JP6656316B2

JP6656316B2 - How to use cucumbers, how to use cucumbers extract and how to use drug mixtures

Info

Publication number: JP6656316B2
Application number: JP2018132095A
Authority: JP
Inventors: 超群徐; 東暁李; 光明舒; 佳阮; 雁 ▲ザン▼; ▲レイ▼ 譚
Original assignee: 四川省中医薬科学院
Priority date: 2013-10-31
Filing date: 2018-07-12
Publication date: 2020-03-04
Anticipated expiration: 2034-10-30
Also published as: EP3064212A4; WO2015062517A1; EP3064212A1; KR101891417B1; JP6371400B2; KR20160087818A; JP2016535091A; US10987395B2; US20190117718A1; ES2775598T3; EP3064212B1; US20160256510A1; JP2018184432A

Description

本発明は医薬分野に属し、具体的にハマナツメ抽出物及びその精製方法と用途に関するものである。 The present invention belongs to the field of medicine, and specifically relates to an extract of Citrus jujuba and its purification method and use.

ハマナツメ（Ｐａｌｉｕｒｕｓｒａｍｏｓｉｓｓｉｍｕｓ（Ｌｏｕｒ．）Ｐｏｉｒ）は落葉潅木で、一般的な薬用植物である。研究によれば、枝、葉、花、果実すべてが薬用であることが報告されている。性質と味は苦く、平坦で、無毒である。除寒活血、解熱、腫れを抑え、打撲傷を治し、心腹の痛みを抑えるという。中薬大辞典及び地方薬物誌に収められている。 Sorghum jujube (Paliurusramosissimus (Lour.) Poir) is a deciduous shrub and is a common medicinal plant. Studies have shown that branches, leaves, flowers and fruits are all medicinal. The taste and taste are bitter, flat and non-toxic. It is said to reduce cold blood, reduce fever and swelling, cure bruises, and reduce heart and abdominal pain. It is included in the Chinese medicine dictionary and local drug magazine.

本発明の発明者は研究過程において、ハマナツメとその抽出物には抗繊維化、抗真菌活性、抗腫瘍活性があり、口腔及び消化器炎症及び、潰瘍関連疾患を治療し、免疫機能の双方向調整作用があることを発見した。 During the course of the research, the inventors of the present invention have found that crabjuju and its extracts have antifibrotic, antifungal and antitumor activities, treat oral and digestive tract inflammation and ulcer-related diseases, We found that there was a regulating effect.

本発明が第一に解決した技術的問題は、ハマナツメの新しい用途に関するものである。 The technical problem solved first by the present invention relates to a new use of cichlids.

応用において、ハマナツメはハマナツメ全体或いはその一部を使うことである。薬用部分として根、茎、葉、花、果実のいかなる一部分或いはそれらの混合物がある。 In an application, crab jujube is to use whole crab jujube or a part thereof. Medicinal parts include any part of roots, stems, leaves, flowers, fruits or mixtures thereof.

具体的にはハマナツメとその抽出物には抗繊維化、抗真菌活性、抗腫瘍活性があり、口腔及び消化器炎症及び、潰瘍関連疾患を治療し、免疫機能の双方向調整作用がある。 More specifically, Scutellaria and its extract have antifibrotic, antifungal and antitumor activities, treat oral and gastrointestinal inflammation and ulcer-related diseases, and have a bidirectional regulation of immune function.

本発明が第二に解決した技術的問題は、新しいハマナツメ抽出物を提供できることである。薬剤の採取期間と保存の利便性を鑑み、臨床で使用しやすい方法で、ハマナツメを抽出物として使用することである。 The second technical problem solved by the present invention is that it can provide a new extract of Aspergillus niger. In view of the drug collection period and the convenience of preservation, the use of Aspergillus japonicus as an extract in a method that is clinically easy to use is used.

具体的には、本発明におけるハマナツメ抽出物はハマナツメ全体或いはその一部を一般的な採取方法で薬剤の原料にすることができる。本発明で得られるハマナツメ抽出物の主な成分にはフラボン類、テルペノイド類、アルカロイド類、クマリン類が含まれている。さらにはフラボン、テルペノイド、アルカロイド、クマリンのグリコシド及び単体成分が含まれており、多糖類とセルロースも含まれている。 More specifically, the extract of Aspergillus japonicum in the present invention can be used as a raw material for a drug by a common collection method using the whole or part of Aspergillus japonicus. The main components of the extract of Aspergillus niger obtained by the present invention include flavones, terpenoids, alkaloids, and coumarins. Furthermore, it contains glycosides of flavone, terpenoid, alkaloid, and coumarin and a simple substance, and also contains polysaccharide and cellulose.

本発明が解決する三つ目の技術的問題として、本発明のハマナツメ抽出物の精製方法は以下の通りである。
方法一：
Ａ．ハマナツメ植物全体或いはその一部を薬剤の原料とする。
Ｂ．溶剤で抽出し、乾燥させることで得られる。 As a third technical problem to be solved by the present invention, the method for purifying an extract of Aspergillus niger according to the present invention is as follows.
Method one:
A. The whole or part of the clover plant is used as a drug material.
B. It is obtained by extracting with a solvent and drying.

上記技術プロトコルにおいて、ステップＡで述べているハマナツメは新鮮なもの、冷凍乾燥品、有機溶媒処理済み品を薬剤の原料として用いている。 In the above technical protocol, fresh cucumbers, freeze-dried products, and products treated with an organic solvent are used as the raw materials for the medicine.

上記技術プロトコルにおいて、メタノール、エタノール、イソアルコール、酢酸エチル或いはベンジンを溶剤として使用しているが、メタノールとエタノールを優先的に使用する。 In the above technical protocol, methanol, ethanol, isoalcohol, ethyl acetate or benzine is used as a solvent, but methanol and ethanol are used preferentially.

上記技術プロトコルのステップＢで述べた抽出方法は浸漬、回流或いは濾過抽出である。 The extraction method described in step B of the above technical protocol is immersion, circulation or filtration extraction.

上記技術プロトコルのステップＢで述べた乾燥とは減圧乾燥、冷凍乾燥、噴霧乾燥或いはマイクロウェイブ乾燥を指す。 The drying described in step B of the above technical protocol refers to drying under reduced pressure, freeze drying, spray drying or microwave drying.

方法二：
Ａ．ハマナツメ植物全体或いはその一部を薬剤の原料とする。
Ｂ．溶剤ａで抽出し、濾液を濃縮し、濃縮液を得る。
Ｃ．溶剤ｂを使用してステップＢで得た濃縮液をさらに抽出し、液体を得て、乾燥させる。或いはステップＢで得た濾液を濃集或いは乾燥させた抽出物１を溶剤ｂで抽出し、抽出液を乾燥させる。 Method Two:
A. The whole or part of the clover plant is used as a drug material.
B. Extract with solvent a and concentrate the filtrate to obtain a concentrate.
C. The concentrated liquid obtained in step B is further extracted using solvent b to obtain a liquid and dried. Alternatively, extract 1 obtained by concentrating or drying the filtrate obtained in step B is extracted with solvent b, and the extract is dried.

上記技術プロトコル内のステップＡで述べたハマナツメは新鮮なもの、冷凍乾燥品、有機溶媒処理済み品を薬剤の原料として用いている。 As described in step A of the above technical protocol, fresh cucumbers, freeze-dried products, and products treated with an organic solvent are used as raw materials for the drug.

上記技術プロトコルのステップＢで述べた溶剤ａは、メタノール、エタノール、イソアルコールだが、メタノールとエタノールを優先的に使用する。 The solvent a mentioned in step B of the above technical protocol is methanol, ethanol or isoalcohol, but methanol and ethanol are used preferentially.

上記技術プロトコルのステップＣで述べた溶剤ｂは酢酸エチル或いはベンジンである。 The solvent b mentioned in step C of the above technical protocol is ethyl acetate or benzine.

上記技術プロトコルのステップＢ及びステップＣで述べた抽出法は浸漬法、回流法、濾過法或いは精製法を指す。 The extraction method described in steps B and C of the above technical protocol refers to a dipping method, a circulation method, a filtration method or a purification method.

上記技術プロトコルのステップＢ及びステップＣで述べた乾燥方法とは減圧乾燥、冷凍乾燥、噴霧乾燥或いはマイクロウェイブ乾燥を指す。 The drying method described in steps B and C of the above technical protocol refers to drying under reduced pressure, freeze drying, spray drying or microwave drying.

上記方法を採用して製造した抽出物は、例えば方法一で製造して取得した場合、ステップＢで使用した溶剤に応じて抽出物を命名する。例えばハマナツメエタノール抽出物、ハマナツメメタノール抽出物、ハマナツメイソアルコール抽出物、ハマナツメ酢酸エチル抽出物、ハマナツメベンジン抽出物である。もし方法二に基づいて得られた場合、ステップＣで使用された溶剤ｂに基づいて抽出物を命名する。例えばハマナツメベンジン抽出物、ハマナツメ酢酸エチル抽出物である。もし方法二のステップＣに基づいて得られた場合、抽出物１は方法二のステップＢで使用した溶剤ａに基づいて命名する。例えばハマナツメエタノール抽出物、ハマナツメメタノール抽出物、ハマナツメイソアルコール抽出物である。 When an extract produced by employing the above method is produced and obtained by, for example, Method 1, the extract is named according to the solvent used in Step B. For example, there are ethanol extract of Sasa jujube, methanol extract of Sasa jujuba, extract of Sasa jujuba isoalcohol, extract of Sasa jujube ethyl acetate, and extract of Sasa jujube benzine. If obtained according to Method 2, name the extract based on the solvent b used in Step C. For example, the extract of Scutellaria japonica and the extract of Stiltium ethyl acetate. If obtained according to step C of method two, extract 1 is named based on the solvent a used in step B of method two. For example, an extract of ethanol from Sorghum jujuba, an extract of Sorghum jujuba methanol, and an extract of Sorghum jujuba isoalcohol.

上記技術プロトコル内において、方法一のステップＢで使用する溶剤とハマナツメの使用量の関係は、溶剤添加量はハマナツメの質量の１−２０倍である。優先的な溶剤添加量はハマナツメの質量の５−１５倍である。さらに好ましくは、溶剤添加量の８−１０倍である。 In the above technical protocol, the relationship between the solvent used in step B of the method 1 and the amount of the yellow clover is that the amount of the solvent added is 1 to 20 times the mass of the yellow clover. The preferred amount of solvent added is 5-15 times the mass of the crab. More preferably, the amount is 8 to 10 times the amount of the solvent added.

上記技術プロトコル内において、方法二のステップＢで使用する溶剤ａとハマナツメの使用量の関係は、溶剤ａ添加量はハマナツメの質量の１−２０倍である。優先的な溶剤ａ添加量はハマナツメの質量の５−１５倍である。さらに好ましくは、溶剤ａ添加量の８−１０倍である。 In the above technical protocol, the relationship between the solvent a used in step B of the method 2 and the used amount of the jujube is that the amount of the solvent a added is 1 to 20 times the mass of the jujube. The preferential addition amount of the solvent a is 5 to 15 times the mass of the crab. More preferably, the amount is 8 to 10 times the amount of the solvent a.

優先的に溶剤或いは溶剤ａでメタノール或いはエタノールを使用する場合、メタノール或いはエタノール添加量はハマナツメの質量の１−２０倍である。優先的にメタノール或いはエタノールの添加量はハマナツメの質量の５−１５倍である。さらに好ましくは、優先的にメタノール或いはエタノールの添加量はハマナツメ質量の８−１０倍である。 When methanol or ethanol is preferentially used as the solvent or the solvent a, the amount of methanol or ethanol added is 1 to 20 times the mass of the crab. Preferentially, the added amount of methanol or ethanol is 5 to 15 times the mass of the crab. More preferably, the amount of methanol or ethanol to be added is preferentially 8-10 times the mass of the crab.

このうち、上記のエタノールの濃度は１０−９５％であり、優先的に５０−９５％のエタノールを使用する。最優先なのは９５％のエタノールである。 Among them, the concentration of the above-mentioned ethanol is 10-95%, and 50-95% ethanol is preferentially used. The highest priority is 95% ethanol.

上記技術プロトコルにおいて、有機溶媒処理を行う原料のハマナツメは新鮮品或いは冷凍乾燥品である必要がある。この理由として、発明者は研究過程において、ハマナツメの干したもの、加熱乾燥品などの乾燥品には相応の活性がないことを発見したため、ハマナツメの新鮮品を原料とした。しかし新鮮品は保存、運送に適さないことから、発明者は研究の過程で冷凍乾燥品と有機溶媒処理したハマナツメの新鮮品とを採用することで、薬物活性成分を保存することができ、効果が新鮮品と同等であることを発見し、本発明のハマナツメ抽出物の新用途を満たすことができる上に、保存と運送に適していることを結論づけた。 In the above-mentioned technical protocol, it is necessary that the raw jujube of the raw material to be treated with the organic solvent is a fresh product or a freeze-dried product. For this reason, the inventor discovered in the course of research that dried products, such as dried and heat-dried products, did not have a corresponding activity, and thus used fresh products of cassava. However, since fresh products are not suitable for storage and transportation, the inventor can preserve the drug active ingredient by adopting freeze-dried products and organic freshwater treated crabs in the course of the research, and effective. Was found to be equivalent to a fresh product, and concluded that it could fulfill the new use of the Aspergillus niger extract of the present invention and was suitable for storage and transportation.

具体的な有機溶媒処理の方法は、ハマナツメを有機溶剤に浸漬し、乾燥させることである。 A specific method of treating with an organic solvent is to immerse clover in an organic solvent and dry it.

有機溶媒にはエタノール、メタノール、酢酸エチル、ベンジン、イソアルコール等が使用されるが、優先的にメタノール或いはエタノールを使用する。 Ethanol, methanol, ethyl acetate, benzene, isoalcohol and the like are used as the organic solvent, and methanol or ethanol is preferentially used.

本発明の抽出物は内服（口内、舌下を含む）、経鼻、局部（頬内、舌下、経皮を含む）、消化器外（皮下、皮内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病巣内、静脈内或いは皮下注射や輸液を含む）ルートの投薬が可能である。これらの製剤は薬剤学技術の既知のいかなる方法を通して、例えば活性成分と媒体或いは賦形剤と合わせて製造することができる。 The extract of the present invention can be used orally (including buccal, sublingual), nasal, topical (including buccal, sublingual, transdermal), extragastrointestinal (subcutaneous, intradermal, intramuscular, intraarticular, synovial) Intra-, intra-sternal, intra-thecal, intralesional, intravenous or subcutaneous injection or infusion) routes of administration are possible. These formulations can be manufactured through any of the methods well known in the art of pharmacy, for example, by combining the active ingredient with a vehicle or excipient.

本発明が解決する第四の技術的問題は、本発明のハマナツメ抽出物の薬物製剤の製造を提供することである。本発明のハマナツメ抽出物は、薬物学上使用可能な補材を利用して、多ルート投薬ができる薬物製剤を製造することができる。より利便性を高めるため、本発明の抽出物は一般的な内服製剤、注射製剤或いは外用製剤に製造することができる。例えば内服（頬内或いは舌下を含む）、経鼻、局部（頬内、舌下、経皮を含む）、消化器外（皮下、皮内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病巣内、静脈内或いは皮下注射や輸液を含む）ルートから投薬することができる。この製剤は薬剤学の既知のいかなる方法を通して、例えば活性成分と媒体或いは賦形剤と合わせて製造することができる。例えば、タブレット、カプセル剤、顆粒剤、微丸剤、微球剤、滴丸、経時希釈剤、希釈製剤或いは注射剤などである。 A fourth technical problem solved by the present invention is to provide a preparation of a drug formulation of the extract of Aspergillus niger according to the present invention. The extract of Aspergillus niger according to the present invention can be used to manufacture a drug formulation capable of multi-root administration by using a pharmacologically usable auxiliary material. To enhance the convenience, the extract of the present invention can be manufactured into general internal preparations, injection preparations or external preparations. For example, oral (including buccal or sublingual), nasal, local (including buccal, sublingual, transdermal), extra-gastrointestinal (subcutaneous, intradermal, intramuscular, intraarticular, synovial, intrasternal) (Including intrathecal, intralesional, intravenous or subcutaneous injections and infusions). The formulations may be prepared through any of the methods well known in pharmacy, for example, combining the active ingredient with a vehicle or excipient. For example, tablets, capsules, granules, micropills, microspheres, drop pills, time-dependent diluents, diluted preparations, injections, and the like.

この製剤は、内服に適した投薬薬物製剤として独立したユニットと成り得る。例えば、カプセル、片剤、粉末或いは顆粒など、或いは水性或いは非水溶性液体の溶剤、ソリキッド、水包油型液体乳液或いは油包水型乳液などである。ユニット剤量形式で内服液、例えば溶液、シロップやそのエレキレル剤にすることが可能である。シロップは化合物を適切に調味した水溶液に溶解させることで製造できる。エレキレル剤は無毒ビークルを使用して製造することができる。溶剤や乳化剤（例えばＥｔｈｙｌＩＳＯｅｉｇｈｔｅｅｎａｌｃｏｈｏｌやＰｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅｓｏｒｂｉｔｏｌｅｔｈｅｒ）、防腐剤、調味添加剤（例えば薄荷油或いは天然甘味剤、或いはサッカリン或いはその他人工甘味剤）及び類似品を添加することができる。適切であれば、内服薬の剤量単位製剤を微カプセル化或いは湿布或いは顆粒を内含した集合物、蝋或いは類似物で製造し、希釈時間を延長、持続させることもできる。また、脂質体の投薬システム（ＳＵＶ、ＬＵＶ或いはＭＬＶ）の形式で投薬しても良い。脂質体は様々なリン脂質、例えばコロステロール、ステアリンラミネ或いはホスファチジルコリンで形成される。 This formulation can be a separate unit as a dosage drug formulation suitable for internal use. For example, capsules, strips, powders or granules, or aqueous or non-aqueous liquid solvents, liquids, water-packed oil-based liquid emulsions or oil-packed water-based emulsions. Oral liquids, for example, solutions, syrups and their elixirs can be prepared in unit dosage form. Syrups can be prepared by dissolving the compound in a suitably seasoned aqueous solution. Elecrel agents can be manufactured using non-toxic vehicles. Solvents and emulsifiers (eg, Ethyl ISO Eighteen alcohol or Polyoxyethyl sorbitol ether), preservatives, seasoning additives (eg, light oil or natural sweetener, or saccharin or other artificial sweetener) and the like can be added. Where appropriate, dosage unit formulations for oral administration can be made with microencapsulation or as an aggregate, wax or the like, containing a poultice or granules, to extend and maintain the dilution time. The drug may be administered in the form of a lipid body administration system (SUV, LUV or MLV). Lipid bodies are formed with various phospholipids, such as corosterol, stearin lamine or phosphatidylcholine.

経皮投薬に適した薬物製剤は、投薬対象の表皮と緊密に長時間接触する独立貼片形剤として製造できる。局部投薬に適した薬物製剤として、軟膏剤、乳剤、ソリキッド、洗剤、粉末、溶剤、のり剤、半固形剤、噴霧剤、気化剤、湿布薬或いは油剤として製造できる。 Pharmaceutical formulations suitable for transdermal administration can be prepared as independent patch forms which are in intimate contact with the epidermis to be administered for an extended period of time. It can be prepared as ointments, emulsions, liquids, detergents, powders, solvents, pastes, semi-solids, sprays, vaporizers, poultices or oils suitable for topical administration.

本発明が解決する第五の技術的問題は、本発明のハマナツメ抽出物の薬用新用途である。 The fifth technical problem solved by the present invention is a new medicinal use of the Aspergillus niger extract of the present invention.

ハマナツメメタノール抽出物、ハマナツメエタノール抽出物、ハマナツメ酢酸エチル抽出物、ハマナツメベンジン抽出物を含む本発明のハマナツメ抽出物は抗繊維化、抗真菌活性、抗腫瘍活性を持っており、口腔及び消化器炎症及び／或いは潰瘍関連疾患の治療、及び双方向免疫調整作用を持っている。ハマナツメ抽出物は単独で或いはハマナツメ抽出物を主な活性成分とした薬物化合物で上記製薬の新しい用途として使える。 The extract of Aspergillus japonica, including the extract of Aspergillus methanol, Aspergillus ethanol extract, Aspergillus ethyl acetate extract and Aspergillus niger, has antifibrotic, antifungal, and antitumor activities, and has oral and gastrointestinal inflammation. And / or treatment of ulcer-related diseases, and has a two-way immunomodulatory effect. Scutellaria extract is a drug compound containing the Sorghum extract alone or as a main active ingredient, and can be used as a new use in the above-mentioned pharmaceuticals.

そのうち：
本発明のハマナツメ抽出物を抗腫瘍活性の薬物に応用する場合、その他の腫瘍治療性中医薬、西洋医療薬を混合使用することができる。例えば放射線治療、免疫療法、ＤＮＡ化学治療剤、細胞複製阻害の化学治療剤及び免疫調整薬物が含まれる。具体的にはＴｏｐｏI抑制剤、ＴｏｐｏII抑制剤、ＤＮＡキメラ薬とフリーラジカル発生剤、干渉細胞複製の化学治療剤、ＴＫ抑制剤、プロテアーゼ抑制剤と癌の表現タンパクと結合し細胞複製を減少させる抗体、タンパク或いは酵素抑制剤が含まれる。その他腫瘍を治療する中医薬、西洋医薬からイリノテカン、トポテカン、カンプトテシン及び類似物或いは代謝物、ドキソルビシン、エトポサイドグリコシド、テニポサイドグリコシド、ダウノルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、イホスファミド、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、メトトレキサート、ミトマイシンC、シクロホスファミド、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ベロマイシン、5-フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、フルダラビン、シトシンアラビノシドグリコシド、メルカプトプリン、チオグアニンヌクレオチド、ペントスタチン、ヒドロキシカルバミド、パクリタキセル、パクリタテルペノイド及び関連類似物、イマニチブミスレイト、ビンクリスチン、ビンかアルカロイド及び関連類似物、サリドマイド及び関連類似物、メシル酸イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、シノブホタリン、姫松茸、珍珠梅酢酸エチル抽出物、ライチ核水抽出物、当雷公藤紅素、ＰｏｌｙｐｏｒｕｓｕｓＢｅｌｌａｔｕｓ、ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｐａｃｈｙｍａｎ、Ａｌｉｓｏｌ抽出濃縮液、甘草ペプチド、当帰総多糖、ソラレン、五味子多糖が含まれる。 Among them:
In the case where the extract of Aspergillus japonica of the present invention is applied to a drug having an antitumor activity, other medicinal drugs for treating tumors and western medicine can be mixed and used. Examples include radiation therapy, immunotherapy, DNA chemotherapeutic agents, chemotherapeutic agents for inhibiting cell replication, and immunomodulatory drugs. Specifically, Topo I inhibitors, Topo II inhibitors, DNA chimeric drugs and free radical generators, chemotherapeutic agents for interfering cell replication, TK inhibitors, protease inhibitors and antibodies that bind to cancer expression proteins and reduce cell replication , Proteins or enzyme inhibitors. Other Chinese medicines for treating tumors, irinotecan, topotecan, camptothecin and analogs or metabolites, doxorubicin, etoposide glycoside, teniposide glycoside, daunorubicin, melphalan, chlorambucil, busulfan, thiotepa, ifosfamide, carmustine, from western medicine Lomustine, semustine, streptozocin, dacarbazine, methotrexate, mitomycin C, cyclophosphamide, cisplatin, oxaliplatin, carboplatin, belomycin, 5-fluorouracil, capecitabine, gemcitabine, fludarabine, cytosine arabinoside glycoside, mercaptopurine, thioguanine nucleotide , Pentostatin, hydroxycarbamide, paclitaxel, paclitaterpenoids and related analogs, Manitib mislate, vincristine, vin or alkaloid and related analogs, thalidomide and related analogs, imatinib mesylate, gefitinib, bortezomib, trastuzumab, rituximab, cetuximab, bevacizumab, cinobhotalin, himematsutake, ethyl citrus ethyl extract Nuclear water extract, Tokurai Koto Koseki, Polyporusus Bellatus, carboxymethylpachyman, Alisol extract concentrate, licorice peptide, tokiso total polysaccharide, psoralen, and omiami polysaccharide.

本発明のハマナツメ抽出物を抗線維化薬物製造に応用する場合、その他線維化治療の中医薬、西洋医薬を同時に使用することができる。これらの抗線維化中医薬、西洋医薬には三七人参サポニン、リグストラジン、丹参、刺五加注射液、リグストラジン注射液、紅花注射液、銀杏フラボングリコシド、生脈、丹参注射液、双黄連、香丹注射液、益気活血顆粒、抗繊顆粒、肺康顆粒、百合固金丸、ｐｏｗｄｅｒｃｏｒｄｙｃｅｐｓｇｅｃｋｏｇｉｎｓｅｎｇｐｉｌｌｓ、ゲンゲ、西紅花、生地黄、三七、アマチャヅル、姜黄、黄葵、アミグダリン、テトランドリン、大黄素、エンテカビル、ラミブジン、β-カロテン、ビタミンＥ、ホスファチジルコリン、Ｓ-腺グリコシドメチオニン、プロスタグランジン、プロスタグランジンＥ２、コルヒチン、エストロゲン、アンギオテンシンＩＩレセプター阻害剤、交感神経抑制剤、インターフェロン、プロリル-４-ヒドロキシラーゼ抑制剤、ヘパリン、シルビニン、ウルソデオキシコール酸が含まれる。上記の線維化には肺線維化、腎線維化、肝線維化、心線維化が含まれる。 In the case of applying the extract of Citrus jujuba of the present invention to the production of an anti-fibrotic drug, other Chinese medicines and western medicines for treating fibrosis can be used simultaneously. These anti-fibrotic medicinal and western medicines include saccharin ginseng saponin, rigstrazine, dansin, saccharin injection, rigstrazine injection, safflower injection, ginkgo flavone glycoside, vital vein, dansin injection, souangren, Kotan Injection, Ekihatobetsu Granules, Antifibril Granules, Lung Kang Granules, Yuri Gokinceps, powder cordeceps gecko ginseng pills, Genge, Nishi-Safflower, Dough Yellow, 37, Amacha, Jiang Yellow, Yellow Aoi, Amygdalin, Tetrandrine , Great chlorophyll, entecavir, lamivudine, β-carotene, vitamin E, phosphatidylcholine, S-gland glycoside methionine, prostaglandin, prostaglandin E2, colchicine, estrogen, angiotensin II receptor inhibitor, sympathomimetic, interferon, prolyl -4-Hydroxylase Control agents include heparin, Shirubinin, ursodeoxycholic acid. The fibrosis includes lung fibrosis, renal fibrosis, liver fibrosis, and cardiac fibrosis.

本発明のハマナツメ抽出物が双方向免疫調節作用を持つ薬物に応用される場合、具体的に免疫機能低下及び／或いは自己免疫性疾患薬物への応用時、特に免疫機能異常による免疫機能低下及び／或いは自己免疫疾患の薬物の製造に応用される。上記の免疫機能異常による免疫機能低下には感冒、体のだるさ、腫瘍、エイズ等が含まれる。上記の免疫機能以外の自己免疫疾患にはリウマチ性関節炎、エリテマトーデス、硬皮症、甲状腺機能亢進、青少年糖尿病、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、潰瘍性結腸炎、慢性肝疾患等が含まれる。 When the extract of Aspergillus niger according to the present invention is applied to a drug having a two-way immunomodulatory action, specifically when applied to a drug having reduced immune function and / or an autoimmune disease, particularly, the immune function is reduced due to abnormal immune function and / or Alternatively, it is applied to the manufacture of drugs for autoimmune diseases. The above-mentioned impaired immune function due to the abnormal immune function includes cold, body slump, tumor, AIDS and the like. Autoimmune diseases other than the above immune functions include rheumatoid arthritis, lupus erythematosus, scleroderma, hyperthyroidism, adolescent diabetes, idiopathic thrombocytopenic purpura, autoimmune hemolytic anemia, ulcerative colitis, chronic liver Diseases and the like are included.

上記の技術プロトコルのうち、ハマナツメ抽出物が抗腫瘍活性物として製薬される場合、ハマナツメ全体或いはそのうちの一部を薬剤の原料として使用でき、優先的に葉を原材料として使用する。 In the above technical protocol, when the extract of Aspergillus niger is formulated as an antitumor active, the whole or part of Aspergillus japonicus can be used as a raw material of a drug, and leaves are preferentially used as a raw material.

根、茎、葉全部或いはいかなる部分を含むハマナツメ全体を原料とする場合、ハマナツメ抽出物は以下の方法で得ることができる。新鮮品、或いは冷凍乾燥品のハマナツメの根、茎、葉全部或いはハマナツメ全体のいかなる部分を採取し、使用に備える。製造時に前記の処理済みハマナツメ新鮮品或いは冷凍乾燥品を有機溶媒で抽出する。或いはハマナツメ新鮮品或いは冷凍乾燥品を直接有機溶媒で抽出し、ハマナツメ抽出物を得る。有機溶媒を用いて抽出する方法は浸漬法、回流法、濾過法等の本分野で一般的な抽出方法を使用する。 In the case of using the root, stem, leaf, or all parts of the jujuba as a raw material, the jujuba extract can be obtained by the following method. Collect fresh or freeze-dried roots, stems, leaves, or any part of the whole hazelnut and prepare it for use. At the time of manufacture, the above-mentioned processed fresh cucumbers or freeze-dried products are extracted with an organic solvent. Alternatively, a fresh or freeze-dried clover is directly extracted with an organic solvent to obtain a clover extract. As a method of extracting using an organic solvent, a general extraction method in this field such as a dipping method, a circulating method, and a filtration method is used.

上記のハマナツメは有機溶剤で処理する前に優先的に新鮮品或いは冷凍乾燥品を選択する。 Prior to treatment with the organic solvent, fresh cucumbers or freeze-dried crabs are preferentially selected.

上記の有機溶剤はメタノール、エタノール、イソアルコール、酢酸エチル、ベンジン等で、優先的に５０−９５％のエタノールを選択し、最優先に９５％のエタノールを使用する。 The organic solvent is methanol, ethanol, isoalcohol, ethyl acetate, benzine or the like, and 50-95% ethanol is preferentially selected, and 95% ethanol is used most preferentially.

ハマナツメ抽出物は優先的に以下の方法で製造する：
新鮮なハマナツメ全体を採取し、８−１０倍量の９５％エタノールに１日浸漬し、その後ハマナツメを粉砕し、さらに６−１０倍量の９５％エタノールに２−３日浸漬する。抽出液を収集し、減圧して溶液を回収する。得られた抽出物濃縮液を乾燥させることでハマナツメエタノール抽出物を得る。そのうち、乾燥方法は減圧乾燥、冷凍乾燥、噴霧乾燥、マイクロウェイブ乾燥に限定されない。 Sorghum extract is preferentially produced by the following method:
The whole fresh jujube is collected, immersed in 8-10 times the amount of 95% ethanol for 1 day, then ground, and further immersed in 6-10 times the amount of 95% ethanol for 2-3 days. Collect the extract and decompress to collect the solution. By drying the obtained extract concentrate, an ethanol extract of Citrus jujuba is obtained. Among them, the drying method is not limited to vacuum drying, freeze drying, spray drying, and microwave drying.

更に優先的には新鮮なハマナツメ茎葉を選択し、８倍量の９５％エタノールに１日浸漬させ、ハマナツメを粉砕する。さらに１０倍量の９５％エタノールで抽出し、回流抽出し、抽出液を回収する。６０℃下で減圧し、エタノールを回収し、抽出物の濃縮液を得る。乾燥後、ハマナツメメタノール抽出物を得ることができる。 Further preferentially, fresh shoots are selected and immersed in eight times the volume of 95% ethanol for one day to grind the hazelnut. Further, extraction is performed with a 10-fold amount of 95% ethanol, circulating extraction is performed, and the extract is recovered. The pressure is reduced at 60 ° C., and the ethanol is collected to obtain a concentrate of the extract. After drying, a methanol extract of Citrus jujuba can be obtained.

さらに、ハマナツメエタノール抽出物を水に分散させた後、ベンジン、酢酸エチルを順に使って抽出し、濃縮後に乾燥させることでベンジン抽出物或いは酢酸エチル抽出物を得ることができる。 Further, after dispersing the ethanol extract of Citrus jujuba in water, the extract is extracted with benzene and ethyl acetate in that order, concentrated, and dried to obtain a benzene extract or an ethyl acetate extract.

詳細なエタノール抽出物のステップとして、
（１）ハマナツメ葉片を採取し、５−１５倍量の５０％−９５％エタノールに浸漬する。
（２）葉片を粉砕し、５−１５倍量の５０％−９５％のエタノールに浸漬し、エタノール溶性成分を抽出する。
（３）抽出液を収集し、３０−７０℃下で減圧し、エタノール臭がしなくなるまでエタノールを回収し、抽出物を得る。
（４）抽出物濃縮液を更に冷凍乾燥させ、ハマナツメ葉片アルコール抽出物を得る。 As a detailed ethanol extract step,
(1) A leaf piece of Scutellaria is collected and immersed in 5 to 15 volumes of 50% to 95% ethanol.
(2) The leaf pieces are pulverized and immersed in 5 to 15 times the volume of 50% to 95% ethanol to extract ethanol-soluble components.
(3) The extract is collected, the pressure is reduced at 30 to 70 ° C., and ethanol is collected until the smell of ethanol is no longer present, to obtain an extract.
(4) The extract concentrate is further freeze-dried to obtain an alcohol extract of Leaf clover.

さらに、上記の中医薬抽出物はベンジン或いは酢酸エチルを使って抽出処理を行う。中医薬抽出物はベンジン、酢酸エチル、ブタノールによって抽出し、回収した溶剤を冷凍乾燥し、３つの極性部位の抽出物を得る。いずれもイソアルコールで溶解し、それぞれの腫瘍細胞に対する抑制効果を測定したところ、該中医薬抽出物のベンジン部分と酢酸エチル部分とに良好な抗腫瘍活性が認められ、ブタノール抽出部位には抗腫瘍活性が認められなかった。酢酸エチル部位の抗腫瘍活性が最も良かった。 Further, the above-mentioned Chinese medicine extract is subjected to an extraction treatment using benzene or ethyl acetate. The Chinese medicine extract is extracted with benzene, ethyl acetate and butanol, and the recovered solvent is freeze-dried to obtain extracts of three polar sites. All were dissolved in isoalcohol, and the inhibitory effect on each tumor cell was measured. As a result, good antitumor activity was observed in the benzene portion and the ethyl acetate portion of the medicinal extract. No activity was observed. The antitumor activity at the ethyl acetate site was the best.

さらに、上記ハマナツメ抽出物の主な成分には三テルペノイド類、フラボン類、アルカロイド類及びクマリン類が含まれる。 In addition, the main components of the extract of Astragalus include triterpenoids, flavones, alkaloids and coumarins.

上記の技術プロトコルにおいて、該ハマナツメ抽出物を抗線維化薬物に応用した場合、ハマナツメ植物全体或いは任意の一部を原材料にする場合、優先的に葉を原材料とする。 In the above technical protocol, when the extract is applied to an anti-fibrotic drug or when the whole or any part of the plant is used as a raw material, leaves are preferentially used as a raw material.

根、茎、葉全部或いはハマナツメ全体の任意の一部を原材料にする場合、ハマナツメ抽出物は以下の方法で得られる。新鮮品或いは冷凍乾燥した根、茎、葉全部或いはハマナツメ全体の任意の一部を準備し、使用時に上記の予備処理したハマナツメ新鮮品或いは冷凍乾燥品を有機溶媒に浸漬して抽出する。或いはハマナツメ新鮮品又は冷凍乾燥品を直接有機溶媒に浸漬し、ハマナツメ抽出物を得る。有機溶媒抽出の方法は浸漬法、回流法、濾過法等に限らず、本分野の一般的な抽出方法を使用してもよい。 When the whole root, stem, leaf, or any part of the whole jujube is used as a raw material, the extract of jujube is obtained by the following method. Fresh or freeze-dried whole roots, stems, leaves, or any part of the whole jujube are prepared, and the above-mentioned pretreated fresh or freeze-dried jujube is immersed in an organic solvent and extracted at the time of use. Alternatively, a fresh or freeze-dried cucumbers is directly immersed in an organic solvent to obtain a crab extract. The method for extracting the organic solvent is not limited to the dipping method, the circulation method, the filtration method, and the like, and a general extraction method in this field may be used.

上記のハマナツメに有機溶媒処理を行う場合、優先的に新鮮品或いは冷凍乾燥品を使用する。 When an organic solvent treatment is applied to the above seaweed, fresh or freeze-dried products are preferentially used.

上記の有機溶剤はメタノール、１０−１００％エタノールから優先的に選び、優先的に９５％のエタノールを選択する。 The organic solvent is preferentially selected from methanol, 10-100% ethanol, and preferentially 95% ethanol.

ハマナツメ抽出物は以下の方法で優先的に製造する。新鮮なハマナツメ全体を採取し、８−１０倍量の９５％エタノールで１日浸漬し、ハマナツメを粉砕し、さらに６−１０倍量の９５％エタノールに２−３日浸漬し、抽出液を採取し、減圧して溶剤を回収することで、抽出物の濃縮液を得る。これを乾燥させることでハマナツメエタノール抽出物を得る。このときの乾燥方法は減圧乾燥、冷凍乾燥、噴霧乾燥、マイクロウェイブ乾燥に限らない。 The pickle extract is preferentially produced by the following method. The whole fresh jujube is collected, immersed in an 8-10 volume of 95% ethanol for 1 day, pulverized, and then immersed in a 6-10 volume of 95% ethanol for 2 to 3 days to collect the extract Then, the concentrated solution of the extract is obtained by collecting the solvent under reduced pressure. This is dried to obtain an ethanol extract of Citrus jujuba. The drying method at this time is not limited to vacuum drying, freeze drying, spray drying, and microwave drying.

優先的に新鮮なハマナツメ茎葉を選択し、８倍量の９５％エタノールに１日浸漬し、ハマナツメを粉砕し、１０倍量の９５％エタノールで抽出し、回流抽出する。抽出液を収集し、６０℃下で減圧し、アルコール臭がしなくなるまでエタノールを回収する。得られた抽出濃縮液を乾燥させた後ハマナツメエタノール抽出物を得る。 Preferentially, fresh shoots are selected and immersed in 8 volumes of 95% ethanol for 1 day, pulverized, extracted with 10 volumes of 95% ethanol, and circulated. The extract is collected, the pressure is reduced at 60 ° C., and ethanol is recovered until the alcohol odor stops. After drying the obtained concentrated extract, an ethanol extract of Citrus jujuba is obtained.

優先的に新鮮なハマナツメ茎葉を選択し、８倍量のメタノールに１日浸漬し、ハマナツメを粉砕、１０倍量のメタノールで抽出し、回流抽出する。抽出液を収集し、６０℃下で減圧し、アルコール臭がしなくなるまでメタノールを回収する。得られた抽出濃縮液を乾燥させた後ハマナツメメタノール抽出物を得る。 Preferentially, fresh shoots are selected and immersed in 8 times the volume of methanol for 1 day, pulverized, extracted with 10 times the volume of methanol, and circulated. The extract is collected, the pressure is reduced at 60 ° C., and methanol is recovered until the alcohol odor stops. After drying the obtained concentrated extract, a methanol extract of Citrus jujuba is obtained.

更に説明すると、ハマナツメエタノール抽出物を水分散させた後、ベンジン、酢酸エチルで抽出し、濃縮後乾燥させることでベンジン抽出物或いは酢酸エチル抽出物を得ることができる。 In more detail, after dispersing the ethanol extract of Scutellaria in water, the extract is extracted with benzene and ethyl acetate, concentrated and dried to obtain a benzene extract or an ethyl acetate extract.

上記技術プロトコルにおいて、該ハマナツメ抽出物で抗真菌薬物を製造する場合、ハマナツメ全体或いはその一部を原材料とし、優先的に葉を原材料とする。 In the above technical protocol, when an antifungal drug is produced from the extract of Aspergillus niger, whole or part of Aspergillus japonica is used as a raw material, and leaves are used as a raw material preferentially.

ハマナツメ抽出物の製造方法：
ハマナツメ全体或いはその任意の一部を採取し、ハマナツメの体積の１−２０倍量のメタノール或いはエタノールし、或いはメタノール或いはエタノール抽出物に対して酢酸エチル或いはベンジンで抽出する。抽出液を濃縮後乾燥させることで、ハマナツメ抽出物を製造できる。 Production method of Shrimp extract:
The whole or any part thereof is collected and extracted with methanol or ethanol in an amount of 1 to 20 times the volume of the jujube or extracted with ethyl acetate or benzene for the methanol or ethanol extract. By concentrating the extract and drying it, an extract of Dictyostelium can be produced.

前述したハマナツメは優先的に新鮮品、冷凍乾燥品或いはメタノール或いはエタノール処理をしたサンプルを使用する。前述した抽出方法は浸漬、回流、濾過である。前述した乾燥方法は減圧乾燥、冷凍乾燥、噴霧乾燥或いはマイクロウェイブ乾燥である。 The above-mentioned Sesame Jujube preferentially uses fresh products, freeze-dried products or samples treated with methanol or ethanol. The aforementioned extraction methods are immersion, circulation, and filtration. The drying method described above is vacuum drying, freeze drying, spray drying or microwave drying.

前記で製造したハマナツメ抽出物にはテルペノイド類、フラボン類、アルカロイド類、クマリン類及びテルペノイド類、フラボン類、アルカロイド類、クマリン類のグリコシド類と単体とが含まれる。 The extract of Aspergillus niger produced above includes terpenoids, flavones, alkaloids, coumarins and terpenoids, flavones, alkaloids, glycosides of coumarins and simple substances.

前述のハマナツメ抽出物の各種製剤にはハマナツメ抽出物タブレット、顆粒剤、軟膏剤、凝固剤、塗膜剤、湿布剤、洗剤と噴霧剤が含まれる。 The various preparations of the above-mentioned extract of Sorghum include a tablet of Sorghum extract, granules, ointment, coagulant, coating agent, poultice, detergent and spray.

本発明において、ハマナツメ抽出物の抗真菌活性と各種製剤への抗真菌活性の応用とを提供する。前述したハマナツメ抽出物はハマナツメメタノール、エタノール、酢酸エチル、ベンジン或いは類似溶媒抽出物である。ハマナツメ新鮮品、冷凍乾燥品、メタノール（エタノール）或いはその他の有機溶媒予備処理したサンプルを原料とし、有効成分の安定性を確保する。 In the present invention, an antifungal activity of the extract of Aspergillus niger and application of the antifungal activity to various preparations are provided. The aforementioned extract of Citrus jujuba is an extract of Citrus jujuba, methanol, ethanol, ethyl acetate, benzene or a similar solvent. The stability of the active ingredient is ensured using fresh cucumbers, freeze-dried products, samples of methanol (ethanol) or other organic solvent pretreated as raw materials.

上記技術プロトコルにおいて、該ハマナツメ抽出物を免疫機能低下或いは／及び自己免疫性疾患の薬物に応用する場合、ハマナツメ全体或いはその一部を薬剤の原料として使用し、優先的に葉を薬剤の原料とする。 In the above-mentioned technical protocol, when the extract of Aspergillus japonicus is applied to a drug for immunologically impaired or / and autoimmune disease, whole or part of Aspergillus japonicus is used as a drug material, and leaves are preferentially used as a drug material. I do.

ハマナツメ抽出物の製造方法は以下の通り。ハマナツメ全体或いは一部を採取し、ハマナツメの体積の１−２０倍量のメタノール或いはエタノールで採取し、或いはメタノール或いはエタノール抽出物に対して酢酸エチル或いはベンジンで抽出する。抽出液を濃縮後乾燥させ、ハマナツメ抽出物を製造できる。 The method for producing the crab extract is as follows. The whole or a part of the jujube is collected and collected with methanol or ethanol of 1 to 20 times the volume of the jujube, or the methanol or ethanol extract is extracted with ethyl acetate or benzene. The extract is concentrated and then dried to produce an extract of Dictyostelium.

前記で製造したハマナツメ抽出物にはテルペノイド類、フラボン類、アルカロイド類、クマリン類及テルペノイド類、フラボン類、アルカロイド類、クマリン類のグリコシド類と単体とが含まれる。 The extract of Aspergillus japonica produced as described above contains terpenoids, flavones, alkaloids, coumarins and terpenoids, flavones, alkaloids, glycosides of coumarins and simple substances.

前述のハマナツメ抽出物の各種製剤にはハマナツメ抽出物タブレット、顆粒剤、軟膏剤、凝固剤、塗膜剤、湿布剤、洗剤及び噴霧剤が含まれる。 The various preparations of the above-mentioned extract of Citrus jujuba include tablets of Citrus jujuba extract, granules, ointments, coagulants, coatings, poultices, detergents and sprays.

前述したハマナツメ抽出物の応用において、免疫機能低下関連疾患或いは／及び自己免疫性疾患の薬物の製造に、ハマナツメ抽出物は単独で或いはハマナツメ抽出物を主な活性成分として薬物構成や治療免疫機能低下関連疾患或いは／及び自己免疫性疾患の薬物に組み合わせて、応用できる。 In the above-mentioned application of the extract of S. jujube, the preparation of S. jujube extract alone or using the extract of S. jujuba as a main active ingredient in the production of a drug for a disease associated with reduced immune function and / or an autoimmune disease, the decrease in the drug composition or therapeutic immune function decline. It can be applied in combination with a drug for a related disease and / or an autoimmune disease.

上記技術プロトコルにおいて、該ハマナツメ抽出物を口腔及び消化器炎症或いは対潰瘍の薬物に応用する場合、ハマナツメ全体或いはその一部を薬剤の原料とし、優先的に葉を薬剤の原料とする。 In the above technical protocol, when the extract of Aspergillus niger is applied to a drug for oral and digestive tract inflammation or anti-ulcer, whole or part of Aspergillus oryzae is used as a raw material of the drug, and leaves are preferentially used as a raw material of the drug.

ハマナツメ抽出物の製造方法は以下の通り：
ハマナツメ全体或いは一部を採取し、ハマナツメの体積の１−２０倍量のメタノール或いはエタノールで抽出し、或いはメタノール或いはエタノール抽出物に対して酢酸エチル或いはベンジンで抽出する。抽出液を濃縮後乾燥させることで、ハマナツメ抽出物を製造できる。製造したハマナツメ抽出物にはテルペノイド類、フラボン類、アルカロイド類、クマリン類及テルペノイド類、フラボン類、アルカロイド類、クマリン類のグリコシド類と単体とが含まれる。 The method for producing the Sorghum jujuba extract is as follows:
The whole or a part of the jujube is collected and extracted with methanol or ethanol of 1 to 20 times the volume of jujube, or the methanol or ethanol extract is extracted with ethyl acetate or benzene. By concentrating the extract and drying it, an extract of Dictyostelium can be produced. The manufactured Sorghum extract contains terpenoids, flavones, alkaloids, coumarins and terpenoids, flavones, alkaloids, glycosides of coumarins, and simple substances.

ハマナツメ抽出物は単独で或いはハマナツメ抽出物を主な活性成分として薬物と組み合わせて、口腔消化器或いは／及び潰瘍薬物に応用することができる。 The extract may be used alone or in combination with a drug as a main active ingredient for oral digestive or / and ulcer drugs.

以下に実例を通した具体的な実施方法を紹介する。本発明の上記内容に対してさらに詳細な説明を行う。説明は本発明を制限しない。 The specific implementation method through examples is introduced below. The above contents of the present invention will be described in more detail. The description does not limit the invention.

以下は本発明のハマナツメ抽出物の成分研究である。
提供したサンプル試液の配合：
抽出物のサンプル１ｇを採取し、２５ｍｌの無水エタノールに溶かし、遠心分離する。上澄み液２ｍｌを採取し、無水エタノールで５倍に希釈する。最終濃度は０．００８ｇ／ｍｌである。 The following is a study of the constituents of the Aspergillus niger extract of the present invention.
Formulation of provided sample reagents:
A 1 g sample of the extract is taken, dissolved in 25 ml of absolute ethanol and centrifuged. Take 2 ml of the supernatant and dilute 5-fold with absolute ethanol. Final concentration is 0.008 g / ml.

（１）三テルペノイド類成分の検査
Ａ．Ｌ−Ｂ反応
サンプルを無水酢酸中に溶かし、濃硫酸-無水酢酸（１：２０）を数滴加え、黄色＞赤＞紫＞青等の変化を確認し、最後色あせることを確認する。これは三テルペノイド類化合物が含まれていることを表している。
Ｂ．Ｋａｈｌｅｎｂｅｒｇ反応
サンプルのクロロホルム或いはアルコール溶液を濾紙の上にたらし、２０％の五塩化アンチモンのクロロホルム溶液（或いは五塩化アンチモンが飽和したクロロホルム溶液）を吹きかけ、乾燥させた後６０−７０℃に加熱し、青くなった場合、三テルペノイド類化合物が含まれていることを示す。
Ｃ．Ｒ−Ｈ反応
サンプル溶液を濾紙の上にたらし、２５％トリクロロ酢酸エタノール溶液を吹きかけ、１００℃まで加熱して、赤色を呈し、少しずつ紫色に変化すれば、三テルペノイド類化合物が含まれていることを示す。
Ｄ．Ｓａｌｋｏｗｋｉ反応
サンプルをクロロホルムに溶かし、濃硫酸を加えたあと、硫酸層で赤色或いは青色を示し、クロロホルム層に蛍光色が出現すれば、三テルペノイド類化合物が含まれていることを示す。
Ｅ．Ｔｓｈμｇａｅｆｆ反応
サンプル溶液を無水酢酸に溶かし、塩化アセチル数滴及び塩化亜鉛結晶を数個加え、微加熱して淡い赤色或いは紫色を呈すれば、三テルペノイド類化合物が含まれていることを示す。 (1) Inspection of triterpenoid components A. LB reaction Dissolve the sample in acetic anhydride, add a few drops of concentrated sulfuric acid-acetic anhydride (1:20), confirm the change of yellow>red>purple> blue, etc., and confirm that the color is faded at the end. This indicates that triterpenoid compounds are contained.
B. Kahlenberg reaction A chloroform or alcohol solution of a sample is dropped on a filter paper, a chloroform solution of 20% antimony pentachloride (or a chloroform solution saturated with antimony pentachloride) is sprayed, dried, and then heated to 60 to 70 ° C. When it turns blue, it indicates that a triterpenoid compound is contained.
C. RH reaction The sample solution was dropped on a filter paper, sprayed with a 25% ethanol solution of trichloroacetic acid, heated to 100 ° C., and turned red, and gradually changed to purple, containing a triterpenoid compound. To indicate that
D. Salkowki reaction After dissolving a sample in chloroform and adding concentrated sulfuric acid, the sulfuric acid layer shows red or blue, and the appearance of a fluorescent color in the chloroform layer indicates that a triterpenoid compound is contained.
E. FIG. Tsh μgaeff reaction A sample solution is dissolved in acetic anhydride, a few drops of acetyl chloride and several zinc chloride crystals are added, and when slightly heated to give a pale red or purple color, it indicates that a triterpenoid compound is contained.

（２）フラボン類成分の検査
Ａ．塩酸-マグネシウム粉末還元反応（還元反応）
少量のサンプルを１ｍｌエタノール中にとかし、少量のマグネシウム粉末と濃塩酸を加え、容器を振って液体の色を観察する。赤紫色になった場合、フラボン類化合物が含まれていることを示す。
Ｂ．三塩化アルミニウム反応（金属イオンの絡合反応）
ガラス棒でサンプル溶液をすくい、濾紙に塗る。風乾させ、１％の三塩化アルミニウムエタノール溶液を吹きかけ、乾燥させ、観察する。紫外線ライト下で鮮明な黄色になった場合、フラボン類化合物が含まれていることを示す。
Ｃ．三塩化鉄反応（金属イオンの絡合反応）
ガラス棒でサンプル溶液をすくい、濾紙に塗る。風乾させ、３％の三塩化鉄エタノール溶液を吹きかけ、乾燥させると、暗い青色の蛍光斑点が現れ、これにアンモニアを吹きかけると茶色の蛍光斑点になった場合、フラボン類化合物が含まれていることを示す。
Ｄ．アルカリ性試験剤
ガラス棒でサンプル溶液をすくい、濾紙にぬる。乾燥させた後、水酸化ナトリウム水溶液を吹きかけるか、アンモニア蒸気中に曝露し、蛍光灯下で観察すると、アンモニア蒸気がサンプルの色を黄色に変色させるならば、フラボン類化合物が含まれていることを示す。 (2) Inspection of flavone components A. Hydrochloric acid-magnesium powder reduction reaction (reduction reaction)
Dissolve a small amount of sample in 1 ml of ethanol, add a small amount of magnesium powder and concentrated hydrochloric acid, shake the container, and observe the color of the liquid. When it becomes reddish purple, it indicates that flavone compounds are contained.
B. Aluminum trichloride reaction (entanglement reaction of metal ions)
Scoop the sample solution with a glass rod and apply it to the filter paper. Air dry, spray with 1% ethanolic aluminum trichloride solution, dry and observe. A bright yellow color under ultraviolet light indicates the presence of flavone compounds.
C. Iron trichloride reaction (entanglement reaction of metal ions)
Scoop the sample solution with a glass rod and apply it to the filter paper. When air-dried and sprayed with 3% ethanolic iron trichloride solution and dried, dark blue fluorescent spots appear. Spraying ammonia turns brown fluorescent spots, containing flavones. Is shown.
D. Alkaline test agent Scoop the sample solution with a glass rod and wet the filter paper. After drying, spray a sodium hydroxide aqueous solution or expose to ammonia vapor and observe under a fluorescent lamp.If the ammonia vapor changes the color of the sample to yellow, it should contain flavone compounds. Is shown.

（３）アルカロイド類成分の検査
Ａ．ドラーゲンドルフ法
１．次硝酸ビスマス０．８５ｇを無水酢酸１０ｍｌと４０ｍｌの水に溶かす。２．ヨウ化カリウム８ｇを２０ｍｌの水に溶かす。溶液１と溶液２を等量混合し、遮光瓶に移し貯蔵液とする。使用前に１ｍｌの貯蔵液、４ｍｌの無水酢酸と１２ｍｌの水と混合する。サンプル溶液を前述の試験溶剤に加えると、赤茶色になり、蒸留水を加え振ると沈殿が見られるならば、アルカロイド類化合物が含まれていることを示す。
Ｂ．ヨード-ヨウ化カリウム（Ｗａｇｎｅｒ）法
ヨード１ｇとヨウ化カリウム１０ｇを５０ｍｌの水に溶かし、２ｍｌの酢酸を加え、水を１００ｍｌまで加える。上記試験剤を適量採取し、１ｍｌのサンプル溶液を加えて茶色になった場合、アルカロイド類化合物があることを示す。
Ｃ．タングストケイ酸（Ｂｅｒｔｒａｎｄ）法
５ｇのタングストケイ酸を１００ｍｌの水に溶かし、濃塩酸少量を加えｐＨ＝２前後に調整する。上記試験剤を適量採取し、１ｍｌのサンプル液を加え褐色になった場合、アルカロイド類化合物が含まれていることを示す。 (3) Inspection of Alkaloid Components A. Dragendorf method 1. 0.85 g of bismuth subnitrate is dissolved in 10 ml of acetic anhydride and 40 ml of water. 2. Dissolve 8 g of potassium iodide in 20 ml of water. Equal amounts of Solution 1 and Solution 2 are mixed and transferred to a light-shielding bottle to obtain a stock solution. Before use mix 1 ml stock solution, 4 ml acetic anhydride and 12 ml water. If the sample solution is added to the test solvent described above, it turns reddish brown, and if distilled water is added and shaken, a precipitate is observed, indicating that the alkaloid compound is contained.
B. Iodine-potassium iodide (Wagner) method 1 g of iodine and 10 g of potassium iodide are dissolved in 50 ml of water, 2 ml of acetic acid is added, and water is added to 100 ml. An appropriate amount of the above test agent was collected, and when 1 ml of the sample solution was added and turned brown, it indicates that an alkaloid compound was present.
C. Tungstosilicic acid (Bertrand) method 5 g of tungstosilicic acid is dissolved in 100 ml of water, and a small amount of concentrated hydrochloric acid is added to adjust the pH to about 2. An appropriate amount of the above test agent was collected, and 1 ml of the sample solution was added to turn brown, indicating that an alkaloid compound was contained.

（４）クマリン類成分の検査
Ａ．ヒドロキサム酸鉄反応
１ａ．塩酸ヒドロキシルアミン２０ｇを５０ｍｌの水に溶かし、エタノールを用いて２００ｍｌに希釈し、冷蔵する。１ｂ．水酸化カリウム５０ｇを少量の水に溶かし５００ｍｌのエタノールを加える。２．塩化鉄（ＦｅＣｌ_３・６Ｈ_２Ｏ）１０ｇを２０ｍｌの３６％の塩酸溶液中に溶かし、ジエチルエーテル２００ｍｌを加え、混合し、密封容器に保存する。使用時に試液１ａと１ｂを１：２の割合で混合し、沈殿物を濾過し、濾液を冷蔵庫に保管する。ガラス棒でサンプルをすくい取り濾紙に塗り、ａｂ混合液を噴霧し、乾かし、再度試液２を噴霧した時、赤色を呈すれば、クマリン類化合物を含まれていることを示す。
Ｂ．ジアゾ化反応
１．２-ニトロアニリン０．３５ｇを濃塩酸５ｍｌに加え、水を５０ｍｌまで加える。
２．亜硝酸ナトリウム５ｇに水５０ｍｌを加え、１、２液を等量採取し、コールドウォーターバス内で混合する。少量のサンプル液を採取し、ジアゾ化試験剤を加え、赤オレンジ色を呈した場合、クマリン類化合物が含まれていることを示す。
上記の研究により、本発明ハマナツメ抽出物の主な成分にはフラボン類、テルペノイド類、アルカロイド類、クマリン類、また、上記のフラボン、テルペノイド、アルカロイド、クマリンのグリコシド体及び単体成分の他に多糖類和セルロースが含まれていることが分かった。 (4) Inspection of Coumarin Components A. Iron hydroxamate reaction 1a. Dissolve 20 g of hydroxylamine hydrochloride in 50 ml of water, dilute to 200 ml with ethanol and refrigerate. 1b. Dissolve 50 g of potassium hydroxide in a small amount of water and add 500 ml of ethanol. 2. Dissolve 10 g of iron chloride (FeCl ₃ .6H ₂ O) in 20 ml of 36% hydrochloric acid solution, add 200 ml of diethyl ether, mix and store in a sealed container. At the time of use, sample solutions 1a and 1b are mixed at a ratio of 1: 2, the precipitate is filtered, and the filtrate is stored in a refrigerator. The sample was scooped with a glass rod, applied to filter paper, sprayed with the ab mixture, dried, and sprayed with test solution 2 again. When it showed a red color, it indicates that it contained a coumarin compound.
B. Diazotization reaction 0.35 g of 1.2-nitroaniline is added to 5 ml of concentrated hydrochloric acid, and water is added up to 50 ml.
2. 50 ml of water is added to 5 g of sodium nitrite, 1 and 2 liquids are collected in equal amounts, and mixed in a cold water bath. A small amount of a sample solution is collected, a diazotization test agent is added, and a red-orange color indicates that a coumarin compound is contained.
According to the above research, the main components of the extract of Aspergillus japonica of the present invention include flavones, terpenoids, alkaloids, and coumarins, and also the above-mentioned flavones, terpenoids, alkaloids, glycosides and single components of coumarin as well as polysaccharides. It was found that Japanese cellulose was contained.

Ｉ．ハマナツメ葉抽出物の抗腫瘍活性
１．ハマナツメ葉片抽出
（１）ハマナツメ新鮮葉１ｋｇを採取し、８−１０倍量の９５％エタノールに１−２日浸漬（作用：１．新鮮な葉の活性酵素を無効化し、有効成分の破壊を防ぐ、２．新鮮葉の硬度を高め、粉砕に有利にする）し、新鮮葉を粉砕する。再度１０倍量の９５％エタノール（６０−１００％のエタノール抽出）で３日間浸漬し、エタノール溶性成分を抽出する。抽出物を収集し、３０−４０℃にてエタノールをアルコール臭がない状態まで回収し、得た抽出物濃縮液をさらに冷凍乾燥させることで、ハマナツメの新鮮葉エタノール抽出物を得る。
（２）残滓を陰干しし、８−１０倍の水で３日間浸漬し水溶性成分を採取する。採取液を収集し、冷凍乾燥させることでハマナツメ新鮮葉水抽出物を得る。
（３）ハマナツメ葉乾燥品（室温自然乾燥）を上記の方法で抽出し、ハマナツメ葉乾燥エタノール抽出物と水抽出物を得る。
（４）ハマナツメ新鮮葉をエタノール浸漬し、陰干しすることで、干し葉片を得る。得られたハマナツメをエタノール浸漬させ、陰干したものを上記の方法で抽出し、エタノール及び水抽出物を得る。 I. Anti-tumor activity of Scutellaria leaf extract Extract of Leaf Jujube Leaf (1) Extract 1 kg of Leaf Jujube Fresh Leaves and immerse them in 8-10 volumes of 95% ethanol for 1-2 days (Action: 1. Inactivate the active enzymes of fresh leaves and prevent destruction of active ingredients) 2. Increase the hardness of the fresh leaves, which is advantageous for grinding) and grind the fresh leaves. It is immersed again in a 10-fold amount of 95% ethanol (60-100% ethanol extraction) for 3 days to extract ethanol-soluble components. The extract is collected, ethanol is recovered at 30 to 40 ° C. until there is no alcohol odor, and the extract concentrate obtained is further freeze-dried to obtain an ethanol extract of fresh leaves of Sorghum.
(2) The residue is shaded and immersed in 8-10 times water for 3 days to collect water-soluble components. The collected liquid is collected and freeze-dried to obtain a fresh leaf water extract of Citrus jujuba.
(3) Extract dried dried jujube leaves (natural drying at room temperature) by the above method to obtain dry ethanol extract of jujube leaves and water extract.
(4) The fresh leaves of Solanum jujuta are immersed in ethanol and dried in the shade to obtain dried leaf pieces. The resulting cichlids are immersed in ethanol, and the shaded ones are extracted by the above method to obtain an ethanol and water extract.

２．抗腫瘍活性
ハマナツメ葉片抽出物の抗腫瘍活性研究を比較した。成長期の多種腫瘍細胞を採取（子宮頸癌株Ｈｅｌａ、ヒト肝癌細胞株ＳＭＭＣ−７７２１、ヒト肺癌細胞株Ａ５４９、ヒト結腸癌細胞株Ｃａｃｏ−２、白血病細胞株ＫＳ５６２、胃癌細胞株ＭＧＣ−８０３を使用）し、２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１０％の胎牛血清を含む相応の培養液で沈殿細胞の濃度を１×１０^５個/ｍｌの細胞懸濁液に調整した後、細胞を９６ウェルの培養プレートに接種する。各ウェルに細胞懸濁液２００μｌ注入し、その後一定濃度の無菌抽出物溶液を加える。各ウィルの抽出物最終濃度を０．０２、０．１、０．２、０．４、０．５、０．８、１．０、２．０ｍｇ／ｍｌにし、混合後３７℃、５％ＣＯ_２の培養器の中で２４時間培養したあと、培養液を吸い出しＰＢＳで二度洗浄する。再度各ウィルに５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴリン酸緩衝液２９μｌと１５０μｌの培養液を加え、同様の条件下で４時間培養し、培養を終了する。２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、培養プレートのウィル内の培養液を捨て、各ウィルに１５０μｌのＤＭＳＯを加え、１０分間振動させ、形成されたホルマザン顆粒を十分に溶解させた後、酵素計測器で吸光度を計測する。選択する波長は５７０ｎｍである。抽出物の腫瘍細胞に対するＩＣ５０を計算した。結果は表１を参照する。 2. Anti-tumor activity The anti-tumor activity studies of Aspergillus leaf extract were compared. Harvesting various types of tumor cells in the growing period (cervical cancer cell line Hela, human liver cancer cell line SMMC-7721, human lung cancer cell line A549, human colon cancer cell line Caco-2, leukemia cell line KS562, gastric cancer cell line MGC-803 After centrifugation at 2000 rpm for 5 minutes and adjusting the concentration of the precipitated cells to a cell suspension of 1 × 10 ⁵ cells / ml with an appropriate culture medium containing 10% fetal calf serum, Inoculate well culture plates. Inject 200 μl of cell suspension into each well, then add a certain concentration of sterile extract solution. The final concentration of the extract in each wheel was 0.02, 0.1, 0.2, 0.4, 0.5, 0.8, 1.0, 2.0 mg / ml. After culturing for 24 hours in a CO ₂ incubator, the culture is aspirated and washed twice with PBS. Again, 29 μl of a 5 mg / ml MTT phosphate buffer and 150 μl of a culture solution are added to each wheel, and the cells are cultured under the same conditions for 4 hours, and the culture is completed. After centrifugation at 2000 rpm for 5 minutes, the culture solution in the culture plate wheel was discarded, 150 μl of DMSO was added to each wheel, and the mixture was shaken for 10 minutes to sufficiently dissolve the formed formazan granules. Measure the absorbance. The wavelength selected is 570 nm. The IC50 of the extract on tumor cells was calculated. The results refer to Table 1.

結果からわかるように、ハマナツメ新鮮葉エタノール抽出物及びハマナツメ葉片のエタノール浸漬及び陰干しエタノール抽出物は良好な腫瘍抑制作用を持つが、その他の抽出物は抗腫瘍活性を持たなかった。分析の結果、活性抽出物の溶解性と安定性に原因があると思われる。 As can be seen from the results, the fresh leaf ethanol extract and the ethanol immersed and shade-dried ethanol extract of the leaf extract had good tumor-suppressing activity, but the other extracts had no antitumor activity. Analysis indicates that the solubility and stability of the active extract may be due.

３．ハマナツメ葉片エタノール抽出物の成分含有量測定
（１）三テルペノイド類成分含有量の測定
本サンプル粉末を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、１０ｍｌ容器内に移す。酢酸エチルを一定値まで加え、精密に４ｍｌの溶液を採取し、１０ｍｌの容器に移す。溶剤を揮発させた後、５％バニリン-無水酢酸０．４ｍｌ、過塩素酸１．６ｍｌを加え混ぜ合わせる。酢酸エチルで一定値まで希釈し、７０℃の恒温ウォーターバスで１５分加熱し、冷却して室温に戻す。１０ｍｌの容器に移し、酢酸エチルを一定値まで加えて希釈し、混ぜ合わせる。５４０ｎｍの波長で吸光度を計測し、サンプル溶液中の総三テルペノイド含有量（三テルペノイドはｃｅａｎｏｔｈｉｃａｃｉｄとして計算する）を試算する。結果、１ｇのエタノール抽出物には三テルペノイド類は０．０５２±０．０１０ｇ含まれていた。
（２）フラボン類成分含量測定
本サンプル粉末を０．１ｇずつ、３サンプル（２ｇの生薬に相当）精密に採取し、５０ｍｌ容器内に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷したエタノールを一定値まで加え、混ぜ合わせる。精密に１ｍｌ採取し、１０ｍｌの容器に移し、水を一定量加え、混ぜ合わせる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移し、吸光度を測定し、サンプル溶液中の総フラボン含有量（フラボンの量はルチンで計算する）を算出する。結果、１ｇのエタノール抽出物にはフラボンが０．３２５±０．０４３ｇ含まれていた。
（３）アルカロイド類成分含有量測定
サンプル粉末を１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、密封できるフラスコに移す。１８％のアンモニア水２ｍｌで１時間湿潤させ、ジエチルエーテル：クロロホルム：エタノール（２４：８：２．５）の混合溶液３０ｍｌを加える。超音波で２０分抽出し、傾けて上澄み液をフラスコから出し、再度上記混合溶剤３０ｍｌを加え、３０分冷蔵する。再度超音波振動で２０分抽出し、濾過し、同じ溶剤１５ｍｌで３回残滓と濾紙を洗浄する。濾液と併せてフラスコ内に移す。６０℃のウォーターバスで乾燥させ、正確に１０ｍｌ採取したクロロホルムで完全に溶かし、再度正確に５ｍｌを採取し、漏斗に移す。６ｍｌのクロロホルムを加え、２ｍｌの緩衝液（ｐＨ＝５．０、０．２Ｍフタル酸水素カリウム緩衝液）を加える。１ｍｍｏｌ・Ｌ−１のＢＴＢ溶液で滴定しながら混ぜ合わせ、終点に近付いたらクロロホルム層を分離させ、再度新たにクロロホルム５ｍｌを加え、再度滴定しながら混ぜ合わせる。静止させ分離させ、水の層が黄色くなり始めたら終点である。アルカロイド総数（アルカロイドはハマナツメアルカリＢで計算する）を計算した。結果、１gのエタノール抽出物のアルカロイド類含有量は０．０２８±０．００７ｇであった。
（４）クマリン類成分含有量測定
測定後のクマリン類成分含有量：１％−１０％。 3. Measurement of component content of ethanol extract of leaf extract of Citrus jujuba (1) Measurement of component content of triterpenoids Three 0.1 g samples of this sample powder were collected and transferred into a 10 ml container. Ethyl acetate is added to a certain value, and precisely 4 ml of the solution is collected and transferred to a 10 ml container. After evaporating the solvent, 0.4 ml of 5% vanillin-acetic anhydride and 1.6 ml of perchloric acid are added and mixed. Dilute to a constant value with ethyl acetate, heat in a constant temperature water bath at 70 ° C. for 15 minutes, cool to room temperature. Transfer to a 10 ml container, add ethyl acetate to a constant value, dilute and mix. The absorbance is measured at a wavelength of 540 nm, and the total triterpenoid content in the sample solution is calculated (triterpenoids are calculated as cyanothic acid). As a result, 1 g of the ethanol extract contained 0.052 ± 0.010 g of triterpenoids.
(2) Flavone component content measurement 0.1 g of this sample powder is precisely sampled in three samples (corresponding to 2 g of crude drug) and transferred into a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve by ultrasonication, add cold ethanol to a certain value, and mix. Precisely collect 1 ml, transfer to a 10 ml container, add a certain amount of water and mix. Precisely collect 3 ml, transfer to a 25 ml container, measure the absorbance, and calculate the total flavone content (the amount of flavone is calculated by rutin) in the sample solution. As a result, 0.325 ± 0.043 g of flavone was contained in 1 g of the ethanol extract.
(3) Alkaloid component content measurement 1 g of each sample powder is precisely sampled and transferred to a sealable flask. Wet with 2 ml of 18% aqueous ammonia for 1 hour, and add 30 ml of a mixed solution of diethyl ether: chloroform: ethanol (24: 8: 2.5). The mixture is extracted with ultrasonic waves for 20 minutes, the supernatant liquid is taken out of the flask by tilting, 30 ml of the mixed solvent is added again, and the mixture is refrigerated for 30 minutes. Extract again with ultrasonic vibration for 20 minutes, filter and wash the residue and filter paper three times with 15 ml of the same solvent. Transfer into flask with filtrate. Dry in a water bath at 60 ° C., completely dissolve with exactly 10 ml of chloroform, again collect exactly 5 ml and transfer to funnel. 6 ml of chloroform are added and 2 ml of buffer (pH = 5.0, 0.2 M potassium hydrogen phthalate buffer) are added. Mix while titrating with a 1 mmol L-1 BTB solution. When approaching the end point, separate the chloroform layer, add 5 ml of chloroform again, and mix while titrating again. Let it stand still and let the water layer start to turn yellow, which is the end point. The total number of alkaloids (alkaloids are calculated in Albacore Alkaline B) was calculated. As a result, the content of alkaloids in 1 g of the ethanol extract was 0.028 ± 0.007 g.
(4) Coumarin component content measurement Coumarin component content after measurement: 1% to 10%.

４．ハマナツメ葉片エタノール抽出物の３つの極性部位の抗癌活性研究
ハマナツメ葉片エタノール抽出物をベンジン、酢酸エチル、ｎ−ブチルアルコールの順で抽出し、溶剤を回収した後冷凍する。３つの極性部位の抽出物はイソアルコールで溶解させる。成長期の各種癌細胞を採取（子宮頸癌株Ｈｅｌａ、ヒト肝癌細胞株ＳＭＭＣ−７７２１、ヒト肺癌細胞株Ａ５４９、ヒト結腸癌細胞株Ｃａｃｏ−２、白血病細胞株Ｋ５６２、胃癌細胞株ＭＧＣ−８０３を使用）し、２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１０％の胎牛血清を含む相応の培養液で沈殿細胞の濃度を１×１０個／ｍｌの細胞懸濁液に調整した後、細胞を９６ウェルの培養プレートに接種する。各ウェルに細胞懸濁液２００μｌ注入し、その後一定濃度の無菌抽出物溶液を加える。各ウィルの抽出物最終濃度を０．０２、０．１、０．２、０．４、０．５、０．８、１．０、２．０ｍｌにし、混合後３７℃、５％ＣＯ_２の培養器の中で２４時間培養したあと、培養液を吸い出しＰＢＳで二度洗浄する。再度各ウィルに５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴリン酸緩衝液２０μｌと１５０μｌの培養液を加え、同様の条件下で４時間培養し、培養を終了する。２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、培養プレートのウィル内の培養液を捨て、各ウィルに１５０μｌのＤＭＳＯを加え、１０分間振動させ、形成されたホルマザン顆粒を十分に溶解させた後、酵素計測器で吸光度を計測する。選択する波長は５７０ｎｍである。抽出物の腫瘍細胞に対するＩＣ５０を計算した。結果は表２を参照する。結果からハマナツメ葉片抽出物のベンジン部分と酢酸エチル部位の活性が良く、特に酢酸エチル部位の活性が良かった。ｎ−ブチルアルコールの採取部位は実験濃度範囲内においてＩＣ５０を計測できなかった。我々はさらに酢酸エチルの部分について研究を進める予定である。 4. Studies on anticancer activity of three polar sites of ethanol extract of Leaf clover leaves The ethanol extract of Leaf clover leaves extract is extracted in the order of benzene, ethyl acetate and n-butyl alcohol, and the solvent is recovered and then frozen. The extracts of the three polar sites are dissolved with isoalcohol. Collecting various cancer cells during the growing period (cervical cancer cell line Hela, human liver cancer cell line SMMC-7721, human lung cancer cell line A549, human colon cancer cell line Caco-2, leukemia cell line K562, gastric cancer cell line MGC-803 Used), centrifuged at 2000 rpm for 5 minutes, and adjusted the concentration of precipitated cells to 1 × 10 cells / ml cell suspension with an appropriate culture medium containing 10% fetal bovine serum. Inoculate the culture plate. Inject 200 μl of cell suspension into each well, then add a certain concentration of sterile extract solution. The final concentration of the extract in each wheel was 0.02, 0.1, 0.2, 0.4, 0.5, 0.8, 1.0, 2.0 ml, and after mixing, 37 ° C., 5% CO _2. After culturing for 24 hours in the incubator, the culture solution is sucked out and washed twice with PBS. Again, 20 μl of a 5 mg / ml MTT phosphate buffer and 150 μl of a culture solution are added to each wheel, and the cells are cultured under the same conditions for 4 hours, and the culture is completed. After centrifugation at 2000 rpm for 5 minutes, the culture solution in the culture plate wheel was discarded, 150 μl of DMSO was added to each wheel, and the mixture was shaken for 10 minutes to sufficiently dissolve the formed formazan granules. Measure the absorbance. The wavelength selected is 570 nm. The IC50 of the extract on tumor cells was calculated. See Table 2 for results. From the results, it was found that the activity of the benzine portion and the ethyl acetate portion of the extract of the leaf extract of Sorghum jujuba were good, and particularly the activity of the ethyl acetate portion was good. The IC50 could not be measured at the sampling site of n-butyl alcohol within the experimental concentration range. We will further work on the ethyl acetate part.

５．酢酸エチル極性部位の対ＥＡＣマウスの作用効果研究
腫瘍Ｓ１８０を移植したマウスに対する抑制作用：
昆明種マウスの右腋皮下にＳ１８０懸濁液０．２ｍｌ（約１×１０^６の腫瘍細胞）を上記接種し、接種２４時間後、マウスを分類、ナンバリングし、対照グループとして１０匹、及び実験グループを計３グループに分け、それぞれ大量グループ、中量グループ、低量グループとして各１０匹を振り分け、それぞれのグループに対して胃へのカテーテル投薬を１日１回、計１４回行った。陽性対照グループにはシクロホスファミド（８５ｍｇ／ｋｇ）を毎日胃へのカテーテル投薬を行った。投薬量、回数、時間は実験グループと同じ条件で行った。最終投薬後２４時間後に実験動物を殺処分し、体重計量後、完全に腫瘍を剥離し計量して腫瘍率を調べた。結果は表３を参照する。 5. Study on the effect of ethyl acetate polarity site on EAC mice Inhibitory effect on mice transplanted with tumor S180:
0.2 ml of S180 suspension (approximately 1 × 10 ⁶ tumor cells) was inoculated into the right armpit subcutaneously of Kunming mice, 24 hours after the inoculation, the mice were classified and numbered, and 10 mice were used as a control group and 10 The groups were divided into a total of 3 groups, and 10 mice each were divided into a large amount group, a medium amount group, and a low amount group, and catheter administration to the stomach was performed once a day for each group, a total of 14 times. The positive control group received daily gastric catheterization of cyclophosphamide (85 mg / kg). The dosage, number of times, and time were the same as in the experimental group. Twenty-four hours after the last dose, the experimental animals were sacrificed, and after weighing, the tumor was completely detached and weighed to determine the tumor rate. See Table 3 for results.

II．ハマナツメ全体抽出物の抗腫瘍活性
（実施例１）
ハマナツメ全体１ｋｇを採取し、８倍量の９５％エタノールに１日浸漬し、粉砕する。再度１０倍量の９５％エタノールに２日間浸漬し、抽出液を採取する。５０℃下で減圧し、アルコール臭がなくなるまでエタノールを回収し、乾燥後ハマナツメエタノール抽出物を得る。 II. Antitumor activity of whole extract of Citrus jujuba (Example 1)
One kilogram of the cichlid is collected, immersed in an eight-fold amount of 95% ethanol for one day, and pulverized. It is immersed again in 10 times the volume of 95% ethanol for 2 days, and the extract is collected. The pressure is reduced at 50 ° C., and ethanol is recovered until the alcohol odor disappears.

（実施例２）
ハマナツメ茎葉１ｋｇを採取し、１０倍量の９５％エタノールに１日浸漬し、粉砕する。再度１０倍量の９５％エタノールを加え回流抽出し、抽出液を得る。６０℃下で減圧し、アルコール臭がなくなるまでエタノールを回収し、乾燥後ハマナツメエタノール抽出物を得る。ハマナツメエタノール抽出物に水を加え分散させた後、ベンジン、酢酸エチルで抽出し、ハマナツメベンジン抽出物と酢酸エチル抽出物を得る。 (Example 2)
1 kg of the leaf and leaf of the clover are collected, immersed in 10 times the volume of 95% ethanol for 1 day, and pulverized. A 10-fold amount of 95% ethanol is added again to carry out circulating extraction to obtain an extract. The pressure is reduced at 60 ° C., and ethanol is recovered until the alcohol odor is eliminated. Water is added to and dispersed in the ethanol extract of Citrus jujuba, and the mixture is extracted with benzene and ethyl acetate to obtain an extract of Citrus jujube and an ethyl acetate.

（実施例３）
ハマナツメ全体１ｋｇを採取し、１０倍量のメタノールに１日浸漬し、粉砕する。再度８倍量のメタノールで２日間浸漬し、抽出液を得る。４０℃下でアルコール臭がなくなるまでメタノールを回収し、乾燥後ハマナツメメタノール抽出物を得る。ハマナツメメタノール抽出物に水を加え、ベンジン、酢酸エチルで順次抽出し、ハマナツメベンジン抽出物と酢酸エチル抽出物を得る。 (Example 3)
1 kg of the whole crab is collected, immersed in 10 times the amount of methanol for 1 day, and pulverized. It is immersed again in 8 times the volume of methanol for 2 days to obtain an extract. The methanol is recovered at 40 ° C. until the alcohol odor disappears, and after drying, a methanol extract of Scutellaria jujuba is obtained. Water is added to the methanol extract of Citrus jujuba and extracted with benzene and ethyl acetate sequentially to obtain a extract of Citrus jujube and an ethyl acetate.

（実施例４）
実施例２のハマナツメベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、１０ｍｌの容器に移す。酢酸エチルを一定量加え、精密に４ｍｌ溶液を採取し、１０ｍｌ容器内に移す。溶剤が揮発したあと、５％のバニリン-無水酢酸０．４ｍｌ、過塩素酸１．６ｍｌを加え混ぜ合わせ、酢酸エチルで一定量まで希釈し、７０℃の恒温ウォーターバスで１５分加熱したあと、室温まで冷却する。１０ｍｌの容器に移し酢酸エチルで一定量まで希釈し、混ぜ合わせ、５４０ｎｍの波長で吸光度を計測する。試験液の三テルペノイド含有量（三テルペノイドはｃｅａｎｏｔｈｉｃａｃｉｄとして計算する）を算出する。１ｇのハマナツメ抽出物に含まれる三テルペノイド類成分の含有量は２３ｍｇであった。
実施例２のハマナツメベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、５０ｍｌの容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷し、エタノールを一定量加え混ぜ合わせる。精密に１ｍｌ採取し、１０ｍｌの容器に移す。水を一定量入れ混ぜ合わせる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移す。５１０ｎｍの波長で吸光度を計測し、サンプル中のフラボン含有量（フラボン量はルチンで計算する）を計測する。結果１ｇのハマナツメ抽出物にはフラボンが合計１０３ｍｇ含まれていた。
実施例２のハマナツメベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、コルク付きのフラスコに移す。１８％のアンモニア水で１時間湿潤させ、ジエチルエーテル：クロロホルム：エタノール（２５：８：２．５）の割合の混合溶剤３０ｍｌを加え、超音波抽出を２０分行う。フラスコを傾け、上澄み液を破棄し、再度上記の混合剤を３０ｍｌ加え、３０分放置する。再度超音波振動で２０分抽出し、濾過する。同じ溶剤１５ｍｌで残滓と濾紙を３回洗浄し、フラスコ内の濾液と合わせる。６０℃のウォーターバスで乾燥させ、正確に採取した１０ｍｌのクロロホルムを使って全て溶かし、正確に５ｍｌ採取し、漏斗内に移す。６ｍｌのクロロホルム、２ｍｌの緩衝液(ｐＨ＝５．０，０．２Ｍフタル酸水素カリウム緩衝液)を加える。１ｍｍｏｌ・Ｌ−１のＢＴＢで滴定し、常に揺らし混ぜながら終点に近づいたときにクロロホルム層を分離し、再度新しいクロロホルムを５ｍｌ加え、滴定を続けながら揺らし混ぜる。静止させ分離させて水が黄色くなれば終点である。アルカロイドの総含有量を調べる（アルカロイドはハマナツメアルカリＢで計算する）。結果、１ｇのハマナツメ抽出物のアルカロイド含有量は２１ｍｇであった。
実施例２のハマナツメベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、５０ｍｌの容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷し、エタノールを一定量加え混ぜる。精密に１ｍｌを採取し、１０ｍｌの容器に移す。７０％のエタノールを一定量加え、混ぜ合わせる。３ｍｌを精密に採取し、２５ｍｌの容器に移す。３４０ｎｍ波長で吸光度を測定する。溶液中のクマリン含有量を調べる（クマリン含有量はウンベリフェロンの量で計算する）。結果、１ｇのハマナツメ抽出物にはクマリンが１０．２ｍｇ含まれていた。 (Example 4)
Three samples of the citrus extract of Example 2 were collected in 0.1 g each and transferred to a 10 ml container. A fixed amount of ethyl acetate is added, and a 4 ml solution is precisely collected and transferred into a 10 ml container. After the solvent was volatilized, 5% vanillin-0.4 ml of acetic anhydride and 1.6 ml of perchloric acid were added and mixed, diluted to a certain amount with ethyl acetate, and heated in a constant temperature water bath at 70 ° C. for 15 minutes. Cool to room temperature. Transfer to a 10 ml container, dilute to a certain volume with ethyl acetate, mix, and measure absorbance at a wavelength of 540 nm. Calculate the triterpenoid content of the test solution (triterpenoids are calculated as cyanothic acid). The content of the triterpenoids component contained in 1 g of the extract of Aspergillus niger was 23 mg.
Three samples of 0.1 g of the extract of P. pertussis of Example 2 are collected and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve with ultrasound, cool, add a fixed amount of ethanol and mix. Precisely collect 1 ml and transfer to a 10 ml container. Add a certain amount of water and mix. Collect 3 ml precisely and transfer to a 25 ml container. The absorbance is measured at a wavelength of 510 nm, and the flavone content in the sample (the amount of flavone is calculated using rutin) is measured. As a result, a total of 103 mg of flavone was contained in 1 g of the Aspergillus niger extract.
Three samples of 0.1 g each of the extract of P. nidus of Example 2 are collected and transferred to a flask with a cork. Wet with 18% ammonia water for 1 hour, add 30 ml of a mixed solvent of diethyl ether: chloroform: ethanol (25: 8: 2.5), and perform ultrasonic extraction for 20 minutes. The flask is tilted, the supernatant is discarded, 30 ml of the above mixture is added again, and the mixture is left for 30 minutes. Extract again with ultrasonic vibration for 20 minutes and filter. The residue and the filter paper are washed three times with 15 ml of the same solvent and combined with the filtrate in the flask. Dry in a water bath at 60 ° C., completely dissolve using exactly 10 ml of chloroform, collect exactly 5 ml, and transfer into a funnel. 6 ml of chloroform, 2 ml of buffer (pH = 5.0, 0.2 M potassium hydrogen phthalate buffer) are added. Titrate with 1 mmol·L-1 of BTB, separate the chloroform layer when approaching the end point while constantly shaking, add 5 ml of fresh chloroform again, and shake while continuing the titration. It is the end point if the water turns yellow after it is stopped and separated. Check the total content of alkaloids (alkaloids are calculated in Albacore B). As a result, the alkaloid content of 1 g of the jujuba extract was 21 mg.
Three samples of 0.1 g of the extract of P. pertussis of Example 2 are collected and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve by ultrasonication, cool, add a certain amount of ethanol and mix. Take exactly 1 ml and transfer to a 10 ml container. Add a certain amount of 70% ethanol and mix. Precisely take 3 ml and transfer to a 25 ml container. Measure absorbance at 340 nm wavelength. Check the coumarin content in the solution (the coumarin content is calculated by the amount of umbelliferone). As a result, 10.2 mg of coumarin was contained in 1 g of Aspergillus niger extract.

（実施例５）
実施例２のハマナツメ酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、１０ｍｌの容器に移し、酢酸エチルを加える。再度精密に４ｍｌ採取し１０ｍｌの容器に移す。溶剤を揮発させた後、５％のバニリン-無水酢酸０．４ｍｌ、過塩素酸１．６ｍｌを加えて混ぜ合わせ、酢酸エチルを一定量入れて希釈する。７０℃の恒温ウォーターバスで１５分加熱し、室温まで冷ます。１０ｍｌの容器に移し、酢酸エチルを加えて希釈し、混ぜ合わせる。５４０ｎｍの波長で吸光度を計測し、サンプル中の三テルペノイド含有量を算出する（三テルペノイドはｃｅａｎｏｔｈｉｃａｃｉｄとして計算する）。結果、１ｇのハマナツメ抽出物には三テルペノイド類成分が１０８ｍｇ含まれていた。
実施例２のハマナツメ酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、５０ｍｌの容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷ます。エタノールを一定量いれ、混ぜ合わせる。精密に１ｍｌを採取し、１０ｍｌの容器に移す。水を一定量加え、混ぜ合わせる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移し、５１０ｎｍの波長で吸光度を計測する。試験サンプル溶液中のフラボン含有量を調べる（フラボン量はルチンで計算）。その結果１ｇのハマナツメ抽出物にはフラボンが合計で４９７ｍｇ含まれていた。
実施例２のハマナツメ酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、コルク付きのフラスコに移す。１８％のアンモニア水で１時間湿潤させる。ジエチルエーテル：クロロホルム：エタノール（２５：８：２．５）の混合液３０ｍｌを加える。超音波抽出を２０分行い、濾過する。同様の溶剤で１５分間３回残滓と濾紙を洗浄し、フラスコ内に濾過する。６０℃のウォーターバスで乾燥させ、１０ｍｌのクロロホルムで全部溶かし、再度正確に５ｍｌ採取し、漏斗に移し、６ｍｌのクロロホルム、２ｍｌ緩衝液(ｐＨ＝５．０，０．２Ｍフタル酸水素カリウム緩衝液)を加える。１ｍｍｏｌ・Ｌ−１のＢＴＢで滴定し、つねに揺らし混ぜながら終点に近づいたときにクロロホルム層を分離し、再度新たにクロロホルムを５ｍｌ加え、滴定を続けながら揺らし混ぜる。静止させ分離させて水が黄色くなれば終点である。アルカロイドの総含有量を調べる（アルカロイドはハマナツメアルカリＢで計算する）。結果、１ｇのハマナツメ抽出物のアルカロイド含有量は１０７ｍｇであった。
実施例２のハマナツメベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、５０ｍｌの容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷し、エタノールを一定量加え混ぜる。精密に１ｍｌを採取し、１０ｍｌの容器に移す。７０％のエタノールを一定量加え、混ぜ合わせる。３ｍｌを精密に採取し、２５ｍｌの容器に移す。３４０ｎｍ波長で吸光度を測定する。溶液中のクマリン含有量を調べる（クマリン含有量はウンベリフェロンの量で計算する）。結果、１ｇのハマナツメ抽出物にはクマリンが１８６ｍｇ含まれていた。 (Example 5)
Three samples of 0.1 g of the extract of Aspergillus niger in Example 2 were collected, transferred to a 10 ml container, and added with ethyl acetate. Again accurately collect 4 ml and transfer to a 10 ml container. After evaporating the solvent, 0.4 ml of 5% vanillin-acetic anhydride and 1.6 ml of perchloric acid are added, mixed and diluted by adding a certain amount of ethyl acetate. Heat in a constant temperature water bath at 70 ° C for 15 minutes and cool to room temperature. Transfer to a 10 ml container, dilute with ethyl acetate and mix. The absorbance is measured at a wavelength of 540 nm, and the content of triterpenoids in the sample is calculated (triterpenoids are calculated as cyanothic acid). As a result, 108 mg of the triterpenoid component was contained in 1 g of the Aspergillus niger extract.
Three samples were precisely collected in 0.1 g each of the extract of the crab jujube of Example 2 and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve with ultrasound and cool. Add a certain amount of ethanol and mix. Take exactly 1 ml and transfer to a 10 ml container. Add a certain amount of water and mix. Precisely collect 3 ml, transfer to a 25 ml container, and measure absorbance at a wavelength of 510 nm. Check the flavone content in the test sample solution (the flavone content is calculated with rutin). As a result, a total of 497 mg of flavone was contained in 1 g of the jujuba extract.
Three samples were precisely collected in 0.1 g each of the extract of E. ginseng of Example 2 and transferred to a flask with a cork. Wet for 1 hour with 18% aqueous ammonia. 30 ml of a mixture of diethyl ether: chloroform: ethanol (25: 8: 2.5) is added. Perform ultrasonic extraction for 20 minutes and filter. The residue and the filter paper are washed three times with the same solvent for 15 minutes and filtered into a flask. Dry in a water bath at 60 ° C., completely dissolve in 10 ml of chloroform, collect exactly 5 ml again, transfer to funnel, 6 ml of chloroform, 2 ml of buffer (pH = 5.0, 0.2 M potassium hydrogen phthalate buffer) ). Titrate with 1 mmol·L-1 of BTB. When approaching the end point while constantly shaking, separate the chloroform layer, add another 5 ml of chloroform again, and shake while continuing the titration. It is the end point if the water turns yellow after it is stopped and separated. Check the total content of alkaloids (alkaloids are calculated in Albacore B). As a result, the alkaloid content of 1 g of Aspergillus niger was 107 mg.
Three samples were precisely sampled in 0.1 g each of the extract of Hamanatsumebenjin of Example 2 and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve by ultrasonication, cool, add a certain amount of ethanol and mix. Take exactly 1 ml and transfer to a 10 ml container. Add a certain amount of 70% ethanol and mix. Precisely take 3 ml and transfer to a 25 ml container. Measure absorbance at 340 nm wavelength. Check the coumarin content in the solution (the coumarin content is calculated by the amount of umbelliferone). As a result, 186 mg of coumarin was contained in 1 g of Astragalus extract.

１．ハマナツメエタノール抽出物の体外抗腫瘍活性研究
成長期の各種癌細胞を採取（子宮頸癌株Ｈｅｌａ、ヒト肝癌細胞株ＳＭＭＣ−７７２１、ヒト肺癌細胞株Ａ５４９、ヒト結腸癌細胞株Ｃａｃｏ−２、白血病細胞株Ｋ５６２、胃癌細胞株ＭＧＣ−８０３を使用）し、２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１０％の胎牛血清を含む相応の培養液で沈殿細胞の濃度を１×１０^５個／ｍｌの細胞懸濁液に調整した後、細胞を９６ウェルの培養プレートに接種する。各ウェルに細胞懸濁液２００μｌ注入し、その後一定濃度の無菌抽出物溶液を加える。各ウィルの抽出物最終濃度を０．０２、０．１、０．２、０．４、０．５、０．８、１．０、２．０ｍｇ／ｍｌにし、混合後３７℃、５％ＣＯ_２の培養器の中で２４時間培養したあと、培養液を吸い出しＰＢＳで二度洗浄する。再度各ウィルに５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴリン酸緩衝液２０μｌと１５０μｌの培養液を加え、同様の条件下で４時間培養し、培養を終了する。２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、培養プレートのウィル内の培養液を捨て、各ウィルに１５０μｌのＤＭＳＯを加え、１０分間振動させ、形成されたホルマザン顆粒を十分に溶解させた後、酵素計測器で吸光度を計測する。選択する波長は５７０ｎｍである。抽出物の腫瘍細胞に対するＩＣ５０を計算した。結果は表４を参照する。結果、ハマナツメ全体抽出物が良好な腫瘍抑制効果を示した。 1. In vitro antitumor activity study of ethanol extract of Aspergillus japonicum Collecting various growing cancer cells (cervical cancer cell line Hela, human liver cancer cell line SMMC-7721, human lung cancer cell line A549, human colon cancer cell line Caco-2, leukemia cell Strain K562, gastric cancer cell line MGC-803), centrifuged at 2000 rpm for 5 minutes, and in a corresponding culture medium containing 10% fetal calf serum, the concentration of precipitated cells was 1 × 10 ⁵ cells / ml. After adjusting to a suspension, the cells are seeded into a 96-well culture plate. Inject 200 μl of cell suspension into each well, then add a certain concentration of sterile extract solution. The final concentration of the extract in each wheel was 0.02, 0.1, 0.2, 0.4, 0.5, 0.8, 1.0, 2.0 mg / ml. After culturing for 24 hours in a CO ₂ incubator, the culture is aspirated and washed twice with PBS. Again, 20 μl of a 5 mg / ml MTT phosphate buffer and 150 μl of a culture solution are added to each wheel, and the cells are cultured under the same conditions for 4 hours, and the culture is completed. After centrifugation at 2000 rpm for 5 minutes, the culture solution in the culture plate wheel was discarded, 150 μl of DMSO was added to each wheel, and the mixture was shaken for 10 minutes to sufficiently dissolve the formed formazan granules. Measure the absorbance. The wavelength selected is 570 nm. The IC50 of the extract on tumor cells was calculated. See Table 4 for results. As a result, the extract of Aspergillus niger showed a favorable tumor-suppressing effect.

２．実施例２の３種類のハマナツメ抽出物の体外抗腫瘍活性研究
実施例１のハマナツメエタノール抽出物に対して、順次、ベンジン、酢酸エチル、ｎ−ブチルアルコールを用いて抽出した。回収溶液は乾燥させ、ハマナツメベンジン、酢酸エチル、ｎ−ブチルアルコール抽出物のそれぞれについて、いずれもイソアルコールに溶解させる。成長期の各種癌細胞を採取（子宮頸癌株Ｈｅｌａ、ヒト肝癌細胞株ＳＭＭＣ−７７２１、ヒト肺癌細胞株Ａ５４９、ヒト結腸癌細胞株Ｃａｃｏ−２、白血病細胞株Ｋ５６２、胃癌細胞株ＭＧＣ−８０３を使用）し、２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、１０％の胎牛血清を含む相応の培養液で沈殿細胞の濃度を１×１０^５個／ｍｌの細胞懸濁液に調整した後、細胞を９６ウェルの培養プレートに接種する。各ウェルに細胞懸濁液２００μｌ注入し、その後一定濃度の無菌抽出物溶液を加える。各ウィルの抽出物最終濃度を０．０２、０．１、０．２、０．４、０．５、０．８、１．０、２．０ｍｇ／ｍｌにし、混合後３７℃、５％ＣＯ_２の培養器の中で２４時間培養したあと、培養液を吸い出しＰＢＳで二度洗浄する。再度各ウィルに５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴリン酸緩衝液２０μｌと１５０μｌの培養液を加え、同様の条件下で４時間培養し、培養を終了する。２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、培養プレートのウィル内の培養液を捨て、各ウィルに１５０μｌのＤＭＳＯを加え、１０分間振動させ、形成されたホルマザン顆粒を十分に溶解させた後、酵素計測器で吸光度を計測する。選択する波長は５７０ｎｍである。抽出物の腫瘍細胞に対するＩＣ５０を計算した。結果は表５を参照する。結果からハマナツメベンジン抽出物と酢酸エチル抽出物に良好な抗腫瘍活性が認められた。特に酢酸エチル部位が良く、ｎ−ブチルアルコール抽出物は実験濃度範囲内ではＩＣ５０を測定できなかった。 2. In Vitro Antitumor Activity Study of Three Kinds of Jujube Extracts of Example 2 The extract of Thaliana jujuba extract of Example 1 was sequentially extracted with benzene, ethyl acetate and n-butyl alcohol. The recovered solution is dried, and each of the extract, e.g., ethyl acetate and n-butyl alcohol is dissolved in isoalcohol. Collecting various cancer cells during the growing period (cervical cancer cell line Hela, human liver cancer cell line SMMC-7721, human lung cancer cell line A549, human colon cancer cell line Caco-2, leukemia cell line K562, gastric cancer cell line MGC-803 Use), centrifuged at 2000 rpm for 5 minutes, and adjusted the concentration of the precipitated cells to 1 × 10 ⁵ cells / ml cell suspension with an appropriate culture medium containing 10% fetal calf serum. Inoculate well culture plates. Inject 200 μl of cell suspension into each well, then add a certain concentration of sterile extract solution. The final concentration of the extract in each wheel was 0.02, 0.1, 0.2, 0.4, 0.5, 0.8, 1.0, 2.0 mg / ml. After culturing for 24 hours in a CO ₂ incubator, the culture is aspirated and washed twice with PBS. Again, 20 μl of a 5 mg / ml MTT phosphate buffer and 150 μl of a culture solution are added to each wheel, and the cells are cultured under the same conditions for 4 hours, and the culture is completed. After centrifugation at 2000 rpm for 5 minutes, the culture solution in the culture plate wheel was discarded, 150 μl of DMSO was added to each wheel, and the mixture was shaken for 10 minutes to sufficiently dissolve the formed formazan granules. Measure the absorbance. The wavelength selected is 570 nm. The IC50 of the extract on tumor cells was calculated. See Table 5 for results. From the results, favorable antitumor activity was observed in the extract of S. fulica and the extract of ethyl acetate. In particular, the ethyl acetate site was good, and the IC50 of the n-butyl alcohol extract could not be measured within the experimental concentration range.

３．ハマナツメエタノール、メタノール、ベンジン及び酢酸エチル抽出物のＳ１８０マウスの影響
Ｓ１８０腫瘍細胞を８ｄ接種した健康状態が良好な腫瘍源マウスを採取し、腹部皮膚を消毒した後、腹水を採取し、無菌生理食塩水を利用し１：４（腹水体積：生理食塩水）の混合懸濁剤を準備する。１８−２０ｇのオスの昆明種マウス８２匹を体重毎にランダムに７グループに振り分け、それぞれモデル対照グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（シクロホスミファミド、ＣＴＸ）、酢酸エチル抽出物少量投薬グループ、酢酸エチル抽出物大量投薬グループ、エタノール抽出物グループ、メタノール抽出物グループ、ベンジン抽出物グループとした。それぞれの右腋皮下に０．２ｍｌの前述した懸濁液を接種した。２時間後、モデル対照グループと薬物グループにそれぞれ被験物或いは懸濁剤の胃へのカテーテル投薬を毎日１回、１４日間連続で行った。陽性対照グループはＣＴＸの腹腔注射を隔日１回、計７回行った。最終投薬後２４時間後に頸椎脱臼でマウスを殺処分し、腫瘍を剥離、計量し、腫瘍抑制率を算出した。（（１−実験グループ平均腫瘍重量/モデル対照グループ平均腫瘍重量）＊１００％）、結果は表６を参照する。 3. Influence of S180 mice on ethanol, methanol, benzine, and ethyl acetate extracts of Scutellaria japonica 8 days. Using water, a mixed suspension of 1: 4 (ascites volume: saline) is prepared. 82 Kunming male mice of 18-20 g were randomly divided into seven groups by body weight, and a model control group (0.5% tragacanth), a positive control group (cyclofosfamide, CTX), and an ethyl acetate extract, respectively. There were a small dose group, a high dose ethyl acetate extract group, an ethanol extract group, a methanol extract group, and a benzine extract group. Each right axillary subcutaneous was inoculated with 0.2 ml of the above suspension. Two hours later, each of the model control group and the drug group was dosed with a test substance or a suspension into the stomach via the catheter once a day for 14 consecutive days. The positive control group received CTX intraperitoneal injection once every other day for a total of 7 times. Twenty-four hours after the last dose, the mice were sacrificed by cervical dislocation, the tumors were detached and weighed, and the tumor suppression rate was calculated. ((1−average tumor weight of experimental group / average tumor weight of model control group) * 100%), results refer to Table 6.

結果、ハマナツメ全体抽出物の酢酸エチル抽出物１．６ｇ／ｋｇの胃管投薬は、Ｓ１８０のマウス体内の成長を明確に抑制でき、尚且つ１．６ｇ／ｋｇの投薬強度とシクロホスファミド４０ｍｇ／ｋｇの隔日腹腔投与はエタノール、メタノール、ベンジン抽出物４．８ｇ／ｋｇと同じように腫瘍重量減少、腫瘍抑止率ともに５０％を超えており、これら４種類の抽出物は比較的良い抗腫瘍活性を示している。 As a result, the gavage administration of 1.6 g / kg of the ethyl acetate extract of the whole extract of Astragalus can clearly suppress the growth in the mouse body of S180, and the dosage strength of 1.6 g / kg and cyclophosphamide 40 mg / Kg every other day intraperitoneal administration has a tumor weight reduction and tumor inhibition rate of more than 50% as in the case of 4.8 g / kg of ethanol, methanol and benzene extract. These four extracts have relatively good antitumor It shows activity.

４．ハマナツメエタノール、メタノール、ベンジン及び酢酸エチル抽出物のＥＡＣマウスに対する影響
ＥＡＣを８ｄ接種した健康状況の良好なＥＡＣマウスを採取し、腹部皮膚を消毒後、腹水を抽出する。無菌食塩水を利用し懸濁液４×１０^６／ｍｌを準備する。１８−２０ｇのオスの昆明種マウス８２匹を体重毎に分け、７組にランダムで振り分ける。それぞれモデル対照グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（シクロホスファミド、ＣＴＸ）、酢酸エチル抽出物低量投薬グループ、酢酸エチル抽出物大量投薬グループ、エタノール抽出物グループ、エタノール抽出物グループ、ベンジン抽出物グループとする。それぞれに腹腔内に前述した０．２ｍｌ懸濁液を接種する。２時間後、モデル対照グループ及び各薬物グループにそれぞれサンプル又は懸濁液を１日１回胃管投薬し、実験動物が瀕死するまで継続的に投薬を続ける。陽性対照グループの腹腔注射には隔日１回、ＣＴＸを計７回行った。動物が瀕死時には頸椎脱臼で処理し、瀕死時間は生存時間に含める。殺処分後に体重を図り、腹水を出し切り、再度体重を図る。その差を腹水の重量とする。結果は表７である。 4. Effect of extract of ethanol, methanol, benzine, and ethyl acetate on EAC mice EAC mice inoculated with 8 d of EAC and having good health conditions are collected, and after aseptic skin is disinfected, ascites is extracted. Prepare a suspension of 4 × 10 ⁶ / ml using sterile saline. 82 Kunming male mice of 18-20 g are divided according to body weight and randomly distributed to 7 groups. Model control group (0.5% tragacanth), positive control group (cyclophosphamide, CTX), low dose group of ethyl acetate extract, high dose group of ethyl acetate extract, ethanol extract group, ethanol extract group , A benzine extract group. Each is inoculated intraperitoneally with the 0.2 ml suspension described above. Two hours later, the sample or suspension is dosed by gavage once daily to each of the model control group and each drug group, and continues to be dosed continuously until the experimental animal is moribund. In the positive control group, intraperitoneal injection was performed once every other day and CTX was performed seven times in total. When the animals are moribund, they are treated with cervical dislocation and the moribund time is included in the survival time. After slaughter, measure weight, drain ascites and regain weight. The difference is defined as the weight of ascites. The results are shown in Table 7.

実験結果として、ハマナツメ全体抽出物酢酸エチル抽出部は、０．４ｇ／ｋｇ及びそれ以上の投薬量の胃管投薬で、顕著にＥＡＣマウスの成長を抑制でき、動物の生存時間を延長できた。尚且つ１．６ｇ／ｋｇの投薬量の腹水抑制作用強度とシクロホスファミドとは類似しているが、後者は動物の生存時間を延長できず、一定のメリットを有していた。エタノール、メタノール、ベンジン抽出物の４．８ｇ／ｋｇも効果的に生存時間を延長し、腹水製造を抑制した。これら四種の抽出物は効果的な抗腫瘍活性である。 As a result of the experiment, the ethyl acetate extract part of the whole extract of Aspergillus niger was able to remarkably inhibit the growth of EAC mice and prolong the survival time of the animal by gavage administration at a dose of 0.4 g / kg or more. In addition, although the ascites inhibitory activity at a dose of 1.6 g / kg is similar to cyclophosphamide, the latter cannot prolong the survival time of animals and has certain advantages. 4.8 g / kg of the ethanol, methanol, and benzine extracts also effectively prolonged survival time and suppressed ascites production. These four extracts are effective antitumor activities.

５．ハマナツメ酢酸エチル抽出物とパクリタキセル及びシノブホタリンの同時投薬によるＳ１８０マウスへの影響
Ｓ１８０を８ｄ接種した健康状況の良好な腫瘍源マウスを採取し、腹部皮膚を消毒したあと、腹水を採取し、無菌生理食塩水を利用し１：４（腹水体積：生理食塩水体積）の混濁液を準備する。１８−２０ｇのオス昆明種マウス８４匹を体重毎に分け、７組にランダムで振り分ける。それぞれモデル対照グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（シクロホスファミド、ＣＴＸ）、酢酸エチル抽出物グループ、パクリタキセルグループ、シノブホタリン抽出物グループとパクリタキセル同時投薬グループと、シノブホタリン同時投薬グループに分け、それぞれ右側腋皮下に０．２ｍｌの前述混濁液を接種する。２ｈ後モデル対照グループと薬物グループにそれぞれ胃管投薬と静脈注射でサンプル或いは混濁液を毎日１回、連続１４日間行う。陽性対照グループ腹腔注射にはＣＴＸを隔日１回計７回行う。最終投薬後、２４時間で頸椎脱臼させ殺処分し、腫瘍を剥離し重量を図り、腫瘍抑制率を算出する（（１-実験組平均腫瘍重量/モデル対照グループ平均腫瘍重量）＊１００％）。結果は表８を参照する。 5. Influence on S180 mice by simultaneous administration of ethyl acetate extract and paclitaxel and shinobhotalin on S180 mice Inoculated with 8d of S180, tumor-well mice with good health conditions were collected, the abdominal skin was disinfected, ascites was collected, and sterile saline was collected. A 1: 4 (ascites volume: saline volume) turbid solution is prepared using water. Eighty-four 20 g male Kunming mice are divided by weight and randomly divided into seven groups. Each group is divided into a model control group (0.5% tragacanth), a positive control group (cyclophosphamide, CTX), an ethyl acetate extract group, a paclitaxel group, a cinobhotaline extract group, a paclitaxel co-administration group, and a shinobhotalin co-administration group. Then, 0.2 ml of the above turbid solution is inoculated into the right armpit subcutaneously. After 2 h, the sample or turbid solution is administered to the model control group and the drug group by gavage and intravenous injection, respectively, once daily for 14 consecutive days. For the positive control group, CTX is performed once every other day for intraperitoneal injection for a total of 7 times. Twenty-four hours after the last dose, the cervical vertebra is dislocated and sacrificed, the tumor is detached and weighed, and the tumor suppression rate is calculated ((1-average tumor weight of experimental group / average tumor weight of model control group) * 100%). See Table 8 for results.

実験結果によれば、ハマナツメ全体酢酸エチル抽出物の０．４ｇ／ｋｇの胃管投薬では、Ｓ１８０のマウス体内成長に対して明確な抑制作用は見られなかった。パクリタキセル５ｍｇ／ｋｇ、シノブホタリン１ｍｌ／ｋｇは一定の効果を示した。しかし同投薬量のハマナツメ全体酢酸エチル抽出物をパクリタキセル５ｍｇ／ｋｇ、シノブホタリン１ｍｌ／ｋｇを同時使用したところ、パクリタキセルの腫瘍抑制率より高い結果を示し、ハマナツメ全体抽出物とその他の抗腫瘍薬物との同時使用は該薬物の抗腫瘍薬効を高めることが分かった。 According to the experimental results, a clear inhibitory effect on the in vivo growth of S180 in mice was not observed with 0.4 g / kg gavage administration of whole ethyl acetate extract of Sorghum jujuba. Paclitaxel 5 mg / kg and cinobhotalin 1 ml / kg showed a certain effect. However, when the same dosage of whole ethyl acetate extract was used simultaneously with 5 mg / kg of paclitaxel and 1 ml / kg of cinobhotalin, the results showed higher results than the tumor suppression rate of paclitaxel. Simultaneous use was found to enhance the antitumor efficacy of the drug.

III．ハマナツメ抽出物の抗繊維化活性
（実施例１）
ハマナツメ全体１ｋｇを採取し、８倍量の９５％エタノールに１日浸漬した後、粉砕し、さらに１０倍量の９５％のエタノールに２日間浸漬し、抽出液を採取する。５０℃でアルコール臭がなくなるまでエタノールを減圧回収し、乾燥後ハマナツメエタノール抽出物を得る。 III. Anti-fibrotic activity of Scutellaria extract (Example 1)
One kilogram of the crab jujube is collected, immersed in an eight-fold amount of 95% ethanol for one day, pulverized, and further immersed in a ten-fold amount of 95% ethanol for two days to collect an extract. Ethanol is collected under reduced pressure at 50 ° C. until the alcohol odor disappears, and after drying, ethanol extract is obtained.

（実施例２）
ハマナツメ茎葉１ｋｇを、１０倍量の９５％エタノールに１日浸漬した後、粉砕し、さらに１０倍量の９５％エタノールを加え、回流抽出し、抽出液を回収する。ハマナツメエタノール抽出物に水を加えた後、ベンジン、酢酸エチルで抽出し、ハマナツメベンジン抽出物と酢酸エチル抽出物を得る。 (Example 2)
After dipping 1 kg of the foliage of the leaves of Jujube in a 10-fold amount of 95% ethanol for 1 day, the mixture is pulverized, and a 10-fold amount of 95% ethanol is added, and the mixture is subjected to circulating extraction to collect an extract. After water is added to the ethanol extract of Citrus jujuba, extraction is performed with benzene and ethyl acetate to obtain a Citrus jujube extract and an ethyl acetate extract.

（実施例３）
ハマナツメ全体１ｋｇを採取し、１０倍量のメタノールに１日浸漬した後、粉砕し、再度８倍量のメタノールに２日間浸漬し、抽出液を得る。４０℃下でメタノールを減圧回収し、乾燥後ハマナツメメタノール抽出物を得る。ハマナツメメタノール抽出物に水を加え、ベンジン、酢酸エチルで抽出したあと、ハマナツメベンジン抽出物と酢酸エチル抽出物を得る。 (Example 3)
One kilogram of the crab jujube is collected, immersed in 10 times the volume of methanol for 1 day, pulverized, and immersed again in 8 times the volume of methanol for 2 days to obtain an extract. The methanol is recovered under reduced pressure at 40 ° C., and dried to obtain an extract of methanol. Water is added to the methanol extract of Scutellaria, and the mixture is extracted with benzene and ethyl acetate.

（実施例４）
実施例２のハマナツメベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、１０ｍｌ容器に移し、酢酸エチルを一定量まで追加し、精確に４ｍｌの溶液を採取し、１０ｍｌの容器に移し、溶剤を揮発させ、５％バニリン-無水酢酸０．４ｍｌ、過塩素酸１．６ｍｌを加え、混ぜ合わせ、酢酸エチルを規定量まで加え、７０℃の恒温ウォーターバスで１５分加熱する。室温まで冷まし、１０ｍｌの容器に酢酸エチルを規定量まで加え、５４０ｎｍの波長で吸光度を測定する。サンプル溶液中の三テルペノイド含有量（三テルペノイドはｃｅａｎｏｔｈｉｃａｃｉｄとして計算する）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物には三テルペノイド類成分が２３ｍｇ含まれていた。
実施例２のハマナツメベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、５０ｍｌの容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷し、エタノールを一定量加え混ぜる。精密に１ｍｌを採取し、１０ｍｌの容器に移す。３ｍｌを精密に採取し、２５ｍｌの容器に移す。５１０ｎｍ波長で吸光度を測定し、溶液中のフラボン含有量を調べる（フラボン有量はルチンの量で計算する）。結果、１ｇのハマナツメ抽出物にはフラボンが１０３ｍｇ含まれていた。
実施例２のハマナツメベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、コルク付きのフラスコ内に移す。１８％のクロロホルムで１時間湿潤させ、ジエチルエーテル：クロロホルム：エタノール（２５：８：２．５）の混合溶剤３０ｍｌを加える。２０分超音波抽出し、フラスコ内の上澄み液を採取し、さらに前述の混合溶剤３０ｍｌを加え、３０分冷蔵保存し、２０分超音波振動で抽出する。濾過した後１５ｍｌの同じ溶剤で残滓と濾紙を３回洗浄し、それらと濾液をフラスコ内に移す。６０℃のウォーターバスで乾燥させ、正確に１０ｍｌのクロロホルムですべてを溶解させ、再度正確に５ｍｌ採取し、漏斗に移す。６ｍｌのクロロホルムと２ｍｌの緩衝液（ｐＨ＝５．０，０．２Ｍフタル酸水素カリウム緩衝液）を加える。１ｍｍｏｌ・Ｌ−１のＢＴＢで滴定し、絶えず揺らし混ぜる。終点に近づいた後、クロロホルム層を分離し、再度新たにクロロホルム５ｍｌを加え、滴定しつつ絶えず揺らし混ぜあわせる。静止させて分離させ、水層が黄色くなったら終点である。アルカロイドの総含有量（ハマナツメアルカリＢをアルカロイドの含有量として計算する）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物にはアルカロイドが２１ｍｇ含まれていた。
実施例２のハマナツメベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し５０ｍｌ容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷却して、エタノールを規定量追加し、混ぜ合わせる。１ｍｌ精密に採取し、１０ｍｌの容器に移し、７０％エタノールを規定量加え、混ぜ合わせる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移す。３４０ｎｍの波長で吸光度を測定する。サンプル中のクマリン含有量を調べる（クマリン含有量はウンベリフェロンの量で計算する）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物にはクマリンが１０．２ｍｇ含まれていた。 (Example 4)
Three samples were collected of 0.1 g of the extract of P. pertussis of Example 2 and transferred to a 10 ml container. Ethyl acetate was added to a certain amount, 4 ml of the solution was collected accurately, transferred to a 10 ml container, and the solvent was removed. It is volatilized, 0.4 ml of 5% vanillin-acetic anhydride and 1.6 ml of perchloric acid are added and mixed, ethyl acetate is added to a specified amount, and the mixture is heated in a constant temperature water bath at 70 ° C. for 15 minutes. After cooling to room temperature, ethyl acetate is added to a 10 ml container to a specified amount, and the absorbance is measured at a wavelength of 540 nm. Calculate the triterpenoid content in the sample solution (triterpenoids are calculated as cyanothic acid). As a result, 23 mg of triterpenoid components were contained in 1 g of the extract of Aspergillus niger.
Three samples were precisely sampled in 0.1 g each of the extract of Hamanatsumebenjin of Example 2 and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve by ultrasonication, cool, add a certain amount of ethanol and mix. Take exactly 1 ml and transfer to a 10 ml container. Precisely take 3 ml and transfer to a 25 ml container. The absorbance is measured at a wavelength of 510 nm to determine the flavone content in the solution (the flavone content is calculated by the amount of rutin). As a result, 103 mg of flavone was contained in 1 g of the extract of Aspergillus niger.
0.1 g each of the extract of Hamanatum benzin of Example 2 is precisely collected in three samples and transferred into a flask with a cork. Wet with 18% chloroform for 1 hour and add 30 ml of a mixed solvent of diethyl ether: chloroform: ethanol (25: 8: 2.5). The mixture is extracted with ultrasonic waves for 20 minutes, the supernatant in the flask is collected, 30 ml of the above-mentioned mixed solvent is added, and the mixture is refrigerated for 30 minutes and extracted by ultrasonic vibration for 20 minutes. After filtration, the residue and the filter paper are washed three times with 15 ml of the same solvent, and the filtrate and the filtrate are transferred into a flask. Dry in a water bath at 60 ° C., dissolve everything with exactly 10 ml of chloroform, collect exactly 5 ml again and transfer to funnel. Add 6 ml of chloroform and 2 ml of buffer (pH = 5.0, 0.2 M potassium hydrogen phthalate buffer). Titrate with 1 mmol L-1 of BTB and shake constantly. After approaching the end point, the chloroform layer is separated, 5 ml of fresh chloroform is added again, and the mixture is shaken constantly while titrating. Let stand still and let the aqueous layer turn yellow, which is the end point. Calculate the total content of alkaloids (Calculate Alkaloids as Alkaloids). As a result, 21 mg of alkaloids were contained in 1 g of the extract of Aspergillus niger.
Three samples were precisely collected in 0.1 g each of the extract of Hamanatsumebenjin of Example 2 and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve with ultrasound, cool, add a specified amount of ethanol, and mix. Precisely collect 1 ml, transfer to a 10 ml container, add a prescribed amount of 70% ethanol, and mix. Collect 3 ml precisely and transfer to a 25 ml container. The absorbance is measured at a wavelength of 340 nm. The coumarin content in the sample is determined (the coumarin content is calculated by the amount of umbelliferone). As a result, 10.2 mg of coumarin was contained in 1 g of Aspergillus niger extract.

（実施例５）
実施例２のハマナツメ酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、１０ｍｌの容器に移す。酢酸エチルを規定量まで加え、４ｍｌの溶液を精密に採取し１０ｍｌの容器に移す。溶剤を揮発させた後、５％のバニリン-無水酢酸０．４ｍｌ、過塩素酸１．６ｍｌを加え、酢酸エチルを規定量加えて希釈する。７０℃の恒温ウォーターバスで１５分加熱し、室温まで冷まし、１０ｍｌの容器に移す。酢酸エチルを規定量加えて希釈し、よく混ぜあわせ、５４０ｎｍの波長で吸光度を測定する。サンプル中の三テルペノイド含有量を算出する（三テルペノイドはｃｅａｎｏｔｈｉｃａｃｉｄとして計算する）。結果、１ｇのハマナツメ抽出物には三テルペノイド類成分が１０８ｍｇ含まれていた。
実施例２のハマナツメ酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し５０ｍｌの容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷やす。エタノールを規定量加え、混ぜ合わせる。精密に１ｍｌ採取し、１０ｍｌの容器に移す。水を規定量加え、混ぜ合わせる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移す。５１０ｎｍの波長の吸光度を計測してサンプル液中の総フラボン含有量を計測する（ルチンの量でフラボン量を測定する）。結果、１ｇのハマナツメ抽出物にはフラボンが４９７ｍｇ含まれていた。
実施例２のハマナツメ酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、コルクが付けられる容器に移す。１８％のアンモニア水２ｍｌで１時間湿潤させ、ジエチルエーテル：クロロホルム：エタノール（２４：８：２．５）の混合溶液３０ｍｌを加える。超音波で２０分抽出を行い、傾けて上澄み液をフラスコから出し、再度上記混合溶剤３０ｍｌを加え、３０分冷蔵する。再度超音波振動で２０分抽出し、濾過し、同じ溶剤１５ｍｌで３回残滓と濾紙を洗浄する。濾液と併せてフラスコ内に移す。６０℃のウォーターバスで乾燥させ、正確に１０ｍｌのクロロホルムで完全に溶かし、再度正確に５ｍｌを採取し、漏斗に移す。６ｍｌのクロロホルムを加え、２ｍｌの緩衝液（ｐＨ＝５．０、０．２Ｍフタル酸水素カリウム緩衝液）を加える。１ｍｍｏｌ・Ｌ−１のＢＴＢ溶液で滴定しながら混ぜ合わせ、終点に近付いたらクロロホルム層を分離させ、再度新たにクロロホルム５ｍｌを加え、再度滴定しながら混ぜ合わせる。静止させ分離させ、水の層が黄色くなり始めたら終点である。アルカロイド総数を計算した（アルカロイドはハマナツメアルカリＢで計算する）。結果、１ｇのエタノール抽出物のアルカロイド類含有量は１０７ｍｇだった。
ハマナツメ酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、５０ｍｌの容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷ます。エタノールを一定量入れ、混ぜる。精密に１ｍｌを採取し、１０ｍｌの容器に移す。７０％のエタノールを一定量加え、混ぜ合わせる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移し、３４０ｎｍの波長で吸光度を計測し、試験サンプル溶液中のクマリン含有量を調べる（クマリン量はウンベリフェロンで計算）。その結果１ｇのハマナツメ抽出物にはフラボンが合計で１８６ｍｇ含まれていた。 (Example 5)
Three samples each of 0.1 g of the extract of Aspergillus niger of Example 2 are collected and transferred to a 10-ml container. Ethyl acetate is added to the specified volume, and 4 ml of the solution is accurately collected and transferred to a 10 ml container. After evaporating the solvent, 0.4 ml of 5% vanillin-acetic anhydride and 1.6 ml of perchloric acid are added, and a prescribed amount of ethyl acetate is added for dilution. Heat for 15 minutes in a constant temperature water bath at 70 ° C., cool to room temperature, and transfer to a 10 ml container. Add a prescribed amount of ethyl acetate, dilute, mix well, and measure the absorbance at a wavelength of 540 nm. Calculate the triterpenoid content in the sample (triterpenoids are calculated as cyanothic acid). As a result, 108 mg of the triterpenoid component was contained in 1 g of the Aspergillus niger extract.
Ethyl acetate extract of Example 2 was extracted in 0.1 g portions, and three samples were accurately collected and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve with ultrasound and cool. Add the specified amount of ethanol and mix. Precisely collect 1 ml and transfer to a 10 ml container. Add the specified amount of water and mix. Collect 3 ml precisely and transfer to a 25 ml container. The total flavone content in the sample solution is measured by measuring the absorbance at a wavelength of 510 nm (the flavone content is measured by the amount of rutin). As a result, 497 mg of flavone was contained in 1 g of the Aspergillus niger extract.
Three samples of 0.1 g of the extract of the fragrant jujube of Example 2 are precisely collected and transferred to a container provided with cork. Wet with 2 ml of 18% aqueous ammonia for 1 hour, and add 30 ml of a mixed solution of diethyl ether: chloroform: ethanol (24: 8: 2.5). The mixture is extracted with ultrasonic waves for 20 minutes, the supernatant liquid is taken out of the flask by tilting, 30 ml of the mixed solvent is added again, and the mixture is refrigerated for 30 minutes. Extract again with ultrasonic vibration for 20 minutes, filter and wash the residue and filter paper three times with 15 ml of the same solvent. Transfer into flask with filtrate. Dry in a water bath at 60 ° C., completely dissolve in exactly 10 ml of chloroform, again collect exactly 5 ml and transfer to funnel. 6 ml of chloroform are added and 2 ml of buffer (pH = 5.0, 0.2 M potassium hydrogen phthalate buffer) are added. Mix while titrating with a 1 mmol L-1 BTB solution. When approaching the end point, separate the chloroform layer, add 5 ml of chloroform again, and mix while titrating again. Let it stand still and let the water layer start to turn yellow, which is the end point. The total number of alkaloids was calculated (alkaloids are calculated using Alkaline Alkaline B). As a result, the content of alkaloids in 1 g of the ethanol extract was 107 mg.
Three samples of 0.1 g of the extract of citrus red jujube are precisely collected and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve with ultrasound and cool. Add a certain amount of ethanol and mix. Take exactly 1 ml and transfer to a 10 ml container. Add a certain amount of 70% ethanol and mix. A 3 ml sample is precisely collected, transferred to a 25 ml container, and the absorbance is measured at a wavelength of 340 nm to check the coumarin content in the test sample solution (the amount of coumarin is calculated by umbelliferone). As a result, a total of 186 mg of flavone was contained in 1 g of the jujuba extract.

１．肝繊維化ラットへの影響
ＳＤラット６０匹（２００−２４０ｇ、オス）を体重毎に分け、ランダムで空白対照グループ（０．５％トラガント）、モデル対照グループ（０．５％トラガント）、陽性対照グループ（デキサメタゾン，１ｍｇ／ｋｇ）、ハマナツメ抽出物（実施例１の方法で得た）低量投薬グループ（０．４ｇ／ｋｇ）、中量投薬(０．８ｇ／ｋｇ)、大量投薬（１．６ｇ／ｋｇ）にわける。空白対照グループ以外、１ｍｌ／ｋｇの４０％四塩化炭素植物油溶液を毎週２回、３ヶ月連続で皮下注射し、同時に高脂肪飼料と５％エタノール水溶液を与える。検査物を毎日１回、３ヶ月連続で胃管投薬する。投薬終了後、翌日腹部大動脈から採血し、血漿を分離し、ＡＬＴ、ＰＣ−III、ＨＡ、ＬＨレベルを調べる。動物を殺処分し、肝臓を採取して病理検査を行う。血清検査の結果は表９を参照する。 1. Effect on hepatic fibrosis rats 60 SD rats (200-240 g, male) were divided by body weight and randomly selected as blank control group (0.5% tragacanth), model control group (0.5% tragacanth), positive control Group (dexamethasone, 1 mg / kg), citrus extract (obtained by the method of Example 1) low dose group (0.4 g / kg), medium dose (0.8 g / kg), high dose (1. 6 g / kg). Except for the blank control group, 1 ml / kg of a 40% carbon tetrachloride vegetable oil solution is injected subcutaneously twice a week twice a month for three consecutive months, while being fed a high fat diet and a 5% ethanol aqueous solution. Specimens are administered by gavage once daily for three consecutive months. After the completion of the administration, blood is collected from the abdominal aorta the next day, the plasma is separated, and ALT, PC-III, HA, and LH levels are examined. Animals are sacrificed and livers are harvested for pathological examination. See Table 9 for serologic results.

結果、モデルグループに比べ、ハマナツメ抽出物の投薬量が０．８ｇ／ｋｇ及び１．６ｇ／ｋｇの時、４０％四塩化炭素植物油溶液による肝臓繊維化に対して一定の保護作用がみられた。特に大量投薬時、血液検査指数が明らかに改善された。
病理結果において、モデルグループの肝臓細胞の水様変性が顕著で、明確な肝細胞壊死と脂肪変性がみられ、肝細胞化は明確であることがわかった。ハマナツメ抽出物の大量投薬と中量投薬グループの肝細胞水様変性と脂肪変性程度は明らかに抑制されており、肝細胞の繊維化に対して良好な抑制効果があることがわかった。 As a result, as compared with the model group, when the dosage of the extract of Citrus jujuba was 0.8 g / kg and 1.6 g / kg, a certain protective effect was observed against liver fibrosis caused by a 40% carbon tetrachloride vegetable oil solution. . The blood test index was clearly improved, especially at high doses.
In the pathological results, water-like degeneration of the liver cells in the model group was remarkable, clear hepatocyte necrosis and steatosis were observed, and the hepatocellularization was found to be clear. The hepatocyte watery degeneration and the degree of steatosis were clearly suppressed in the high-dose and medium-dose groups of the Aspergillus japonicus extract, indicating a good inhibitory effect on hepatocyte fibrosis.

２．ラット肺繊維化に対する影響
ＳＤラット（２００−２４０ｇ、オス）６０匹を体重毎に分け、ランダムで仮手術対照グループ（０．５％トラガント）、モデル対照グループ（０．５％トラガント）、陽性対照グループ（デキサメタゾン，１ｍｇ／ｋｇ）、ハマナツメ抽出物（実施例１の方法で得たもの）低量投薬グループ（０．４ｇ／ｋｇ）、中量投薬(０．８ｇ／ｋｇ)、大量投薬（１．６ｇ／ｋｇ）にわける。全ての実験動物に対して、１０％抱水クロラール（３５０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔注射して麻酔を行い、気管を分離する。仮手術対照グループ以外、５ｍｌ／ｋｇのブレオマイシン生理食塩水溶液０．４ｍｌ、仮手術対照グループには生理食塩水を投薬する。を毎週２回、３ヶ月連続で皮下注射し、同時に高脂肪飼料と５％エタノール水溶液を与える。検査物を毎日１回、３ヶ月連続で胃管投薬する。投薬終了後、翌日腹部大動脈から採血し、血漿を分離し、ＡＬＴ、ＰＣ−III、ＨＡ、ＬＨレベルを調べる。動物を殺処分し、肝臓を採取して病理検査を行う。血清検査の結果は表９を参照する。術後翌日から毎日１回、連続３０日間投薬する。頸椎脱臼で殺処分した動物から、肺を取り出し、部分臓器を粉砕して、ヒドロキシプロリン含有量を測定し、一部は病理観察を行う。肺組織のヒドロキシプロリン含有量測定結果は表１０を参照する。 2. Effect on rat lung fibrosis 60 SD rats (200-240 g, male) were divided by body weight and randomly operated as a tentative operation control group (0.5% tragacanth), a model control group (0.5% tragacanth), and a positive control. Group (dexamethasone, 1 mg / kg), citrus extract (obtained by the method of Example 1), low dose group (0.4 g / kg), medium dose (0.8 g / kg), high dose (1 0.6 g / kg). All experimental animals are anesthetized by intraperitoneal injection of 10% chloral hydrate (350 mg / kg) and the trachea is separated. Except for the tentative operation control group, 0.4 ml of a 5 ml / kg bleomycin saline solution is administered, and the tentative operation control group is dosed with physiological saline. Is injected subcutaneously twice a week for three consecutive months, while simultaneously receiving a high fat diet and a 5% aqueous ethanol solution. Specimens are administered by gavage once daily for three consecutive months. After the completion of the administration, blood is collected from the abdominal aorta the next day, the plasma is separated, and ALT, PC-III, HA, and LH levels are examined. Animals are sacrificed and livers are harvested for pathological examination. See Table 9 for serologic results. The drug is administered once daily for 30 consecutive days from the day after the operation. From the animal sacrificed by cervical dislocation, the lungs are removed, partial organs are crushed, the hydroxyproline content is measured, and a part is observed for pathology. Refer to Table 10 for the measurement results of the hydroxyproline content of the lung tissue.

結果、モデルグループと比べ、ハマナツメ抽出物は０．８ｇ／ｋｇ及び１．６ｇ／ｋｇ投薬時に効果的にラット肺組織中のヒドロキシプロリン含有量を低下させることができ、肺線維化に良好な抑制作用があることを示した。
病理検査結果によると、モデルグループのラットには明確な肺線維化病変が見られ、肺間質の大量線維化細胞や大範囲繊維結合組織沈着、肺胞構造破壊、一部肺胞腔消失を呈した。モデルグループと比べ、ハマナツメ抽出物の各投薬量グループのラットの線維結合組織の沈着は少なく、肺間質繊維細胞も少なかった。投薬量が大きいグループほどこの傾向が顕著で、本抽出物が一定の潜在的な肺線維化治療薬物であることを示した。 As a result, compared with the model group, the extract of Aspergillus niger can effectively reduce the hydroxyproline content in rat lung tissue at the time of administration of 0.8 g / kg and 1.6 g / kg, and favorably suppress lung fibrosis. It has been shown to work.
Pathological examination showed that rats in the model group had clear pulmonary fibrotic lesions, including massive fibrotic cells in the lung interstitium, extensive fibrous connective tissue deposition, alveolar structure destruction, and partial alveolar space loss. Presented. Compared with the model group, there was less deposition of fibrous connective tissue and less pulmonary stromal fiber cells in rats from each dose group of the crab extract. This trend was more pronounced in the higher dose groups, indicating that the extract was a potential therapeutic drug for pulmonary fibrosis.

３．ハマナツメ抽出物とポリエンホスファチジルコリンの同時投薬のラット肝線維化に対する影響
ＳＤラット６０匹（２００−２４０ｇ、オス）を体重毎に分け、ランダムで空白対照グループ、モデル対照グループ、陽性対照グループ（デキサメタゾン，１ｍｇ／ｋｇ）、ハマナツメ抽出物グループ（実施例１の方法で得たもの、０．８ｇ／ｋｇ)、ポリエンホスファチジルコリングループ（１ｍｌ／ｋｇ）、同時投薬グループ（ハマナツメ抽出物０．８ｇ／ｋｇ＋ポリエンホスファチジルコリン１ｍｌ／ｋｇ）にわける。空白対照グループ以外、１ｍｌ／ｋｇの４０％四塩化炭素植物油溶液を毎週２回、３ヶ月連続で皮下注射し、同時に高脂肪飼料と５％エタノール水溶液を与える。検査物を毎日１回、３ヶ月連続で胃管投薬する。投薬終了翌日に腹部大動脈から採血し、血漿を分離し、ＡＬＴ、ＰＣ−III、ＨＡ、ＬＨレベルを調べる。動物を殺処分し、肝臓を採取して病理検査を行う。血清検査の結果は表１１を参照。 3. Influence of co-administration of Syringa extract and polyenephosphatidylcholine on rat liver fibrosis 60 SD rats (200-240 g, male) were divided by body weight and randomly selected as blank control group, model control group, positive control group (dexamethasone, 1 mg). / Kg), Sorghum extract group (obtained by the method of Example 1, 0.8 g / kg), polyenephosphatidylcholine group (1 ml / kg), co-administration group (0.8 g / kg extract of Sorghum jujuba + 1 ml polyenephosphatidylcholine) / Kg). Except for the blank control group, 1 ml / kg of a 40% carbon tetrachloride vegetable oil solution is injected subcutaneously twice a week twice a month for three consecutive months, while being fed a high fat diet and a 5% ethanol aqueous solution. Specimens are administered by gavage once daily for three consecutive months. The day after the end of the administration, blood is collected from the abdominal aorta, the plasma is separated, and ALT, PC-III, HA, and LH levels are examined. Animals are sacrificed and livers are harvested for pathological examination. See Table 11 for serum test results.

４．ハマナツメ抽出物とリグストラジン同時投薬によるラット肺線維化への影響
ＳＤラット６０匹（２００−２４０ｇ、オス）を体重毎に分け、ランダムで空白対照グループ、モデル対照グループ、陽性対照グループ（デキサメタゾン，１ｍｇ／ｋｇ）、ハマナツメ抽出物グループ（実施例１の方法で得たもの、０．８ｇ／ｋｇ、ｏｐ)、リグストラジングループ（１ｍｌ／ｋｇ、ｉｐ）、同時投薬グループ（ハマナツメ抽出物０．８ｇ／ｋｇ、ｏｐ；リグストラジン注射液４０ｍｇ／ｋｇ、ｉｐ）に分ける。すべての動物に１０％抱水クロラール（３５０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔注射で麻酔を行い、気管を分離し、仮手術対照グループ以外のそれぞれに５ｍｇ／ｋｇのブレオマイシン生理食塩水溶液０．４ｍｌを注入し、仮手術対照グループには生理食塩水を注入する。手術後翌日よりサンプルを毎日１回、連続３０日間胃管投薬或いは注射する。頸椎脱臼で動物を殺処分し、肺を採取し、一部を粉砕し、ヒドロキシプロリン含有量を測定し、一部に対して病理検査を行う。肺組織中のヒドロキシプロリン含有量測定値結果は表１２を参照。 4. Effect of co-administration of citrus extract and rigstrazine on rat pulmonary fibrosis 60 SD rats (200-240 g, male) were divided by body weight and randomly selected as blank control group, model control group, positive control group (dexamethasone, 1 mg / mg). kg), Scutellaria extract group (obtained by the method of Example 1, 0.8 g / kg, op), ligustrazine group (1 ml / kg, ip), co-medication group (0.8 g / kg extract) kg, op; 40 mg / kg rigstrazine injection, ip). All animals were anesthetized with 10% chloral hydrate (350 mg / kg) by intraperitoneal injection, the trachea was separated, and 0.4 ml of a 5 mg / kg bleomycin saline solution was injected into each of the non-sham operation control groups. The sham control group is infused with saline. From the next day after the operation, the sample is administered by gavage or injection once a day for 30 consecutive days. Animals are sacrificed by cervical dislocation, lungs are harvested, portions are crushed, hydroxyproline content is measured, and a portion is pathologically examined. See Table 12 for results of hydroxyproline content measurements in lung tissue.

結果、単独でリグストラジン４０ｍｇ／ｋｇを投与しても実験的肺線維化には明確な効果はみられなかったが、同時投薬によって効果的にモデルラット肺組織中のヒドロキシプロリン含有量を低下させることができ、リグストラジン４０ｍｇ／ｋｇに比べ明確な差が見られた。ハマナツメ抽出物には肺線維化治療薬物の治療効果を効果的に向上させることができることが示された。 As a result, administration of 40 mg / kg of rigstrazine alone had no clear effect on experimental lung fibrosis, but simultaneous administration effectively reduced the hydroxyproline content in lung tissue of model rats. And a clear difference was seen compared to 40 mg / kg of rigstrazine. It was shown that the extract of Aspergillus niger can effectively improve the therapeutic effect of the drug for treating pulmonary fibrosis.

IV．ハマナツメ抽出物の抗真菌活性
（I）実施例ハマナツメ抽出物の製造
１．ハマナツメエタノール抽出物の製造
（１）ハマナツメ全体１ｋｇを採取し、８倍量の９５％エタノールに１−２日浸漬した後、葉、根、茎を粉砕し、さらに１２倍量の９５％のエタノールに３日間浸漬し、抽出液を採取する。エタノールを減圧回収し、濃縮液を冷凍乾燥後、ハマナツメエタノール抽出物を得る。
（２）ハマナツメ全体の新鮮品１ｋｇ（或いはその一部）を粉砕し、ハマナツメ８倍量の９５％エタノールで３回回流抽出し、抽出液を収集する。エタノールを減圧回収し、濃縮液を冷凍乾燥後、ハマナツメメタノール抽出物を得る。
（３）ハマナツメ全体の新鮮品（根、茎、葉等）１ｋｇを採取し、冷凍乾燥後粉砕（粉砕後に冷凍乾燥するのも可）し、ハマナツメ１０倍量の９５％エタノールを加え、３回回流抽出し、抽出液を回収する。エタノールを減圧回収し、濃縮液を冷凍乾燥させて、ハマナツメエタノール抽出物を得る。 IV. Antifungal activity of Scutellaria extract (I) Example Production of Sageju extract 1. Manufacture of ethanol extract of Citrus jujuba (1) One kilogram of Citrus jujuba was collected, immersed in 8 times 95% ethanol for 1-2 days, pulverized leaves, roots and stems, and further 12 times 95% ethanol And the extract is collected for 3 days. Ethanol is recovered under reduced pressure, and the concentrated solution is freeze-dried to obtain an ethanol extract of Citrus jujuba.
(2) 1 kg (or a part thereof) of a fresh product of the crab jujube is pulverized, and extracted three times with eight times the amount of crab jujuba of 95% ethanol to collect an extract. Ethanol is recovered under reduced pressure, and the concentrated solution is freeze-dried to obtain a methanol extract of Prunus jujuba.
(3) 1 kg of a fresh product (roots, stems, leaves, etc.) of the whole crab is collected, freeze-dried and pulverized (pulverization can be performed after freeze-drying is also possible), and 10 times the amount of crab-jujube 95% ethanol is added, and 3 times Extract by circulating flow and collect the extract. Ethanol is recovered under reduced pressure, and the concentrated solution is freeze-dried to obtain an extract of Citrus jujuba.

２．ハマナツメメタノール抽出物の製造
ハマナツメ植物全体の新鮮品１ｋｇを採取、粉砕しハマナツメ体積６倍量のメタノールを加え、３回回流抽出する。メタノールを減圧回収し、濃縮液を冷凍乾燥させてハマナツメメタノール抽出物を得る。 2. Manufacture of methanol extract of Citrus jujuba 1 kg of a fresh product of Citrus jujuba is collected, pulverized, added with 6 times the volume of Citrus jujuba, and extracted three times. The methanol is recovered under reduced pressure, and the concentrated liquid is freeze-dried to obtain an extract of Pomaria japonica.

３．ハマナツメベンジン抽出物の製造
（１）ハマナツメエタノール抽出物の濃縮液体をベンジンで抽出し、ベンジンを回収してから乾燥させる。
（２）ハマナツメメタノール抽出物乾燥サンプルに１０倍量の水混濁液を加え、ベンジンで抽出し、ベンジンを回収してから乾燥させる。
（３）ハマナツメエタノール抽出物の乾燥品に１０倍量のベンジンで回流抽出し、ベンジンを乾燥させて回収する。 3. Manufacture of Sorghum jujube extract (1) The concentrated liquid of Sorghum jujube ethanol extract is extracted with benzene, and the benzene is recovered and dried.
(2) A 10-fold amount of a water turbid solution is added to the dried sample of methanol extract, extracted with benzene, and the benzene is recovered and dried.
(3) A 10-fold amount of benzine is circulated to a dried product of the ethanol extract of Citrus jujuba, and the benzine is dried and collected.

４．ハマナツメ酢酸エチル抽出物の製造
（１）ハマナツメエタノール抽出物の濃縮液体に対して１０倍量のベンジンで抽出物を得た後さらに１０倍量の酢酸エチルで抽出する。酢酸エチルを回収後、乾燥させる。
（２）ハマナツメメタノール抽出物の乾燥品に１０倍量の水混濁液を加え、１０倍量のベンジンを回収した後、１０倍量の酢酸エチルを抽出する。酢酸エチルを回収後、乾燥させる。
（３）ハマナツメエタノール抽出物の乾燥サンプルに対して、６倍量のエチル回流を２回行う。酢酸エチルを回収してから乾燥させる。 4. Manufacture of ethyl acetate extract of Citrus jujuba (1) An extract is obtained with 10 times the amount of benzene relative to the concentrated liquid of the ethanol extract of Citrus jujuba, and then extracted with 10 times the amount of ethyl acetate. After collecting the ethyl acetate, it is dried.
(2) A 10-fold amount of a water turbid solution is added to a dried product of the methanol extract, and 10-fold amount of benzene is recovered, and then 10-fold amount of ethyl acetate is extracted. After collecting the ethyl acetate, it is dried.
(3) A 6-fold amount of ethyl recirculation is performed twice on the dried sample of the cranberry ethanol extract. The ethyl acetate is recovered and dried.

５．ハマナツメ酢酸エチルの抽出物タブレットの製造
３００ｇハマナツメ酢酸エチル抽出物を採取し、粉砕後、４０ウィルで濾過し、１００ｇ微晶質セルロース、５７．５ｇ乳糖、２０ｇクロスカルメロースナトリウムを加え、噴射体積濃度を混ぜあわせ９５％エタノール溶液を適量使い、顆粒に圧縮し、２４ウィルのフィルターに通して５０℃で乾燥させ、２０ｇクロスカルメロースナトリウムと２．５ｇのステアリン酸マグネシウムを加え、十分に混ぜ合わせ、圧縮し、ハマナツメ酢酸エチル抽出物タブレットを得る。 5. Preparation of an extract tablet of ethyl citrus ethyl acetate 300 g of an ethyl acetate extract was collected, pulverized, filtered with 40 wheels, added with 100 g of microcrystalline cellulose, 57.5 g of lactose, and 20 g of croscarmellose sodium. Combine with an appropriate amount of a 95% ethanol solution, compress into granules, pass through a 24-wheel filter, dry at 50 ° C., add 20 g croscarmellose sodium and 2.5 g magnesium stearate, mix thoroughly, Compress to obtain citrus ethyl acetate extract tablets.

６．ハマナツメエタノール抽出物顆粒剤の製造
１０００ｇのハマナツメエタノール抽出物を採取し、粉砕したあと４０ウィルでフィルタリングし、４０００ｇの粉砂糖を加える。混ぜた後、均等に９５％濃度のエタノール溶液を噴霧し、顆粒状にこねる。２４ウィルでフィルタリングし、５０℃で乾燥させた後、顆粒にし、ハマナツメエタノール抽出物顆粒剤を得る。 6. Preparation of Granules of Ethanol Jujube Extract 1000 g of ethanol extract of Thug Jujube are collected, pulverized, filtered with 40 wheels and added with 4000 g of powdered sugar. After mixing, spray 95% ethanol solution evenly and knead into granules. After filtering with 24 wheels and drying at 50 ° C., the mixture is granulated to obtain granules of ethanol extract of Citrus jujuba.

７．ハマナツメメタノール抽出物軟膏剤の製造
１１５ｇのステアリルアルコールを採取し、１１５ｇ白ワセリン、７０ｇグリセリンモノステアラートを加熱溶解し、油状物を得る。４０ｇのハマナツメメタノール抽出物を加える。別途１００ｇのグリセリン、１５ｇのラウリル硫酸ナトリウム、０．０１ｇの塩酸Ｌ−システインに６５０ｍｌの水を加え溶解させ、水状物を得る。それぞれ７５−８０℃に加熱し攪拌した後、水状物をゆっくりと油状物に加え、１５分攪拌し続ける。ハマナツメメタノール抽出物軟膏剤を得る。 7. Manufacture of Sorghum jujuba methanol extract ointment 115 g of stearyl alcohol was collected, and 115 g of white petrolatum and 70 g of glycerin monostearate were dissolved by heating to obtain an oil. Add 40 g of Sorghum jujuba methanol extract. Separately, 650 ml of water is added and dissolved in 100 g of glycerin, 15 g of sodium lauryl sulfate, and 0.01 g of L-cysteine hydrochloride to obtain a water-like substance. After each heating to 75-80 ° C and stirring, the water is slowly added to the oil and stirring is continued for 15 minutes. An ointment of methanol extract of Scutellaria is obtained.

８．ハマナツメエタノール抽出物ジェル剤の製造
１０ｇカルボマーを４２０ｍｌの純水に加え、攪拌する。１００ｍｌのプロピレングリコールを加え攪拌、１８ｇのトリエタノールアミンを加え、ジェル状にする。別途１００ｇハマナツメエタノール抽出物を採取し、２ｇのエチルパラベンと共に３５０ｍｌのエタノールに溶かし、攪拌してからジェル状物に加え、攪拌する。 8. Manufacture of gel extract of ethanol extract of Citrus jujuba 10 g carbomer is added to 420 ml of pure water and stirred. Add 100 ml of propylene glycol, stir and add 18 g of triethanolamine to form a gel. Separately, an extract of 100 g of jujube ethanol is collected, dissolved in 350 ml of ethanol together with 2 g of ethyl paraben, stirred, added to the gel, and stirred.

９．ハマナツメエタノール抽出物塗膜剤の製造
４０ｇのポリビニルアルコール１２４を採取し、４００ｍｌの純水に溶かす。別途１００ｇのハマナツメエタノール抽出物を４００ｍｌのエタノール中にとかし、さらに１００ｍｌのグリセリンを加え攪拌する。ゆっくりとポリビニルアルコール溶液中に溶かし、攪拌してから濾過し、濾過器にエタノールを１０００ｍｌ加える。 9. Manufacture of coat extract of ethanol extract of Citrus jujuba 40 g of polyvinyl alcohol 124 is collected and dissolved in 400 ml of pure water. Separately, 100 g of the jujuba ethanol extract is dissolved in 400 ml of ethanol, and 100 ml of glycerin is further added and stirred. Dissolve slowly in the polyvinyl alcohol solution, stir, filter, and add 1000 ml of ethanol to the filter.

１０．ハマナツメベンジン抽出物湿布剤の製造
１００ｇハマナツメベンジン抽出物の粉末を乳鉢に加え、５００ｍｌのピーナツオイルを加え、さらにゆっくりと水酸化カルシウム溶液を１０００ｍｌまで加え、白色乳状物を得る。 10. Manufacture of citrus extract in 100 g powder of citrus extract was added to a mortar, 500 ml of peanut oil was added, and calcium hydroxide solution was slowly added to 1000 ml to obtain a white milky substance.

１１．ハマナツメエタノール抽出物洗剤の製造
１００ｇのハマナツメエタノール抽出物を乳鉢に加え、５０ｍｌのグリセリンと適量の純水を加える。ノリ状に練り、少しずつ純水を加えて全量が均等になれば完成である。 11. Preparation of Dessert of Jujube Ethanol Extract 100 g of jujube ethanol extract is added to a mortar, and 50 ml of glycerin and an appropriate amount of pure water are added. It is completed when it is kneaded in a glue-like shape and pure water is added little by little to make the whole amount even.

（II）ハマナツメ抽出物の真菌活性研究
実施例１（１）で製造したハマナツメエタノール抽出物１ｇを採取し、５％のイソアルコール溶液に溶解させ、１０ｍｌの溶液を作る。０．２２ｕｍのフィルターで除菌する。１ｍｌの除菌した上記溶液を採取し、溶解冷却して５０℃にした９ｍｌのＰＤＡ培養液に加える。十分に混ぜ合わせ、迅速に直径６ｃｍの培養プレートに流し込み、静止させ、１０ｍｇ／ｍｌのハマナツメ抽出物が含まれるＰＤＡ培養プレートを作る。同様体積の５％イソアルコール溶液で空白対照ＰＤＡ培養プレートを作る。
採取した菌コロニーを上記薬品が含まれたＰＤＡ培養プレートに接種し、２５℃で恒温培養する。対照グループのコロニーが培養プレートの縁に到達するのを待ち、十字交差法ですべての培養プレート上のコロニー直径を計測し、校正して菌抑制率を算出する。 (II) Study on fungal activity of extract of Aspergillus niger 1 g of the extract of Aspergillus jujuba produced in Example 1 (1) was collected and dissolved in a 5% isoalcohol solution to prepare a 10 ml solution. Sterilize with a 0.22 um filter. 1 ml of the above sterilized solution is collected, added to 9 ml of PDA culture solution which has been dissolved and cooled to 50 ° C. Mix well, quickly pour into a 6 cm diameter culture plate, allow to rest, and make a PDA culture plate containing 10 mg / ml Diptera extract. Make a blank control PDA culture plate with a similar volume of 5% isoalcohol solution.
The collected bacterial colonies are inoculated on a PDA culture plate containing the above-mentioned drug, and incubated at 25 ° C at a constant temperature. Wait for the colony of the control group to reach the edge of the culture plate, measure the diameter of the colony on all culture plates by the cross-over method, and calibrate to calculate the bacterial inhibition rate.

結果は表１３の通りである。ハマナツメエタノール抽出物は各種真菌に対して明確な抑制作用を見せた。真菌はどれも代表的な発病菌である。結論として、ハマナツメエタノール抽出物には強力な抗真菌活性があり、真菌類薬物の製造に応用できる可能性が高い。 Table 13 shows the results. The ethanol extract of Aspergillus niger showed a clear inhibitory effect on various fungi. Fungi are all typical pathogenic fungi. In conclusion, the ethanol extract of Citrus jujuba has strong antifungal activity and is likely to be applicable to the production of fungal drugs.

V．ハマナツメ葉抽出物による免疫機能低下及び／或いは自己免疫疾の治療
（I）ハマナツメ抽出物の製造
１．全体エタノール抽出物の製造
ハマナツメ全体１ｋｇを採取し８倍量の９５％エタノールに１日浸漬し、粉砕する。さらに１０倍量の９５％エタノールに２日間浸漬し、抽出液を採取する。アルコール臭がなくなるまでエタノールを５０℃下で減圧回収し、乾燥させることでハマナツメエタノール抽出物を得る。 V. Treatment of Immune Function Decrease and / or Autoimmune Disease with Scutellaria Leaf Extract (I) Production of Scutellaria extract Production of Total Ethanol Extract 1 kg of whole clover is collected, immersed in 8 times 95% ethanol for 1 day, and pulverized. Further, it is immersed in a 10-fold amount of 95% ethanol for 2 days, and the extract is collected. Ethanol is recovered under reduced pressure at 50 ° C. until the alcohol odor disappears, and dried to obtain an ethanol extract of Citrus jujuba.

２．茎葉エタノール、ベンジンと酢酸エチル抽出物の製造
ハマナツメ茎葉１ｋｇを採取し、１０倍量の９５％エタノールに１日浸漬し、粉砕する。１０倍量の９５％エタノールで回流採取し、抽出液を得る。アルコール臭がなくなるまでエタノールを６０℃下で減圧回収し、乾燥後ハマナツメエタノール抽出物を得る。ハマナツメエタノール抽出物に水を加え、ベンジン、酢酸エチルでそれぞれ抽出することで、ハマナツメベンジン抽出物と酢酸エチル抽出物を得る。 2. Production of Forage Ethanol, Benzine and Ethyl Acetate Extracts 1 kg of clover foliage are collected, immersed in 10 times the amount of 95% ethanol for 1 day, and pulverized. It is collected by circulation with 10 volumes of 95% ethanol to obtain an extract. Ethanol is collected under reduced pressure at 60 ° C. until the alcohol odor disappears, and after drying, ethanol extract is obtained. Water is added to the ethanol extract of Citrus jujuba and extracted with benzene and ethyl acetate, respectively, to obtain a Citrus jujube extract and an ethyl acetate extract.

３．全体ベンジンと酢酸エチル抽出物の製造
ハマナツメ全体１ｋｇを１０倍量のエタノールに１日浸漬し、粉砕する。さらに８倍量のメタノールに２日浸漬し、抽出液を得る。４０℃下でメタノールを減圧回収し、乾燥させてハマナツメエタノール抽出物を得る。ハマナツメエタノール抽出物に水を加えベンジン、酢酸エチルでそれぞれ抽出することで、ハマナツメベンジン抽出物と酢酸エチル抽出物を得る。 3. Manufacture of whole benzine and ethyl acetate extract 1 kg of Aspergillus japonicus is immersed in 10 times volume of ethanol for 1 day and pulverized. It is further immersed in 8 times the volume of methanol for 2 days to obtain an extract. The methanol is recovered under reduced pressure at 40 ° C., and dried to obtain an ethanol extract of Citrus jujuba. Water is added to the ethanol extract of Citrus jujuba and extracted with benzene and ethyl acetate, respectively, to obtain an extract of Citrus jujube and an ethyl acetate.

４．成分定量分析
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、１０ｍｌの容器に移す。酢酸エチルを一定量加える。４ｍｌを精密に採取し、１０ｍｌの容器に移す。溶剤を揮発させた後、５％のバニリン−無水酢酸０．４ｍｌ、過塩素酸１．６ｍｌを加え混ぜ合わせ、酢酸エチルを一定量加え、希釈し、７０℃の恒温ウォーターバスで１５分加熱する。室温まで冷却し、１０ｍｌ容器に移し、酢酸エチルを一定量加えて希釈する。よく混ぜ合わせた後、５４０ｎｍ波長の吸光度を測定し、トリテルペノイドの総含有量（アメリカンカテキンでトリテルペノイドの含有量を計算する）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物におけるトリテルペノイド類の含有量は２３ｍｇだった。
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、５０ｍｌの容器に移し、エタノールを適量加える。超音波で溶解したあと、冷し、エタノールを一定量加え、混ぜ合わせる。精密に１ｍｌ採取し、１０ｍｌ容器に移し、水を一定量加え、混ぜ合わせる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移し、５１０ｎｍの波長で吸光度を計測し、サンプル溶液中の総フラボン含有量（ルチンでフラボン量を計算）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物のフラボン含有量は１０３ｍｇだった。
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、コルク付きのフラスコに移す。１８％のアンモニア水２ｍｌを加え、１時間湿潤させ、ジエチルエーテル：クロロホルム：エタノール（２５：８：２．５）の混合溶剤３０ｍｌを加える。超音波抽出を２０分行い、上澄み液を捨て、再度上記混合溶剤を３０ｍｌ加え、３０分冷蔵し冷ます。さらに超音波振動で２０分抽出を行い、同じ溶剤１５ｍｌで３回残滓と濾紙を洗浄し、濾液とフラスコ内の溶液を混ぜる。６０℃のウォーターバスで加熱乾燥させ、正確に１０ｍｌのクロロホルムで全部溶かし、正確に５ｍｌを採取し少量分液漏斗に移す。６ｍｌのクロロホルムと２ｍｌ緩衝液(ｐＨ＝５．０，０．２Ｍフタル酸水素カリウム緩衝液)を加える。１ｍｍｏｌ・Ｌ−１のＢＴＢで滴定しつつ絶え間なく振動させ、終点に近づいた時点で、クロロホルム層を分離し、新たにクロロホルムを５ｍｌ再度加える。滴定を続け、絶え間なく振動させて混ぜ合わせる。水層が黄色くなったら終点である。アルカロイド（ハマナツメアルカリＢでアルカロイドを計算）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物のアルカロイド含有量は２１ｍｇだった。
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル、精密に採取し、５０ｍｌの容器に移す。エタノール適量を加え、超音波で溶解させ、冷ます。エタノールを一定量加え、よく混ぜ合わせる。精密に１ｍｌを採取し、１０ｍｌの容器に移す７０％のエタノールを一定量加え、よく混ぜ合わせる。精密に３ｍｌを採取し、２５ｍｌの容器に移す。３４０ｎｍの波長で吸光度を測定する。サンプル溶液中のクマリン含有量（クマリンの量はウンベリフェロンが計算）を算出する。クマリン含有量（ウンベリフェロンでクマリンの量を算出する）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物の総クマリン含有量は１０．２ｇだった。
ハマナツメ茎葉酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、１０ｍｌの容器内に移し、酢酸エチルを一定量加える。そこから精密に４ｍｌの溶液を採取し、１０ｍｌの容器に移す。溶剤が揮発したあと、５％のバニリン−無水酢酸０．４ｍｌ、過塩素酸１．６ｍｌを混ぜ合わせる。酢酸エチルを一定量加え、希釈し、７０℃の恒温ウォーターバスで１５分加熱し、室温に冷まし、１０ｍｌの容器に移す。酢酸エチルを一定量加え、希釈し、よく混ぜ合わせた後、５４０ｎｍの波長の吸光度を測定し、サンプル溶液中のトリテルペノイド総含有量（アメリカンカテキンでトリテルペノイドの量を計算）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物に含まれるトリテルペノイド類成分は１０８ｍｇだった。
ハマナツメ茎葉酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、５０ｍｌの容器に移し、エタノールを適量加え、超音波で溶解させる。冷まし、エタノールを一定値加え、混ぜ合わせる。精密に１ｍｌ採取し、１０ｍｌの容器に移し、水を一定量加えて混ぜ合わせる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移し、５１０ｎｍの波長の吸光度を計測し、サンプル溶液中の総フラボン含有量（ルチンでフラボン量を計算）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物に含まれるフラボンは４９７ｍｇだった。
ハマナツメ全体酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、コルク付きのフラスコに移し、１８％のアンモニア水２ｍｌで１時間湿潤させる。ジエチルエーテル：クロロホルム：エタノール（２５：８：２．５）の混合溶剤３０ｍｌを加え、超音波抽出を２０分行い、フラスコ内の上澄み液を捨て、さらに上記混合溶剤を３０ｍｌ加える。３分ほど冷却し、再度超音波振動で２０分抽出を行い、濾過し、同じ溶剤１５ｍｌで３回残滓と濾紙を洗浄する。洗浄液と濾液をフラスコ内で混ぜ合わせ、６０℃のウォーターバスで蒸発させ、１０ｍｌのクロロホルムを正確に採取して加え、すべて溶解させた後、再度５ｍｌを採取し少量分液漏斗に移す。６ｍｌのクロロホルムと、２ｍｌ緩衝液(ｐＨ＝５．０，０．２Ｍフタル酸水素カリウム緩衝液)を加える。１ｍｍｏｌ・Ｌ−１のＢＴＢで滴定し、断続的に揺らし混ぜ合わせる。終点に近付いたらクロロホルム層を分離させ、新たに５ｍｌのクロロホルムを加え、滴定中も絶え間なく揺らし混ぜ合わせる。静止させて水層が黄色くなったら終点である。総アルカロイド（ハマナツメアルカリＢでアルカロイドを計算）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物中のアルカロイド含有量は１０７ｍｇだった。
ハマナツメ全体酢酸エチル抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、５０ｍｌ容器内に移す。エタノールを適量加え、混ぜ合わせる。３ｍｌを精密に採取し、２５ｍｌの容器に移し、３４０ｎｍの波長の吸光度を測定し、サンプル溶液の総クマリン含有量（ウンベリフェロンでクマリン量を計算）を算出する。結果、１ｇハマナツメ抽出物の総クマリン含有量は１８６ｍｇだった。 4. Component Quantitative Analysis Three samples of 0.1 g of the bean extract stir-leaf benzine extract are collected and transferred to a 10 ml container. Add a fixed amount of ethyl acetate. Precisely take 4 ml and transfer to a 10 ml container. After evaporating the solvent, add and mix 0.4 ml of 5% vanillin-acetic anhydride and 1.6 ml of perchloric acid, add a certain amount of ethyl acetate, dilute, and heat in a constant temperature water bath at 70 ° C. for 15 minutes. . Cool to room temperature, transfer to a 10 ml container and dilute by adding a fixed amount of ethyl acetate. After mixing well, the absorbance at a wavelength of 540 nm is measured to calculate the total content of triterpenoids (the content of triterpenoids is calculated using American catechin). As a result, the content of triterpenoids in 1 g of Aspergillus niger was 23 mg.
Three samples of 0.1 g of the bean extract stir-leaf benzine extract are precisely collected, transferred to a 50 ml container, and an appropriate amount of ethanol is added. After dissolving with ultrasonic waves, cool, add a certain amount of ethanol, and mix. Precisely collect 1 ml, transfer to a 10 ml container, add a certain amount of water and mix. A 3 ml sample is precisely collected, transferred to a 25 ml container, and the absorbance is measured at a wavelength of 510 nm to calculate the total flavone content in the sample solution (calculate the amount of flavone with rutin). As a result, the flavone content of 1 g of Aspergillus niger extract was 103 mg.
Three samples of 0.1 g of the bean extract stinging bean extract are precisely collected and transferred to a flask with a cork. 2 ml of 18% ammonia water is added, wet for 1 hour, and 30 ml of a mixed solvent of diethyl ether: chloroform: ethanol (25: 8: 2.5) is added. Perform ultrasonic extraction for 20 minutes, discard the supernatant, add 30 ml of the above mixed solvent again, refrigerate for 30 minutes and cool. Further, extraction is performed by ultrasonic vibration for 20 minutes, the residue and the filter paper are washed three times with 15 ml of the same solvent, and the filtrate and the solution in the flask are mixed. Heat and dry in a water bath at 60 ° C., completely dissolve in exactly 10 ml of chloroform, collect exactly 5 ml, and transfer to a small amount separating funnel. Add 6 ml chloroform and 2 ml buffer (pH = 5.0, 0.2 M potassium hydrogen phthalate buffer). Vibration is constantly performed while titrating with 1 mmol L-1 of BTB. When the end point is approached, the chloroform layer is separated, and 5 ml of chloroform is added again. Continue titration and mix constantly with shaking. The end point is when the water layer turns yellow. Calculate alkaloids (calculate alkaloids with Albacore Alkaline B). As a result, the alkaloid content of 1 g of Aspergillus niger was 21 mg.
Three samples of 0.1 g each of the bean extract of radish foliage are precisely collected and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve with ultrasound, and cool. Add a certain amount of ethanol and mix well. Collect 1 ml precisely, transfer to a 10 ml container, add a certain amount of 70% ethanol, and mix well. Take exactly 3 ml and transfer to a 25 ml container. The absorbance is measured at a wavelength of 340 nm. The coumarin content in the sample solution (the amount of coumarin is calculated by umbelliferone) is calculated. The coumarin content (calculate the amount of coumarin with umbelliferone) is calculated. As a result, the total coumarin content of 1 g of the jujuba extract was 10.2 g.
Three samples of 0.1 g of the ethyl acetate extract of sprouts are collected and transferred into a 10 ml container, and a fixed amount of ethyl acetate is added. From there, 4 ml of the solution is precisely collected and transferred to a 10 ml container. After the solvent has evaporated, 0.4 ml of 5% vanillin-acetic anhydride and 1.6 ml of perchloric acid are mixed. A certain amount of ethyl acetate is added to dilute the solution, which is heated in a constant temperature water bath at 70 ° C. for 15 minutes, cooled to room temperature, and transferred to a 10 ml container. After adding a certain amount of ethyl acetate, diluting and mixing well, the absorbance at a wavelength of 540 nm is measured, and the total content of triterpenoids in the sample solution (the amount of triterpenoids is calculated using American catechin) is calculated. As a result, the amount of the triterpenoid component contained in 1 g of the Aspergillus niger was 108 mg.
Three 0.1 g samples of the ethyl acetate extract of the stalk of leaves are transferred to a 50 ml container, an appropriate amount of ethanol is added, and the mixture is ultrasonically dissolved. Cool, add a certain amount of ethanol and mix. Precisely collect 1 ml, transfer to a 10 ml container, add a certain amount of water and mix. A 3 ml sample is precisely collected, transferred to a 25 ml container, and the absorbance at a wavelength of 510 nm is measured to calculate the total flavone content in the sample solution (calculate the amount of flavone with rutin). As a result, the amount of flavone contained in 1 g of Aspergillus niger was 497 mg.
Three samples of 0.1 g of the whole ethyl acetate extract were collected, transferred to a flask with a cork, and wetted with 2 ml of 18% aqueous ammonia for 1 hour. 30 ml of a mixed solvent of diethyl ether: chloroform: ethanol (25: 8: 2.5) is added, ultrasonic extraction is performed for 20 minutes, the supernatant in the flask is discarded, and 30 ml of the above mixed solvent is further added. The mixture is cooled for about 3 minutes, extracted again by ultrasonic vibration for 20 minutes, filtered, and the residue and the filter paper are washed three times with 15 ml of the same solvent. The washing solution and the filtrate are mixed in a flask, evaporated in a water bath at 60 ° C., 10 ml of chloroform is accurately collected and added, and after all of them are dissolved, 5 ml is collected again and transferred to a small amount separating funnel. 6 ml of chloroform and 2 ml of buffer (pH = 5.0, 0.2 M potassium hydrogen phthalate buffer) are added. Titrate with 1 mmol L-1 BTB, shake intermittently and mix. When approaching the end point, separate the chloroform layer, add another 5 ml of chloroform, and shake constantly during the titration. It is the end point when it stops and the water layer turns yellow. Calculate total alkaloids (calculate alkaloids with Albacore Alkaline B). As a result, the alkaloid content in 1 g of Aspergillus niger was 107 mg.
Three samples of 0.1 g each of the whole ethyl acetate extract of Scutellaria are collected and transferred into a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol and mix. 3 ml is accurately collected, transferred to a 25 ml container, and the absorbance at a wavelength of 340 nm is measured to calculate the total coumarin content of the sample solution (the coumarin amount is calculated by umbelliferone). As a result, the total coumarin content of 1 g of Astragalus extract was 186 mg.

（II）ハマナツメ製剤の製造
１．タブレット剤の製造
ハマナツメ全体エタノール抽出物を３００ｇ採取し、適切な補材、例えば１００ｇ微晶質セルロース、５７．５ｇ乳糖、２０ｇクロスカルメロースナトリウム等を加え、タブレット剤を製造する。 (II) Manufacture of Sorghum Jujube Preparation Production of Tablets A total of 300 g of the extract of ethanol from Aspergillus niger is collected, and an appropriate supplement, for example, 100 g of microcrystalline cellulose, 57.5 g of lactose, 20 g of croscarmellose sodium is added to produce a tablet.

２．カプセル剤の製造
ハマナツメ茎葉酢酸エチル抽出物を採取し、適切な補材を加える。例えば乳糖、加圧性澱粉、カルボキシメチル澱粉、微晶質セルロース等でカプセル剤を製造する 2. Manufacture of capsules Extract the ethyl acetate extract of the foliage and add appropriate supplements. For example, capsules are made with lactose, pressurized starch, carboxymethyl starch, microcrystalline cellulose, etc.

３．顆粒剤の製造
ハマナツメ全体メタノール抽出物を採取し、適量の補材を加える。例えば、乳糖、澱粉、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、微粉シリコン等で顆粒剤を製造する。 3. Production of granules Collect the methanol extract of whole clover and add an appropriate amount of supplement. For example, granules are produced from lactose, starch, methylcellulose, hydroxymethylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, hydroxypropylcellulose, polyvinylpyrrolidone, finely divided silicon and the like.

４．軟膏剤の製造
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を採取し、適量の補材を加える。例えばステアリルアルコール、グリセロールモノステアレート、グリセリン、ステアレート等で軟膏剤を製造する。 4. Manufacture of ointment Extract the benzine extract of stalks and leaves and add an appropriate amount of supplementary material. For example, ointments are prepared with stearyl alcohol, glycerol monostearate, glycerin, stearate and the like.

５．栓剤の製造
ハマナツメ全体エタノール抽出物を採取し、適量の補材を加える。例えば混合脂肪酸グリセリド、ＰＥＧ、蜜ろう等で栓剤を製造する。 5. Manufacture of plug agent Collect whole ethanol extract of Sorghum and add an appropriate amount of supplement. For example, a plug is manufactured with mixed fatty acid glyceride, PEG, beeswax and the like.

（III）体外細胞学研究
１．ハマナツメ抽出物のマウス体外増殖脾臓リンパ細胞に対する影響
１．１．マウス脾臓リンパ細胞の製造
無菌で昆明マウスの脾臓を採取し、ＲＰＭＩ１６４０を適量加えた培養プレート内に置く。注射器針で細かく砕き、２００ウィルのフィルターでろ過したあと、遠心管に移し、ＲＰＭＩ１６４０で洗浄したあと、細胞を収集する。１ｍｌのヘモグロビン裂解液を加える。４℃下で５−１０分放置したあと、１５００ｒ／分で５分間遠心分離し、上澄み液を捨てる。ＲＰＭＩ１６４０培養ベースで２回洗浄し、最後に細胞懸濁液を１ｍｌのＲＰＭＩ１６４０完全培養プレートに浮かせる。トリパンブルー染色測定で生存率を測定し、結果、脾臓組織の生存率は９５％以上だった。上記の脾臓組織懸濁液を細胞密度２×１０^６個／ｍｌに希釈する。 (III) In vitro cytology research Effect of Aspergillus niger extract on mouse ex vivo expanded spleen lymphocytes 1.1. Production of Mouse Spleen Lymphocytes The spleen of a Kunming mouse is aseptically collected and placed in a culture plate containing an appropriate amount of RPMI1640. The cells are triturated with a syringe needle, filtered through a 200-wil filter, transferred to a centrifuge tube, washed with RPMI 1640, and the cells are collected. Add 1 ml of hemoglobin digestion solution. After standing at 4 ° C. for 5 to 10 minutes, the mixture is centrifuged at 1500 r / min for 5 minutes, and the supernatant is discarded. Wash twice with RPMI 1640 culture base and finally float cell suspension on 1 ml RPMI 1640 complete culture plate. The viability was measured by trypan blue staining, and as a result, the viability of the spleen tissue was 95% or more. The above spleen tissue suspension is diluted to a cell density of 2 × 10 ⁶ cells / ml.

１．２．ハマナツメ抽出物のマウス体外増殖リンパ細胞に対する影響
２×１０^６個／ｍｌの脾臓細胞懸濁液を１００μｌ／ウィルの９６ウィルプレートに加える。空白グループ、対照グループとハマナツメ抽出物グループに分ける。対照グループの各ウィルには１００μｌのＲＰＭＩ１６４０完全培養ベースを加える。ハマナツメ抽出物には各ウィルにさらに１００μｌの異なる濃度のハマナツメ抽出物のＲＰＭＩ１６４０完全培養ベース溶液を加える。別途空白グループをつくり、培養ベースのみを加える。上記の９６ウィルプレートを５％ＣＯ_２、３７℃の培養器内にて６０時間培養する。ウィルプレートを取り出し、各ウィルの液体を吸い出し、ＰＢＳで３回洗浄した後、１００μｌの培養ベースと２０μｌのＩＭＴＴ液（５ｍｇ・ｍｌ^−１）を加える。再度３７℃、５％ＣＯ_２の培養器（体積比で５％ＣＯ_２を含む湿度環境）で４時間培養し、培養プレートを取り出す。上澄み液を吸い出し、１５０μｌのジメチルスルホキシドを加える。ウィルプレートを微孔振動機で１０分振動させ、結晶ホルマザンを十分に溶解させた後、酵素免疫検査機上で４９０ｎｍの色彩比較を行った結果、公式（１）でハマナツメ抽出物のマウス体外脾臓細胞平均生存率を算出する。
平均生存率（％）=（実験グループ値−空白グループ値）／（対照グループ値−空白グループ値）× １００％（１） 1.2. Effect of Scutellaria extract on mouse extra-proliferating lymphocytes 2 × 10 ⁶ / ml spleen cell suspension is added to a 96 μl plate of 100 μl / wheel. Separate into blank group, control group and Syringa extract group. 100 μl of RPMI 1640 complete culture base is added to each wheel of the control group. To the extract of Sorghum jujube, further 100 μl of RPMI 1640 complete culture base solution of Sorghum jujuba extract is added to each wheel at different concentrations. Create a blank group separately and add only the culture base. The 96-well plate is cultured for 60 hours in an incubator at 37 ° C. with 5% CO ₂ . After taking out the wheel plate, aspirating the liquid from each wheel and washing three times with PBS, 100 μl of culture base and 20 μl of IMTT solution (5 mg · ml ⁻¹ ) are added. The cells are cultured again for 4 hours at 37 ° C. in a 5% CO ₂ incubator (humidity environment containing 5% CO ₂ by volume), and the culture plate is taken out. Aspirate the supernatant and add 150 μl of dimethyl sulfoxide. The will plate was vibrated for 10 minutes with a microporous vibrator to sufficiently dissolve the crystalline formazan, and then subjected to a color comparison at 490 nm on an enzyme immunoassay apparatus. Calculate the average cell viability.
Average survival rate (%) = (experimental group value−blank group value) / (control group value−blank group value) × 100% (1)

結果、ハマナツメ抽出物濃度が０．００４ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌの時、マウス脾臓細胞の平均生存率が１１７．８５％、１０７．２１％及び７７．４６％となった。結果から低濃度のハマナツメ抽出物はマウスの体外脾臓細胞増殖を促進することができ、高濃度のハマナツメ抽出物は脾臓細胞の増殖に一定の抑制作用があった。 As a result, when the extract of Scutellaria japonica was at concentrations of 0.004 mg / ml, 0.02 mg / ml and 0.2 mg / ml, the average survival rates of mouse spleen cells were 117.85%, 107.21% and 77.46%. became. From the results, it was found that a low concentration of S. jujuba extract was able to promote the extracorporeal spleen cell growth of mice, and a high concentration of S. jujuba extract had a certain inhibitory effect on the proliferation of spleen cells.

２．ハマナツメ抽出物のＣｏｎＡ誘導された脾臓細胞体外増殖の影響
２×１０^６個／ｍｌの脾臓細胞懸濁液を１００μｌ／ウィルの９６ウィルプレートに加える。空白グループ、対照グループとハマナツメ抽出物グループに分ける。対照グループの各ウィルには１００μｌのＲＰＭＩ１６４０完全培養ベースを加える。ＣｏｎＡグループにはさらに１００μｌのＣｏｎＡが２５μｇ／ｍｌ含まれるＲＰＭＩ１６４０完全培養ベース溶液を加える。ハマナツメ抽出物には各ウィルにさらに１００μｌの異なる濃度のハマナツメ抽出物のＲＰＭＩ１６４０完全培養ベース溶液を加える（溶液中に２５μｇ／ｍｌＣｏｎＡが含まれている）。別途空白グループを作り、培養ベースのみ加える。上記９６ウィルプレートを５％ＣＯ_２、３７℃の培養器内で６０時間培養する。ウィルプレートを取り出し、各ウィル内の液体を吸い出し、ＰＢＳで３回洗浄し、１００μｌの培養ベースと２０μｌのＩＭＴＴ液（５ｍｇ・ｍｌ^−１）を加え、さらに３７℃、５％ＣＯ_２の培養器（体積比で５％ＣＯ_２を含む湿度環境）で４時間培養した後、細胞培養プレートを取り出し、上澄み液を吸い出し、１５０μｌジメチルスルホキシドを加え、培養プレートを微孔板振動機に１０分間かける。結晶ホルマザンが十分に溶解した後、酵素免疫計測器にて４９０ｎｍで彩色比較する。公式（１）に基づいてＣｏｎＡグループとハマナツメ抽出物グループのマウスの脾臓組織体外平均生存率を計算した。再度公式（２）でハマナツメ抽出物のＣｏｎＡ誘導のマウス脾臓細胞体外増殖の増殖率を計算した。
相対増殖率（％）=（実験グループ／ＣｏｎＡ対照グループ−１）×１００％（２） 2. Effect of ConA-induced spleen cell extracellular proliferation of Aspergillus niger extract 2 × 10 ⁶ / ml spleen cell suspension is added to a 100 μl / will 96-well plate. Separate into blank group, control group and Syringa extract group. 100 μl of RPMI 1640 complete culture base is added to each wheel of the control group. To the ConA group, an additional 100 μl of ConA at 25 μg / ml RPMI 1640 complete culture base solution is added. To the Willing extract is further added 100 μl of a different concentration of RPMI 1640 complete culture base solution of the extract in each will (25 μg / ml ConA in solution). Create a blank group separately and add only the culture base. The 96-well plate is cultured in a 5% CO ₂ , 37 ° C. incubator for 60 hours. Remove the will plate, aspirate the liquid in each will, wash three times with PBS, add 100 μl of culture base and 20 μl of IMTT solution (5 mg · ml ⁻¹ ), and further incubate at 37 ° C., 5% CO ₂ After culturing for 4 hours in a (humidity environment containing 5% CO ₂ by volume ratio), the cell culture plate is taken out, the supernatant is sucked out, 150 μl of dimethyl sulfoxide is added, and the culture plate is placed on a micropore vibrator for 10 minutes. After the crystalline formazan is sufficiently dissolved, the coloring is compared at 490 nm using an enzyme immunoassay. Based on the formula (1), the average survival rate of spleen tissues in the mice of the ConA group and the Aspergillus niger extract group was calculated. The proliferation rate of ConA-induced mouse spleen extracellular proliferation of the Aspergillus japonicus extract was calculated again by the formula (2).
Relative growth rate (%) = (experimental group / ConA control group-1) × 100% (2)

結果、ハマナツメ抽出物濃度が０．００４ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ時、ＣｏｎＡグループに比べると、相対増殖率はそれぞれ１５．１１％、５．６９％と−１４．３５％だった。結論として低濃度のハマナツメ抽出物はＣｏｎＡ誘導と比べてマウス脾臓細胞体外増殖に促進作用が認められ、高濃度時の抑制作用がより突出していることが分かった。 As a result, the relative growth rates were 15.11%, 5.69%, and -14.14% when compared to the ConA group when the extract of Scutellaria was at concentrations of 0.004 mg / ml, 0.02 mg / ml, and 0.2 mg / ml, respectively. It was 35%. In conclusion, it was found that a low concentration of the extract of Aspergillus niger has a promoting effect on extracellular proliferation of mouse spleen cells as compared with ConA induction, and a suppressive effect at a high concentration was more prominent.

３．ハマナツメ抽出物のＬＰＳ誘導による脾臓細胞体外増殖に対する影響
９６ウィルのウィルプレートに２×１０^６個／ｍｌの脾臓細胞懸濁液を１００μｌ／ウィル加える。空白グループ、対照グループ、ＬＰＳグループ及びハマナツメ抽出部グループに分ける。対照グループの各ウィルには１００μｌのＲＰＭＩ１６４０完全培養ベースを加える。ＬＰＳグループにはさらに１００μｌのＬＰＳが２０μｇ／ｍｌ含まれるＲＰＭＩ１６４０完全培養ベース溶液を加える。ハマナツメ抽出物グループの各ウィルには１００μｌの異なる濃度のハマナツメ抽出物を含むＲＰＭＩ１６４０完全培養ベース溶液（溶液中には同時に２０μｇ／ｍｌのＬＰＳが含まれる）を加える。別途空白グループを作り、培養ベースのみを加える。上記の９６ウィルプレートを５％ＣＯ_２、３７℃の培養器にて６０時間培養する。プレートを取り出し、ウィル内の液体を吸い出し、ＰＢＳで３回洗浄し、１００μｌ培養ベースと２０μｌＭＴＴ液（５ｍｇ・ｍｌ^−１）を加え、再度３７℃、５％ＣＯ_２の培養器（体積比で５％ＣＯ_２を含む湿度環境）で４時間培養する。プレートを取り出し、上澄み液を吸い出し、１５０μｌのジメチルスルホキシドを加え、プレートを微孔振動機に１０分掛ける。結晶物ホルマザンが十分に溶解した後、酵素免疫計測器で４９０ｎｍの色彩比較を行う。記録に対して公式（１）を用いてＬＰＳグループとハマナツメ抽出物のマウス脾臓細胞の体外平均生存率を算出する。再度公式（２）を用いてハマナツメ抽出物のＬＰＳ誘導のマウス脾臓細胞体外増殖の増殖率を調べた。
結果、ハマナツメ抽出物の濃度が０．００４ｍｇ／ｍｌ、０．０２ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌ時、ＬＰＳグループの相対増殖率はそれぞれ３４．３７％、２０．４８％と−１５．６０％で、ハマナツメ抽出部低濃度時、ＬＰＳ誘導マウス脾臓細胞体外増殖率には促進作用があり、高濃度時には抑制作用があることが分かった。これはハマナツメ抽出物のＣｏｎＡ誘導の脾臓細胞体外増殖に双方向性免疫調節機能がある結論と一致している。 3. Influence of LPS-induced spleen cell extracellular proliferation of Aspergillus niger extract 2 × 10 ⁶ cells / ml of spleen cell suspension is added to a 96-wheel plate at 100 μl / wheel. The group is divided into a blank group, a control group, an LPS group, and a radish extractor group. 100 μl of RPMI 1640 complete culture base is added to each wheel of the control group. To the LPS group, an additional 100 μl of RPMI 1640 complete culture base solution containing 20 μg / ml of LPS is added. To each will of the Sorghum extract group is added 100 μl of RPMI 1640 complete culture base solution containing different concentrations of Sorghum extract (20 μg / ml LPS in solution simultaneously). Create a blank group separately and add only the culture base. The above 96-well plate is cultured for 60 hours in a 5% CO ₂ , 37 ° C. incubator. The plate is taken out, the liquid in the wheel is sucked out, washed three times with PBS, 100 μl of culture base and 20 μl of MTT solution (5 mg · ml ⁻¹ ) are added, and the mixture is again placed at 37 ° C., 5% CO ₂ incubator (5% by volume). (Humidity environment containing% CO ₂ ) for 4 hours. The plate is removed, the supernatant is aspirated, 150 μl of dimethyl sulfoxide is added, and the plate is placed on a microporator for 10 minutes. After the crystalline formazan is sufficiently dissolved, color comparison at 490 nm is performed using an enzyme immunoassay. The in vitro average survival rate of mouse spleen cells of the LPS group and Scutellaria extract is calculated using the formula (1) for the record. Again using the formula (2), the growth rate of LPS-induced mouse spleen extracellular proliferation of the clover extract was examined.
As a result, the relative growth rates of the LPS group were 34.37%, 20.48% and -15.60%, respectively, when the concentration of the extract was 0.004 mg / ml, 0.02 mg / ml, and 0.2 mg / ml. Thus, it was found that the LPS-induced spleen cell extracellular proliferation rate of LPS-induced mouse extracellular growth rate had a promoting effect when the extract was low, and a suppressive effect when the concentration was high. This is consistent with the conclusion that there is a bidirectional immunomodulatory function in ConA-induced splenocyte extracorporeal proliferation of Aspergillus niger extract.

（IV）薬理学検証
１．エタノール、メタノール、ベンジン抽出物及び酢酸エチル抽出物の免疫低下非特異性免疫機能に対する影響（腹腔マクロファージ呑噬法）
ＫＭマウス８０匹を体重に基づき８グループ、それぞれ懸濁剤グループ（０．５％トラガカント）、モデル対照グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（カワラタケ多糖類）、酢酸エチル抽出物低量投薬グループ、酢酸エチル抽出物大量投薬グループ、エタノール抽出物グループ、メタノール抽出物グループ、ベンジン抽出物グループに分ける。サンプル薬物或いは懸濁剤を毎日１回、連続１４日間、胃管投薬する。懸濁剤対照グループ以外、投薬第８、１０、１２日に２５ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド生理食塩水溶液を腹腔注射し、免疫低下を引き起こす。第１３日、１４日にそれぞれ６％澱粉溶液を腹腔注射する。第１４日目の最終投薬１時間後、５％トリヘモグロビン生理食塩水懸濁液１ｍｌを腹腔注射する。３０分後、頸椎脱臼で殺処分し、腹腔に生理食塩水２ｍｌを注入し、腹部を軽くマッサージする。１分後腹部を切開し、腹腔洗浄液１ｍｌを吸い取り、２枚のスライドに均等に乗せ、３７℃の保温器内で３０分培養する。生理食塩水で洗浄し、陰干しし、１：１のアセトン-メタノール溶液に固定し、４％（ｖ／ｖ）Ｇｉｅｍｓａ−ＰＢＳで３分染色する。蒸留水で洗浄し、陰干しし、顕微鏡でマクロファージのパーセントを算出する。 (IV) Pharmacology verification Effect of ethanol, methanol, benzine extract and ethyl acetate extract on immune-lowering non-specific immune function (peritoneal macrophage swallowing method)
Eighty KM mice were divided into eight groups based on body weight, each of which was a suspension group (0.5% tragacanth), a model control group (0.5% tragacanth), a positive control group (Kawataketake polysaccharide), and a low amount of ethyl acetate extract. The group is divided into a dosage group, a large dose group of ethyl acetate extract, an ethanol extract group, a methanol extract group and a benzine extract group. The sample drug or suspension is administered by gavage once daily for 14 consecutive days. Except for the suspension control group, a 25 mg / kg cyclophosphamide saline solution is intraperitoneally injected on the eighth, tenth and twelfth dosing days to cause immunosuppression. On days 13 and 14, a 6% starch solution is injected intraperitoneally. One hour after the last dose on the 14th day, 1 ml of a 5% trihemoglobin saline suspension is intraperitoneally injected. Thirty minutes later, the mice are sacrificed by cervical dislocation, 2 ml of physiological saline is injected into the abdominal cavity, and the abdomen is lightly massaged. One minute later, the abdomen is incised, 1 ml of the peritoneal lavage solution is sucked, placed evenly on two slides, and cultured in a 37 ° C incubator for 30 minutes. The cells are washed with physiological saline, shaded, fixed in a 1: 1 acetone-methanol solution, and stained with 4% (v / v) Giemsa-PBS for 3 minutes. Wash with distilled water, shade, and calculate the percentage of macrophages under a microscope.

結果は表１４の通りである。ハマナツメ酢酸エチル抽出物は０．１ｇ／ｋｇ及びそれ以上の薬物を１４日間胃管投薬した場合、顕著に免疫機能を高め、マウス腹腔マクロファージの貪食機能を抑制した。尚且つ０．４ｇ／ｋｇの投薬強度とカワラタケ多糖類グループの結果に有意差が見られなかった。エタノール、メタノール、ベンジン抽出物１．２ｇ／ｋｇも免疫低下マウス腹腔マクロファージの貪食機能を効果的に増強することが分かった。該四種類の抽出物は免疫低下動物に対して効果的に免疫増強作用があることを示している。 The results are as shown in Table 14. When a drug of 0.1 g / kg or more was administered by gavage for 14 days, the ethyl acetate extract of Scutellaria significantly increased the immune function and suppressed the phagocytic function of mouse peritoneal macrophages. In addition, there was no significant difference between the results of the 0.4 g / kg dosing strength and the Kawatake mushroom polysaccharide group. It was found that ethanol, methanol, and benzine extract 1.2 g / kg also effectively enhanced the phagocytic function of immunoperpetent mouse peritoneal macrophages. These four extracts have been shown to have an effective immunopotentiating effect on immunocompromised animals.

２．エタノール、メタノール、ベンジン抽出物及び酢酸エチル抽出物の免疫低下マウスの特異性免疫機能に対する影響（２，４−ジフルオロフェニル硝酸による耳腫脹法）
ＫＭマウス８０匹を体重に基づき８グループ、それぞれ懸濁剤グループ（０．５％トラガカント）、モデル対照グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（カワラタケ多糖類）、酢酸エチル抽出物低量投薬グループ、酢酸エチル抽出物大量投薬グループ、エタノール抽出物グループ、メタノール抽出物グループ、ベンジン抽出物グループに分ける。サンプル薬物或いは懸濁剤を毎日１回、連続１４日間、胃管投薬する。懸濁剤対照グループ以外に、投薬第８、１０、１２日に２５ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド生理食塩水溶液を腹腔注射し、免疫を低下させる。第９日目に１％２，４−ジフルオロフェニル硝酸（ＤＮＦＢ）溶液（１００ｍｇＤＮＦＢを採取して１：１のアセトン−植物油混合物を混ぜ合わせる。１０ｍｌ）２５μｌをマウス腹部に塗る。第１３日の投薬１時間後に１０μｌの１％ＤＮＦＢ溶液をマウス左耳に塗布する。塗布後２４時間、最終投薬後１時間後に頸椎脱臼で殺処分し、耳を切除、重さを量り、耳の腫脹度を測る。 2. Effects of ethanol, methanol, benzine extract and ethyl acetate extract on specific immune function of immunocompromised mice (ear swelling with 2,4-difluorophenyl nitrate)
Eighty KM mice were divided into eight groups based on body weight, each of which was a suspension group (0.5% tragacanth), a model control group (0.5% tragacanth), a positive control group (Kawataketake polysaccharide), and a low amount of ethyl acetate extract. The group is divided into a dosage group, a large dose group of ethyl acetate extract, an ethanol extract group, a methanol extract group and a benzine extract group. The sample drug or suspension is administered by gavage once daily for 14 consecutive days. In addition to the suspension control group, immunity is reduced by intraperitoneal injection of a 25 mg / kg cyclophosphamide saline solution on days 8, 10 and 12 of dosing. On day 9, 25 μl of a 1% 2,4-difluorophenyl nitric acid (DNFB) solution (100 mg DNFB is collected and mixed with a 1: 1 acetone-vegetable oil mixture; 10 ml) is spread on the abdomen of the mouse. One hour after dosing on day 13, 10 μl of a 1% DNFB solution is applied to the left ear of the mouse. Twenty-four hours after application and one hour after the final dose, the mice are sacrificed by cervical dislocation, the ears are excised, weighed, and the ear swelling is measured.

結果は表１５の通りである。ハマナツメ酢酸エチル抽出物は免疫低下マウスのＤＮＦＢによる耳腫脹程度を増加させ、免疫低下動物の細胞免疫機能に対して増強作用を示した。エタノール、メタノール、ベンジン抽出物１．２ｇ／ｋｇ、及び酢酸エチル抽出物の作用は類似しており、該四種類の抽出物はともに免疫低下動物の特異性免疫作用を効果的に強化することを示した。 Table 15 shows the results. The extract of ethyl acetate of Scutellaria increased the ear swelling due to DNFB in immunocompromised mice, and showed an enhancing effect on the cellular immune function of immunocompromised animals. The effects of ethanol, methanol, benzene extract 1.2 g / kg, and ethyl acetate extract are similar, and all four extracts effectively enhance the specific immunity of immunocompromised animals. Indicated.

３．エタノール、メタノール、ベンジン抽出物と酢酸エチル抽出物の正常マウスの非特異性免疫機能への影響（腹腔マクロファージ貪食法）
ＫＭマウス８０匹を体重に基づき８グループ、それぞれ懸濁剤グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（カワラタケ多糖類）、抑制作用陽性対照グループ、酢酸エチル抽出物低量投薬グループ、酢酸エチル抽出物大量投薬グループ、エタノール抽出物グループ、メタノール抽出物グループ、ベンジン抽出物グループに分ける。抑制作用陽性対照グループに第１３日目に一過性皮下注射を行う以外、サンプル薬物或いは懸濁剤を毎日１回、連続１４日間、胃管投薬する。第１３日目、１４日目にそれぞれ６％澱粉溶液を腹腔注射する。第１４日目の最終投薬１時間後、５％トリヘモグロビン生理食塩水懸濁液１ｍｌを腹腔注射する。３０分後、頸椎脱臼で殺処分し、腹腔に生理食塩水２ｍｌを注入し、腹部を軽くマッサージする。１分後腹部を切開し、腹腔洗浄液１ｍｌを吸い取り、２枚のスライドに均等に乗せ、３７℃の保温器内で３０分培養する。生理食塩水で洗浄し、陰干しし、１：１のアセトン-メタノール溶液に固定し、４％（ｖ／ｖ）Ｇｉｅｍｓａ−ＰＢＳで３分染色する。蒸留水で洗浄し、陰干しし、顕微鏡でマクロファージのパーセントを算出する。 3. Effect of ethanol, methanol, benzene extract and ethyl acetate extract on nonspecific immune function in normal mice (peritoneal macrophage phagocytosis)
Eighty KM mice were divided into eight groups based on body weight, each of which was a suspension group (0.5% tragacanth), a positive control group (Kawatake mushroom polysaccharide), an inhibitory positive control group, an ethyl acetate extract low-dose group, and ethyl acetate. The extract is divided into a large dose group, an ethanol extract group, a methanol extract group, and a benzine extract group. A sample drug or suspension is administered by gavage once daily for 14 consecutive days, except that a transient subcutaneous injection is performed on the thirteenth day in the positive control control group. On days 13 and 14, a 6% starch solution is injected intraperitoneally. One hour after the last dose on the 14th day, 1 ml of a 5% trihemoglobin saline suspension is intraperitoneally injected. Thirty minutes later, the mice are sacrificed by cervical dislocation, 2 ml of physiological saline is injected into the abdominal cavity, and the abdomen is lightly massaged. One minute later, the abdomen is incised, 1 ml of the peritoneal lavage solution is sucked, placed evenly on two slides, and cultured in a 37 ° C incubator for 30 minutes. The cells are washed with physiological saline, shaded, fixed in a 1: 1 acetone-methanol solution, and stained with 4% (v / v) Giemsa-PBS for 3 minutes. Wash with distilled water, shade, and calculate the percentage of macrophages under a microscope.

結果は表１６の通りである。ハマナツメ酢酸エチル抽出物０．４ｇ／ｋｇ１４日間の胃管投薬はある程度正常マウス腹腔マクロファージの貪食作用を抑制できたが、０．１ｇ／ｋｇにおいて明確な作用は見られなかった。エタノール、メタノール、ベンジン抽出物１．２ｇ／ｋｇもそれぞれ程度が異なる抑制効果をみせ、四種類の抽出物が正常動物に対しても軽度の免疫抑制作用があることが分かった。 Table 16 shows the results. Stomach tube administration of 0.4 g / kg of E. ginseng extract for 14 days could suppress the phagocytosis of normal mouse peritoneal macrophages to some extent, but no clear effect was observed at 0.1 g / kg. Ethanol, methanol, and benzine extract 1.2 g / kg each exhibited a different degree of inhibitory effect, indicating that the four types of extracts had a mild immunosuppressive effect on normal animals.

４．エタノール、メタノール、ベンジン抽出物及び酢酸エチル抽出物の正常マウスの特異性免疫機能に対する影響（２，４−ジフルオロフェニル硝酸による耳腫脹法）
ＫＭマウス８０匹をそれぞれ懸濁剤グループ（０．５％トラガカント）、抑制作用対照グループ（シクロホスファミド）、陽性対照グループ（カワラタケ多糖類）、酢酸エチル抽出物低量投薬グループ、酢酸エチル抽出物大量投薬グループ、エタノール抽出物グループ、メタノール抽出物グループ、ベンジン抽出物グループに分ける。抑制作用陽性グループが第１３日目に一過性皮下注射を行う以外、その他のグループはサンプル薬物或いは懸濁剤を毎日１回、連続１４日間、胃管投薬する。投薬第９日目に１％２，４−ジフルオロフェニル硝酸（ＤＮＦＢ）溶液（１００ｍｇＤＮＦＢを採取して１：１のアセトン-植物油混合物を混ぜ合わせる。１０ｍｌ）２５μｌをマウス腹部に塗る。第１３日目に投薬１時間後、１０μｌの１％ＤＮＦＢ溶液をマウス左耳に塗布する。塗布後２４時間、最終投薬後１時間後に頸椎脱臼で殺処分し、耳を切除、重さを量り、耳の腫脹度を測る。 4. Effect of ethanol, methanol, benzine extract and ethyl acetate extract on specific immune function of normal mice (ear swelling with 2,4-difluorophenyl nitrate)
Eighty KM mice were used as a suspension group (0.5% tragacanth), an inhibitory control group (cyclophosphamide), a positive control group (Kawataketake polysaccharide), an ethyl acetate extract low-dose group, and an ethyl acetate extract, respectively. Drug extract group, ethanol extract group, methanol extract group, benzine extract group. Other groups receive gastric tube administration of the sample drug or suspension once daily for 14 consecutive days, except that the group with positive inhibitory effect receives transient subcutaneous injection on day 13. On the ninth day of dosing, 25 μl of a 1% 2,4-difluorophenyl nitric acid (DNFB) solution (100 mg of DNFB is collected and mixed with a 1: 1 acetone-vegetable oil mixture. 10 ml) is spread on the abdomen of the mouse. One hour after dosing on day 13, 10 μl of a 1% DNFB solution is applied to the left ear of the mouse. Twenty-four hours after application and one hour after the final dose, the mice are sacrificed by cervical dislocation, the ears are excised, weighed, and the ear swelling is measured.

結果は表１７の通りである。ハマナツメ酢酸エチル抽出物は０．１ｇ／ｋｇで正常マウスのＤＮＦＢによる耳腫脹を抑制しており、正常動物に対しても一定の免疫機能抑制作用を持つことが分かった。エタノール、メタノール、ベンジン抽出物１．２ｇ／ｋｇ及び酢酸エチル抽出物の作用は類似しており、四種の抽出物はどれも一定の特異性免疫抑制作用を持つことが分かった。 The results are as shown in Table 17. The extract of ethyl citrus extract at 0.1 g / kg suppressed ear swelling due to DNFB in normal mice, and was found to have a certain immunosuppressive effect on normal animals. The effects of ethanol, methanol, benzene extract 1.2 g / kg and ethyl acetate extract were similar, and all four extracts were found to have a certain specific immunosuppressive effect.

５．エタノール、メタノール、ベンジン抽出物及び酢酸エチル抽出物のＳＬＥ実験用マウスに対する治療作用及び細胞免疫に関する影響
ＫＭマウス８０匹を体重に基づき８グループ、それぞれ懸濁剤対照グループ（０．５％トラガカント）、モデル対照グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（ＴＷＨＦ）、酢酸エチル抽出物少量投薬グループ、酢酸エチル抽出物大量投薬グループ、エタノール抽出物グループ、メタノール抽出物グループ、ベンジン抽出物グループに分ける。懸濁液対照グループ以外は０．５ｍｌのプリスタンを腹腔注射し、サンプル或いは混濁液を毎日１回、連続３０日間胃管投薬する。最終投薬２４時間後に目の縁から採血した後、４℃冷凍遠心分離で血清を分離し、ＥＬＩＳＡ測定で血清中の抗ｄｓＤＮＡ抗体レベルを測定する。
別途同様のグループでモデルをコピーし、プリスタンを注射した後第２４日目に、懸濁剤対照グループ以外、各グループの腹腔に５％のトリヘモグロビン生理食塩懸濁液を０．２ｍｌ注射し、第３０日目までプリスタンを投薬し続ける。最終投薬２４時間後、目の縁から２０μｌ採決し、１ｍｌ生理食塩水の中に加える。その後それぞれ４％のトリヘモグロビン生理食塩水懸濁液０．５ｍｌと１０％ラット血清０．５ｍｌに加え、混ぜ合わせたあと、０．５時間３７℃で培養し、３０００ｒｐｍで１０分遠心分離する。上澄み液１ｍｌを採取し、３ｍｌのブロー氏液を加え、５４０ｎｍで色彩比較をする。 5. Effects of ethanol, methanol, benzine extract and ethyl acetate extract on therapeutic effect and cell immunity on SLE experimental mice Eighty KM mice were divided into 8 groups based on body weight, each of which was a suspension control group (0.5% tragacanth), It is divided into a model control group (0.5% tragacanth), a positive control group (TWHF), a small dose group of ethyl acetate extract, a large dose group of ethyl acetate extract, an ethanol extract group, a methanol extract group, and a benzine extract group. . Except for the suspension control group, 0.5 ml of pristane is injected intraperitoneally and the sample or turbid solution is administered by gavage once daily for 30 consecutive days. 24 hours after the final administration, blood is collected from the margin of the eyes, and the serum is separated by freeze centrifugation at 4 ° C., and the anti-dsDNA antibody level in the serum is measured by ELISA measurement.
Separately, the model was copied in a similar group, and on day 24 after injection of pristane, 0.2 ml of a 5% trihemoglobin saline suspension was injected into the peritoneal cavity of each group except the suspension control group. Continue to administer Pristane until day 30. Twenty-four hours after the last dose, 20 μl is taken from the eye margin and added to 1 ml of physiological saline. Then, each was added to 0.5 ml of a 4% saline solution of trihemoglobin in saline and 0.5 ml of 10% rat serum, mixed, cultured for 0.5 hours at 37 ° C., and centrifuged at 3000 rpm for 10 minutes. 1 ml of the supernatant is collected, 3 ml of Blow's solution is added, and the color is compared at 540 nm.

結果は表１８の通りである。ハマナツメ酢酸エチル抽出物０．４ｇ／ｋｇは効果的に実験的ＳＬＥマウスの血清中のｄｓＤＮＡ抗体レベルを抑制することができた。これはＳＬＥに対する治療作用があることを示している。エタノール、メタノール、ベンジン抽出物１．２ｇ／ｋｇ及び酢酸エチル抽出物の作用は類似している。これは四種の抽出物がそれぞれＳＬＥに対して一定の作用を持つことを示している。ＳＬＥは体液免疫の異常な上昇といえる。本実験においてモデル動物の溶血素レベルは正常動物より明らかに高く、ハマナツメ酢酸エチル抽出物０．１ｇ／ｋｇは効果的に異常上昇した溶血素レベルを下げることができた。エタノール、メタノール、ベンジン抽出物１．２ｇ／ｋｇ及び酢酸エチル抽出物の作用は類似しており、４種の抽出物は免疫機能異常亢進に対して顕著な抑制作用があることを示した。 The results are as shown in Table 18. 0.4 g / kg of the extract of Escherichia japonica could effectively suppress the level of dsDNA antibody in the serum of experimental SLE mice. This indicates a therapeutic effect on SLE. The effects of ethanol, methanol, benzine extract 1.2 g / kg and ethyl acetate extract are similar. This indicates that each of the four extracts has a certain effect on SLE. SLE can be described as an abnormal increase in humoral immunity. In the present experiment, the hemolysin level of the model animal was clearly higher than that of the normal animal, and 0.1 g / kg of the extract of Erythmus jujuba was able to effectively reduce the abnormally increased hemolysin level. The actions of ethanol, methanol, benzine extract 1.2 g / kg and ethyl acetate extract were similar, indicating that the four kinds of extracts have a remarkable inhibitory action on the enhancement of abnormal immune function.

VI．ハマナツメ抽出物の口腔及び消化器炎症と潰瘍の治療
（I）ハマナツメ抽出物の製造
１．全体エタノール抽出物の製造
ハマナツメ全体１ｋｇを採取し、８倍量の９５％エタノールに１日浸漬させた後、粉砕し、再度１０倍量の９５％エタノールに２日間浸漬させ、抽出液を収集する。アルコール臭がなくなるまでエタノールを５０℃下で減圧回収する。乾燥後ハマナツメエタノール抽出物を得る。 VI. Treatment of Oral and Gastrointestinal Inflammation and Ulcer of Shrimp Extract (I) Production of Shrimp Extract Preparation of Whole Ethanol Extract 1 kg of the crab jujube was collected, immersed in 8 times 95% ethanol for 1 day, crushed, immersed again in 10 times 95% ethanol for 2 days, and the extract was collected. . Ethanol is recovered under reduced pressure at 50 ° C. until the alcohol odor disappears. After drying, an ethanol extract of Citrus jujuba is obtained.

２．茎葉エタノール、ベンジンと酢酸エチル抽出物の製造
ハマナツメ茎葉１ｋｇを採取し、１０倍量の９５％エタノールに１日浸漬させた後、粉砕し、再度１０倍量９５％エタノールを加え、回流抽出し、抽出液を得る。アルコール臭がなくなるまでエタノールを６０℃下で減圧回収し、乾燥後ハマナツメエタノール抽出物を得る。ハマナツメエタノール抽出物に水を加え、ベンジン、酢酸エチルでそれぞれ抽出することでハマナツメベンジン抽出物と酢酸エチル抽出物を得る。 2. Production of Forage Ethanol, Benzine and Ethyl Acetate Extract 1 kg of clover foliage is collected, immersed in 10 times volume of 95% ethanol for 1 day, pulverized, added again with 10 times volume of 95% ethanol, and subjected to circulating extraction. Obtain an extract. Ethanol is collected under reduced pressure at 60 ° C. until the alcohol odor disappears, and after drying, ethanol extract is obtained. Water is added to the ethanol extract of Citrus jujuba and extracted with benzene and ethyl acetate, respectively, to obtain a Citrus jujube extract and an ethyl acetate extract.

３．全体ベンジンと酢酸エチル抽出物の製造
ハマナツメ全体１ｋｇを採取し、１０倍量のメタノールで１日浸漬した後、粉砕し、さらに8倍量のメタノールに２日間浸漬し、抽出液を得る。メタノールを４０℃下で減圧回収し、乾燥後ハマナツメメタノール抽出物を得る。ハマナツメメタノール抽出物に水を加え、ベンジン、酢酸エチルで抽出することで、ハマナツメベンジン抽出物と酢酸エチル抽出物を得る。 3. Production of Whole Benzine and Ethyl Acetate Extract One kilogram of the crenata is collected, immersed in 10 times the amount of methanol for 1 day, pulverized, and then immersed in 8 times the amount of methanol for 2 days to obtain an extract. The methanol is recovered under reduced pressure at 40 ° C., and dried to obtain an extract of C. jujuba. Water is added to the methanol extract of Scutellaria japonica, and the mixture is extracted with benzene and ethyl acetate.

４．成分定量分析
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、１０ｍｌの容器に移す。酢酸エチルを一定量加え、再度４ｍｌの溶液を精密に採取し１０ｍｌの容器に移し、溶剤を揮発させる。５％バニリン−氷酢酸０．４ｍｌ、過塩素酸１．６ｍｌを加え、混ぜ合わせる。酢酸エチルを一定量加えて希釈し、７０℃の恒温ウォーターバスで１５分加熱し、室温まで冷ます。１０ｍｌの容器内に酢酸エチルを一定量加えて希釈し、混ぜ合わせ、５４０ｎｍの波長の吸光度を測定する。被験薬溶液中の総トリテルペノイド含有量（トリテルペノイドはアメリカンカテキンで計算）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物にはトリテルペノイド類成分が２３ｍｇ含まれていた。
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し５０ｍｌ容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷ます。エタノールを一定量加えよく混ぜる。精密に１ｍｌ採取し、１０ｍｌの容器に移す。水を一定量加え、よく混ぜる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移し、５１０ｎｍ波長の吸光度を測定し、被験薬溶液中の総フラボン含有量（フラボンはルチンで計算する）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物の総フラボン含有量は１０３ｍｇだった。
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、コルク付きのフラスコに移し、１８％アンモニア水２ｍｌで１時間湿らせる。ジエチルエーテル：クロロホルム：エタノール（２５：８：２．５）混合溶剤３０ｍｌを加え、超音波振動に２０分掛け、上澄み液を捨て、さらに上記混合溶剤を３０ｍｌ加え、３０分冷し、超音波振動に２０分掛け、濾過し、同様の溶剤１５ｍｌで３回残滓と濾紙を洗浄し、フラスコに戻す。６０℃のウォーターバスで乾燥させ、１０ｍｌのクロロホルムを使用してすべて溶解させる。５ｍｌを正確に採取し、少量分液漏斗に移し、６ｍｌのクロロホルムと２ｍｌ緩衝液(ｐＨ＝５．０，０．２Ｍフタル酸水素カリウム緩衝液)を加える。１ｍｍｏｌ・Ｌ−１のＢＴＢで滴定しつつ絶え間なく振動させ、終点に近づいた時点で、クロロホルム層を分離し、新たにクロロホルムを５ｍｌ再度加える。滴定を続け、絶え間なく振動させて混ぜ合わせる。水層が黄色くなったら終点である。アルカロイド（ハマナツメアルカリＢでアルカロイドを計算）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物のアルカロイド含有量は２１ｍｇだった。
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、５０ｍｌ容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷ます。エタノールを一定量加えよく混ぜる。精密に１ｍｌ採取し、１０ｍｌの容器に移す。７０％エタノールを一定量加え、よく混ぜる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移し、３４０ｎｍ波長の吸光度を測定し、被験薬溶液中の総クマリン含有量（クマリンはウンベリフェロンで計算する）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物の総クマリン含有量は１０．２ｍｇだった。
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、１０ｍｌの容器に移す。酢酸エチルを一定量加え、再度４ｍｌの溶液を精密に採取し１０ｍｌの容器に移し、溶剤を揮発させる。５％バニリン−氷酢酸０．４ｍｌ、過塩素酸１．６ｍｌを加え、混ぜ合わせる。酢酸エチルを一定量加えて希釈し、７０℃の恒温ウォーターバスで１５分加熱し、室温まで冷ます。１０ｍｌの容器内に酢酸エチルを一定量加えて希釈し、混ぜ合わせ、５４０ｎｍの波長の吸光度を測定する。被験薬溶液中の総トリテルペノイド含有量（トリテルペノイドはアメリカンカテキンで計算）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物にはトリテルペノイド類成分が１０８ｍｇ含まれていた。
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し５０ｍｌ容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷ます。エタノールを一定量加えよく混ぜる。精密に１ｍｌ採取し、１０ｍｌの容器に移す。水を一定量加え、よく混ぜる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移し、５１０ｎｍ波長の吸光度を測定し、被験薬溶液中の総フラボン含有量（フラボンはルチンで計算する）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物の総フラボン含有量は４９７ｍｇだった。
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル精密に採取し、コルク付きのフラスコに移し、１８％アンモニア水２ｍｌで１時間湿らせる。ジエチルエーテル：クロロホルム：エタノール（２５：８：２．５）混合溶剤３０ｍｌを加え、超音波振動に２０分掛け、上澄み液を捨て、さらに上記混合溶剤を３０ｍｌ加え、３０分冷し、超音波振動に２０分掛け、濾過し、同様の溶剤１５ｍｌで３回残滓と濾紙を洗浄し、フラスコに戻す。６０℃のウォーターバスで乾燥させ、１０ｍｌのクロロホルムを使用してすべて溶解させる。５ｍｌを正確に採取し、少量分液漏斗に移し、６ｍｌのクロロホルムと２ｍｌ緩衝液(ｐＨ＝５．０，０．２Ｍフタル酸水素カリウム緩衝液)を加える。１ｍｍｏｌ・Ｌ−１のＢＴＢで滴定しつつ絶え間なく振動させ、終点に近づいた時点で、クロロホルム層を分離し、新たにクロロホルムを５ｍｌ再度加える。滴定を続け、絶え間なく振動させて混ぜ合わせる。水層が黄色くなったら終点である。アルカロイド（ハマナツメアルカリＢでアルカロイドを計算）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物のアルカロイド含有量は１０７ｍｇだった。
ハマナツメ茎葉ベンジン抽出物を０．１ｇずつ、３サンプル採取し、５０ｍｌ容器に移す。エタノールを適量加え、超音波で溶解させ、冷ます。エタノールを一定量加えよく混ぜる。精密に１ｍｌ採取し、１０ｍｌの容器に移す。７０％エタノールを一定量加え、よく混ぜる。精密に３ｍｌ採取し、２５ｍｌの容器に移し、３４０ｎｍ波長の吸光度を測定し、被験薬溶液中の総クマリン含有量（クマリンはウンベリフェロンで計算する）を算出する。結果、１ｇのハマナツメ抽出物の総クマリン含有量は１８６ｍｇだった。 4. Component Quantitative Analysis Three samples of 0.1 g of the bean extract stir-leaf benzine extract are collected and transferred to a 10 ml container. A certain amount of ethyl acetate is added, and again 4 ml of the solution is precisely sampled and transferred to a 10 ml container to evaporate the solvent. 0.4 ml of 5% vanillin-glacial acetic acid and 1.6 ml of perchloric acid are added and mixed. Dilute with a certain amount of ethyl acetate, heat in a 70 ° C constant temperature water bath for 15 minutes, and cool to room temperature. A certain amount of ethyl acetate is added to a 10 ml container to dilute the mixture, mixed, and the absorbance at a wavelength of 540 nm is measured. Calculate the total triterpenoid content in the test drug solution (triterpenoids are calculated by American catechin). As a result, 1 g of Aspergillus niger extract contained 23 mg of triterpenoids.
Three samples of 0.1 g of the bean extract of radish foliage are precisely collected and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve with ultrasound and cool. Add a certain amount of ethanol and mix well. Precisely collect 1 ml and transfer to a 10 ml container. Add a certain amount of water and mix well. A 3 ml sample is precisely collected, transferred to a 25 ml container, and the absorbance at a wavelength of 510 nm is measured to calculate the total flavone content in the test drug solution (flavone is calculated as rutin). As a result, the total flavone content of 1 g of Aspergillus niger extract was 103 mg.
Three samples of 0.1 g of the bean extract of bean foliage are precisely collected, transferred to a flask with a cork, and moistened with 2 ml of 18% aqueous ammonia for 1 hour. 30 ml of a mixed solvent of diethyl ether: chloroform: ethanol (25: 8: 2.5) was added, the mixture was subjected to ultrasonic vibration for 20 minutes, the supernatant was discarded, 30 ml of the above mixed solvent was added, the mixture was cooled for 30 minutes, and ultrasonic vibration was performed. For 20 minutes, filter, wash the residue and filter paper three times with 15 ml of the same solvent, and return to the flask. Dry in a 60 ° C. water bath and completely dissolve using 10 ml of chloroform. Take exactly 5 ml, transfer to a small separatory funnel and add 6 ml chloroform and 2 ml buffer (pH = 5.0, 0.2 M potassium hydrogen phthalate buffer). Vibration is constantly performed while titrating with 1 mmol L-1 of BTB. When the end point is approached, the chloroform layer is separated, and 5 ml of chloroform is added again. Continue titration and mix constantly with shaking. The end point is when the water layer turns yellow. Calculate alkaloids (calculate alkaloids with Albacore Alkaline B). As a result, the alkaloid content of 1 g of Aspergillus niger was 21 mg.
Three samples of 0.1 g of the bean extract of bean foliage are collected and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve with ultrasound and cool. Add a certain amount of ethanol and mix well. Precisely collect 1 ml and transfer to a 10 ml container. Add a certain amount of 70% ethanol and mix well. A 3 ml sample is precisely collected, transferred to a 25 ml container, and the absorbance at a wavelength of 340 nm is measured to calculate the total coumarin content in the test drug solution (coumarin is calculated using umbelliferone). As a result, the total coumarin content of 1 g of the jujuba extract was 10.2 mg.
Three samples each of 0.1 g of the bean extract of bean foliage are collected and transferred to a 10 ml container. A certain amount of ethyl acetate is added, and again 4 ml of the solution is precisely sampled and transferred to a 10 ml container to evaporate the solvent. 0.4 ml of 5% vanillin-glacial acetic acid and 1.6 ml of perchloric acid are added and mixed. Dilute with a certain amount of ethyl acetate, heat in a 70 ° C constant temperature water bath for 15 minutes, and cool to room temperature. A certain amount of ethyl acetate is added to a 10 ml container to dilute the mixture, mixed, and the absorbance at a wavelength of 540 nm is measured. Calculate the total triterpenoid content in the test drug solution (triterpenoids are calculated by American catechin). As a result, 108 mg of the triterpenoid component was contained in 1 g of the extract of Aspergillus niger.
Three samples of 0.1 g of the bean extract of radish foliage are precisely collected and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve with ultrasound and cool. Add a certain amount of ethanol and mix well. Precisely collect 1 ml and transfer to a 10 ml container. Add a certain amount of water and mix well. A 3 ml sample is precisely collected, transferred to a 25 ml container, and the absorbance at a wavelength of 510 nm is measured to calculate the total flavone content in the test drug solution (flavone is calculated as rutin). As a result, the total flavone content of 1 g of the Aspergillus niger extract was 497 mg.
Three samples of 0.1 g of the bean extract of bean foliage are precisely collected, transferred to a flask with a cork, and moistened with 2 ml of 18% aqueous ammonia for 1 hour. 30 ml of a mixed solvent of diethyl ether: chloroform: ethanol (25: 8: 2.5) was added, the mixture was subjected to ultrasonic vibration for 20 minutes, the supernatant was discarded, 30 ml of the above mixed solvent was added, the mixture was cooled for 30 minutes, and ultrasonic vibration was performed. For 20 minutes, filter, wash the residue and filter paper three times with 15 ml of the same solvent, and return to the flask. Dry in a 60 ° C. water bath and completely dissolve using 10 ml of chloroform. Take exactly 5 ml, transfer to a small separatory funnel and add 6 ml chloroform and 2 ml buffer (pH = 5.0, 0.2 M potassium hydrogen phthalate buffer). Vibration is constantly performed while titrating with 1 mmol L-1 of BTB. When the end point is approached, the chloroform layer is separated, and 5 ml of chloroform is added again. Continue titration and mix constantly with shaking. The end point is when the water layer turns yellow. Calculate alkaloids (calculate alkaloids with Albacore Alkaline B). As a result, the alkaloid content of 1 g of the jujuba extract was 107 mg.
Three samples of 0.1 g of the bean extract of bean foliage are collected and transferred to a 50 ml container. Add an appropriate amount of ethanol, dissolve with ultrasound and cool. Add a certain amount of ethanol and mix well. Precisely collect 1 ml and transfer to a 10 ml container. Add a certain amount of 70% ethanol and mix well. A 3 ml sample is precisely collected, transferred to a 25 ml container, and the absorbance at a wavelength of 340 nm is measured to calculate the total coumarin content in the test drug solution (coumarin is calculated using umbelliferone). As a result, the total coumarin content of 1 g of Aspergillus niger was 186 mg.

２．カプセル剤の製造
ハマナツメ茎葉酢酸エチル抽出物を採取し、適切な補材を加える。例えば乳糖、加圧性澱粉、カルボキシメチル澱粉、微晶質セルロース等でカプセル剤を製造する。 2. Manufacture of capsules Extract the ethyl acetate extract of the foliage and add appropriate supplements. For example, capsules are manufactured from lactose, pressurized starch, carboxymethyl starch, microcrystalline cellulose and the like.

（III）ハマナツメ抽出物の用途の薬理学検証
１．エタノール、メタノール、ベンジン抽出物及び酢酸エチル抽出物の幽門結紮によるラットの実験的胃潰瘍に対する影響
ＳＤラット８０匹を体重に基づき８グループ、それぞれモデル対照グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（ラニチジン）、酢酸エチル抽出物少量投薬グループ、酢酸エチル抽出物中量投薬グループ、酢酸エチル抽出物大量投薬グループ、エタノール抽出物グループ、メタノール抽出物グループ、ベンジン抽出物グループに分類する。被験薬を毎日１回、３日間胃管投薬する。最終投薬から１時間後幽門結紮術を行い、術後１５時間後に動物を頸椎脱臼で殺処分する。胃を採取し、１％ホルムアルデヒドで２０分固定した後解剖する。顕微鏡で粘膜損傷状況を観察し、潰瘍指数と潰瘍抑制率を算出する。 (III) Pharmacological verification of the use of Aspergillus niger extract 1. Effect of pylorus ligation of ethanol, methanol, benzine extract and ethyl acetate extract on experimental gastric ulcer in rats Eighty SD rats were divided into eight groups based on body weight, each of which was a model control group (0.5% tragacanth) and a positive control group (0.5% tragacanth). Ranitidine), a small dose group of ethyl acetate extract, a medium dose group of ethyl acetate extract, a large dose group of ethyl acetate extract, an ethanol extract group, a methanol extract group, and a benzine extract group. The test drug is administered by gavage once daily for 3 days. One hour after the last dose, a pyloric ligation is performed, and the animals are sacrificed by cervical dislocation 15 hours after the operation. The stomach is collected, fixed in 1% formaldehyde for 20 minutes, and then dissected. Observe the mucosal damage status with a microscope and calculate the ulcer index and ulcer inhibition rate.

結果は表１９の通りである。ハマナツメ酢酸エチル抽出物は０．２ｇ／ｋｇ及びそれ以上の胃管投薬３回で明確に幽門結紮によるラットの胃潰瘍を抑制し、尚且つ０．４ｇ／ｋｇ投薬量グループの作用強度はラニチジン６０ｍｇ／ｋｇと比べて顕著な差異は認められなかった。エタノール、メタノール、ベンジン抽出物１．２ｇ／ｋｇも効果的に胃潰瘍を抑制でき、四種の抽出物は胃潰瘍に対してよい作用をもたらすことが分かった。 Table 19 shows the results. Ethyl acetate extract clearly inhibits gastric ulcer of rats due to pyloric ligation with three gavage doses of 0.2 g / kg and more, and the potency of the 0.4 g / kg dose group is ranitidine 60 mg / kg. No remarkable difference was observed compared to kg. Ethanol, methanol, and benzine extract 1.2 g / kg can also effectively suppress gastric ulcer, and it was found that the four kinds of extracts have a good effect on gastric ulcer.

２．エタノール、メタノール、ベンジン抽出物及び酢酸エチル抽出物の２，４，６−トリニトロトルエンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるラットの実験的結腸炎に対する影響
ＳＤラット９０匹を体重に基づき９グループ、それぞれ仮手術対照グループ（０．５％トラガカント）、モデル対照グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（デキサメタゾン）、酢酸エチル抽出物少量投薬グループ、酢酸エチル抽出物中量投薬グループ、酢酸エチル抽出物大量投薬グループ、エタノール抽出物グループ、メタノール抽出物グループ、ベンジン抽出物グループに分ける。動物には絶食２４時間後ペントバルビタールナトリウムで麻酔を行い、ＴＮＢＳと４０％エタノールで浣腸し、実験的結腸炎モデルを再現する。再現後６時間から被験薬を投薬する。投薬後５日、尾静脈から採血し、白血球数を算出する。第６日にウレタン麻酔を行い腹主動脈から採血した後、頸椎脱臼で殺処分する。肛門から口側に向かって９ｃｍの結腸を採取し、冷水のウォーターバスにて腸膜を切開、内容物を洗浄し、潰瘍面積を計測し、潰瘍面積％を算出する。結腸の重さを測った後、結腸粘膜を採取し、ＥＬＩＳＡで腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−ａ）濃度を測定する。 2. Effect of 2,4,6-trinitrotoluenesulfonic acid (TNBS) of ethanol, methanol, benzine extract and ethyl acetate extract on experimental colitis in rats Ninety SD rats were divided into 9 groups based on body weight, each of which was a tentative control. Group (0.5% tragacanth), model control group (0.5% tragacanth), positive control group (dexamethasone), ethyl acetate extract small dose group, ethyl acetate extract medium dose group, ethyl acetate extract large dose Group, ethanol extract group, methanol extract group, benzine extract group. Animals are anesthetized with pentobarbital sodium 24 hours after fasting and enema with TNBS and 40% ethanol to reproduce the experimental colitis model. The test drug is administered from 6 hours after the reproduction. Five days after dosing, blood is collected from the tail vein and the white blood cell count is calculated. On day 6, urethane anesthesia is performed, blood is collected from the abdominal main artery, and then killed by cervical dislocation. A 9 cm colon is collected from the anus to the mouth, the intestinal membrane is incised with a cold water bath, the contents are washed, the ulcer area is measured, and the ulcer area% is calculated. After weighing the colon, the colon mucosa is collected and the tumor necrosis factor (TNF-a) concentration is measured by ELISA.

結果は表２１の通りである。ＴＮＢＳによるラットの実験的結腸炎は炎症細胞の増加、炎症細胞因子レベルの上昇と結腸表面の潰瘍を引き起こす。ハマナツメ酢酸エチル抽出物０．２ｇ／ｋｇ及びこれ以上の投薬量は白血球及び重要な発炎因子ＴＮＦ−ａの増加と潰瘍面積を抑制できた。エタノール、メタノール、ベンジン抽出物１．２ｇ／ｋｇと酢酸エチル抽出物の作用とは類似しており、四種類の抽出物は比較的良好な抗結腸炎作用を有していた。 The results are shown in Table 21. Experimental colitis in rats with TNBS causes an increase in inflammatory cells, increased levels of inflammatory cell factors and ulceration of the colon surface. A dose of 0.2 g / kg or more of ethyl sorghum ethyl acetate extract was able to suppress the increase of erythrocyte and important inflammatory factor TNF-a and the ulcer area. The effects of the ethanol, methanol and benzine extracts 1.2 g / kg and the ethyl acetate extract were similar, and the four extracts had relatively good anti-colitis effects.

３．エタノール、メタノール、ベンジン抽出物及び酢酸エチル抽出物のアンモニア水によるラット実験的慢性胃炎に対する影響
ＳＤラット１２０匹を体重に基づき１０グループ、それぞれ正常対照グループ（０．５％トラガカント）、モデル対照グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（三九胃泰顆粒）、酢酸エチル抽出物少量投薬グループ、酢酸エチル抽出物中量投薬グループ、酢酸エチル抽出物大量投薬グループ、エタノール抽出物グループ、メタノール抽出物グループ、ベンジン抽出物グループに分ける。全ての動物に対して０．０２％のアンモニア水を毎日１回、９０日間、胃管投薬する。同時に被験薬を１日１回、連続９０日胃管投薬する。最終投薬の翌日に動物を頸椎脱臼で殺処分する。胃上辺を採取し、１０％のホルマリンで固定、パラフィン埋蔵し、切片をＨＥ及びＰＡＳで染色する。ＨＥ染色で炎症反応状況をカウントし、胃体部粘膜の厚さを計測する。ＰＡＳ染色は陽性層の厚さと粘液層の厚さを測定する。 3. Effects of ethanol, methanol, benzine extract, and ethyl acetate extract on experimental chronic gastritis in rats caused by aqueous ammonia 120 SD rats were grouped into 10 groups based on body weight, normal control group (0.5% tragacanth) and model control group, respectively. 0.5% tragacanth), Positive control group (Sanju Ito granule), Ethyl acetate extract small dose group, Ethyl acetate extract medium dose group, Ethyl acetate extract large dose group, Ethanol extract group, Methanol extraction Product group and benzine extract group. All animals are gavaged with 0.02% aqueous ammonia once daily for 90 days. At the same time, the test drug is administered by gavage once a day for 90 consecutive days. Animals are sacrificed by cervical dislocation the day after the last dose. The upper part of the stomach is collected, fixed with 10% formalin, embedded in paraffin, and the section is stained with HE and PAS. The inflammatory reaction status is counted by HE staining, and the thickness of the gastric body mucosa is measured. PAS staining measures the thickness of the positive layer and the thickness of the mucus layer.

結果は表２１の通りである。ハマナツメ酢酸エチル抽出物はアンモニア水による実験的慢性胃炎に対する炎症抑制レベル、胃粘膜と粘液層の厚さに対する増加効果、特に炎症抑制及び粘液層の増加に顕著な効果があった。エタノール、メタノール、ベンジン抽出物１．２ｇ／ｋｇ及び酢酸エチル抽出物の作用は類似しており、四種の抽出部は良好な抗慢性胃炎があることがわかった。 The results are shown in Table 21. Ethyl acetate extract had a remarkable effect on the level of suppression of inflammation against experimental chronic gastritis by ammonia water, the increasing effect on the thickness of gastric mucosa and mucous layer, especially on the suppression of inflammation and increase of mucus layer. The effects of ethanol, methanol, benzine extract 1.2 g / kg and ethyl acetate extract were similar, indicating that the four extracts had good anti-chronic gastritis.

４．酢酸エチル抽出物と三九胃泰併用の幽門結紮によるラットの実験的胃潰瘍の影響
ＳＤラット５０匹を体重に基づき５グループ、それぞれモデル対照グループ（０．５％トラガカント）、陽性対照グループ（ラニチジン）、酢酸エチル抽出物グループ、三九胃泰グループ、同時投薬グループに分ける。胃管で被験薬を毎日１回、３回投薬する。最終投薬後１時間後に幽門結紮術を行い、術後１５時間で頸椎脱臼による殺処分を行う。胃を採取し、１％ホルムアヒデビドで２０分固定した後解剖する。顕微鏡で粘膜損傷程度を観察し、潰瘍指数と潰瘍抑制率を算出する。 4. Effects of experimental gastric ulcer of rats by pylorus ligation in combination with ethyl acetate extract and Sangu-gastricum 50 SD rats, 5 groups based on body weight, 5 model control group (0.5% tragacanth) and positive control group (Ranitidine) , Ethyl acetate extract group, Sangu Ichiyasu group, and simultaneous administration group. The test drug is administered by gastric tube once, three times daily. One hour after the last dose, pyloric ligation is performed, and 15 hours after the operation, the cervical dislocation is killed. The stomach is collected, fixed with 1% formaldehyde for 20 minutes, and then dissected. Observe the degree of mucosal damage with a microscope and calculate the ulcer index and ulcer inhibition rate.

結果は表２２の通りである。ハマナツメ酢酸エチルは０．２ｇ／ｋｇの胃管投薬３回で幽門結紮によるラットの胃潰瘍に顕著な抑制効果を見せた。単独で使用した三九胃泰は特に影響はなかったが、本発明の抽出物と併用すると顕著な抗胃潰瘍効果をみせた。抗胃潰瘍薬物或いは併用に協同作用が見られた。 The results are as shown in Table 22. Ethyl saccharinum ethyl acetate showed a remarkable inhibitory effect on gastric ulcer in rats due to pyloric ligation at three doses of 0.2 g / kg by gavage. Although the use of Sangu-Gu, used alone, had no particular effect, it showed a remarkable anti-gastric ulcer effect when used in combination with the extract of the present invention. A synergistic effect was seen with the antigastric ulcer drug or combination.

５．酢酸エチル抽出物と三九胃泰併用のアンモニア水によるラットの実験的慢性胃炎に対する影響
本試験は薬効学試験２と同時に行った。結果は表２１を参照する。正常対照グループ及びモデル対照グループは共用した。結果、三九胃泰は顕著に粘膜層の厚みを増加させ、炎症を抑制したが、粘膜層の厚みに影響は見られなかった。本発明の抽出物と併用した後、三九胃泰の効果をある程度強化し、粘膜層の厚みを効果的に増加させた。他の慢性胃炎薬物とは協同作用があるとみられる。 5. Effect of Ammonia Water Combined with Ethyl Acetate Extract and Sangu Ichi on Experimental Chronic Gastritis in Rats This test was performed simultaneously with Pharmacodynamic Test 2. See Table 21 for results. The normal control group and the model control group were shared. As a result, Sangu-Gatsu remarkably increased the thickness of the mucosal layer and suppressed inflammation, but did not affect the thickness of the mucosal layer. After the combined use with the extract of the present invention, the effect of the stomach was enhanced to some extent and the thickness of the mucosal layer was effectively increased. It appears to be synergistic with other chronic gastritis drugs.

上記を総括すると、本発明のハマナツメ抽出物或いは原型薬剤ハマナツメには顕著な抗腫瘍活性、抗真菌活性、抗繊維化と双方向免疫調整作用があり、口腔及び消化器炎症と潰瘍に対する治療効果があることがわかる。 Summarizing the above, the extract of Aspergillus japonica or the prototype drug of Aspergillus oryzae of the present invention has remarkable antitumor activity, antifungal activity, antifibrosis and bidirectional immunoregulatory effect, and has a therapeutic effect on oral and gastrointestinal inflammation and ulcer. You can see that there is.

（付記）
（付記１）
ハマナツメの医薬製造における抗線維化の使用。 (Note)
(Appendix 1)
Use of anti-fibrosis in the manufacture of a medicinal product of Scutellaria.

（付記２）
ハマナツメの医薬製造における抗真菌活性の使用。 (Appendix 2)
Use of antifungal activity in the manufacture of pharmaceuticals for Sorghum.

（付記３）
ハマナツメの医薬製造における抗腫瘍活性の使用。 (Appendix 3)
Use of an antitumor activity in the manufacture of a medicinal product of Scutellaria.

（付記４）
ハマナツメの医薬製造における口腔及び消化器炎症或いは／及び潰瘍関連疾患治療の使用。 (Appendix 4)
Use of a treatment for oral and gastrointestinal inflammation or / and ulcer-related diseases in the manufacture of a medicament for Scutellaria.

（付記５）
ハマナツメの医薬製造における双方向免疫調整作用の使用。 (Appendix 5)
Use of a bidirectional immunomodulatory effect in the manufacture of a medicinal product of Aspergillus niger.

（付記６）
ハマナツメはハマナツメ植物全体或いは任意の一部を使用し、
好ましくは、前記一部が根、茎、葉、花、果実の一部或いはそれらの混合であり、
さらに好ましくは、前記一部が葉の部分、であることを特徴とする付記１−５のいずれか一つに記載の用途。 (Appendix 6)
As for the jujube, use the whole jujube plant or any part,
Preferably, the part is a part of root, stem, leaf, flower, fruit or a mixture thereof,
More preferably, the use according to any one of supplementary notes 1 to 5, wherein the part is a leaf part.

（付記７）
ハマナツメ植物全体或いはその一部を薬剤の原材料として、一般的な方法で製造すること、を特徴とするハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 7)
A method for producing an extract of Hawthorn extract, comprising using an entire method or a part of an Aspergillus oryzae plant as a raw material of a drug by a general method.

（付記８）
製造方法一は、
Ａ、ハマナツメ植物全体或いはその一部を薬剤の原材料とし、
Ｂ、溶剤で抽出し、乾燥させることで得られることを含むこと、を特徴とする付記７に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 8)
The first manufacturing method is
A. The whole or part of the clover plant is used as a raw material for the drug,
B. The method for producing an extract of Aspergillus niger according to Supplementary Note 7, wherein the method includes extraction by a solvent and drying.

（付記９）
製造方法二は、
Ａ．ハマナツメ植物全体或いはその一部を薬剤の原材料とし、
Ｂ．溶剤ａで抽出し濾過濃縮することで、濃縮液を得、
Ｃ．溶剤ｂを用いてステップＢで得た濃縮液を抽出し、液体状物を得、乾燥することで得られ、或いはステップＢで得られた濃縮液を乾燥させることで抽出物１を得、溶剤ｂで抽出、乾燥させることで得られる、を含むこと、を特徴とする付記７に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。
ステップＡで述べた原材料薬とするハマナツメはその新鮮品、冷凍乾燥品、有機溶媒処理品であり、
好ましくは、有機溶媒処理品の製造方法はハマナツメを有機溶媒で浸漬させ、
さらに好ましくは、有機溶媒はエタノール、メタノール、酢酸エチル、ベンジン、イソアルコール等であり、さらに好ましくはメタノールまたはエタノールを含むこと、を特徴とする付記７または８に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 9)
Manufacturing method 2
A. The whole or part of the clover plant as a raw material of the drug,
B. By extracting with a solvent a and concentrating by filtration, a concentrated solution is obtained,
C. The concentrated liquid obtained in step B is extracted using the solvent b to obtain a liquid substance, which is obtained by drying, or the concentrated liquid obtained in step B is dried to obtain an extract 1, b. Extraction and drying of the extract in step b.
The raw cranberry as the raw material drug described in Step A is a fresh product, a freeze-dried product, a product treated with an organic solvent,
Preferably, in the method for producing an organic solvent-treated product, soybean jujube is soaked in an organic solvent
More preferably, the organic solvent is ethanol, methanol, ethyl acetate, benzene, isoalcohol, or the like, and further preferably, methanol or ethanol is contained.

（付記１０）
前記有機溶媒処理品の有機溶媒はメタノール、エタノール、イソアルコール、酢酸エチル或いはベンジンを含み、好ましくはメタノール或いはエタノールを含むこと、を特徴とする付記９に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 10)
10. The method for producing an extract of Aspergillus niger according to claim 9, wherein the organic solvent of the organic solvent-treated product contains methanol, ethanol, isoalcohol, ethyl acetate or benzene, and preferably contains methanol or ethanol.

（付記１１）
前記製造方法一のステップＢにおいて、前記溶剤にはメタノール、エタノール、イソアルコール、酢酸エチル或いはベンジンが含まれ、好ましくはメタノール或いはエタノールを含むこと、を特徴とする付記８に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 11)
In step B of the production method 1, the solvent contains methanol, ethanol, isoalcohol, ethyl acetate or benzine, and preferably contains methanol or ethanol. Production method.

（付記１２）
前記製造方法一のステップＢにおいて、採用する方法は浸漬、回流または滲出であること、を特徴とする付記８に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 12)
9. The method for producing an extract of Aspergillus niger according to Supplementary Note 8, wherein the method adopted in Step B of the production method 1 is immersion, circulation, or leaching.

（付記１３）
前記製造方法一のステップＢにおいて、乾燥方法は減圧乾燥、冷凍乾燥、噴霧乾燥或いはマイクロウェイブ乾燥であること、を特徴とする付記８に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 13)
The method according to claim 8, wherein in step B of the production method 1, the drying method is vacuum drying, freeze drying, spray drying or microwave drying.

（付記１４）
前記製造方法二のステップＢにおいて、前記溶剤ａにはメタノール或いはエタノール、イソアルコールが含まれ、好ましくはメタノール或いはエタノールを含むこと、を特徴とする付記８に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 14)
The method according to claim 8, wherein in step B of the second production method, the solvent a contains methanol, ethanol, or isoalcohol, and preferably contains methanol or ethanol.

（付記１５）
前記製造方法二のステップＣにおいて、前記溶剤ｂには酢酸エチルまたはベンジンが含まれること、を特徴とする付記８に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 15)
The method according to claim 8, wherein in step C of the second production method, the solvent b contains ethyl acetate or benzene.

（付記１６）
前記製造方法二のステップＢ及びステップＣにおいて、抽出方法は浸漬法、回流法滲出法或いは抽出法であること、を特徴とする付記８に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 16)
9. The method for producing an extract of Aspergillus niger according to Supplementary Note 8, wherein in Steps B and C of the second production method, the extraction method is a dipping method, a circulation leaching method, or an extraction method.

（付記１７）
前記製造方法二のステップＢ及びステップＣにおいて、乾燥方法は減圧乾燥、冷凍乾燥、噴霧乾燥或いはマイクロウェイブ乾燥であること、を特徴とする付記８に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 17)
9. The method for producing an extract of Aspergillus niger according to Supplementary Note 8, wherein in Steps B and C of the second production method, the drying method is vacuum drying, freeze drying, spray drying, or microwave drying.

（付記１８）
前記製造方法一のステップＢにおいて、溶剤とハマナツメの用量関係について、溶剤添加量はハマナツメ質量の１−２０倍であり、
好ましくは、溶剤添加量はハマナツメ質量の５−１５倍であり、
更に好ましくは、溶剤添加量はハマナツメ質量の８−１０倍であり、
溶剤としてメタノール或いはエタノールを採用した場合、メタノール或いはエタノール添加量はハマナツメ質量の１−２０倍であり、
前記製造方法二のステップＢにおいて、溶剤ａとハマナツメの用量関係は、溶剤ａ添加量はハマナツメ質量の１−２０倍であり、
好ましくは溶剤ａ添加量はハマナツメ質量の５−１５倍であり、
更に好ましくは溶剤ａ添加量はハマナツメ質量の８−１０倍であること、を特徴とする付記８に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 18)
In step B of the above-mentioned production method, the amount of the solvent added is 1 to 20 times the mass of the yellow clover,
Preferably, the amount of the solvent added is 5 to 15 times the mass of the jujuba,
More preferably, the amount of the solvent added is 8 to 10 times the mass of the crab jujuba,
When methanol or ethanol is employed as the solvent, the amount of methanol or ethanol added is 1 to 20 times the mass of the crab.
In step B of the above-mentioned production method 2, the dose relationship between the solvent a and the jujube is that the amount of the solvent a added is 1 to 20 times the mass of jujube,
Preferably, the added amount of the solvent a is 5 to 15 times the mass of the crab jujuba,
Further preferably, the amount of the solvent a added is 8 to 10 times the mass of the jujube, and the method for producing a jujuba extract described in Supplementary Note 8 is provided.

（付記１９）
エタノールの濃度は１０−９５％であり、
好ましくはエタノール濃度が５０−９５％のものを採用し、
更に好ましくは、エタノール濃度が９５％のものを採用すること、を特徴とする付記１０、１１、１４或いは１８に記載のハマナツメ抽出物の製造方法。 (Appendix 19)
The concentration of ethanol is 10-95%,
Preferably, an ethanol concentration of 50-95% is used,
More preferably, the method for producing a jujuba extract described in Supplementary Note 10, 11, 14, or 18, wherein an ethanol concentration of 95% is employed.

（付記２０）
付記７−１９のいずれか一つに記載の製造方法で得るハマナツメ抽出物。 (Appendix 20)
An extract of Citrus jujuba obtained by the production method according to any one of Supplementary Notes 7-19.

（付記２１）
主な成分にはフラボン類、テルペノイド類、アルカロイド類、クマリン類が含まれ、
好ましくは前記フラボン類、テルペノイド類、アルカロイド類、クマリン類グリコシド及びその単体成分及び多糖類とセルロースが含まれること、を特徴とする付記２０に記載のハマナツメ抽出物。 (Appendix 21)
Main ingredients include flavones, terpenoids, alkaloids, coumarins,
20. The extract of Aspergillus niger according to Supplementary Note 20, wherein the extract preferably contains the flavone, terpenoid, alkaloid, coumarin glycoside and a single component thereof, and a polysaccharide and cellulose.

（付記２２）
ハマナツメ抽出物の活性成分に薬学上使用可能な補材を加えて製剤に加工すること、を特徴とする付記２０或いは２１に記載のハマナツメ抽出物の薬物混合物。 (Appendix 22)
22. The drug mixture of the extract of Scutellaria as described in Supplementary Note 20 or 21, wherein a pharmaceutically usable auxiliary material is added to the active ingredient of the extract of Smelt extract.

（付記２３）
前記製剤は内服製剤、注射製剤、外用製剤、放出制御製剤或いは希釈製剤であり、
好ましくは、内服製剤はタブレット剤、カプセル剤、顆粒剤、微丸剤、微球剤、または滴丸剤であり、
好ましくは、外用製剤は貼り薬、軟膏剤、ジェル剤、塗膜剤、湿布剤、栓剤、洗剤或いは噴霧剤であること、を特徴とする付記２２に記載のハマナツメ抽出物の薬物混合物。 (Appendix 23)
The preparation is an oral preparation, an injection preparation, an external preparation, a controlled release preparation or a dilution preparation,
Preferably, the oral formulation is a tablet, capsule, granule, pill, microsphere, or drop pill,
Preferably, the external preparation is a patch, an ointment, a gel, a coating, a poultice, a plug, a detergent or a spray, and the drug mixture of the crab extract of Supplementary Note 22.

（付記２４）
抗繊維化薬物の製造における付記２０或いは２１に記載のハマナツメ抽出物の用途。 (Appendix 24)
Use of the extract of Aspergillus niger according to Supplementary Note 20 or 21 in production of an anti-fibrotic drug.

（付記２５）
前記線維化は肺線維化、腎線維化、肝線維化、および心筋線維化を含むこと、を特徴とする付記２４に記載の用途。 (Appendix 25)
25. The use according to claim 24, wherein the fibrosis comprises lung fibrosis, renal fibrosis, liver fibrosis, and myocardial fibrosis.

（付記２６）
線維化を治療する中医薬と西洋医薬とを併用すること、を特徴とする付記２４に記載の用途。 (Supplementary Note 26)
25. The use according to Supplementary Note 24, wherein a Chinese medicine for treating fibrosis and a Western medicine are used in combination.

（付記２７）
前記中医薬、西洋医薬は、三七人参サポニン、リグストラジン、丹参、刺五加注射液、リグストラジン注射液、紅花注射液、銀杏フラボングリコシド、生脉、丹参注射液、双黄連、香丹注射液、益气活血顆粒、抗繊顆粒、肺康顆粒、百合固金丸、ｐｏｗｄｅｒｃｏｒｄｙｃｅｐｓｇｅｃｋｏｇｉｎｓｅｎｇｐｉｌｌｓ、ゲンゲ、西紅花、生地黄、三七、絞股藍、姜黄、黄葵、アミグダリン、テトランドリン、大黄素、エンテカビル、ラミブジン、β-カロテン、ビタミンＥ、ホスファチジルコリン、Ｓ−腺グリコシドメチオニン、プロスタグランジン、プロスタグランジンＥ２、コルヒチン、エストロゲン、アンギオテンシンＩＩレセプター阻害剤、交感神経系統抑制剤、インターフェロン、プロリル−４−ヒドロキシラーゼ抑制剤、ヘパリン、シルビニン、ウルソデオキシコール酸からなる群より選択されるものであること、を特徴とする付記２６に記載の用途。 (Appendix 27)
Said Chinese medicine and Western medicine are saccharin saponin, rigstrazine, ginseng, saccharin injection, ligustrazine injection, safflower injection, ginkgo flavone glycoside, living vein, ginseng injection, Souyouren, kotan injection , Eikha viable blood granules, anti-fibrous granules, Lung Kang granules, Yuri Gokingan, powder cordeceps gecko ginseng pills, Genge, Nishi-Safana, dough yellow, sunflower, sunflower, ginger yellow, yellow aoi, amygdalin, tetrandrine, large yellow pigment, Entecavir, lamivudine, β-carotene, vitamin E, phosphatidylcholine, S-gland glycoside methionine, prostaglandin, prostaglandin E2, colchicine, estrogen, angiotensin II receptor inhibitor, sympathetic nervous system inhibitor, interferon, prolyl-4- Hydroxylase inhibitor, Hepari 27. The use according to Supplementary Note 26, which is selected from the group consisting of sulfonyl, silvinine, and ursodeoxycholic acid.

（付記２８）
抗腫瘍活性の薬物の製造における付記２０或いは２１に記載のハマナツメ抽出物の用途。 (Appendix 28)
Use of the extract of Aspergillus niger according to Supplementary Note 20 or 21 in the manufacture of a drug having antitumor activity.

（付記２９）
腫瘍治療効果がある中医薬または西洋医薬を加えること、を特徴とする付記２８に記載の用途。 (Appendix 29)
The use according to Supplementary Note 28, wherein a Chinese medicine or a Western medicine having a tumor therapeutic effect is added.

（付記３０）
前記中医薬または西洋医薬は放射線治療、免疫治療、ＤＮＡ損傷の化学療法剤、インターフェロン複製の化学療法剤と免疫調節薬物であり、
好ましくは、ＴｏｐｏＩ抑制剤、ＴｏｐｏＩＩ抑制剤、アルキル化剤、ＤＮＡ嵌合剤、ＤＮＡ嵌入剤とフリーラジカル発生剤、細胞複製を阻害する化学療法剤、ＴＫ抑制剤、プロテアーゼ抑制剤、癌の表現タンパクと結合して細胞複製力を低下させる抗体、タンパク或いは酵素抑制剤、その他腫瘍を治療する中医薬、西洋医薬はイリノテカン、トポテカン、カンプトテシン及びその類似物或いは代謝物、ドキソルビシン、エトポサイドグリコシド、テニポサイドグリコシド、ダウノルビシン、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、イホスファミド、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、メトトレキサート、ミトマイシンＣ、シクロホスファミド、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ベロマイシン、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、フルダラビン、シトシンアラビノシドグリコシド、メルカプトプリン、チオグアニンヌクレオチド、ペントスタチン、ヒドロキシカルバミド、パクリタキセル、イチイテルペノイド及びその関連類似物、ビンクリスチン、ビンかアルカロイド及び関連類似物、サリドマイド及びその関連類似物、メシル酸イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、トラスツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、華蟾素、姫松茸、珍珠梅酢酸エチル抽出物、ライチ核水提液、当雷公藤紅素、ＰｏｌｙｐｏｒｕｓｕｓＢｅｌｌａｔｕｓ、カルボキシメチル、Ａｌｉｓｏｌエキス濃縮物、甘草多糖、アンジェリカ・シネンシス多糖類、ソラレン、五味子多糖からなる群より選択されるものであること、を特徴とする付記２９に記載の用途。 (Appendix 30)
The Chinese or Western medicine is radiation therapy, immunotherapy, chemotherapeutic agent for DNA damage, chemotherapeutic agent for interferon replication and immunomodulatory drug,
Preferably, a TopoI inhibitor, a TopoII inhibitor, an alkylating agent, a DNA incorporation agent, a DNA incorporation agent and a free radical generator, a chemotherapeutic agent that inhibits cell replication, a TK inhibitor, a protease inhibitor, a cancer expression protein Antibodies, proteins or enzyme inhibitors that reduce cell replication by binding to medicaments, other Chinese medicines for treating tumors, and Western medicines include irinotecan, topotecan, camptothecin and its analogs or metabolites, doxorubicin, etoposide glycoside, teni Poside glycoside, daunorubicin, melphalan, chlorambucil, busulfan, thiotepa, ifosfamide, carmustine, lomustine, semustine, streptozocin, dacarbazine, methotrexate, mitomycin C, cyclophosphamide, cisplatin, oxaliplatin Carboplatin, belomycin, 5-fluorouracil, capecitabine, gemcitabine, fludarabine, cytosine arabinoside glycoside, mercaptopurine, thioguanine nucleotide, pentostatin, hydroxycarbamide, paclitaxel, yew terpenoid and related analogs, vincristine, vin or alkaloid and related Analogs, thalidomide and its related analogs, imatinib mesylate, gefitinib, bortezomib, trastuzumab, rituximab, cetuximab, bevacizumab, flower buds, himematsu mushroom, chinju plum ethyl acetate extract, litchi nucleus water solution, Torai Kotobuki Element, Polyporus Bellatus, carboxymethyl, Alisol extract concentrate, licorice polysaccharide, angelica sinensis polysaccharide, psoralen, gomisako It is a member selected from the group consisting of, use of statement 29, wherein.

（付記３１）
抗真菌活性の薬物の製造における付記２０或いは２１に記載のハマナツメ抽出物の用途。 (Appendix 31)
Use of the extract of Aspergillus niger according to Supplementary Note 20 or 21 in the manufacture of a drug having antifungal activity.

（付記３２）
口腔及び消化器炎症或いは／及び関連疾患の薬物の製造における付記２０或いは２１に記載のハマナツメ抽出物の用途。 (Supplementary Note 32)
Use of the extract of Aspergillus niger according to Supplementary Note 20 or 21 in the manufacture of a drug for oral and digestive tract inflammation or / and related diseases.

（付記３３）
双方向免疫調節作用の薬物の製造における付記２０或いは２１に記載のハマナツメ抽出物の用途。 (Appendix 33)
Use of the extract of Aspergillus niger according to Supplementary Note 20 or 21 in the manufacture of a drug having a bidirectional immunomodulatory action.

（付記３４）
双方向免疫調節作用は免疫機能異常によって引き起こされる免疫機能低下或いは／及び自己免疫疾患のためであること、を特徴とする付記３３に記載の用途。 (Supplementary Note 34)
The use according to claim 33, wherein the bidirectional immunomodulatory effect is due to a decrease in immune function caused by abnormal immune function or / and an autoimmune disease.

（付記３５）
免疫機能異常の免疫機能低下には風邪、だるさ、腫瘍或いはエイズが含まれること、を特徴とする付記３４に記載の用途。 (Appendix 35)
35. The use according to Supplementary Note 34, wherein the reduced immune function of the abnormal immune function includes a cold, sluggishness, tumor or AIDS.

（付記３６）
免疫機能異常の自己免疫疾患にはリウマチ性関節炎、ＳＬＥ、強皮症、甲状腺機能亢進、青少年糖尿病、原発性血小板紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、潰瘍性結腸炎或いは慢性肝炎が含まれること、を特徴とする付記３４に記載の用途。 (Appendix 36)
Autoimmune disorders with abnormal immune function include rheumatoid arthritis, SLE, scleroderma, hyperthyroidism, adolescent diabetes, primary platelet purpura, autoimmune hemolytic anemia, ulcerative colitis or chronic hepatitis 35. The use according to claim 34, wherein

Claims

抗線維化用の医薬製造のためのハマナツメ（Paliurus ramosissimus）の使用方法であって、
ハマナツメ（Paliurus ramosissimus）を単一の活性成分とする、
使用方法。 A method of using a pollen (Paliurus ramosissimus) for the manufacture of a medicament for anti-fibrosis,
Aspergillus (Paliurus ramosissimus) as a single active ingredient,
how to use.

抗真菌用の医薬製造のためのハマナツメ（Paliurus ramosissimus）の使用方法であって、
ハマナツメ（Paliurus ramosissimus）を単一の活性成分とする、
使用方法。 A method of using a pollen (Paliurus ramosissimus) for the manufacture of a medicament for antifungal,
Aspergillus (Paliurus ramosissimus) as a single active ingredient,
how to use.

口腔及び消化器炎症或いは／及び潰瘍関連疾患治療用の医薬製造のためのハマナツメ（Paliurus ramosissimus）の使用方法であって、
ハマナツメ（Paliurus ramosissimus）を単一の活性成分とする、
使用方法。 Use of a pollen (Paliurus ramosissimus) for the manufacture of a medicament for the treatment of oral and gastrointestinal inflammation or / and ulcer-related diseases,
Aspergillus (Paliurus ramosissimus) as a single active ingredient,
how to use.

ＳＬＥ治療用の医薬製造のためのハマナツメ（Paliurus ramosissimus）の使用方法であって、
ハマナツメ（Paliurus ramosissimus）を単一の活性成分とする、
使用方法。 A method of using a pollen (Paliurus ramosissimus) for the manufacture of a medicament for treating SLE ,
Aspergillus (Paliurus ramosissimus) as a single active ingredient,
how to use.

ハマナツメはハマナツメ植物全体、根、茎、葉、花、果実の一部或いはそれらの混合物であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用方法。 The method according to any one of claims 1 to 4, wherein the jujube is a whole jujube plant, a root, a stem, a leaf, a part of a flower, a fruit, or a mixture thereof.

抗線維化用の薬物の製造のためのハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物の使用方法であって、
ハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分とする、
使用方法。 A method of using an extract of Paleurus ramosissimus for the manufacture of a drug for anti-fibrosis, comprising:
Aspergillus (Paliurus ramosissimus) extract as a single active ingredient,
how to use.

抗真菌用の薬物の製造のためのハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物の使用方法であって、
ハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分とする、
使用方法。 A method of using an extract of Paleurus ramosissimus for the manufacture of a drug for antifungal,
Aspergillus (Paliurus ramosissimus) extract as a single active ingredient,
how to use.

口腔及び消化器炎症或いは／及び潰瘍関連疾患治療用の薬物の製造のためのハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物の使用方法であって、
ハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分とする、
使用方法。 Use of an extract of Paliurus ramosissimus for the manufacture of a medicament for the treatment of oral and gastrointestinal inflammation or / and ulcer-related diseases,
Aspergillus (Paliurus ramosissimus) extract as a single active ingredient,
how to use.

ＳＬＥ治療用の薬物の製造のためのハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物の使用方法であって、
ハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分とする、
使用方法。 Claims: 1. A method of using an extract of Paliurus ramosissimus for the manufacture of a medicament for the treatment of SLE ,
Aspergillus (Paliurus ramosissimus) extract as a single active ingredient,
how to use.

ハマナツメはハマナツメ植物全体、根、茎、葉、花、果実の一部或いはそれらの混合物を薬物の原材料として、有機溶媒で抽出されることを特徴とする請求項６〜９のいずれか一項に記載の使用方法。 The green clover plant is extracted with an organic solvent using the whole clover plant, roots, stems, leaves, flowers, a part of the fruit or a mixture thereof as a raw material of the drug, according to any one of claims 6 to 9, Usage as described.

前記有機溶媒はエタノール、メタノール、酢酸エチル、石油ベンジン、またはイソプロピルアルコールを含むことを特徴とする請求項１０に記載の使用方法。 The method of claim 10, wherein the organic solvent comprises ethanol, methanol, ethyl acetate, petroleum benzine, or isopropyl alcohol.

ハマナツメ抽出物の主な成分にはフラボン類、トリテルペノイド類、アルカロイド類、及びクマリン類が含まれることを特徴とする請求項１０に記載の使用方法。 11. The method according to claim 10, wherein the main components of the extract of Flax jujube include flavones, triterpenoids, alkaloids, and coumarins.

抗線維化用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法であって、
前記薬物混合物はハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分として、薬学上使用可能な補材を加えて加工される製剤であることを特徴とする抗線維化用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法。 Use of a drug mixture for the manufacture of a drug for anti-fibrosis,
The drug mixture is a preparation prepared by adding a citrus extract (Paliurus ramosissimus) extract as a single active ingredient and adding a pharmaceutically usable auxiliary material to produce a drug for anti-fibrosis. How to use the drug mixture.

抗真菌用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法であって、
前記薬物混合物はハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分として、薬学上使用可能な補材を加えて加工される製剤であることを特徴とする抗真菌用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法。 Use of a drug mixture for the manufacture of a drug for antifungal,
The drug mixture is a preparation prepared by using a extract of Paliurus ramosissimus as a single active ingredient and adding a pharmaceutically usable auxiliary material, to manufacture a drug for antifungal use. How to use the drug mixture.

口腔及び消化器炎症或いは／及び潰瘍関連疾患治療用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法であって、
前記薬物混合物はハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分として、薬学上使用可能な補材を加えて加工される製剤であることを特徴とする口腔及び消化器炎症或いは／及び潰瘍関連疾患治療用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法。 Use of a drug mixture for the manufacture of a medicament for the treatment of oral and gastrointestinal inflammation or / and ulcer related diseases,
The drug mixture is a preparation prepared by processing a extract of Paliurus ramosissimus as a single active ingredient and adding a pharmaceutically usable auxiliary material thereto, wherein the mixture is associated with oral and digestive inflammation or / and ulcer. Use of a drug mixture for the manufacture of a medicament for treating a disease.

ＳＬＥ治療用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法であって、
前記薬物混合物はハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分として、薬学上使用可能な補材を加えて加工される製剤であることを特徴とするＳＬＥ治療用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法。 Use of a drug mixture for the manufacture of a drug for treating SLE , comprising:
The drug mixture is a formulation prepared by using a extract of Paleurus ramosissimus as a single active ingredient and adding a pharmaceutically usable auxiliary material, to manufacture a drug for treating SLE . How to use the drug mixture.

ハマナツメ抽出物はハマナツメ植物全体、根、茎、葉、花、果実の一部或いはそれらの混合物を薬剤の原材料として、有機溶媒で抽出されることを特徴とする請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の使用方法。 17. The extract of Sorghum jujuba extract is extracted with an organic solvent using the whole Sorghum jujuba plant, roots, stems, leaves, flowers, a part of fruits, or a mixture thereof as a raw material of a drug. 18. Usage as described in section.

前記有機溶媒はエタノール、メタノール、酢酸エチル、石油ベンジン、またはイソプロピルアルコールを含むことを特徴とする請求項１７に記載の使用方法。 The method of claim 17, wherein the organic solvent comprises ethanol, methanol, ethyl acetate, petroleum benzine, or isopropyl alcohol.

抗線維化用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法であって、
前記薬物混合物は活性成分と薬学上使用可能な補材を含み、前記活性成分がハマナツメ（Paliurus ramosissimus）又はハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分として含むことを特徴とする抗線維化用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法。 Use of a drug mixture for the manufacture of a drug for anti-fibrosis,
The drug mixture comprises an active ingredient and a pharmaceutically usable auxiliary material, wherein the active ingredient comprises asparagus (Paliurus ramosissimus) or an extract of Aspergillus (Paliurus ramosissimus) as a single active ingredient. Of using a drug mixture for the manufacture of a medicament for use in medicine.

抗真菌用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法であって、
前記薬物混合物は活性成分と薬学上使用可能な補材を含み、前記活性成分がハマナツメ（Paliurus ramosissimus）又はハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分として含むことを特徴とする抗真菌用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法。 Use of a drug mixture for the manufacture of a drug for antifungal,
The drug mixture comprises an active ingredient and a pharmaceutically usable auxiliary material, wherein the active ingredient comprises asparagus extract (Paliurus ramosissimus) or extract (Paliurus ramosissimus) as a single active ingredient. Use of a drug mixture for the manufacture of a drug of the invention.

口腔及び消化器炎症或いは／及び潰瘍関連疾患治療用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法であって、
前記薬物混合物は活性成分と薬学上使用可能な補材を含み、前記活性成分がハマナツメ（Paliurus ramosissimus）又はハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分として含むことを特徴とする口腔及び消化器炎症或いは／及び潰瘍関連疾患治療用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法。 Use of a drug mixture for the manufacture of a medicament for the treatment of oral and gastrointestinal inflammation or / and ulcer related diseases,
The drug mixture comprises an active ingredient and a pharmaceutically usable auxiliary material, wherein the active ingredient comprises asparagus (Paliurus ramosissimus) or an aspergillus (Paliurus ramosissimus) extract as a single active ingredient. Use of a drug mixture for the manufacture of a medicament for the treatment of organ inflammatory or / and ulcer related diseases.

ＳＬＥ治療用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法であって、
前記薬物混合物は活性成分と薬学上使用可能な補材を含み、前記活性成分がハマナツメ（Paliurus ramosissimus）又はハマナツメ（Paliurus ramosissimus）抽出物を単一の活性成分として含むことを特徴とするＳＬＥ治療用の薬物の製造のための薬物混合物の使用方法。 Use of a drug mixture for the manufacture of a drug for treating SLE , comprising:
The drug mixture comprising an active ingredient and pharmaceutically usable auxiliary materials, for treatment of SLE, characterized by comprising the active ingredient Hamanatsume (Paliurus ramosissimus) or Hamanatsume (Paliurus ramosissimus) extracts as the sole active ingredient Use of a drug mixture for the manufacture of a drug of the invention.

ハマナツメ抽出物はハマナツメ植物全体、根、茎、葉、花、果実の一部或いはそれらの混合物を薬剤の原材料として、有機溶媒で抽出されることを特徴とする請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の使用方法。 23. The method according to any one of claims 19 to 22, wherein the extract of Aspergillus niger is extracted from the whole Aspergillus oryzae plant, a root, a stem, a leaf, a part of a flower or a fruit or a mixture thereof as an ingredient of a drug with an organic solvent. Usage as described in section.