミノ酸残基ファミリーの分類を用いることもできることが当業者には明らかであろう。さらに、変異体は、非保存的アミノ酸置換、例えば、あるアミノ酸の、異なる構造的または化学的特性を有するアミノ酸残基による置きかえを有してもよい。類似する小さい変異はまた、アミノ酸欠失もしくは挿入、またはその両方を含んでもよい。どのアミノ酸残基を、免疫学的活性を無効化することなく置換する、改変する、挿入する、または欠失させることができるかを
決定する際の指針を、当業界で周知のコンピュータプログラムを用いて見出すことができる。当業者には公知である、特にＧａｐまたはＢｅｓｔｆｉｔのようなコンピュータアルゴリズムを用いて、比較しようとするアミノ酸配列を最適に整列させ、類似するか、または同一のアミノ酸残基を定義することができる。変異体は、抗ＬＩＧＨＴ抗体と比較して、同じか、または異なる、より高いか、またはより低い結合親和性を有してもよいが、依然としてＬＩＧＨＴに特異的に結合することができ、抗ＬＩＧＨＴ抗体と同じであるか、より高いか、またはより低い生物活性を有してもよい。 Examples of modifications include, but are not limited to, glycosylation, acetylation, pegation, phosphorylation, amidation, derivatization with known protecting / blocking groups, proteolytic cleavage, and cellular ligands or others. Linkage to proteins can be mentioned. Standards known in the art for amino acid modifications, such as site-specific mutagenesis, molecular cloning, oligonucleotide-specific mutagenesis, and randomized PCR-mediated mutagenesis in nucleic acids encoding antibodies. It can be introduced by various technologies. Conservative amino acid substitutions include those in which amino acid residues are replaced with amino acid residues having similar structural or chemical properties. A family of amino acid residues with similar side chains is defined in the art. These families include amino acids with basic side chains (eg, lysine, arginine, histidine), amino acids with acidic side chains (eg, aspartic acid, glutamate), amino acids with uncharged polar chains (eg, asparagine). , Glutamine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, tryptophan), amino acids with non-polar side chains (eg, glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine), amino acids with beta-branched side chains (For example, threonine, valine, isoleucine), and amino acids with aromatic side chains (eg, tyrosine, phenylalanine, tryptophan). It will be apparent to those skilled in the art that classifications of amino acid residue families other than those used above can also be used. In addition, variants may have non-conservative amino acid substitutions, eg, replacement of certain amino acids with amino acid residues with different structural or chemical properties. Similar small mutations may also include amino acid deletions and / or insertions. Using computer programs well known in the industry, guidance in determining which amino acid residues can be replaced, modified, inserted, or deleted without deteriorating immunological activity. Can be found. Computer algorithms known to those of skill in the art, especially such as Gap or Bestfit, can be used to optimally align the amino acid sequences to be compared and define similar or identical amino acid residues. The variant may have the same, different, higher, or lower binding affinity as compared to the anti-LIGHT antibody, but can still specifically bind to LIGHT and is anti-LIGHT. It may have the same, higher, or lower biological activity as the antibody.

本発明の実施形態はまた、抗体のような、抗ＬＩＧＨＴ結合剤の抗原結合断片を含んでもよい。用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合断片」および同様の用語は、抗原と相互作用し、結合剤に、抗原に対するその特異性および親和性を付与するアミノ酸残基を含む抗体の部分（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を指す。抗原結合領域は、げっ歯類（例えば、ウサギ、ラットまたはハムスター）およびヒトのような任意の動物種に由来することができる。いくつかの実施形態においては、抗原結合領域は、ヒト起源のものである。抗原結合断片の非限定例としては：Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、ｄＡｂ断片、および抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。 Embodiments of the invention may also include antigen-binding fragments of anti-LIGHT binding agents, such as antibodies. The terms "antigen binding domain", "antigen binding region", "antigen binding fragment" and similar terms include amino acid residues that interact with the antigen and impart the binding agent to its specificity and affinity for the antigen. Refers to the portion of the antibody (eg, complementarity determining regions (CDRs)). The antigen binding region can be derived from any animal species such as rodents (eg, rabbits, rats or hamsters) and humans. In some embodiments, the antigen binding region is of human origin. Non-limiting examples of antigen-binding fragments include: Fab fragment, F (ab') 2 fragment, Fd fragment, Fv fragment, single-chain Fv (scFv) molecule, dAb fragment, and amino acid residue that mimics the hypervariable region of an antibody. The minimum recognition unit consisting of the base is mentioned.

本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤（またはその変異体またはその抗原結合断片）は、ｉｎ ｖｉｖｏでＬＩＧＨＴ生物活性（例えば、ＬＩＧＨＴ受容体、例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、および／またはＤｃＲ３を発現する細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、またはＲＡＮＴＥＳのＬＩＧＨＴにより媒介される産生または分泌）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害する。 In some embodiments of the invention, the anti-LIGHT binding agent (or variant thereof or antigen-binding fragment thereof) is in vivo LIGHT biological activity (eg, LIGHT receptor, eg, HVEM, LTβR, and / or Improves, neutralizes, or otherwise inhibits LIGHT-mediated production or secretion of CCL20, IL-8, or RANTES from cells expressing DcR3.

本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤（またはその変異体またはその抗原結合断片）は、ｉｎ ｖｉｖｏでＬＩＧＨＴ生物活性（例えば、ＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、および／またはＤｃＲ３）のようなＬＩＧＨＴリガンドを発現する細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８、またはＲＡＮＴＥＳのＬＩＧＨＴにより媒介される産生または分泌）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害するアンタゴニスト結合剤である。 In some embodiments of the invention, the anti-ligand inhibitor (or variant thereof or antigen-binding fragment thereof) is in vivo a LIGHT biological activity (eg, a LIGHT receptor (eg, HVEM, LTβR, and / or). An antagonist binding agent that improves, neutralizes, or otherwise inhibits LIGHT-mediated production or secretion of CCL20, IL-8, or RANTES from cells expressing a LIGHT ligand such as DcR3). ..

いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤（またはその変異体またはその抗原結合断片）は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２８０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、および約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。例えば、抗ＬＩＧＨＴ結合剤は、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約６５ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約８５ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約９５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０５ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１１５ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１３５ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１４５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５５ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１６５ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１８５ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約１９５ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２０５ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２１５ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２３５ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２４５ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５５ｍｇ／ｍＬ、約２６０ｍｇ／ｍＬ、約２６５ｍｇ／ｍＬ、約２７０ｍｇ／ｍＬ、約２７５ｍｇ／ｍＬ、または約２８０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在してもよい。 In some embodiments, the anti-LIGHT binding agent (or variant thereof or antigen-binding fragment thereof) is from about 5 mg / mL to about 280 mg / mL, eg, about 5 mg / mL to about 200 mg / mL, about 50 mg / mL. It is present in formulations in amounts of mL to about 250 mg / mL, about 100 mg / mL to about 250 mg / mL, about 50 mg / mL to about 200 mg / mL, and about 100 mg / mL to about 200 mg / mL. For example, anti-LIGHT binders are about 5 mg / mL, about 10 mg / mL, about 15 mg / mL, about 20 mg / mL, about 25 mg / mL, about 30 mg / mL, about 35 mg / mL, about 40 mg / mL, about 45 mg. / ML, about 50 mg / mL, about 55 mg / mL, about 60 mg / mL, about 65 mg / mL, about 70 mg / mL, about 75 mg / mL, about 80 mg / mL, about 85 mg / mL, about 90 mg / mL, about 95 mg / ML, about 100 mg / mL, about 105 mg / mL, about 110 mg / mL, about 115 mg / mL, about 120 mg / mL, about 125 mg / mL, about 130 mg / mL, about 135 mg / mL, about 140 mg / mL, about 145 mg / ML, about 150 mg / mL, about 155 mg / mL, about 160 mg / mL, about 165 mg / mL, about 170 mg / mL, about 175 mg / mL, about 180 mg / mL, about 185 mg / mL, about 190 mg / mL, about 195 mg / ML, about 200 mg / mL, about 205 mg / mL, about 210 mg / mL, about 215 mg / mL, about 220 mg / mL, about 225 mg / mL, about 230 mg / mL, about 235 mg / mL, about 240 mg / mL, about 245 mg It may be present in the formulation in an amount of / mL, about 250 mg / mL, about 255 mg / mL, about 260 mg / mL, about 265 mg / mL, about 270 mg / mL, about 275 mg / mL, or about 280 mg / mL.

代替的な実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤は、約５〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５１〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約７６〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０１〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１２６〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５１〜約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１７６〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約２０１ｍｇ／ｍＬ〜約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２２６ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５１〜約２８０ｍｇ／ｍＬ、約５〜約１０ｍｇ／ｍＬ、約４０〜約６０ｍｇ／ｍＬ、約７５〜約８５ｍｇ／ｍＬ、または約１４０〜約１６０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在してもよい。 In an alternative embodiment, the anti-LIGHT binder is about 5 to about 25 mg / mL, about 26 to about 50 mg / mL, about 51 to about 75 mg / mL, about 76 to about 100 mg / mL, about 101 to about. 125 mg / mL, about 126-about 150 mg / mL, about 151-about 175 mg / mL, about 176-about 200 mg / mL, about 201 mg / mL-about 225 mg / mL, about 226 mg / mL-about 250 mg / mL, about 251 It may be present in the formulation in an amount of ~ about 280 mg / mL, about 5 ~ about 10 mg / mL, about 40 ~ about 60 mg / mL, about 75 ~ about 85 mg / mL, or about 140 ~ about 160 mg / mL.

ある例示的実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴ結合剤は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１７０ｍｇ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１６０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約１５０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。あるいは、抗ＬＩＧＨＴ結合剤は、約５０ｍｇ／ｍＬの量で存在する。別の例示的実施形態においては、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体は、約１５０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。 In certain exemplary embodiments, the anti-LIGHT binder is present in the formulation in an amount of about 50 mg / mL to about 170 mg, about 100 mg / mL to about 160 mg / mL, eg, about 150 mg / mL. Alternatively, the anti-LIGHT binder is present in an amount of about 50 mg / mL. In another exemplary embodiment, a fully human IgG4 anti-LIGHT antibody comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 is formulated in an amount of about 150 mg / mL. Exists in.

ｉｉ．抗ＣＸＣＲ５結合剤、ならびにその変異体および断片
ある実施形態においては、本発明の製剤は、抗ＣＸＣＲ５結合剤を含む。結合剤は、ＣＸＣＲ５に結合するか、もしくは特異的に結合する、抗体、ｓｉＲＮＡ、核酸、アプタマー、タンパク質、もしくは低分子有機化合物、またはその変異体もしくは断片のような任意の分子であってもよい。いくつかの実施形態においては、結合剤は、抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその変異体、またはその抗原結合断片である。抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＣＸＣＬ１３（ＢＬＣとしても知られる）タンパク質、ポリペプチド断片、またはエピトープに特異的に結合する。ＣＸＣＲ５分子は、任意の種に由来するものであってもよい。いくつかの実施形態においては、ＣＸＣＲ５分子は、本明細書で「ｈＣＸＣＲ５」として知られる、ヒトに由来するものである。ｈＣＸＣＲ５は、以下のアミノ酸配列：
MNYPLTLEMD LENLEDLFWE LDRLDNYNDT SLVENHLCPA TEGPLMASFK AVFVPVAYSL
IFLLGVIGNV LVLVILERHR QTRSSTETFL FHLAVADLLL VFILPFAVAE GSVGWVLGTF
LCKTVIALHK VNFYCSSLLL ACIAVDRYLA IVHAVHAYRH RRLLSIHITC GTIWLVGFLL
ALPEILFAKV SQGHHNNSLP RCTFSQENQA ETHAWFTSRF LYHVAGFLLP MLVMGWCYVG
VVHRLRQAQR RPQRQKAVRV AILVTSIFFL CWSPYHIVIF LDTLARLKAV DNTCKLNGSL
PVAITMCEFL GLAHCCLNPM LYTFAGVKFR SDLSRLLTKL GCTGPASLCQ LFPSWRRSSL
SESENATSLT TF (配列番号14)
を有し、配列番号１４として同定される。 ii. Anti-CXCR5 Binders, and Variants and Fragments thereof In certain embodiments, the formulations of the present invention comprise an anti-CXCR5 binder. The binding agent may be any molecule, such as an antibody, siRNA, nucleic acid, aptamer, protein, or small organic compound, or variant or fragment thereof, that binds or specifically binds to CXCR5. .. In some embodiments, the binder is an anti-CXCR5 antibody, or variant thereof, or an antigen-binding fragment thereof. The anti-CXCR5 antibody specifically binds to the CXCL13 (also known as BLC) protein, polypeptide fragment, or epitope. The CXCR5 molecule may be of any species. In some embodiments, the CXCR5 molecule is derived from humans, known herein as "hCXCR5". hCXCR5 has the following amino acid sequence:
MNYPLTLEMD LENLEDLFWE LDRLDNYNDT SLVENHLCPA TEGPLMASFK AVFVPVAYSL
IFLLGVIGNV LVLVILERHR QTRSSTETFL FHLAVADLLL VFILPFAVAE GSVGWVLGTF
LCKTVIALHK VNFYCSSLLL ACIAVDRYLA IVHAVHAYRH RRLLSIHITC GTIWLVGFLL
ALPEILFAKV SQGHHNNSLP RCTFSQENQA ETHAWFTSRF LYHVAGFLLP MLVMGWCYVG
VVHRLRQAQR RPQRQKAVRV AILVTSIFFL CWSPYHIVIF LDTLARLKAV DNTCKLNGSL
PVAITMCEFL GLAHCCLNPM LYTFAGVKFR SDLSRLLTKL GCTGPASLCQ LFPSWRRSSL
SESENATSLT TF (SEQ ID NO: 14)
Is identified as SEQ ID NO: 14.

ある例示的実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、またはその変異体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＣＸＣＲ５のそのリガンドとの結合を防止し、ＣＸＣＲ５生物活性（例えば、ＣＸＣＲ５のＣＸＣＬ１３への結合）を阻害する。 In certain exemplary embodiments, the anti-CXCR5 antibody is a humanized antibody, a fully human antibody, or a variant thereof or an antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the anti-CXCR5 antibody prevents binding of CXCR5 to its ligand and inhibits CXCR5 biological activity (eg, binding of CXCR5 to CXCL13).

ある特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＨＣＤＲ１−ＧＦＳＬＩＤＹＧＶＮ（配列番号１５）；
ＨＣＤＲ２−ＶＩＷＧＤＧＴＴＹ（配列番号１６）；または
ＨＣＤＲ３−ＩＶＹ（配列番号１７）
のいずれか１つまたは複数のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。 In certain embodiments, the anti-CXCR5 antibody has the following complementarity determining regions (CDRs):
HCDR1-GFSLIDYGVN (SEQ ID NO: 15);
HCDR2-VIWGDGTTTY (SEQ ID NO: 16); or HCDR3-IVY (SEQ ID NO: 17)
Includes a heavy chain variable region (VH) comprising any one or more of the amino acid sequences of.

他の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ＬＣＤＲ１−ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＳＧＫＴＹＬＹ（配列番号１８）；
ＬＣＤＲ２−ＲＬＳＳＬＡ（配列番号１９）；または
ＬＣＤＲ３−ＭＱＨＬＥＹＰＹＴ（配列番号２０）
のいずれか１つまたは複数のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。 In other specific embodiments, the anti-CXCR5 antibody has the following complementarity determining regions (CDRs):
LCDR1-RSSKSLLHSSGKTYLY (SEQ ID NO: 18);
LCDR2-RLSSLA (SEQ ID NO: 19); or LCDR3-MQHLEYPYT (SEQ ID NO: 20)
Contains a light chain variable region (VL) comprising any one or more of the amino acid sequences of.

１つの特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号１５、１６および１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。 In one particular embodiment, the anti-CXCR5 antibody comprises a heavy chain variable region (VH) comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 15, 16 and 17.

別の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号１８、１９および２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。 In another particular embodiment, the anti-CXCR5 antibody comprises a light chain variable region (VL) comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 18, 19 and 20.

より特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号１５、１６および１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；ならびに配列番号１８、１９および２０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。 In a more specific embodiment, the anti-CXCR5 antibody comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 15, 16 and 17; and a light chain variable region comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 18, 19 and 20.

特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２１：
QVQLKESGPG LVAPSESLSI TCTVSGFSLI DYGVNWIRQP PGKGLEWLGV IWGDGTTYYN
PSLKSRLSIS KDNSKSQVFL KVTSLTTDDT AMYYCARIVY WGQGTLVTVS A (配列番号21)
のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。 In certain embodiments, the anti-CXCR5 antibody is described in SEQ ID NO: 21:
QVQLKESGPG LVAPSESLSI TCTVSGFSLI DYGVNWIRQP PGKGLEWLGV IWGDGTTYYN
PSLKSRLSIS KDNSKSQVFL KVTSLTTDDT AMYYCARIVY WGQGTLVTVS A (SEQ ID NO: 21)
Contains a heavy chain variable region containing the amino acid sequence of.

別の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２２：
DIVMTQAAPS VAVTPGASVS ISCRSSKSLL HSSGKTYLYW FLQRPGQSPQ LLIYRLSSLA SGVPDRFSGS
GSGTAFTLRI SRVEAEDVGV YYCMQHLEYP YTFGGGTKLE IK (配列番号22)
のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。 In another particular embodiment, the anti-CXCR5 antibody is described in SEQ ID NO: 22:
DIVMTQAAPS VAVTPGASVS ISCRSSKSLL HSSGKTYLYW FLQRPGQSPQ LLIYRLSSLA SGVPDRFSGS
GSGTAFTLRI SRVEAEDVGV YYCMQHLEYP YTFGGGTKLE IK (SEQ ID NO: 22)
Contains a light chain variable region containing the amino acid sequence of.

より特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。 In a more specific embodiment, the anti-CXCR5 antibody comprises a heavy chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21; and a light chain variable region comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 22.

いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ定常領域をさらに含む。いくつかの実施形態においては、定常領域は、ヒトＩｇＧ４定常領域である。さらなる実施形態においては、定常領域は、改変されたヒトＩｇＧ４定常領域である。いくつかの実施形態においては、ヒトＩｇＧ４定常領域は、以下の改変：Ｓ２４１Ｐ（配列番号２３中、太字で以下に示される）、Ｌ２４８Ｅ（配列番号２３中、太字で以下に示される）、および異種性を回避するための末端リシンの欠如を有する。いくつかの実施形態においては、ＩｇＧ４定常領域は、配列番号２３：
In some embodiments, the anti-CXCR5 antibody further comprises a constant region, eg, a human IgG constant region. In some embodiments, the constant region is human IgG4 constant region. In a further embodiment, the constant region is a modified human IgG4 constant region. In some embodiments, the human IgG4 constant region has the following modifications: S241P (in SEQ ID NO: 23, shown below in bold), L248E (in SEQ ID NO: 23, shown below in bold), and heterologous. Has a lack of terminal lysine to avoid sex. In some embodiments, the IgG4 constant region is SEQ ID NO: 23:

他の実施形態においては、定常領域は、ヒトＣκ定常領域である。いくつかの実施形態においては、Ｃκ定常領域は、配列番号２４：
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS
TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC (配列番号24)
のアミノ酸配列を含む。 In other embodiments, the constant region is the human Cκ constant region. In some embodiments, the Cκ constant region is designated as SEQ ID NO: 24:
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS
TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC (SEQ ID NO: 24)
Contains the amino acid sequence of.

特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２５：
のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
１〜１１１位：重鎖の可変領域（ＶＨ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による、相補性決定領域）に下線を付ける。
１１２〜４３２位：ヒトＩｇＧ４の定常領域（以下の改変：Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、および異種性を回避するための末端リシンの欠如を含む、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＧＨＧ４＿ＨＵＭＡＮ）。 In certain embodiments, the anti-CXCR5 antibody is described in SEQ ID NO: 25:
Contains a heavy chain containing the amino acid sequence of.
Positions 1-111: Variable region of heavy chain (VH). Underline the CDRs (complementarity determining regions as defined by Kabat).
Positions 112-432: constant region of human IgG4 (SwissProt IGHG4_HUMAN, including modifications: S241P, L248E, and lack of terminal lysine to avoid heterogeneity).

他の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２６：
DIVMTQAAPS VAVTPGASVS ISCRSSKSLL HSSGKTYLYW FLQRPGQSPQ LLIYRLSSLA SGVPDRFSGS
GSGTAFTLRI SRVEAEDVGV YYCMQHLEYP YTFGGGTKLE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL
LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV
TKSFNRGEC (配列番号26)
のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
１〜１１２位：軽鎖の可変領域（ＶＬ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による、相補性決定領域）に下線を付ける。
１１３〜１８２位：ヒトＣκの定常領域。 In other specific embodiments, the anti-CXCR5 antibody is described in SEQ ID NO: 26:
DIVMTQAAPS VAVTPGASVS ISC RSSKSLL HSSGKTYLY W FLQRPGQSPQ LLIY RLSSLA SGVPDRFSGS
GSGTAFTLRI SRVEAEDVGV YYC MQHLEYP YT FGGGTKLE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL
LNNFYPREAK VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE VTHQGLSSPV
TKSFNRGEC (SEQ ID NO: 26)
Includes a light chain containing the amino acid sequence of.
Positions 1-112: Variable region of the light chain (VL). Underline the CDRs (complementarity determining regions as defined by Kabat).
Positions 113-182: constant region of human Cκ.

さらなる実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。 In a further embodiment, the anti-CXCR5 antibody comprises a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26.

いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、リーダー配列をさらに含む。リーダー配列は、いくつかの実施形態においては、２５〜２５アミノ酸、典型的には、１９アミノ酸のような、１〜３０アミノ酸の長さのアミノ酸配列を含む。重鎖、軽鎖、または重鎖と軽鎖の両方が、リーダー配列を含んでもよい。いくつかの実施形態においては、リーダー配列は、配列番号１６：ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬ ＶＡＴＡＴＧＶＨＳ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含む。 In some embodiments, the anti-CXCR5 antibody further comprises a leader sequence. The leader sequence comprises, in some embodiments, an amino acid sequence having a length of 1 to 30 amino acids, such as 25 to 25 amino acids, typically 19 amino acids. The heavy chain, the light chain, or both the heavy chain and the light chain may contain a leader sequence. In some embodiments, the leader sequence comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 16: MGWSCIILFL VATATGVHS (SEQ ID NO: 27).

特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２８：
のアミノ酸配列に由来する重鎖を含む。
１〜１９位：リーダー配列
２０〜１３０位：重鎖の可変領域（ＶＨ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による、相補性決定領域）に下線を付ける。
１３１〜４５６位：ヒトＩｇＧ４の定常領域（以下の改変：Ｓ２４１Ｐ、Ｌ２４８Ｅ、および異種性を回避するための末端リシンの欠如を含む、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ＩＧＨＧ４＿ＨＵＭＡＮ）。 In certain embodiments, the anti-CXCR5 antibody is described in SEQ ID NO: 28:
Contains heavy chains derived from the amino acid sequence of.
Positions 1 to 19: Leader sequence 20 to 130 positions: Variable region of heavy chain (VH). Underline the CDRs (complementarity determining regions as defined by Kabat).
Positions 131-456: Constant region of human IgG4 (SwissProt IGHG4_HUMAN, including modifications: S241P, L248E, and lack of terminal lysine to avoid heterogeneity).

他の特定の実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２９：
MGWSCIILFL VATATGVHSD IVMTQAAPSV AVTPGASVSI SCRSSKSLLH SSGKTYLYWF LQRPGQSPQL
LIYRLSSLAS GVPDRFSGSG SGTAFTLRIS RVEAEDVGVY YCMQHLEYPY TFGGGTKLEI KRTVAAPSVF
IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY
EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC (配列番号29)
のアミノ酸配列に由来する軽鎖を含む。
１〜１９位：リーダー配列
２０〜１３１位：軽鎖の可変領域（ＶＬ）。ＣＤＲ（Ｋａｂａｔの定義による、相補性決定領域）に下線を付ける。
１３２〜２３８位：ヒトＣκの定常領域。 In other specific embodiments, the anti-CXCR5 antibody is described in SEQ ID NO: 29:
MGWSCIILFL VATATGVHSD IVMTQAAPSV AVTPGASVSI SC RSSKSLLH SSGKTYLY WF LQRPGQSPQL
LIY RLSSLA S GVPDRFSGSG SGTAFTLRIS RVEAEDVGVY YC MQHLEYPY T FGGGTKLEI KRTVAAPSVF
IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY
EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC (SEQ ID NO: 29)
Contains a light chain derived from the amino acid sequence of.
Positions 1-19: Leader sequence 20-131 positions: Variable region of the light chain (VL). Underline the CDRs (complementarity determining regions as defined by Kabat).
Positions 132-238: constant region of human Cκ.

さらなる実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。 In a further embodiment, the anti-CXCR5 antibody comprises a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 28 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29.

本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト化または完全ヒト抗体である。ヒト化および完全ヒト抗体アイソタイプの例としては、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが挙げられる。いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＩｇＧ抗体である。４つの形態のＩｇＧが存在する。いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ＩｇＧ４抗体である。本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト化ＩｇＧ４抗体である。 In some embodiments of the invention, the anti-CXCR5 antibody is a humanized or fully human antibody. Examples of humanized and fully human antibody isotypes include IgA, IgD, IgE, IgG, and IgM. In some embodiments, the anti-CXCR5 antibody is an IgG antibody. There are four forms of IgG. In some embodiments, the anti-CXCR5 antibody is an IgG4 antibody. In some embodiments of the invention, the anti-CXCR5 antibody is a humanized IgG4 antibody.

本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体である（「リードＣＸＣＲ５抗体」）。本発明の代替的な実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が配列番号１５、１６および１７のアミノ酸配列を含む３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、軽鎖可変領域が配列番号１８、１９および２０のアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを含む、ヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体である。配列番号２５を含む重鎖アミノ酸配列と、配列番号２６を含む軽鎖アミノ酸配列とを含む抗ＣＸＣＲ５抗体などの、抗ＣＸＣＲ５抗体の同定、単離、調製、および特性評価は、参照により本明細書に組み入れられるＰＣＴ公開ＷＯ２００９／０３２６６１に詳細に記載されている。 In some embodiments of the invention, the anti-CXCR5 antibody is a humanized IgG4 anti-CXCR5 antibody comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26 ( "Lead CXCR5 antibody"). In an alternative embodiment of the invention, the anti-CXCR5 antibodies comprise a heavy chain variable region and a light chain variable region, the heavy chain variable regions having three complementarities comprising the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 15, 16 and 17. A humanized IgG4 anti-CXCR5 antibody comprising determining regions (CDRs) and three CDRs in which the light chain variable region comprises the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 18, 19 and 20. Identification, isolation, preparation, and characterization of anti-CXCR5 antibodies, such as anti-CXCR5 antibodies comprising a heavy chain amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 25 and a light chain amino acid sequence comprising SEQ ID NO: 26, are described herein by reference. It is described in detail in PCT Publication WO 2009/032661 incorporated in.

本発明の製剤のある実施形態は、抗体のような抗ＣＸＣＲ５結合剤の変異体も含む。特に、本発明の製剤は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体である、抗ＣＸＣＲ５抗体の変異体を含んでもよい。抗ＣＸＣＲ５抗体の変異体は、その高い類似性に基づいて、類似する物理化学的特性を有してもよく、従って、これも本発明の範囲内に含まれる。変異体は、抗ＣＸＣＲ５抗体と少なくとも９５％、少なくとも９７％、例えば、少なくとも９８％または９９％相同であり、ＣＸＣＲ５ポリペプチド、ＣＸＣＲ５ポリペプチド断片、またはＣＸＣＲ５エピトープへの結合について競合することができるアミノ酸配列を有する抗体と定義される。いくつかの実施形態においては、変異体は、ＣＸＣＲ５生物活性（例えば、ＣＸＣＬ１３のＣＸＣＲ５への結合）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害する。標的への結合に関する競合の決定を、当業者には公知の日常的な方法により行うことができる。いくつかの実施形態においては、変異体は、ヒト抗体であり、いくつか
の実施形態においては、ＩｇＧ４分子である。いくつかの実施形態においては、変異体は、リード抗体と、アミノ酸配列において少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。用語「変異体」は、抗ＣＸＣＲ５抗体のアミノ酸配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸により変化したアミノ酸配列を含む抗体を指す。変異体は、アミノ酸置換、改変、付加、および欠失などの、保存的配列改変を有してもよい。 Certain embodiments of the formulations of the invention also include variants of anti-CXCR5 binders such as antibodies. In particular, the formulation of the invention comprises a variant of the anti-CXCR5 antibody, which is a humanized IgG4 anti-CXCR5 antibody comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26. It may be. Variants of the anti-CXCR5 antibody may have similar physicochemical properties based on their high similarity, and are therefore also within the scope of the invention. Amino acids that are at least 95%, at least 97%, eg, at least 98% or 99% homologous to the anti-CXCR5 antibody and can compete for binding to a CXCR5 polypeptide, CXCR5 polypeptide fragment, or CXCR5 epitope. Defined as an antibody having a sequence. In some embodiments, the mutant improves, neutralizes, or otherwise inhibits CXCR5 biological activity (eg, binding of CXCL13 to CXCR5). Competitive decisions regarding binding to the target can be made by routine methods known to those of skill in the art. In some embodiments, the variant is a human antibody and in some embodiments, an IgG4 molecule. In some embodiments, the variant is at least 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% identical in amino acid sequence to the lead antibody. The term "mutant" refers to an antibody that comprises an amino acid sequence altered by one or more amino acids as compared to the amino acid sequence of an anti-CXCR5 antibody. Variants may have conservative sequence modifications such as amino acid substitutions, modifications, additions, and deletions.

改変の例としては、限定されるものではないが、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護基／遮断基による誘導体化、タンパク質分解的切断、および細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結が挙げられる。アミノ酸改変を、抗体をコードする核酸における部位特異的突然変異誘発、分子クローニング、オリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発、および無作為ＰＣＲ媒介性突然変異誘発などの、当業界で公知の標準的な技術により導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似する構造的または化学的特性を有するアミノ酸残基で置きかえられたものを含む。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当業界で定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ−分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン）が挙げられる。上記で用いられたもの以外のアミノ酸残基ファミリーの分類を用いることもできることが当業者には明らかであろう。さらに、変異体は、非保存的アミノ酸置換、例えば、あるアミノ酸と、異なる構造的または化学的特性を有するアミノ酸残基との置きかえを有してもよい。類似する小さい変異はまた、アミノ酸欠失もしくは挿入、またはその両方を含んでもよい。どのアミノ酸残基を、免疫学的活性を無効化することなく置換する、改変する、挿入する、または欠失させることができるかを決定する際の指針を、当業界で周知のコンピュータプログラムを用いて見出すことができる。当業者には公知である、特にＧａｐまたはＢｅｓｔｆｉｔのようなコンピュータアルゴリズムを用いて、比較しようとするアミノ酸配列を最適に整列させ、類似するか、または同一のアミノ酸残基を定義することができる。変異体は、抗ＣＸＣＲ５抗体と比較して、同じか、または異なる、より高いか、またはより低い結合親和性を有してもよいが、依然としてＣＸＣＲ５に特異的に結合することができ、抗ＣＸＣＲ５抗体と同じであるか、より高いか、またはより低い生物活性を有してもよい。 Examples of modifications include, but are not limited to, glycosylation, acetylation, pegation, phosphorylation, amidation, derivatization with known protecting / blocking groups, proteolytic cleavage, and cellular ligands or others. Linkage to proteins can be mentioned. Amino acid modification is performed by standard techniques known in the art such as site-specific mutagenesis, molecular cloning, oligonucleotide-specific mutagenesis, and randomized PCR-mediated mutagenesis in nucleic acids encoding antibodies. Can be introduced. Conservative amino acid substitutions include those in which amino acid residues are replaced with amino acid residues having similar structural or chemical properties. A family of amino acid residues with similar side chains is defined in the art. These families include amino acids with basic side chains (eg, lysine, arginine, histidine), amino acids with acidic side chains (eg, aspartic acid, glutamate), amino acids with uncharged polar chains (eg, asparagine). , Glutamine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, tryptophan), amino acids with non-polar side chains (eg, glycine, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, methionine), amino acids with beta-branched side chains (For example, threonine, valine, isoleucine), and amino acids with aromatic side chains (eg, tyrosine, phenylalanine, tryptophan). It will be apparent to those skilled in the art that classifications of amino acid residue families other than those used above can also be used. In addition, variants may have non-conservative amino acid substitutions, such as the replacement of certain amino acids with amino acid residues that have different structural or chemical properties. Similar small mutations may also include amino acid deletions and / or insertions. Using computer programs well known in the industry, guidance in determining which amino acid residues can be replaced, modified, inserted, or deleted without deteriorating immunological activity. Can be found. Computer algorithms known to those of skill in the art, especially such as Gap or Bestfit, can be used to optimally align the amino acid sequences to be compared and define similar or identical amino acid residues. The variant may have the same or different, higher or lower binding affinity as compared to the anti-CXCR5 antibody, but can still specifically bind to CXCR5 and anti-CXCR5. It may have the same, higher, or lower biological activity as the antibody.

本発明の実施形態は、抗体のような、抗ＣＸＣＲ５結合剤の抗原結合断片も含む。用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合断片」および同様の用語は、抗原と相互作用し、結合剤に、抗原に対するその特異性および親和性を付与するアミノ酸残基を含む抗体の部分を指す（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））。抗原結合領域を、げっ歯類（例えば、ウサギ、ラットまたはハムスター）およびヒトのような、任意の動物種に由来することができる。いくつかの実施形態においては、抗原結合領域は、ヒト起源のものである。抗原結合断片の非限定例としては：Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、ｄＡｂ断片、および抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。 Embodiments of the invention also include antigen-binding fragments of anti-CXCR5 binders, such as antibodies. The terms "antigen binding domain", "antigen binding region", "antigen binding fragment" and similar terms include amino acid residues that interact with the antigen and impart the binding agent to its specificity and affinity for the antigen. Refers to the portion of the antibody (eg, complementarity determining regions (CDRs)). The antigen binding region can be derived from any animal species, such as rodents (eg, rabbits, rats or hamsters) and humans. In some embodiments, the antigen binding region is of human origin. Non-limiting examples of antigen-binding fragments include: Fab fragment, F (ab') 2 fragment, Fd fragment, Fv fragment, single-chain Fv (scFv) molecule, dAb fragment, and amino acid residue that mimics the hypervariable region of an antibody. The minimum recognition unit consisting of the base is mentioned.

本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤（またはその変異体もしくはその抗原結合断片）は、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＸＣＲ５生物活性（例えば、ＣＸＣＬ１３のＣＸＣＲ５への結合）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害する。 In some embodiments of the invention, an anti-CXCR5 binder (or variant thereof or antigen-binding fragment thereof) neutralizes, which improves CXCR5 biological activity (eg, binding of CXCL13 to CXCR5) in vivo. Or otherwise inhibit.

本発明のいくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤（またはその変異体もし
くはその抗原結合断片）は、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＸＣＲ５生物活性（例えば、ＣＸＣＬ１３のＣＸＣＲ５への結合）を改善する、中和する、またはさもなければ阻害するアンタゴニスト結合剤である。 In some embodiments of the invention, an anti-CXCR5 binder (or variant thereof or antigen-binding fragment thereof) neutralizes, which improves CXCR5 biological activity (eg, binding of CXCL13 to CXCR5) in vivo. An antagonist binder that does or otherwise inhibits.

いくつかの実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤（またはその変異体もしくはその抗原結合断片）は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２８０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、および約５ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。例えば、抗ＣＸＣＲ５結合剤は、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約５５ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約６５ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約８５ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約９５ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０５ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１１５ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１３５ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１４５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５５ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１６５ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１８５ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約１９５ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２０５ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２１５ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２３５ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２４５ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５５ｍｇ／ｍＬ、約２６０ｍｇ／ｍＬ、約２６５ｍｇ／ｍＬ、約２７０ｍｇ／ｍＬ、約２７５ｍｇ／ｍＬ、または約２８０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在してもよい。 In some embodiments, the anti-CXCR5 binding agent (or variant thereof or antigen-binding fragment thereof) is from about 5 mg / mL to about 280 mg / mL, eg, about 5 mg / mL to about 200 mg / mL, about 5 mg / mL. It is present in formulations in amounts of mL to about 125 mg / mL, about 5 mg / mL to about 75 mg / mL, about 5 mg / mL to about 50 mg / mL, and about 5 mg / mL to about 25 mg / mL. For example, anti-CXCR5 binders are about 5 mg / mL, about 10 mg / mL, about 15 mg / mL, about 20 mg / mL, about 25 mg / mL, about 30 mg / mL, about 35 mg / mL, about 40 mg / mL, about 45 mg. / ML, about 50 mg / mL, about 55 mg / mL, about 60 mg / mL, about 65 mg / mL, about 70 mg / mL, about 75 mg / mL, about 80 mg / mL, about 85 mg / mL, about 90 mg / mL, about 95 mg / ML, about 100 mg / mL, about 105 mg / mL, about 110 mg / mL, about 115 mg / mL, about 120 mg / mL, about 125 mg / mL, about 130 mg / mL, about 135 mg / mL, about 140 mg / mL, about 145 mg / ML, about 150 mg / mL, about 155 mg / mL, about 160 mg / mL, about 165 mg / mL, about 170 mg / mL, about 175 mg / mL, about 180 mg / mL, about 185 mg / mL, about 190 mg / mL, about 195 mg / ML, about 200 mg / mL, about 205 mg / mL, about 210 mg / mL, about 215 mg / mL, about 220 mg / mL, about 225 mg / mL, about 230 mg / mL, about 235 mg / mL, about 240 mg / mL, about 245 mg It may be present in the formulation in an amount of / mL, about 250 mg / mL, about 255 mg / mL, about 260 mg / mL, about 265 mg / mL, about 270 mg / mL, about 275 mg / mL, or about 280 mg / mL.

代替的な実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤は、約５〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約２６〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約５１〜約７５ｍｇ／ｍＬ、約７６〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０１〜約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１２６〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５１〜約１７５ｍｇ／ｍＬ、約１７６〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約２０１ｍｇ／ｍＬ〜約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２２６ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２５１〜約２８０ｍｇ／ｍＬ、約５〜約２５ｍｇ／ｍＬ、約４０〜約６０ｍｇ／ｍＬ、約７５〜約８５ｍｇ／ｍＬ、または約９０〜約１１０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在してもよい。 In an alternative embodiment, the anti-CXCR5 binder is about 5 to about 25 mg / mL, about 26 to about 50 mg / mL, about 51 to about 75 mg / mL, about 76 to about 100 mg / mL, about 101 to about. 125 mg / mL, about 126-about 150 mg / mL, about 151-about 175 mg / mL, about 176-about 200 mg / mL, about 201 mg / mL-about 225 mg / mL, about 226 mg / mL-about 250 mg / mL, about 251 It may be present in the formulation in an amount of ~ about 280 mg / mL, about 5 ~ about 25 mg / mL, about 40 ~ about 60 mg / mL, about 75 ~ about 85 mg / mL, or about 90 ~ about 110 mg / mL.

ある例示的実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤は、約２０ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。あるいは、抗ＣＸＣＲ５結合剤は、約１００ｍｇ／ｍＬの量で存在する。別の例示的実施形態においては、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体は、約２０ｍｇ／ｍＬまたは１００ｍｇ／ｍＬの量で製剤中に存在する。 In certain exemplary embodiments, the anti-CXCR5 binder is present in the formulation in an amount of about 20 mg / mL. Alternatively, the anti-CXCR5 binder is present in an amount of about 100 mg / mL. In another exemplary embodiment, the humanized IgG4 anti-CXCR5 antibody comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26 is approximately 20 mg / mL or 100 mg / mL. Is present in the formulation in an amount of.

ｉｉｉ．緩衝剤
本発明の製剤は、緩衝剤としてクエン酸バッファーを含む。緩衝剤は、生理的に好適なｐＨを維持する。さらに、緩衝剤は、製剤の等張性および化学的安定性を増強する。いくつかの実施形態においては、クエン酸バッファーは、約０．５ｍＭ〜約５０ｍＭ、例えば、約５ｍＭ〜約１５ｍＭの濃度で製剤中に存在する。例えば、クエン酸バッファーは、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、約１５ｍＭ、約１６ｍＭ、約１７ｍＭ、約１８ｍＭ、約１９ｍＭ、約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭ、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３１ｍＭ、約３２ｍＭ、約３３ｍＭ、約３４ｍＭ、約３５ｍＭ、約３６ｍＭ、約３７ｍＭ、約３８ｍＭ、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４１ｍＭ、約４２ｍＭ、約４３ｍＭ、約４４ｍＭ、約４５ｍＭ、約４６ｍＭ、約４７ｍＭ、約４８ｍＭ、約４９ｍＭ、および約５０ｍＭの濃度で製剤中に
存在してもよい。いくつかの実施形態においては、クエン酸バッファーは、約９ｍＭ〜約１１ｍＭのような、約７ｍＭ〜約１３ｍＭの濃度で製剤中に存在する。いくつかの実施形態においては、クエン酸バッファーは、約１０ｍＭの濃度で存在する。 iii. Buffers The formulations of the present invention include a citrate buffer as a buffer. The buffer maintains a physiologically suitable pH. In addition, buffers enhance the isotonicity and chemical stability of the formulation. In some embodiments, the citrate buffer is present in the formulation at a concentration of about 0.5 mM to about 50 mM, eg, about 5 mM to about 15 mM. For example, citric acid buffer is about 5 mM, about 6 mM, about 7 mM, about 8 mM, about 9 mM, about 10 mM, about 11 mM, about 12 mM, about 13 mM, about 14 mM, about 15 mM, about 16 mM, about 17 mM, about 18 mM, about. 19 mM, about 20 mM, about 21 mM, about 22 mM, about 23 mM, about 24 mM, about 25 mM, about 26 mM, about 27 mM, about 28 mM, about 29 mM, about 30 mM, about 31 mM, about 32 mM, about 33 mM, about 34 mM, about 35 mM, In formulation at concentrations of about 36 mM, about 37 mM, about 38 mM, about 39 mM, about 40 mM, about 41 mM, about 42 mM, about 43 mM, about 44 mM, about 45 mM, about 46 mM, about 47 mM, about 48 mM, about 49 mM, and about 50 mM. May be present in. In some embodiments, the citrate buffer is present in the formulation at a concentration of about 7 mM to about 13 mM, such as about 9 mM to about 11 mM. In some embodiments, the citrate buffer is present at a concentration of about 10 mM.

ある実施形態においては、本発明の製剤は、ｐＨ６以下のｐＨを有する。いくつかの実施形態においては、製剤のｐＨは、約５．０〜約６．０の範囲である。例えば、製剤のｐＨは、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、および約６．０であってもよい。いくつかの実施形態においては、製剤のｐＨは、約５．５〜約６．０の範囲であってもよい。いくつかの実施形態においては、ｐＨは約５．５または約６．０である。製剤のｐＨを、当業者には公知の任意の手段により測定することができる。ｐＨを測定するための手段は、微小電極を含むｐＨメーターを用いることである。製剤のｐＨを、当業界で公知の任意の手段を用いて調整することができる。製剤のｐＨを変化させるための例示的化学物質は、塩酸（ＨＣｌ）および水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）である。 In certain embodiments, the formulations of the present invention have a pH of pH 6 or less. In some embodiments, the pH of the formulation is in the range of about 5.0 to about 6.0. For example, the pH of the formulation is about 5.0, about 5.1, about 5.2, about 5.3, about 5.4, about 5.5, about 5.6, about 5.7, about 5. It may be 8, about 5.9, and about 6.0. In some embodiments, the pH of the formulation may be in the range of about 5.5 to about 6.0. In some embodiments, the pH is about 5.5 or about 6.0. The pH of the formulation can be measured by any means known to those skilled in the art. A means for measuring pH is to use a pH meter that includes microelectrodes. The pH of the formulation can be adjusted using any means known in the art. Exemplary chemicals for changing the pH of a formulation are hydrochloric acid (HCl) and sodium hydroxide (NaOH).

ある実施形態においては、本発明の製剤は、抗体のような、結合剤の等電点（ｐＩ）以下のｐＨを有する。等電点は、特定の分子または表面が正味の電荷を担持しないｐＨである。抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５結合剤のｐＩを、当業者には公知の任意の手段により決定することができる。いくつかの実施形態においては、抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５抗体のｐＩは、変性等電点電気泳動により決定される。図１に示されるように、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体のｐＩは、６．８〜７．２である。図１１に示されるように、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体のｐＩは、７．６〜８．４である。 In certain embodiments, the formulations of the invention have a pH below the isoelectric point (pI) of the binder, such as an antibody. The isoelectric point is the pH at which a particular molecule or surface does not carry a net charge. The pI of an anti-LIGHT or anti-CXCR5 binder can be determined by any means known to those of skill in the art. In some embodiments, the pI of the anti-LIGHT or anti-CXCR5 antibody is determined by denatured isoelectric focusing. As shown in FIG. 1, the pI of a fully human IgG4 anti-LIGHT antibody comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 is 6.8 to 7.2. Is. As shown in FIG. 11, the pI of the humanized IgG4 anti-CXCR5 antibody comprising the heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and the light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26 is 7.6 to 8.4. Is.

ｉｖ．界面活性剤
本発明の製剤は、場合により、安定化剤としても知られる界面活性剤をさらに含んでもよい。界面活性剤／安定化剤は、製剤中の生物分子および／または一般的な医薬添加剤と相互作用し、これを安定化する化学化合物である。ある実施形態においては、界面活性剤を、より低い温度の保存と共に用いることができる。界面活性剤は一般に、空気／溶液境界面で誘導されるストレスおよび溶液／表面で誘導されるストレスから結合剤を保護し、そうでなければタンパク質凝集をもたらし得る。界面活性剤としては、限定されるものではないが、ポリソルベート、グリセリン、ジカルボン酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、フタル酸、およびその組合せが挙げられる。当業者であれば、それらが薬学的に許容される、すなわち、対象への投与にとって好適である限り、他の界面活性剤、例えば、非イオン性またはイオン性界面活性剤（ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）を用いることができることを知っている。界面活性剤は、いくつかの実施形態においては、ポリソルベートである。ポリソルベートの例としては、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、およびポリソルベート８０が挙げられる。 iv. Surfactants The formulations of the present invention may optionally further contain a surfactant, also known as a stabilizer. Surfactants / stabilizers are chemical compounds that interact with and stabilize biomolecules and / or common pharmaceutical additives in formulations. In certain embodiments, surfactants can be used with storage at lower temperatures. Surfactants generally protect the binder from air / solution interface-induced stress and solution / surface-induced stress, which can otherwise result in protein aggregation. Surfactants include, but are not limited to, polysorbate, glycerin, dicarboxylic acid, oxalic acid, succinic acid, fumaric acid, phthalic acid, and combinations thereof. Those skilled in the art will use other surfactants, such as nonionic or ionic detergents, as long as they are pharmaceutically acceptable, i.e. suitable for administration to the subject. I know I can do it. Surfactants are, in some embodiments, polysorbates. Examples of polysorbate include polysorbate 20, polysorbate 40, polysorbate 60, polysorbate 65, and polysorbate 80.

例示的実施形態においては、界面活性剤は、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在する。例えば、界面活性剤は、約０．００１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％（ｗ／ｖ）、約０．００３％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）、約０．００６％（ｗ／ｖ）、約０．００７％（ｗ／ｖ）、約０．００８％（ｗ／ｖ）、約０．００９％（ｗ／ｖ）、約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）、および約０．１％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。特定の実施形態においては、界面活性剤は、約０．００３％（ｗ／ｖ）〜約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％（ｗ／ｖ）、または約０．００５
％（ｗ／ｖ）〜約０．０２％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．００５％（ｗ／ｖ）で製剤中に存在する。例えば、ポリソルベート２０は、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００２％（ｗ／ｖ）〜約０．０１％（ｗ／ｖ）、約０．００３％（ｗ／ｖ）〜約０．００８％（ｗ／ｖ）、および約０．００４％（ｗ／ｖ）〜約０．００６％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．００５％（ｗ／ｖ）で製剤中に存在してもよい。代替的な実施形態においては、ポリソルベート２０は、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０５％（ｗ／ｖ）、および約０．００７５％（ｗ／ｖ）〜約０．０２５％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．０１％（ｗ／ｖ）の量で存在する。さらに代替的な実施形態においては、ポリソルベート２０は、約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００５％（ｗ／ｖ）〜約０．０５％（ｗ／ｖ）、および約０．０１％（ｗ／ｖ）〜約０．０３％（ｗ／ｖ）、例えば、約０．０２％（ｗ／ｖ）の量で存在する。 In an exemplary embodiment, the surfactant is present in the formulation in an amount of about 0.001% (w / v) to about 0.1% (w / v). For example, the surfactant is about 0.001% (w / v), about 0.002% (w / v), about 0.003% (w / v), about 0.004% (w / v). , About 0.005% (w / v), about 0.006% (w / v), about 0.007% (w / v), about 0.008% (w / v), about 0.009% (W / v), about 0.01% (w / v), about 0.02% (w / v), about 0.03% (w / v), about 0.04% (w / v), About 0.05% (w / v), about 0.06% (w / v), about 0.07% (w / v), about 0.08% (w / v), about 0.09% ( It may be present in the formulation in an amount of w / v), and about 0.1% (w / v). In certain embodiments, the surfactant is from about 0.003% (w / v) to about 0.05% (w / v), from about 0.004% (w / v) to about 0.025%. (W / v), or about 0.005
% (W / v) to about 0.02% (w / v), eg, about 0.005% (w / v), is present in the formulation. For example, polysorbate 20 contains about 0.001% (w / v) to about 0.1% (w / v), about 0.002% (w / v) to about 0.01% (w / v), About 0.003% (w / v) to about 0.008% (w / v), and about 0.004% (w / v) to about 0.006% (w / v), eg, about 0. It may be present in the formulation at 005% (w / v). In an alternative embodiment, the polysorbate 20 is about 0.001% (w / v) to about 0.1% (w / v), about 0.005% (w / v) to about 0.05%. (W / v), and is present in an amount of about 0.0075% (w / v) to about 0.025% (w / v), eg, about 0.01% (w / v). In a further alternative embodiment, the polysorbate 20 is about 0.001% (w / v) to about 0.1% (w / v), about 0.005% (w / v) to about 0.05. It is present in an amount of% (w / v) and from about 0.01% (w / v) to about 0.03% (w / v), eg, about 0.02% (w / v).

ｖ．等張化剤
本発明の製剤は、場合により、等張化剤をさらに含んでもよい。典型的には、等張化剤は、製剤のオスモル濃度を、血液または血漿のような体液の浸透圧に近いものにするために調整または維持するために用いられる。等張化剤はまた、製剤中の結合剤レベルを維持することもできる。部分的には、等張化剤は、製剤中に存在する治療上活性な結合剤のレベル、比率、または割合を保つのに寄与する。本明細書で用いられる用語「等張化（ｔｏｎｉｃｉｔｙ）」とは、流体環境または溶液中の生物学的成分の挙動を指す。等張溶液は、血漿と同じ浸透圧を有し、対象の血漿の浸透圧を変化させることなく、対象中に静脈内注入することができる。実際、本発明のある実施形態においては、等張化剤は、製剤を静脈内注入にとって好適なものにするのに十分な量で存在する。等張化剤はその上、増量剤または安定化剤としての役割も果たすことが多い。そのようなものとして、等張化剤により、結合剤は凍結および剪断のような様々なストレスを克服することができる。等張化剤としては、限定されるものではないが、サッカライド、糖、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、および他の無機塩が挙げられる。当業者であれば、それらが薬学的に許容される、すなわち、対象への投与にとって好適である限り、他の等張化剤を用いることができることを知っている。 v. Isotonic Agent The formulation of the present invention may further contain an isotonic agent, as the case may be. Typically, isotonic agents are used to adjust or maintain the osmolarity of the formulation to be close to the osmotic pressure of body fluids such as blood or plasma. The tonicity agent can also maintain binder levels in the formulation. In part, the tonicity agent contributes to maintaining the level, proportion, or proportion of the therapeutically active binder present in the formulation. As used herein, the term "tonicity" refers to the behavior of biological components in a fluid environment or solution. The isotonic solution has the same osmotic pressure as plasma and can be injected intravenously into the subject without changing the osmotic pressure of the subject's plasma. In fact, in certain embodiments of the invention, the tonicity agent is present in an amount sufficient to make the formulation suitable for intravenous infusion. The tonicity agent also often serves as a bulking agent or stabilizer. As such, the tonicity agent allows the binder to overcome various stresses such as freezing and shearing. Isotonic agents include, but are not limited to, saccharides, sugars, glycerin, sorbitol, mannitol, sodium chloride, potassium chloride, magnesium chloride, and other inorganic salts. Those skilled in the art know that other isotonic agents can be used as long as they are pharmaceutically acceptable, i.e., suitable for administration to a subject.

ある実施形態においては、等張化剤は、約０．１％（ｗ／ｖ）〜１０％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在する。例えば、等張化剤は、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、約１％（ｗ／ｖ）、約２％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、約４．５％（ｗ／ｖ）、約５％（ｗ／ｖ）、約５．５％（ｗ／ｖ）、約６％（ｗ／ｖ）、約７％（ｗ／ｖ）、約８％（ｗ／ｖ）、約９％（ｗ／ｖ）、および約１０％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。あるいは、等張化剤は、約２％（ｗ／ｖ）〜約８％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）〜約７％（ｗ／ｖ）、および約４％（ｗ／ｖ）〜約６％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。さらに代替的な実施形態においては、等張化剤は、約０．１％〜約１％、約０．１％〜約０．５％、約０．１％〜約０．３％、および約０．２％の量で製剤中に存在してもよい。 In certain embodiments, the tonicity agent is present in the formulation in an amount of about 0.1% (w / v) to 10% (w / v). For example, the tonicity agent is about 0.1% (w / v), about 0.2% (w / v), about 0.3% (w / v), about 0.4% (w / v). ), About 0.5% (w / v), about 0.6% (w / v), about 0.7% (w / v), about 0.8% (w / v), about 0.9 % (W / v), about 1% (w / v), about 2% (w / v), about 3% (w / v), about 4% (w / v), about 4.5% (w) / V), about 5% (w / v), about 5.5% (w / v), about 6% (w / v), about 7% (w / v), about 8% (w / v) , About 9% (w / v), and may be present in the formulation in an amount of about 10% (w / v). Alternatively, the tonicity agent is about 2% (w / v) to about 8% (w / v), about 3% (w / v) to about 7% (w / v), and about 4% (w). It may be present in the formulation in an amount of / v) to about 6% (w / v). In a further alternative embodiment, the tonicity agent is about 0.1% to about 1%, about 0.1% to about 0.5%, about 0.1% to about 0.3%, and. It may be present in the formulation in an amount of about 0.2%.

ある例示的実施形態においては、等張化剤は、サッカライドである。サッカライドの例としては、グルコース、スクロース（サッカロースとしても知られる）、マルトース、トレハロース、デキストロース、キシリトール、フルクトースおよびマンニトールが挙げられる。例えば、マンニトールは、約１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）、約２％（ｗ／ｖ）〜約８％（ｗ／ｖ）、または約３％（ｗ／ｖ）〜約５％（ｗ／ｖ）、例えば、約４％（ｗ／ｖ）の量で存在してもよい。あるいは、スクロース（サッカロースとしても知られる）は、約１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）〜約８％（ｗ／ｖ）
、または約４％（ｗ／ｖ）〜約６％（ｗ／ｖ）、例えば、約４．５、５、５．５または６％（ｗ／ｖ）の量で存在してもよい。 In certain exemplary embodiments, the tonicity agent is saccharides. Examples of saccharides include glucose, sucrose (also known as sucrose), maltose, trehalose, dextrose, xylitol, fructose and mannitol. For example, mannitol is about 1% (w / v) to about 10% (w / v), about 2% (w / v) to about 8% (w / v), or about 3% (w / v). It may be present in an amount of ~ about 5% (w / v), for example about 4% (w / v). Alternatively, sucrose (also known as sucrose) is about 1% (w / v) to about 10% (w / v), about 3% (w / v) to about 8% (w / v).
, Or may be present in an amount of about 4% (w / v) to about 6% (w / v), eg, about 4.5, 5, 5.5 or 6% (w / v).

ある他の例示的実施形態においては、等張化剤は、塩化ナトリウムである。例えば、塩化ナトリウムは、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、および約１％（ｗ／ｖ）の量で存在してもよい。あるいは、塩化ナトリウムは、約０．１％〜約１％、約０．１％〜約０．５％、約０．１％〜約０．３％、および約０．２％の量で製剤中に存在してもよい。 In some other exemplary embodiments, the tonicity agent is sodium chloride. For example, sodium chloride is about 0.1% (w / v), about 0.2% (w / v), about 0.3% (w / v), about 0.4% (w / v), About 0.5% (w / v), about 0.6% (w / v), about 0.7% (w / v), about 0.8% (w / v), about 0.9% ( It may be present in an amount of w / v), and about 1% (w / v). Alternatively, sodium chloride is formulated in an amount of about 0.1% to about 1%, about 0.1% to about 0.5%, about 0.1% to about 0.3%, and about 0.2%. It may be present in.

さらなる例示的実施形態においては、製剤は、１つまたは複数の等張化剤を含んでもよい。例えば、製剤は、上記濃度の１つまたは複数の上記等張化剤を含んでもよい。ある特定の実施形態においては、製剤はスクロースと塩化ナトリウムとを含んでもよく、スクロースと塩化ナトリウムのそれぞれの濃度は約０．１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）である。いくつかの実施形態においては、スクロース濃度は約６％であり、塩化ナトリウム濃度は約０．２％である。あるいは、スクロース濃度は約４．５％であり、塩化ナトリウム濃度は約０．２％である。 In a further exemplary embodiment, the formulation may comprise one or more isotonic agents. For example, the formulation may contain one or more of the above isotonic agents at the above concentrations. In certain embodiments, the formulation may comprise sucrose and sodium chloride, with concentrations of sucrose and sodium chloride each ranging from about 0.1% (w / v) to about 10% (w / v). .. In some embodiments, the sucrose concentration is about 6% and the sodium chloride concentration is about 0.2%. Alternatively, the sucrose concentration is about 4.5% and the sodium chloride concentration is about 0.2%.

本発明のある実施形態においては、製剤のオスモル濃度は約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲、例えば、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇである。換言すれば、本発明の製剤は、いくつかの実施形態においては、ヒト血液と実質的に等張性である、すなわち、実質的に同じ浸透圧を有する。オスモル濃度を、蒸気圧または凍結型浸透圧計を用いるような、当業者には公知の任意の手段によって測定することができる。本発明の製剤のオスモル濃度を、例えば、本明細書に記載の１つまたは複数の等張化剤により調節することができる。 In certain embodiments of the invention, the osmolal concentration of the formulation is from about 200 mOsm / kg to about 350 mOsm / kg, about 270 mOsm / kg to about 330 mOsm / kg, about 280 mOsm / kg to about 320 mOsm / kg, or about 290 mOsm / kg. The range is about 310 mOsm / kg, for example about 300 mOsm / kg. In other words, the formulations of the present invention, in some embodiments, are substantially isotonic with human blood, i.e. have substantially the same osmotic pressure. The osmolal concentration can be measured by any means known to those of skill in the art, such as using a vapor pressure or frozen osmotic meter. The osmolal concentration of the formulations of the present invention can be adjusted, for example, with one or more isotonic agents described herein.

ｖｉ．アミノ酸
本発明の製剤は、場合により、アミノ酸をさらに含んでもよい。アミノ酸の例としては、限定されるものではないが、グリシン、アラニン、アスパラギン酸、リシン、セリン、チロシン、システイン、グルタミン、メチオニン、アルギニン、およびプロリンが挙げられる。例示的実施形態においては、アミノ酸は、約０．１％（ｗ／ｖ）〜５％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在する。例えば、アミノ酸は、約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．３％（ｗ／ｖ）、約０．４％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）、約０．６％（ｗ／ｖ）、約０．７％（ｗ／ｖ）、約０．８％（ｗ／ｖ）、約０．９％（ｗ／ｖ）、約１．０％（ｗ／ｖ）、約１．１％（ｗ／ｖ）、約１．２％（ｗ／ｖ）、約１．３％（ｗ／ｖ）、約１．４％（ｗ／ｖ）、約１．５％（ｗ／ｖ）、約１．６％（ｗ／ｖ）、約１．７％（ｗ／ｖ）、約１．８％（ｗ／ｖ）、約１．９％（ｗ／ｖ）、約２．０％（ｗ／ｖ）、約３％（ｗ／ｖ）、約４％（ｗ／ｖ）、および約５％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。あるいは、アミノ酸は、約１．３％（ｗ／ｖ）〜約１．８％（ｗ／ｖ）、または約１．４％（ｗ／ｖ）〜約１．６％（ｗ／ｖ）、例えば、約１．５％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在する。さらに代替的な実施形態においては、アミノ酸は、約０．５％（ｗ／ｖ）〜約１．５％（ｗ／ｖ）、または約０．８％（ｗ／ｖ）〜約１．２％（ｗ／ｖ）、例えば、約１．０％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在する。例示的なアミノ酸は、プロリンまたはアルギニンである。例えば、プロリンは、約１％（ｗ／ｖ）〜約２％（ｗ／ｖ）、約１．３％（ｗ／ｖ）〜約１．８％（ｗ／ｖ）、約１．４％（ｗ／ｖ）〜約１．６％（ｗ／ｖ）、例えば、１．５％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。あるいは、アルギニンは、約０．５％（ｗ／ｖ）〜約１．５％（ｗ／ｖ）、または約０．８％（ｗ／ｖ）〜約１．２％（ｗ／ｖ）、例えば、約１．０％（ｗ／ｖ）の量で製剤中に存在してもよい。 vi. Amino Acids The formulations of the present invention may optionally further contain amino acids. Examples of amino acids include, but are not limited to, glycine, alanine, aspartic acid, lysine, serine, tyrosine, cysteine, glutamine, methionine, arginine, and proline. In an exemplary embodiment, the amino acid is present in the formulation in an amount of about 0.1% (w / v) to 5% (w / v). For example, amino acids are about 0.1% (w / v), about 0.2% (w / v), about 0.3% (w / v), about 0.4% (w / v), about. 0.5% (w / v), about 0.6% (w / v), about 0.7% (w / v), about 0.8% (w / v), about 0.9% (w) / V), about 1.0% (w / v), about 1.1% (w / v), about 1.2% (w / v), about 1.3% (w / v), about 1 .4% (w / v), about 1.5% (w / v), about 1.6% (w / v), about 1.7% (w / v), about 1.8% (w / v) v), about 1.9% (w / v), about 2.0% (w / v), about 3% (w / v), about 4% (w / v), and about 5% (w / v) It may be present in the formulation in an amount of v). Alternatively, the amino acids are about 1.3% (w / v) to about 1.8% (w / v), or about 1.4% (w / v) to about 1.6% (w / v), For example, it is present in the formulation in an amount of about 1.5% (w / v). In a further alternative embodiment, the amino acids are from about 0.5% (w / v) to about 1.5% (w / v), or about 0.8% (w / v) to about 1.2. It is present in the formulation in an amount of% (w / v), eg, about 1.0% (w / v). An exemplary amino acid is proline or arginine. For example, proline is about 1% (w / v) to about 2% (w / v), about 1.3% (w / v) to about 1.8% (w / v), about 1.4%. It may be present in the formulation in an amount of (w / v) to about 1.6% (w / v), eg, 1.5% (w / v). Alternatively, arginine is about 0.5% (w / v) to about 1.5% (w / v), or about 0.8% (w / v) to about 1.2% (w / v), For example, it may be present in the formulation in an amount of about 1.0% (w / v).

ｖｉｉ．他の添加剤
さらに、本発明の製剤は、限定されるものではないが、注射用水、賦形剤、可溶化剤、緩和剤、さらなるバッファー、無機または有機塩、酸化防止剤などの他の添加剤を含んでもよい。しかしながら、いくつかの実施形態においては、本発明の製剤は、上記のもの以外の他の添加剤を含まない。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．（編）（１９８０）に記載のもののような、他の薬学的に許容される担体、添加剤、または安定剤が製剤の所望の特性に有害に影響しないという条件で、それらを製剤中に含有させることができる。特定の実施形態においては、製剤は保存剤を実質的に含まないが、代替的な実施形態においては、必要に応じて保存剤を添加してもよい。例えば、凍結防止剤またはリオプロテクタントを、凍結乾燥製剤中に含有させることができる。 vii. Other Additives In addition, the formulations of the present invention include, but are not limited to, other additives such as water for injection, excipients, solubilizers, palliatives, additional buffers, inorganic or organic salts, antioxidants, etc. It may contain an agent. However, in some embodiments, the formulations of the present invention do not contain other additives than those described above. Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th Edition, Osol, A. et al. Included in the formulation, provided that other pharmaceutically acceptable carriers, additives, or stabilizers, such as those described in (ed.) (1980), do not adversely affect the desired properties of the formulation. Can be made to. In certain embodiments, the formulation is substantially free of preservatives, but in alternative embodiments, preservatives may be added as needed. For example, antifreeze agents or rioprotectants can be included in lyophilized formulations.

ｖｉｉｉ．液体または凍結乾燥製剤
本発明の製剤は、液体製剤または凍結乾燥製剤であってもよい。いくつかの実施形態においては、製剤は液体製剤である。いくつかの実施形態においては、液体製剤は、すぐに注射できる。あるいは、製剤は凍結乾燥粉末であってもよい。いくつかの実施形態においては、凍結乾燥粉末は、投与の直前に溶媒とすぐに混合される。 viii. Liquid or lyophilized preparation The preparation of the present invention may be a liquid preparation or a lyophilized preparation. In some embodiments, the formulation is a liquid formulation. In some embodiments, the liquid formulation can be injected immediately. Alternatively, the formulation may be a lyophilized powder. In some embodiments, the lyophilized powder is immediately mixed with the solvent immediately prior to administration.

ｉｘ．製剤例
本発明の１つの例示的実施形態においては、本発明は、皮下投与にとって好適な安定な液体抗体製剤であって、
ａ）約８０ｍｇ／ｍｌを超える、例えば、約１５０ｍｇ／ｍｌの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．００５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；および
ｄ）約４％（ｗ／ｖ）のマンニトール；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、前記製剤を提供する。 ix. Formulation Examples In one exemplary embodiment of the invention, the invention is a stable liquid antibody formulation suitable for subcutaneous administration.
a) Fully human IgG4 anti-LIGHT (lymphocyte) comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 above about 80 mg / ml, eg, about 150 mg / ml. (Receptor) antibody that is similar, exhibits inducible expression, competes with HSV glycoprotein D for HVEM, and is expressed by T lymphocytes;
b) Approximately 10 mM citric acid buffer;
c) Approximately 0.005% (w / v) of polysorbate 20; and d) Approximately 4% (w / v) of mannitol;
Provided above, wherein the pH of the formulation is about pH 5.5.

ある例示的実施形態においては、この製剤を、
ａ）注射用水に約１０ｍＭのクエン酸ナトリウム二水和物を溶解し、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムを用いて、緩衝溶液のｐＨを約ｐＨ５．５に調整する工程；
ｂ）約８０ｍｇ／ｍｌを超える、例えば、約１５０ｍｇ／ｍｌの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体、約４％（ｗ／ｖ）のマンニトール、および０．００５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を、完全に溶解されるまで不活性材料から作られたベッセル中で撹拌しながら、工程ａ）の緩衝溶液に添加した後、塩酸または水酸化ナトリウムを用いて、得られる製剤のｐＨを約ｐＨ５．５に調整した後、工程ａ）の緩衝溶液を添加して、得られる製剤の最終重量を調整する工程；
ｃ）０．２μＭの公称孔径を有する滅菌された適合性膜フィルターを用いて無菌条件下で工程ｂ）の製剤を濾過した後、０．２μＭの公称孔径を有する滅菌された適合性膜フィルターを用いて、不活性材料から作られる滅菌容器中に、無菌条件下での濾過により製剤を滅菌する工程；
ｄ）ストッパおよびフランジを備えたフリップオフキャップで密閉される滅菌バイアル中に、無菌条件下で工程ｃ）に由来する製剤を充填する工程；ならびに場合により、
ｅ）粗い汚染物質、無傷の密封、および眼に見える粒子について、工程ｄ）に由来する容器を検査する工程
により製造することができる。 In certain exemplary embodiments, this formulation is
a) A step of dissolving about 10 mM sodium citrate dihydrate in water for injection and adjusting the pH of the buffer solution to about pH 5.5 with, for example, hydrochloric acid or sodium hydroxide;
b) Full human IgG4 anti-LIGHT (lymphocyte) containing a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 above about 80 mg / ml, eg, about 150 mg / ml. Like, showing inducible expression, competing with HSV glycoprotein D for HVEM, a receptor) antibody expressed by T lymphocytes, about 4% (w / v) mannitol, and 0.005% (w). The polysorbate 20 of / v) is added to the buffer solution of step a) with stirring in a vessel made of an inert material until completely dissolved, and then obtained using hydrochloric acid or sodium hydroxide. After adjusting the pH of the formulation to about pH 5.5, the step of adding the buffer solution of step a) to adjust the final weight of the resulting formulation;
c) After filtering the preparation of step b) under sterile conditions using a sterilized compatible membrane filter with a nominal pore size of 0.2 μM, a sterilized compatible membrane filter with a nominal pore size of 0.2 μM is used. The step of sterilizing the formulation by filtration under aseptic conditions in a sterile container made from an inert material using;
d) Filling sterile vials sealed with flip-off caps with stoppers and flanges with formulations derived from step c) under sterile conditions; and optionally.
e) Coarse contaminants, intact seals, and visible particles can be produced by the step of inspecting the container from step d).

本発明の別の例示的実施形態においては、本発明は、静脈内投与にとって好適な安定な液体抗体製剤であって、
ａ）約５〜約８０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；および
ｃ）約０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、前記製剤を提供する。 In another exemplary embodiment of the invention, the invention is a stable liquid antibody formulation suitable for intravenous administration.
a) Fully human IgG4 anti-LIGHT containing from about 5 to about 80 mg / mL, eg, about 50 mg / mL, a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 ( A phosphotoxin-like, inducible expression, a receptor) antibody that competes with HSV glycoprotein D for HVEM and is expressed by T lymphocytes;
b) about 10 mM citric acid buffer; and c) about 0.01% (w / v) polysorbate 20;
Provided above, wherein the pH of the formulation is about pH 5.5.

本発明の代替的な例示的実施形態においては、本発明は、静脈内投与にとって好適な安定な凍結乾燥抗体製剤であって、
ａ）約５〜約８０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；
ｄ）約５％（ｗ／ｖ）のスクロース；および
ｅ）約１．５％（ｗ／ｖ）のプロリン；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、前記製剤を提供する。 In an alternative exemplary embodiment of the invention, the invention is a stable lyophilized antibody formulation suitable for intravenous administration.
a) Fully human IgG4 anti-LIGHT containing from about 5 to about 80 mg / mL, eg, about 50 mg / mL, a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 ( A phosphotoxin-like, inducible expression, a receptor) antibody that competes with HSV glycoprotein D for HVEM and is expressed by T lymphocytes;
b) Approximately 10 mM citric acid buffer;
c) Approximately 0.01% (w / v) polysorbate 20;
d) about 5% (w / v) sucrose; and e) about 1.5% (w / v) proline;
Provided above, wherein the pH of the formulation is about pH 5.5.

本発明の例示的実施形態においては、本発明は、
ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０２％のポリソルベート２０；
ｄ）約６％のスクロース；および
ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。 In an exemplary embodiment of the invention, the invention
a) Humanized IgG4 anti-CXCR5 (C-X-C chemokine receptor type 5) antibody containing about 20 mg / mL a heavy chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26. ;
b) Approximately 10 mM citric acid buffer;
c) Approximately 0.02% polysorbate 20;
d) about 6% sucrose; and e) about 0.2% sodium chloride;
To provide a stable antibody formulation comprising, and the pH of the formulation being about pH 6.0.

本発明の代替的な例示的実施形態においては、本発明は、
ａ）約１００ｍｇ／ｍＬの、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；
ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；
ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；
ｄ）約４．５％のスクロース；
ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；
ｆ）約１％のアルギニン；
を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。 In an alternative exemplary embodiment of the invention, the invention
a) A humanized IgG4 anti-CXCR5 (CXX-C chemokine receptor type 5) antibody comprising a heavy chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26 at about 100 mg / mL. ;
b) Approximately 10 mM citric acid buffer;
c) Approximately 0.01% polysorbate 20;
d) Approximately 4.5% sucrose;
e) Approximately 0.2% sodium chloride;
f) About 1% arginine;
To provide a stable antibody formulation comprising, and the pH of the formulation being about pH 6.0.

ｘ．安定性
本発明の製剤は、５℃で、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２カ月以上、典型的には、少なくとも約１２、１８または２４カ月以上にわたって安定である。例示的実施形態においては、それらは５℃で、少なくとも約６カ月以上にわたって安定である。他の例示的実施形態においては、それらは５℃で、少なくとも
約９カ月にわたって安定である。さらなる例示的実施形態においては、それらは５℃で、少なくとも約１年以上、典型的には約２年にわたって安定である。 x. Stability The formulations of the present invention are at least about 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11 or 12 months or more at 5 ° C., typically at least about 12,18. Or stable for more than 24 months. In exemplary embodiments, they are stable at 5 ° C. for at least about 6 months. In other exemplary embodiments, they are stable at 5 ° C. for at least about 9 months. In a further exemplary embodiment, they are stable at 5 ° C. for at least about 1 year or more, typically about 2 years.

Ｃ．投与様式
本発明のある実施形態においては、製剤は、非経口投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、皮下投与、またはその組合せにとって好適である。本発明の製剤は、様々な技術による送達にとって好適である。 C. Dosage Mode In certain embodiments of the present invention, the formulation is suitable for parenteral, intravenous, intramuscular, intradermal, subcutaneous, or a combination thereof. The formulations of the present invention are suitable for delivery by a variety of techniques.

本発明のいくつかの実施形態においては、製剤は静脈内投与される。例えば、抗体のような、８０ｍｇ／ｍＬ以下のＩｇＧ４結合剤を含有する製剤を静脈内投与するのが望ましい。従って、製剤は、典型的には滅菌される。無菌製剤を作製するための方法は当業界で周知であり、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過または約１２０℃で約３０分間の抗体を除く製剤の構成成分のオートクレーブが挙げられる。例えば、本発明は、静脈内投与にとって好適な安定な液体抗体製剤であって、ａ）約５〜約８０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約５０ｍｇ／ｍＬの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；およびｃ）約０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０を含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、前記製剤を提供する。あるいは、本発明は、ａ）約２０ｍｇ／ｍＬの、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；ｃ）約０．０２％のポリソルベート２０；ｄ）約６％のスクロース；およびｅ）約０．２％の塩化ナトリウムを含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。 In some embodiments of the invention, the formulation is administered intravenously. For example, it is desirable to administer a preparation containing an IgG4 binder of 80 mg / mL or less, such as an antibody, intravenously. Therefore, the formulation is typically sterilized. Methods for making sterile formulations are well known in the art and include, for example, filtration through sterile filtration membranes or autoclaving of the components of the formulation excluding antibodies at about 120 ° C. for about 30 minutes. For example, the present invention is a stable liquid antibody preparation suitable for intravenous administration, a) with a heavy chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7, which is about 5 to about 80 mg / mL, for example, about 50 mg / mL. , A fully human IgG4 anti-LIGHT (phosphotoxin-like, inducible expression, competing with HSV glycoprotein D for HVEM, and a receptor expressed by T lymphocytes, including a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8. The preparation is provided, wherein the body) antibody; b) about 10 mM citrate buffer; and c) about 0.01% (w / v) of polysorbate 20, and the pH of the preparation is about pH 5.5. Alternatively, the invention a) humanized IgG4 anti-CXCR5 (CX-C) comprising a heavy chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26 at about 20 mg / mL. Chemokine receptor type 5) antibody; b) about 10 mM citrate buffer; c) about 0.02% polysorbate 20; d) about 6% sucrose; and e) about 0.2% sodium chloride. Provides a stable antibody formulation having a pH of about pH 6.0.

本発明のいくつかの実施形態においては、製剤は皮下投与される。例えば、抗体のような、８０ｍｇ／ｍＬを超えるＩｇＧ４結合剤を含有する製剤を皮下投与するのが望ましい。特定の実施形態においては、ａ）約１５０ｍｇ／ｍＬの、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合し、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；ｃ）約０．００５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０；ｄ）約４％（ｗ／ｖ）のマンニトールを含み、製剤のｐＨが約ｐＨ５．５である、安定な液体抗体製剤を対象に皮下投与するのが望ましい。あるいは、本発明は、ａ）約１００ｍｇ／ｍＬの、配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体型５）抗体；ｂ）約１０ｍＭのクエン酸バッファー；ｃ）約０．０１％のポリソルベート２０；ｄ）約４．５％のスクロース；ｅ）約０．２％の塩化ナトリウム；およびｆ）約１％のアルギニンを含み、製剤のｐＨが約ｐＨ６．０である、安定な抗体製剤を提供する。 In some embodiments of the invention, the formulation is administered subcutaneously. For example, it is desirable to subcutaneously administer a preparation containing an IgG4 binder greater than 80 mg / mL, such as an antibody. In certain embodiments, a) a fully human IgG4 anti-LIGHT (like a lymphocyte) comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 at about 150 mg / mL. Yes, showing inducible expression, competing with HSV glycoprotein D for HVEM, receptor) antibody expressed by T lymphocytes; b) about 10 mM citrate buffer; c) about 0.005% (w / v) ) Polysorbate 20; d) It is desirable to subcutaneously administer a stable liquid antibody preparation containing about 4% (w / v) of mannitol and having a preparation pH of about pH 5.5. Alternatively, the invention a) humanized IgG4 anti-CXCR5 (CXC) comprising a heavy chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26 at about 100 mg / mL. Chemokine receptor type 5) antibody; b) about 10 mM citrate buffer; c) about 0.01% polysorbate 20; d) about 4.5% sucrose; e) about 0.2% sodium chloride; and f ) Provided is a stable antibody preparation containing about 1% arginine and having a pH of the preparation of about pH 6.0.

Ｄ．用量および剤形
本発明の製剤の有効用量は、投与手段、標的部位、対象の生理的状態、対象がヒトまたは動物であるかどうか、投与される他の薬剤、および処置が予防的なものであるか、または治療的なものであるかなどの、多くの様々な因子に応じて変化する。通常、対象はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物などの非ヒト哺乳動物を処置することもできる。処置用量は安全性および効能を最適化するために滴定する必要がある。 D. Dose and Dosage Form The effective dose of the formulation of the invention is the means of administration, the target site, the physiological condition of the subject, whether the subject is human or animal, other agents administered, and the treatment is prophylactic. It depends on many different factors, such as whether it is present or therapeutic. The subject is usually human, but non-human mammals such as transgenic mammals can also be treated. The treatment dose should be titrated to optimize safety and efficacy.

本発明の製剤を、複数回投与することができる。単回投与間の間隔は、１日、１週間、２週間、１カ月または１年であってもよい。間隔は不規則であってもよい。いくつかの方法においては、用量を、抗体のような結合剤の特定の血漿濃度を達成するために調整する
。用量および頻度は、対象中での、抗体のような、抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５結合剤の半減期に応じて変化するであろう。一般に、ヒト抗体は、最も長い半減期を示し、次いで、ヒト化抗体、キメラ抗体、および非ヒト抗体と続く。 The preparation of the present invention can be administered multiple times. The interval between single doses may be 1 day, 1 week, 2 weeks, 1 month or 1 year. The intervals may be irregular. In some methods, the dose is adjusted to achieve a particular plasma concentration of a binder such as an antibody. The dose and frequency will vary depending on the half-life of the anti-LIGHT or anti-CXCR5 binder, such as antibody, in the subject. In general, human antibodies have the longest half-life, followed by humanized antibodies, chimeric antibodies, and non-human antibodies.

さらなる実施形態においては、本発明は、対象への剤形の投与による対象における１つまたは複数の疾患の処置のための、治療上有効量の本発明の製剤を含む医薬単位剤形を提供する。いくつかの実施形態においては、対象はヒトである。ヒトは、成人または幼児であってもよい。用語「医薬単位剤形」とは、それぞれの単位が、必要とされるクエン酸バッファーおよびｐＨと関連して所望の治療／予防効果をもたらすと算出された所定量の活性化合物を含有する、処置しようとする対象のための単位用量として好適な物理的に別々の単位を指す。 In a further embodiment, the invention provides a pharmaceutical unit dosage form comprising a therapeutically effective amount of a formulation of the invention for the treatment of one or more diseases in a subject by administration of the dosage form to the subject. .. In some embodiments, the subject is a human. Humans may be adults or infants. The term "pharmaceutical unit dosage form" is a treatment in which each unit contains a predetermined amount of active compound calculated to provide the desired therapeutic / preventive effect in relation to the required citrate buffer and pH. Refers to physically separate units suitable as unit doses for the subject to be attempted.

単位剤形は、製剤を含む容器であってもよい。好適な容器としては、限定されるものではないが、密封されたアンプル、バイアル、ボトル、シリンジ、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックのような様々な材料から形成されたものであってよく、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は皮下注射針により貫通可能なストッパを有するバイアルであってもよい）。いくつかの実施形態においては、容器はバイアルである。一般に、容器は、製剤の無菌性および安定性を維持するべきである。 The unit dosage form may be a container containing the formulation. Suitable containers include, but are not limited to, sealed ampoules, vials, bottles, syringes, and test tubes. The container may be made of various materials such as glass or plastic and may have a sterile access port (eg, the container is a vial with a stopper that can be penetrated by a subcutaneous injection needle). May be good). In some embodiments, the container is a vial. In general, the container should maintain the sterility and stability of the formulation.

特定の実施形態においては、製剤は、透明な無色のＩ型ガラス製の２ｍＬのバイアル中に包装され、フランジ（ポリプロピレン）を備えたフリップオフキャップで密封されたストッパ（フルオロポリマー被覆ブロモブチル）で密閉される。バイアルは、いくつかの実施形態においては、バイアルが、バイアルあたり約０．２ｍＬの過充填容量、および１．０ｍＬの抽出可能容量を有するように、１．２ｍＬの製剤を充填される。例えば、これは、抗ＬＩＧＨＴ抗体の用量強度（例えば、１５０ｍｇ／ｍＬ）が１ｍＬの溶液中に含有されることを意味する。 In certain embodiments, the formulation is packaged in a 2 mL vial made of clear colorless I-shaped glass and sealed with a stopper (fluoropolymer coated bromobutyl) sealed with a flip-off cap with a flange (polypropylene). Will be done. The vial is filled with 1.2 mL of formulation so that, in some embodiments, the vial has an overfill volume of about 0.2 mL per vial and an extractable volume of 1.0 mL. For example, this means that the dose intensity of the anti-LIGHT antibody (eg, 150 mg / mL) is contained in 1 mL of solution.

特定の実施形態においては、製剤は、バイアルを光から保護するカードボードボックスのような容器中に二次的に包装される。 In certain embodiments, the formulation is secondarily packaged in a container such as a cardboard box that protects the vial from light.

Ｅ．処置方法
対象に本発明の製剤を投与することを含む、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患または障害を処置するための方法が、本明細書でさらに提供される。本発明はさらに、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患または障害を処置するための本明細書に記載の方法における使用のための本発明の製剤に関する。ある実施形態においては、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患は、慢性腸疾患、またはクローン病（ＣＤ）もしくは潰瘍性大腸炎（ＵＣ）のような炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。他の実施形態においては、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）である。 E. Treatment Methods Methods for treating LIGHT-mediated diseases or disorders, including administration of the formulations of the invention to a subject, are further provided herein. The invention further relates to the formulations of the invention for use in the methods described herein for treating LIGHT-mediated diseases or disorders. In certain embodiments, the LIGHT-mediated disease is chronic bowel disease, or inflammatory bowel disease (IBD) such as Crohn's disease (CD) or ulcerative colitis (UC). In another embodiment, the LIGHT-mediated disease is graft-versus-host disease (GVHD).

また、対象に本発明の製剤を投与することを含む、ＣＸＣＲ５媒介性疾患または障害を処置するための方法も本明細書で提供される。本発明はさらに、ＣＸＣＲ５媒介性疾患または障害を処置するための本明細書に記載の方法における使用のための本発明の製剤に関する。ある実施形態においては、抗ＣＸＣＲ５結合剤は、メトトレキサート（ＭＴＸ）またはＴＮＦαアンタゴニストのような、１つまたは複数の疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）に対して不十分に応答した、中程度から重篤な活動性関節リウマチ（ＲＡ）を有する成人患者における、兆候および症状の軽減、構造的損傷の進行の阻害、主要な臨床応答の誘導、および身体障害の防止のために用いられる。抗ＣＸＣＲ５結合剤を、ＤＭＡＲＤまたは抗ＴＮＦαアゴニストと共に用いることができる。 Also provided herein are methods for treating CXCR5-mediated diseases or disorders, including administering to a subject a formulation of the invention. The invention further relates to the formulations of the invention for use in the methods described herein for treating CXCR5-mediated diseases or disorders. In certain embodiments, the anti-CXCR5 binding agent is moderate to severe in response to one or more disease-modifying antirheumatic drugs (DMARD), such as methotrexate (MTX) or TNFα antagonists. It is used to reduce signs and symptoms, inhibit the progression of structural damage, induce a major clinical response, and prevent physical disability in adult patients with active rheumatoid arthritis (RA). Anti-CXCR5 binders can be used with DMARD or anti-TNFα agonists.

ある実施形態においては、本発明の製剤を、１つまたは複数の治療（例えば、ＬＩＧＨ
Ｔ媒介性疾患またはＣＸＣＲ５媒介性疾患を防止、処置、管理、および／または改善するために現在投与されている本発明の製剤ではない治療と共に投与することができる。用語「と共に」の使用は、治療を対象に投与する順序を限定するものではない。第１の治療を、ＬＩＧＨＴ媒介性疾患またはＣＸＣＲ５媒介性疾患を有していた、有する、またはそれが疑われる対象への第２の治療の投与の前（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間）、それと同時、またはその後（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間）に投与することができる。任意のさらなる治療を、他のさらなる治療と共に任意の順序で投与することができる。本発明の抗体と共に投与することができる治療の非限定例としては、米国薬局方および／または米医薬品便覧に列挙された認可された抗炎症剤が挙げられる。 In certain embodiments, the formulations of the invention are treated with one or more treatments (eg, LIGHT).
It can be administered with treatments other than the formulations currently administered to prevent, treat, manage, and / or ameliorate T-mediated or CXCR5-mediated diseases. The use of the term "with" does not limit the order in which the treatment is administered to the subject. The first treatment is given prior to administration of the second treatment to a subject who has, has, or is suspected of having a LIGHT-mediated disease or CXCR5-mediated disease (eg, 1 minute, 45 minutes, 30 minutes). , 45 minutes, 1 hour, 2 hours, 4 hours, 6 hours, 12 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours, 96 hours, 1 week, 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks, 5 weeks, 6 weeks, 8 Weekly or 12 weeks), at the same time or thereafter (eg, 1 minute, 45 minutes, 30 minutes, 45 minutes, 1 hour, 2 hours, 4 hours, 6 hours, 12 hours, 24 hours, 48 hours, 72 hours , 96 hours, 1 week, 2 weeks, 3 weeks, 4 weeks, 5 weeks, 6 weeks, 8 weeks, or 12 weeks). Any further treatment can be administered in any order along with other further treatments. Non-limiting examples of treatments that can be administered with the antibodies of the invention include approved anti-inflammatory agents listed in the United States Pharmacopeia and / or the US Pharmaceutical Handbook.

Ｆ．キット
本発明のある実施形態は、本発明の製剤を含むキットを含む。キットは、薬学的に許容される添加剤を含む１つまたは複数の容器をさらに含んでもよく、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料、例えば、フィルター、針およびシリンジなどを含んでもよい。例えば、適応症、使用、用量、製造、投与、禁忌、および／または治療用、予防用もしくは診断用製品の使用に関する警告に関する情報を含有する、治療用、予防用または診断用製品の商業的包装中に慣用的に含まれる指示書を、キットに添付してもよい。また、情報を含む任意の種類のデータ担体（例えば、リーフレット、ステッカー、チップ、プリントまたはバーコード）であってもよいラベルをキットに添付してもよい。ある実施形態においては、上記に列挙されたような指示書などは、ラベル中に、またはラベル上に含まれていてもよい。キットは、製剤の投与のためのデバイス、特に、製剤を含有するデバイス、すなわち、限定されるものではないが、充填済みシリンジまたは充填済みオートインジェクターのような、充填済みデバイスをさらに含んでもよい。キットはまた、製剤を含む容器、すなわち、充填済みバイアル、カルトゥーシュ、サチェット、またはアンプルのような、充填済み容器を含んでもよい。 F. Kits Certain embodiments of the invention include kits that include the formulations of the invention. The kit may further include one or more containers containing pharmaceutically acceptable additives and may also include other materials desirable from a commercial and user standpoint, such as filters, needles and syringes. Good. For example, commercial packaging of therapeutic, prophylactic or diagnostic products containing information regarding indications, uses, doses, manufactures, administrations, contraindications and / or warnings regarding the use of therapeutic, prophylactic or diagnostic products. Instructions customarily included therein may be attached to the kit. The kit may also be accompanied by a label, which may be any type of data carrier containing the information (eg, leaflets, stickers, chips, prints or barcodes). In certain embodiments, instructions such as those listed above may be included in or on the label. The kit may further include a device for administration of the formulation, in particular a device containing the formulation, i.e., a pre-filled device such as, but not limited to, a pre-filled syringe or a pre-filled auto-injector. The kit may also include a container containing the formulation, i.e., a pre-filled container such as a pre-filled vial, cartouche, sachet, or ampoule.

Ｇ．異なる実施形態の組合せ
本発明の文脈においては、本明細書に記載される実施形態のいずれかを、逆に明示的に記述しない限り、１つまたは複数の他の本明細書に記載される実施形態と組み合わせることができる。特に、本明細書に記載の結合剤および抗体ならびに本明細書に記載のその製剤のいずれかを、キット、充填済みデバイスもしくは充填済み容器のいずれかと共に用いるか、または対応する抗体と共に本明細書に記載の処置または医学的使用の方法において用いることができる（例えば、抗ＬＩＧＨＴ抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体を含む安定な製剤を、本明細書に記載のキット、容器またはデバイスのいずれかと組み合わせることができる）。抗原に特異的に結合する本明細書に記載の結合剤のいずれか（例えば、ＬＩＧＨＴに特異的に結合する結合剤またはＣＸＣＲ５に特異的に結合する結合剤）を、対応する抗体（すなわち、抗ＬＩＧＨＴまたは抗ＣＸＣＲ５）と共に本明細書に記載された処置の方法のいずれかにおいて用いることもでき、およびその逆も可能である。 G. Combination of Different Embodiments In the context of the present invention, one or more of the other embodiments described herein, unless expressly stated conversely, any of the embodiments described herein. Can be combined with morphology. In particular, any of the binding agents and antibodies described herein and any of its formulations described herein is used herein with either a kit, a pre-filled device or a pre-filled container, or with the corresponding antibody. Can be used in the procedures or methods of medical use described in (eg, stable formulations containing anti-LIGHT antibody or anti-CXCR5 antibody can be combined with any of the kits, containers or devices described herein. ). Any of the binders described herein that specifically binds to an antigen (eg, a binder that specifically binds to LIGHT or a binder that specifically binds to CXCR5) is combined with the corresponding antibody (ie, anti-antibody). It can be used in any of the methods of treatment described herein with LIGHT or anti-CXCR5) and vice versa.

本発明を例示するのを助けるために、以下の実施例が提供される。実施例は、いかなる意味でも本発明の範囲を制限することを意図するものではない。一般に、本発明の実施は、別途指摘しない限り、医薬製剤、化学、分子生物学、組換えＤＮＡ技術、抗体技術のような免疫学の従来の技術、ならびに例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）；Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇ
ｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）、第５１巻、Ｐａｕｌ Ｓ．（編）、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ Ｓｅｒｉｅｓ、１６９）、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ Ｊ．ら（編）、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９９９）；およびＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（１９９２）に記載されたポリペプチド調製の標準的な技術を用いる。 The following examples are provided to help illustrate the invention. The examples are not intended to limit the scope of the invention in any way. In general, the practice of the present invention is the practice of immunology such as pharmaceutical formulation, chemistry, molecular biology, recombinant DNA technology, antibody technology, as well as, for example, Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning, unless otherwise indicated. : Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); Antibody Eng
tireing Protocols (Methods in Molecular Biology), Vol. 51, Paul S. et al. (Edit), Humana Press (1996); Antibody Engineering: A Practical Application (Practical Application Series, 169), McCafferty J. et al. Et al. (E.), Humana Press (1996); Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1999); and Current Protocols in Molecular Biology (1999); and Current Protocols in Molecular Biology. Use the standard techniques for preparing polypeptides described in.

抗ＬＩＧＨＴ
最適な製剤化条件を決定するために、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体（「リードＬＩＧＨＴ抗体」）を実施例１〜９において用いた。 Anti-LIGHT
To determine optimal formulation conditions, a fully human IgG4 anti-LIGHT antibody (“lead LIGHT antibody”) comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 Used in Examples 1-9.

材料
原薬バッチ
５．５ｍｇ／ｍＬの濃度および７．３のｐＨのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に製剤化されたリード抗体（「元の製剤」、「ＰＢＳ製剤」または「参照ロット」）を、以下の実施例において用いた。 Material API batch Lead antibody (“original formulation”, “PBS formulation” or “reference lot” formulated in phosphate buffered saline (PBS) at a concentration of 5.5 mg / mL and a pH of 7.3. ”) Was used in the following examples.

添加剤
表１は、親生成物における使用のためのその許容性／好適性に従って選択された、以下の実施例において用いた添加剤を示す。 Additives Table 1 shows the additives used in the following examples, selected according to their tolerance / suitability for use in the parent product.

方法
以下の方法を用いて、実験製剤およびリードＬＩＧＨＴ抗体を含有する本発明の製剤を製造した。 Method The following method was used to produce the experimental formulation and the formulation of the invention containing the lead LIGHT antibody.

バッファーの製造および組成
全てのバッファーを、撹拌下で製造して、対応する添加剤を溶解した。ｐＨを、０．１
Ｍ ＨＣｌまたは０．１Ｍ ＮａＯＨを用いて調整した。全てのバッファーの一般的な濃度は１０ｍＭであった。 Buffer Preparation and Composition All buffers were prepared with stirring to dissolve the corresponding additives. pH, 0.1
Prepared with M HCl or 0.1 M NaOH. The general concentration of all buffers was 10 mM.

添加剤ストック溶液の製造および組成
全てのストック溶液を、撹拌しながら製造して、添加剤を溶解した。濃度は、重量／重量（ｗ／ｗ）として与えた。 Preparation and composition of additive stock solutions All stock solutions were prepared with stirring to dissolve the additives. The concentration was given as weight / weight (w / w).

試料の滅菌濾過
全ての試料、溶液、バッファーなどを、Ｓａｒｔｏｐｏｒｅ−２膜を用いて滅菌濾過した（０．２２μｍ）。試料をクリーンベンチの内部で無菌条件下で滅菌ボトルまたはバイアル中に濾過し、密閉して、微生物の汚染を防止した。 Sterilization filtration of samples All samples, solutions, buffers, etc. were sterilized and filtered using a Sartopore-2 membrane (0.22 μm). Samples were filtered inside a clean bench under sterile conditions into sterile bottles or vials and sealed to prevent microbial contamination.

機械的ストレス試験
室温で２．５時間、３５０回／分の撹拌速度を用いる機械的ストレスを、２６ｍｍ距離の水平実験室振とう器（Ｂｕｈｌｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙからの振とう器およびインキュベーションフード）を用いて実施した。２Ｒバイアルに、約２．５ｍＬのヘッドスペースで溶液１ｍＬを充填した。機械的ストレス試験を計画し、１回目の予備製剤化試験の間および界面活性剤選択のための関連試験の間に実施した。 Mechanical stress test Mechanical stress using a stirring speed of 350 beats / min for 2.5 hours at room temperature was performed using a horizontal laboratory shaker (shaker and incubation hood from the Buhler Company) at a distance of 26 mm. did. 2R vials were filled with 1 mL of solution with approximately 2.5 mL of headspace. Mechanical stress tests were planned and performed during the first preformation test and during the relevant tests for detergent selection.

熱ストレス試験
予備製剤化プログラムの全工程の間に、ストレス試験として熱ストレスを用いた。研究に応じて、試料を＋４０℃で２４時間または７日間保存した。 Thermal stress test Thermal stress was used as a stress test during the entire process of the pre-formulation program. Samples were stored at + 40 ° C. for 24 hours or 7 days, depending on the study.

製剤の充填および完了における分析方法
以下の実施例において、製剤の充填および完了においては以下の分析方法を用いた。 Analytical Methods for Filling and Completing Formulations In the following examples, the following analytical methods were used for filling and completing formulations.

外観
抗体溶液の外観を、視覚的にチェックし、デジタルカメラで写真を撮影することによりさらに文書化した。 Appearance The appearance of the antibody solution was further documented by visually checking and taking pictures with a digital camera.

ｐＨ
全てのｐＨ測定を、微小電極を有するｐＨメーターを用いて実施した。 pH
All pH measurements were performed using a pH meter with microelectrodes.

ＵＶを用いる濃度
全ての抗体溶液のタンパク質濃度を、ＮａｎｏＤｒｏｐ ＮＤ１０００を用いてバッファーに対して測定した。５ｍｇ／ｍＬに近いか、またはそれより低いタンパク質濃度を１：３に希釈したが、２０ｍｇ／ｍＬに近いより高いタンパク質濃度は１：２０に希釈し、２１５ｎｍおよび２８０ｎｍで吸光度を測定した。 Concentrations with UV The protein concentrations of all antibody solutions were measured against buffer using NanoDrop ND1000. Protein concentrations close to or lower than 5 mg / mL were diluted 1: 3, while higher protein concentrations close to 20 mg / mL were diluted 1:20 and absorbances were measured at 215 nm and 280 nm.

動的光散乱（ＤＬＳ）
分子の流体力学直径を、レーザー光散乱を用いて測定した。混濁が観察された場合、分析の前に試料を滅菌濾過し、かくして、可溶性凝集体のみを検出することができた。 Dynamic Light Scattering (DLS)
The hydrodynamic diameter of the molecule was measured using laser light scattering. If turbidity was observed, the sample could be sterile filtered prior to analysis and thus only soluble aggregates could be detected.

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
ＭｉｃｒｏｃａｌからのＶＰＣａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣを用いるＤＳＣにより、多くの予備製剤化試料のアリコートを試験し、２秒の濾過時間で９０℃／時間で自動サンプリング機器中で走査した。試料４００μｌを９６穴プレート中に入れ、アンフォールディング温度Ｔｍについて分析した。 Differential scanning calorimetry (DSC)
Aliquots of many pre-prepared samples were tested by DSC with VPC Purpleary DSC from Microcal and scanned in an automatic sampling instrument at 90 ° C./hour with a filtration time of 2 seconds. 400 μl of sample was placed in a 96-well plate and analyzed for unfolding temperature Tm.

オスモル濃度
自動化Ｋｎａｕｒ Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒを用いて、オスモル濃度を測定した。 Osmol concentration The osmol concentration was measured using an automated Knaur Osmometer.

密度
製剤の密度を、落球粘度計ＤＭＡ４５００ Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒを用いて測定した。 Density The density of the formulation was measured using a falling ball viscometer DMA4500 Antonio Par.

ＦＦの生物分析における分析方法
以下の実施例において、充填および完了の生物分析においては以下の分析方法を用いた。 Analytical Method in Biological Analysis of FF In the following examples, the following analytical method was used in the biological analysis of filling and completion.

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
リード抗体の凝集体、ならびに分解産物を、サイズ排除ＧＬクロマトグラフィーを用いて定量した。試験を、ＳＵＰＥＲＤＥＸ ２００ １０／３００カラムを用いるアイソクラチックＨＰＬＣにより実行した。 Size Exclusion Chromatography (SEC)
Aggregates of lead antibodies, as well as degradation products, were quantified using size exclusion GL chromatography. The test was performed by isocratic HPLC using a SUPERDEX 200 10/300 column.

還元的および非還元的ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を用いて、分子完全性（例えば、半分子）および純度を分析した。この電気泳動分析を、還元的および非還元的条件下で４〜１２％勾配のゲルを用いて実施した。電気泳動分離の後、クマシー染色によりタンパク質を可視化した。 Reducing and non-reducing SDS-PAGE
Molecular integrity (eg, hemimolecules) and purity were analyzed using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). This electrophoretic analysis was performed using gels with a 4-12% gradient under reducing and non-reducing conditions. After electrophoretic separation, the protein was visualized by Kumashi staining.

弱陽イオン交換（ＷＣＸ）
弱陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて、抗体の電荷不均一性をモニタリングした。塩基性、中性、および酸性アイソフォームの割合を報告した。ＰｒｏＰａｃ ＷＣＸ１０カラムを用いる不連続高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、試験を実行した。 Weak cation exchange (WCX)
Weak cation exchange chromatography was used to monitor the charge heterogeneity of the antibody. The proportions of basic, neutral, and acidic isoforms were reported. The test was performed by discontinuous high performance liquid chromatography (HPLC) using a ProPac WCX10 column.

抗原−酵素結合免疫吸着アッセイ（抗原−ＥＬＩＳＡ）
抗原−ＥＬＩＳＡを、抗体の機能を決定するために実施した。天然ＬＩＧＨＴタンパク質への結合特性を、現在の標準抗体と比較してモニタリングした。この効力を、相対的ＥＣ₅₀として報告した。 Antigen-enzyme-linked immunosorbent assay (antigen-ELISA)
Antigen-ELISA was performed to determine the function of the antibody. Binding properties to the native LIGHT protein were monitored in comparison with current standard antibodies. The efficacy was reported as relative EC _50.

等電点電気泳動（ＩＥＦ）
ＩＥＦを実施した。等電点パターンは、リード抗体に特異的であり、同定試験として役立った。異なる電荷パターンにより、分解を見ることができた。 Isoelectric focusing (IEF)
IEF was carried out. The isoelectric point pattern was specific to the lead antibody and served as an identification test. Degradation could be seen with different charge patterns.

保存
別途言及しない限り、全てのバッファー溶液、添加剤溶液、および試料を、５℃（±３℃）で保存した。 Storage Unless otherwise stated, all buffer solutions, additive solutions, and samples were stored at 5 ° C. (± 3 ° C.).

調製および分析された全ての製剤の概要
以下の表２は、以下の実施例において調製および分析された全ての製剤の概要を示す。それぞれの製剤は、列挙された濃度のリードＬＩＧＨＴ抗体を含有していた。 Summary of All Formulations Prepared and Analyzed Table 2 below outlines all formulations prepared and analyzed in the examples below. Each formulation contained the listed concentrations of lead LIGHT antibody.

〔実施例１〕
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）製剤の特性評価およびそれと関連する欠点
本実施例においては、参照ロットを特性評価した。上記の材料の節に記載されたように、参照ロットは、５．５ｍｇ／ｍＬの濃度および７．３のｐＨのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に製剤化され、研究溶液Ｖｉｔｒｙ（ＢｉｏＳＣＰ）中で産生されたリードＬＩＧＨＴ抗体を含有する。 [Example 1]
Phosphate Buffered Saline (PBS) Formulation and Related Disadvantages In this example, the reference lot was characterized. As described in the Materials section above, the reference lot was formulated in Phosphate Buffered Saline (PBS) at a concentration of 5.5 mg / mL and a pH of 7.3 and was formulated in the study solution Vitry (BioSCP). ) Contains the read LIGHT antibody produced in.

等電点電気泳動（ＩＥＦ）を用いて、リード抗体の等電点（ｐＩ）を決定した。リードＬＩＧＨＴ抗体のｐＩは６．２８と理論的に算出され、次いで、当業界で公知の標準的な
方法を用いる変性等電点電気泳動により測定された。図１に示されるように、主要バンドはリードＬＩＧＨＴ抗体のｐＩが６．８〜７．２であったことを示す。 Isoelectric focusing (IEF) was used to determine the isoelectric point (pI) of the lead antibody. The pI of the lead LIGHT antibody was theoretically calculated to be 6.28 and then measured by denatured isoelectric focusing using standard methods known in the art. As shown in FIG. 1, the major band shows that the pI of the lead LIGHT antibody was 6.8-7.2.

ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて、抗体モノマーの分子量、潜在的な凝集体、または半分子の存在を同定した。図２は、還元的および非還元的条件下で異なる参照ロットバッチを比較したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。ＥＬＩＳＡを用いて、リードＬＩＧＨＴ抗体の抗原結合活性を決定した。図３は、参照ロットの第１および第２のバッチの抗原結合活性を決定するのに用いられたＥＬＩＳＡグラフを示す。 SDS-PAGE was used to identify the molecular weight of antibody monomers, the presence of potential aggregates, or half molecules. FIG. 2 shows SDS-PAGE gels comparing different reference lot batches under reducing and non-reducing conditions. The antigen-binding activity of the read LIGHT antibody was determined using ELISA. FIG. 3 shows an ELISA graph used to determine the antigen binding activity of the first and second batches of the reference lot.

ＳＥＣを用いて、参照ロットの第１のバッチの凝集体、ならびに分解産物の存在を決定した。図４に示されるように、サイズ排除クロマトグラフィーは、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、例えば、ダイマー／オリゴマー（ＲＲＴ０．８）または凝集体、および低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）または分解産物を検出した。参照ロットの第１のバッチは、９７％の純度のモノマー含量を有していた。 SEC was used to determine the presence of aggregates, as well as degradation products, in the first batch of reference lots. As shown in FIG. 4, size exclusion chromatography detected high molecular weight proteins (HMWP), such as dimers / oligomers (RRT0.8) or aggregates, and low molecular weight proteins (LMWP) or degradation products. The first batch of reference lots had a monomer content of 97% purity.

ＷＣＸを用いて、参照ロットの第１のバッチの電荷不均一性をモニタリングした。図５に示されるように、酸性、中性、および塩基性アイソフォームの再構成が安定性試験の間に起こった。参照ロットの第１のバッチは、４２．３／５５．６／１．９％の酸性／中性／塩基性アイソフォームの分布を有していた。 WCX was used to monitor the charge heterogeneity of the first batch of reference lots. As shown in FIG. 5, reconstruction of acidic, neutral, and basic isoforms occurred during the stability test. The first batch of reference lots had a distribution of 42.3 / 55.6 / 1.9% acidic / neutral / basic isoforms.

ＤＳＣを用いて、参照ロットの第１のバッチのアンフォールディング温度Ｔｍを分析した。図６に示されるように、抗体の３つのドメインは、６８℃、７５℃、および７８℃で開裂した。 The DSC was used to analyze the unfolding temperature Tm of the first batch of reference lots. As shown in FIG. 6, the three domains of the antibody were cleaved at 68 ° C, 75 ° C, and 78 ° C.

ＤＬＳを用いて、抗体モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。図７および８に示されるように、約１０ｎｍの流体力学直径が検出されたが、凝集体はＰＢＳ中に見られた。しかしながら、凝集体はクエン酸バッファー中には見られなかった（図１０）。 DLS was used to determine the hydrodynamic diameter of antibody monomers and potential soluble aggregates. As shown in FIGS. 7 and 8, hydrodynamic diameters of about 10 nm were detected, but aggregates were found in PBS. However, no aggregates were found in the citrate buffer (Fig. 10).

〔実施例２〕
クエン酸緩衝製剤の開発、およびそれと関連する利点
元のバッファー、ｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）は、ｐＨに関しては、リード抗体の等電点（ｐＩ）に非常に近かった（実施例１を参照されたい）。さらに、元の製剤は、凝集体；半分子；分解産物；低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）；高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）；ならびに酸性、塩基性、および中性抗体アイソフォームの再構成を示した（実施例１を参照されたい）。かくして、これらの欠点に患わされない改良された製剤が必要であった。 [Example 2]
Development of citrate buffer formulation and associated benefits The original buffer, phosphate buffered saline (PBS) at pH 7.3, was very close to the isoelectric point (pI) of the lead antibody in terms of pH (pI). See Example 1). In addition, the original formulation showed agglomerates; semi-molecules; degradation products; low molecular weight proteins (LMWP); high molecular weight proteins (HMWP); and rearrangements of acidic, basic, and neutral antibody isoforms (implemented). See Example 1). Thus, there was a need for an improved formulation that would not suffer from these drawbacks.

５、５．５および６のｐＨの、ポリソルベート２０を含む、および含まない１０ｍＭクエン酸バッファーを含有するリードＬＩＧＨＴ抗体（配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ抗体）の製剤を試験した。表３は、参照ロットの第１のバッチ、ならびに５．０および５．５および６．０のｐＨの、ポリソルベート２０を含む、および含まない、クエン酸塩中に製剤化されたリードＬＩＧＨＴ抗体の様々な実験製剤の分析結果を示す。凝集体は、動的光散乱（ＤＬＳ）測定において、参照ロットについては見出されたが、他の全ての試験した製剤中では見出されなかった。示差走査熱量測定（μＤＳＣ）により測定された場合、Ｔｍは、ｐＨが高くなるほど、熱力学的安定性が高くなると推測できることを示していた。しかし、高い抗体濃縮製剤については、ｐＨを抗体のｐＩ以下で選択しなければならなかった。 Read LIGHT antibody containing 10 mM citrate buffer with and without polysorbate 20 at pH 5, 5.5 and 6 containing the heavy chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 Formulations of fully human IgG4 anti-LIGHT antibody) containing light chain were tested. Table 3 shows the first batch of reference lots and the lead LIGHT antibodies formulated in citrate with and without polysorbate 20 at pH 5.0 and 5.5 and 6.0. The analysis results of various experimental preparations are shown. Aggregates were found in dynamic light scattering (DLS) measurements for reference lots, but not in all other tested formulations. When measured by differential scanning calorimetry (μDSC), Tm showed that the higher the pH, the higher the thermodynamic stability. However, for high antibody concentrates, the pH had to be selected below the pI of the antibody.

表４に示されるように、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）のデータは、参照ロット（ｐＨ７．３のリン酸バッファー）と比較して、クエン酸バッファー中のリードＬＩＧＨＴ抗体について有意に低下した量の高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）を示した。対照的に、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いた場合には差異を検出することができなかった（表５）。 As shown in Table 4, size exclusion chromatography (SEC) data show a significantly reduced amount of lead LIGHT antibody in citrate buffer compared to the reference lot (pH 7.3 phosphate buffer). High molecular weight protein (HMWP) was shown. In contrast, no differences could be detected when SDS-PAGE was used (Table 5).

〔実施例３〕
高濃度抗体製剤の開発
実施例２のクエン酸緩衝抗体製剤による提供される改良を考慮して、クエン酸バッファー成分を、リードＬＩＧＨＴ抗体の濃度の増大のために最適化した。表６は、高濃度（約４０ｍｇ／ｍｌ）の抗体製剤：７．３のｐＨの高リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（製剤２）またはポリソルベート２０を含む５．５のｐＨのクエン酸塩（製剤４）の第１のバッチの分析結果を示す。 [Example 3]
Development of High Concentration Antibody Formulation In view of the improvements provided by the citrate buffered antibody formulation of Example 2, the citrate buffer component was optimized for increased concentrations of lead LIGHT antibody. Table 6 shows a high concentration (about 40 mg / ml) antibody formulation: a high phosphate buffered saline (PBS) (formulation 2) with a pH of 7.3 or a citrate at a pH of 5.5 containing polysorbate 20. The analysis result of the first batch of (formulation 4) is shown.

クエン酸バッファー中でタンパク質溶液を濃縮した後、モノマー含量のわずかな低下が観察された。さらに、ダイマー濃度は低下し、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）も同様に有意に低下し得た（表７を参照されたい）。対照的に、これらの不純物および副産物は、リン酸バッファー中の濃度を増加させることにより増加した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を用いた場合には差異は検出することができなかった（表８）。 After concentrating the protein solution in citrate buffer, a slight decrease in monomer content was observed. In addition, dimer concentrations were reduced and high molecular weight proteins (HMWP) could be significantly reduced as well (see Table 7). In contrast, these impurities and by-products were increased by increasing the concentration in phosphate buffer. Differences could not be detected when SDS-PAGE analysis was used (Table 8).

〔実施例４〕
凍結乾燥抗体製剤の開発
凍結乾燥の実現可能性を試験するために、様々な凍結乾燥実験製剤を製造し、安定性分析にかけた。リードＬＩＧＨＴ抗体の濃度は５０ｍｇ／ｍＬに増加した。 [Example 4]
Development of lyophilized antibody preparations In order to test the feasibility of lyophilization, various lyophilization experimental preparations were manufactured and subjected to stability analysis. The concentration of lead LIGHT antibody increased to 50 mg / mL.

表９は、本実施例において用いられたフリーズドライプログラムを示す。 Table 9 shows the freeze-drying program used in this example.

表１０は、参照ロットの第１のバッチ、ならびにクエン酸バッファー、スクロース、ポリソルベート２０、およびプロリンの様々な組合せ中に製剤化されたリードＬＩＧＨＴ抗体の様々な実験凍結乾燥製剤の分析結果を示す。 Table 10 shows the results of analysis of the first batch of reference lots and various experimental lyophilized formulations of lead LIGHT antibodies formulated in various combinations of citrate buffer, sucrose, polysorbate 20, and proline.

表１１に示されるように、クエン酸バッファーを用いることにより、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）を明確に減少させることができた。４０℃での長時間の保存についてはダイマー含量の差異は見られなかった。フリーズドライ後に低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）の増加が観察された。前記のように、これらの差異はＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を用いた場合には検出することができなかった（表１２）。 As shown in Table 11, the use of citrate buffer was able to significantly reduce ultra-high molecular weight protein (HMWP). No difference in dimer content was observed for long-term storage at 40 ° C. An increase in low molecular weight protein (LMWP) was observed after freeze-drying. As mentioned above, these differences could not be detected using SDS-PAGE analysis (Table 12).

〔実施例５〕
加速安定性試験
クエン酸およびヒスチジンバッファーを用いて、加速安定性試験を実施した。表１３は、参照ロットの第１のバッチ、ならびにクエン酸バッファーまたはヒスチジンバッファーの様々な組合せ中に製剤化されたリードＬＩＧＨＴ抗体の様々な実験製剤の分析結果を示す。注目すべきことに、本発明のクエン酸製剤は、全ての実験においてヒスチジンよりも良好に機能すると考えられた。特に、クエン酸製剤は、参照ロットバッチとヒスチジンの両方と比較して高いモノマー含量を有し（表１３）、低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）および高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）の含量も有意に低かった（表１４）。前記のように、これらの差異は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を用いた場合には検出することができなかった（表１５）。 [Example 5]
Accelerated stability test An accelerated stability test was performed using citric acid and histidine buffer. Table 13 shows the results of analysis of the first batch of reference lots and various experimental formulations of lead LIGHT antibodies formulated in various combinations of citrate buffer or histidine buffer. Notably, the citric acid formulations of the present invention were considered to function better than histidine in all experiments. In particular, the citric acid formulation had a higher monomer content compared to both the reference lot batch and histidine (Table 13), and the content of low molecular weight protein (LMWP) and high molecular weight protein (HMWP) was also significantly lower (Table 13). Table 14). As mentioned above, these differences could not be detected using SDS-PAGE analysis (Table 15).

〔実施例６〕
皮下投与のための高抗体濃度製剤の開発
実施例２〜５のクエン酸緩衝製剤の結果の成功に基づいて、皮下投与にとって好適な高濃度（１５０ｍｇ／ｍｌ）抗体製剤を開発した。製剤開発を、＋２〜＋８℃で保存した場合の許容される保管可能期間を有する液体剤形を開発するためにリードＬＩＧＨＴ抗体に対して実施した。予備ストレス試験により、眼に見えない、および眼に見える粒子、高分子量種およびより塩基性の種の形成が示された。従って、これらのパラメータを、視覚的評価、動的光散乱、光遮蔽、サイズ排除クロマトグラフィー、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動、および弱陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて製剤候補のスクリーニング中にモニタリングした。様々な液体製剤を、臨床製剤の選択前に予備製剤化および製剤化試験において用いた。所見に従って、ｐＨ５．５に調整された１０ｍＭクエン酸バッファー中の製剤（製剤１４）を、さらなる開発のために選択した。製剤のｐＨは、原薬の最適な物理的および化学的安定性ならびに許容される生理学的寛容性（例えば、オスモル濃度）の領域中にある。 [Example 6]
Development of High-Concentration Antibody Preparation for Subcutaneous Administration Based on the successful results of the citrate-buffered preparations of Examples 2-5, a high-concentration (150 mg / ml) antibody preparation suitable for subcutaneous administration was developed. Formulation development was performed on lead LIGHT antibodies to develop liquid dosage forms with acceptable shelf life when stored at + 2 to + 8 ° C. Preliminary stress tests have shown the formation of invisible and visible particles, high molecular weight species and more basic species. Therefore, these parameters are monitored during screening of drug candidates using visual evaluation, dynamic light scattering, light shielding, size exclusion chromatography, sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, and weak cation exchange chromatography. did. Various liquid formulations were used in pre-formulation and formulation studies prior to clinical formulation selection. According to the findings, a formulation (formulation 14) in 10 mM citrate buffer adjusted to pH 5.5 was selected for further development. The pH of the formulation is within the range of optimal physical and chemical stability of the drug substance and acceptable physiological tolerance (eg, osmolal concentration).

表１６に示されるように、製剤１４は、注射用溶液であり、リードＬＩＧＨＴ抗体、クエン酸ナトリウム二水和物（緩衝剤）、ポリソルベート２０（安定化剤）、およびマンニトール（等張化剤）を含有する水性滅菌透明溶液である。水酸化ナトリウム溶液および塩酸を用いて、ｐＨ５．５に調整した。 As shown in Table 16, formulation 14 is a solution for injection, which is a lead LIGHT antibody, sodium citrate dihydrate (buffer), polysorbate 20 (stabilizer), and mannitol (isotonic agent). It is an aqueous sterilized transparent solution containing. The pH was adjusted to 5.5 with sodium hydroxide solution and hydrochloric acid.

全ての添加剤は可溶性であり、非経口投与のための良好に許容される薬局方基準添加剤であり、Ｐｈ．Ｅｕｒ．およびＵＳＰに列挙されたものであった。 All additives are soluble, well-accepted pharmacopoeial standard additives for parenteral administration, Ph. Euro. And those listed in the USP.

〔実施例７〕
皮下抗体製剤のための製造方法
ＧＭＰ順守製造プロセスを、実施例６の皮下高濃度抗体製剤（製剤１４）のために開発した。製造手順は、溶解、ｐＨ調整、滅菌濾過、充填、および包装工程からなっていた。 [Example 7]
Production Method for Subcutaneous Antibody Preparation A GMP compliant manufacturing process was developed for the subcutaneous high concentration antibody preparation (formulation 14) of Example 6. The manufacturing procedure consisted of dissolution, pH adjustment, sterile filtration, filling, and packaging steps.

原薬（リードＬＩＧＨＴ抗体）は、製剤バッファー（１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ５．５）中の液体形態で提供される。添加剤は全て水溶性であり、製造中に製剤バッファーの最初の水性部分に溶解された。バルク原薬溶液を同じ製剤化バッファーでさらに希釈して、１５０ｍｇ／ｍＬのリードＬＩＧＨＴ抗体の濃度を達成した。バルク溶液をよく混合して、溶解プロセスを容易にし、均一性を確保した。 The API (lead LIGHT antibody) is provided in liquid form in formulation buffer (10 mM citrate buffer pH 5.5). All additives were water soluble and were dissolved in the first aqueous portion of formulation buffer during production. The bulk drug substance solution was further diluted with the same formulation buffer to achieve a concentration of 150 mg / mL lead LIGHT antibody. The bulk solution was mixed well to facilitate the dissolution process and ensure uniformity.

濾過による滅菌を、０．２μｍの公称孔径を有する細菌保持フィルターを用いて実行した（Ｐｈ．Ｅｕｒ．およびＵＳＰによる）。「濾過による滅菌」の前にさらなる濾過手順を実施して、低いバイオバーデンを確保した。バイオバーデンのサンプリングを、予備濾過工程ならびに滅菌濾過工程の前に行った。 Filtration sterilization was performed using a bacterial retention filter with a nominal pore size of 0.2 μm (according to Ph. Eur. And USP). Further filtration procedures were performed prior to "sterilization by filtration" to ensure low bioburden. Bioburden sampling was performed prior to the pre-filtration and sterile filtration steps.

好適な容器中への滅菌溶液の調製および充填を、無菌条件下で行った。これは、濾過による滅菌およびその後の無菌プロセッシングを必要とする、薬局方モノグラフおよび関連する指針に従うものであった。「濾過による滅菌」工程後に生成物と接触される装備を、検証された方法（Ｐｈ．Ｅｕｒ．／ＵＳＰによる）を用いて熱または蒸気により滅菌した。 Preparation and filling of sterile solutions into suitable containers was performed under sterile conditions. This followed a pharmacopoeial monograph and related guidelines that required sterilization by filtration and subsequent aseptic processing. Equipment that comes into contact with the product after the "sterilization by filtration" step was sterilized by heat or steam using a validated method (according to Ph.Eur./USP).

バイアルを約１．２ｍＬまで充填して、１．０ｍＬの抽出可能容量を確保した。２ｍＬのバイアルは、透明な無色のＩ型ガラスから作られ、フランジ（ポリプロピレン）を備えたフリップオフキャップで密封されるストッパ（フルオロポリマー被覆ブロモブチル）で密閉された。一次包装材料は、Ｐｈ．Ｅｕｒ．およびＵＳＰの要件を満たした。一次包装材料の好適性を、安定性試験の結果により立証した。用いられた一次包装材料に関する不適合性は観察されなかった。二次包装は光からの生成物の保護を提供する。 The vial was filled to about 1.2 mL to ensure an extractable volume of 1.0 mL. The 2 mL vial was made from clear colorless Type I glass and sealed with a stopper (fluoropolymer coated bromobutyl) sealed with a flip-off cap with a flange (polypropylene). The primary packaging material is Ph. Euro. And met the requirements of USP. The suitability of the primary packaging material was proved by the results of the stability test. No incompatibility was observed with respect to the primary packaging materials used. Secondary packaging provides product protection from light.

適用シリンジに関する適合性を、医薬品溶液上で３つの異なるシリンジサイズおよび針直径（２５〜２８ゲージ）を用いて評価した。生成物の品質に関する差異は得られなかった。適合性を、８時間にわたって証明した。 Compatibility with applicable syringes was evaluated using three different syringe sizes and needle diameters (25-28 gauge) on pharmaceutical solutions. No difference in product quality was obtained. Conformity was proven over 8 hours.

製剤１４を５Ｌバッチ中で作製したが、その組成を表１７に示す。しかしながら、バッチサイズは臨床要件に従って調整することができる。 Formulation 14 was prepared in a 5 L batch and its composition is shown in Table 17. However, batch size can be adjusted according to clinical requirements.

製剤１４の製造方法およびプロセス対照を、図９中のフローダイアグラムに示す。バッチ製造は、以下の工程を含んでいた：
Ｉ．完全に溶解するまで、不活性材料（例えば、ステンレススチールまたはガラス）から作られたベッセル中で撹拌しながら、クエン酸ナトリウム二水和物を注射用水に溶解した。必要に応じて、ｐＨ値を、希塩酸（例えば、０．１Ｍ塩酸）および／または水酸化ナトリウム溶液（例えば、０．１Ｍ水酸化ナトリウム）を用いて５．５に調整した。
ＩＩ．リード抗体、マンニトール、およびポリソルベート２０を、完全に溶解するまで、不活性材料（例えば、ステンレススチールまたはガラス）から作られたベッセル中で撹拌しながら、工程１からのバッファー溶液中に希釈した。必要に応じて、希塩酸（例えば、１Ｍ塩酸）または水酸化ナトリウム（例えば、１Ｍ水酸化ナトリウム）を用いてｐＨ値を５．５に調整した。工程１からのバッファー溶液（残り）を添加して最終重量を調整した。
ＩＩＩ．ａ）予備濾過：
工程ＩＩからの溶液を、０．２μｍの公称孔径を有する滅菌された適合性膜フィルター（例えば、ポリエーテルスルホンまたはポリビニリデンジフルオリド）を用いて無菌条件下で濾過した。
ｂ）濾過による滅菌：
工程ＩＩＩ．ａからの溶液を、０．２μｍの公称孔径を有する滅菌された適合性膜フィルター（例えば、ポリエーテルスルホンまたはポリビニリデンジフルオリド）を用いて、不活性材料（例えば、ステンレススチールまたはガラス）から作られた滅菌容器中、無菌条件下での濾過により滅菌した。
ＩＶ．工程ＩＩＩ．ｂからの溶液を、ストッパおよびフランジを備えたフリップオフキャップで密閉された滅菌バイアル中に、無菌条件下で充填した。
Ｖ．工程ＩＶからの容器を、粗汚染物質、無傷の密封、および眼に見える粒子について検査した。
ＶＩ．工程Ｖからの検査された容器を、好適な容器（例えば、カードボードボックス）
中にさらに包装した。 The production method and process control of Formulation 14 are shown in the flow diagram in FIG. Batch production included the following steps:
I. The sodium citrate dihydrate was dissolved in water for injection with stirring in a vessel made of an inert material (eg, stainless steel or glass) until completely dissolved. If necessary, the pH value was adjusted to 5.5 with dilute hydrochloric acid (eg, 0.1 M hydrochloric acid) and / or sodium hydroxide solution (eg, 0.1 M sodium hydroxide).
II. The lead antibody, mannitol, and polysorbate 20 were diluted in buffer solution from step 1 with stirring in a vessel made of an inert material (eg, stainless steel or glass) until completely dissolved. If necessary, the pH value was adjusted to 5.5 with dilute hydrochloric acid (eg, 1M hydrochloric acid) or sodium hydroxide (eg, 1M sodium hydroxide). The buffer solution (remaining) from step 1 was added to adjust the final weight.
III. a) Preliminary filtration:
The solution from step II was filtered under sterile conditions using a sterilized compatible membrane filter with a nominal pore size of 0.2 μm (eg, polyether sulfone or polyvinylidene difluoride).
b) Sterilization by filtration:
Step III. The solution from a is made from an inert material (eg, stainless steel or glass) using a sterile compatible membrane filter (eg, polyether sulfone or polyvinylidene difluoride) with a nominal pore size of 0.2 μm. It was sterilized by filtration under sterile conditions in the sterilized container.
IV. Step III. The solution from b was filled under sterile conditions into sterile vials sealed with flip-off caps with stoppers and flanges.
V. Containers from Step IV were inspected for crude contaminants, intact seals, and visible particles.
VI. The container inspected from step V can be a suitable container (eg, a cardboard box).
Further wrapped inside.

さらに、ＤＬＳを用いて、抗体モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。図１０に示されるように、凝集体はクエン酸バッファー中には見られなかった。しかしながら、図７および８に示されるように、ＰＢＳ中では凝集体が見られた。より高い抗体濃度に起因して、ＰＢＳ中の試料と比較して、２８ｎｍまでのＺＡｖｅの増加が観察された。 In addition, DLS was used to determine the hydrodynamic diameter of antibody monomers and potential soluble aggregates. As shown in FIG. 10, no aggregates were found in the citrate buffer. However, aggregates were found in PBS, as shown in FIGS. 7 and 8. Due to the higher antibody concentration, an increase in ZAve up to 28 nm was observed compared to the sample in PBS.

〔実施例８〕
皮下抗体製剤の安定性プロファイル
実施例７の臨床バッチ（バッチ２）の安定性プロファイルを、ＩＣＨの指針に従う長期および加速試験条件下での保存について評価した。ストッパ（フルオロポリマー被覆ブロモブチル）およびフランジ（ポリプロピレン）を備えたフリップオフキャップで密閉される２ｍＬの無色透明のバイアル（Ｉ型ガラス）中で試料を包装および保存した。 [Example 8]
Stability Profile of Subcutaneous Antibody Preparation The stability profile of the clinical batch (Batch 2) of Example 7 was evaluated for storage under long-term and accelerated test conditions according to ICH guidelines. Samples were packaged and stored in 2 mL clear colorless vials (type I glass) sealed with flip-off caps with stoppers (fluoropolymer coated bromobutyl) and flanges (polypropylene).

安定性の間に以下の試験：外観（透明度、色）、アッセイ（抗原ＥＬＩＳＡ、ＵＶ）、純度（ＳＥＣ、還元および非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、分子完全性（非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、電荷不均一性（弱陽イオン交換クロマトグラフィー、等電点電気泳動）、ｐＨ、無菌性、細菌内毒素、粒子状物質（眼に見える、および眼に見えない粒子）、および密閉完全性を実施した。 The following tests during stability: appearance (transparency, color), assay (antigen ELISA, UV), purity (SEC, SDS-PAGE under reducing and non-reducing conditions), molecular integrity (under non-reducing conditions). SDS-PAGE), charge heterogeneity (weak cation exchange chromatography, isoelectric focusing), pH, sterility, bacterial endotoxins, particulate matter (visible and invisible particles), And sealed completeness was performed.

試料を、逆転させた、および直立した位置で保存した。逆転させた保存の結果を、よりストリンジェントな条件として提示した。−２０℃、＋５℃および＋２５℃での安定性データを、それぞれ、表１８〜２０に提示する。長期試験条件下での保存の物理的、化学的および生物学的特性に関する調査により、５℃での医薬品の良好な安定性が確認された（表１９を参照されたい）。加速試験条件下（＋２５℃）では、サイズ排除クロマトグラフィーにより純度のほんのわずかな低下が検出された（表２０を参照されたい）。従って、医薬品は光から保護して＋２℃〜＋８℃で保存するべきであると結論付けられた。 Samples were stored in inverted and upright positions. The results of inverted preservation are presented as more stringent conditions. Stability data at −20 ° C., + 5 ° C. and + 25 ° C. are presented in Tables 18-20, respectively. Investigations into the physical, chemical and biological properties of storage under long-term test conditions confirmed good drug stability at 5 ° C (see Table 19). Under accelerated test conditions (+ 25 ° C.), size exclusion chromatography detected a slight decrease in purity (see Table 20). Therefore, it was concluded that the drug should be protected from light and stored at + 2 ° C to + 8 ° C.

〔実施例９〕
皮下投与のための超高濃度抗体製剤の開発
実施例７における最大１５０ｍｇ／ｍＬの抗体濃度に関するクエン酸緩衝製剤の結果の成功に基づいて、皮下投与にとって好適なより高濃度（最大２５０ｍｇ／ｍｌ）の抗体製剤を開発した。 [Example 9]
Development of Ultra-High Concentration Antibody Preparations for Subcutaneous Administration Higher concentrations suitable for subcutaneous administration (up to 250 mg / ml) based on the successful results of citrate buffered preparations for antibody concentrations up to 150 mg / mL in Example 7. We have developed an antibody preparation for.

予備データにより、１５０ｍｇ／ｍＬを超える抗体濃度の製剤は、製剤の使用に影響するより高い粘度をもたらし得ることが示された。 Preliminary data have shown that formulations with antibody concentrations above 150 mg / mL can result in higher viscosities that affect the use of the formulation.

表２１に見られるように、粘度は抗体濃度の低下と共に減少するが、製剤１４と共に製剤化されたより高い濃度でも依然として許容される範囲にある。他の全てのパラメータは、超高濃度によって影響されないか、またはほんのわずかに影響されると考えられた。 As seen in Table 21, the viscosity decreases with increasing antibody concentration, but higher concentrations formulated with Formulation 14 are still acceptable. All other parameters were considered to be unaffected or only slightly affected by ultra-high concentrations.

表２２に示されるように、抗体濃度は、長期およびストレス条件での同一の１カ月安定性データにより示された、製剤の安定性に影響しなかった。 As shown in Table 22, antibody concentrations did not affect formulation stability as shown by the same 1-month stability data under long-term and stress conditions.

抗ＣＸＣＲ５（２０ｍｇ／ｍＬ）予備製剤化試験
配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５抗体（「リードＣＸＣＲ５抗体」）を実施例１０〜１
２において用いて、２０ｍｇ／ｍＬの製剤に関する最適製剤化条件を決定した。 Anti-CXCR5 (20 mg / mL) Preformation Test A humanized IgG4 anti-CXCR5 antibody (“lead CXCR5 antibody”) containing a heavy chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26. Examples 10 to 1
Used in 2, the optimal formulation conditions for the 20 mg / mL formulation were determined.

リード抗体は、ヒトＣＸＣＲ５に特異的なヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）であり、半分子（Ｓ２４１Ｐ）およびエフェクター機能（Ｌ２４８Ｅ）の減少を目的とする２個のアミノ酸置換を含有する遺伝子操作されたＩｇＧ４フレームワークを含む。リードＣＸＣＲ５抗体タンパク質構造は、ジスルフィド架橋により連結された、それぞれ約２４ｋＤａの分子量を有する２つのカッパ軽鎖と、それぞれ約４８ｋＤａの分子量を有する２つのＩｇＧ４重鎖とから構成される。それぞれの軽鎖は２１９個のアミノ酸残基からなり、それぞれの重鎖は４３７個のアミノ酸残基からなる。 The read antibody is a humanized monoclonal antibody (mAb) specific for human CXCR5 and is a genetically engineered IgG4 containing two amino acid substitutions aimed at reducing the half molecule (S241P) and effector function (L248E). Includes framework. The lead CXCR5 antibody protein structure is composed of two kappa light chains, each having a molecular weight of about 24 kDa, linked by disulfide bridges and two IgG4 heavy chains, each having a molecular weight of about 48 kDa. Each light chain consists of 219 amino acid residues and each heavy chain consists of 437 amino acid residues.

実施例１０〜１２のデータは、リードＣＸＣＲ５抗体ならびに静脈内および皮下投与のためのその医薬品のための予備製剤化活動の間に収集されたものであった。リード抗体はＩｇＧ４サブクラスの抗体であり、凝集し、粒子を形成しやすいため、予備製剤化試験の目的は、リードＣＸＣＲ５抗体の凝集挙動および半分子を形成するその傾向に特に重点を置いて、２０ｍｇ／ｍＬの標的濃度を有する緩衝化リードＣＸＣＲ５抗体溶液の良好な安定性を提供することであった。 The data for Examples 10-12 were collected during the pre-formulation activity for the lead CXCR5 antibody and its drug for intravenous and subcutaneous administration. Because lead antibodies are IgG4 subclass antibodies and are prone to agglutination and particle formation, the purpose of the pre-formulation test was to focus on the agglutination behavior of the lead CXCR5 antibody and its tendency to form half molecules, 20 mg. It was to provide good stability of buffered lead CXCR5 antibody solution with a target concentration of / mL.

材料
原薬（ＤＳ）
リードＣＸＣＲ５抗体バッチＲＳＮ０１５１を、５．１３ｍｇ／ｍＬの濃度でＰＢＳ ｐＨ７．２中に製剤化した。 Material API (DS)
Reed CXCR5 antibody batch RSN0151 was formulated in PBS pH 7.2 at a concentration of 5.13 mg / mL.

添加剤
表２３は、予備製剤化試験中に用いられた添加剤を示す。 Additives Table 23 shows the additives used during the preformation test.

方法
以下の方法を用いて、実験製剤およびリードＣＸＣＲ５抗体を含有する本発明の製剤を製造した。 Method The following method was used to produce the experimental formulation and the formulation of the invention containing the lead CXCR5 antibody.

バッファーの製造および組成
全てのバッファーは、一定に撹拌して対応する添加剤を溶解することにより製造した。０．１Ｍ ＨＣｌまたは０．１Ｍ ＮａＯＨを用いてｐＨを調整した。全てのバッファーの全体濃度は１０ｍＭであった。 Preparation and Composition of Buffers All buffers were prepared by dissolving the corresponding additives with constant stirring. The pH was adjusted with 0.1M HCl or 0.1M NaOH. The total concentration of all buffers was 10 mM.

添加剤ストック溶液の製造および組成
全てのストック溶液を、一定に撹拌して添加剤を溶解することにより製造した。濃度を、重量／重量（ｗ／ｗ）として与えた。 Preparation and composition of additive stock solutions All stock solutions were prepared by dissolving the additives with constant stirring. The concentration was given as weight / weight (w / w).

ＵＦ／ＤＦ−小規模
ＵＦ／ＤＦ実験を、リン酸バッファーを除去し、それを適切なバッファーで置きかえ、
濃度を増加させるために、Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ膜および３０ｋＤａカットオフを備えたＶｉｖａｓｐｉｎユニット（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実施した。これらのユニットを一般的な実験室用遠心分離機（Ｍｕｌｔｉｆｕｇｅ ３Ｓ、Ｈａｅｒｅｕｓ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に入れ、＋５℃、２０００ｒｐｍ（８６０Ｇ、ローター半径１９２ｍｍ）で遠心分離した。 UF / DF-Small UF / DF experiments, remove phosphate buffer and replace it with appropriate buffer,
To increase the concentration, it was performed using a Vivaspin unit (Sartorius Stedim, Göttingen, Germany) with a Hydrosart membrane and a 30 kDa cutoff. These units were placed in a general laboratory centrifuge (Multifuge 3S, Haereus, Germany) and centrifuged at + 5 ° C., 2000 rpm (860 G, rotor radius 192 mm).

ＵＦ／ＤＦ−大規模
ＵＦ／ＤＦ実験を、リン酸バッファーを除去し、それを適切なバッファーで置きかえ、濃度を増加させるために、Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ膜および３０ｋＤａカットオフを備えたＶｉｖａｆｌｏｗユニット（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて実施した。この装備を無菌条件下でクリーンベンチに入れ、室温でプロセスを実施した。 UF / DF-Large-scale UF / DF experiments, Vivaflow unit (Sartorius Stedim, Göttingen) with Hydrosart membrane and 30 kDa cutoff to remove phosphate buffer and replace it with appropriate buffer to increase concentration. , Germany). The equipment was placed on a clean bench under sterile conditions and the process was performed at room temperature.

試料の滅菌濾過
全ての試料、溶液、バッファーなどを、Ｓａｒｔｐｏｒｅ−２膜を用いて滅菌濾過（０．２２μｍ）した。試料を滅菌ボトルまたはバイアル中に濾過し、クリーンベンチの内部で無菌条件下で密閉して、微生物汚染を防止した。 Sterilized filtration of samples All samples, solutions, buffers, etc. were sterilized (0.22 μm) using a Saltpore-2 membrane. Samples were filtered into sterile bottles or vials and sealed inside a clean bench under sterile conditions to prevent microbial contamination.

機械的ストレス試験
室温で２．５時間にわたる３５０ｒｐｍ／ｍｉｎの撹拌速度での機械的ストレスを、２６ｍｍ距離を有する水平実験室振とう器（Ｂｕｈｌｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙからの振とう器およびインキュベーションフード）を用いて実施した。２Ｒバイアルに、約２．５ｃｍ³
のヘッドスペースで溶液１ｍＬを充填した。 Mechanical stress test Mechanical stress at a stirring speed of 350 rpm / min for 2.5 hours at room temperature was performed using a horizontal laboratory shaker (shaker and incubation hood from the Buhler Company) at a distance of 26 mm. did. Approximately 2.5 cm ³ in a 2R vial
1 mL of solution was filled in the headspace of.

機械的ストレス試験を計画し、１回目の予備製剤化試験の間に実施した。分析結果はバッファー選択またはｐＨ選択の間に、熱ストレス試験と比較していかなる追加情報も示さなかったため、この試験は界面活性剤選択の間にのみ用いた。 A mechanical stress test was planned and performed during the first preformation test. This test was used only during detergent selection, as the analysis results did not show any additional information during buffer selection or pH selection compared to the thermal stress test.

熱ストレス試験
熱ストレスを、予備製剤化プログラムの全工程の間に加速ストレス試験として用いた。試験に応じて、試料を＋４０℃で２４ｈ、７日間、または３カ月間保存した。 Thermal stress test Thermal stress was used as an accelerated stress test during the entire process of the preformation program. Samples were stored at + 40 ° C. for 24 hours, 7 days, or 3 months, depending on the test.

製剤の充填および完了における分析方法
以下の分析方法を、以下の実施例において用いた。 Analytical Methods for Filling and Completing Formulations The following analytical methods were used in the following examples.

外観
抗体溶液の外観を視覚的にチェックし、カメラで写真を撮影することによりさらに文書化した。 Appearance The appearance of the antibody solution was visually checked and further documented by taking a picture with a camera.

ｐＨ
全てのｐＨ測定を、微小電極を有するｐＨメーターを用いて実施した。 pH
All pH measurements were performed using a pH meter with microelectrodes.

ＵＶを用いる濃度
全ての抗体溶液のタンパク質濃度を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ ＮＤ１０００を用いてバッファーに対して測定した。５ｍｇ／ｍＬに近いか、またはそれより低いタンパク質濃度を１：３に希釈し、２０ｍｇ／ｍＬに近い、より高いタンパク質濃度を１：２０に希釈した後、２１５ｎｍおよび２８０ｎｍで吸光度を測定した。 Concentrations with UV The protein concentrations of all antibody solutions were measured against buffer using Nanodrop ND1000. Protein concentrations close to or below 5 mg / mL were diluted 1: 3, and higher protein concentrations close to 20 mg / mL were diluted 1:20, after which absorbance was measured at 215 nm and 280 nm.

動的光散乱（ＤＬＳ）
分子の流体力学直径を、レーザー光散乱を用いて測定した。混濁が観察された場合、分
析の前に試料を滅菌濾過したところ、可溶性凝集体のみを検出することができた。 Dynamic Light Scattering (DLS)
The hydrodynamic diameter of the molecule was measured using laser light scattering. When turbidity was observed, the sample was sterile filtered prior to analysis and only soluble aggregates could be detected.

チオフラビン−Ｔ試験
いくつかの予備製剤化試料の蛍光測定を、Ｔｅｃａｎ ＧＥＮｉｏｓ Ｐｌｕｓ、ＸＦＬＵＯＲ４を用いて実行した。試料に機械的にストレスをかけた（Ｂｕｈｌｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙからの振とう器およびインキュベーターフード中、３７℃で４ｈ、撹拌速度３００単位／分および２６ｍｍ距離）。チオフラビン−Ｔ蛍光スペクトルを、室温で測定した。１０μｌのチオフラビン−Ｔ溶液（超純水中で１０．１ｍＭ）を、製剤１ｍｌに添加し、穏やかに混合した。次いで、混合物を黒色のＥｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｖ型カップに分注した後、９６穴プレート中に分注した（ウェルあたり１００μＬ）。 Thioflavin-T test Fluorescence measurements of several pre-prepared samples were performed using Tecan GENios Plus, XFLUOR4. Samples were mechanically stressed (in a shaker and incubator hood from the Buhler Company, 4 h at 37 ° C., agitation rate 300 units / min and 26 mm distance). The thioflavin-T fluorescence spectrum was measured at room temperature. 10 μl of Thioflavin-T solution (10.1 mM in ultrapure water) was added to 1 ml of the formulation and mixed gently. The mixture was then dispensed into a black Eppendorf V-shaped cup and then dispensed into a 96-well plate (100 μL per well).

チオフラビン−Ｔ試験を、予備製剤化活動の開始時に用いて、不溶性凝集体を検出した。しかし、これらの凝集体は溶液の混濁として視覚的に見ることができるため、この方法は全予備製剤化プログラムについて用いなかった。 The Thioflavin-T test was used at the beginning of the preformation activity to detect insoluble aggregates. However, this method was not used for all preformation programs because these aggregates can be visually viewed as solution turbidity.

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
予備製剤化試料のアリコートを、ＭｉｃｒｏｃａｌからのＶＰＣａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣを用いるＤＳＣにより検査し、２ｓｅｃのフィルター時間を用いて９０℃／ｈで自動サンプリング機器中で走査した。４００μｌの試料を９６穴プレート中に入れ、アンフォールディング温度Ｔｍについて分析した。 Differential scanning calorimetry (DSC)
Aliquots of the pre-prepared sample were examined by DSC with VPCappily DSC from Microcal and scanned in an automatic sampling instrument at 90 ° C./h with a filter time of 2 sec. A 400 μl sample was placed in a 96-well plate and analyzed for unfolding temperature Tm.

オスモル濃度
オスモル濃度を、自動化Ｋｎａｕｒ Ｏｓｍｏｍｅｔｅｒを用いて測定した。 Osmol concentration Osmol concentration was measured using an automated Knaur Osmometer.

密度
製剤の密度を、落球粘度計ＤＭＡ４５００ Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒを用いて測定した。 Density The density of the formulation was measured using a falling ball viscometer DMA4500 Antonio Par.

ＦＦの生物分析における分析方法
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
抗体のオリゴマー／ダイマーを、サイズ排除クロマトグラフィーを用いることにより定量した。試験を、ＳＵＰＥＲＤＥＸ２００ １０／３００カラムを用いるアイソクラチックＨＰＬＣにより実行した。 Analytical Method in Biological Analysis of FF Size Exclusion Chromatography (SEC)
Antibody oligomers / dimers were quantified using size exclusion chromatography. The test was performed by isocratic HPLC using a SUPERDEX200 10/300 column.

還元的および非還元的ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）を用いて、分子完全性（例えば、半分子）および分解産物の外観を分析した。この電気泳動分析を、還元的および非還元的条件下で１５％均一ゲルを用いて実施した。タンパク質を、電気泳動分離後に銀染色を用いて可視化した。 Reducing and non-reducing SDS-PAGE
Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was used to analyze molecular integrity (eg, hemimolecules) and degradation product appearance. This electrophoretic analysis was performed using a 15% uniform gel under reducing and non-reducing conditions. Proteins were visualized using silver staining after electrophoresis separation.

ＷＣＸ
弱陽イオン交換クロマトグラフィー（ＷＣＸ）を用いて、抗体の電荷不均一性をモニタリングした。塩基性、中性、および酸性アイソフォームの割合を報告した。試験を、ＰｒｏＰａｃ ＷＣＸ１０カラムを用いる不連続ＨＰＬＣにより実行した。 WCX
Weak cation exchange chromatography (WCX) was used to monitor the charge heterogeneity of the antibody. The proportions of basic, neutral, and acidic isoforms were reported. The test was performed by discontinuous HPLC using a ProPac WCX10 column.

抗原−ＥＬＩＳＡ
抗原−ＥＬＩＳＡを実施して、抗体の機能を決定した。ＣＸＣＲ５抗原の２８マーペプチドへの結合特性を、抗体の現在の基準と比較してモニタリングした。この効力を、相対的ＥＣ５０として報告した。 Antigen-ELISA
Antigen-ELISA was performed to determine antibody function. The binding properties of the CXCR5 antigen to the 28-mer peptide were monitored in comparison with the current criteria for the antibody. This efficacy was reported as a relative EC50.

等電点電気泳動（ＩＥＦ）
ＩＥＦを実施した。 Isoelectric focusing (IEF)
IEF was carried out.

保存
別途記載しない限り、全てのバッファー溶液、添加剤溶液、および試料を＋５℃で保存した。 Storage Unless otherwise stated, all buffer solutions, additive solutions, and samples were stored at + 5 ° C.

調製および分析された全ての製剤の概要
以下の表２４は、実施例１０〜１２において調製および分析された全ての製剤の概要を示す。それぞれの製剤は、リードＣＸＣＲ５抗体を含有していた。ＰＢＳはリン酸緩衝生理食塩水を表す。ＰＢはリン酸バッファーを表す。ＰＳはポリソルベートを表す。ＬＡはリードＣＸＣＲ５抗体を表す。 Summary of All Formulations Prepared and Analyzed Table 24 below outlines all formulations prepared and analyzed in Examples 10-12. Each formulation contained a lead CXCR5 antibody. PBS stands for Phosphate Buffered Saline. PB represents a phosphate buffer. PS represents polysorbate. LA represents the lead CXCR5 antibody.

〔実施例１０〕
リン酸バッファー製剤
以下は、リン酸バッファー中のリードＣＸＣＲ５抗体原薬の特性評価の結果に関する概説を与える。 [Example 10]
Phosphate Buffer Preparations The following provides an overview of the results of characterization of the lead CXCR5 antibody drug substance in phosphate buffers.

ＩＥＦ
リードＣＸＣＲ５抗体のｐＩ（等電点）は７．６と理論的に算出され、これを変性等電点電気泳動により確認した（７．６〜８．４のｐＩ）。図１１を参照されたい。 IEF
The pI (isoelectric point) of the lead CXCR5 antibody was theoretically calculated to be 7.6, which was confirmed by denatured isoelectric focusing (pI of 7.6 to 8.4). See FIG.

ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて、抗体モノマーの分子量、潜在的な凝集体、または半分子の存在を決定した。図１２は、還元的および非還元的条件下で異なる原薬バッチを比較するためのＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの例を示す。 SDS-PAGE
SDS-PAGE was used to determine the molecular weight of antibody monomers, the presence of potential aggregates, or half molecules. FIG. 12 shows an example of an SDS-PAGE gel for comparing different API batches under reducing and non-reducing conditions.

ＥＬＩＳＡ
図１３は、リード抗体の抗原結合活性を決定するためのＥＬＩＳＡグラフの例を示す。 ELISA
FIG. 13 shows an example of an ELISA graph for determining the antigen binding activity of a lead antibody.

ＳＥＣ
図１４に示されるように、サイズ排除クロマトグラフィーは、高分子量タンパク質（ＨＭＷＰ）、例えば、ダイマー／オリゴマーまたは凝集体および低分子量タンパク質（ＬＭＷＰ）または分解産物を検出した。リードＣＸＣＲ５抗体バッチは、９９％の純度のモノマー含量を有していた。 SEC
As shown in FIG. 14, size exclusion chromatography detected high molecular weight proteins (HMWP), such as dimers / oligomers or aggregates and low molecular weight proteins (LMWP) or degradation products. The Reed CXCR5 antibody batch had a monomer content of 99% purity.

ＷＣＸ
図１５に示されるリード抗体に関する弱陽イオン交換クロマトグラフィーは、電荷不均一性を示す。安定性試験の間に、酸性ピークの配置が変化し、塩基性アイソフォームの割合が増加した。リードＣＸＣＲ５抗体は、１４／８５／１％の酸性／中性／塩基性アイソフォームの分布を有していた。 WCX
Weak cation exchange chromatography on the read antibody shown in FIG. 15 shows charge heterogeneity. During the stability test, the arrangement of acidic peaks changed and the proportion of basic isoforms increased. The lead CXCR5 antibody had a distribution of 14/85/1% acidic / neutral / basic isoforms.

動的光散乱
図１６に示されるように、ＤＬＳを用いて、抗体モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を決定した。 Dynamic Light Scattering As shown in FIG. 16, DLS was used to determine the hydrodynamic diameter of antibody monomers and potential soluble aggregates.

結論として、リード抗体はＰＢＳ中で安定であり得るが、凝集体形成は剪断力または光ストレスによって容易に生成する。 In conclusion, lead antibodies can be stable in PBS, but aggregate formation is readily produced by shear or photostress.

さらに、ＰＢＳのｐＨは、リードＣＸＣＲ５抗体のｐＩに近い。従って、製剤はｐＩよりも少なくとも１段階下のｐＨで製剤化するべきである。 In addition, the pH of PBS is close to the pI of the lead CXCR5 antibody. Therefore, the formulation should be formulated at a pH at least one step below pI.

表２５は、リードＣＸＣＲ５抗体に関する３カ月安定性試験の結果を示す。リード抗体を異なる温度で保存し、１および３カ月後に分析した。 Table 25 shows the results of a 3-month stability test for the lead CXCR5 antibody. Reed antibodies were stored at different temperatures and analyzed after 1 and 3 months.

ＰＢＳ中で緩衝化されたリードＣＸＣＲ５抗体に関する３カ月安定性データは、＋５℃と−２０℃での保存で関連する変化を示さなかった。加速条件（＋２５℃）で３カ月後、有意な変化を観察することができた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析により分析されたように、さらなるバンドは、塩基性アイソフォームの増加および酸性アイソフォームの減少を示し、これは分解産物を示唆する。 Three-month stability data for the lead CXCR5 antibody buffered in PBS showed no relevant changes upon storage at + 5 ° C and -20 ° C. Significant changes could be observed after 3 months under accelerated conditions (+ 25 ° C). Further bands, as analyzed by SDS-PAGE and Western blot analysis, show an increase in basic isoforms and a decrease in acidic isoforms, suggesting degradation products.

〔実施例１１〕
バッファーおよびｐＨの最適化
ＰＢＳ ｐＨ７．２は、凍結／解凍サイクル後および凍結保存後に凝集および分解を示した。かくして、別のバッファーおよびより良好なｐＨ範囲を見つけることが必要であった。さらに、ｐＨシフトが起こるため、ＰＢＳは溶液の凍結にとって好適ではない。 [Example 11]
Buffer and pH optimization PBS pH 7.2 showed aggregation and degradation after freeze / thaw cycle and cryopreservation. Thus, it was necessary to find another buffer and a better pH range. In addition, PBS is not suitable for freezing the solution due to pH shifts.

様々なｐＨを有する３０種の異なるバッファーおよびバッファー系を用いて、最良のｐＨ範囲を選択した。これらの実験を、非常に小規模で実行し、集中的に分析した。 The best pH range was selected using 30 different buffers and buffer systems with different pH. These experiments were performed on a very small scale and analyzed intensively.

最良のバッファーおよびｐＨの選択スクリーニング−小規模（収量５ｍＬ）
分析結果を、表４０、表４１、表４２、および表４３にまとめる。 Best Buffer and pH Selective Screening-Small Scale (Yield 5 mL)
The analysis results are summarized in Table 40, Table 41, Table 42, and Table 43.

図１７および図１８に、熱ストレス後の２つの好適なバッファー系（酢酸塩およびヒスチジン）の外観を示す。さらなる評価のために、酢酸塩においてはｐＨ５．５およびヒスチジンにおいてはｐＨ５．０を選択した。対照として、図１９に、不適合バッファー系（ＴＲＩＳバッファー）の外観を示す。 17 and 18 show the appearance of two suitable buffer systems (acetate and histidine) after heat stress. For further evaluation, pH 5.5 was selected for acetate and pH 5.0 for histidine. As a control, FIG. 19 shows the appearance of a non-conforming buffer system (TRIS buffer).

以下のバッファーを選択して、より大規模なＵＦ／ＤＦにおいて試験した：
・クエン酸塩１０ｍＭ、ｐＨ６
・酢酸塩１０ｍＭ、ｐＨ５．５
・コハク酸塩１０ｍＭ、ｐＨ５
・ヒスチジン１０ｍＭ、ｐＨ５
・アルギニン１０ｍＭ、ｐＨ６。 The following buffers were selected and tested in larger UF / DF:
・ Citric acid 10 mM, pH 6
-Acetate 10 mM, pH 5.5
・ Succinate 10 mM, pH 5
・ Histidine 10 mM, pH 5
-Arginine 10 mM, pH 6.

最良のバッファーおよびｐＨの選択スクリーニング−大規模（収量約２０ｇ）
最良のバッファーおよびｐＨを選択した後、それぞれのバッファー系中のより大量のリードＣＸＣＲ５抗体を、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｖｉｖａｆｌｏｗシステムを用いることにより調製した。それぞれのバッチを分析的に試験し、結果を以下に記載する。 Best buffer and pH selective screening-Large scale (yield about 20 g)
After selecting the best buffer and pH, a larger amount of read CXCR5 antibody in each buffer system was prepared using the Sartorius Vivaflow system. Each batch is analytically tested and the results are listed below.

クエン酸バッファー１０ｍＭ、ｐＨ６（ＬＡ＿０９＿０１６）
ＵＦ／ＤＦ工程は良好に機能し、ほんのわずかに濁った溶液が得られた；滅菌濾過中に困難に遭遇しなかった。ＤＬＳにより分析した場合、流体力学直径の増加は見られなかった。 Citric acid buffer 10 mM, pH 6 (LA_09_016)
The UF / DF process worked well and gave a slightly cloudy solution; no difficulties were encountered during sterile filtration. No increase in hydrodynamic diameter was observed when analyzed by DLS.

分析結果は、リードＣＸＣＲ５抗体バッチ材料と比較して、ダイマーの増加がなく、塩基性または酸性アイソフォームの変化がないことを示していた。表２６および図２０を参照されたい。 The results of the analysis showed no increase in dimer and no change in basic or acidic isoforms compared to the lead CXCR5 antibody batch material. See Table 26 and FIG.

酢酸バッファー１０ｍＭ、ｐＨ５．５（ＬＡ＿０９＿０１７）
ＵＦ／ＤＦ工程は良好に機能したが、濁った溶液が得られた；滅菌濾過中にフィルターが遮断された。 Acetic acid buffer 10 mM, pH 5.5 (LA_09_017)
The UF / DF process worked well, but a turbid solution was obtained; the filter was blocked during sterile filtration.

分析結果は、リードＣＸＣＲ５抗体バッチ材料と比較して、ダイマーの増加がなく、塩基性または酸性アイソフォームの変化がないことを示していた。表２７および図２１を参照されたい。 The results of the analysis showed no increase in dimer and no change in basic or acidic isoforms compared to the lead CXCR5 antibody batch material. See Table 27 and FIG.

コハク酸バッファー１０ｍＭ、ｐＨ５（ＬＡ＿０９＿０１８）
フィルターの遮断のため、ＵＦ／ＤＦ後の滅菌濾過を実施することは困難であった。１２ｇの収量は非常に少なかった。 Succinate buffer 10 mM, pH 5 (LA_09_018)
It was difficult to perform sterile filtration after UF / DF due to filter blockage. The yield of 12g was very low.

分析結果は、リードＣＸＣＲ５抗体バッチ材料と比較して、ダイマーがわずかに減少し、塩基性または酸性アイソフォームの変化がないことを示していた。機械的ストレス後に、ダイマー濃度はわずかに増加し、ＷＣＸにおける酸性アイソフォームのピークは塩基性アイソフォームが増加するにつれて減少した。表２８および図２２を参照されたい。 The results of the analysis showed that the dimer was slightly reduced and there was no change in basic or acidic isoforms compared to the lead CXCR5 antibody batch material. After mechanical stress, the dimer concentration increased slightly and the peak of acidic isoforms in WCX decreased as the basic isoforms increased. See Table 28 and FIG.

ヒスチジンバッファー１０ｍＭ、ｐＨ５（ＬＡ＿０９＿０１９）
フィルターの遮断のため、ＵＦ／ＤＦ後の滅菌濾過は実施することは困難であった。１０．５ｇの収量は非常に少なかった。 Histidine buffer 10 mM, pH 5 (LA_09_019)
Sterilization after UF / DF was difficult to perform due to filter blockage. The yield of 10.5 g was very low.

分析結果は、リードＣＸＣＲ５抗体バッチ材料と比較して、ダイマーがわずかに減少し、塩基性または酸性アイソフォームの変化がないことを示していた。機械的ストレス後に、ダイマー濃度はわずかに増加し、ＷＣＸにおける酸性アイソフォームのピークは塩基性アイソフォームが増加するにつれて減少した。表２９および図２３を参照されたい。 The results of the analysis showed that the dimer was slightly reduced and there was no change in basic or acidic isoforms compared to the lead CXCR5 antibody batch material. After mechanical stress, the dimer concentration increased slightly and the peak of acidic isoforms in WCX decreased as the basic isoforms increased. See Table 29 and FIG.

アルギニンバッファー１０ｍＭ、ｐＨ６（ＬＡ＿０９＿０２０）
ＵＦ／ＤＦ後の滅菌濾過は実施することが困難であった。ＤＬＳは、２１．０８ｎｍの流体力学直径でもたらされたピークを示したが、これはダイマー形成を示し得る。 Arginine buffer 10 mM, pH 6 (LA_09_020)
Sterilization filtration after UF / DF was difficult to perform. DLS showed a peak resulting in a hydrodynamic diameter of 21.08 nm, which may indicate dimer formation.

分析結果は、リードＣＸＣＲ５抗体バッチ中の０．２９％からアルギニン中の０．４９％までのダイマーのわずかな増加を示した。機械的ストレス後、０．６１％のダイマーが見出され、ＷＣＸにおける塩基性アイソフォームの増加が検出された。表３０および図２４を参照されたい。 The results of the analysis showed a slight increase in dimer from 0.29% in the lead CXCR5 antibody batch to 0.49% in arginine. After mechanical stress, 0.61% dimer was found and an increase in basic isoforms in WCX was detected. See Table 30 and FIG.

結論として、５つのバッチのうちの３つが、２０ｍｇ／ｍｌ濃度のリードＣＸＣＲ５抗体と適合する：
・クエン酸塩ｐＨ６．０
・酢酸塩ｐＨ５．５
・ヒスチジンｐＨ５．０。
これらのバッチを、適合性および安定性に関してより詳細に特性評価した。 In conclusion, 3 out of 5 batches are compatible with the 20 mg / ml concentration of lead CXCR5 antibody:
・ Citric acid pH 6.0
・ Acetate pH 5.5
-Histidine pH 5.0.
These batches were characterized in more detail with respect to suitability and stability.

〔実施例１２〕
添加剤との適合性
上記のバッチの全部を、界面活性剤との適合性試験のために用いた。適合性試験を、リードＣＸＣＲ５抗体および４つの選択されたバッファーを用いて実施した。コハク酸塩ｐＨ５．０およびアルギニンｐＨ６．０は、リードＣＸＣＲ５抗体と適合しないため、これらのバッファーは添加剤についてこれ以上試験しなかった。添加剤を以下のように分類した：
・界面活性剤
・糖
・塩
・その他（アミノ酸、保存剤）。
機械的ストレス（撹拌速度３５０／ｍｉｎ、２．５ｈ、室温）を適用して、界面活性剤の効果を試験し、熱ストレス（＋４０℃、１週間）を用いて他の全ての添加剤を試験した。 [Example 12]
Compatibility with Additives All of the above batches were used for compatibility testing with surfactants. Compatibility testing was performed with the lead CXCR5 antibody and four selected buffers. Since succinate pH 5.0 and arginine pH 6.0 are incompatible with the lead CXCR5 antibody, these buffers were not further tested for additives. Additives were classified as follows:
・ Surfactants, sugars, salts, etc. (amino acids, preservatives).
Mechanical stress (stirring rate 350 / min, 2.5h, room temperature) is applied to test the effect of the surfactant and thermal stress (+ 40 ° C, 1 week) is used to test all other additives. did.

界面活性剤
界面活性剤の型（ＬＡ＿０８＿００１）および界面活性剤濃度（ＬＡ＿０９＿００３；０．０１％、０．０５％および０．１％）の選択に関する適合化試験は、眼に見える凝集体を防止するには０．０１％の濃度で十分であることを示した。以下の界面活性剤：ＰＶＰ Ｋ１２およびＫ１７は両方とも機械的ストレスを印加する前に混濁を示したため、リードＣＸＣＲ５抗体にとって好適ではなかった。さらに、ドデシル硫酸ナトリウムのようなイオン性界面活性剤がリードＣＸＣＲ５抗体タンパク質溶液と適合しないことが示された。 Surfactant Tailoring tests for the selection of surfactant type (LA_08_001) and surfactant concentration (LA_09_003; 0.01%, 0.05% and 0.1%) prevent visible aggregates. It was shown that a concentration of 0.01% was sufficient. The following surfactants: PVP K12 and K17 were both unsuitable for the lead CXCR5 antibody as they showed turbidity before applying mechanical stress. Furthermore, it has been shown that ionic detergents such as sodium dodecyl sulfate are incompatible with the lead CXCR5 antibody protein solution.

例として、図２５は、機械的ストレス後の、および界面活性剤を含まない溶液と比較した、様々な界面活性剤を含む異なるクエン酸緩衝溶液の外観を示す。分析結果を、表４４および表４５にまとめる。 As an example, FIG. 25 shows the appearance of different citrate buffer solutions containing various surfactants after mechanical stress and compared to detergent-free solutions. The analysis results are summarized in Tables 44 and 45.

他の添加剤
＋４０℃で１週間の熱ストレスおよび分析決定の後、様々なバッファー系におけるリードＣＸＣＲ５抗体と適合する添加剤の選択を得ることができた。 Other Additives After 1 week of heat stress and analytical decisions at + 40 ° C., a selection of additives compatible with the lead CXCR5 antibody in various buffer systems could be obtained.

利用可能な試料容量がほんの少量であったため、いくつかの添加剤は４つのバッファー系の全部において試験することができなかった。 Some additives could not be tested on all four buffer systems due to the small amount of sample volume available.

全ての分析データを再検討した後、表３１中の添加剤はリードＣＸＣＲ５抗体と適合すると同定された。これらの添加剤は、ＳＥＣおよびＷＣＸにより分析されたダイマー、ＨＭＷＰまたは塩基性アイソフォームの有意な増加を示さなかった。 After reviewing all analytical data, the additives in Table 31 were identified as compatible with the lead CXCR5 antibody. These additives did not show a significant increase in dimers, HMWP or basic isoforms analyzed by SEC and WCX.

全ての流体力学直径測定は、鋭いモノマーピークを示しており、好適な添加剤のＴｍは対応するバッファー系中のリードＣＸＣＲ５抗体と比較して低下していなかった。全ての分析データを、表４６、表４７、表４８および表４９にまとめた。 All hydrodynamic diameter measurements showed sharp monomer peaks, and the Tm of the suitable additive was not reduced compared to the lead CXCR5 antibody in the corresponding buffer system. All analytical data are summarized in Table 46, Table 47, Table 48 and Table 49.

結論として、界面活性剤との適合性試験は、ポリソルベート２０が、２０ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体と組み合わせた全ての選択されたバッファーにとって好適であることを明確に示す。界面活性剤は機械的ストレスの間、粒子の形成を防いだ。ほぼ全ての他の界面活性剤はＨＭＷＰの増加をもたらした。 In conclusion, detergent compatibility studies clearly show that polysorbate 20 is suitable for all selected buffers in combination with 20 mg / mL lead CXCR5 antibody. Surfactants prevented the formation of particles during mechanical stress. Almost all other surfactants resulted in an increase in HMWP.

以下の添加剤を選択して、異なるプロトタイプ製剤を製剤化した：ＮａＣｌ、トレハロース（スクロースは安定性に関してトレハロースと多かれ少なかれ同等である）、およびアルギニン−ＨＣｌ。 The following additives were selected to formulate different prototype formulations: NaCl, trehalose (sucrose is more or less equivalent to trehalose in terms of stability), and arginine-HCl.

３カ月のプロトタイプ安定性試験
リードＣＸＣＲ５抗体の製剤開発を支援するために、１２種の異なるプロトタイプ製剤
を製造し、異なる条件（−２０℃、＋５℃および＋４０℃）で３カ月間、安定させた。 3-Month Prototype Stability Test To support the development of the lead CXCR5 antibody formulation, 12 different prototype formulations were produced and stabilized under different conditions (-20 ° C, + 5 ° C and + 40 ° C) for 3 months. ..

以前に記載のバッファー、ｐＨおよび添加剤スクリーニングに基づいて、３つの異なるバッファー系を選択した。 Three different buffer systems were selected based on the buffer, pH and additive screening previously described.

クエン酸塩ｐＨ６．０（製剤番号ＬＡ＿０９＿０２７）、酢酸塩ｐＨ５．５（ＬＡ＿０９＿０２８）、およびヒスチジンｐＨ５．０（ＬＡ＿０９＿０２９）を、２０ｍｇ／ｍＬのリード抗体および４つの異なる添加剤の組合せを含む１０ｍＭバッファー溶液として用いた（表３２）。 Citrate pH 6.0 (formulation number LA_09_027), acetate pH 5.5 (LA_09_028), and histidine pH 5.0 (LA_09_029) in a 10 mM buffer solution containing 20 mg / mL lead antibody and a combination of four different additives. (Table 32).

これらの４つの添加剤は、添加剤スクリーニング後に有望な結果を示した。必要に応じて、オスモル濃度を調整するために、ＮａＣｌを選択し、等張化調整のために、および凍結乾燥選択肢のための糖を有するためにトレハロースを選択した。さらに、トレハロースは抗体を安定化させることができ、同様にアルギニン−ＨＣｌを安定剤として選択した。ポリソルベート２０は機械的ストレスの間の凝集を防止するのに役立つことがわかった。 These four additives showed promising results after additive screening. If necessary, NaCl was selected to adjust the osmolality, and trehalose was selected to have sugar for isotonicity adjustment and for lyophilization options. In addition, trehalose was able to stabilize the antibody and arginine-HCl was also selected as the stabilizer. Polysorbate 20 has been found to help prevent agglutination during mechanical stress.

以下の段落は、製剤開発のための最良のバッファー系および最良の添加剤を選択するための安定性試験の間にコンパイルされた選択されたデータを示す。表３３に、全ての保存条件、時点および分析方法をまとめた。 The following paragraphs show the selected data compiled during the stability test to select the best buffer system and the best additive for formulation development. Table 33 summarizes all storage conditions, time points and analytical methods.

不運にも、ＰＢＳバッファー中でのリードＣＸＣＲ５抗体の３カ月安定性データは、バッチの差異のため、および異なる加速条件のため、プロトタイプの安定性と同等ではなかった。 Unfortunately, the 3-month stability data for read CXCR5 antibody in PBS buffer was not comparable to prototype stability due to batch differences and different acceleration conditions.

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
図２６において、４つ全部のヒスチジン製剤中で３カ月の保存後に最大１０％のダイマー形成の増加を明確に見ることができる。酢酸製剤は、最大で６％のダイマー含量の増加を示した。４つ全部のクエン酸製剤において、ダイマー濃度は＋４０℃で３カ月後でも２％以下であった。 Size Exclusion Chromatography (SEC)
In FIG. 26, an increase in dimer formation of up to 10% can be clearly seen in all four histidine formulations after 3 months of storage. Acetic acid preparations showed up to 6% increase in dimer content. In all four citric acid preparations, the dimer concentration was less than 2% even after 3 months at + 40 ° C.

弱陽イオン交換クロマトグラフィー（ＷＣＸ）
中性、塩基性および酸性アイソフォームの決定は様々な製剤の安定性に関する良好な指標であるため、これらの方法を用いてＳＥＣデータを修正した。 Weak cation exchange chromatography (WCX)
The determination of neutral, basic and acidic isoforms is a good indicator of the stability of various formulations, so these methods were used to modify the SEC data.

図２７において、加速条件下ではリードＣＸＣＲ５抗体安定性についてヒスチジンがより悪いことを再度見ることができる。４つ全ての酢酸製剤について塩基性アイソフォームのわずかな増加を見ることができるが、興味深いことに、クエン酸製剤については、４つの製剤間の識別はここでは不可能である。さらに、図２８は、ヒスチジン製剤に関する中性アイソフォームの強力な減少、および酢酸製剤におけるわずかな減少を示す。再度、クエン酸塩中のリードＣＸＣＲ５抗体はほとんど影響されない。 In FIG. 27, it can be seen again that histidine is worse for lead CXCR5 antibody stability under accelerated conditions. A slight increase in basic isoforms can be seen for all four acetic acid preparations, but interestingly, for citric acid preparations, the distinction between the four preparations is not possible here. In addition, FIG. 28 shows a strong reduction in neutral isoforms for histidine preparations and a slight reduction for acetic acid preparations. Again, the lead CXCR5 antibody in citrate is largely unaffected.

ＳＤＳ−ＰＡＧＥ
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定の結果を、添付の結果表に見出すことができる。表３７〜６１を参照されたい。 SDS-PAGE
The results of SDS-PAGE measurements can be found in the attached results table. See Tables 37-61.

アンフォールディング温度（Ｔｍ）
アンフォールディング温度を用いて、異なる製剤の安定性を予測することができ、本明細書ではＭｉｃｒｏｃａｌの装備を用いて測定した。Ｔｍが高いほど、製剤はより有望であった。Ｔｍ測定の精度は＋／−０．４℃であった。 Unfolding temperature (Tm)
The unfolding temperature can be used to predict the stability of different formulations, which are measured herein using Microcal equipment. The higher the Tm, the more promising the formulation. The accuracy of Tm measurement was +/- 0.4 ° C.

クエン酸および酢酸製剤の間で、Ｔ０でのＴｍ間の差異はほぼ見られなかった。さらに、製剤Ａ、ＢおよびＤは、Ｃと比較してわずかにより高いＴｍを有していた。製剤Ａ、ＢおよびＤは全てトレハロースを含有する。 There was almost no difference between Tm at T0 between the citric acid and acetic acid preparations. In addition, formulations A, B and D had slightly higher Tm compared to C. Formulations A, B and D all contain trehalose.

ヒスチジン製剤は、全ての事例において有意により低いＴｍを有していた。 The histidine formulation had a significantly lower Tm in all cases.

ｐＨ
ｐＨは抗体溶液の安定性にとって主要な対象であり、重要であるため、ｐＨをモニタリングした。以下の図面は、加速された保存条件でのＴ０、Ｔ１、Ｔ２およびＴ３間のデルタｐＨを示す。 pH
Since pH is a major subject and important for the stability of antibody solutions, pH was monitored. The drawings below show the delta pH between T0, T1, T2 and T3 under accelerated storage conditions.

多くのｐＨ安定化製剤はクエン酸緩衝化されたもの、特に、製剤ＢおよびＤである（図２９）。リードＣＸＣＲ５抗体の酢酸緩衝溶液中では、ｐＨはより高い値に向かってシフトした（図３０）。ヒスチジン緩衝溶液中では、ｐＨはわずかに低下していた（図３１）。 Many pH-stabilized formulations are citrate-buffered, especially formulations B and D (FIG. 29). In the acetate buffer solution of the lead CXCR5 antibody, the pH shifted towards higher values (FIG. 30). The pH was slightly reduced in the histidine buffer solution (Fig. 31).

ＤＬＳ
モノマーおよび潜在的な可溶性凝集体の流体力学直径を、動的光散乱を用いて測定した。 DLS
The hydrodynamic diameters of the monomers and potential soluble aggregates were measured using dynamic light scattering.

加速条件（＋４０℃）での保存後にのみ、２００ｎｍ未満の可溶性凝集体を観察することができた。これらの凝集体は主に、保存の３週間後に、ヒスチジン緩衝化製剤ＬＡ＿０９＿０２９Ａ、Ｃ、Ｄにおいて生じた。 Only after storage under accelerating conditions (+ 40 ° C.) were soluble aggregates below 200 nm observable. These aggregates were primarily produced in the histidine buffered formulations LA_09_029A, C and D 3 weeks after storage.

クエン酸緩衝製剤は、製剤Ｃ中で３週間後、および製剤Ａ中での保存の６週間後に、ほんのわずかな凝集体を示した（図３２）。同様に、製剤Ｂ中での保存の３カ月後に、いくらかの凝集体を検出することができた。しかし、酢酸緩衝製剤と比較して、その量は非常に少なかった。 The citrate buffer formulation showed very slight aggregates after 3 weeks in formulation C and 6 weeks after storage in formulation A (FIG. 32). Similarly, some aggregates could be detected after 3 months of storage in Formulation B. However, the amount was very small compared to the acetate buffer preparation.

酢酸緩衝製剤ＬＡ＿０９＿０２８Ｃは、３週間後に、および同様に製剤Ａ中では３カ月後に２００ｎｍ未満のいくらかの凝集体を示した。図３３を参照されたい。 Acetic acid buffer formulation LA_09_028C showed some aggregates below 200 nm after 3 weeks and similarly in formulation A after 3 months. See FIG. 33.

ＵＶ
ＵＶ測定によりタンパク質濃度をモニタリングすることにより、全ての時点、試料、および製剤間の有意差は認められなかった。試料容量が非常に少なかったため、濃度をＮａｎｏｄｒｏｐ装備を用いて測定した。その結果は、＋／−５％で変化した。詳細な情報については、表５０〜６１を参照されたい。 UV
Monitoring protein concentration by UV measurement showed no significant differences between time points, samples, and formulations. Since the sample volume was very small, the concentration was measured using Nanodrop equipment. The results varied by +/- 5%. See Tables 50-61 for more information.

外観
３カ月の保存期間後、全ての試料はヒスチジン中であっても、濁ることなく無色透明のままであった。この観察は、ＤＬＳ中の全ての測定された凝集体が可溶性であったことを同様に示している。不溶性および眼に見えない凝集体を、ＨＩＡＣによる光遮断測定により検出することができた。 Appearance After a storage period of 3 months, all samples remained colorless and transparent, even in histidine. This observation also indicates that all measured aggregates in the DLS were soluble. Insoluble and invisible aggregates could be detected by photoblocking measurements with HIAC.

ＨＩＡＣ
Ｔ０で、および＋５℃での保存の３週間後に、眼に見えない粒子が検出された。粒子の形成は酢酸バッファー中で主に観察されたことを表３６中に明確に見ることができる。興味深いことに、ヒスチジンは、４つ全部の異なる製剤について良好な結果を示した。クエン酸製剤Ａ、ＢおよびＣにおいても同様に良好である。全ての製剤における１０μｍを超える、および２５μｍを超える粒子のレベルならびに値はＰｈ．Ｅｕｒ．およびＵＳＰに規定された限界よりもはるかに下であるため、粒子形成は関係がない。 HIAC
Invisible particles were detected at T0 and after 3 weeks of storage at + 5 ° C. It can be clearly seen in Table 36 that particle formation was predominantly observed in acetate buffer. Interestingly, histidine showed good results for all four different formulations. The citric acid preparations A, B and C are also good. The levels and values of particles above 10 μm and above 25 μm in all formulations are pH. Euro. And because it is well below the limits specified in the USP, particle formation is irrelevant.

オスモル濃度
実験を適合化させるのに利用できる試料容量がなかったため、オスモル濃度を調整するための添加剤の定量を、計算によって試料の製造前に行った。従って、オスモル濃度は、それがあるべきものよりも低かった（理想的には、２８０〜３２０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ）。表３５。より良好な調整のためのさらなる試験を、製剤最適化試験の間に行う。 Since there was no sample volume available to adapt the osmolality experiment, quantification of additives to adjust osmolality was performed by calculation prior to sample production. Therefore, the osmolal concentration was lower than it should be (ideally 280-320 mOsmol / kg). Table 35. Further testing for better adjustment is performed during the formulation optimization test.

結論
結論として、クエン酸バッファー、酢酸バッファー、およびヒスチジンバッファーは、＋５℃および−２０℃での保存後に変化を示さず、酢酸バッファーに関しては３カ月後に分解産物のほんのわずかな増加が見られた。 Conclusion In conclusion, citrate buffer, acetate buffer, and histidine buffer showed no change after storage at + 5 ° C and -20 ° C, and for acetate buffer there was a slight increase in degradation products after 3 months.

加速条件下でのリードＣＸＣＲ５抗体の保存は、ＤＳの有意な変化をもたらした。クエン酸バッファー中では少しの変化が観察されたが、酢酸バッファーは分解産物および凝集産物の有意な増加ならびに酸性または塩基性アイソフォーム中の中性アイソフォームの減少を示した。 Storage of the lead CXCR5 antibody under accelerated conditions resulted in a significant change in DS. Although slight changes were observed in citrate buffer, acetate buffer showed a significant increase in degradation products and aggregates and a decrease in neutral isoforms in acidic or basic isoforms.

加速条件下でリードＣＸＣＲ５抗体に対するとてつもない効果が観察された（最大２９．６％の高分子量タンパク質および最大８．２％のダイマー／オリゴマーおよび最大１．３％の低分子量タンパク質）。また、陽イオン交換クロマトグラフィーにより、中性アイソフォームの５０％への減少が示された。 A tremendous effect on the lead CXCR5 antibody was observed under accelerated conditions (up to 29.6% high molecular weight protein and up to 8.2% dimer / oligomer and up to 1.3% low molecular weight protein). Also, cation exchange chromatography showed a reduction of neutral isoforms to 50%.

全ての試験したバッファー、例えば、クエン酸、酢酸、およびヒスチジンバッファーについて、２０ｍｇ／ｍＬの標的濃度を達成することができた。 A target concentration of 20 mg / mL could be achieved for all tested buffers, such as citric acid, acetic acid, and histidine buffers.

安定なＤＰのｐＨ範囲は、ｐＨ５〜６．５と規定することができた。 The pH range of stable DP could be defined as pH 5-6.5.

３つの選択されたバッファーに関する２段階のスケールアップ（４ｍＬ〜１００ｍＬ〜１０００ｍＬ ＵＦ／ＤＦ）を上手く実施した。 A two-step scale-up (4 mL-100 mL-1000 mL UF / DF) on the three selected buffers was successfully performed.

機械的ストレス（撹拌速度３５０／ｍｉｎ、２．５ｈ、ＲＴ）後の全ての選択されたバッファー中での０．０１％ポリソルベート２０との凝集体形成の減少を評価し、分析的に確認した。 The reduction in aggregate formation with 0.01% polysorbate 20 in all selected buffers after mechanical stress (stirring rate 350 / min, 2.5 h, RT) was evaluated and analytically confirmed.

ＨＭＷＰの非存在または減少を観察することができ、かくして、０．０１％のポリソルベート２０を添加することにより濾過可能性（０．２２μｍ）の増加を達成することができた。 The absence or decrease of HMWP could be observed and thus an increase in filterability (0.22 μm) could be achieved by adding 0.01% polysorbate 20.

ダイマー／オリゴマーの量は、バッファーおよびｐＨに高度に依存し、ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびＤＬＳを用いることにより分析した。 The amount of dimer / oligomer was highly dependent on buffer and pH and was analyzed using SEC, SDS-PAGE and DLS.

原薬の特性評価
リードＣＸＣＲ５抗体分子は、分解または半分子形成に関して非常に安定しているが、予備製剤化活動の間に、ｐＨ７．２のＰＢＳに溶解したリードＣＸＣＲ５抗体は凝集傾向を有するということが分かった。従って、このバッファーは長期安定性にとって好適ではない。保存または凍結／解凍サイクル中の眼に見える、および眼に見えない粒子の形成を、製剤開発および安定性試験の間に注意深くモニタリングするべきである。 Characterization of drug substance Lead CXCR5 antibody molecule is very stable with respect to degradation or hemimolecule formation, but during preformation activity, lead CXCR5 antibody dissolved in PBS at pH 7.2 has a tendency to aggregate. It turned out. Therefore, this buffer is not suitable for long-term stability. The formation of visible and invisible particles during the storage or freezing / thawing cycle should be carefully monitored during formulation development and stability testing.

最良のバッファーおよびｐＨの選択
最良のバッファーおよびｐＨの選択の後、ｐＨ６．０のクエン酸バッファー１０ｍＭは、２０ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体溶液にとって好適であると同定された。１０ｍＭヒスチジンバッファーｐＨ５または１０ｍＭ酢酸バッファーｐＨ５．５は、バックアップ選択肢として役立ち得る。 Best Buffer and pH Selection After selection of the best buffer and pH, 10 mM citrate buffer at pH 6.0 was identified as suitable for a 20 mg / mL lead CXCR5 antibody solution. A 10 mM histidine buffer pH 5 or a 10 mM acetate buffer pH 5.5 may serve as a backup option.

添加剤との適合性試験
プロトタイプ製剤のためには以下の添加剤が推奨される：
・ポリソルベート２０
・トレハロース／スクロース
・ＮａＣｌ
・アルギニン−ＨＣｌ
開発のためには以下の添加剤が推奨されない：
・ベンジルアルコール
・マルトース
・マンニトール
・デキストラン
・リシン−ＨＣｌ。 Compatibility testing with additives The following additives are recommended for prototype formulations:
・ Polysorbate 20
・ Trehalose / sucrose ・ NaCl
・ Arginine-HCl
The following additives are not recommended for development:
-Benzyl alcohol, maltose, mannitol, dextran, lysine-HCl.

プロトタイプ製剤の３カ月安定性試験
クエン酸バッファーｐＨ６．０、酢酸バッファーｐＨ５．５、およびヒスチジンバッファーｐＨ５．０中での２０ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体の優れた安定性が、＋５℃および−２０℃で３カ月の保存後に見られた。＋４０℃でのわずかな分解（モノマー含量の５％未満の低下）がクエン酸バッファーを用いた場合に観察されたが、酢酸バッファーは、低いが有意な、およびヒスチジンバッファーについては強力な人工物の増加を示した。 3-month stability test of prototype formulation Excellent stability of 20 mg / mL lead CXCR5 antibody in citrate buffer pH 6.0, acetate buffer pH 5.5, and histidine buffer pH 5.0 is + 5 ° C and -20 ° C. It was seen after storage for 3 months. Slight degradation at + 40 ° C. (less than 5% reduction in monomer content) was observed with citrate buffer, but acetic acid buffer was low but significant, and strong artifacts for histidine buffer. Showed an increase.

全ての試験した製剤は、ＰＢＳ ｐＨ７．２中の一般的な探索製剤と比較して保存中の粒子形成の有意な減少を示した。 All tested formulations showed a significant reduction in particle formation during storage compared to common exploratory formulations in PBS pH 7.2.

かくして、この予備製剤化試験の推奨は、リードＣＸＣＲ５抗体のＤＳおよびＤＰのために１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６を用いることである。２０ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体を含む滅菌濾過緩衝溶液、および安定性を増加させる添加剤は、バイアル中、＋５℃での保存推奨と共に実現可能であるべきである。 Thus, the recommendation for this preformation test is to use 10 mM citrate buffer pH 6 for DS and DP of the lead CXCR5 antibody. A sterile filtration buffer solution containing 20 mg / mL Reed CXCR5 antibody, and an additive that increases stability, should be feasible with recommendations for storage at + 5 ° C. in vials.

等張化調整のため、トレハロースおよびＮａＣｌを用いることができ、凝集体の形成を防止するためにポリソルベート２０を用いるべきである。 Trehalose and NaCl can be used for isotonic adjustment, and polysorbate 20 should be used to prevent the formation of aggregates.

バッファー系を変化させる、および／またはｍＡＢ濃度を５ｍｇ／ｍＬから２０ｍｇ／ｍＬに増加させるためのＵＦ／ＤＦ実験の実現可能性を、様々な規模で示すことができた。 The feasibility of UF / DF experiments to alter the buffer system and / or increase the mAB concentration from 5 mg / mL to 20 mg / mL could be demonstrated on various scales.

機械的ストレス後に大きな差異は見られなかったため、試料ＬＡ＿０９＿０９〜１５に機械的ストレスをかけなかった。 No significant difference was observed after mechanical stress, so samples LA_09_09-15 were not mechanically stressed.

Ｎ／Ａ、利用可能な試料容量があまりにも少なかったため、試料を分析的に試験しなかった。 N / A, sample volume available was too small to analytically test the sample.

添加剤およびリードＣＸＣＲ５抗体（ＬＡ＿０９＿０２２）
Additives and lead CXCR5 antibody (LA_09_022)

添加剤およびクエン酸緩衝化（ＬＡ＿０９＿０２３）
Additives and citrate buffering (LA_09_023)

添加剤および酢酸緩衝化（ＬＡ＿０９＿０２４）
Additives and acetic acid buffering (LA_09_024)

添加剤およびヒスチジン緩衝化（ＬＡ＿０９＿０２５）
Additives and histidine buffering (LA_09_025)

抗ＣＸＣＲ５（２０ｍｇ／ｍＬ）製剤試験
実施例１３〜１６のデータを、静脈内および皮下投与のためのリードＣＸＣＲ５抗体お
よびその医薬品について製剤化試験の間に収集した。製剤化試験の目的は、第Ｉ相のための注射のための、安定な、透明な、またはわずかに乳白色の、および無色またはわずかに黄色の、眼に見える粒子を含まないリードＣＸＣＲ５抗体溶液を提供することであった。 Anti-CXCR5 (20 mg / mL) Formulation Test Data from Examples 13-16 were collected during the formulation test for the lead CXCR5 antibody and its drug for intravenous and subcutaneous administration. The purpose of the formulation test was to provide a stable, clear, or slightly milky, and colorless or slightly yellow, particle-free lead CXCR5 antibody solution for injection for Phase I. It was to provide.

材料
原薬（ＤＳ）
２つの原薬バッチを、これらの製剤化試験のために用いた。一方はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に製剤化されたものであり、他方はクエン酸バッファー中に製剤化されたものである。表６２を参照されたい。 Material API (DS)
Two API batches were used for these formulation tests. One was formulated in phosphate buffered saline (PBS) and the other was formulated in citrate buffer. See Table 62.

添加剤
表６３は、製剤化試験中に用いられた添加剤を示す。 Additives Table 63 shows the additives used during the formulation test.

方法
試料の調製
Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ膜および３０ｋＤａカットオフを備えたＶｉｖａＳｐｉｎデバイスを用いて、小規模で限外濾過／ダイアフィルトレーションを実施した。ＲＳＮ材料を５ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、リン酸（ＰＢＳ）バッファーを１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６．０、酢酸バッファーｐＨ５．５、またはヒスチジンバッファーｐＨ５．０のいずれかに交換した。ＶｉｖａＳｐｉｎユニットを室温（ＲＴ）で一般的な実験室用遠心分離に入れ、２０００ｒｐｍで遠心分離した。分析試験の前に、溶液を０．２μｍのＭｉｎｉｓａｒｔ上で濾過した。全ての試料を＋２℃〜＋８℃で保存し、固く密閉し、
Ｔ０での分析試験まで、および＋４０℃での１週間の熱ストレスの後またはＲＴで２．５時間、３００ｒｐｍの機械的ストレスの後、光から保護した（ポリソルベート２０濃度の評価のためだけに）。 Method Sample Preparation A small-scale ultrafiltration / diafiltration was performed using a VivaSpin device with a Hydrosart membrane and a 30 kDa cutoff. The RSN material was concentrated to 5 mg / mL to 20 mg / mL and the phosphate (PBS) buffer was replaced with either 10 mM citrate buffer pH 6.0, acetate buffer pH 5.5, or histidine buffer pH 5.0. The VivaSpin unit was placed in a typical laboratory centrifuge at room temperature (RT) and centrifuged at 2000 rpm. Prior to the analytical test, the solution was filtered over 0.2 μm Minisart. Store all samples at + 2 ° C to + 8 ° C, tightly seal,
Protected from light up to analytical testing at T0 and after 1 week of thermal stress at + 40 ° C. or after mechanical stress at 300 rpm for 2.5 hours at RT (only for evaluation of polysorbate 20 concentration). ..

分析方法
以下の技術を試料分析のために用いた： Analytical method The following techniques were used for sample analysis:

〔実施例１３〕
さらなるｐＨ最適化
予備製剤化試験により、１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６．０がリードＣＸＣＲ５抗体凝集傾向が少ない最良のバッファーであると同定された。クエン酸バッファー中でのｐＨプロファイルを得るために、ｐＨ５．０〜７．０までの段階的ｐＨ依存的安定性を評価した。限られた原薬の利用可能性のため、綿密なｐＨスクリーニングは１０ｍＭクエン酸バッファーについてのみ行った。試料をＴ０で、および＋４０℃での１週間の熱ストレス後に取得した。表６５〜６９を参照されたい。 [Example 13]
Further pH optimization Pre-formulation testing identified a 10 mM citrate buffer pH 6.0 as the best buffer with less propensity to aggregate lead CXCR5 antibodies. Gradual pH-dependent stability from pH 5.0 to 7.0 was evaluated to obtain a pH profile in citrate buffer. Due to limited drug substance availability, in-depth pH screening was performed only on 10 mM citrate buffer. Samples were taken at T0 and after 1 week of heat stress at + 40 ° C. See Tables 65-69.

結論として、データは、予備製剤化試験中に既に生成された結果を確認する：ｐＨの増加は、モノマー含量を減少させ、ダイマー率を増加させる。＋４０℃の試料は、ｐＨ６．０までのＨＭＷにおけるｐＨ値の低下および次いで、ｐＨ５．０までの増加を示した。 In conclusion, the data confirm the results already produced during the preformation test: increasing pH reduces monomer content and increases dimer rate. Samples at + 40 ° C. showed a decrease in pH value at HMW up to pH 6.0 and then an increase up to pH 5.0.

〔実施例１４〕
さらなるバッファー最適化
次に、クエン酸、酢酸、およびヒスチジン（バックアップバッファーとして）バッファーを、選択されたｐＨ値で５／１０／２５／５０ｍＭでスクリーニングした。表７０〜８４を参照されたい。 [Example 14]
Further buffer optimization The citric acid, acetic acid, and histidine (as backup buffer) buffers were then screened at 5/10/25/50 mM at selected pH values. See Tables 70-84.

結論として、データは、予備製剤化試験中に生成された結果を確認する。緩衝剤としてクエン酸を用いた場合、モノマー含量は酢酸バッファーおよびヒスチジンバッファーよりもわずかに高い。ヒスチジンを用いた場合、Ｔ０でも高い凝集挙動が観察可能であり、分析試料の調製が困難である。試験したバッファー濃度間の有意差を測定することができず、従ってバッファー、クエン酸バッファー、ヒスチジンバッファー、および酢酸バッファーの３種全部を１０ｍＭの濃度で用いることができる。 In conclusion, the data confirm the results produced during the preformation test. When citric acid is used as the buffer, the monomer content is slightly higher than the acetate and histidine buffers. When histidine is used, high aggregation behavior can be observed even at T0, and it is difficult to prepare an analysis sample. Significant differences between the buffer concentrations tested cannot be measured, so all three buffers, citrate buffer, histidine buffer, and acetate buffer can be used at a concentration of 10 mM.

〔実施例１５〕
さらなる界面活性剤最適化
予備製剤化試験に基づいて、非イオン性界面活性剤ポリソルベート２０（０．０１％）の添加は、安定性に対する有益な効果を示し、従って、対応するバッファーに以下のポリソルベート２０濃度：０．００２５％／０．００５％／０．０１％／０．０２％を添加することにより、その濃度のさらなる評価を行った。表８５〜９４を参照されたい。 [Example 15]
Further Surfactant Optimization Based on pre-formulation testing, the addition of nonionic surfactant polysorbate 20 (0.01%) showed a beneficial effect on stability and therefore the following polysorbate in the corresponding buffer: 20 Concentration: By adding 0.0025% / 0.005% / 0.01% / 0.02%, the concentration was further evaluated. See Tables 85-94.

結論として、様々なポリソルベート濃度を有する酢酸またはクエン酸バッファーを含有する試料における有意差は測定できなかった。１５０ｍｉｎよりも長時間にわたり行われた機械的ストレスに対するｍＡｂ防止を確保するために、ポリソルベート濃度を０．２ｍｇ／ｍＬに設定した。この量は、予備製剤化試験に基づいても提唱された。 In conclusion, no significant difference could be measured in samples containing acetic acid or citrate buffers with various polysorbate concentrations. The polysorbate concentration was set to 0.2 mg / mL to ensure mAb protection against mechanical stress performed for longer than 150 min. This amount was also proposed based on pre-formulation studies.

〔実施例１６〕
さらなる等張性最適化
予備製剤化試験中に、ＮａＣｌ、トレハロース、およびアルギニン−ＨＣｌが、等張性および安定性のための添加物として同定された。次いで、ｍＡｂ安定性効果が低いため、アルギニン−ＨＣｌを脱落させた。バッファー濃度およびｐＨ値に応じて、等張剤（ｉｓｏｔｏｎａｎｔ）／安定剤の量を、Ｐｈ．Ｅｕｒ．に従って少なくとも２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのオスモル濃度を達成するために合わせる。 [Example 16]
Further Isotonicity Optimization During the preformation test, NaCl, trehalose, and arginine-HCl were identified as additives for isotonicity and stability. Then, arginine-HCl was shed because of its low mAb stability effect. Depending on the buffer concentration and pH value, the amount of isotonic / stabilizer was determined by Ph.D. Euro. To achieve an osmolality of at least 240 mOsmol / kg according to.

トレハロースは公定添加剤ではなく、高価であるため、トレハロースの使用は課題であった。予備製剤化試験中に、スクロース（サッカロース）はわずかにより多い凝集を引き起こしたが、さらなる試験において追跡および検証されなかった。従って、＋５℃、＋２５℃、および＋４０℃の保存温度の１０ｍＭクエン酸および酢酸バッファーの両方の中のトレハロースならびにサッカロースを含む、４週間にわたる新しい短期安定性試験を設計した。表９５〜１０３を参照されたい。 The use of trehalose has been a challenge because trehalose is not an official additive and is expensive. During the preformation study, sucrose (sucrose) caused slightly more aggregation, but was not followed and verified in further studies. Therefore, a new 4-week short-term stability test was designed involving trehalose and saccharose in both 10 mM citric acid and acetate buffers at storage temperatures of + 5 ° C, + 25 ° C, and + 40 ° C. See Tables 95-103.

少なくとも２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのオスモル濃度の微調整を、ＮａＣｌを用いて実施した。 A fine adjustment of the osmolality of at least 240 mOsmol / kg was performed with NaCl.

結論として、クエン酸バッファーと酢酸バッファーとの有意差は測定されず、トレハロースとサッカロースとの加速条件での差異は見えなかった。サッカロースを含むクエン酸バッファーを、さらなる試験のために選択した。 In conclusion, no significant difference between citrate buffer and acetate buffer was measured, and no difference was seen between trehalose and saccharose under acceleration conditions. Citric acid buffer containing saccharose was selected for further testing.

ＤＰ製造プロセスパラメータの決定
クエン酸バッファー中のＤＳバッチを用いて、製造プロセスパラメータを決定した。予備製剤化試験により、ＤＳが酸化を受けにくく、製造中の光保護または窒素重層またはパージが必要であることが示された。標準的なガラス装備ならびにシリコン管（ＳａｎｉＴｅｃｈ６５）を用いた。 Determination of DP production process parameters Production process parameters were determined using DS batches in citrate buffer. Pre-formulation tests have shown that DS is less susceptible to oxidation and requires photoprotection or nitrogen layering or purging during production. Standard glass equipment and a silicon tube (SaniTech65) were used.

添加順序
添加剤の添加順序を評価する実験は、ＤＳの小さい希釈容量のため限られていた。 Order of Addition Experiments evaluating the order of addition of additives have been limited due to the small dilution volume of DS.

ＤＳをガラスボトル中で計量し、第１の添加剤としてのポリソルベート２０、第２の添加剤としてのサッカロース、および第３の添加剤としてのＮａＣｌを添加し、クエン酸バッファー１０ｍＭ ｐＨ６．０ですすぎ、ＤＳの含量を２０ｍｇ／ｍＬに希釈した。 DS is weighed in a glass bottle, polysorbate 20 as the first additive, saccharose as the second additive, and NaCl as the third additive are added and rinsed with citrate buffer 10 mM pH 6.0. , DS content was diluted to 20 mg / mL.

撹拌速度および時間
撹拌速度を１００ｒｐｍに設定して、ＤＳに対する機械的ストレスを軽減した。全ての添加剤は良好に水溶性であったという事実のため、撹拌時間を５分間に設定した。 Stirring Speed and Time Stirring speed was set to 100 rpm to reduce mechanical stress on the DS. Due to the fact that all additives were well water soluble, the stirring time was set to 5 minutes.

モニタリングパラメータおよびＩＰＣ
外観、濁度、密度、および粘度のようなモニタリングパラメータ、ならびにｐＨ値およびオスモル濃度のようなＩＰＣを、以下の表１０４に従って試料製造中に日常的にチェックした：
Monitoring parameters and IPC
Monitoring parameters such as appearance, turbidity, density, and viscosity, as well as IPCs such as pH and osmolality, were routinely checked during sample preparation according to Table 104 below:

製造中に問題は観察されなかった。オスモル濃度の限界を、測定されたデータに基づいて設定した。 No problems were observed during production. The osmolal concentration limit was set based on the measured data.

濾過プロセス
予備製剤化試験によれば、ポリエーテルスルホンは滅菌濾過のための好適な膜であった（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、０．２２μｍ）。濾過の速度および時間は水性溶液の濾過に関する標準値を示したため、濾過後の潜在的なｐＨシフトを観察することはできなかった。フィルター完全性試験を、問題なく日常的に実施した。 Filtration Process According to the pre-formulation test, the polyether sulfone was a suitable membrane for sterile filtration (Sartorius, 0.22 μm). Potential pH shifts after filtration could not be observed, as the rate and duration of filtration showed standard values for filtration of aqueous solutions. Filter integrity tests were performed on a daily basis without problems.

充填プロセス
充填ポンプおよび充填針のような、ステンレススチール製の標準的な投薬装備を調査した。また、持続時間および充填速度をモニタリングした。充填されたＤＰの抽出可能容量を決定した。１．５ｍＬの抽出可能容量を確保するためには、０．２ｍＬの過充填が必要であった。 Filling process Standard medication equipment made of stainless steel, such as filling pumps and filling needles, was investigated. The duration and filling rate were also monitored. The extractable capacity of the filled DP was determined. 0.2 mL overfill was required to ensure an extractable volume of 1.5 mL.

材料適合性
全ての予備製剤化および製剤化試験を、ＧＭＰ製造に用いられる装備のための推奨でもある、標準的な製造装備としてガラス中で実施した。 Material Compatibility All pre-formulations and formulation tests were performed in glass as standard manufacturing equipment, which is also a recommendation for equipment used in GMP manufacturing.

洗浄剤
製造装備の洗浄を、標準的な洗浄剤Ｎｅｏｄｉｓｈｅｒ（登録商標）を用いる皿洗い機を用いて、対応するＳＯＰに従って実施した。注射用水を用いる手動での予備洗浄を、その前に日常的に行った。洗浄剤の有害な効果は観察されなかった。 Cleaning The cleaning of the cleaning equipment was performed according to the corresponding SOP using a dishwasher using the standard cleaning agent Neodisher®. Manual pre-washing with water for injection was routinely performed prior to this. No detrimental effects of the cleaning agent were observed.

リードＣＸＣＲ５抗体（２０ｍｇ／ｍＬ）のためのさらなる製剤化試験の概要
第Ｉ相リードＣＸＣＲ５抗体ＤＰ製剤の選択のために、ヒスチジンおよび酢酸よりもクエン酸１０ｍＭ、ｐＨ６．０をバッファーとして選択した。ｐＨ値の増加または減少はモノマー含量の減少を意味するため、溶液のｐＨ値を６．０に設定した。バッファー濃度を１０ｍＭの媒体濃度に設定したが、５〜５０ｍＭの濃度間で有意差はなかった。 Summary of Further Formulation Tests for Lead CXCR5 Antibody (20 mg / mL) For selection of Phase I Lead CXCR5 Antibody DP Formulation, citric acid 10 mM, pH 6.0 was selected as buffer over histidine and acetic acid. Since an increase or decrease in pH value means a decrease in monomer content, the pH value of the solution was set to 6.0. The buffer concentration was set to a medium concentration of 10 mM, but there was no significant difference between the concentrations of 5 to 50 mM.

機械的ストレスに対してＤＳを安定化させるのに十分な、０．２ｍｇ／ｍＬ（０．０２％）の界面活性剤としてポリソルベート２０を選択した。 Polysorbate 20 was selected as a 0.2 mg / mL (0.02%) surfactant sufficient to stabilize DS against mechanical stress.

トレハロースを選ぶ熱ストレスに対する安定剤としてスクロース（サッカロース）を選択した。サッカロースの濃度を６０ｍｇ／ｍＬ（６％）に設定した。 Choosing trehalose Sucrose (saccharose) was chosen as a stabilizer against heat stress. The concentration of saccharose was set at 60 mg / mL (6%).

ＮａＣｌを２．０ｍｇ／ｍＬ（０．２％）の濃度で等張剤として用いて、約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのＤＰのオスモル濃度を達成した。 NaCl was used as an isotonic agent at a concentration of 2.0 mg / mL (0.2%) to achieve an osmolality of DP of about 300 mOsmol / kg.

抗ＣＸＣＲ５（１００ｍｇ／ｍＬ）製剤化試験
実施例１７〜２１のデータを、静脈内および皮下投与のためのリードＣＸＣＲ５抗体およびその医薬品のための製剤化試験の間に収集した。製剤化試験の目的は、第Ｉ相のための注射のための、安定な、透明またはわずかに乳白色の、および無色またはわずかに黄色の、眼に見える粒子を含まないリードＣＸＣＲ５抗体溶液を提供することであった。 Anti-CXCR5 (100 mg / mL) Formulation Test Data from Examples 17-21 were collected during the formulation test for the lead CXCR5 antibody for intravenous and subcutaneous administration and its pharmaceuticals. The purpose of the formulation study is to provide a stable, clear or slightly opalescent, and colorless or slightly yellow, particle-free lead CXCR5 antibody solution for injection for Phase I. Was that.

方法
試料調製
ＵＦ／ＤＦを、Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ膜および３０ｋＤａカットオフを備えたＶｉｖａＳｐｉｎデバイスを用いて小規模で実施した。ＲＳＮ材料を、約２０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。全ての溶液は既に最終製剤バッファー（１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６．０）中にあった。 Method Sample preparation UF / DF was performed on a small scale using a VivaSpin device with Hydrosart membranes and a 30 kDa cutoff. The RSN material was concentrated to about 20 mg / mL-100 mg / mL. All solutions were already in final formulation buffer (10 mM citrate buffer pH 6.0).

ＶｉｖａＳｐｉｎユニットを、ＲＴで一般的な実験室用遠心分離機に入れ、２０００ｒｐｍで遠心分離した。分析試験の前に溶液を０．２μｍのＭｉｎｉｓａｒｔ上で濾過した。 The VivaSpin unit was placed in a typical laboratory centrifuge at RT and centrifuged at 2000 rpm. Prior to the analytical test, the solution was filtered over 0.2 μm Minisart.

全ての試料を＋２〜＋８℃で保存し、固く密閉し、Ｔ０での分析試験まで、および＋４０℃での１週間の熱ストレス後または機械的ストレス後に、光から保護した。 All samples were stored at + 2 to + 8 ° C, tightly sealed and protected from light until analytical testing at T0 and after a week of thermal or mechanical stress at + 40 ° C.

分析方法
以下の技術を、試料分析のために用いた： Analytical method The following techniques were used for sample analysis:

〔実施例１７〕
添加剤スクリーニング
予備製剤化試験により、１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６．０がリードＣＸＣＲ５抗体凝集傾向が少ない最良のバッファーであると同定された。２０ｍｇ／ｍＬでの以前の試験において、１０ｍＭクエン酸バッファー、６０ｍｇ／ｍＬ（６％）スクロース、２ｍｇ／ｍＬ（０．２％）ＮａＣｌ、および０．２ｍｇ／ｍＬ（０．０２％）ポリソルベート２０を含有する製剤を選択した。これらの添加剤およびいくつかの選択肢を試験して、より高濃度（１００ｍｇ／ｍＬ）での選択された製剤の好適性を確認した。 [Example 17]
Additive screening Pre-formulation tests have identified a 10 mM citrate buffer pH 6.0 as the best buffer with less propensity to aggregate lead CXCR5 antibodies. In previous studies at 20 mg / mL, 10 mM citrate buffer, 60 mg / mL (6%) sucrose, 2 mg / mL (0.2%) NaCl, and 0.2 mg / mL (0.02%) polysorbate 20. The formulation to be contained was selected. These additives and several options were tested to confirm the suitability of the selected formulation at higher concentrations (100 mg / mL).

様々な製剤に、４０℃で７日間、熱ストレスを加え、１００ｒｐｍで５ｈ機械的にストレスを加えた。さらに、様々な製剤のアンフォールディング温度を、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）を用いて１００ｍｇ／ｍＬでスクリーニングした。 Various formulations were heat stressed at 40 ° C. for 7 days and mechanically stressed at 100 rpm for 5 hours. In addition, the unfolding temperatures of the various formulations were screened at 100 mg / mL using DSC (Differential Scan Calorimetry).

以下の添加剤を試験した：
スクロース→６０ｍｇ／ｍＬ
トレハロース→６０ｍｇ／ｍＬ
アルギニン→３０ｍｇ／ｍＬ
リシン→３０ｍｇ／ｍＬ
グリシン→３０ｍｇ／ｍＬ。 The following additives were tested:
Sucrose → 60 mg / mL
Trehalose → 60 mg / mL
Arginine → 30 mg / mL
Lysine → 30 mg / mL
Glycine → 30 mg / mL.

ＮａＣｌまたはマンニトールを等張剤として添加した。粘度低下（約２．１ｃＰ）のために塩は必要なかった。 NaCl or mannitol was added as an isotonic agent. No salt was needed due to the reduced viscosity (about 2.1 cP).

Ｔ０およびＴ７日の結果を表１０６に示す。 The results for days T0 and T7 are shown in Table 106.

熱ストレス
試料はいずれもストレスの前後で混濁を示さなかった。 None of the thermal stress samples showed turbidity before and after stress.

リシンは、９．８へのｐＨシフト、非常に高い凝集傾向、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける酸
性および塩基性アイソフォーム、ならびに高分子量バンドの非常に高い増加を示した。結果として、それはさらなる考慮から除外された。 Lysine showed a pH shift to 9.8, a very high aggregation tendency, acidic and basic isoforms in SDS-PAGE, and a very high increase in high molecular weight bands. As a result, it was excluded from further consideration.

マンニトールを含む製剤は、ストレス後にＥＬＩＳＡアッセイにおいて不良な結合を示した。結果として、ＮａＣｌが好ましい等張剤である。 Formulations containing mannitol showed poor binding in ELISA assays after stress. As a result, NaCl is the preferred isotonic agent.

スクロースは、トレハロースよりもわずかに良好な化学的安定性を示したが、ストレス後にＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいてさらなるバンドが見られた（両方について）。 Sucrose showed slightly better chemical stability than trehalose, but additional bands were seen on SDS-PAGE after stress (for both).

アルギニン（特に、ＮａＣｌの存在下）およびグリシンは、類似するＳＥＣプロファイルを有していたが、ストレス後にＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいてさらなるバンドが見られた。 Arginine (particularly in the presence of NaCl) and glycine had similar SEC profiles, but additional bands were seen on SDS-PAGE after stress.

動的光散乱（ＤＬＳ）により測定されたタンパク質会合形成
リードＣＸＣＲ５抗体は、濃度を増加させることにより、流体力学直径（Ｚ平均）の有意な増加を示した（図３４）。この挙動は、希釈時に完全に可逆性であった。この効果のさらなる調査のために、分析的超遠心分離（ＡＵＣ）により様々なリードＣＸＣＲ５抗体濃度を測定し、凝集体を排除した。ＡＵＣ試験の結論は、この挙動がタンパク質会合の形成によるものであるということであった。 Protein association-forming lead CXCR5 antibodies measured by dynamic light scattering (DLS) showed a significant increase in hydrodynamic diameter (Z mean) by increasing concentration (FIG. 34). This behavior was completely reversible upon dilution. To further investigate this effect, various lead CXCR5 antibody concentrations were measured by analytical ultracentrifugation (AUC) to eliminate aggregates. The conclusion of the AUC test was that this behavior was due to the formation of protein associations.

この挙動に対する上記で列挙された添加剤の効果を試験し、結果を図３５に示す。Ｚ平均を熱ストレスの前後で測定した。安定化効果は、全ての試験した添加剤と類似していたが、Ｚ平均の増加は一般的には、安定剤としてアミノ酸（アルギニン、リシンまたはグリシン）を用いることにより減少した。リシンは、ストレス後の凝集体の含量がより高いため除外された。アルギニンは、グリシンよりも良好な効果を示した。両アミノ酸を、最良の添加剤の組合せを選択するための最終実験設計のために考慮した。 The effects of the additives listed above on this behavior were tested and the results are shown in FIG. The Z mean was measured before and after thermal stress. The stabilizing effect was similar to all tested additives, but the increase in Z-average was generally reduced by the use of amino acids (arginine, lysine or glycine) as stabilizers. Lysine was excluded due to its higher content of aggregates after stress. Arginine showed a better effect than glycine. Both amino acids were considered for final experimental design to select the best additive combination.

機械的ストレス
リシン製剤ならびにマンニトールを含有する全製剤を除外した。ＳＥＣデータは、試験した試料に対するストレスの効果がないことを示した。表１０７を参照されたい。 Mechanical stress Lysine preparations and all preparations containing mannitol were excluded. SEC data showed no stress effect on the samples tested. See Table 107.

アミノ酸の存在下でもＺ平均の同じ減少が認められた。スクロースは機械的ストレスに対する、トレハロースよりも良好な保護効果を有していた。アルギニンおよびグリシンはＮａＣｌと組み合わせた場合、より良好に機能した。図３６を参照されたい。 The same decrease in Z mean was observed in the presence of amino acids. Sucrose had a better protective effect than trehalose against mechanical stress. Arginine and glycine worked better when combined with NaCl. See FIG. 36.

示差走査熱量測定（ＤＳＣ）スクリーニング
リードＣＸＣＲ５抗体のアンフォールディング温度を決定するためのスクリーニング試験を、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を用いて実施した。スクロース、トレハロース、アルギニン、およびグリシンをスクリーニングした。 Differential Scanning Calorimetry (DSC) Screening A screening test to determine the unfolding temperature of the lead CXCR5 antibody was performed using differential scanning calorimetry (DSC). Sucrose, trehalose, arginine, and glycine were screened.

Ｔｍの結果を表１０８に列挙する。 The results of Tm are listed in Table 108.

Ｔｍ１に基づいて、スクロースおよびトレハロースは最も高い値を示した。アルギニンはＮａＣｌと組み合わせた場合に良好に機能した。 Based on Tm1, sucrose and trehalose showed the highest values. Arginine worked well when combined with NaCl.

結論として、収集されたデータは、最終リードＣＸＣＲ５抗体１００ｍｇ／ｍｌ製剤が、等張剤としてのＮａＣｌの存在下で糖（いくつかの実施形態においては、スクロース）とアミノ酸（いくつかの実施形態においては、アルギニンまたはグリシン）との組合せを含有することを示唆している。 In conclusion, the data collected show that the final lead CXCR5 antibody 100 mg / ml formulation has sugars (sucrose in some embodiments) and amino acids (in some embodiments) in the presence of NaCl as an isotonic agent. Suggests that it contains a combination with arginine or glycine).

〔実施例１８〕
界面活性剤のスクリーニング
安定剤としてのポリソルベートを、熱ストレスと機械的ストレスの両方に対するリードＣＸＣＲ５抗体の保護について評価した。 [Example 18]
Surfactant Screening Polysorbate as a stabilizer was evaluated for protection of the lead CXCR5 antibody against both thermal and mechanical stress.

ポリソルベート２０および８０を、２つの異なる濃度：０．１および０．２ｍｇ／ｍｌで試験した。 Polysorbate 20 and 80 were tested at two different concentrations: 0.1 and 0.2 mg / ml.

熱ストレス
ＤＬＳにより、熱ストレス後のポリソルベートの添加による効果がないことが示された。ＳＥＣにより検出されたように、４０℃で７日間の保存後にＨＭＷおよび断片の形成が全試料において認められた。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおけるさらなるバンドは検出されなかった。熱ストレス後にわずかな変化が見られたが、ＰＳ２０とＰＳ８０との間、ならびに２
つの濃度の間の差異は見られなかった（データは示さない）。 Thermal stress DLS showed that the addition of polysorbate after thermal stress had no effect. As detected by SEC, HMW and fragment formation were observed in all samples after storage at 40 ° C. for 7 days. No additional bands were detected on SDS-PAGE. Slight changes were seen after heat stress, but between PS20 and PS80, as well as 2
No difference was found between the two concentrations (data not shown).

機械的ストレス
ＤＬＳにより、機械的ストレス後の変化は示されなかった。ポリソルベート２０は、機械的ストレス後に凝集体を示さなかった。ポリソルベート８０は、機械的ストレス後に凝集体形成を示した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおけるさらなるバンドは見られなかった（データは示さない）。 Mechanical stress DLS showed no change after mechanical stress. Polysorbate 20 did not show aggregates after mechanical stress. Polysorbate 80 showed aggregate formation after mechanical stress. No further bands were seen on SDS-PAGE (data not shown).

結論として、ポリソルベート２０は、リードＣＸＣＲ５抗体の機械的安定化において優れているため、望ましい界面活性剤であった。 In conclusion, polysorbate 20 was a desirable detergent because of its superior mechanical stabilization of the lead CXCR5 antibody.

〔実施例１９〕
ＤＳＣを用いるプロトタイプ製剤の予備選択
添加剤スクリーニングおよび界面活性剤スクリーニング試験に基づいて、１２種の異なる添加剤の組合せが示唆された（表１０９および１１０を参照されたい）。 [Example 19]
Pre-selection of prototype formulations using DSC Based on additive screening and surfactant screening tests, 12 different additive combinations were suggested (see Tables 109 and 110).

全ての製剤のアンフォールディング温度を、ＤＳＣを用いて決定し、それぞれの製剤に関する得られるＴｍならびにオスモル濃度を、表１０９および１１０に列挙する。 The unfolding temperature of all formulations was determined using DSC and the resulting Tm and osmolality concentrations for each formulation are listed in Tables 109 and 110.

製剤はＴｍにおいては大きな差異を示さなかったが、オスモル濃度は大きく変化した。プロトタイプ製剤の予備選択を、Ｔｍおよびオスモル濃度に基づいて行った。従って、それぞれの添加剤群（アルギニンおよびグリシン）において、最も高いＴｍを選択した（オスモル濃度とは無関係に）。さらに、等張領域における最も高いＴｍも選択した。 The formulations did not show significant differences in Tm, but osmolal concentrations changed significantly. Preliminary selection of prototype formulations was made based on Tm and osmolality. Therefore, the highest Tm was selected for each additive group (arginine and glycine) (regardless of osmolality). In addition, the highest Tm in the isotonic region was also selected.

〔実施例２０〕
プロトタイプ探査安定性試験
上記のプロトタイプ選択は４つのプロトタイプ製剤をもたらしたが、これらを表１１１に列挙する。これらの製剤を、機械的ストレス（１００ｒｐｍで５時間）、５回の凍結／解凍サイクルならびに５、２０および４０℃での等温ストレスについて試験した。 [Example 20]
Prototype Exploration Stability Test The above prototype selection resulted in four prototype formulations, which are listed in Table 111. These formulations were tested for mechanical stress (5 hours at 100 rpm), 5 freeze / thaw cycles and isothermal stress at 5, 20 and 40 ° C.

機械的安定性
いずれの添加剤も添加しない、１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６中のリードＣＸＣＲ５抗体（ＤＳ製剤）も、プロトタイプ製剤と平行してストレスを加えた。ＤＳの機械的ストレス、機械的ストレス後に全ての試験した製剤において変化が見られなかったストレス
後にＤＬＳによってより高分子量の種が測定された（図３７）。機械的ストレス後の凝集体の形成を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて測定し、その結果を表１１２に示す。一般に、より多くのＨＭＷが機械的ストレス後にＳＥＣにより見出される製剤Ａを除いて、４つの製剤は機械的ストレスに対して同等に安定であった。図３８を参照されたい。 Mechanical stability The lead CXCR5 antibody (DS formulation) in 10 mM citrate buffer pH 6 without any additives was also stressed in parallel with the prototype formulation. Higher molecular weight seeds were measured by DLS after mechanical stress of DS, stress with no change in all tested formulations after mechanical stress (Fig. 37). The formation of aggregates after mechanical stress was measured using size exclusion chromatography (SEC) and the results are shown in Table 112. In general, the four formulations were equally stable to mechanical stress, with the exception of formulation A, where more HMW was found by SEC after mechanical stress. See FIG. 38.

凍結／解凍安定性
５回の凍結／解凍サイクル後にＤＳまたはＤＰに関して有意差は検出されなかった。従って、凍結および解凍による不安定性の問題はないはずである（データは示さない）。 Freezing / thawing stability No significant difference was detected for DS or DP after 5 freezing / thawing cycles. Therefore, there should be no instability issues due to freezing and thawing (data not shown).

探査プロトタイプ安定性試験
プロトタイプ製剤を、−２０、５、２０、および４０℃で保存した。それらを試験の開始時、１カ月後、３カ月後、および６カ月後に分析した。３カ月後の結果に基づいて製剤を選択した（表１１３〜１１５）。その結果は、特に４０℃で、ＳＥＣ、ＷＣＸ、および眼に見えない粒子に関して、製剤Ｂが最も良好に機能することを示していた。 Exploration Prototype Stability Tests Prototype formulations were stored at -20, 5, 20, and 40 ° C. They were analyzed at the start of the study, 1 month, 3 months, and 6 months. Formulations were selected based on the results after 3 months (Tables 113-115). The results showed that Formulation B worked best with respect to SEC, WCX, and invisible particles, especially at 40 ° C.

結論として、試験は、製剤ＬＡ＿１０＿１０２＿Ｂに関するより良好な結果を示した。この製剤は、１０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ６中、１００ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体の濃度を有し、以下の添加剤：
スクロース ４５ｍｇ／ｍＬ（４．５％）；
アルギニン １０ｍｇ／ｍＬ（１％）；
ＮａＣｌ ２ｍｇ／ｍＬ（０．２％）；および
ポリソルベート２０ ０．１ｍｇ／ｍＬ（０．０１％）
を含有していた。 In conclusion, the study showed better results for formulation LA_10_102_B. This formulation has a concentration of 100 mg / mL lead CXCR5 antibody in 10 mM citrate buffer pH 6, with the following additives:
Sucrose 45 mg / mL (4.5%);
Arginine 10 mg / mL (1%);
NaCl 2 mg / mL (0.2%); and polysorbate 20 0.1 mg / mL (0.01%)
Was contained.

〔実施例２１〕
１００ｍｇ／ｍＬ製剤に関する安定性データの支援
実施例２０で同定された１００ｍｇ／ｍＬのリードＣＸＣＲ５抗体製剤に対してさらなる安定性試験を行った。さらなる試験を、−２０、５、および２５℃で実施した。結果を表１１６〜１１８に示す。 [Example 21]
Support for Stability Data for 100 mg / mL Formulation Further stability tests were performed on the 100 mg / mL lead CXCR5 antibody formulation identified in Example 20. Further testing was performed at -20, 5, and 25 ° C. The results are shown in Tables 116-118.

Claims (18)

配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む完全ヒトＩｇＧ４抗ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様であり、誘導的発現を示し、ＨＶＥＭについてＨＳＶ糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球により発現される受容体）抗体；
緩衝剤としての４．５〜５５ｍＭクエン酸塩；および
ポリソルベート２０
を含む安定な製剤であって、
該製剤のｐＨがｐＨ６．０以下かつ抗体のｐＩ以下である、前記製剤。 Fully human IgG4 anti-LIGHT containing a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 (lymphocyte-like, inducible expression, competing with HSV glycoprotein D for HVEM ( Receptor expressed by T lymphocytes) antibody ;
4.5-55 mM citrate as a buffer; and polysorbate 20
It is a stable preparation containing
PH of the formulation is less than the pI of the antibody One or pH 6.0 or less, the formulation. 配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含むヒト化ＩｇＧ４抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型）抗体；
緩衝剤としての４．５〜５５ｍＭクエン酸塩；および
ポリソルベート２０
を含む安定な製剤であって、
該製剤のｐＨがｐＨ６．０以下かつ抗体のｐＩ以下である、前記製剤。 A humanized IgG4 anti-CXCR5 (CXX-C chemokine receptor type 5) antibody comprising a heavy chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 25 and a light chain comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26 ;
4.5-55 mM citrate as a buffer; and polysorbate 20
It is a stable preparation containing
PH of the formulation is less than the pI of the antibody One or pH 6.0 or less, the formulation. 液体製剤である、請求項１または２に記載の製剤。 The preparation according to claim 1 or 2 , which is a liquid preparation. 凍結乾燥製剤である、請求項１または２に記載の製剤。 The preparation according to claim 1 or 2 , which is a lyophilized preparation. ＋５℃で少なくとも６カ月間安定である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の製剤。 The preparation according to any one of claims 1 to 4 , which is stable at + 5 ° C. for at least 6 months. ＋５℃で少なくとも９カ月間安定である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の製剤。 The preparation according to any one of claims 1 to 5 , which is stable at + 5 ° C. for at least 9 months. ｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に抗ＬＩＧＨＴ抗体を含む参照抗ＬＩＧＨＴ製剤またはｐＨ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に抗ＣＸＣＲ５抗体を含む参照抗ＣＸＣＲ５製剤と比較して、凝集体、半分子、分解産物、低分子量タンパク質、高分子量タンパク質、および抗体の酸性／塩基性／中性アイソフォームの再構成からなる群から選択される少
なくとも１つの副産物の量の減少を示す、請求項１〜６のいずれか１項に記載の製剤。 Aggregates, half as compared to the reference anti-LIGHT preparation containing anti-LIGHT antibody in phosphate buffered saline at pH 7.3 or the reference anti-CXCR5 preparation containing anti-CXCR5 antibody in phosphate buffered saline at pH 7.3. Claims 1 to show a reduction in the amount of at least one by-product selected from the group consisting of reconstitution of offspring, degradation products, low molecular weight proteins, high molecular weight proteins, and acidic / basic / neutral isoforms of antibodies. The preparation according to any one of 6 . １）請求項１〜７のいずれか１項に記載の製剤と、２）該製剤の投与および使用に関するラベルまたは指示書とを含む容器を含むキット。 A kit comprising a container comprising 1) the preparation according to any one of claims 1 to 7 and 2) a label or instruction regarding administration and use of the preparation. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の製剤を含むシリンジ、カートリッジ、バイアル、アンプル、またはオートインジェクターのような充填済みデバイスまたは充填済み容器。 Syringe containing a preparation according to any one of claims 1 to 7 cartridges, vials, ampoules or prefilled device or filled container, such as auto-injector. ５ｍｇ／ｍＬ±０．５ｍｇ／ｍＬ〜２８０ｍｇ／ｍＬ±２８ｍｇ／ｍＬの抗ＣＸＣＲ５（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体５型）抗体を含む、請求項２に記載の製剤。 Containing 5mg / mL ± 0.5mg / mL~280mg / mL ± 28mg / mL of anti-CXCR5 (C-X-C chemokine receptor type 5) antibody formulation according to claim 2. １０ｍＭ±１ｍＭのクエン酸バッファーを含む、請求項２に記載の製剤。 The preparation according to claim 2 , which comprises a 10 mM ± 1 mM citric acid buffer. ０．０１％±０．００１％のポリソルベート２０を含む、請求項２に記載の製剤。 The preparation according to claim 2 , which comprises 0.01% ± 0.001% of polysorbate 20. ４．５％±０．４５％のスクロースを含む、請求項２に記載の製剤。 The preparation according to claim 2 , which comprises 4.5% ± 0.45% sucrose. ０．２％±０．０２％の塩化ナトリウムを含む、請求項２に記載の製剤。 The preparation according to claim 2 , which comprises 0.2% ± 0.02% sodium chloride. １％±０．１％のアルギニンを含む、請求項２に記載の製剤。 The preparation according to claim 2 , which comprises 1% ± 0.1% arginine. ５ｍｇ／ｍＬ±０．５ｍｇ／ｍＬ〜２８０ｍｇ／ｍＬ±２８ｍｇ／ｍＬの抗ＬＩＧＨＴ抗体を含む、請求項１に記載の製剤。 Including anti ligh T antibody of 5mg / mL ± 0.5mg / mL~280mg / mL ± 28mg / mL, the formulation according to claim 1. １０ｍＭ±１ｍＭのクエン酸バッファーを含む、請求項１に記載の製剤。 The preparation according to claim 1, which comprises a 10 mM ± 1 mM citric acid buffer. マンニトールをさらに含む、請求項１に記載の製剤。 The preparation according to claim 1, further comprising mannitol.