JP6589011B2 - Oral composition for improving brain dysfunction - Google Patents

Description

本発明は、脳機能障害改善用経口組成物に関する。   The present invention relates to an oral composition for improving brain dysfunction.

認知症は、加齢に伴い発現率が高くなる脳機能障害であり、その発現率は、６５歳以上の高齢者の凡そ７．７％であり、８０〜８４歳では１４．６％、８５歳以上では２７．３％とも言われている。我が国においては、人口の高齢化に伴って、認知症患者数が急激に増加しており、２０１０年時点では２００万人程度である患者数が、２０２１年には３００万人以上になるとも推定されている。認知症は、種々の原因で発症するが、その中でも一番多い原因疾患は、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害であるアルツハイマー病である（アルツハイマー型認知症）。   Dementia is a cerebral dysfunction whose incidence increases with age, and the incidence is approximately 7.7% of elderly people over 65 years old, and 14.6%, 85 at 80-84 years old. It is said that it is 27.3% over age. In Japan, with the aging of the population, the number of patients with dementia is increasing rapidly, and it is estimated that the number of patients, which is about 2 million as of 2010, will exceed 3 million in 2021. Has been. Dementia develops due to various causes. Among them, the most common causative disease is Alzheimer's disease, which is a brain dysfunction caused by amyloid beta protein (Alzheimer-type dementia).

このような背景から、アルツハイマー型認知症に対する根本的治療法が望まれている。アルツハイマー型認知症は、脳内でアミロイド・ベータ蛋白質が凝集して蓄積することで神経毒性が生じ、脳内の神経細胞を死滅させることが原因で発症するとされている。そのため、根本的な治療方法としては、脳内の神経細胞死自体を抑制することが必要である。しかしながら、現在のアルツハイマー型認知症の治療方法としては、コリンエステラーゼ阻害薬やグルタミン酸ＮＭＤＡ受容体拮抗薬による投薬治療が対症療法的に行われているのみである（非特許文献１）。   Against this background, a fundamental treatment for Alzheimer type dementia is desired. Alzheimer-type dementia is thought to develop due to neurotoxicity caused by aggregation and accumulation of amyloid beta protein in the brain, and death of nerve cells in the brain. Therefore, as a fundamental treatment method, it is necessary to suppress nerve cell death itself in the brain. However, the current treatment method for Alzheimer-type dementia is only symptomatic treatment with a cholinesterase inhibitor or a glutamate NMDA receptor antagonist (Non-patent Document 1).

近年、ペリンドプリルなどの薬剤に、アミロイド・ベータ蛋白質による脳内の神経細胞死を抑制する効果が見出され、アルツハイマー型認知症の原因治療になり得るものとして注目を集めている。しかしながら、ペリンドプリルなどの薬剤は、強力な血圧降下作用を有しているため、副作用として低血圧を誘発する可能性がある。
血圧とアルツハイマー型認知症の関係では、中年期の高血圧が晩年の認知機能低下に関与することが示唆されている一方で、高齢者においては、低血圧による不安定な循環動態が、アルツハイマー病の病態を悪化させると考えられている（非特許文献２）。
したがって、血圧が変動しやすく、かつ、高齢のアルツハイマー型認知症患者にとって、従来の血圧降下作用を有する薬剤を用いて治療をすることは、血圧のさらなる低下を引き起こす恐れがあり、かえって病状を悪化させてしまう可能性があった。 In recent years, drugs such as perindopril have been found to have an effect of suppressing neuronal cell death in the brain caused by amyloid / beta protein, and are attracting attention as a possible cause of Alzheimer-type dementia. However, since drugs such as perindopril have a strong blood pressure lowering effect, there is a possibility of inducing hypotension as a side effect.
The relationship between blood pressure and Alzheimer's dementia suggests that middle-age hypertension is involved in later cognitive decline, while unstable circulation due to hypotension is associated with Alzheimer's disease in the elderly It is thought to worsen the pathological condition (Non-patent Document 2).
Therefore, for elderly patients with Alzheimer-type dementia, treatment with a conventional drug that has a blood pressure lowering effect may cause a further decrease in blood pressure, which worsens the medical condition. There was a possibility of letting it.

上野川修一、吉川正明編集、「食と健康のための免疫学入門」、初版、株式会社建帛社、２０１２年２月１０日、第１９９−２１５頁Edited by Shuichi Uenogawa and Masaaki Yoshikawa, “Introduction to Immunology for Food and Health”, First Edition, Kenshisha Co., Ltd., February 10, 2012, pages 199-215 山崎貴史、「アルツハイマー病における血管性危険因子と画像所見の横断的検討」、脳卒中、日本脳卒中学会、２００８年、第３０巻第５号、第６６０−６６７頁Takashi Yamazaki, “Cross-sectional examination of vascular risk factors and imaging findings in Alzheimer's disease”, Stroke, Japan Stroke Society, 2008, Vol. 30, No. 5, pp. 660-667

前記アルツハイマー型認知症において、薬剤による治療には長期間の薬剤投与を伴うのが通常である。そのため、継続的に摂取又は投与をしても副作用が少なく、安全性が高い薬剤が望まれていた。
また、高齢者のアルツハイマー病患者に対しても、血圧の変動を生じさせずに、アミロイド・ベータ蛋白質による脳内の神経細胞死を抑制することができる治療薬が望まれている。 In Alzheimer type dementia, treatment with a drug usually involves long-term drug administration. Therefore, there has been a demand for a drug that has few side effects even after continuous ingestion or administration and has high safety.
In addition, a therapeutic agent that can suppress neuronal cell death in the brain caused by amyloid-beta protein without causing fluctuations in blood pressure is also desired for elderly Alzheimer's disease patients.

本発明者は鋭意検討を行った結果、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏで表される配列（配列番号１）からなるペプチド（以下、「ペプチドＭＫＰ」とも表記する）が、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害に対して有効であることを見出し、本発明を完成させるに至った。このペプチドＭＫＰは、血圧を過度に低下させることなく、アルツハイマー型認知症の改善に有効であることが明らかとなった。さらに、ペプチドＭＫＰは、乳蛋白質であるカゼインを特定の酵素で分解した加水分解物中に存在する成分であるため、サプリメントや食品に添加して提供することも可能な安全性の高いものであった。   As a result of intensive studies, the present inventors have found that a peptide consisting of a sequence represented by Met-Lys-Pro (SEQ ID NO: 1) (hereinafter also referred to as “peptide MKP”) is caused by amyloid / beta protein. It has been found that it is effective against functional disorders, and the present invention has been completed. This peptide MKP was revealed to be effective in improving Alzheimer's dementia without excessively lowering blood pressure. Furthermore, since peptide MKP is a component present in a hydrolyzate obtained by degrading casein, which is a milk protein, with a specific enzyme, it is highly safe and can be added to supplements and foods. It was.

本発明は、副作用が少なく安全性に優れ、血圧の変動を生じさせずに脳機能障害を改善する経口組成物を提供することを目的としている。   An object of the present invention is to provide an oral composition that is excellent in safety with few side effects and improves brain dysfunction without causing fluctuations in blood pressure.

すなわち、前記課題を解決する本発明は、以下の（１）である。
（１）Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチドを有効成分として含有する、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害改善用経口組成物。 That is, this invention which solves the said subject is the following (1).
(1) An oral composition for improving cerebral dysfunction caused by amyloid beta protein, comprising a peptide comprising Met-Lys-Pro as an active ingredient.

また、本発明は以下の（２）及び（３）を好ましい態様としている。
（２）前記（１）の脳機能障害が記憶障害である。
（３）前記（２）の記憶障害が記銘力の低下である。 Moreover, this invention makes the following (2) and (3) the preferable aspect.
(2) The brain dysfunction of (1) is a memory disorder.
(3) The memory failure of (2) is a decline in memorizing ability.

本発明の有効成分であるペプチドＭＫＰは、乳由来のカゼイン蛋白質から得られるペプチドであることから副作用が少なく安全に摂取が可能である。また、ペプチドＭＫＰを含有する医薬品や飲食品の形態により、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害の改善剤を提供することができる。   Peptide MKP, which is an active ingredient of the present invention, is a peptide obtained from casein protein derived from milk, and therefore can be safely ingested with few side effects. Moreover, the improvement agent of the brain dysfunction resulting from an amyloid beta protein can be provided with the form of the pharmaceutical and food-drinks containing peptide MKP.

次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。   Next, a preferred embodiment of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the following preferred embodiments, and can be freely changed within the scope of the present invention. In the present specification, percentages are expressed by mass unless otherwise specified.

＜アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害改善剤＞
本発明のＭｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチドを有効成分とするアミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害改善剤（以下、「本発明の脳機能障害改善剤」とも記載する）は、当該Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチドを含む脳機能障害改善剤を、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害の罹患者に投与する、又は摂取させることにより、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害を改善する効果を有するものである。ここで、本明細書における、「改善」とは、疾患の症状・状態の好転、疾患の症状・状態の悪化の防止若しくは遅延、疾患の症状の進行の逆転、防止若しくは遅延、又は疾患の治療等を意味するものである。さらに、本発明書における「改善」は、予防の意味をも包含する。「予防」とは、適用対象における疾患の発症の防止若しくは発症の遅延、又は適用対象の疾患の発症の危険性を低下させる等を意味するものである。 <A brain dysfunction-improving agent caused by amyloid-beta protein>
The cerebral dysfunction-improving agent (hereinafter also referred to as “the cerebral dysfunction-improving agent of the present invention”) caused by amyloid / beta protein containing the peptide comprising Met-Lys-Pro of the present invention as an active ingredient is the Met- Improve cerebral dysfunction caused by amyloid / beta protein by administering or ingesting cerebral dysfunction-improving agent containing peptide consisting of Lys-Pro to patients suffering from cerebral dysfunction caused by amyloid / beta protein It has the effect to do. As used herein, “improvement” means improvement of disease symptoms / states, prevention or delay of deterioration of disease symptoms / states, reversal of progression of disease symptoms, prevention or delay, or treatment of diseases And so on. Furthermore, “improvement” in the present invention also includes the meaning of prevention. “Prevention” means prevention or delay of the onset of the disease in the application target or reduction of the risk of the onset of the disease of the application target.

本発明の脳機能障害改善剤の投与対象となる「アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害」とは、アミロイド・ベータ蛋白質が脳内に凝集して蓄積し、脳内の神経細胞が死滅することによって生ずる、記憶障害、学習障害及び空間認知機能障害などの脳の種々の機能障害を意味する。このような脳機能障害のうち、最も典型的なものは、アルツハイマー型認知症である。アルツハイマー型認知症は、アルツハイマー病を原因疾患とする認知症であり、認知症とは、「一度正常に達した認知機能が後天的な脳の障害によって持続的に低下し、日常生活や社会生活に支障をきたすようになった状態であり、かつ、それが意識障害のないときにみられる状態」と定義されている（認知症疾患治療ガイドライン２０１０）。   The “brain dysfunction caused by amyloid / beta protein” to be administered with the brain dysfunction-improving agent of the present invention means that amyloid / beta protein aggregates and accumulates in the brain, and nerve cells in the brain die. This refers to various brain dysfunctions such as memory impairment, learning impairment, and spatial cognitive impairment. Among such brain dysfunctions, the most typical is Alzheimer's dementia. Alzheimer-type dementia is a dementia caused by Alzheimer's disease. Dementia is a condition in which normal cognitive functions that have once reached normal levels are continuously reduced by acquired brain damage, It is defined as “a state seen when there is no disturbance of consciousness” (dementia disease treatment guideline 2010).

アルツハイマー型認知症の患者においては、脳萎縮（大脳皮質・海馬の萎縮、及び脳室の拡大）が見られ、さらに、大脳皮質には老人斑と呼ばれる病理学的所見が見られる。この老人斑の主要な構成成分はアミロイド・ベータ蛋白質であることが知られている。
アルツハイマー型認知症の原因は完全には明らかになってはいないが、このアミロイド・ベータ蛋白質が脳内に凝集・蓄積して老人班となる過程で神経毒性を生じ、神経原線維を変性させ、最終的には神経細胞死に至ることが主要因であると想定されている。
したがって、本発明のアミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害改善剤は、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害の中でも、アルツハイマー型認知症の改善に有効であると考えられる。 In patients with Alzheimer-type dementia, brain atrophy (cerebral cortex / hippocampal atrophy and ventricular enlargement) is observed, and the cerebral cortex has pathological findings called senile plaques. It is known that the main component of this senile plaque is amyloid beta protein.
The cause of Alzheimer-type dementia has not been fully clarified, but this amyloid beta protein aggregates and accumulates in the brain, causing neurotoxicity in the process of becoming a senile group, degenerating neurofibrils, It is assumed that the main factor is ultimately the death of nerve cells.
Therefore, it is considered that the brain dysfunction-improving agent caused by amyloid-beta protein of the present invention is effective in improving Alzheimer-type dementia among brain dysfunctions caused by amyloid-beta protein.

＜ペプチドＭＫＰ＞
本発明の脳機能障害改善剤の有効成分はペプチドであり、当該ペプチドは、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏで表されるアミノ酸配列（配列番号１）からなる、「ペプチドＭＫＰ」である。ここで、Ｍｅｔ（Ｍ）はメチオニン残基、Ｌｙｓ（Ｋ）はリジン残基、Ｐｒｏ（Ｐ）はプロリン残基を示す。いずれのアミノ酸も、Ｌ−型アミノ酸であることが好ましい。
また、本発明の有効成分であるペプチドは、このペプチドの塩類であってもよい。当該塩類としては、例えば、カリウム、ナトリウム等のアルカリ金属類；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属類等が挙げられる。 <Peptide MKP>
The active ingredient of the brain dysfunction improving agent of the present invention is a peptide, and the peptide is “peptide MKP” consisting of an amino acid sequence (SEQ ID NO: 1) represented by Met-Lys-Pro. Here, Met (M) represents a methionine residue, Lys (K) represents a lysine residue, and Pro (P) represents a proline residue. Any amino acid is preferably an L-amino acid.
Moreover, the peptide which is an active ingredient of this invention may be salts of this peptide. Examples of the salts include alkali metals such as potassium and sodium; alkaline earth metals such as calcium and magnesium.

前記ペプチドＭＫＰは、例えば、（１）Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏで表されるアミノ酸配列（配列番号１）を含む蛋白質やペプチドを加水分解酵素等にて分解し、得られた分解物から分離精製して得る方法、（２）ペプチドの化学合成方法にてペプチドＭＫＰを合成した後、得られた合成物からペプチドＭＫＰを分離精製して得る方法、（３）ペプチドＭＫＰ及びこれを含むペプチド等を生産する植物、動物や微生物から抽出し、得られた抽出物から分離精製する方法等により得ることができる。本明細書においては、前記の（１）及び（２）の方法によるペプチドＭＫＰを製造する方法について、以下のとおり説明する。   The peptide MKP is obtained by, for example, decomposing a protein or peptide containing the amino acid sequence (SEQ ID NO: 1) represented by (1) Met-Lys-Pro with a hydrolase, etc., and separating and purifying it from the resulting degradation product. (2) After peptide MKP is synthesized by peptide chemical synthesis method, peptide MKP is obtained by separating and purifying peptide MKP from the obtained compound, and (3) peptide MKP and peptides containing the same are produced. It can be obtained by a method of extracting from the obtained plant, animal or microorganism and separating and purifying from the obtained extract. In the present specification, a method for producing peptide MKP by the methods (1) and (2) will be described as follows.

（１）加水分解により得る方法
本発明の脳機能障害改善剤の有効成分であるペプチドＭＫＰを、加水分解により得る方法としては、例えば、乳蛋白質であるカゼインを、蛋白質加水分解酵素や、酸・アルカリ等により加水分解し、得られた加水分解物からＭＫＰの配列を有するペプチドを分離精製する方法が挙げられる。
ここでは、乳蛋白質であるカゼインを原料として、加水分解酵素により加水分解して前記ペプチドＭＫＰを得る方法を例示する。 (1) Method obtained by hydrolysis As a method for obtaining peptide MKP, which is an active ingredient of the brain dysfunction-improving agent of the present invention, by hydrolysis, for example, casein, which is a milk protein, protein hydrolase, acid / Examples include a method of hydrolyzing with an alkali or the like, and separating and purifying a peptide having the MKP sequence from the obtained hydrolyzate.
Here, a method of obtaining the peptide MKP by hydrolysis with a hydrolase using casein, which is a milk protein, as a raw material is exemplified.

まず、カゼインを酵素で加水分解する前に、カゼイン蛋白質を水に溶解、分散又は懸濁させる。前記カゼイン蛋白質は、ＭＫＰを一次構造中に含む蛋白質であって、適宜加水分解酵素で消化したときに本発明の有効成分であるペプチドが生成可能なものである。なお、加水分解により本発明の脳機能障害改善剤の有効成分であるペプチドＭＫＰを得られるものであれば、原料に用いられる蛋白質として、動物由来、植物由来又は微生物由来のいずれかの蛋白質であってもよい。   First, before hydrolyzing casein with an enzyme, casein protein is dissolved, dispersed or suspended in water. The casein protein is a protein containing MKP in the primary structure, and is capable of producing a peptide that is an active ingredient of the present invention when appropriately digested with a hydrolase. As long as the peptide MKP, which is an active ingredient of the cerebral dysfunction-improving agent of the present invention, can be obtained by hydrolysis, any protein derived from animals, plants, or microorganisms may be used as a raw material. May be.

原料蛋白質の性状により処理方法は異なるが、原料蛋白質が可溶性の場合には、原料蛋白質を水又は温水に分散して溶解すればよく、また、難溶性の場合には熱水に蛋白質を混合撹拌し均質化すればよい。また、前記蛋白質を含有する溶液に、アルカリ剤又は酸剤を添加してｐＨを調整してもよい。当該ｐＨは、使用する加水分解酵素の至適ｐＨ又はその付近のｐＨに調整することが好ましい。   The treatment method varies depending on the properties of the raw protein, but if the raw protein is soluble, the raw protein may be dispersed and dissolved in water or warm water, and if it is poorly soluble, the protein is mixed and stirred in hot water. And then homogenize. Moreover, you may adjust pH by adding an alkali agent or an acid agent to the solution containing the said protein. It is preferable to adjust the pH to an optimum pH of the hydrolase used or a pH in the vicinity thereof.

次に、前記カゼイン蛋白質を含有する溶液に、所定量の加水分解酵素を加え、温度１０〜８５℃程度で０．１〜４８時間反応を行い、加水分解物を得る。
このとき、前記カゼイン蛋白質を含有する溶液に加水分解酵素を添加した後、当該溶液を、酵素の種類に応じて適当な温度、例えば３０〜６０℃、望ましくは４５〜５５℃に保持して、蛋白質の加水分解を開始することが望ましい。 Next, a predetermined amount of hydrolase is added to the solution containing the casein protein and reacted at a temperature of about 10 to 85 ° C. for 0.1 to 48 hours to obtain a hydrolyzate.
At this time, after adding the hydrolase to the solution containing the casein protein, the solution is maintained at an appropriate temperature according to the type of the enzyme, for example, 30 to 60 ° C., preferably 45 to 55 ° C., It is desirable to initiate protein hydrolysis.

前記加水分解酵素は、特に限定されるものではなく、前記原料蛋白質を加水分解して本発明の有効成分であるペプチドを生成させ得る酵素であることが好ましく、当該生成させ得る酵素として、具体的にはエンドペプチダーゼが好ましい。
前記エンドペプチダーゼとして、例えば、微生物由来や動物由来のものが挙げられる。具体的には、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属細菌由来のプロテアーゼ及び動物膵臓由来のプロテアーゼ等が挙げられる。前記プロテアーゼは市販されているものを利用することが可能である。市販品のプロテアーゼとして、例えば、ビオプラーゼｓｐ−２０（長瀬生化学工業社製）又はプロテアーゼＮ（天野エンザイム社製）等のバチルス属細菌由来のプロテアーゼ；ＰＴＮ６．０Ｓ（ノボザイムズ・ジャパン社製）等の動物膵臓由来のプロテアーゼ等が好ましいものとして例示できる。 The hydrolase is not particularly limited, and is preferably an enzyme that can hydrolyze the raw material protein to produce a peptide that is an active ingredient of the present invention. Specific examples of the enzyme that can be produced are as follows. Endopeptidase is preferred for.
Examples of the endopeptidase include those derived from microorganisms and animals. Specific examples include proteases derived from bacteria belonging to the genus Bacillus and proteases derived from animal pancreas. A commercially available protease can be used. Examples of commercially available proteases include proteases derived from Bacillus bacteria such as biopase sp-20 (manufactured by Nagase Seikagaku) or protease N (manufactured by Amano Enzyme); PTN 6.0S (manufactured by Novozymes Japan), and the like. Animal pancreatic proteases and the like can be exemplified as preferable ones.

例えば、バチルス属細菌由来のプロテアーゼを使用する際には、蛋白質１ｇ当たり１００〜５０００活性単位の割合で添加するのが望ましい。また、動物膵臓由来のプロテアーゼを使用する際には、蛋白質１ｇ当たり３０００〜８０００活性単位の割合で添加するのが望ましい。   For example, when using a protease derived from a genus Bacillus, it is desirable to add it at a rate of 100 to 5000 active units per gram of protein. In addition, when using a protease derived from animal pancreas, it is desirable to add it at a rate of 3000 to 8000 active units per gram of protein.

本発明において用いる加水分解酵素は、単独で又は２種以上組み合わせて使用してもよい。２種以上の酵素を用いる場合には、それぞれの酵素反応は同時に又は別々に行ってもよい。本発明において、ビオプラーゼｓｐ−２０、プロテアーゼＮ及びＰＴＮ６．０Ｓを併用するのが好ましく、これら３種の酵素を混合して使用することが特に好ましい。   The hydrolase used in the present invention may be used alone or in combination of two or more. When using 2 or more types of enzymes, you may perform each enzyme reaction simultaneously or separately. In the present invention, it is preferable to use biopase sp-20, protease N and PTN 6.0S in combination, and it is particularly preferable to use these three kinds of enzymes in combination.

加水分解の反応時間は、酵素反応の分解率をモニターしながら、好ましい分解率に達するまで反応を続ければよい。特に、原料に前記カゼイン蛋白質を用いた場合の分解率は２０〜３０％であることが好ましい。   The reaction time of hydrolysis may be continued until the desired decomposition rate is reached while monitoring the decomposition rate of the enzyme reaction. In particular, the degradation rate when the casein protein is used as a raw material is preferably 20 to 30%.

なお、原料蛋白質の分解率の算出方法は、ケルダール法（日本食品工業学会編、「食品分析法」、第１０２頁、株式会社光琳、昭和５９年）により試料の全窒素量を測定し、ホルモール滴定法（満田他編、「食品工学実験書」、上巻、第５４７ページ、養賢堂、１９７０年）により試料のホルモール態窒素量を測定し、これらの測定値から分解率を次式により算出する。
分解率（％）＝（ホルモール態窒素量／全窒素量）×１００ The method for calculating the decomposition rate of the raw material protein was determined by measuring the total amount of nitrogen in the sample by the Kjeldahl method (edited by the Japan Food Industry Association, “Food Analysis Method”, page 102, Korin Co., Ltd., 1984). Measure the amount of formol nitrogen in the sample by the titration method (Matsuda et al., “Food Engineering Experiments”, Volume 1, Page 547, Yokendo, 1970), and calculate the decomposition rate from these measurements using the following formula To do.
Decomposition rate (%) = (formol nitrogen amount / total nitrogen amount) × 100

加水分解酵素反応の停止は、例えば、加水分解溶液中の酵素の失活により行われ、常法による加熱失活処理により実施することができる。加熱失活処理の加熱温度と保持時間は、使用した酵素の熱安定性を考慮し、十分に失活できる条件を適宜設定することができる。
なお、前記の加熱失活処理は、加水分解物の殺菌処理として併用することも可能であり、常法による加熱処理方法等を用いることができる。
加熱処理時の加熱温度と保持時間は、充分に加熱・殺菌できる条件を適宜設定すればよく、例えば、８０〜１４０℃で２秒間〜３０分間加熱処理することができる。
加熱処理の方式としては、バッチ方式、連続方式のいずれの方式も可能であり、連続方式として、プレート熱交換方式、インフュージョン方式、インジェクション方式等の方式を用いることができる。 Termination of the hydrolase reaction is performed, for example, by deactivation of the enzyme in the hydrolyzed solution, and can be performed by heat deactivation treatment by a conventional method. The heating temperature and holding time of the heat deactivation treatment can be appropriately set under conditions that can be sufficiently deactivated in consideration of the thermal stability of the enzyme used.
In addition, the said heat deactivation process can also be used together as a sterilization process of a hydrolyzate, and the heat processing method by a conventional method etc. can be used.
What is necessary is just to set suitably the conditions which can fully heat and disinfect the heating temperature and holding time at the time of heat processing, for example, it can heat-process at 80-140 degreeC for 2 second-30 minutes.
As a heat treatment method, either a batch method or a continuous method can be used, and a plate heat exchange method, an infusion method, an injection method, or the like can be used as the continuous method.

加水分解酵素による反応後、加熱処理された加水分解物は、ペプチドＭＫＰを精製することを目的として、ペプチドの分離精製を行うことができる。例えば、イオン交換クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー等の各種クロマトグラフィー、溶媒沈殿、塩析、２種の液相間での分配等の方法を適宜組み合わせることによって、分離精製が可能である。
分離精製したペプチドの分画物は、本発明の有効成分であるペプチドＭＫＰが含まれているかどうかを確認することを目的として、質量分析法により、ペプチドＭＫＰの同定を行うことができる。 After the reaction with the hydrolase, the hydrolyzate subjected to the heat treatment can be subjected to separation and purification of the peptide for the purpose of purifying the peptide MKP. For example, various methods such as ion exchange chromatography, adsorption chromatography, reverse phase chromatography, partition chromatography, gel filtration chromatography, solvent precipitation, salting out, and partitioning between two liquid phases are used as appropriate. Separation and purification are possible by combining them.
The peptide MKP can be identified by mass spectrometry for the purpose of confirming whether or not the peptide MKP, which is the active ingredient of the present invention, is contained in the separated and purified peptide fraction.

前記のようにして得られたペプチドＭＫＰは、ペプチド溶液のまま使用することもでき、また、必要に応じて、該溶液を公知の方法により、濃縮した濃縮液として使用することもできる。また、該濃縮液を公知の方法により乾燥し、粉末にして使用することもできる。   The peptide MKP obtained as described above can be used as it is as a peptide solution, and if necessary, the solution can be used as a concentrated solution by a known method. Further, the concentrated liquid can be dried by a known method and used as a powder.

（２）化学合成により得る方法
また、本発明の有効成分であるペプチドＭＫＰは、化学合成によっても製造することができる。
本発明の有効成分であるペプチドＭＫＰの化学合成は、オリゴペプチドの合成に通常用いられている液相法または固相法によって行うことができる。合成されたペプチドは必要に応じて脱保護され、未反応試薬や副生物等を除去して、本発明の有効成分であるペプチドＭＫＰを単離することが可能である。
このようなペプチドの合成は、市販のペプチド合成装置を用いて行うことができる。 (2) Method obtained by chemical synthesis The peptide MKP which is an active ingredient of the present invention can also be produced by chemical synthesis.
The chemical synthesis of peptide MKP, which is an active ingredient of the present invention, can be performed by a liquid phase method or a solid phase method usually used for the synthesis of oligopeptides. The synthesized peptide is deprotected as necessary, and unreacted reagents and by-products can be removed to isolate the peptide MKP which is an active ingredient of the present invention.
Such peptide synthesis can be performed using a commercially available peptide synthesizer.

＜脳機能障害改善剤＞
前記の通り、本発明の脳機能障害改善剤の有効成分であるペプチドＭＫＰは、乳蛋白質であるカゼインの加水分解物から得られることから、腸管からの消化吸収性に優れている。さらに、風味がほとんど無味無臭であって、かつ、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害の改善効果を有するため、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害及びアルツハイマー型認知症等の改善のための医薬品として用いることができる。 <Brain dysfunction-improving agent>
As described above, peptide MKP, which is an active ingredient of the brain dysfunction-improving agent of the present invention, is obtained from a hydrolyzate of casein, which is a milk protein, and thus has excellent digestibility and absorption from the intestinal tract. Furthermore, the flavor is almost tasteless and odorless, and has the effect of improving brain dysfunction caused by amyloid / beta protein, thus improving brain dysfunction caused by amyloid / beta protein and Alzheimer-type dementia, etc. It can be used as a pharmaceutical product.

また、前記の通り、本発明の脳機能障害改善剤の有効成分であるペプチドＭＫＰは、投与対象の血圧を正常に保つ作用を有する。したがって、高齢者であり、低血圧等による不安定な循環動態に起因してアルツハイマー病の病態が悪化している対象、特に高血圧症を併発していない対象に発症するアルツハイマー型認知症に対して、必要以上に血圧変動を伴わずに改善効果が期待されるものである。
したがって、従来の降圧作用を伴うアルツハイマー型認知症の治療と比較して、投与対象者の血圧を過度に低下させることなく、アルツハイマー型認知症を始めとしたアミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害に広く用いることができる。 Further, as described above, peptide MKP, which is an active ingredient of the cerebral dysfunction improving agent of the present invention, has an action of maintaining the blood pressure of the administration subject to normal. Therefore, for Alzheimer-type dementia that develops in subjects who are elderly and whose disease state of Alzheimer's disease has deteriorated due to unstable circulatory dynamics due to hypotension, etc., particularly those who do not have hypertension The improvement effect is expected without accompanying blood pressure fluctuation more than necessary.
Therefore, compared with conventional treatment of Alzheimer type dementia with antihypertensive effect, brain function disorder caused by amyloid beta protein such as Alzheimer type dementia without excessively lowering the blood pressure of the subject Can be widely used.

ここで、本明細書において、「高血圧症」とは、診察室血圧において収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上、又は、拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上である状態をいう（高血圧治療ガイドライン２００９参照）。また、「高血圧症ではない」とは、「血圧が正常である」と同義であり、診察室血圧において収縮期血圧が１３９ｍｍＨｇ以下、かつ、拡張期血圧が８９ｍｍＨｇ以下の状態をいう。
なお、前記「診察室血圧」とは、前記「高血圧治療ガイドライン２００９」において示されている「診察室での血圧測定の指針」に基づいて測定された値を意味する。
さらに、本明細書において、「高齢者」との用語は、６５歳以上の対象を示す。 Here, in the present specification, “hypertension” refers to a state in which systolic blood pressure is 140 mmHg or more or diastolic blood pressure is 90 mmHg or more in the examination room blood pressure (see hypertension treatment guideline 2009). Further, “not hypertension” is synonymous with “normal blood pressure”, and refers to a state in which systolic blood pressure is 139 mmHg or less and diastolic blood pressure is 89 mmHg or less in the examination room blood pressure.
The “examination room blood pressure” means a value measured based on the “guideline for blood pressure measurement in the examination room” shown in the “hypertension treatment guideline 2009”.
Further, in this specification, the term “elderly person” refers to a subject 65 years of age or older.

本発明の脳機能障害改善剤は、食品として長年使用されてきた乳由来の成分を有効成分とするため、種々のアミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害を罹患した患者に対しても安心して投与できる可能性が高い。また、長期間、連続的に投与しても副作用を心配する必要性も少ない。さらに、他の薬剤との併用においても安全性が高い。   The brain dysfunction-improving agent of the present invention has an ingredient derived from milk, which has been used for many years as a food, as an active ingredient, so it can be used with peace of mind for patients suffering from cerebral dysfunction caused by various amyloid / beta proteins. The possibility of administration is high. Moreover, there is little need to worry about side effects even if administered continuously for a long period of time. Furthermore, it is highly safe when used in combination with other drugs.

本発明の脳機能障害改善剤を医薬品に利用する場合、該医薬品は、経口投与及び非経口投与のいずれでもよいが、経口投与が好ましい。非経口投与としては、例えば、静注、直腸投与、吸入等が挙げられる。経口投与の剤形としては、例えば、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、顆粒剤、散剤等が挙げられる。   When the cerebral dysfunction-improving agent of the present invention is used as a pharmaceutical product, the pharmaceutical product may be administered orally or parenterally, but oral administration is preferred. Examples of parenteral administration include intravenous injection, rectal administration, and inhalation. Examples of the dosage form for oral administration include tablets, capsules, troches, syrups, granules, powders and the like.

また、製剤化に際しては、本発明の有効成分であるペプチドＭＫＰの他に、通常製剤化に用いられている賦形剤、ｐＨ調整剤、着色剤、矯味剤等の成分を用いることができる。
また、本発明の脳機能障害改善剤を含有しているものであれば、公知の又は将来的に見出される脳機能障害に関連する疾患の改善効果を有する成分を、本発明の脳機能障害改善剤と併用することもできる。 In formulation, in addition to peptide MKP, which is the active ingredient of the present invention, components such as excipients, pH adjusters, colorants, and corrigents that are usually used for formulation can be used.
Moreover, if it contains the brain dysfunction-improving agent of the present invention, a known or future-found component having an effect of improving a disease related to cerebral dysfunction is added to improve the brain dysfunction of the present invention. It can also be used in combination with an agent.

さらに、投与方法に応じて、適宜所望の剤形に製剤化することができる。例えば、経口投与の場合、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の固形製剤；溶液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することができる。また、非経口投与の場合、座剤、噴霧剤、軟膏剤、貼付剤、注射剤等に製剤化することができる。   Furthermore, depending on the administration method, it can be appropriately formulated into a desired dosage form. For example, in the case of oral administration, it can be formulated into solid preparations such as powders, granules, tablets and capsules; liquid preparations such as solutions, syrups, suspensions and emulsions. For parenteral administration, it can be formulated into suppositories, sprays, ointments, patches, injections and the like.

加えて、製剤化は剤形に応じて適宜公知の方法により実施できる。製剤化に際しては、有効成分であるペプチドＭＫＰのみを製剤化してもよく、適宜、製剤担体を配合して製剤化してもよい。   In addition, formulation can be appropriately performed by a known method according to the dosage form. In the formulation, only the peptide MKP which is an active ingredient may be formulated, or a formulation carrier may be blended as appropriate.

製剤担体を配合する場合、脳機能障害改善剤の有効成分であるペプチドＭＫＰの含有量は特に限定されず、剤形に合わせて一日あたりの摂取量又は投与量に基づいて適宜選択することができる。
また、当該ペプチドＭＫＰの一日の摂取量又は投与量は、０．１ｍｇ／日〜１ｇ／日の範囲であることが好ましい。なお、当該ペプチドＭＫＰの摂取又は投与は、当該摂取量又は投与量が得られる範囲で、１日複数回に分けて行ってもよい。 When a pharmaceutical carrier is blended, the content of peptide MKP, which is an active ingredient of an agent for improving brain dysfunction, is not particularly limited, and may be appropriately selected based on the daily intake or dose according to the dosage form. it can.
The daily intake or dose of the peptide MKP is preferably in the range of 0.1 mg / day to 1 g / day. In addition, the intake or administration of the peptide MKP may be performed in a plurality of times a day within a range in which the intake or dose can be obtained.

また、前記製剤担体としては、剤形に応じて、各種有機又は無機の担体を用いることができる。固形製剤の場合の担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、安定剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。   In addition, as the preparation carrier, various organic or inorganic carriers can be used depending on the dosage form. Examples of the carrier in the case of a solid preparation include excipients, binders, disintegrants, lubricants, stabilizers, and flavoring agents.

賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の珪酸塩誘導体；リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体等が挙げられる。   Examples of the excipient include sugar derivatives such as lactose, sucrose, glucose, mannitol and sorbit; starch derivatives such as corn starch, potato starch, α-starch, dextrin and carboxymethyl starch; crystalline cellulose, hydroxypropyl cellulose, Cellulose derivatives such as hydroxypropylmethylcellulose, carboxymethylcellulose, carboxymethylcellulose calcium; gum arabic; dextran; pullulan; silicate derivatives such as light anhydrous silicic acid, synthetic aluminum silicate, magnesium magnesium magnesium silicate; phosphate derivatives such as calcium phosphate; And carbonate derivatives such as calcium; sulfate derivatives such as calcium sulfate and the like.

結合剤としては、例えば、上記賦形剤の他、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等が挙げられる。   Examples of the binder include gelatin, polyvinyl pyrrolidone, macrogol and the like in addition to the above excipients.

崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられる。   Examples of the disintegrant include, in addition to the above excipients, chemically modified starch or cellulose derivatives such as croscarmellose sodium, carboxymethyl starch sodium, and crosslinked polyvinylpyrrolidone.

滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ピーガム、ゲイロウ等のワックス類；硼酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸塩類；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物等の珪酸類；デンプン誘導体等が挙げられる。   As the lubricant, for example, talc; stearic acid; stearic acid metal salts such as calcium stearate and magnesium stearate; colloidal silica; waxes such as pea gum and geirow; boric acid; glycol; carboxylic acids such as fumaric acid and adipic acid Carboxylic acid sodium salts such as sodium benzoate; sulfates such as sodium sulfate; leucine; lauryl sulfates such as sodium lauryl sulfate and magnesium lauryl sulfate; silicic acids such as silicic anhydride and silicic acid hydrate; starch derivatives and the like It is done.

安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられる。   Examples of the stabilizer include paraoxybenzoates such as methyl paraben and propyl paraben; alcohols such as chlorobutanol, benzyl alcohol and phenylethyl alcohol; benzalkonium chloride; acetic anhydride; sorbic acid and the like.

矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられる。   Examples of the flavoring agent include sweeteners, acidulants, and fragrances.

なお、経口投与用の液剤の場合に使用する担体としては、水等の溶剤、矯味矯臭剤等が挙げられる。   In addition, as a carrier used in the case of a liquid for oral administration, a solvent such as water, a flavoring agent and the like can be mentioned.

＜飲食品、飼料＞
前記の通り、本発明の脳機能障害改善剤の有効成分であるペプチドＭＫＰは、腸管からの消化吸収性に優れている。さらに、風味がほとんど無味無臭であって、かつ、後述するようにアミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害の改善・予防効果を有するため、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害及びアルツハイマー型認知症等の疾患の改善・予防用の飲食品、飼料等の有効成分としてこれらに配合して使用することができる。 <Food and drink, feed>
As described above, peptide MKP, which is an active ingredient of the cerebral dysfunction improving agent of the present invention, is excellent in digestive absorption from the intestinal tract. Furthermore, the flavor is almost tasteless and odorless, and has the effect of improving / preventing brain dysfunction caused by amyloid / beta protein, as described later, so that brain dysfunction caused by amyloid / beta protein and Alzheimer-type cognition It can be used in combination with these as active ingredients such as foods and drinks for improving and preventing diseases such as infectious diseases and feeds.

（１）飲食品
本発明の脳機能障害改善剤を飲食品に利用する場合、公知の飲食品に添加して脳機能障害改善・予防効果を有する飲食品を調製することができる。また、飲食品の原料中に混合してアミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害の改善・予防効果を有する新たな飲食品を製造することもできる。 (1) Food / beverage products When the cerebral dysfunction improving agent of the present invention is used in food / beverage products, it can be added to known food / beverage products to prepare food / beverage products having an effect of improving / preventing brain dysfunction. Moreover, it can mix in the raw material of food / beverage products, and can also manufacture the new food / beverage products which have the improvement and prevention effect of the brain dysfunction resulting from an amyloid beta protein.

前記飲食品は、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食、飼料（ペット用を含む）等のほか、例えば、小麦粉製品、即席食品、農産加工品、水産加工品、畜産加工品、乳・乳製品、油脂類、基礎調味料、複合調味料・食品類、冷凍食品、菓子、飲料、これら以外の市販品等が挙げられる。   The foods and drinks may be in the form of liquids, pastes, solids, powders, etc., in addition to tablet confections, liquid foods, feeds (including for pets), etc., for example, flour products, instant foods, processed agricultural products, marine products Processed products, processed livestock products, milk / dairy products, fats and oils, basic seasonings, compound seasonings / foods, frozen foods, confectionery, beverages, commercial products other than these.

小麦粉製品としては、例えば、パン、マカロニ、スパゲッティ、めん類、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等が挙げられる。
即席食品類としては、例えば、即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等が挙げられる。
農産加工品としては、例えば、農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル（穀物加工品）等が挙げられる。
水産加工品としては、例えば、水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等が挙げられる。
畜産加工品としては、例えば、畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等が挙げられる。
乳・乳製品としては、例えば、加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等が挙げられる。
油脂類としては、例えば、バター、マーガリン類、植物油等が挙げられる。
基礎調味料としては、例えば、しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等が挙げられ、前記複合調味料・食品類として、調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等が挙げられる。
冷凍食品としては、例えば、素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等が挙げられる。
菓子類としては、例えば、キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、その他の菓子等が挙げられる。
飲料類としては、例えば、炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等が挙げられる。
上記以外の市販食品としては、例えば、ベビーフード、ふりかけ、お茶漬けのり等が挙げられる。 Examples of flour products include bread, macaroni, spaghetti, noodles, cake mix, fried flour, bread crumbs and the like.
Examples of instant foods include instant noodles, cup noodles, retort / cooked food, cooking canned food, microwave food, instant soup / stew, instant miso soup / soup, canned soup, freeze-dried food, other instant foods, etc. It is done.
Examples of processed agricultural products include canned agricultural products, canned fruits, jams and marmalades, pickles, boiled beans, dried agricultural products, cereals (cereal processed products), and the like.
Examples of processed fishery products include canned fishery products, fish hams and sausages, marine products, marine delicacies, and tsukudani.
Examples of livestock processed products include canned livestock, pastes, livestock meat ham, sausage and the like.
Examples of milk / dairy products include processed milk, milk beverages, yogurts, lactic acid bacteria beverages, cheese, ice cream, prepared powdered milk, cream, and other dairy products.
Examples of the fats and oils include butter, margarine, vegetable oil and the like.
Basic seasonings include, for example, soy sauce, miso, sauces, tomato processed seasonings, mirins, vinegars, etc., and the above mixed seasonings and foods include cooking mix, curry ingredients, sauces, Examples include dressings, noodle soups, spices, and other complex seasonings.
Examples of the frozen food include raw material frozen food, semi-cooked frozen food, cooked frozen food, and the like.
Examples of the confectionery include caramel, candy, chewing gum, chocolate, cookie, biscuit, cake, pie, snack, cracker, Japanese confectionery, rice confectionery, bean confectionery, dessert confectionery, and other confectionery.
Examples of beverages include carbonated beverages, natural fruit juices, fruit juice drinks, soft drinks with fruit juice, fruit drinks, fruit drinks with fruits, vegetable drinks, soy milk, soy milk drinks, coffee drinks, tea drinks, powdered drinks, concentrated drinks Sports drinks, nutritional drinks, alcoholic drinks, other taste drinks, and the like.
Examples of commercially available foods other than the above include baby food, sprinkles, and green tea paste.

また、本発明で定義される飲食品は、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害の改善用又は予防用との保健用途が表示された飲食品として提供・販売されることが可能である。
「表示」行為には、需要者に対して前記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、前記用途を想起・類推させうるような表現であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て本技術の「表示」行為に該当する。 In addition, the food and drink defined in the present invention can be provided and sold as a food and drink displaying the health use for improving or preventing brain dysfunction caused by amyloid / beta protein.
The “display” act includes all acts for informing the consumer of the use, and if the expression can remind the user of the use, the purpose of the display, the content of the display, the display Regardless of the target object / medium, etc., all fall under the “display” act of this technology.

また、「表示」は、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により行われることが好ましい。具体的には、飲食品に係る商品又は商品の包装に前記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引き渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為等が挙げられる。   Moreover, it is preferable that the “display” is performed by an expression that allows the consumer to directly recognize the above-described use. Specifically, it is the act of transferring, displaying, importing, displaying, or importing products that are related to food or drinks or products that describe the use, on advertisements, price lists, or transaction documents. For example, an act of describing and displaying the above uses or distributing them, or describing the above uses in information including the contents and providing them by an electromagnetic (Internet or the like) method can be given.

一方、表示内容としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示等）であることが好ましい。また、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等へ付することが好ましい。   On the other hand, the display content is preferably a display approved by the government or the like (for example, a display that is approved based on various systems determined by the government and performed in a mode based on such approval). Moreover, it is preferable to attach such display contents to advertising materials at sales sites such as packaging, containers, catalogs, pamphlets, POPs, and other documents.

また、「表示」には、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、医薬用部外品等としての表示も挙げられる。この中でも特に、消費者庁によって認可される表示、例えば、特定保健用食品制度、これに類似する制度にて認可される表示等が挙げられる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク減少表示等を挙げることができ、より具体的には、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）及びこれに類する表示が典型的な例である。   “Indication” also includes indication as health food, functional food, enteral nutrition food, special purpose food, health functional food, food for specified health, functional nutrition food, quasi drug, etc. Among these, in particular, there are indications approved by the Consumer Affairs Agency, for example, indications approved under the food system for specific health use, a similar system, and the like. Examples of the latter can include indications for food for specified health use, indications for conditional health foods, indications that affect the structure and function of the body, indications for reducing disease risk, etc. Specifically, indications as food for specified health (especially indications for health use) and similar indications stipulated in the Enforcement Regulations of the Health Promotion Act (Ministry of Health, Labor and Welfare Ordinance No. 86 of April 30, 2003) Is a typical example.

なお、飲食品を製造する際に添加する本発明の脳機能障害改善剤の有効成分であるペプチドＭＫＰの含有量は特に限定されず、一日あたりの摂取量に基づいて適宜選択することができる。なお、当該ペプチドＭＫＰの一日の摂取量は、０．１ｍｇ／日〜１ｇ／日の範囲であることが好ましい。   In addition, content of peptide MKP which is an active ingredient of the brain function disorder improving agent of this invention added when manufacturing food / beverage products is not specifically limited, It can select suitably based on the intake per day. . The daily intake of the peptide MKP is preferably in the range of 0.1 mg / day to 1 g / day.

（２）飼料
本発明の脳機能障害改善剤を飼料に利用する場合、公知の飼料に添加して脳機能障害の改善・予防効果を有する飼料を調製することもできるし、飼料の原料中混合して脳機能障害の改善・予防効果を有する新たな飼料を製造することもできる。 (2) Feed When the cerebral dysfunction improving agent of the present invention is used in feed, it can be added to a known feed to prepare a feed having an effect of improving or preventing brain dysfunction, and mixing in the feed raw material Thus, a new feed having an effect of improving / preventing brain dysfunction can also be produced.

前記飼料の原料としては、例えば、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦等の穀類；ふすま、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；脱脂粉乳、ホエー、魚粉、骨粉等の動物性飼料類；ビール酵母等の酵母類；リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油脂類；アミノ酸類；糖類等が挙げられる。また、前記飼料の形態としては、例えば、愛玩動物用飼料（ペットフード等）、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。   Examples of the raw material of the feed include cereals such as corn, wheat, barley, and rye; bran such as bran, wheat straw, rice bran, and defatted rice bran; and manufactured porridges such as corn gluten meal and corn jam meal; Animal feeds such as whey, fish meal and bone meal; yeasts such as beer yeast; mineral feeds such as calcium phosphate and calcium carbonate; fats and oils; amino acids; In addition, examples of the form of the feed include pet animal feed (pet food, etc.), livestock feed, fish feed, and the like.

なお、飼料を製造する際に添加する本発明の脳機能障害改善剤の有効成分であるペプチドＭＫＰの含有量は特に限定されず、一日あたりの摂餌量に基づいて適宜選択することができる。なお、当該ペプチドＭＫＰの一日の摂餌量、１μｇ／ｋｇ体重／日〜１ｇ／ｋｇ体重／日の範囲であることが好ましい。   The content of peptide MKP, which is an active ingredient of the brain dysfunction-improving agent of the present invention to be added when producing feed, is not particularly limited, and can be appropriately selected based on the amount of food consumed per day. . In addition, the daily food intake of the peptide MKP is preferably in the range of 1 μg / kg body weight / day to 1 g / kg body weight / day.

以下、実施例に基づいて本発明を更に詳細に説明する。なお、以下に説明する実施例は、本発明の代表的な実施例の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。   Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on examples. In addition, the Example demonstrated below shows an example of the typical Example of this invention, and, thereby, the range of this invention is not interpreted narrowly.

［製造例１］カゼインの酵素分解によるペプチドＭＫＰの製造
（１）カゼインの酵素分解
市販のカゼイン（フォンテラ社製）１００ｇに水９００ｇを加えて分散させ、水酸化ナトリウムを添加して溶液のｐＨを７．０に調整して、カゼインを完全に溶解した。溶解後のカゼイン水溶液の濃度は、約１０質量％であった。該カゼイン水溶液を８５℃で１０分間加熱殺菌し、５０℃に温度調整し、水酸化ナトリウムを添加してｐＨを９．５に調整した。
その後、ｐＨ調整したカゼイン水溶液にビオプラーゼｓｐ−２０（長瀬生化学工業社製）１００，８００活性単位（蛋白質１ｇ当り１，２００活性単位）、プロテアーゼＮ（天野エンザイム社製）１６８，０００活性単位（蛋白質１ｇ当り２，０００活性単位）、及びＰＴＮ６．０Ｓ（ノボザイムズ・ジャパン社製）５８８，０００活性単位（蛋白質１ｇ当り７，０００活性単位）を添加して、加水分解反応を開始させた。カゼインの分解率が２４．１％に達した時点で、８０℃で６分間加熱して酵素を失活させて酵素反応を停止し、１０℃に冷却した。この加水分解液を分画分子量３，０００の限外ろ過膜（旭化成社製）で限外ろ過し、濃縮後に凍結乾燥し、カゼイン加水分解物の凍結乾燥粉末８５ｇを得た。 [Production Example 1] Production of Peptide MKP by Enzymatic Degradation of Casein (1) Enzymatic Degradation of Casein 900 g of water was added to 100 g of commercially available casein (manufactured by Fontera) and dispersed, and sodium hydroxide was added to adjust the pH of the solution. The casein was completely dissolved by adjusting to 7.0. The density | concentration of the casein aqueous solution after melt | dissolution was about 10 mass%. The casein aqueous solution was sterilized by heating at 85 ° C. for 10 minutes, adjusted to a temperature of 50 ° C., and sodium hydroxide was added to adjust the pH to 9.5.
Then, pH-adjusted casein aqueous solution was treated with biorase sp-20 (Nagase Seikagaku Co., Ltd.) 100,800 active units (1,200 active units per gram of protein), protease N (Amano Enzyme Co.) 168,000 active units ( 2,000 active units per gram of protein) and 588,000 active units of PTN 6.0S (manufactured by Novozymes Japan) (7,000 active units per gram of protein) were added to initiate the hydrolysis reaction. When the degradation rate of casein reached 24.1%, the enzyme reaction was stopped by heating at 80 ° C. for 6 minutes to deactivate the enzyme, and then cooled to 10 ° C. This hydrolyzed solution was ultrafiltered with an ultrafiltration membrane (manufactured by Asahi Kasei Co., Ltd.) having a molecular weight cut off of 3,000, concentrated and freeze-dried to obtain 85 g of freeze-dried powder of casein hydrolyzate.

（２）ＨＰＬＣによるペプチドの精製
逆相ＨＰＬＣで上記カゼイン加水分解物の分離精製を行った。このＨＰＬＣ条件は下記ＨＰＬＣ条件１に示した。
〔ＨＰＬＣ条件１〕
カラム ：カプセルパックＣ１８（ＵＧ１２０、粒子径５μｍ） ２０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ（株式会社資生堂）
検 出 ：ＵＶ ２１５ｎｍ
流 速 ：１６ｍｌ／分
溶離液Ａ：０．０５％ ＴＦＡを含む１％アセトニトリル水溶液
溶離液Ｂ：０．０５％ ＴＦＡを含む２５％アセトニトリル水溶液 (2) Purification of peptide by HPLC The casein hydrolyzate was separated and purified by reverse phase HPLC. The HPLC conditions are shown in the following HPLC condition 1.
[HPLC condition 1]
Column: Capsule pack C18 (UG120, particle size 5 μm) 20 mmI. D. × 250mm (Shiseido Co., Ltd.)
Detection: UV 215nm
Flow rate: 16 ml / min Eluent A: 1% acetonitrile aqueous solution containing 0.05% TFA Eluent B: 25% acetonitrile aqueous solution containing 0.05% TFA

溶離液の送液は、溶離液Ａの割合１００％から、４０分後に溶離液Ｂの割合が１００％になるように直線的に濃度勾配をかけたグラジエント法で行った。得られた溶出画分のそれぞれについて、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社のプロテイン・シーケンサー（Ｍｏｄｅｌ−４７３Ａ）を用いてアミノ酸配列を同定したところ、リテンションタイム２２分に溶出された画分が、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏの配列を持つペプチドＭＫＰであることが確認された。このペプチドを精製するため、さらにＨＰＬＣで精製した。
このときの条件を下記ＨＰＬＣ条件２に示した。
〔ＨＰＬＣ条件２〕
カラム ：カプセルパックＣ１８（ＵＧ３００、粒子径５μｍ） ２．０ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ（株式会社資生堂）
検 出 ：ＵＶ ２１５ｎｍ
流 速 ：０．２ｍｌ／分
溶離液Ａ：０．０５％ ＴＦＡを含む１％アセトニトリル水溶液
溶離液Ｂ：０．０５％ ＴＦＡを含む１０％アセトニトリル水溶液 The eluent was fed by a gradient method in which a concentration gradient was linearly applied so that the ratio of the eluent B became 100% after 40 minutes from the ratio of the eluent A of 100%. For each of the obtained eluted fractions, the amino acid sequence was identified using an Applied Biosystem protein sequencer (Model-473A). The fraction eluted at a retention time of 22 minutes was found to be Met-Lys-Pro. It was confirmed to be a peptide MKP having a sequence. In order to purify this peptide, it was further purified by HPLC.
The conditions at this time are shown in the following HPLC condition 2.
[HPLC condition 2]
Column: Capsule pack C18 (UG300, particle size 5 μm) 2.0 mmI. D. × 250mm (Shiseido Co., Ltd.)
Detection: UV 215nm
Flow rate: 0.2 ml / min Eluent A: 1% acetonitrile aqueous solution containing 0.05% TFA Eluent B: 10% acetonitrile aqueous solution containing 0.05% TFA

溶離液の送液は、溶離液Ａの割合１００％から１５分後に溶離液Ｂの割合１００％になるように直線的に濃度勾配をかけたグラジエント法で行った。得られた溶出画分のそれぞれについて、前記と同様にアミノ酸配列を同定したところ、リテンションタイム１３分のピークに溶出された画分が、ペプチドＭＫＰであることが確認された。
なお、前記カゼイン加水分解物の凍結乾燥粉末８５ｇ中に、ペプチドＭＫＰは、４２．５ｍｇ含まれていた。 The eluent was fed by a gradient method in which a concentration gradient was linearly applied so that the ratio of the eluent A was 100% to 15% after 15 minutes. For each of the obtained eluted fractions, the amino acid sequence was identified in the same manner as described above, and it was confirmed that the fraction eluted in the peak at the retention time of 13 minutes was peptide MKP.
In addition, 42.5 mg of peptide MKP was contained in 85 g of the freeze-dried powder of the casein hydrolyzate.

［製造例２］ペプチドＭＫＰの化学合成
ペプチドシンセサイザー（Ｍｏｄｅｌ ４３３Ａ型、アプライドバイオシステムズ社）を使用し、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｍｅｔ（アプライドバイオシステムズ社）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（アプライドバイオシステムズ社）、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＴｒｔＡ−ＰＥＧ Ｒｅｓｉｎ（渡辺化学工業株式会社製）を原料に用いて、固相合成法によりトリペプチドＭｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏを合成した。合成操作はアプライドバイオシステムズ社のマニュアルに従って行った。その後、合成物を脱保護した。 [Production Example 2] Chemical synthesis of peptide MKP Using a peptide synthesizer (Model 433A, Applied Biosystems), Fmoc-L-Met (Applied Biosystems), Fmoc-Lys (Boc) (Applied Biosystems) Fmoc-Pro-TrtA-PEG Resin (Watanabe Chemical Co., Ltd.) was used as a raw material, and the tripeptide Met-Lys-Pro was synthesized by a solid phase synthesis method. The synthesis operation was performed according to the manual of Applied Biosystems. The composite was then deprotected.

このペプチドは、製造例１のＨＰＬＣ条件１の条件でＨＰＬＣ精製した。得られたトリペプチドは、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社のプロテイン・シーケンサー（Ｍｏｄｅｌ−４７３Ａ）により、Ｈ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−ＯＨの構造を持つことがわかった。また、サーモクエスト社製質量分析計ＬＣＱにより分子量（Ｍ）は３７４．２と測定された。   This peptide was purified by HPLC under the conditions of HPLC condition 1 of Production Example 1. The obtained tripeptide was found to have a structure of H-Met-Lys-Pro-OH by a protein sequencer (Model-473A) manufactured by Applied Biosystem. Moreover, molecular weight (M) was measured with the mass spectrometer LCQ by Thermoquest Co., Ltd. as 374.2.

［試験例１］アミロイド・ベータ蛋白質投与マウス（Aβ injection model マウス）を用いたＹ迷路試験
次に、前記製造例２にて合成したペプチドＭＫＰを用いて、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害に対する改善効果を確認するための試験を行った。
アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害に対する効果を検証するためには、その中核症状である記憶障害（記憶力、特に記銘力の低下）を適切に惹起させたモデルを用いて、学習・記憶の状態を評価することが必要である。本試験例においては、アミロイド・ベータ蛋白質（以下、「Ａβ」と略記することがある）を投与したAβ injection model マウスを用いてＹ迷路試験を実施することで、ペプチドＭＫＰの効果を評価した。 [Test Example 1] Y-maze test using amyloid / beta protein-administered mice (Aβ injection model mice) Next, using the peptide MKP synthesized in Production Example 2, brain dysfunction caused by amyloid / beta protein A test was conducted to confirm the improvement effect on.
In order to verify the effects on cerebral dysfunction caused by amyloid-beta protein, learning / memory is performed using a model that appropriately induces memory impairment (deterioration of memory, especially memory), which is its core symptom. It is necessary to evaluate the state of In this test example, the effect of peptide MKP was evaluated by conducting a Y maze test using Aβ injection model mice administered with amyloid / beta protein (hereinafter sometimes abbreviated as “Aβ”).

＜Aβ injection model マウス＞
本試験例にて用いたAβ injection model マウスは、アミロイド・ベータ蛋白質をマウス側脳室内に投与することにより、記憶障害を惹起させたモデルマウスである。
マウスやラットの脳室内にアミロイド・ベータ蛋白質を連続投与すると、海馬アセチルコリン遊離量が低下し、八方向放射状迷路課題における空間記憶障害を発現することが報告されている（参考文献１：Iwasaki K. et al, Neurotoxicity Research, 2004, 6, pp.299-309、参考文献２：Walsh D. M. et al, Nature, 2002, 416, pp.535-539）。
また、マウスの脳室内にアミロイド・ベータ蛋白質を単回投与すると、Ｙ迷路試験における短期記憶障害や受動回避試験における長期記憶障害を発現することが報告されている（参考文献３：Lu P, et al, British Journal of Pharmacology, 2010, 157, pp.1270-1277、参考文献４：Lu P. et al, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2009, 331, 319-326、参考文献５：Hiramatsu M. et al, British Journal of Pharmacology, 2010, 161, pp.1899-1912、参考文献６：Mamiya T. et al, Biological and Pharmaceutical Bulletin, 2004, 27, 1041-1045）。
したがって、脳室内にアミロイド・ベータ蛋白質を投与した前記Aβ injection model マウスは、アミロイド・ベータ蛋白質に起因するアルツハイマー型認知症等の脳機能障害に対する効果を確認するために有用なモデルマウスである。 <Aβ injection model mouse>
The Aβ injection model mouse used in this test example is a model mouse in which memory impairment is induced by administering amyloid beta protein into the mouse lateral ventricle.
It has been reported that continuous administration of amyloid beta protein into the ventricles of mice and rats reduces hippocampal acetylcholine release and causes spatial memory impairment in the eight-way radial maze task (Reference 1: Iwasaki K.). et al, Neurotoxicity Research, 2004, 6, pp. 299-309, Reference 2: Walsh DM et al, Nature, 2002, 416, pp. 535-539).
In addition, it has been reported that single administration of amyloid / beta protein into the ventricle of mice develops short-term memory impairment in Y-maze test and long-term memory impairment in passive avoidance test (Reference 3: Lu P, et al, British Journal of Pharmacology, 2010, 157, pp. 1270-1277, Reference 4: Lu P. et al, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 2009, 331, 319-326, Reference 5: Hiramatsu M. et al, British Journal of Pharmacology, 2010, 161, pp.1899-1912, Reference 6: Mamiya T. et al, Biological and Pharmaceutical Bulletin, 2004, 27, 1041-1045).
Therefore, the Aβ injection model mouse in which amyloid / beta protein is administered into the ventricle is a useful model mouse for confirming the effect on brain dysfunction such as Alzheimer-type dementia caused by amyloid / beta protein.

Aβ injection model マウスは、以下の手順にて作成した。Ｓｌｃ：ｄｄＹマウス（日本エスエルシー株式会社製）に、ペントバルビタールナトリウム４０ｍｇ／ｋｇ体重の容量を腹腔内投与し、麻酔した。麻酔後、頭皮に塩酸レボブピバカインを適量皮下投与し、動物の頭頂部の毛を刈り、頭部を脳定位固定装置に固定した。頭皮をヨードチンキで消毒後に切開して、頭蓋骨を露出させた。歯科用ドリルを用いて ブレグマ（ｂｒｅｇｍａ）より、１ｍｍ右側、０．２ｍｍ後方の頭蓋骨にステンレスパイプ刺入用の穴を開け、骨表面から２．５ｍｍの深さまで外径０．５ｍｍのシリコンチューブ及びマイクロシリンジに接続されたステンレスパイプを垂直に刺入した。   Aβ injection model mice were prepared by the following procedure. A Slc: ddY mouse (manufactured by Nippon SLC Co., Ltd.) was anesthetized by intraperitoneal administration of a pentobarbital sodium 40 mg / kg body weight. After anesthesia, an appropriate amount of levobupivacaine hydrochloride was subcutaneously administered to the scalp, the hair at the top of the animal was shaved, and the head was fixed to a stereotaxic apparatus. The scalp was disinfected with iodine tincture and then dissected to expose the skull. Using a dental drill, drill a stainless steel pipe into the skull 1 mm to the right and 0.2 mm behind the bregma, using a silicone tube with an outer diameter of 0.5 mm to a depth of 2.5 mm from the bone surface and A stainless steel pipe connected to the microsyringe was inserted vertically.

試験群として、脳室内に、アミロイド・ベータ蛋白質（商品名：Ａｍｙｌｏｉｄ β−Ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｈｕｍａｎ，２５−３５）、Polypeptide Laboratories製）を２ｍｏｌ／Ｌ濃度に希釈したアミロイド・ベータ溶液３μＬをマイクロシリンジポンプで３分間かけて注入する「Ａβ投与手術」を行った。
なお、陰性群として、アミロイド・ベータ蛋白質を投与しないマウスを作製した。当該マウスに対しては、前記アミロイド・ベータ溶液に変えて注射用水３μＬをマイクロシリンジポンプで３分間かけて注入する「偽手術」を行った。
アミロイド・ベータ溶液又は注射用水の注入後は、ステンレスパイプを挿入したまま ３分間静置し、ステンレスパイプをゆっくりと外した。その後、ステンレスパイプを取り除き、頭蓋穴を非吸収性骨髄止血剤（商品名：ネストップ（登録商標）、アルフレッサファーマ株式会社製）で塞ぎ、頭皮を縫合した。 As a test group, 3 μL of amyloid / beta solution obtained by diluting amyloid / beta protein (trade name: Amyloid β-Protein (Human, 25-35), manufactured by Polypeptide Laboratories) to a concentration of 2 mol / L in the ventricle with a microsyringe pump. An “Aβ administration operation” in which injection was performed over 3 minutes was performed.
As a negative group, mice not administered with amyloid / beta protein were prepared. The mouse was subjected to a “pseudo surgery” in which 3 μL of water for injection was injected with a microsyringe pump over 3 minutes instead of the amyloid / beta solution.
After the injection of amyloid beta solution or water for injection, the stainless steel pipe was inserted and left still for 3 minutes, and the stainless steel pipe was slowly removed. Then, the stainless steel pipe was removed, the skull hole was closed with a non-absorbable bone marrow hemostatic (trade name: Nestop (registered trademark), manufactured by Alfresa Pharma Corporation), and the scalp was sutured.

ペプチドＭＫＰ（試料）の投与および前記手術は以下のスケジュールで行った。すなわち、Ｓｌｃ：ｄｄＹマウス（日本エスエルシー株式会社製）を３つの群（１群当たりｎ＝１０）に分け、各群に対して同時期に、試料の投与を開始した。そして、試料の投与を開始した日から起算して３日目に、前記アミロイド・ベータ蛋白質の側脳室内投与手術又は偽手術を行った。各群に対して投与した試料の種類、投与量及び手術による脳室内へのアミロイド・ベータ蛋白質の投与の有無（施術内容）は、下記表１のとおりとした。各試料は、前記手術までの３日間に加えて、術後から試験が終了するまでの６日間、合計で９日間投与した。また、全ての群において、試験用マウスには、各試料とは別に、ＭＦ飼料（オリエンタル酵母株式会社製）を自由摂取させた。   Administration of the peptide MKP (sample) and the operation were performed according to the following schedule. That is, Slc: ddY mice (manufactured by Nippon SLC Co., Ltd.) were divided into three groups (n = 10 per group), and sample administration was started at the same time for each group. Then, on the third day from the day when the administration of the sample was started, an operation for intraventricular administration or sham operation of the amyloid beta protein was performed. Table 1 below shows the type of sample administered to each group, the dose, and whether or not amyloid / beta protein was administered into the ventricle by surgery (operation contents). Each sample was administered for 9 days in total, 6 days from the postoperative period to the end of the test, in addition to 3 days before the operation. In all groups, the test mice were allowed to freely ingest MF feed (produced by Oriental Yeast Co., Ltd.) separately from each sample.

＜Ｙ迷路試験＞
前記手術後６日目（試料投与開始後９日目）のマウスを用いて、Ｙ迷路試験により記憶障害を評価した。
Ｙ迷路試験では、Ｙ字型を構成する３本の同じ大きさのアームを、アーム間の角度を１２０度としたＹ迷路において、マウスの自発的交替行動を評価するために実施した。自発的交替行動とは、マウスが探索行動で自発的に異なるアームに入る性質を利用した試験において、既に入ったアームを記憶していることにより可能となる行動である。マウス（実験動物）に、報酬や罰刺激を与えずに起こる自発的行動で測定することができる。 <Y maze test>
Memory impairment was evaluated by the Y maze test using mice on the 6th day after the surgery (9th day after the start of sample administration).
In the Y maze test, three arms of the same size constituting a Y-shape were performed in the Y maze with an angle between the arms of 120 degrees in order to evaluate the spontaneous alternation behavior of the mouse. Spontaneous alternation behavior is behavior that is made possible by memorizing an arm that has already been entered in a test that utilizes the property that a mouse spontaneously enters a different arm in search behavior. It can be measured by spontaneous behavior that occurs without giving rewards or punitive stimuli to mice (experimental animals).

１本のアームの長さが３９．５ｃｍであり、床の幅が４．５ｃｍであり、壁の高さが１２ｃｍである、３アームがそれぞれ１２０度に分岐しているプラクチック製のＹ字型迷路（有限会社ユニコム製）を用いて、本試験を行った。
装置の設置後、装置の床面の照明が、１０〜４０ルクス（ｌｘ）になるように照度を調節した。当該試験は、最後の試料の投与から約１時間経過後に行なった。
マウスをＹ字型迷路のいずれかのアームに置き、８分間迷路内を自由に探索させた。マウスが測定時間内に移動したアームの順番を記録し、アームに移動した回数を数え、総エントリー数とした。次に、この中で連続して異なる３つのアームを選択した組み合わせを調べ、この数を自発的交替行動数とした。下記の式を用いて自発的交替行動率を算出した。
自発的交替行動率（％）=［自発的交替行動数／（総エントリー数−２）］×１００ The length of one arm is 39.5cm, the floor is 4.5cm, the wall height is 12cm, and the plastic Y-shaped three arms each branch at 120 degrees This test was performed using a maze (manufactured by Unicom).
After the installation of the apparatus, the illuminance was adjusted so that the illumination on the floor of the apparatus was 10 to 40 lux (lx). The test was conducted approximately 1 hour after the last sample administration.
The mouse was placed on any arm of the Y-shaped maze and allowed to freely explore the maze for 8 minutes. The order of the arm that the mouse moved within the measurement time was recorded, and the number of times the mouse moved to the arm was counted to obtain the total number of entries. Next, the combination which selected three different arms in succession among these was investigated, and this number was made into the number of spontaneous alternation actions. The voluntary alternation behavior rate was calculated using the following formula.
Voluntary alternation action rate (%) = [number of voluntary alternation actions / (total number of entries−2)] × 100

＜試験結果＞
試験の結果は、下記の表２のとおりとなった。総エントリー数、自発的交替行動数及び自発的交替行動率は、全ての群においてｎ＝１０の平均値として表した。
自発的交替行動率において、アミロイド・ベータ蛋白質投与手術を行った陽性群では、アミロイド・ベータ蛋白質を投与せずに偽手術を行った陰性群と比較して、自発的交替行動率の有意な低下が認められた（ｔ検定において、Ｐ＜０．０１）。すなわち、陽性群においては、陰性群に比べて、Ｙ迷路において既に入ったアームを記憶する能力が有意に低下していたことから、記憶障害の発生が示唆された。
一方、ペプチドＭＫＰ（試料）を投与した試験群（５ｍｇ／ｋｇ体重／日、経口投与）では、陽性群に対して自発的交替行動率が有意に増加した（ｔ検定において、Ｐ＜０．０１）。
すなわち、ペプチドＭＫＰを投与した試験群のマウスは、Ｙ迷路において既に入ったアームを記憶する能力が、陽性群よりも向上したことが判明した。したがって、ペプチドＭＫＰを投与した試験群では、陽性群よりも記憶障害の程度が改善していること明らかとなった。 <Test results>
The test results are shown in Table 2 below. The total number of entries, the number of spontaneous alternation actions, and the voluntary alternation action rate were expressed as an average value of n = 10 in all groups.
Spontaneous alternation behavior rate was significantly lower in the positive group that had undergone surgery with amyloid / beta protein compared to the negative group that had undergone sham surgery without administration of amyloid / beta protein Was observed (P <0.01 in the t-test). That is, in the positive group, the ability to memorize the arm already entered in the Y maze was significantly lower than in the negative group, suggesting the occurrence of memory impairment.
On the other hand, in the test group (5 mg / kg body weight / day, oral administration) administered with the peptide MKP (sample), the spontaneous alternation behavior rate significantly increased compared to the positive group (P <0.01 in the t test). ).
That is, it was found that the test group mice administered with the peptide MKP had an improved ability to memorize the arms already in the Y maze than the positive group. Therefore, it was revealed that the degree of memory impairment was improved in the test group administered with peptide MKP as compared to the positive group.

以上の試験結果から、ペプチドＭＫＰを投与したマウスにおいて、ペプチドＭＫＰを投与しない場合と比較して、Ｙ迷路において既に入ったアームを記憶する能力の低下が改善し、自発的交替行動率が大幅に増加することがわかった。したがって、ペプチドＭＫＰは、Aβ injection model マウスにおける記憶障害の改善に有効であることが明らかとなった。
このことから、ペプチドＭＫＰは、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能の障害やアルツハイマー型認知症に対して顕著な改善効果を有することが示唆された。 From the above test results, in mice administered with peptide MKP, compared to the case where peptide MKP was not administered, the decrease in the ability to memorize the arm already entered in the Y maze was improved, and the spontaneous alternation behavior rate was greatly increased. It turned out to increase. Therefore, it was revealed that the peptide MKP is effective in improving memory impairment in Aβ injection model mice.
This suggests that peptide MKP has a marked improvement effect on brain function disorders and Alzheimer-type dementia caused by amyloid beta protein.

また、本試験の実施前後に、各群のマウスの血圧を測定したところ、いずれの群のマウスも試験実施による血圧の変動は確認されず、血圧は正常値を保っていた。
前記ペプチドＭＫＰは、本出願人によりすでに、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性を有するものであることを開示している。このような事実を鑑みれば、本試験の実施により、本発明の脳機能障害改善剤を投与した対象において血圧低下等の変動が予想されるが、意外にも血圧への影響は確認されなかった。 Moreover, when the blood pressure of each group of mice was measured before and after this test, no change in blood pressure was observed in any group of mice, and the blood pressure maintained a normal value.
It has been disclosed by the applicant that the peptide MKP has angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory activity. In view of such facts, this test is expected to cause a decrease in blood pressure, etc. in subjects administered the brain dysfunction-improving agent of the present invention, but surprisingly no effect on blood pressure was confirmed. .

このように、本発明による脳機能障害の改善とともに、血圧への影響が確認されなかった事実から、従来の血圧降下作用等の副作用を伴うアルツハイマー型認知症治療薬に比して、血圧変動を伴わない点で、本発明は異質な効果を有するものであると考えられる。
すなわち、低血圧等による不安定な循環動態に起因してアルツハイマー病の病態が悪化している高齢者に、本発明の脳機能障害改善剤を投与することにより、血圧等の循環動態に変化を与えることなくアルツハイマー型認知症の症状を改善することが可能であると考えられることから、高齢者等に発症するアルツハイマー型認知症を始めとしたアミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害の治療において、従来のアルツハイマー型認知症治療薬よりも有利な効果を有するものである。 Thus, with the improvement of cerebral dysfunction according to the present invention and the fact that the effect on blood pressure was not confirmed, blood pressure fluctuations were compared with conventional Alzheimer-type dementia treatments with side effects such as blood pressure lowering effects. In this respect, the present invention is considered to have a heterogeneous effect.
In other words, administration of the brain function disorder improving agent of the present invention to an elderly person whose Alzheimer's disease pathology has deteriorated due to unstable circulatory dynamics due to hypotension or the like changes the circulatory dynamics such as blood pressure. It is thought that it is possible to improve the symptoms of Alzheimer's dementia without giving it, so in the treatment of cerebral dysfunction caused by amyloid / beta protein such as Alzheimer's dementia that develops in the elderly It has an advantageous effect over conventional Alzheimer-type dementia therapeutic agents.

本発明のアミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害改善剤の有効成分は、トリペプチドであるＭｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏとともに、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏを含むカゼイン加水分解物としても使用することができるので、医薬品だけでなく、カゼイン加水分解物を添加することが可能な食品及び機能性食品等の幅広い分野に適用させて、安全性が高いアミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害改善剤を提供することが可能である。   The active ingredient of the brain dysfunction-improving agent caused by the amyloid beta protein of the present invention can be used as a casein hydrolyzate containing Met-Lys-Pro together with the tripeptide Met-Lys-Pro. , To provide a highly safe ameliorating agent for cerebral dysfunction caused by amyloid / beta protein by applying to a wide range of fields such as foods and functional foods to which casein hydrolyzate can be added as well as pharmaceuticals It is possible.

Claims (3)

Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏからなるペプチドを有効成分として含有する、アミロイド・ベータ蛋白質に起因する脳機能障害改善用経口組成物。 An oral composition for improving cerebral dysfunction caused by amyloid beta protein, comprising a peptide comprising Met-Lys-Pro as an active ingredient. 前記脳機能障害が記憶障害である、請求項１に記載の脳機能障害改善用経口組成物。   The oral composition for improving brain dysfunction according to claim 1, wherein the brain dysfunction is memory disorder. 前記記憶障害が記銘力の低下である、請求項２に記載の脳機能障害改善用経口組成物。   The oral composition for improving cerebral dysfunction according to claim 2, wherein the memory disorder is a decrease in memorizing ability.