JP6604204B2 - 新規抗ヒトｂｄｃａ−２抗体 - Google Patents

新規抗ヒトｂｄｃａ−２抗体 Download PDF

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Description

本発明は、新規な抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体に関する。
ＢＤＣＡ−２（Ｂｌｏｏｄ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ａｎｔｉｇｅｎ ２）は、１回膜貫通型の膜蛋白質である。ＢＤＣＡ−２はヒト形質細胞様樹状細胞（ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ；ｐＤＣｓ）に限定して発現することが知られている。ＢＤＣＡ−２はｐＤＣｓの細胞内へシグナルを伝達することで、ｐＤＣｓの機能調節を担う（Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、Ｖｏｌ．２５、ｐ．２７１−２７７、２０１３）。
ＢＤＣＡ−２は活性化した免疫反応に対して抑制的に機能することが知られている（非特許文献１）。このメカニズムの詳細は未だ不明な部分が多いが、後述のように、ＢＤＣＡ−２に対する抗体を用いてＢＤＣＡ−２分子を架橋することで、活性化状態にあるｐＤＣｓを抑制できることが報告されている（特許文献１、非特許文献１〜４）。
ＢＤＣＡ−２の特異的発現細胞であるｐＤＣｓは、全身性エリテマトーデス、強皮症、多発性筋炎・皮膚筋炎、乾癬、シェーグレン症候群、関節リウマチ、バセドウ病、橋本病などの自己免疫疾患において、末梢血中、又は障害部位で異常に活性化し、インターフェロン（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ；ＩＦＮ）αを大量に産生していることが知られており、これら自己免疫疾患の病態に深く関与していることが明らかになっている。（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．、Ｖｏｌ．６５、ｐ．８５３−８６３、２０１３）。
自己免疫疾患の一種である全身性エリテマトーデスにおいては、患者の重症度と血中ＩＦＮα濃度に正の相関があることがあることが報告されている（Ｌｕｐｕｓ、Ｖｏｌ．９、ｐ．６６４−６７１、２０００）。また、全身性エリテマトーデス病態モデルマウスに対して、ｐＤＣｓが発生しないように遺伝子改変を施すと、全身性エリテマトーデスの発症が抑制されることから、全身性エリテマトーデス病態に対するｐＤＣｓの関与が直接証明されている（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ Ｓ Ａ、Ｖｏｌ．１１０、ｐ．２９４０−２９４５、２０１３）。
ヒトＢＤＣＡ−２に対する抗体としては、マウスモノクローナル抗体であるＡＣ１４４が知られており（特許文献１、非特許文献１〜４）、ＡＣ１４４が、ＢＤＣＡ−２分子を架橋することにより、活性化状態にあるｐＤＣｓを抑制できることが報告されている。具体的には、Ｔｏｌｌ様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＴＬＲ）９に対するリガンドで刺激されたｐＤＣｓから誘導されるＩＦＮαの産生等が、ＡＣ１４４を用いて抑制できることが報告されている（非特許文献１〜４）。また、全身性エリテマトーデス患者の血清を刺激剤に用いるとｐＤＣｓからＩＦＮα産生が誘導されるが、このＩＦＮα産生も、同様にＡＣ１４４を用いて抑制できることが報告されている（非特許文献４）。
国際公開第２００１／０３６４８７号
「プロス バイオロジー（ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、（米国）、Ｓｅｐ．１１ ２００７、Ｖｏｌ．５、１０、ｐ．２１９０−２２００ 「ヨーロピアン ジャーナル オブ イムノロジー（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」、（ドイツ）、Ｎｏｖ．１６ ２００７、Ｖｏｌ．３７、ｐ．３５６４−３５７５ 「セルラー イムノロジー（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」、（オランダ）、Ｊｕｌ．６ ２０１０、Ｖｏｌ．２６５、ｐ．１５−２２ 「ザ ジャーナル オブ エクスペリメンタル メディシン（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）」、（米国）、Ｄｅｃ．１７ ２００１、Ｖｏｌ．１９４、１２、ｐ．１８２３−１８３４
本発明の課題は、ヒトＢＤＣＡ−２に結合して、ヒトＢＤＣＡ−２を介してｐＤＣｓの機能を調節することにより自己免疫疾患を予防又は治療する抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を提供することにある。
本発明者らは、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の作製において相当の創意検討を重ねた結果、配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域、並びに配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域をそれぞれ含む抗体を作製し（実施例５）、これら抗体が、ヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に結合して（実施例７）、ヒトＢＤＣＡ−２を介してｐＤＣｓの機能を調節し、ｐＤＣsからのＩＦＮα産生を抑制する（実施例８）ことを見出した。これらの結果、前記抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を提供し、本発明を完成した。
本発明は、医学上又は産業上有用な物質又は方法として以下の発明を含むものである。
（１）以下の１）〜４）のいずれかから選択される、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
１）配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント；
２）配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント；
３）配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント；並びに
４）上記１）〜３）のいずれかの抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントである、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（２）配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、上記（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（３）配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、上記（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（４）配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、上記（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（５）配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントである、上記（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（６）配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントである、上記（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（７）配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントである、上記（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（８）翻訳後修飾が重鎖可変領域Ｎ末端のピログルタミル化及び／又は重鎖Ｃ末端のリジン欠失である、上記（１）及び（５）〜（７）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（９）ヒトＩｇγ１定常領域である重鎖定常領域を含む、上記（１）〜（８）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（１０）ヒトＩｇκ定常領域である軽鎖定常領域を含む、上記（１）〜（８）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（１１）ヒトＩｇγ１定常領域である重鎖定常領域及びヒトＩｇκ定常領域である軽鎖定常領域を含む、上記（１）〜（８）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（１２）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、上記（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（１３）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、上記（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（１４）配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、上記（４）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（１５）一本鎖可変領域フラグメント、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦ（ａｂ’）2である、上記（１）〜（１１）のいずれかに記載の抗原結合フラグメント。
（１６）上記（１２）〜（１４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の翻訳後修飾により生じた抗体である、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（１７）翻訳後修飾が重鎖可変領域Ｎ末端のピログルタミル化及び／又は重鎖Ｃ末端のリジン欠失である、上記（１６）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（１８）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号２のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、上記（１６）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（１９）配列番号６のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸番号からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、上記（１６）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（２０）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号１０のアミノ酸番号１から４５１までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、上記（１６）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（２１）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
（２２）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
（２３）上記（２１）及び／又は（２２）に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（２４）以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される、上記（２３）に記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
（ａ）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；及び
（ｄ）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
（２５）以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される、上記（２３）に記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
（ａ）上記（１２）〜（１４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記（１２）〜（１４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）上記（１２）〜（１４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；及び
（ｄ）上記（１２）〜（１４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
（２６）以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを発現させる工程を包含する、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法。
（ａ）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｃ）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
（２７）以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を発現させる工程を包含する、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を生産する方法。
（ａ）上記（１２）〜（１４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）上記（１２）〜（１４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｃ）上記（１２）〜（１４）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
（２８）上記（２６）に記載の方法で生産された抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（２９）上記（２７）に記載の方法で生産された抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（３０）上記（１）〜（２０）、（２８）、及び（２９）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント及び薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
（３１）上記（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、上記（５）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
（３２）上記（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、上記（６）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
（３３）上記（４）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、上記（７）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
（３４）上記（１２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体、上記（１８）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
（３５）上記（１３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体、上記（１９）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
（３６）上記（１４）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体、上記（２０）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体、及び、薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
（３７）全身性エリテマトーデスの予防又は治療用医薬組成物である、上記（３０）〜（３６）のいずれかに記載の医薬組成物。
（３８）上記（１）〜（２０）、（２８）、及び（２９）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の治療有効量を投与する工程を包含する、全身性エリテマトーデスを予防又は治療する方法。
（３９）全身性エリテマトーデスの予防又は治療に使用するための、上記（１）〜（２０）、（２８）、及び（２９）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（４０）全身性エリテマトーデスの予防又は治療用医薬組成物製造における上記（１）〜（２０）、（２８）、及び（２９）のいずれかに記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの使用。
前記抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントには、他のペプチド及び蛋白質との融合体や、修飾剤を結合させた修飾体も含まれる。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体は、ｐＤＣｓの表面に特異的に発現するヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に結合して、ヒトＢＤＣＡ−２を介してｐＤＣｓの機能を調節するものであり、全身性エリテマトーデスの予防又は治療剤として使用できる。
以下に、本発明について詳述する。
抗体にはＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥの５つのクラスが存在する。抗体分子の基本構造は、各クラス共通で、分子量５万〜７万の重鎖と２〜３万の軽鎖から構成される。重鎖は、通常約４４０個のアミノ酸を含むポリペプチド鎖からなり、クラスごとに特徴的な構造をもち、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥに対応してＩｇγ、Ｉｇμ、Ｉｇα、Ｉｇδ、Ｉｇεとよばれる。さらにＩｇＧには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４のサブクラスが存在し、それぞれに対応する重鎖はＩｇγ１、Ｉｇγ２、Ｉｇγ３、Ｉｇγ４とよばれている。軽鎖は、通常約２２０個のアミノ酸を含むポリペプチド鎖からなり、Ｌ型とＫ型の２種が知られており、それぞれＩｇλ、Ｉｇκとよばれる。抗体分子の基本構造のペプチド構成は、それぞれ相同な２本の重鎖及び２本の軽鎖が、ジスルフィド結合（Ｓ−Ｓ結合）及び非共有結合によって結合され、分子量１５万〜１９万である。２種の軽鎖は、どの重鎖とも対をなすことができる。個々の抗体分子は、常に同一の軽鎖２本と同一の重鎖２本からできている。
鎖内Ｓ−Ｓ結合は、重鎖に四つ（Ｉｇμ、Ｉｇεには五つ）、軽鎖には二つあって、アミノ酸１００〜１１０残基ごとに一つのループを成し、この立体構造は各ループ間で類似していて、構造単位又はドメインとよばれる。重鎖、軽鎖ともにＮ末端に位置するドメインは、同種動物の同一クラス（サブクラス）からの標品であっても、そのアミノ酸配列が一定せず、可変領域とよばれており、各ドメインは、それぞれ、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）とよばれている。可変領域よりＣ末端側のアミノ酸配列は、各クラス又はサブクラスごとにほぼ一定で定常領域とよばれている（各ドメインは、それぞれ、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３又はＣＬと表される）。
抗体の抗原決定部位はＶＨ及びＶＬによって構成され、結合の特異性はこの部位のアミノ酸配列によっている。一方、補体や各種細胞との結合といった生物学的活性は各クラスＩｇの定常領域の構造の差を反映している。軽鎖と重鎖の可変領域の可変性は、どちらの鎖にも存在する３つの小さな超可変領域にほぼ限られることがわかっており、これらの領域を相補性決定領域（ＣＤＲ；それぞれＮ末端側からＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３）と呼んでいる。可変領域の残りの部分はフレームワーク領域（ＦＲ）とよばれ、比較的一定である。
抗体のＶＨ及びＶＬを含む各種抗原結合フラグメントも抗原結合活性を有し、このような代表的な抗原結合フラグメントとして、一本鎖可変領域フラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2が挙げられる。Ｆａｂは、軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１ドメインとヒンジ領域の一部とを含む重鎖フラグメントから構成される、一価の抗体フラグメントである。Ｆａｂ’は、軽鎖と、ＶＨ、ＣＨ１ドメインとヒンジ領域の一部とを含む重鎖フラグメントから構成される、一価の抗体フラグメントであり、このヒンジ領域の部分には重鎖間Ｓ−Ｓ結合を構成していたシステイン残基が含まれる。Ｆ（ａｂ’）2フラグメントは、２つのＦａｂ’フラグメントがヒンジ領域中の重鎖間Ｓ−Ｓ結合で結合した二価の抗体フラグメントである。ｓｃＦｖは、リンカーで連結されたＶＨとＶＬから構成される、一価の抗体フラグメントである。
＜本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体＞
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントには、以下のいずれかの特徴を有する抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントが含まれる。
１）配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
２）配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
３）配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントは、上記１）〜３）のいずれかの特徴を有し、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域をさらに含む抗体が好ましい。定常領域としては、どのようなサブクラスの定常領域（例えば、重鎖としてＩｇγ１、Ｉｇγ２、Ｉｇγ３又はＩｇγ４、軽鎖としてＩｇλ又はＩｇκの定常領域）も選択可能であり得るが、重鎖定常領域としてヒトＩｇγ１定常領域が好ましく、軽鎖定常領域としては、ヒトＩｇκ定常領域が好ましい。
ヒトＩｇγ１定常領域としては、例えば、配列番号２のアミノ酸番号１２１から４５０までのアミノ酸配列からなるヒトＩｇγ１定常領域が挙げられる。
ヒトＩｇκ定常領域としては、例えば、配列番号４のアミノ酸番号１１０から２１５までのアミノ酸配列からなるヒトＩｇκ定常領域が挙げられる。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントとしては、上記１）〜３）のいずれかの特徴を有し、重鎖定常領域がヒトＩｇγ１定常領域であり、軽鎖定常領域がヒトＩｇκ定常領域である、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントがより好ましい。
１つの実施形態において、本発明の抗原結合フラグメントは、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、又はＦ（ａｂ’）2である。
当業者であれば、当該分野で公知の方法を用いて、抗体又はその抗原結合フラグメントを、他のペプチド又は蛋白質を融合した融合体として作製することや、修飾剤を結合させた修飾体として作製することも可能である。本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントには、このような融合体や修飾体の形態の抗体又は抗原結合フラグメントも含まれる。例えば、配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、又は配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントには、他のペプチド又は蛋白質と融合した抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、或いは修飾剤を結合させた抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントも含まれる。本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントは融合体としてヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域への結合活性を有している限り、融合に用いられる他のペプチド又は蛋白質は特に限定されず、例えば、ヒト血清アルブミン、各種タグペプチド、人工ヘリックスモチーフペプチド、マルトース結合蛋白質、グルタチオンＳトランスフェラーゼ、各種毒素、その他多量体化を促進しうるペプチド又は蛋白質等が挙げられる。本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントは修飾体としてヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域への結合活性を有している限り、修飾に用いられる修飾剤は特に限定されず、例えば、ポリエチレングリコール、糖鎖、リン脂質、リポソーム、低分子化合物等が挙げられる。
１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体は、以下のｉ）〜ｉｉｉ）のいずれかの特徴を有する抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体である。
ｉ）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
ｉｉ）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
ｉｉｉ）配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
抗体を細胞で発現させる場合、抗体が翻訳後に修飾を受けることが知られている。翻訳後修飾の例としては、重鎖Ｃ末端のリジンのカルボキシペプチダーゼによる切断、重鎖及び軽鎖Ｎ末端のグルタミン又はグルタミン酸のピログルタミル化によるピログルタミン酸への修飾、グリコシル化、酸化、脱アミド化、糖化等が挙げられ、種々の抗体において、このような翻訳後修飾が生じることが知られている（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２００８、Ｖｏｌ．９７、ｐ．２４２６−２４４７）。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントには、翻訳後修飾により生じた抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントも含まれる。翻訳後修飾により生じた本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの例としては、重鎖可変領域Ｎ末端のピログルタミル化及び／又は重鎖Ｃ末端のリジン欠失を受けた抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントが挙げられる。このようなＮ末端のピログルタミル化又はＣ末端リジン欠失による翻訳後修飾が抗体の活性に影響を及ぼすものではないことは当該分野で知られている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００６、Ｖｏｌ．３４８、ｐ．２４−３９）。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体には、下記（１）〜（３）のいずれかの特徴を有する抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントが含まれる。
（１）配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（２）配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
（３）配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体は、下記（１）〜（３）のいずれかの特徴を有する抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体である。
（１）配列番号２のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾され及び／又はアミノ酸番号４５０のリジンを欠く配列番号２のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（２）配列番号６のアミノ酸番号１のグルタミン酸がピログルタミン酸に修飾され及び／又はアミノ酸番号４５０のリジンを欠く配列番号６のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（３）配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾され及び／又はアミノ酸番号４５２のリジンを欠く配列番号１０のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
本発明には、以下のいずれかの特徴を有する抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントも含まれる。
１）配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１０９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、並びに、配列番号４のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号８９から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
２）配列番号６のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸番号９９から１０９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、並びに、配列番号８のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸番号８９から９７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
３）配列番号１０のアミノ酸番号３１から３７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸番号５２から６７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１０のアミノ酸番号１００から１１１までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、並びに、配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１２のアミノ酸番号８９から９７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントは、ヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域（配列番号１３のアミノ酸番号４２から２１３までのアミノ酸配列からなる）に結合する。抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントがヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に結合するか否かは、公知の結合活性測定方法を用いて確認することができる。結合活性を測定する方法としては、例えば、Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）等の方法が挙げられる。ＥＬＩＳＡを用いる場合は、例示的な方法において、ヒトＢＤＣＡ−２（配列番号１３）又は後記実施例３に記載されるようにヒトＢＤＣＡ−２変異体（配列番号１５）を発現させた細胞（例えば、ＣＨＯ―Ｋ１細胞）をＥＬＩＳＡプレートに播種し、これに対して被験抗体を添加して反応させる。反応後、西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）等の酵素で標識した抗ＩｇＧ抗体等の二次抗体を反応させ、洗浄した後、その活性を検出する試薬（例えば、ＨＲＰ標識の場合、ＢＭ−Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ＥＬＩＳＡ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＰＯＤ）（ロシュ・ダイアグノスティックス社））等を用いた活性測定により、被験抗体がヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に結合するか否かを確認することができる。
また、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントには、ヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に結合する抗体又はその抗原結合フラグメントであれば、ヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域への結合に加え、他の動物由来のＢＤＣＡ−２（例えば、サルＢＤＣＡ−２）の細胞外領域にも結合する抗体又はその抗原結合フラグメントも含まれる。
さらに、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントはヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に結合し、ＩＦＮαの産生を抑制する活性を有する。ＩＦＮαの産生を抑制する活性の具体的な評価方法としては、後記実施例４に記載されるような方法を用いることができる。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントは、本明細書に開示される、本発明の抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列情報に基づいて、当該分野で公知の方法を使用して、当業者によって容易に作製され得る。本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントは、特に限定されるものではないが、例えば、後述の＜本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を生産する方法及び該方法により生産された抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体＞に記載の方法に従い製造することができる。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントは、必要によりさらに精製された後、常法に従って製剤化され、全身性エリテマトーデス、強皮症、多発性筋炎・皮膚筋炎、乾癬、シェーグレン症候群、関節リウマチ、バセドウ病、橋本病などの自己免疫疾患など、ｐＤＣｓが病態形成に関与する疾患の予防又は治療に用いることができる。
＜本発明のポリヌクレオチド＞
本発明のポリヌクレオチドには、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、及び、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドが含まれる。
１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドは、配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、又は配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである。
配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列に示される重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号１の塩基番号１から３６０までの塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号５の塩基番号１から３６０までの塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号９の塩基番号１から３６６までの塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。
好ましい実施形態において、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、又は配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである。
配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号１に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号５に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号９に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。
１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドは、配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、又は配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである。
配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号３の塩基番号１から３２７までの塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号７の塩基番号１から３２４までの塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号１１の塩基番号１から３２４までの塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。
好ましい実施形態において、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドは、配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド、又は配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドである。
配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号３に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号７に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとしては、例えば、配列番号１１に示される塩基配列を含むポリヌクレオチドが挙げられる。
本発明のポリヌクレオチドは、その塩基配列に基づき、当該分野で公知の方法を使用して、当業者によって容易に作製され得る。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、当該分野で公知の遺伝子合成方法を利用して合成することが可能である。このような遺伝子合成方法としては、ＷＯ９０／０７８６１に記載の抗体遺伝子の合成方法等の当業者に公知の種々の方法が使用され得る。
＜本発明の発現ベクター＞
本発明の発現ベクターには、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び／又は本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターが含まれる。
好ましい本発明の発現ベクターとしては、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクター、又は本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターが挙げられる。
本発明のポリヌクレオチドを発現させるために用いる発現ベクターとしては、真核細胞（例えば、動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母）及び／又は原核細胞（例えば、大腸菌）の各種の宿主細胞中で本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド及び／又は本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを発現し、これらによりコードされるポリペプチドを産生できるものである限り、特に制限されるものではない。このような発現ベクターとしては、例えば、プラスミドベクター、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス）等が挙げられ、好ましくは、ｐＥＥ６．４やｐＥＥ１２．４（ロンザ社）を使用することができる。また、ＡＧ−γ１やＡＧ−κ（例えば、ＷＯ９４／２０６３２を参照）等の予めヒトＩｇ定常領域遺伝子を有する発現ベクターに可変領域遺伝子断片を導入して抗体遺伝子を発現することもできる。
本発明の発現ベクターは、本発明のポリヌクレオチドに機能可能に連結されたプロモーターを含み得る。動物細胞で本発明のポリヌクレオチドを発現させるためのプロモーターとしては、例えば、ＣＭＶ、ＲＳＶ、ＳＶ４０などのウイルス由来プロモーター、アクチンプロモーター、ＥＦ（ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）１αプロモーター、ヒートショックプロモーターなどが挙げられる。細菌（例えば、エシェリキア属菌）で発現させるためのプロモーターとしては、例えば、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモーター、λＰＬプロモーター、ｔａｃプロモーターなどが挙げられる。また、酵母で発現させるためのプロモーターとしては、例えば、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ１０プロモーター、ＰＨ０５プロモーター、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーターなどが挙げられる。
宿主細胞として動物細胞、昆虫細胞、又は酵母を用いる場合、本発明の発現ベクターは、開始コドン及び終止コドンを含み得る。この場合、本発明の発現ベクターは、エンハンサー配列、本発明の抗体又はその重鎖可変領域若しくは軽鎖可変領域をコードする遺伝子の５’側及び３’側の非翻訳領域、分泌シグナル配列、スプライシング接合部、ポリアデニレーション部位、あるいは複製可能単位などを含んでいてもよい。宿主細胞として大腸菌を用いる場合、本発明の発現ベクターは、開始コドン、終止コドン、ターミネーター領域、及び複製可能単位を含み得る。この場合、本発明の発現ベクターは、目的に応じて通常用いられる選択マーカー（例えば、テトラサイクリン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、ジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子）を含んでいてもよい。
＜本発明の形質転換された宿主細胞＞
本発明の形質転換された宿主細胞には、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される、本発明の発現ベクターで形質転換された宿主細胞が含まれる。
（ａ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；及び
（ｄ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
１つの実施形態において、本発明の形質転換された宿主細胞は、以下の（ａ）〜（ｄ）からなる群より選択される、本発明の発現ベクターで形質転換された宿主細胞である。
（ａ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｃ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；及び
（ｄ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
好ましい本発明の形質転換された宿主細胞としては、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、並びに、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞が挙げられる。
形質転換する宿主細胞としては、使用する発現ベクターに適合し、該発現ベクターで形質転換されて、抗体を発現することができるものである限り、特に限定されるものではない。形質転換する宿主細胞としては、例えば、本発明の技術分野において通常使用される天然細胞又は人工的に樹立された細胞など種々の細胞（例えば、動物細胞（例えば、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９）、細菌（エシェリキア属菌など）、酵母（サッカロマイセス属、ピキア属など）など）が挙げられ、好ましくは、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞、ＣＨＯ−ＤＧ４４細胞、２９３細胞、ＮＳ０細胞等の培養細胞を使用することができる。
宿主細胞を形質転換する方法は、特に限定されるものではないが、例えば、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法等を用いることができる。
＜本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を生産する方法及び該方法により生産された抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体＞
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法には、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを発現させる工程を包含する、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法が含まれる。
（ａ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｃ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
１つの実施形態において、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を生産する方法には、以下の（ａ）〜（ｃ）からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を発現させる工程を包含する、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を生産する方法が含まれる。
（ａ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
（ｂ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
（ｃ）本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞、及び、該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを発現させる工程を包含している限り、特に限定されるものではない。該方法で使用される好ましい宿主細胞としては、前述の好ましい本発明の形質転換された宿主細胞が挙げられる。
形質転換された宿主細胞の培養は公知の方法により行うことができる。培養条件、例えば、温度、培地のｐＨ、及び培養時間は、適宜選択される。宿主細胞が動物細胞の場合、培地としては、例えば、約５〜２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地（Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９５９、Ｖｏｌ．１３０、Ｎｏ．３３７３、ｐ．４３２−７）、ＤＭＥＭ培地（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１９５９、Ｖｏｌ．８、ｐ．３９６）、ＲＰＭＩ１６４０培地（Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．、１９６７、Ｖｏｌ．１９９、ｐ．５１９）、１９９培地（Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．、１９５０、Ｖｏｌ．７３、ｐ．１−８）等を用いることができる。培地のｐＨは約６〜８であるのが好ましく、培養は、必要により通気や撹拌しながら、通常約３０〜４０℃で約１５〜７２時間行われる。宿主細胞が昆虫細胞の場合、培地としては、例えば、胎児牛血清を含むＧｒａｃｅ’ｓ培地（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８５、Ｖｏｌ．８２、ｐ．８４０４）等を用いることができる。培地のｐＨは約５〜８であるのが好ましく、培養は、必要により通気や撹拌しながら、通常約２０〜４０℃で約１５〜１００時間行われる。宿主細胞が大腸菌又は酵母である場合、培地としては、例えば、栄養源を含有する液体培地が適当である。栄養培地は、形質転換された宿主細胞の生育に必要な炭素源、無機窒素源又は有機窒素源を含んでいることが好ましい。炭素源としては、例えば、グルコース、デキストラン、可溶性デンプン、ショ糖などが、無機窒素源又は有機窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、アミノ酸、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などが挙げられる。所望により他の栄養素（例えば、無機塩（例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウム）、ビタミン類など）、抗生物質（例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、アンピシリン、カナマイシン等）を含んでいてもよい。培地のｐＨは約５〜８であるのが好ましい。宿主細胞が大腸菌の場合、好ましい培地としては、例えば、ＬＢ培地、Ｍ９培地（Ｍｏｌ．Ｃｌｏ．、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｖｏｌ．３、Ａ２．２）等を用いることができる。培養は、必要により通気や撹拌しながら、通常約１４〜３９℃で約３〜２４時間行われる。宿主細胞が酵母の場合、培地としては、例えば、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒ最小培地（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８０、Ｖｏｌ．７７、ｐ．４５０５）等を用いることができる。培養は、必要により通気や撹拌しながら、通常約２０〜３５℃で約１４〜１４４時間行われる。上述のような培養により、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを発現させることができる。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法は、本発明の形質転換された宿主細胞を培養し、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを発現させる工程に加えて、さらには、該形質転換された宿主細胞から抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを回収、好ましくは単離又は精製する工程を含むことができる。単離又は精製方法としては、例えば、塩析、溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法、透析、限外濾過、ゲル濾過などの分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーなどの荷電を利用する方法、アフィニティークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方法、等電点電気泳動などの等電点の差を利用する方法などが挙げられる。好ましくは、培養上清中に蓄積された抗体は、各種クロマトグラフィー、例えば、プロテインＡカラム又はプロテインＧカラムを用いたカラムクロマトグラフィーにより精製することができる。
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントには、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法で生産された抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントも含まれる。
＜本発明の医薬組成物＞
本発明の医薬組成物には、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が含まれる。本発明の医薬組成物は、当該分野において通常用いられている賦形剤、即ち、薬剤用賦形剤や薬剤用担体等を用いて、通常使用される方法によって調製することができる。これら医薬組成物の剤型の例としては、例えば、注射剤、点滴用剤等の非経口剤が挙げられ、静脈内投与、皮下投与等により投与することができる。製剤化にあたっては、薬学的に許容される範囲で、これら剤型に応じた賦形剤、担体、添加剤等を使用することができる。
本発明の医薬組成物は、複数種の本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを含み得る。例えば、翻訳後修飾を受けていない抗体又はその抗原結合フラグメント、及び、該抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する医薬組成物も本発明に含まれる。
１つの実施形態において、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する本発明の医薬組成物には、下記（１）〜（３）のいずれかに記載の医薬組成物も含まれる。
（１）配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、並びに、該抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する医薬組成物；
（２）配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、並びに、該抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する医薬組成物；並びに
（３）配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント、並びに、該抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する医薬組成物。
本発明の医薬組成物には、重鎖Ｃ末端リジンの欠失抗体、Ｎ末端翻訳後修飾を受けた抗体又はその抗原結合フラグメント、重鎖Ｃ末端リジンを欠失しＮ末端翻訳後修飾を受けた抗体、及び／又は重鎖Ｃ末端リジンを有しＮ末端翻訳後修飾を受けていない抗体を含有する医薬組成物も含まれる。
１つの実施形態において、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を含有する本発明の医薬組成物には、下記（１）〜（４）のうち２種以上の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を含有する医薬組成物も含まれる。
（１）配列番号２のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（２）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号２のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（３）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号２のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（４）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
１つの実施形態において、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を含有する本発明の医薬組成物には、下記（１）〜（４）のうち２種以上の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を含有する医薬組成物も含まれる。
（１）配列番号６のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（２）アミノ酸番号１のグルタミン酸がピログルタミン酸に修飾された配列番号６のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（３）アミノ酸番号１のグルタミン酸がピログルタミン酸に修飾された配列番号６のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（４）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
１つの実施形態において、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を含有する本発明の医薬組成物には、下記（１）〜（４）のうち２種以上の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を含有する医薬組成物も含まれる。
（１）配列番号１０のアミノ酸番号１から４５１までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（２）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号１０のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（３）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号１０のアミノ酸番号１から４５１までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
（４）配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
製剤化における本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの添加量は、患者の症状の程度や年齢、使用する製剤の剤型、又は抗体の結合力価等により異なるが、例えば、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ程度を用いることができる。
本発明の医薬組成物は、ｐＤＣｓが病態形成に関与する疾患、例えば、全身性エリテマトーデスの予防又は治療用医薬組成物として用いることができる。
本発明には、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント及び薬学的に許容される賦形剤を含む、全身性エリテマトーデスの予防又は治療用医薬組成物が含まれる。また、本発明には、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの治療有効量を投与する工程を包含する、全身性エリテマトーデスを予防又は治療する方法が含まれる。また、本発明には、全身性エリテマトーデスの予防又は治療に使用するための、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントが含まれる。また、本発明には、全身性エリテマトーデスの予防又は治療用医薬組成物の製造における、本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの使用が含まれる。
本発明についてさらに理解を得るために参照する特定の実施例をここに提供するが、これらは例示目的とするものであって、本発明を限定するものではない。
市販のキット又は試薬等を用いた部分については、特に断りのない限り添付のプロトコールに従って実験を行った。
（実施例１：ヒトＢＤＣＡ−２変異体発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞の取得）
抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の結合性試験に使用するために、ヒトＢＤＣＡ−２変異体発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞を取得した。具体的には、ＰＣＲ法によって増幅した、ヒトＢＤＣＡ−２変異体（配列番号１５：野生型ヒトＢＤＣＡ−２（配列番号１３）のアミノ酸番号３３のセリンをシステインに置換したアミノ酸配列からなる。当該変異部位は、膜貫通領域に存在するため、細胞外領域のアミノ酸配列は野生型と同じである。）をコードする遺伝子（配列番号１４）を、ヒトＦｃεＲＩγの全長配列をコードする遺伝子（配列番号１６）と共に哺乳細胞発現用ベクターであるｐＩＲＥＳベクター（クロンテック社）に挿入し、ヒトＢＤＣＡ−２変異体とヒトＦｃεＲＩγとを同時に発現するベクターを作製した。次にこのベクターを、遺伝子導入試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（ライフテクノロジーズ社）を用いてＣＨＯ−Ｋ１細胞へ遺伝子導入した。この細胞をＧｅｎｅｔｉｃｉｎ（ライフテクノロジーズ社）含有ＲＰＭＩ１６４０培地にて選択培養した後、セルソーターＦＡＣＳＡｒｉａTM（ベクトン・ディッキンソン アンド カンパニー）によりヒトＢＤＣＡ−２変異体蛋白質を高発現する細胞集団をさらに選別した（以下、ヒトＢＤＣＡ−２変異体／ＣＨＯ細胞と称する）。
（実施例２：抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体産生ハイブリドーマの作製）
ヒトモノクローナル抗体開発技術「ベロシミューン」（ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ社（米国特許６５９６５４１号））マウスを用いて抗体を作製した。具体的には、免疫反応を惹起するアジュバントと共に、ヒトＢＤＣＡ−２細胞外領域とマウスＦｃとの融合蛋白質及びヒトＢＤＣＡ−２発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞、又は、ヒトＢＤＣＡ−２細胞外領域とマウスＦｃとの融合蛋白質、サルＢＤＣＡ−２細胞外領域とマウスＦｃとの融合蛋白質及びヒトＢＤＣＡ−２発現ＣＨＯ−Ｋ１細胞をベロシミューンマウスに注射し、免疫を施した。
その後常法に従い、免疫したマウスの脾臓やリンパ節を摘出しリンパ球を収集し、これをマウスミエローマ細胞ＳＰ２／０―Ａｇ１４と細胞融合することでハイブリドーマを作製した。ハイブリドーマのモノクローン化を行い、各クローンについて、無血清培地で培養した。得られた培養上清から抗体を精製した。ベロシミューン技術を用いて得られた抗体は、ヒト抗体の可変領域とマウス抗体の定常領域を有する抗体（キメラ抗体とも称する）である。
（実施例３：細胞ＥＬＩＳＡ結合アッセイ）
抗体の抗原特異的結合活性を測定するために、実施例１で作製したヒトＢＤＣＡ−２変異体／ＣＨＯ細胞に対する抗体の結合を評価した。具体的にはまず、ヒトＢＤＣＡ−２変異体／ＣＨＯ細胞をＲＰＭＩ１６４０培地（ライフテクノロジーズ社）で２×１０5個／ｍＬになるよう懸濁し、ポリＤリジンコートされた３８４ウェルプレート（グライナー社）に、１ウェルあたり５０μＬ播種し、３７℃に設定したＣＯ2インキュベータで一晩培養した。その後培地を除去し、希釈液（１％ウシ血清アルブミン入りハンクス平衡塩溶液）で１００００ｎｇ／ｍＬから４．６ｎｇ／ｍＬの濃度で段階希釈（３倍希釈系列で８段階）したハイブリドーマ由来抗体（実施例２で精製された抗体）及び比較抗体を、２０μＬずつそれぞれ添加して、室温で１時間反応させた。次に洗浄液（０．１％ウシ血清アルブミン入りハンクス平衡塩溶液）で洗浄し、希釈液で５０００倍に希釈したＨＲＰ標識ウサギ抗マウスＩｇＧ抗体（ＨＲＰ−ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ ＩｇＧ ａｎｔｉｂｏｄｙ：ダコ社）を２０μＬ添加し、室温で３０分間反応させた。その後洗浄液で洗浄し、化学発光検出試薬であるＢＭ−Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ＥＬＩＳＡ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＰＯＤ）（ロシュ・ダイアグノスティックス社）を３０μＬ加え、その化学発光量をＥｎＶｉｓｉｏｎカウンター（パーキンエルマー社）にて測定した。測定結果は、ＥＣ５０値を４パラメータロジスティック曲線当てはめにより分析した。本試験では比較抗体として、ヒトＢＤＣＡ−２に対するマウス抗体であるＡＣ１４４（非特許文献１〜４、ミルテニーバイオテク社）を用いた。
その結果、ＢＤＣ３−１２Ａ２、ＢＤＣ３−１２Ｆ５、及びＢＤＣ１３−３２Ｅ３と命名した抗体（キメラ抗体）が、ヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に対する高い結合活性を有していた（表１）。
表１：抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体のヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に対する結合活性
Figure 0006604204
（実施例４：ヒトＩＦＮα産生に対する抑制活性評価）
ヒト末梢血単核細胞にＯＤＮ２２１６などのＴＬＲ９のリガンドを添加して培養すると、ヒト末梢血単核細胞中に存在するｐＤＣｓが活性化され、ｐＤＣｓからのＩＦＮα産生が誘導される（非特許文献１）。そこで、ｐＤＣｓから産生されるＩＦＮαの抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体による産生抑制を指標として、抗体のｐＤＣｓに対する機能調節活性を評価した。具体的にはまず、９６ウェルＵ底プレート（グライナー社）に、ＲＰＭＩ１６４０培地を用いて１．６μＭに調製したＯＤＮ２２１６（インヴィヴォジェン社）を２５μＬ添加し、次にＲＰＭＩ１６４０培地を用いて４０００ｎｇ／ｍＬから０．０２ｎｇ／ｍＬの範囲内で１１段階に希釈したハイブリドーマ由来抗体及び比較抗体を各２５μＬ添加した。そこに、ヒトＩＬ−３（ぺプロテック社）を２０ｎｇ／ｍＬ含有するＲＰＭＩ１６４０培地で２×１０6個／ｍＬになるよう懸濁したヒト末梢血単核細胞（ロンザ社）を５０μＬ添加した。コントロールとして、抗体の代わりにＲＰＭＩ１６４０培地を添加したウェル、ＯＤＮ２２１６の代わりにＲＰＭＩ１６４０培地を添加したウェルをそれぞれ準備した。３７℃に設定したＣＯ2インキュベータにて２０時間培養した後、上清中のＩＦＮα蛋白量をＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＩＦＮαアッセイキット（パーキンエルマー社）を用いて定量した。さらに定量した値をもとに、ＩＦＮα産生抑制率を算出した。より具体的には、抗体の代わりにＲＰＭＩ１６４０培地を添加した群を０％抑制コントロール群として、また、ＯＤＮ２２１６の代わりにＲＰＭＩ１６４０培地を添加した群を１００％抑制コントロール群として設定した。算出されたＩＦＮα産生抑制率を解析し、４パラメータロジスティック曲線当てはめにより抗体のＩＣ５０値とＩＣ９０値を算出した。ＩＣ９０値は、それぞれの抗体の最大作用が期待できる最小値、すなわち、ヒト末梢血単核細胞からのＩＦＮα産生の完全抑制に要する抗体濃度の最小値に近似する値である。全身性エリテマトーデス病態モデルマウスにおいては、極めて微量のＩＦＮαが病態増悪を引き起こすことが報告されており（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．１７４、ｐ．２４９９、２００５）、全身性エリテマトーデスの予防及び治療においてＩＦＮαを完全抑制することの重要性が示唆されている。なお、本実施例では比較抗体としてＡＣ１４４を用いた。
その結果、ＢＤＣ３−１２Ａ２、ＢＤＣ３−１２Ｆ５及びＢＤＣ１３−３２Ｅ３が、ＩＣ５０値とＩＣ９０値のいずれにおいても、比較抗体ＡＣ１４４よりも高いＩＦＮα産生抑制活性を有していることが明らかとなった（表２）。また、ＩＣ９０値の結果から、ＢＤＣ３−１２Ａ２、ＢＤＣ３−１２Ｆ５及びＢＤＣ１３−３２Ｅ３は、ＡＣ１４４よりも、ＩＦＮα産生の完全抑制に要する濃度が小さいことが明らかとなった。
表２：抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体のヒトＩＦＮα産生に対する抑制活性
Figure 0006604204
（実施例５：完全ヒト型抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の配列決定と作製）
ＢＤＣ３−１２Ａ２、ＢＤＣ３−１２Ｆ５及びＢＤＣ１３−３２Ｅ３をそれぞれ産生するハイブリドーマから抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子をクローニングし、配列を決定した。
前述の抗体は、可変領域がヒト由来であり、定常領域がマウス由来の抗体である。そこで、ＧＳ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ロンザ社）を用いて、重鎖及び軽鎖の両遺伝子を含む発現ベクターを構築し、可変領域及び定常領域がヒト由来の完全ヒト型抗体を作製した。具体的には、ＢＤＣ３−１２Ａ２、ＢＤＣ３−１２Ｆ５、及びＢＤＣ１３−３２Ｅ３の各抗体の重鎖可変領域遺伝子の５’側にシグナル配列（Ｎ．Ｗｈｉｔｔｌｅら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、Ｖｏｌ．１、ｐ．４９９、１９８７）をコードする遺伝子を、そして３’側にヒトＩｇγ１の定常領域遺伝子（配列番号１の塩基番号３６１から１３５３までの塩基配列からなる）をそれぞれ繋げ、この重鎖遺伝子をｐＥＥ６．４に挿入した。また、抗体の軽鎖可変領域遺伝子の５’側にシグナル配列（Ｎ．Ｗｈｉｔｔｌｅら、前出）をコードする遺伝子を、そして３’側にヒトＩｇκの定常領域遺伝子（配列番号３の塩基番号３２８から６４８までの塩基配列からなる）をそれぞれ繋げ、この軽鎖遺伝子をｐＥＥ１２．４に挿入した。
ｐＥＥ６．４に挿入した各抗体の重鎖遺伝子配列、ｐＥＥ１２．４に挿入した各抗体の軽鎖遺伝子配列をシーケンサーで解析し、その結果得られたアミノ酸配列から、Ｋａｂａｔらのデータベース（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”、ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＵＳ Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ Ｐｒｉｎｔｉｎｇ Ｏｆｆｉｃｅ）を参照してＣＤＲ配列を決定した。
作製したＢＤＣ３−１２Ａ２の完全ヒト型抗体（完全ヒト型ＢＤＣ３−１２Ａ２）の重鎖の塩基配列を配列番号１に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号２に、該抗体の軽鎖の塩基配列を配列番号３に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号４にそれぞれ示す。配列番号２で表される重鎖の可変領域は、配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなり、重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号２のアミノ酸番号３１から３５、５０から６６、９９から１０９までのアミノ酸配列からなる。配列番号４で表される軽鎖の可変領域は、配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなり、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４のアミノ酸番号２４から３４、５０から５６、８９から９８までのアミノ酸配列からなる。
作製したＢＤＣ３−１２Ｆ５の完全ヒト型抗体（完全ヒト型ＢＤＣ３−１２Ｆ５）の重鎖の塩基配列を配列番号５に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号６に、該抗体の軽鎖の塩基配列を配列番号７に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号８にそれぞれ示す。配列番号６で表される重鎖の可変領域は、配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなり、重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号６のアミノ酸番号３１から３５、５０から６６、９９から１０９までのアミノ酸配列からなる。配列番号８で表される軽鎖の可変領域は、配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなり、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号８のアミノ酸番号２４から３４、５０から５６、８９から９７までのアミノ酸配列からなる。
作製したＢＤＣ１３−３２Ｅ３の完全ヒト型抗体（完全ヒト型ＢＤＣ１３−３２Ｅ３）の重鎖の塩基配列を配列番号９に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号１０に、該抗体の軽鎖の塩基配列を配列番号１１に、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号１２にそれぞれ示す。配列番号１０で表される重鎖の可変領域は、配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなり、重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１０のアミノ酸番号３１から３７、５２から６７、１００から１１１までのアミノ酸配列からなる。配列番号１２で表される軽鎖の可変領域は、配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなり、軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、それぞれ配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４、５０から５６、８９から９７までのアミノ酸配列からなる。
各完全ヒト型抗体を作製するため、ＧＳ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ロンザ社）のプロトコールに記載の方法を参考に、各抗体の重鎖と軽鎖の遺伝子がそれぞれ挿入された前述のＧＳベクターをＮｏｔＩとＰｖｕＩで制限酵素切断し、Ｌｉｇａｔｉｏｎ−Ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｃｅ Ｋｉｔ（ニッポンジーン社）を用いて連結し、重鎖と軽鎖の両遺伝子が挿入されたＤｏｕｂｌｅ−Ｇｅｎｅベクターを構築した。次に、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞（ロンザ社）に対して、前述のＤｏｕｂｌｅ−Ｇｅｎｅベクターをエレクトロポレーション法により遺伝子導入し、メチオニンスルフォキシミン（シグマ社）を最終濃度５０μＭとなるように添加したＣＤ−ＣＨＯ Ｍｅｄｉｕｍ（ライフテクノロジーズ社）中で５日〜６日間培養した。得られた培養上清からプロテインＡカラム又はプロテインＧカラム（ＧＥヘルスケア・ジャパン社）を用いて、各完全ヒト型抗体を精製した。
（実施例６：完全ヒト型抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体のアミノ酸修飾分析）
実施例５で精製した各完全ヒト型抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体のアミノ酸修飾を分析した結果、精製抗体の大部分において、完全ヒト型ＢＤＣ３−１２Ａ２では重鎖Ｎ末端のピログルタミン変換及び重鎖Ｃ末端のリジン欠失が、完全ヒト型ＢＤＣ３−１２Ｆ５では重鎖Ｃ末端のリジン欠失が、完全ヒト型ＢＤＣ１３−３２Ｅ３では重鎖Ｎ末端のピログルタミン変換及び重鎖Ｃ末端のリジン欠失がそれぞれ生じていた。
（実施例７：完全ヒト型抗体のヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に対する結合活性評価）
実施例３の方法に従い、各完全ヒト型抗体について、ヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に対する結合活性を評価した。但し、ハイブリドーマ由来抗体の代わりに、実施例５で作製した各完全ヒト型抗体（完全ヒト型ＢＤＣ３−１２Ａ２、完全ヒト型ＢＤＣ３−１２Ｆ５又は完全ヒト型ＢＤＣ１３−３２Ｅ３）をそれぞれ添加した。また、ＨＲＰ標識ウサギ抗マウスＩｇＧ抗体の代わりに、ＨＲＰ標識ウサギ抗ヒトＩｇＧ抗体（ＤＡＫＯ社）を用いた。本活性評価試験は３回独立して実施した。
その結果、本発明の完全ヒト型抗体のいずれもが、ヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に対する高い結合活性を有していることが確認された（表３）。表３に示されるＥＣ５０値は、３回の独立した活性評価から得られたＥＣ５０値の平均である。
表３：完全ヒト型抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体のヒトＢＤＣＡ−２の細胞外領域に対する結合活性
Figure 0006604204
（実施例８：完全ヒト型抗体のヒトＩＦＮα産生に対する抑制活性評価）
実施例４の方法に従い、実施例５で作製した各完全ヒト型抗体について、ｐＤＣｓから産生されるＩＦＮαの抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体による産生抑制を指標に、ｐＤＣｓに対する抗体の機能調節活性を評価した。但し、本実施例においては、より安定した評価結果を得るために、複数のヒト末梢血単核細胞のロットの中でＯＤＮ２２１６刺激に対するＩＦＮα産生が比較的高いロットを使い、ヒトＩＬ−３を含有するＲＰＭＩ１６４０培地で細胞が５×１０6個／ｍＬになるよう懸濁して評価に用いた。また、ハイブリドーマ由来抗体の代わりに、１２００ｎｇ／ｍＬから０．０６ｎｇ／ｍＬの範囲内で９段階に希釈した各完全ヒト型抗体（完全ヒト型ＢＤＣ３−１２Ａ２、完全ヒト型ＢＤＣ３−１２Ｆ５又は完全ヒト型ＢＤＣ１３−３２Ｅ３）をそれぞれ添加した。本実施例は、比較抗体としてＡＣ１４４を用いた。また、本活性評価試験は２回独立して実施した。
その結果、本発明の完全ヒト型抗体のいずれもが、ＩＣ５０値とＩＣ９０値のいずれにおいても、ｐＤＣｓに対して、比較抗体ＡＣ１４４よりも高い抑制活性を有していることが明らかとなった（表４）。また、ＩＣ９０値の結果から、ＢＤＣ３−１２Ａ２、ＢＤＣ３−１２Ｆ５及びＢＤＣ１３−３２Ｅ３は、ＡＣ１４４よりも、ＩＦＮα産生の完全抑制に要する濃度が小さいことが明らかとなった。
表４：完全ヒト型抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体のヒトＩＦＮα産生に対する抑制活性
Figure 0006604204
本発明の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体は、ヒトＢＤＣＡ−２を特異的に発現するｐＤＣｓが病態形成に関与する自己免疫疾患の予防又は治療に有用である。また、本発明のポリヌクレオチド、発現ベクター、形質転換された宿主細胞及び抗体を生産する方法は、前記抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を産生するのに有用である。
以下の配列表の数字見出し＜２２３＞には、「Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ」の説明を記載する。具体的には配列表の配列番号１及び３で表される塩基配列は、それぞれ完全ヒト型ＢＤＣ３−１２Ａ２の重鎖及び軽鎖の塩基配列であり、配列番号２及び４で表されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１及び３によりコードされる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列である。配列表の配列番号５及び７で表される塩基配列は、それぞれ完全ヒト型ＢＤＣ３−１２Ｆ５の重鎖及び軽鎖の塩基配列であり、配列番号６及び８で表されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号５及び７によりコードされる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列である。配列表の配列番号９及び１１で表される塩基配列は、それぞれ完全ヒト型ＢＤＣ１３−３２Ｅ３の重鎖及び軽鎖の塩基配列であり、配列番号１０及び１２で表されるアミノ酸配列は、それぞれ配列番号９及び１１によりコードされる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列である。配列表の配列番号１４で表される塩基配列は、ヒトＢＤＣＡ−２変異体の塩基配列であり、配列番号１５で表されるアミノ酸配列は、ヒトＢＤＣＡ−２変異体のアミノ酸配列である。

Claims (14)

  1. 以下の（１）〜（３）のいずれかから選択される、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
    （１）配列番号２のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号２のアミノ酸番号９９から１０９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、並びに、配列番号４のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号４のアミノ酸番号８９から９８までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント；
    （２）配列番号６のアミノ酸番号３１から３５までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号６のアミノ酸番号５０から６６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸番号９９から１０９までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、並びに、配列番号８のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号８のアミノ酸番号８９から９７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント；並びに
    （３）配列番号１０のアミノ酸番号３１から３７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１０のアミノ酸番号５２から６７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１０のアミノ酸番号１００から１１１までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む重鎖可変領域、並びに、配列番号１２のアミノ酸番号２４から３４までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸番号５０から５６までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び配列番号１２のアミノ酸番号８９から９７までのアミノ酸配列からなるＣＤＲ３とを含む軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
  2. 以下の（１）〜（４）のいずれかから選択される、請求項１に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
    （１）配列番号２のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号４のアミノ酸番号１から１０９までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント；
    （２）配列番号６のアミノ酸番号１から１２０までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント；
    （３）配列番号１０のアミノ酸番号１から１２２までのアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１２のアミノ酸番号１から１０８までのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント；並びに
    （４）上記（１）〜（３）のいずれかの抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの翻訳後修飾により生じた抗体又はその抗原結合フラグメントである、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメント。
  3. 以下の（１）〜（４）のいずれかから選択される、請求項２に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
    （１）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；
    （２）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；
    （３）配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；並びに
    （４）上記（１）〜（３）のいずれかの抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の翻訳後修飾により生じた抗体である、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
  4. 以下の（１）〜（３）のいずれかから選択される、請求項３に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
    （１）配列番号２のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾され及び／又はアミノ酸番号４５０のリジンを欠く配列番号２のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；
    （２）配列番号６のアミノ酸番号１のグルタミン酸がピログルタミン酸に修飾され及び／又はアミノ酸番号４５０のリジンを欠く配列番号６のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；並びに
    （３）配列番号１０のアミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾され及び／又はアミノ酸番号４５２のリジンを欠く配列番号１０のアミノ酸配列からなる重鎖、並びに配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
  5. 以下の（１）〜（３）のいずれかから選択される、請求項４に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
    （１）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号２のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項４に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；
    （２）配列番号６のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項４に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；並びに
    （３）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号１０のアミノ酸番号１から４５１までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項４に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体。
  6. 以下の（１）〜（３）のいずれかから選択されるポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
    （１）請求項２（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列及び該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；
    （２）請求項２（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列及び該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド；並びに
    （３）請求項２（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列及び該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含む、ポリヌクレオチド。
  7. 以下の（１）〜（３）のいずれかから選択されるポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
    （１）請求項３（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列及び該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含む、ポリヌクレオチド；
    （２）請求項３（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列及び該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含む、ポリヌクレオチド；並びに
    （３）請求項３（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列及び該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチド。
  8. 以下の（ａ）〜（ｆ）からなる群より選択される、宿主細胞。
    （ａ）請求項２（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項２（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｃ）請求項２（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｄ）請求項２（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｅ）請求項２（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；及び
    （ｆ）請求項２（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  9. 以下の（ａ）〜（ｆ）からなる群より選択される、宿主細胞。
    （ａ）請求項３（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項３（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｃ）請求項３（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｄ）請求項３（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｅ）請求項３（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；及び
    （ｆ）請求項３（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  10. 以下の（ａ）〜（ｆ）からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを発現させる工程を包含する、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントを生産する方法。
    （ａ）請求項２（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項２（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｃ）請求項２（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｄ）請求項２（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｅ）請求項２（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
    （ｆ）請求項２（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体又はその抗原結合フラグメントの重鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体又はその抗原結合フラグメントの軽鎖可変領域をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  11. 以下の（ａ）〜（ｆ）からなる群より選択される宿主細胞を培養し、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を発現させる工程を包含する、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体を生産する方法。
    （ａ）請求項３（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｂ）請求項３（１）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｃ）請求項３（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｄ）請求項３（２）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；
    （ｅ）請求項３（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドとを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞；並びに
    （ｆ）請求項３（３）に記載の抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体の重鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターと該抗体の軽鎖をコードする塩基配列を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
  12. （１）配列番号２のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；
    （２）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号２のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；
    （３）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号２のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；及び／又は
    （４）配列番号２に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号４に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；並びに
    薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
  13. （１）配列番号６のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；
    （２）アミノ酸番号１のグルタミン酸がピログルタミン酸に修飾された配列番号６のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；
    （３）アミノ酸番号１のグルタミン酸がピログルタミン酸に修飾された配列番号６のアミノ酸番号１から４４９までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；及び／又は
    （４）配列番号６に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号８に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；並びに
    薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
  14. （１）配列番号１０のアミノ酸番号１から４５１までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；
    （２）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号１０のアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；
    （３）アミノ酸番号１のグルタミンがピログルタミン酸に修飾された配列番号１０のアミノ酸番号１から４５１までのアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；及び／又は
    （４）配列番号１０に示されるアミノ酸配列からなる重鎖及び配列番号１２に示されるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、抗ヒトＢＤＣＡ−２抗体；並びに
    薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
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