JP6731402B2 - 液体クロマトグラフィー用充填剤、液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法、サイズ排除液体クロマトグラフィー - Google Patents

液体クロマトグラフィー用充填剤、液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法、サイズ排除液体クロマトグラフィー Download PDF

Info

Publication number
JP6731402B2
JP6731402B2 JP2017505286A JP2017505286A JP6731402B2 JP 6731402 B2 JP6731402 B2 JP 6731402B2 JP 2017505286 A JP2017505286 A JP 2017505286A JP 2017505286 A JP2017505286 A JP 2017505286A JP 6731402 B2 JP6731402 B2 JP 6731402B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
meth
liquid chromatography
group
gel
packing material
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2017505286A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2016143673A1 (ja
Inventor
松井　徹
徹 松井
順也 加藤
順也 加藤
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Showa Denko KK
Original Assignee
Showa Denko KK
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Showa Denko KK filed Critical Showa Denko KK
Publication of JPWO2016143673A1 publication Critical patent/JPWO2016143673A1/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6731402B2 publication Critical patent/JP6731402B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
    • B01J20/267—Cross-linked polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/34—Size selective separation, e.g. size exclusion chromatography, gel filtration, permeation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/282—Porous sorbents
    • B01J20/285—Porous sorbents based on polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/291—Gel sorbents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/74—Optical detectors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)

Description

本発明は、液体クロマトグラフィー用充填剤に関する。
本願は、２０１５年３月１０日に、日本に出願された特願２０１５−０４６６５０号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
光散乱検出器は、ポリマー溶液にレーザー光を照射し、コロイド粒子によるレイリー散乱光を測定する装置である。この装置は、散乱光の強度から、試料の重量平均絶対分子量や回転半径を出力することができる。光散乱現象を利用した測定方法は、高分子のキャラクタリゼーション、すなわち分子量の決定や形状の検討に広く活用されてきた。評価対象は合成高分子であり、その中でも有機溶媒に可溶なものに重点が置かれてきた。その理由は、高分子が有機溶媒に溶けた高分子溶液の場合には、光散乱測定の障害となる不純物粒子や“ごみ”が存在しても、それらの除去が容易であったことに起因している。なお“ごみ”が存在すると、クロマトグラムのベースラインが不安定になり、スパイクノイズが発生することがあり好ましくない。
前述のように光散乱クロマトグラムのベースラインが不安定になったり、スパイクノイズが発生したりする原因としては、有機溶媒内にダストやイオン性物質が存在すること、および、そのダストやイオン性物質がカラム内の充填剤に吸着され、わずかな圧力変動により脱離することが理由として考えられる。スパイクノイズを抑える方法として、例えば、特許文献１には、微粒子であるダストをろ過、及び除去できるフィルターを使用する溶媒精製法が記載されている。
このように、有機溶媒を使用した分析においてはゲルパーミエーションクロマトグラフィー（以降、ＧＰＣ（Gel permeation chromatography）とも称する。）が用いられており、前述のように、溶媒を精製することによってスパイクノイズを抑えることに成功している。
一方で、水系溶媒に溶解したポリマーを分析する場合には、ゲルろ過クロマトグラフィー（以降、ＧＦＣ（Gel filtration chromatography）とも称する。）が用いられる。なおＧＦＣを用いて光散乱検出器で高分子のキャラクタリゼーションを行う場合、ＧＰＣの場合よりもスパイクノイズが発生しやすい傾向がある。
前記スパイクノイズが発生する原因としては、ＧＦＣを行う際に、液体クロマトグラフィー用の充填剤に含まれている不純物が残存していることが理由として考えられる。液体クロマトグラフィー用充填剤としては、ゲル化したポリマー基材が用いられる。しかしながら、前記ゲル化が完全に進行しなかった場合、未反応オリゴマーがゲル内に留まる。この未反応オリゴマーが溶離液によって少しずつ溶出し、それが光散乱検出器で分析する際のノイズの要因となる、と想定できる。
具体的には、従来の液体クロマトグラフィー用充填剤を使用したＧＦＣにおいて、溶出したろ液を回収し、赤外分光光度計で分析を行った際に、メタクリロイルオキシ基を有する比較的低分子量のオリゴマーが検出されることがあった。
特開２００２−１８１８００号公報
本発明は、サイズ排除液体クロマトグラフィー（SEC: Size Exclusion Chromatography）において、光散乱用検出器を使用する際、スパイクノイズが発生しにくい液体クロマトグラフィー用充填剤を提供すること、およびそれを用いた分析方法を提供することを目的とする。
本発明者は、液体クロマトグラフィー用充填剤として架橋度を上げたゲルを使用することによって、スパイクノイズの発生を著しく減少させることができ、本発明を完成するに至った。本発明は、例えば、以下の事項を含む。
［１］（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体を４０質量％以上含む単量体を重合して得られるゲルからなる液体クロマトグラフィー用充填剤。
［２］前記（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体が、（ポリ）アルキレングリコールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物、グリセリンと（メタ）アクリル酸とのエステル化物、およびペンタエリスリトールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物からなる群から選ばれる少なくとも１種である、［１］に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
［３］前記（ポリ）アルキレングリコールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物が、下記一般式（１）で表される化合物である、［２］に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤；
Figure 0006731402
 （式中、Ｒ１， Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子またはメチル基を表し、ｎは１〜１４の整数を表し、Ｘは炭素数２〜４のオキシアルキレン基を表す。）。
［４］前記グリセリンと（メタ）アクリル酸とのエステル化物が、下記一般式（２）で表される化合物である、［２］に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤；
Figure 0006731402
 （式中Ｒ３、Ｒ４ 、Ｒ５はそれぞれ独立に（メタ）アクリロイルオキシ基または水酸基を表し、Ｒ３、Ｒ４ 、Ｒ５のうちの少なくとも２つは（メタ）アクリロイルオキシ基である。）。
［５］前記ペンタエリスリトールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物が、下記一般式（３）で表される化合物である、［２］に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤；
Figure 0006731402
 （式中、Ｒ６は（メタ）アクリロイルオキシ基または水酸基を表し、Ｒ７は水素原子またはメチル基を表す）。
［６］前記単量体が、（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体に加えて、さらに分子内に１つのエチレン性二重結合を有する化合物である非架橋性単量体を含む、［１］〜［５］のいずれか１項に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
［７］前記非架橋性単量体が、下記一般式（４）で表される化合物である、［６］に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
Figure 0006731402
 （式中、Ｒ８は水素原子またはメチル基を表し、Ｙはオキシアルキレン基を有する１価の有機基またはグリシジル基を表す。）
［８］水系溶媒に溶解する試料を、液体クロマトグラフィー用充填剤を充填したカラムに導入し、光散乱検出器を用いて検出を行う、サイズ排除液体クロマトグラフィーにおいて、前記充填剤が、架橋性単量体を４０質量％以上含む単量体を重合して得られたゲルからなることを特徴とするサイズ排除液体クロマトグラフィー。
［９］前記ゲルが多孔性高分子ゲルであり、充填剤の体積平均粒径が１〜５００ミクロンである、［１］〜［７］のいずれか１項に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
［１０］前記ゲルが、前記（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体に起因するモノマー単位を４０質量％以上含む、高分子ゲルである、［１］〜［７］及び［９］のいずれか１項に記載の、液体クロマトグラフィー用充填剤。
［１１］前記架橋性単量体が分子内に２つ以上のエチレン性二重結合を有する化合物であり、前記ゲルが親水性ゲルであり、前記架橋性単量体が５０質量％以上である、［１］〜［７］及び［９］〜［１０］のいずれか１項に記載の、液体クロマトグラフィー用充填剤。
［１２］架橋性単量体が、ペンタエリスリトールトリ（メタ）アクリレート、ペンタエリスリトールテトラ（メタ）アクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、グリセリンジメタクリレート、ポリエチレングリコール＃２００ジアクリレート、及び、ポリエチレングリコール＃２００ジメタクリレートからなる群の少なくとも一つを含む、［１］〜［７］及び［９］〜［１１］のいずれか１項に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
［１３］ ［１］〜［７］及び［９］〜［１２］のいずれか１項に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤、前記充填剤を含むカラム、前記カラムに送液するポンプ、カラムから溶出した成分を分析する検出器、及び検出器で検出されたデーターを処理する装置を含む、液体クロマトグラフィー装置。
本発明の液体クロマトグラフィー用充填剤を使用することによって、プルランや、ポリエチレングリコール（以降、ＰＥＧとも称する。）などの水溶性高分子を試料とした分析においても、スパイクノイズの影響をほとんど受けることがなく、光散乱検出器を使用したサイズ排除液体クロマトグラフィーにおいて高いＳ／Ｎ比（信号／ノイズ）で測定を行うことができる。
本発明の液体クロマトグラフィー用充填剤を使用した分析を行う際の装置の構成の一例である。 比較例１のクロマトグラムである。 実施例２のクロマトグラムである。
以下に本発明の好ましい例を説明するが、本発明はこれらの例のみに限定されることは無い。本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、構成の付加、省略、置換、組み合わせ、及び、その他の変更が可能である。
本発明は、液体クロマトグラフィー用充填剤に関する。好ましくは、光散乱検出器用のサイズ排除液体クロマトグラフィーに適した、液体クロマトグラフィー用充填剤に関する。より好ましくは、光散乱検出器を用いる分析において、ベースラインが安定し、スパイクノイズが少ない光散乱クロマトグラムを得ることができる水系のゲル浸透クロマトグラフィー用充填剤に関する。
本発明の液体クロマトグラフィー用充填剤は、（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体を４０質量％以上含む単量体を重合して得られるゲル（高分子ゲル）からなる液体クロマトグラフィー用充填剤である。すなわち、重合体である前記ゲルは、その４０質量％以上が（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体に起因する。
本願において、（メタ）アクリロイルオキシ基とは、アクリロイルオキシ基およびメタクリロイルオキシ基から選ばれる少なくとも１つを意味する。（メタ）アクリロイル基とは、アクリロイル基およびメタクリロイル基から選ばれる少なくとも１つを意味する。（メタ）アクリル酸とは、アクリル酸およびメタクリル酸から選ばれる少なくとも１つを意味する。（メタ）アクリレートとは、アクリレートおよびメタクリレートから選ばれる少なくとも１つを意味する。また（ポリ）アルキレングリコールとは、アルキレングリコールまたはポリアルキレングリコールを意味する。また、架橋性単量体とは、分子内に２つ以上のエチレン性二重結合を有する化合物であり、非架橋性単量体とは、分子内に１つのエチレン性二重結合を有する化合物を意味する。
（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体としては、（ポリ）アルキレングリコールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物、グリセリンと（メタ）アクリル酸とのエステル化物、およびペンタエリスリトールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物からなる群から選ばれる少なくとも1種であることが好ましい。
（ポリ）アルキレングリコールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物としては、下記一般式（１）で表される化合物を好ましく例示することができる。
Figure 0006731402
（式中、Ｒ１、Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子またはメチル基を表し、ｎは１〜１４の整数を表し、Ｘは炭素数２〜４のオキシアルキレン基を表す。）。
（ポリ）アルキレングリコールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物の具体例としては、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコール＃２００ジ（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコール＃４００ジ（メタ）アクリレート、ポリエチレングリコール＃６００ジ（メタ）アクリレート、ポリプロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、ネオペンチルグリコールジ（メタ）アクリレート、１，９−ノナンジオールジ（メタ）アクリレート、トリシクロデカンジメチロールジ（メタ）アクリレート、トリメチロールプロパントリ（メタ）アクリレートなどを挙げることができ、単独でも、あるいはこれらを組み合わせて使用することもできる。
それらの中でも、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、及びポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレートが、他のエチレン性二重結合含有化合物と共重合しやすい点で好ましい。
グリセリンと（メタ）アクリル酸とのエステル化物としては、下記一般式（２）で表される化合物を好ましく例示することができる。
Figure 0006731402
 （式中Ｒ３、Ｒ４ 、Ｒ５はそれぞれ独立に（メタ）アクリロイルオキシ基または水酸基を表し、Ｒ３、Ｒ４ 、Ｒ５のうちの少なくとも２つは（メタ）アクリロイルオキシ基である。）。
グリセリンと（メタ）アクリル酸とのエステル化物の具体例としては、グリセリンジ（メタ）アクリレート、グリセリントリ（メタ）アクリレート、グリセリンメタクリレートアクリレートを挙げることができ、単独でも、あるいはこれらを組み合わせて使用することもできる。
それらの中でも、グリセリンジ（メタ）アクリレートが他のエチレン性二重結合含有化合物と共重合しやすい点で好ましい。
ペンタエリスリトールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物としては、下記一般式（３）で表される化合物を好ましく例示することができる。
Figure 0006731402

（式中、Ｒ６は（メタ）アクリロイルオキシ基または水酸基を表し、Ｒ７は水素原子またはメチル基を表す）。
ペンタエリスリトールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物の具体例としては、ペンタエリスリトールトリ（メタ）アクリレート、ペンタエリスリトールテトラ（メタ）アクリレートなどがあり、単独でも、あるいはこれらを組み合わせて使用することもできる。
それらの中でも、ペンタエリスリトールトリ（メタ）アクリレートが他のエチレン性二重結合含有化合物と共重合しやすい点と親水性を付与しやすい点で好ましい。
（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体を４０質量％以上含む単量体を重合してゲルを得るには、例えば、全単量体のうち（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体を４０質量％以上配合した単量体を用意し、これを後述の条件で重合または共重合させて、重合体や共重合体を得ることによって、製造することができる。得られた重合体や共重合体は網目構造や三次元網目構造を有する事が好ましい。本発明においては、ゲルを得る際の原料となる全単量体に対する、（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体の質量％を、架橋度と称する。
本発明において架橋度は４０質量％以上であり、これによって光散乱検出器での高いＳ／Ｎ比を実現することができる。架橋度は４５質量％以上が好ましく、５０質量％以上がより好ましく、６０質量％以上がさらに好ましい。架橋度が、７５質量％以上や、９０質量％以上であることも好ましい。Ｓ／Ｎ比には、ゲルの製造の際に残存する未反応のオリゴマーの存在が影響していると考えられ、架橋度を上げることによって、未反応のオリゴマーの存在量が低減しＳ／Ｎ比が高くなると考えられる。架橋度の上限は任意に選択ができ、１００質量％以下や、９５質量％以下や、９０質量％以下や、８０質量％以下など、必要に応じて選択できる。本発明の効果が得られる限り、任意に選択することが可能である。
なお得られた重合体や共重合体（高分子ゲル）は、架橋度に応じて、例えば架橋度が４５質量％以上の時は、（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体に起因するモノマー単位を４０質量％以上好ましく含む重合体となる。
前記のゲルの製造に際して、Ｓ／Ｎ比が低下しない範囲で、（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体の他に、（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体と共重合可能な非架橋性単量体を使用して、共重合することができる。
前記非架橋性単量体としては、分子内に１つのビニル基を有する化合物、分子内に１つの（メタ）アクリロイル基を有する化合物、及び分子内に１つの（メタ）アクリロイルオキシ基を有する化合物等を挙げることができる。
Figure 0006731402
 （式中、Ｒ８は水素原子またはメチル基を表し、Ｙはオキシアルキレン基を有する１価の有機基またはグリシジル基を表す。）
具体的には、上記の一般式（４）で表されるような化合物や、その他の化合物、例えばグリシジル（メタ）アクリレート、４−ヒドロキシブチル（メタ）アクリレート、メトキシポリエチレングリコール＃４００アクリレート、４−ヒドロキシブチル（メタ）アクリレートグリシジルエーテルの他に、スチレン、スチレンスルホン酸（ソーダ）、酢酸ビニル、（メタ）アクリル酸（ソーダ）、（メタ）アクリル酸アルキルエステル、（メタ）アクリル酸ベンジル、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−メチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド、アクリルアミドプロパンスルホン酸（ソーダ）、アクリロイルモルホリン、Ｎ−ビニルピロリドン、Ｎ−ビニルホルムアミド、Ｎ−ビニルアセトアミド、Ｎ−ビニルカルバゾール、アクリロニトリル、メチルビニルエーテル、エチルビニルエーテル、ブチルビニルエーテル、シクロヘキシルビニルエーテル、２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸、無水マレイン酸、マレイミド、Ｎ−アルキルマレイミド、Ｎ−フェニルマレイミドなどがあり、１種または２種以上用いることができる。これらのうち、水酸基を生成してゲルの親水性を向上できる点で、グリシジル（メタ）アクリレートが好ましい。非架橋性単量体の量は、例えば０以上６０質量％未満の範囲から選ぶことができ、０〜５０質量％や、１０〜５０質量％や、２０〜４５質量％など、任意の量で使用することができる。本発明の高分子ゲル中の非架橋性単量体に起因するモノマー単位の量も、例えば０以上６０％未満の範囲から好ましく選択することができ、必要に応じて、０〜５０％や、１０〜５０％や、２０〜４５％など、好ましい範囲を選択できる。
前記のゲルは多孔性であることが好ましい。多孔性を得る為に、重合の際に上記の単量体に希釈剤を多孔形成剤として配合することが好ましい。
希釈剤としては、原料単量体を溶解でき、反応条件下で原料単量体と均一に混合可能であって、一方で、前記単量体から形成された重合体を溶解できないものであり、重合反応には不活性な有機溶媒が使用できる。このような有機溶媒としては、モノマー類の種類により異なり、任意に選択できるが、例えばトルエン、キシレン、ジエチルベンゼン、ドデシルベンゼンのような芳香族系炭化水素類；ヘキサン、ヘプタン、オクタン、デカンのような飽和炭化水素類；イソアミルアルコール、ヘキシルアルコール、オクチルアルコールのようなアルコール類；ジクロロメタン、ジクロロエタン、トリクロロエタンのような脂肪族ハロゲン化炭化水素類；酢酸エチル、酢酸ブチル、フタル酸ジメチル、フタル酸ジエチルのような脂肪族あるいは芳香族エステルなどを用いることができる。希釈剤の配合量は、モノマー類の種類、目的とする多孔性架橋重合体の細孔サイズ、及びその密度などにより変わり一概に決定することはできないが、必要に応じて選択できる。例えば、通常は原料単量体１００質量部に対し、５０〜２００質量部程度混合して重合することが好ましい。
本発明のゲルは、それ自体公知の一般的な方法、すなわち、例えば、重合開始剤の存在下で、溶液重合法や懸濁重合法で得ることができる。なお、前記重合体や共重合体が水などの溶媒を含む状態のゲルを得る事もできるが、溶媒を除いて乾燥されたゲルとしても良い。重合開始剤はラジカル発生源になるものであればいずれでもよい。例えば、過酸化ベンゾイル、過酸化アセチル、過酸化ラウロイル、ｔ−ブチルハイドロパーオキサイド、クメンハイドロパーオキサイド、イソブチリルパーオキサイド、ジクミルパーオキサイド、ｔ−ブチルパーオキシベンゾエート、ｔ−ブチルパーオキシイソプロピルカーボネート、過硫酸アンモニウム、過硫酸カリウム、アゾビスイソブチロニトリル、アゾビス−２−４−ジメチルバレロニトリル、アゾビスシクロヘキサンカルボニトリル、アゾビス−２−アミジノプロパンジハイドロクロリド、アゾビス〔２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン〕ジハイドロクロリド、アゾビス〔２−メチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）プロピオナミド〕、光ラジカル重合開始剤としては、２，４−ジエチルチオキサントン、ベンゾフェノン、４−ジメチルアミノイソアミルベンゾエート、４−ジメチルアミノエチルベンゾエート、などがある。これらの添加量は任意の量で使用でき、例えば、全単量体１００質量部に対して通常０．０１〜３０質量部、好ましくは０．０５〜２０質量部で使用される。
溶液重合においては、例えば、（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体、必要に応じて非架橋性単量体、及び重合開始剤を配合した水溶液を、反応容器に取り、容器内を窒素置換し、例えば４０〜１００℃の温度で重合させることができる。反応後、含水状ゲルが得られる。
また、懸濁重合では、例えば、撹拌機のついた反応容器で（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体、必要に応じて非架橋性単量体、希釈剤及び重合開始剤を配合した溶液を、分散安定剤を溶解した水溶液に分散させて、所定の粒径になった後、窒素置換し、４０℃〜１００℃で重合させることができる。ここでは、粒子状の含水ゲルが得られる。また、共沸脱水などで脱水すれば粉末状のゲルが得られる。この場合に、分散安定剤として、ゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリビニルアルコールのケン化物、ヒドロキシエチルセルロースのような水溶性高分子化合物、アニオン、カチオン、非イオン性の各種界面活性剤、炭酸カルシウム、りん酸カルシウムのような難水溶性無機塩を用いることができる。これら分散安定剤と共に、単量体の水への溶解を抑制するために、塩析剤として塩化ナトリウム、塩化カルシウム、硫酸カリウムのような水溶性無機塩を併用することができる。得られた粒子状のゲルは、水または熱水で、更に必要に応じて有機溶媒などで洗浄し、ゲルに付着している分散安定剤、さらにはゲル内に存在している希釈剤及び未反応モノマー類などを除去する。更に必要に応じて、粒子状のゲルを分級することにより、粒子径を揃えることができる。体積平均粒径は任意で選択することができ、通常は１〜５００ミクロン、好ましくは２〜２００ミクロンである。必要に応じて体積平均粒径の好ましい範囲は選択することができ、例えば、１〜１００ミクロンや、１〜５０ミクロンや、あるいは１〜２０ミクロンなど、任意に好ましい範囲を選択してよい。
本発明における上記の体積平均粒径は、コールターカウンター法を用いて、次のように測定できる。すなわち、測定装置としてＭｕｌｔｉｓｉｚｅｒ ４（ベックマン・コールター社製）を用い、得られたポリマー充填剤０．２ｇにアイソトン（希釈液）２５ｍＬを加え、超音波を３分間当てて分散させた後、約１０００個の測定個数にて体積平均粒径を測定する。体積平均粒径を好ましい範囲とするには、風力分級、ふるい分けによる分級、沈殿を利用した分級等で、前記粒径を制御できる。
このようにして得られた多孔性のゲルは、親水性であることが好ましく、水酸基等を有することが好ましい。したがって、ゲルを製造する際の（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体が、水酸基等の親水基を有していない場合には、グリシジル基を有する非架橋性単量体との共重合によってゲルを製造し、ゲルにエポキシ基を付与することが好ましい。その場合、ゲルが有するエポキシ基とエチレングリコールなどのポリオールとを、好ましくは三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体などの触媒の存在下で反応させることで、エポキシ基が開環して水酸基が生成し親水性を付与できる。さらにこの生成した水酸基に、エポキシ化合物、好ましくはグリシドールを反応させて、水酸基を増やすことが好ましい。それによって、該粒子状ゲルの外表面がアルコール性水酸基で覆われ、一方で、粒子状ゲルの細孔内は疎水性である、２種類の性質を併せ持つ構造の多孔性ゲルとなる。これにより外表面の親水性が高まり、タンパク質などが該ゲルに吸着したり保持したりすることを防止できる。
ゲルが有する水酸基と、エポキシ化合物特にグリシドールとの反応は、該ゲルとグリシドールを分散混合することによって行うことができ、この反応によってゲルの水酸基を増やすことができる。分散混合の方法としては、グリシドールの単独溶液、あるいはグリシドールと相溶性のある有機溶媒に溶解したグリシドール溶液に該ゲルを分散混合する方法により、またはグリシドールに相溶性ある有機溶媒に該ゲルを分散混合した中にグリシドールを添加する方法などにより行うことができる。グリシドールを添加する方法は特に限定されず、例えば、一括して添加する方法、数回に分割して添加する方法、滴下して添加する方法、更には他の有機溶媒に溶解したものを一括して添加する方法、またはこれを数回に分けて添加する方法など、いずれの方法であってもよい。グリシドールと相溶性ある有機溶媒としては、該粒子を混合分散することができ、該粒子の持つ官能基とグリシドールのエポキシ基との反応に不活性であれば、特に限定するものでない。例えばジメチルホルムアミド、ジオキサン、ジエチレングリコールジメチルエーテルなどを、前記有機溶媒として挙げることができる。
上記のグリシドールとゲルが有する水酸基との反応に関して、必要であれば適宜触媒を用いることができる。触媒としては、塩酸、硫酸のような無機強酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのような強アルカリ、トリエチルベンジルアンモニウムクロライドやテトラメチルアンモニウムクロライドのような四級アンモニウム塩、ベンジルジメチルアミンやトリブチルアミンのような三級アミン、２−メチル−４−エチルイミダールや２−メチルイミダゾールのようなイミダゾール化合物、更には三フッ化ホウ素、ホウフッ化亜鉛、塩化スズのようなルイス酸などを挙げることができる。
以上のようにして得られた本発明の液体クロマトグラフィー用充填剤は、液体クロマトグラフィー法や液体クロマトグラフィー装置に好ましく使用できる。例えば、カラム、前記カラムに送液するポンプ、カラムから溶出した成分を分析する検出器、及び検出器で検出されたデーターを処理する装置を含む液体クロマトグラフィー装置において、本発明の充填剤をカラムに使用することにより、高いＳ／Ｎ比で測定を行うことができる。
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。
［実施例１］（架橋度：１００％）
架橋性単量体（Ａ−ＴＭＭ−３Ｌ、新中村化学工業製、ペンタエリスリトールトリアクリレート５５質量％（１０３．３ｍｍｏｌ）、ペンタエリスリトールテトラアクリレート４５質量％（７１．３ｍｍｏｌ））５６．０ｇ、希釈剤としてジクロロエタン６７．６ｇ、及びオクタノール３６．４ｇを容器に入れ、これに、重合開始剤として２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）３．３ｇ（１３．３ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水３００ｇ、ＧＨ−２０（分散安定剤、日本合成化学製、ケン化度が８６．５％−８９．０％のポリビニルアルコール）を８ｇ、塩析剤としてＮａＣｌを８ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザー（日本精機製作所製）により、２０００ｒｐｍで１０分間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合した。その後、重合を行った分散液を、ろ過、洗浄、及び乾燥することにより、ゲル５９．０ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して４〜８μｍの粒子を集め、本発明のゲル２２．２ｇを得た。
［実施例２］（架橋度：６０％）
架橋性単量体（Ａ−ＴＭＭ−３Ｌ、新中村化学工業製、ペンタエリスリトールトリアクリレート ５５質量％（７６．２ｍｍｏｌ）、ペンタエリスリトールテトラアクリレート４５質量％（５２．６ｍｍｏｌ））４１．３ｇ、非架橋性単量体としてグリシジルメタクリレート２７．５ｇ（１９３．５ｍｍｏｌ）、ジクロロエタン６７．６ｇ、及びオクタノール３６．４ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）３．３ｇ（１３．３ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水を３００ｇ、分散安定剤としてＧＨ−２０を８ｇ、ＮａＣｌを８ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、２０００ｒｐｍで１０分間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。その後重合を行った分散液を、ろ過、洗浄、及び乾燥することにより、ゲル６３．７ｇを得た。得られたゲルを、ジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びエチレングリコール２２０ｇの混合液に分散し、一時間撹拌を行った。撹拌後、触媒として三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体２．６ｇを加え、８０℃ ３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル６７．０ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して４〜８μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２０．８ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びグリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル２２．８ｇを得た。
［実施例３］（架橋度：４７％）
架橋性単量体（Ａ−ＴＭＭ−３Ｌ、新中村化学工業製、ペンタエリスリトールトリアクリレート ５５質量％（５４．８ｍｍｏｌ）、ペンタエリスリトールテトラアクリレート４５質量％（３７．８ｍｍｏｌ））２９．７ｇ、グリシジルメタクリレート３３．１ｇ（２３２．９ｍｍｏｌ）、ジクロロエタン６７．６ｇ、及び、オクタノール３６．４ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）３．３ｇ（１３．３ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水３００ｇ、ＧＨ−２０を８ｇ、ＮａＣｌを８ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、２０００ｒｐｍで１０分間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。その後重合を行った分散液を、ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル５７．３ｇを得た。得られたゲルを、ジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ，エチレングリコール２２０ｇに分散し、一時間撹拌を行った。撹拌後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体２．６ｇを加え、８０℃、３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル６１．３ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して４〜８μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル１８．７ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、グリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル２０．２ｇを得た。
［比較例１］（架橋度：３０％）
架橋性単量体（Ａ−ＴＭＭ−３Ｌ、新中村化学工業製、ペンタエリスリトールトリアクリレート ５５質量％（３１．０ｍｍｏｌ）、ペンタエリスリトールテトラアクリレート４５質量％（２１．４ｍｍｏｌ））１６．８ｇ、グリシジルメタクリレート３９．２ｇ（２７５．８ｍｍｏｌ）、ジクロロエタン６７．６ｇ、オクタノール３６．４ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビスイソブチロニトリル２．２ｇ（１３．３ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水３００ｇ、ＧＨ−２０を８ｇ、ＮａＣｌを８ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、２０００ｒｐｍで１０分間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合した。その後、重合を行った分散液を、ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル５０．４ｇを得た。得られたゲルをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、エチレングリコール２２０ｇの混合液に分散し、一時間撹拌を行った。撹拌後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体２．６ｇを加え、８０℃、３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル５３．３ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して４〜８μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル１５．７ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、グリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル１６．４ｇを得た。
［比較例２］（架橋度：３０％）
架橋性単量体としてエチレングリコールジメタクリレート１９．８ｇ（９９．９ｍｍｏｌ）、非架橋性単量体としてグリシジルメタクリレート４６．２ｇ（３２３．６ｍｍｏｌ）、希釈剤としてクロロベンゼン２８ｇ、ラウリルアルコール３０ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）４．０ｇ（１６．１ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水４４０ｇ、ＧＨ−２０を２．２０ｇ、ＫＨ−１７（分散安定剤、日本合成化学製、ケン化度が７８．５％−８１．５％のポリビニルアルコール）２．２０ｇ、ＮａＣｌを４．４０ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、３５００ｒｐｍで１０分間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル６０．０ｇを得た。得られたゲルに水４００ｇ，硫酸６ｇを加え８０℃３時間反応を行った。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル６４．５ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して８〜１２μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２４．６ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びグリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル２６．６ｇを得た。
［実施例４］（架橋度：４０％）
エチレングリコールジメタクリレート２６．４ｇ（１３３．２ｍｍｏｌ）、グリシジルメタクリレート３９．６ｇ（２７８．６ｍｍｏｌ）、クロロベンゼン２８ｇ、ラウリルアルコール３０ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）４．０ｇ（１６．１ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水４４０ｇ、ＧＨ−２０を２．２０ｇ、ＫＨ−１７を２．２０ｇ、ＮａＣｌを４．４０ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、３５００ｒｐｍで１０間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル６２．５ｇを得た。得られたゲルに水４００ｇ，硫酸６ｇを加え、８０℃で３時間反応を行った。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル６４．８ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して８〜１２μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２５．６ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びグリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル２７．３ｇを得た。
［実施例５］（架橋度：５０％）
エチレングリコールジメタクリレート３３．０ｇ（１６６．５ｍｍｏｌ）、グリシジルメタクリレート３３．０ｇ（２３２．１ｍｍｏｌ）、クロロベンゼン２８ｇ、ラウリルアルコール３０ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）４．０ｇ（１６．１ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水４４０ｇ、ＧＨ−２０を２．２０ｇ、ＫＨ−１７を２．２０ｇ、ＮａＣｌを４．４０ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、３５００ｒｐｍで１０間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル６６．６ｇを得た。得られたゲルに水４００ｇ，硫酸６ｇを加え８０℃で３時間反応を行った。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル７１．３ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して８〜１２μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２８．６ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びグリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃ｄ３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル３０．４ｇを得た。
［実施例６］（架橋度：６０％）
架橋性単量体としてグリセリンジメタクリレート３９．６ｇ（１７３．７ｍｍｏｌ）、グリシジルメタクリレート２６．４ｇ（１８５．７ｍｍｏｌ）、クロロベンゼン１８ｇ、ラウリルアルコール３８ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）２．２ｇ（８．９ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水４４０ｇ、ＧＨ−２０を２．２０ｇ、ＫＨ−１７を２．２０ｇ、ＮａＣｌを４．４０ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、３０００ｒｐｍで５間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。その後、重合を行った分散液を、ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル５７．２ｇを得た。得られたゲルに水４００ｇ、硫酸６ｇを加え、８０℃で３時間反応を行った。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル６３．５ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して１０〜１２μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２５．６ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、グリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル２６．８ｇを得た。
［実施例７］（架橋度：６０％）
架橋性単量体（Ａ−ＴＭＭ−３Ｌ、新中村化学工業製、ペンタエリスリトールトリアクリレート ５５質量％（７３．１ｍｍｏｌ）、ペンタエリスリトールテトラアクリレート４５質量％（５０．４ｍｍｏｌ））３９．６ｇ、グリシジルメタクリレート２６．４ｇ（１８５．７ｍｍｏｌ）、クロロベンゼン１８ｇ、ラウリルアルコール３８ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）３．３ｇ（１３．３ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水４４０ｇ、ＧＨ−２０を２．２０ｇ、ＫＨ−１７を２．２０ｇ、ＮａＣｌを４．４０ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、３０００ｒｐｍで１０間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。その後、重合を行った分散液を、ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル５８．２ｇを得た。得られたゲルに水４００ｇ、硫酸６ｇを加え８０℃で３時間反応を行った。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル６３．５ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して８〜１２μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２５．８ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びグリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル２７．３ｇを得た。
［実施例８］（架橋度：６０％）
架橋性単量体としてポリエチレングリコール＃２００ジアクリレート（新中村化学工業製）４１．３ｇ（１３４．１ｍｍｏｌ）、グリシジルメタクリレート２７．５ｇ（１９３．５ｍｍｏｌ）、ジクロロエタン６７．６ｇ、オクタノール３６．４ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）３．３ｇ（１３．３ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また、イオン交換水３００ｇ、ＧＨ−２０を８ｇ、ＮａＣｌを８ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、２０００ｒｐｍで１０分間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル５６．８ｇを得た。得られたゲルをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びエチレングリコール２２０ｇの混合液に分散し、一時間撹拌を行った。撹拌後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体２．６ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル６２．５ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して４〜８μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２０．１ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びグリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより、本発明のゲル２２．３ｇを得た。
［実施例９］（架橋度：６０％）
ポリエチレングリコール＃２００ジメタクリレート（新中村化学工業製）４１．３ｇ（１２５．２ｍｍｏｌ）、グリシジルメタクリレート２７．５ｇ（１９３．５ｍｍｏｌ）、ジクロロエタン６７．６ｇ、オクタノール３６．４ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）３．３ｇ（１３．３ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水３００ｇ、ＧＨ−２０を８ｇ、ＮａＣｌを８ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、２０００ｒｐｍで１０分間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。その後、重合を行った分散液を、ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル５８．４ｇを得た。得られたゲルをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びエチレングリコール２２０ｇの混合液に分散し、一時間撹拌を行った。撹拌後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体２．６ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル６７．４ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して４〜８μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２３．５ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びグリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル２５．７ｇを得た。
［実施例１０］（架橋度：６０％）
架橋性単量体（Ａ−ＴＭＭ−３Ｌ、新中村化学工業製、ペンタエリスリトールトリアクリレート５５質量％（７６．２ｍｍｏｌ）、ペンタエリスリトールテトラアクリレート４５質量％（５２．６ｍｍｏｌ））４１．３ｇ、非架橋性単量体としてメトキシポリエチレングリコール＃４００アクリレート（新中村化学工業製）２７．５ｇ（６０．６ｍｍｏｌ）、ジクロロエタン６７．６ｇ、オクタノール３６．４ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）３．３ｇ（１３．３ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水３００ｇ、ＧＨ−２０を８ｇ、ＮａＣｌを８ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、２０００ｒｐｍで１０分間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル６３．７ｇを得た。得られたゲルをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びエチレングリコール２２０ｇの混合液に分散し、一時間撹拌を行った。撹拌後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体２．６ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル７１．１ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して４〜８μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２６．５ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、グリシドール２０ｇの混合液に分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル２９．３ｇを得た。
［実施例１１］（架橋度：６０％）
架橋性単量体（Ａ−ＴＭＭ−３Ｌ、新中村化学工業製、ペンタエリスリトールトリアクリレート５５質量％（７６．２ｍｍｏｌ）、ペンタエリスリトールテトラアクリレート４５質量％（５２．６ｍｍｏｌ））４１．３ｇ、４−ヒドロキシブチルアクリレート（日本化成製）２７．５ｇ（１９０．７ｍｍｏｌ）、ジクロロエタン６７．６ｇ、オクタノール３６．４ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）３．３ｇ（１３．３ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水３００ｇ、ＧＨ−２０を８ｇ、ＮａＣｌを８ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、２０００ｒｐｍで１０分間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル６２．５ｇを得た。得られたゲルをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びエチレングリコール２２０ｇの混合液に分散し、一時間撹拌を行った。撹拌後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体２．６ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル７１．５ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して４〜８μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２７．５ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、グリシドール２０ｇに分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル２９．３ｇを得た。
［実施例１２］（架橋度：６０％）
架橋性単量体（Ａ−ＴＭＭ−３Ｌ、新中村化学工業製、ペンタエリスリトールトリアクリレート５５質量％（７６．２ｍｍｏｌ）、ペンタエリスリトールテトラアクリレート４５質量％（５２．６ｍｍｏｌ））４１．３ｇ、４−ヒドロキシブチルアクリレートグリシジルエーテル（日本化成製）２７．５ｇ（１９３．７ｍｍｏｌ）、ジクロロエタン６７．６ｇ、オクタノール３６．４ｇを容器に入れ、これに２，２’−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）３．３ｇ（１３．３ｍｍｏｌ）を溶解させ、一時間撹拌し、油相を準備した。また別に、イオン交換水３００ｇ、ＧＨ−２０を８ｇ、ＮａＣｌを８ｇ溶解させた水相を準備した。水相の中に油相を加え、エクセルオートホモジナイザーにより、２０００ｒｐｍで１０分間分散させた。その後、セパラブルフラスコに分散液を移し、反応容器内を窒素で置換した。反応温度６０℃で６時間重合させた。その後、重合を行った分散液を、ろ過、洗浄、乾燥することにより、ゲル６４．５ｇを得た。得られたゲルをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、及びエチレングリコール２２０ｇの混合液に分散し、一時間撹拌を行った。撹拌後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体２．６ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することによりゲル７２．３ｇを得た。得られたゲルを風力分級機で分級して４〜８μｍの粒子を集めた。風力分級後のゲル２８．５ｇをジエチレングリコールジメチルエーテル２２０ｇ、グリシドール２０ｇに分散させ、一時間撹拌を行った。撹拌後、ホウフッ化亜鉛８ｇを加え、８０℃で３時間反応させた。ろ過、洗浄、乾燥することにより本発明のゲル３０．６ｇを得た。
［分析例］
実施例および比較例で作製したゲルを８．０φ×３００ｍｍのＳＵＳ製のハウジングに充填し、多角度光散乱検出器（ＤＡＷＮ ＨＥＬＥＯＳ II、Ｗｙａｔｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）で評価した。流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ、温度３０℃の条件で、溶離液として０．１Ｍの硝酸ナトリウム水溶液を用いた。測定サンプルとして０．５％のプルラン標準物質（重量平均分子量がＰＳ換算で、２０８００）であるＰ−２０を１０μＬ注入して、シグナルに対するベースラインのノイズの比率（Ｓ／Ｎ比）で比較を行った。Ｓは得られたサンプルピークの高さを表し、Ｎはサンプルピーク周辺（±２分）のノイズの平均値を表す。すなわち、山と谷との差の平均値を、比較する値として採用した。
比較例１で得られたクロマトグラムを図２に、実地例２で得られたクロマトグラムを図３に示す。これら図において、縦軸はｍＶ、横軸は分（ｍｉｎ．）を表す。
また、実施例１〜１２および比較例１〜２で作製したゲルを使用して上記の条件で測定したときのＳ／Ｎ比を、表に示す。
定量分析の際にはＳ／Ｎが３０以上であると好ましいが、実施例１〜１２においては全て３０以上を実現している。
Figure 0006731402
本発明は、サイズ排除液体クロマトグラフィーにおいて光散乱用検出器を使用する際、スパイクノイズが発生しにくい液体クロマトグラフィー用充填剤を提供すること、およびそれを用いた分析方法を提供することを目的とする。
１ 液体クロマトグラフィー用カラム
２ 移動相タンク
３ 送液ポンプ
４ サンプラー（インジェクター）
５ 光散乱検出器
６ 示差屈折率検出器
７ 記録計（データー処理装置）

Claims (9)

  1. （メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体に起因するモノマー単位を４０質量％以上含む、高分子ゲルであり、前記高分子ゲルの外表面にグリシドールとの反応に由来する水酸基を有する、液体クロマトグラフィー用充填剤。
  2. 前記（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体が、ペンタエリスリトールトリ（メタ）アクリレートおよびペンタエリスリトールテトラ（メタ）アクリレートである、またはペンタエリスリトールトリ（メタ）アクリレートである、請求項１に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
  3. 前記（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体に起因するモノマー単位に加えて、分子内に１つのエチレン性二重結合を有する化合物である非架橋性単量体に起因するモノマー単位をさらに含み、前記非架橋性単量体が、下記一般式（４）で表される化合物である、請求項１または請求項２に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤。
    Figure 0006731402
     （式中、Ｒ８は水素原子またはメチル基を表し、Ｙはオキシアルキレン基を有する１価の有機基またはグリシジル基を表す。）
  4. （メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体を４０質量％以上含む単量体を重合して水酸基を有するゲルを得る工程と、
    前記ゲルが有する水酸基と、グリシドールとを反応させる工程とを含む、液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法。
  5. 前記（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体が、（ポリ）アルキレングリコールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物、グリセリンと（メタ）アクリル酸とのエステル化物、およびペンタエリスリトールと（メタ）アクリル酸とのエステル化物からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項４に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法。
  6. 前記（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体が、下記一般式（１）で表される化合物である、請求項４に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法；
    Figure 0006731402
     （式中、Ｒ１，Ｒ２はそれぞれ独立に水素原子またはメチル基を表し、ｎは１〜１４の整数を表し、Ｘは炭素数２〜４のオキシアルキレン基を表す。）。
  7. 前記（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体が、下記一般式（２）で表される化合物である、請求項４に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法；
    Figure 0006731402
     （式中Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５はそれぞれ独立に（メタ）アクリロイルオキシ基または水酸基を表し、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５のうちの少なくとも２つは（メタ）アクリロイルオキシ基である。）。
  8. 前記（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体が、下記一般式（３）で表される化合物である、請求項４に記載の液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法；
    Figure 0006731402
     （式中、Ｒ６は（メタ）アクリロイルオキシ基または水酸基を表し、Ｒ７は水素原子またはメチル基を表す）。
  9. 水系溶媒に溶解する試料を、液体クロマトグラフィー用充填剤を充填したカラムに導入し、光散乱検出器を用いて検出を行う、サイズ排除液体クロマトグラフィーにおいて、前記充填剤が、（メタ）アクリロイルオキシ基を有する架橋性単量体に起因するモノマー単位を４０質量％以上含む、高分子ゲルであり、前記高分子ゲルの外表面にグリシドールとの反応に由来する水酸基を有することを特徴とする、サイズ排除液体クロマトグラフィー。
JP2017505286A 2015-03-10 2016-03-03 液体クロマトグラフィー用充填剤、液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法、サイズ排除液体クロマトグラフィー Active JP6731402B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2015046650 2015-03-10
JP2015046650 2015-03-10
PCT/JP2016/056654 WO2016143673A1 (ja) 2015-03-10 2016-03-03 液体クロマトグラフィー用充填剤

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPWO2016143673A1 JPWO2016143673A1 (ja) 2017-12-21
JP6731402B2 true JP6731402B2 (ja) 2020-07-29

Family

ID=56879606

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017505286A Active JP6731402B2 (ja) 2015-03-10 2016-03-03 液体クロマトグラフィー用充填剤、液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法、サイズ排除液体クロマトグラフィー

Country Status (5)

Country Link
US (1) US11167264B2 (ja)
EP (1) EP3270155B1 (ja)
JP (1) JP6731402B2 (ja)
CN (1) CN107407667B (ja)
WO (1) WO2016143673A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2018037940A1 (ja) * 2016-08-26 2019-06-20 昭和電工株式会社 Ｈｉｌｉｃカラム用充填剤、それが充填されたｈｉｌｉｃカラム、及びそれを用いたオリゴ糖の分析方法

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1907666A1 (de) 1969-02-15 1970-10-15 Merck Patent Gmbh Quellfaehige Polymerisate
JPS54160300A (en) * 1978-06-08 1979-12-18 Toyo Soda Mfg Co Ltd Hydrophilic separating carrier and making method thereof
JPS6070353A (ja) 1983-09-28 1985-04-22 Toyo Soda Mfg Co Ltd 疎水性クロマトグラフィ−用担体
JPS60104256A (ja) 1984-09-28 1985-06-08 Showa Denko Kk クロマトグラフイー用充填剤及びその製造方法
JPS6366458A (ja) 1986-09-09 1988-03-25 Hitachi Chem Co Ltd クロマトグラフイ−用充填剤
JPS6392645A (ja) 1986-10-07 1988-04-23 Hitachi Chem Co Ltd 架橋重合体粒子の製造法
JPS6425056A (en) 1987-07-21 1989-01-27 Nippon Oils & Fats Co Ltd Manufacture of macromolecular filler for liquid chromatography
JP2969848B2 (ja) 1990-07-25 1999-11-02 三菱化学株式会社 親水性架橋共重合体粒子
WO1992001721A1 (en) 1990-07-20 1992-02-06 Mitsubishi Kasei Corporation Crosslinked copolymer particle and process for preparing the same
JP2000055897A (ja) * 1998-08-06 2000-02-25 Showa Denko Kk 充填剤及びその製造方法
JP2002181800A (ja) 2000-12-11 2002-06-26 Sumitomo Chem Co Ltd 溶媒の精製法
JP2002239380A (ja) * 2001-02-15 2002-08-27 Showa Denko Kk 親水性分離担体粒子及びその製造方法
KR20040039422A (ko) 2001-09-28 2004-05-10 쇼와 덴코 가부시키가이샤 입상 소수성 중합체, 그 제조방법 및 역상 고성능 액체크로마토그래피용 칼럼
AU2003243233A1 (en) 2002-05-15 2003-12-02 Dow Gloval Technologies Inc Molecular topological frationation of macromolecules
US20050061745A1 (en) 2002-06-26 2005-03-24 Teledyne Isco, Inc. Separation system, components of a separation system and methods of making and using them
TW200738331A (en) * 2005-07-26 2007-10-16 Showa Denko Kk Method for analyzing low-molecular-weight compound in sample containing water-soluble polymer and low-molecular-weight compound
JP5396933B2 (ja) 2009-03-11 2014-01-22 東ソー株式会社 液体クロマトグラフィー用充填剤、及び生体高分子の分離精製方法
WO2011084506A2 (en) 2009-12-15 2011-07-14 Waters Technologies Corporation Device and methods for performing size exclusion chromatography
WO2012031745A1 (en) * 2010-09-08 2012-03-15 Qiagen Gmbh Method and device for concentrating target compounds
CN102059157B (zh) 2010-12-08 2014-01-08 南京大学 阴离子交换整体材料和以其为分离介质的常规液相色谱柱或石英毛细管柱及其制法
CN102552201A (zh) 2012-03-12 2012-07-11 广州康和药业有限公司 一种地乌皂苷w3口服缓释片及其制备方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2018037940A1 (ja) * 2016-08-26 2019-06-20 昭和電工株式会社 Ｈｉｌｉｃカラム用充填剤、それが充填されたｈｉｌｉｃカラム、及びそれを用いたオリゴ糖の分析方法
US11247192B2 (en) 2016-08-26 2022-02-15 Showa Denko K.K. Packing material for HILIC columns, HILIC column filled with same, and method for analyzing oligosaccharide with use of same

Also Published As

Publication number Publication date
EP3270155A1 (en) 2018-01-17
EP3270155A4 (en) 2018-10-24
CN107407667B (zh) 2021-06-15
JPWO2016143673A1 (ja) 2017-12-21
EP3270155B1 (en) 2022-06-29
US20180104669A1 (en) 2018-04-19
US11167264B2 (en) 2021-11-09
CN107407667A (zh) 2017-11-28
WO2016143673A1 (ja) 2016-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8710111B2 (en) Porous polymeric resins
KR101297282B1 (ko) 친수성이 우수한 신규 충전제 및 그 제조 방법
JP5566152B2 (ja) 単分散ポリマー粒子の製造法
JP2005510609A5 (ja)
US20220176273A1 (en) Packing material for size exclusion chromatography and method for producing the same
JP5292571B2 (ja) 有機系多孔質体の製造方法および有機系多孔質カラムならびに有機系多孔質体
Nakano et al. Preparation of cross-linked monodisperse poly (acrylic acid) particles by precipitation polymerization
EP2027163B1 (en) A method for producing cross-linked spherical particles
Sand et al. Effects of reaction parameters on water absorption of poly (itaconic acid) superabsorbent particles synthesized by inverse suspension polymerization
JP6731402B2 (ja) 液体クロマトグラフィー用充填剤、液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法、サイズ排除液体クロマトグラフィー
Dai et al. Narrowly dispersed imprinted microspheres with hydrophilic polymer brushes for the selective removal of sulfamethazine
Norhayati et al. Synthesis and characterization of poly (HEMA-co-EGDMA-co-VBC) by modified suspension polymerization: Effects of polymerization parameters reaction on chemical and thermal properties of polymer
US6362245B1 (en) Porous co-polymer particles, process for preparing the same and use of the same
Zhang et al. Preparation of molecularly imprinted polymer for vanillin via seed swelling and suspension polymerization
EP0990667B1 (en) Porous copolymer particles, process for preparing the same and use of the same
CN114213581A (zh) 一种亲水性聚丙烯酸酯类交联微球的制备方法
Savina et al. Analysis of polymer grafted inside the porous hydrogel using confocal laser scanning microscopy
Bukowska et al. Three‐component terpolymers of glycidyl methacrylate with good swelling characteristics
JP4734685B2 (ja) 多孔性共重合体粒子の製造方法
RU2590015C1 (ru) Способ получения монодисперсных сшитых сферических гранул сополимеров дивинилбензола
JPH09268232A (ja) 親水性重合体の変性方法並びに親水性樹脂の製造方法
WO2023276550A1 (ja) 充填剤およびその製造方法、並びにサイズ排除クロマトグラフィー用カラム
JPH02115201A (ja) 逆相懸濁重合用分散剤およびそれを用いてなる親水性樹脂の製造方法
CN117467059A (zh) 聚合物多孔微球及其制备方法与用途
Kim et al. Preparation and characteristics of poly (St-co-MAA) microgels

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20181101

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20181101

RD03 Notification of appointment of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423

Effective date: 20181102

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20191203

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20200128

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20200609

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20200706

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6731402

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

S111 Request for change of ownership or part of ownership

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

S531 Written request for registration of change of domicile

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350