JP6791478B2 - Angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins - Google Patents
Angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins Download PDFInfo
- Publication number
- JP6791478B2 JP6791478B2 JP2016105426A JP2016105426A JP6791478B2 JP 6791478 B2 JP6791478 B2 JP 6791478B2 JP 2016105426 A JP2016105426 A JP 2016105426A JP 2016105426 A JP2016105426 A JP 2016105426A JP 6791478 B2 JP6791478 B2 JP 6791478B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- urolithin
- converting enzyme
- angiotensin converting
- urolithins
- enzyme inhibitor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Description
本発明は、ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤に関する。 The present invention relates to angiotensin converting enzyme inhibitors containing urolithins.
アンジオテンシン変換酵素は、主に血圧の調節や電解質バランスの維持に関わっているレニン−アンジオテンシン系において重要な役割をもつ酵素である。レニン-アンジオテ
ンシン系においては、まず、主に肝臓で合成されるアンジオテンシノーゲンが、腎臓で産生、分泌されるレニンによって不活性なアンジオテンシンＩへ変換される。アンジオテンシンＩは更にアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によってＣ末端の２つのアミノ酸残基が切断され血管収縮、血圧上昇等の生理活性を持つペプチドであるアンジオテンシンＩＩへ変換される。一方で、ＡＣＥは血管を拡張させ、血圧を低下させるブラジキニンを分解して不活性化する作用も有している。従って、この酵素の作用を抑制することによって血圧降下作用が期待でき、高血圧治療への有効性が確認されており、カプトプリルやエナラプリルなどのＡＣＥ阻害剤が高血圧治療薬として従来から利用されている。食品又は食品原料から得ることができるＡＣＥ阻害剤は安全性の高い降圧剤、健康志向食品として期待することができる。
これまでに、ＡＣＥ阻害剤としては、緑茶由来のポリフェノールであるテアフラビン類（特許文献１）や茶に含まれるカテキン類の合成誘導体（特許文献２）において活性が報告されている他、牛骨（特許文献３）、鶏肉（特許文献４）、チーズ（特許文献５）、酒粕（特許文献６）由来のペプチドが、ＡＣＥ阻害活性を有することが報告されている。
Angiotensin converting enzyme is an enzyme that plays an important role in the renin-angiotensin system, which is mainly involved in the regulation of blood pressure and the maintenance of electrolyte balance. In the renin-angiotensin system, first, angiotensinogen, which is mainly synthesized in the liver, is converted to inactive angiotensin I by renin produced and secreted by the kidney. Angiotensin I is further converted into angiotensin II, which is a peptide having physiological activities such as vasoconstriction and blood pressure increase by cleaving two amino acid residues at the C-terminal by angiotensin converting enzyme (ACE). On the other hand, ACE also has the effect of decomposing and inactivating bradykinin, which dilates blood vessels and lowers blood pressure. Therefore, by suppressing the action of this enzyme, a blood pressure lowering effect can be expected, and its effectiveness for the treatment of hypertension has been confirmed, and ACE inhibitors such as captopril and enalapril have been conventionally used as antihypertensive agents. ACE inhibitors that can be obtained from foods or food raw materials can be expected as highly safe antihypertensive agents and health-conscious foods.
As ACE inhibitors, theaflavins (Patent Document 1), which are polyphenols derived from green tea, and synthetic derivatives of catechins contained in tea (Patent Document 2) have been reported to be active, as well as bovine bone (Patent Document 2). It has been reported that peptides derived from Patent Document 3), chicken (Patent Document 4), cheese (Patent Document 5), and sake lees (Patent Document 6) have ACE inhibitory activity.
一方、ウロリチンと呼ばれるポリフェノールが存在することが知られている。ウロリチンＡに代表されるウロリチン類は、ザクロ、ラズベリー、ブラックベリー、クラウドベリー、イチゴ、クルミなどに含まれるエラジタンニンに由来するエラグ酸の代謝物として知られている。エラジタンニンは加水分解性タンニンに分類され、摂取されると体内で加水分解され、エラグ酸に変換されることが知られている。
エラジタンニンやエラグ酸は体内の腸管吸収性は非常に低いと言われているが、これらが摂取された際、ヒト結腸微生物叢によって更に代謝されることによってウロリチン類に変換されることが知られている。このようにして生成されるウロリチン類は生体内で最も重要な化合物の１つである。近年、ウロリチン類を生成する腸内細菌としてＧｏｒｄｏｎｉｂａｃｔｅｒ ｕｒｏｌｉｔｈｉｎｆａｃｉｅｎｓが報告されている（非特許文献１）。
On the other hand, it is known that there is a polyphenol called urolithin. Urolithins represented by urolithin A are known as ellagic acid biotransformers derived from ellagitannins contained in pomegranate, raspberry, blackberry, cloudberry, strawberry, walnut and the like. Elagitannin is classified as hydrolyzable tannin, and it is known that when ingested, it is hydrolyzed in the body and converted to ellagic acid.
Elagitannin and ellagic acid are said to have very low intestinal absorption in the body, but when they are ingested, they are known to be converted to urolithins by further metabolism by the human colon microbiota. There is. The urolithins produced in this way are one of the most important compounds in the living body. In recent years, Gordonibacter urolithifaciens has been reported as an intestinal bacterium that produces urolithins (Non-Patent Document 1).
生体におけるウロリチンの生成については、ゲラニインなどのエラジタンニンを摂取させた後、尿中のウロリチンを分析することによってエラジタンニンの生体内における代謝物としてウロリチンが生じることがラットを用いた試験で報告されている（非特許文献２）。また、非特許文献３ではヒトにおいて、プニカラジンを主としたエラジタンニンを含むザクロ抽出物を摂取後の尿中においてウロリチン類縁体が検出され、特にウロリチンＡが主な代謝物として機能することが報告されている。ウロリチンＡには抗酸化作用（非特許文献４）、抗炎症作用（非特許文献５）、抗糖化作用（非特許文献６）など様々な有効性があることが報告されており、肥満、新陳代謝速度低下、メタボリックシンドローム、糖尿病、心血管疾患、高脂血症、神経変性疾患、認知障害、気分障害、ストレスおよび不安障害からなる群から選択される症状の治療または予防、体重管理、筋機能もしくは精神能力を向上させるために、ウロリチン類の一つであるウロリチンＡを含有する食品または栄養サプリメントなども報告されている（特許文献７）。 Regarding the production of urolithin in the living body, it has been reported in a test using rats that urolithin is produced as a biotransformation of ellagitannin in the living body by ingesting ellagitannin such as geraniin and then analyzing urolithin in urine. (Non-Patent Document 2). In addition, Non-Patent Document 3 reports that urolithin analogs are detected in urine after ingestion of a pomegranate extract containing ellagitannin, mainly punicarazine, in humans, and urolithin A in particular functions as a main biotransformer. ing. It has been reported that urolithin A has various effects such as antioxidative action (Non-Patent Document 4), anti-inflammatory action (Non-Patent Document 5), and anti-glycation action (Non-Patent Document 6), and obesity and metabolism. Treatment or prevention of symptoms selected from the group consisting of slowdown, metabolic syndrome, diabetes, cardiovascular disease, hyperlipidemia, neurodegenerative disease, cognitive impairment, mood disorder, stress and anxiety disorder, weight management, muscle function or Foods or nutritional supplements containing urolithin A, which is one of the urolithins, have also been reported in order to improve mental ability (Patent Document 7).
このように、ウロリチン類を食品、医薬品の原材料及びそれらの加工品等へ添加するこ
とが求められている。しかしながら、ウロリチン類が関わるアンジオテンシン変換酵素阻害作用および血圧降下作用は知られていない。
As described above, it is required to add urolithins to foods, raw materials for pharmaceutical products, processed products thereof and the like. However, the angiotensin converting enzyme inhibitory action and the blood pressure lowering action involving urolithins are not known.
本発明は上記状況下でなされたものであり、本発明は、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害剤の提供を課題とする。また、新規な血圧降下剤として、該アンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む血圧降下剤の提供を課題とする。さらに、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害用飲食品、および新規な血圧降下用飲食品の提供を課題とする。 The present invention has been made under the above circumstances, and an object of the present invention is to provide a novel angiotensin converting enzyme inhibitor. Another object of the present invention is to provide a blood pressure lowering agent containing the angiotensin converting enzyme inhibitor as a novel blood pressure lowering agent. Furthermore, it is an object to provide new foods and drinks for inhibiting angiotensin converting enzyme and new foods and drinks for lowering blood pressure.
本発明者らは、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害剤を探索したところ、ウロリチン類がアンジオテンシン変換酵素の作用を抑制することを見出し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は以下に示すとおりである。
〔１〕ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
〔２〕前記ウロリチン類が、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、およびウロリチンＥからなる群から選択される１以上である、〔１〕に記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
〔３〕〔１〕又は〔２〕に記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む血圧降下剤。
〔４〕ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害用飲食品。
〔５〕ウロリチン類を含有する血圧降下用飲食品。
When the present inventors searched for a novel angiotensin converting enzyme inhibitor, they found that urolithins suppress the action of the angiotensin converting enzyme, and completed the present invention. That is, the present invention is as shown below.
[1] Angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins.
[2] The angiotensin converting enzyme inhibitor according to [1], wherein the urolithins are one or more selected from the group consisting of urolithin A, urolithin B, urolithin C, urolithin D, and urolithin E.
[3] A blood pressure lowering agent containing the angiotensin converting enzyme inhibitor according to [1] or [2].
[4] Foods and drinks for inhibiting angiotensin converting enzyme containing urolithins.
[5] Foods and drinks for lowering blood pressure containing urolithins.
本発明によれば、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害剤として、ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤を提供することができる。また、新規な血圧降下剤として、該アンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む血圧降下剤を提供することができる。また、新規なアンジオテンシン変換酵素阻害用飲食品として、ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害用飲食品を提供することができる。さらに、新規な血圧降下用飲食品として、ウロリチン類を含有する血圧降下用飲食品を提供することができる。 According to the present invention, as a novel angiotensin converting enzyme inhibitor, an angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins can be provided. In addition, as a novel blood pressure lowering agent, a blood pressure lowering agent containing the angiotensin converting enzyme inhibitor can be provided. Further, as a novel food and drink for inhibiting angiotensin converting enzyme, it is possible to provide a food and drink for inhibiting angiotensin converting enzyme containing urolithins. Further, as a novel food or drink for lowering blood pressure, a food or drink for lowering blood pressure containing urolithins can be provided.
本発明は、ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤に係る第一の実施態様と、前記アンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有する血圧降下剤に係る第二の実施態様を含む。 The present invention includes a first embodiment relating to an angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins and a second embodiment relating to a blood pressure lowering agent containing the angiotensin converting enzyme inhibitor.
＜１．ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤＞
本発明の第一の実施態様は、下記一般式（１）で表されるウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤である。
<1. Angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins>
The first embodiment of the present invention is an angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins represented by the following general formula (1).
（ウロリチン類）
第一の実施態様におけるウロリチン類は特に限定されないが、その構造が上記一般式（１）で表される物質である。また、表１に示すように、ウロリチン類は化学式におけるＲ１〜Ｒ６によって、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、ウロリチンＥ、ウロリチンＭ３、ウロリチンＭ４、ウロリチンＭ５、ウロリチンＭ６、ウロリチンＭ７、及びイソウロリチンＡなどを含む。
(Urolithins)
The urolithins in the first embodiment are not particularly limited, but the structure thereof is a substance represented by the above general formula (1). Further, as shown in Table 1, urolithins have urolithin A, urolithin B, urolithin C, urolithin D, urolithin E, urolithin M3, urolithin M4, urolithin M5, urolithin M6, urolithin M7, and urolithin M7 according to R1 to R6 in the chemical formula. Contains isourolithin A and the like.
このうち、アンジオテンシン変換酵素阻害作用が高いことから、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、ウロリチンＥが好ましく、中でもウロリチンＣがより好ましい。 Of these, urolithin A, urolithin B, urolithin C, urolithin D, and urolithin E are preferable, and urolithin C is more preferable, because the angiotensin converting enzyme inhibitory action is high.
ウロリチン類を得る方法は特段限定されず、市販されているものを用いてもよく、化学合成により合成してもよい。
市販のウロリチン類としては、例えば、ウロリチンＡ、ウロリチンＢ、ウロリチンＣ、ウロリチンＤ、ウロリチンＥ（Ｄａｌｔｏｎ Ｐｈａｒｍａ社製）などを挙げることができる。
また、化学合成による合成方法としては常法に従うことができ、例えば、本明細書の実施例で説明するように、２−ブロモ−５−メトキシ安息香酸と塩化アルミニウムとを原料に用いてウロリチンＡを合成する方法が挙げられる。
The method for obtaining urolithins is not particularly limited, and commercially available products may be used or synthesized by chemical synthesis.
Examples of commercially available urolithins include urolithin A, urolithin B, urolithin C, urolithin D, and urolithin E (manufactured by Dalton Pharma).
In addition, a conventional method can be followed as a synthetic method by chemical synthesis. For example, as described in the examples of the present specification, urolithin A using 2-bromo-5-methoxybenzoic acid and aluminum chloride as raw materials. There is a method of synthesizing.
また、植物からエラジタンニンの一種であるプニカラジンを抽出し、これをエラグ酸に加水分解した後、もしくはエラグ酸を抽出し、微生物を用いてウロリチン類に変換してもよい。
植物の種類は特段限定されず、ザクロ、ラズベリー、ブラックベリー、クラウドベリー、ボイセンベリー、イチゴ、クルミ、ゲンノショウコ等が挙げられる。このうち、エラジタンニン及び／又はエラグ酸を高含有していることから、ザクロ、ボイセンベリー、ゲンノショウコが好ましく、ザクロがより好ましい。
これらの植物は、いずれか１種のみを用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。また、該植物からの抽出方法及び抽出条件は特段限定されず、常法に従えばよい。例えば、水抽出、熱水抽出、温水抽出、アルコール抽出、超臨界抽出等の公知の抽出方法を用いることができる。
Alternatively, punicarazine, which is a kind of ellagitannin, may be extracted from a plant and hydrolyzed to ellagic acid, or ellagic acid may be extracted and converted into urolithins using a microorganism.
The type of plant is not particularly limited, and examples thereof include pomegranate, raspberry, blackberry, cloudberry, boysenberry, strawberry, walnut, and geranium thunbergii. Of these, pomegranate, boysenberry, and geranium thunbergii are preferable, and pomegranate is more preferable, because they contain a large amount of ellagitannin and / or ellagic acid.
Only one of these plants may be used, or two or more of these plants may be used in combination. In addition, the extraction method and extraction conditions from the plant are not particularly limited, and a conventional method may be followed. For example, known extraction methods such as water extraction, hot water extraction, hot water extraction, alcohol extraction, and supercritical extraction can be used.
溶媒抽出を行う場合、溶媒としては、例えば、水；メタノール、エタノール等の低級アルコールや、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール等のアルコール類（無水、含水の別を問わない）；アセトン等のケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、酢酸エチルエステル等のエステル類、キシレン等が挙げられ、好ましくは水、エタノール等である。これらの溶媒は、いずれか１種のみを用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。
抽出したプニカラジンなどのエラジタンニンをエラグ酸に加水分解する方法としては特段限定されないが、酸、酵素、微生物によって加水分解する方法が挙げられる。
微生物を用いてエラグ酸をウロリチン類に変換する方法としては特段限定されないが、例えば、Food Funct., 5, 8, 1779-1784 (2014)に記載にされている公知の方法を用いる
ことができる。
When solvent extraction is performed, the solvent may be, for example, water; lower alcohols such as methanol and ethanol, and alcohols such as polyhydric alcohols such as propylene glycol and 1,3-butylene glycol (whether anhydrous or water-containing). ); Ketones such as acetone, esters such as diethyl ether, dioxane, acetonitrile and ethyl acetate, xylene and the like, preferably water, ethanol and the like. Only one of these solvents may be used, or two or more of these solvents may be used in combination.
The method for hydrolyzing the extracted ellagitannin such as punicarazine to ellagic acid is not particularly limited, and examples thereof include a method for hydrolyzing with an acid, an enzyme, and a microorganism.
The method for converting ellagic acid into urolithins using a microorganism is not particularly limited, and for example, a known method described in Food Funct., 5, 8, 1779-1784 (2014) can be used. ..
得られたウロリチン類をそのままの状態で使用することもできるが、乾燥させて粉末状のものを用いてもよい。また、必要に応じて、得られたウロリチン類に精製、濃縮処理等を施してもよい。精製処理としては、濾過又はイオン交換樹脂や活性炭カラム等を用いた吸着、脱色といった処理を行うことができる。また、濃縮処理としては、エバポレーター等の常法を利用できる。 The obtained urolithins can be used as they are, but they may be dried and used in powder form. Further, if necessary, the obtained urolithins may be subjected to purification, concentration treatment or the like. As the purification treatment, treatment such as filtration or adsorption or decolorization using an ion exchange resin or an activated carbon column can be performed. Further, as the concentration treatment, a conventional method such as an evaporator can be used.
また、得られたウロリチン類（又は精製処理物若しくは濃縮物）を凍結乾燥処理に供して粉末化する方法、デキストリン、コーンスターチ、アラビアゴム等の賦形剤を添加してスプレードライ処理により粉末化する方法等、公知の方法に従って粉末化してもよい。さらにその後に、必要に応じて純水、エタノール等に溶解して用いてもよい。 In addition, the obtained urolithins (or purified products or concentrates) are subjected to freeze-drying treatment to be pulverized, and excipients such as dextrin, cornstarch, and gum arabic are added and pulverized by spray-drying treatment. It may be pulverized according to a known method such as a method. After that, if necessary, it may be dissolved in pure water, ethanol or the like for use.
（アンジオテンシン変換酵素阻害剤）
第一の実施態様は、ウロリチン類を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤である。
背景技術にも記載した通り、アンジオテンシン変換酵素とは、アンジオテンシンＩのＣ末端の２つのアミノ酸残基を切断し、血管収縮、血圧上昇等の生理活性を持つペプチドであるアンギオテンシンＩＩへ変換する酵素のことである。本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、アンジオテンシンＩをアンジオテンシンＩＩへ変換する酵素を阻害する剤である。
一方で、アンジオテンシン変換酵素は血管を拡張させ、血圧を低下させるブラジキニンを分解して不活性化する作用も有している。
従って、アンジオテンシン変換酵素を阻害することは、アンジオテンシンＩからアンジオテンシンＩＩへの変換を阻害し、血圧降下ができることから、高血圧に伴う疾患の予防や治療に有用である。
このことから、本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、血圧降下の用途に好ましく用いられ、その好ましい形態は、医薬や飲食品、サプリメントである。
(Angiotensin converting enzyme inhibitor)
The first embodiment is an angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins.
As described in the background art, angiotensin converting enzyme is an enzyme that cleaves two amino acid residues at the C-terminal of angiotensin I and converts it into angiotensin II, which is a peptide having physiological activities such as vasoconstriction and blood pressure increase. That is. The angiotensin converting enzyme inhibitor according to this embodiment is an agent that inhibits an enzyme that converts angiotensin I to angiotensin II.
On the other hand, angiotensin converting enzyme also has the effect of dilating blood vessels and decomposing and inactivating bradykinin, which lowers blood pressure.
Therefore, inhibiting angiotensin converting enzyme inhibits the conversion of angiotensin I to angiotensin II and lowers blood pressure, which is useful for the prevention and treatment of diseases associated with hypertension.
From this, the angiotensin converting enzyme inhibitor according to the present embodiment is preferably used for the purpose of lowering blood pressure, and the preferred form thereof is a medicine, a food or drink, or a supplement.
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、上記したウロリチン類のうち一種を含有してもよく、複数種を含有してもよい。また、ウロリチン類を単独で含有してもよいが、ウロリチン類以外に公知の賦形剤、香料、着色料、乳化剤、安定化剤、増粘剤、酵素、防腐剤、滑沢剤、界面活性剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、結合剤、吸収促進剤、吸着剤、保湿剤、可溶化剤、保存剤、風味剤、甘味剤等を、本実施態様の効果を損なわない範囲で必要に応じて配合することができる。 The angiotensin converting enzyme inhibitor according to this embodiment may contain one of the above-mentioned urolithins, or may contain a plurality of them. In addition, urolithins may be contained alone, but other than urolithins, known excipients, fragrances, colorants, emulsifiers, stabilizers, thickeners, enzymes, preservatives, lubricants, and surfactants are used. Agents, disintegrants, disintegrants, binders, absorption promoters, adsorbents, moisturizers, solubilizers, preservatives, flavors, sweeteners, etc., as required without impairing the effects of this embodiment. Can be blended.
アンジオテンシン変換酵素阻害剤全量に対するウロリチン類の含有量は、本実施態様による所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．００００１質量％以上、好ましくは０.０００１質量％以上、より好ましくは０．００
１質量％以上であり、また、通常２０質量％以下、好ましくは３質量％以下、より好ましくは１質量％以下である。
The content of urolithins with respect to the total amount of the angiotensin converting enzyme inhibitor is not particularly limited as long as the desired effect according to this embodiment is achieved, but the total amount of urolithins is usually 0.00001% by mass or more, preferably 0.0001. Mass% or more, more preferably 0.00
It is 1% by mass or more, and is usually 20% by mass or less, preferably 3% by mass or less, and more preferably 1% by mass or less.
（医薬）
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を医薬の素材として用いる場合、その剤形は、予防または治療しようとする疾患や医薬の使用形態、投与経路等に応じて選択することができる。例えば、錠剤、被覆錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、注射剤、坐剤、浸剤、煎剤、チンキ剤等が挙げられる。これ
らの各種製剤は、常法に従って主薬に対して必要に応じて充填剤、増量剤、賦形剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用し得る既知の補助剤を用いて製剤化することができる。また、この医薬製剤中に着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬を含有させてもよい。
また、好ましい疾患としては、血圧の上昇に起因するものであり、例えば高血圧症が挙げられ、その中でも好ましくは、脳梗塞、脳出血、くも膜下出血、心筋梗塞、狭心症、腎臓病である。
(Pharmaceutical)
When the angiotensin converting enzyme inhibitor according to this embodiment is used as a material for a drug, the dosage form can be selected according to the disease to be prevented or treated, the form of use of the drug, the route of administration, and the like. Examples thereof include tablets, coated tablets, pills, capsules, granules, powders, liquids, suspensions, emulsions, syrups, injections, suppositories, dipping agents, decoctions, tinctures and the like. These various preparations are used as a filler, a bulking agent, an excipient, a binder, a moisturizer, a disintegrant, a surfactant, a lubricant, a colorant, and a flavoring agent as needed for the main ingredient according to a conventional method. , Dissolving aids, suspending agents, coating agents and the like, can be formulated using known excipients commonly used in the pharmaceutical formulation technology field. In addition, colorants, preservatives, flavors, flavors, sweeteners and the like and other medicines may be contained in this pharmaceutical preparation.
In addition, preferred diseases are caused by an increase in blood pressure, and examples thereof include hypertension, and among them, cerebral infarction, cerebral hemorrhage, subarachnoid hemorrhage, myocardial infarction, angina, and kidney disease are preferable.
医薬全量に対する上記アンジオテンシン変換酵素阻害剤の含有量は、各発明による所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下である。 The content of the angiotensin converting enzyme inhibitor with respect to the total amount of the drug is not particularly limited as long as the desired effect according to each invention is exhibited, but the total amount of urolithins is usually 0.0001% by mass or more, preferably 0.001% by mass. % Or more, more preferably 0.01% by mass or more, and usually 10% by mass or less, preferably 1% by mass or less, more preferably 0.1% by mass or less.
（飲食品）
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を飲食品の素材として用いる場合、一般の飲食品の他、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品、病者用食品、食品添加物等（これらには飲料も含まれる。本明細書において同じ。）として使用できる。飲食品の形態としては、ウロリチン類を含有する植物自体や動物自体ではなく、清涼飲料、ミルク、プリン、ゼリー、飴、ガム、グミ、ヨーグルト、チョコレート、スープ、クッキー、スナック菓子、アイスクリーム、アイスキャンデー、パン、ケーキ、シュークリーム、ハム、ミートソース、カレー、シチュー、チーズ、バター、ドレッシング等を例示することができる。
(Food and drink)
When the angiotensin converting enzyme inhibitor according to this embodiment is used as a material for foods and drinks, in addition to general foods and drinks, foods for specified health use, dietary supplements, functional foods, foods for the sick, food additives, etc. Also includes beverages; the same shall apply herein). The form of food and drink is not the plant itself or the animal itself containing urolithins, but soft drinks, milk, pudding, jelly, candy, gum, gummies, yogurt, chocolate, soup, cookies, snacks, ice cream, ice candy. , Bread, cake, cream puff, ham, meat sauce, curry, stew, cheese, butter, dressing and the like can be exemplified.
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む飲食品は、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を主成分として使用することができる。タンパク質としては、例えば、全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、及びこれらの加水分解物、バターなどが挙げられる。糖質としては、糖類、加工澱粉（デキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維などが挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン、乳清ミネラルなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸などが挙げられる。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用してもよく、合成品及び／又はこれらを多く含む飲食品を用いてもよい。 The food or drink containing the angiotensin converting enzyme inhibitor according to this embodiment may use water, protein, sugar, lipid, vitamins, minerals, organic acid, organic base, fruit juice, flavors and the like as main components. it can. Examples of the protein include animal and vegetable proteins such as full-fat milk powder, skim milk powder, partially skim milk powder, casein, soybean protein, chicken egg protein, meat protein, and hydrolysates and butters thereof. Examples of carbohydrates include sugars, modified starches (in addition to dextrin, soluble starches, British starch, oxidized starches, starch esters, starch ethers, etc.), dietary fiber and the like. Examples of the lipid include lard, safflower oil, corn oil, rapeseed oil, coconut oil, fractionated oils thereof, hydrogenated oils, and vegetable fats and oils such as ester exchange oils. Examples of vitamins include vitamin A, carotene, vitamin B group, vitamin C, vitamin D group, vitamin E, vitamin K group, vitamin P, vitamin Q, niacin, nicotinic acid, pantothenic acid, biotin, inositol, and choline. , Folic acid and the like, and examples of minerals include calcium, potassium, magnesium, sodium, copper, iron, manganese, zinc, selenium and milky minerals. Examples of the organic acid include malic acid, citric acid, lactic acid, tartaric acid and the like. As these components, two or more kinds may be used in combination, and synthetic products and / or foods and drinks containing a large amount thereof may be used.
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有する飲食品は、常法に従って製造することができる。また、本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤の、飲食品への配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。さらに、必要に応じて、瓶、袋、缶、箱、パック等の適宜の容器に封入することができる。
飲食品全量に対する上記アンジオテンシン変換酵素阻害剤の含有量は、各発明による所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質
量％以下である。
The food or drink containing the angiotensin converting enzyme inhibitor according to this embodiment can be produced according to a conventional method. In addition, the amount, method, and timing of blending the angiotensin converting enzyme inhibitor according to this embodiment with food and drink can be appropriately selected. Further, if necessary, it can be sealed in an appropriate container such as a bottle, a bag, a can, a box, or a pack.
The content of the angiotensin converting enzyme inhibitor with respect to the total amount of food and drink is not particularly limited as long as the desired effect according to each invention is exhibited, but the total amount of urolithins is usually 0.0001% by mass or more, preferably 0.001. It is 9% by mass or more, more preferably 0.01% by mass or more, and usually 10% by mass or less, preferably 1% by mass or less, more preferably 0.1% by mass or less.
（サプリメント）
サプリメントとは、dietary supplementからなる飲食品区分の１つであり、本明細書では、アンジオテンシン変換酵素阻害作用等を発揮する機能補助物質をいう。
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤をサプリメントの素材として用いる場合、固形物、ゲル状物、液状物の何れの形態とすることができる。サプリメントの形態としては、例えば、各種加工飲食品、粉末、錠剤、丸剤、カプセル、ゼリー、顆粒等の形態にすることができる。
(supplement)
A supplement is one of the food and drink categories consisting of dietary supplements, and in the present specification, it refers to a functional auxiliary substance that exerts an angiotensin converting enzyme inhibitory action and the like.
When the angiotensin converting enzyme inhibitor according to this embodiment is used as a material for supplements, it can be in any form of solid, gel or liquid. The form of the supplement can be, for example, various processed foods and drinks, powders, tablets, pills, capsules, jellies, granules and the like.
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤をサプリメントの素材として用いる場合、デキストリン等の賦形剤、ビタミンＣ等の保存剤、バニリン等の嬌味剤、ベニバナ色素等の色素、単糖、オリゴ糖および多糖類（例、グルコース、フルクトース、スクロース、サッカロース、およびこれらを含有する糖質）、酸味料、香料、油脂、乳化剤、全脂粉乳、または寒天などの添加剤を含有していてもよい。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用してもよく、合成品及び／又はこれらを多く含んでもよい。 When the angiotensin converting enzyme inhibitor according to the present embodiment is used as a supplement material, excipients such as dextrin, preservatives such as vitamin C, flavoring agents such as vanillin, pigments such as benivana pigment, monosaccharides and oligosaccharides And may contain additives such as polysaccharides (eg, glucose, fructose, sucrose, sucrose, and sugars containing them), acidulants, flavors, fats and oils, emulsifiers, whole fat powdered milk, or agar. These components may be used in combination of two or more, and may contain a large amount of synthetic products and / or these.
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤をサプリメントの素材として用いる場合、常法に従って製造することができる。また、サプリメントへの配合量、配合方法、配合時期は適宜選択することができる。さらに、必要に応じて、瓶、袋、缶、箱、パック等の適宜の容器に封入することができる。 When the angiotensin converting enzyme inhibitor according to this embodiment is used as a material for a supplement, it can be produced according to a conventional method. In addition, the amount to be added to the supplement, the method of addition, and the timing of addition can be appropriately selected. Further, if necessary, it can be sealed in an appropriate container such as a bottle, a bag, a can, a box, or a pack.
サプリメント全量に対する上記アンジオテンシン変換酵素阻害剤の含有量は、上記効果が発揮される限り特段限定されないが、ウロリチン類として、総量で、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下である。 The content of the angiotensin converting enzyme inhibitor with respect to the total amount of the supplement is not particularly limited as long as the above effects are exhibited, but the total amount of urolithins is usually 0.0001% by mass or more, preferably 0.001% by mass or more. It is more preferably 0.01% by mass or more, and usually 10% by mass or less, preferably 1% by mass or less, and more preferably 0.1% by mass or less.
（表示）
本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有する、医薬、飲食品、サプリメント等は、アンジオテンシン変換酵素阻害作用のために用いられるものである旨の表示を付した医薬、飲食品、サプリメント等として販売することができる。
(display)
Drugs, foods and drinks, supplements and the like containing an angiotensin converting enzyme inhibitor according to the present embodiment are designated as drugs, foods and drinks, supplements and the like with a label indicating that they are used for angiotensin converting enzyme inhibitory action. Can be sold.
前記「表示」とは、需要者に対して上記用途を知らしめるための全ての行為を意味し、上記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、すべてが各実施態様における「表示」に該当する。しかしながら、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により表示することが好ましい。具体的には、医薬、飲食品、サプリメント等に係る商品又は商品の包装に上記用途を記載する行為、商品又は商品の包装に上記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為、等が例示できる。 The "display" means all actions for informing the consumer of the above-mentioned use, and if the display can recall or infer the above-mentioned use, the purpose of the display, the content of the display, and the display. Regardless of the object, medium, etc., all correspond to the "indication" in each embodiment. However, it is preferable to display it in an expression that allows the consumer to directly recognize the above application. Specifically, for the act of describing the above-mentioned use on the product or product packaging related to medicines, foods and drinks, supplements, etc., or for transferring, transferring, or delivering the product or product packaging with the above-mentioned use described. The above-mentioned uses are described in the act of displaying and importing products, advertisements, price lists or transaction documents, or distributed, or the above-mentioned uses are described in the information containing these and electromagnetically (Internet, etc.) ) The act of providing by the method, etc. can be exemplified.
一方、表示としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましく、特に包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等への表示が好ましい。 On the other hand, as the display, it is preferable that the display is approved by the government or the like (for example, the display is approved based on various systems established by the government and is performed in a manner based on such approval), and particularly packaging and containers. , Catalogs, pamphlets, POPs, and other promotional materials at sales sites, and other documents are preferable.
また、例えば、本実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有する飲食品で
あれば、健康食品、機能性食品、特別用途食品、栄養機能食品（これらには飲料も含まれる。本明細書において同じ。）、医薬用部外品等としての表示を例示することができ、その他厚生労働省によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができ、詳細にいえば、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示が、典型的な例として列挙することが可能である。
Further, for example, foods and drinks containing an angiotensin converting enzyme inhibitor according to the present embodiment include health foods, functional foods, special purpose foods, and nutritionally functional foods (these also include beverages. In the present specification. (Same as above), labeling as a medicinal external product, etc. can be exemplified, and other labeling approved by the Ministry of Health, Labor and Welfare, for example, foods for specified health use, labeling approved by a similar system can be exemplified. .. Examples of the latter include labeling as a food for specified health use, labeling as a food for specified health use as a condition, labeling indicating that it affects the structure and function of the body, labeling for reducing the risk of illness, and the like. Speaking of which, labeling as a food for specified health use (especially labeling for health uses) stipulated in the Health Promotion Law Enforcement Regulations (April 30, 2003, Ministry of Health, Labor and Welfare Ordinance No. 86), and similar The display can be listed as a typical example.
＜２．血圧降下剤＞
本発明の第二の実施態様は、上記第一の実施態様に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤を含む血圧降下剤である。
本実施態様に係る血圧降下剤は、ウロリチン類を単独で含有してもよいが、上記成分以外に公知の賦形剤、香料、着色料、乳化剤、安定化剤、増粘剤、酵素、防腐剤、滑沢剤、界面活性剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、結合剤、吸収促進剤、吸着剤、保湿剤、可溶化剤、保存剤、風味剤、甘味剤等を本実施態様の効果を損なわない範囲で必要に応じて配合することができる。
<2. Blood pressure lowering agent>
A second embodiment of the present invention is a blood pressure lowering agent containing an angiotensin converting enzyme inhibitor according to the first embodiment.
The antihypertensive agent according to this embodiment may contain urolithins alone, but in addition to the above components, known excipients, fragrances, colorants, emulsifiers, stabilizers, thickeners, enzymes, preservatives Agents, lubricants, surfactants, disintegrants, disintegrant inhibitors, binders, absorption promoters, adsorbents, moisturizers, solubilizers, preservatives, flavoring agents, sweeteners, etc. It can be blended as needed within a range that does not impair.
血圧降下剤全量に対するウロリチン類の含有量は、本実施態様による所望の効果が奏される限り特に限定されないが、ウロリチン類の総量として、通常０．０００１質量％以上、好ましくは０．００１質量％以上、より好ましくは０．０１質量％以上であり、また、通常１０質量％以下、好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．１質量％以下である。 The content of urolithins with respect to the total amount of the antihypertensive agent is not particularly limited as long as the desired effect according to this embodiment is exhibited, but the total amount of urolithins is usually 0.0001% by mass or more, preferably 0.001% by mass. As described above, it is more preferably 0.01% by mass or more, and usually 10% by mass or less, preferably 1% by mass or less, and more preferably 0.1% by mass or less.
本実施態様に係る血圧降下剤は、実施形態に合わせ、医薬や飲食品、サプリメントなどの形態で用いることができる。本実施態様に係る血圧降下剤に関する説明には、第一の実施態様に記載した説明を援用する。 The blood pressure lowering agent according to this embodiment can be used in the form of medicine, food or drink, supplement, etc. according to the embodiment. The description described in the first embodiment is incorporated in the description of the blood pressure lowering agent according to the present embodiment.
尚、本実施態様に係る血圧降下作用はウロリチン類に起因するものである。よって、本発明の他の一実施態様として、ウロリチン類を含む血圧降下剤が挙げられる。ウロリチン類を含む血圧降下剤に関する説明には、第一の実施態様および第二の実施態様に記載した説明を援用する。 The blood pressure lowering effect according to this embodiment is due to urolithins. Therefore, as another embodiment of the present invention, a blood pressure lowering agent containing urolithins can be mentioned. For the description of the blood pressure lowering agent containing urolithins, the description described in the first embodiment and the second embodiment is incorporated.
以下、具体的な実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to specific examples, but the present invention is not limited to these examples.
（ウロリチン類の分析方法）
ウロリチン類の一例としてウロリチンＡを用いた場合を説明する。ウロリチンＡの分析はＨＰＬＣを用いて行った。即ち、ウロリチンＡ（Ｄａｌｔｏｎ Ｐｈａｒｍａ社製）を適当な溶媒に溶解させて調製した溶液を下記のＨＰＬＣ条件下で分析し、純度（％）（Ａ）およびＨＰＬＣにおけるピーク面積値（Ｂ）を用いて、下記算出式（１）及び算出式（２）によりウロリチンＡのファクター及びサンプルのウロリチンＡ濃度を算出した。
(Analysis method for urolithins)
The case where urolithin A is used as an example of urolithins will be described. Analysis of urolithin A was performed using HPLC. That is, a solution prepared by dissolving urolithin A (manufactured by Dalton Pharma) in an appropriate solvent was analyzed under the following HPLC conditions, and the purity (%) (A) and the peak area value (B) in HPLC were used. The urolithin A factor and the urolithin A concentration of the sample were calculated by the following calculation formulas (1) and (2).
（ウロリチンＡのファクター算出式）
ウロリチンＡのファクター＝（Ｂ）／（ウロリチンＡの標準液の濃度（ｍｇ／Ｌ）×（Ａ）／１００） ・・・（１）
（サンプルのウロリチンＡ濃度算出式）
サンプルのウロリチンＡ濃度（ｍｇ／Ｌ）＝サンプル中のウロリチンＡのピーク面積値／
ウロリチンＡのファクター ・・・（２）
(Urolithin A factor calculation formula)
Urolithin A factor = (B) / (Urolithin A standard solution concentration (mg / L) x (A) / 100) ... (1)
(Sample urolithin A concentration calculation formula)
Sample urolithin A concentration (mg / L) = peak area value of urolithin A in the sample /
Urolithin A factor ... (2)
（分析条件）
分析カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ−３（２５０×４．６ｍｍ）（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）
検出波長：３０５ｎｍ
移動相：水／アセトニトリル／酢酸 ＝ ７４／２５／１
カラム温度：４０℃
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
上記条件下、ウロリチンＡは１６．５分に保持時間を有した。
(Analysis conditions)
Analytical column: Inertsil ODS-3 (250 x 4.6 mm) (manufactured by GL Sciences)
Detection wavelength: 305 nm
Mobile phase: water / acetonitrile / acetic acid = 74/25/1
Column temperature: 40 ° C
Flow velocity: 1.0 mL / min
Under the above conditions, urolithin A had a retention time of 16.5 minutes.
（ウロリチンＡの調製）
２−ブロモ−５−メトキシ安息香酸５ｇ（和光純薬工業株式会社製）と塩化アルミニウム１５ｇを１５０ｍＬのクロロベンゼン中で２．５時間還流した。冷却後、反応液を氷水に移し、２５０ｍＬのジエチルエーテルを用いて３回抽出を行った。得られた抽出液を減圧濃縮してジエチルエーテルを留去し、２−ブロモ−５−ヒドロキシ安息香酸４．２ｇを得た。得られた２−ブロモ−５−ヒドロキシ安息香酸３．９ｇとレゾルシノール３．９ｇ（東京化成工業株式会社製）を９ｍＬの４Ｍ ＮａＯＨ水溶液中で６０℃、３０分間加熱
した。この反応液に１０％硫酸銅水溶液１．８ｍＬを加えた後、更に８０℃、１０分間の加熱を行った。生成した沈殿物をろ過によって回収し、ウロリチンＡの白色粉末を得た。
(Preparation of urolithin A)
5 g of 2-bromo-5-methoxybenzoic acid (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 15 g of aluminum chloride were refluxed in 150 mL of chlorobenzene for 2.5 hours. After cooling, the reaction solution was transferred to ice water and extracted three times with 250 mL of diethyl ether. The obtained extract was concentrated under reduced pressure to distill off diethyl ether to obtain 4.2 g of 2-bromo-5-hydroxybenzoic acid. The obtained 2-bromo-5-hydroxybenzoic acid (3.9 g) and resorcinol (3.9 g) (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) were heated at 60 ° C. for 30 minutes in 9 mL of a 4M NaOH aqueous solution. After adding 1.8 mL of a 10% copper sulfate aqueous solution to this reaction solution, heating was further performed at 80 ° C. for 10 minutes. The resulting precipitate was collected by filtration to give a white powder of urolithin A.
＜アンジオテンシン変換酵素阻害の評価＞
［実施例１］
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）（Ｓｉｇｍａ社製）を１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．３）（３００ｍＭ ＮａＣｌを含む）に溶解後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ、４℃）し、上清を回収して１００ｍＵ／ｍＬのＡＣＥ溶液を調製し、酵素液とした。９６ウェルマイクロプレートに１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ８．３）に溶解した１７５ｍＭ Ｈｉｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ（株式会社ペプチド研究所製）２５μＬ、および、ウロリチンＡの終濃度が７．８１ｍｇ／Ｌ、６２．５ｍｇ／Ｌ、５００ｍｇ／Ｌ、又は１０００ｍｇ／Ｌとなるように試験サンプル液５０μＬを添加して３７℃、１０ｍｉｎプレインキュベーションを行った。その後、上記酵素液１００μＬを添加し、３７℃、４０ｍｉｎの酵素反応を行った。１Ｎ 水酸化ナトリウム溶液２０μＬを添加することによって反応を停止させ、メタノールに溶解した０．２％ ｏ−フタルアルデヒド（和光純薬工業株式会社製）１０μＬを加えて遮光下で１５分間反応させた後に３．６Ｍ リン酸溶液１５μＬを加えて、励起波長３４０ｎｍ、蛍光波長４２０ｎｍの条件下、酵素反応生成物の蛍光強度を測定した。
基質Ｈｉｐ−Ｈｉｓ−ＬｅｕにＡＣＥを添加すると、酵素反応の結果、該基質は馬尿酸とＨｉｓ−Ｌｅｕとに加水分解される。Ｈｉｓ−Ｌｅｕはアルカリ条件下でｏ−フタルアルデヒドにより蛍光を発する。つまり、ＡＣＥ阻害活性が大きい場合には、Ｈｉｓ−Ｌｅｕの生成量は小さいため蛍光強度が小さいことになる。
<Evaluation of angiotensin converting enzyme inhibition>
[Example 1]
Angiotensin converting enzyme (ACE) (manufactured by Sigma) is dissolved in 100 mM HEPES buffer (pH 8.3) (containing 300 mM NaCl), centrifuged (3000 rpm, 10 min, 4 ° C), and the supernatant is collected and 100 mU. A / mL ACE solution was prepared and used as an enzyme solution. 25 μL of 175 mM Hip-His-Leu (manufactured by Peptide Institute, Ltd.) dissolved in 100 mM HEPES buffer (pH 8.3) in a 96-well microplate, and the final concentration of urolithin A was 7.81 mg / L, 62.5 mg. 50 μL of the test sample solution was added so as to be / L, 500 mg / L, or 1000 mg / L, and preincubation was performed at 37 ° C. for 10 minutes. Then, 100 μL of the above enzyme solution was added, and an enzymatic reaction was carried out at 37 ° C. for 40 minutes. The reaction was stopped by adding 20 μL of 1N sodium hydroxide solution, 10 μL of 0.2% o-phthalaldehyde (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) dissolved in methanol was added, and the reaction was carried out in the dark for 15 minutes. 15 μL of a 3.6 M phosphoric acid solution was added, and the fluorescence intensity of the enzyme reaction product was measured under the conditions of an excitation wavelength of 340 nm and a fluorescence wavelength of 420 nm.
When ACE is added to the substrate Hip-His-Leu, the substrate is hydrolyzed to hippuric acid and His-Leu as a result of the enzymatic reaction. His-Leu fluoresces with o-phthalaldehyde under alkaline conditions. That is, when the ACE inhibitory activity is large, the amount of His-Leu produced is small, so that the fluorescence intensity is small.
［比較例１］
ウロリチンＡを添加しないこと以外は上記実施例１と同様にしたものをコントロール（比較例１）として用いた。
[Comparative Example 1]
The same as in Example 1 above except that urolithin A was not added was used as a control (Comparative Example 1).
また、ＡＣＥを添加しないこと以外は上記実施例１と同様にしたものを試験反応液のブランクとして用いた。更に、コントロールにおいてＡＣＥを添加しないこと以外は上記実施例１と同様にしたものをコントロールのブランクとした。 Further, the same as in Example 1 above except that ACE was not added was used as a blank for the test reaction solution. Further, the same as in Example 1 above except that ACE was not added in the control was used as the control blank.
ＡＣＥ阻害率は下記算出式（１）により算出した。
ＡＣＥ阻害率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００ ・・・（３）
Ａ：試験反応液（実施例１）（ＡＣＥ添加、ウロリチンＡ添加）の蛍光強度
Ｂ：試験反応液（実施例１）のブランク（ＡＣＥ非添加、ウロリチンＡ添加）の蛍光強度
Ｃ：コントロール（比較例１）（ＡＣＥ添加、ウロリチンＡ非添加）の蛍光強度
Ｄ：コントロール（比較例１）のブランク（ＡＣＥ非添加、ウロリチンＡ非添加）の蛍光強度
The ACE inhibition rate was calculated by the following formula (1).
ACE inhibition rate (%) = {1- (AB) / (CD)} × 100 ... (3)
A: Fluorescence intensity of test reaction solution (Example 1) (ACE added, urolithin A added) B: Fluorescence intensity of blank (ACE not added, urolithin A added) of test reaction solution (Example 1) C: Control (comparison) Example 1) Fluorescence intensity of (ACE added, urolithin A not added) D: Fluorescence intensity of the control (Comparative Example 1) blank (ACE not added, urolithin A not added)
ウロリチンＡ濃度とＡＣＥ阻害率との関係を表すグラフを図１に示す。図１に示すように、ウロリチンＡの濃度依存的にＡＣＥ阻害率の増加が見られ、ウロリチンＡがＡＣＥ阻害剤として作用することが確認された。 A graph showing the relationship between the urolithin A concentration and the ACE inhibition rate is shown in FIG. As shown in FIG. 1, an increase in the ACE inhibition rate was observed depending on the concentration of urolithin A, and it was confirmed that urolithin A acts as an ACE inhibitor.
［実施例２、比較例２］
試験サンプルとして市販のウロリチンＢ（Ｄａｌｔｏｎ Ｐｈａｒｍａ社製）を用い、終濃度が１５．６ｍｇ／Ｌ、６２．５ｍｇ／Ｌ、２５０ｍｇ／Ｌ、又は１０００ｍｇ／Ｌとなるように反応液を調製した以外は実施例１と同じ方法で行った。
[Example 2, Comparative Example 2]
A commercially available urolithin B (manufactured by Dalton Pharma) was used as a test sample, and the reaction solution was prepared so that the final concentration was 15.6 mg / L, 62.5 mg / L, 250 mg / L, or 1000 mg / L. The same method as in Example 1 was carried out.
ウロリチンＢ濃度とＡＣＥ阻害率との関係を表すグラフを図２に示す。図２に示すように、ウロリチンＢの濃度依存的にＡＣＥ阻害率の増加が見られ、ウロリチンＢがＡＣＥ阻害剤として作用することが確認された。 A graph showing the relationship between the urolithin B concentration and the ACE inhibition rate is shown in FIG. As shown in FIG. 2, an increase in the ACE inhibition rate was observed depending on the concentration of urolithin B, and it was confirmed that urolithin B acts as an ACE inhibitor.
［実施例３、比較例３］
試験サンプルとして市販のウロリチンＣ（Ｄａｌｔｏｎ Ｐｈａｒｍａ社製）を用い、終濃度が７．８１ｍｇ／Ｌ、３１．３ｍｇ／Ｌ、１２５ｍｇ／Ｌ、又は５００ｍｇ／Ｌとなるように反応液を調製した以外は実施例１と同じ方法で行った。
[Example 3, Comparative Example 3]
A commercially available urolithin C (manufactured by Dalton Pharma) was used as a test sample, and the reaction solution was prepared so that the final concentration was 7.81 mg / L, 31.3 mg / L, 125 mg / L, or 500 mg / L. The same method as in Example 1 was carried out.
ウロリチンＣ濃度とＡＣＥ阻害率との関係を表すグラフを図３に示す。図３に示すように、ウロリチンＣの濃度依存的にＡＣＥ阻害率の増加が見られ、ウロリチンＣがＡＣＥ阻害剤として作用することが確認された。 A graph showing the relationship between the urolithin C concentration and the ACE inhibition rate is shown in FIG. As shown in FIG. 3, an increase in the ACE inhibition rate was observed depending on the concentration of urolithin C, and it was confirmed that urolithin C acts as an ACE inhibitor.
［実施例４、比較例４］
試験サンプルとして市販のウロリチンＤ（Ｄａｌｔｏｎ Ｐｈａｒｍａ社製）を用いて反応液を調製した以外は実施例１と同じ方法で行った。
[Example 4, Comparative Example 4]
The reaction was carried out in the same manner as in Example 1 except that a reaction solution was prepared using commercially available urolithin D (manufactured by Dalton Pharma) as a test sample.
ウロリチンＤ濃度とＡＣＥ阻害率との関係を表すグラフを図４に示す。図４に示すように、ウロリチンＤの濃度依存的にＡＣＥ阻害率の増加が見られ、ウロリチンＤがＡＣＥ阻害剤として作用することが確認された。 A graph showing the relationship between the urolithin D concentration and the ACE inhibition rate is shown in FIG. As shown in FIG. 4, an increase in the ACE inhibition rate was observed depending on the concentration of urolithin D, and it was confirmed that urolithin D acts as an ACE inhibitor.
［実施例５、比較例５］
試験サンプルとして市販のウロリチンＥ（Ｄａｌｔｏｎ Ｐｈａｒｍａ社製）を用い、終濃度が１５．６ｍｇ／Ｌ、６２．５ｍｇ／Ｌ、２５０ｍｇ／Ｌ、又は１０００ｍｇ／Ｌとなるように反応液を調製した以外は実施例１と同じ方法で行った。
[Example 5, Comparative Example 5]
A commercially available urolithin E (manufactured by Dalton Pharma) was used as a test sample, and the reaction solution was prepared so that the final concentration was 15.6 mg / L, 62.5 mg / L, 250 mg / L, or 1000 mg / L. The same method as in Example 1 was carried out.
ウロリチンＥ濃度とＡＣＥ阻害率との関係を表すグラフを図５に示す。図５に示すように、ウロリチンＥの濃度依存的にＡＣＥ阻害率の増加が見られ、ウロリチンＥがＡＣＥ阻害剤として作用することが確認された。 A graph showing the relationship between the urolithin E concentration and the ACE inhibition rate is shown in FIG. As shown in FIG. 5, an increase in the ACE inhibition rate was observed depending on the concentration of urolithin E, and it was confirmed that urolithin E acts as an ACE inhibitor.
本発明は、医薬、飲食品、サプリメント等の製剤技術に適用できる。これらは、アンジオテンシン変換酵素阻害、血圧降下等のために用いられる。 The present invention can be applied to formulation techniques for medicines, foods and drinks, supplements and the like. These are used for inhibiting angiotensin converting enzyme, lowering blood pressure, and the like.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2016105426A JP6791478B2 (en) | 2016-05-26 | 2016-05-26 | Angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2016105426A JP6791478B2 (en) | 2016-05-26 | 2016-05-26 | Angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2017210445A JP2017210445A (en) | 2017-11-30 |
| JP6791478B2 true JP6791478B2 (en) | 2020-11-25 |
Family
ID=60475251
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2016105426A Active JP6791478B2 (en) | 2016-05-26 | 2016-05-26 | Angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6791478B2 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019163437A1 (en) * | 2018-02-21 | 2019-08-29 | 株式会社ダイセル | Osteoclast differentiation inhibitor containing urolithin |
| WO2019163176A1 (en) * | 2018-02-21 | 2019-08-29 | 株式会社ダイセル | Osteoclast differentiation inhibitor containing urolithin |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2356536B1 (en) * | 2009-09-23 | 2012-02-13 | Probelte Pharma, Sa | A composition used as a prebiotic that contains a pomegranate extract and a food that includes said composition. |
| SG10201602286RA (en) * | 2010-12-23 | 2016-04-28 | Amazentis Sa | Compositions and methods for improving mitochondrial function and treating neurodegenerative diseases and cognitive disorders |
| AU2013284419A1 (en) * | 2012-06-27 | 2015-02-12 | Amazentis Sa | Enhancing autophagy or increasing longevity by administration of urolithins or precursors thereof |
| CA2826884A1 (en) * | 2012-09-14 | 2014-03-14 | Natreon, Inc. | Method for improving endothelial function and decreasing cardiovascular morbidity using shilajit |
-
2016
- 2016-05-26 JP JP2016105426A patent/JP6791478B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2017210445A (en) | 2017-11-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5207611B2 (en) | Saccharification inhibitor | |
| JP2013241354A (en) | Phosphodiesterase 2 inhibitor | |
| AU2015275507A1 (en) | Cyclic dipeptide-containing composition | |
| JP2006256977A (en) | Maillard reaction inhibitor | |
| JP2017210444A (en) | Lipase inhibitor containing urolithin | |
| JP6751709B2 (en) | Energy metabolism activator in muscle cells | |
| JP6791478B2 (en) | Angiotensin converting enzyme inhibitor containing urolithins | |
| JP6998108B2 (en) | Α-Glucosidase activity inhibitor containing urolithins and blood glucose increase inhibitor containing urolithins | |
| WO2014030514A1 (en) | Muscle atrophy inhibitor | |
| JPWO2019163437A1 (en) | Osteoclast differentiation inhibitor containing urolithins | |
| WO2005061529A1 (en) | Peptide inhibiting angiontensin converting enzyme | |
| JP2012240956A (en) | Resveratrol-containing agent and composition | |
| JP2021065226A (en) | Composition for improving cognitive function speed | |
| JP5552277B2 (en) | Royal jelly extract and human osteoblast growth inhibitor | |
| JP2020015681A (en) | Bone metabolism improving composition | |
| JP6787633B2 (en) | Aqueous solution containing urolithins, a dry solid composition thereof, a method for producing them, and a method for stabilizing and solubilizing urolithins. | |
| JP5637707B2 (en) | Skillpsin B-containing composition and method for producing skillpsin B-containing composition | |
| JP6948774B2 (en) | Preadipocyte differentiation inhibitor containing urolithins | |
| JP7231313B2 (en) | Composition for lowering blood pressure | |
| JP2012067041A (en) | Ace activity inhibitor | |
| US20220330595A1 (en) | Angiotensin-converting enzyme inhibitor, blood pressure-lowering agent, and beverages and food products | |
| JP6964635B2 (en) | Orientation composition | |
| TW201424743A (en) | Igf-1 production promoter | |
| JP2012056879A (en) | Angiotensin-converting enzyme inhibitor and application thereof | |
| WO2023119368A1 (en) | Liquid composition and composition for activating sirtuin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190305 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200218 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200420 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200617 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20200617 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20201006 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20201027 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6791478 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |