JP6738970B2

JP6738970B2 - Ｏｇａ阻害剤としてのｎ−［４−フルオロ−５−［［（２ｓ，４ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミド

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Publication number: JP6738970B2
Application number: JP2019537118A
Authority: JP
Inventors: ニコラ・ジャック・フランソワ・ドレフュス; ピーター・ジェイムズ・リンジー−スコット
Original assignee: イーライリリーアンドカンパニー
Priority date: 2017-01-27
Filing date: 2018-01-19
Publication date: 2020-08-12
Anticipated expiration: 2038-01-19
Also published as: EP3573983A1; SI3573983T1; MY197494A; IL267693A; EA038368B1; US10081625B2; PE20191406A1; JP2020504142A; JOP20190182A1; BR112019013535A2; CN110198940B; CR20190320A; RS61979B1; MA47368B1; ES2871949T3; EA201991515A1; AR110747A1; PT3573983T; CL2019001978A1; MX2019008846A

Description

発明の詳細な説明

本発明は、新規の５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル化合物、この化合物を含む薬学的組成物、この化合物を使用して生理学的障害を治療する方法、ならびにこの化合物の合成に有用な中間体およびプロセスに関する。

本発明は、アルツハイマー病、進行性核上麻痺（ＰＳＰ）ならびに総称してタウオパチーとして既知のタウ媒介性神経変性症を含む他の疾患および障害の治療の分野におけるものである。

アルツハイマー病は、世界中で何百万人もの患者が罹患する甚大な影響をもたらす神経変性疾患である。現在認可されている市販の薬剤が患者に一時的な対症効果しかもたらさないことを考えると、アルツハイマー病の治療において著しい未だ満たされていない必要性が存在する。

対形成したらせん状フィラメント（ＰＨＦ）および直線状またはねじれ状フィラメントのような、神経原線維変化（ＮＦＴ）および神経絨毛糸（ＮＴ）を生じさせるフィラメント状構造への微小管関連タンパク質タウのオリゴマー化は、アルツハイマー病および他のタウオパチーの決定的な病理学的特徴の１つである。アルツハイマー病に罹患している個体の脳内のＮＦＴの数が、この疾患の重症度と密接に相関することが認められており、タウがニューロン機能障害および神経変性において重要な役割を担っていることを示唆している（Ｎｅｌｓｏｎｅｔａｌ．，ＪＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌＥｘｐＮｅｕｒｏｌ．，７１（５），３６２−３８１（２０１２））。タウの病理は、ＰＳＰの疾患持続期間と相関することが示されてきており、より侵攻性の疾患経過を伴う症例は、進行が遅い症例よりもタウの量が多い。（Ｗｉｌｌｉａｍｓｅｔａｌ．，Ｂｒａｉｎ，１３０，１５６６−７６（２００７））。

近年の研究（Ｙｕｚｗａｅｔａｌ．，ＮａｔＣｈｅｍＢｉｏｌ，４（８），４８３−４９０（２００８））は、アルツハイマー病および関連するタウ媒介性神経変性障害の治療においてタウ過剰リン酸化および病理学的タウへの凝集を制限するためのＯ−ＧｌｃＮＡｃａｓｅ（ＯＧＡ）阻害剤の治療可能性を支持している。具体的には、ＯＧＡ阻害剤Ｔｈｉａｍｅｔ−Ｇは、ＪＮＰＬ３タウマウスモデルにおける運動ニューロンの喪失を遅らせること（Ｙｕｚｗａｅｔａｌ．，ＮａｔＣｈｅｍＢｉｏｌ，８，３９３−３９９（２０１２））、ならびにＴｇ４５１０タウマウスモデルにおけるタウ病理およびジストロフィー性神経突起の低減と関連付けられてきた（Ｇｒａｈａｍｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，７９，３０７−３１３（２０１４））。したがって、ＯＧＡ阻害剤は、ＮＦＴおよびＮＴなどの高リン酸化病理形態のタウの蓄積を低減させるための有効な治療アプローチとして認識されている。

米国特許第９，１２０，７８１号は、ＯＧＡ阻害活性を有し、ＯＧＡの欠乏もしくは過剰発現、および／または２−アセトアミド−２−デオキシ−５β−Ｄ−グルコピラノシド（Ｏ−ＧｌｃＮＡｃ）の蓄積もしくは欠乏に関する疾患および障害を治療する上で有用であるとしてさらに開示される、ヘキサヒドロベンゾオキサゾールおよびヘキサヒドロベンゾチアゾール誘導体を開示している。さらに、ＵＳ２０１６／００３１８７１は、アルツハイマー病を治療するためのある特定のグリコシダーゼ阻害剤を開示している。

脳浸透性であるＯＧＡ阻害剤は、アルツハイマー病およびＰＳＰなどのタウ媒介性神経変性障害のための治療を提供するために望ましい。本発明は、ＯＧＡの阻害剤である、ある特定の新規の化合物を提供する。

したがって、本発明は、式Ｉの化合物、

またはその薬学的に許容される塩を提供する。

加えて、本発明は、式Ｉａの化合物、

またはその薬学的に許容される塩を提供する。

本発明はまた、そのような治療を必要とする患者におけるアルツハイマー病を治療する方法であって、患者に、有効量の式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。

本発明はさらに、そのような治療を必要とする患者における軽度認知障害のアルツハイマー病への進行を治療する方法であって、患者に、有効量の式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。

本発明はまた、そのような治療を必要とする患者における進行性核上麻痺を治療する方法であって、患者に、有効量の式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。本発明はまた、患者におけるタウ媒介性神経変性障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。

さらに、本発明は、治療に使用するため、特に、アルツハイマー病の治療に使用するため、または軽度認知障害のアルツハイマー病への進行の予防に使用するための、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。加えて、本発明は、進行性核上麻痺の治療における使用のための、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。本発明はまた、タウ媒介性神経変性障害の治療における使用のための式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。

またさらに、本発明は、アルツハイマー病の治療のため、または軽度認知障害のアルツハイマー病への進行の予防のための薬剤の製造のための、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。加えて、本発明は、進行性核上麻痺の治療のための薬剤の製造のための、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。本発明はまた、タウ媒介性神経変性障害を治療するための薬剤の製造のための、式ＩもしくはＩａの化合物、またはこれらの薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。

本発明はさらに、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とともに、式ＩもしくはＩａの化合物、またはこれらの薬学的に許容される塩を含む、薬学的組成物を提供する。本発明はさらに、薬学的組成物を調製するためのプロセスであって、式ＩもしくはＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、プロセスを提供する。本発明はまた、式ＩおよびＩａの化合物の合成のための新規の中間体およびプロセスも包含する。

軽度認知障害は、経時的に軽度認知障害からアルツハイマー認知症までを呈する患者の臨床所見および進行に基づき、アルツハイマー病と関連した認知症の潜在的な前駆期として定義されている。「軽度認知障害のアルツハイマー病への進行を予防すること」という用語は、患者における軽度認知障害のアルツハイマー病への進行を抑制すること、遅延させること、停止させること、または回復させることを含む。

本明細書で使用される場合、「治療」または「治療すること」という用語は、既存の症状または障害の進行または重症度を抑制すること、遅延させること、停止させること、または回復させることを含む。

本明細書で使用される場合、「患者」という用語はヒトを指す。

本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、患者への単回または複数回投与の際に、診断中または治療中の患者に所望の効果を提供する、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の量または投与量を指す。

有効量は、既知技法の使用によって、および同様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者により容易に決定され得る。患者のための有効量を決定する際には、患者の人種；患者のサイズ、年齢、および健康状態全般；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の程度または関与度もしくは重症度；個々の患者の応答；投与される特定の化合物；投与の様式方法；投与される製剤の生物学的利用能特性；選択された投薬計画；併用薬の使用；ならびに他の関連する状況を含むがこれらに限定されない、多数の要因が考慮される。

本発明の化合物は、概して、投薬量が幅広い範囲にわたって有効である。例えば、１日当たりの投薬量は、通常、体重１ｋｇにつき約０．１〜約１５ｍｇの範囲内である。ある場合には、前述の範囲の下限よりも低い投薬量レベルが十分以上である場合があり、他の場合には、許容される副作用を伴って、さらに多い用量が用いられてもよく、したがって、前述の投薬量範囲は、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。

本発明の化合物は、好ましくは、経口および経皮経路を含む、化合物を生体利用可能にする任意の経路によって投与される薬学的組成物として製剤化される。より好ましくは、そのような組成物は経口投与用である。このような薬学的組成物およびこれを調製するためのプロセスは、当該技術分野で周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｌ．Ｖ．Ａｌｌｅｎ，Ｅｄｉｔｏｒ，２２^ｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｓｓ，２０１２を参照されたい）。

式ＩおよびＩａの化合物またはその薬学的に許容される塩は、本発明の治療方法において特に有用であるが、ある特定の立体配置が好ましい。以下の段落ではこのような好ましい立体配置について説明する。これらの選好が、本発明の治療方法および化合物の両方に適用可能であることが理解されるであろう。

本発明の化合物は、

およびその薬学的に許容される塩を含む。

ピペリジン環上のメチルおよび酸素置換基がシスまたはトランス立体配置にある式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩は、本発明の範囲内に含まれ、シス立体配置が好ましい。例えば、当業者は、以下のスキームＡに示すように、２位のメチルが４位の酸素に対してシス立体配置にあることを理解するであろう。

さらに、当業者は、以下のスキームＢに示すように、２位のメチルが４位の酸素に対してトランス立体配置にあることを理解するであろう。

ピペリジン環の２位のキラル中心がＳ配置にある化合物はさらに好ましい。本発明は、全ての個々のエナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびにラセミ体を含む上記化合物のエナンチオマーの混合物を企図するが、以下に記載の絶対配置を有する化合物が特に好ましい：
Ｎ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミド、およびその薬学的に許容される塩、ならびに
Ｎ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミドが特に好ましい。

結晶形のＮ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミドが特に好ましい。０．２°の回折角に対する許容差を有する、１５．３°、２１．６°、２２．２°、２２．７°、２３．５°、２４．３°および２６．８°からなる群より選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１２．１°の回折角２θにおけるＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とする結晶形のＮ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミドがさらに好ましい。

個々の異性体、エナンチオマー、およびジアステレオマーは、選択的結晶化技術またはキラルクロマトグラフィーなどの方法によって、本発明の化合物の合成における任意の好都合な時点において、当業者により分離または分割され得る（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓ，ｅｔａｌ．，“Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄＲｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１、およびＥ．Ｌ．ＥｌｉｅｌａｎｄＳ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎ，”ＳｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＯｒｇａｎｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４を参照）。

本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、例えば、当該技術分野で周知の標準的な条件下での本発明の化合物の適切な遊離塩基および適切な薬学的に許容される酸の、適切な溶媒中での反応によって形成され得る。そのような塩の形成は、当該技術分野で周知であり、また理解されている。例えば、Ｇｏｕｌｄ，Ｐ．Ｌ．，“Ｓａｌｔｓｅｌｅｃｔｉｏｎｆｏｒｂａｓｉｃｄｒｕｇｓ，”ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，３３：２０１−２１７（１９８６）、Ｂａｓｔｉｎ，Ｒ．Ｊ．，ｅｔａｌ．“ＳａｌｔＳｅｌｅｃｔｉｏｎａｎｄＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎＰｒｏｃｅｄｕｒｅｓｆｏｒＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＮｅｗＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｔｉｔｉｅｓ，”ＯｒｇａｎｉｃＰｒｏｃｅｓｓＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４：４２７−４３５（２０００）、およびＢｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔａｌ．，“ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ，”ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，６６：１−１９，（１９７７）を参照されたい。

本発明の化合物またはその塩は、当業者に既知の様々な手順によって調製されてもよく、そのうちのいくつかが、以下のスキーム、調製法、および実施例で説明されている。当業者は、本発明の化合物またはその塩を調製するために、記載される経路の各々についての特定の合成ステップを異なる様式で組み合わるか、または異なるスキームのステップと併せることができることを認識している。以下のスキームにおける各ステップの生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、磨砕、および結晶化を含む、当該技術分野で周知の従来の方法によって回収することできる。以下のスキームにおいて、全ての置換基は、別途指示のない限り、すでに定義された通りである。試薬および出発材料は、当業者にとって容易に入手可能である。本発明の範囲を限定することなく、以下のスキーム、調製物、および実施例は、本発明をさらに説明するために提供される。さらに、当業者は、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、およびＩｄの化合物が、当業者によって調製可能である対応する立体化学的配置を有する出発材料を使用することによって調製され得ることを理解する。例えば、以下のスキームは、最終的に式Ｉａに対応する立体配置を有する出発材料を利用している。

一般に、式Ｉａの化合物は、式ＩＩの化合物から調製され得る（スキーム１）。より具体的には、適切な溶媒中のナトリウムトリアセトキシボロヒドリドなどの適切な還元剤の存在下で、式ＩＩａの化合物をＮ−（４−フルオロ−５−ホルミルチアゾール−２−イル）アセトアミドで還元的にアルキル化して、酢酸エチルなどの適切な溶媒中の式Ｉａの化合物を提供する。Ｎ−（４−フルオロ−５−ホルミルチアゾール−２−イル）アセトアミドは、化学分野で既知の方法、ならびに以下の調製物および実施例で提供される方法によって調製することができる。

式ＩＩａの化合物は、Ｐｇが適切なアミン保護基である式ＩＩＩａの化合物から調製することができる。より具体的には、Ｐｇがｔｅｒｔ−ブチルカルボキシラート（ｔ−ＢＯＣ）である式ＩＩａの化合物を、ジオキサンまたはジクロロメタンなどの適切な溶媒中で、塩酸またはトリフルオロ酢酸などの酸と反応させて、式ＩＩａの化合物を提供する。適切なアミン保護基は化学分野で既知であり、ｔ−ＢＯＣおよびＣｂｚ、ならびにＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９９９において考察されているものを含む。

Ｐｇが適切なアミン保護基である式ＩＩＩａの化合物は、式ＩＶａの化合物から調製することができる（スキーム２）。より具体的には、Ｐｇがｔｅｒｔ−ブチルカルボキシラートである式ＩＶａの化合物を、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの塩基の存在下で３−（クロロメチル）−５−メチル−１，２，４−オキサジアゾールと反応させて、式ＩＩＩａの化合物を提供する。この反応は、アセトニトリルまたはジメチルホルムアミドなどの溶媒中で簡便に行われる。Ｐｇがｔｅｒｔ−ブチルカルボキシラートである式ＩＶａの化合物は、本質的にＷＯ２００４／０９４３８０Ａ１で説明されているように調製することができる。より具体的には、式Ｖａの化合物をテトラヒドロフランなどの溶媒中でリチウムトリ（ｓｅｃ−ブチル）ボロヒドリドなどの還元剤と反応させて、Ｐｇがｔｅｒｔ−ブチルカルボキシラートである式ＩＶａの化合物を提供する。Ｐｇが適切なアミン保護基である式Ｖａの化合物は、ＷＯ２００４／０９４３８０Ａ１において説明されるものを含む化学分野で既知のプロセスによって調製することができる。

調製物１
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）カルバマートの合成。

フッ化セシウム（２２７ｇ、１４８０ｍｍｏｌ）を、室温のＤＭＳＯ（７７６ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−（４−クロロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）カルバマート（３８．８ｇ、１４８ｍｍｏｌ；ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（４−クロロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）カルバマートの調製用、例えばＮ．Ｍａｓｕｄａｅｔａｌ．，ＢｉｏｏｒｇＭｅｄＣｈｅｍ，１２，６１７１−６１８２（２００４）を参照）の溶液に加える。反応混合物を１４５℃のヒートブロック中で、内部温度を１３３℃に保ちながら４８時間撹拌し、次いで混合物を氷水浴中で冷却する。混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）、鹹水（５００ｍＬ）および酢酸エチル（５００ｍＬ）を添加する。混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで珪藻土で濾過し、酢酸エチル（５００ｍＬ）で洗浄する。濾液を分液漏斗に移し、層を分離し、次いで水層を酢酸エチル（１Ｌ）で抽出する。合わせた有機物を鹹水（１Ｌ）で洗浄し、次いで鹹水層を酢酸エチル（３００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、残渣を得る。残渣をジクロロメタン（１．５Ｌ）中の５％酢酸エチルで溶離するシリカゲルパッド（３３０ｇ）に通し、濾液を濃縮して残渣（２４．２ｇ）を得る。

残渣（合わせたロット３２．７ｇ、１３３ｍｍｏｌ）をイソプロパノール（３０３ｍＬ）に溶解し、濾過し、次いで３ｍＬ注射で１８０ｍＬ／分の１０％ＩＰＡ（添加物なし）とともにＩＣカラム（セルロース多糖誘導体：トリス（３，５−ジクロロフェニルカルバマート、３０×２５０ｍｍ、５ｕ）を使用するＳＦＣ（超臨界流体クロマトグラフィー）により精製する。生成物含有画分を濃縮して表題化合物（１６．１ｇ）を得る。ＭＳｍ／ｚ２４７．０（Ｍ＋Ｈ）。

調製物２
合成Ｎ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）アセトアミド（方法Ａ）

ジャケット付き容器中で、臭化亜鉛（９１．９ｇ、４０８ｍｍｏｌ）を室温のｔｅｒｔ−ブチルＮ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）カルバマート（３３．５ｇ、１３６ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（５０３ｍＬ）の混合物に一度に加える。反応混合物を３７℃の内部温度で一晩撹拌し、次いでジャケット温度を−１０℃に設定し、内部温度を６℃未満に維持しながら、テトラヒドロフラン（１１１ｍＬ）を１５分かけて滴加する。次いでジャケット温度を−３０℃に設定し、内部温度を５℃未満に維持しながら、ピリジン（１１０ｍＬ、１３６０ｍｍｏｌ）を５分かけて滴加する。ジャケット温度を０℃に設定し、無水酢酸（１１６ｍＬ、１２２０ｍｍｏｌ）を５分かけて滴加する。反応混合物を３７℃の内部温度で一晩撹拌し、次に室温になるまで冷却し、テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）で溶離する短い珪藻土パッドに通す。濾液をフラスコに移し、混合物を濃縮して残渣を得、これをトルエン（５０ｍＬ）から濃縮する。残渣に水（４００ｍＬ）および２−メチルテトラヒドロフラン（４００ｍＬ）中のクエン酸一水和物（５７．２ｇ、２７２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を４０℃で５分間撹拌し、次いで、２−メチルテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）で溶離する短い珪藻土パッドに通す。濾液を分液漏斗に移し、層を分離する。水層を２−メチルテトラヒドロフラン（２×２５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を水（５００ｍＬ）で希釈する。混合物に、固体炭酸水素ナトリウムを５分間かけて少しずつ添加し、気体の発生が止まるまで撹拌する。混合物を分液漏斗に移し、層を分離し、次いで水層を２−メチルテトラヒドロフラン（２００ｍＬおよび１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得、これを２−メチルテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）で希釈し、混合物を２−メチルテトラヒドロフラン（２．５Ｌ）で溶離する短いシリカゲル（２５０ｇ）パッドに通す。濾液を濃縮して残渣を得、これをジクロロメタンとヘプタンの１：１混合物（２０２ｍＬ）中に懸濁する。混合物を室温で３０分間撹拌した後、濾過する。濾過した固体を４０℃で２時間真空乾燥させて、表題化合物（１８．０ｇ、７０％）を得る。ＭＳｍ／ｚ１８９．０（Ｍ＋Ｈ）。

Ｎ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）アセトアミドの代替合成（方法Ｂ）。
２−アミノ−４−クロロチアゾール−５−カルボアルデヒド（１００ｇ、０．６１ｍｏｌ）およびピリジン（１９４．６ｇ、２．４６ｍｏｌ）にジクロロメタン（１３２５ｇ、１５．６ｍｏｌ）を加え、０〜５℃まで冷却する。温度を０〜５℃に維持しながら、無水酢酸（１８８．４ｇ、１．８５ｍｏｌ）を滴加する。添加が完了した後、温度を２０〜２５℃に調整し、４１時間撹拌する。減圧下で濃縮し、続いて温度を４０℃未満に維持しながら３５％ＨＣｌ水溶液（２００ｍＬ）および水（１．５Ｌ）を添加する。２０〜２５℃まで冷却し、１８時間撹拌する。混合物を濾過し、回収された固体を水で洗う。固体を６０〜６５℃で２４時間乾燥させて、Ｎ−（４−クロロ−５−ホルミルチアゾール−２−イル）アセトアミド（７５ｇ、０．４ｍｏｌ）を得る。

不活性雰囲気下で、スルホラン（１０００ｍｌ）をＮ−（４−クロロ−５−ホルミルチアゾール−２−イル）アセトアミド（５０ｇ、０．２４４ｍｏｌ、この前の工程で調製）、テトラメチルアンモニウムクロリド（１０７．１ｇ、０．９７７ｍｏｌ）、およびフッ化セシウム（３７０．６ｇ、２．４４ｍｍｏｌ）に添加する。１３０℃まで加熱し、２３時間撹拌する。ＨＰＬＣ分析は、表題化合物の４５％のその場収率とともに７５％の転化を示す。

Ｎ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）アセトアミドの代替合成（方法Ｃ）。
テトラメチルアンモニウムフルオリド四水和物（１０．２ｇ、１０９．０ｍｍｏｌ）に２−プロパノール（１５０ｍＬ）を添加し、内部温度を７０℃に維持しながら真空下で２〜３容積に混合物を濃縮して水を除去する。２−プロパノール（２００ｍＬ）を添加し、およびおよび混合物を真空下で２〜３容積に濃縮する。さらに２回繰り返す。ＤＭＦ（２００ｍＬ）を添加し、真空下で２〜３容積に濃縮する。ＴＨＦ（２００ｍＬ）を添加し、２〜３容積に濃縮する。さらに２回繰り返す。Ｎ−（４−クロロ−５−ホルミルチアゾール−２−イル）アセトアミド（１．２２ｇ、５．９６ｍｍｏｌ、方法Ｂにおいて先に調製）およびＤＭＦ（１２ｍｌ）を入れる。１１０℃まで加熱し、１２時間撹拌する。反応混合物を２５℃まで冷却する。２−メチルテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）および水（４０ｍＬ）を加える。層を分離し、水層を２−メチルテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）で抽出した。層を分離し、合わせた有機層を水（２０ｍＬ）で洗浄した。層を分離し、有機層を濃縮した。酢酸エチル（２０ｍＬ）および水（５ｍＬ）を加える。層を分離し、有機層を濃縮して溶媒を除去した。酢酸エチル（２ｍＬ）およびヘプタン（２ｍＬ）を添加して濾過する。濾過した固体を５５℃で１８時間真空乾燥させて、表題化合物をＮ−（４−クロロ−５−ホルミルチアゾール−２−イル）アセトアミドとの９３％混合物として得る。

調製物３
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラートの合成

フラスコにｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−メチル−４−オキソ−ピペリジン−１−カルボキシラート（５０ｇ、２３４．４４ｍｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）を入れる。混合物を窒素雰囲気下で−６５℃まで冷却し、リチウムトリ（ｓｅｃ−ブチル）ボロヒドリド（３０４．７７ｍＬ、３０４．７７ｍｍｏｌ；テトラヒドロフラン中１Ｍ）を、内部温度を−６０℃未満に維持しながら、４５分かけて滴加する。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで−３０℃まで冷却する。反応混合物に、内部温度を−２０℃未満に維持しながら、水（２５．３４ｍＬ）とテトラヒドロフラン（１００．１６ｍＬ）との混合物を加える。水（１２６．７０ｍＬ）中の過酸化水素（１１８．８８ｍＬ、１．１７ｍｏｌ、３０重量／重量％）の水溶液を、内部温度を１０℃未満に維持しながら１時間かけて滴加する。混合物に塩化水素水溶液（４６．８９ｍＬ、２３４．４４ｍｍｏｌ、５Ｍ）およびメチルｔ−ブチルエーテル（１．００Ｌ）を添加し、混合物を室温になるまで加温する。層を分離し、有機相を水（５００ｍＬ）中のメタ重亜硫酸ナトリウム（２２２．８４ｇ、１．１７ｍｏｌ）の溶液とともに室温で１０分間撹拌する。層を分離し、有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濃縮する。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（０〜５０％メチルｔ−ブチルエーテル／イソヘキサン、シリカゲル）により精製し、生成物含有画分を合わせて濃縮して、表題化合物（４０．４ｇ、７８％）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）２３８（Ｍ＋Ｎａ）。

ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラートの代替合成。

脱イオン水（４６０Ｌ）、および２０℃のリン酸二水素カリウム（６．５ｋｇ、０．４１当量）を含有するガラス内張り反応器に、ＤＭＳＯ（２７．４ｋｇ、１．０体積）およびＤ−（＋）−グルコース一水和物（２８．９ｋｇ、１．２５当量）を入れる。内部温度を３０℃に調整し、水酸化ナトリウム水溶液（８％、１５Ｌ、０．２８当量）の添加によって反応物のｐＨを６．９に調整する。反応器にｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ）−２−メチル−４−オキソ−ピペリジン−１−カルボキシラート（２４．９ｋｇ、１．０当量（９９．１％鏡像体過剰率））を入れ、混合物を３０℃で１５分間撹拌する。ケトレダクターゼ（ＫＲＥＤ−１３０、２５０ｇ、１％ｗ／ｗ）、グルコースデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ−１０１、２５０ｇ、１％ｗ／ｗ）、およびＮＡＤＰナトリウム塩（６３ｇ、０．２５％ｗ／ｗ）を、開口部を介して反応混合物に直接入れる。８％ＮａＨＣＯ_３水溶液の添加を介して、混合物の温度を３０℃およびｐＨを７．０±０．２に維持する。１６．５時間撹拌した後（９９．５％転化）、反応物にＣｅｌｉｔｅ（商標）（１２．５ｋｇ、５０％ｗ／ｗ）およびトルエン（１２５Ｌ、５容積）を入れる。３０℃で３０分間撹拌した後、混合物を１時間かけてインラインＧＡＦフィルター（４ソック）を介して別の２０００Ｌ反応器に移す。混合物を撹拌せずに３０分間放置したままにし、層を分離し、水層をトルエン（２×１２５Ｌ）で逆抽出する。合わせた有機層を濾過し（インラインＧＡＦフィルター）、トルエン混合物を２５℃の塩化ナトリウム水溶液（２５％、１２５Ｌ、５容積）で洗浄する。得られたトルエン溶液を０．１０％ｗ／ｗの水に共沸乾燥させ（部分真空、内部温度＜６０℃）、２０℃まで冷却する。混合物を反応器からカートリッジフィルターを介して窒素陽圧下で清浄なドラムへと濾過する。次に反応混合物をドラムから５００Ｌのガラス内張り容器に移し、真空下（＜６０℃）で目標残留容積５６Ｌ（２．２５容積）に濃縮する。４０℃のｎ−ヘプタン（１６９ｋｇ、１０容積）を入れ、混合物に２５ｇのｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラートを播種する。得られた濃厚スラリーを追加のｎ−ヘプタン（２５Ｌ、１容積）で希釈し、４時間かけて１６℃まで冷却する。生成物を、遠心分離を介して単離し、ｎ−ヘプタン（１回転あたり２５Ｌ；４回転必要）で洗浄し、３０℃のトレー乾燥器中で１１時間乾燥させた後に２０．３ｋｇ（８１％；＞９９．９％鏡像体過剰率）を得る。ＥＳ／ＭＳ（ｍ／ｅ）２３８（Ｍ＋Ｎａ）。

調製物４
ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］ピペリジン−１−カルボキシラートの合成。

３−（クロロメチル）−５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール（４３．５ｇ、３０１ｍｍｏｌ）を、室温のアセトニトリル（５９０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ、４Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラート（２９．５ｇ、１３７ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を氷水浴中で撹拌し、内部温度を１０℃未満に維持しながら、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５４．３ｇ、５４８ｍｍｏｌ）を１０分かけて少しずつ添加する。反応混合物を氷水浴中で内部温度を５℃に保ちながら９時間撹拌し、次いで室温になるまで緩徐に加温し、一夜撹拌する。反応混合物を氷水浴中で冷却し、添加中、内部温度を１０℃未満に維持しながら、飽和塩化アンモニウム水溶液（２００ｍＬ）を５分間かけて添加する。混合物を次いで水（１００ｍＬ）で希釈し、室温になるまで加温する。混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×３００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機物を鹹水（３００ｍＬ）で洗浄する。合わせた有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得る。残渣をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）で溶離するシリカゲル（３００ｇ）のパッドに素早く通し、濾液を濃縮して表題化合物（４６．５ｇ、１０９％）を得る。ＭＳｍ／ｚ３３４．０（Ｍ＋Ｎａ）。

ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］ピペリジン−１−カルボキシラートの代替合成。

０℃の窒素下でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中の、ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−４−ヒドロキシ−２−メチル−ピペリジン−１−カルボキシラート（０．２５ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）および３−（クロロメチル）−５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール（０．３０８ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）の溶液に、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０．３５ｇ、３．５ｍｍｏｌ）を５分かけて少しずつ添加する。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで４０℃で１２時間撹拌する。反応混合物を室温になるまで冷却し、次いで水（１０ｍＬ）でクエンチする。層を分離し、水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を塩化リチウムの水溶液（５％）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、表題化合物（０．４９ｇ、０．７ｍｍｏｌ、収率８１％、純度６０％）を褐色の油状物として得る。ＭＳｍ／ｚ３３４．０（Ｍ＋Ｎａ）。

調製物５
５−メチル−３−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシメチル］−１，２，４−オキサジアゾールヒドロクロリドの合成。

ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］ピペリジン−１−カルボキシラート（４．０３ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）を含むフラスコを氷水浴に漬ける。このフラスコに、１，４−ジオキサン（２５．９ｍＬ、１０４ｍｍｏｌ）中の塩酸の４Ｍ溶液を５分間かけて滴加する。添加中、内部温度を２０℃未満に維持しながら撹拌する。反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで濃縮して表題化合物（３．５６ｇ、^１ＨＮＭＲで測定した純度８３％に基づく収率９２％）を得る。ＭＳｍ／ｚ２１２．０（Ｍ＋Ｈ）。

５−メチル−３−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシメチル］−１，２，４−オキサジアゾールヒドロクロリドの代替合成
メタノール（５０ｍＬ）をｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］ピペリジン−１−カルボキシラート（１２．９ｇ、０．０４１モル））に添加する。混合物を０℃まで冷却する。メタノール（８０ｍＬ）中の４Ｍ塩酸溶液を、内部温度を２０℃未満に維持しながら、冷却した混合物に滴加する。次いで反応混合物を室温で１８時間撹拌する。次いで混合物を濃縮して溶媒を除去する。アセトン（１０ｍＬ）を添加し、混合物を２０分間撹拌する。テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）を添加し、混合物を３時間撹拌する。固体を窒素下で濾過により回収し、濾過した固体ケークをテトラヒドロフランですすぐ。次いで濾過した固体を４５℃で２時間真空乾燥させて、表題化合物を純度９０％として得る。アセトンを用いた再結晶は表題化合物の純度を９５％まで高めることができる。

調製物６
５−メチル−３−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシメチル］−１，２，４−オキサジアゾールの合成。

窒素下のジクロロメタン（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］ピペリジン−１−カルボキシラート（０．４９ｇ、１．６ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１．８ｍＬ、２３ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温で３時間撹拌する。混合物を減圧下で濃縮して、黄色の油状物を得る。残渣をメタノール（５ｍＬ）中に溶解し、陽イオン交換カートリッジに注ぎ、メタノール（２×１０ｍＬ）、次いでメタノール（１０ｍＬ）中の２Ｍアンモニア溶液で溶離する。濾液を減圧下で濃縮して表題化合物（０．３ｇ、１．４ｍｍｏｌ、９１％）を得る。ＭＳｍ／ｚ２１２．０（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１
Ｎ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミドの合成。

Ｎ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）アセトアミド（２８．３ｇ、１５０ｍｍｏｌ）を、室温の酢酸エチル（７０７ｍＬ）中の５−メチル−３−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシメチル］−１，２，４−オキサジアゾールヒドロクロリド（４８．７ｇ、１８５ｍｍｏｌ、純度９４％）に添加する。反応混合物を室温で撹拌し、Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３４．１ｍＬ、１９５ｍｍｏｌ）を１分かけて滴加し、次いでナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（９８．５ｇ、４５１ｍｍｏｌ）を一度に添加する。反応混合物を、内部温度を３０℃に保ちながら３１℃の加熱ブロック中で一晩撹拌し、次いで氷水浴中で内部温度が５℃になるまで冷却する。混合物に、内部温度を１０℃未満に維持しながら、２Ｍ塩酸水溶液（２２６ｍＬ）を１５分かけて添加する。混合物に水（２５０ｍＬ）を添加し、混合物を室温で５分間撹拌する。層を分離し、有機層を水（５０ｍＬ）中の２Ｍ塩酸水溶液（２８ｍＬ）の混合物で抽出する。第１の水層を氷水浴中で撹拌し、内部温度を１０℃未満に維持しながら、５０％水酸化ナトリウム水溶液（２５．７ｍＬ）を１０分かけて滴加する。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で希釈し、次いで室温で１０分間撹拌し、次いで酢酸エチル（３×４００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得る。塩酸水溶液を用いて抽出した第２の水層を２−メチルテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）で希釈し、混合物を短い珪藻土パッドに通す。濾液を分液漏斗に移し、層を分離する。水層を氷水浴中で撹拌し、内部温度を１０℃未満に維持しながら、５０％水酸化ナトリウム水溶液（３．１５ｍＬ）を５分かけて滴加する。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、次いで室温で５分間撹拌し、次いで酢酸エチル（３×４０ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）中１０％イソプロパノールで抽出する。合わせた有機物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮して残渣を得、これを作業の第１の部分からの残渣と合わせる。合わせた残渣を酢酸エチル（３．５Ｌ）で溶離するシリカゲル（３５０ｇ）のパッドに通し、濾液を濃縮して残渣（４５．８ｇ）を得る。

残渣（４７．５ｇの合わせたロット、１２３．９ｍｍｏｌ）をヘプタン中の５０〜１００％酢酸エチルで溶離するフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。生成物含有画分を残渣に濃縮し、これをメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルとヘプタンの１：１混合物（４４８ｍＬ）中に懸濁する。混合物を、内部温度を４５℃に保ちながら、４６℃の加熱ブロック中で３０分間撹拌し、次いで撹拌しながら２時間かけて室温になるまで冷却する。混合物を濾過し、固体をメチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテルとヘプタンの１：１混合物（３０ｍＬ）で洗浄する。濾過した固体を４０℃で一晩真空乾燥させて表題化合物（２８．５ｇ）を得る。ＭＳｍ／ｚ３８４．０（Ｍ＋Ｈ）；
［α］_Ｄ ^２０＝＋３３．４°（Ｃ＝０．２６、メタノール）。

Ｎ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミドの代替合成。
窒素下でジクロロメタン（１０ｍＬ）中のＮ−（４−フルオロ−５−ホルミル−チアゾール−２−イル）アセトアミド（０．０５ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）および５−メチル−３−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−ピペリジル］オキシメチル］−１，２，４−オキサジアゾール（０．０４ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ、０．５７ｍｍｏｌ）およびナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（０．１２ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を添加する。反応混合物を室温で１２時間撹拌する。反応混合物を炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（１０ｍＬ）に注ぐ。層を分離し、水相をジクロロメタン（２×１０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、橙色の油状物を得る。

残渣をメタノール中にとり（全容積９．８ｍｌになるまで）、濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＧｅｍｉｎｉ−ＮＸ１０Ｍｉｃｒｏｎ５０×１５０ｍｍＣ−１８）（水酸化アンモニウムでｐＨ９に調整された１０ｍＭ炭酸水素アンモニウムを含むＣＨ_３ＣＮおよび水、１１０ｍｌ／分で１０分かけて１５％〜１００％のＣＨ_３ＣＮ）（１回の注入）（２７１／２０４ｎｍ）によって精製して、表題化合物（０．０２ｇ、０．０５ｍｍｏｌ、２８％）を得る。ＭＳｍ／ｚ３８４．２（Ｍ＋Ｈ）。

実施例１Ａ
結晶性Ｎ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミド。
粗Ｎ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ、４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミド（２９．９ｇ）をヘプタン中の５０％メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル４４８ｍＬ中で、４６℃で３０分間懸濁する。混合物を撹拌し、２時間かけて１９℃まで冷却した後、濾過し、次いでヘプタン中の５０％メチルｔｅｒｔブチルエーテル３０ｍＬで洗浄して、表題化合物（２８．５ｇ、収率９５％）を得る。

実施例１ＡのＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）
結晶性固体のＸＲＰＤパターンは、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備え、３５ｋＶおよび５０ｍＡで動作するＢｒｕｋｅｒＤ４ＥｎｄｅａｖｏｒＸ線粉末回折計で得られる。試料は、２θにおける０．００８７°のステップサイズおよび０．５秒／ステップの走査速度で、０．６ｍｍの発散スリット、５．２８ｍｍの固定散乱防止スリット、および９．５ｍｍ検出スリットを用いて、２θにおける４〜４０°で走査される。乾燥粉末を石英試料ホルダに充填し、ガラススライドを使用して滑らかな表面を得る。結晶学の分野において、任意の所与の結晶形に関して、結晶形態および晶癖などの要因から生じる好ましい配向に起因して、回折ピークの相対強度が変化し得ることは周知である。選択配向の影響がある場合、ピーク強度は変化するが、多形体の特徴的なピーク位置は変化しない。（例えば、ＴｈｅＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ３８−ＮａｔｉｏｎａｌＦｏｒｍｕｌａｒｙ３５Ｃｈａｐｔｅｒ９４１ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅａｎｄｐａｒｔｉａｌｌｙｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅｓｏｌｉｄｓｂｙＸ−ｒａｙｐｏｗｄｅｒｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ（ＸＲＰＤ）ＯｆｆｉｃｉａｌＭａｙ１，２０１５を参照のこと）。さらに、結晶学の分野では、任意の所与の結晶形についてピークの角度位置がわずかに変動し得ることもまた周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される際の温度もしくは湿度の変動、試料の位置ずれ、または内部標準の有無に起因してシフトし得る。本発明の場合、２θの±０．２のピーク位置の変動は、示された結晶形の明確な同定を妨げることなく起こり得る変動として考慮される。結晶形の確認は、特徴的なピーク（°２θの単位で）、典型的にはより顕著なピークの任意の固有の組み合わせに基づいて行われ得る。周囲室温度および相対湿度にて収集された結晶形態回折パターンは、８．８５および２６．７７°２θで、ＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づき調整する。

調製試料である結晶性Ｎ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミドは、ＣｕＫａ放射線を用いたＸＲＰＤパターンにより、以下の表１に記載されるような回折ピーク（２θ値）を有するものとして特徴付けられる。具体的には、パターンは、０．２度の回折角についての許容差を、１５．３°、２１．６°、２２．２°、２２．７°、２３．５°、２４．３°、および２６．８°からなる群より選択される１つ以上のピークと組み合わせて、１２．１°におけるピークを含む。

インビトロヒトＯＧＡ酵素アッセイ
ＯＧＡタンパク質の生成
全長ヒトＯ−ＧｌｃＮＡｃ−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（ＮＭ＿０１２２１５）をコードするヌクレオチド配列を、Ｎ末端ポリヒスチジン（ＨＩＳ）タグとともにｐＦａｓｔＢａｃ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ベクターに挿入する。バキュロウイルス産生を、Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃバキュロウイルス発現系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）プロトコルによって行う。Ｓｆ９細胞を、培養液１リットル当たり１０ｍＬのＰ１ウイルスを用いて１．５×１０^６個／ｍＬで感染させ、２８℃で４８時間インキュベートする。細胞を遠心沈降させ、ＰＢＳですすぎ、ペレットを−８０℃で保存する。
上述のＯＧＡタンパク質（Ｈｉｓ−ＯＧＡ）を次のように精製する。４Ｌの細胞を、５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、１ｍＭのジチオトレイトール（ＤＴＴ）、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００、４錠のプロテアーゼ阻害剤（完全ＥＤＴＡ非含有、Ｒｏｃｈｅ）を含有する２００ｍＬの緩衝液中で、４℃で４５分間溶解する。次いで、この細胞溶解物を４℃、１６５００ｒｐｍで４０分間遠心沈降させ、上清を６ｍＬのＮｉ−ＮＴＡ樹脂（ニッケル−ニトリロ三酢酸）とともに４℃で２時間インキュベートする。

次に樹脂をカラムに充填し、５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１０ｍＭのイミダゾール、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００、１ｍＭのＤＴＴ、続いて５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのイミダゾール、１０％のグリセロール、１ｍＭのＤＴＴで洗浄する。タンパク質を５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３００ｍＭのイミダゾール、１０％のグリセロール、１ｍＭのＤＴＴで溶離する。プールしたＨｉｓ−ＯＧＡ含有画分を６ｍｌに濃縮し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５にかける（１６／６０）。タンパク質を５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、２ｍＭのＤＴＴで溶離する。Ｈｉｓ−ＯＧＡ含有画分をプールし、タンパク質濃度をＢＣＡ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ比色アッセイ）で測定する。

ＯＧＡ酵素アッセイ
ＯＧＡ酵素は、核細胞質タンパク質からのＯ−ＧｌｃＮＡｃの除去を触媒する。この活性を測定するためにフルオレセインジ−Ｎ−アセチル−β−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミニド（ＦＤ−ＧｌｃＮＡｃ、Ｋｉｍ，ＥｕｎＪｕ；Ｋａｎｇ，ＤａｅＯｏｋ；Ｌｏｖｅ，ＤｏｎａＣ．；Ｈａｎｏｖｅｒ，ＪｏｈｎＡ．ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＲｅｓｅａｒｃｈ（２００６），３４１（８），９７１−９８２）を１０μＭ（９６ウェルアッセイ形式における）または６．７μＭ（３８４ウェルアッセイ形式における）の最終濃度で基質として使用する。この蛍光発生基質は、ＯＧＡによる切断の際に蛍光性となるので、酵素活性は、５３５ｎｍ（４８５ｎｍでの励起）で検出される蛍光の増大によって測定することができる。

アッセイ緩衝液を調製して、ｐＨ７の水中の５０ｍＭのＨ_２ＮａＰＯ_３−ＨＮａ_２ＰＯ_３の最終濃度、０．０１％ウシ血清アルブミンおよび０．０１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００を得る。最終酵素濃度は、３ｎＭ（９６ウェルアッセイ形式における）または３．２４ｎＭ（３８４ウェルアッセイ形式における）となる。いずれのアッセイ形式も、本質的に同等の結果をもたらす。

試験する化合物を、１０点濃度応答曲線を用いて純粋なジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に希釈する。反応混合物中の最大化合物濃度は３０μＭである。基質の添加により反応が始まる前に、適切な濃度の化合物をＯＧＡ酵素とともに３０分間プレインキュベートする。反応を室温で６０分間進行させる。次いで、反応を止めることなく蛍光を読み取る。ＩＣ_５０値は、正規化データ対化合物のｌｏｇをプロットし、４パラメータロジスティック方程式を用いてデータを当てはめることによって計算する。

実施例１の化合物を本質的に上述の通りに試験したところ、２．３６ｎＭ±０．７８６（ｎ＝８）のＩＣ_５０を呈した。このデータは、実施例１の化合物がＯＧＡ酵素活性をインビトロで阻害することを実証している。

ＯＧＡ酵素活性の阻害を測定するための全細胞アッセイ
細胞播種：
当該技術分野において既知の標準的な条件を利用して、微小管関連タンパク質タウのＰ３０１Ｓ−１Ｎ４Ｒ型の誘導発現のために改変されたＴＲｅｘ−２９３細胞を作製し、１０％のテトラサイクリン非含有ウシ胎児血清（ＦＢＳ、ＳｉｇｍａＦ２４４２）、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５μｇ／ｍＬのブラスチシジン（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃Ａ１１１３９−０３）および２００μｇ／ｍＬゼオシン（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃Ｒ２５０−０１）を補充したＤＭＥＭＨｉｇｈＧｌｕｃｏｓｅ（Ｓｉｇｍａ＃Ｄ５７９６）からなる成長培地中で維持する。実験のために、細胞を、ポリ−Ｄ−リジンでコーティングされたＣｏｒｎｉｎｇＢｉｏｃｏａｔ（３５６６６３）３８４ウェルプレート中にウェル当たり１０，０００〜１４，０００個を成長培地中に播種し、３７℃／５％ＣＯ_２の細胞インキュベーター中で２０〜２４時間インキュベートする。実験を、タウ発現を誘導することなく行う。

化合物処理：
試験する化合物を、１０点濃度応答曲線を用いて無水ＤＭＳＯ中で１／３に連続希釈し、成長培地中でさらに希釈する。播種の２０〜２４時間後、細胞を成長培地中で、試験化合物で処理する。最大化合物濃度は１５μＭ（０．１５％ＤＭＳＯ）とする。最大阻害は、１５μＭのＴｈｉａｍｅｔＧの反復測定によって定義され、最小阻害は、０．１５％ＤＭＳＯ処理の反復測定によって定義される。細胞を３７℃／５％ＣＯ_２のインキュベーターに２０〜２４時間戻す。化合物を各プレート内で二回試験する。

免疫染色：
２０〜２４時間の化合物処理後、培地をアッセイプレートから除去し、ＤＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ＃Ｄ８５３７）中の２５μＬの３．７％ホルムアルデヒド溶液（Ｓｉｇｍａ＃Ｆ１６３５）を各ウェルに添加し、３０分間インキュベートする。次いで、細胞をＤＰＢＳで１回洗浄し、次いで０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ＃Ｔ９２８４）で透過処理する。３０分後、細胞をＤＰＢＳで２回洗浄し、次いでブロッキング溶液（１％ＢＳＡ／ＤＰＢＳ／０．１％Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００）を各ウェルに添加し、６０分間インキュベートする。ブロッキング溶液を除去し、ブロッキング溶液中のＯ−ＧｌｃＮＡｃタンパク質抗体（ＲＬ２クローン、Ｔｈｅｒｍｏ、ＭＡ１０７２）の０．４０〜０．３３μｇ／ｍＬの溶液を細胞に添加し、２〜８℃で一晩放置する。翌日、細胞をＤＰＢＳで２回洗浄し、ＤＰＢＳ中の２μｇ／ｍＬの二次抗体ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ヤギ抗マウスＩｇＧ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃Ａ１１００１）を各ウェルに添加し、室温で９０分間放置する。二次抗体を除去し、細胞をＤＰＢＳで２回洗浄し、それぞれ１および５０μｇ／ｍＬの濃度のＤＰＢＳ中のＤＡＰＩ（Ｓｉｇｍａ＃Ｄ９５６４）およびＲＮアーゼ（Ｓｉｇｍａ、Ｒ６５１３）の溶液を各ウェルに添加する。プレートを密封し、１時間インキュベートし、ＡｃｕｍｅｎｅＸ３ｈｃｉ（ＴＴＰＬａｂｔｅｃｈ）で分析する。一次抗体以外は、上述のインキュベーションおよび洗浄ステップは全て室温で行われる。

分析および結果
プレートを、４８８および４０５ｎｍ励起レーザーならびに２つの発光フィルターＦＬ２（５００〜５３０ｎｍ）およびＦＬ１（４２０〜４９０ｎｍ）を用いてＡｃｕｍｅｎｅＸ３機で分析する。ＦＬ２フィルターは、Ｏ−ＧｌｃＮＡｃタンパク質抗体（ＲＬ２クローン）に対応するシグナルであり、ＦＬ１フィルターは細胞核（ＤＡＰＩ）に対応するシグナルである。全ＦＬ２／全ＦＬ１（対象物または集団の選択なしの各ウェルの全蛍光）の比をデータ分析に使用する。データは、ＴｈｉａｍｅｔＧの１５μＭ処理によって参照されるような最大阻害、および０．１５％ＤＭＳＯ処理によって達成されるような最小阻害に対して正規化される。データを非線形曲線当てはめアプリケーション（４パラメータロジスティック方程式）に当てはめ、ＩＣ_５０値を計算し、報告する。

実施例１の化合物を本質的に上述の通り試験したところ、２１．９ｎＭ±７．３（ｎ＝５）のＩＣ_５０を呈した。このデータは、実施例１の化合物が細胞アッセイにおいてＯＧＡ酵素活性を阻害することを実証している。

Claims

以下の式の化合物

またはその薬学的に許容される塩。
２位のメチルが、ピペリジン環上で、４位の酸素に対してシス立体配置にある、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
前記化合物が、Ｎ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミドである、請求項１または請求項２に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｎ−［４−フルオロ−５−［［（２Ｓ，４Ｓ）−２−メチル−４−［（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）メトキシ］−１−ピペリジル］メチル］チアゾール−２−イル］アセトアミドである、請求項３に記載の化合物。
前記化合物が結晶質であり、０．２度の回折角の許容差を有する、１５．３°、２１．６°、２２．２°、２２．７°、２３．５°、２４．３°、および２６．８°からなる群より選択される１つ以上のピークと組み合わせた、１２．１°の回折角２θにおけるＸ線粉末回折スペクトルのピークを特徴とする、請求項４に記載の化合物。
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、患者におけるアルツハイマー病を治療するための薬学的組成物。
患者における軽度認知障害からアルツハイマー病への進行を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に、有効量の、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、患者における軽度認知障害からアルツハイマー病への進行を治療するための薬学的組成物。
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、患者における進行性核上麻痺を治療するための薬学的組成物。
アルツハイマー病の治療のための薬剤の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
軽度認知障害のアルツハイマー病への進行を予防するための薬剤の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
進行性核上麻痺の治療のための薬剤の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
療法における使用のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
アルツハイマー病の治療における使用のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
軽度認知障害のアルツハイマー病への進行を予防する上での使用のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
進行性核上麻痺を治療する上での使用のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とともに含む、薬学的組成物。
薬学的組成物を調製するためのプロセスであって、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合することを含む、プロセス。