JP6640736B2

JP6640736B2 - Hyperbranched compounds bound with nucleic acid antimetabolites

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Publication number: JP6640736B2
Application number: JP2016563754A
Authority: JP
Inventors: 大川村; 綾香望月; 佳奈水沼; 裕介齋藤; 上村　和也; 和也上村
Original assignee: Nippon Kayaku Co Ltd
Current assignee: Nippon Kayaku Co Ltd
Priority date: 2014-12-12
Filing date: 2015-12-11
Publication date: 2020-02-05
Anticipated expiration: 2035-12-11
Also published as: JPWO2016093352A1; WO2016093352A1

Description

本発明は、核酸代謝拮抗剤が結合した多分岐化合物及びその用途に関する。 The present invention relates to a hyperbranched compound to which a nucleic acid antimetabolite is bound and a use thereof.

悪性腫瘍あるいはウイルス性疾患の治療を目的として、種々の核酸代謝拮抗剤の開発が行なわれている。例えば、抗腫瘍剤（抗癌剤）としては、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ネララビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）等がある。また、抗ウイルス剤としては、ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ）、ラミブジン（ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）等が臨床で使用されている。 Various nucleic acid antimetabolites have been developed for the treatment of malignant tumors or viral diseases. For example, examples of antitumor agents (anticancer agents) include cytarabine, gemcitabine, doxifluridine, azacitidine, decitabine, nerabine, and the like. In addition, zalcitabine, lamivudine, and the like are used clinically as antiviral agents.

これらの核酸代謝拮抗剤は、ｉｎｖｉｔｒｏの評価において極めて強力な薬理活性を有する。しかしながら、これらの薬剤は生体内において代謝・***を受けやすく、ｉｎｖｉｖｏの評価では本来の薬剤が持つ薬効を十分に発揮できない課題がある。これらの薬剤は、臨床上の治療用法において高用量を要するものが多い。例えば、ゲムシタビンは、ｉｎｖｉｔｒｏにおける細胞増殖抑制活性評価（ＩＣ_５０値）がパクリタキセルやドキソルビシン等の強力な抗腫瘍剤に匹敵する強い活性を有している。一方、ゲムシタビンの臨床用法は、体表面積あたりの用法として１，０００ｍｇ／ｍ^２の高用量投与が必要である。これは、２’−デオキシシチジンの代謝酵素であるシチジン脱アミノ化酵素によって、ゲムシタビンの核酸塩基部分の４位アミノ基が代謝され失活されることにより、ｉｎｖｉｖｏ利用率が低くなるためと考えられている（非特許文献１）。These antimetabolites have extremely potent pharmacological activity in in vitro evaluations. However, these drugs are susceptible to metabolism and excretion in a living body, and there is a problem that in vivo evaluation cannot sufficiently exert the medicinal properties of the original drugs. These drugs often require high doses in clinical therapeutic regimens. For example, gemcitabine has a strong activity comparable to a strong antitumor agent such as paclitaxel or doxorubicin in the evaluation of in vitro cytostatic activity (IC ₅₀ value). On the other hand, the clinical use of gemcitabine requires a high dose of 1,000 mg / m ² per body surface area. This is thought to be because the 4th amino group of the nucleobase portion of gemcitabine is metabolized and deactivated by cytidine deaminase, a metabolic enzyme of 2'-deoxycytidine, thereby reducing the in vivo utilization rate. (Non-Patent Document 1).

薬剤の代謝・失活を抑制して生物学的利用能を改善する目的で、高分子担体に薬剤を結合させた高分子化薬剤が研究されている。該高分子化薬剤は、高分子量化に基づき薬物動態が変化して、治療効果が向上することが期待される。非特許文献２には、平均分子量約３０キロダルトンのポリグルタミン酸類に、核酸代謝拮抗剤であるシタラビンを結合させた高分子化誘導体が記載されている。しかしながら、薬剤の高分子化誘導体は、生体で異物認識されやすく肝臓等の貪食系組織へ多くの薬剤が捕捉されてしまう懸念がある。また、免疫を惹起して過敏反応を引き起こす場合があり、その様な場合には、薬剤として繰返し投与ができなくなる懸念がある。 For the purpose of improving the bioavailability by suppressing the metabolism and inactivation of a drug, a polymerized drug having a drug bound to a polymer carrier has been studied. The pharmacokinetics of the polymerized drug is expected to be improved due to the change in pharmacokinetics based on the increase in molecular weight. Non-Patent Document 2 describes a polymerized derivative in which cytarabine, a nucleic acid antimetabolite, is bound to polyglutamic acids having an average molecular weight of about 30 kilodaltons. However, a polymerized derivative of a drug is likely to be easily recognized as a foreign substance in a living body, and there is a concern that a large amount of the drug is trapped in a phagocytic tissue such as a liver. In addition, there is a case where immunity is induced to cause a hypersensitivity reaction, and in such a case, there is a concern that the drug cannot be repeatedly administered.

高分子化誘導体の異物認識を回避する方法として、ポリエチレングリコールを利用する方法が知られている。例えば、特許文献１には、ポリエチレングリコール類にシチジン系誘導体を結合させた高分子化誘導体が記載されている。また非特許文献３には、ポリエチレングリコール類の両末端にアスパラギン酸を分枝状に置換させ、それにシタラビンを結合させた高分子化誘導体が記載されている。さらに、特許文献２には、ポリエチレングリコール鎖の末端にアミノ酸を用い分岐させ、その各分岐がベンジル脱離反応を受けた後に薬剤を放出する構造を持つ高分子化誘導体が記載されている。 As a method for avoiding foreign substance recognition of a polymerized derivative, a method using polyethylene glycol is known. For example, Patent Literature 1 describes a polymerized derivative in which a cytidine derivative is bonded to polyethylene glycols. Non-Patent Document 3 describes a polymerized derivative in which aspartic acid is substituted at both ends of polyethylene glycols in a branched manner, and cytarabine is bonded thereto. Further, Patent Literature 2 describes a polymerized derivative having a structure in which an amino acid is branched at the end of a polyethylene glycol chain and each branch undergoes a benzyl elimination reaction to release a drug.

特許文献３及び特許文献４には、ポリエチレングリコール類とポリ酸性アミノ酸とのブロック共重合体の末端官能基に、核酸代謝拮抗剤及び疎水性置換基を結合させた高分子化誘導体が記載されている。特許文献５には、ポリエチレングリコール類とポリ酸性アミノ酸とのブロック共重合体の末端官能基に、疎水性置換基を有するリンカーを介して核酸代謝拮抗を結合させた高分子化誘導体が記載されている。
これらの核酸代謝拮抗剤の高分子結合体は、末端官能基に疎水性置換基が導入された疎水性セグメントと、親水性セグメントであるポリエチレングリコールを併せ持つ双極性高分子である。このため、該核酸代謝拮抗剤の高分子結合体は、水溶液中において疎水性セグメントの分子間凝集により、疎水性セグメントを内核にして親水性セグメントを外側にした自己会合体を形成すると考えられる。Patent Documents 3 and 4 disclose a polymerized derivative in which a nucleic acid antimetabolite and a hydrophobic substituent are bonded to a terminal functional group of a block copolymer of a polyethylene glycol and a polyacidic amino acid. I have. Patent Document 5 discloses a polymerized derivative in which a nucleic acid antimetabolite is bound to a terminal functional group of a block copolymer of a polyethylene glycol and a polyacid amino acid via a linker having a hydrophobic substituent. I have.
The polymer conjugate of these antimetabolites is a dipolar polymer having both a hydrophobic segment having a hydrophobic substituent introduced into a terminal functional group and polyethylene glycol as a hydrophilic segment. Therefore, it is considered that the polymer conjugate of the nucleic acid antimetabolite forms a self-aggregate in which the hydrophobic segment is the core and the hydrophilic segment is outside by the intermolecular aggregation of the hydrophobic segment in an aqueous solution.

特許文献６には、分岐型ジアミン化合物であるリシンによるポリリシンデンドリマーを担体として用い、最外殻の末端官能基にポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤を結合させた高分子誘導体が記載されている。
このデンドリマーを用いた高分子誘導体は、核酸代謝拮抗剤としてゲムシタビンを用いている。該ゲムシタビンは、リンカーとしてグルタル酸を介して、ゲムシタビンの５’−水酸基とエステル結合にてデンドリマー担体に導入させている。Patent Literature 6 describes a polymer derivative in which a polylysine dendrimer using lysine, which is a branched diamine compound, is used as a carrier, and a polyethylene glycol segment and a nucleic acid antimetabolite are bonded to the terminal functional group of the outermost shell.
The polymer derivative using this dendrimer uses gemcitabine as a nucleic acid antimetabolite. The gemcitabine is introduced into the dendrimer carrier via glutaric acid as a linker via an ester bond with the 5′-hydroxyl group of gemcitabine.

上記様々なポリエチレングリコールを有する該核酸代謝拮抗剤の高分子結合体は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液において加水分解を受け、結合していた核酸代謝拮抗剤を緩やかに解離する物性を有する。したがって、これらの高分子化核酸代謝拮抗剤は、従来の核酸代謝拮抗剤と比較して低投与量で長期に亘り腫瘍増殖阻害効果を発揮し続ける特徴を有する。しかしながら、薬効と同作用機作で生じる副作用も、長期に亘り発現させてしまうことが懸念される。核酸代謝拮抗剤は、白血球減少等の発現として認められる骨髄抑制が副作用として問題となっている。当該高分子化核酸代謝拮抗剤は、治療効果の向上と副作用の低減を両立させた有用な治療方法を確立する上で、大きな課題となっている。 The above-mentioned polymer conjugates of the nucleic acid antimetabolite having various polyethylene glycols are subjected to hydrolysis in a phosphate buffered saline (PBS) solution to exhibit a property of slowly dissociating the bound nucleic acid antimetabolite. Have. Therefore, these polymerized nucleic acid antimetabolites are characterized in that they exert a tumor growth inhibitory effect over a long period of time at a lower dose than conventional nucleic acid antimetabolites. However, there is a concern that side effects caused by the medicinal effect and the mechanism of action may be exhibited over a long period of time. Nucleic acid antimetabolites have a problem as a side effect of bone marrow suppression, which is observed as the occurrence of leukopenia. The polymerized nucleic acid antimetabolite has been a major issue in establishing a useful therapeutic method that achieves both improved therapeutic effects and reduced side effects.

特表２００３−５２４０２８号公報JP 2003-524028 A 特表２００４−５３２２８９号公報JP-T-2004-532289 国際公開２００６／１２０９１４号International Publication No. 2006/120914 国際公開２００８／０５６５９６号International Publication No. 2008/056596 国際公開２００８／０５６６５４号International Publication No. 2008/056654 国際公開２０１２／１６７３０９号International Publication 2012/167309

ＣａｎｃｅｒＳｃｉｅｎｃｅ、ＪａｐａｎｅｓｅＣａｎｃｅｒＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．９５、ｐ．１０５−１１１（２００４）「キャンサー・サイエンス」、日本癌学会発行、２００４年、第９５巻、１０５−１１１頁Cancer Science, Japan Cancer Association, Vol. 95, p. 105-111 (2004) "Cancer Science", published by The Japanese Cancer Society, 2004, Vol. 95, pp. 105-111. ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ、ＡｍｅｒｉｃａｎＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｖｏｌ．４４、ｐ．２５−３０（１９８４）「キャンサー・リサーチ」（米国）、米国癌学会発行、１９８４年、第４４巻、２５−３０頁Cancer Research, American Association for Cancer Research, Vol. 44, p. 25-30 (1984) "Cancer Research" (USA), American Cancer Society, 1984, 44, 25-30. ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｖｏｌ．７９、ｐ．５５−７０（２００２）「ジャーナルオブコントロールドリリース」（英国）、エルゼヴィア発行、２００２年、第７９巻、５５−７０頁Journal of Controlled Release, Elsevier, Vol. 79, p. 55-70 (2002) "Journal of Controlled Release" (UK), published by Elsevier, 2002, Vol. 79, pp. 55-70.

本発明の目的は、抗腫瘍効果の向上とともに、副作用の低減、特に骨髄抑制が低下した核酸代謝拮抗剤を提供することである。具体的には、腫瘍増殖阻害効果を長期に亘り発揮しつつ、骨髄抑制を遷延化しない核酸代謝拮抗剤を提供する。 An object of the present invention is to provide a nucleic acid antimetabolite having improved antitumor effect and reduced side effects, particularly reduced bone marrow suppression. Specifically, the present invention provides a nucleic acid antimetabolite which does not prolong myelosuppression while exerting a tumor growth inhibitory effect over a long period of time.

本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行なった結果、多分岐高分子担体の末端官能基に、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットとポリエチレングリコールセグメントを結合させた核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物が、抗腫瘍効果の向上とともに、副作用である骨髄抑制の遷延化を回避できることを見出した。 The present inventors have conducted intensive studies to solve the above problems, and as a result, a nucleic acid in which a succinic acid monoamide unit in which a nucleic acid antimetabolite is bound and a polyethylene glycol segment are bound to a terminal functional group of a multibranched polymer carrier. It has been found that an antimetabolite-binding hyperbranched compound can prevent prolonged myelosuppression, which is a side effect, while improving the antitumor effect.

即ち、本発明は次の［１］〜［１４］に関する。
［１］核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物が一般式（１）

［式中、［Ｑ］は（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）個の末端官能基化された多分岐高分子担体であり、（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）は４〜２００の整数であり、［Ｆ］は前記末端官能基であってアミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基、及び／又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基を有する保護基で修飾された、アミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基であり、Ｆは前記末端官能基から水素原子又は水酸基が除かれた結合基であり、Ｒ_１は核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基であり、Ｒ_２はポリエチレングリコールセグメントを含む置換基であり、Ｒ_３はコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基であり、ｍは０〜１９９の整数であり、ｎは１〜２００の整数であり、ｏは０〜１９９の整数であり、ｐは０〜１９９の整数である。］で示される核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。
本発明は、一般式（１）におけるＲ_１に係る核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを必須の置換基として具備し、Ｒ_２、Ｒ_３及び［Ｆ］に係る置換基を任意に具備する核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物である。
なお、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基を具備することが好ましい。該ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基は、一般式（１）においてＲ_２として具備していても良く、Ｒ_１に係る核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットに該ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基を具備させてもいても良い。
また、前記［Ｆ］は、多分岐高分子担体［Ｑ］の末端官能基であっても良く、また該末端官能基が置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基を有する保護基の修飾体であっても良く、末端官能基とその保護基修飾体の混合体で存在している態様を含む。That is, the present invention relates to the following [1] to [14].
[1] The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound has the general formula (1)

[Wherein [Q] is a (m + n + o + p) terminal-functionalized hyperbranched polymer carrier, (m + n + o + p) is an integer of 4-200, and [F] is the terminal functional group. A protecting group having at least one functional group selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, and / or a C1-C6 alkyl group which may have a substituent; Is one or more functional groups selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, wherein F is a bonding group obtained by removing a hydrogen atom or a hydroxyl group from the terminal functional group. , R ₁ is a substituent containing a succinic acid monoamide units nucleic acid antimetabolites are bonded, R ₂ is a substituent containing a polyethylene glycol segment, R ₃ is Zanmoto及acid monoamide derivative / Or a substituent containing a succinimide residue, m is an integer of 0 to 199, n is an integer of 1 to 200, o is an integer of 0 to 199, and p is an integer of 0 to 199. Is an integer. ] The nucleic acid antimetabolite binding hyperbranched compound shown by these.
The present invention comprises, as an essential substituent, a succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite related to R ₁ in the general formula (1) is bound, and optionally the substituents related to R ₂ , R ₃ and [F]. The present invention is a nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound.
In addition, the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention preferably has a substituent containing a polyethylene glycol segment. The substituent containing the polyethylene glycol segment may be provided as R ₂ in the general formula (1), and the substituent containing the polyethylene glycol segment is attached to the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite related to R ₁ is bound. May be provided.
[F] may be a terminal functional group of the multi-branched polymer carrier [Q], and the terminal functional group may have a substituent. It may be a modified form of a protective group having a group, and includes an embodiment in which the modified form is present as a mixture of a terminal functional group and a modified form of the protective group.

［２］前記核酸代謝拮抗剤が核酸塩基にアミノ基を有する核酸代謝拮抗剤であり、該核酸代謝拮抗剤はコハク酸モノアミドのカルボキシ基に該アミノ基によるアミド結合を介して結合している前記［１］に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。
当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の核酸代謝拮抗剤の結合様式をアミド結合にそろえることで、所望の薬物放出プロファイルを達成することができ、薬効の持続的発揮と副作用の低減に関する本発明の効果を安定的に得る事ができる。[2] The nucleic acid antimetabolite is a nucleic acid antimetabolite having an amino group in a nucleobase, wherein the nucleic acid antimetabolite is bonded to a carboxy group of succinic monoamide via an amide bond by the amino group. The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to [1].
By aligning the binding mode of the nucleic acid antimetabolite binding multi-branched compound of the nucleic acid antimetabolite with an amide bond, a desired drug release profile can be achieved, and the present invention relates to sustained exertion of drug efficacy and reduction of side effects. The effect can be obtained stably.

［３］前記核酸代謝拮抗剤の質量含有率が、２質量％以上６０質量％以下である前記［１］又は［２］に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 [3] The multi-branched nucleic acid antimetabolite-binding compound according to the above [1] or [2], wherein the mass content of the nucleic acid antimetabolite is 2% by mass or more and 60% by mass or less.

［４］前記核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物におけるポリエチレングリコールセグメントの質量含有率が２０質量％以上９０質量％以下であり、ポリエチレングリコールセグメントが２〜１００ユニット結合している前記［１］〜［３］に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。
当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、ポリエチレングリコールセグメントを適当量保持させることにより適切な体内動態が得られ、薬効発現と副作用の軽減を達成させることができる。[4] The above-mentioned [1] to [1], wherein the mass content of the polyethylene glycol segment in the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound is from 20% by mass to 90% by mass, and 2 to 100 units of the polyethylene glycol segment are bound. 3] The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to [3].
The nucleic acid antimetabolite-bound hyperbranched compound can obtain an appropriate pharmacokinetics by holding an appropriate amount of polyethylene glycol segment, and can achieve onset of a drug effect and reduction of side effects.

［５］Ｒ_１の核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットが、一般式（２）及び／又は（３）

［式中、［Ｄ］は核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、Ｘ_４は末端官能基Ｆとの結合基であり、Ｒ_４、Ｒ_５及びＲ_６はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキル基であり、Ｒ_７は水素原子、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアラルキル基、置換基を有していても良い芳香族基及びカルボキシ基が保護されたアミノ酸残基からなる群から選択される１種以上の基である。］である前記［１］〜［４］の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。
すなわち、該［５］の発明態様は、前記一般式（１）において、前記Ｒ_１に係る前記コハク酸モノアミドユニットが、アスパラギン酸モノアミドユニットを用いることが好ましい。この場合、核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物にポリエチレングリコールセグメントを具備させる場合は、Ｒ_２へポリエチレングリコールセグメントを含む置換基を導入する態様である。[5] The succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite of R ₁ is bound is represented by the general formula (2) and / or (3):

[Wherein [D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite, X ₄ is a binding group to a terminal functional group F, and R ₄ , R ₅ and R ₆ are each independently a hydrogen atom or a carbon atom. R ₇ represents a hydrogen atom, a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 20 carbon atoms (C 1 to C 20) which may have a substituent; A linear, branched or cyclic aralkyl group having carbon atoms (C7 to C20) which may have an aromatic group which may have a substituent and an amino acid residue in which a carboxy group is protected And at least one group selected from the group consisting of ] The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to any one of the above [1] to [4].
That is, in the invention aspect of [5], in the general formula (1), it is preferable that the succinic acid monoamide unit related to the R ₁ be an aspartic acid monoamide unit. In this case, case of including a polyethylene glycol segment in nucleic acid metabolism antagonist binding hyperbranched compound, a mode of introducing a substituent containing a polyethylene glycol segment into R _2.

［６］Ｒ_１の核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットが、側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したポリアスパラギン酸誘導体である前記［１］〜［５］の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。
すなわち、該コハク酸モノアミドユニットとして、ポリアスパラギン酸を用いても良い。該ポリアスパラギン酸を用いることにより、１つのＲ_１置換基に複数の核酸代謝拮抗剤を具備させることができることから好ましい。[6] Any one of the above-mentioned [1] to [5], wherein the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite of R ₁ is bonded is a polyaspartic acid derivative having a nucleic acid antimetabolite bonded to a side chain carboxy group. 2. The multi-branched compound binding to a nucleic acid antimetabolite according to item 1.
That is, polyaspartic acid may be used as the succinic acid monoamide unit. Use of the polyaspartic acid is preferable because one R ₁ substituent can be provided with a plurality of nucleic acid antimetabolites.

［７］Ｒ_１のポリアスパラギン酸誘導体が一般式（４）又は（５）

［式中、［Ｄ］は核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、Ｒ_１２は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１４）ＣＯＮＨ（Ｒ_１５）であり、該Ｒ_１４及び該Ｒ_１５は同一でも異なってもいてもよく、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、Ｒ_１３は水素原子、炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアシル基及び炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルコキシカルボニル基からなる群から選択される基であり、Ｘ_２は末端官能基Ｆとの結合基であり、ａ、ｂ、ｃ、ｄ及びｅはそれぞれ独立して０〜３０の整数を示し、（ａ＋ｂ）は１〜３０の整数を示し、ポリアスパラギン酸誘導体の総重合数である（ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ＋ｅ）は１〜３０であり、前記［Ｄ］が結合したアスパラギン酸単位、前記Ｒ_１２が結合したアスパラギン酸単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型のアスパラギン酸単位が、それぞれ独立してランダムな配列である。］である前記［６］に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。[7] The polyaspartic acid derivative of R ₁ has the general formula (4) or (5)

[Wherein [D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite, R ₁₂ is a hydroxyl group and / or —N (R ₁₄ ) CONH (R ₁₅ ), and even if R ₁₄ and R ₁₅ are the same, May be different and may be a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon atoms (C1 to C8) which may be substituted by a tertiary amino group, and R ₁₃ is a hydrogen atom, a carbon atom ( an alkoxy radical selected from the group consisting of a carbonyl group of the acyl group and the number of carbon atoms (C1 to C8) of C1 to C8), _{X 2} is a linking group between the terminal functional group F, a, b, c, d and e each independently represent an integer of 0 to 30; (a + b) represents an integer of 1 to 30; (a + b + c + d + e), which is the total polymerization number of the polyaspartic acid derivative, is 1 to 30; D] is bonded to an aspartic acid unit, wherein R ₁₂ is bonded The aspartic acid unit and the aspartic acid unit in which the side chain carboxy group is intramolecularly cyclized are each independently a random sequence. ] The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to [6], wherein

［８］Ｒ_１の核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットが、ポリエチレングリコールセグメントと側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの結合型置換基である前記［１］〜［４］の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。
すなわち、前記一般式（１）のＲ_１に係る核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットは、ポリエチレングリコールセグメントを具備する置換基であっても良い。このような２つの官能基を一体化した置換基を用いることにより、ポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの比率を一定にすることができることから好ましい。また、多分岐高分子担体の末端官能基を効率的に使用することができることから好ましい。[8] The above-mentioned [1], wherein the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite of R ₁ is bonded is a binding type substituent of the succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bonded to a polyethylene glycol segment and a side chain carboxy group. The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to any one of items [4] to [4].
That is, the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite related to R ₁ in the general formula (1) is bound may be a substituent having a polyethylene glycol segment. Use of such a substituent in which two functional groups are integrated is preferable because the ratio of the succinic acid monoamide unit to which the polyethylene glycol segment and the nucleic acid antimetabolite are bound can be kept constant. Further, it is preferable because the terminal functional group of the multibranched polymer carrier can be used efficiently.

［９］Ｒ_１の前記結合型置換基が、ポリエチレングリコールセグメントと側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したポリアスパラギン酸セグメントが結合したブロック共重合体型置換基であって、一般式（６）又は（７）

［式中、［Ｄ］は核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、Ｒ_１６はポリエチレングリコールセグメントであり、Ｒ_１７は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１８）ＣＯＮＨ（Ｒ_１９）であり、該Ｒ_１８及び該Ｒ_１９は同一でも異なっていてもよく、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、Ｘ_３は末端官能基Ｆとの結合基であり、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ及びｊはそれぞれ独立して０〜３０の整数を示し、（ｆ＋ｇ）は１〜３０の整数を示し、ポリアミノ酸誘導体の総重合数である（ｆ＋ｇ＋ｈ＋ｉ＋ｊ）は１〜３０であり、前記［Ｄ］が結合したアスパラギン酸単位、前記Ｒ_１７が結合したアスパラギン酸単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型のアスパラギン酸単位が、それぞれ独立してランダムな配列である。］である前記［８］に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。
ポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットが結合して一体となった置換基において、コハク酸モノアミドユニットとしてポリアスパラギン酸を用いることにより、１つの置換基に複数の核酸代謝拮抗剤を具備させることができることから好ましい。[9] The bond type substituent of R ₁ is a block copolymer type substituent in which a polyethylene glycol segment and a polyaspartic acid segment in which a nucleic acid antimetabolite is bonded to a side chain carboxy group are bonded, and a compound represented by the general formula (6) ) Or (7)

[Wherein [D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite, R ₁₆ is a polyethylene glycol segment, R ₁₇ is a hydroxyl group and / or -N (R ₁₈ ) CONH (R ₁₉ ), R ₁₈ and R ₁₉ may be the same or different, and are a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 8 carbon atoms (C 1 to C 8) which may be substituted with a tertiary amino group; ₃ is a bonding group to the terminal functional group F, f, g, h, i and j each independently represent an integer of 0 to 30; (f + g) represents an integer of 1 to 30; (F + g + h + i + j) is from 1 to 30, and the aspartic acid unit to which [D] is bonded, the aspartic acid unit to which R ₁₇ is bonded, and the aspartic acid in which the side chain carboxy group is an intramolecularly cyclized aspartic acid Unit is German It is an upright random array. ] The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to [8] above.
By using polyaspartic acid as a succinic acid monoamide unit in a substituent in which a succinic acid monoamide unit in which a polyethylene glycol segment is bound to a nucleic acid antimetabolite is bonded, a plurality of nucleic acid antimetabolites can be substituted for one substituent. It is preferable because an agent can be provided.

［１０］Ｒ_２のポリエチレングリコールセグメントが、一般式（８）

［式中、Ｒ_８は水素原子又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、ｋは５〜２，５００の整数であり、Ｘ_１は末端官能基Ｆとの結合基を示す。］である前記［１］〜［９］の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。[10] The polyethylene glycol segment of R ₂ has the general formula (8)

[In the formula, R ₈ is a hydrogen atom or a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C8) which may have a substituent, and k is 5 to 2,500. X ₁ represents a bonding group to the terminal functional group F. ] The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound according to any one of the above [1] to [9].

［１１］Ｒ_３のコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基が、一般式（９）、（１０）及び（１１）

［式中、Ｘ_４は末端官能基Ｆとの結合基であり、Ｒ_９は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１０）ＣＯＮＨ（Ｒ_１１）を示し、Ｒ_１０、Ｒ_１１は同一でも異なっていてもよく、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基を示し、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６及びＲ_７は前記と同義である。］からなる置換基群から選ばれる１種以上の基である前記［１］〜［１０］の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。
Ｒ_３のコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基が、アスパラギン酸モノアミド由来の残基又はイミド残基であることが好ましい。該Ｒ_３は、前記一般式（２）及び／又は（３）で示される核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基から、該核酸代謝拮抗剤が解離した残基の態様を示す。
すなわち、本発明は一般式（１）において、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基（Ｒ_１）と、ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基（Ｒ_２）並びにコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基（Ｒ_３）の少なくとも３種類の置換基が、それぞれ別の置換基として具備する態様であって良い。[11] A succinic monoamide derivative residue and / or a succinimide residue of R ₃ is a compound represented by the general formula (9), (10) or (11)

[Wherein, X ₄ is a bonding group to the terminal functional group F, R ₉ represents a hydroxyl group and / or —N (R ₁₀ ) CONH (R ₁₁ ), and R ₁₀ and R ₁₁ are the same or different. And represents a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C8) which may be substituted with a tertiary amino group, wherein R ₄ , R ₅ , R ₆ and R ₇ are the same as defined above. Is synonymous with ] The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound according to any one of the above [1] to [10], which is one or more groups selected from a substituent group consisting of:
The substituent containing a succinic monoamide derivative residue and / or a succinimide residue of R ₃ is preferably a residue or imide residue derived from aspartic monoamide. R ₃ represents an embodiment of a residue in which the nucleic acid antimetabolite is dissociated from a substituent containing a succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite represented by the general formula (2) and / or (3) is bonded. Show.
That is, the present invention provides a compound represented by the general formula (1) in which a substituent (R ₁ ) containing a succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound, a substituent (R ₂ ) containing a polyethylene glycol segment, and a succinic acid monoamide derivative residue. At least three types of substituents (R ₃ ) containing a group and / or a succinimide residue may be provided as separate substituents.

［１２］核酸代謝拮抗剤が式（１２）：

［式中、−Ｒｆは、式（１３）：

の置換基群より選ばれる基を示し、Ｒ_２０は水素原子又は脂肪酸エステルのアシル基を示す。］で表されるいずれか１種以上の核酸代謝拮抗剤である、前記［１］〜［１１］の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。[12] The nucleic acid antimetabolite has the formula (12):

[Wherein, -Rf is represented by the formula (13):

And R ₂₀ represents a hydrogen atom or an acyl group of a fatty acid ester. ] The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound according to any one of the above [1] to [11], which is any one or more nucleic acid antimetabolite represented by the formula:

［１３］核酸代謝拮抗剤が式（１４）：

［式中、−Ｒｆは、式（１５）：

の置換基群より選ばれる基を示し、Ｒ_２０は水素原子又は脂肪酸エステルのアシル基を示す。］で表されるいずれか１種以上の核酸代謝拮抗剤である、前記［１］〜［１２］の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。[13] The nucleic acid antimetabolite has the formula (14):

[Wherein, -Rf is represented by the formula (15):

And R ₂₀ represents a hydrogen atom or an acyl group of a fatty acid ester. ] The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound according to any one of the above [1] to [12], wherein the compound is any one or more nucleic acid antimetabolite represented by the formula:

［１４］前記［１］〜［１３］に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を含有する医薬。 [14] A medicine containing the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to any of [1] to [13].

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、多分岐高分子担体の末端官能基に、ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基、並びに核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基を具備することを特徴とする。当該多分岐化合物は、生体内に投与すると血中に滞留して体内分布しつつ、結合していた核酸代謝拮抗剤を適切な放出プロファイルにて遊離させて薬理活性作用を発揮させることができる。その結果、薬効を向上させつつ、副作用を回避することができる。特に核酸代謝拮抗剤の主たる副作用である骨髄抑制の遷延化がなく、薬効が持続的に発揮される核酸代謝拮抗剤を提供することができる。 The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention includes a substituent containing a polyethylene glycol segment, and a substituent containing a succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound, at the terminal functional group of the hyperbranched polymer carrier. It is characterized by doing. When the hyperbranched compound is administered to a living body, the compound can stay in the blood and distribute in the body, and can release a bound nucleic acid antimetabolite with an appropriate release profile to exert a pharmacological activity. As a result, side effects can be avoided while improving the efficacy. In particular, it is possible to provide a nucleic acid antimetabolite which does not prolong the myelosuppression, which is a main side effect of the nucleic acid antimetabolite, and has sustained efficacy.

本発明は、多分岐高分子担体を用い、この複数個有する末端基に核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基を具備した核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物に関する。以下に、本発明の詳細について説明する。 The present invention relates to a multibranched compound having an antimetabolite binding agent having a substituent containing a succinic acid monoamide unit in which a nucleic acid antimetabolite is bound to a plurality of terminal groups using a multibranched polymer carrier. Hereinafter, details of the present invention will be described.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、一般式（１）

［式中、［Ｑ］は（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）個の末端官能基化された多分岐高分子担体であり、（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）は４〜２００の整数であり、［Ｆ］は前記末端官能基であってアミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基、及び／又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基を有する保護基で修飾された、アミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基であり、Ｆは前記末端官能基から水素原子又は水酸基が除かれた結合基であり、Ｒ_１は核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基であり、Ｒ_２はポリエチレングリコールセグメントを含む置換基であり、Ｒ_３はコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基であり、ｍは０〜１９９の整数であり、ｎは１〜２００の整数であり、ｏは０〜１９９の整数であり、ｐは０〜１９９の整数である。］で示される核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。である。The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention has the general formula (1)

[Wherein [Q] is a (m + n + o + p) terminal-functionalized hyperbranched polymer carrier, (m + n + o + p) is an integer of 4-200, and [F] is the terminal functional group. A protecting group having at least one functional group selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, and / or a C1-C6 alkyl group which may have a substituent; Is one or more functional groups selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, wherein F is a bonding group obtained by removing a hydrogen atom or a hydroxyl group from the terminal functional group. , R ₁ is a substituent containing a succinic acid monoamide units nucleic acid antimetabolites are bonded, R ₂ is a substituent containing a polyethylene glycol segment, R ₃ is Zanmoto及acid monoamide derivative / Or a substituent containing a succinimide residue, m is an integer of 0 to 199, n is an integer of 1 to 200, o is an integer of 0 to 199, and p is an integer of 0 to 199. Is an integer. ] The nucleic acid antimetabolite binding hyperbranched compound shown by these. It is.

すなわち、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、一般式（１６）

［式中、［Ｆ］は末端官能基であってアミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基であり、［Ｑ］、ｍ、ｎ、ｏ及びｐは前述と同義である。］で表される多分岐高分子担体に、Ｒ_１で表される核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基を具備し、更に、任意にＲ_２で表されるポリエチレングリコールセグメントを含む置換基、並びにＲ_３で表されるコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基を結合させた核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物である。That is, the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention has the general formula (16)

[Wherein [F] is a terminal functional group and is at least one functional group selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, and [Q], m, n, o and p has the same meaning as described above. A multi-branched polymer carrier represented by the formula (I), further comprising a substituent comprising a succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite represented by R ₁ is bonded, and further comprising a polyethylene glycol segment optionally represented by R ₂ And a substituent containing a succinic monoamide derivative residue and / or a succinimide residue represented by R ₃ bound thereto.

前記一般式（１６）で示される多分岐高分子担体は、複数単位の末端官能基を含有する多分岐担体をポリマーコアとする高分子化合物である。該末端官能基は、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基、ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基、並びにコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基を結合させるための結合性官能基として用いられる。 The multibranched polymer carrier represented by the general formula (16) is a polymer compound having a multibranched carrier having a plurality of terminal functional groups as a polymer core. The terminal functional group includes a substituent containing a succinic monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound, a substituent containing a polyethylene glycol segment, and a substituent containing a succinic monoamide derivative residue and / or a succinimide residue. It is used as a binding functional group for binding.

前記多分岐高分子担体は、コア分子種から任意の形状の分岐構造を有する複数の分岐鎖を具備し、該分岐鎖の末端は前記［Ｆ］で表される複数の反応性官能基を具備する、分子量１キロダルトン以上の分子種である。
該分岐鎖の分岐点は特に制限はなく、該コア分子種から複数の分子鎖が伸長した構造のいわゆる星状高分子構造であっても良く、１以上の分岐点を有する分岐鎖が該コア分子種から伸長した構造の分子種であっても良い。
該分岐鎖は、コア分子種から２以上で伸長した構造である。該コア分子種から伸長する複数の分子鎖は、互いに同じであっても異なるものであっても良い。末端反応性官能基が同一であることが好ましいことから、同じ分子鎖を用いることが好ましい。The multi-branched polymer carrier includes a plurality of branched chains having a branched structure of an arbitrary shape from a core molecular species, and the terminal of the branched chain includes a plurality of reactive functional groups represented by the above [F]. Is a molecular species having a molecular weight of 1 kilodalton or more.
The branch point of the branched chain is not particularly limited, and may be a so-called star-like polymer structure in which a plurality of molecular chains are extended from the core molecular species. It may be a molecular species having a structure extended from the molecular species.
The branched chain has a structure extended from the core molecular species by two or more. The plurality of molecular chains extending from the core molecular species may be the same or different. Since the terminal reactive functional groups are preferably the same, it is preferable to use the same molecular chain.

該分岐鎖が複数の分岐点を有する分岐鎖である場合、当該多分岐高分子担体は、デンドリマー又は超分岐ポリマーと称される分子種であることが好ましい。デンドリマー又は超分岐ポリマーは樹状ポリマーとも呼ばれ、コア分子種から複数の規則的に分岐した分岐鎖が伸長したポリマー構造である。これらはコア分子種を中心に略球型構造又は放射状構造を取り、外殻に該分岐鎖末端の反応性官能基を具備した分子種である。なお、デンドリマーが有する超分岐構造単位の繰り返し単位はデンドロンと呼ばれる。デンドリマーは、規則的な繰り返し分岐構造体を称する。一方、超分岐ポリマーは、繰り返し分岐構造の規則性がデンドリマーほど精密でなく、分子量や分岐度の異なる不規則な繰り返し分岐構造を有しているものを称する。 When the branched chain is a branched chain having a plurality of branch points, the multibranched polymer carrier is preferably a molecular species called a dendrimer or a hyperbranched polymer. A dendrimer or hyperbranched polymer is also called a dendritic polymer and has a polymer structure in which a plurality of regularly branched branches are extended from a core molecular species. These are molecular species having a substantially spherical structure or a radial structure around the core molecular species and having a reactive functional group at the end of the branched chain in the outer shell. The repeating unit of the hyperbranched structural unit of the dendrimer is called a dendron. Dendrimers refer to regularly repeating branched structures. On the other hand, the hyperbranched polymer refers to a polymer having an irregular repeating branched structure in which the regularity of the repeating branched structure is not as precise as the dendrimer and the molecular weight and the degree of branching are different.

当該多分岐高分子担体の分岐骨格として、それぞれアミド結合で分岐させたポリアミド構造、３級アミンを分岐させたポリアミン構造、エステル結合で分岐させたポリエステル構造、エーテル結合で分岐させたポリエーテル構造あるいはその混合構造有する構造などが挙げられる。
デンドリマーや超分岐ポリマーにおいて、分岐構造の繰り返し数を世代（Ｇ）と称し、コア分子種（Ｇ０）から伸長する分岐官能基化数を世代数として、末端反応性官能基数や分子量数の物性値として表す。本発明において、多分岐高分子担体としてデンドリマー又は超分岐ポリマーを用いる場合、その世代数に特に制限はないが、世代数はＧ２〜Ｇ６が好ましく、さらに好ましくはＧ３〜Ｇ５である。As the branched skeleton of the multi-branched polymer carrier, a polyamide structure branched by an amide bond, a polyamine structure branched by a tertiary amine, a polyester structure branched by an ester bond, a polyether structure branched by an ether bond, or And a structure having a mixed structure thereof.
In dendrimers and hyperbranched polymers, the number of repetitions of the branched structure is referred to as generation (G), and the number of branched functional groups extending from the core molecular species (G0) is defined as the number of generations. Expressed as In the present invention, when a dendrimer or a hyperbranched polymer is used as the hyperbranched polymer carrier, the number of generations is not particularly limited, but the number of generations is preferably G2 to G6, and more preferably G3 to G5.

当該多分岐高分子担体の末端反応性官能基は、アミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基である。これらの官能基は多分岐高分子担体の最外殻に分布し、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットやポリエチレングリコールセグメント等による外殻構造の化学修飾のための結合基として用いられる。
一般式（１）のＦは、アミノ基、水酸基若しくはメルカプト基から水素原子が除かれた結合基であるか、又はカルボキシ基から水酸基が除かれた結合基である。該多分岐高分子担体において、該末端反応性官能基数である（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）は４以上で２００以下で存在する。好ましくは、末端反応性官能基は４以上で１５０以下であり、特に好ましくは８以上で１００以下の末端反応性反応基を有する。本発明で用いる多分岐高分子担体であるデンドリマーや超分岐ポリマーは、世代数に応じて末端官能基数が倍数的に増加する。デンドリマーや超分岐ポリマーは公知であり、それを適宜選択して用いれば良い。
該末端反応性官能基は、同一の官能基であっても、異なる官能基が混在していても良い。しかしながら、該末端反応性官能基は、核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドやポリエチレングリコールセグメントによる化学修飾を行う結合基であるため、同一の官能基であることが好ましい。該末端反応性官能基としては、水酸基又はカルボキシ基が好ましい。The terminal reactive functional group of the hyperbranched polymer carrier is one or more functional groups selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group, and a mercapto group. These functional groups are distributed on the outermost shell of the hyperbranched polymer carrier, and are used as a bonding group for chemical modification of the outer shell structure with a succinic acid monoamide unit or a polyethylene glycol segment to which a nucleic acid antimetabolite is bonded.
F in the general formula (1) is a bonding group in which a hydrogen atom has been removed from an amino group, a hydroxyl group or a mercapto group, or a bonding group in which a hydroxyl group has been removed from a carboxy group. In the hyperbranched polymer carrier, the number of terminal reactive functional groups (m + n + o + p) is 4 or more and 200 or less. Preferably, the number of terminal reactive functional groups is 4 or more and 150 or less, particularly preferably 8 or more and 100 or less. In the dendrimer or hyperbranched polymer which is a hyperbranched polymer carrier used in the present invention, the number of terminal functional groups increases fold according to the number of generations. Dendrimers and hyperbranched polymers are known, and may be appropriately selected and used.
The terminal reactive functional groups may be the same functional group or different functional groups may be mixed. However, the terminal reactive functional groups are preferably the same functional groups because they are chemical groups that are chemically modified with an antimetabolite-binding succinic acid monoamide or a polyethylene glycol segment. As the terminal reactive functional group, a hydroxyl group or a carboxy group is preferable.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、高分子担体を用いることによる薬物動態の制御を目的としているため、該高分子担体には適当な分子量の範囲が設定される。該多分岐高分子担体は、分子量が１キロダルトン以上であり１００キロダルトン以下の分子であることが好ましい。より好ましくは、３キロダルトン以上であり７０キロダルトン以下の多分岐高分子担体である。 Since the purpose of the present invention is to control pharmacokinetics by using a polymer carrier, an appropriate range of molecular weight is set for the polymer carrier. The hyperbranched polymer carrier is preferably a molecule having a molecular weight of 1 kDa or more and 100 kDa or less. More preferably, it is a hyperbranched polymer carrier having a molecular weight of 3 kDa or more and 70 kDa or less.

前記多分岐高分子担体は、公知の方法により調製することができる。すなわち、コア部を基に複数の枝部を具備させた高分子担体を合成する方法として、コアとなる分子にジェネレーションごとに分子を順次結合させ枝分かれさせていくダイバージェント法、又はあらかじめ枝の部分を合成して、最後に枝部をコア分子と反応させるコンバージェント法の２通りの合成法が知られている。本発明に用いる多分岐高分子担体は、何れの合成方法によっても調製することができる。 The hyperbranched polymer carrier can be prepared by a known method. That is, as a method of synthesizing a polymer carrier having a plurality of branches based on a core portion, a divergent method in which molecules are sequentially bonded to a molecule serving as a core for each generation and branched, or a portion of a branch in advance is used. , And finally, a convergent method in which a branch is reacted with a core molecule. The hyperbranched polymer carrier used in the present invention can be prepared by any synthetic method.

当該多分岐高分子担体として用いられるデンドリマー、デンドロン及び超分岐ポリマーは、市販品を用いても良い。デンドリマーは、例えば、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）デンドリマー（Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ０〜７、末端官能基として、水酸基、アミノ基、カルボキシ基、トリメトキシシリル基等数種）（シグマ−アルドリッチ社）を用いても良い。デンドロンとしては、ポリエステル−ポリ−ヒドロキシ−１−アセチレンビス−ＭＰＡデンドロン（ヒドロキシ基；８〜３２、Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ３〜５）、ポリエステル−ポリ−ヒドロキシ−１−カルボキシビス−ＭＰＡデンドロン（水酸基；８〜３２、Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ３〜５）（シグマ−アルドリッチ社）を用いても良い。超分岐ポリマーとしては、ハイパーブランチドビス−ＭＰＡポリエステル−ポリ−ヒドロキシ（水酸基１６〜６４、Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ２〜４）（シグマ−アルドリッチ社）を用いても良い。
なお、市販の多分岐高分子担体を用い、これらの末端反応性官能基を通常の有機反応による化学修飾によって任意の官能基に変換したものを用いても良い。例えば、末端反応性官能基が水酸基やアミノ基の多分岐高分子担体を、末端カルボキシ基の多分岐高分子担体に変換する場合は、例えば、任意の酸無水物化合物と反応させることにより、エステル化反応又はアミド化反応を経由して、末端反応性官能基をカルボキシ基にすることができる。As the dendrimer, dendron and hyperbranched polymer used as the hyperbranched polymer carrier, commercially available products may be used. As the dendrimer, for example, a polyamidoamine (PAMAM) dendrimer (Generation 0 to 7, several kinds of terminal functional groups such as a hydroxyl group, an amino group, a carboxy group, and a trimethoxysilyl group) (Sigma-Aldrich) may be used. As the dendron, polyester-poly-hydroxy-1-acetylene bis-MPA dendron (hydroxyl group; 8-32, Generation 3-5), polyester-poly-hydroxy-1-carboxybis-MPA dendron (hydroxyl group; 8-32, Generations 3 to 5) (Sigma-Aldrich) may be used. As the hyperbranched polymer, hyperbranched bis-MPA polyester-poly-hydroxy (hydroxyl groups 16 to 64, Generations 2 to 4) (Sigma-Aldrich) may be used.
A commercially available multibranched polymer carrier may be used in which these terminal-reactive functional groups have been converted to arbitrary functional groups by chemical modification by a usual organic reaction. For example, when converting a multi-branched polymer carrier having a terminal-reactive functional group to a hydroxyl group or an amino group into a multi-branched polymer carrier having a terminal carboxy group, for example, by reacting with any acid anhydride compound, The terminal-reactive functional group can be converted to a carboxy group via an amide or amidation reaction.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、コハク酸モノアミドユニットのカルボキシ基に核酸代謝拮抗剤がアミド結合及び／又はエステル結合を介して結合している。好ましくは、アミノ基及び／又は水酸基を有する核酸代謝拮抗剤を用い、該アミノ基による該カルボキシ基とのアミド結合又は該水酸基による該カルボキシ基とのエステル結合にて結合させた構造ユニットである。結合様式は、アミド結合のみの場合、エステル結合のみの場合、又はアミド結合とエステル結合との混合体の場合の何れでも良い。用いる核酸代謝拮抗剤の結合性官能基に応じて、コハク酸モノアミドのカルボキシ基への結合様式を適宜選択して良い。 In the multibranched compound of the present invention, a nucleic acid antimetabolite is bonded to a carboxy group of a succinic acid monoamide unit via an amide bond and / or an ester bond. Preferably, it is a structural unit in which a nucleic acid antimetabolite having an amino group and / or a hydroxyl group is used and bound by an amide bond with the carboxy group by the amino group or an ester bond with the carboxy group by the hydroxyl group. The bonding mode may be any of only an amide bond, only an ester bond, or a mixture of an amide bond and an ester bond. Depending on the binding functional group of the nucleic acid antimetabolite to be used, the binding mode to the carboxy group of succinic monoamide may be appropriately selected.

一般式（１）のＲ_１で示される前記核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットは、下記一般式（１７）及び／又は（１８）

［式中、［Ｄ］は核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、Ｘは前記末端官能基Ｆとの結合基であり、Ｙは酸素原子又はＮ−Ｒ_４であり、前記Ｒ_４並びにＲ_５及びＲ_６はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキル基であり、Ｒ_７は水素原子、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアラルキル基、置換基を有していても良い芳香族基及びカルボキシ基が保護されたアミノ酸残基からなる群から選択される１種以上の基である。］で示される核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットが好ましい。
前記一般式（１７）及び（１８）で示されるコハク酸モノアミドユニットは、光学活性体であっても良く、光学活性体の任意の混合物であっても良い。The succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite represented by R ₁ in the general formula (1) binds is represented by the following general formulas (17) and / or (18)

[Wherein [D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite, X is a binding group to the terminal functional group F, Y is an oxygen atom or NR ₄ , and R _{4 and} R ₅ and R ₆ are each independently a hydrogen atom or an alkyl group having a carbon number (C1 to C8); and R ₇ is a hydrogen atom or a straight chain having a carbon number (C1 to C20) which may have a substituent. , Branched or cyclic alkyl group, which may have a substituent (C7-C20) linear, branched or cyclic aralkyl group, which may have a substituent At least one group selected from the group consisting of amino acid residues in which an aromatic group and a carboxy group are protected. A succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite represented by
The succinic acid monoamide units represented by the general formulas (17) and (18) may be an optically active substance or an arbitrary mixture of optically active substances.

前記一般式（１７）又は（１８）で示すコハク酸モノアミドユニットにおいて、式中、Ｒ_４、Ｒ_５及びＲ_６における、炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキル基は、直鎖状、分岐鎖状又は環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキル基である。
直鎖状アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−へキシル基等を挙げることができる。
分岐鎖状アルキル基としては、例えばイソプロピル基、ｔ−ブチル基、１−メチル−プロピル基、２−メチル−プロピル基、２，２−ジメチルプロピル基等が挙げられる。
環状アルキル基としては、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。In the succinic acid monoamide unit represented by the general formula (17) or (18), in the formula, the alkyl group having carbon atoms (C1 to C8) in R ₄ , R ₅ and R ₆ is linear or branched. Or a cyclic alkyl group having 1 to 8 carbon atoms.
Examples of the linear alkyl group include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an n-butyl group, and an n-hexyl group.
Examples of the branched alkyl group include an isopropyl group, a t-butyl group, a 1-methyl-propyl group, a 2-methyl-propyl group, and a 2,2-dimethylpropyl group.
Examples of the cyclic alkyl group include a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, and the like.

前記一般式（１７）又は（１８）に係るＲ_７は、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアラルキル基、置換基を有していても良い芳香族基である。
ここで有しても良い置換基としては、メルカプト基、水酸基、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、炭素環若しくは複素環アリール基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルキルスルフィニル基、アリールスルフィニル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、スルファモイル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、カルバモイルオキシ基、置換又は無置換アミノ基、アシルアミノ基、アルコキシカルボニルアミノ基、ウレイド基、スルホニルアミノ基、スルファモイルアミノ基、ホルミル基、アシル基、カルボキシ基、アルコキシカルボニル基、カルバモイル基又はシリル基等を挙げることができる。芳香環上の置換位置は、オルト位でも、メタ位でも、パラ位でも良い。
また、ポリエチレングリコールセグメントを置換基として具備していても良い。Ｒ_７が、ポリエチレングリコールセグメントを置換基として有する、炭素数（Ｃ１〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基、炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアラルキル基、芳香族基からなる群から選択される基である場合、一般式（１）に係るＲ_１は、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含み、且つポリエチレングリコールセグメントを併せ持つ置換基となる。
置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基とは、例えばメチル基、エチル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基、シクロヘキシル基、ｎ−オクチル基、ドデシル基、オクタデシル基が挙げられる。
置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアラルキル基としては、例えば、ベンジル基、２−フェニルエチル基、４−フェニルブチル基、８−フェニルオクチル基等が挙げられる。
置換基を有していても良い炭素数（Ｃ５〜Ｃ２０）の芳香族基としては、例えば、フェニル基、４−メトキシフェニル基、４−ジメチルアミノフェニル基、４−ヒドロキシフェニル基等が挙げられる。R _{7 according} to the general formula (17) or (18) has a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 20 carbon atoms (C1 to C20), which may have a substituent, or a substituent. A linear, branched or cyclic aralkyl group having carbon atoms (C7 to C20), and an aromatic group which may have a substituent.
Examples of the substituent which may be present include a mercapto group, a hydroxyl group, a halogen atom, a nitro group, a cyano group, a carbocyclic or heterocyclic aryl group, an alkylthio group, an arylthio group, an alkylsulfinyl group, an arylsulfinyl group, and an alkylsulfonyl group. Group, arylsulfonyl group, sulfamoyl group, alkoxy group, aryloxy group, acyloxy group, alkoxycarbonyloxy group, carbamoyloxy group, substituted or unsubstituted amino group, acylamino group, alkoxycarbonylamino group, ureido group, sulfonylamino group, Examples thereof include a sulfamoylamino group, a formyl group, an acyl group, a carboxy group, an alkoxycarbonyl group, a carbamoyl group, and a silyl group. The substitution position on the aromatic ring may be at the ortho, meta or para position.
Further, a polyethylene glycol segment may be provided as a substituent. R ₇ has a polyethylene glycol segment as a substituent, and has a straight-chain, branched or cyclic alkyl group having 1 to 20 carbon atoms (C1 to C20), a straight-chain, branched or cyclic alkyl group having 1 to 7 carbon atoms (C7 to C20). When the group is selected from the group consisting of a cyclic aralkyl group and an aromatic group, R _{1 according} to the general formula (1) contains a succinic monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound, and has a polyethylene glycol segment. It becomes a substituent having both.
The linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C20) which may have a substituent includes, for example, a methyl group, an ethyl group, an isopropyl group, a t-butyl group, a cyclohexyl group, Examples include an n-octyl group, a dodecyl group, and an octadecyl group.
Examples of the linear, branched or cyclic aralkyl group having carbon atoms (C7 to C20) which may have a substituent include, for example, benzyl group, 2-phenylethyl group, 4-phenylbutyl group, and 8 -Phenyloctyl group and the like.
Examples of the aromatic group having carbon atoms (C5 to C20) which may have a substituent include a phenyl group, a 4-methoxyphenyl group, a 4-dimethylaminophenyl group, a 4-hydroxyphenyl group, and the like. .

また、前記Ｒ_７は、カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基であっても良い。カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基としては、例えば、グリシニル−メチルエステル基、アラニル−メチルエステル基、ロイシニル−メチルエステル基、バリニル−メチルエステル基、フェニルアラニル−メチルエステル基、アラニル−エチルエステル基、ロイシニル−エチルエステル基、アラニル−ブチルエステル基、ロイシニル−ブチルエステル基等が挙げられる。
若しくは、カルボキシ基にポリエチレングリコールセグメントがアミド結合又はエステル結合にて結合したアミノ酸残基であっても良い。Further, R ₇ may be an amino acid residue in which a carboxy group is protected. Examples of the amino acid residue having a protected carboxy group include a glycinyl-methyl ester group, an alanyl-methyl ester group, a leucinyl-methyl ester group, a valinyl-methyl ester group, a phenylalanyl-methyl ester group, and an alanyl-ethyl ester Groups, leucinyl-ethyl ester groups, alanyl-butyl ester groups, leucinyl-butyl ester groups, and the like.
Alternatively, it may be an amino acid residue in which a polyethylene glycol segment is bonded to a carboxy group by an amide bond or an ester bond.

前記核酸代謝拮抗剤が結合するコハク酸モノアミドユニットは、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの重合体であっても良い。すなわち、コハク酸モノアミドユニットとしてアスパラギン酸モノアミドユニットである場合、ポリアスパラギン酸誘導体を用いても良い。ポリアスパラギン酸を用いると、自ずと一方のカルボキシ基がモノアミド体となることから、好ましい置換基として挙げることができる。
前記コハク酸モノアミドユニットの重合体である場合、重合数が１〜５０の重合体であることが好ましい。より好ましくは、重合数が２〜３０である。該コハク酸モノアミドユニットの重合体の重合形式は、α−アミド結合による重合体であっても、β−アミド結合による重合体であっても、α及びβ−アミド結合の混合による重合体であってもいずれであっても良い。The succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite binds may be a polymer of a succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite binds. That is, when the succinic acid monoamide unit is an aspartic acid monoamide unit, a polyaspartic acid derivative may be used. When polyaspartic acid is used, one of the carboxy groups naturally becomes a monoamide, and thus can be mentioned as a preferred substituent.
When it is a polymer of the succinic monoamide unit, it is preferably a polymer having a polymerization number of 1 to 50. More preferably, the number of polymerization is from 2 to 30. The polymerization form of the polymer of the succinic monoamide unit may be a polymer based on an α-amide bond, a polymer based on a β-amide bond, or a polymer based on a mixture of α and β-amide bonds. Or any of them.

前記核酸代謝拮抗剤が結合するコハク酸モノアミドユニットとして、コハク酸モノアミドユニットの重合体を用いる場合、核酸代謝拮抗剤は該重合体置換基に対して１分子以上が結合していれば良く、２以上の複数分子が結合していても良い。複数の核酸代謝拮抗剤を結合させることで薬剤含量を高めることができることから有利な態様である。この場合の該核酸代謝拮抗剤の結合様式としては、前記と同様であって、アミド結合及び／又はエステル結合を介して結合している。
前記コハク酸モノアミドユニットの重合体のＣ末カルボキシ基は、適当な保護基で修飾されていることが好ましい。例えば、メチルエステル基、エチルエステル基、ブチルエステル基、ベンジルエステル基等のエステル保護基、若しくは、メチルアミド基、エチルアミド基、ブチルアミド基、ベンジルアミド基等のアミド保護基が挙げられる。
若しくは、カルボキシ基にポリエチレングリコールセグメントがアミド結合又はエステル結合にて結合したアミノ酸残基であっても良い。この場合、一般式（１）に係るＲ_１は、複数の核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含み、且つポリエチレングリコールセグメントを併せ持つ置換基となる。When a polymer of a succinic acid monoamide unit is used as the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite binds, the nucleic acid antimetabolite only needs to have at least one molecule bound to the polymer substituent. The plurality of molecules described above may be bonded. This is an advantageous embodiment since the drug content can be increased by binding a plurality of nucleic acid antimetabolites. In this case, the binding mode of the antimetabolite is the same as described above, and is linked via an amide bond and / or an ester bond.
The C-terminal carboxy group of the polymer of the succinic monoamide unit is preferably modified with a suitable protecting group. Examples include an ester protecting group such as a methyl ester group, an ethyl ester group, a butyl ester group, and a benzyl ester group, and an amide protecting group such as a methyl amide group, an ethyl amide group, a butyl amide group, and a benzyl amide group.
Alternatively, it may be an amino acid residue in which a polyethylene glycol segment is bonded to a carboxy group by an amide bond or an ester bond. In this case, R _{1 according} to the general formula (1) is a substituent containing a succinic acid monoamide unit to which a plurality of nucleic acid antimetabolites are bound, and having a polyethylene glycol segment.

前記Ｙが酸素原子である場合、前記コハク酸モノアミドユニットはリンゴ酸を基本骨格とするユニットである。一方、前記ＹがＮ−Ｒ_４である場合、前記コハク酸モノアミドユニットはアスパラギン酸を基本骨格とするユニットである。すなわち、前記Ｒ_５及びＲ_６が水素原子である場合、前記コハク酸モノアミドユニットはリンゴ酸モノアミド誘導体又はアスパラギン酸モノアミド誘導体を用いることができる。前記コハク酸モノアミドユニットとしてはアスパラギン酸モノアミド誘導体が好ましい。When Y is an oxygen atom, the succinic monoamide unit is a unit having malic acid as a basic skeleton. On the other hand, when Y is N—R ₄ , the succinic monoamide unit is a unit having aspartic acid as a basic skeleton. That is, when R ₅ and R ₆ are hydrogen atoms, the succinic acid monoamide unit may be a malic acid monoamide derivative or an aspartic acid monoamide derivative. As the succinic acid monoamide unit, an aspartic acid monoamide derivative is preferable.

前記一般式（１７）及び／又は（１８）におけるＸは、前記Ｒ_１に係る核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基と多分岐高分子担体の末端反応性官能基［Ｆ］を結合させる結合基である。該結合基としては、該コハク酸モノアミドユニットを含む置換基の末端官能基の酸素原子又はＮ−Ｒ_４と、末端反応性官能基［Ｆ］に対して、それぞれ結合可能な官能基を両末端に有する結合基であれば、特に限定されるものではない。X in the general formula (17) and / or (18), the terminal reactive functional group substituent and multi-branched polymer support containing succinic acid monoamide units nucleic acid antimetabolites are bonded according to R ₁ [F ] Is a bonding group. As the bonding group, a functional group capable of bonding to an oxygen atom or N—R ₄ of a terminal functional group of the substituent containing the succinic acid monoamide unit and a terminal reactive functional group [F] can be attached at both ends. Is not particularly limited as long as it has a bonding group.

該Ｘに係る結合基は、該コハク酸モノアミドユニットを含む置換基の末端官能基が酸素原子である場合、一方の末端基がエーテル結合様式、エステル結合、ウレタン結合又はカーボネート結合する結合性官能基を有する。一方、該コハク酸モノアミドユニットを含む置換基の末端官能基がＮ−Ｒ_４である場合、一方の末端基がアミン結合様式、アミド結合、ウレア結合又はウレタン結合する結合性官能基を有する。そして、もう一方の末端基が、末端反応性官能基［Ｆ］とエステル結合、アミド結合、チオエステル結合、ウレア結合又はウレタン結合することができる結合性官能基を有する。すなわち、該Ｘに係る結合基は、前記の末端官能基を有する、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキレン基である。When the terminal functional group of the substituent containing the succinic acid monoamide unit is an oxygen atom, the bonding group relating to X is a bonding functional group in which one terminal group is an ether bond, an ester bond, a urethane bond, or a carbonate bond. Having. On the other hand, when the terminal functional group of the substituent containing the succinic acid monoamide unit is N—R ₄ , one of the terminal groups has an amine bonding mode, an amide bond, a urea bond, or a urethane-bondable functional group. The other terminal group has a bonding functional group capable of forming an ester bond, an amide bond, a thioester bond, a urea bond, or a urethane bond with the terminal reactive functional group [F]. That is, the bonding group relating to the X is an alkylene group having a terminal functional group and having an optionally substituted carbon number (C1 to C8).

該Ｘに係る結合基としては、前記コハク酸モノアミドユニットを含む置換基の末端官能基が酸素原子である場合にエーテル結合し、若しくは末端官能基がＮ−Ｒ_４でアミノ結合様式となり、もう一方が末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合、エステル結合又はチオエステル結合する結合基として、例えば、−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｏ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｓ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＯ−（ｘは１〜８の整数を示す）等が挙げられる。
前記コハク酸モノアミドユニットを含む置換基の末端官能基が酸素原子である場合にエステル結合し、若しくは末端官能基がＮ−Ｒ_４でアミド結合様式となり、もう一方が末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合、エステル結合又はチオエステル結合する結合基として、例えば、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｏ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｓ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＯ−（ｘは１〜８の整数を示す）等が挙げられる。
前記コハク酸モノアミドユニットを含む置換基の末端官能基が酸素原子である場合にウレタン結合し、若しくは末端官能基がＮ−Ｒ_４でウレア結合様式となり、もう一方が末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合、エステル結合又はチオエステル結合する結合基として、例えば、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｏ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｓ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＯ−（ｘは１〜８の整数を示す）等が挙げられる。
また、前記コハク酸モノアミドユニットを含む置換基の末端官能基が酸素原子である場合にカーボネート結合し、若しくは末端官能基がＮ−Ｒ_４でウレタン結合様式となり、もう一方が末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合、エステル結合又はチオエステル結合する結合基として、例えば、−ＣＯＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｏ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｓ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−ＣＯ−（ｘは１〜８の整数を示す）等を挙げることができる。
該Ｘとして、好ましくは前記コハク酸モノアミドユニットを含む置換基の末端官能基が酸素原子である場合にエーテル結合し、若しくは末端官能基がＮ−Ｒ_４でアミノ結合様式となり、末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合する結合基であり、−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−（ｘは１〜８の整数を示す）である。As the bonding group relating to X, when the terminal functional group of the substituent containing the succinic acid monoamide unit is an oxygen atom, an ether bond is formed, or the terminal functional group becomes an amino bonding mode by NR ₄ , and There terminal reactive functional group [F] and an amide bond, as a bonding group to an ester bond or thioester bond, for _{_{example, - (CH 2) x -NH-}} (x is an integer of 1~8), - (CH ₂ ) _x -O- (x is an integer of _{_{1~8), - (CH 2)}} x -S- (x is an integer of _{_{1~8), - (CH 2)}} x -CO- (x is And an integer of 1 to 8).
When the terminal functional group of the substituent containing the succinic acid monoamide unit is an oxygen atom, an ester bond is formed, or the terminal functional group is in an amide bond mode with NR ₄ , and the other is a terminal reactive functional group [F]. an amide bond, as a bonding group to an ester bond or thioester bond, for _{_{example, -CO- (CH 2) x -NH-}} (x is an integer of _{_{1~8), - CO- (CH 2}} ) x -O- (x is an integer of _{_{1~8), - CO- (CH 2}} ) x -S- (x is an integer of _{_{1~8), - CO- (CH 2}} ) x -CO- (x is 1 And an integer of from 8 to 8).
When the terminal functional group of the substituent containing the succinic monoamide unit is an oxygen atom, a urethane bond is formed, or the terminal functional group is in a urea bond mode with N—R ₄ , and the other is a terminal reactive functional group [F]. amide bond, as a bonding group to an ester bond or thioester bond, e.g., -CONH- _(CH ₂₎ x -NH- and (x is an integer of _{_{1~8), - CONH- (CH 2}} ) x -O- (x is an integer of _{_{1~8), - CONH- (CH 2}} ) x -S- (x is an integer of _{_{1~8), - CONH- (CH 2}} ) x -CO- (x is 1 And an integer of from 8 to 8).
Further, when the terminal functional group of the substituent containing the succinic acid monoamide unit is an oxygen atom, a carbonate bond is formed, or the terminal functional group is in a urethane bond mode with NR ₄ , and the other is a terminal reactive functional group [ F] and amide bond, as a bonding group to an ester bond or thioester bond, for example, (is an integer of _{_{1~8 x) -COO- (CH 2)}} x -NH-, - COO- (CH 2) x - O-(x is an integer of _{_{1~8), - COO- (CH 2}} ) x -S- (x is an integer of _{_{1~8), - COO- (CH 2}} ) x -CO- (x Represents an integer of 1 to 8).
X is preferably an ether bond when the terminal functional group of the substituent containing the succinic acid monoamide unit is an oxygen atom, or the terminal functional group is in an amino bonding mode with N—R ₄ to form a terminal reactive functional group. [F] and a linking group to an amide bond is _- _(CH 2) x -NH- _(x is an integer of 1-8).

また、該Ｘに係る結合基としてアミノ酸誘導体を用いても良い。アミノ酸誘導体を結合基とする場合の結合基の使用態様としては、アミノ酸誘導体のＮ末アミノ基が、前記側鎖カルボキシ基とアミド結合し、Ｃ末カルボキシ基が、該コハク酸モノアミドユニットを含む置換基の末端官能基が酸素原子でエステル結合又は末端官能基がＮ−Ｒ_４でアミド結合する態様である。
該Ｘに係る結合基としてアミノ酸誘導体を用いる場合、用いられるアミノ酸は、天然アミノ酸又は非天然アミノ酸であってよく、Ｌ体、Ｄ体のいずれでも特に限定されずに用いることができる。例えば、グリシン、β−アラニン、アラニン、ロイシン、フェニルアラニン等の炭化水素系アミノ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等の酸性アミノ酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン等の塩基性アミノ酸等を用いることができる。Further, an amino acid derivative may be used as the bonding group for X. When the amino acid derivative is used as a bonding group, the N-terminal amino group of the amino acid derivative may be amide bonded to the side chain carboxy group, and the C-terminal carboxy group may contain the succinic acid monoamide unit. ester bond or terminal functional groups terminal functional group with an oxygen atom of the group is a mode in which the amide bond in N-R _4.
When an amino acid derivative is used as the bonding group for X, the amino acid used may be a natural amino acid or an unnatural amino acid, and any of an L-form and a D-form can be used without any particular limitation. For example, hydrocarbon-based amino acids such as glycine, β-alanine, alanine, leucine, and phenylalanine; acidic amino acids such as aspartic acid and glutamic acid; and basic amino acids such as lysine, arginine, and histidine can be used.

また、該Ｘは「結合」であってよい。「結合」とは、特に結合基を介せず、前記多分岐高分子担体の末端反応性官能基と前記コハク酸モノアミドユニットを含む置換基の末端官能基が、直接エステル結合又はアミド結合をしている態様を指す。 Also, the X may be a “bond”. The term "bond" means that the terminal reactive functional group of the multi-branched polymer carrier and the terminal functional group of the substituent containing the succinic acid monoamide unit directly form an ester bond or an amide bond without interposing a bonding group. Refers to the embodiment in which

前記一般式（１７）又は（１８）に係る［Ｄ］は、核酸代謝拮抗剤の結合残基である。該核酸代謝拮抗剤は分子中にアミノ基及び／又は水酸基を有するものであり、該核酸代謝拮抗剤がコハク酸モノアミドユニットのカルボキシ基にアミド結合及び／又はエステル結合を介して結合する。すなわち、該［Ｄ］は該核酸代謝拮抗剤のアミド結合残基及び／又はエステル結合残基である。核酸代謝拮抗剤の結合様式は、アミド結合のみの場合又はエステル結合のみの場合、若しくはアミド結合とエステル結合との混合体の場合の何れでも良い。用いる核酸代謝拮抗剤の結合性官能基に応じて、カルボキシ基への結合様式を適宜選択して良い。 [D] according to the general formula (17) or (18) is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite. The nucleic acid antimetabolite has an amino group and / or a hydroxyl group in a molecule, and the nucleic acid antimetabolite binds to a carboxy group of a succinic acid monoamide unit via an amide bond and / or an ester bond. That is, the [D] is an amide bond residue and / or an ester bond residue of the nucleic acid antimetabolite. The binding mode of the nucleic acid antimetabolite may be either the case of only an amide bond, the case of only an ester bond, or the case of a mixture of an amide bond and an ester bond. The mode of binding to the carboxy group may be appropriately selected depending on the binding functional group of the nucleic acid antimetabolite to be used.

本発明に用いられる核酸代謝拮抗剤は、抗腫瘍活性又は抗ウイルス活性等の薬理活性を有するヌクレオシド誘導体である。該核酸代謝拮抗剤としては、ピリミジン塩基ヌクレオシド誘導体、プリン塩基ヌクレオシド誘導体、トリアジン塩基ヌクレオシド誘導体等を用いることが好ましい。また、該核酸代謝拮抗剤は、分子内にアミノ基及び／又は水酸基を有する化合物を用いることが好ましい。このような核酸代謝拮抗剤は、該アミノ基及び／又は水酸基によりアミド結合及び／又はエステル結合を介して、前述のコハク酸モノアミドユニットのカルボキシ基に導入できることから好ましい。 The nucleic acid antimetabolite used in the present invention is a nucleoside derivative having pharmacological activity such as antitumor activity or antiviral activity. As the nucleic acid antimetabolite, a pyrimidine base nucleoside derivative, a purine base nucleoside derivative, a triazine base nucleoside derivative, or the like is preferably used. Further, as the nucleic acid antimetabolite, it is preferable to use a compound having an amino group and / or a hydroxyl group in a molecule. Such a nucleic acid antimetabolite is preferable because it can be introduced into the carboxy group of the succinic monoamide unit through an amide bond and / or an ester bond by the amino group and / or the hydroxyl group.

特に、ヌクレオシドの核酸塩基にアミノ基を有する核酸代謝拮抗剤を用いることが好ましく、アミノ基を有するピリミジン塩基ヌクレオシド誘導体、アミノ基を有するプリン塩基ヌクレオシド誘導体、アミノ基を有するトリアジン塩基ヌクレオシド誘導体が好ましい。アミノ基を有する核酸代謝拮抗剤は、該アミノ基によるアミド結合で前述のコハク酸モノアミドユニットのカルボキシ基に導入することができることから好ましい。 In particular, it is preferable to use a nucleic acid antimetabolite having an amino group in a nucleoside of a nucleoside, and a pyrimidine base nucleoside derivative having an amino group, a purine base nucleoside derivative having an amino group, and a triazine base nucleoside derivative having an amino group are preferable. The nucleic acid antimetabolite having an amino group is preferable because it can be introduced into the carboxy group of the succinic monoamide unit by an amide bond with the amino group.

核酸代謝拮抗剤として、抗腫瘍活性や抗ウイルス活性を有する複数の化合物が知られており、これらを適宜選択して使用して良い。用いることができる核酸代謝拮抗剤としては、アミノ基及び／又は水酸基を有する核酸代謝拮抗剤が好ましく、該核酸代謝拮抗剤としては、例えば、ピリミジン系代謝拮抗剤、プリン系代謝拮抗剤、トリアジン系代謝拮抗剤等が挙げられる。 As the nucleic acid antimetabolite, a plurality of compounds having an antitumor activity and an antiviral activity are known, and these may be appropriately selected and used. The nucleic acid antimetabolite that can be used is preferably a nucleic acid antimetabolite having an amino group and / or a hydroxyl group. Examples of the nucleic acid antimetabolite include a pyrimidine antimetabolite, a purine antimetabolite, and a triazine antimetabolite. Antimetabolites and the like.

当該核酸代謝拮抗剤は、核酸塩基部分が下記式（１２）から選択されるいずれか１種以上であり、それに結合している基（Ｒｆ）が下記式（１３）から選択されるいずれか１種以上の組み合せである核酸代謝拮抗剤であることが特に好ましい。

［式中、−Ｒｆは、式（１３）：

の置換基群より選ばれる基を示し、Ｒ_２０は水素原子又は脂肪酸エステルのアシル基残基を示す。］。In the nucleic acid antimetabolite, the nucleobase moiety is at least one selected from the following formula (12), and the group (Rf) bonded thereto is any one selected from the following formula (13). Particularly preferred are nucleic acid antimetabolites which are a combination of more than one species.

[Wherein, -Rf is represented by the formula (13):

And R ₂₀ represents a hydrogen atom or an acyl group residue of a fatty acid ester. ].

前記Ｒ_２０における脂肪酸エステルのアシル基は、炭素数（Ｃ４〜Ｃ３０）の炭化水素のモノカルボン酸がエステル結合したアシル残基である。炭素数（Ｃ４〜Ｃ３０）の炭化水素は、飽和炭化水素である飽和脂肪酸であっても良く、１以上の二重結合を含む不飽和炭化水素である不飽和脂肪酸であってもよい。これらの脂肪酸エステルは、当該核酸代謝拮抗剤の脂溶性誘導体として知られており、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の有効成分として使用することができる。
前記Ｒ_２０としての脂肪酸エステルのアシル基残基の脂肪酸において、前記飽和脂肪酸としては、ブタン酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、エイコサン酸、ドコサン酸等が挙げられる。
また前記不飽和脂肪酸としては、９−ヘキサデセン酸、ｃｉｓ−９−オクタデセン酸、ｔｒａｎｓ−９−オクタデセン酸、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１２−オクタデカジエン酸、９，１２，１５−オクタデカトリエン酸、６，９，１２−オクタデカトリエン酸、５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸等が挙げられる。The acyl group of the fatty acid esters in R ₂₀ is an acyl residue of a monocarboxylic acid of hydrocarbon and ester bonds of carbon atoms (C4 to C30). The hydrocarbon having carbon atoms (C4 to C30) may be a saturated fatty acid that is a saturated hydrocarbon, or may be an unsaturated fatty acid that is an unsaturated hydrocarbon containing one or more double bonds. These fatty acid esters are known as fat-soluble derivatives of the nucleic acid antimetabolite, and can be used as an active ingredient of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention.
Wherein the fatty acyl group residue of a fatty acid ester as R _20, examples of the saturated fatty acid, butanoic acid, pentanoic acid, hexanoic acid, octanoic acid, decanoic acid, dodecanoic acid, tetradecanoic acid, hexadecanoic acid, octadecanoic acid, eicosanoic Acid, docosanoic acid and the like.
Examples of the unsaturated fatty acids include 9-hexadecenoic acid, cis-9-octadecenoic acid, trans-9-octadecenoic acid, cis, cis-9,12-octadecadienoic acid, and 9,12,15-octadecatrienoic acid. , 6,9,12-octadecatrienoic acid, 5,8,11,14-eicosatetraenoic acid and the like.

当該核酸代謝拮抗剤として公知の化合物を用いても良い。例えば、下記式（１９）に構造を示すシタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ネララビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）、２’−メチリデン−２’−デオキシシチジン（ＤＭＤＣ）、トロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）、３’−エチニルシチジン（Ｅｔｈｙｎｙｌｃｙｔｉｄｉｎｅ）、２’−シアノ−２’−デオキシ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（ＣＮＤＡＣ）、２’−デオキシ−５、６−ジヒドロ−５−アザシチジン（ＤＨＡＣ）、５’−フルオロ−２’−デオキシシチジン（ＮＳＣ−４８００６)、４’−チオ−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（ＯＳＩ−７８３６）、クラドリビン（Ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、クロファラビン（Ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ）又はフルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、シタラビン−５’−エライジン酸エステル（ＣＰ−４０５５）、ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル（ＣＰ−４１２６）、アザシチジン−５’−エライジン酸エステル（ＣＰ−４２００）等を挙げることができる。本発明の多分岐化合物に用いられる核酸代謝拮抗剤は、これらの化合物に限定されるものではないが、適用する好ましい化合物として挙げることができる。 A known compound may be used as the nucleic acid antimetabolite. For example, cytarabine (gecitabine), gemcitabine (azacitidine), decitabine (decitabine), neraravine (nerarabine), 2'-methylidene-2'-deoxycytidine (DMC) having a structure represented by the following formula (19): Toloxacitabine, 3′-ethynylcytidine, 2′-cyano-2′-deoxy-1-β-D-arabinofuranosylcytosine (CNDAC), 2′-deoxy-5,6-dihydro- 5-azacytidine (DHAC), 5′-fluoro-2′-deoxycytidine (NSC-48006), 4′-thio-β-D-arabinofuranosylcytosine (OSI-7836), Claddoli Cladribine, Clofarabine or Fludarabine, Cytarabine-5′-elaidate (CP-4055), Gemcitabine-5′-elaidate (CP-4126), Azacytidine-5′-elaidic acid Esters (CP-4200) and the like can be mentioned. The nucleic acid antimetabolite used in the hyperbranched compound of the present invention is not limited to these compounds, but can be mentioned as preferred compounds to be applied.

本発明における核酸代謝拮抗剤は、シチジン系代謝拮抗剤を用いることが好ましく、核酸塩基部分が下記式（１４）で示されるシチジン塩基であり、それに結合している基（Ｒｆ）が下記式（１５）の置換基群から選択されるいずれか１種以上の組み合せである核酸代謝拮抗剤であることが特に好ましい。ここで、Ｒ_２０は水酸基又は脂肪酸エステルのアシル基で表される化合物である。As the nucleic acid antimetabolite in the present invention, it is preferable to use a cytidine antimetabolite. The nucleobase portion is a cytidine base represented by the following formula (14), and the group (Rf) bonded thereto has the following formula (Rf). Particularly preferred is a nucleic acid antimetabolite which is a combination of at least one selected from the group of substituents of 15). Here, R ₂₀ is a compound represented by a hydroxyl group or an acyl group of a fatty acid ester.

［式中、−Ｒｆは、式（１５）：

の置換基群より選ばれる基を示し、Ｒ_２０は水素原子又は脂肪酸エステルのアシル基を示す。］。一般式（１５）のＲ_２０における脂肪酸エステルのアシル基は、前述と同義である。

[Wherein, -Rf is represented by the formula (15):

And R ₂₀ represents a hydrogen atom or an acyl group of a fatty acid ester. ]. The acyl group of the fatty acid ester represented by R ₂₀ in formula (15) has the same meaning as described above.

これらのシチジン系代謝拮抗剤は、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）及びその脂肪酸エステル誘導体、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）及びその脂肪酸エステル誘導体、並びに３’−エチニルシチジン（Ｅｔｈｙｎｙｌｃｙｔｉｄｉｎｅ）及びその脂肪酸エステル誘導体である。脂肪酸エステル誘導体として、シタラビン−５’−エライジン酸エステル（ＣＰ−４０５５）、ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル（ＣＰ−４１２６）等である。 These cytidine antimetabolites are gemcitabine and its fatty acid ester derivatives, cytarabine and its fatty acid ester derivatives, and 3'-ethynylcytidine and its fatty acid ester derivatives. Fatty acid ester derivatives include cytarabine-5'-elaidate (CP-4055), gemcitabine-5'-elaidate (CP-4126), and the like.

一般式（１）において、前記Ｒ_１に係る核酸代謝拮抗剤が結合するコハク酸モノアミドユニットは本発明において必須の構成である。したがって、該Ｒ_１基の置換基結合数であるｎは１〜２００の整数である。該Ｒ_１基を多く具備することにより、多分岐担体１分子当たりの核酸代謝拮抗剤の含量を高めることができる。一方、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を医薬品として用いることを踏まえ、水溶性や薬物動態特性の最適化を考慮すると、該Ｒ_１基の置換基結合数であるｎは２〜１００であることが好ましい。特に好ましくは、ｎは５〜５０である。In the general formula (1), succinic acid monoamide units nucleic acid metabolism antagonists according to the R ₁ is attached is essential in this invention. Therefore, n, which is the number of substituents bonded to the R ₁ group, is an integer of 1 to 200. By providing a large number of the R ₁ groups, the content of the nucleic acid antimetabolite per molecule of the hyperbranched carrier can be increased. On the other hand, in consideration of optimizing water solubility and pharmacokinetic properties based on the use of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention as a drug, n, which is the number of substituent bonds of the R ₁ group, is 2 to 100. It is preferable that Particularly preferably, n is from 5 to 50.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基が結合している。一般式（１）におけるＲ_２は、ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基である。該ポリエチレングリコールセグメントは、エチレンオキシ基；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）単位の繰り返し構造を有するセグメントである。好ましくはエチレンオキシ基単位重合度が５〜１０，０００ユニット、より好ましくは重合度が５〜２，５００ユニットであり、特に好ましくは１０〜１，０００ユニットであり、殊更好ましくは２０〜５００ユニットのポリエチレングリコール鎖を含むセグメント構造である。
すなわち該ポリエチレングリコールセグメントとは、ポリエチレングリコール相当の分子量として０．２キロダルトン以上で５００キロダルトン以下のセグメントであることが好ましく、より好ましくは分子量として０．２キロダルトン以上で１５０キロダルトン以下の構造部分であり、特に好ましくは分子量として０．５キロダルトン以上で５０キロダルトン以下である。分子量が１キロダルトン以上で２０キロダルトン以下のポリエチレングリコールセグメントであることが、殊更好ましい。
なお、本発明で用いるポリエチレングリコールセグメントの分子量とは、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を調製する際において、用いるポリエチレングリコールセグメント構造化合物の、ポリエチレングリコール標準品を基準としたＧＰＣ法により測定されるピークトップ分子量により求められる平均分子量を採用する。In the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention, a substituent containing a polyethylene glycol segment is bound. R ₂ in the general formula (1) is a substituent containing a polyethylene glycol segment. The polyethylene glycol segment is a segment having a repeating structure of an ethyleneoxy group; (CH ₂ CH ₂ O) unit. Preferably, the degree of polymerization of the ethyleneoxy group unit is 5 to 10,000 units, more preferably, the degree of polymerization is 5 to 2,500 units, particularly preferably 10 to 1,000 units, and particularly preferably 20 to 500 units. Is a segment structure containing a polyethylene glycol chain.
That is, the polyethylene glycol segment is preferably a segment having a molecular weight equivalent to polyethylene glycol of not less than 0.2 kDa and not more than 500 kDa, more preferably not less than 0.2 kDa and not more than 150 kDa. It is a structural part, and particularly preferably has a molecular weight of 0.5 kDa or more and 50 kDa or less. It is particularly preferred that the polyethylene glycol segment has a molecular weight of 1 kDa or more and 20 kDa or less.
The molecular weight of the polyethylene glycol segment used in the present invention refers to the polyethylene glycol segment structure compound used in preparing the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention, by a GPC method based on a polyethylene glycol standard product. The average molecular weight determined from the measured peak top molecular weight is adopted.

該ポリエチレングリコールセグメントの末端基は、一方が前記多分岐高分子担体との結合側であり、他方は本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の外殻側である。
前記多分岐高分子担体との結合側の末端基は特に限定されるものではないが、エチレンオキシ基；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）単位の酸素原子が末端基となることが好ましい。該Ｒ_２に係るポリエチレングリコールセグメントを含む置換基において、前記多分岐高分子担体の末端反応性官能基との結合基は、特に限定されるものではなく、ポリエチレングリコールセグメントの該末端基及び前記多分岐高分子担体の末端反応性官能基に対して結合可能な官能基を有した、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）アルキレン基であることが好ましい。One of the terminal groups of the polyethylene glycol segment is on the bonding side with the multibranched polymer carrier, and the other is on the outer shell side of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention.
The terminal group on the bonding side with the hyperbranched polymer carrier is not particularly limited, but it is preferable that an oxygen atom of an ethyleneoxy group; (CH ₂ CH ₂ O) unit be a terminal group. In substituent containing a polyethylene glycol segment according to said R _2, bonding groups and terminal reactive functional group of the multi-branched polymer carrier is not limited in particular, said distal end group of polyethylene glycol segments and the multi It is preferable that it is a C1-C8 alkylene group having a functional group capable of binding to the terminal reactive functional group of the branched polymer carrier and optionally having a substituent.

一方、該ポリエチレングリコールセグメントの外殻側の末端基は、特に限定されるものではなく、水素原子、水酸基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルコキシ基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）のアラルキルオキシ基等を用いることができる。 On the other hand, the terminal group on the outer shell side of the polyethylene glycol segment is not particularly limited, and may be a hydrogen atom, a hydroxyl group, an alkoxy group having a carbon number (C1 to C8) which may have a substituent, or a substituent. And an aralkyloxy group having a carbon number (C7 to C20) which may have the following.

該末端基における置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルコキシ基としては、直鎖、分岐鎖又は環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルコキシ基が挙げられる。例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、２−メチルブトキシ基、ネオペンチルオキシ基、１−エチルプロポキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、４−メチルペンチルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、２−メチルペンチルオキシ基、１−メチルペンチルオキシ基、３，３−ジメチルブトキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、１，１−ジメチルブトキシ基、１，２−ジメチルブトキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、２−エチルブトキシ基、シクロプロポキシ基、シクロペンチルオキシ基又はシクロヘキシルオキシ基等が挙げられる。好ましくは炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルコキシ基であり、例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｓ−ブトキシ基又はｔ−ブトキシ基等であり、特に好ましくはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基又はイソプロポキシ基である。
有していても良い置換基としては、水酸基、アミノ基、ホルミル基、カルボキシ基等が挙げられる。Examples of the alkoxy group having a carbon number (C1 to C8) which may have a substituent in the terminal group include a linear, branched or cyclic alkoxy group having a carbon number (C1 to C8). For example, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, t-butoxy, n-pentyloxy, isopentyloxy, 2-methylbutoxy, neopentyloxy Group, 1-ethylpropoxy group, n-hexyloxy group, 4-methylpentyloxy group, 3-methylpentyloxy group, 2-methylpentyloxy group, 1-methylpentyloxy group, 3,3-dimethylbutoxy group, 2,2-dimethylbutoxy group, 1,1-dimethylbutoxy group, 1,2-dimethylbutoxy group, 1,3-dimethylbutoxy group, 2,3-dimethylbutoxy group, 2-ethylbutoxy group, cyclopropoxy group, Examples include a cyclopentyloxy group or a cyclohexyloxy group. Preferably, it is an alkoxy group having carbon number (C1 to C4), for example, a methoxy group, an ethoxy group, an n-propoxy group, an isopropoxy group, an n-butoxy group, a s-butoxy group or a t-butoxy group, Particularly preferred are a methoxy group, an ethoxy group, an n-propoxy group and an isopropoxy group.
Examples of the substituent that may be present include a hydroxyl group, an amino group, a formyl group, and a carboxy group.

該末端基における置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）のアラルキルオキシ基としては、いずれか１カ所の水素原子がアリール基で置換されている直鎖又は分岐鎖アルキル基である。例えば、ベンジルオキシ基、２−フェニルエチルオキシ基、４−フェニルブチルオキシ基、３−フェニルブチルオキシ基、５−フェニルペンチルオキシ基、６−フェニルへキシルオキシ基、８−フェニルオクチルオキシ基等が挙げられる。好ましくはベンジルオキシ基、４−フェニルブチルオキシ基、８−フェニルオクチルオキシ基である。
有していても良い置換基としては、水酸基、アミノ基、ホルミル基、カルボキシ基等が挙げられる。The aralkyloxy group having carbon atoms (C7 to C20) which may have a substituent in the terminal group is a straight-chain or branched-chain alkyl group in which one hydrogen atom is substituted with an aryl group. is there. Examples include a benzyloxy group, a 2-phenylethyloxy group, a 4-phenylbutyloxy group, a 3-phenylbutyloxy group, a 5-phenylpentyloxy group, a 6-phenylhexyloxy group, an 8-phenyloctyloxy group, and the like. Can be Preferred are a benzyloxy group, a 4-phenylbutyloxy group and an 8-phenyloctyloxy group.
Examples of the substituent that may be present include a hydroxyl group, an amino group, a formyl group, and a carboxy group.

一般式（１）における前記Ｒ_２は、一般式（８）

［式中、Ｒ_８は水素原子又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、ｋは５〜２，５００の整数であり、Ｘ_１は末端官能基Ｆとの結合基を示す。］を用いることが好ましい。
すなわち、エチレンオキシ基；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）単位の繰り返し構造によるエチレンオキシ基単位重合度が５〜２，５００ユニットのポリエチレングリコールセグメントであり、ポリエチレングリコール相当の平均分子量として０．２キロダルトン〜１５０キロダルトンのセグメント部であることが好ましい。より好ましくは重合度が１０〜１，０００ユニットであり、平均分子量として０．５キロダルトン〜５０キロダルトンであり、更に好ましくは重合度が２０〜５００ユニットで、平均分子量として１キロダルトン〜２０キロダルトンであり、殊更好ましくは重合度が２０〜３００ユニットで、平均分子量として１キロダルトン〜１２キロダルトンのポリエチレングリコール鎖を含むセグメント構造である。The R ₂ in the general formula (1) is represented by the general formula (8)

[In the formula, R ₈ is a hydrogen atom or a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C8) which may have a substituent, and k is 5 to 2,500. X ₁ represents a bonding group to the terminal functional group F. ] Is preferably used.
That is, an ethylene _group, ethylene group units polymerization degree of (CH 2 _CH 2 O) repeating structural units are polyethylene glycol segments 5～2,500 unit 0.2 kilodalton mean molecular weight of the polyethylene glycol equivalent It is preferred that the segment be ~ 150 kilodaltons. More preferably, the degree of polymerization is 10 to 1,000 units, and the average molecular weight is 0.5 to 50 kilodaltons. Still more preferably, the degree of polymerization is 20 to 500 units, and the average molecular weight is 1 to 200 kilodaltons. It is a kilodalton, particularly preferably a segment structure having a degree of polymerization of 20 to 300 units and a polyethylene glycol chain having an average molecular weight of 1 to 12 kilodalton.

前記Ｒ_８における置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基は、例えば、直鎖状アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−へキシル基、ｎ−デシル基等を挙げることができる。分岐鎖状アルキル基としては、例えばイソプロピル基、ｔ−ブチル基、１−メチル−プロピル基、２−メチル−プロピル基、２，２−ジメチルプロピル基等が挙げられる。環状アルキル基としては、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、アダマンチル基等が挙げられる。
有していても良い置換基としては、水酸基、アミノ基、ホルミル基、カルボキシ基等が挙げられる。Examples of the linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to ₈ carbon atoms (C1 to C8) which may have a substituent in R ₈ include, for example, a methyl group, an ethyl group as a linear alkyl group. Group, n-propyl group, n-butyl group, n-hexyl group, n-decyl group and the like. Examples of the branched alkyl group include an isopropyl group, a t-butyl group, a 1-methyl-propyl group, a 2-methyl-propyl group, and a 2,2-dimethylpropyl group. Examples of the cyclic alkyl group include a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, an adamantyl group and the like.
Examples of the substituent that may be present include a hydroxyl group, an amino group, a formyl group, and a carboxy group.

前記一般式（８）におけるＸ_１は、前記Ｒ_２に係るポリエチレングリコールセグメントを含む置換基と多分岐高分子担体の末端反応性官能基［Ｆ］を結合させる結合基である。該結合基としては、該ポリエチレングリコールセグメント末端基の酸素原子と、末端反応性官能基［Ｆ］に対して、それぞれ結合可能な官能基を両末端に有する結合基であれば、特に限定されるものではない。X ₁ in the general formula (8) is a bonding group that bonds the substituent containing the polyethylene glycol segment relating to R ₂ to the terminal reactive functional group [F] of the multibranched polymer carrier. The binding group is not particularly limited as long as it has a functional group capable of binding to both the oxygen atom of the terminal group of the polyethylene glycol segment and the terminal reactive functional group [F] at both ends. Not something.

該Ｘ_１に係る結合基は、一方の末端基が、該ポリエチレングリコールセグメントの末端酸素原子とエーテル結合様式、エステル結合、ウレタン結合又はカーボネート結合する結合性官能基を有し、もう一方の末端基が、末端反応性官能基［Ｆ］とエステル結合、アミド結合、チオエステル結合、ウレア結合又はウレタン結合することができる結合性官能基を有する、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキレン基である。The bonding group according to X ₁ has one terminal group having a bonding functional group capable of forming an ether bond, an ester bond, a urethane bond or a carbonate bond with a terminal oxygen atom of the polyethylene glycol segment, and the other terminal group. Has a bonding functional group capable of forming an ester bond, an amide bond, a thioester bond, a urea bond, or a urethane bond with the terminal reactive functional group [F], and may have a substituent-containing carbon number (C1 to C1). It is an alkylene group of C8).

該Ｘ_１に係る結合基としては、ポリエチレングリコールセグメントとエーテル結合し、末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合、エステル結合又はチオエステル結合する結合基として、例えば、−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｏ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｓ−（ｘは１〜８の整数を示す）等が挙げられる。
ポリエチレングリコールセグメントとエステル結合し、末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合、エステル結合又はチオエステル結合する結合基として、例えば、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｏ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｓ−（ｘは１〜８の整数を示す）等が挙げられる。
ポリエチレングリコールセグメントとウレタン結合し、末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合、エステル結合又はチオエステル結合する結合基として、例えば、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｏ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｓ−（ｘは１〜８の整数を示す）等が挙げられる。
また、ポリエチレングリコールセグメントとカーボネート結合し、末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合、エステル結合又はチオエステル結合する結合基として、例えば、−ＣＯＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｏ−（ｘは１〜８の整数を示す）、−ＣＯＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｓ−（ｘは１〜８の整数を示す）等を挙げることができる。
該Ｘ_１として、好ましくはポリエチレングリコールセグメントとエーテル結合し、末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合する結合基であり、−（ＣＨ_２）_ｘ−ＮＨ−（ｘは１〜８の整数を示す）である。The bonding group in accordance with the X _1, and polyethylene glycol segment and an ether bond, terminal reactive functional group [F] and an amide bond, as a bonding group to an ester bond or thioester bond, for example, - (CH ₂₎ _x -NH - (x is an integer of _{_{1~8), - (CH 2)}} x -O- (x is an integer of _{_{1~8), - (CH 2)}} x -S- (x is 1 to 8 And an integer).
As a linking group which forms an ester bond with the polyethylene glycol segment and forms an amide bond, an ester bond or a thioester bond with the terminal reactive functional group [F], for example, -CO- (CH ₂ ) _x -NH- (where x is 1 to 8) an _{_{integer), - CO- (CH 2)}} x -O- (x is an integer of _{_{1~8), - CO- (CH 2}} ) x -S- (x is an integer of 1-8) And the like.
Polyethylene glycol segment and urethane bond, terminal reactive functional group [F] and an amide bond, as a bonding group to an ester bond or thioester bond, _{_{e.g., -CONH- (CH 2) x -NH-}} (x is 1 to 8 an _{_{integer), - CONH- (CH 2)}} x -O- (x is an integer of _{_{1~8), - CONH- (CH 2}} ) x -S- (x is an integer of 1-8) And the like.
Furthermore, polyethylene glycol segment and to carbonate linkages, terminal reactive functional group [F] and an amide bond, as a bonding group to an ester bond or thioester bond, _{_{e.g., -COO- (CH 2) x -NH-}} (x is 1 to 8 represents an integer _{_{of), - COO- (CH 2)}} x -O- (x is an integer of 1-8), - COO- a _(CH ₂₎ x -S- _(x is an integer from 1 to 8 Shown).
X ₁ is preferably a bonding group that is ether-bonded to a polyethylene glycol segment and amide-bonded to a terminal reactive functional group [F], and — (CH ₂ ) _x —NH— (x is an integer of 1 to 8). Shown).

また、該Ｘ_１に係る結合基としてアミノ酸誘導体を用いても良い。アミノ酸誘導体を結合基とする場合の結合基の使用態様としては、アミノ酸誘導体のＮ末アミノ基が、前記側鎖カルボキシ基とアミド結合し、Ｃ末カルボキシ基が、該ポリエチレングリコールセグメントの末端酸素原子とエステル結合する態様である。
該Ｘ_１に係る結合基としてアミノ酸誘導体を用いる場合、用いられるアミノ酸は、天然アミノ酸又は非天然アミノ酸であってよく、Ｌ体、Ｄ体のいずれでも特に限定されずに用いることができる。例えば、グリシン、β−アラニン、アラニン、ロイシン、フェニルアラニン等の炭化水素系アミノ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等の酸性アミノ酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン等の塩基性アミノ酸等を用いることができる。It is also possible to use an amino acid derivative as binding group according to the X _1. When the amino acid derivative is used as the bonding group, the N-terminal amino group of the amino acid derivative is amide bonded to the side chain carboxy group, and the C-terminal carboxy group is a terminal oxygen atom of the polyethylene glycol segment. And an ester bond.
When using an amino acid derivative as binding group according to the X _1, amino acids used may be natural amino acids or unnatural amino acids, L body, can be used without being limited particularly either D-form. For example, hydrocarbon-based amino acids such as glycine, β-alanine, alanine, leucine, and phenylalanine; acidic amino acids such as aspartic acid and glutamic acid; and basic amino acids such as lysine, arginine, and histidine can be used.

また、該Ｘ_１は「結合」であってよい。「結合」とは、特に結合基を介せず、前記多分岐高分子担体の末端反応性官能基と該ポリエチレングリコールセグメントの末端酸素原子が、直接エステル結合している態様を指す。Further, X ₁ may be a “bond”. The term “bond” refers to an embodiment in which the terminal reactive functional group of the multi-branched polymer carrier and the terminal oxygen atom of the polyethylene glycol segment are directly ester-bonded, not via a bonding group.

一般式（１）において、前記Ｒ_２で表されるポリエチレングリコールセグメントを含む置換基は、多分岐高分子担体に複数個存在する末端反応性官能基に対し０〜１９９ユニットが結合している。すなわち、該Ｒ_２基の置換基結合数であるｏは０〜１９９の整数である。
本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は医薬品として使用される。このため、ポリエチレングリコールセグメントを具備させることにより、水溶性を付与できることから好ましい。本発明において、多分岐高分子担体にポリエチレングリコールセグメントを具備することが好ましい。該ポリエチレングリコールセグメントは、該Ｒ_２として具備しても良く、又は該Ｒ_１の核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドに置換基として結合させていても良い。若しくは、Ｒ_１とＲ_２の両方にポリエチレングリコールセグメントを具備させていても良い。
本発明において、該Ｒ_１にポリエチレングリコールセグメントを有さない場合、該Ｒ_２に係るポリエチレングリコールセグメントを含む置換基は必須の置換基であり、該Ｒ_２基の置換基結合数であるｏは１〜１９９の整数である。該Ｒ_２基でポリエチレングリコールセグメントを具備させる場合、複数ユニットを結合させることが好ましい。したがって、該Ｒ_２基の置換基結合数であるｏは、より好ましくは２〜１００の整数であり、特に好ましくは２〜５０である。In the general formula (1), a substituent containing a polyethylene glycol segment represented by R ₂ is 0 to 199 units are attached to terminal reactive functional groups plurality present in the multi-branched polymer carrier. That, o is a substituent bonding number of the _{R 2} groups is an integer of 0 to 199.
The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention is used as a pharmaceutical. For this reason, it is preferable to provide a polyethylene glycol segment since water solubility can be imparted. In the present invention, the hyperbranched polymer carrier preferably has a polyethylene glycol segment. The polyethylene glycol segment, the may be provided as R _2, or in nucleic acid metabolism antagonist binding acid monoamide of the R ₁ may be bonded as a substituent. Alternatively, both R ₁ and R ₂ may have a polyethylene glycol segment.
In the present invention, when the R ₁ does not have a polyethylene glycol segment, the substituent containing the polyethylene glycol segment according to the R ₂ is an essential substituent, and the number o of substituents of the R ₂ group is o. It is an integer of 1 to 199. Case of including a polyethylene glycol segment with said R ₂ groups, it is preferred to attach a plurality of units. Therefore, o is a substituent bonding number of the _{R 2} groups, more preferably an integer of 2 to 100, particularly preferably from 2 to 50.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、多分岐高分子担体の末端反応性官能基に、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基とポリエチレングリコールセグメントを含む置換基が結合し、更に、任意にコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基が結合した化合物であっても良い。
すなわち、一般式（１）において、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットが結合した置換基（Ｒ_１）と、ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基（Ｒ_２）が結合し、更に、コハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基（Ｒ_３）を具備していても良い。
なお、Ｒ_３に係るコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基は、Ｒ_１に係る核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基から、該核酸代謝拮抗剤が解離した残基である。The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention has a substituent containing a succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound and a substituent containing a polyethylene glycol segment attached to a terminal reactive functional group of the hyperbranched polymer carrier. It may be a compound that binds and optionally further binds a substituent containing a succinic monoamide derivative residue and / or a succinimide residue.
That is, in the general formula (1), a substituent (R ₁ ) bonded to a succinic acid monoamide unit bonded to a nucleic acid antimetabolite is bonded to a substituent (R ₂ ) containing a polyethylene glycol segment, and further, succinic acid It may have a substituent (R ₃ ) containing a monoamide derivative residue and / or a succinimide residue.
Incidentally, succinic acid monoamide derivative residue and / or succinimide residues according to R _3, from the substituents comprising succinic acid monoamide units nucleic acid metabolism antagonists according to R ₁ is bonded, is the nucleic acid metabolism antagonist dissociation Is the residue

前記Ｒ_３は、好ましくは一般式（２０）、（２１）及び（２２）

［式中、Ｘは前記末端官能基Ｆとの結合基であり、Ｙは酸素原子又はＮ−Ｒ_４であり、Ｒ_９は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１０）ＣＯＮＨ（Ｒ_１１）を示し、Ｒ_１０、Ｒ_１１は同一でも異なっていてもよく、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基を示し、Ｘ、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６及びＲ_７は、一般式（１７）及び（１８）に記載した置換基と同義である。］からなる置換基群から選ばれる１種以上の基である。R ₃ is preferably a group represented by the general formulas (20), (21) and (22).

[In the formula, X is a bonding group to the terminal functional group F, Y is an oxygen atom or N—R ₄ , and R ₉ represents a hydroxyl group and / or —N (R ₁₀ ) CONH (R ₁₁ ). , R ₁₀ and R ₁₁ may be the same or different, and represent a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C8) which may be substituted with a tertiary amino group; , R ₄ , R ₅ , R ₆ and R ₇ have the same meanings as the substituents described in formulas (17) and (18). And at least one group selected from the substituent group consisting of

該Ｒ_１０及びＲ_１１における三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基とは、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、ネオペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられ、好ましくはイソプロピル基、シクロへキシル基が挙げられる。
該三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基としては、例えば、２−ジメチルアミノエチル基、３−ジメチルアミノプロピル基、５−ジメチルアミノペンチル基、６−ジメチルアミノヘキシル基等が挙げられる。
該Ｒ_１０及びＲ_１１として好ましくは、エチル基、イソプロピル基、シクロへキシル基、３−ジメチルアミノプロピル基が挙げられる。Examples of the linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 8 carbon atoms (C1 to C8) which may be substituted with a tertiary amino group for R ₁₀ and R ₁₁ include, for example, methyl group, ethyl group, n group -Propyl group, isopropyl group, isobutyl group, sec-butyl group, t-butyl group, 1-methylbutyl group, 2-methylbutyl group, neopentyl group, cyclohexyl group and the like, preferably isopropyl group and cyclohexyl group. No.
Examples of the linear, branched, or cyclic alkyl group having 1 to 8 carbon atoms (C1 to C8) which may be substituted with the tertiary amino group include a 2-dimethylaminoethyl group and a 3-dimethylaminopropyl group. , 5-dimethylaminopentyl group, 6-dimethylaminohexyl group and the like.
Preferably, R ₁₀ and R ₁₁ include an ethyl group, an isopropyl group, a cyclohexyl group, and a 3-dimethylaminopropyl group.

前記Ｒ_９が水酸基である場合、カルボン酸の態様を示す。また、そのカルボン酸の任意の塩態様であっても良い。
前記Ｒ_９は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１０）ＣＯＮＨ（Ｒ_１１）であるが、水酸基のみである場合、水酸基及び−Ｎ（Ｒ_１０）ＣＯＮＨ（Ｒ_１１）が共存する場合、若しくは−Ｎ（Ｒ_１０）ＣＯＮＨ（Ｒ_１１）のみである場合の態様を取り得る。水酸基と−Ｎ（Ｒ_１０）ＣＯＮＨ（Ｒ_１１）の存在比率は任意に設定されて良い。When R ₉ is a hydroxyl group, it represents an embodiment of a carboxylic acid. Further, any salt form of the carboxylic acid may be used.
R ₉ is a hydroxyl group and / or —N (R ₁₀ ) CONH (R ₁₁ ), but when it is only a hydroxyl group, when a hydroxyl group and —N (R ₁₀ ) CONH (R ₁₁ ) coexist, or —N An embodiment in which only (R ₁₀ ) CONH (R ₁₁ ) is used can be taken. Existence ratio of hydroxyl group and _{_{-N (R 10) CONH (R}} 11) may be arbitrarily set.

一般式（１）において、前記Ｒ_３で表されるコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基は、前記Ｒ_１に係る核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットから核酸代謝拮抗剤が解離した残基であるため、任意に存在して良い基である。該Ｒ_３基の置換基結合数であるｐは０〜１９９の整数である。
本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、水溶液中において経時的に核酸代謝拮抗剤を解離する物性を有する。したがって、Ｒ_１に係る置換基は核酸代謝拮抗剤を解離して、Ｒ_３に係る置換基に変換されるため、Ｒ_１とＲ_３の結合数は経時変化を伴うものである。該Ｒ_３に係る置換基は、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の製造中や医薬品用製剤の製造中、並びに医薬製剤保存中や医薬品として使用時において、核酸代謝拮抗剤の解離に伴い、随時、生成し得る。該Ｒ_３基の置換基結合数であるｐは０〜８０の整数であることが好ましく、０〜５０であることがより好ましい。In the general formula (1), the substituent containing a succinic monoamide derivative residue and / or a succinimide residue represented by R ₃ is a succinic monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite according to R ₁ is bound. Is a residue that has been dissociated from a nucleic acid antimetabolite, and thus can be arbitrarily present. P, which is the number of substituents bonded to the R ₃ group, is an integer of 0 to 199.
The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention has a property of dissociating the nucleic acid antimetabolite over time in an aqueous solution. Therefore, the substituent relating to R ₁ dissociates the nucleic acid antimetabolite and is converted into a substituent relating to R ₃ , so that the number of bonds between R ₁ and R ₃ changes with time. The substituent for R ₃ is responsible for dissociation of the nucleic acid antimetabolite during the production of the multibranched compound binding to an antimetabolite of the present invention, during the production of a pharmaceutical preparation, and during the storage of a pharmaceutical preparation or when used as a pharmaceutical. Accordingly, it can be generated at any time. P, which is the number of substituents bonded to the R ₃ group, is preferably an integer of 0 to 80, and more preferably 0 to 50.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、前記核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基、前記ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基、並びに前記コハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基が結合していない末端官能基を含んでいても良い。その場合、これらの末端官能基は、一般式（１）における［Ｆ］で表されるアミノ基、水酸基、カルボキシ基、メルカプト基からなる群から選択される１種以上の末端官能基である。 The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention includes a substituent containing the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite is bound, a substituent containing the polyethylene glycol segment, and a residue of the succinic acid monoamide derivative and / or A terminal functional group to which a substituent containing a succinimide residue is not bonded may be included. In this case, these terminal functional groups are one or more terminal functional groups selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group, and a mercapto group represented by [F] in the general formula (1).

また、前記末端官能基が、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基を有する保護基で修飾されたアミノ基、水酸基、カルボキシ基、メルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基であっても良い。すなわち、一般式（１）における［Ｆ］は、末端反応性官能基のままであっても良く、末端反応性官能基の保護基修飾体であっても良く、これらが混在した基であっても良い。
前記保護基における前記炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、シクロペンチル基、ｎ−へキシル基、シクロへキシル基等が挙げられる。
前記保護基における有していても良い置換基とは、水酸基、アミノ基、ハロゲン原子、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルキルカルボニルアルコキシ基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルキルカルボニルアミド基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルキルカルボニルアルキルアミド基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキルアリール基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルコキシ基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルキルアミノ基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアシルアミド基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルコキシカルボニルアミノ基等を挙げることができる。水溶性を有し且つ正電荷や負電荷を具備しない炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルコキシ基を置換基として有する保護基であることが好ましい。In addition, the terminal functional group is selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group, and a mercapto group modified with a protective group having an alkyl group having carbon number (C1 to C6) which may have a substituent. It may be one or more functional groups. That is, [F] in the general formula (1) may be a terminal-reactive functional group or may be a modified protective group of the terminal-reactive functional group. Is also good.
Examples of the alkyl group having the carbon number (C1 to C6) in the protective group include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, an n-butyl group, an isobutyl group, a sec-butyl group, a t-butyl group, Examples thereof include an n-pentyl group, a cyclopentyl group, an n-hexyl group, and a cyclohexyl group.
The substituents that the protective group may have include a hydroxyl group, an amino group, a halogen atom, an alkylcarbonylalkoxy group having carbon atoms (C1 to C4), an alkylcarbonylamide group having carbon atoms (C1 to C4), and carbon atoms. A number (C1 to C4) alkylcarbonylalkylamide group, a carbon number (C1 to C8) alkylaryl group, a carbon number (C1 to C4) alkoxy group, a carbon number (C1 to C4) alkylamino group, a carbon number An acylamide group having (C1 to C4) and an alkoxycarbonylamino group having (C1 to C4) carbon atoms can be exemplified. It is preferable that the protective group is a protective group having a water-soluble alkoxy group having a carbon number (C1 to C4) having no positive or negative charge as a substituent.

前記保護基修飾体としては、末端反応性官能基であるアミノ基、水酸基、カルボキシ基又はメルカプト基に対して結合可能な様式であれば特に限定されることなく使用することができる。すなわち、対応する末端反応性官能基に応じて、アミド結合、アルコキシカルボニルアミド結合、エステル結合、カーボネート結合、チオエステル結合、アルコキシチオカルボニル結合等を適宜選択して用いることができる。 The modified protective group can be used without any particular limitation as long as it can be bonded to an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group or a mercapto group which is a terminal reactive functional group. That is, an amide bond, an alkoxycarbonylamide bond, an ester bond, a carbonate bond, a thioester bond, an alkoxythiocarbonyl bond, or the like can be appropriately selected and used depending on the corresponding terminal reactive functional group.

前記末端反応性官能基の保護基修飾体の好ましい例としては、末端官能基がアミノ基、水酸基、メルカプト基の場合は、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、トリフルオロアセチル基、トリクロロアセチル基、メトキシカルボニル基、トリクロロメトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等が挙げられる。
末端官能基がカルボキシ基の場合、エチルアミノ基、メトキシメチルアミノ基、メトキシエチルアミノ基、メトキシエトキシエチルアミノ基等のアミド結合体、若しくはエトキシ基、メトキシメトキシ基、メトキシエトキシ基、メトキシエトキシメトキシ基等のエステル結合体が挙げられる。Preferred examples of the protective group modification of the terminal reactive functional group include, when the terminal functional group is an amino group, a hydroxyl group, or a mercapto group, an acetyl group, a propionyl group, a butyryl group, a trifluoroacetyl group, a trichloroacetyl group, Examples include a methoxycarbonyl group, a trichloromethoxycarbonyl group, a t-butoxycarbonyl group, a benzyloxycarbonyl group and the like.
When the terminal functional group is a carboxy group, an amide bond such as an ethylamino group, a methoxymethylamino group, a methoxyethylamino group, a methoxyethoxyethylamino group, or an ethoxy group, a methoxymethoxy group, a methoxyethoxy group, or a methoxyethoxymethoxy group And the like.

一般式（１）の末端官能基［Ｆ］の数を示すｍは０〜１９９の整数である。該ｍは、多分岐高分子担体において、前記Ｒ_１〜Ｒ_３が結合した残部であり、特にその官能基数が規定されるべき理由はなく、適宜設定されて良い。好ましくは、ｍは０〜１５０であり、０〜１００がより好ましい。
当該末端反応性官能基の保護基修飾体は、任意に存在して良く０基以上であり１９９基以下で存在する。当該保護基修飾体は、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の表面電荷等を制御することができ、水溶性や自己会合性等の物性制御をすることができることから、具備することが好ましい。このため、当該保護基修飾体が４基以上であり１５０基以下で存在することが好ましく、６基以上であり１００基以下で存在することがより好ましい。M indicating the number of terminal functional groups [F] in the general formula (1) is an integer of 0 to 199. M is the remainder of the above-mentioned R _{1 to} R ₃ in the multi-branched polymer carrier, and there is no particular reason why the number of functional groups should be defined, and may be appropriately set. Preferably, m is 0 to 150, more preferably 0 to 100.
The modified protective group of the terminal reactive functional group may be arbitrarily present and may be present in an amount of 0 or more and 199 or less. The modified protective group can be provided because it can control the surface charge and the like of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention and can control physical properties such as water solubility and self-association. preferable. Therefore, the number of the modified protective group is preferably 4 or more and 150 or less, more preferably 6 or more and 100 or less.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、核酸代謝拮抗剤の質量含有率やポリエチレングリコールセグメントの質量含量が、薬効発現及び副作用発現に影響を及ぼすことがある。そこで、これらの部分構造の質量含有率の算出方法について説明する。
核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、該多分岐化合物の構成部分の各構成分子量を合算した計算値を当該「核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量」として採用する。すなわち、（１）多分岐高分子担体の分子量、（２）ポリエチレングリコールセグメントの分子量にその結合数を乗じたポリエチレングリコールセグメントの総分子量、（３）核酸代謝拮抗剤の結合残基分子量にその結合数を乗じた核酸代謝拮抗剤の総分子量、（４）核酸代謝拮抗剤を結合させるためのコハク酸モノアミドユニット分子量にその結合数を乗じた該コハク酸モノアミドユニットの総分子量を合算した計算値を当該分子量とする。In the multibranched compound binding to an antimetabolite of the present invention, the mass content of an antimetabolite or the mass content of a polyethylene glycol segment may affect the onset of the efficacy and the side effects. Therefore, a method of calculating the mass content of these partial structures will be described.
As the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound, a calculated value obtained by summing the respective constituent molecular weights of the constituent parts of the hyperbranched compound is adopted as the “molecular weight of the nucleic acid antimetabolite binding hyperbranched compound”. That is, (1) the molecular weight of the hyperbranched polymer carrier, (2) the total molecular weight of the polyethylene glycol segment obtained by multiplying the molecular weight of the polyethylene glycol segment by the number of bonds, and (3) the binding residue molecular weight of the nucleic acid antimetabolite. (4) the total molecular weight of the succinic acid monoamide unit obtained by multiplying the total molecular weight of the succinic acid monoamide unit by multiplying the total molecular weight of the succinic acid monoamide unit for binding the nucleic acid antimetabolite by the number; The molecular weight is used.

当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、キロダルトン単位での精度による分子量規定が求められるものである。したがって、前記各構成部分の分析方法は、当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物のキロダルトン単位（×１０^３オーダー）での分子量測定において、十分な精度の分析方法であれば特に限定されるものではなく、様々な分析方法を適宜選択して良い。以下に、各構成部分における好ましい分析方法を挙げる。The molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound is required to be determined in terms of precision in kilodalton units. Therefore, the method of analyzing each component is not particularly limited as long as it is an analysis method with sufficient accuracy in measuring the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound in kilodalton units (× 10 ³ order). Instead, various analysis methods may be appropriately selected. Preferred analysis methods for each component will be described below.

前記（１）多分岐高分子担体の分子量は、デンドリマー、デンドロン及び超分岐ポリマーといった化学構造が明確な担体を用いる場合は、その化学構造式から算出される計算分子量を採用する。用いた担体の末端官能基を、更に化学修飾した多分岐高分子担体を用いた場合には、修飾した化合物残基の分子量を、末端官能基数及び末端官能基への化合物残基の導入率で乗じた値を加えることにより多分岐高分子担体の分子量として採用する。該導入率は^１Ｈ−ＮＭＲの積分値から算出された変換率により算出される値を用いることができる。該多分岐高分子担体が、単一の化合物残基により修飾させられる場合は、^１Ｈ−ＮＭＲの分析が簡便であり好ましく、^１Ｈ−ＮＭＲの積分値から算出された変換率を用いて算出することが好ましい。The molecular weight of the multi-branched polymer carrier (1) uses a calculated molecular weight calculated from the chemical structural formula when a carrier having a clear chemical structure such as a dendrimer, a dendron and a hyperbranched polymer is used. In the case of using a multi-branched polymer carrier in which the terminal functional group of the carrier used is further chemically modified, the molecular weight of the modified compound residue is determined by the number of terminal functional groups and the introduction ratio of the compound residue to the terminal functional group. By adding the multiplied value, the value is adopted as the molecular weight of the hyperbranched polymer carrier. As the introduction rate, a value calculated from the conversion rate calculated from the integrated value of ¹ H-NMR can be used. When the hyperbranched polymer carrier is modified with a single compound residue, ¹ H-NMR analysis is simple and preferable, and is calculated using the conversion rate calculated from the integrated value of ¹ H-NMR. Is preferred.

前記（２）ポリエチレングリコールセグメントの総分子量は、ポリエチレングリコールセグメントの分子量にその結合量を乗じた計算値である。ポリエチレングリコールセグメントの分子量は、用いるポリエチレングリコールセグメント構造化合物の、ポリエチレングリコール標準品を基準としたＧＰＣ法により測定されるピークトップ分子量により求められる平均分子量を採用する。
ポリエチレングリコールセグメントの結合量は、核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物から、ポリエチレングリコールセグメントを開裂させて、遊離するポリエチレングリコールセグメントを定量分析することにより求める方法、若しくは当該多分岐高分子単体に対しポリエチレングリコールセグメントを導入する反応において、ポリエチレングリコールセグメントの消費率から算出する方法であっても良い。(2) The total molecular weight of the polyethylene glycol segment is a calculated value obtained by multiplying the molecular weight of the polyethylene glycol segment by the binding amount. As the molecular weight of the polyethylene glycol segment, an average molecular weight of the polyethylene glycol segment structural compound to be used, which is determined by a peak top molecular weight measured by a GPC method based on a polyethylene glycol standard product, is employed.
The binding amount of the polyethylene glycol segment can be determined by cleaving the polyethylene glycol segment from the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound and quantitatively analyzing the released polyethylene glycol segment. In the reaction of introducing the glycol segment, a method of calculating from the consumption rate of the polyethylene glycol segment may be used.

前記（３）核酸代謝拮抗剤の総分子量は、核酸代謝拮抗剤の結合残基分子量にその結合数を乗じた計算値である。該核酸代謝拮抗剤の結合数は、当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を加水分解し、遊離する核酸代謝拮抗剤を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量分析することによって算出された値である。
なお、前記（４）のコハク酸モノアミドユニットの総分子量は、該コハク酸モノアミドユニットの分子量に、その結合数を乗じた計算値である。該結合基の結合数は、前述の核酸代謝拮抗剤の結合数と同じであり、その値を用いることで算出できる。(3) The total molecular weight of the nucleic acid antimetabolite is a calculated value obtained by multiplying the molecular weight of the binding residue of the nucleic acid antimetabolite by the number of bonds. The number of bonds of the nucleic acid antimetabolite is a value calculated by quantitatively analyzing the liberated nucleic acid antimetabolite by hydrolyzing the nucleic acid antimetabolite-bound hyperbranched compound by high performance liquid chromatography (HPLC). It is.
The total molecular weight of the succinic monoamide unit (4) is a calculated value obtained by multiplying the molecular weight of the succinic monoamide unit by the number of bonds. The number of bonds of the linking group is the same as the number of bonds of the antimetabolites, and can be calculated by using the value.

一方、コハク酸モノアミドユニットとして前記のコハク酸モノアミドユニットの重合体を用いる場合、前記（４）のコハク酸モノアミドユニットの総分子量は、コハク酸モノアミドユニット重合体の分子量に、その結合した数を乗じた値を採用する。
コハク酸モノアミドユニットの重合体の分子量は、重合モノマー単位の分子量にその重合数を乗じた計算値である。該重合数は、重合反応後の生成物における^１Ｈ−ＮＭＲの積分値から算出された重合数や、アミノ酸分析により算出される重合数、あるいはアスパラギン酸の側鎖カルボン酸が保護されたモノマーを用いて重合した場合、該反応の生成物に対し脱保護を行ったときに発生する除去された保護基成分を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量分析することによって算出された重合数を用いることができる。On the other hand, when the polymer of the succinic acid monoamide unit is used as the succinic acid monoamide unit, the total molecular weight of the succinic acid monoamide unit (4) is obtained by multiplying the molecular weight of the succinic acid monoamide unit polymer by the number of the bonded succinic acid monoamide units. Value is adopted.
The molecular weight of the polymer of the succinic monoamide unit is a calculated value obtained by multiplying the molecular weight of the polymerized monomer unit by the number of polymerizations. The polymerization number is the polymerization number calculated from the integrated value of ¹ H-NMR in the product after the polymerization reaction, the polymerization number calculated by amino acid analysis, or the monomer in which the side chain carboxylic acid of aspartic acid is protected. When the polymerization is carried out using a polymer, the number of polymerizations calculated by quantitatively analyzing the removed protecting group component generated when the product of the reaction is deprotected by high performance liquid chromatography (HPLC) is calculated. Can be used.

該ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率は、前述の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量に対する、前記（２）のポリエチレングリコールセグメントの総分子量の含有比率により算出することができる。すなわち、ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率は、以下の式で算出する。
ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率（％）＝（ポリエチレングリコールセグメント総分子量／核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物）×１００
前記ポリエチレングリコールセグメントの質量分子量率は、２０質量％以上９０質量％以下であり、４０質量％以上８０質量％以下であることが好ましい。より好ましくは、５０質量％以上８０質量％以下である。
ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率が２０質量％より少ない場合、骨髄抑制が強く発現する傾向がある。十分な薬効と副作用の低減を達成するために、ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率を設定することが好ましい。The mass content of the polyethylene glycol segment can be calculated by the content ratio of the total molecular weight of the polyethylene glycol segment in the above (2) to the molecular weight of the above-described multibranched compound binding to an antimetabolite. That is, the mass content of the polyethylene glycol segment is calculated by the following equation.
Mass content (%) of polyethylene glycol segment = (total molecular weight of polyethylene glycol segment / nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound) × 100
The mass molecular weight ratio of the polyethylene glycol segment is from 20% by mass to 90% by mass, and preferably from 40% by mass to 80% by mass. More preferably, the content is 50% by mass or more and 80% by mass or less.
When the mass content of the polyethylene glycol segment is less than 20% by mass, myelosuppression tends to be strongly exhibited. In order to achieve sufficient drug efficacy and reduction of side effects, it is preferable to set the mass content of the polyethylene glycol segment.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、該多分岐化合物における核酸代謝拮抗剤の質量含有率が、２質量％以上６０質量％以下であることが好ましい。
核酸代謝拮抗剤の含有率が２質量％より少ないと、核酸代謝拮抗剤の有効量を確保するために当該多分岐化合物の総投与量が多くなり、投与利便性が低下するため好ましくない。一方、核酸代謝拮抗剤の含有率が６０質量％より多い場合、骨髄抑制が強く発現する傾向がある。投与利便性を確保し、十分な薬効と副作用の低減を達成するために、核酸代謝拮抗剤の含有量を設定することが好ましい。
該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物における核酸代謝拮抗剤の質量含有率は、該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物分子量に対する、前記（３）核酸代謝拮抗剤の総分子量の含有比率により算出することができる。核酸代謝拮抗剤の含有量のより好ましい範囲は、５質量％以上で４０質量％以下である。核酸代謝拮抗剤含量が５質量％以上で２０質量％以下であることが特に好ましい。In the multibranched compound binding to an antimetabolite of the present invention, the mass content of the antimetabolite in the multibranched compound is preferably 2% by mass or more and 60% by mass or less.
If the content of the nucleic acid antimetabolite is less than 2% by mass, the total dose of the hyperbranched compound increases in order to secure an effective amount of the nucleic acid antimetabolite, and the administration convenience decreases, which is not preferable. On the other hand, when the content of the nucleic acid antimetabolite is more than 60% by mass, myelosuppression tends to be strongly exhibited. In order to ensure administration convenience and achieve sufficient drug efficacy and reduction of side effects, it is preferable to set the content of the nucleic acid antimetabolite.
The mass content of the nucleic acid antimetabolite in the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound is calculated by the content ratio of the total molecular weight of the nucleic acid antimetabolite (3) to the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound. Can be. A more preferable range of the content of the nucleic acid antimetabolite is 5% by mass or more and 40% by mass or less. It is particularly preferred that the content of the nucleic acid antimetabolite is 5% by mass or more and 20% by mass or less.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、該多分岐化合物の分子量が１０キロダルトン以上で２００キロダルトン以下であることが望ましい。より好ましくは、分子量が２０キロダルトン以上であり１６０キロダルトン以下である。該多分岐化合物の分子量は、上記の構成部分の各構成分子量を合算した計算値を当該「核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量」として採用する。すなわち、前記（１）〜（４）の各構成分子量を合算した計算値を当該分子量とする。 The multi-branched compound binding to an antimetabolite of the present invention preferably has a molecular weight of 10 to 200 kDa. More preferably, the molecular weight is not less than 20 kilodaltons and not more than 160 kilodaltons. As the molecular weight of the multi-branched compound, a calculated value obtained by summing the respective constituent molecular weights of the above-mentioned constituent parts is adopted as the “molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding multi-branched compound”. That is, the calculated value obtained by adding the constituent molecular weights of the above (1) to (4) is defined as the molecular weight.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、多分岐高分子担体の末端反応性官能基；［Ｆ］に、核酸代謝拮抗剤を放出する機能を有する核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニットを具備することを特徴とする。更に、当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、ポリエチレングリコールセグメントを具備することが好ましい。すなわち、本発明の好ましい態様は、核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニットとポリエチレングリコールセグメントの２種類の機能性置換基を含む核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物である。
本発明の実施態様は、該多分岐高分子担体に対して、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットとポリエチレングリコールセグメントの結合様式によって、その構造に基づいて以下の２タイプに分類できる。
［タイプ１］：前記核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットと前記ポリエチレングリコールセグメントが、それぞれ別の置換基として該多分岐高分子担体の末端反応性官能基に結合する実施態様。
［タイプ２］：前記核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットと前記ポリエチレングリコールセグメントが連結して一体となった置換基が該多分岐高分子担体の末端反応性官能基に結合する実施態様。該コハク酸モノアミドユニットとは、複数の該コハク酸モノアミドユニットの重合体セグメントであっても良い。
なお、前記［タイプ１］において、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットが、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットである場合（［タイプ１−１］）と、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの重合体である場合（［タイプ１−２］）を挙げることができる。The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention comprises a nucleic acid antimetabolite-binding succinic acid monoamide unit having a function of releasing a nucleic acid antimetabolite, at the terminal reactive functional group of the multibranched polymer carrier; It is characterized by having. Furthermore, the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound preferably has a polyethylene glycol segment. That is, a preferred embodiment of the present invention is a nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound containing two kinds of functional substituents, a nucleic acid antimetabolite-binding succinic acid monoamide unit and a polyethylene glycol segment.
Embodiments of the present invention can be classified into the following two types based on the structure of the polyethylene glycol segment and the succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bonded to the multibranched polymer carrier.
[Type 1]: An embodiment in which the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite is bonded and the polyethylene glycol segment are bonded to the terminal reactive functional group of the multibranched polymer carrier as separate substituents.
[Type 2]: An embodiment in which a substituent integrated by linking the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite is bonded and the polyethylene glycol segment is bonded to a terminal reactive functional group of the multibranched polymer carrier. . The succinic monoamide unit may be a plurality of polymer segments of the succinic monoamide unit.
In the above [Type 1], when the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite is bound is a succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite is bound ([Type 1-1]), Is a polymer of a succinic acid monoamide unit bonded thereto ([Type 1-2]).

本発明の具体例について、以下にそれぞれの実施態様に分けて説明する。
初めに、前記核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットと前記ポリエチレングリコールセグメントが、それぞれ別の置換基として該多分岐高分子担体の末端反応性官能基に結合する実施態様［タイプ１］について説明する。Specific examples of the present invention will be described below for each embodiment.
First, an embodiment [Type 1] in which the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite is bonded and the polyethylene glycol segment are respectively bonded to the terminal reactive functional group of the multibranched polymer carrier as separate substituents explain.

該［タイプ１］は、前述の一般式（１）において、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基（Ｒ_１）及びポリエチレングリコールセグメントを含む置換基（Ｒ_２）の両方が必須の置換基である実施態様であって、一般式（１）

［式中、［Ｑ］は（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）個の末端官能基化された多分岐高分子担体であり、（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）は４〜２００の整数であり、［Ｆ］は前記末端官能基であってアミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基、及び／又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基を有する保護基で修飾された、アミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基であり、Ｆは前記末端官能基から水素原子又は水酸基が除かれた結合基であり、Ｒ_１は核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基であり、Ｒ_２はポリエチレングリコールセグメントを含む置換基であり、Ｒ_３はコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基であり、ｍは０〜１９８の整数であり、ｎは１〜１９９の整数であり、ｏは１〜１９９の整数であり、ｐは０〜１９８の整数である。］で示される核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物である。In the [Type 1], both the substituent (R ₁ ) containing a succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound and the substituent (R ₂ ) containing a polyethylene glycol segment in the aforementioned general formula (1) are used. An embodiment which is an essential substituent, having the general formula (1)

[Wherein [Q] is a (m + n + o + p) terminal-functionalized hyperbranched polymer carrier, (m + n + o + p) is an integer of 4-200, and [F] is the terminal functional group. A protecting group having at least one functional group selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, and / or a C1-C6 alkyl group which may have a substituent; Is one or more functional groups selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, wherein F is a bonding group obtained by removing a hydrogen atom or a hydroxyl group from the terminal functional group. , R ₁ is a substituent containing a succinic acid monoamide units nucleic acid antimetabolites are bonded, R ₂ is a substituent containing a polyethylene glycol segment, R ₃ is Zanmoto及acid monoamide derivative An / or succinimide residue, m is an integer of from 0 to 198, n is an integer from one to one hundred ninety-nine, o is an integer from one to one hundred ninety-nine, p is an integer of from 0 to 198. ] It is a nucleic acid antimetabolite binding multi-branched compound shown by these.

該［タイプ１］の実施態様は、Ｒ_１である核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基の結合量（ｎ）により、核酸代謝拮抗剤の含有量を制御することができる。また、Ｒ_２であるポリエチレングリコールセグメントを含む置換基の結合量（ｏ）、並びに用いるポリエチレングリコールセグメントの分子量により、ポリエチレングリコール含有量を制御することができ、結果として、核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の水溶性や自己会合性といった物性を制御することができる点で有利な構造である。In the embodiment of [Type 1], the content of the nucleic acid antimetabolite can be controlled by the binding amount (n) of the substituent containing the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite of R ₁ is bound. . The binding amount of a substituted group containing a polyethylene glycol segment is R ₂ (o), the molecular weight of the polyethylene glycol segment to be used as well, it is possible to control the polyethylene glycol content, as a result, nucleic acid metabolism antagonist binding multibranched This is an advantageous structure in that physical properties such as water solubility and self-association of the compound can be controlled.

該［タイプ１］において、Ｒ_２のポリエチレングリコールセグメントとしては、エチレンオキシ基；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）単位の繰り返し構造を有するセグメントである。好ましくはエチレンオキシ基単位重合度が５〜１０，０００ユニット、より好ましくは重合度が５〜２，５００ユニットであり、特に好ましくは１０〜１，０００ユニットであり、殊更好ましくは２０〜５００ユニットのポリエチレングリコール鎖を含むセグメント構造である。
すなわち該ポリエチレングリコールセグメントは、ポリエチレングリコール相当の平均分子量として０．２キロダルトン〜５００キロダルトンのセグメント部であることが好ましく、より好ましくは平均分子量として０．２キロダルトン〜１５０キロダルトンの構造部分であり、特に好ましくは平均分子量として０．５キロダルトン〜５０キロダルトンである。平均分子量として１キロダルトン〜２０キロダルトンのポリエチレングリコールセグメントであることが、殊更好ましい。
なお、本発明で用いるポリエチレングリコールセグメントの平均分子量とは、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を調製する際において、用いるポリエチレングリコールセグメント構造化合物の、ポリエチレングリコール標準品を基準としたＧＰＣ法により測定されるピークトップ分子量により求められる平均分子量である。In the [Type 1], the polyethylene glycol segment of R ₂ is a segment having a repeating structure of an ethyleneoxy group; (CH ₂ CH ₂ O) unit. Preferably, the degree of polymerization of the ethyleneoxy group unit is 5 to 10,000 units, more preferably, the degree of polymerization is 5 to 2,500 units, particularly preferably 10 to 1,000 units, and particularly preferably 20 to 500 units. Is a segment structure containing a polyethylene glycol chain.
That is, the polyethylene glycol segment is preferably a segment part having an average molecular weight equivalent to polyethylene glycol of 0.2 kilodalton to 500 kilodalton, and more preferably a structural part having an average molecular weight of 0.2 kilodalton to 150 kilodalton. The average molecular weight is particularly preferably from 0.5 to 50 kDa. Particularly preferred is a polyethylene glycol segment having an average molecular weight of 1 to 20 kilodaltons.
The average molecular weight of the polyethylene glycol segment used in the present invention refers to the GPC method based on a polyethylene glycol standard product of the polyethylene glycol segment structural compound used in preparing the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention. Is the average molecular weight determined from the peak top molecular weight measured by

該［タイプ１］におけるＲ_２は、一般式（８）

［式中、Ｒ_８は水素原子又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、ｋは５〜２，５００の整数であり、Ｘ_１は末端官能基Ｆとの結合基を示す。］を用いることが好ましい。
すなわち、エチレンオキシ基；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）単位の繰り返し構造によるエチレンオキシ基単位重合度が５〜２，５００ユニットのポリエチレングリコールセグメントであり、ポリエチレングリコール相当の平均分子量として０．２キロダルトン〜１５０キロダルトンのセグメント部であることが好ましい。より好ましくは重合度が１０〜１，０００ユニットであり、平均分子量として０．５キロダルトン〜５０キロダルトンであり、更に好ましくは重合度が２０〜５００ユニットで、平均分子量として１キロダルトン〜２０キロダルトンであり、殊更好ましくは重合度が２０〜３００ユニットで、平均分子量として１キロダルトン〜１２キロダルトンのポリエチレングリコール鎖を含むセグメント構造である。

なお、該Ｒ_８及び該Ｘ_１は、前述のＲ_２に係るポリエチレングリコールセグメントの記載と同義である。R ₂ in the [Type 1] is represented by the general formula (8)

[In the formula, R ₈ is a hydrogen atom or a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C8) which may have a substituent, and k is 5 to 2,500. X ₁ represents a bonding group to the terminal functional group F. ] Is preferably used.
That is, an ethylene _group, ethylene group units polymerization degree of (CH 2 _CH 2 O) repeating structural units are polyethylene glycol segments 5～2,500 unit 0.2 kilodalton mean molecular weight of the polyethylene glycol equivalent It is preferred that the segment be ~ 150 kilodaltons. More preferably, the degree of polymerization is 10 to 1,000 units, and the average molecular weight is 0.5 to 50 kilodaltons. Still more preferably, the degree of polymerization is 20 to 500 units, and the average molecular weight is 1 to 200 kilodaltons. It is a kilodalton, particularly preferably a segment structure having a degree of polymerization of 20 to 300 units and a polyethylene glycol chain having an average molecular weight of 1 to 12 kilodalton.

Note that the R ₈ and the X ₁ are as defined in the polyethylene glycol segment of the R ₂ above.

次に、前記［タイプ１］の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物において、一般式（１）のＲ_１が核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニットである［タイプ１−１］について説明する。Next, the in nucleic acid metabolism antagonist binding multibranched compounds of Type 1], R ₁ is a nucleic acid antimetabolite binding succinic acid monoamide units of the general formula (1) will be described Type 1-1].

該［タイプ１−１］の好ましい実施態様として、Ｒ_１で示される核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットが一般式（２）及び／又は（３）

［式中、［Ｄ］は核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、Ｘ_４は前記末端官能基Ｆとの結合基であり、Ｒ_４、Ｒ_５及びＲ_６はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキル基であり、Ｒ_７は水素原子、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアラルキル基、置換基を有していても良い芳香族基及びカルボキシ基が保護されたアミノ酸残基からなる群から選択される１種以上の基である。］で示される核酸代謝拮抗剤が結合したアスパラギン酸モノアミドユニットであることが好ましい。
核酸代謝拮抗剤の結合様式は、アミド結合のみの場合、エステル結合のみの場合、又はアミド結合とエステル結合との混合体の場合の何れでも良い。用いる核酸代謝拮抗剤の結合性官能基に応じて、側鎖カルボキシ基への結合様式を適宜選択して良い。The preferred embodiment of Type 1-1], succinic acid monoamide units nucleic acid antimetabolites represented by R ₁ is bonded is the general formula (2) and / or (3)

[Wherein [D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite, X ₄ is a binding group to the terminal functional group F, and R ₄ , R ₅ and R ₆ are each independently a hydrogen atom or R ₇ represents a hydrogen atom, a linear (C 1 -C 20) linear or branched or cyclic alkyl group which may have a substituent; A linear, branched or cyclic aralkyl group having carbon atoms (C7 to C20) which may have a group, an amino acid residue in which an aromatic group which may have a substituent and a carboxy group are protected. One or more groups selected from the group consisting of groups. Is preferably an aspartic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite represented by
The binding mode of the nucleic acid antimetabolite may be any of only an amide bond, only an ester bond, or a mixture of an amide bond and an ester bond. Depending on the binding functional group of the nucleic acid antimetabolite to be used, the mode of binding to the side chain carboxy group may be appropriately selected.

前記一般式（２）又は（３）で示すアスパラギン酸モノアミドユニットにおいて、式中、Ｒ_４、Ｒ_５及びＲ_６における、炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキル基は、直鎖状、分岐鎖状又は環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキル基である。
直鎖状アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−へキシル基等を挙げることができる。
分岐鎖状アルキル基としては、例えばイソプロピル基、ｔ−ブチル基、１−メチル−プロピル基、２−メチル−プロピル基、２，２−ジメチルプロピル基等が挙げられる。
環状アルキル基としては、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。In the aspartic acid monoamide unit represented by the general formula (2) or (3), in the formula, the alkyl group having carbon atoms (C1 to C8) in R ₄ , R ₅ and R ₆ is linear or branched. Or, it is a cyclic alkyl group having a carbon number (C1 to C8).
Examples of the linear alkyl group include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an n-butyl group, and an n-hexyl group.
Examples of the branched alkyl group include an isopropyl group, a t-butyl group, a 1-methyl-propyl group, a 2-methyl-propyl group, and a 2,2-dimethylpropyl group.
Examples of the cyclic alkyl group include a cyclopropyl group, a cyclobutyl group, a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, and the like.

前記一般式（２）又は（３）に係るＲ_７において、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基とは、例えばメチル基、エチル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基、シクロヘキシル基、ｎ−オクチル基、ドデシル基、オクタデシル基が挙げられる。
置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアラルキル基としては、例えば、ベンジル基、２−フェニルエチル基、４−フェニルブチル基、８−フェニルオクチル基等が挙げられる。
置換基を有していても良い炭素数（Ｃ５〜Ｃ２０）の芳香族基としては、例えば、フェニル基、４−メトキシフェニル基、４−ジメチルアミノフェニル基、４−ヒドロキシフェニル基等が挙げられる。In R _{7 according} to the general formula (2) or (3), the linear, branched or cyclic alkyl group having carbon atoms (C1 to C20) which may have a substituent includes, for example, methyl Group, ethyl group, isopropyl group, t-butyl group, cyclohexyl group, n-octyl group, dodecyl group and octadecyl group.
Examples of the linear, branched or cyclic aralkyl group having carbon atoms (C7 to C20) which may have a substituent include, for example, benzyl group, 2-phenylethyl group, 4-phenylbutyl group, and 8 -Phenyloctyl group and the like.
Examples of the aromatic group having carbon atoms (C5 to C20) which may have a substituent include a phenyl group, a 4-methoxyphenyl group, a 4-dimethylaminophenyl group, a 4-hydroxyphenyl group, and the like. .

また、前記Ｒ_７は、カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基であっても良い。カルボキシ基が保護されたアミノ酸残基としては、例えば、グリシニル−メチルエステル基、アラニル−メチルエステル基、ロイシニル−メチルエステル基、バリニル−メチルエステル基、フェニルアラニル−メチルエステル基、アラニル−エチルエステル基、ロイシニル−エチルエステル基、アラニル−ブチルエステル基、ロイシニル−ブチルエステル基等が挙げられる。Further, R ₇ may be an amino acid residue in which a carboxy group is protected. Examples of the amino acid residue having a protected carboxy group include a glycinyl-methyl ester group, an alanyl-methyl ester group, a leucinyl-methyl ester group, a valinyl-methyl ester group, a phenylalanyl-methyl ester group, and an alanyl-ethyl ester Groups, leucinyl-ethyl ester groups, alanyl-butyl ester groups, leucinyl-butyl ester groups, and the like.

前記Ｘ_４は、前記Ｒ_１に係る核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基と多分岐高分子担体の末端反応性官能基［Ｆ］を結合させる結合基である。該Ｘ_４は、前述の一般式（１７）及び／又は（１８）におけるＸと同義である。X ₄ is a linking group for linking the substituent containing the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite related to R ₁ is linked to the terminal reactive functional group [F] of the multibranched polymer carrier. X ₄ has the same meaning as X in the aforementioned general formulas (17) and / or (18).

前記［Ｄ］の核酸代謝拮抗剤の結合残基は、前述の核酸代謝拮抗剤が、アスパラギン酸モノアミドユニットの側鎖カルボキシ基にアミド結合及び／又はエステル結合を介して結合している態様であって、該核酸代謝拮抗剤のアミド結合残基及び／又はエステル結合残基である。核酸代謝拮抗剤の結合様式は、アミド結合のみの場合、エステル結合のみの場合又はアミド結合とエステル結合との混合体の場合の何れでも良い。用いる核酸代謝拮抗剤の結合性官能基に応じて、側鎖カルボキシ基への結合様式を適宜選択して良い。 The binding residue of the nucleic acid antimetabolite of the above [D] is an embodiment in which the nucleic acid antimetabolite is bonded to a side chain carboxy group of an aspartic acid monoamide unit via an amide bond and / or an ester bond. The amide bond residue and / or the ester bond residue of the nucleic acid antimetabolite. The binding mode of the nucleic acid antimetabolite may be any of only an amide bond, only an ester bond, or a mixture of an amide bond and an ester bond. Depending on the binding functional group of the nucleic acid antimetabolite to be used, the mode of binding to the side chain carboxy group may be appropriately selected.

前記［Ｄ］の核酸代謝拮抗剤は前述と同義であり、例えば、ピリミジン系代謝拮抗剤、プリン系代謝拮抗剤、トリアジン系代謝拮抗剤等が挙げられる。アミノ基及び／又は水酸基を有する核酸代謝拮抗剤を用いる事が好ましい。より好ましくは、ヌクレオシド塩基にアミノ基を有する核酸代謝拮抗剤であり、該アミノ基によりコハク酸モノアミドユニットのカルボキシ基にアミド結合できる核酸代謝拮抗剤であることが好ましい。 The nucleic acid antimetabolite [D] has the same meaning as described above, and examples thereof include a pyrimidine antimetabolite, a purine antimetabolite, and a triazine antimetabolite. It is preferable to use a nucleic acid antimetabolite having an amino group and / or a hydroxyl group. More preferably, it is a nucleic acid antimetabolite having an amino group in the nucleoside base, and is preferably a nucleic acid antimetabolite which can be amide-bonded to the carboxy group of the succinic acid monoamide unit by the amino group.

核酸代謝拮抗剤は、核酸塩基部分が下記式（１２）から選択されるいずれか１種以上であり、それに結合している基（Ｒｆ）が下記式（１３）から選択されるいずれか１種以上の組み合せである核酸代謝拮抗剤であることが特に好ましい。

［式中、−Ｒｆは、式（１３）：

の置換基群より選ばれる基を示し、Ｒ_２０は水素原子又は脂肪酸エステルのアシル基残基を示す。］。ここでＲ_２０における脂肪酸エステルのアシル基は、前述と同義である。The nucleic acid antimetabolite has a nucleic acid base moiety of at least one selected from the following formula (12), and a group (Rf) bonded thereto is any one selected from the following formula (13) Particularly preferred is a nucleic acid antimetabolite which is a combination of the above.

[Wherein, -Rf is represented by the formula (13):

And R ₂₀ represents a hydrogen atom or an acyl group residue of a fatty acid ester. ]. Here, the acyl group of the fatty acid ester at R ₂₀ has the same meaning as described above.

該核酸代謝拮抗剤は、シチジン系代謝拮抗剤を用いることが好ましく、核酸塩基部分が下記式（１４）で示されるシチジン塩基であり、それに結合している基（Ｒｆ）が下記式（１５）の置換基群から選択されるいずれか１種以上の組み合せである核酸代謝拮抗剤であることが特に好ましい。ここで、Ｒ_２０は水酸基又は脂肪酸エステルのアシル基で表される化合物である。As the nucleic acid antimetabolite, a cytidine antimetabolite is preferably used. The nucleobase portion is a cytidine base represented by the following formula (14), and the group (Rf) bonded thereto is represented by the following formula (15). Particularly preferred is a nucleic acid antimetabolite which is a combination of at least one selected from the group consisting of the substituents Here, R ₂₀ is a compound represented by a hydroxyl group or an acyl group of a fatty acid ester.

［式中、−Ｒｆは、式（１５）：

の置換基群より選ばれる基を示し、Ｒ_２０は水素原子又は脂肪酸エステルのアシル基を示す。］。Ｒ_２０における脂肪酸エステルのアシル基は、前述と同義である。

[Wherein, -Rf is represented by the formula (15):

And R ₂₀ represents a hydrogen atom or an acyl group of a fatty acid ester. ]. The acyl group of the fatty acid ester for R ₂₀ has the same meaning as described above.

これらのシチジン系代謝拮抗剤は、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）及びその脂肪酸エステル誘導体、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）及びその脂肪酸エステル誘導体、並びに３’−エチニルシチジン（Ｅｔｈｙｎｙｌｃｙｔｉｄｉｎｅ）及びその脂肪酸エステル誘導体である。脂肪酸エステル誘導体として、シタラビン−５’−エライジン酸エステル（ＣＰ−４０５５）、ゲムシタビン−５’−エライジン酸エステル（ＣＰ−４１２６）等であり、本発明において好適に用いられる。 These cytidine antimetabolites are gemcitabine and its fatty acid ester derivatives, cytarabine and its fatty acid ester derivatives, and 3'-ethynylcytidine and its fatty acid ester derivatives. Fatty acid ester derivatives include cytarabine-5'-elaidic acid ester (CP-4055), gemcitabine-5'-elaidic acid ester (CP-4126) and the like, which are suitably used in the present invention.

前記［タイプ１−１］の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物において、一般式（１）のＲ_３で示されるコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基が、一般式（９）、（１０）及び（１１）

［式中、Ｘ_４は前記末端官能基Ｆとの結合基であり、Ｒ_９は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１０）ＣＯＮＨ（Ｒ_１１）を示し、Ｒ_１０、Ｒ_１１は同一でも異なっていてもよく、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基を示し、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６及びＲ_７は前述の［タイプ１−１］のＲ_１で用いられる一般式（２）及び（３）と同義である。］からなる置換基群から選ばれる１種以上の基であることが好ましい。ここで、Ｘ_４、Ｒ_１０及びＲ_１１は前述と同義である。
前記Ｒ_３で表されるコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基は、前記Ｒ_１に係る核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットから核酸代謝拮抗剤が解離した残基であるため、任意に存在して良い基である。しかしながら、該Ｒ_３に係る置換基は、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の製造中や医薬品用製剤の製造中、並びに医薬製剤保存中や医薬品として使用時において、核酸代謝拮抗剤の解離に伴い、随時、生成し得ることになる。In the above-mentioned [Type 1-1] nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound, the succinic monoamide derivative residue and / or succinimide residue represented by R ₃ in the general formula (1) is represented by the general formula (9) , (10) and (11)

[Wherein, X ₄ is a bonding group to the terminal functional group F, R ₉ is a hydroxyl group and / or —N (R ₁₀ ) CONH (R ₁₁ ), and R ₁₀ and R ₁₁ are the same or different. A linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C8) which may be substituted by a tertiary amino group, wherein R ₄ , R ₅ , R ₆ and R ₇ are the same meaning as in formula used in _{R 1} of the aforementioned type 1-1] (2) and (3). ] Is preferably at least one group selected from the substituent group consisting of Here, X ₄ , R ₁₀ and R ₁₁ have the same meanings as described above.
The succinic monoamide derivative residue and / or succinimide residue represented by R ₃ is a residue obtained by dissociating the nucleic acid antimetabolite from the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite according to R ₁ is bound. Because of this, it is a group that can be present arbitrarily. However, during the production of the anti-nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention or during the production of a pharmaceutical preparation, and during the storage of a pharmaceutical preparation or when used as a pharmaceutical, the substituent for R ₃ may be a nucleic acid antimetabolite. It can be generated at any time along with the dissociation.

該［タイプ１−１］の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物において、前記核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基（Ｒ_１）、前記ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基（Ｒ_２）、並びに前記コハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基（Ｒ_３）が結合していない末端官能基［Ｆ］を含んでいても良い。該［Ｆ］はアミノ基、水酸基、カルボキシ基、メルカプト基からなる群から選択される１種以上の末端官能基である。また、前記末端官能基が、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基を有する保護基で修飾されたアミノ基、水酸基、カルボキシ基、メルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基であっても良い。すなわち、該［タイプ１−１］は、一般式（１）における［Ｆ］が末端反応性官能基のままであっても良く、末端反応性官能基の保護基修飾体であっても良く、これらが混在した基であっても良い。In nucleic acid metabolism antagonist binding multi-branched compound of the Type 1-1], the substituent which the nucleic acid antimetabolites comprises succinic acid monoamide units bound (R _1), a substituent containing the polyethylene glycol segment (R ₂ ), And a terminal functional group [F] to which a substituent (R ₃ ) containing a succinic monoamide derivative residue and / or a succinimide residue is not bonded. [F] is one or more terminal functional groups selected from the group consisting of amino groups, hydroxyl groups, carboxy groups, and mercapto groups. In addition, the terminal functional group is selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group, and a mercapto group modified with a protective group having an alkyl group having carbon number (C1 to C6) which may have a substituent. It may be one or more functional groups. That is, in the [Type 1-1], [F] in the general formula (1) may be a terminal-reactive functional group, or may be a modified terminal-reactive functional group-protected group. These may be mixed groups.

前記末端反応性官能基［Ｆ］の保護基における、前記炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基は前述と同義であり、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、シクロペンチル基、ｎ−へキシル基、シクロへキシル基等が挙げられる。
前記保護基における有していても良い置換基とは、水酸基、アミノ基、ハロゲン原子、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルキルカルボニルアルコキシ基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルキルカルボニルアミド基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルキルカルボニルアルキルアミド基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキルアリール基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルコキシ基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルキルアミノ基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアシルアミド基、炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルコキシカルボニルアミノ基等を挙げることができる。水溶性を有し且つ正電荷や負電荷を具備しない炭素数（Ｃ１〜Ｃ４）のアルコキシ基を置換基として有する保護基であることが好ましい。The alkyl group having the carbon number (C1 to C6) in the protective group of the terminal reactive functional group [F] has the same meaning as described above. Butyl, isobutyl, sec-butyl, t-butyl, n-pentyl, cyclopentyl, n-hexyl, cyclohexyl and the like.
The substituents that the protective group may have include a hydroxyl group, an amino group, a halogen atom, an alkylcarbonylalkoxy group having carbon atoms (C1 to C4), an alkylcarbonylamide group having carbon atoms (C1 to C4), and carbon atoms. A number (C1 to C4) alkylcarbonylalkylamide group, a carbon number (C1 to C8) alkylaryl group, a carbon number (C1 to C4) alkoxy group, a carbon number (C1 to C4) alkylamino group, a carbon number An acylamide group having (C1 to C4) and an alkoxycarbonylamino group having (C1 to C4) carbon atoms can be exemplified. It is preferable that the protective group is a protective group having a water-soluble alkoxy group having a carbon number (C1 to C4) having no positive or negative charge as a substituent.

当該末端反応性官能基の保護基修飾体は、任意に存在して良く０基以上であり１９９基以下で存在する。当該保護基修飾体は、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の表面電荷等を制御することができ、水溶性や自己会合性等の物性制御をすることができることから、具備することが好ましい。このため、当該保護基修飾体が４基以上であり１５０基以下で存在することが好ましく、６基以上であり１００基以下で存在することがより好ましい。 The modified protective group of the terminal reactive functional group may be present arbitrarily and may be present in an amount of 0 or more and 199 or less. The modified protective group can be provided because it can control the surface charge and the like of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention and can control physical properties such as water solubility and self-association. preferable. Therefore, the number of the modified protective group is preferably 4 or more and 150 or less, more preferably 6 or more and 100 or less.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物が前記［タイプ１−１］である場合、一般式（１）におけるそれぞれの置換基結合数は、ｍは０〜１９８の整数であり、ｎは１〜１９９の整数であり、ｏは１〜１９９の整数であり、ｐは０〜１９８の整数である。好ましくは、ｍは０〜１２０の整数であり、ｎは２〜１００の整数であり、ｏは２〜１００の整数であり、ｐは０〜８０の整数である。より好ましくは、ｍは０〜８０の整数であり、ｎは５〜５０の整数であり、ｏは５〜５０の整数であり、ｐは０〜５０の整数である。また、多分岐高分子担体の末端置換基総数である（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）は４〜２００の整数である。好ましくは４〜１５０であり、より好ましくは８〜１００である。
Ｒ_１で示される核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニット及びＲ_２で示されるポリエチレングリコールセグメントの結合数は、核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の薬物動態特性や、核酸代謝拮抗剤の解離速度を踏まえ、適宜設定されるべきである。When the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention is the [Type 1-1], the number of substituents bonded in the general formula (1) is m is an integer of 0 to 198, and n is 1 O is an integer of 1 to 199, and p is an integer of 0 to 198. Preferably, m is an integer from 0 to 120, n is an integer from 2 to 100, o is an integer from 2 to 100, and p is an integer from 0 to 80. More preferably, m is an integer of 0 to 80, n is an integer of 5 to 50, o is an integer of 5 to 50, and p is an integer of 0 to 50. (M + n + o + p), which is the total number of terminal substituents of the multi-branched polymer carrier, is an integer of 4 to 200. Preferably it is 4-150, More preferably, it is 8-100.
Bonding number of polyethylene glycol segment represented by the nucleic acid metabolism antagonist binding succinic acid monoamide units and R ₂ represented by R _1, and the pharmacokinetic properties of the nucleic acid metabolism antagonist binding hyperbranched compounds, the dissociation rate of nucleic acid metabolism antagonist It should be set accordingly.

本発明に係る［タイプ１］の別の実施態様として、一般式（１）におけるＲ_１が、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの重合体である［タイプ１−２］が挙げられる。以下、この［タイプ１−２］について説明する。As another embodiment of [Type 1] according to the present invention, [Type 1-2] in which R ₁ in the general formula (1) is a polymer of a succinic monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound is exemplified. . Hereinafter, [Type 1-2] will be described.

該［タイプ１−２］は、前記Ｒ_１がコハク酸モノアミドユニットの重合体であって、この側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が１分子以上結合している態様を指す。該Ｒ_１のコハク酸モノアミドユニットの重合体は、２分子以上の複数分子の核酸代謝拮抗剤が結合していることが好ましい。該［タイプ１−２］は、置換基当りの核酸代謝拮抗剤の結合数を増加させることができるため、薬剤含量を高める場合において有利な構造である。The Type 1-2], the R ₁ is a polymer of monoamide units succinic acid, refers to a mode in which the nucleic acid antimetabolites are bonded more than one molecule to the side chain carboxyl group. Preferably, the polymer of the succinic monoamide unit of R ₁ has two or more molecules of a nucleic acid antimetabolite bonded thereto. The [Type 1-2] is an advantageous structure when increasing the drug content, because the number of binding of the nucleic acid antimetabolite per substituent can be increased.

該コハク酸モノアミドユニットの重合体は、重合数が１〜５０のコハク酸モノアミドユニットの重合体であることが好ましい。より好ましくは、重合数が２〜３０である。該コハク酸モノアミドユニットの重合体の重合形式は、α−アミド結合による重合体であっても、β−アミド結合による重合体であっても、α及びβ−アミド結合の混合による重合体であってもいずれであっても良い。 The polymer of the succinic monoamide unit is preferably a polymer of a succinic monoamide unit having a polymerization number of 1 to 50. More preferably, the number of polymerization is from 2 to 30. The polymerization form of the polymer of the succinic monoamide unit may be a polymer based on an α-amide bond, a polymer based on a β-amide bond, or a polymer based on a mixture of α and β-amide bonds. Or any of them.

前記コハク酸モノアミドユニットの重合体に結合する核酸代謝拮抗剤は、前述と同義であり、例えば、ピリミジン系代謝拮抗剤、プリン系代謝拮抗剤、トリアジン系代謝拮抗剤等が挙げられる。アミノ基及び／又は水酸基を有する核酸代謝拮抗剤を用いる事が好ましい。より好ましくは、ヌクレオシド塩基にアミノ基を有する核酸代謝拮抗剤であり、該アミノ基によりアスパラギン酸のカルボキシ基にアミド結合できる核酸代謝拮抗剤であることが好ましい。 The nucleic acid antimetabolite which binds to the polymer of the succinic monoamide unit has the same meaning as described above, and examples thereof include a pyrimidine antimetabolite, a purine antimetabolite, and a triazine antimetabolite. It is preferable to use a nucleic acid antimetabolite having an amino group and / or a hydroxyl group. More preferably, it is a nucleic acid antimetabolite having an amino group in the nucleoside base, and is preferably a nucleic acid antimetabolite capable of forming an amide bond with the carboxy group of aspartic acid by the amino group.

該［タイプ１−２］におけるＲ_１は、コハク酸モノアミドユニットの重合体の側鎖カルボキシ基に、前記核酸代謝拮抗剤がアミド結合及び／又はエステル結合を介して、１分子以上、好ましくは２分子以上の複数分子で結合している置換基である。核酸代謝拮抗剤の結合様式は、アミド結合のみの場合、エステル結合のみの場合、又はアミド結合とエステル結合との混合体の場合の何れでも良い。用いる核酸代謝拮抗剤の結合性官能基に応じて、側鎖カルボキシ基への結合様式を適宜選択して良い。
核酸代謝拮抗剤は、該コハク酸モノアミドユニットの重合体における１以上の側鎖カルボキシ基に結合していればよい。２以上の側鎖カルボキシ基に該核酸代謝拮抗剤がそれぞれ結合しているコハク酸モノアミドユニットの重合体が好ましい。すなわち、総側鎖カルボキシ基に対する核酸代謝拮抗剤結合率は１０〜９０％の重合体であることが好ましい。R ₁ in the [Type 1-2] is _one or more molecules, preferably two or more, of the nucleic acid antimetabolite via an amide bond and / or an ester bond to the side chain carboxy group of the polymer of the succinic monoamide unit. It is a substituent bonded by a plurality of molecules or more. The binding mode of the nucleic acid antimetabolite may be any of only an amide bond, only an ester bond, or a mixture of an amide bond and an ester bond. Depending on the binding functional group of the nucleic acid antimetabolite to be used, the mode of binding to the side chain carboxy group may be appropriately selected.
The nucleic acid antimetabolite may be bound to one or more side chain carboxy groups in the polymer of the succinic monoamide unit. Preferred is a polymer of a succinic monoamide unit in which the nucleic acid antimetabolite is bonded to two or more side chain carboxy groups. That is, it is preferable that the polymer has a binding rate of the nucleic acid antimetabolite to the total side chain carboxy groups of 10 to 90%.

該［タイプ１−２］におけるＲ_１はポリアスパラギン酸誘導体であって、一般式（４）又は（５）

［式中、［Ｄ］は核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、Ｒ_１２は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１４）ＣＯＮＨ（Ｒ_１５）であり、該Ｒ_１４及び該Ｒ_１５は同一でも異なってもいてもよく、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、Ｒ_１３は水素原子、炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアシル基及び炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルコキシカルボニル基からなる群から選択される基であり、Ｘ_２は末端官能基Ｆとの結合基であり、ａ、ｂ、ｃ、ｄ及びｅはそれぞれ独立して０〜３０の整数を示し、（ａ＋ｂ）は１〜３０の整数を示し、ポリアミノ酸誘導体の総重合数である（ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ＋ｅ）は１〜３０であり、前記［Ｄ］が結合したアスパラギン酸単位、前記Ｒ_１２が結合したアスパラギン酸単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型のアスパラギン酸単位が、それぞれ独立してランダムな配列である。］で示される置換基であることが好ましい。R ₁ in the [Type 1-2] is a polyaspartic acid derivative, and represented by the general formula (4) or (5)

[Wherein [D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite, R ₁₂ is a hydroxyl group and / or -N (R ₁₄ ) CONH (R ₁₅ ), and even if R ₁₄ and R ₁₅ are the same, May be different and may be a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon atoms (C1 to C8) which may be substituted by a tertiary amino group, and R ₁₃ is a hydrogen atom, a carbon atom ( an alkoxy radical selected from the group consisting of a carbonyl group of the acyl group and the number of carbon atoms (C1 to C8) of C1 to C8), _{X 2} is a linking group between the terminal functional group F, a, b, c, d and e each independently represent an integer of 0 to 30, (a + b) represents an integer of 1 to 30, and the total polymerization number of the polyamino acid derivative (a + b + c + d + e) is 1 to 30; ] it is bound aspartic acid units, a wherein R ₁₂ is bonded The spargate unit and the aspartate unit in which the side chain carboxy group is an intramolecular cyclization type are each independently a random sequence. ] Is preferable.

前記［Ｄ］は核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、該核酸代謝拮抗剤結合残基とは前記［タイプ１−１］における該［Ｄ］の記載と同義である。 [D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite, and the nucleic acid antimetabolite binding residue has the same meaning as in the description of [D] in [Type 1-1].

Ｒ_１２は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１４）ＣＯＮＨ（Ｒ_１５）である。該Ｒ_１４及び該Ｒ_１５における、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基とは、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、ネオペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられ、好ましくはイソプロピル基、シクロへキシル基が挙げられる。
該三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基としては、例えば、２−ジメチルアミノエチル基、３−ジメチルアミノプロピル基、５−ジメチルアミノペンチル基、６−ジメチルアミノヘキシル基等が挙げられる。
該Ｒ_１４及びＲ_１５として好ましくは、エチル基、イソプロピル基、シクロへキシル基、３−ジメチルアミノプロピル基が挙げられる。R ₁₂ is a hydroxyl group and / or —N (R ₁₄ ) CONH (R ₁₅ ). In R ₁₄ and R ₁₅ , a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 8 carbon atoms (C 1 to C ₈ ) which may be substituted with a tertiary amino group includes, for example, a methyl group, an ethyl group , N-propyl group, isopropyl group, isobutyl group, sec-butyl group, t-butyl group, 1-methylbutyl group, 2-methylbutyl group, neopentyl group, cyclohexyl group and the like, and preferably isopropyl group and cyclohexyl. Groups.
Examples of the linear, branched, or cyclic alkyl group having 1 to 8 carbon atoms (C1 to C8) which may be substituted with the tertiary amino group include a 2-dimethylaminoethyl group and a 3-dimethylaminopropyl group. , 5-dimethylaminopentyl group, 6-dimethylaminohexyl group and the like.
Preferred examples of R ₁₄ and R ₁₅ include an ethyl group, an isopropyl group, a cyclohexyl group and a 3-dimethylaminopropyl group.

前記Ｒ_１２が水酸基である場合、カルボン酸の態様を示す。また、そのカルボン酸の任意の塩態様であっても良い。
前記Ｒ_１２は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１４）ＣＯＮＨ（Ｒ_１５）であるが、水酸基のみである場合、水酸基及び−Ｎ（Ｒ_１４）ＣＯＮＨ（Ｒ_１５）が共存する場合、若しくは−Ｎ（Ｒ_１４）ＣＯＮＨ（Ｒ_１５）のみである場合の態様を取り得る。水酸基と−Ｎ（Ｒ_１４）ＣＯＮＨ（Ｒ_１５）の存在比率は任意に設定されて良い。When R ₁₂ is a hydroxyl group, it represents an embodiment of a carboxylic acid. Further, any salt form of the carboxylic acid may be used.
R ₁₂ is a hydroxyl group and / or —N (R ₁₄ ) CONH (R ₁₅ ), but when it is only a hydroxyl group, when a hydroxyl group and —N (R ₁₄ ) CONH (R ₁₅ ) coexist, or —N (R ₁₄ ) CONH (R ₁₅ ) alone may be used. The existence ratio of the hydroxyl group and —N (R ₁₄ ) CONH (R ₁₅ ) may be arbitrarily set.

前記Ｒ_１３における炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアシル基とは、直鎖状、分岐鎖状又は環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアシル基である。例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチロイル基、シクロプロピルカルボニル基、シクロペンタンカルボニル基等が挙げられる。
前記Ｒ_１３における炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルコキシカルボニル基としては、直鎖状、分岐鎖状又は環状の炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルコキシカルボニル基である。例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ｎ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ペントキシカルボニル基、ヘキシルオキシカルボニル基、シクロプロポキシカルボニル基、シクロペンチルオキシカルボニル基、シクロヘキシルオキシカルボニル基等が挙げられるWherein the acyl group of carbon number (C1 to C8) in _{R 13,} an acyl group having a linear, branched or cyclic carbon atoms (C1 to C8). For example, a formyl group, an acetyl group, a propionyl group, a butyroyl group, a cyclopropylcarbonyl group, a cyclopentanecarbonyl group and the like can be mentioned.
The alkoxycarbonyl group of carbon number (C1 to C8) in the _{R 13,} an alkoxycarbonyl group having a linear, branched or cyclic carbon atoms (C1 to C8). For example, methoxycarbonyl group, ethoxycarbonyl group, propoxycarbonyl group, isopropoxycarbonyl group, n-butoxycarbonyl group, t-butoxycarbonyl group, pentoxycarbonyl group, hexyloxycarbonyl group, cyclopropoxycarbonyl group, cyclopentyloxycarbonyl group , Cyclohexyloxycarbonyl group and the like.

前記Ｘ_２は、一般式（４）又は（５）で表されるＲ_１と、多分岐高分子担体の末端反応性官能基［Ｆ］との結合基である。該結合基Ｘ_２としては、該Ｒ_１の末端基と、末端反応性官能基［Ｆ］に対して、それぞれ結合可能な官能基を両末端に有する結合基であれば、特に限定されるものではない。X ₂ is a bonding group of R ₁ represented by the general formula (4) or (5) and the terminal reactive functional group [F] of the multi-branched polymer carrier. Examples of the linking group X _2, and the terminal groups of the R _1, with respect to terminal reactive functional group [F], if a linking group having each linkable functional groups at both ends, limited in particular is not.

該Ｘ_２は、一方の末端基が該Ｒ_１の末端基と結合して、もう一方の末端基が、末端反応性官能基［Ｆ］とエステル結合、アミド結合、チオエステル結合、ウレア結合又はウレタン結合することができる結合性官能基を有する、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキレン基が好ましい。
該Ｘ_２に係る結合基としては、末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合、エステル結合又はチオエステル結合する結合基として、例えば、−（ＣＨ_２）_ｙ−ＮＨ−（ｙは０〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｏ−（ｙは０〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｓ−（ｙは０〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｙ−ＣＯ−（ｙは０〜８の整数を示す）、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｙ−ＣＯ−（ｙは０〜８の整数を示す）等が挙げられる。X ₂ has _one terminal group bonded to the terminal group of R _{1 and the} other terminal group connected to a terminal reactive functional group [F] through an ester bond, an amide bond, a thioester bond, a urea bond or a urethane bond. An alkylene group having a carbon number (C1 to C8) which may have a substituent and has a bonding functional group capable of bonding is preferable.
The bonding group according to the _{X 2,} terminal reactive functional group [F] and an amide bond, as a bonding group to an ester bond or thioester bond, for _{_{example, - (CH 2) y -NH-}} (y is 0 to 8 an _{_{integer), - (CH 2) y}} -O- (y is an integer of _{_{0~8), - (CH 2)}} y -S- (y is an integer of 0~8), - (CH ₂₎ _y -CO- (y is an integer of _{_{0~8), - NH- (CH 2}} ) y -CO- (y can be mentioned), etc. represents an integer of 0-8.

また、該Ｘ_２は「結合」であってもよい。「結合」とは、特に結合基を介せず、多分岐高分子担体の末端反応性官能基と前記Ｒ_２に係る末端基が直接結合している態様を指す。X ₂ may be a “bond”. "Bond" and is particularly not through a linking group, refers to a mode in which end groups and terminal reactive functional group according to the R ₂ of the multi-branched polymeric carrier is directly bonded.

一般式（４）又は（５）で表されるポリアスパラギン酸誘導体置換基は、総重合数である（ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ＋ｅ）は１〜３０である。好ましくは重合数が４〜３０のポリアスパラギン酸誘導体置換基であり、重合数５〜２５が好ましい。
アスパラギン酸誘導体ユニットの各構成数を示すａ、ｂ、ｃ、ｄ及びｅはそれぞれ独立して０〜３０の整数である。しかしながら、前記核酸代謝拮抗剤［Ｄ］が結合したアスパラギン酸誘導体ユニットは必須の構成であり、（ａ＋ｂ）は１〜３０の整数を示す。好ましくは（ａ＋ｂ）は４〜２５の整数であり、５〜２０であることがより好ましい。また、水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１４）ＣＯＮＨ（Ｒ_１５）であるＲ_１２が結合したアスパラギン酸誘導体ユニット数である（ｃ＋ｄ）及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型のアスパラギン酸誘導体ユニット数であるｅは任意の構成であり、（ｃ＋ｄ）及びｅは０〜２９である。The polyaspartic acid derivative substituent represented by the general formula (4) or (5) has a total polymerization number (a + b + c + d + e) of 1 to 30. Preferably it is a polyaspartic acid derivative substituent having a polymerization number of 4 to 30, and preferably a polymerization number of 5 to 25.
A, b, c, d and e indicating the number of each component of the aspartic acid derivative unit are each independently an integer of 0 to 30. However, the aspartic acid derivative unit to which the nucleic acid antimetabolite [D] is bound is an essential component, and (a + b) represents an integer of 1 to 30. Preferably (a + b) is an integer of 4 to 25, and more preferably 5 to 20. Also, hydroxyl and / or _{_{-N (R 14) CONH (R}} 15) is aspartic acid derivative number _of units _{R 12} are bonded a (c + d) and side chain carboxy group intramolecular cyclization type aspartic acid derivatives unit The number e is an arbitrary configuration, and (c + d) and e are 0 to 29.

また、一般式（４）又は（５）で表されるポリアスパラギン酸誘導体置換基は、前記［Ｄ］が結合したアスパラギン酸単位、前記Ｒ_１２が結合したアスパラギン酸単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型のアスパラギン酸単位が、局在化した配列の態様であっても良く、それぞれの構成単位に規則性がないランダム配列で構成されたポリマー構造であっても良く、つまり、その側鎖修飾体の配列順序において特に規則性のない配列である。In general formula (4) or polyaspartic acid derivative substituent represented by (5), the [D] is bonded to aspartic acid units, the aspartic acid unit and side chain carboxy group R ₁₂ is bonded molecules The inner cyclized aspartic acid unit may be in the form of a localized sequence, or may be a polymer structure composed of a random sequence in which each constituent unit has no regularity. It is a sequence that is not particularly regular in the sequence order of the chain modifications.

該［タイプ１−２］におけるＲ_２は、ポリエチレングリコールセグメントを含有する置換基である。該ポリエチレングリコールセグメントを含有する置換基とは、前記［タイプ１］に記載の同義である。
該Ｒ_２は、一般式（８）

［式中、Ｒ_８は水素原子又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、ｋは５〜２，５００の整数であり、Ｘ_１は末端官能基Ｆとの結合基を示す。］で示されるポリエチレングリコールセグメントであることが好ましい。ここで、Ｒ_８、ｋ及びＸ_１は前述と同義である。R ₂ in [Type 1-2] is a substituent containing a polyethylene glycol segment. The substituent containing the polyethylene glycol segment has the same meaning as described in the above [Type 1].
The R ₂ has the general formula (8)

[In the formula, R ₈ is a hydrogen atom or a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C8) which may have a substituent, and k is 5 to 2,500. X ₁ represents a bonding group to the terminal functional group F. ] Is preferable. Here, R ₈ , k and X ₁ are as defined above.

該［タイプ１−２］に係る核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物において、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの重合体セグメント（Ｒ_１）及びポリエチレングリコールセグメントを含む置換基（Ｒ_２）以外に、更に、任意のコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基（Ｒ_３）が結合していても良い。これらの任意の置換基は、Ｒ_２に係る核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの重合体セグメントから、該核酸代謝拮抗剤が解離した残基である。
該［タイプ１−２］のＲ_１に係る核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの重合体セグメントが、一般式（４）又は（５）で示されるポリアスパラギン酸誘導体である場合、該Ｒ_３は、前記一般式（４）又は（５）において、核酸代謝拮抗剤；［Ｄ］を具備するアスパラギン酸ユニットが欠如したポリアスパラギン酸誘導体となる。すなわち一般式（４）又は（５）において、ａ及びｂが０であり、Ｒ_１２、Ｒ_１３、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｘ_２、ｃ、ｄ及びｅが前述と同義である置換基である。In the multi-branched compound according to [Type 1-2], a substituent (R ₂ ) containing a polymer segment (R ₁ ) of a succinic acid monoamide unit and a polyethylene glycol segment to which a nucleic acid antimetabolite is bound In addition, a substituent (R ₃ ) containing any succinic monoamide derivative residue and / or succinimide residue may be further bonded. These optional substituents, the polymer segment of the succinic acid monoamide units nucleic acid metabolism antagonists according to R ₂ are bonded, a residue nucleic acid metabolism antagonist is dissociated.
When the polymer segment of the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite relating to R ₁ of [Type 1-2] is bound is a polyaspartic acid derivative represented by the general formula (4) or (5), R ₃ is a polyaspartic acid derivative in the above general formula (4) or (5), which lacks an aspartic acid unit comprising a nucleic acid antimetabolite; [D]. That is, in the general formula (4) or (5), a and b are 0, and R ₁₂ , R ₁₃ , R ₁₄ , R ₁₅ , X ₂ , c, d, and e are substituents as defined above. .

該［タイプ１−２］の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物において、前記核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの重合体（Ｒ_１）、前記ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基（Ｒ_２）、並びに前記コハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基（Ｒ_３）が結合していない末端官能基［Ｆ］を含んでいても良い。該［Ｆ］はアミノ基、水酸基、カルボキシ基、メルカプト基からなる群から選択される１種以上の末端官能基である。また、前記末端官能基が、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基を有する保護基で修飾されたアミノ基、水酸基、カルボキシ基、メルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基であっても良い。すなわち、一般式（１）における［Ｆ］は、末端反応性官能基のままであっても良く、末端反応性官能基の保護基修飾体であっても良く、これらが混在した基であっても良い。該［Ｆ］に係る末端官能基は、前記［タイプ１−１］と同義である。In the [Type 1-2] nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound, a polymer (R ₁ ) of a succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite is bound, and a substituent (R ₂ ) containing the polyethylene glycol segment And a terminal functional group [F] to which the substituent (R ₃ ) containing the succinic monoamide derivative residue and / or the succinimide residue is not bonded. [F] is one or more terminal functional groups selected from the group consisting of amino groups, hydroxyl groups, carboxy groups, and mercapto groups. In addition, the terminal functional group is selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group, and a mercapto group modified with a protective group having an alkyl group having carbon number (C1 to C6) which may have a substituent. It may be one or more functional groups. That is, [F] in the general formula (1) may be a terminal-reactive functional group or may be a modified protective group of the terminal-reactive functional group. Is also good. The terminal functional group according to [F] has the same meaning as in [Type 1-1].

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物が前記［タイプ１−２］である場合、一般式（１）におけるそれぞれの置換基結合数は、ｍは０〜１９８の整数であり、ｎは１〜１９９の整数であり、ｏは１〜１９９の整数であり、ｐは０〜１９８の整数である。好ましくは、ｍは０〜１２０の整数であり、ｎは２〜１００の整数であり、ｏは２〜１００の整数であり、ｐは０〜８０の整数である。より好ましくは、ｍは０〜８０の整数であり、ｎは５〜５０の整数であり、ｏは５〜５０の整数であり、ｐは０〜５０の整数である。また、多分岐高分子担体の末端置換基総数である（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）は４〜２００の整数である。好ましくは４〜１５０であり、より好ましくは８〜１００である。
Ｒ_１で示される核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニット及びＲ_２で示されるポリエチレングリコールセグメントの結合数は、核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の薬物動態特性や、核酸代謝拮抗剤の解離速度を踏まえ、適宜設定されるべきである。
該［タイプ１−２］は、該Ｒ_１がコハク酸モノアミド重合体を用いるため、１つの置換基に複数の核酸代謝拮抗剤を結合させることができる。このため、核酸代謝拮抗剤含量を高くすることができることから、前述の［タイプ１−１］より、Ｒ_１の結合数；ｎを低くすることも可能である。When the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention is the above [Type 1-2], the number of substituents bonded in the general formula (1) is m is an integer of 0 to 198, and n is 1 O is an integer of 1 to 199, and p is an integer of 0 to 198. Preferably, m is an integer from 0 to 120, n is an integer from 2 to 100, o is an integer from 2 to 100, and p is an integer from 0 to 80. More preferably, m is an integer of 0 to 80, n is an integer of 5 to 50, o is an integer of 5 to 50, and p is an integer of 0 to 50. (M + n + o + p), which is the total number of terminal substituents of the multi-branched polymer carrier, is an integer of 4 to 200. Preferably it is 4-150, More preferably, it is 8-100.
Bonding number of polyethylene glycol segment represented by the nucleic acid metabolism antagonist binding succinic acid monoamide units and R ₂ represented by R _1, and the pharmacokinetic properties of the nucleic acid metabolism antagonist binding hyperbranched compounds, the dissociation rate of nucleic acid metabolism antagonist It should be set accordingly.
The Type 1-2], since the R ₁ is used monoamide polymers, can be attached a plurality of nucleic acid metabolism antagonist to one substituent. Therefore, since it is possible to increase the nucleic acid metabolism antagonist content, than the aforementioned Type 1-1], the number of bonds R _1; It is also possible to lower the n.

次に本発明に係る核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の別の実施態様である、前記ポリエチレングリコールセグメントと前記核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットが連結して一体となった置換基が該多分岐高分子担体の末端反応性官能基に結合する［タイプ２］の実施態様について説明する。
該［タイプ２］は、前記一般式（１）におけるＲ_１が、ポリエチレングリコールセグメントと側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの結合型置換基である。Next, in another embodiment of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound according to the present invention, a substituent in which the polyethylene glycol segment and the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite is bonded is integrated to form a unit. The embodiment of [Type 2] binding to the terminal reactive functional group of the hyperbranched polymer carrier will be described.
In the [Type 2], R ₁ in the general formula (1) is a binding type substituent of a succinic monoamide unit in which a nucleic acid antimetabolite is bound to a polyethylene glycol segment and a side chain carboxy group.

前記［タイプ２］における前記ポリエチレングリコールセグメントと側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの結合型置換基は、下記一般式（２５）及び／又は（２６）

［式中、［Ｄ］は核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、Ｙは多分岐高分子担体との結合基であって酸素原子又はＮ−Ｒ_４であり、前記Ｒ_４並びにＲ_５及びＲ_６はそれぞれ独立して水素原子又は炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキル基であり、Ｒ_１６はポリエチレングリコールセグメントである。］で示されるポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの結合型置換基が好ましい。
核酸代謝拮抗剤の結合様式は、アミド結合のみの場合、エステル結合のみの場合、又はアミド結合とエステル結合との混合体の場合の何れでも良い。用いる核酸代謝拮抗剤の結合性官能基に応じて、側鎖カルボキシ基への結合様式を適宜選択して良い。The bonding type substituent of the succinic acid monoamide unit in which the nucleic acid antimetabolite is bonded to the polyethylene glycol segment and the side chain carboxy group in the [Type 2] is represented by the following general formula (25) and / or (26)

[Wherein [D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite, Y is a binding group to a hyperbranched polymer carrier and is an oxygen atom or N—R ₄ , wherein R ₄ , R ₅ and R ₆ is each independently a hydrogen atom or an alkyl group having carbon atoms (C1 to C8), and R ₁₆ is a polyethylene glycol segment. The preferred is a succinic acid monoamide unit having a polyethylene glycol segment and a nucleic acid antimetabolite.
The binding mode of the nucleic acid antimetabolite may be any of only an amide bond, only an ester bond, or a mixture of an amide bond and an ester bond. Depending on the binding functional group of the nucleic acid antimetabolite to be used, the mode of binding to the side chain carboxy group may be appropriately selected.

前記一般式（２５）及び（２６）で示される前記ポリエチレングリコールセグメントとコハク酸モノアミドユニットの結合型置換基は、光学活性体であっても良く、それらの任意の混合物であっても良い。
該Ｒ_４、Ｒ_５及びＲ_６、並びに［Ｄ］に係る核酸代謝拮抗剤は前述と同義である。
前記一般式（２５）及び（２６）で示される置換基としては、ＹがＮ−Ｒ_４であることが好ましい。すなわち、ポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤が結合したアスパラギン酸モノアミドユニットであることが好ましい。この場合の該Ｒ_４、Ｒ_５及びＲ_６、並びに［Ｄ］に係る核酸代謝拮抗剤も前述と同義である。The bonding type substituent of the polyethylene glycol segment and the succinic monoamide unit represented by the general formulas (25) and (26) may be an optically active substance or an arbitrary mixture thereof.
The nucleic acid antimetabolite according to R ₄ , R ₅ and R ₆ , and [D] are as defined above.
As the substituent represented by the general formulas (25) and (26), Y is preferably NR ₄ . That is, it is preferably an aspartic acid monoamide unit in which a polyethylene glycol segment and a nucleic acid antimetabolite are bound. In this case, R ₄ , R ₅ and R ₆ , and the nucleic acid antimetabolite according to [D] have the same meaning as described above.

また、該［タイプ２］において、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットは、複数の該コハク酸モノアミドユニットの重合体セグメントであっても良い。この場合、前記核酸代謝拮抗剤は、コハク酸モノアミドユニットの重合体の側鎖カルボキシ基にアミド結合及び／又はエステル結合を介して、１分子以上、好ましくは２分子以上の複数分子で結合している置換基である。
核酸代謝拮抗剤の結合様式は、アミド結合のみの場合、エステル結合のみの場合、又はアミド結合とエステル結合との混合体の場合の何れでも良い。用いる核酸代謝拮抗剤の結合性官能基に応じて、側鎖カルボキシ基への結合様式を適宜選択して良い。In the [Type 2], the succinic acid monoamide unit to which the nucleic acid antimetabolite is bound may be a polymer segment of a plurality of the succinic acid monoamide units. In this case, the nucleic acid antimetabolite binds to a side chain carboxy group of the polymer of the succinic acid monoamide unit via an amide bond and / or an ester bond by one or more molecules, preferably two or more molecules. Is a substituent.
The binding mode of the nucleic acid antimetabolite may be any of only an amide bond, only an ester bond, or a mixture of an amide bond and an ester bond. Depending on the binding functional group of the nucleic acid antimetabolite to be used, the mode of binding to the side chain carboxy group may be appropriately selected.

該［タイプ２］における核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの重合体であるセグメントは、核酸代謝拮抗剤が結合したポリアスパラギン酸セグメントを用いることが好ましい。すなわち、側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤がアミド結合及び／又はエステル結合により結合したポリアスパラギン酸セグメントが好ましい。該ポリアスパラギン酸は，α型重合体であってもβ型重合体であっても良く、α型とβ型が混在した重合体であっても良い。
核酸代謝拮抗剤は、該コハク酸モノアミドユニットの重合体における１以上の側鎖カルボキシ基に結合していれば良い。２以上の側鎖カルボキシ基に該核酸代謝拮抗剤が結合しているコハク酸モノアミドユニットの重合体が好ましい。すなわち、総側鎖カルボキシ基に対する核酸代謝拮抗剤結合率は１０〜９０％の重合体が好ましい。It is preferable to use a polyaspartic acid segment to which a nucleic acid antimetabolite is bound, as the segment which is a polymer of a succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound in [Type 2]. That is, a polyaspartic acid segment in which a nucleic acid antimetabolite is bonded to a side chain carboxy group via an amide bond and / or an ester bond is preferable. The polyaspartic acid may be an α-type polymer or a β-type polymer, or may be a mixture of α-type and β-type polymers.
The nucleic acid antimetabolite may be bound to at least one side chain carboxy group in the polymer of the succinic monoamide unit. Preferred is a polymer of a succinic monoamide unit in which the nucleic acid antimetabolite is bonded to two or more side chain carboxy groups. That is, a polymer having a binding rate of an antimetabolite to a total side chain carboxy group of preferably 10 to 90% is preferable.

該［タイプ２］におけるポリエチレングリコールセグメントと側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの結合様式は特に限定されるものではなく、両置換基がそれぞれの末端基で直接結合しても良く、また、適当な結合基を介して結合しても良い。適当な結合基を介して連結した置換基であることが好ましい。
該［タイプ２］のポリエチレングリコールセグメントと側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットの結合型置換基の多分岐高分子担体との結合様式としては、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットと多分岐高分子担体の末端反応性官能基が結合し、ポリエチレングリコールセグメントが、当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の外殻層を形成する構造であることが好ましい。The bonding mode of the succinic acid monoamide unit in which the nucleic acid antimetabolite is bonded to the polyethylene glycol segment and the side chain carboxy group in [Type 2] is not particularly limited, and both substituents are directly bonded at their respective terminal groups. Or a bond via an appropriate linking group. It is preferably a substituent linked via an appropriate bonding group.
The type of the [Type 2] polyethylene glycol segment and the side chain carboxy group to which a nucleic acid antimetabolite is bonded to a multibranched polymer carrier of a binding type substituent of a succinic acid monoamide unit are as follows. It is preferable that the succinic acid monoamide unit and the terminal reactive functional group of the multibranched polymer carrier are bonded to each other, and the polyethylene glycol segment has a structure forming the outer shell layer of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound.

該［タイプ２］の一般式（２５）及び（２６）におけるＲ_１６で示されるポリエチレングリコールセグメントは、エチレンオキシ基；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）単位の繰り返し構造を有するセグメントである。好ましくはエチレンオキシ基単位重合度が５〜１０，０００ユニット、より好ましくは重合度が５〜２，５００ユニットであり、特に好ましくは１０〜１，０００ユニットであり、殊更好ましくは２０〜５０ユニットのポリエチレングリコール鎖を含むセグメント構造である。
すなわち該ポリエチレングリコールセグメントは、ポリエチレングリコール相当の平均分子量として０．２キロダルトン〜５００キロダルトンのセグメント部であることが好ましく、より好ましくは平均分子量として０．２キロダルトン〜１５０キロダルトンの構造部分であり、特に好ましくは平均分子量として０．５キロダルトン〜５０キロダルトンである。平均分子量として１キロダルトン〜２０キロダルトンのポリエチレングリコールセグメントであることが、殊更好ましい。Polyethylene glycol segment represented by _{R 16} in the general formula (25) and (26) of the [Type 2], ethyleneoxy _group; a segment having a repeating structure of (CH 2 _CH 2 O) units. Preferably, the degree of polymerization of ethyleneoxy group units is from 5 to 10,000 units, more preferably from 5 to 2,500 units, particularly preferably from 10 to 1,000 units, and particularly preferably from 20 to 50 units. Is a segment structure containing a polyethylene glycol chain.
That is, the polyethylene glycol segment is preferably a segment part having an average molecular weight equivalent to polyethylene glycol of 0.2 kilodalton to 500 kilodalton, and more preferably a structural part having an average molecular weight of 0.2 kilodalton to 150 kilodalton. The average molecular weight is particularly preferably from 0.5 to 50 kDa. Particularly preferred is a polyethylene glycol segment having an average molecular weight of 1 to 20 kilodaltons.

前記一般式（２５）及び（２６）におけるＲ_１６のポリエチレングリコールセグメントは、一般式（２３）

［式中、Ｒ_８は水素原子又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、ｋは５〜２，５００の整数であり、Ｘ_５は側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットとの結合基を示す。］を用いることが好ましい。
すなわち、エチレンオキシ基；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）単位の繰り返し構造によるエチレンオキシ基単位重合度が５〜２，５００ユニットのポリエチレングリコールセグメントであり、ポリエチレングリコール相当の平均分子量として２００ダルトン〜１５０キロダルトンのセグメント部であることが好ましい。より好ましくは重合度が２０〜１，５００ユニットであり、平均分子量として１キロダルトン〜５０キロダルトンのポリエチレングリコール鎖を含むセグメント構造である。なお、該Ｒ_８は前述と同義である。The polyethylene glycol segment of R _{16 in} the general formulas (25) and (26) is represented by the general formula (23)

[Wherein, R ₈ is a hydrogen atom or a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C 1 to C ₈ ) which may have a substituent, and k is 5 to 2,500. is an integer, X ₅ represents a bonding group of succinic acid monoamide units nucleic acid metabolism antagonist is bonded to a side chain carboxyl group. ] Is preferably used.
That is, it is a polyethylene glycol segment having a degree of polymerization of an ethyleneoxy group unit of 5 to 2,500 units due to a repeating structure of an ethyleneoxy group; (CH ₂ CH ₂ O) unit, and has an average molecular weight equivalent to polyethylene glycol of 200 daltons to 150 kg. It is preferably a Dalton segment. More preferably, it is a segment structure having a degree of polymerization of 20 to 1,500 units and a polyethylene glycol chain having an average molecular weight of 1 to 50 kDa. Here, R ₈ has the same meaning as described above.

前記一般式（２３）におけるＸ_５は側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットとの結合基を示す。該コハク酸モノアミドユニットと前記ポリエチレングリコールセグメントの結合部位は該コハク酸の一方のカルボキシ基に対して、アミド結合する態様である。したがって、該Ｘ_５の一方の末端基は該アミド結合に結合し、もう一方の末端基は前記ポリエチレングリコールセグメントの酸素原子とエーテル結合、エステル結合、ウレタン結合又はカーボネート結合ができる結合性官能基を有する。よって、該Ｘ_５は前記末端基を有する置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）アルキレン基であることが好ましい。Wherein X ₅ in the general formula (23) shows a bonding group of succinic acid monoamide units nucleic acid metabolism antagonist is bonded to a side chain carboxyl group. In this embodiment, the binding site between the succinic acid monoamide unit and the polyethylene glycol segment forms an amide bond with one carboxy group of the succinic acid. Therefore, one of the terminal groups of the X ₅ is bonded to the amide bond, the other end group is an oxygen atom and an ether bond of the polyethylene glycol segment, an ester bond, the binding functional group capable urethane bond or carbonate bond Have. Therefore, the X ₅ is preferably a substituent which may have a carbon number (C1 to C8) alkylene group having an end group.

該Ｘ_５に係る結合基としては、ポリエチレングリコールセグメントとエーテル結合し、コハク酸モノアミドユニットのアミド結合と連結する結合基として、−（ＣＨ_２）_ｘ−（ｘは１〜８の整数を示す）が挙げられる。ポリエチレングリコールセグメントとエステル結合し、コハク酸モノアミドユニットのアミド結合と連結する結合基として、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−（ｘは１〜８の整数を示す）が挙げられる。ポリエチレングリコールセグメントとウレタン結合し、コハク酸モノアミドユニットのアミド結合と連結する結合基として、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ_２）_ｘ−（ｘは１〜８の整数を示す）が挙げられる。
また、ポリエチレングリコールセグメントとカーボネート結合し、コハク酸モノアミドユニットのアミド結合と連結する結合基として、−ＣＯＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−（ｘは１〜８の整数を示す）を挙げることができる。
該Ｘ_５として、好ましくはポリエチレングリコールセグメントとエーテル結合し、コハク酸モノアミドユニットのアミド結合と連結する結合基であり、−（ＣＨ_２）_ｘ−（ｘは１〜８の整数を示す）である。As binding groups as linking groups according to the X _5, polyethylene glycol segment and then ether bond, which connects the amide bond of succinic acid monoamide _{units, - (CH 2) x -} (x is an integer of 1-8) Is mentioned. Polyethylene glycol segment and ester bond as a binding group linked with amide bonds succinic acid monoamide _{_{units, -CO- (CH 2) x -}} (x is an integer of 1-8) can be mentioned. Polyethylene glycol segment and urethane bond, a linking group linking the amide bond of succinic acid monoamide _{_{units, -CONH- (CH 2) x -}} (x is an integer of 1-8) can be mentioned.
Further, as a bonding group which is bonded to a polyethylene glycol segment by a carbonate bond and is connected to an amide bond of a succinic acid monoamide unit, -COO- (CH ₂ ) _x- (x represents an integer of 1 to 8) can be exemplified.
As the X _5, preferably bound polyethylene glycol segment and ether, a linking group that connects the amide bond of succinic acid monoamide units, - are _(x is an integer of 1~8) - (CH 2) _x .

該［タイプ２］において、一般式（１）におけるＲ_１がポリエチレングリコールセグメントと側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したポリアスパラギン酸誘導体セグメントのブロック共重合体であって、一般式（６）又は（７）

［式中、［Ｄ］は核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、Ｒ_１６はポリエチレングリコールセグメントであり、Ｒ_１７は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１８）ＣＯＮＨ（Ｒ_１９）であり、該Ｒ_１８及び該Ｒ_１９は同一でも異なっていてもよく、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、Ｘ_３は末端官能基Ｆとの結合基であり、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ及びｊはそれぞれ独立して０〜３０の整数を示し、（ｆ＋ｇ）は１〜３０の整数を示し、ポリアミノ酸誘導体の総重合数である（ｆ＋ｇ＋ｈ＋ｉ＋ｊ）は１〜３０であり、前記［Ｄ］が結合したアスパラギン酸単位、前記Ｒ_１７が結合したアスパラギン酸単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型のアスパラギン酸単位が、それぞれ独立してランダムな配列である。］で示される置換基であることが好ましい。In the [Type 2], R ₁ in the general formula (1) is a block copolymer of a polyethylene glycol segment and a polyaspartic acid derivative segment in which a nucleic acid antimetabolite is bonded to a side chain carboxy group, and the general formula (6) ) Or (7)

[Wherein [D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite, R ₁₆ is a polyethylene glycol segment, R ₁₇ is a hydroxyl group and / or -N (R ₁₈ ) CONH (R ₁₉ ), R ₁₈ and R ₁₉ may be the same or different, and are a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 8 carbon atoms (C 1 to C 8) which may be substituted with a tertiary amino group; ₃ is a bonding group to the terminal functional group F, f, g, h, i and j each independently represent an integer of 0 to 30; (f + g) represents an integer of 1 to 30; (F + g + h + i + j) is from 1 to 30, and the aspartic acid unit to which [D] is bonded, the aspartic acid unit to which R ₁₇ is bonded, and the aspartic acid in which the side chain carboxy group is an intramolecularly cyclized aspartic acid Unit is German It is an upright random array. ] Is preferable.

該［Ｄ］の核酸代謝拮抗剤は前述と同義であり、例えば、ピリミジン系代謝拮抗剤、プリン系代謝拮抗剤、トリアジン系代謝拮抗剤等が挙げられる。アミノ基及び／又は水酸基を有する核酸代謝拮抗剤を用いる事が好ましい。より好ましくは、ヌクレオシド塩基にアミノ基を有する核酸代謝拮抗剤であり、該アミノ基によりアスパラギン酸ユニットのカルボキシ基にアミド結合できる核酸代謝拮抗剤であることが好ましい。 The nucleic acid antimetabolite [D] has the same meaning as described above, and examples thereof include a pyrimidine antimetabolite, a purine antimetabolite, and a triazine antimetabolite. It is preferable to use a nucleic acid antimetabolite having an amino group and / or a hydroxyl group. More preferably, it is a nucleic acid antimetabolite having an amino group in a nucleoside base, and is preferably a nucleic acid antimetabolite which can be amide-bonded to a carboxy group of an aspartic acid unit by the amino group.

［式中、−Ｒｆは、式（１３）：

[Wherein, -Rf is represented by the formula (13):

［式中、−Ｒｆは、式（１４）：

[Wherein, -Rf is represented by the formula (14):

Ｒ_１７は、水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１８）ＣＯＮＨ（Ｒ_１９）である。該Ｒ_１８及びＲ_１９における、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基とは、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、ネオペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられ、好ましくはイソプロピル基、シクロへキシル基が挙げられる。
該三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基としては、例えば、２−ジメチルアミノエチル基、３−ジメチルアミノプロピル基、５−ジメチルアミノペンチル基、６−ジメチルアミノヘキシル基等が挙げられる。
該Ｒ_１８及びＲ_１９として好ましくは、エチル基、イソプロピル基、シクロへキシル基、３−ジメチルアミノプロピル基が挙げられる。R ₁₇ is a hydroxyl group and / or —N (R ₁₈ ) CONH (R ₁₉ ). In R ₁₈ and R ₁₉ , the linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C8) which may be substituted by a tertiary amino group includes, for example, a methyl group, an ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, isobutyl group, sec-butyl group, t-butyl group, 1-methylbutyl group, 2-methylbutyl group, neopentyl group, cyclohexyl group and the like, and preferably isopropyl group and cyclohexyl group. Is mentioned.
Examples of the linear, branched, or cyclic alkyl group having 1 to 8 carbon atoms (C1 to C8) which may be substituted with the tertiary amino group include a 2-dimethylaminoethyl group and a 3-dimethylaminopropyl group. , 5-dimethylaminopentyl group, 6-dimethylaminohexyl group and the like.
Preferred examples of R ₁₈ and R ₁₉ include an ethyl group, an isopropyl group, a cyclohexyl group, and a 3-dimethylaminopropyl group.

前記Ｒ_１７が水酸基である場合、カルボン酸の態様を示す。また、そのカルボン酸の任意の塩態様であっても良い。
前記Ｒ_１７は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１８）ＣＯＮＨ（Ｒ_１９）であるが、水酸基のみである場合、水酸基及び−Ｎ（Ｒ_１８）ＣＯＮＨ（Ｒ_１９）が共存する場合、若しくは−Ｎ（Ｒ_１８）ＣＯＮＨ（Ｒ_１９）のみである場合の態様を取り得る。水酸基と−Ｎ（Ｒ_１８）ＣＯＮＨ（Ｒ_１９）の存在比率は任意に設定されて良い。When R ₁₇ is a hydroxyl group, it represents an embodiment of a carboxylic acid. Further, any salt form of the carboxylic acid may be used.
R ₁₇ is a hydroxyl group and / or —N (R ₁₈ ) CONH (R ₁₉ ), but when it is only a hydroxyl group, when a hydroxyl group and —N (R ₁₈ ) CONH (R ₁₉ ) coexist, or —N An embodiment in which only (R ₁₈ ) CONH (R ₁₉ ) is used can be taken. Existence ratio of hydroxyl group and _{_{-N (R 18) CONH (R}} 19) may be arbitrarily set.

前記一般式（６）及び（７）におけるＲ_１６のポリエチレングリコールセグメントは、一般式（２４）

［式中、Ｒ_８は水素原子又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、ｋは５〜２，５００の整数であり、Ｘ_５’は側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したポリアスパラギン酸セグメントとの結合基を示す。］を用いることが好ましい。
すなわち、エチレンオキシ基；（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）単位の繰り返し構造によるエチレンオキシ基単位重合度が５〜２，５００ユニットのポリエチレングリコールセグメントであり、ポリエチレングリコール相当の平均分子量として０．２キロダルトン〜１５０キロダルトンのセグメント部であることが好ましい。より好ましくは重合度が１０〜１，０００ユニットであり、平均分子量として０．５キロダルトン〜５０キロダルトンであり、更に好ましくは重合度が２０〜５００ユニットで、平均分子量として１キロダルトン〜２０キロダルトンであり、殊更好ましくは重合度が２０〜３００ユニットで、平均分子量として１キロダルトン〜１２キロダルトンのポリエチレングリコール鎖を含むセグメント構造である。なお、該Ｒ_８の詳細は前述と同義である。The polyethylene glycol segment of R _{16 in} the general formulas (6) and (7) is represented by the general formula (24)

[Wherein, R ₈ is a hydrogen atom or a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C 1 to C ₈ ) which may have a substituent, and k is 5 to 2,500. X _{5 ′} is an integer, and X _{5 ′} represents a bonding group to a polyaspartic acid segment in which a nucleic acid antimetabolite is bonded to a side chain carboxy group. ] Is preferably used.
That is, an ethylene _group, ethylene group units polymerization degree of (CH 2 _CH 2 O) repeating structural units are polyethylene glycol segments 5～2,500 unit 0.2 kilodalton mean molecular weight of the polyethylene glycol equivalent It is preferred that the segment be ~ 150 kilodaltons. More preferably, the degree of polymerization is 10 to 1,000 units, and the average molecular weight is 0.5 to 50 kilodaltons. Still more preferably, the degree of polymerization is 20 to 500 units, and the average molecular weight is 1 to 200 kilodaltons. It is a kilodalton, particularly preferably a segment structure having a degree of polymerization of 20 to 300 units and a polyethylene glycol chain having an average molecular weight of 1 to 12 kilodalton. The details of the R ₈ have the same meanings as described above.

前記一般式（２４）におけるＸ_５’は側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したポリアスパラギン酸セグメントとの結合基を示す。該ポリアスパラギン酸セグメントと前記ポリエチレングリコールセグメントの結合部位は窒素官能基であり、該Ｘ_５’の一方の末端基は該窒素官能基と連結できる結合性官能基であり、もう一方の末端基は前記ポリエチレングリコールセグメントの酸素原子とエーテル結合、エステル結合、ウレタン結合又はカーボネート結合ができる結合性官能基を有する。よって、該Ｘ_５’は前記末端基を有する置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）アルキレン基であることが好ましい。X _{5 ′} in the general formula (24) represents a bonding group to a polyaspartic acid segment in which a nucleic acid antimetabolite is bonded to a side chain carboxy group. The binding site between the polyaspartic acid segment and the polyethylene glycol segment is a nitrogen functional group, one end group of the X _{5 ′} is a binding functional group that can be connected to the nitrogen functional group, and the other end group is It has a bonding functional group capable of forming an ether bond, an ester bond, a urethane bond or a carbonate bond with an oxygen atom of the polyethylene glycol segment. Therefore, X _{5 ′} is preferably a C 1 -C 8 alkylene group which may have a substituent having the terminal group.

該Ｘ_５’に係る結合基としては、ポリエチレングリコールセグメントとエーテル結合し、ポリアスパラギン酸セグメントと結合する結合基として、−（ＣＨ_２）_ｘ−（ｘは１〜８の整数を示す）、が挙げられる。ポリエチレングリコールセグメントとエステル結合し、ポリアスパラギン酸セグメントと結合する結合基として、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−（ｘは１〜８の整数を示す）が挙げられる。ポリエチレングリコールセグメントとウレタン結合し、ポリアスパラギン酸セグメントと結合結合する結合基として、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ_２）_ｘ−（ｘは１〜８の整数を示す）が挙げられる。
また、ポリエチレングリコールセグメントとカーボネート結合し、ポリアスパラギン酸セグメントと結合する結合基として、−ＣＯＯ−（ＣＨ_２）_ｘ−（ｘは１〜８の整数を示す）を挙げることができる。
該Ｘ_５として、好ましくはポリエチレングリコールセグメントとエーテル結合し、ポリアスパラギン酸セグメントと結合する結合基であり、−（ＣＨ_２）_ｘ−（ｘは１〜８の整数を示す）である。As the bonding group relating to X _{5 ′} , as a bonding group bonded to a polyethylene glycol segment with an ether and bonded to a polyaspartic acid segment, — (CH ₂ ) _x — (x is an integer of 1 to 8) No. Examples of a bonding group that forms an ester bond with the polyethylene glycol segment and bonds with the polyaspartic acid segment include —CO— (CH ₂ ) _x — (x represents an integer of 1 to 8). Polyethylene glycol segment and urethane bond, a linking group that binds binding to polyaspartate _{_{segment, -CONH- (CH 2) x -}} (x is an integer of 1-8) can be mentioned.
Furthermore, polyethylene glycol segment and then a carbonate bond, a linking group which binds to polyaspartate _{_{segment, -COO- (CH 2) x -}} (x is an integer of 1-8) can be mentioned.
As the X _5, preferably bound polyethylene glycol segment and ether, a linking group which binds to polyaspartic acid segment, - a _(x is an integer of _{1~8) - (CH 2) x} .

前記Ｘ_３は、一般式（６）又は（７）で表されるポリアスパラギン酸誘導体セグメントと多分岐高分子担体の末端反応性官能基［Ｆ］との結合基である。該結合基Ｘ_３としては、該Ｒ_１の末端基と、末端反応性官能基［Ｆ］に対して、それぞれ結合可能な官能基を両末端に有する結合基であれば、特に限定されるものではない。Wherein X ₃ is a linking group of the general formula (6) or polyaspartic acid derivative segment and multi-branched polymer carrier terminal reactive functional group represented by (7) [F]. Examples of the linking group X _3, and the terminal groups of the R _1, with respect to terminal reactive functional group [F], if a linking group having each linkable functional groups at both ends, limited in particular is not.

該Ｘ_３は、一方の末端基が該ポリアスパラギン酸誘導体セグメントの末端基と結合して、もう一方の末端基が、末端反応性官能基［Ｆ］とエステル結合、アミド結合、チオエステル結合、ウレア結合又はウレタン結合することができる結合性官能基を有する、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキレン基である。
該Ｘ_３に係る結合基としては、末端反応性官能基［Ｆ］とアミド結合、エステル結合又はチオエステル結合する結合基として、例えば、−（ＣＨ_２）_ｙ−ＮＨ−（ｙは０〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｏ−（ｙは０〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｙ−Ｓ−（ｙは０〜８の整数を示す）、−（ＣＨ_２）_ｙ−ＣＯ−（ｙは０〜８の整数を示す）、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｙ−ＣＯ−（ｙは０〜８の整数を示す）等が挙げられる。The X ₃ has one of the end groups bonded to the terminal groups of the polyaspartic acid derivative segment, the other end group, terminal reactive functional group [F] and an ester bond, an amide bond, thioester bond, a urea It is an alkylene group having a carbon number (C1 to C8) which may have a substituent and has a bonding functional group capable of bonding or urethane bonding.
The bonding group according to the _{X 3,} terminal reactive functional group [F] and an amide bond, as a bonding group to an ester bond or thioester bond, for _{_{example, - (CH 2) y -NH-}} (y is 0 to 8 an _{_{integer), - (CH 2) y}} -O- (y is an integer of _{_{0~8), - (CH 2)}} y -S- (y is an integer of 0~8), - (CH ₂₎ _y -CO- (y is an integer of _{_{0~8), - NH- (CH 2}} ) y -CO- (y can be mentioned), etc. represents an integer of 0-8.

また、該Ｘ_３は「結合」であってよい。「結合」とは、特に結合基を介せず、多分岐高分子担体の末端反応性官能基と前記ポリアスパラギン酸誘導体セグメントに係る末端基が直接結合している態様を指す。X ₃ may be a “bond”. The term “bond” refers to an embodiment in which the terminal reactive functional group of the hyperbranched polymer carrier and the terminal group of the polyaspartic acid derivative segment are directly bonded without interposing a bonding group.

一般式（６）又は（７）で表されるポリエチレングリコールセグメントとポリアスパラギン酸誘導体セグメントのブロック共重合体である置換基は、総重合数である（ｆ＋ｇ＋ｈ＋ｉ＋ｊ）は１〜３０である。好ましくは重合数が４〜３０のポリアスパラギン酸誘導体セグメントであり、重合数５〜２５のセグメント構造が好ましい。
アスパラギン酸誘導体ユニットの各構成数を示すｆ、ｇ、ｈ、ｉ及びｊはそれぞれ独立して０〜３０の整数である。しかしながら、前記核酸代謝拮抗剤［Ｄ］が結合したアスパラギン酸誘導体ユニットは必須の構成であり、（ｆ＋ｇ）は１〜３０の整数を示す。好ましくは（ｆ＋ｇ）は４〜２５の整数であり、５〜２０であることがより好ましい。また、水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１８）ＣＯＮＨ（Ｒ_１９）であるＲ_１７が結合したアスパラギン酸誘導体ユニット数である（ｈ＋ｉ）及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型のアスパラギン酸誘導体ユニット数であるｊは任意の構成であり、（ｈ＋ｉ）及びｊは０〜２９である。
また、一般式（６）又は（７）で表される置換基は、前記［Ｄ］が結合したアスパラギン酸単位、前記Ｒ_１７が結合したアスパラギン酸単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型のアスパラギン酸単位が、局在化した配列の態様であっても良く、それぞれの構成単位に規則性がないランダム配列で構成されたポリマー構造であっても良く、つまり、その側鎖修飾体の配列順序において特に規則性のない配列である。The substituent, which is a block copolymer of the polyethylene glycol segment and the polyaspartic acid derivative segment represented by the general formula (6) or (7), has a total polymerization number (f + g + h + i + j) of 1 to 30. Preferably, it is a polyaspartic acid derivative segment having a polymerization number of 4 to 30, and a segment structure having a polymerization number of 5 to 25 is preferred.
F, g, h, i and j indicating the number of each component of the aspartic acid derivative unit are each independently an integer of 0 to 30. However, the aspartic acid derivative unit to which the nucleic acid antimetabolite [D] is bound is an essential component, and (f + g) represents an integer of 1 to 30. Preferably (f + g) is an integer of 4 to 25, more preferably 5 to 20. In addition, the number of aspartic acid derivative units to which the hydroxyl group and / or R _{17 of} —N (R ₁₈ ) CONH (R ₁₉ ) are bound (h + i) and the side chain carboxy group is an intramolecularly cyclized aspartic acid derivative unit The number j is an arbitrary configuration, and (h + i) and j are 0 to 29.
The substituent represented by the general formula (6) or (7) is an aspartic acid unit to which the above [D] is bonded, an aspartic acid unit to which the above R ₁₇ is bonded, and a side chain carboxy group which is an intramolecular cyclization type. Aspartic acid unit may be in the form of a localized sequence, or may be a polymer structure composed of a random sequence having no regularity in each of the constituent units, that is, a modified side chain thereof. The array has no particular order in the array order.

該［タイプ２］に係る核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物において、一般式（１）のＲ_２で示されるポリエチレングリコールセグメントを含む置換基を備えていても良い。該ポリエチレングリコールセグメントを含有する置換基とは、前記［タイプ１］に記載の同義である。
該Ｒ_２は、一般式（８）

［式中、Ｒ_８は水素原子又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、ｋは５〜２，５００の整数であり、Ｘ_１は末端官能基Ｆとの結合基を示す。］で示されるポリエチレングリコールセグメントであることが好ましい。ここで、Ｒ_８、ｋ及びＸ_１は前述と同義である。In nucleic acid metabolism antagonist binding multi-branched compound according to the [Type 2], may include a substituent group containing a polyethylene glycol segment represented by R ₂ in the general formula (1). The substituent containing the polyethylene glycol segment has the same meaning as described in the above [Type 1].
The R ₂ has the general formula (8)

該［タイプ２］に係る核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物において、ポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニットが連結した置換基（Ｒ_１）及び、任意のポリエチレングリコールセグメントを含む置換基（Ｒ_２）、並びに、更に任意のコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基（Ｒ_３）が結合していても良い。これらの任意の置換基は、Ｒ_１に係るポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニットが連結した置換基から、該核酸代謝拮抗剤が解離した残基である。
該［タイプ２］のＲ_１に係るポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニットが連結した置換基が、一般式（６）又は（７）で示されるポリエチレングリコールセグメントとポリアスパラギン酸誘導体のブロック共重合体である場合、該Ｒ_３は、前記一般式（６）又は（７）において、核酸代謝拮抗剤；［Ｄ］を具備するアスパラギン酸ユニットが欠如したポリアスパラギン酸誘導体となる。すなわち一般式（６）又は（７）において、ｆ及びｇが０であり、Ｒ_１６、Ｒ_１７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｘ_３、ｈ、ｉ及びｊが前述と同義である置換基である。In the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound according to [Type 2], a substituent (R ₁ ) in which a polyethylene glycol segment and a nucleic acid antimetabolite-binding succinic acid monoamide unit are linked, and a substituent containing an arbitrary polyethylene glycol segment (R ₂ ) and a substituent (R ₃ ) further containing any succinic monoamide derivative residue and / or succinimide residue may be bonded. These optional substituents, the substituents polyethylene glycol segment and nucleic acid metabolism antagonist binding succinic acid monoamide units according to R ₁ are linked, a residue nucleic acid metabolism antagonist is dissociated.
The polyethylene glycol segment represented by the general formula (6) or (7) and a polyaspartic acid derivative having a substituent in which the polyethylene glycol segment relating to R ₁ of [Type 2] is linked to a nucleic acid antimetabolite-binding succinic acid monoamide unit In the case of the block copolymer, R ₃ is a polyaspartic acid derivative having a nucleic acid antimetabolite; [D] and lacking an aspartic acid unit in the general formula (6) or (7). That is, in the general formula (6) or (7), f and g are 0, and R ₁₆ , R ₁₇ , R ₁₈ , R ₁₉ , X ₃ , h, i and j are the substituents as defined above. .

該［タイプ２］の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物において、前記ポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニットが連結した置換基（Ｒ_１）、前記ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基（Ｒ_２）、並びに前記コハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基（Ｒ_３）が結合していない末端官能基［Ｆ］を含んでいても良い。
該［Ｆ］はアミノ基、水酸基、カルボキシ基、メルカプト基からなる群から選択される１種以上の末端官能基である。また、前記末端官能基が、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基を有する保護基で修飾されたアミノ基、水酸基、カルボキシ基、メルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基であっても良い。すなわち、一般式（１）における［Ｆ］は、末端反応性官能基のままであっても良く、末端反応性官能基の保護基修飾体であっても良く、これらが混在した基であっても良い。該［Ｆ］に係る末端官能基は、前記［タイプ１−１］と同義である。In the [type 2] multi-branched nucleic acid antimetabolite-binding compound, a substituent (R ₁ ) in which the polyethylene glycol segment is linked to the nucleic acid antimetabolite-binding succinic monoamide unit, and a substituent (R ₁ ) containing the polyethylene glycol segment ₂ ) and a terminal functional group [F] to which the substituent (R ₃ ) containing the succinic monoamide derivative residue and / or the succinimide residue is not bonded.
[F] is one or more terminal functional groups selected from the group consisting of amino groups, hydroxyl groups, carboxy groups, and mercapto groups. In addition, the terminal functional group is selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group, and a mercapto group modified with a protective group having an alkyl group having carbon number (C1 to C6) which may have a substituent. It may be one or more functional groups. That is, [F] in the general formula (1) may be a terminal-reactive functional group or may be a modified protective group of the terminal-reactive functional group. Is also good. The terminal functional group according to [F] has the same meaning as in [Type 1-1].

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物が前記［タイプ２］である場合、一般式（１）におけるそれぞれの置換基結合数は、ｍは０〜１９９の整数であり、ｎは１〜２００の整数であり、ｏは０〜１９９の整数であり、ｐは０〜１９９の整数である。好ましくは、ｍは０〜１２０の整数であり、ｎは２〜１００の整数であり、ｏは０〜１００の整数であり、ｐは０〜８０の整数である。より好ましくは、ｍは０〜８０の整数であり、ｎは５〜５０の整数であり、ｏは０〜５０の整数であり、ｐは０〜５０の整数である。また、多分岐高分子担体の末端置換基総数である（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）は４〜２００の整数である。好ましくは４〜１５０であり、より好ましくは８〜１００である。
Ｒ_１で示されるポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニットが連結した置換基の結合数は、核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の薬物動態特性や、核酸代謝拮抗剤の解離速度を踏まえ、適宜設定されるべきである。
該［タイプ２］は、該Ｒ_１がポリエチレングリコールセグメントと核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドの２種類の機能性官能基を一体化した置換基を用いるため、多分岐化合物において、少ない置換基数で所望の物性を得ることができる。更に、核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドをその重合体とすることで、１つの置換基に複数の核酸代謝拮抗剤を結合させることができる。このため、核酸代謝拮抗剤含量を高くすることができて好ましい。したがって、Ｒ_１の結合数；ｎを低くすることも可能である。When the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention is the [Type 2], m is an integer of 0 to 199, and n is 1 to 200, in the general formula (1). Is an integer of 0 to 199, and p is an integer of 0 to 199. Preferably, m is an integer from 0 to 120, n is an integer from 2 to 100, o is an integer from 0 to 100, and p is an integer from 0 to 80. More preferably, m is an integer of 0 to 80, n is an integer of 5 to 50, o is an integer of 0 to 50, and p is an integer of 0 to 50. (M + n + o + p), which is the total number of terminal substituents of the multi-branched polymer carrier, is an integer of 4 to 200. Preferably it is 4-150, More preferably, it is 8-100.
Bonding number of substituents polyethylene glycol segment and nucleic acid metabolism antagonist binding succinic acid monoamide units represented by R ₁ are linked, the or pharmacokinetic properties of the nucleic acid metabolism antagonist binding hyperbranched compounds, the dissociation rate of nucleic acid metabolism antagonist It should be set accordingly.
In the [Type 2], the R ₁ uses a substituent in which two kinds of functional functional groups of a polyethylene glycol segment and a nucleic acid antimetabolite-binding succinic acid monoamide are integrated. Desired physical properties can be obtained. Furthermore, a plurality of nucleic acid antimetabolites can be bonded to one substituent by using succinic acid monoamide bound with a nucleic acid antimetabolite as a polymer thereof. Therefore, the content of the nucleic acid antimetabolite can be preferably increased. Therefore, it is also possible to lower the number of bonds of R ₁ ; n.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、該多分岐化合物の水溶液を調製して、非経口的に投与して用いることが好ましい。該水溶液は、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ溶液）、５％ブドウ糖水溶液等により溶解して調製される。 The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention is preferably prepared by preparing an aqueous solution of the hyperbranched compound and parenterally administering the solution. The aqueous solution is prepared by dissolving in water, physiological saline, phosphate buffered saline (PBS solution), 5% glucose aqueous solution or the like.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、薬効の発現と骨髄抑制といった副作用と相関することが考えられる。一般的に、分子量が１０キロダルトン以下であると、非経口的に投与した後、生体内からの***が速やかに行われる。該形態においては、薬効を発現するより先に体外に排出され、所望の薬効が得られないことが考えられる。一方で、分子量が２００キロダルトン以上であると、生体内における化合物の貯留時間が延長しすぎて核酸代謝拮抗剤の副作用を増強させてしまうことが考えられる。したがって、本発明の多分岐化合物は、核酸代謝拮抗剤をコハク酸モノアミドを介して具備させ、且つ分子量は１０キロダルトン以上２００キロダルトン以下とすることで、優れた薬効を維持しつつ、副作用の少ない治療効果の高い医薬品を提供することができる。該多分岐化合物における分子量は２０キロダルトン以上１６０キロダルトン以下であることが、より好ましい。 It is considered that the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention is correlated with the onset of drug efficacy and side effects such as myelosuppression. Generally, when the molecular weight is 10 kilodaltons or less, excretion from the living body is promptly performed after parenteral administration. In this mode, it is considered that the drug is excreted outside the body before the drug exerts its effect, and the desired effect cannot be obtained. On the other hand, when the molecular weight is 200 kilodaltons or more, it is conceivable that the retention time of the compound in the living body becomes too long, thereby increasing the side effects of the nucleic acid antimetabolite. Therefore, the hyperbranched compound of the present invention is provided with a nucleic acid antimetabolite via succinic acid monoamide, and has a molecular weight of 10 to 200 kDa, thereby maintaining excellent drug efficacy and producing side effects. It is possible to provide a drug having a small therapeutic effect and a high therapeutic effect. More preferably, the molecular weight of the hyperbranched compound is from 20 kDa to 160 kDa.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、該水溶液において、自己会合性を示さない物性であることが好ましい。ここで自己会合性とは、当該多分岐化合物が１０分子より多くの分子で自己会合して凝集体を形成する物性であることを示す。したがって、本発明における「自己会合性を示さない物性」とは、水溶液中における当該多分岐化合物が単分子体で存在するか、若しくは１０分子以下の自己会合体を形成する態様を示す。
本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の自己会合性の指標として、レーザー光を用いた光散乱強度を用いることが有効である。すなわち、当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の水溶液中での自己会合性を、レーザー光散乱強度を指標として確認することができる。その際、トルエンを光散乱強度標準試料として、トルエンに対する相対強度を指標として、当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の水溶液中での自己会合性を確認する方法が有効である。
本発明において、当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の濃度が１ｍｇ／ｍＬの水溶液をレーザー光散乱光度計にて計測し、光散乱強度がトルエンの光散乱強度に対する相対強度として５倍以下である場合、自己会合性を示さない物性であり、水溶液中においてほぼ単分子体〜数分子程度の会合体で分散していると考えられる。好ましくは、光散乱強度がトルエンの光散乱強度に対する相対強度として３倍以下となる多分岐化合物である。The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention preferably has physical properties that do not exhibit self-association in the aqueous solution. Here, the self-association property indicates that the multibranched compound has a property of self-associating with more than 10 molecules to form an aggregate. Therefore, the term “physical properties that do not exhibit self-association” in the present invention refers to an embodiment in which the multibranched compound in the aqueous solution exists as a single molecule or forms a self-association body of 10 molecules or less.
It is effective to use the light scattering intensity using laser light as an index of the self-association of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention. That is, the self-association property of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound in an aqueous solution can be confirmed using the laser light scattering intensity as an index. At this time, a method of confirming the self-association property of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound in an aqueous solution using toluene as a light scattering intensity standard sample and using the relative intensity to toluene as an index is effective.
In the present invention, an aqueous solution having a concentration of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of 1 mg / mL is measured with a laser light scattering photometer, and the light scattering intensity is 5 times or less as a relative intensity to the light scattering intensity of toluene. In this case, it is considered that the material has no self-associating property and is dispersed in an aqueous solution with an aggregate of about one molecule to several molecules. Preferably, it is a hyperbranched compound whose light scattering intensity is three times or less as a relative intensity to the light scattering intensity of toluene.

前記レーザー光散乱光度計としては、例えば、大塚電子社製ダイナミック光散乱光度計ＤＬＳ−８０００ＤＬ（測定温度２５℃、測定角度：９０°、波長：６３２．８ｎｍ、ＮＤフィルター：５％、ＰＨ１：ＯＰＥＮ、ＰＨ２：ＳＬＩＴ、サンプル濃度：１ｍｇ／ｍＬ）を用い、当該多分岐化合物の濃度が１ｍｇ／ｍＬの水溶液を、レーザー光散乱光度計にて光散乱強度を計測する測定方法を挙げることができる。なお、光散乱強度測定の標準物質して用いるトルエンは、試薬レベルの純度であれば特に限定されるものではなく用いることができる。光散乱分析の試料調製において通常行う、前処理濾過を行ったトルエンを用いることが好ましい。
当該核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は，この測定方法において、光散乱強度がトルエンの光散乱強度に対する相対強度として５倍以下である場合が好ましく，より好ましくは３倍以下である。この場合、下限値は特に限定されるものではなく、明確な光散乱強度を示さない場合であり、水溶液中において自己会合性を示さない状態であり、水溶液中において、ほぼ単分子体〜数分子程度の会合体で分散していることを示している。As the laser light scattering photometer, for example, a dynamic light scattering photometer DLS-8000DL manufactured by Otsuka Electronics Co., Ltd. (measuring temperature: 25 ° C., measuring angle: 90 °, wavelength: 632.8 nm, ND filter: 5%, PH1: OPEN) , PH2: SLIT, sample concentration: 1 mg / mL) and measuring the light scattering intensity of an aqueous solution having a concentration of the hyperbranched compound of 1 mg / mL with a laser light scattering photometer. Toluene used as a standard substance for light scattering intensity measurement is not particularly limited as long as it has a reagent-level purity, and can be used. It is preferable to use toluene which has been subjected to pretreatment filtration, which is usually performed in sample preparation for light scattering analysis.
In this measurement method, the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound preferably has a light scattering intensity of 5 times or less, more preferably 3 times or less as a relative intensity to the light scattering intensity of toluene. In this case, the lower limit is not particularly limited, is a case where no clear light scattering intensity is exhibited, is a state where it does not show self-association in an aqueous solution, and in an aqueous solution, almost monomolecular to several molecules This indicates that the aggregates are dispersed in a certain degree.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の、水溶液中における自己会合性の有無は、骨髄抑制といった副作用と相関する。核酸代謝拮抗剤は、副作用として白血球減少等の骨髄抑制が発現し、該治療剤を用いた治療継続を困難とする問題がある。このため、骨髄抑制の少ない核酸代謝拮抗剤治療剤を提供することは、悪性腫瘍等の治療方法において、非常に有用である。
本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、水溶液中の物性として粒径が小さい多分岐高分子担体を用いて、核酸代謝拮抗剤のプロドラッグを調製するとともに、ポリエチレングリコールセグメントを配することにより自己会合性の低い物性の高分子化プロドラッグを調製したものである。該誘導体は、水溶液中における自己会合性を示さない物性となり、結果として骨髄抑制が少ない治療効果の高い医薬品を提供することができる。The presence or absence of self-association of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention in an aqueous solution correlates with a side effect such as myelosuppression. Nucleic acid antimetabolites have a problem that bone marrow suppression such as leukopenia appears as a side effect, making it difficult to continue treatment using the therapeutic agent. For this reason, providing a therapeutic agent for a nucleic acid antimetabolite with less myelosuppression is very useful in a method for treating a malignant tumor or the like.
The multi-branched nucleic acid antimetabolite-binding compound of the present invention is prepared by using a multi-branched polymer carrier having a small particle size as a physical property in an aqueous solution to prepare a prodrug of a nucleic acid antimetabolite and disposing a polyethylene glycol segment. To prepare a polymerized prodrug having low self-association properties. The derivative has physical properties that do not exhibit self-association in an aqueous solution, and as a result, can provide a medicament with little bone marrow suppression and a high therapeutic effect.

次に、本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の製造方法について説明する。
本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、末端反応性官能基を有する多分岐高分子担体を用い、これにポリエチレングリコールセグメント、並びに核酸代謝拮抗剤を結合させたコハク酸モノアミドユニットを含む置換基を結合させることで調製することができる。
当該多分岐化合物の製造方法としては、多分岐高分子担体にポリエチレングリコールセグメント及びコハク酸モノアミドユニットを同時に反応させて、その後、核酸代謝拮抗剤を化学結合させる方法や、あらかじめコハク酸モノアミドユニットに核酸代謝拮抗剤を結合させた化合物を調製し、多分岐高分子担体にポリエチレングリコールセグメント及びあらかじめ調製した核酸代謝拮抗剤を結合させたコハク酸モノアミドユニットの化合物を同時に反応させる方法が挙げられる。又は、ポリエチレングリコールセグメントを多分岐高分子担体に反応させ、その後、これにコハク酸モノアミドユニットを化学結合させ、最後に、核酸代謝拮抗剤を化学結合させる方法でも製造することができる。若しくは、ポリエチレングリコールセグメントを多分岐高分子担体に反応させ、その後、核酸代謝拮抗剤を結合させたコハク酸モノアミドユニットを含む化合物を反応させる方法などが挙げられる。当該製造方法としては、該ポリエチレングリコールセグメント導入量及び該核酸代謝拮抗剤の結合量を制御しやすいことから、２種の置換基を順次結合させる後者で示した２つの方法を用いることが好ましい。
前記反応終了後、任意に精製工程を施しても良く、医薬品として適用することができるポリエチレングリコールセグメント及び核酸代謝拮抗剤を末端官能基に導入した多分岐化合物を製造することができる。Next, a method for producing the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention will be described.
An antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention uses a hyperbranched polymer carrier having a terminal reactive functional group, a polyethylene glycol segment, and a substituted succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound. It can be prepared by attaching a group.
Examples of the method for producing the multi-branched compound include a method in which a polyethylene glycol segment and a succinic acid monoamide unit are simultaneously reacted with a multi-branched polymer carrier, and then a nucleic acid antimetabolite is chemically bonded to the multi-branched polymer carrier. A method in which a compound to which an antimetabolite is bound is prepared, and a compound of a succinic acid monoamide unit in which a polyethylene glycol segment and a previously prepared nucleic acid antimetabolite are bound to a hyperbranched polymer carrier, is simultaneously reacted. Alternatively, it can also be produced by a method in which a polyethylene glycol segment is reacted with a hyperbranched polymer carrier, and thereafter, a succinic acid monoamide unit is chemically bonded thereto, and finally, a nucleic acid antimetabolite is chemically bonded. Alternatively, a method of reacting a polyethylene glycol segment with a multi-branched polymer carrier and thereafter reacting a compound containing a succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite has been bound may be used. As the production method, it is preferable to use the latter two methods of sequentially linking two types of substituents because the amount of the introduced polyethylene glycol segment and the amount of the nucleic acid antimetabolite can be easily controlled.
After completion of the reaction, a purification step may be arbitrarily performed to produce a multibranched compound in which a polyethylene glycol segment and a nucleic acid antimetabolite which can be applied as a pharmaceutical are introduced into a terminal functional group.

以下の、本発明に係る核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の製造方法例について、２つのタイプ別に説明する。
前記［タイプ１］の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を調製する場合は、末端反応性官能基を有する多分岐高分子担体に対し、該末端反応性官能基と結合し得る官能基を有するポリエチレングリコールセグメント化合物、並びに該末端反応性官能基と結合し得る官能基を有する核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニットを含む化合物を、順次又は同時に反応させることで、目的の［タイプ１］の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を調製することができる。ポリエチレングリコールセグメント化合物と核酸代謝拮抗剤結合コハク酸モノアミドユニットを含む化合物の結合性官能基は、同じ種類の官能基を用いても、異種の官能基を用いても何れであっても良いが、同種の官能基を用いた方が好ましい。Hereinafter, examples of the method for producing a nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound according to the present invention will be described for each of two types.
In the case of preparing the [Type 1] nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound, a polyethylene having a functional group capable of binding to the terminal reactive functional group is added to a multibranched polymer carrier having a terminal reactive functional group. By reacting, sequentially or simultaneously, a glycol segment compound and a compound containing a nucleic acid antimetabolite binding succinic acid monoamide unit having a functional group capable of binding to the terminal reactive functional group, the desired [Type 1] nucleic acid metabolism Antagonist-binding hyperbranched compounds can be prepared. The binding functional group of the polyethylene glycol segment compound and the compound containing the nucleic acid antimetabolite binding succinic acid monoamide unit may use the same type of functional group, or may use any of different types of functional groups, It is preferable to use the same kind of functional group.

例えば、末端反応性官能基がカルボキシ基の多分岐高分子担体を用い、これにアミノ基を有するポリエチレングリコールセグメント化合物と、カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤を結合させたアスパラギン酸誘導体を、アミド縮合反応条件下で反応させることにより、目的の［タイプ１］の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を調製することができる。この際、それぞれの反応量を制御することにより、所望のポリエチレングリコールセグメント含有量や、核酸代謝拮抗剤含有量の化合物を調製することができる。該反応終了後、任意に精製工程を施しても良く、医薬品として適用することができる当該化合物を製造することができる。 For example, an amide condensation reaction is carried out by using a polybranched polymer carrier having a carboxy group as a terminal reactive functional group, a polyethylene glycol segment compound having an amino group, and an aspartic acid derivative having a carboxy group bound to a nucleic acid antimetabolite. By reacting under the conditions, the target [Type 1] nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound can be prepared. At this time, a compound having a desired polyethylene glycol segment content or a nucleic acid antimetabolite content can be prepared by controlling the amount of each reaction. After completion of the reaction, a purification step may be arbitrarily performed, whereby the compound applicable as a pharmaceutical can be produced.

一方、前記［タイプ２］の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を調製する場合は、末端反応性官能基を有する多分岐高分子担体に対し、該末端反応性官能基と結合し得る官能基を有するポリエチレングリコールセグメント−核酸代謝拮抗剤結合（ポリ）アスパラギン酸が連結した化合物を反応させることにより達成できる。
例えば、アミノ基を有するポリエチレングリコールセグメント化合物を反応開始剤として、Ｌ−アスパラギン酸−Ｎ−カルボン酸無水物を開環重合させることにより、ポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸を得る。これのアスパラギン酸側鎖カルボキシ基に、核酸代謝拮抗剤を結合させることにより、ポリエチレングリコールセグメント−核酸代謝拮抗剤結合（ポリ）アスパラギン酸結合化合物を調製することができる。これを末端反応性官能基がカルボキシ基の多分岐高分子担体に対して、アミド縮合反応条件下で反応させることにより、目的の［タイプ２］の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を調製することができる。該反応終了後、任意に精製工程を施しても良く、医薬品として適用することができる当該化合物を製造することができる。On the other hand, when preparing the [type 2] nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound, a functional group capable of binding to the terminal reactive functional group is added to the multibranched polymer carrier having a terminal reactive functional group. The reaction can be achieved by reacting a compound having a linked polyethylene glycol segment-nucleic acid antimetabolite (poly) aspartic acid.
For example, polyethylene glycol-polyaspartic acid is obtained by subjecting L-aspartic acid-N-carboxylic anhydride to ring-opening polymerization using a polyethylene glycol segment compound having an amino group as a reaction initiator. By binding a nucleic acid antimetabolite to the aspartic acid side chain carboxy group, a polyethylene glycol segment-nucleic acid antimetabolite-bound (poly) aspartic acid-binding compound can be prepared. This is reacted with a multi-branched polymer carrier having a carboxy group having a terminal reactive functional group under an amide condensation reaction condition to prepare a desired [Type 2] nucleic acid antimetabolite-binding multi-branched compound. Can be. After the completion of the reaction, a purification step may be optionally performed to produce the compound applicable as a pharmaceutical.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、生体内に投与後、核酸代謝拮抗剤を徐々に遊離する性質を有し、該核酸代謝拮抗剤を有効成分とする医薬としての用途を有する。 The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention has a property of gradually releasing a nucleic acid antimetabolite after administration into a living body, and has a use as a drug containing the nucleic acid antimetabolite as an active ingredient.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の医薬品としての用途は、該核酸代謝拮抗剤により治療効果を奏する疾病であれば特に限定されるものではない。例えば、悪性腫瘍、ウイルス疾患等の治療に用いられる医薬に適する。特に好ましくは、悪性腫瘍の治療用医薬である。悪性腫瘍としては、非小細胞肺癌、膵臓癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、乳癌、卵巣癌、膀胱癌、ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫等を挙げることができる。 The use of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention as a medicament is not particularly limited as long as the disease exerts a therapeutic effect by the nucleic acid antimetabolite. For example, it is suitable for a medicament used for treatment of malignant tumors, viral diseases and the like. Particularly preferred are medicaments for treating malignant tumors. Examples of malignant tumors include non-small cell lung cancer, pancreatic cancer, gastric cancer, colon cancer, rectal cancer, breast cancer, ovarian cancer, bladder cancer, AIDS-related Kaposi's sarcoma, and the like.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を含む医薬は、医薬品として通常容認される他の添加剤を有していても良い。該添加剤としては、賦形剤、増量剤、充填剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、潤滑剤、界面活性剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤及び等張化剤等が挙げられる。 The drug containing the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention may have other additives generally accepted as a drug. Such additives include excipients, extenders, fillers, binders, wetting agents, disintegrants, lubricants, surfactants, dispersants, buffers, preservatives, solubilizing agents, preservatives, and flavoring. Agents, soothing agents, stabilizers, tonicity agents and the like.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を含む医薬は、治療用の医薬品製剤として調製されても良い。該製剤としては、経口、注射、直腸内投与、門脈内投与、臓器の灌流液に混合、患部臓器への局所投与等いずれの投与方法でも可能であるが、好ましくは非経口的投与であり、より好ましくは注射による静脈内投与、動脈内投与又は患部臓器への局所投与である。 The medicament containing the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of the present invention may be prepared as a pharmaceutical preparation for treatment. The preparation can be administered by any method such as oral, injection, rectal administration, portal vein administration, mixing with a perfusate of an organ, and topical administration to an affected organ, but parenteral administration is preferred. And more preferably, intravenous administration, intraarterial administration or local administration to an affected organ by injection.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を含む医薬の投与量は、病状、投与方法、患者の状態、年齢、体重等により異なるが、通常、核酸代謝拮抗剤換算で体表面積１ｍ^２あたり１ｍｇ〜５，０００ｍｇ、好ましくは１０ｍｇ〜２，０００ｍｇである。投与用法としては、１日１回又は数回に分けて投与しても良い。投与は連日行なうこともできるが、数日から数ヶ月の間をおいて反復投与を行なっても良い。必要に応じて前記以外の投与方法、投与量、投与スケジュールを用いることができる。The dosage of a pharmaceutical comprising a nucleic acid metabolism antagonist binding multi-branched compound of the present invention, conditions, administration method, the condition of the patient, age, varies depending body weight and the like, usually, body surface area 1 m ² per 1mg in nucleic acid metabolism antagonists terms 5,000 mg, preferably 10 mg to 2,000 mg. As an administration method, it may be administered once or several times a day. The administration can be performed every day, but may be repeated every several days to several months. If necessary, other administration methods, dosage amounts, and administration schedules can be used.

以下、本発明を実施例により更に説明する。ただし、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１から８の「核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量」は、以下の計算式により算出した。
［核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量］＝［多分岐高分子担体の分子量］＋［（ポリエチレングリコールセグメント＋ポリエチレングリコールの結合基残基）分子量 × 結合数］＋［核酸代謝拮抗剤の結合残基分子量 × 結合数］＋［アスパラギン酸モノアミドの結合残基分子量 × 結合数］Hereinafter, the present invention will be further described with reference to Examples. However, the present invention is not limited to these examples.
"Molecular weight of nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound" in Examples 1 to 8 was calculated by the following formula.
[Molecular weight of nucleic acid antimetabolite binding hyperbranched compound] = [molecular weight of hyperbranched polymer carrier] + [(polyethylene glycol segment + polyethylene glycol bonding group residue) molecular weight × number of bonds] + [binding of nucleic acid antimetabolite Residue molecular weight × number of bonds] + [bonding residue molecular weight of aspartic acid monoamide × number of bonds]

本実施例において「ポリエチレングリコールセグメント」はポリエチレングリコールセグメントに結合基であるプロピレンアミンが一体となったポリエチレングリコールセグメント化合物を用いており、これらを合算してポリエチレングリコールセグメント分子量とした。
したがって、本実施例の「核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量」は、主要構成である、“多分岐高分子担体の分子量”、“（ポリエチレングリコールセグメント＋該結合基残基）の総分子量”及び“核酸代謝拮抗剤の総分子量”、並びに“アスパラギン酸モノアミドユニット残基の総分子量”を足し合わせた計算値を用いた。In this example, the “polyethylene glycol segment” uses a polyethylene glycol segment compound in which a propylene amine serving as a bonding group is integrated with the polyethylene glycol segment, and these are combined to obtain a polyethylene glycol segment molecular weight.
Therefore, the “molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound” in the present embodiment is mainly defined as “the molecular weight of the hyperbranched polymer carrier” and “the total molecular weight of (polyethylene glycol segment + residue of the bonding group)”. Calculated value obtained by adding "total molecular weight of nucleic acid antimetabolite" and "total molecular weight of aspartic acid monoamide unit residue" was used.

ポリエチレングリコールセグメントの分子量は、導入反応前のポリエチレングリコールセグメント化合物において、ポリエチレングリコール標準物質を基準としたＧＰＣ分析におけるピークトップ分子量を採用した。 As the molecular weight of the polyethylene glycol segment, the peak top molecular weight in GPC analysis based on the polyethylene glycol standard substance in the polyethylene glycol segment compound before the introduction reaction was adopted.

ポリエチレングリコールセグメントの結合数は、多分岐高分子担体とポリエチレングリコールセグメント化合物の結合反応において、ポリエチレングリコールセグメント化合物の仕込み量に対する、該反応における消費率から算出した。
前記ポリエチレングリコール化合物の消費量は、以下の計算式により算出した。
多分岐高分子担体とポリエチレングリコールセグメント化合物の結合反応における、反応開始前（ジイソプロピルカルボジイミド添加前）の反応液１０μＬを１％リン酸９０μＬで希釈し、ＨＰＬＣ（使用カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５１０／３００ＧＬ、ＧＥヘルスケア社製、検出器：示唆屈折検出分析器（ＲＩ））にて分析した。
この時のポリエチレングリコールセグメント化合物に相当するピーク面積をＡｓとし、反応終了時の反応液１０μＬを、１％リン酸９０μＬで希釈しＨＰＬＣにて分析したときのポリエチレングリコール化合物に相当するピーク面積をＡｔとした。
そして、以下の式によりポリエチレングリコールセグメントの消費率を算出した。
［ポリエチレングリコールセグメント化合物の消費率］＝１ − Ａｔ／ＡｓThe number of bonded polyethylene glycol segments was calculated from the consumption rate of the charged polyethylene glycol segment compound to the amount of the charged polyethylene glycol segment compound in the bonding reaction between the multibranched polymer carrier and the polyethylene glycol segment compound.
The consumption of the polyethylene glycol compound was calculated by the following formula.
In the binding reaction between the hyperbranched polymer carrier and the polyethylene glycol segment compound, 10 μL of the reaction solution before the start of the reaction (before addition of diisopropylcarbodiimide) was diluted with 90 μL of 1% phosphoric acid, and HPLC (column used: Superdex 75 10/300 GL, The analysis was performed by a detector: suggestive refraction detection analyzer (RI) manufactured by GE Healthcare.
The peak area corresponding to the polyethylene glycol segment compound at this time is defined as As, and the peak area corresponding to the polyethylene glycol compound when 10 μL of the reaction solution at the end of the reaction is diluted with 90 μL of 1% phosphoric acid and analyzed by HPLC is represented by At. And
And the consumption rate of the polyethylene glycol segment was calculated by the following formula.
[Consumption rate of polyethylene glycol segment compound] = 1-At / As

核酸代謝拮抗剤の含有率及び結合数は、得られた実施例及び比較例の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を１０ｍｇ精秤し、アセトニトリル１ｍＬを加えて溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１ｍＬを加えて混合し、３０分間撹拌することで加水分解した。
この加水分解溶液に、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸１ｍＬを加え、水／アセトニトリル混液（１：１）を加えて正確に１０ｍＬとした。この溶液を、ＨＰＬＣを用いて遊離する核酸代謝拮抗剤を定量分析することにより、核酸代謝拮抗剤の含有率を算出した。
核酸代謝拮抗剤の結合数は、上記核酸代謝拮抗剤含有率に基づき核酸代謝拮抗剤分子量及び多分岐高分子担体分子量から算出した。
また、核酸代謝拮抗剤結合の総分子量は以下の式より算出した。
［核酸代謝拮抗剤結合の総分子量］＝［核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物１分子あたりの核酸代謝拮抗剤の結合数］ × ［核酸代謝拮抗剤の分子量］The content of the nucleic acid antimetabolite and the number of bonds were determined by precisely weighing 10 mg of the obtained multi-branched nucleic acid antimetabolite compound of each of Examples and Comparative Examples, adding and dissolving 1 mL of acetonitrile, and adding a 1 mol / L aqueous sodium hydroxide solution. 1 mL was added, mixed, and hydrolyzed by stirring for 30 minutes.
1 mol / L hydrochloric acid (1 mL) was added to this hydrolysis solution, and a water / acetonitrile mixture (1: 1) was added to make exactly 10 mL. The content of the nucleic acid antimetabolite was calculated from the solution by quantitatively analyzing the released nucleic acid antimetabolite using HPLC.
The number of bonded nucleic acid antimetabolite was calculated from the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite and the molecular weight of the hyperbranched polymer carrier based on the content of the nucleic acid antimetabolite.
The total molecular weight of the nucleic acid antimetabolite was calculated by the following equation.
[Total molecular weight of nucleic acid antimetabolite binding] = [Number of nucleic acid antimetabolite bound per molecule of nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound] × [Molecular weight of nucleic acid antimetabolite]

実施例及び比較例の「ポリエチレングリコールセグメントの含有率」は、以下の計算式で算出した。
［ポリエチレングリコールセグメント含有率（％）］＝［ポリエチレングリコールセグメント総分子量］／［核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物分子量］×１００
該「ポリエチレングリコールセグメント総分子量」は、前記ポリエチレングリコールセグメントの分子量に前記ポリエチレングリコールセグメントの結合数を乗じて算出した数値を用いた。
該「核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物分子量」は、前記の各構成部分の分子量の総和により算出した数値を用いた。The “content of polyethylene glycol segment” in Examples and Comparative Examples was calculated by the following formula.
[Polyethylene glycol segment content (%)] = [Total molecular weight of polyethylene glycol segment] / [Molecular weight of nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound] × 100
As the “total molecular weight of the polyethylene glycol segment”, a numerical value calculated by multiplying the molecular weight of the polyethylene glycol segment by the number of bonds of the polyethylene glycol segment was used.
As the “molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound”, a numerical value calculated from the sum of the molecular weights of the above-mentioned constituent parts was used.

実施例及び比較例の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の散乱強度測定は、大塚電子社製ダイナミック光散乱光度計ＤＬＳ−８０００ＤＬ（測定温度２５℃、測定角度：９０°、波長：６３２．８ｎｍ、ＮＤフィルター：５％、ＰＨ１：ＯＰＥＮ、ＰＨ２：ＳＬＩＴ）にて行った。
散乱強度測定の測定サンプルは、核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物濃度１ｍｇ／ｍＬになるように５％ブドウ糖注射液を加え、氷冷下にて超音波を３分間照射し調製した溶液を用いた。
光散乱強度の測定に用いるトルエン（純正化学社製、特級）は、０．２μｍメンブレンフィルターで３回濾過した後に使用した。
前記光散乱強度計により測定されたトルエン標準液の光散乱強度は、１２，９３４ｃｐｓであった。The scattering intensity of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compounds of Examples and Comparative Examples was measured using a dynamic light scattering photometer DLS-8000DL manufactured by Otsuka Electronics Co., Ltd. (measuring temperature 25 ° C., measuring angle: 90 °, wavelength: 632.8 nm, (ND filter: 5%, PH1: OPEN, PH2: SLIT).
As a measurement sample for the scattering intensity measurement, a solution prepared by adding a 5% glucose injection solution to a concentration of a nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of 1 mg / mL and irradiating ultrasonic waves for 3 minutes under ice cooling was used. .
Toluene (special grade, manufactured by Junsei Chemical Co., Ltd.) used for measuring the light scattering intensity was used after being filtered three times with a 0.2 μm membrane filter.
The light scattering intensity of the toluene standard solution measured by the light scattering intensity meter was 12,934 cps.

実施例及び比較例の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の、測定サンプル溶液中における会合分子数は以下の計算式で算出した。
［会合分子数］＝［ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量］／［核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物分子量］
なお、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は、ＷｙａｔｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製ＤＡＷＮＥＯＳ（光散乱検出器）及びＯｐｔｉｌａｂｒＥＸ（ＲＩ検出器）にて行い、ｄｎ／ｄｃはポリエチレングリコールの値（０．１３５）を用い算出した。
使用カラム：Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００Ｉｎｃｒｅａｓｅ１０／３００ＧＬ、ＧＥヘルスケア社製
測定サンプルは、核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物１ｍｇ／ｍＬになるように５％ブドウ糖注射液を加え、氷冷下にて超音波を３分間照射し調製した溶液を用いた。The number of associated molecules in the measurement sample solution of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compounds of Examples and Comparative Examples was calculated by the following formula.
[Number of associated molecules] = [Molecular weight of SEC-MALS measurement] / [Molecular weight of nucleic acid antimetabolite binding hyperbranched compound]
The SEC-MALS measurement molecular weight was measured using DAWN EOS (light scattering detector) and Optilab rEX (RI detector) manufactured by Wyatt Technology, and dn / dc was calculated using the value of polyethylene glycol (0.135). .
Column used: Superdex 200 Increase 10/300 GL, manufactured by GE Healthcare Co., Ltd. A 5% glucose injection solution was added to the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound at 1 mg / mL, and ultrasound was applied under ice cooling. For 3 minutes, and the prepared solution was used.

［合成例１］末端官能基数３２の多分岐高分子担体（ハイパーブランチ・２，２−ビス（メチロール）プロピオン酸ポリエステル−３２−カルボキシル）の合成（化合物１）
ハイパーブランチ・２，２−ビス（メチロール）プロピオン酸ポリエステル−３２−ヒドロキシル（５．０ｇ、末端官能基数３２、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）と、コハク酸無水物（２２．２ｇ）と、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．１ｇ）をＤＭＦ（１００ｍＬ）に溶解後、外温９０℃にて８時間撹拌した。室温まで降温し、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、５０ｍＬ）を加え１時間撹拌後、イオン交換樹脂を濾過により除去した。濾液を５０％アセトニトリル／精製水にて透析し、その後、内液を減圧下濃縮しアセトニトリルを除去し、凍結乾燥して化合物１に係る標記化合物（８．７２ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ_４，ｐｐｍ）：１．１５−１．４１（ｂｒ，８４Ｈ）、２．５２−２．７７（ｂｒ，１２８Ｈ）、３．４２−３．９０（ｂｒ，１６Ｈ）、３．９５−４．６１（ｂｒ，１２０Ｈ）
^１Ｈ−ＮＭＲの面積比より、原料である多分岐高分子担体末端のアルコールはすべてカルボン酸に変換されたことが確認された。したがって、化合物１の分子量は以下の式により、６．８キロダルトンと算出された。
［化合物１の分子量］＝［多分岐高分子担体前駆体の分子量］＋［（多分岐高分子担体前駆体の末端官能基数 × コハク酸分子量）］[Synthesis Example 1] Synthesis of a hyperbranched polymer carrier having 32 terminal functional groups (hyperbranched 2,2-bis (methylol) propionic acid polyester-32-carboxyl) (Compound 1)
Hyperbranched 2,2-bis (methylol) propionic acid polyester-32-hydroxyl (5.0 g, number of terminal functional groups 32, manufactured by Sigma-Aldrich), succinic anhydride (22.2 g), and 4-dimethyl After dissolving aminopyridine (DMAP, 1.1 g) in DMF (100 mL), the mixture was stirred at an external temperature of 90 ° C. for 8 hours. The temperature was lowered to room temperature, an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ), 50 mL, manufactured by Dow Chemical) was added, and the mixture was stirred for 1 hour, and then the ion exchange resin was removed by filtration. The filtrate was dialyzed against 50% acetonitrile / purified water, and then the inner solution was concentrated under reduced pressure to remove acetonitrile, followed by lyophilization to obtain the title compound of Compound 1 (8.72 g).
^{_{1 H-NMR (400MHz, Methanol}} -d 4, ppm): 1.15-1.41 (br, 84H), 2.52-2.77 (br, 128H), 3.42-3.90 (br , 16H), 3.95-4.61 (br, 120H)
^From the area ratio of ¹ H-NMR, it was confirmed that all the alcohols at the terminal of the multibranched polymer carrier as the raw material were converted into carboxylic acids. Therefore, the molecular weight of compound 1 was calculated to be 6.8 kDa by the following equation.
[Molecular weight of compound 1] = [molecular weight of multibranched polymer carrier precursor] + [(number of terminal functional groups of multibranched polymer carrier precursor × succinic acid molecular weight)]

［合成例２］末端官能基数６４の多分岐高分子担体（ハイパーブランチ・２，２−ビス（メチロール）プロピオン酸ポリエステル−６４−カルボキシル）の合成（化合物２）
ハイパーブランチ・２，２−ビス（メチロール）プロピオン酸ポリエステル−６４−ヒドロキシル（３．０ｇ、末端官能基数６４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）と、コハク酸無水物（１３．１ｇ）と、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、０．６４ｇ）をＤＭＦ（６０ｍＬ）に溶解後、外温９０℃にて８時間撹拌した。室温まで降温し、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、３０ｍＬ）を加え１時間撹拌後、イオン交換樹脂を濾過により除去した。濾液を５０％アセトニトリル／精製水にて透析し、その後、内液を減圧下濃縮しアセトニトリルを除去し、凍結乾燥して化合物２に係る標記化合物（５．５３ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｄ_４，ｐｐｍ）：１．１５−１．５２（ｂｒ，１８０Ｈ）、２．３９−３．００（ｂｒ，２５６Ｈ）、３．４２−３．９０（ｂｒ，１６Ｈ）、３．９５−４．７５（ｂｒ，２４０Ｈ）
^１Ｈ−ＮＭＲの面積比より、原料である多分岐高分子担体末端のアルコールはすべてカルボン酸に変換されたことが確認された。したがって、化合物２の分子量は以下の式により、１３．７キロダルトンと算出された。
［化合物２の分子量］＝［多分岐高分子担体前駆体の分子量］＋［（多分岐高分子担体前駆体の末端官能基数 × コハク酸分子量）］[Synthesis Example 2] Synthesis of a hyperbranched polymer carrier having 64 terminal functional groups (hyperbranched 2,2-bis (methylol) propionate polyester-64-carboxyl) (compound 2)
Hyperbranched 2,2-bis (methylol) propionic acid polyester-6-hydroxyl (3.0 g, terminal functional group 64, manufactured by Sigma-Aldrich), succinic anhydride (13.1 g), and 4-dimethyl After dissolving aminopyridine (DMAP, 0.64 g) in DMF (60 mL), the mixture was stirred at an external temperature of 90 ° C. for 8 hours. The temperature was lowered to room temperature, an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ), 30 mL, manufactured by Dow Chemical) was added, and the mixture was stirred for 1 hour. Then, the ion exchange resin was removed by filtration. The filtrate was dialyzed against 50% acetonitrile / purified water, and then the inner solution was concentrated under reduced pressure to remove acetonitrile, followed by lyophilization to obtain the title compound of Compound 2 (5.53 g).
^{_{1 H-NMR (400MHz, Methanol}} -d 4, ppm): 1.15-1.52 (br, 180H), 2.39-3.00 (br, 256H), 3.42-3.90 (br , 16H), 3.95-4.75 (br, 240H)
^From the area ratio of ¹ H-NMR, it was confirmed that all the alcohols at the terminal of the multibranched polymer carrier as the raw material were converted into carboxylic acids. Therefore, the molecular weight of compound 2 was calculated to be 13.7 kDa according to the following equation.
[Molecular weight of compound 2] = [molecular weight of multibranched polymer carrier precursor] + [(number of terminal functional groups of multibranched polymer carrier precursor × succinic acid molecular weight)]

［合成例３］アスパラギン酸−１−アラニンメチルエステル−４−ゲムシタビンアミドの合成（化合物３）
Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アスパラギン酸−４−ベンジルエステル（１５．０ｇ）と、Ｌ−アラニンメチルエステル（６．５ｇ）をＤＭＦ（１６０ｍＬ）に溶解後、１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］カルボジイミド（ＷＳＣＤ）塩酸塩（１３．３ｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（８．５３ｇ）、トリエチルアミン（６．５ｍＬ）を加え、氷浴下にて４時間撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルにて抽出し、５％クエン酸水溶液，飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び飽和食塩水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下、酢酸エチルを留去し真空乾燥して油状物（１３．９ｇ）得た。
この油状物（１３．９ｇ）をメタノール（３５０ｍＬ）に溶解し、１０％パラジウム炭素（水分含有量５０％）（１．３９ｇ）を加えた後、系内を水素置換し、室温にて３時間攪拌した。１０％パラジウム炭素を濾過し、メタノール（５０ｍＬ）で洗浄後、減圧下、メタノールを留去し真空乾燥して油状物（１０．６ｇ）を得た。
この油状物とゲムシタビン（３．０ｇ、ＳＣＩＮＯＰＨＡＲＭ社製）を、ＤＭＦ（５６ｍＬ）に溶解後、ＨＯＢｔ（２．１ｇ）、ＷＳＣＤ塩酸塩（３．３ｇ）を加え、０℃から室温に昇温させ、一夜撹拌した。反応液に精製水を加え、酢酸エチル（１７０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を、飽和食塩水を用いて２回洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。減圧濃縮にて酢酸エチルを除去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、真空乾燥後、油状物（３．９ｇ）を得た。
この油状物を酢酸エチル（４１ｍＬ）に溶解させ、４規定の塩酸−酢酸エチル溶液（３１ｍＬ）を加え、室温にて２時間攪拌した。反応液に酢酸エチル（８０ｍＬ）及びｎ−ヘキサン（２０ｍＬ）の混合溶媒を加え、沈析物を濾取し、真空乾燥させ、化合物３（２．９９ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：１．２０（ｄ，３Ｈ）、２．９５−３．１０（ｍ，２Ｈ）、３．６３（ｓ，３Ｈ）、３．６７（ｄｄ，１Ｈ）、３．９０−４．０２（ｍ，５Ｈ）、４．１８−４．３１（ｍ，３Ｈ）、６．１８（ｄｄ，１Ｈ）、７．２２（ｄ，１Ｈ）、８．２５（ｓ，２Ｈ）、８．９２（ｄ，１Ｈ）、１１．３（ｂｒ，１Ｈ）[Synthesis Example 3] Synthesis of aspartic acid-1-alanine methyl ester-4-gemcitabine amide (Compound 3)
After dissolving N- (t-butoxycarbonyl) aspartic acid-4-benzyl ester (15.0 g) and L-alanine methyl ester (6.5 g) in DMF (160 mL), 1-ethyl-3- [3- (Dimethylamino) propyl] carbodiimide (WSCD) hydrochloride (13.3 g), 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (8.53 g), and triethylamine (6.5 mL) were added, and the mixture was stirred in an ice bath for 4 hours. . Water was added to the reaction solution, extracted with ethyl acetate, and washed with a 5% aqueous citric acid solution, a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and a saturated saline solution. After drying over magnesium sulfate, ethyl acetate was distilled off under reduced pressure, and the residue was dried under vacuum to obtain an oil (13.9 g).
This oil (13.9 g) was dissolved in methanol (350 mL), and 10% palladium on carbon (water content: 50%) (1.39 g) was added. Stirred. After filtering 10% palladium carbon and washing with methanol (50 mL), methanol was distilled off under reduced pressure and dried under vacuum to obtain an oil (10.6 g).
After dissolving this oil and gemcitabine (3.0 g, manufactured by SCINO PHARM) in DMF (56 mL), HOBt (2.1 g) and WSCD hydrochloride (3.3 g) were added, and the temperature was raised from 0 ° C. to room temperature. And stirred overnight. Purified water was added to the reaction solution, and extracted with ethyl acetate (170 mL). The organic layer was washed twice using a saturated saline solution and dried using sodium sulfate. After removing ethyl acetate by concentration under reduced pressure, purification by silica gel column chromatography was carried out, and after drying in vacuo, an oil (3.9 g) was obtained.
This oil was dissolved in ethyl acetate (41 mL), 4N hydrochloric acid-ethyl acetate solution (31 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. A mixed solvent of ethyl acetate (80 mL) and n-hexane (20 mL) was added to the reaction solution, and the precipitate was collected by filtration and dried in vacuo to obtain Compound 3 (2.99 g).
^{1 H-NMR (400MHz, DMSO} -d6, ppm): 1.20 (d, 3H), 2.95-3.10 (m, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.67 (dd , 1H), 3.90-4.02 (m, 5H), 4.18-4.31 (m, 3H), 6.18 (dd, 1H), 7.22 (d, 1H), 8. 25 (s, 2H), 8.92 (d, 1H), 11.3 (br, 1H)

［合成例４］アスパラギン酸−１−ロイシンメチルエステル−４−ゲムシタビンアミドの合成（化合物４）
Ｎ−(ｔ−ブトキシカルボニル)−Ｌ−アスパラギン酸−４−ベンジルエステル（渡辺化学工業社製、４．９ｇ）及びＬ−ロイシン−メチルエステル塩酸塩（国産化学社製、２．７ｇ）をＤＭＦ（７５ｍＬ）に溶解後、ＨＯＢｔ（２．８ｇ）、ジイソプロピルエチルアミン（２．６ｍＬ）、ＷＳＣＤ塩酸塩（４．３ｇ）を加え、０℃にて２時間攪拌した。反応液に精製水を加え、酢酸エチル（２５０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和食塩水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。減圧濃縮にて酢酸エチルを除去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、真空乾燥後、油状物（６．８ｇ）を得た。
この油状物をメタノール（１５０ｍＬ）に溶解後、１０質量％パラジウム炭素を加え、水素雰囲気化で２時間攪拌した。反応液を濾過後、濾液を真空乾燥し、油状物（５．３７ｇ）を得た。
この油状物とゲムシタビン（３．０ｇ、ＳＣＩＮＯＰＨＡＲＭ社製）をＤＭＦ（５７ｍＬ）に溶解後、ＨＯＢｔ（２．１ｇ）、ＷＳＣＤ塩酸塩（３．３ｇ）を加え、０℃から室温に昇温させ、一夜撹拌した。反応液に精製水を加え、酢酸エチル（１７０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を、飽和食塩水を用いて２回洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。減圧濃縮にて酢酸エチルを除去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、真空乾燥後、油状物（４．９ｇ）を得た。
この油状物を酢酸エチル（４４ｍＬ）に溶解させ、４規定の塩酸酢酸エチル溶液（３３ｍＬ）を加え、室温にて２時間攪拌した。反応液に酢酸エチル（８０ｍＬ）及びｎ−ヘキサン（２０ｍＬ）の混合溶媒を加え、沈析物を濾取し、真空乾燥させ、化合物４（３．６２ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：０．８９（ｄｄ，６Ｈ）、１．４９−１．７１（ｍ，３Ｈ）、２．９７−３．１７（ｍ，４Ｈ）、３．６３（ｓ，３Ｈ）、３．６６（ｄｄ，１Ｈ）、３．８０−３．９３（ｍ，２Ｈ）、４．１０−４．２８（ｍ，４Ｈ）、６．１８（ｄｄ，１Ｈ）、７．２２（ｄ，１Ｈ）、８．３２（ｓ，２Ｈ）、８．９１（ｄ，１Ｈ）、１１．３（ｂｒ，１Ｈ）[Synthesis Example 4] Synthesis of aspartic acid-1-leucine methyl ester-4-gemcitabine amide (Compound 4)
N- (t-butoxycarbonyl) -L-aspartic acid-4-benzyl ester (manufactured by Watanabe Chemical Industry Co., Ltd., 4.9 g) and L-leucine-methyl ester hydrochloride (manufactured by Kokusan Chemical Co., Ltd., 2.7 g) were added to DMF. (75 mL), HOBt (2.8 g), diisopropylethylamine (2.6 mL) and WSCD hydrochloride (4.3 g) were added, and the mixture was stirred at 0 ° C. for 2 hours. Purified water was added to the reaction solution, and extracted with ethyl acetate (250 mL). The organic layer was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution and a saturated saline solution, and dried with sodium sulfate. After removing ethyl acetate by concentration under reduced pressure, purification by silica gel column chromatography was performed, and after drying under vacuum, an oil (6.8 g) was obtained.
After dissolving this oil in methanol (150 mL), 10% by mass palladium carbon was added, and the mixture was stirred under a hydrogen atmosphere for 2 hours. After filtering the reaction solution, the filtrate was dried under vacuum to obtain an oil (5.37 g).
After dissolving this oil and gemcitabine (3.0 g, SCINO PHARM) in DMF (57 mL), HOBt (2.1 g) and WSCD hydrochloride (3.3 g) were added, and the temperature was raised from 0 ° C. to room temperature. And stirred overnight. Purified water was added to the reaction solution, and extracted with ethyl acetate (170 mL). The organic layer was washed twice using a saturated saline solution and dried using sodium sulfate. After removing ethyl acetate by concentration under reduced pressure, purification by silica gel column chromatography was performed, and after drying under vacuum, an oil (4.9 g) was obtained.
This oily substance was dissolved in ethyl acetate (44 mL), 4N ethyl acetate hydrochloride solution (33 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. A mixed solvent of ethyl acetate (80 mL) and n-hexane (20 mL) was added to the reaction solution, and the precipitate was collected by filtration and dried in vacuo to obtain Compound 4 (3.62 g).
^{1 H-NMR (400MHz, DMSO} -d6, ppm): 0.89 (dd, 6H), 1.49-1.71 (m, 3H), 2.97-3.17 (m, 4H), 3 .63 (s, 3H), 3.66 (dd, 1H), 3.80-3.93 (m, 2H), 4.10-4.28 (m, 4H), 6.18 (dd, 1H) ), 7.22 (d, 1H), 8.32 (s, 2H), 8.91 (d, 1H), 11.3 (br, 1H)

［合成例５］アスパラギン酸−１−イソロイシンメチルエステル−４−ゲムシタビンアミドの合成（化合物５）
Ｎ−(ｔ−ブトキシカルボニル)−Ｌ−アスパラギン酸−４−ベンジルエステル（国産化学社製、４．９ｇ）及びＬ−イソロイシン−メチルエステル塩酸塩（東京化成工業社製、２．７ｇ）をジクロロメタン（７５ｍＬ）に溶解後、ＨＯＢｔ（２．８ｇ）、ジイソプロピルエチルアミン（３．１ｍＬ）、ＷＳＣＤ塩酸塩（４．３ｇ）を加え、室温にて４時間攪拌した。反応液に精製水を加え、有機層を飽和重曹水、飽和塩化アンモニウム水、飽和食塩水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。減圧濃縮にてジクロロメタンを除去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、真空乾燥後、油状物（７．０ｇ）を得た。
この油状物を酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶解後、５質量％パラジウム炭素を加え、水素雰囲気化で１７時間攪拌した。反応液を濾過後、濾液を真空乾燥し、油状物（５．４２ｇ）を得た。
この油状物とゲムシタビン（３．０ｇ、ＳＣＩＮＯＰＨＡＲＭ社製）をＤＭＦ（５７ｍＬ）に溶解後、ＨＯＢｔ（２．１ｇ）、ＷＳＣＤ塩酸塩（３．３ｇ）を加え、０℃から室温に昇温させ、一夜撹拌した。反応液に精製水を加え、酢酸エチル（１７０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を、飽和食塩水を用いて２回洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。減圧濃縮にて酢酸エチルを除去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、真空乾燥後、油状物（４．５ｇ）を得た。
この油状物を酢酸エチル（２７ｍＬ）に溶解させ、４規定の塩酸酢酸エチル溶液（２０ｍＬ）を加え、室温にて２時間攪拌した。反応液に酢酸エチル（４８ｍＬ）及びｎ−ヘキサン（１２ｍＬ）の混合溶媒を加え、沈析物を濾取し、真空乾燥させ、化合物５（２．０６ｇ）を得た。
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ−ｄ４，ｐｐｍ）：０．８９−１．０１（ｍ，６Ｈ）、１．２７−１．３６（ｍ，１Ｈ）、１．４４−１．５５（ｍ，１Ｈ）、１．９１−２．００（ｍ，１Ｈ）、３．０８（ｄｄ，１Ｈ）、３．２５（ｄｄ，１Ｈ）、３．７３（ｓ，３Ｈ）、３．８４（ｄｄ，１Ｈ）、３．９７−４．０３（ｍ，２Ｈ）、４．２８−４．３６（ｍ，１Ｈ）、４．４２（ｄｄ，１Ｈ）、４．４７（ｄ，１Ｈ）、６．２９（ｄｄ，１Ｈ）、７．２９（ｄ，１Ｈ）、８．４５（ｄ，１Ｈ）Synthesis Example 5 Synthesis of aspartic acid-1-isoleucine methyl ester-4-gemcitabine amide (Compound 5)
N- (t-butoxycarbonyl) -L-aspartic acid-4-benzyl ester (manufactured by Kokusan Chemical Co., 4.9 g) and L-isoleucine-methyl ester hydrochloride (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd., 2.7 g) were added to dichloromethane. (75 mL), HOBt (2.8 g), diisopropylethylamine (3.1 mL), and WSCD hydrochloride (4.3 g) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 4 hours. Purified water was added to the reaction solution, and the organic layer was washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate, saturated aqueous ammonium chloride, and saturated saline, and dried using sodium sulfate. After removing dichloromethane by concentration under reduced pressure, purification by silica gel column chromatography was performed, and after drying under vacuum, an oil (7.0 g) was obtained.
After dissolving this oil in ethyl acetate (150 mL), 5% by mass of palladium on carbon was added, and the mixture was stirred under a hydrogen atmosphere for 17 hours. After the reaction solution was filtered, the filtrate was dried under vacuum to obtain an oil (5.42 g).
After dissolving this oil and gemcitabine (3.0 g, SCINO PHARM) in DMF (57 mL), HOBt (2.1 g) and WSCD hydrochloride (3.3 g) were added, and the temperature was raised from 0 ° C. to room temperature. And stirred overnight. Purified water was added to the reaction solution, and extracted with ethyl acetate (170 mL). The organic layer was washed twice using a saturated saline solution and dried using sodium sulfate. After removing ethyl acetate by concentration under reduced pressure, purification by silica gel column chromatography was performed, and after drying under vacuum, an oily substance (4.5 g) was obtained.
This oil was dissolved in ethyl acetate (27 mL), 4N ethyl acetate hydrochloride solution (20 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. A mixed solvent of ethyl acetate (48 mL) and n-hexane (12 mL) was added to the reaction solution, and the precipitate was collected by filtration and dried in vacuo to obtain Compound 5 (2.06 g).
^{1 H-NMR (400MHz, MeOD} -d4, ppm): 0.89-1.01 (m, 6H), 1.27-1.36 (m, 1H), 1.44-1.55 (m, 1H), 1.91-2.00 (m, 1H), 3.08 (dd, 1H), 3.25 (dd, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.84 (dd, 1H) ), 3.97-4.03 (m, 2H), 4.28-4.36 (m, 1H), 4.42 (dd, 1H), 4.47 (d, 1H), 6.29 ( dd, 1H), 7.29 (d, 1H), 8.45 (d, 1H)

［合成例６］３−アミノプロピル−ポリ−α−アスパラギン酸（重合数約１１）の合成（化合物６）
Ｎ−Ｂｏｃ−１，３−ジアミノプロパン（８０ｍｇ、東京化成社製）をＤＭＳＯ（４０ｍＬ）に溶解後、γ−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸−Ｎ−カルボン酸無水物（ＢＬＡ−ＮＣＡ、３．０ｇ、ＩＳＯＣＨＥＭ社製）を加え、３２．５℃にて一夜攪拌した。反応液を、エタノール（１００ｍＬ）及びジイソプロピルエーテル（９００ｍＬ）の混合溶媒中に１５分かけて滴下し、室温にて３時間攪拌した。沈析物を濾取後、真空乾燥し固形物を得た。
この固形物（２．０１ｇ）をＤＭＩ（４０ｍＬ）に溶解後、無水酢酸（４ｍＬ）を加え２０℃にて一夜攪拌した。反応液を、酢酸エチル（１００ｍＬ）及びジイソプロピルエーテル（９００ｍＬ）の混合溶媒中に１５分かけて滴下し、室温にて２時間攪拌した。沈析物を濾取後、真空乾燥し固形物を得た。
この固形物（１．４３ｇ）にジクロロメタン（０．３ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（１．２ｍＬ）を加え室温にて１時間撹拌した。反応液にジイソプロピルエーテル（５００ｍＬ）を加え、析出した固体を濾取後、真空乾燥し化合物６（１．３８ｇ）を得た。
アスパラギン酸の重合数は、アルカリ加水分解後、遊離したベンジルアルコールを高速液体体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより算出した。その結果ベンジルアルコール含量は４８％であり、重合数は１１．６と算出された。Synthesis Example 6 Synthesis of 3-aminopropyl-poly-α-aspartic acid (polymerization number: about 11) (Compound 6)
After dissolving N-Boc-1,3-diaminopropane (80 mg, manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) in DMSO (40 mL), γ-benzyl-L-aspartic acid-N-carboxylic anhydride (BLA-NCA, 3.0 g) , Manufactured by ISOCHEM) and stirred at 32.5 ° C. overnight. The reaction solution was added dropwise to a mixed solvent of ethanol (100 mL) and diisopropyl ether (900 mL) over 15 minutes, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The precipitate was collected by filtration and dried under vacuum to obtain a solid.
This solid (2.01 g) was dissolved in DMI (40 mL), acetic anhydride (4 mL) was added, and the mixture was stirred at 20 ° C. overnight. The reaction solution was added dropwise to a mixed solvent of ethyl acetate (100 mL) and diisopropyl ether (900 mL) over 15 minutes, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The precipitate was collected by filtration and dried under vacuum to obtain a solid.
To this solid (1.43 g) were added dichloromethane (0.3 mL) and trifluoroacetic acid (1.2 mL), and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. Diisopropyl ether (500 mL) was added to the reaction solution, and the precipitated solid was collected by filtration and dried in vacuo to obtain Compound 6 (1.38 g).
The polymerization number of aspartic acid was calculated by quantifying liberated benzyl alcohol after high-performance liquid chromatography (HPLC) after alkali hydrolysis. As a result, the benzyl alcohol content was 48%, and the number of polymerizations was calculated to be 11.6.

［合成例７］ハイパーブランチ・２，２−ビス（メチロール）プロピオン酸ポリエステル−３２−カルボキシルと３−アミノプロピル−ポリ−α−アスパラギン酸（重合数約１１）及び平均分子量５キロダルトンの片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコールのアミド結合体の合成（化合物７）
合成例１で得られた化合物１（分子量６．８キロダルトン、０．６９ｇ）と、片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（５．１ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−５０Ｈ、日油社製、平均分子量５キロダルトン）をＤＭＦ（３２ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２５℃に降温し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．４８ｇ）と、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（１．０ｍＬ）を加えて、３．５時間撹拌した。その後、合成例６で得られた化合物６（１．５０ｇ）とＤＩＰＣＩ（０．５０ｍＬ）とジイソプロピルエチルアミン（０．２５ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。その後、ＤＩＰＣＩ（０．５０ｍＬ）と２−メトキシエチレンアミン（０．２８ｍＬ）加え３時間撹拌した。その後、酢酸エチル（４３ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（４３０ｍＬ）に３０分かけて滴下し、室温にて２５分撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物をＤＭＦ（１６ｍＬ）及び精製水（０．１６ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、８ｍＬ）を加えた。１．５時間撹拌後、濾過し、減圧下濃縮を行って化合物７前駆体（７．５０ｇ）を得た。[Synthesis Example 7] Hyperbranched 2,2-bis (methylol) propionic acid polyester-32-carboxyl and 3-aminopropyl-poly-α-aspartic acid (polymerization number: about 11) and one terminal having an average molecular weight of 5 kDa Synthesis of amide bond of polyethylene glycol having a 3-aminopropyl group at one terminal of a methoxy group (compound 7)
Compound 1 (molecular weight: 6.8 kDa, 0.69 g) obtained in Synthesis Example 1 and a polyethylene glycol compound having a methoxy group at one end and a 3-aminopropyl group at one end (5.1 g, SUNBRIGHT MEPA-50H, Oil Company, average molecular weight 5 kilodalton) was dissolved in DMF (32 mL) at 35 ° C, the temperature was lowered to 25 ° C, and 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.48 g) and diisopropylcarbodiimide (DIPCI) ( 1.0 mL) and stirred for 3.5 hours. Thereafter, the compound 6 (1.50 g) obtained in Synthesis Example 6, DIPCI (0.50 mL) and diisopropylethylamine (0.25 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. Thereafter, DIPCI (0.50 mL) and 2-methoxyethyleneamine (0.28 mL) were added, and the mixture was stirred for 3 hours. Thereafter, ethyl acetate (43 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (430 mL) over 30 minutes, followed by stirring at room temperature for 25 minutes. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (50 mL). After the obtained precipitate was dissolved in DMF (16 mL) and purified water (0.16 mL), an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ), 8 mL, manufactured by Dow Chemical) was added. After stirring for 1.5 hours, the mixture was filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a compound 7 precursor (7.50 g).

得られた化合物７前駆体において、ポリエチレングリコール化合物の結合量は、ポリエチレングリコール化合物の仕込当量及びポリエチレングリコール化合物の消費率より１０分子であった。したがって、総ポリエチレングリコールセグメント分子量は５０キロダルトンであった。
なお、本反応における多分岐高分子担体の末端カルボキシ基に対するポリエチレングリコールセグメント化合物の仕込当量＝０．３１当量であり、ポリエチレングリコールセグメント化合物の消費率＝１であった。In the obtained Compound 7 precursor, the binding amount of the polyethylene glycol compound was 10 molecules based on the equivalent weight of the charged polyethylene glycol compound and the consumption rate of the polyethylene glycol compound. Thus, the total polyethylene glycol segment molecular weight was 50 kilodaltons.
In this reaction, the charged equivalent of the polyethylene glycol segment compound to the terminal carboxy group of the multibranched polymer carrier was 0.31 equivalent, and the consumption rate of the polyethylene glycol segment compound was 1.

化合物７前駆体におけるアスパラギン酸ユニットの含有量総数は、該化合物７前駆体をアルカリ加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを高速液体体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより算出した。その結果ベンジルアルコール含量は９．９％であり、アスパラギン酸単位の結合総数は６４．９と算出された。
また、化合物６の１分子あたりのアスパラギン酸の重合数は１１．６であるので、多分岐高分子担体１分子あたりに結合した化合物６の数は、以下の式より５．６分子と算出された。
多分岐高分子担体１分子あたりに結合した化合物６の数＝６４．９／１１．６＝５．６The total content of aspartic acid units in the compound 7 precursor was calculated by subjecting the compound 7 precursor to alkaline hydrolysis and quantifying the released benzyl alcohol by high performance liquid chromatography (HPLC). As a result, the benzyl alcohol content was 9.9%, and the total number of aspartic acid units bonded was calculated to be 64.9.
Further, since the polymerization number of aspartic acid per molecule of compound 6 is 11.6, the number of compound 6 bound per molecule of the hyperbranched polymer carrier is calculated as 5.6 molecules from the following formula. Was.
The number of compounds 6 bound per molecule of the hyperbranched polymer carrier = 64.9 / 11.6 = 5.6.

得られた化合物７前駆体をＤＭＦ（６５ｍＬ）に溶解し、１０％パラジウム炭素（０．７５ｇ、ナカライテスク社製）を加え、水素雰囲気下で一夜撹拌した。パラジウム炭素を濾別後、酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（５００ｍＬ）に３０分かけて滴下し、室温にて１時間撹拌した。沈析物を濾取後、真空乾燥し化合物７（５．７３ｇ）を得た。
化合物７の分子量は以下の式より６４キロダルトンと算出された。
［化合物７の分子量］＝［多分岐高分子担体分子量］＋［総ポリエチレングリコールセグメント分子量］＋［（ポリアスパラギン酸単位分子量） × （アスパラギン酸単位の結合総数）］
なお、ポリアスパラギン酸単位分子の分子量は１１５．０９を用いた。The obtained compound 7 precursor was dissolved in DMF (65 mL), 10% palladium carbon (0.75 g, manufactured by Nacalai Tesque) was added, and the mixture was stirred overnight under a hydrogen atmosphere. After filtering off the palladium carbon, ethyl acetate (50 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (500 mL) over 30 minutes and stirred at room temperature for 1 hour. The precipitate was collected by filtration and dried under vacuum to obtain Compound 7 (5.73 g).
The molecular weight of compound 7 was calculated to be 64 kDa from the following formula.
[Molecular weight of compound 7] = [Molecular weight of hyperbranched polymer carrier] + [Total polyethylene glycol segment molecular weight] + [(Molecular weight of polyaspartic acid unit) × (Total number of bonds of aspartic acid unit)]
The molecular weight of the polyaspartic acid unit molecule was 115.09.

［合成例８］平均分子量２キロダルトンのメトキシポリエチレングリコールとポリ−α−アスパラギン酸（重合数約５）とのブロック共重合体の合成（化合物８）
片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（４．５２ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−２０Ｈ、日油社製、平均分子量２キロダルトン）をＤＭＳＯ（４０ｍＬ）に溶解後、γ−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸−Ｎ−カルボン酸無水物（ＢＬＡ−ＮＣＡ、３．１０ｇ、ＩＳＯＣＨＥＭ社製）を加え、３０℃にて一夜攪拌した。反応液を、精製水（５ｍＬ）で希釈し、外液アセトニトリルにて透析し、内液のアセトニトリルを減圧下除去し、凍結乾燥して化合物８（６．０６ｇ）を得た。
得られた化合物８のアスパラギン酸の重合数は、これをアルカリ加水分解した後、遊離したベンジルアルコールを高速液体体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより算出した。その結果ベンジルアルコール含量は１６．７％であり、重合数は４．５と算出された。したがって、化合物８の１分子あたりのアスパラギン酸重合数は４．５であり、また、ポリエチレングリコールセグメント分子量は２キロダルトンである。[Synthesis Example 8] Synthesis of a block copolymer of methoxypolyethylene glycol having an average molecular weight of 2 kDa and poly-α-aspartic acid (polymerization number: about 5) (Compound 8)
A polyethylene glycol compound having one terminal methoxy group and one terminal 3-aminopropyl group (4.52 g, SUNBRIGHT MEPA-20H, manufactured by NOF Corporation, average molecular weight 2 kilodalton) was dissolved in DMSO (40 mL), and then γ-benzyl- L-Aspartic acid-N-carboxylic anhydride (BLA-NCA, 3.10 g, manufactured by ISOCHEM) was added, and the mixture was stirred at 30 ° C. overnight. The reaction solution was diluted with purified water (5 mL), dialyzed against acetonitrile in an external solution, acetonitrile in the internal solution was removed under reduced pressure, and lyophilized to obtain Compound 8 (6.06 g).
The polymerization number of aspartic acid in the obtained compound 8 was calculated by subjecting this to alkaline hydrolysis and quantifying the released benzyl alcohol by high performance liquid chromatography (HPLC). As a result, the benzyl alcohol content was 16.7%, and the polymerization number was calculated to be 4.5. Therefore, the polymerization number of aspartic acid per molecule of compound 8 is 4.5, and the molecular weight of the polyethylene glycol segment is 2 kilodalton.

［合成例９］ハイパーブランチ・２，２−ビス（メチロール）プロピオン酸ポリエステル−３２−カルボキシルと平均分子量２キロダルトンのモノメトキシポリエチレングリコール−ブロック−ポリ−α−アスパラギン酸（重合数約５）のアミド結合体の合成（化合物９）
合成例１で得られた化合物１（分子量６．８キロダルトン、０．８６ｇ）と、合成例８で得られた化合物８をＤＭＦ（８０ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２５℃に降温し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．５７２ｇ）と、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（１．０ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。その後、ＤＩＰＣＩ（０．４２ｍＬ）と２−メトキシエチレンアミン（０．２４ｍＬ）加え３時間撹拌した。その後、酢酸エチル（１６０ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（１．６Ｌ）に３０分かけて滴下し、室温にて３０分撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物をＤＭＦ（４０ｍＬ）及び精製水（０．４ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、２０ｍＬ）を加えた。１時間撹拌後、酢酸エチル（８０ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（８００ｍＬ）に３０分かけて滴下し、室温にて２時間撹拌した。沈析物を濾取後、真空乾燥し化合物９前駆体を固形物として得た。
この化合物９前駆体におけるアスパラギン酸ユニットの結合総数は、アルカリ加水分解後、遊離したベンジルアルコールを高速液体体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより算出した。その結果ベンジルアルコール含量は１５％であり、はアスパラギン酸ユニットの結合総数は７２と算出された。
また、化合物８の１分子あたりのアスパラギン酸の重合数は４．５であるので、化合物９前駆体１分子あたりに結合した化合物８の数は、以下の式より１６分子と算出された。
多分岐高分子担体１分子あたりに結合した化合物８の数＝７２／４．５＝１６[Synthesis Example 9] Hyperbranched 2,2-bis (methylol) propionic acid polyester-32-carboxyl and monomethoxypolyethylene glycol-block-poly-α-aspartic acid having an average molecular weight of 2 kDa (polymerization number: about 5) Synthesis of amide bond (compound 9)
Compound 1 obtained in Synthesis Example 1 (molecular weight: 6.8 kDa, 0.86 g) and Compound 8 obtained in Synthesis Example 8 were dissolved in DMF (80 mL) at 35 ° C, and the temperature was lowered to 25 ° C. , 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.572 g) and diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (1.0 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. Thereafter, DIPCI (0.42 mL) and 2-methoxyethyleneamine (0.24 mL) were added and stirred for 3 hours. Thereafter, ethyl acetate (160 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (1.6 L) over 30 minutes, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (50 mL). The obtained precipitate was dissolved in DMF (40 mL) and purified water (0.4 mL), and an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ) manufactured by Dow Chemical, 20 mL) was added. After stirring for 1 hour, ethyl acetate (80 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (800 mL) over 30 minutes, followed by stirring at room temperature for 2 hours. The precipitate was collected by filtration and dried under vacuum to obtain a compound 9 precursor as a solid.
The total number of aspartic acid units bonded in the precursor of compound 9 was calculated by quantifying liberated benzyl alcohol after high-performance liquid chromatography (HPLC) after alkali hydrolysis. As a result, the benzyl alcohol content was 15%, and the total number of aspartic acid units bonded was calculated to be 72.
In addition, since the number of aspartic acids polymerized per molecule of the compound 8 is 4.5, the number of the compounds 8 bound per one molecule of the precursor of the compound 9 was calculated to be 16 molecules from the following formula.
The number of compounds 8 bound per molecule of the hyperbranched polymer carrier = 72 / 4.5 = 16

化合物９前駆体をＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解し、１０％パラジウム炭素（０．３４ｇ、ナカライテスク社製）を加え、水素雰囲気下で一夜撹拌した。パラジウム炭素を濾別後、酢酸エチル（８０ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（８００ｍＬ）に３０分かけて滴下し、室温にて１時間撹拌した。沈析物を濾取後、真空乾燥し化合物９（２．９９ｇ）を得た。
化合物９の分子量は以下の式より４７キロダルトンと算出された。
［化合物９の分子量］＝［多分岐高分子担体分子量］＋（多分岐高分子担体１分子あたりに結合した化合物８の数） × ［（化合物８の１分子あたりのポリエチレングリコールセグメント分子量）＋（ポリアスパラギン酸単位分子量） × （化合物８の１分子あたりのアスパラギン酸重合数）］
なお、ポリアスパラギン酸単位分子の分子量は１１５．０９を用いた。The compound 9 precursor was dissolved in DMF (40 mL), 10% palladium carbon (0.34 g, manufactured by Nacalai Tesque) was added, and the mixture was stirred overnight under a hydrogen atmosphere. After filtering off the palladium carbon, ethyl acetate (80 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (800 mL) over 30 minutes, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The precipitate was collected by filtration and dried under vacuum to obtain Compound 9 (2.99 g).
The molecular weight of compound 9 was calculated from the following formula to be 47 kDa.
[Molecular weight of compound 9] = [molecular weight of hyperbranched polymer carrier] + (number of compounds 8 bound per molecule of hyperbranched polymer carrier) × [(polyethylene glycol segment molecular weight per molecule of compound 8) + ( (Polyaspartic acid unit molecular weight) × (polymerization number of aspartic acid per molecule of compound 8)]
The molecular weight of the polyaspartic acid unit molecule was 115.09.

［合成例１０］Ｎ−(ｔ−ブトキシカルボニル)−ポリ−β−Ｌ−アスパラギン酸ベンジルエステル（重合数５）の合成（化合物１０）
Ｎ−(ｔ−ブトキシカルボニル)−Ｌ−アスパラギン酸−１−ベンジルエステル（渡辺化学工業社製、１５．４ｇ）と９−フルオレニルメタノール（東京化成社製、１８．４ｇ）をＤＭＦ（９５．２ｍｇ）に溶解後、ＤＭＡＰ（１．１６ｇ）及びＷＳＣＤ塩酸塩（１３．６ｇ）を加え、室温にて３時間攪拌した。その後、反応液に精製水を加え、酢酸エチル（３００ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を飽和重曹水、飽和塩化アンモニウム水、飽和食塩水にて順次洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。減圧濃縮にて酢酸エチルを除去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行い、真空乾燥後、固形物（８．４ｇ）を得た。
この固形物（８．４ｇ）を酢酸エチル（８４ｍＬ）に溶解後、４規定の塩酸−酢酸エチル溶液（８４ｍＬ）を加え、室温にて２時間攪拌した。反応液中に析出した固形物をろ過し真空乾燥を行い、固形物（６．９ｇ）を得た。
この固形物（６．７ｇ）とＮ−(ｔ−ブトキシカルボニル)−Ｌ−アスパラギン酸−１−ベンジル（渡辺化学工業社製、５．４ｇ）をＤＭＦに溶解後、ジイソプロピルエチルアミン（２．９ｍＬ）、ＨＯＢｔ（２．８ｇ）、ＷＳＣＤ塩酸塩（４．８ｇ）を加え、室温にて６時間した。反応液に精製水を加え、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機層を、飽和重曹水、飽和塩化アンモニウム水、飽和食塩水にて順次洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。減圧濃縮にてジクロロメタンを除去後、真空乾燥を行い、固形物（１１．０ｇ）を得た。
この固形物に対し、上記の４規定の塩酸酢酸エチル溶液によるｔ−ブトキシカルボニル基の除去及び縮合剤としてＷＳＣＤ塩酸塩、縮合補助剤としてＨＯＢｔを用いたＮ−(ｔ−ブトキシカルボニル)−Ｌ−アスパラギン酸−１−ベンジルとの縮合反応を３回繰り返した後、得た固形物をＤＭＦ（１００ｍＬ）に溶解し、ピペリジン（０．２７μＬ）を加え、室温にて１時間撹拌した。その後、反応液をジイソプロピルエーテル（１Ｌ）に滴下し、析出した沈析物を濾取後、真空乾燥し化合物１０（２．７ｇ）を得た。
ＭＳ：ｍ／ｚ１１４５(Ｍ＋Ｈ)^＋Ｃ６０Ｈ６６Ｎ５Ｏ１８（Ｍ＋Ｈ)^＋としての計算値１１４５
ｍ／ｚ１１４３(Ｍ−Ｈ)⁻ Ｃ６０Ｈ６４Ｎ５Ｏ１８（Ｍ−Ｈ)⁻としての計算値１１４３Synthesis Example 10 Synthesis of N- (t-butoxycarbonyl) -poly-β-L-aspartic acid benzyl ester (polymerization number 5) (Compound 10)
N- (t-butoxycarbonyl) -L-aspartic acid-1-benzyl ester (Watanabe Chemical Industry Co., Ltd., 15.4 g) and 9-fluorenyl methanol (Tokyo Kasei Co., Ltd., 18.4 g) were added to DMF (95 .2 mg), DMAP (1.16 g) and WSCD hydrochloride (13.6 g) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. Thereafter, purified water was added to the reaction solution, and the mixture was extracted with ethyl acetate (300 mL). The organic layer was washed sequentially with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate, a saturated aqueous solution of ammonium chloride, and a saturated saline solution, and dried using sodium sulfate. After removing ethyl acetate by concentration under reduced pressure, purification by silica gel column chromatography was performed, and after drying in vacuo, a solid (8.4 g) was obtained.
After dissolving this solid (8.4 g) in ethyl acetate (84 mL), 4N hydrochloric acid-ethyl acetate solution (84 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The solid substance precipitated in the reaction solution was filtered and dried under vacuum to obtain a solid substance (6.9 g).
This solid (6.7 g) and 1-benzyl N- (t-butoxycarbonyl) -L-aspartate (5.4 g, manufactured by Watanabe Chemical Industry Co., Ltd.) are dissolved in DMF and then diisopropylethylamine (2.9 mL). , HOBt (2.8 g) and WSCD hydrochloride (4.8 g) were added, and the mixture was stirred at room temperature for 6 hours. Purified water was added to the reaction solution, and extracted with dichloromethane. The organic layer was washed successively with a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate, a saturated aqueous solution of ammonium chloride, and a saturated saline solution, and dried using sodium sulfate. After removing dichloromethane by concentration under reduced pressure, vacuum drying was performed to obtain a solid (11.0 g).
Removal of the t-butoxycarbonyl group with the above-mentioned 4N ethyl acetate solution of hydrochloric acid and N- (t-butoxycarbonyl) -L- using WSCD hydrochloride as a condensing agent and HOBt as a condensing aid were performed on this solid. After repeating the condensation reaction with 1-benzyl aspartate three times, the obtained solid was dissolved in DMF (100 mL), piperidine (0.27 μL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. Thereafter, the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (1 L), and the deposited precipitate was collected by filtration and dried in vacuo to obtain Compound 10 (2.7 g).
MS: m / z 1145 (M + H) ⁺ calc'd for C60H66N5O18 (M + H) ⁺ 1145.
m / z 1143 (M-H ) - C60H64N5O18 (M-H) - Calculated as 1143

［合成例１１］平均分子量５キロダルトンのモノメトキシポリエチレングリコール−ブロック−ポリ−β−アスパラギン（重合数５）のアミド結合体の合成（化合物１１）
化合物１０（２．５ｇ）及び片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（１２．１ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−５０Ｈ、日油社製、平均分子量５キロダルトン）をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解後、ＨＯＢｔ（０．４０ｍｇ）及びジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（０．４２ｍＬ）を加え３０℃で９時間撹拌した。その後、その後、酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（１Ｌ）中に１５分かけて滴下し、室温にて一晩撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテルで洗浄し、固形物（１４．３ｇ）を得た。
得られた固形物（１４．２ｇ）をジクロロメタン（９ｍＬ）に溶解後、トリフルオロ酢酸（１２ｍＬ）を加え、室温にて２時間撹拌した。その後、減圧下ジクロロメタンを除去し、残渣をジイソプロピルエーテル（１Ｌ）中に３０分かけて滴下した。室温にて３０分撹拌後、沈析物を濾取してジイソプロピルエーテルで洗浄し、固形物を得た。得た固形物をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、外液メタノールにて透析した。その後、内液を精製水３００ｍＬにて希釈後、減圧濃縮によりメタノールを除去し、凍結乾燥して化合物１１（１２．６ｇ）を得た。
なお、化合物１１の１分子あたりのポリエチレングリコールセグメント分子量は５キロダルトンであり、アスパラギン酸重合数は５である。Synthesis Example 11 Synthesis of amide bond of monomethoxypolyethylene glycol-block-poly-β-asparagine (polymerization number 5) having an average molecular weight of 5 kDa (compound 11)
Compound 10 (2.5 g) and a polyethylene glycol compound having a methoxy group at one end and a 3-aminopropyl group at one end (12.1 g, SUNBRIGHT MEPA-50H, manufactured by NOF CORPORATION, average molecular weight 5 kDalton) were added to DMF (50 mL). Then, HOBt (0.40 mg) and diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (0.42 mL) were added, and the mixture was stirred at 30 ° C. for 9 hours. Thereafter, ethyl acetate (100 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (1 L) over 15 minutes, followed by stirring at room temperature overnight. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether to obtain a solid (14.3 g).
After dissolving the obtained solid (14.2 g) in dichloromethane (9 mL), trifluoroacetic acid (12 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Thereafter, dichloromethane was removed under reduced pressure, and the residue was added dropwise to diisopropyl ether (1 L) over 30 minutes. After stirring at room temperature for 30 minutes, the precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether to obtain a solid. The obtained solid was dissolved in methanol (20 mL) and dialyzed with an external solution methanol. Thereafter, the inner solution was diluted with 300 mL of purified water, and then methanol was removed by concentration under reduced pressure, followed by lyophilization to obtain Compound 11 (12.6 g).
In addition, the molecular weight of the polyethylene glycol segment per molecule of the compound 11 is 5 kDa, and the polymerization number of aspartic acid is 5.

［合成例１２］ハイパーブランチ・２，２−ビス（メチロール）プロピオン酸ポリエステル−３２−カルボキシルと平均分子量５キロダルトンのモノメトキシポリエチレングリコール−ブロック−ポリ−β−アスパラギン酸（重合数５）のアミド結合体の合成（化合物１２）
合成例１１で得られた化合物１１（１０．２ｇ）及び合成例１で得られた化合物１（分子量６．８キロダルトン、１．４ｇ）をＤＭＦ（８０ｍＬ）に３５℃にて溶解し、３０℃に降温し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（１．１ｇ）とジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（２．１５ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３２ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。その後、ＤＩＰＣＩ（１．０８ｍＬ）と２−メトキシエチレンアミン（０．５７ｍＬ）加え３時間撹拌した。その後、酢酸エチル（２００ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（１．５Ｌ）に３０分かけて滴下し、室温にて３０分撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、２５ｍＬ）を加えた。１時間撹拌後、酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（１Ｌ）に３０分かけて滴下し、室温にて２時間撹拌した。沈析物を濾取後、真空乾燥し化合物１２前駆体である固形物（９．０２ｇ）を得た。Synthesis Example 12 Hyperbranched 2,2-bis (methylol) propionic acid polyester-32-carboxyl and amide of monomethoxy polyethylene glycol-block-poly-β-aspartic acid (polymerization number 5) having an average molecular weight of 5 kDa Synthesis of conjugate (compound 12)
Compound 11 (10.2 g) obtained in Synthesis Example 11 and Compound 1 (molecular weight: 6.8 kDa, 1.4 g) obtained in Synthesis Example 1 were dissolved in DMF (80 mL) at 35 ° C. The temperature was lowered to 1 ° C., 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (1.1 g), diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (2.15 mL) and diisopropylethylamine (0.32 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. Thereafter, DIPCI (1.08 mL) and 2-methoxyethyleneamine (0.57 mL) were added and stirred for 3 hours. Thereafter, ethyl acetate (200 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (1.5 L) over 30 minutes, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (50 mL). After dissolving the obtained precipitate in DMF (50 mL), an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ) manufactured by Dow Chemical, 25 mL) was added. After stirring for 1 hour, ethyl acetate (100 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (1 L) over 30 minutes, followed by stirring at room temperature for 2 hours. The precipitate was collected by filtration and dried under vacuum to obtain a solid (9.02 g) as a precursor of compound 12.

この化合物１２前駆体におけるアスパラギン酸ユニットの結合総数は、アルカリ加水分解後、遊離したベンジルアルコールを高速液体体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより算出した。その結果ベンジルアルコール含量は７．７％であり、はアスパラギン酸ユニットの結合総数は４０と算出された。
また、化合物１１の１分子あたりのアスパラギン酸の重合数は５であるので、多分岐高分子担体１分子あたりに結合した化合物１１の数は、以下の式より８分子と算出された。
多分岐高分子担体１分子あたりに結合した化合物８の数＝４０／５＝８The total number of aspartic acid units bonded in the precursor of Compound 12 was calculated by quantifying liberated benzyl alcohol after high-performance liquid chromatography (HPLC) after alkaline hydrolysis. As a result, the benzyl alcohol content was 7.7%, and the total number of aspartic acid units bonded was calculated to be 40.
Further, since the number of aspartic acids polymerized per molecule of the compound 11 is 5, the number of the compound 11 bound per molecule of the hyperbranched polymer carrier was calculated to be 8 molecules from the following formula.
The number of compounds 8 bound per molecule of the hyperbranched polymer carrier = 40/5 = 8

この化合物１２前駆体（９．０ｇ）をＤＭＦ（９０ｍＬ）に溶解し、１０％パラジウム炭素（０．９０ｇ、ナカライテスク社製）を加え、水素雰囲気下で一夜撹拌した。パラジウム炭素を濾別後、酢酸エチル（９０ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（１．５Ｌ）に１時間かけて滴下し、室温にて一晩撹拌した。沈析物を濾取後、真空乾燥し化合物１２（５．０１ｇ）を得た。
化合物１２の分子量は以下の式より５２キロダルトンと算出された。
［化合物１２の分子量］＝［多分岐高分子担体分子量］＋（多分岐高分子担体１分子あたりに結合した化合物１１の数） × ［（化合物１１の１分子あたりのポリエチレングリコールセグメント分子量）＋（ポリアスパラギン酸単位分子量） × （化合物１１の１分子あたりのアスパラギン酸重合数）］
なお、ポリアスパラギン酸単位分子の分子量は１１５．０９を用いた。This compound 12 precursor (9.0 g) was dissolved in DMF (90 mL), 10% palladium carbon (0.90 g, manufactured by Nacalai Tesque) was added, and the mixture was stirred overnight under a hydrogen atmosphere. After filtering off the palladium carbon, ethyl acetate (90 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (1.5 L) over 1 hour and stirred at room temperature overnight. The precipitate was collected by filtration and dried under vacuum to obtain Compound 12 (5.01 g).
The molecular weight of compound 12 was calculated to be 52 kDa from the following formula.
[Molecular weight of compound 12] = [molecular weight of hyperbranched polymer carrier] + (number of compounds 11 bound per molecule of hyperbranched polymer carrier) × [(polyethylene glycol segment molecular weight per molecule of compound 11) + ( (Polyaspartic acid unit molecular weight) × (polymerization number of aspartic acid per molecule of compound 11)]
The molecular weight of the polyaspartic acid unit molecule was 115.09.

［実施例１］多分岐高分子担体（末端カルボン酸数３２）と平均分子量５キロダルトンの片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール及びアスパラギン酸−１−アラニンメチルエステル−４−ゲムシタビンアミドのアミド結合体の合成
合成例１で得られた化合物１（分子量６．８キロダルトン、０．６０ｇ）と、片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（３．５ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−５０Ｈ、日油社製、平均分子量５キロダルトン）をＤＭＦ（２８ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２０℃に降温し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．４７ｇ）と、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（０．４２ｍＬ）を加えて、４．５時間撹拌した。その後、合成例３で得られた化合物３（０．８４ｇ）とＤＩＰＣＩ（０．４２ｍＬ）とジイソプロピルエチルアミン（０．３２ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。その後、酢酸エチル（５４ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（５４０ｍＬ）に１０分かけて滴下し、室温にて３０分撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（１０６ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、５３ｍＬ）を加えた。３０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、実施例１に係る標記化合物（４．６９ｇ）を得た。Example 1 Multi-branched polymer carrier (terminal carboxylic acid number: 32), polyethylene glycol having one terminal methoxy group and one terminal 3-aminopropyl group having an average molecular weight of 5 kDa and aspartic acid-1-alanine methyl ester-4- Synthesis of amide bond of gemcitabine amide Compound 1 (molecular weight: 6.8 kDa, 0.60 g) obtained in Synthesis Example 1 and a polyethylene glycol compound having a methoxy group at one end and a 3-aminopropyl group at one end (3. 5 g, SUNBRIGHT MEPA-50H, manufactured by NOF CORPORATION, average molecular weight: 5 kDa) was dissolved in DMF (28 mL) at 35 ° C, the temperature was lowered to 20 ° C, and 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.47 g). And diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (0.42 mL), and stirred for 4.5 hours. It was. Thereafter, compound 3 (0.84 g) obtained in Synthesis Example 3, DIPCI (0.42 mL), and diisopropylethylamine (0.32 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. Thereafter, ethyl acetate (54 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (540 mL) over 10 minutes, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (50 mL). After dissolving the obtained precipitate in purified water (106 mL), an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ), 53 mL, manufactured by Dow Chemical) was added. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound of Example 1 (4.69 g).

実施例１の化合物をアルカリ加水分解した後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、実施例１におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、実施例１におけるゲムシタビン含有量は７．４質量％であった。したがって、多分岐高分子担体の末端カルボン酸数３２に対するゲムシタビン結合率は４６．６％と算出された。
この結果、実施例１のゲムシタビン総分子量は３．９キロダルトンと算出された。After alkaline hydrolysis of the compound of Example 1, the gemcitabine content in Example 1 was determined by quantifying the released gemcitabine by high performance liquid chromatography (HPLC). As a result, the gemcitabine content in Example 1 was 7.4% by mass. Therefore, the binding ratio of gemcitabine to the number of terminal carboxylic acids of the hyperbranched polymer carrier was calculated to be 46.6%.
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Example 1 was calculated to be 3.9 kilodalton.

実施例１のポリエチレングリコール化合物の結合量は、ポリエチレングリコール化合物の仕込当量及びポリエチレングリコール化合物の消費率より８分子であった。したがって、総ポリエチレングリコールセグメント分子量は４０キロダルトンであった。
なお、本反応における多分岐高分子担体の末端カルボキシ基に対するポリエチレングリコールセグメント化合物の仕込当量＝０．２５当量であり、ポリエチレングリコールセグメント化合物の消費率＝１であった。The binding amount of the polyethylene glycol compound of Example 1 was 8 molecules based on the equivalent charge of the polyethylene glycol compound and the consumption rate of the polyethylene glycol compound. Thus, the total polyethylene glycol segment molecular weight was 40 kilodaltons.
In this reaction, the equivalent charge of the polyethylene glycol segment compound to the terminal carboxy group of the multibranched polymer carrier was 0.25 equivalent, and the consumption rate of the polyethylene glycol segment compound was 1.

上記の化合物１の分子量、結合ポリエチレングリコールセグメント分子量、結合ゲムシタビン総分子量及びアスパラギン酸ユニット残基の総分子量から、実施例１の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、５３キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、７５質量％と算出された。
また、実施例１の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は５，９８６ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は０．４６倍であった。また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は８１，７５０であり、会合分子数は１．５であった。From the molecular weight of Compound 1, the molecular weight of the bound polyethylene glycol segment, the total molecular weight of the bound gemcitabine, and the total molecular weight of the aspartic acid unit residues, the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 1 was calculated to be 53 kDa. Was.
Further, the content of the polyethylene glycol segment was calculated to be 75% by mass.
When the degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 1 was measured by laser light scattering intensity, the light scattering intensity was 5,986 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 0.46. Moreover, the molecular weight measured by SEC-MALS was 81,750, and the number of associated molecules was 1.5.

［実施例２］多分岐高分子担体（末端カルボン酸数３２）と平均分子量５キロダルトンの片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール及びアスパラギン酸−１−ロイシンメチルエステル−４−ゲムシタビンアミドのアミド結合体の合成
合成例１で得られた化合物１（分子量６．８キロダルトン、０．５９ｇ）と、片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（３．５ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−５０Ｈ、日油社製、平均分子量５キロダルトン）をＤＭＦ（２８ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２０℃に降温し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．４７ｇ）と、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（０．４１ｍＬ）を加えて、５時間撹拌した。その後、合成例４で得られた化合物４（０．９０ｇ）とＤＩＰＣＩ（０．４１ｍＬ）とジイソプロピルエチルアミン（０．３２ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。その後、酢酸エチル（５６ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（５６０ｍＬ）に１０分かけて滴下し、室温にて３０分撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（５３ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、５３ｍＬ）を加えた。３０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、実施例２に係る標記化合物（４．３９ｇ）を得た。Example 2 Multi-branched polymer carrier (terminal carboxylic acid number 32), polyethylene glycol having one terminal methoxy group and one terminal 3-aminopropyl group having an average molecular weight of 5 kDa and aspartic acid-1-leucine methyl ester-4- Synthesis of amide bond of gemcitabine amide Compound 1 (molecular weight: 6.8 kDa, 0.59 g) obtained in Synthesis Example 1 and a polyethylene glycol compound having a methoxy group at one end and a 3-aminopropyl group at one end (3. 5 g, SUNBRIGHT MEPA-50H, manufactured by NOF CORPORATION, average molecular weight: 5 kilodalton) was dissolved in DMF (28 mL) at 35 ° C, the temperature was lowered to 20 ° C, and 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.47 g). And diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (0.41 mL) were added and stirred for 5 hours. . Thereafter, Compound 4 (0.90 g) obtained in Synthesis Example 4, DIPCI (0.41 mL), and diisopropylethylamine (0.32 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. Thereafter, ethyl acetate (56 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (560 mL) over 10 minutes, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (50 mL). After the obtained precipitate was dissolved in purified water (53 mL), an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ), 53 mL, manufactured by Dow Chemical) was added. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound according to Example 2 (4.39 g).

実施例２の化合物をアルカリ加水分解した後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、実施例２におけるゲムシタビン含有量は６．５質量％であった。したがって、多分岐高分子担体の末端カルボン酸数３２に対する結合率は４０．９％と算出された。
この結果、実施例２のゲムシタビン総分子量は３．４キロダルトンであった。After alkali hydrolysis of the compound of Example 2, gemcitabine liberated was quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) to determine the content of gemcitabine in the present compound. As a result, the gemcitabine content in Example 2 was 6.5% by mass. Therefore, the binding rate of the multi-branched polymer carrier to the number of terminal carboxylic acids of 32 was calculated to be 40.9%.
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Example 2 was 3.4 kDa.

実施例２のポリエチレングリコール化合物の結合量は、ポリエチレングリコール化合物の仕込当量及びポリエチレングリコール化合物の消費率より７．９分子であった。したがって、総ポリエチレングリコールセグメント分子量は４０キロダルトンであった。
なお、本反応における多分岐高分子担体の末端カルボキシ基に対するポリエチレングリコールセグメント化合物の仕込当量＝０．２５当量であり、ポリエチレングリコールセグメント化合物の消費率＝０．９９３であった。The binding amount of the polyethylene glycol compound in Example 2 was 7.9 molecules based on the equivalent charge of the polyethylene glycol compound and the consumption rate of the polyethylene glycol compound. Thus, the total polyethylene glycol segment molecular weight was 40 kilodaltons.
In this reaction, the equivalent of the charged polyethylene glycol segment compound to the terminal carboxy group of the multibranched polymer carrier was 0.25 equivalent, and the consumption rate of the polyethylene glycol segment compound was 0.993.

上記の化合物１の分子量、結合ポリエチレングリコールセグメント分子量、結合ゲムシタビン総分子量及びアスパラギン酸ユニット残基の総分子量から、実施例２の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、５３キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、７５質量％と算出された。
また、実施例２の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は７，０３０ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は０．５４倍であった。また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は８５，４１０であり、会合分子数は１．６であった。From the molecular weight of Compound 1, the molecular weight of the bound polyethylene glycol segment, the total molecular weight of the bound gemcitabine, and the total molecular weight of the aspartic acid unit residues, the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 2 was calculated to be 53 kDa. Was.
Further, the content of the polyethylene glycol segment was calculated to be 75% by mass.
Further, the degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 2 was measured by laser light scattering intensity, and the light scattering intensity was 7,030 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 0.54 times. The SEC-MALS measurement molecular weight was 85,410 and the number of associated molecules was 1.6.

［実施例３］多分岐高分子担体（末端カルボン酸数３２）と平均分子量５キロダルトンの片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール及びアスパラギン酸−１−イソロイシンメチルエステル−４−ゲムシタビンアミドのアミド結合体の合成
合成例１で得られた化合物１（分子量６．８キロダルトン、０．７７ｇ）と、片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（４．５ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−５０Ｈ、日油社製、平均分子量５キロダルトン）をＤＭＦ（３６ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２０℃に降温し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．６１ｇ）と、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（０．５４ｍＬ）を加えて、７時間撹拌した。その後、合成例５で得られた化合物５（１．１７ｇ）とＤＩＰＣＩ（０．５４ｍＬ）とジイソプロピルエチルアミン（０．６９ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。その後、酢酸エチル（７２ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（７２０ｍＬ）に１５分かけて滴下し、室温にて２時間撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（７０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（６４ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、６４ｍＬ）を加えた。３０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、実施例３に係る標記化合物（５．７３ｇ）を得た。Example 3 Multi-branched polymer carrier (terminal carboxylic acid number: 32), polyethylene glycol having one terminal methoxy group and one terminal 3-aminopropyl group having an average molecular weight of 5 kDa and aspartic acid-1-isoleucine methyl ester-4- Synthesis of amide bond of gemcitabine amide Compound 1 (molecular weight: 6.8 kDa, 0.77 g) obtained in Synthesis Example 1 and a polyethylene glycol compound having a methoxy group at one end and a 3-aminopropyl group at one end (4. 5 g, SUNBRIGHT MEPA-50H, manufactured by NOF CORPORATION, average molecular weight: 5 kilodalton) was dissolved in DMF (36 mL) at 35 ° C, the temperature was lowered to 20 ° C, and 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.61 g). And diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (0.54 mL), and stirred for 7 hours. It was. Thereafter, compound 5 (1.17 g) obtained in Synthesis Example 5, DIPCI (0.54 mL), and diisopropylethylamine (0.69 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. Thereafter, ethyl acetate (72 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (720 mL) over 15 minutes, followed by stirring at room temperature for 2 hours. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (70 mL). After dissolving the obtained precipitate in purified water (64 mL), an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ), 64 mL, manufactured by Dow Chemical) was added. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound of Example 3 (5.73 g).

実施例３の化合物をアルカリ加水分解後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、実施例３におけるゲムシタビン含有量は７．７質量％であった。したがって、多分岐高分子担体の末端カルボン酸数３２に対する結合率は４９．８％と算出された。
この結果、実施例３のゲムシタビン総分子量は４．２キロダルトンであった。After alkaline hydrolysis of the compound of Example 3, gemcitabine liberated was quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) to determine the content of gemcitabine in the present compound. As a result, the gemcitabine content in Example 3 was 7.7% by mass. Therefore, the binding rate of the multi-branched polymer carrier to the number of terminal carboxylic acids of 32 was calculated to be 49.8%.
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Example 3 was 4.2 kilodalton.

実施例３のポリエチレングリコール化合物の結合量は、ポリエチレングリコール化合物の仕込当量及びポリエチレングリコール化合物の消費率より８分子であった。したがって、総ポリエチレングリコールセグメント分子量は４０キロダルトンであった。
なお、本反応における多分岐高分子担体の末端カルボキシ基に対するポリエチレングリコールセグメント化合物の仕込当量＝０．２５当量であり、ポリエチレングリコールセグメント化合物の消費率＝０．９９９であった。The binding amount of the polyethylene glycol compound of Example 3 was 8 molecules based on the equivalent charge of the polyethylene glycol compound and the consumption rate of the polyethylene glycol compound. Thus, the total polyethylene glycol segment molecular weight was 40 kilodaltons.
In this reaction, the charged equivalent of the polyethylene glycol segment compound to the terminal carboxy group of the multibranched polymer carrier was 0.25 equivalent, and the consumption rate of the polyethylene glycol segment compound was 0.999.

上記の化合物１の分子量、結合ポリエチレングリコールセグメント分子量、結合ゲムシタビン総分子量及びアスパラギン酸ユニット残基の総分子量から、実施例３の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、５４キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、７４質量％と算出された。
また、実施例３の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は８，５６０ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は０．６６倍であった。
また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は８，５６０であり、会合分子数は２．６であった。From the molecular weight of compound 1, the molecular weight of the bound polyethylene glycol segment, the total molecular weight of the bound gemcitabine, and the total molecular weight of the aspartic acid unit residues, the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 3 was calculated to be 54 kDa. Was.
The content of the polyethylene glycol segment was calculated to be 74% by mass.
Further, the degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 3 was measured by laser light scattering intensity, and the light scattering intensity was 8,560 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 0.66 times.
The molecular weight measured by SEC-MALS was 8,560, and the number of associated molecules was 2.6.

［実施例４］多分岐高分子担体（末端カルボン酸数６４）と平均分子量２キロダルトンの片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール及びアスパラギン酸−１−ロイシンメチルエステル−４−ゲムシタビンアミドのアミド結合体の合成
合成例２で得られた化合物２（分子量１３．７キロダルトン、０．５３ｇ）と、片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（１．７ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−２０Ｈ、日油社製、平均分子量２キロダルトン）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２０℃に降温し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．３１ｇ）と、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（０．３６ｍＬ）を加えて、４時間撹拌した。その後、合成例４で得られた化合物４（０．８０ｇ）とＤＩＰＣＩ（０．３６ｍＬ）とジイソプロピルエチルアミン（０．２８ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。その後、酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（５００ｍＬ）に３０分かけて滴下し、室温にて３０分撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（６０ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、４０ｍＬ）を加えた。２０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、実施例４に係る標記化合物（２．４２ｇ）を得た。[Example 4] Multi-branched polymer carrier (terminal carboxylic acid number: 64), polyethylene glycol having one terminal methoxy group and one terminal 3-aminopropyl group having an average molecular weight of 2 kDa and aspartic acid-1-leucine methyl ester-4- Synthesis of amide bond of gemcitabine amide Compound 2 (molecular weight: 13.7 kDa, 0.53 g) obtained in Synthesis Example 2 and a polyethylene glycol compound having a methoxy group at one end and a 3-aminopropyl group at one end (1. 7 g, SUNBRIGHT MEPA-20H, manufactured by NOF Corporation, average molecular weight 2 kilodalton) was dissolved in DMF (20 mL) at 35 ° C, the temperature was lowered to 20 ° C, and 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.31 g). And diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (0.36 mL), and stirred for 4 hours It was. Thereafter, compound 4 (0.80 g) obtained in Synthesis Example 4, DIPCI (0.36 mL) and diisopropylethylamine (0.28 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. Thereafter, ethyl acetate (20 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (500 mL) over 30 minutes, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (50 mL). After dissolving the obtained precipitate in purified water (60 mL), an ion-exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ), 40 mL, manufactured by Dow Chemical) was added. After stirring for 20 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound of Example 4 (2.42 g).

実施例４の化合物をアルカリ加水分解後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、実施例４におけるゲムシタビン含有量は１０．２質量％であった。したがって、多分岐高分子担体の末端カルボン酸数６４に対する結合率は３７．５％と算出された。
この結果、実施例４のゲムシタビン総分子量は６．３キロダルトンであった。After alkaline hydrolysis of the compound of Example 4, gemcitabine liberated was quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) to determine the content of gemcitabine in the present compound. As a result, the gemcitabine content in Example 4 was 10.2% by mass. Therefore, the binding ratio of the multi-branched polymer carrier to the number of terminal carboxylic acids of 64 was calculated to be 37.5%.
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Example 4 was 6.3 kilodalton.

実施例４のポリエチレングリコール化合物の結合量は、ポリエチレングリコール化合物の仕込当量及びポリエチレングリコール化合物の消費率より１８．３分子であった。したがって、総ポリエチレングリコールセグメント分子量は３６．６キロダルトンであった。
なお、本反応における多分岐高分子担体の末端カルボキシ基に対するポリエチレングリコールセグメント化合物の仕込当量＝０．３１当量であり、ポリエチレングリコールセグメント化合物の消費率＝０．９２０であった。The binding amount of the polyethylene glycol compound of Example 4 was 18.3 molecules based on the equivalent charge of the polyethylene glycol compound and the consumption rate of the polyethylene glycol compound. Thus, the total polyethylene glycol segment molecular weight was 36.6 kilodaltons.
In this reaction, the equivalent of the charged polyethylene glycol segment compound to the terminal carboxy group of the multibranched polymer carrier was 0.31 equivalent, and the consumption rate of the polyethylene glycol segment compound was 0.920.

上記の化合物２の分子量、結合ポリエチレングリコールセグメント分子量、結合ゲムシタビン総分子量及びアスパラギン酸ユニット残基の総分子量から、実施例４の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、６２キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、５９質量％と算出された。
また、実施例４の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は５，７４６ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は０．４４倍であった。また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は７２，０７０であり、会合分子数は１．２であった。From the molecular weight of Compound 2, the molecular weight of the bound polyethylene glycol segment, the total molecular weight of the bound gemcitabine, and the total molecular weight of the aspartic acid unit residue, the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-bound hyperbranched compound of Example 4 was calculated to be 62 kDa. Was.
The content of the polyethylene glycol segment was calculated to be 59% by mass.
Further, the degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 4 was measured by laser light scattering intensity, and the light scattering intensity was 5,746 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 0.44. The measured molecular weight of SEC-MALS was 72,070, and the number of associated molecules was 1.2.

［実施例５］多分岐高分子担体（末端カルボン酸数６４）と平均分子量５キロダルトンの片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール及びアスパラギン酸−１−アラニンメチルエステル−４−ゲムシタビンアミドのアミド結合体の合成の合成
合成例２で得られた化合物２（分子量１３．７キロダルトン、０．５５ｇ）と、片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（１．６ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−５０Ｈ、日油社製、平均分子量５キロダルトン）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２０℃に降温し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．３２ｇ）と、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（０．４０ｍＬ）を加えて、４時間撹拌した。その後、合成例３で得られた化合物３（１．１５ｇ）とＤＩＰＣＩ（０．４０ｍＬ）とジイソプロピルエチルアミン（０．４５ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。その後、酢酸エチル（２０ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（５００ｍＬ）に１０分かけて滴下し、室温にて１時間撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（１２０ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、５０ｍＬ）を加えた。２０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、実施例５に係る標記化合物（２．８６ｇ）を得た。[Example 5] Multi-branched polymer carrier (terminal carboxylic acid number 64), polyethylene glycol having one terminal methoxy group and one terminal 3-aminopropyl group having an average molecular weight of 5 kDa and aspartic acid-1-alanine methyl ester-4- Synthesis of synthesis of amide bond of gemcitabine amide Compound 2 (molecular weight: 13.7 kDa, 0.55 g) obtained in Synthesis Example 2 and a polyethylene glycol compound having a methoxy group at one end and a 3-aminopropyl group at one end ( 1.6 g, SUNBRIGHT MEPA-50H, manufactured by NOF CORPORATION, average molecular weight: 5 kilodalton) was dissolved in DMF (20 mL) at 35 ° C, the temperature was lowered to 20 ° C, and 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (0. 32 g) and diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (0.40 mL) It stirred. Thereafter, the compound 3 (1.15 g) obtained in Synthesis Example 3, DIPCI (0.40 mL) and diisopropylethylamine (0.45 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. Thereafter, ethyl acetate (20 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (500 mL) over 10 minutes, followed by stirring at room temperature for 1 hour. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (50 mL). After dissolving the obtained precipitate in purified water (120 mL), an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ) manufactured by Dow Chemical, 50 mL) was added. After stirring for 20 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound of Example 5 (2.86 g).

実施例５の化合物をアルカリ加水分解後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、実施例５におけるゲムシタビン含有量は１５．７質量％であった。したがって、多分岐高分子担体の末端カルボン酸数６４に対する結合率は５９．４％と算出された。
この結果、実施例５のゲムシタビン総分子量は１０．０キロダルトンであった。After alkaline hydrolysis of the compound of Example 5, gemcitabine liberated was quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) to determine the content of gemcitabine in the present compound. As a result, the gemcitabine content in Example 5 was 15.7% by mass. Therefore, the binding ratio of the multi-branched polymer carrier to the number of terminal carboxylic acids of 64 was calculated to be 59.4%.
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Example 5 was 10.0 kilodalton.

実施例５のポリエチレングリコール化合物の結合量は、ポリエチレングリコール化合物の仕込当量及びポリエチレングリコール化合物の消費率より６．６分子であった。したがって、総ポリエチレングリコールセグメント分子量は３３キロダルトンであった。
なお、本反応における多分岐高分子担体の末端カルボキシ基に対するポリエチレングリコールセグメント化合物の仕込当量＝０．１２５当量であり、ポリエチレングリコールセグメント化合物の消費率＝０．８２５であった。The binding amount of the polyethylene glycol compound of Example 5 was 6.6 molecules based on the equivalent charge of the polyethylene glycol compound and the consumption rate of the polyethylene glycol compound. Thus, the total polyethylene glycol segment molecular weight was 33 kilodaltons.
In this reaction, the charged equivalent of the polyethylene glycol segment compound to the terminal carboxy group of the multibranched polymer carrier was 0.125 equivalent, and the consumption rate of the polyethylene glycol segment compound was 0.825.

上記の化合物２の分子量、結合ポリエチレングリコールセグメント分子量、結合ゲムシタビン総分子量及びアスパラギン酸ユニット残基の総分子量から、実施例５の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、６４キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、５２質量％と算出された。
また、実施例５の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は３１，８６５ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は２．４６倍であった。また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は２２０，５００であり、会合分子数は３．５であった。From the molecular weight of the compound 2, the molecular weight of the bound polyethylene glycol segment, the total molecular weight of the bound gemcitabine, and the total molecular weight of the aspartic acid unit residue, the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 5 was calculated to be 64 kDa. Was.
The polyethylene glycol segment content was calculated to be 52% by mass.
Further, the degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 5 was measured by laser light scattering intensity, and the light scattering intensity was 31,865 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 2.46 times. The molecular weight measured by SEC-MALS was 220,500, and the number of associated molecules was 3.5.

［実施例６］ハイパーブランチ・２，２−ビス（メチロール）プロピオン酸ポリエステル−３２−カルボキシルと３−アミノプロピル−ポリ−α−アスパラギン酸（重合数約１１）及び平均分子量５キロダルトンの片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコールのアミド結合体へのゲムシタビンの導入
合成例７で得られた化合物７（５．７ｇ）とゲムシタビン（１．２ｇ、ＳＣＩＮＯＰＨＡＲＭ社製）を、ＤＭＦ（２９ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２５℃にて１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．９６ｇ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（２．０ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。反応液を酢酸エチル（４５ｍＬ）で希釈し、ジイソプロピルエーテル（５００ｍＬ）に３０分かけて滴下し、室温にて１時間攪拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（１０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（６０ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、２８ｍＬ）を加えた。３０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、実施例６に係る標記化合物（６．２６ｇ）を得た。Example 6 Hyperbranched 2,2-bis (methylol) propionic acid polyester-32-carboxyl and 3-aminopropyl-poly-α-aspartic acid (polymerization number: about 11) and one terminal having an average molecular weight of 5 kDa Introduction of Gemcitabine to Amide Conjugate of Polyethylene Glycol with One End of 3-methoxypropyl Group of Methoxy Group Compound 7 (5.7 g) obtained in Synthesis Example 7 and gemcitabine (1.2 g, manufactured by SCINO PHARM) were added to DMF. (29 mL) at 35 ° C., 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.96 g) and diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (2.0 mL) were added at 25 ° C., and the mixture was stirred overnight. The reaction solution was diluted with ethyl acetate (45 mL), added dropwise to diisopropyl ether (500 mL) over 30 minutes, and stirred at room temperature for 1 hour. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (10 mL). After dissolving the obtained precipitate in purified water (60 mL), an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ) manufactured by Dow Chemical, 28 mL) was added. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound according to Example 6 (6.26 g).

実施例６の化合物をアルカリ加水分解後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、実施例６におけるゲムシタビン含有量は９．６質量％であった。したがってアスパラギン酸単位の結合総数６４．９に対する結合率は４０％（結合数２６）と算出された。
この結果、実施例６のゲムシタビン総分子量は６．８キロダルトンであった。After alkaline hydrolysis of the compound of Example 6, gemcitabine released was quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) to determine the content of gemcitabine in the present compound. As a result, the gemcitabine content in Example 6 was 9.6% by mass. Therefore, the binding ratio of the aspartic acid unit to the total number of bonds of 64.9 was calculated to be 40% (the number of bonds: 26).
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Example 6 was 6.8 kDa.

実施例６の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、化合物７の分子量及び結合ゲムシタビン総分子量から、７１キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、７０質量％と算出された。
また、実施例６の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は１７，７４０ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は１．３７倍であった。また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は１７９，６００であり、会合分子数は２．５であったThe molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 6 was calculated to be 71 kDa from the molecular weight of compound 7 and the total molecular weight of bound gemcitabine.
Further, the content of the polyethylene glycol segment was calculated to be 70% by mass.
The degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 6 was measured by laser light scattering intensity, and the light scattering intensity was 17,740 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 1.37 times. The molecular weight measured by SEC-MALS was 179,600, and the number of associated molecules was 2.5.

［実施例７］ハイパーブランチ・２，２−ビス（メチロール）プロピオン酸ポリエステル−３２−カルボキシルと平均分子量２キロダルトンのモノメトキシポリエチレングリコール−ブロック−ポリ−α−アスパラギン酸（重合数約５）のアミド結合体へのゲムシタビンの導入
合成例９で得られた化合物９（３．０ｇ）とゲムシタビン（０．９７ｇ、ＳＣＩＮＯＰＨＡＲＭ社製）を、ＤＭＦ（３１ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２０℃にて１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．８５ｇ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（１．７ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。反応液を酢酸エチル（３５ｍＬ）及びジイソプロピルエーテル（３５０ｍＬ）の混合溶媒中に３０分かけて滴下し、室温にて１時間攪拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（１０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（６０ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、３０ｍＬ）を加えた。３０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、実施例７に係る標記化合物（５．９３ｇ）を得た。Example 7 Hyperbranched 2,2-bis (methylol) propionic acid polyester-32-carboxyl and monomethoxy polyethylene glycol-block-poly-α-aspartic acid having an average molecular weight of 2 kDa (polymerization number: about 5) Introduction of Gemcitabine into Amide Conjugate Compound 9 (3.0 g) obtained in Synthesis Example 9 and gemcitabine (0.97 g, manufactured by SCINO PHARM) were dissolved in DMF (31 mL) at 35 ° C, and then dissolved at 20 ° C. Then, 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.85 g) and diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (1.7 mL) were added thereto, and the mixture was stirred overnight. The reaction solution was dropped into a mixed solvent of ethyl acetate (35 mL) and diisopropyl ether (350 mL) over 30 minutes, and stirred at room temperature for 1 hour. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (10 mL). After dissolving the obtained precipitate in purified water (60 mL), an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ), 30 mL, manufactured by Dow Chemical) was added. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound according to Example 7 (5.93 g).

実施例７の化合物をアルカリ加水分解後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、実施例７におけるゲムシタビン含有量は１２．６質量％であった。したがってアスパラギン酸単位の結合総数７２に対する結合率は３６％（結合数２６）と算出された。
この結果、実施例７のゲムシタビン総分子量は６．８キロダルトンであった。After alkaline hydrolysis of the compound of Example 7, gemcitabine liberated was quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) to determine the content of gemcitabine in the present compound. As a result, the gemcitabine content in Example 7 was 12.6% by mass. Therefore, the binding ratio of aspartic acid units to the total number of bonds 72 was calculated to be 36% (the number of bonds: 26).
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Example 7 was 6.8 kDa.

実施例７の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、化合物９の分子量及び結合ゲムシタビン総分子量から、５７キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、５６質量％と算出された。
また、実施例７の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は８，９１７ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は０．６９倍であった。また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は１２７，８００であり、会合分子数は２．２であったThe molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 7 was calculated to be 57 kDa from the molecular weight of compound 9 and the total molecular weight of the bound gemcitabine.
The content of the polyethylene glycol segment was calculated to be 56% by mass.
When the degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 7 was measured by laser light scattering intensity, the light scattering intensity was 8,917 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 0.69 times. The molecular weight measured by SEC-MALS was 127,800, and the number of associated molecules was 2.2.

［実施例８］ハイパーブランチ・２，２−ビス（メチロール）プロピオン酸ポリエステル−３２−カルボキシルと平均分子量５キロダルトンのモノメトキシポリエチレングリコール−ブロック−ポリ−β−アスパラギン酸（重合数５）のアミド結合体へのゲムシタビンの導入
合成例１２で得られた化合物１２（４．９ｇ）とゲムシタビン（０．７９ｇ、ＳＣＩＮＯＰＨＡＲＭ社製）を、ＤＭＦ（２５ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２０℃にて１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．６３ｇ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（１．３ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。反応液を酢酸エチル（５０ｍＬ）及びジイソプロピルエーテル（１Ｌ）の混合溶媒中に１時間かけて滴下し、室温にて１時間攪拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（２０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（５０ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、２５ｍＬ）を加えた。３０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、実施例８に係る標記化合物（４．３ｇ）を得た。Example 8 Hyperbranched 2,2-bis (methylol) propionic acid polyester-32-carboxyl and amide of monomethoxy polyethylene glycol-block-poly-β-aspartic acid (polymerization number 5) having an average molecular weight of 5 kDa Introduction of Gemcitabine into Conjugate Compound 12 (4.9 g) obtained in Synthesis Example 12 and gemcitabine (0.79 g, manufactured by SCINO PHARM) were dissolved in DMF (25 mL) at 35 ° C, and the solution was heated to 20 ° C. Then, 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.63 g) and diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (1.3 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. The reaction solution was added dropwise over 1 hour to a mixed solvent of ethyl acetate (50 mL) and diisopropyl ether (1 L), followed by stirring at room temperature for 1 hour. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (20 mL). After dissolving the obtained precipitate in purified water (50 mL), an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ) manufactured by Dow Chemical, 25 mL) was added. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound (4.3 g) according to Example 8.

実施例８の化合物をアルカリ加水分解後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、本化合物におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、実施例８におけるゲムシタビン含有量は８．７質量％であった。したがってアスパラギン酸単位の結合総数４０に対する結合率は４７％（結合数１９）と算出された。
この結果、実施例８のゲムシタビン総分子量は４．９キロダルトンであった。After alkaline hydrolysis of the compound of Example 8, gemcitabine liberated was quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) to determine the content of gemcitabine in the present compound. As a result, the gemcitabine content in Example 8 was 8.7% by mass. Therefore, the binding ratio of aspartic acid units to the total number of bonds 40 was calculated to be 47% (number of bonds 19).
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Example 8 was 4.9 kilodaltons.

実施例８の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、化合物１２の分子量及び結合ゲムシタビン総分子量から、５７キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、７１質量％と算出された。
また、実施例８の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は１７，８８７ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は１．３８倍であった。また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は９０，６１０であり、会合分子数は１．６であった。The molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 8 was calculated to be 57 kDa from the molecular weight of compound 12 and the total molecular weight of bound gemcitabine.
The content of the polyethylene glycol segment was calculated to be 71% by mass.
The degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 8 was measured by laser light scattering intensity, and the light scattering intensity was 17,887 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 1.38 times. Further, the molecular weight measured by SEC-MALS was 90,610, and the number of associated molecules was 1.6.

［実施例９］多分岐高分子担体（末端カルボン酸数６４）と平均分子量２キロダルトンの片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール及びアスパラギン酸−１−アラニンメチルエステル−４−ゲムシタビンアミドのアミド結合体（ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率が２４％）の合成
合成例２で得られた化合物２（分子量１３．７キロダルトン、０．６０ｇ）と、片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（０．３７ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−２０Ｈ、日油社製、平均分子量２キロダルトン）をＤＭＦ（１９ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２０℃に降温し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．４７ｇ）と、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（０．４１ｍＬ）を加えて、７．０時間撹拌した。その後、合成例３で得られた化合物３（０．７８ｇ）とＤＩＰＣＩ（０．４１ｍＬ）とジイソプロピルエチルアミン（０．３９ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。その後、酢酸エチル（４３ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（４１９ｍＬ）に１０分かけて滴下し、室温にて３０分撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（２５０ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（１１０ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、５０ｍＬ）を加えた。３０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、実施例９に係る標記化合物（１．６９ｇ）を得た。[Example 9] Hyperbranched polymer carrier (terminal carboxylic acid number: 64), polyethylene glycol having one terminal methoxy group and one terminal 3-aminopropyl group having an average molecular weight of 2 kDa, and aspartic acid-1-alanine methyl ester-4- Synthesis of amide bond of gemcitabine amide (polyethylene glycol segment mass content: 24%) Compound 2 (molecular weight: 13.7 kDa, 0.60 g) obtained in Synthesis Example 2, one end methoxy group and one end A 3-aminopropyl group polyethylene glycol compound (0.37 g, SUNBRIGHT MEPA-20H, manufactured by NOF CORPORATION, average molecular weight 2 kDa) was dissolved in DMF (19 mL) at 35 ° C, and the temperature was lowered to 20 ° C. -Hydroxybenzotriazole (HOBt) (0.47 g) and diisopropylcarbo In addition imide (DIPCI) (0.41mL), and stirred for 7.0 hours. Thereafter, the compound 3 (0.78 g) obtained in Synthesis Example 3, DIPCI (0.41 mL) and diisopropylethylamine (0.39 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. Thereafter, ethyl acetate (43 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (419 mL) over 10 minutes, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (250 mL). After dissolving the obtained precipitate in purified water (110 mL), an ion exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ), 50 mL, manufactured by Dow Chemical) was added. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound according to Example 9 (1.69 g).

実施例９の化合物をアルカリ加水分解した後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、実施例９におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、実施例９におけるゲムシタビン含有量は２０．３質量％であった。したがって、多分岐高分子担体の末端カルボン酸数６４に対するゲムシタビン結合率は３９．９％と算出された。
この結果、実施例９のゲムシタビン総分子量は６．７キロダルトンと算出された。After alkaline hydrolysis of the compound of Example 9, the gemcitabine released in Example 9 was determined by quantifying the released gemcitabine by high performance liquid chromatography (HPLC). As a result, the gemcitabine content in Example 9 was 20.3% by mass. Therefore, the binding ratio of gemcitabine to the number of terminal carboxylic acids of the hyperbranched polymer carrier was calculated to be 39.9%.
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Example 9 was calculated to be 6.7 kDa.

実施例９のポリエチレングリコール化合物の結合量は、ポリエチレングリコール化合物の仕込当量及びポリエチレングリコール化合物の消費率より４分子であった。したがって、総ポリエチレングリコールセグメント分子量は８キロダルトンであった。
なお、本反応における多分岐高分子担体の末端カルボキシ基に対するポリエチレングリコールセグメント化合物の仕込当量＝０．０６３当量であり、ポリエチレングリコールセグメント化合物の消費率＝１であった。The binding amount of the polyethylene glycol compound in Example 9 was 4 molecules based on the equivalent charge of the polyethylene glycol compound and the consumption rate of the polyethylene glycol compound. Thus, the total polyethylene glycol segment molecular weight was 8 kilodaltons.
In this reaction, the charged equivalent of the polyethylene glycol segment compound to the terminal carboxy group of the multibranched polymer carrier was 0.063 equivalent, and the consumption rate of the polyethylene glycol segment compound was 1.

上記の化合物２の分子量、結合ポリエチレングリコールセグメント分子量、結合ゲムシタビン総分子量及びアスパラギン酸ユニット残基の総分子量から、実施例９の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、３３キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、２４質量％と算出された。
また、実施例９の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は１，３０６，４３８ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は１０１．０１倍であった。また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は９，９１７，０００であり、会合分子数は３００．３であった。From the molecular weight of the compound 2, the molecular weight of the bound polyethylene glycol segment, the total molecular weight of the bound gemcitabine, and the total molecular weight of the aspartic acid unit residue, the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 9 was calculated to be 33 kDa. Was.
The polyethylene glycol segment content was calculated to be 24% by mass.
In addition, the degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 9 was measured by laser light scattering intensity, and the light scattering intensity was 1,306,438 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 101.01 times. Moreover, the molecular weight measured by SEC-MALS was 9,917,000, and the number of associated molecules was 300.3.

［実施例１０］多分岐高分子担体（末端カルボン酸数６４）と平均分子量２キロダルトンの片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール及びアスパラギン酸−１−アラニンメチルエステル−４−ゲムシタビンアミドのアミド結合体（ポリエチレングリコールセグメントの質量含有率が４４％）の合成
合成例２で得られた化合物２（分子量１３．７キロダルトン、１．９３ｇ）と、片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（２．１１ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−２０Ｈ、日油社製、平均分子量２キロダルトン）をＤＭＦ（８１ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２０℃に降温し、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（１．５１ｇ）と、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（１．３４ｍＬ）を加えて、４．５時間撹拌した。その後、合成例３で得られた化合物３（０．９１ｇ）とＤＩＰＣＩ（１．３４ｍＬ）とジイソプロピルエチルアミン（０．７８ｍＬ）を加えて、一夜撹拌した。その後、酢酸エチル（１８７ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（１８２７ｍＬ）に１０分かけて滴下し、室温にて３０分撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（１０００ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（６００ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、２０３ｍＬ）を加えた。３０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、実施例１０に係る標記化合物（４．３５ｇ）を得た。Example 10 Multi-branched polymer carrier (terminal carboxylic acid number: 64), polyethylene glycol having one terminal methoxy group and one terminal 3-aminopropyl group having an average molecular weight of 2 kDa and aspartic acid-1-alanine methyl ester-4- Synthesis of amide bond of gemcitabine amide (polyethylene glycol segment mass content: 44%) Compound 2 (molecular weight: 13.7 kDa, 1.93 g) obtained in Synthesis Example 2, one end methoxy group and one end A polyethylene glycol compound having a 3-aminopropyl group (2.11 g, SUNBRIGHT MEPA-20H, manufactured by NOF CORPORATION, average molecular weight 2 kDa) was dissolved in DMF (81 mL) at 35 ° C, and the temperature was lowered to 20 ° C. -Hydroxybenzotriazole (HOBt) (1.51 g) and diisopropyl carb Added diimide (DIPCI) (1.34mL), and stirred for 4.5 hours. Thereafter, compound 3 (0.91 g) obtained in Synthesis Example 3, DIPCI (1.34 mL), and diisopropylethylamine (0.78 mL) were added, and the mixture was stirred overnight. Thereafter, ethyl acetate (187 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (1827 mL) over 10 minutes, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (1000 mL). After dissolving the obtained precipitate in purified water (600 mL), an ion-exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ) manufactured by Dow Chemical, 203 mL) was added. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound of Example 10 (4.35 g).

実施例１０の化合物をアルカリ加水分解した後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、実施例１０におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、実施例１０におけるゲムシタビン含有量は８．３質量％であった。したがって、多分岐高分子担体の末端カルボン酸数６４に対するゲムシタビン結合率は１５．７％と算出された。
この結果、実施例１０のゲムシタビン総分子量は２．７キロダルトンと算出された。After alkali hydrolysis of the compound of Example 10, the gemcitabine content in Example 10 was determined by quantifying the released gemcitabine by high performance liquid chromatography (HPLC). As a result, the gemcitabine content in Example 10 was 8.3% by mass. Therefore, the binding ratio of gemcitabine to the number of terminal carboxylic acids of the hyperbranched polymer carrier was calculated to be 15.7%.
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Example 10 was calculated to be 2.7 kDa.

実施例１０のポリエチレングリコール化合物の結合量は、ポリエチレングリコール化合物の仕込当量及びポリエチレングリコール化合物の消費率より７分子であった。したがって、総ポリエチレングリコールセグメント分子量は１４キロダルトンであった。
なお、本反応における多分岐高分子担体の末端カルボキシ基に対するポリエチレングリコールセグメント化合物の仕込当量＝０．１０９当量であり、ポリエチレングリコールセグメント化合物の消費率＝１であった。The binding amount of the polyethylene glycol compound in Example 10 was 7 molecules based on the equivalent charge of the polyethylene glycol compound and the consumption rate of the polyethylene glycol compound. Thus, the total polyethylene glycol segment molecular weight was 14 kilodaltons.
In this reaction, the charged equivalent of the polyethylene glycol segment compound to the terminal carboxy group of the multibranched polymer carrier was 0.109 equivalent, and the consumption rate of the polyethylene glycol segment compound was 1.

上記の化合物２の分子量、結合ポリエチレングリコールセグメント分子量、結合ゲムシタビン総分子量及びアスパラギン酸ユニット残基の総分子量から、実施例１０の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、３２キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、４４質量％と算出された。
また、実施例１０の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は１７，０４０ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は１．３２倍であった。また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は２０９，０００であり、会合分子数は６．５であった。From the molecular weight of the compound 2, the molecular weight of the bound polyethylene glycol segment, the total molecular weight of the bound gemcitabine, and the total molecular weight of the aspartic acid unit residue, the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-bound hyperbranched compound of Example 10 was calculated to be 32 kDa. Was.
The polyethylene glycol segment content was calculated to be 44% by mass.
The degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Example 10 was measured by laser light scattering intensity, and the light scattering intensity was 17,040 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 1.32 times. The molecular weight measured by SEC-MALS was 209,000, and the number of associated molecules was 6.5.

［比較例１］多分岐高分子担体（末端カルボン酸数３２）と平均分子量５キロダルトンの片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール及びゲムシタビンの結合体の合成
合成例１で得られた化合物１（分子量６．８キロダルトン、１．００ｇ）と、片末端メトキシ基及び片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール化合物（５．９ｇ、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴＭＥＰＡ−５０Ｈ、日油社製、平均分子量５キロダルトン）をＤＭＦ（４７ｍＬ）に３５℃にて溶解し、２０℃に降温し、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．８７ｇ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）（１．７４ｍＬ）及びゲムシタビン（１．４８ｇ、ＳＣＩＮＯＰＨＡＲＭ社製）を加えて、３２時間撹拌した。その後、酢酸エチル（５６ｍＬ）を加え希釈し、反応液をジイソプロピルエーテル（１１２８ｍＬ）に３０分かけて滴下し、室温にて３０分撹拌した。沈析物を濾取してジイソプロピルエーテル（５６４ｍＬ）で洗浄した。得られた沈析物を精製水（２００ｍＬ）に溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ^＋）、１２０ｍＬ）を加えた。３０分撹拌後、濾過し、凍結乾燥を行い、比較例１に係る標記化合物（８．５７ｇ）を得た。[Comparative Example 1] Synthesis of a conjugate of a multibranched polymer carrier (terminal carboxylic acid number: 32), polyethylene glycol having one terminal methoxy group and one terminal 3-aminopropyl group having an average molecular weight of 5 kDa and gemcitabine obtained in Synthesis Example 1 Compound 1 (molecular weight: 6.8 kDa, 1.00 g) and a polyethylene glycol compound having one end methoxy group and one end 3-aminopropyl group (5.9 g, SUNBRIGHT MEPA-50H, manufactured by NOF Corporation, average (Molecular weight: 5 kilodaltons) was dissolved in DMF (47 mL) at 35 ° C., the temperature was lowered to 20 ° C., N, N-dimethyl-4-aminopyridine (DMAP) (0.87 g), diisopropylcarbodiimide (DIPCI) (1 .74 mL) and gemcitabine (1.48 g, manufactured by SCINO PHARM) and stirred for 32 hours. . Thereafter, ethyl acetate (56 mL) was added for dilution, and the reaction solution was added dropwise to diisopropyl ether (1128 mL) over 30 minutes, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. The precipitate was collected by filtration and washed with diisopropyl ether (564 mL). After dissolving the obtained precipitate in purified water (200 mL), an ion-exchange resin (Dowex 50 (H ⁺ ) manufactured by Dow Chemical, 120 mL) was added. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered and freeze-dried to obtain the title compound of Comparative Example 1 (8.57 g).

比較例１の化合物をアルカリ加水分解した後、遊離したゲムシタビンを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて定量することにより、比較例１におけるゲムシタビン含有量を求めた。その結果、比較例１におけるゲムシタビン含有量は６．８質量％であった。したがって、多分岐高分子担体の末端カルボン酸数３２に対するゲムシタビン結合率は４０．２％と算出された。
この結果、比較例１のゲムシタビン総分子量は３．４キロダルトンと算出された。After alkaline hydrolysis of the compound of Comparative Example 1, gemcitabine liberated was quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) to determine the gemcitabine content in Comparative Example 1. As a result, the gemcitabine content in Comparative Example 1 was 6.8% by mass. Therefore, the binding ratio of gemcitabine to the number of terminal carboxylic acids of the hyperbranched polymer carrier was calculated to be 40.2%.
As a result, the total molecular weight of gemcitabine in Comparative Example 1 was calculated to be 3.4 kDa.

比較例１のポリエチレングリコール化合物の結合量は、ポリエチレングリコール化合物の仕込当量及びポリエチレングリコール化合物の消費率より８分子であった。したがって、総ポリエチレングリコールセグメント分子量は４０キロダルトンであった。
なお、本反応における多分岐高分子担体の末端カルボキシ基に対するポリエチレングリコールセグメント化合物の仕込当量＝０．２５当量であり、ポリエチレングリコールセグメント化合物の消費率＝１であった。The binding amount of the polyethylene glycol compound of Comparative Example 1 was 8 molecules based on the equivalent charge of the polyethylene glycol compound and the consumption rate of the polyethylene glycol compound. Thus, the total polyethylene glycol segment molecular weight was 40 kilodaltons.
In this reaction, the equivalent charge of the polyethylene glycol segment compound to the terminal carboxy group of the multibranched polymer carrier was 0.25 equivalent, and the consumption rate of the polyethylene glycol segment compound was 1.

上記の化合物１の分子量、結合ポリエチレングリコールセグメント分子量及び結合ゲムシタビン総分子量から、比較例１の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の分子量は、５０キロダルトンと算出された。
また、ポリエチレングリコールセグメント含有量は、８０質量％と算出された。
また、比較例１の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物の会合度をレーザー光散乱強度により測定したところ、光散乱強度は６，１９９ｃｐｓであった。したがって、トルエンの光散乱強度との相対比率は０．４８倍であった。また、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ測定分子量は７７，２７０であり、会合分子数は１．６であった。From the molecular weight of Compound 1, the molecular weight of the bound polyethylene glycol segment and the total molecular weight of the bound gemcitabine, the molecular weight of the nucleic acid antimetabolite-bound hyperbranched compound of Comparative Example 1 was calculated to be 50 kDa.
The polyethylene glycol segment content was calculated to be 80% by mass.
When the degree of association of the nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound of Comparative Example 1 was measured by laser light scattering intensity, the light scattering intensity was 6,199 cps. Therefore, the relative ratio of toluene to the light scattering intensity was 0.48 times. Moreover, the molecular weight measured by SEC-MALS was 77,270, and the number of associated molecules was 1.6.

［試験例１］非担癌マウスに対する血液毒性評価
実施例１、２、５、６、８、９及び比較例１の化合物並びに対照薬として塩酸ゲムシタビンを用いて、非担癌マウス（ＩＣＲ系マウス（Ｃｒｌｊ：ＣＤ−１））に対する血液毒性評価試験を実施した。
実施例１、２、５、６、８、９及び比較例１の化合物は、５％ブドウ糖注射液に溶解して調製した。投与量は各化合物において予め確認した最大耐用量（ＭＴＤ maximum tolerated dose）以下を設定した。対照薬として塩酸ゲムシタビンを生理食塩液に溶解して調製した。各化合物及び対照薬は、各々静脈内に単回投与した。また、溶媒（５％ブドウ糖注射液、あるいは生理食塩液、１０ｍＬ／ｋｇ）を投与した群を設定し、実施例１、２、５、６、８、９及び比較例１の化合物に対しては５％ブドウ糖注射液投与群を，塩酸ゲムシタビンに対しては生理食塩液投与群をそれぞれ対照群とした。
投与後７日あるいは５日に採血し、網状赤血球数を血球分析装置（ＸＴ−２０００ｉＶ）により測定した。投与後７日あるいは５日における溶媒対照群の網状赤血球数（１００）に対する各化合物投与群の相対値を算出した。その結果を表１及び２に示した。[Test Example 1] Hematological toxicity evaluation on non-tumor-bearing mice
Hematological toxicity evaluation test on non-tumor-bearing mice (ICR mice (Crlj: CD-1)) using the compounds of Examples 1, 2, 5, 6, 8, 9 and Comparative Example 1 and gemcitabine hydrochloride as a control drug Was carried out.
The compounds of Examples 1, 2, 5, 6, 8, 9 and Comparative Example 1 were prepared by dissolving in 5% glucose injection solution. The dose was set to be less than or equal to the maximum tolerated dose (MTD) previously confirmed for each compound. Gemcitabine hydrochloride was dissolved in physiological saline as a control drug. Each compound and control drug were each administered once intravenously. In addition, a group to which a solvent (5% glucose injection solution or physiological saline solution, 10 mL / kg) was administered was set, and for the compounds of Examples 1, 2, 5, 6, 8, 9 and Comparative Example 1, The control group was a group administered with a 5% glucose injection solution, and the physiological saline solution group was administered for gemcitabine hydrochloride.
Blood was collected on the 7th or 5th day after the administration, and the reticulocyte count was measured with a blood cell analyzer (XT-2000iV). The relative value of each compound administration group to the reticulocyte count (100) of the solvent control group on day 7 or 5 after administration was calculated. The results are shown in Tables 1 and 2.

試験例１の結果、比較例１の化合物は投与量が低いにも関わらず、対照薬である塩酸ゲムシタビンと比較して、網状赤血球数を著しく低下させており、血液毒性の発現が認められた。この現象は、投与５日後であっても、網状赤血球数の回復が遅延していることを示し、血液毒性の遷延化現象であると考えられる。これに対し、本発明の実施例１、２、５、６、８及び９に係る化合物は、投与後７日時点において網状赤血球数の低下が確認されておらず、対象薬の塩酸ゲムシタビンと同様に血液毒性が認められていないことが示された。
この理由として、比較例１の化合物は、長期に亘り血中に滞留したため、血液毒性が遷延化したと考えられる。本発明の化合物は、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸アミドユニットを具備しているのに対し、比較例１の化合物は、該コハク酸アミドユニットを具備していない。したがって、実施例１、２、５、６、８及び９に係る化合物は、核酸代謝拮抗剤を適切な結合様式で多分岐高分子担体に結合させたことにより、塩酸ゲムシタビンが持つ副作用である血液毒性は同程度であり、高分子化代謝拮抗剤にすることで懸念される血液毒性の発現及びその遷延化はないことが確認された。As a result of Test Example 1, the compound of Comparative Example 1 significantly reduced the reticulocyte count as compared with the control drug gemcitabine hydrochloride, despite the low dose, and hematological toxicity was observed. . This phenomenon indicates that the recovery of the reticulocyte count is delayed even 5 days after administration, and is considered to be a prolonged phenomenon of hematotoxicity. In contrast, the compounds according to Examples 1, 2, 5, 6, 8, and 9 of the present invention did not show a decrease in reticulocyte count at 7 days after administration, and were similar to the target drug gemcitabine hydrochloride. Showed no hematological toxicity.
It is considered that the reason for this is that the compound of Comparative Example 1 stayed in the blood for a long period of time, so that the blood toxicity was prolonged. The compound of the present invention has a succinamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound, whereas the compound of Comparative Example 1 does not have the succinamide unit. Therefore, the compounds according to Examples 1, 2, 5, 6, 8, and 9 were obtained by binding a nucleic acid antimetabolite to a multi-branched polymer carrier in an appropriate binding manner, thereby obtaining the blood side effect of gemcitabine hydrochloride. The toxicity was almost the same, and it was confirmed that there was no occurrence and prolongation of hematologic toxicity, which is a concern with the use of a polymerized antimetabolite.

［試験例２］ヒト膵がん移植ヌードマウスに対する抗腫瘍効果試験
実施例１、２、５、６、８、９及び比較例１の化合物の抗腫瘍効果試験を実施した。
ヌードマウス皮下で継代したヒト膵がんＡｓＰＣ−１の腫瘍塊を、約３ｍｍ角のブロックにし、套管針を用いてヌードマウスの背側部皮下に移植した。腫瘍移植後、平均腫瘍体積が３００ｍｍ^３以上になった時点で投与を開始した。
実施例１、２、５、６、８、９及び比較例１の化合物は５％ブドウ糖注射液に溶解して調製した。投与量は予め確認した各化合物の最大耐用量（ＭＴＤ）以下を設定した。対照薬として塩酸ゲムシタビンを生理食塩液に溶解して調製した。各化合物及び対照薬は、３日間隔で４回、尾静脈内に投与した。
投与開始日及び評価日（投与開始後１６日目又は１７日目）の腫瘍体積から相対腫瘍体積を求め、抗腫瘍効果の指標とした。なお、腫瘍体積は、腫瘍の長径（Ｌ：ｍｍ）及び短径（Ｗ：ｍｍ）を計測して、（Ｌ×Ｗ^２）／２の計算式にて算出した。試験は４回に分けて行った。結果を表３、４、５及び６に示した。Test Example 2 Antitumor Effect Test on Human Pancreatic Cancer-Transplanted Nude Mice The compounds of Examples 1, 2, 5, 6, 8, 9 and Comparative Example 1 were subjected to an antitumor effect test.
A tumor mass of human pancreatic cancer AsPC-1 subcutaneously subcutaneously into a nude mouse was cut into a block of about 3 mm square, and transplanted subcutaneously into the dorsal part of the nude mouse using a trocar. Administration was started when the average tumor volume became 300 mm ³ or more after tumor implantation.
The compounds of Examples 1, 2, 5, 6, 8, 9 and Comparative Example 1 were prepared by dissolving in 5% glucose injection solution. The dose was set at or below the maximum tolerated dose (MTD) of each compound confirmed in advance. Gemcitabine hydrochloride was dissolved in physiological saline as a control drug. Each compound and the control drug were administered into the tail vein four times at three-day intervals.
The relative tumor volume was determined from the tumor volumes on the day of administration and on the day of evaluation (16 or 17 days after the start of administration) and used as an index of the antitumor effect. Incidentally, the tumor volume, tumor diameter of (L: mm) and the minor axis (W: mm) was measured and calculated by (L × ^W 2) / 2 formula. The test was performed in four parts. The results are shown in Tables 3, 4, 5, and 6.

試験例２の結果、本発明の実施例１、２、５、６、８及び９に係る化合物は対照薬である塩酸ゲムシタビンと比較して、強力な抗腫瘍効果を示すと共にその効果持続性が認められた。 As a result of Test Example 2, the compounds according to Examples 1, 2, 5, 6, 8 and 9 of the present invention showed a stronger antitumor effect and a longer duration of effect than gemcitabine hydrochloride as a control drug. Admitted.

本発明の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物は、多分岐高分子担体の末端官能基に、複数のポリエチレングリコールセグメント及び核酸代謝拮抗剤が結合した複数のコハク酸モノアミドユニットを含む置換基を適切に具備させたことにより、血中に滞留して体内分布しつつ、結合していた核酸代謝拮抗剤を適切な放出プロファイルにて作用させることができたため、核酸代謝拮抗剤の副作用である骨髄抑制の遷延化を回避しつつ、抗腫瘍効果の増強を達成したと考察された。 The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound of the present invention appropriately comprises a plurality of polyethylene glycol segments and a plurality of succinic acid monoamide units in which a nucleic acid antimetabolite is bonded to a terminal functional group of the multibranched polymer carrier. By having it, it is possible to cause the bound nucleic acid antimetabolite to act with an appropriate release profile while staying in the blood and distributing in the body, so that bone marrow suppression which is a side effect of the nucleic acid antimetabolite is suppressed. It was considered that the antitumor effect was enhanced while avoiding prolongation.

Claims

核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物が一般式（１）

［式中、
［Ｑ］は、（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）個の末端官能基化された多分岐高分子担体であり、
（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）は、４〜２００の整数であり、
［Ｆ］は、前記末端官能基であってアミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基、及び／又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基を有する保護基で修飾された、アミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基であり、
Ｆは、前記末端官能基から水素原子又は水酸基が除かれた結合基であり、
Ｒ_１は、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基であって、該核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基は、一般式（２）及び／又は（３）

［式中、
［Ｄ］は、核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、
Ｘ _４は、末端官能基Ｆとの結合基であり、
Ｒ _４、Ｒ _５及びＲ _６は、それぞれ独立して水素原子又は炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルキル基であり、
Ｒ _７は、水素原子、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基、置換基を有していても良い炭素数（Ｃ７〜Ｃ２０）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアラルキル基、置換基を有していても良い芳香族基及びカルボキシ基が保護されたアミノ酸残基からなる群から選択される１種以上の基である。］
であり、
Ｒ_２は、ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基であり、
Ｒ_３は、コハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基であり、
ｍは、０〜１９８の整数であり、
ｎは、１〜１９９の整数であり、
ｏは、１〜１９９の整数であり、
ｐは、０〜１９８の整数である。］
で示される核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 Nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound represented by general formula (1)

[Where,
[Q] is a (m + n + o + p) terminal-functionalized hyperbranched polymer carrier,
(M + n + o + p) is an integer of 4 to 200;
[F] is the above-mentioned terminal functional group, one or more functional groups selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, and / or a carbon number which may have a substituent. (C1 to C6) one or more functional groups selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, modified with a protecting group having an alkyl group,
F is a bonding group in which a hydrogen atom or a hydroxyl group has been removed from the terminal functional group,
R ₁ is a substituent containing a succinic acid monoamide units nucleic acid antimetabolites are bonded, a substituent containing a succinic acid monoamide units nucleic acid antimetabolites are bonded to the general formula (2) and / or ( 3)

[Where,
[D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite,
X ₄ is a bonding group to the terminal functional group F,
R ₄ , R ₅ and R ₆ are each independently a hydrogen atom or an alkyl group having carbon atoms (C1 to C8);
R ₇ is a hydrogen atom, a linear, branched or cyclic alkyl group having a carbon number (C1 to C20) which may have a substituent, or a carbon number (C7 To C20) one or more selected from the group consisting of a linear, branched or cyclic aralkyl group, an aromatic group which may have a substituent and an amino acid residue in which a carboxy group is protected. Group. ]
And
R ₂ is a substituent containing a polyethylene glycol segment;
R ₃ is a substituent containing a succinic monoamide derivative residue and / or a succinimide residue,
m is an integer from 0 to 198 ;
n is an integer of 1 to 199 ;
o is an integer of 1 to 199,
p is an integer of 0 to 198 . ]
A nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound represented by the formula:

核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物が一般式（１）

［式中、
［Ｑ］は、（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）個の末端官能基化された多分岐高分子担体であり、
（ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｐ）は、４〜２００の整数であり、
［Ｆ］は、前記末端官能基であってアミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基、及び／又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキル基を有する保護基で修飾された、アミノ基、水酸基、カルボキシ基及びメルカプト基からなる群から選択される１種以上の官能基であり、
Ｆは、前記末端官能基から水素原子又は水酸基が除かれた結合基であり、
Ｒ_１は、核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基であって、該核酸代謝拮抗剤が結合したコハク酸モノアミドユニットを含む置換基は、側鎖カルボキシ基に核酸代謝拮抗剤が結合したポリアスパラギン酸誘導体であり、
Ｒ_２は、ポリエチレングリコールセグメントを含む置換基であり、
Ｒ_３は、コハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基を含む置換基であり、
ｍは、０〜１９８の整数であり、
ｎは、１〜１９９の整数であり、
ｏは、１〜１９９の整数であり、
ｐは、０〜１９８の整数である。］
で示される核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 Nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound represented by general formula (1)

[Where,
[Q] is a (m + n + o + p) terminal-functionalized hyperbranched polymer carrier,
(M + n + o + p) is an integer of 4 to 200;
[F] is the above-mentioned terminal functional group, one or more functional groups selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, and / or a carbon number which may have a substituent. (C1 to C6) one or more functional groups selected from the group consisting of an amino group, a hydroxyl group, a carboxy group and a mercapto group, modified with a protecting group having an alkyl group,
F is a bonding group in which a hydrogen atom or a hydroxyl group has been removed from the terminal functional group,
R ₁ is a substituent containing a succinic acid monoamide unit to which a nucleic acid antimetabolite is bound; Is a bonded polyaspartic acid derivative,
R ₂ is a substituent containing a polyethylene glycol segment;
R ₃ is a substituent containing a succinic monoamide derivative residue and / or a succinimide residue,
m is an integer from 0 to 198 ;
n is an integer of 1 to 199 ;
o is an integer of 1 to 199,
p is an integer of 0 to 198 . ]
A nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound represented by the formula:

Ｒ_１のポリアスパラギン酸誘導体が一般式（４）又は（５）

［式中、
［Ｄ］は、核酸代謝拮抗剤の結合残基であり、
Ｒ_１２は、水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１４）ＣＯＮＨ（Ｒ_１５）であり、該Ｒ_１４及び該Ｒ_１５は同一でも異なってもいてもよく、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、
Ｒ_１３は、水素原子、炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアシル基及び炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）のアルコキシカルボニル基からなる群から選択される基であり、
Ｘ_２は、末端官能基Ｆとの結合基であり、
ａ、ｂ、ｃ、ｄ及びｅはそれぞれ独立して０〜３０の整数を示し、
（ａ＋ｂ）は、１〜３０の整数を示し、
ポリアスパラギン酸誘導体の総重合数である（ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ＋ｅ）は、１〜３０であり、
前記［Ｄ］が結合したアスパラギン酸単位、前記Ｒ_１２が結合したアスパラギン酸単位及び側鎖カルボキシ基が分子内環化型のアスパラギン酸単位が、それぞれ独立してランダムな配列である。］
である請求項２に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 The polyaspartic acid derivative represented by R ₁ has the general formula (4) or (5)

[Where,
[D] is a binding residue of a nucleic acid antimetabolite,
R ₁₂ is a hydroxyl group and / or —N (R ₁₄ ) CONH (R ₁₅ ), and R ₁₄ and R ₁₅ may be the same or different, and may be substituted with a tertiary amino group. A linear, branched or cyclic alkyl group having carbon atoms (C1 to C8);
R ₁₃ is a group selected from the group consisting of a hydrogen atom, an acyl group having carbon atoms (C1 to C8), and an alkoxycarbonyl group having carbon atoms (C1 to C8);
X ₂ is a bonding group to the terminal functional group F,
a, b, c, d and e each independently represent an integer of 0 to 30,
(A + b) represents an integer of 1 to 30,
(A + b + c + d + e), which is the total polymerization number of the polyaspartic acid derivative, is 1 to 30,
Wherein [D] is bonded to aspartic acid units, wherein R ₁₂ is bonded to aspartic acid units and side chain carboxy group intramolecular cyclization type aspartic acid unit is a random sequence independently. ]
The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to claim 2 , which is:

前記核酸代謝拮抗剤が核酸塩基にアミノ基を有する核酸代謝拮抗剤であり、該核酸代謝拮抗剤はコハク酸モノアミドのカルボキシ基に該アミノ基によるアミド結合を介して結合している請求項１〜３の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 The nucleic acid antimetabolite is a nucleic acid antimetabolite having an amino group in a nucleobase, and the nucleic acid antimetabolite is bonded to a carboxy group of succinic monoamide via an amide bond by the amino group . The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to any one of claims 3 to 3 .

前記核酸代謝拮抗剤の質量含有率が、２質量％以上６０質量％以下である請求項１〜４の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to any one of claims 1 to 4, wherein the mass content of the nucleic acid antimetabolite is 2% by mass or more and 60% by mass or less.

前記核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物におけるポリエチレングリコールセグメントの質量含有率が２０質量％以上９０質量％以下であり、ポリエチレングリコールセグメントが２〜１００ユニット結合している請求項１〜５の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 Wherein is a mass content of polyethylene glycol segments in nucleic acid metabolism antagonist binding multi-branched compound than 20 wt% to 90 wt%, any one of claims 1 to 5 polyethylene glycol segment is from 2 to 100 units coupled Item 10. The multi-branched compound binding to an antimetabolite according to Item 8.

Ｒ_２のポリエチレングリコールセグメントが、一般式（８）

［式中、Ｒ_８は水素原子又は置換基を有していても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基であり、ｋは５〜２，５００の整数であり、Ｘ_１は末端官能基Ｆとの結合基を示す。］である請求項１〜６の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 The polyethylene glycol segment of R ₂ has the general formula (8)

[In the formula, R ₈ is a hydrogen atom or a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C8) which may have a substituent, and k is 5 to 2,500. X ₁ represents a bonding group to the terminal functional group F. ] The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to any one of claims 1 to 6 .

Ｒ_３のコハク酸モノアミド誘導体残基及び／又はコハク酸イミド残基が、一般式（９）、（１０）及び（１１）

［式中、Ｘ_４は末端官能基Ｆとの結合基であり、Ｒ_９は水酸基及び／又は−Ｎ（Ｒ_１０）ＣＯＮＨ（Ｒ_１１）を示し、Ｒ_１０、Ｒ_１１は同一でも異なっていてもよく、三級アミノ基で置換されていても良い炭素数（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状、分岐鎖状又は環状のアルキル基を示し、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６及びＲ_７は前記と同義である。］からなる置換基群から選ばれる１種以上の基である請求項１〜７の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 The succinic monoamide derivative residue and / or succinimide residue of R ₃ is represented by the general formula (9), (10) and (11)

[Wherein, X ₄ is a bonding group to the terminal functional group F, R ₉ represents a hydroxyl group and / or —N (R ₁₀ ) CONH (R ₁₁ ), and R ₁₀ and R ₁₁ are the same or different. And represents a linear, branched or cyclic alkyl group having carbon number (C1 to C8) which may be substituted with a tertiary amino group, wherein R ₄ , R ₅ , R ₆ and R ₇ are the same as defined above. Is synonymous with The nucleic acid antimetabolite-binding hyperbranched compound according to any one of claims 1 to 7 , which is one or more groups selected from a substituent group consisting of:

核酸代謝拮抗剤が式（１２）：

［式中、−Ｒｆは、式（１３）：

の置換基群より選ばれる基を示し、Ｒ_２０は水素原子又は脂肪酸エステルのアシル基を示す。］で表されるいずれか１種以上の核酸代謝拮抗剤である、請求項１〜８の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 The nucleic acid antimetabolite has the formula (12):

[Wherein, -Rf is represented by the formula (13):

And R ₂₀ represents a hydrogen atom or an acyl group of a fatty acid ester. The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound according to any one of claims 1 to 8 , which is any one or more nucleic acid antimetabolite represented by the formula:

核酸代謝拮抗剤が式（１４）：

［式中、−Ｒｆは、式（１５）：

の置換基群より選ばれる基を示し、Ｒ_２０は水素原子又は脂肪酸エステルのアシル基を示す。］で表されるいずれか１種以上の核酸代謝拮抗剤である、請求項１〜９の何れか一項に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物。 The nucleic acid antimetabolite has the formula (14):

[Wherein, -Rf is represented by the formula (15):

And R ₂₀ represents a hydrogen atom or an acyl group of a fatty acid ester. The nucleic acid antimetabolite-binding multibranched compound according to any one of claims 1 to 9 , wherein the compound is any one or more nucleic acid antimetabolite represented by the formula:

請求項１〜１０に記載の核酸代謝拮抗剤結合多分岐化合物を含有する医薬。 A medicament containing a nucleic acid metabolism antagonist binding hyperbranched compound as claimed in claim 1-10.