JP6733900B2 - Separation carrier, method for producing separation carrier, column, and device for liquid chromatography or solid phase extraction - Google Patents
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Description
本発明は、分離用担体、分離用担体の製造方法、カラム、及び、液体クロマトグラフィー用装置又は固相抽出用装置に関する。 The present invention relates to a carrier for separation, a method for producing a carrier for separation, a column, and a device for liquid chromatography or a device for solid phase extraction.
従来より、液体クロマトグラフィー等に用いられる分離用担体としては、シリカや、表面が修飾されたシリカが使用されている（例えば、非特許文献１を参照）。 Conventionally, silica or surface-modified silica has been used as a carrier for separation used in liquid chromatography or the like (see, for example, Non-Patent Document 1).
しかしながら、シリカは、塩基条件下での耐久性が低いため、塩基性条件下における使用には適していないという問題があった。 However, since silica has low durability under basic conditions, there is a problem that it is not suitable for use under basic conditions.
本発明は、以上の実情に鑑みてなされたものであり、塩基性条件下における使用に適した分離用担体、分離用担体の製造方法、並びにこのような分離用担体を備えるカラム、及び装置を提供することを目的とする。 The present invention has been made in view of the above circumstances, and a separation carrier suitable for use under basic conditions, a method for producing a separation carrier, and a column and an apparatus including such a separation carrier. The purpose is to provide.
本発明者らは、所定の平均粒径の炭酸カルシウムが、分離用担体として使用できることを見出し、本発明を完成するに至った。より具体的には、本発明は以下のようなものを提供することを目的とする。 The present inventors have found that calcium carbonate having a predetermined average particle size can be used as a carrier for separation, and have completed the present invention. More specifically, the present invention aims to provide the following.
（１） 平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である炭酸カルシウム粒子を含有する、分離用担体。 (1) A carrier for separation containing calcium carbonate particles having an average particle size of 0.15 μm or more and 95 μm or less.
（２） 前記炭酸カルシウム粒子の表面に形成されたポリマーからなる膜をさらに含有する、（１）に記載の分離用担体。 (2) The separation carrier according to (1), further containing a film made of a polymer formed on the surface of the calcium carbonate particles.
（３） 前記ポリマーが温度応答性ポリマーである、（２）に記載の分離用担体。 (3) The carrier for separation according to (2), wherein the polymer is a temperature responsive polymer.
（４） 前記炭酸カルシウム粒子と前記ポリマーとの質量比が１：０．０１〜１：０．３である、（２）又は（３）に記載の分離用担体。 (4) The carrier for separation according to (2) or (3), wherein the mass ratio of the calcium carbonate particles and the polymer is 1:0.01 to 1:0.3.
（５） 前記炭酸カルシウム粒子の比表面積が、２５ｍ２／ｇ以上６００ｍ２／ｇ以下である（１）から（４）のいずれかに記載の分離用担体。 (5) The carrier for separation according to any one of (1) to (4), wherein the specific surface area of the calcium carbonate particles is 25 m 2 /g or more and 600 m 2 /g or less.
（６） 液体クロマトグラフィー用又は固相抽出用である、（１）から（５）のいずれかに記載の分離用担体。 (6) The carrier for separation according to any one of (1) to (5), which is for liquid chromatography or solid phase extraction.
（７） 塩基性条件下における分離に用いられる、（１）から（６）のいずれかに記載の分離用担体。 (7) The carrier for separation according to any one of (1) to (6), which is used for separation under basic conditions.
（８） （１）から（７）のいずれかに記載の分離用担体を備える、液体クロマトグラフィー用又は固相抽出用カラム。 (8) A column for liquid chromatography or solid phase extraction, comprising the separation carrier according to any one of (1) to (7).
（９） （８）に記載のカラムを備える、液体クロマトグラフィー用又は固相抽出用装置。 (9) An apparatus for liquid chromatography or solid phase extraction, comprising the column according to (8).
（１０） 平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である炭酸カルシウム粒子と、該炭酸カルシウム粒子の表面に形成されたポリマーからなる膜とを含有する分離用担体の製造方法であって、
重合性モノマーと平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である炭酸カルシウム粒子とを含有する第１の溶媒を調製する工程と、
前記第１の溶媒を揮発させ、前記炭酸カルシウム粒子と前記重合性モノマーとの混合物の塊を得る工程と、
前記混合物の塊を含有する第２の溶媒を調製する工程と、
前記第２の溶媒中の前記重合性モノマーを重合させる重合工程と、を有し、
前記第１の溶媒は、前記重合性モノマーに対する良溶媒であり、かつ、前記炭酸カルシウム粒子に対する貧溶媒であり、
前記第２の溶媒は、前記重合性モノマー及び前記炭酸カルシウム粒子に対する貧溶媒である、方法。
(10) A method for producing a separation carrier, which comprises calcium carbonate particles having an average particle size of 0.15 μm or more and 95 μm or less and a film made of a polymer formed on the surfaces of the calcium carbonate particles,
A step of preparing a first solvent containing a polymerizable monomer and calcium carbonate particles having an average particle size of 0.15 μm or more and 95 μm or less,
Volatilizing the first solvent to obtain a mass of a mixture of the calcium carbonate particles and the polymerizable monomer,
Preparing a second solvent containing a mass of said mixture;
A polymerization step of polymerizing the polymerizable monomer in the second solvent,
The first solvent is a good solvent for the polymerizable monomer, and a poor solvent for the calcium carbonate particles,
The method wherein the second solvent is a poor solvent for the polymerizable monomer and the calcium carbonate particles.
（１１） 前記重合工程における重合を、光重合により行う、（１０）に記載の方法。 (11) The method according to (10), wherein the polymerization in the polymerization step is performed by photopolymerization.
（１２） 前記第１の溶媒を調製する工程において、前記炭酸カルシウム粒子と前記重合性モノマーとを１：０．０１０〜１：０．３の質量比で前記第１の溶媒に含有させる、（１０）又は（１１）に記載の方法。 (12) In the step of preparing the first solvent, the calcium carbonate particles and the polymerizable monomer are contained in the first solvent in a mass ratio of 1:0.010 to 1:0.3, ( The method according to 10) or (11).
本発明によれば、塩基性条件下における使用に適した分離用担体、分離用担体の製造方法、並びにこのような分離用担体を備えるカラム、及び装置を提供することができる。 According to the present invention, it is possible to provide a separation carrier suitable for use under basic conditions, a method for producing a separation carrier, a column equipped with such a separation carrier, and an apparatus.
以下、本発明の実施形態について説明するが、本発明はこれに特に限定されない。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described, but the present invention is not particularly limited thereto.
＜分離用担体＞
本発明の分離用担体は、平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である炭酸カルシウム粒子を含有する。
<Separation carrier>
The carrier for separation of the present invention contains calcium carbonate particles having an average particle size of 0.15 µm or more and 95 µm or less.
本発明において、「分離用担体」とは、物質の分離に用いられる担体を意味する。「物質の分離に用いられる」とは、例えば、複数の物質が混在する液体等の系において、１つの物質又は２つ以上の物質を検出、定量又は分取可能な程度にまで分離することを目的として用いられることを意味する。分離対象の物質は、化合物（低分子、高分子、ペプチド、たんぱく質、ＤＮＡ、ＲＮＡ等）のいずれであってもよく、特に限定されない。 In the present invention, the “separation carrier” means a carrier used for separating substances. “Used for separating substances” means separating one substance or two or more substances to such an extent that they can be detected, quantified or fractionated in a system such as a liquid in which a plurality of substances are mixed. It is meant to be used for the purpose. The substance to be separated may be any compound (low molecule, polymer, peptide, protein, DNA, RNA, etc.) and is not particularly limited.
（炭酸カルシウム粒子）
炭酸カルシウムは、その特性上、シリカよりも塩基性条件における耐久性があるため、炭酸カルシウム粒子を分離用担体として使用できれば、シリカよりも塩基性条件における使用に適した分離用担体として使用できることが期待される。ここで、炭酸カルシウムは、液体クロマトグラフィーの歴史の初期段階では分離用担体として使用されていた（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗａｋａｙａｍａ−ｅｄｃ．ｂｉｇ−ｕ．ｊｐ／ｋａｎｋｙｏ／ｅｋｉｋｕｒｏ／ｅｋｉｋｕｒｏ．ｐｄｆの「１（１）クロマトグラフィーの歴史」）という経緯がある。しかしながら、炭酸カルシウム粒子は、液体クロマトグラフィー等の精密な分離解析の分離用担体としては使用できないと考えられており（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ．ｃｏ．ｊｐ／ｎｅｗｓｌｅｔｔｅｒ／ｂｉｏｄｉｒｅｃｔ＿ｍａｉｌ／ｔｅｃｈｎｉｃａｌ＿ｔｉｐｓ／ｔｉｐｓ４８．ｈｔｍｌを参照）、現在は、炭酸カルシウムは分離用担体としては使用されておらず、もっぱらシリカが使用されている。
(Calcium carbonate particles)
Since calcium carbonate is more durable under basic conditions than silica due to its characteristics, if calcium carbonate particles can be used as a separation carrier, it can be used as a separation carrier suitable for use under basic conditions rather than silica. Be expected. Here, calcium carbonate was used as a carrier for separation in the early stages of the history of liquid chromatography (for example, http://www.wakayama-edc.big-u.jp/kankyo/ekikuro/ekikuro.pdf). "1(1) Chromatography history"). However, it is considered that calcium carbonate particles cannot be used as a carrier for separation in a precise separation analysis such as liquid chromatography (for example, http://www.gellifesciences.co.jp/newsletter/biodirect_mail/technical_tips/ (See tips 48.html), currently calcium carbonate is not used as a carrier for the separation and silica is used exclusively.
このように、炭酸カルシウムは、長年にわたって、分離用担体として使用できないとされていたが、本発明者らは、平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下の炭酸カルシウム粒子が、液体クロマトグラフィー等における分離用担体として機能することを見出した。さらには、上述のとおり、炭酸カルシウム粒子は、シリカよりも塩基性条件における耐久性があるため、本発明は、塩基性条件下における使用に適した分離用担体を提供する。 Thus, although it has been said that calcium carbonate cannot be used as a carrier for separation for many years, the present inventors have found that calcium carbonate particles having an average particle diameter of 0.15 μm or more and 95 μm or less are used in liquid chromatography or the like. It has been found that it functions as a carrier for separation. Furthermore, as mentioned above, the calcium carbonate particles are more durable under basic conditions than silica, so the present invention provides a separation carrier suitable for use under basic conditions.
本発明の炭酸カルシウム粒子は、平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である粒子であれば特に限定されず、上記範囲において、目的に応じて、適宜平均粒径を調整することができる。例えば、本発明の分離用担体を、精製等の分取を目的として使用する場合は、炭酸カルシウム粒子の平均粒径は１５μｍ以上８５μｍ以下であることが好ましく、２０μｍ以上８２μｍ以下であることがより好ましく、３０μｍ以上８０μｍ以下であることがより一層好ましく、３８μｍ以上７５μｍ以下であることさらに好ましい。また、本発明の分離用担体を分析に用いる場合は、炭酸カルシウム粒子の平均粒径は０．２０μｍ以上２５μｍ以下であることが好ましく、０．３５μｍ以上２０μｍ以下であることがより好ましく、０．５０μｍ以上１５μｍ以下であることがより一層好ましく、１．０μｍ以上１０μｍ以下であることがさらに好ましく、２．５μｍ以上７．０μｍ以下であることが特に好ましい。なお、炭酸カルシウム粒子の平均粒径は、ＳＥＭ像より測定する。 The calcium carbonate particles of the present invention are not particularly limited as long as the particles have an average particle size of 0.15 μm or more and 95 μm or less, and the average particle size can be appropriately adjusted within the above range according to the purpose. For example, when the carrier for separation of the present invention is used for the purpose of fractionation such as purification, the average particle diameter of calcium carbonate particles is preferably 15 μm or more and 85 μm or less, and more preferably 20 μm or more and 82 μm or less. The thickness is more preferably 30 μm or more and 80 μm or less, still more preferably 38 μm or more and 75 μm or less. Further, when the carrier for separation of the present invention is used for analysis, the average particle diameter of calcium carbonate particles is preferably 0.20 μm or more and 25 μm or less, more preferably 0.35 μm or more and 20 μm or less, and 0.1. The thickness is more preferably 50 μm or more and 15 μm or less, still more preferably 1.0 μm or more and 10 μm or less, and particularly preferably 2.5 μm or more and 7.0 μm or less. The average particle size of the calcium carbonate particles is measured from the SEM image.
炭酸カルシウムの結晶構造は、カルサイト、アラゴナイト、バテライト、アモルファスの４つの形態のものが知られているが、炭酸カルシウム粒子の平均粒径を上記範囲内に制御しやすく、分離能の高い分離用担体が得られやすく、さらには塩基性下での耐久性がより優れるという観点から、本発明の炭酸カルシウム粒子はバテライトの結晶形であることが好ましい。本発明の炭酸カルシウム粒子は、単一の結晶構造から構成されていてもよいが、複数種の結晶構造が混在してもよい。複数種の結晶構造が混在する場合、全炭酸カルシウムのうち、８０質量％以上がバテライトであることが好ましく、８５質量％以上がバテライトであることがより好ましく、９０質量％以上がバテライトであることがより一層好ましく、９５質量％以上がバテライトであることがさらに好ましく、９９％以上がバテライトであることが特に好ましい。 The crystal structure of calcium carbonate is known to be one of the four forms of calcite, aragonite, vaterite, and amorphous, but it is easy to control the average particle diameter of calcium carbonate particles within the above range, and for high separation performance. From the viewpoint that a carrier is easily obtained and the durability under basicity is more excellent, the calcium carbonate particles of the present invention are preferably in the crystal form of vaterite. The calcium carbonate particles of the present invention may be composed of a single crystal structure, but a plurality of types of crystal structures may be mixed. When plural kinds of crystal structures are mixed, 80% by mass or more of the total calcium carbonate is preferably vaterite, more preferably 85% by mass or more is vaterite, and 90% by mass or more is vaterite. Is more preferred, 95% by mass or more is more preferably vaterite, and 99% or more is particularly preferably vaterite.
バテライトの結晶形であって、平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下の範囲に制御された炭酸カルシウム粒子は、以下のような方法で製造することができる。 Calcium carbonate particles having a vaterite crystal form and having an average particle size controlled in the range of 0.15 μm or more and 95 μm or less can be produced by the following method.
まず、炭酸源（Ｎａ２Ｃｏ３等）を含む水溶液と、カルシウム源（ＣａＣｌ２等）を含む水溶液と、ポリスチレンスルホン酸等の親水性ポリマーとを溶解させた水溶液とを混合し、（例えば、５００ｒｐｍで）撹拌して混合液を得る。この混合液を、２４時間程度静置した後、濾過（吸引濾過等）してから、乾燥することで（乾燥条件は、例えば、１０〜６０℃、３０分〜３時間である。）、得ることができる。なお、０．１５μｍ以上９５μｍ以下の範囲内での平均粒径の制御は、平均粒径を小さくする場合は、攪拌速度を速くすることにより行うことができ、平均粒径を大きくする場合は、攪拌子を小さくすることにより行うことができる。また、炭酸カルシウムのバテライトの結晶形は、安定性が低く、カルサイトに転移しやすいので、安定性を高く保つために、後述する膜形成ポリマーにより表面を膜で覆うことが好ましい。膜形成ポリマーとして親水性ポリマーを用いることで、炭酸カルシウム粒子の表面が親水性ポリマーにより覆われ、平均粒径を制御しやすくなる。 First, an aqueous solution containing a carbonic acid source (Na 2 Co 3, etc.), an aqueous solution containing a calcium source (CaCl 2, etc.), and an aqueous solution in which a hydrophilic polymer such as polystyrene sulfonic acid is dissolved are mixed (for example, Stir (at 500 rpm) to obtain a mixture. The mixed solution is left standing for about 24 hours, filtered (such as suction filtration), and then dried (drying conditions are, for example, 10 to 60° C. and 30 minutes to 3 hours). be able to. The average particle size can be controlled within the range of 0.15 μm or more and 95 μm or less by increasing the stirring speed when decreasing the average particle size and increasing the average particle size when increasing the average particle size. This can be done by reducing the size of the stirring bar. Further, since the crystal form of vaterite of calcium carbonate has low stability and is easily transferred to calcite, it is preferable to cover the surface with a film-forming polymer described later in order to keep the stability high. By using the hydrophilic polymer as the film-forming polymer, the surface of the calcium carbonate particles is covered with the hydrophilic polymer, and the average particle size can be easily controlled.
本発明における炭酸カルシウムの比表面積は、特に限定されないが、大きいほど分離能が高くなる傾向にあることから、その下限は５ｍ２／ｇ以上であることが好ましく、１０ｍ２／ｇ以上であることがより好ましく、１５ｍ２／ｇ以上であることがより一層好ましく、２０ｍ２／ｇ以上であることがさらに一層好ましく、２５ｍ２／ｇ以上であることが特に好ましい。本発明における炭酸カルシウムの比表面積の上限は１３００ｍ２／ｇ以下であることが好ましく、１１００ｍ２／ｇ以下であることがより好ましく、９００ｍ２／ｇ以下であることがより一層好ましく、７００ｍ２／ｇ以下であることがさらに一層好ましく、６００ｍ２／ｇ以下であることが特に好ましい。なお、本発明における炭酸カルシウムの比表面積は、ＢＥＴ法により測定する。 The specific surface area of calcium carbonate in the present invention is not particularly limited, but the lower limit is preferably 5 m 2 /g or more, and is preferably 10 m 2 /g or more, because the larger the surface area, the higher the separating power tends to be. Is more preferable, 15 m 2 /g or more is still more preferable, 20 m 2 /g or more is still more preferable, and 25 m 2 /g or more is particularly preferable. The upper limit of the specific surface area of the calcium carbonate in the present invention is preferably at most 1300 m 2 / g, more preferably 1100 m 2 / g or less, even more preferably at most 900m 2 / g, 700m 2 / It is even more preferably g or less, and particularly preferably 600 m 2 /g or less. The specific surface area of calcium carbonate in the present invention is measured by the BET method.
（膜形成ポリマー）
本発明の分離用担体は、炭酸カルシウム粒子の表面に形成されたポリマー（以下、本明細書において「膜形成ポリマー」と略称する場合がある。）からなる膜をさらに含有することが好ましい。これにより、膜形成ポリマーの種類に応じて分離用担体に様々な特性を与えることができ、また、炭酸カルシウム中のバテライトをより安定させることができる。
(Film forming polymer)
The separation carrier of the present invention preferably further contains a film made of a polymer formed on the surface of the calcium carbonate particles (hereinafter, may be abbreviated as “film-forming polymer” in the present specification). As a result, various properties can be imparted to the carrier for separation depending on the type of the film-forming polymer, and vaterite in calcium carbonate can be made more stable.
本発明の膜形成ポリマーとしては、従来の分離用担体として使用されているようなポリマーを使用でき、分離対象の物性等に応じて、適宜選択できる。具体的には、温度応答性ポリマー、親水性ポリマー、疎水性ポリマー、カチオン性ポリマー、アニオン性ポリマー等のポリマーを使用できる。膜形成ポリマーは、重合性モノマーの重合により得られ、例えば、以下の式（１）、式（２）で表されるようなモノマーの重合体であってもよい。 As the film-forming polymer of the present invention, a polymer used as a conventional carrier for separation can be used, and can be appropriately selected according to the physical properties of the separation target. Specifically, polymers such as temperature responsive polymers, hydrophilic polymers, hydrophobic polymers, cationic polymers and anionic polymers can be used. The film-forming polymer is obtained by polymerizing a polymerizable monomer, and may be, for example, a polymer of a monomer represented by the following formula (1) or formula (2).
式（１）、（２）中、Ｒ１は、置換基を表すが、式（１）、（２）で表されるモノマーは、例えば、以下の、式（３）で表されるアクリルアミド系モノマー、式（４）で表されるメタクリルアミド系モノマー、式（５）で表されるメタアクリレート系モノマー、式（６）で表されるアクリレート系モノマー、式（７）で表されるビニルエステル系モノマー、式（８）で表されるビニルアミド系モノマー、式（９）で表されるスチレン系モノマーが挙げられる。式（３）〜（９）中のＲ２としては、炭化水素基、水素原子、アミノ基（脂肪族基を置換基として有してもよい）等が挙げられる。 In the formulas (1) and (2), R 1 represents a substituent, and the monomer represented by the formulas (1) and (2) is, for example, an acrylamide-based monomer represented by the following formula (3). Monomer, methacrylamide monomer represented by formula (4), methacrylate monomer represented by formula (5), acrylate monomer represented by formula (6), vinyl ester represented by formula (7) Examples thereof include a system monomer, a vinylamide monomer represented by the formula (8), and a styrene monomer represented by the formula (9). Examples of R 2 in the formulas (3) to (9) include a hydrocarbon group, a hydrogen atom, an amino group (which may have an aliphatic group as a substituent), and the like.
温度応答性ポリマーとしては、例えば、（メタ）アクリルアミド化合物、Ｎ−（又はＮ，Ｎ−ジ）アルキル置換（メタ）アクリルアミド誘導体、ビニルエーテル誘導体等を構成モノマーとして構成されたポリマーや、これらのうちの２種類以上のモノマーの共重合体であってもよい。また、これらのモノマー以外のモノマーとの共重合、ポリマー同士のグラフト重合又は共重合を行ったものを用いてもよく、あるいはこれらモノマーの単独重合体と共重合体の混合物を用いてもよい。 Examples of the temperature responsive polymer include a (meth)acrylamide compound, a polymer composed of an N-(or N,N-di)alkyl-substituted (meth)acrylamide derivative, a vinyl ether derivative or the like as a constituent monomer, and It may be a copolymer of two or more kinds of monomers. Further, those obtained by copolymerization with monomers other than these monomers, graft polymerization or copolymerization of polymers may be used, or a mixture of homopolymers and copolymers of these monomers may be used.
具体的な温度応答性ポリマーを構成するモノマーとしては、例えば、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ｎ−プロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−シクロプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−エトキシエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−テトラヒドロフルフリル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−エチルメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチル（メタ）アクリルアミド等が挙げられる。温度応答性ポリマーは、これらのモノマーの単独重合体であってもよく、２種以上の共重合体であってもよい。また、これらのモノマーとさらに共重合してもよいモノマーとしては、ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド、（メタ）アクリルアミド、Ｎ、Ｎ−ジエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、エチレンオキシド、（メタ）アクリル酸及びその塩、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ポリヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ビニルアルコール、ビニルピロリドン、セルロース、カルボキシメチルセルロース等が挙げられる。これらのうち、温度応答性ポリマーとしては、特に、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド（ＮＩＰＡＡｍ）の重合体、又は、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド（ＮＩＰＡＡｍ）と他の重合性モノマーの共重合体であることが好ましい。 Specific examples of the monomer constituting the temperature responsive polymer include N-isopropyl(meth)acrylamide, Nn-propyl(meth)acrylamide, N-cyclopropyl(meth)acrylamide, N-ethoxyethyl(meth). Examples thereof include acrylamide, N-tetrahydrofurfuryl (meth)acrylamide, N,N-ethylmethyl (meth)acrylamide, N,N-diethyl (meth)acrylamide and the like. The temperature responsive polymer may be a homopolymer of these monomers or a copolymer of two or more kinds. Further, as a monomer which may be further copolymerized with these monomers, dimethylaminopropyl(meth)acrylamide, (meth)acrylamide, N,N-diethyl(meth)acrylamide, N,N-dimethyl(meth)acrylamide, Examples thereof include ethylene oxide, (meth)acrylic acid and salts thereof, hydroxyethyl (meth)acrylate, polyhydroxyethyl (meth)acrylate, vinyl alcohol, vinylpyrrolidone, cellulose and carboxymethyl cellulose. Among these, the temperature-responsive polymer is particularly a polymer of N-isopropyl(meth)acrylamide (NIPAAm) or a copolymer of N-isopropyl(meth)acrylamide (NIPAAm) and another polymerizable monomer. It is preferable to have.
疎水性ポリマーを構成するモノマーとしては、例えば、以下の式（１０）で示されるブチルメタクリレート、式（１１）で表されるオクタデシルメタクリレート等が挙げられる。 Examples of the monomer constituting the hydrophobic polymer include butyl methacrylate represented by the following formula (10) and octadecyl methacrylate represented by the formula (11).
カチオン性ポリマーを構成するモノマーとしては、例えば、以下の式（１２）で示されるＮ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド等が挙げられる。 Examples of the monomer that constitutes the cationic polymer include N,N-dimethylaminopropylacrylamide represented by the following formula (12).
親水性ポリマーを構成するモノマーとしては、例えば、以下の式（１３）で示される２−（メタクリロイルオキシ）エチル２−（トリメチルアンモニオ）エチルリン酸等が挙げられる。 Examples of the monomer constituting the hydrophilic polymer include 2-(methacryloyloxy)ethyl 2-(trimethylammonio)ethyl phosphoric acid represented by the following formula (13).
アニオン性ポリマーを構成するモノマーとしては、例えば、以下の式（１４）で示されるメタクリル酸等が挙げられる。 Examples of the monomer that constitutes the anionic polymer include methacrylic acid represented by the following formula (14).
上記ポリマーは、安定して膜を形成するためには、架橋されていることが好ましい。架橋剤は、二重結合を２つ以上有する公知の架橋剤であれば特に限定されないが、Ｎ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド、プロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、エチレンジ（メタ）アクリレート、ペンタエリトリトールジアクリレートモノステアレート、ジビニルベンゼン、Ｎ，Ｎ’−ジアリル−Ｌ−酒石酸ジアミド、Ｎ，Ｎ’−ジアリル−酒石酸ジアミド、ピペラジンジアクリルアミド等が挙げられる。架橋剤の添加量は、膜形成ポリマーを構成する重合性モノマーの量に応じて、適宜設定することができ、例えば、重合性モノマーと架橋剤との質量比が、１：０．００１〜１：１であることが好ましく、１：０．０１〜１：０．５であることがより好ましく、１：０．０４〜１：０．２であることがさらに好ましい。 The polymer is preferably crosslinked in order to form a stable film. The crosslinking agent is not particularly limited as long as it is a known crosslinking agent having two or more double bonds, but N,N′-methylenebisacrylamide, propylene glycol di(meth)acrylate, polypropylene glycol di(meth)acrylate, ethylene. Glycol di(meth)acrylate, polyethylene glycol di(meth)acrylate, ethylene di(meth)acrylate, pentaerythritol diacrylate monostearate, divinylbenzene, N,N'-diallyl-L-tartaric acid diamide, N,N'-diallyl -Tartaric acid diamide, piperazine diacrylamide and the like. The addition amount of the cross-linking agent can be appropriately set according to the amount of the polymerizable monomer constituting the film-forming polymer. For example, the mass ratio of the polymerizable monomer and the cross-linking agent is 1:0.001-1. :1 is preferable, 1:0.01 to 1:0.5 is more preferable, and 1:0.04 to 1:0.2 is further preferable.
本発明の分離用担体が膜形成ポリマーを含有する場合、膜形成ポリマーの含有量が過大であると、膜が厚くなりすぎて、均一な膜が得られにくくなり、分離能が低下する恐れがある。他方、膜形成ポリマーの含有量が少なすぎると、膜で炭酸カルシウム粒子の表面全体を覆いにくくなり、炭酸カルシウム粒子中のバテライトが安定せず、分離能が低下する恐れがある。このことから、炭酸カルシウム粒子と膜形成ポリマーとの質量比は、１：０．０００１〜１：１であることが好ましく、１：０００５〜１：０．５であることがより好ましく、１：０．０１０〜１：０．３０であることがさらに好ましく、０．０１５〜１：０．０４０であることが特に好ましい。 When the carrier for separation of the present invention contains a film-forming polymer, if the content of the film-forming polymer is too large, the film becomes too thick, and it becomes difficult to obtain a uniform film, and the separability may decrease. is there. On the other hand, when the content of the film-forming polymer is too low, it becomes difficult to cover the entire surface of the calcium carbonate particles with the film, the vaterite in the calcium carbonate particles is not stable, and the separability may decrease. From this, the mass ratio of the calcium carbonate particles and the film-forming polymer is preferably 1:0.0001 to 1:1, more preferably 1:0005 to 1:0.5, and 1: It is more preferably from 0.010 to 1:0.30, and particularly preferably from 0.015 to 1:0.040.
本発明の分離用担体が、炭酸カルシウム粒子と上記膜形成ポリマーとから構成される場合、その平均粒径は、目的に応じて適宜決定されてもよい。例えば、本発明の分離用担体を、精製等の分取を目的として使用する場合は、炭酸カルシウムの分離用担体の平均粒径は１５μｍ以上８５μｍ以下であることが好ましく、２０μｍ以上８２μｍ以下であることがより好ましく、３０μｍ以上８０μｍ以下であることがより一層好ましく、３８μｍ以上７５μｍ以下であることさらに好ましい。また、本発明の分離用担体を分析に用いる場合は、本発明の分離用担体の平均粒径は０．２０μｍ以上２５μｍ以下であることが好ましく、０．３５μｍ以上２０μｍ以下であることがより好ましく、０．５０μｍ以上１５μｍ以下であることがより一層好ましく、１．０μｍ以上１０μｍ以下であることがさらに好ましく、２．５μｍ以上７μｍ以下であることが特に好ましい。なお、膜形成ポリマーを含有する態様の本発明の分離用担体の平均粒径は、炭酸カルシウム粒子の測定と同様の方法で測定される。 When the carrier for separation of the present invention is composed of calcium carbonate particles and the above film-forming polymer, the average particle size thereof may be appropriately determined depending on the purpose. For example, when the carrier for separation of the present invention is used for the purpose of fractionation such as purification, the average particle size of the carrier for separation of calcium carbonate is preferably 15 μm or more and 85 μm or less, and 20 μm or more and 82 μm or less. More preferably, it is more preferably 30 μm or more and 80 μm or less, and further preferably 38 μm or more and 75 μm or less. When the separation carrier of the present invention is used for analysis, the average particle size of the separation carrier of the present invention is preferably 0.20 μm or more and 25 μm or less, more preferably 0.35 μm or more and 20 μm or less. , 0.50 μm or more and 15 μm or less, more preferably 1.0 μm or more and 10 μm or less, and particularly preferably 2.5 μm or more and 7 μm or less. The average particle size of the carrier for separation according to the present invention containing the film-forming polymer is measured by the same method as the measurement of calcium carbonate particles.
本発明の炭酸カルシウムの表面において、上記の膜形成ポリマーからなる膜の平均膜厚は、１０．０ｎｍ以上５００ｎｍ以下であることが好ましく、２０．０ｎｍ以上４００ｎｍ以下であることがより好ましく、３０．０ｎｍ以上３００ｎｍ以下であることがさらに好ましく、５０．０ｎｍ以上２５０ｎｍ以下であることが特に好ましい。また、炭酸カルシウムの表面の略全面（好ましくは、表面の９０％以上の面積、より好ましくは表面の９９％以上の面積）が覆われていることが好ましい。 On the surface of the calcium carbonate of the present invention, the average film thickness of the film made of the above film-forming polymer is preferably 10.0 nm or more and 500 nm or less, more preferably 20.0 nm or more and 400 nm or less, and 30. The thickness is more preferably 0 nm or more and 300 nm or less, and particularly preferably 50.0 nm or more and 250 nm or less. Further, it is preferable that substantially the entire surface of the calcium carbonate (preferably an area of 90% or more of the surface, more preferably an area of 99% or more of the surface) is covered.
本発明における膜形成ポリマーの分子量は、膜形成ポリマーによる所望の性質を得られるように、適宜設定してもよい。 The molecular weight of the film-forming polymer in the present invention may be appropriately set so that the desired properties of the film-forming polymer can be obtained.
本発明の炭酸カルシウム粒子の表面に膜形成ポリマーが形成された分離用担体の製造方法の詳細は後述する。 Details of the method for producing the carrier for separation in which the film-forming polymer is formed on the surface of the calcium carbonate particles of the present invention will be described later.
（用途）
本発明の分離用担体の用途としては、分離対象物質と接触させて用いられる、従来の、検出、測定、分取等を目的とした用途であれば、特に限定されないが、液体クロマトグラフィー用又は固相抽出用であることが好ましく、液体クロマトグラフィー用であることが特に好ましい。また、上述のとおり、本発明の分離用担体は、炭酸カルシウムを用いることから、塩基性条件下における分離に適している。このことから、塩基性条件下における分離に用いられることが好ましい。
(Use)
The use of the carrier for separation of the present invention is not particularly limited as long as it is used in contact with a substance to be separated, conventional, detection, measurement, fractionation, etc., or for liquid chromatography or It is preferably for solid phase extraction, and particularly preferably for liquid chromatography. Further, as described above, the carrier for separation of the present invention uses calcium carbonate, and thus is suitable for separation under basic conditions. Therefore, it is preferably used for separation under basic conditions.
また、本発明の分離用担体が分取を目的として用いられる場合において、分離対象物質を最終的に回収する方法は、目的や膜形成ポリマーの種類等に応じて、適宜選択できる。例えば、分離対象物質と本発明の分離用担体とを混合した後に、遠心分離を行い、沈殿した分離用担体を回収することで分取が可能である。あるいは、低温で親水性となり、かつ、高温で疎水性となる温度応答性ポリマーを膜形成ポリマーとして用いる場合は、疎水性の有機溶媒（トルエン、ニトロベンゼン等）と、分離対象物質を吸着した分離用担体を含む水と、を低温で混合した後、加温することで、分離用担体を疎水性の有機溶媒の層に移動させることができ、この有機溶媒に含まれる分離用担体を回収することで分取が可能である。 In the case where the carrier for separation of the present invention is used for the purpose of fractionation, the method of finally recovering the substance to be separated can be appropriately selected depending on the purpose, the type of the film-forming polymer and the like. For example, it is possible to fractionate by separating the substance to be separated and the separation carrier of the present invention, centrifuging and collecting the precipitated separation carrier. Alternatively, when a temperature-responsive polymer that becomes hydrophilic at low temperature and hydrophobic at high temperature is used as a film-forming polymer, a hydrophobic organic solvent (toluene, nitrobenzene, etc.) and a substance to be separated are used for separation. By mixing water containing a carrier at a low temperature and then heating, the carrier for separation can be moved to the layer of the hydrophobic organic solvent, and the carrier for separation contained in this organic solvent can be recovered. It is possible to sort by.
＜カラム＞
本発明は、上述の分離用担体を備える、液体クロマトグラフィー用又は固相抽出用カラムを包含する。上述のとおり、液体クロマトグラフィー、固相抽出に適しているため、上述の分離用担体をカラムに充填することで、液体クロマトグラフィー用カラム、固相抽出用カラムとして使用できる。
<Column>
The present invention includes a column for liquid chromatography or solid phase extraction, which comprises the above-mentioned carrier for separation. As described above, since it is suitable for liquid chromatography and solid phase extraction, it can be used as a column for liquid chromatography or a column for solid phase extraction by filling the column with the above-mentioned carrier for separation.
カラムの種類は、従来の液体クロマトグラフィーや、固相抽出に用いられるものであれば、特に限定されない。 The type of column is not particularly limited as long as it is used for conventional liquid chromatography or solid phase extraction.
＜装置＞
本発明は、さらに、上記のカラムを備える、液体クロマトグラフィー用又は固相抽出用装置を包含する。
<Device>
The invention further comprises a liquid chromatography or solid phase extraction device comprising a column as described above.
液体クロマトグラフィー用装置、固相抽出用装置の種類は、従来の液体クロマトグラフィー用装置、固相抽出用装置に用いられるものであれば、特に限定されない。 The types of the liquid chromatography device and the solid phase extraction device are not particularly limited as long as they are used in the conventional liquid chromatography device and the solid phase extraction device.
＜分離用担体の製造方法＞
本発明の上述の分離用担体のうち、平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である炭酸カルシウム粒子と、該炭酸カルシウム粒子の表面に形成されたポリマー（上述の膜形成ポリマーからなる膜）とを含有する分離用担体は、例えば、重合性モノマーと、平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である炭酸カルシウム粒子とを含有する第１の溶媒を調製する工程と、該第１の溶媒を揮発させ、炭酸カルシウム粒子と重合性モノマーとの混合物の塊を得る工程と、該混合物の塊を含有する第２の溶媒を調製する工程と、該第２の溶媒中の重合性モノマーを重合させる重合工程と、を有する方法で製造できる。以下に、かかる本発明の好ましい製造方法（以下、「本発明の製造方法」と略称する。）について、詳細に説明する。
<Method for producing carrier for separation>
Among the above-mentioned carrier for separation of the present invention, calcium carbonate particles having an average particle diameter of 0.15 μm or more and 95 μm or less, and a polymer formed on the surface of the calcium carbonate particles (a film made of the above film-forming polymer). The separating carrier containing, for example, a step of preparing a first solvent containing a polymerizable monomer and calcium carbonate particles having an average particle size of 0.15 μm or more and 95 μm or less, and the first solvent Volatilizing to obtain a mass of a mixture of calcium carbonate particles and a polymerizable monomer, preparing a second solvent containing the mass of the mixture, and polymerizing the polymerizable monomer in the second solvent And a polymerization step. Hereinafter, the preferable production method of the present invention (hereinafter, abbreviated as “production method of the present invention”) will be described in detail.
本発明の製造方法における重合性モノマー、炭酸カルシウム粒子は、上述のものと同様のものを例示できる。 Examples of the polymerizable monomer and calcium carbonate particles in the production method of the present invention are the same as those described above.
第１の溶媒は、重合性モノマーに対する良溶媒であり、かつ、炭酸カルシウム粒子に対する貧溶媒である。このような溶媒であれば、特に限定されず、重合性モノマーの種類に応じて適宜変更することができる。例えば、重合性モノマーがＮ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド（ＮＩＰＡＡｍ）、ジメチルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドである場合、第１の溶媒としては、クロロホルム、酢酸エチル、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、メタノール、エタノール等を用いることができる。あるいは、重合性モノマーがオクタデシルメタクリレート、ブチルメタクリレート、ヘキシルメタクリレートである場合、第１の溶媒としては、ヘキサン、ペンタン、ヘプタンを用いることができる。また、本発明において、「良溶媒」とは、２０℃における溶媒１ｍＬに対する対象物質（第１の溶媒においては重合性モノマー）の溶解量が０．０１ｇ以上である溶媒のことを意味する。また、「貧溶媒」とは、２０℃における溶媒１ｍＬに対する対象物質（第１の溶媒においては炭酸カルシウム粒子、第２の溶媒においては炭酸カルシウム粒子及び重合性モノマー）の溶解量が０．００１ｇ以下である溶媒のことを意味する。 The first solvent is a good solvent for the polymerizable monomer and a poor solvent for the calcium carbonate particles. The solvent is not particularly limited as long as it is such a solvent, and can be appropriately changed depending on the type of the polymerizable monomer. For example, when the polymerizable monomer is N-isopropyl(meth)acrylamide (NIPAAm), dimethylacrylamide, N,N-dimethylaminopropylacrylamide, the first solvent is chloroform, ethyl acetate, THF (tetrahydrofuran), methanol. , Ethanol, etc. can be used. Alternatively, when the polymerizable monomer is octadecyl methacrylate, butyl methacrylate, or hexyl methacrylate, hexane, pentane, or heptane can be used as the first solvent. Further, in the present invention, the “good solvent” means a solvent in which the amount of the target substance (polymerizable monomer in the first solvent) dissolved in 1 mL of the solvent at 20° C. is 0.01 g or more. Further, the “poor solvent” means that the amount of the target substance (calcium carbonate particles in the first solvent, calcium carbonate particles and the polymerizable monomer in the second solvent) dissolved in 1 mL of the solvent at 20° C. is 0.001 g or less. Means a solvent that is
第２の溶媒は、炭酸カルシウム粒子及び重合性モノマーに対する貧溶媒である。このような溶媒であれば、特に限定されず、重合性モノマーの種類に応じて適宜変更することができる。例えば、重合性モノマーがＮ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド（ＮＩＰＡＡｍ）、ジメチルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミドである場合、第２の溶媒としてはヘキサン、ペンタン、ヘプタンを用いることができる。あるいは、重合性モノマーがオクタデシルメタクリレート、ブチルメタクリレート、ヘキシルメタクリレートである場合、第２の溶媒としては、メタノール、エタノール、水を用いることができる。 The second solvent is a poor solvent for the calcium carbonate particles and the polymerizable monomer. The solvent is not particularly limited as long as it is such a solvent, and can be appropriately changed depending on the type of the polymerizable monomer. For example, when the polymerizable monomer is N-isopropyl(meth)acrylamide (NIPAAm), dimethylacrylamide, or N,N-dimethylaminopropylacrylamide, hexane, pentane, or heptane can be used as the second solvent. Alternatively, when the polymerizable monomer is octadecyl methacrylate, butyl methacrylate, or hexyl methacrylate, methanol, ethanol, or water can be used as the second solvent.
本発明において、重合性モノマーと平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である炭酸カルシウム粒子とを含有する第１の溶媒を調製する工程は、第１の溶媒に、重合性モノマーと平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である炭酸カルシウム粒子とを含有させることにより行う。このように、第１の溶媒に、重合性モノマーと炭酸カルシウム粒子とが含有させることで、重合性モノマーは第１の溶媒に溶解するが、炭酸カルシウムは、溶解しない。このような状態にすることで、炭酸カルシウム粒子の隙間に、重合性モノマーが入り込みやすくなり、均一な膜を得やすい。第１の溶媒に、重合性モノマーと炭酸カルシウム粒子とを含有させる手段であれば、どのような手段であってもよいが、まず、重合性モノマーを第１の溶媒に含有させて溶解させた後に、炭酸カルシウムを第１の溶媒に含有させることが好ましい。これにより、重合性モノマーが溶解した状態の第１の溶媒が、炭酸カルシウム粒子の隙間に浸透させやすくなり、均一な重合工程後に均一な膜を炭酸カルシウム粒子の表面に形成しやすくなる。 In the present invention, the step of preparing the first solvent containing the polymerizable monomer and the calcium carbonate particles having an average particle size of 0.15 μm or more and 95 μm or less includes the step of adding the polymerizable monomer and the average particle size to the first solvent. Is 0.15 μm or more and 95 μm or less. As described above, by incorporating the polymerizable monomer and the calcium carbonate particles in the first solvent, the polymerizable monomer is dissolved in the first solvent, but the calcium carbonate is not dissolved. In such a state, the polymerizable monomer easily enters the gaps between the calcium carbonate particles, and a uniform film is easily obtained. Any means may be used as long as it is a means for containing the polymerizable monomer and the calcium carbonate particles in the first solvent, but first, the polymerizable monomer was contained in the first solvent and dissolved. It is preferable that the first solvent later contain calcium carbonate. This makes it easier for the first solvent in the state where the polymerizable monomer is dissolved to permeate into the gaps between the calcium carbonate particles, and to easily form a uniform film on the surface of the calcium carbonate particles after the uniform polymerization step.
本発明の製造方法において、使用する重合性モノマーの量が過大であると、重合工程後の膜が厚くなりすぎて、均一な膜が得られにくなり、製造される分離用担体の分離能が低下する恐れがある。他方、重合性モノマーの量が少なすぎると、膜で炭酸カルシウム粒子の表面全体を覆いにくくなり、分離能が低下する恐れがある。このことから、第１の溶媒に含有させる炭酸カルシウム粒子と重合性モノマーとの質量比は、１：０．０００１〜１：１であることが好ましく、１：０００５〜１：０．５であることがより好ましく、１：０．０１０〜１：０．３０であることがさらに好ましく、０．０１５〜１：０．０４０であることが特に好ましい。 In the production method of the present invention, if the amount of the polymerizable monomer used is too large, the membrane after the polymerization step becomes too thick, and it becomes difficult to obtain a uniform membrane. May decrease. On the other hand, when the amount of the polymerizable monomer is too small, it becomes difficult to cover the entire surface of the calcium carbonate particles with the film, and the separability may be reduced. From this, the mass ratio of the calcium carbonate particles to be contained in the first solvent and the polymerizable monomer is preferably 1:0.0001 to 1:1 and is 1:0005 to 1:0.5. More preferably, it is more preferably 1:0.010 to 1:0.30, and particularly preferably 0.015 to 1:0.040.
また、第１の溶媒には、必要に応じて添加剤（架橋剤）を加えてもよい。また、重合性モノマーを第１の溶媒に溶解させ、炭酸カルシウム粒子をこの第１の溶媒とは異なる別の液体に分散させておき、該液体と第１の溶媒とを混合してもよい。また、第１の溶媒中に、炭酸カルシウム粒子と重合性モノマーとを含有させた後、後述の揮発を行う前に、撹拌を行ってもよい。 Moreover, you may add an additive (crosslinking agent) to a 1st solvent as needed. Alternatively, the polymerizable monomer may be dissolved in the first solvent, the calcium carbonate particles may be dispersed in another liquid different from the first solvent, and the liquid and the first solvent may be mixed. Further, after the calcium carbonate particles and the polymerizable monomer are contained in the first solvent, stirring may be performed before volatilization described later.
本発明の製造方法は、第１の溶媒中に、炭酸カルシウム粒子と重合性モノマーとを含有させた後、第１の溶媒を揮発させ、炭酸カルシウム粒子と重合性モノマーとの混合物の塊を得る工程を有する。 In the production method of the present invention, after the calcium carbonate particles and the polymerizable monomer are contained in the first solvent, the first solvent is volatilized to obtain a mass of a mixture of the calcium carbonate particles and the polymerizable monomer. Have steps.
揮発は、従来の公知のいずれの方法に行ってよく、第１の溶媒の揮発性に応じて適宜選択することができる。 Volatilization may be performed by any conventionally known method and can be appropriately selected depending on the volatility of the first solvent.
本発明の製造方法は、上記混合物の塊を得た後、混合物の塊を含有する第２の溶媒を調製する工程を有する。この混合物の塊は炭酸カルシウム粒子と重合性モノマーからなるものである。第２の溶媒中に含有させた状態であれば、炭酸カルシウム粒子も重合性モノマーも溶解しないため、後述の重合を行った際に、そのまま炭酸カルシウム粒子の表面で重合性モノマーが重合するため、その表面に膜を形成可能となる。 The production method of the present invention includes a step of preparing a second solvent containing the lump of the mixture after obtaining the lump of the mixture. The mass of this mixture is composed of calcium carbonate particles and a polymerizable monomer. In the state of being contained in the second solvent, neither the calcium carbonate particles nor the polymerizable monomer is dissolved, so that the polymerizable monomer is directly polymerized on the surface of the calcium carbonate particles when the below-described polymerization is performed, A film can be formed on the surface.
本発明の製造方法は、第２の溶媒中に上記混合物の塊を含有させた後、第２の溶媒中の重合性モノマーを重合させる重合工程を有する。上述のとおり、かかる工程で炭酸カルシウム粒子の表面に重合性モノマーの重合体からなるポリマーにより膜を形成できる。重合性モノマーの重合は、重合性モノマーの種類に応じて、公知の重合方法で行うことができるが、加熱により重合を加えると、均一な膜を形成しにくくなることから、光重合であることが好ましい。この場合、光重合開始剤を、第２の溶媒に含有させて、光重合を行うことが好ましい。あるいは、第１の溶媒に光重合開始剤を予め含有させておき、その後、上述の混合物の塊を得ることで、光重合開始剤と重合性モノマーを共存させて、光重合を行ってもよい。 The production method of the present invention has a polymerization step of polymerizing the polymerizable monomer in the second solvent after the lump of the mixture is contained in the second solvent. As described above, the film can be formed on the surface of the calcium carbonate particles by the polymer made of the polymer of the polymerizable monomer in this step. The polymerization of the polymerizable monomer can be performed by a known polymerization method depending on the type of the polymerizable monomer, but if the polymerization is added by heating, it is difficult to form a uniform film. Is preferred. In this case, the photopolymerization initiator is preferably contained in the second solvent to perform the photopolymerization. Alternatively, the photopolymerization initiator may be preliminarily contained in the first solvent, and then the photopolymerization initiator and the polymerizable monomer may be allowed to coexist by obtaining a lump of the above-mentioned mixture to perform photopolymerization. ..
上記の第２の溶媒に、混合物の塊を含有させている間や、重合を行っているときに、超音波処理、及び／又は撹拌を行うことが好ましい。これにより、より均一な膜を形成しやすくなる。 It is preferable to carry out ultrasonic treatment and/or stirring while the lump of the mixture is contained in the second solvent or during the polymerization. This facilitates formation of a more uniform film.
重合後、得られた分離用単体は、平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である炭酸カルシウム粒子と、該炭酸カルシウム粒子の表面に形成されたポリマー（上述の膜形成ポリマーからなる膜）とを含有する分離用担体である。 After the polymerization, the obtained simple substance for separation is calcium carbonate particles having an average particle diameter of 0.15 μm or more and 95 μm or less, and a polymer formed on the surface of the calcium carbonate particles (a film made of the above-mentioned film-forming polymer). It is a carrier for separation containing.
重合後の分離用単体は、遠心分離、乾燥を行うことで回収できる。 The simple substance for separation after the polymerization can be recovered by performing centrifugation and drying.
なお、上記で述べた方法は、好ましい製造方法であって、他の方法（融液法）によっても、本発明の分離用単体は製造可能である。 The above-described method is a preferable manufacturing method, and the separation unit of the present invention can be manufactured by another method (melt method).
＜炭酸カルシウム粒子の作製＞
（実施例１）
１６ｍＭのＮａ２ＣＯ３水溶液０．５ｄｍ３に終濃度１．０ｇ／ｄｍ３となるようにＰＳＳ（ポリスチレンスルホン酸）を溶解させ５００ｒｐｍで１分間撹拌しながら（撹拌子サイズ：２００ｍｍ ｘ ７ｍｍ）１ＭのＣａＣｌ２水溶液１６ｍＬを混合し、混合後に２５℃で２４時間静置した。その後、６０℃で３時間乾燥することで平均粒径５．０μｍのバテライト型炭酸カルシウム／ＰＳＳの複合粒子を得た。ＰＳＳの除去得られた粒子を５％ＮａＣｌＯ水溶液（５０ｍＬ）に浸漬し、１分間超音波処理を行った後、２５℃で４８時間静置し、その後４００℃で２時間焼成することで、ＰＳＳを除去し、平均粒径５．０μｍのバテライト型炭酸カルシウムを作製し、このバテライト型炭酸カルシウムを実施例１に係る分離用担体とした。
<Preparation of calcium carbonate particles>
(Example 1)
PSS (polystyrene sulfonic acid) was dissolved in 16 mM Na 2 CO 3 aqueous solution 0.5 dm 3 to a final concentration of 1.0 g/dm 3 and stirred at 500 rpm for 1 minute (stir bar size: 200 mm x 7 mm) 1M 16 mL of CaCl 2 aqueous solution was mixed, and after mixing, the mixture was left standing at 25° C. for 24 hours. Then, by drying at 60° C. for 3 hours, vaterite-type calcium carbonate/PSS composite particles having an average particle diameter of 5.0 μm were obtained. Removal of PSS The obtained particles were immersed in a 5% NaClO aqueous solution (50 mL), subjected to ultrasonic treatment for 1 minute, then allowed to stand at 25°C for 48 hours, and then calcined at 400°C for 2 hours to obtain PSS. Were removed to produce vaterite-type calcium carbonate having an average particle size of 5.0 μm, and this vaterite-type calcium carbonate was used as a carrier for separation according to Example 1.
（実施例２）
炭酸カルシウム粒子の平均粒径が２．５μｍとなるように制御した点以外は、実施例１と同様の手順で実施例２に係る分離用担体を作製した。
(Example 2)
The carrier for separation according to Example 2 was produced in the same procedure as in Example 1 except that the average particle size of the calcium carbonate particles was controlled to be 2.5 μm.
＜炭酸カルシウムの表面におけるポリマーからなる膜の形成＞
（実施例３：融液法による膜の形成）
ポリマーを形成する重合性モノマーとして、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（ＮＩＰＡＡｍ）（０．５０ｇ）を、架橋剤としてＮ，Ｎ’−メチレンビスアクリルアミド（ＢＩＳ）（０．０４４ｇ）を２０ｃｍ３のスクリュー管に入れホットスターラーで６０℃に加熱した。ＮＩＰＡＡｍ、ＢＩＳが完全に溶解した後に、ナノスペースの拡張をした、実施例１の分離用担体である平均粒径２．５μｍの炭酸カルシウムを１．０ｇ加え、６時間撹拌した。その後放冷し、光重合開始剤である２，２’−ジメトキシ−２−フェニルアセトフェノン（ＢＤＫ）（０．０１ｇ）が溶解したヘキサン１５ｃｍ３を加え、撹拌しながらキセノンランプを３時間照射し、光重合を行った。重合後、４０００ｒｐｍで遠心分離を３回行い洗浄し、凍結乾燥により回収し、炭酸カルシウムの表面にＮＩＰＡＡｍのポリマー（以下、「ＰＮＩＰＡＡｍ」と略称する。）からなる膜が形成された、実施例３に係る分離用担体を作製した。
<Formation of polymer film on the surface of calcium carbonate>
(Example 3: Formation of film by melt method)
N-isopropylacrylamide (NIPAAm) (0.50 g) was used as a polymerizable monomer for forming a polymer, and N,N′-methylenebisacrylamide (BIS) (0.044 g) was used as a cross-linking agent in a 20 cm 3 screw tube. It heated at 60 degreeC with the hot stirrer. After NIPAAm and BIS were completely dissolved, 1.0 g of calcium carbonate having an average particle diameter of 2.5 μm, which was a carrier for separation of Example 1 in which nanospaces were expanded, was added and stirred for 6 hours. Then, the mixture was allowed to cool, 15 cm 3 of hexane in which 2,2′-dimethoxy-2-phenylacetophenone (BDK) (0.01 g) as a photopolymerization initiator was dissolved was added, and a xenon lamp was irradiated for 3 hours while stirring. Photopolymerization was performed. After polymerization, centrifugation was performed three times at 4000 rpm, washing was performed, and freeze-drying was performed to collect, and a film made of a polymer of NIPAAm (hereinafter, abbreviated as "PNIPAAm") was formed on the surface of calcium carbonate. Example 3 The carrier for separation according to 1. was prepared.
（実施例４：溶媒揮発法による膜の形成）
ＮＩＰＡＡｍ０．０５ｇ、ＢＩＳ０．０４４１ｇをクロロホルムに溶かした溶液に、実施例１のバテライト型の炭酸カルシウムの粒子を浸漬させた。クロロホルムが全て揮発した後、０．０１ｇのＢＤＫが溶解したヘキサン１５ｃｍ３を加え、撹拌しながらキセノンランプを３時間照射し、光重合を行った。重合後、４０００ｒｐｍで３回遠心分離を行い洗浄し、凍結乾燥により回収し、実施例４に係る分離用担体を作製した。
(Example 4: Formation of film by solvent volatilization method)
The vaterite-type calcium carbonate particles of Example 1 were immersed in a solution prepared by dissolving 0.05 g of NIPAAm and 0.0441 g of BIS in chloroform. After all the chloroform was volatilized, 15 cm 3 of hexane in which 0.01 g of BDK was dissolved was added, and a xenon lamp was irradiated for 3 hours with stirring to perform photopolymerization. After the polymerization, the product was centrifuged at 4000 rpm three times, washed, and freeze-dried to collect the carrier for separation according to Example 4.
（実施例５：溶媒揮発法による膜の形成）
ＮＩＰＡＡｍの量を、０．０２５ｇに変更した点以外は、実施例４と同様の手順で、実施例５に係る分離用担体を作製した。
(Example 5: Formation of film by solvent volatilization method)
A carrier for separation according to Example 5 was produced in the same procedure as in Example 4 except that the amount of NIPAAm was changed to 0.025 g.
＜比表面積、積算細孔容積、平均細孔直径の測定＞
実施例１の平均粒径５μｍの炭酸カルシウム粒子、実施例２の平均粒径２．５μｍの炭酸カルシウム粒子、実施例３の炭酸カルシウム／ＰＮＩＰＡＡｍ粒子について、比表面積、細孔容積、平均細孔直径の測定を測定した。また、参考例１として、シリカ粒子を、参考例２として、ＳｉＯ２／ＰＮＩＰＡＡｍ粒子（ＳｉＯ２粒子の表面にＰＮＩＰＡＡｍの膜が形成）を準備し、これらについても、比表面積、細孔容積、平均細孔直径の測定を測定した。
<Measurement of specific surface area, cumulative pore volume, average pore diameter>
Specific surface area, pore volume, and average pore diameter of calcium carbonate particles having an average particle diameter of 5 μm of Example 1, calcium carbonate particles having an average particle diameter of 2.5 μm of Example 2, and calcium carbonate/PNIPAAm particles of Example 3. Was measured. Further, as Reference Example 1, silica particles were prepared, and as Reference Example 2, SiO 2 /PNIPAAm particles (a film of PNIPAAm was formed on the surface of SiO 2 particles) were prepared. Pore diameter measurements were measured.
比表面積は、ＢＥＴ法により測定し、積算細孔容積は、平均細孔直径（ポアサイズ）ＢＪＨ法により測定した。その結果を以下の表１に示す。 The specific surface area was measured by the BET method, and the cumulative pore volume was measured by the average pore diameter (pore size) BJH method. The results are shown in Table 1 below.
表１に示す結果から、実施例１〜３の分離用担体は、カラムとしての分離能を発揮できるための十分な多孔性を有することがわかった。 From the results shown in Table 1, it was found that the separation carriers of Examples 1 to 3 had sufficient porosity to exhibit the separation ability as a column.
＜カラムの作製＞
（実施例６）
ＰＳＳ除去後の実施例１のバテライト型炭酸カルシウムを、カーボンテトラクロライド／テトラブロモエタン（１：１）（１３ｍＬ）に懸濁させ、ＨＰＬＣポンプ（日立ハイテクノロジーズ社製：Ｌ−６２００ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ Ｐｕｍｐ）を用いてクロロホルム（グラジエント条件：６０ｍｉｎ）、メタノール（グラジエント条件：２０ｍｉｎ）、５０％メタノール．ａｑ（グラジエント条件：２０ｍｉｎ）、メタノール（グラジエント条件：５ｍｉｎ）を移動相としてカラム（φ２．１ｍｍ×１００ｍｍ）に充填（２５ＭＰａ、１０５ｍｉｎ）させることで、実施例１の分離用担体が充填された実施例６に係る順相カラムを作製した。
<Preparation of column>
(Example 6)
Vaterite-type calcium carbonate of Example 1 after PSS removal was suspended in carbon tetrachloride/tetrabromoethane (1:1) (13 mL), and an HPLC pump (Hitachi High-Technologies Corporation: L-6200 Intelligent Pump) was used. Using chloroform (gradient condition: 60 min), methanol (gradient condition: 20 min), 50% methanol. A column (φ2.1 mm×100 mm) was packed (25 MPa, 105 min) with aq (gradient condition: 20 min) and methanol (gradient condition: 5 min) as mobile phases, whereby the separation carrier of Example 1 was packed. A normal phase column according to Example 6 was prepared.
（実施例７）
ＰＮＩＰＡＡｍによる膜形成後の実施例３のバテライト型炭酸カルシウムをメタノール／水（１：１）（１０ｍＬ）に懸濁させ、ＨＰＬＣポンプ（日立ハイテクノロジーズ社製：Ｌ−６２００ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ Ｐｕｍｐ）を用いてメタノール／水（１：１）を移動相としてカラム（φ２．１ｍｍ×１００ｍｍ）に充填（２５ＭＰａ，９０ｍｉｎ）させることで、実施例３の分離用担体が充填された実施例７に係るカラムを作製した。
(Example 7)
The vaterite-type calcium carbonate of Example 3 after film formation by PNIPAAm was suspended in methanol/water (1:1) (10 mL), and methanol was used using an HPLC pump (L-6200 Intelligent Pump, manufactured by Hitachi High-Technologies Corporation). By packing (25 MPa, 90 min) a column (φ2.1 mm×100 mm) with /water (1:1) as a mobile phase, a column according to Example 7 packed with the separation carrier of Example 3 was produced. ..
（実施例８）
実施例３のバテライト型炭酸カルシウムの代わりに実施例４のバテライト型炭酸カルシウムを用いた点以外は、実施例７と同様の手順により実施例８に係るカラムを作製した。
(Example 8)
A column according to Example 8 was produced in the same procedure as in Example 7, except that the vaterite-type calcium carbonate of Example 3 was used in place of the vaterite-type calcium carbonate of Example 4.
（実施例９）
実施例４のバテライト型炭酸カルシウムの代わりに実施例５のバテライト型炭酸カルシウムを用いた点以外は、実施例８と同様の手順により実施例９に係るカラムを作製した。
(Example 9)
A column according to Example 9 was produced by the same procedure as in Example 8 except that the vaterite type calcium carbonate of Example 4 was used in place of the vaterite type calcium carbonate of Example 4.
＜試験１＞
実施例６の順相カラムを用いて、液体クロマトグラフィーのカラムとして機能するかを試験するために、以下の測定試料・分析条件で、液体クロマトグラフィーによる測定試験を行った。
<Test 1>
In order to test whether or not the normal phase column of Example 6 functions as a column for liquid chromatography, a measurement test by liquid chromatography was performed under the following measurement sample and analysis conditions.
（測定試料）
テストステロンの０．１ｍｇ／ｍＬ酢酸エチル／ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）（９／１）溶液をフィルター（０．２μｍ）に通したものを測定試料とした。
(Measurement sample)
A 0.1 mg/mL ethyl acetate/THF (tetrahydrofuran) (9/1) solution of testosterone passed through a filter (0.2 μm) was used as a measurement sample.
（分析条件）
移動相；ヘキサン、酢酸エチル
流速；０．５ｍＬ／ｍｉｎ
温度；２５℃
検出波長；２５４ｎｍ
カラム；炭酸カルシウム・カラム（実施例６のカラム）（φ２．１ ｍｍ×１００ ｍｍ）
(Analysis conditions)
Mobile phase: Hexane, ethyl acetate Flow rate: 0.5 mL/min
Temperature; 25 ℃
Detection wavelength: 254 nm
Column: calcium carbonate column (column of Example 6) (φ2.1 mm×100 mm)
移動相であるヘキサンと酢酸エチルの溶媒比については、５０：５０、６０：４０、７０：３０と変化させて分析を行った。その結果を、図１に示す。図１に示すように、移動相の極性が高くなること（酢酸エチルの量の割合が多いほど）で保持時間が短くなった。このことから、バテライト型炭酸カルシウム粒子を充填したカラムは、順相カラムとして機能することがわかった。また、シャープなピーク形状が得られたことから、実施例１の平均粒径５μmのバテライト型炭酸カルシウムからなる分離用担体は、液体クロマトグラフィー用のカラムに充填される分離用担体として十分に使用可能なことがわかった。 The solvent ratios of hexane and ethyl acetate, which are mobile phases, were changed to 50:50, 60:40, and 70:30 for analysis. The result is shown in FIG. As shown in FIG. 1, the retention time became shorter due to the higher polarity of the mobile phase (the higher the ratio of the amount of ethyl acetate). From this, it was found that the column packed with vaterite-type calcium carbonate particles functions as a normal phase column. Further, since a sharp peak shape was obtained, the separation carrier composed of vaterite-type calcium carbonate having an average particle size of 5 μm of Example 1 was sufficiently used as a separation carrier packed in a column for liquid chromatography. I found it possible.
＜試験２＞
カラムの耐久性を試験するために、実施例６の順相カラムを用いて、作製後の初回の測定から、５か月後に２５回の測定試験を行い、保持時間の変化を評価した。測定試料・分析条件は、上記の試験１と同様のものを用いた。ただし、移動相のヘキサン、酢酸エチルは、ヘキサン：酢酸エチル＝６０：４０の比とした。その結果を、図２に示す。
<Test 2>
In order to test the durability of the column, the normal phase column of Example 6 was used to perform a measurement test 25 times 5 months after the first measurement after production to evaluate the change in retention time. The same measurement sample and analysis conditions as in Test 1 above were used. However, the ratio of hexane and ethyl acetate in the mobile phase was hexane:ethyl acetate=60:40. The result is shown in FIG.
図２に示すように、５か月後も使用可能であり繰り返し使用しても保持時間が変化しなかったことから、２５回の測定でほぼ一定の保持時間であることから、カラムの耐久性が十分であることがわかった。 As shown in Fig. 2, it can be used even after 5 months, and the retention time does not change even after repeated use. Therefore, the retention time is almost constant after 25 measurements. Was found to be sufficient.
＜ＳＥＭ画像観察＞
実施例３及び４に係る分離用担体（炭酸カルシウム／ＰＮＩＰＡＡｍ）について、ＳＥＭ（走査型電子顕微鏡）を用いて画像観察を行った。まず、それぞれの分離用担体を導電性テープでアルミニウムの試料台に貼り付け、オスミウム真空蒸着を１０秒行いコーティングをした。その後、ＳＥＭを用いて結晶形態の観察を行った。実施例３の分離用担体についてのＳＥＭ画像を図３に、実施例４の分離用担体についてのＳＥＭ画像を図４に示す。
<SEM image observation>
The separation carriers (calcium carbonate/PNIPAAm) according to Examples 3 and 4 were subjected to image observation using an SEM (scanning electron microscope). First, each separation carrier was attached to an aluminum sample stage with a conductive tape, and osmium vacuum vapor deposition was performed for 10 seconds to perform coating. Then, the crystal morphology was observed using SEM. An SEM image of the separation carrier of Example 3 is shown in FIG. 3, and an SEM image of the separation carrier of Example 4 is shown in FIG.
図３に示すように、融液法により作製した実施例３の分離用担体は、粒子周辺に余分な有機物が存在することがわかった。一方、所定の溶媒揮発法により作製した実施例４の分離用担体は、粒子周辺に余分な有機物が存在していなかった。この結果から、実施例４の所定の溶媒分離法により作製した分離用担体の方が、実施例３の融液法により作製された分離用担体より分散性が非常に良く、粒子表面に均一にＰＮＩＰＡＡｍの膜が形成されることがわかった。 As shown in FIG. 3, in the carrier for separation of Example 3 produced by the melt method, it was found that extra organic matter was present around the particles. On the other hand, in the carrier for separation of Example 4 produced by the predetermined solvent volatilization method, no extra organic matter was present around the particles. From these results, the separation carrier prepared by the predetermined solvent separation method of Example 4 has much better dispersibility than the separation carrier prepared by the melt method of Example 3, and the particles are uniformly dispersed on the particle surface. It was found that a film of PNIPAAm was formed.
＜試験３＞
実施例８、実施例９のカラムを用いて、液体クロマトグラフィーによる測定試験を行った。それぞれ、以下の測定試料・分析条件で、条件を行った。
<Test 3>
Using the columns of Example 8 and Example 9, a measurement test by liquid chromatography was performed. The conditions were performed under the following measurement samples and analysis conditions, respectively.
（実施例８についての測定試料）
テストステロンの０．１ｍｇ／ｍＬ Ｈ２Ｏ／ＴＨＦ（９／１）溶液をフィルター（０．２μｍ）に通したものを測定試料とした。
(Measurement sample for Example 8)
A test sample was prepared by passing a 0.1 mg/mL H 2 O/THF (9/1) solution of testosterone through a filter (0.2 μm).
（実施例８についての分析条件）
移動相；水
流速；０．５ｍＬ／ｍｉｎ
温度；２５℃、３５℃、４０℃
検出波長；２５４ｎｍ
カラム；炭酸カルシウム／ＰＮＩＰＡＡｍ・カラム（実施例８のカラム）（φ２．１ｍｍ×１００ｍｍ）
(Analysis conditions for Example 8)
Mobile phase: Water Flow rate: 0.5 mL/min
Temperature: 25°C, 35°C, 40°C
Detection wavelength: 254 nm
Column: calcium carbonate/PNIPAAm column (column of Example 8) (φ2.1 mm×100 mm)
（実施例９についての測定試料）
実施例８と同様の測定試料を用いた。
(Measurement sample for Example 9)
The same measurement sample as in Example 8 was used.
（実施例９についての分析条件）
移動相；水／メタノール（９５：５）
流速；０．２ｍＬ／ｍｉｎ
温度；３０℃、４０℃
検出波長；２５４ｎｍ
カラム；炭酸カルシウム／ＰＮＩＰＡＡｍ・カラム（実施例９のカラム）（φ２．１ｍｍ×１００ｍｍ）
(Analysis conditions for Example 9)
Mobile phase: water/methanol (95:5)
Flow rate; 0.2 mL/min
Temperature: 30℃, 40℃
Detection wavelength: 254 nm
Column: calcium carbonate/PNIPAAm column (column of Example 9) (φ2.1 mm×100 mm)
実施例８についての分析結果を、図５に示す。実施例９についての分析結果を、図６に示す。 The analysis result of Example 8 is shown in FIG. The analysis result of Example 9 is shown in FIG.
ＮＩＰＡＡｍのモノマー量が０．０２５ｇ（炭酸カルシウムの質量に対して０．００２５）の実施例９のクロマトグラムはピークは、ＮＩＰＡＡｍのモノマー量が０．０５ｇ（炭酸カルシウムの質量に対して０．０５）である実施例８のものよりもシャープなピーク形状が得られた。このことは、ＮＩＰＡＡｍの量を減らすことで、炭酸カルシウム粒子の表面に薄いＰＮＩＰＡＡｍの膜を形成でき、サンプルの膜の奥への潜り込みが抑えられたためだと考えられる。この結果から、ＰＮＩＰＡＡｍの膜が薄い方が、シャープなピーク形状を得られやすいことがわかった。 The chromatogram of Example 9 in which the amount of NIPAAm monomer is 0.025 g (0.0025 relative to the mass of calcium carbonate) shows a peak in which the amount of NIPAAm monomer is 0.05 g (0.05 relative to the mass of calcium carbonate). ), a sharper peak shape was obtained. It is considered that this is because by reducing the amount of NIPAAm, a thin PNIPAAm film could be formed on the surface of the calcium carbonate particles, and the submersion of the sample in the back of the film was suppressed. From these results, it was found that the thinner the PNIPAAm film, the easier it is to obtain a sharp peak shape.
＜試験４＞
作製した炭酸カルシウム／ＰＮＩＰＡＡｍのカラム（実施例４）について、塩基性条件下での溶出挙動を確認するために、移動相をｐＨ８に設定し、塩基性化合物であるアミトリプチリンを測定試料として、以下の条件で分析を行った。
<Test 4>
Regarding the produced calcium carbonate/PNIPAAm column (Example 4), in order to confirm the elution behavior under basic conditions, the mobile phase was set to pH 8, and the basic compound amitriptyline was used as a measurement sample, as shown below. The analysis was performed under the conditions.
（測定試料）
アミトリプチリンの０．１ｍｇ／ｍＬＨ２Ｏ／ＴＨＦ（９／１）溶液をフィルター（０．２μｍ）に通したものを測定試料とした。
(Measurement sample)
A 0.1 mg/mL H 2 O/THF (9/1) solution of amitriptyline passed through a filter (0.2 μm) was used as a measurement sample.
（分析条件）
移動相；１０ｍＭ酢酸緩衝液 ｐＨ８．０
流速；０．２ｍＬ／ｍｉｎ
温度；３０℃
検出波長；２５４ｎｍ
カラム；炭酸カルシウム／ＰＮＩＰＡＡｍ・カラム（実施例４のカラム）（φ２．１ｍｍ×１００ｍｍ）
(Analysis conditions)
Mobile phase: 10 mM acetate buffer pH 8.0
Flow rate; 0.2 mL/min
Temperature; 30°C
Detection wavelength: 254 nm
Column; calcium carbonate/PNIPAAm column (column of Example 4) (φ2.1 mm×100 mm)
分析結果を、図７に示す。 The analysis result is shown in FIG. 7.
図７に示すように、塩基性条件下においてピークが確認されたことから、塩基性条件下における分析に使用できることが確認された。また、図には示さないが、温度を４０℃に変更した以外は上記と同じ条件で分析を行ったところ、ピークの保持時間が長くなったことが確認された。 As shown in FIG. 7, a peak was confirmed under basic conditions, which confirmed that it could be used for analysis under basic conditions. Although not shown in the figure, when the analysis was performed under the same conditions as above except that the temperature was changed to 40° C., it was confirmed that the retention time of the peak was prolonged.
Claims (10)
前記炭酸カルシウム粒子の表面に形成されたポリマーからなる膜と、を含有し、
前記炭酸カルシウム粒子と前記ポリマーとの質量比が１：０．０１〜１：０．３である、
分離用担体。 Calcium carbonate particles having an average particle size of 0.15 μm or more and 95 μm or less ,
A film made of a polymer formed on the surface of the calcium carbonate particles,
The mass ratio of the calcium carbonate particles and the polymer is 1:0.01 to 1:0.3.
Separation carrier.
重合性モノマーと平均粒径が０．１５μｍ以上９５μｍ以下である炭酸カルシウム粒子とを含有する第１の溶媒を調製する工程と、
前記第１の溶媒を揮発させ、前記炭酸カルシウム粒子と前記重合性モノマーとの混合物の塊を得る工程と、
前記混合物の塊を含有する第２の溶媒を調製する工程と、
前記第２の溶媒中の前記重合性モノマーを重合させる重合工程と、を有し、
前記第１の溶媒は、前記重合性モノマーに対する良溶媒であり、かつ、前記炭酸カルシウム粒子に対する貧溶媒であり、
前記第２の溶媒は、前記重合性モノマー及び前記炭酸カルシウム粒子に対する貧溶媒であり、
前記炭酸カルシウム粒子と前記ポリマーとの質量比が１：０．０１〜１：０．３である、
方法。 A method for producing a carrier for separation, which comprises calcium carbonate particles having an average particle diameter of 0.15 μm or more and 95 μm or less and a film made of a polymer formed on the surface of the calcium carbonate particles,
A step of preparing a first solvent containing a polymerizable monomer and calcium carbonate particles having an average particle size of 0.15 μm or more and 95 μm or less,
Volatilizing the first solvent to obtain a mass of a mixture of the calcium carbonate particles and the polymerizable monomer,
Preparing a second solvent containing a mass of said mixture;
A polymerization step of polymerizing the polymerizable monomer in the second solvent,
The first solvent is a good solvent for the polymerizable monomer, and a poor solvent for the calcium carbonate particles,
The second solvent, Ri poor solvent der for said polymerizable monomer and said calcium carbonate particles,
The mass ratio of the calcium carbonate particles and the polymer is 1:0.01 to 1:0.3.
Method.
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