JP6666053B2 - Ｉａｌｄ産生促進剤 - Google Patents
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Description
本発明は、ビフィドバクテリウム属の菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属）、特にビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）の菌を有効成分とする、ＩＡＬＤ（Ｉｎｄｏｌｅ−３−ａｌｄｅｈｙｄｅ）の産生促進剤に関する。
トリプトファンから分解合成されるＩＡＬＤはＡｈＲレセプターを介してＩＬ−２２の産生を促進することが知られている。ＩＬ−２２は抗菌ペプチドやムチンの産生を促進するので、有益なサイトカインである。
ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）がトリプトファンからＩＡＬＤ（Ｉｎｄｏｌｅ−３−ａｌｄｅｈｙｄｅ）の合成を促進する事が報告されている（非特許文献１）。
芳香族炭化水素レセプター（ＡｈＲ）活性化能を有する乳酸菌、ビフィドバクテリウム属の菌およびプロピオン酸菌からなる群が示されているが、ＩＡＬＤに関する記載も示唆もされていない（特許文献１）。
Ｚｅｌａｎｔｅ Ｔ， Ｉａｎｎｉｔｔｉ ＲＧ， Ｃｕｎｈａ Ｃ， Ｄｅ Ｌｕｃａ Ａ， Ｇｉｏｖａｎｎｉｎｉ Ｇ， Ｐｉｅｒａｃｃｉｎｉ Ｇ， Ｚｅｃｃｈｉ Ｒ， Ｄ’Ａｎｇｅｌｏ Ｃ， Ｍａｓｓｉ−Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ Ｃ， Ｆａｌｌａｒｉｎｏ Ｆ， Ｃａｒｖａｌｈｏ Ａ， Ｐｕｃｃｅｔｔｉ Ｐ， Ｒｏｍａｎｉ Ｌ． Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｃａｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｆｒｏｍ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｅｎｇａｇｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ｂａｌａｎｃｅ ｍｕｃｏｓａｌ ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｖｉａ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２２． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ． ２０１３ Ａｕｇ ２２；３９（２）：３７２−８５．
上記のようにＩＡＬＤの産生促進によって、ＩＬ−２２の産生が促進され、抗菌ペプチドやムチンを産生する事が確認されている。そこで、本発明は効率的にＩＡＬＤの産生を促進し得る剤の提供を課題とする。
本発明者らは、数多くの乳酸菌を試験に供し、ビフィドバクテリウム属の菌、特にビフィドバクテリウム・ロンガムの菌がＩＡＬＤを産生する機能が非常に高いことを見出し、本発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は以下の構成からなる。
（１）ビフィドバクテリウム属の菌を有効成分とする、ＩＡＬＤ産生促進剤。
（２）ビフィドバクテリウム属の菌がビフィドバクテリウム・ロンガムの菌である、上記（１）に記載のＩＡＬＤ産生促進剤。
（３）ビフィドバクテリウム属の菌がＳＢＴ−２９２８（ＦＥＲＭ Ｐ−１０６５７）である、上記（１）に記載のＩＡＬＤ産生促進剤。
すなわち、本発明は以下の構成からなる。
（１）ビフィドバクテリウム属の菌を有効成分とする、ＩＡＬＤ産生促進剤。
（２）ビフィドバクテリウム属の菌がビフィドバクテリウム・ロンガムの菌である、上記（１）に記載のＩＡＬＤ産生促進剤。
（３）ビフィドバクテリウム属の菌がＳＢＴ−２９２８（ＦＥＲＭ Ｐ−１０６５７）である、上記（１）に記載のＩＡＬＤ産生促進剤。
本発明のビフィドバクテリウム属を有効成分とする、ＩＡＬＤ産生促進剤によれば、効率的にＩＡＬＤの産生を増加でき、これによってＩＬ−２２の産生を促進することにより、抗菌ペプチドやムチンの産生を増強する事ができる。
本発明において、「ＩＡＬＤ産生促進剤」とは、ＩＡＬＤ（Ｉｎｄｏｌｅ−３−ａｌｄｅｈｙｄｅ）の産生を促進するための剤のことをいい、ビフィドバクテリウム属の菌を有効成分とする剤のことをいう。この剤は、有効成分であるビフィドバクテリウム属の菌のみからなる剤であってもよく、ＩＡＬＤの産生を抑制しないその他の物質を含む剤であってもよい。
本発明において、「ＩＡＬＤ」とは、インドール−３−アルデヒド（Ｉｎｄｏｌｅ−３−ａｌｄｅｈｙｄｅ）のことをいう。
本発明の「ＩＡＬＤ産生促進剤」の有効成分であるビフィドバクテリウム属の菌として、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ブレイブ（Ｂｉｆｏｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュラタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、ビフィドバクテリウム・カテニュラタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、ビフィドバクテリウム・アングラタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｇｕｌａｔｕｍ）またはビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ）等の菌が挙げられ、これらを一種以上または二種以上組み合わせて含むものであっても良い。このうち、ビフィドバクテリウム・ロンガムの菌を有効成分とすることが好ましい。ビフィドバクテリウム・ロンガムの菌として、特にＳＢＴ−２９２８（ＦＥＲＭ Ｐ−１０６５７）を有効成分として含むことが好ましい。
以下に、本発明の実施例をあげて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
〔実施例１〕
１．１．菌体の準備
表１に示した乳酸菌１１株及びビフィドバクテリウム属の菌１２株を供試菌として使用した。乳酸菌はＭＲＳ液体培地にて、ビフィドバクテリウム属の菌はＧＡＭ液体培地にて３７℃，１６時間静置培養した。各菌体を遠心分離（１，９１２×ｇ，４℃，１０ｍｉｎ）にて回収し、１ｍＭ ＭｇＳＯ４を含有する１００ｍＭ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７、以下、緩衝液と呼ぶ）を用いて３回洗浄した。
１．１．菌体の準備
表１に示した乳酸菌１１株及びビフィドバクテリウム属の菌１２株を供試菌として使用した。乳酸菌はＭＲＳ液体培地にて、ビフィドバクテリウム属の菌はＧＡＭ液体培地にて３７℃，１６時間静置培養した。各菌体を遠心分離（１，９１２×ｇ，４℃，１０ｍｉｎ）にて回収し、１ｍＭ ＭｇＳＯ４を含有する１００ｍＭ リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７、以下、緩衝液と呼ぶ）を用いて３回洗浄した。
１．２．反応条件
反応は休止菌体系にて実施した。表１に示したように、菌体懸濁液を供試菌によってＯ．Ｄ．６００＝３．７〜７．９に調整して、次のＡ、Ｂの２つの反応液組成にて３７℃で１８時間、反応を行った。
反応液組成Ａ：２０ｍＭ トリプトファン
反応液組成Ｂ：２０ｍＭ トリプトファン ａｎｄ ２０ｍＭ α−ケトグルタル酸
反応は休止菌体系にて実施した。表１に示したように、菌体懸濁液を供試菌によってＯ．Ｄ．６００＝３．７〜７．９に調整して、次のＡ、Ｂの２つの反応液組成にて３７℃で１８時間、反応を行った。
反応液組成Ａ：２０ｍＭ トリプトファン
反応液組成Ｂ：２０ｍＭ トリプトファン ａｎｄ ２０ｍＭ α−ケトグルタル酸
１．３．反応産物の定量
反応液は遠心分離後（９，１００×ｇ，４℃，１０ｍｉｎ）、上清を回収し、フィルター（０．２２μｍ）にて不溶物を除去したものをＨＰＬＣ分析サンプルとした。分析はＡｇｉｌｅｎｔ社の１２００シリーズを使用した。溶離液Ａ（９５％ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ ｗａｔｅｒ，５％ Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（ＡＣＮ），０．０５％ Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＴＦＡ））で平衡化したＯＤＳカラム（Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８ 粒子径（μｍ）Ｓ−５，細孔径 ４．６Ｘ２５０，品番 ＨＳ１２Ｓ０５−２５４６ＷＴ，メーカー ＹＭＣ）に分析サンプルを１０μｌインジェクトし、流速１ｍｌ／ｍｉｎとして溶離液Ｂ（５％ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ ｗａｔｅｒ，９５％ ＡＣＮ，０．０５％ ＴＦＡ）の濃度勾配（％Ｂ（ｔｉｍｅ）：１０（０）→５０（１６）→５０（１６）→１００（１６．１）→１００（２０）→１０（２０．１）→１０（２６））により行った。カラムオーブンは４０℃とした。分光光度計にてＩＡＬＤの吸収波長の試験を行った結果、ＩＡＬＤの検出は３００ｎｍにおける吸収を利用した。ここで、合成活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を、反応により生成したＩＡＬＤ合成量（Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ． ｐｐｍ）を供試菌のＯ．Ｄ．６００の値で割った値と定義する（式１）。
反応液は遠心分離後（９，１００×ｇ，４℃，１０ｍｉｎ）、上清を回収し、フィルター（０．２２μｍ）にて不溶物を除去したものをＨＰＬＣ分析サンプルとした。分析はＡｇｉｌｅｎｔ社の１２００シリーズを使用した。溶離液Ａ（９５％ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ ｗａｔｅｒ，５％ Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（ＡＣＮ），０．０５％ Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（ＴＦＡ））で平衡化したＯＤＳカラム（Ｈｙｄｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｃ１８ 粒子径（μｍ）Ｓ−５，細孔径 ４．６Ｘ２５０，品番 ＨＳ１２Ｓ０５−２５４６ＷＴ，メーカー ＹＭＣ）に分析サンプルを１０μｌインジェクトし、流速１ｍｌ／ｍｉｎとして溶離液Ｂ（５％ Ｍｉｌｌｉ−Ｑ ｗａｔｅｒ，９５％ ＡＣＮ，０．０５％ ＴＦＡ）の濃度勾配（％Ｂ（ｔｉｍｅ）：１０（０）→５０（１６）→５０（１６）→１００（１６．１）→１００（２０）→１０（２０．１）→１０（２６））により行った。カラムオーブンは４０℃とした。分光光度計にてＩＡＬＤの吸収波長の試験を行った結果、ＩＡＬＤの検出は３００ｎｍにおける吸収を利用した。ここで、合成活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を、反応により生成したＩＡＬＤ合成量（Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ． ｐｐｍ）を供試菌のＯ．Ｄ．６００の値で割った値と定義する（式１）。
［式１］
結果を図１（反応液組成Ａ）、図２（反応液組成Ｂ）に示した。
図１、図２より、α−ケトグルタル酸の有無に関わらず、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）と比較して、ビフィドバクテリウム属の菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属）、特にビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）のＩＡＬＤ産生能が優れていることが確認できた。また、その中でも特にＳＢＴ−２９２８（ＦＥＲＭ Ｐ−１０６５７）の効果が大きい事が確認できた。従って、これらのビフィドバクテリウム属の菌を有効成分として、ＩＡＬＤ産生促進剤が提供できることが示された。
図１、図２より、α−ケトグルタル酸の有無に関わらず、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）と比較して、ビフィドバクテリウム属の菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属）、特にビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）のＩＡＬＤ産生能が優れていることが確認できた。また、その中でも特にＳＢＴ−２９２８（ＦＥＲＭ Ｐ−１０６５７）の効果が大きい事が確認できた。従って、これらのビフィドバクテリウム属の菌を有効成分として、ＩＡＬＤ産生促進剤が提供できることが示された。
本発明のビフィドバクテリウム属の有効成分とする、ＩＡＬＤ産生促進剤によれば、効率的にＩＡＬＤの産生を増加でき、これによってＩＬ−２２の産生を促進することにより、抗菌ペプチドやムチンの産生を増強する事ができる。
Claims (1)
- ビフィドバクテリウム・ロンガムＳＢＴ−２９２８（ＦＥＲＭ Ｐ−１０６５７）を有効成分とするＩＡＬＤ産生促進剤。
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- 2015-03-31 JP JP2015071248A patent/JP6666053B2/ja active Active
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| JP2021035992A (ja) * | 2020-11-25 | 2021-03-04 | 雪印メグミルク株式会社 | Ｉａｌｄ産生促進剤 |
| JP7080296B2 (ja) | 2020-11-25 | 2022-06-03 | 雪印メグミルク株式会社 | Ｉａｌｄ産生促進剤 |
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| JP2016190804A (ja) | 2016-11-10 |
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