JP6731004B2 - 富化体液の調製のための方法および装置 - Google Patents
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Description
本出願は、参照によりその内容全体を本明細書に組み込むものとする、2015年7月2日に出願された米国特許出願第62/188,118号の利益を主張するものである。
本開示は、多血小板血漿、骨髄単核細胞(BMMC)、脂肪組織由来の間質血管画分(SVF)、および他の富化または濃縮体液を生産する方法および器具に関する。本開示は、障害組織を多血小板血漿、骨髄単核細胞、脂肪組織の間質血管画分、または他の富化もしくは濃縮体液で治療する方法、ならびに障害組織の治療において使用するための、多血小板血漿、骨髄単核細胞、脂肪組織の間質血管画分、または他の富化もしくは濃縮体液も開示する。
多血小板血漿(PRP)、骨髄単核細胞(BMMC)、脂肪組織の間質血管画分(SVF)、および他の富化または濃縮体液、ならびにこれらの体液を生成する方法が本明細書で開示される。実施形態は、全血分画の方法を提供する。一実施形態では、全血を赤血球層、バフィー層、ならびに乏血小板血漿(PPP)層に分画することができる。一実施形態では、全血の分画は、遠心分離によって達成することができる。PPP層の少なくとも一部を取り出し、残りの体液を異なる容器に移すことができる。一実施形態では、残りの体液はダブルシリンジのような第2の容器に移される。次いで、残りの体液を、赤血球層および血漿層(すなわち、多血小板血漿)の2層に分画することができる。一実施形態では、多血小板血漿は第2のシリンジまたは容器から取り出され、対象に投与される。
一実施形態では、PRP調製のための装置は、例えば、第1のシリンジに血液を直接吸い上げるための点滴セットの直接接続のために、底部カップリングエレメント110を有する第1のシリンジ100を含むことができる。図2A。カップリングエレメントは、オステーパー接続金具とその対になるメス部品との間を漏れのない接続にするために、ルアーロックコネクタまたは任意の他のタイプの小型の液体接続金具であり得る。第1のシリンジは、上部カップリングエレメント120を含むこともできる。上部カップリングエレメントは、例えば、スワバブル(swabbable)針なし注射ルアーコネクタ150またはプランジャー140に接続可能である。第1のシリンジは、体液に適したチャンバー130を有するバレル190を含むことができる。体液を、上部カップリングエレメント120に接続したプランジャー140(または他の適した手段)を用いて第1のシリンジのチャンバー130に吸い上げることができる。
本明細書に記載の装置および方法は、例えば、骨髄または脂肪組織を含む他の体液と共に用いることができる。
一実施形態では、本明細書で開示された方法によって調製された、PRP組成物、BMMC組成物、SVF組成物、または他の体液は、1つまたはそれ以上のビタミンE、ビタミンA、または他のレチノイドのようなビタミンを含むことができる。ビタミンまたは他のレチノイドは、PRP、BMMC、またはSVF中に約40、30、20、10、5mg/L、またはそれ未満で存在することができる。ビタミンは、創傷治癒および抗酸化作用特性を提供することができる。あるいは、またはさらに、非ビタミン抗酸化物質を、PRP、BMMC、またはSVF中に約50、40、30、20、10、5mcg/dL、またはそれ未満で含むことができる。そのような抗酸化物質の非限定的な代表的な例は、β−カロテンを含む。
一実施形態では、本明細書に記載の方法は、適切な全血の分画および層の収集を達成するための使い捨て血液分離キットおよび器具を含む。方法、装置、および装置の構成要素は、全血および血液成分の画分への分離(例えば、少なくともPPPの一部が取り出された第2の遠心分離)、およびその後の選択された画分の収集を監視および制御することを含む。
「バフィー層」または「バフィーコート」という用語は、血液の密度勾配遠心分離後または強回転遠心分離条件下の、血漿層と赤血球層との間の白血球、血小板、ならびに間葉細胞および/または造血細胞の中間白色層を表す。
より高い血小板比率の濃縮多血小板血漿(すなわち、自己調整血漿(autologous conditioned plasma))を生産する方法が開発された。
全血をシリンジに吸い上げた(各々3人の異なるドナー)。プランジャーをシリンジから除去し、全血をシリンジ内で、1705×g、10分間、室温で遠心分離した(Hettich(登録商標)1390バケット、Hettich Lab Technology、Beverly、MA))。上部帯黄色透明画分(乏血小板血漿)、白色境界画分(「バフィー層」)、およびシリンジ底部の赤色画分の3つの画分が識別できた。約20mLの乏血小板血漿画分を取り出した。残りの血漿およびバフィー層をArthrex ACP(登録商標)ダブルシリンジシステム(Arthrex Inc.、Naples、FL)に移した。ダブルシリンジを、スワバブル針なしLuer−Lok(登録商標)接続を介してより大きなシリンジに接続した。ダブルシリンジをHettich(登録商標)1390バケットに設置し、41.65×g、5分間、室温で遠心分離した。遠心分離の後に、上方帯黄色透明画分(多血小板血漿)および底部赤色赤血球画分の2つの画分が識別できた。上方画分をArthrex ACP(登録商標)ダブルシリンジの内側シリンジを用いて単離した。細胞内含量の測定のために処理されたPRPの総体積は6mLであった。
全血(WB)および最終PRP画分を細胞含量について分析した。
本明細書に記載の方法は、高血小板比率の増加したならびに白血球、赤血球、および好中球比率の低下したPRPを生産した。
実施例1で生成された濃縮PRPと比較するために、異なる方法によって濃縮PRPを生成した。
Arthrex ACP(登録商標)ダブルシリンジシステムおよびAngel(登録商標)PRPシステム(Arthrex Inc.、Naples、FL)によって、製造業社の取扱説明書にしたがって、濃縮PRPを調製した。2%、7%、および15%のヘマトクリット設定のみ異なる、3つの別々のAngel(登録商標)PRPを調製した。
さまざまな異なる方法によって調製されたPRPの成分を表3に比較する(PRP対全血)(図1も参照)。実施例1と類似して、細胞内量の測定のために処理された各々のAngel(登録商標)PRP試料は6mLであった。しかし、細胞含量の測定のために処理されたArthrex ACP(登録商標)ダブルシリンジシステム試料は4.6mLであった。同一体積での比較を提供するために、データを4.6mLから6.0mLまで外挿した。
実施例1の方法は、15%ヘマトクリットのAngel(登録商標)PRP試料を除いて他の方法より、より高い血小板比率を有するPRPを生産した。しかし、赤血球、好中球および白血球比率は、15%ヘマトクリットのAngel(登録商標)PRP試料よりはるかに低かった。
Claims (11)
- a)上部カップリングエレメントおよび底部カップリングエレメントを有する第1のシリンジ内の全血を遠心分離し、シリンジ内で全血を乏血小板血漿層、バフィー層、および、赤血球層に分画すること、
b)第1のシリンジの上部カップリングエレメントから、乏血小板血漿層の少なくとも一部を取り出すこと、
c)第2のシリンジまたは第2の容器の底部カップリングエレメントを第1のシリンジの上部カップリングエレメントに取り付けること、
d)i)乏血小板血漿層、およびバフィー層のいずれかを第2のシリンジまたは第2の容器に吸い上げること、もしくは
ii)乏血小板血漿層、バフィー層、および赤血球層の一部のいずれかを第2のシリンジまたは第2の容器に吸い上げること、および
e)第2のシリンジまたは第2の容器を遠心分離し、乏血小板血漿層、バフィー層、および赤血球層のいずれかが多血小板血漿層および赤血球層に分画されること、
を含む、血液分画の方法。 - 多血小板血漿層が取り出され、容器に移される、請求項1または2に記載の方法。
- 多血小板血漿層が約8×106から約1×107血小板/μLを含む、請求項1または2に記載の方法。
- 多血小板血漿層が約0.1×105から約2×105赤血球/μLを含む、請求項1から3のいずれかに記載の方法。
- 多血小板血漿層が約500から約4000白血球/μLを含む、請求項1から4のいずれかに記載の方法。
- 多血小板血漿層が約10から約300好中球/μLを含む、請求項1から5のいずれかに記載の方法。
- ステップ(a)の遠心分離が約1500×gから約2000×gの相対遠心力(RCF)である、請求項1から6のいずれかに記載の方法。
- ステップ(e)の遠心分離が約30×gから約200×gの相対遠心力(RCF)である、請求項1から7のいずれかに記載の方法。
- 第2のシリンジがダブルシリンジである、請求項1から8のいずれかに記載の方法。
- 第2のシリンジまたは第2の容器から赤血球層を排出すること、および第2のシリンジまたは第2の容器に多血小板血漿を保持することをさらに含む、請求項1から9のいずれかに記載の方法。
- 第2のシリンジまたは第2の容器の底部カップリングエレメントに針を取り付けることをさらに含む、請求項1から10のいずれかに記載の方法。
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