JP6712126B2 - 食品中の微生物の検出法 - Google Patents
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Description
このとき、培養時間は、本発明の効果が得られる範囲で任意に設定できるが、例えば、8時間以上10時間以下であり、好ましくは、8時間以上9時間以下である。なお、BGLB培地は、日本の主な大腸菌群の検査の公定法で用いられる培地であり、LST培地は、アメリカ合衆国のAmerican Public Health Associationで定めている大腸菌群の試験法で用いられる培地である。LST培地、BGLB培地、デオキシコール酸ナトリウム、ナイシン、バンコマイシンは、それぞれ、市販されているものを入手して使用できる。
ここで、発酵食品とは、発酵微生物の代謝活動により、食品中に存在する有機物などの成分や性状が変化した食品をいい、例えば、ヨーグルト、ドリンクヨーグルト、乳酸菌飲料、チーズ、発酵バターなどが挙げられる。また、発酵微生物とは、例えば、乳酸菌、ビフィズス菌、カビ、酵母などが挙げられ、本発明では、好ましくは、乳酸菌、ビフィズス菌である。
本発明では、あらかじめ測定試料を所定の培地で培養することにより、測定試料に含まれる乳酸菌などの発酵微生物の菌数を大幅に減少できる。このとき、測定試料中に存在する大腸菌群などの汚染微生物数を減少させることはない。したがって、本発明の検出法では、例えばATP法などの迅速検出法での測定に影響を及ぼす乳酸菌などの発酵微生物の菌数を減少させながら、大腸菌群などの検出対象の汚染微生物の菌数には何ら影響を及ぼさないことから、汚染微生物だけに由来するATPを測定することができ、汚染微生物に特異的な検出が可能となる。
また、本発明の検出法は、検出の所要時間の全体が、短時間であることを特徴とする。具体的には、本発明の検出法は、例えば、検出の所要時間が8時間以上10時間以下であり、好ましくは検出の所要時間が8時間以上9時間以下である。
発酵乳(明治ブルガリアヨーグルト;株式会社明治製)の10倍希釈液の1mLを、表1に示したそれぞれの培地に接種した。35℃で8時間培養後、ATP量と乳酸菌数を測定した。ATP量は、「MLSII」(スリーエムジャパン株式会社)を用いて測定した。乳酸菌数は、「乳及び乳製品の成分規格等に関する省令」に記載の方法で測定した。
また、nBGLB培地、LST培地、dLST培地を使用した場合は、ATP量、乳酸菌数ともに、BGLB培地の結果と比べて大きく減少した。これは、nBGLB培地、LST培地、dLST培地に含まれる、ナイシン、ラウリル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウムが、グラム陽性菌である乳酸菌に対し、菌体膜への膜孔形成作用や溶菌作用を示し、その結果、乳酸菌数が減少するとともに、乳酸菌に由来するATPが菌体外に漏出し、ATP法の測定時に菌体外ATPとして測定時に消去されたものと考えられた。以上の結果から、vBGLB培地、nBGLB培地、LST培地、dLST培地を使用して培養することにより、ATP法による測定において、乳酸菌に由来するATPの影響を、効果的に排除できることが確認できた。特に、nBGLB培地、LST培地、dLST培地を使用して培養することにより、ATP法による測定において、乳酸菌に由来するATPの影響を、より効果的に排除できることが確認できた。
発酵乳(明治ブルガリアヨーグルト;株式会社明治製)の10倍希釈液の1mLを、BGLB培地、dLST培地に接種した。接種直後、および35℃で2、4、6、8時間培養後、実施例1と同様の方法でATP量と乳酸菌数を測定した。
測定結果を表2に示した。BGLB培地を使用した場合、8時間培養後まで乳酸菌数が維持されたのに対し、dLST培地を使用した場合、接種直後(培養後0時間)の時点で乳酸菌数が検出限界以下となり、ATP量も大きく減少した。以上の結果から、dLST培地を使用して培養することにより、時間をかけて培養する必要なしに、乳酸菌に由来するATPの影響を効果的に排除でき、迅速にATP法の利用が可能になることが確認できた。
発酵乳(明治ブルガリアヨーグルト;株式会社明治製)の0.1gに、表3に示した代表的な大腸菌群の4菌種を、1〜10 CFUまたは10〜100 CFUの2段階の菌数で接種した。また、発酵乳(明治ブルガリアヨーグルト;株式会社明治製)の0.1gに、表4に示した非大腸菌群の7菌種を、10〜100 CFUで接種した。さらに、菌を接種しない対照試料も用意した。それぞれの試料の10倍希釈液の1mLを、dLST培地に接種し、35℃で8時間培養した。培養後、培養液のATP量と接種菌の菌数を計測した。接種菌である大腸菌群は、標準寒天平板(SMA)で35℃、48時間培養した後に計測した。
なお、今回の結果は、比較のために実施した公定法(BGLB法、デソキシコーレイト寒天培地法(DOA法))と同様の判定結果を示し(表3、表4中に合わせて記載)、dLST培地を使用して培養した後に、ATP法を実施する検出法の結果が妥当であることが示された。
発酵乳として、「R-1」(製品名「明治プロビオヨーグルトR-1」)、「LG21」(製品名「明治プロビオヨーグルトLG21」)、「のむYo LB81プレーン」(製品名「明治ブルガリアのむヨーグルトLB81プレーン」)、「ブルガリアブルーベリー」(製品名「明治ブルガリアヨーグルトつぶごとブルーベリー」)、「ブルガリア朝のフルーツ」(製品名「明治ブルガリアヨーグルト朝のフルーツミックス」)、「クロレラ乳酸菌」(製品名「明治クロレラ乳酸菌」)、「PA3」(製品名「明治プロビオヨーグルトPA-3」)、「PA3ドリンクタイプ」(製品名「明治プロビオヨーグルトPA-3ドリンクタイプ」)(以上、全て株式会社明治製)の8種類を用意した。
それぞれの発酵乳の0.1gに、表5に示した代表的な大腸菌群の2菌種を1〜10 CFUで接種した。また、菌を接種しない対照試料も用意した。それぞれの試料の10倍希釈液の1mLを、dLST培地に接種し、35℃で8時間培養した。培養後、実施例3と同様の方法で培養液のATP量と接種菌の菌数を計測した。
測定結果を表5に示した。大腸菌群の接種試料では、いずれもATP量が増加し、対照試料のATP量と明確な差が認められた。よって、dLST培地を使用して培養した後に、ATP法を実施することで、発酵乳の種類にかかわらず、発酵乳中の微量の大腸菌群を8時間で検出できることが確認できた。なお、今回の結果は、比較のために実施した公定法(BGLB法、デソキシコーレイト寒天培地法(DOA法))と同様の判定結果を示し(表5中に合わせて記載)、dLST培地を使用して培養した後に、ATP法を実施する検出法の結果が妥当であることが示された。
Claims (4)
- 発酵微生物の生育を抑制する物質を添加した培地としてデオキシコール酸ナトリウム添加LST培地を用いて、あらかじめ測定試料を培養し、その後に、検出対象の大腸菌群の迅速検出法としてATP法を実施し、大腸菌群測定の公定法であるデソキシコーレイト寒天培地法と比較して、検出の所要時間が40%以上50%以下に短縮されることを特徴とする、発酵食品中の大腸菌群の検出法。
- 発酵食品が、ヨーグルト、ドリンクヨーグルト、乳酸菌飲料、チーズ、発酵バターのいずれか1つである、請求項1に記載の検出法。
- 発酵微生物が、乳酸菌またはビフィズス菌である、請求項1または2に記載の検出法。
- 検出の所要時間が8時間以上10時間以下であることを特徴とする、請求項1から3のいずれか一項に記載の検出法。
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