JP6553706B2 - Antimicrobial peptide dendrimer - Google Patents

Description

グラム陰性緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は環境中に広く分布する一般的な日和見病原体である。緑膿菌は尿路、呼吸器系、血流の感染症並びに重度の火傷及び嚢胞性線維症の患者の感染症と頻繁に関連する。広範囲の火傷を負った患者には全身感染症さえも引き起こしうる。緑膿菌は、院内感染症における倫理の主要因の１つである。それは、抗生物質への高レベルの獲得耐性及び抗生物質への感受性を減少させるバイオフィルムの形成が原因である。それ故に、グラム陰性細菌、及び具体的には緑膿菌をターゲットとする新規の治療薬を開発する必要がある。 Gram-negative P. aeruginosa ( Pseudomonas aeruginosa ) is a common opportunistic pathogen widely distributed in the environment. Pseudomonas aeruginosa is frequently associated with infections of the urinary tract, respiratory system, bloodstream and infections of patients with severe burns and cystic fibrosis. Patients with widespread burns can even cause systemic infections. Pseudomonas aeruginosa is one of the main causes of ethics in nosocomial infections. It is due to the high level of acquired resistance to antibiotics and the formation of biofilms that reduce the sensitivity to antibiotics. Therefore, there is a need to develop new therapeutic agents that target gram negative bacteria, and specifically P. aeruginosa.

抗微生物ペプチド（ＡＭＰ）は競合する病原微生物に対する防御機構として、あらゆる種類の生命の体内で生成される。直鎖のＡＭＰが多数であるが、単環及び複環のＡＭＰもまた自然界で発見されうる。全てのＡＭＰの一般的な特徴は６〜５０残基であり、塩基性アミノ酸のリジン又はアルギニン及び相当な割合（少なくとも３０％）の疎水性残基を含むことである。それ故にＡＭＰは負の電荷を帯びた細菌で覆われた双性イオン性の哺乳類の膜に優先的に作用し、かつ、疎水残基が膜の疎水性部分への拡散を促進させる。ＡＭＰにおいても、耐性を誘発する可能性があるが、その進行は古典的な抗生物質よりもずっと遅い。ほとんどの直鎖のＡＭＰは、新規の優れた抗生物質源となりうる、病原性細菌、菌類、ウイルス、寄生虫及びさらにがん細胞に対する広範囲の活性を有する。直鎖のＡＭＰの主要な欠点は、潜在毒性、プロテアーゼによる急速な分解、ｐＨ変化に対する感受性及び高い生産コストである。 Antimicrobial peptides (AMP) are produced in the body of all types of life as a defense mechanism against competing pathogenic microorganisms. Although there are many linear AMPs, monocyclic and multicyclic AMPs can also be found in nature. A common feature of all AMPs is that it is 6 to 50 residues and contains the basic amino acids lysine or arginine and a significant proportion (at least 30%) of hydrophobic residues. AMP therefore preferentially acts on zwitterionic mammalian membranes covered with negatively charged bacteria, and hydrophobic residues promote diffusion into the hydrophobic part of the membrane. AMP can also induce resistance, but its progression is much slower than classical antibiotics. Most linear AMPs have a broad spectrum of activity against pathogenic bacteria, fungi, viruses, parasites, and even cancer cells, which can be a new and superior source of antibiotics. The main disadvantages of linear AMP are potential toxicity, rapid degradation by proteases, sensitivity to pH changes and high production costs.

別の種類は、多量体／樹脂状抗微生物ペプチドから成る。これらのペプチドデンドリマーは、鋳型又はコアマトリクスと結合したペプチドモノマーの数個の複製物を含む分岐ポリマーと定義された。それらの多価ペプチドデンドリマーの多数の種類は過去３０年内に開発された。改良は主にコアに対して行われた一方、結合したペプチドは効率的な天然に存在するペプチド又はそれらの類似体のままであった。１９８０年代に分岐単位としてのリジンから成るコアを含み、かつ最大で第３世代のデンドリマーを生み出す多重抗原ペプチド（ＭＡＰｓ）が免疫源として導入された（Ｔａｍ、Ｊ．Ｐ．ら；２００２、Ｅｕｒ．Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２６９、９２３−３２）。 Another type consists of multimeric / resinous antimicrobial peptides. These peptide dendrimers were defined as branched polymers containing several replicas of peptide monomers attached to a template or core matrix. Many types of these multivalent peptide dendrimers have been developed within the last 30 years. Improvements were made primarily to the core, while the bound peptide remained an efficient naturally occurring peptide or analog thereof. In the 1980s, multiple antigen peptides (MAPs) containing a core consisting of lysine as a branching unit and producing up to third generation dendrimers were introduced as immunogens (Tam, JP et al .; 2002, Eur. J Biochem., 269, 923-32).

新規のトポロジーを備えるペプチドデンドリマーは、本発明者の研究グループによって開発された。これらのペプチドデンドリマーは、分岐点として用いられるリジンなどのジアミノ酸、及び分岐単位の間の１つ、２つ又は３つのアミノ酸（ＡＡ）を含む分岐ペプチドである。これらは固相ペプチド合成によって容易に調製され、かつ、直鎖状配列によく見られる凝集傾向がなく、水媒体への良好な溶解性を持つ。それらのペプチドデンドリマーは触媒活性及び生物活性を示し、かつ、直鎖の類似体と比較してタンパク質分解及び加水分解に非常に安定である。 Peptide dendrimers with novel topologies have been developed by the inventor's research group. These peptide dendrimers are branched peptides comprising diamino acids such as lysine used as branch points and one, two or three amino acids (AA) between the branching units. They are easily prepared by solid phase peptide synthesis and do not have the aggregation tendency often found in linear sequences and have good solubility in aqueous media. These peptide dendrimers exhibit catalytic and biological activity and are very stable to proteolysis and hydrolysis as compared to linear analogues.

Ｔａｍ、Ｊ．Ｐ．ら；２００２、Ｅｕｒ．Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２６９、９２３−３２Tam, J.M. P. Et al., 2002, Eur. J Biochem. 269, 923-32 Ｓｔａｃｈ、Ｍ．ら、２０１２．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３（１）、８６Stach, M. Et al., 2012. Med. Chem. Commun. , 3 (1), 86

抗菌剤としてのペプチドデンドリマーの研究は最初に、（分岐リジン間に１つのアミノ酸を有する）１１１１個のペプチドデンドリマーのビーズのコンビナトリアルライブラリー合成、及びビーズ拡散分析による活性のスクリーニングが試みられた（Ｓｔａｃｈ、Ｍ．ら、２０１２．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３（１）、８６）。枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）がスクリーニング細菌として用いられ、そして複数のヒット配列が明らかになった。ヒット物及び類似体の再合成は、グラム陽性枯草菌に対して非常に高い活性を持つ化合物を生成した。しかし、調製された化合物は全て緑膿菌に対する活性を示さないか、又はＭＩＣ（最小発育阻止濃度）が約２０μｇ／ｍＬのわずかな活性があるかのいずれかであった。緑膿菌に対する同じライブラリーのスクリーニングは、１つの化学構造もヒットしなかったことが示された。 The study of peptide dendrimers as antibacterial agents was first attempted by combinatorial library synthesis of beads of 1111 peptide dendrimers (with one amino acid between branched lysines) and screening of activity by bead diffusion analysis (Stach M. et al., 2012. Med. Chem. Commun., 3 (1), 86). Bacillus subtilis was used as a screening bacterium and multiple hit sequences were revealed. Resynthesis of hits and analogs produced compounds with very high activity against Gram-positive Bacillus subtilis. However, all the prepared compounds either did not show activity against P. aeruginosa or had a slight activity with a MIC (minimum inhibitory concentration) of about 20 μg / mL. Screening the same library against Pseudomonas aeruginosa showed that no chemical structure was hit.

本発明の目的は、生体外及び生体内で使用するための、新規のペプチド抗生物質を提供することである。本目的は、独立請求項の主題により達成される。 The object of the present invention is to provide novel peptide antibiotics for use in vitro and in vivo. This object is achieved by the subject matter of the independent claims.

本発明は、分岐単位間に２つ又は３つのアミノ酸を有する、新種の抗微生物ペプチドデンドリマー（ＡＭＰＤｓ）に関する（図１）。ペプチドデンドリマーは第２、第３、第４及び第５世代になり得、分岐単位はリジン、ジアミノプロピオン酸、オルニチン又はジアミノ酪酸であり得、かつ、分岐単位間のアミノ酸は任意の天然又は非天然のアミノ酸である。疎水性尾部のような活性を高める基はデンドリマーのコア又はＮ末端に結合しうる。当該ペプチドデンドリマーは、臨床単離株を含むグラム陰性緑膿菌、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）及びアシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ）を含む他のグラム陰性細菌、並びにいくつかのグラム陽性細菌（黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ））に対し、非常に効果が高い。 The present invention relates to a new class of antimicrobial peptide dendrimers (AMPDs) having two or three amino acids between branching units (FIG. 1). Peptide dendrimers can be second, third, fourth and fifth generation, the branching unit can be lysine, diaminopropionic acid, ornithine or diaminobutyric acid, and the amino acids between the branching units can be any natural or unnatural Amino acids. An activity enhancing group such as a hydrophobic tail can be attached to the core or N-terminus of the dendrimer. The peptide dendrimers include Gram-negative Pseudomonas aeruginosa, including clinical isolates, other Gram-negative bacteria, including Escherichia coli and Acinetobacter baumannii , and several Gram-positive bacteria (Staphylococcus aureus ( Staphylococcus aureus ))).

用語及び定義
アミノ酸配列はＮ末端からＣ末端までである。本明細書中で言及されるペプチドデンドリマーの末端のカルボキシ基は、カルボン酸、カルボキシレート基（ＣＯＯ−）又はアミド基（ＣＯＮＨ_２）である可能性がある。 Terms and Definitions The amino acid sequence is from the N-terminus to the C-terminus. Terminal carboxy groups of the peptide dendrimers referred to herein, carboxylic acid, could be a carboxylate group (COO-) or amide groups (CONH _2).

本明細書中の文脈におけるアルキルカルボン酸は、一般式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯＯＨで表され、式中、ｎは６〜２２の値である。特定の実施態様では、ｎは６、７、８、９、１０、１１、１２、１４又は１６から選択される。 Alkyl carboxylic acids in the context herein, is represented by the general formula _{CH 3 (CH 2) n COOH} , wherein, n is a value of 6-22. In certain embodiments, n is selected from 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14 or 16.

３文字のコードで表わされる配列位置（ストライヤー、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３版、ｐ．２１）は、別段の指示がない限り、天然に存在する（タンパク質を構成する）Ｌ−アミノ酸のエナンチオマー又はジアステレオマーを指す。 Sequence positions represented by the three letter code (Stryer, Biochemistry, 3rd edition, p.21) are naturally occurring (protein-constituting) enantiomers or diastereoisomers unless otherwise indicated. Points to a mer.

本明細書中の文脈における疎水性アミノ酸は、水素結合供与体又は受容体のない側鎖を有する、任意のαアミノカルボン酸である。疎水性アミノ酸は、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンを含むが、これらに限定されない。 A hydrophobic amino acid in the context herein is any alpha amino carboxylic acid having a side chain without a hydrogen bond donor or acceptor. Hydrophobic amino acids include, but are not limited to, alanine, valine, isoleucine, leucine, methionine, phenylalanine, tyrosine and tryptophan.

本明細書中の文脈におけるカチオン性側鎖を含むアミノ酸は、生理的なｐＨ下でカチオンとして存在する化学官能基を含む、側鎖を有するαアミノカルボン酸である。カチオン性アミノ酸はアルギニン、ヒスチジン、リジン、オルニチン、ジアミノプロピオン酸及びジアミノ酪酸を含むが、これらに限定されない。 An amino acid comprising a cationic side chain in the context of the present specification is an alpha aminocarboxylic acid having a side chain comprising a chemical functional group present as a cation under physiological pH. Cationic amino acids include, but are not limited to, arginine, histidine, lysine, ornithine, diaminopropionic acid and diaminobutyric acid.

Ｄａｂは（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸（ＣＡＳ番号２６４３−６６−５）である。 Dab is (L) -2,3-diaminobutyric acid (CAS number 2643-66-5).

（Ｂ）は（Ｌ）−２、３−ジアミノプロピオン酸（ＣＡＳ番号４０３３−３９−０）である。 (B) is (L) -2,3-diaminopropionic acid (CAS number 4033-39-0).

発明の第１の側面によれば、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマーが提供される。該デンドリマーは一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓであり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１であり、
Ｚは中心部分であり、
それぞれのＢ（Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６）はその他のＢから独立して分岐部分であり、
それぞれのＤ（Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６）はその他のＤから独立して、
ｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ、又は
ｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）
である。）
で表される。 According to a first aspect of the invention there is provided a peptide dendrimer for use as a medicament. The dendrimer has the general formula X- (B ^2- [Y ² ] _s -D ¹ ) ₂ -B ¹ -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 _{^{) 8 - (B 3 - [}} Y 3] r -D 2) is _4,
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of a binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of the amino acid adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in
o, p, q, r and s are 0 or 1,
Z is the central part,
Each B (B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ ) is a branched portion independently of the other B,
Each D (D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ ) is independent of the other D
i. Dipeptide CH, HC, CC or HH, or ii. Tripeptides HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(Wherein, H is any amino acid comprising a hydrophobic side chain, and C is any amino acid comprising a cationic side chain)
It is. )
Is represented by

言い換えれば、本発明の主題であるデンドリマーは、簡略化した一般式（（［（［（［（［Ｄ^６ _２Ｂ^６［Ｙ^６］_ｏ］_ｄＤ^５）_２Ｂ^５［Ｙ^５］_ｐ］_ｃＤ^４）_２Ｂ^４［Ｙ^４］_ｑ］_ｂＤ^３）_２Ｂ^３［Ｙ^３］_ｒ］_ａＤ^２）_２Ｂ^２［Ｙ^２］_ｓＤ^１）_２Ｂ^１−Ｚ
（式中、ａ、ｂ、ｃ及びｄは０又は１であり得る（ただし、ａが１の場合ｂは１のみであり得、ｂが１の場合ｃは１のみであり得、かつ、ｃが１の場合ｄは１のみであり得る）。上記の式で示されるように、結合部分Ｙは、存在する場所で、アミド結合によってＤと結合する酢酸部分を含むシステイン側鎖のチオエーテル結合によって、隣接するＤと結合する。当該例示的な結合において、チオエーテル基の硫黄はＹのシステイン側鎖が起源であり、かつ、アミド結合中のアミノ基は（システイン残基から見れば）Ｃ末端でＤに隣接する、Ｎ末端のアミノ酸が起源である。）
で表される。 In other words, the dendrimer is the subject of the present invention, simplified formula _^(([([([( [D 6 2 B 6 [Y 6] o] d D 5) 2 B 5 [Y 5] p] _c D ⁴ ) ₂ B ⁴ [Y ⁴ ] _q ] _b D ³ ) ₂ B ³ [Y ³ ] _r ] _a D ² ) ₂ B ² [Y ² ] _s D ¹ ) ₂ B ^1- Z
(Wherein, a, b, c and d may be 0 or 1 (however, when a is 1, b may be only 1; when b is 1 c may be only 1 and c D may be only 1 if A is 1. As shown in the above formula, the linking moiety Y is, where present, by a thioether bond of a cysteine side chain comprising an acetic acid moiety linked to D by an amide bond. The sulfur of the thioether group originates from the cysteine side chain of Y in the exemplary bond, and the amino group in the amide bond is C-terminally (as viewed from the cysteine residue) (The origin is the N-terminal amino acid adjacent to D.)
Is represented by

分岐点間に２つのＡＡを有する第３世代（Ｇ３）のペプチドデンドリマーのトポロジー。Topology of third generation (G3) peptide dendrimers with two AA between branch points. 樹上ペプチドの固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）。ａ．カップリング：３当量／Ｇ Ｆｍｏｃ−アミノ酸、３当量／Ｇ ヘキサフルオロリン酸（ベンゾトリアゾ−ル−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウム（ＰｙＢＯＰ）又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾ−ル（ＨＯＢｔ）、及び５当量／Ｇ Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）又はＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液中のＮ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＰＡ）又はＮ、Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）。ｂ．アセチル化：無水酢酸（Ａｃ_２Ｏ）／ジクロロメタン（ＤＣＭ）（１：１、ｖ／ｖ）、１×１５分。ｃ．Ｆｍｏｃの脱保護：ピペリジン／ＤＭＦ（１：４、ｖ／ｖ）、２０分。ｄ．開裂：トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（９４％）、トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）（５％）、水（１％）（システイン及びメチオニンの遊離ペプチド）又はＴＦＡ（９４％）、ＴＩＳ（１％）、水（２．５％）、１、２−エタンジオール（ＥＤＴ）（２．５％）（システイン及び／又はメチオニンを含むペプチド）。Solid-phase peptide synthesis of dendritic peptides (SPPS). a. Coupling: 3 equivalents / G Fmoc-amino acid, 3 equivalents / G hexafluorophosphoric acid (benzotriazol-1-yloxy) tripyrrolidinophosphonium (PyBOP) or 1-hydroxybenzotriazole (HOBt), and 5 Equivalent / G N, N-diisopropylethylamine (DIEPA) or N, N-diisopropylcarbodiimide (DIC) in N-methylpyrrolidone (NMP) or N, N-dimethylformamide (DMF) solution. b. Acetylation: acetic anhydride (Ac ₂ O) / dichloromethane (DCM) (1: 1, v / v), 1 × 15 min. c. Fmoc deprotection: piperidine / DMF (1: 4, v / v), 20 min. d. Cleavage: trifluoroacetic acid (TFA) (94%), triisopropylsilane (TIS) (5%), water (1%) (free peptide of cysteine and methionine) or TFA (94%), TIS (1%), Water (2.5%), 1,2-ethanediol (EDT) (2.5%) (peptides containing cysteine and / or methionine). 低位の世代のペプチドデンドリマーのチオ連結反応によるペプチドデンドリマーの組立。Assembly of peptide dendrimers by thio-ligation of lower generation peptide dendrimers. Ａ：第３世代のＡＭＰＤのＭＳｔ−１１２、及びＢ：コアリジンに結合するＣ_１２疎水性尾部を有する第２世代ＡＭＰＤのＭＳｔ−２６３。荷電したＡＡは黒色であり、疎水性のＡＡは明灰色であり、かつ、分岐点は暗灰色である。A: Third generation AMPD of MSt-112, and B: second generation AMPD of MSt-263 with _{C 12} hydrophobic tail that binds to Koarijin. The charged AA is black, the hydrophobic AA is light gray, and the branch point is dark gray. 黄色ブドウ球菌、アシネトバクター・バウマニ及び緑膿菌の臨床分離株に対するＡＭＰＤのＭＩＣ値（μｇ／ｍＬ）（２つの独立したデュプリケートで測定され、ＭＳｔ−２６１及びＭＳｔ−２６５は１回だけ試験された）。最大測定濃度は６４μｇ／ｍＬである。MIC values of AMPD (μg / mL) for clinical isolates of S. aureus, Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa (measured in two independent duplicates, MSt-261 and MSt-265 were tested only once) . The maximum measured concentration is 64 μg / mL. ホスファチジルグリセロールの脂肪小胞からの５（６）−カルボキシフルオレセインの漏出。５０秒でペプチドデンドリマーをバッファー（１０ｍＭ ＴＲＩＳ、１０７ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ ７．４）中の脂質小胞溶液に添加し、かつ、３００秒で１．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００を添加する。蛍光強度はＩ（ｔ）＝（Ｉ_ｔ−Ｉ_０）／（Ｉ_∞−Ｉ_０）（式中、Ｉ_０＝Ｉ_ｔでペプチドデンドリマーを添加し、Ｉ_∞＝Ｉ_ｔで溶菌が飽和する）を用いて、部分発光強度Ｉ（ｔ）に正規化された。Ａは活性のあるＡＭＰＤのＭＳｔ−１１２であり、Ｂは異なるペプチド濃度の、不活性なペプチドデンドリマーのＭＳｔ−１１３である。Leakage of 5 (6) -carboxyfluorescein from fat vesicles of phosphatidylglycerol. The peptide dendrimer is added to the lipid vesicle solution in buffer (10 mM TRIS, 107 mM NaCl, pH 7.4) at 50 seconds, and 1.2% Triton X 100 is added at 300 seconds. The fluorescence intensity _{I (t) = (I t} -I 0) / (I ∞ -I 0) ( _where the addition of peptide dendrimers with I 0 = _{I t,} lysis is saturated with _{I ∞} = I _t) Was normalized to the partial emission intensity I (t). A is MSt-112 of active AMPD and B is MSt-113 of different peptide concentrations and inactive peptide dendrimer. ホスファチジルコリンの脂肪小胞からの５（６）−カルボキシフルオレセインの漏出。５０秒でペプチドデンドリマーをバッファー（１０ｍＭ ＴＲＩＳ、１０７ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ ７．４）中の脂質小胞溶液に添加し、かつ、３００秒で１．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００を添加する。蛍光強度はＩ（ｔ）＝（Ｉ_ｔ−Ｉ_０）／（Ｉ_∞−Ｉ_０）（式中、Ｉ_０＝Ｉ_ｔでペプチドデンドリマーを添加し、Ｉ_∞＝Ｉ_ｔで溶菌が飽和する）を用いて、部分発光強度Ｉ（ｔ）に正規化された。Ａは活性のあるＡＭＰＤのＭＳｔ−１１２であり、Ｂは異なるペプチド濃度の、不活性なペプチドデンドリマーのＭＳｔ−１１３である。Leakage of 5 (6) -carboxyfluorescein from fat vesicles of phosphatidylcholine. The peptide dendrimer is added to the lipid vesicle solution in buffer (10 mM TRIS, 107 mM NaCl, pH 7.4) at 50 seconds, and 1.2% Triton X 100 is added at 300 seconds. The fluorescence intensity _{I (t) = (I t} -I 0) / (I ∞ -I 0) ( _where the addition of peptide dendrimers with I 0 = _{I t,} lysis is saturated with _{I ∞} = I _t) Was normalized to the partial emission intensity I (t). A is MSt-112 of active AMPD and B is MSt-113 of different peptide concentrations and inactive peptide dendrimer. 異なる濃度のＭＳｔ−２６０によって誘発される５（６）−カルボキシフルオレセインの漏出。５０秒でペプチドデンドリマーをバッファー（１０ｍＭ ＴＲＩＳ、１０７ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ ７．４）中の脂質小胞溶液に添加し、かつ、３００秒で１．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００を添加する。蛍光強度はＩ（ｔ）＝（Ｉ_ｔ−Ｉ_０）／（Ｉ_∞−Ｉ_０）（式中、Ｉ_０＝Ｉ_ｔでペプチドデンドリマーを添加し、Ｉ_∞＝Ｉ_ｔで溶菌が飽和する）を用いて、部分発光強度Ｉ（ｔ）に正規化された。Ａはホスファチジルグリセロールの大規模単層ベシクル（ＬＵＶｓ）であり、ＢはホスファチジルコリンのＬＵＶｓである。Leakage of 5 (6) -carboxyfluorescein induced by different concentrations of MSt-260. The peptide dendrimer is added to the lipid vesicle solution in buffer (10 mM TRIS, 107 mM NaCl, pH 7.4) at 50 seconds, and 1.2% Triton X 100 is added at 300 seconds. The fluorescence intensity _{I (t) = (I t} -I 0) / (I ∞ -I 0) ( _where the addition of peptide dendrimers with I 0 = _{I t,} lysis is saturated with _{I ∞} = I _t) Was normalized to the partial emission intensity I (t). A is a large-scale monolayer vesicle (LUVs) of phosphatidylglycerol, and B is LUVs of phosphatidylcholine. ２つの独立したデュプリケートで測定された、活性及び不活性のペプチドデンドリマー細胞生存性。緑膿菌はペプチドデンドリマー（２５μｇ／ｍＬ）を加えて培養され、かつ、３７℃で０、１、３、６、８、２４時間培養された。ＷＳＴ−８の添加及び培養の後、吸光度を４５０ｎｍで測定した。Active and inactive peptide dendrimer cell viability, measured in two independent duplicates. Pseudomonas aeruginosa was incubated with peptide dendrimer (25 μg / mL) and incubated at 37 ° C. for 0, 1, 3, 6, 8, 24 hours. Absorbance was measured at 450 nm after addition of WST-8 and incubation. チオエーテル結合した例示的なデンドリマーの構造を示す。1 shows the structure of an exemplary dendrimer with thioether linkages.

本発明のすべての側面において、分岐部分Ｂは任意の二官能性のアミノ酸であり得、具体的には任意のジアミノ酸であり得、具体的には一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ−１（ＮＨ_２）_２ＣＯ−（式中、ｎは２〜１０の間の数であり、より具体的にはｎは２、３、４又は５である）で表されるジアミノ置換アルキルカルボン酸部分であり得る。 In all aspects of the invention, the branching moiety B can be any difunctional amino acid, in particular any diamino acid, and in particular, the general formula C _n H _{2 n-1} (NH ₂ ) ₂ CO— (wherein n is a number between 2 and 10, more specifically, n is 2, 3, 4 or 5) and may be a diamino substituted alkyl carboxylic acid moiety .

いくつかの実施態様では、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマーは、一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、かつ、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するＤのアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓであり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１であり、
Ｚは中心部分であり、
それぞれのＢ（Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６）はその他のＢから独立して、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ−１（ＮＨ）_２ＣＯ−で表されるジアミノアルキルカルボン酸部分を表し、ｎは２〜１０の間の数であり、より具体的にはｎは２、３、４又は５であり、
それぞれのＤ（Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６）はその他のＤから独立して、
ｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ、又は
ｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）
である。）
で表される。 In some embodiments, the peptide dendrimers for use as a medicament has the general formula _{^{X- (B 2 - [Y 2}} ] s -D 1) 2 -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 ) _8- (B ^3- [Y ³ ] _r -D ² ) ₄ , and
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of a binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of amino acid D adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in
o, p, q, r and s are 0 or 1,
Z is the central part,
Each B (B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ ) independently of the other B is a diamino represented by the general formula C _n H _{2 n-1} (NH) ₂ CO— Represents an alkyl carboxylic acid moiety, n is a number between 2 and 10, more specifically n is 2, 3, 4 or 5;
Each D (D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ ) is independent of the other D
i. Dipeptide CH, HC, CC or HH, or ii. Tripeptides HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(Wherein, H is any amino acid comprising a hydrophobic side chain, and C is any amino acid comprising a cationic side chain)
It is. )
Is represented by

いくつかの実施態様では、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマーは、一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、かつ、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するＤのアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓであり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１であり、少なくともｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは１であり、
Ｚは中心部分であり、
それぞれのＢ（Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６）はその他のＢから独立して、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ−１（ＮＨ）_２ＣＯ−で表されるジアミノアルキルカルボン酸部分を表し、ｎは２〜１０の間の数であり、より具体的にはｎは２、３、４又は５であり、
それぞれのＤ（Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６）はその他のＤから独立して、
ｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ、又は
ｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）
である。）
で表される。 In some embodiments, the peptide dendrimers for use as a medicament has the general formula _{^{X- (B 2 - [Y 2}} ] s -D 1) 2 -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 ) _8- (B ^3- [Y ³ ] _r -D ² ) ₄ , and
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of a binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of amino acid D adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in
o, p, q, r and s are 0 or 1, at least o, p, q, r and s are 1.
Z is the central part,
Each B (B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ ) independently of the other B is a diamino represented by the general formula C _n H _{2 n-1} (NH) ₂ CO— Represents an alkyl carboxylic acid moiety, n is a number between 2 and 10, more specifically n is 2, 3, 4 or 5;
Each D (D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ ) is independent of the other D
i. Dipeptide CH, HC, CC or HH, or ii. Tripeptides HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(Wherein, H is any amino acid comprising a hydrophobic side chain, and C is any amino acid comprising a cationic side chain)
It is. )
Is represented by

いくつかの実施態様では、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマーは、一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、かつ、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するＤのアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓであり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１であり、
Ｚは中心部分であり、
それぞれのＢ（Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６）はその他のＢから独立して、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ−１（ＮＨ）_２ＣＯ−で表されるジアミノアルキルカルボン酸部分を表し、ｎは２〜１０の間の数であり、より具体的にはｎは２、３、４又は５であり、
それぞれのＤ（Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６）はその他のＤから独立して、
ｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ、又は
ｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）
であり、Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６のうちの少なくとも１つが上記のトリペプチドから選択されるトリペプチドである。）
で表される。 In some embodiments, the peptide dendrimers for use as a medicament has the general formula _{^{X- (B 2 - [Y 2}} ] s -D 1) 2 -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 ) _8- (B ^3- [Y ³ ] _r -D ² ) ₄ , and
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of a binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of amino acid D adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in
o, p, q, r and s are 0 or 1,
Z is the central part,
Each B (B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ ) independently of the other B is a diamino represented by the general formula C _n H _{2 n-1} (NH) ₂ CO— Represents an alkyl carboxylic acid moiety, n is a number between 2 and 10, more specifically n is 2, 3, 4 or 5;
Each D (D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ ) is independent of the other D
i. Dipeptide CH, HC, CC or HH, or ii. Tripeptides HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(Wherein, H is any amino acid comprising a hydrophobic side chain, and C is any amino acid comprising a cationic side chain)
And at least one of D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ is a tripeptide selected from the above tripeptides. )
Is represented by

Ｂにおける以下の実施態様は本発明の全ての側面に適用する。いくつかの実施態様では、Ｂはリジン、オルニチン、２、３−ジアミノ酪酸及び２、３−ジアミノプロピオン酸などの、アミノ官能化されたαアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｂは天然に存在するアミノ酸から選択されるアミノ酸である。天然に存在するアミノ酸は非毒性の代謝産物に容易に代謝され、それ故に、デンドリマーの人への使用に対する規制当局の承認を容易にする。 The following embodiments in B apply to all aspects of the invention. In some embodiments, B is an amino functionalized alpha amino acid such as lysine, ornithine, 2,3-diaminobutyric acid and 2,3-diaminopropionic acid. In some embodiments, B is an amino acid selected from naturally occurring amino acids. Naturally occurring amino acids are readily metabolized to non-toxic metabolites, thus facilitating regulatory approval for human use of dendrimers.

本発明の任意の側面の特定の実施態様では、ペプチドデンドリマーは、固相合成担体上で成長するデンドリマーのアミノ基と活性カルボン酸基をペプチド結合することによってデンドリマーを伸長する、メリーフィールドによる固相ペプチド合成によって合成される。本発明の任意の側面のこれらのいくつかの実施態様では、第１位置のＺはＺのアミノ官能基とＢ^１のカルボン酸炭素との間のアミド結合によってＢと結合し、かつ、Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５、Ｄ^６はそれぞれ、それらの各々の結合パートナーであるＢ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５、Ｂ^６と、Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５、Ｂ^６のアミノ窒素とＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５、Ｄ^６のカルボキシル末端アミノ酸のカルボン酸炭素との間のアミド結合によって、それぞれ結合する。 In certain embodiments of any of the aspects of the invention, the peptide dendrimer is a solid phase according to maryfield, wherein the dendrimer is extended by peptide linking the amino groups of the dendrimer grown on the solid phase synthesis support with the activated carboxylic acid group. Synthesized by peptide synthesis. In some of these embodiments of any aspect of the invention, the Z at the first position is bound to B by an amide bond between the amino functionality of Z and the carboxylic acid carbon of B ¹ and D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ , D ⁶ are their respective binding partners B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ , B ⁶ and B ¹ , B ^{2, respectively.} , B ³ , B ⁴ , B ⁵ , B ⁶ amino nitrogen and D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ , by the amide bond between the carboxyl-terminal amino acids of D ⁶ and D ⁶ , respectively. Join.

（）内にチオエーテル結合が１つもない実施態様において、式はＸ−（Ｂ^２−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４
である。）
という簡略化された形で表されうる。 () In the embodiment thioether bond none of the inside, the formula _{^{X- (B 2 -D 1) 2}} -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 ) _8- (B ^3- [Y ³ ] _r- D ² ) ₄
It is. )
Can be expressed in a simplified form.

特定の実施態様では、Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６はその他のＤからそれぞれ独立して、ジペプチド（ＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ）又はトリペプチド（ＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ）である。 In particular embodiments, D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ are each independently from the other D a dipeptide (CH, HC, CC or HH) or a tripeptide (HCH, HHC) , CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC).

Ｚは中心部分であり、かつ、本発明のデンドリマーを作成するための固相化学的手法では、Ｚは合成の出発点である。多数の異なる短ペプチドが、実験的に用いられ、全面的に高い成功率を収めている。 Z is the central part, and Z is the starting point for the synthesis in the solid phase chemistry method for making the dendrimers of the present invention. A number of different short peptides have been used experimentally and have a high overall success rate.

いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ｌｅｕ、Ｄａｂ−Ｔｒｐ、Ｄａｂ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｔｒｐ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、ＤａｂＡ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ、Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ、Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｏｒｎ−Ｌｅｕ、Ｏｒｎ−Ｐｈｅ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ又はＧｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓである。 In some embodiments, Z is Lys-Leu, Arg-Leu, Dab-Trp, Dab-Leu, Leu-Lys, Lys-Trp, Lys-Phe, Lys-Lys, Leu-Leu, DabA-Ala, Lys. -Lys-Leu, Lys-Leu-Leu, Leu-Lys-Leu, Lys-Leu-Lys, Orn-Leu, Orn-Phe, Arg-Phe or Gly-Ser-Cys.

いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ＣＯＮＨ_２）である。いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ｌｅｕ、Ｄａｂ−Ｌｅｕ又はＤａｂ−Ｔｒｐである。いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ又はＬｅｕである。いくつかの実施態様では、ＺはＺのアミノ官能基とアルキルカルボン酸のカルボキシ基との間のアミド結合によって、アルキルカルボン酸と結合する。特定の実施態様では、アルキルカルボン酸はＺに含まれるリジン部分のωアミノ側鎖と結合する。他の実施態様では、アルキルカルボン酸はＮ末端のＤと結合する。 In some embodiments, Z is _{Lys-Leu-Lys (CONH 2} ). In some embodiments, Z is Lys-Leu, Arg-Leu, Dab-Leu or Dab-Trp. In some embodiments, Z is Lys or Leu. In some embodiments, Z is linked to the alkyl carboxylic acid by the amide bond between the amino function of Z and the carboxy group of the alkyl carboxylic acid. In a particular embodiment, the alkyl carboxylic acid is attached to the omega amino side chain of the lysine moiety contained in Z. In another embodiment, the alkyl carboxylic acid is attached to D at the N-terminus.

いくつかの実施態様では、Ｈはロイシン、フェニルアラニン、アラニン、チロシン又はトリプトファンから選択される。いくつかの実施態様では、Ｃはリジン、アルギニン又は（Ｌ）−２−３−ジアミノ酪酸から選択される。 In some embodiments, H is selected from leucine, phenylalanine, alanine, tyrosine or tryptophan. In some embodiments, C is selected from lysine, arginine or (L) -2-3-diaminobutyric acid.

いくつかの実施態様では、ＺはトリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ又はＣＣＣであり、Ｈ及びＣは上記の意味を持つ。 In some embodiments, Z is the tripeptide HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC, and H and C have the above meanings.

いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓである。 In some embodiments, Z is Lys-Leu-Lys.

いくつかの実施態様では、ＺはトリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ又はＣＣＣであり、Ｈ及びＣは上記の意味を持ち、かつ、ＺはＺのアミノ官能基とアルキルカルボン酸のカルボキシ基との間のアミド結合によって、一般式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯ−によって表されるアルキルカルボン酸部分と結合する。 In some embodiments, Z is the tripeptide HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC, H and C have the above meanings, and Z is the amino functional group of Z and alkyl by an amide bond between the carboxy group of the carboxylic acid, it binds to the general formula _CH 3 _{(CH 2)} alkylcarboxylic acid moiety represented by n CO-.

いくつかの実施態様では、ｎは４〜２２の間の数であり、具体的には４〜１０の間の数であり、より具体的には４〜８の間の数である。 In some embodiments, n is a number between 4 and 22, in particular a number between 4 and 10, more particularly a number between 4 and 8.

いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓであり、ＺはＺのアミノ官能基とアルキルカルボン酸のカルボキシ基との間のアミド結合によって、アルキルカルボン酸と結合する。 In some embodiments, Z is Lys-Leu-Lys, and Z is linked to the alkyl carboxylic acid by the amide bond between the amino function of Z and the carboxy group of the alkyl carboxylic acid.

いくつかの実施態様では、ペプチドデンドリマーは表１ａの式によって特徴付けられる：
In some embodiments, the peptide dendrimer is characterized by the formula in Table 1a:

いくつかの実施態様では、化合物ｇ及びｈはリストより除外される。 In some embodiments, compounds g and h are excluded from the list.

いくつかの実施態様では、表１ａのリストはさらに以下の化合物を含む：
ｃｃｃ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＬＬ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｄｄｄ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＫＫ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｅｅｅ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＫＫ）_４−（Ｋ−ＫＫ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｆｆｆ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＬＬ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｇｇｇ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｈｈｈ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｉｉｉ．（ＫＡ）_８−（Ｋ−ＫＡ）_４−（Ｋ−ＫＡ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｊｊｊ．（ＫＨ）_８−（Ｋ−ＫＨ）_４−（Ｋ−ＫＨ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｋｋｋ．（ＲＬ）_８−（Ｋ−ＬＬ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｌｌｌ．（ＲＬ）_８−（Ｋ−ＲＬ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｍｍｍ．（ＲＬ）_８−（Ｋ−ＲＬ）_４−（Ｋ−ＲＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ。 In some embodiments, the list in Table 1a further comprises the following compounds:
ccc. _{(KK) 8 - (K-} LL) 4 - (K-LL) 2 -K-GSC
ddd. _{(KK) 8 - (K-} KK) 4 - (K-LL) 2 -K-GSC
eee. _{(KK) 8 - (K-} KK) 4 - (K-KK) 2 -K-GSC
fff. _{(KL) 8 - (K-} LL) 4 - (K-LL) 2 -K-GSC
ggg. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-LL) 2 -K-GSC
hhh. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-KL) 2 -K-GSC
iii. _{(KA) 8 - (K-} KA) 4 - (K-KA) 2 -K-GSC
jjj. _{(KH) 8 - (K-} KH) 4 - (K-KH) 2 -K-GSC
kkk. _{(RL) 8 - (K-} LL) 4 - (K-LL) 2 -K-GSC
lll. _{(RL) 8 - (K-} RL) 4 - (K-LL) 2 -K-GSC
mmm. _{(RL) 8 - (K-} RL) 4 - (K-RL) 2 -K-GSC.

いくつかの実施態様では、表１ａのリストはさらに以下の化合物を含む：
ｎｎｎ．（ＯｒｎＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＦ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｏｏｏ．（ＯｒｎＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｐｐｐ．（ＲＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｑｑｑ．（ＯｒｎＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｒｒｒ．（ＯｒｎＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＦ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｓｓｓ．（ＲＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３。 In some embodiments, the list in Table 1a further comprises the following compounds:
nnn. _{(OrnL) 4 - (K-} DabF) 2 -K-KL
oo. _{(OrnF) 4 - (K-} DabL) 2 -K-KL
ppp. _{(RF) 4 - (K-} DabL) 2 -K-KL
qqq. _{(OrnF) 4 - (K-} DabL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
rrr. _{(OrnL) 4 - (K-} DabF) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
sss. _{(RF) 4 - (K-} DabL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3.

各括弧において、一番左の（Ｎ末端の）アミノ酸は、最後の１つを除いて分岐部分である。挙げられた例では、括弧部分の間の単一のアミノ酸及びＺ部分は分岐部分である。 In each parenthesis, the leftmost (N-terminal) amino acid is branched except for the last one. In the example given, the single amino acid between the bracket parts and the Z part are branched parts.

特定の実施態様では、本発明の該第１の側面による薬剤として使用されるペプチドデンドリマーは、デンドリマーのＺ及び／又はＮ末端のＤがアルキルカルボン酸部分と結合し、具体的には一般式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯ−によって表されるアルキルカルボン酸部分と結合し、より具体的にはｎは４〜２２の間の数であり、よりいっそう具体的には、ｎは４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４又は１６であることで特徴付けられる。 In a particular embodiment, the peptide dendrimer used as a medicament according to the first aspect of the invention comprises a dendrimer in which the Z and / or N-terminal D is linked to an alkyl carboxylic acid moiety, specifically the general formula CH ₃ (CH ₂ ) _n is attached to an alkyl carboxylic acid moiety represented by CO—, more specifically n is a number between 4 and 22, and more specifically, n is 4, 5, It is characterized by being 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14 or 16.

特定の実施態様では、デンドリマーは（ホモ）ダイマーとして存在する。二量化は、例えば、Ｚ中心部分のシステイン残基を通じた２つのデンドリマーの結合によって達成される。 In certain embodiments, the dendrimer is present as a (homo) dimer. Dimerization is achieved, for example, by conjugation of two dendrimers through a cysteine residue in the Z central moiety.

特定の実施態様では、ペプチドデンドリマーは細菌感染症の予防又は治療において使用される。特定の実施態様では、前記細菌感染症は、緑膿菌、アシネトバクター・バウマニ又は大腸菌、又は黄色ブドウ球菌、具体的にはメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ株）を含むが、これに限定されないグラム陰性又は陽性の細菌によって引き起こされる。 In certain embodiments, peptide dendrimers are used in the prevention or treatment of bacterial infections. In a particular embodiment, said bacterial infection comprises Gram-negative, including but not limited to Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii or E. coli, or S. aureus, specifically methicillin-resistant S. aureus (MRSA strain). Or caused by positive bacteria.

本発明の第２の側面によれば、一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓであり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１でありえ、
Ｚは中心部分であり、
それぞれのＢ（Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６）はその他のＢから独立して分岐部分であり、
それぞれのＤ（Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６）はその他のＤから独立して、
ｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ、又は
ｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃ（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸である。）
である。）
で表されるペプチドデンドリマーが提供される。 According to a second aspect of the present invention, the general formula _{^{X- (B 2 - [Y 2}} ] s -D 1) 2 -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 _{^{) 8 - (B 3 - [}} Y 3] r -D 2) is _4,
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of a binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of the amino acid adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in
o, p, q, r and s can be 0 or 1;
Z is the central part,
Each B (B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ ) is a branched portion independently of the other B,
Each D (D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ ) is independent of the other D
i. Dipeptide CH, HC, CC or HH, or ii. Tripeptides HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(In the formula, H is an arbitrary amino acid containing a hydrophobic side chain, and is C (L) -2,3-diaminobutyric acid.)
It is. )
The peptide dendrimer represented by is provided.

いくつかの実施態様では、一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、かつ、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するＤのアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓであり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１でありえ、
Ｚは中心部分であり、
Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６はその他のＢからそれぞれ独立して、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ−１（ＮＨ）_２ＣＯ−で表されるジアミノアルキルカルボン酸部分を表し、ｎは２〜１０の間の数であり、より具体的にはｎは２、３、４又は５であり、
Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６はその他のＤからそれぞれ独立して、
ｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ、又は
ｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃは（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸であることを特徴とする。）
である。）
で表される、ペプチドデンドリマーが提供される。 In some embodiments, the general formula _{^{X- (B 2 - [Y 2}} ] s -D 1) 2 -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 ) _8- (B ^3- [Y ³ ] _r -D ² ) ₄ , and
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of a binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of amino acid D adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in
o, p, q, r and s can be 0 or 1;
Z is the central part,
B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ are each independently of the other B and are each a diaminoalkylcarboxylic acid moiety represented by the general formula C _n H _2n-1 (NH) ₂ CO— And n is a number between 2 and 10, more specifically n is 2, 3, 4 or 5,
D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ are each independently from the other D
i. Dipeptide CH, HC, CC or HH, or ii. Tripeptides HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(Wherein H is any amino acid containing a hydrophobic side chain, and C is characterized by (L) -2, 3-diaminobutyric acid).
It is. )
A peptide dendrimer represented by:

いくつかの実施態様では、一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、かつ、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するＤのアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓであり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１でありえ、
Ｚは中心部分であり、
Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６はその他のＢからそれぞれ独立して、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ−１（ＮＨ）_２ＣＯ−で表されるジアミノアルキルカルボン酸部分を表し、ｎは２〜１０の間の数であり、より具体的にはｎは２、３、４又は５であり、
Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６はその他のＤからそれぞれ独立して、
ｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ、又は
ｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃは（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸であり、かつ、Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６のうちの少なくとも１つがＣＨ、ＨＣ、ＣＣ、ＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ又はＣＣＣから選択されることを特徴とする。）
である。）
で表される、ペプチドデンドリマーが提供される。 In some embodiments, the general formula _{^{X- (B 2 - [Y 2}} ] s -D 1) 2 -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 ) _8- (B ^3- [Y ³ ] _r -D ² ) ₄ , and
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of a binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of amino acid D adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in
o, p, q, r and s can be 0 or 1;
Z is the central part,
B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ are each independently of the other B and are each a diaminoalkylcarboxylic acid moiety represented by the general formula C _n H _2n-1 (NH) ₂ CO— And n is a number between 2 and 10, more specifically n is 2, 3, 4 or 5,
D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ are each independently from the other D
i. Dipeptide CH, HC, CC or HH, or ii. Tripeptides HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
Wherein H is any amino acid containing a hydrophobic side chain, C is (L) -2,3-diaminobutyric acid, and D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D Characterized in that at least one of ⁵ and D ⁶ is selected from CH, HC, CC, HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC or CCC.)
It is. )
A peptide dendrimer represented by:

いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ｌｅｕ、Ｄａｂ−Ｔｒｐ、Ｄａｂ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｔｒｐ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、ＤａｂＡ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ、Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ、Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｏｒｎ−Ｌｅｕ、Ｏｒｎ−Ｐｈｅ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ又はＧｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓである。 In some embodiments, Z is Lys-Leu, Arg-Leu, Dab-Trp, Dab-Leu, Leu-Lys, Lys-Trp, Lys-Phe, Lys-Lys, Leu-Leu, DabA-Ala, Lys. -Lys-Leu, Lys-Leu-Leu, Leu-Lys-Leu, Lys-Leu-Lys, Orn-Leu, Orn-Phe, Arg-Phe or Gly-Ser-Cys.

Ｚは中心部分であり、かつ、本発明のデンドリマーを作成するための固相化学的手法では、Ｚは合成の出発点である。多数の異なる短ペプチドが、実験的に用いられ、全面的に高い成功率を収めている。いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ＣＯＮＨ_２）である。いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ｌｅｕ、Ｄａｂ−Ｌｅｕ又はＤａｂ−Ｔｒｐである。いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ又はＬｅｕである。 Z is a central moiety, and in the solid phase chemistry approach to making the dendrimers of the invention, Z is the starting point of synthesis. A number of different short peptides have been used experimentally and have a high overall success rate. In some embodiments, Z is _{Lys-Leu-Lys (CONH 2} ). In some embodiments, Z is Lys-Leu, Arg-Leu, Dab-Leu or Dab-Trp. In some embodiments, Z is Lys or Leu.

いくつかの実施態様では、Ｈはトリプトファン、ロイシン又はアラニンから選択される。いくつかの実施態様では、Ｃは（Ｌ）−２−３−ジアミノ酪酸である。 In some embodiments, H is selected from tryptophan, leucine or alanine. In some embodiments, C is (L) -2-3-diaminobutyric acid.

いくつかの実施態様では、ＺはトリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ又はＣＣＣであり、Ｈ及びＣは上記の意味を持つ。 In some embodiments, Z is the tripeptide HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC, and H and C have the above meanings.

いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓである。 In some embodiments, Z is Lys-Leu-Lys.

いくつかの実施態様では、ＺはトリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ又はＣＣＣであり、Ｈ及びＣは上記の意味を持ち、かつ、ＺはＺのアミノ官能基とアルキルカルボン酸のカルボキシ基との間のアミド結合によって、一般式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯ−によって表されるアルキルカルボン酸部分と結合する。 In some embodiments, Z is the tripeptide HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC, H and C have the above meanings, and Z is the amino functional group of Z and alkyl by an amide bond between the carboxy group of the carboxylic acid, it binds to the general formula _CH 3 _{(CH 2)} alkylcarboxylic acid moiety represented by n CO-.

いくつかの実施態様では、ｎは４〜２２の間の数であり、具体的には４〜１０の間の数であり、より具体的には４〜８の間の数である。 In some embodiments, n is a number between 4 and 22, in particular a number between 4 and 10, more particularly a number between 4 and 8.

いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓであり、ＺはＺのアミノ官能基とアルキルカルボン酸のカルボキシ基との間のアミド結合によって、アルキルカルボン酸と結合する。 In some embodiments, Z is Lys-Leu-Lys, and Z is linked to the alkyl carboxylic acid by the amide bond between the amino function of Z and the carboxy group of the alkyl carboxylic acid.

本発明の第３の側面によれば、一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、
それぞれのＹ（Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５及びＹ６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓであり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１でありえ、
Ｚは中心部分であり、
それぞれのＢ（Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６）はその他のＢから独立して分岐部分であり、
それぞれのＤ（Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６）はその他のＤから独立して、
ｉ．アミノ酸Ｃ又はＨ
ｉｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ、又は
ｉｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）
であり、かつ、Ｚ及び／又はＮ末端のＤが一般式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯ−によって表されるアルキルカルボン酸部分と結合し、具体的にはｎは４〜２２の間の数であり、より具体的にはｎは６、７、８、９、１０、１１、１２、１４又は１６であることを特徴とする。）
で表される、ペプチドデンドリマーが提供される。。 According to a third aspect of the present invention, the general formula X- (B ^2- [Y ² ] _s -D ¹ ) ₂ -B ¹ -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 _{^{) 8 - (B 3 - [}} Y 3] r -D 2) is _4,
Each Y (Y2, Y3, Y4, Y5 and Y6) is independent of the other Y and has the formula
H-Cys or CH-Cys of a binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of the amino acid adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in
o, p, q, r and s can be 0 or 1;
Z is the central part,
Each B (B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ ) is a branched portion independently of the other B,
Each D (D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ ) is independent of the other D
i. Amino acid C or H
ii. Dipeptide CH, HC, CC or HH, or iii. Tripeptides HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(Wherein, H is any amino acid comprising a hydrophobic side chain, and C is any amino acid comprising a cationic side chain)
And Z and / or N-terminal D is bonded to an alkylcarboxylic acid moiety represented by the general formula CH ₃ (CH ₂ ) _n CO—, specifically, n is a number between 4-22. More specifically, n is 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14 or 16. )
A peptide dendrimer represented by: .

いくつかの実施態様では、一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、かつ、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓであり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１であり、
Ｚは中心部分であり、
Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６はその他のＢからそれぞれ独立して、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ−１（ＮＨ_２）_２ＣＯ−で表されるジアミノアルキルカルボン酸部分を表し、ｎは２〜１０の間の数であり、より具体的にはｎは２、３、４又は５であり、
Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６はその他のＤからそれぞれ独立して、
ｉ．アミノ酸Ｃ又はＨ
ｉｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ又はＨＨ
ｉｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ又はＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）
であり、Ｚ及び／又はＮ末端のＤがアルキルカルボン酸部分と結合することを特徴とする。）
で表される、ペプチドデンドリマーが提供される。。 In some embodiments, the general formula _{^{X- (B 2 - [Y 2}} ] s -D 1) 2 -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 ) _8- (B ^3- [Y ³ ] _r -D ² ) ₄ , and
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of a binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of the amino acid adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in
o, p, q, r and s are 0 or 1,
Z is the central part,
Each of B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ independently from the other B is a diaminoalkylcarboxylic acid represented by the general formula C _n H _{2 n-1} (NH ₂ ) ₂ CO- Represents a moiety, n is a number between 2 and 10, more specifically n is 2, 3, 4 or 5;
D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ are each independently from the other D
i. Amino acid C or H
ii. Dipeptide CH, HC, CC or HH
iii. Tripeptide HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(Wherein, H is any amino acid comprising a hydrophobic side chain, and C is any amino acid comprising a cationic side chain)
Wherein Z and / or N-terminal D is bonded to an alkylcarboxylic acid moiety. )
A peptide dendrimer represented by: .

いくつかの実施態様では、Ｚ及び／又はＮ末端のＤが一般式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯ−によって表されるアルキルカルボン酸部分と結合し、具体的にはｎは６〜２２の間の数であり、より具体的には、ｎは６、７、８、９、１０、１１、１２、１４又は１６である。 In some embodiments, the Z and / or N-terminal D is linked to an alkyl carboxylic acid moiety represented by the general formula CH ₃ (CH ₂ ) _n CO—, in particular n is between 6-22. And, more specifically, n is 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 14 or 16.

いくつかの実施態様では、ｎは４〜２２の間の数であり、具体的には４〜１０の間の数であり、より具体的には４〜８の間の数である。 In some embodiments, n is a number between 4 and 22, in particular a number between 4 and 10, more particularly a number between 4 and 8.

いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ｌｅｕ、Ｄａｂ−Ｔｒｐ、Ｄａｂ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｔｒｐ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、ＤａｂＡ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ、Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ、Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｏｒｎ−Ｌｅｕ、Ｏｒｎ−Ｐｈｅ、Ａｒｇ−Ｐｈｅ又はＧｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓである。 In some embodiments, Z is Lys-Leu, Arg-Leu, Dab-Trp, Dab-Leu, Leu-Lys, Lys-Trp, Lys-Phe, Lys-Lys, Leu-Leu, DabA-Ala, Lys. -Lys-Leu, Lys-Leu-Leu, Leu-Lys-Leu, Lys-Leu-Lys, Orn-Leu, Orn-Phe, Arg-Phe or Gly-Ser-Cys.

いくつかの実施態様では、ＺはトリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ又はＣＣＣであり、Ｈ及びＣは上記の意味を持つ。 In some embodiments, Z is the tripeptide HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC, and H and C have the above meanings.

いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓである。 In some embodiments, Z is Lys-Leu-Lys.

いくつかの実施態様では、ＺはトリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ又はＣＣＣであり、Ｈ及びＣは上記の意味を持ち、かつ、ＺはＺのアミノ官能基とアルキルカルボン酸のカルボキシ基との間のアミド結合によって、一般式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯ−によって表されるアルキルカルボン酸部分と結合する。 In some embodiments, Z is the tripeptide HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC, H and C have the above meanings, and Z is the amino functional group of Z and alkyl by an amide bond between the carboxy group of the carboxylic acid, it binds to the general formula _CH 3 _{(CH 2)} alkylcarboxylic acid moiety represented by n CO-.

いくつかの実施態様では、ｎは４〜２２の間の数であり、具体的には４〜１０の間の数であり、より具体的には４〜８の間の数である。 In some embodiments, n is a number between 4 and 22, in particular a number between 4 and 10, more particularly a number between 4 and 8.

いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓであり、ＺはＺのアミノ官能基とアルキルカルボン酸のカルボキシ基との間のアミド結合によって、アルキルカルボン酸と結合する。 In some embodiments, Z is Lys-Leu-Lys, and Z is linked to the alkyl carboxylic acid by the amide bond between the amino function of Z and the carboxy group of the alkyl carboxylic acid.

Ｚは中心部分であり、かつ、本発明のデンドリマーを作成するための固相化学的手法では、Ｚは合成の出発点である。多数の異なる短ペプチドが、実験的に用いられ、全面的に高い成功率を収めている。いくつかの実施態様では、ＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ＣＯＮＨ_２）である。 Z is a central moiety, and in the solid phase chemistry approach to making the dendrimers of the invention, Z is the starting point of synthesis. A number of different short peptides have been used experimentally and have a high overall success rate. In some embodiments, Z is _{Lys-Leu-Lys (CONH 2} ).

いくつかの実施態様では、Ｈはロイシン、フェニルアラニン、アラニン、チロシン又はトリプトファンから選択される。いくつかの実施態様では、Ｃはリジン、アルギニン又は（Ｌ）−２−３−ジアミノ酪酸から選択される。 In some embodiments, H is selected from leucine, phenylalanine, alanine, tyrosine or tryptophan. In some embodiments, C is selected from lysine, arginine or (L) -2-3-diaminobutyric acid.

いくつかの実施態様では、ペプチドデンドリマーは式ｇ及びｈを除く表１に示す式によって特徴付けられる。 In some embodiments, the peptide dendrimer is characterized by the formulas shown in Table 1 excluding formulas g and h.

本明細書中に開示される、本発明の任意の側面の特定の実施態様では、デンドリマーは全体が、又は部分的に上記で特定されるアミノ酸のＤ体のエナンチオマーからなる。 In certain embodiments of any of the aspects of the invention disclosed herein, the dendrimer consists entirely or partially of the enantiomers of the D form of the amino acids specified above.

例えば、Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５又はＤ^６、Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５又はＢ^６、又はＺ又はＨ、又はＣのような、単一の分離可能な特徴の代替案が明細書で「実施態様」と説明されるいずれの場所も、そのような代替が自由に結びついて、本明細書中に開示される本発明の個別の実施態様を形成する可能性があることは当然である。 For example, D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ or D ⁶ , B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ or B ⁶ , or Z or H, or C Wherever an alternative of one separable feature is described as an “embodiment” in the specification, such alternatives are free to combine to implement the individual implementations of the invention disclosed herein. Of course, there is the possibility of forming an aspect.

いくつかの実施態様では、ペプチドデンドリマーは表１ｂの式によって特徴付けられる：
In some embodiments, the peptide dendrimer is characterized by the formula in Table 1b:

いくつかの実施態様では、ペプチドデンドリマーは下記の式：
ａ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｂ．（ＫＬ）_４−（Ｂ−ＫＬ）_２−Ｂ−ＫＬ
ｃ．（ＲＬ）_４−（Ｂ−ＲＬ）_２−Ｂ−ＲＬ
ｄ．（ＫＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２Ｋ−ＫＬ
ｅ．（ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｆ．（ＤａｂＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＤａｂＬ
ｇ．（ＬＫ）_８−（Ｋ−ＬＫ）_４−（Ｋ−ＬＫ）_２−Ｋ−ＬＫ
ｈ．（ＫＹ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｉ．（ＬＡ）_８−（Ｋ−ＬＫ）_４−（Ｋ−ＬＡ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｊ．（ＫＷ）_８−（Ｋ−ＫＷ）_４−（Ｋ−ＫＷ）_２−Ｋ−ＫＷ
ｋ．（ＫＦ）_８−（Ｋ−ＫＦ）_４−（Ｋ−ＫＦ）_２−Ｋ−ＫＦ
ｌ．（ＫＬ）_８−（Ｂ−ＫＬ）_４−（Ｂ−ＫＬ）_２−Ｂ−ＫＬ
ｍ．（ＲＬ）_８−（Ｂ−ＲＬ）_４−（Ｂ−ＲＬ）_２−Ｂ−ＲＬ
ｎ．（ＬＬ）_８−（Ｋ−ＫＫ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＫＫ
ｏ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＤａｂＬ
ｐ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｑ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｒ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＬ
ｓ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＡ
ｔ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＡ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｕ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＡ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｖ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬＣＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｗ．（ＫＬ）_１６−（Ｋ−ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬＣＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｘ．（ＫＬ）_１６−（Ｋ−ＫＬＣＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｙ．（ＲＬ）_８−（Ｋ−ＲＬＣＲＬ）_４−（Ｋ−ＲＬ）_２−Ｋ−ＲＬ
ｚ．（ＫＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＫＬ）_２−Ｋ−ＫＫＬ
ａａ．（ＫＬＬ）_４−（Ｋ−ＫＬＬ）_２−Ｋ−ＫＬＬ
ｂｂ．（ＬＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＬＫＬ
ｃｃ．（ＫＬＬ）_８−（Ｋ−ＫＬＬ）_４−（Ｋ−ＫＬＬ）_２−Ｋ−ＫＬＬ
ｄｄ．（ＬＫＬ）_８−（Ｋ−ＬＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＬＫＬ
ｅｅ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＫＫＬ
ｆｆ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＬ
ｇｇ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ
ｈｈ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＬＫＬ
ｉｉ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３
ｊｊ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３
ｋｋ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｌｌ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１０ＣＨ_３
ｍｍ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３
ｎｎ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３
ｏｏ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｐｐ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１０ＣＨ_３
ｑｑ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１４ＣＨ_３
ｒｒ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３
ｓｓ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_２２ＣＨ_３
ｔｔ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３
ｕｕ．（ＣＨ_３（ＣＨ_２）_４ＣＯ−ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｖｖ．（ＣＨ_３（ＣＨ_２）_４ＣＯ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｗｗ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＫＫ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＬＬ
ｘｘ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＬＬ）_４−（Ｋ−ＫＫ）_２−Ｋ−ＬＬ
ｙｙ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１４ＣＨ_３
ｚｚ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_２２ＣＨ_３
ａａａ．（ＯｒｎＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＦ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｂｂｂ．（ＯｒｎＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｃｃｃ．（ＲＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｄｄｄ．（ＯｒｎＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｅｅｅ．（ＯｒｎＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＦ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｆｆｆ．（ＲＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
によって特徴付けられる。 In some embodiments, the peptide dendrimer has the formula:
a. _{(KL) 4 - (K-} KL) 2 -K-KL
b. _{(KL) 4 - (B-} KL) 2 -B-KL
c. _{(RL) 4 - (B-} RL) 2 -B-RL
d. _{(KKL) 4 - (KKL)} 2 KKL
e. _{(DabW) 4 - (K-} DabW) 2 -K-DabW
f. _{(DabL) 4 - (K-} DabL) 2 -K-DabL
g. _{(LK) 8 - (K-} LK) 4 - (K-LK) 2 -K-LK
h. _{(KY) 8 - (K-} KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KL
i. _{(LA) 8 - (K-} LK) 4 - (K-LA) 2 -K-KL
j. _{(KW) 8 - (K-} KW) 4 - (K-KW) 2 -K-KW
k. _{(KF) 8 - (K-} KF) 4 - (K-KF) 2 -K-KF
l. _{(KL) 8 - (B-} KL) 4 - (B-KL) 2 -B-KL
m. _{(RL) 8 - (B-} RL) 4 - (B-RL) 2 -B-RL
n. _{(LL) 8 - (K-} KK) 4 - (K-LL) 2 -K-KK
o. _{(DabL) 8 - (K-} DabL) 4 - (K-DabL) 2 -K-DabL
p. _{(DabL) 8 - (K-} DabW) 4 - (K-DabL) 2 -K-DabW
q. _{(DabL) 8 - (K-} DabL) 4 - (K-DabW) 2 -K-DabW
r. _{(DabL) 8 - (K-} DabW) 4 - (K-DabW) 2 -K-DabL
s. _{(DabL) 8 - (K-} DabW) 4 - (K-DabW) 2 -K-DabA
t. _{(DabL) 8 - (K-} DabW) 4 - (K-DabA) 2 -K-DabW
u. _{(DabL) 8 - (K-} DabA) 4 - (K-DabW) 2 -K-DabW
v. _{(KL) 8 - (K-} KLCKL) 4 - (K-KL) 2 -K-KL
w. _{(KL) 16 - (K-} KL) 8 - (K-KLCKL) 4 - (K-KL) 2 -K-KL
x. _{(KL) 16 - (K-} KLCKL) 8 - (K-KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KL
y. _{(RL) 8 - (K-} RLCRL) 4 - (K-RL) 2 -K-RL
z. _{(KKL) 4 - (K-} KKL) 2 -K-KKL
aa. _{(KLL) 4 - (K-} KLL) 2 -K-KLL
bb. _{(LKL) 4 - (K-} LKL) 2 -K-LKL
cc. _{(KLL) 8 - (K-} KLL) 4 - (K-KLL) 2 -K-KLL
dd. _{(LKL) 8 - (K-} LKL) 4 - (K-LKL) 2 -K-LKL
ee. _{(KL) 8 - (KKL)} 4 - (K-LKL) 2 -K-KKL
ff. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-LKL) 2 -K-KLL
gg. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-LKL) 2 -K-KLK
hh. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-LKL) 2 -K-LKL
ii. _{(KL) 4 - (K-} KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 4 CH 3
jj. _{(KL) 4 - (K-} KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 6 CH 3
kk. _{(KL) 4 - (K-} KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
ll. _{(KL) 4 - (K-} KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 10 CH 3
mm. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 4 CH 3
nn. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 6 CH 3
oo. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
pp. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 10 CH 3
qq. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 14 CH 3
rr. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 16 CH 3
ss. _{(KL) 8 - (K-} KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 22 CH 3
tt. _{(KL) 4 - (K-} KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 16 CH 3
uu. _{(CH 3 (CH 2) 4} CO-KL) 8 - (K-KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KL
vv. _{(CH 3 (CH 2) 4} CO-KL) 4 - (K-KL) 2 -K-KL
www. _{(KK) 8 - (K-} KK) 4 - (K-LL) 2 -K-LL
xx. _{(KK) 8 - (K-} LL) 4 - (K-KK) 2 -K-LL
yy. _{(KL) 4 - (K-} KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 14 CH 3
zz. _{(KL) 4 - (K-} KL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 22 CH 3
aaa. _{(OrnL) 4 - (K-} DabF) 2 -K-KL
bbb. _{(OrnF) 4 - (K-} DabL) 2 -K-KL
ccc. _{(RF) 4 - (K-} DabL) 2 -K-KL
ddd. _{(OrnF) 4 - (K-} DabL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
eee. _{(OrnL) 4 - (K-} DabF) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
fff. _{(RF) 4 - (K-} DabL) 2 -K-KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
Is characterized by

本発明は、さらなる実施態様及び利点が引き出されうる、以下の実施例及び図面によってさらに説明される。これらの実施例は本発明を説明することを意図するが、その範囲を限定するものではない。 The invention is further illustrated by the following examples and figures, from which further embodiments and advantages may be derived. These examples are intended to illustrate the invention but do not limit its scope.

異なる世代、分岐部分及び電荷疎水比を含む様々な化合物の第１ライブラリーは構造活性相関（ＳＡＲ）に関する識見を得るために合成された。ペプチドのＣ末端から第２位置の荷電したアミノ酸を含むことによる、各世代に荷電し、かつ疎水性のアミノ酸を有することで高い活性のために効果があることが分かった。 A first library of various compounds containing different generations, branching moieties and charge to hydrophobic ratios were synthesized to gain insight on structure activity relationship (SAR). It was found that having a charged and hydrophobic amino acid for each generation by containing the charged amino acid at the second position from the C-terminus of the peptide is effective for high activity.

疎水性側鎖を含むＡＭＰＤのライブラリーが合成され、かつ、試験された。鎖の長さがＣ_６〜Ｃ_２４のカルボン酸は、分岐部分間のＫＬモチーフ（ｍｏｔｉｖｅ）を含む第２又は第３世代ＡＭＰＤのコアに導入されたリジンに結合する（図４）。疎水性側鎖を含む第２又は第３世代のＡＭＰＤ（ＭＳｔ−２６０〜ＭＳｔ−２６７）は、一般的な抗生物質に対する耐性を持つ臨床分離株を含む緑膿菌に対して試験された、最も強力な構造であると考えられた。第３世代のＡＭＰＤへの疎水性側鎖の付加は結果として溶血作用の増加をもたらすが、ＡＭＰＤは溶血発生前の低濃度中で格段に活性が強い。 A library of AMPD containing hydrophobic side chains was synthesized and tested. Carboxylic acids with chain lengths of C _{6 to} C ₂₄ bind to lysines introduced into the core of second or third generation AMPD containing KL motifs between the branched portions (FIG. 4). Second or third generation AMPD containing hydrophobic side chains (MSt-260 to MSt-267) was most tested against P. aeruginosa, including clinical isolates resistant to common antibiotics. It was considered a powerful structure. Addition of hydrophobic side chains to third generation AMPD results in increased hemolysis, but AMPD is much more active at low concentrations prior to hemolysis.

１次又は２次構造のペプチドデンドリマーの活性に関する試験は活性又は不活性の化合物の２次構造は類似であり、かつかなりランダムコイルであることを示した。しかし、活性化合物は疎水性環境と接触するときは広がる傾向にある。中性の脂質小胞ではなく、負に帯電した脂質小胞からの５（６）−カルボキシフルオレセイン（ＣＦ）の漏出は活性変化の役割を示す。疎水性側鎖を有する、及び有しないＡＭＰＤの反応速度論は、脂質がペプチドデンドリマーに結合する場合のより早い殺菌を示した。 Studies on the activity of peptide dendrimers of primary or secondary structure showed that the secondary structure of active or inactive compounds is similar and fairly random coils. However, active compounds tend to spread when in contact with a hydrophobic environment. Leakage of 5 (6) -carboxyfluorescein (CF) from negatively charged lipid vesicles rather than neutral lipid vesicles indicates a role for activity change. The kinetics of AMPD with and without hydrophobic side chains showed faster killing when lipids bound to peptide dendrimers.

材料及び試薬
全ての試薬、塩及びバッファーはＡｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｋａ、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、ＴＣＩ Ｅｕｒｏｐｅ又はＤｒ．Ｇｒｏｇｇ Ｃｈｅｍｉｅ ＡＧのいずれかから購入した。ＰｙＢＯＰ、アミノ酸及びそれらの誘導体はＡｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ（アメリカ合衆国）、ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ（スイス国）、ＩＲＩＳ Ｂｉｏｔｅｃｈ（ドイツ国）、ＰｏｌｙＰｅｐｔｉｄｅ（フランス国）、ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ（上海）から購入した。アミノ酸は以下の誘導体として使用された：Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−β−Ａｌａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｄａｐ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｂｏｃ）−ＯＨ、４−Ｆｍｏｃ−アミノメチル安息香酸（ＡＭＢＡ）、Ｆｍｏｃ−γ−Ａｂｕ−ＯＨ（ＧＡＢＡ）。ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ ＮＨ_２（荷重：０．３２ｍｍｏｌ／ｇ）及びＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ ＲＡＭ（荷重：０．２２〜０．２６ｍｍｏｌ・ｇ^−１）レジンはＲａｐｐ Ｐｏｌｙｍｅｒｅ（ドイツ国）から購入した。５（６）−カルボキシフルオレセイン（ＣＦ）はＳｉｇｍａから購入した。ベシクル調製に利用される卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）及びＭｉｎｉ−ＥｘｔｒｕｄｅｒはＡｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓから購入した。ペプチドデンドリマーの合成は、ポリエチレンのフリット、テフロン（登録商標）の栓及びストッパーが取り付けられたポリプロピレンシリンジ内で、手動で行われた。分析ＲＰ−ＵＨＰＬＣは、Ｄｉｏｎｅｘ Ａｃｃｌａｉｍ ＲＳＬＣ １２０ Ｃ１８カラム（２．２μｍ、１２０Å、３．０×５０ｍｍ、流速１．２ｍｌ・ｍｉｎ^−１）を用いたＤｉｏｎｅｘ ＵＬＴＩＭＡＴＥ ３０００ Ｒａｐｉｄ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ＬＣ Ｓｙｓｔｅｍ（ＵＬＴＩＭＡＴＥ−３０００ＲＳ ｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒ）で実行した。化合物は２１４ｎｍの紫外線吸収により検出した。データの記録及び処理はＤｉｏｎｅｘ Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．８０（分析ＲＰ−ＨＰＬＣ）で行った。予備のＲＰ−ＨＰＬＣはＤｒ．Ｍａｉｓｃｈ Ｇｍｂｈ Ｒｅｐｒｏｓｐｈｅｒカラム（Ｃ１８−ＤＥ、１００×３０ｍｍ、５μｍ、孔経１００Å、流速４０ｍＬ・ｍｉｎ^−１）を用いたＷａｔｅｒｓ Ｐｒｅｐ ＬＣ２４８９クロマトグラフィーシステムで実行した。化合物は２１４ｎｍの紫外線吸収により検出した。ＲＰ−ＨＰＬＣはＨＰＬＣ級のアセトニトリル及びｍＱ脱イオン水を用いて実行した。溶出溶液は：Ａ ０．１％ＴＦＡを含む水；Ｂ 水／アセトニトリル（５０：５０）；Ｃ ０．１％ＴＦＡを含む水／アセトニトリル（１０：９０）；Ｄ ０．１％ＴＦＡを含む水／アセトニトリル（４０：６０）とした。ＭＳスペクトル、アミノ酸分析及びＤＯＳＹ−ＮＭＲ測定は、ベルン大学の化学科及び生化学科の質量分析、タンパク質分析及びＮＭＲの設備によってそれぞれ提供された。収率は、他に記載がない限り、定量的なアミノ酸分析（ＡＡＡ）で決定した。蛍光測定は、攪拌機及び温度制御器（他に記載がない限り２５℃での測定）を備えた蛍光分光光度計（Ｃａｒｙ Ｅｃｌｉｐｓｅ、Ｖａｒｉａｎ）で実行された。 Materials and Reagents All reagents, salts and buffers are available from Aldrich, Fluka, Acros Organics, TCI Europe or Dr. Purchased from any of Grogg Chemie AG. PyBOP, amino acids and their derivatives were purchased from Advanced ChemTech (USA), NovaBiochem (Switzerland), IRIS Biotech (Germany), PolyPeptide (France), GL Biochem (Shanghai). Amino acids were used as the following derivatives: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-β-Ala-OH, Fmoc-Arg (Pbf) -OH, Fmoc-D-Arg (Pbf) -OH, Fmoc-Asp (OtBu) -OH, Fmoc-Gln (Trt) -OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His (Boc) -OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-D-Leu-OH, Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-D-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Lys (Fmoc) -OH, Fmoc-D-Lys (Fmoc) -OH, Fmoc-Lys (Alloc) -OH, Fmoc-Phe- OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser (tBu) -OH, Fmoc-Thr (tBu) -O , Fmoc-Tyr (tBu) -OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Dap (Fmoc) -OH, Fmoc-D-Dap (Fmoc) -OH, Fmoc-Dab (Boc) -OH, 4-Fmoc-amino Methylbenzoic acid (AMBA), Fmoc-γ-Abu-OH (GABA). TentaGel S NH ₂ (load: 0.32 mmol / g) and TentaGel S RAM (load: 0.22 to 0.26 mmol · g ⁻¹ ) resin were purchased from Rapp Polymere (Germany). 5 (6) -carboxyfluorescein (CF) was purchased from Sigma. Egg phosphatidylcholine (EPC), egg phosphatidylglycerol (EPG) and Mini-Extruder used for vesicle preparation were purchased from Avanti Polar Lipids. Peptide dendrimers were synthesized manually in a polypropylene syringe fitted with a polyethylene frit, Teflon stopper and stopper. Analytical RP-UHPLC was performed using the Dionex ULTIMATE 3000 Rapid Separation LC System (ULTIMATE-3000RS diode) using a Dionex Acclaim RSLC 120 C18 column (2.2 μm, 120 mm, 3.0 × 50 mm, flow rate 1.2 ml · min ⁻¹ ). Executed with detector). The compound was detected by UV absorption at 214 nm. Data recording and processing was performed with Dionex Chromeleon Management System Version 6.80 (analytical RP-HPLC). Preliminary RP-HPLC was performed using Dr. The analysis was carried out on a Waters Prep LC2489 chromatography system using a Maisch Gmbh Reprosphere column (C18-DE, 100 × 30 mm, 5 μm, pore diameter 100 mm, flow rate 40 mL · min ⁻¹ ). The compound was detected by UV absorption at 214 nm. RP-HPLC was performed using HPLC grade acetonitrile and mQ deionized water. The elution solutions are: A water containing 0.1% TFA; B water / acetonitrile (50:50); C water containing 0.1% TFA / acetonitrile (10:90); D water containing 0.1% TFA. / Acetonitrile (40:60). MS spectra, amino acid analysis and DOSY-NMR measurements were provided by the Department of Chemistry and Biochemistry, University of Bern, Mass Spectrometry, Protein Analysis and NMR equipment, respectively. Yields were determined by quantitative amino acid analysis (AAA) unless otherwise stated. Fluorescence measurements were performed on a fluorescence spectrophotometer (Cary Eclipse, Varian) equipped with a stirrer and temperature controller (measurement at 25 ° C. unless otherwise stated).

デンドリマーの合成
修飾のないペプチドデンドリマー
レジン（ＴｅｎｔａＧｅｌ Ｓ ＲＡＭ）は８ｍＬのジクロロメタンで膨潤させ、そしてＤＭＦ中の２０％ピペリジン溶液（２×１０分）でレジンのＦｍｏｃ保護基を除去した。さらなる結合として、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウム）（３当量／Ｇ、Ｇ＝世代）及び約８ｍＬのＮＭＰ中のＤＩＰＥＡ（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）（５当量／Ｇ）の存在下で、レジンを保護されたアミノ酸（３当量／Ｇ）の１つでアシル化した。アミノ酸、誘導体又はジアミノ酸は１時間（Ｇ０）、２時間（Ｇ１）、３時間（Ｇ２）、４時間（Ｇ３）で結合した。反応の終了は２、４、６−トリニトロベンゼンスルホン酸溶液（ＴＮＢＳ）又は（プロリン用の）クロラニルテストを用いて確認した。ビーズが赤の場合（プロリンは茶色）、いくつかの遊離アミノ基があり、かつレジンテストは陽性であった。それらが無色の場合、遊離アミノ基がなく、かつレジンテストは陰性であった。結合は陽性のテスト後に繰り返された。未反応のペプチド鎖のキャッピングは無水酢酸及びジクロロメタン（１：１ｖ／ｖ）で１５分間行われた。各結合後、各シリンジ内のレジンは脱保護され（ＤＭＦ中の２０％ピペリジン、２×１０分）、続いてＴＮＢＳ又はクロラニルテストが行われ（テストは陽性でなければならない）、そして次に保護されたアミノ酸が添加された。合成の終わりに、末端のアミノ基は無水酢酸／ジクロロメタン（１：１）で２０分間アセチル化するか、又はアセチル化しないかのいずれかであった。レジンはメタノールで２回洗浄し、真空下で乾燥後、ＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９４：５：１ ｖ／ｖ／ｖ）を用いて４．５時間開裂を行った。システイン又はメチオニンを含むペプチドにおいては、開裂条件はＴＦＡ／ＴＩＳ／水／ＥＤＴ（９４／１／２．５／２．５ ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）である。濾過後、ペプチドを５０ｍＬの氷冷したｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）を用いて沈殿させ、４４００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、そしてＴＢＭＥで２回洗浄した。粗製ペプチドの精製のために、粗製ペプチドをＡ（１００％ｍＱ水、０．１％ＴＦＡ）に溶解し、予備ＲＰ−ＨＰＬＣに供し、そして凍結乾燥後にＴＦＡ塩として得た。記載のない限り、分析ＨＰＬＣに用いられた勾配は２．２分でＡ／Ｄ＝１００／０〜０／１００、１．２ｍＬ・ｍｉｎ^−１である。 Peptide dendrimer resin (TentaGel S RAM) without dendrimer synthetic modification was swollen with 8 mL of dichloromethane and the resin's Fmoc protecting group was removed with 20% piperidine solution in DMF (2 × 10 min). As additional linkages, PyBOP (benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium) (3 eq / G, G = generation) and DIPEA (N, N-diisopropylethylamine) (5 eq / G in about 8 mL NMP). The resin was acylated with one of the protected amino acids (3 equivalents / G) in the presence of Amino acids, derivatives or diamino acids were bound in 1 hour (G0), 2 hours (G1), 3 hours (G2), 4 hours (G3). The completion of the reaction was confirmed using 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid solution (TNBS) or chloranil test (for proline). When the beads were red (proline brown), there were some free amino groups and the resin test was positive. If they were colorless, there were no free amino groups and the resin test was negative. Binding was repeated after a positive test. Capping of the unreacted peptide chain was performed with acetic anhydride and dichloromethane (1: 1 v / v) for 15 minutes. After each conjugation, the resin in each syringe is deprotected (20% piperidine in DMF, 2 × 10 min) followed by a TNBS or chloranil test (test must be positive) and then protected Added amino acids. At the end of the synthesis, the terminal amino group was either acetylated with acetic anhydride / dichloromethane (1: 1) for 20 minutes or not. The resin was washed twice with methanol, dried under vacuum and cleaved for 4.5 hours with TFA / TIS / water (94: 5: 1 v / v / v). For peptides containing cysteine or methionine, the cleavage conditions are TFA / TIS / water / EDT (94/1 / 2.5 / 2.5 v / v / v / v). After filtration, the peptide was precipitated with 50 mL of ice-cold tert-butyl methyl ether (TBME), centrifuged at 4400 rpm for 15 minutes, and washed twice with TBME. For purification of the crude peptide, the crude peptide was dissolved in A (100% mQ water, 0.1% TFA), subjected to preparative RP-HPLC, and obtained as a TFA salt after lyophilization. Unless stated, the gradient used for analytical HPLC is A / D = 100/0-0/100, 1.2 mL min- ¹ at 2.2 minutes.

リジン側鎖に結合したカルボン酸を含むペプチドデンドリマー
合成は「修飾のないペプチドデンドリマー」に従って行った。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨが最初にレジンに結合した。最後のＦｍｏｃ基の脱保護の前にアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）保護基を、５ｍＬの無水ＤＣＭ及び２５当量のフェニルシラン（ＰｈＳｉＨ_３）に溶解した０．２５当量のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４を触媒として、乾燥条件下で除去した。該工程は２回繰り返し、間に無水ＤＣＭで２回レジンを洗浄した。第２サイクル後、レジンをＤＣＭで１時間洗浄し、そしてＴＮＢＳテストで遊離アミン基の検査を行うことによって脱保護を確認した。テストが赤であった場合、最初にＨＯＢｔ（５当量）、ＤＩＣ（５当量）及びＮＭＰ／ＤＣＭ（１／１ ｖ／ｖ）中のＤＩＰＥＡ（３当量）を添加したカルボン酸（５当量）をレジンに溶解させ、そして３〜４時間撹拌した。ＮＭＰ、メタノール、ＤＣＭで３回洗浄後、ＨＡＴＵ（５当量）及びＤＭＦ／ＤＣＭ（１／１ ｖ／ｖ）中のＤＩＰＥＡ（３当量）を溶解させたカルボン酸（５当量）を用いて結合を一晩繰り返した。最後のＦｍｏｃ基の脱保護はＮＭＰ、メタノール、ＤＣＭで３回洗浄後に行い、そしてＴＮＢＳテスト（無色）による遊離アミン基の検査の後に行い、続いて「修飾のないペプチドデンドリマー」に記載した開裂及び精製を行った。 Peptide dendrimer synthesis involving a carboxylic acid attached to the lysine side chain was performed according to the “unmodified peptide dendrimer”. Fmoc-Lys (Alloc) -OH was first attached to the resin. Prior to the final deprotection of the Fmoc group, the allyloxycarbonyl (Alloc) protecting group was dissolved in 5 mL anhydrous DCM and 25 equivalents of phenylsilane (PhSiH ₃ ) with 0.25 equivalents of tetrakis (triphenylphosphine) palladium ( Pd (PPh ₃ ) ₄ was removed as a catalyst under dry conditions, the process was repeated twice, washing the resin twice with anhydrous DCM in between.After the second cycle, the resin was washed with DCM for 1 hour, Deprotection was then confirmed by testing for free amine groups in the TNBS test, if the test was red, first HOBt (5 eq), DIC (5 eq) and NMP / DCM (1/1 v / The carboxylic acid (5 eq) with the addition of DIPEA (3 eq) in v) was dissolved in the resin and stirred for 3-4 hours.NMP, methanol After washing 3 times with DCM, coupling is repeated overnight using carboxylic acid (5 eq) in which DIPEA (3 eq) in HATU (5 eq) and DMF / DCM (1/1 v / v) is dissolved. The last deprotection of the Fmoc group was performed after washing 3 times with NMP, methanol, DCM and after examination of the free amine group by TNBS test (colorless), followed by “Unmodified Peptide Dendrimer”. Cleavage and purification were performed.

チオエーテル連結戦略を用いたペプチドデンドリマー合成
チオエーテル連結
コア及び鎖部分のペプチドは上記の手順に従って合成した。固相からのコアペプチドの開裂及び精製の前に、Ｎ末端を５ｍＬのＤＣＭ中のクロロ酢酸無水物溶液（Ｎ末端ごとに１０．０当量）で２回、１５分間クロロアセチル化した。レジンはＮＭＰ、メタノール及びＤＣＭで（それぞれ３回）洗浄した。 Peptide Dendrimer Synthesis Using a Thioether Linking Strategy The thioether linked core and chain portion peptides were synthesized according to the above procedure. Prior to cleavage of the core peptide from the solid phase and purification, the N-terminus was chloroacetylated twice for 15 minutes with a solution of chloroacetic acid anhydride (10.0 equivalents per N-terminus) in 5 mL of DCM. The resin was washed with NMP, methanol and DCM (3 times each).

典型的な実験では、コアペプチド（クロロアセチル基を含む配列、１．０当量）、及びＤＭＦ／水（１／１、ｖ／ｖ）中のＫＩ（２０．０当量）の溶液（３００μＬ）を５ｍＬ線のガラスフラスコに調製した。混合物は１０分間アルゴンで脱ガスした。第２の５ｍＬ線ガラスフラスコに鎖ペプチド（システイン含有配列、コア配列中のクロロアセチル基ごとに１．５当量）を（溶媒なしに）調製し、そしてフラスコをアルゴン／真空で３回脱ガスした。コアペプチド溶液を気密性シリンジで鎖ペプチドを含むガラスフラスコに移した。ＤＩＰＥＡ（５５．０当量）を添加し、そして溶液を室温で撹拌した。反応物を続いて分析ＲＰ−ＨＰＬＣに供した（気密性１０μＬガラスシリンジで採取した１．０μＬ反応混合物＋１００μＬの溶媒Ａ）。終了後（通常は一晩）、反応物は５ｍＬの溶媒Ａを加えてクエンチし、濾過しそして予備ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。収率はアミノ酸分析で補正した。 In a typical experiment, a solution (300 μL) of core peptide (sequence containing chloroacetyl group, 1.0 equivalent) and KI (20.0 equivalent) in DMF / water (1/1, v / v) It was prepared in a 5 mL line glass flask. The mixture was degassed with argon for 10 minutes. A chain peptide (cysteine containing sequence, 1.5 equivalents per chloroacetyl group in the core sequence) was prepared (without solvent) in a second 5 mL line glass flask and the flask was degassed 3 times with argon / vacuum . The core peptide solution was transferred by a gas tight syringe to a glass flask containing chain peptide. DIPEA (55.0 eq.) Was added and the solution was stirred at room temperature. The reaction was subsequently subjected to analytical RP-HPLC (1.0 μL reaction mixture + 100 μL of solvent A collected with a gas tight 10 μL glass syringe). After completion (usually overnight), the reaction was quenched by addition of 5 mL of solvent A, filtered and purified by preparative RP-HPLC. Yield was corrected by amino acid analysis.

上記の一般的な手順を用いて、出発物質ＣＣＳ−２：（ＣｌＡｃＫＬ）_４（ＫＫＬ）_２ＫＫＬＮＨ_２及びＣＣＳ−５：（ＫＬ）_２ＫＫＬＣＮＨ_２からＣＣＳ−２０：（ＫＬ）_８（ＫＫＬＣｘＫＬ）_４（ＫＫＬ）_２ＫＫＬＮＨ_２が予備ＲＰ−ＨＰＬＣ精製後に白色の泡状固体として得た（１１．２ｍｇ、１．８２μｍｏｌ、７３％）。分析ＲＰ−ＨＰＬＣ：ｔ_Ｒ＝１．５１分（２．２分でＡ／Ｄ＝１００／０〜０／１００、λ＝２１４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：Ｃ_２９０Ｈ_５５６Ｎ_８０Ｏ_５３Ｓ_４ ｃａｌｃ．／ｆｏｕｎｄ．６１４０．２８／６１４０．３ ［Ｍ］^＋、６２４０．４６／６２３９ ［Ｍ＋２Ｋ＋Ｎａ］^＋。「ｘ」はＣ末端に隣接するアミノ酸のＮ末端とアミド結合によって結合する酢酸部分を含むシステイン側鎖のチオエーテル結合を示す。 Starting material CCS-2: (ClAcKL) ₄ (KKL) ₂ KKLNH ₂ and CCS-5: (KL) ₂ KKLCNH ₂ to CCS-20: (KL) ₈ (KKLCxKL) ₄ using the general procedure described above. (KKL) ₂ KKLNH ₂ was obtained after preliminary RP-HPLC purification as a white foamy solid (11.2 mg, 1.82 μmol, 73%). Analysis _RP-HPLC: t R = 1.51 min (A / D = 100 / 0~0 / 100 at 2.2 min, λ = 214nm). MS (ESI +): C ₂₉₀ H ₅₅₆ N ₈₀ O ₅₃ S ₄ calc. / Found. 6140.28 / 6140.3 [M] ⁺ , 6240.46 / 6239 [M + 2K + Na] ⁺ . “X” indicates a thioether bond of a cysteine side chain containing an acetic acid moiety bonded by an amide bond to the N-terminus of an amino acid adjacent to the C-terminus.

アミノ酸分析
サンプルを、０．１％フェノール（ｖ／ｖ）含有６Ｍ塩酸を用いて、窒素真空下で、１１５℃で２２時間加水分解した（チャン、Ｊ．−Ｙ．及びクネヒト、Ｒ．、１９９２、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９７、５２−５８）。遊離したアミノ酸はフェニルイソチオシアネート（ＰＩＴＣ）と結合し、そして結果として生じるフェニルチオカルバミル（ＰＴＣ）アミノ酸は自動注入装置（Ｂｉｄｌｉｎｇｍｅｙｅｒ、Ｂ．Ａ．ら、１９８４、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｂ、３３６、９３−１０４）と共にＤｉｏｎｅｘ Ｓｕｍｍｉｔ ＨＰＬＣ装置を用いて、Ｎｏｖａ Ｐａｃｋ Ｃ１８カラム（４μｍ、３．９ｍｍ×１５０ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ）によってＲＰ−ＨＰＬＣによって分析された。対応する酢酸アンモニウムバッファーがｐＨ６．３、０．１４Ｍの酢酸ナトリウムバッファーと置き換わった。チオエーテルの橋にシステインが含まれた場合、カルボメチルシステイン（ＣＭＣｙｓ）として検出した。そうでない場合はシステインは加水分解中に崩壊した。加水分解が原因でトリプトファンは該方法では検出し得ず、かつアスパラギン／グルタミンはアスパラギン酸／グルタミン酸とそれぞれ同じ保持時間であった。フェニルアラニン及びＤａｐ溶出は同様に同じ保持時間であった。本分析ではセリンの検出量は通常、理論上の期待量より著しく低い。全ての収率、ＭＩＣ（最小発育阻止濃度）ＭＢＣ（最小殺菌濃度）及びＭＨＣ（最小溶血濃度）は該方法から結果として生じたペプチド含有量に従って補正した。 Amino acid analysis samples were hydrolyzed with 6M hydrochloric acid containing 0.1% phenol (v / v) at 115 ° C. for 22 hours under nitrogen vacuum (Chan, J.-Y. and Kunehito, R., 1992). Anal. Biochem., 197, 52-58). The liberated amino acid binds to phenyl isothiocyanate (PITC), and the resulting phenylthiocarbamyl (PTC) amino acid is injected by an autoinjector (Bidlingmeyer, BA et al., 1984, Journal of Chromatography B, 336, 93- 104) with a Dionex Summit HPLC instrument and analyzed by RP-HPLC on a Nova Pack C18 column (4 μm, 3.9 mm × 150 mm, Waters). The corresponding ammonium acetate buffer replaced the pH 6.3, 0.14 M sodium acetate buffer. When the thioether bridge contained cysteine, it was detected as carbomethylcysteine (CMCys). Otherwise, cysteine collapsed during hydrolysis. Due to hydrolysis, tryptophan could not be detected by the method and asparagine / glutamine had the same retention time as aspartic acid / glutamic acid, respectively. Phenylalanine and Dap elution were similarly at the same retention time. In this analysis, the detected amount of serine is usually significantly lower than the theoretical expected amount. All yields, MIC (minimum inhibitory concentration) MBC (minimum bactericidal concentration) and MHC (minimum hemolytic concentration) were corrected according to the peptide content resulting from the method.

生物学的アッセイ
抗微生物ペプチドＩの微量液体希釈法
抗微生物活性は枯草菌（ＢＲ１５１株）、大腸菌（ＤＨ５α株）、及び緑膿菌（ＰＡＯ１株）に対して評価した。微量液体希釈法は最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を決定するために用いた。細菌のコロニーはＬＢ培地中で、３７℃で一晩培養した。濃度は６００ｎｍでの吸光度を測定することで定量化し、そしてＯＤ_６００＝０．１（１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬ）まで希釈した。サンプルは１ｍｇ・ｍＬ^−１水溶液を原液として調製し、そして９６ウェルのマイクロプレート（Ｃｏｒｎｓｔａｒ、ポリプロピレン、未処理）中の栄養素ＬＢ培地中で２／３ずつ連続的に希釈した。サンプル溶液（５０μＬ）はＯＤ_{６００ｎｍ}が０．００１の希釈細菌懸濁液（５０μＬ）と混合した。これにより５×１０^５ＣＦＵ／ｍＬの最終希望植菌が生じた。プレートを３７℃で十分な増殖まで（１８−２４時間）培養した。各テストに対し、プレートの２つのカラムが無菌のコントロール（ＳＣ、培養液のみ）及び増殖コントロール（ＧＣ、培養液及び細菌種菌、抗体なし）として保持した。ＭＴＴの０．１％水溶液を１０μＬずつ各ウェルに加えた。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は肉眼で試験細菌（黄色）の目に見える増殖を阻害した抗菌物質（ペプチドデンドリマー）の最低濃度として定義した。微生物学的な研究のために、直鎖ペプチドＬｙｓＴｙｒＬｙｓＬｙｓＡｌａＬｅｕＬｙｓＬｙｓＬｅｕＡｌａＬｙｓＬｅｕＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１）をリファレンスとして用いた。 Biological Assays Microfluidic Dilution Method of Antimicrobial Peptide I The antimicrobial activity was evaluated against Bacillus subtilis (BR151 strain), E. coli (DH5α strain), and Pseudomonas aeruginosa (PAO1 strain). The microfluidic dilution method was used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC). Bacterial colonies were cultured overnight at 37 ° C. in LB medium. Concentrations were quantified by measuring absorbance at 600 nm and diluted to OD ₆₀₀ = 0.1 (1 × 10 ⁸ CFU / mL). Samples were prepared as ¹ mg.mL- ¹ aqueous solutions as stock solutions and serially diluted 2/3 in nutrient LB medium in 96 well microplates (Cornstar, polypropylene, untreated). The sample solution (50 μL) was mixed with a diluted bacterial suspension (50 μL) with an OD _{600 nm} of 0.001. This resulted in a final desired inoculum of 5 × 10 ⁵ CFU / mL. Plates were incubated at 37 ° C. until full growth (18-24 hours). For each test, two columns of the plate were maintained as sterile controls (SC, medium only) and growth controls (GC, medium and bacterial inoculum, no antibody). 10 μL of a 0.1% aqueous solution of MTT was added to each well. The minimum inhibitory concentration (MIC) was defined as the lowest concentration of antimicrobial substance (peptide dendrimer) that inhibited visible growth of the test bacteria (yellow) with the naked eye. For microbiological studies, the linear peptide LysTyrLysLysAlaLeuLysLysLeuAluLysLeuLeu (SEQ ID No. 1) was used as a reference.

抗微生物ペプチドＩＩの微量液体希釈法
抗微生物活性は緑膿菌（ＰＡＯ１株）、緑膿菌ＰＴ１４８２（Ａ−）、ＰＴ１４８５（Ａ−Ｂ−）、ＰＴ１１４９（Ａ−Ｂ−Ｃ−ａｌｇＣ）、ＰＴ３３１（Ｚ６１）（ＬＰＳ変異株）、緑膿菌ＰＥＪ２．６、ＰＥＪ９．１、ＺＥＭ１．Ａ、ＺＥＭ９．Ａ（ジュネーヴ大学／大学医療センターからの臨床分離株）、バークホルデリア・セノセパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ），黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ株）及びアシネトバクター・バウマニ（ジュネーヴ大学／大学医療センターからの臨床分離株）に対して評価した。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を決定するために、微量液体希釈法を用いた。細菌のコロニーをＭＨ培地で３７℃、一晩培養した。サンプルは８ｍｇ・ｍＬ^−１水溶液の原液として調製し、開始濃度を３００μＬのＭＨ培地中で３２、６４、１２８又は２５６μｇ／ｍＬまで希釈し、９６ウェルのマイクロプレート（トリフェニルホスフェート（ＴＰＰ）、未処理）の第１ウェルに添加し、そして１／２ずつ連続的に希釈した。細菌の濃度は６００ｎｍでの吸光度を測定することで定量化し、そしてＭＨ培地中でＯＤ_６００＝０．０２２まで希釈した。サンプル溶液（１５０μＬ）をおよそ５×１０^５ＣＦＵの最終植菌の４μＬ希釈バクテリア懸濁液と混合した。プレートを３７℃で十分な増殖まで（〜１８時間）培養した。各テストに対し、プレートの２つのカラムが無菌のコントロール（ＳＣ、培養液のみ）及び増殖コントロール（ＧＣ、培養液及び細菌種菌、抗生物質なし）として保持した。最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は肉眼で試験細菌の目に見える増殖を阻害した抗菌物質（ペプチドデンドリマー）の最低濃度として定義した。微生物学的な研究のために、ポリミキシンをリファレンスとして用いた。 The antimicrobial activity of the antimicrobial peptide II in the micro liquid dilution method is Pseudomonas aeruginosa (PAO1 strain), Pseudomonas aeruginosa PT1482 (A-), PT1485 (AB-), PT1149 (ABC-algC), PT331 (Z61) (LPS mutant), P. aeruginosa PEJ2.6, PEJ9.1, ZEM1. A, ZEM9. A (clinical isolate from University of Geneva / University Medical Center), Burkholderia cenocepacia ( Burkholderia cenocepacia ), Staphylococcus aureus (MRSA strain) and Acinetobacter baumanni (clinical isolate from University of Geneva / University Medical Center) It was evaluated against. The microdilution method was used to determine the minimum inhibitory concentration (MIC). Bacterial colonies were grown overnight at 37 ° C. in MH medium. The sample is prepared as a stock solution of 8 mg mL- ¹ aqueous solution, diluted to a starting concentration of 32, 64, 128 or 256 μg / mL in 300 μL of MH medium, 96 well microplate (triphenyl phosphate (TPP), not Added to the first well of treatment) and serially diluted in half. Bacterial concentration was quantified by measuring absorbance at 600 nm and diluted to OD ₆₀₀ = 0.022 in MH medium. The sample solution (150 μL) was mixed with a 4 μL diluted bacterial suspension of approximately 5 × 10 ⁵ CFU final inoculum. Plates were incubated at 37 ° C until full growth (-18 hours). For each test, two columns of plates were maintained as sterile controls (SC, medium only) and growth controls (GC, medium and bacterial inoculum, no antibiotics). The minimum inhibitory concentration (MIC) was defined as the lowest concentration of antimicrobial substance (peptide dendrimer) that inhibited visible growth of the test bacteria with the naked eye. Polymyxin was used as a reference for microbiological studies.

溶血アッセイ
最小溶血濃度（ＭＨＣ）を決定するために、ペプチドデンドリマー水溶液を８ｍｇ／ｍＬ原液として調製し、そして５０μＬを９６ウェルのプレート（Ｃｏｒｎｓｔａｒ又はＮｕｎｃ、ポリスチレン、未処理）中で、５０μＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）で１／２ずつ連続的に希釈した。ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）を、信頼できる被験者からの全血１．５ｍＬを３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離することで得た。血漿を捨て、そしてペレットを１５ｍＬのファルコンチューブ内で、最大５ｍＬのＰＢＳで再懸濁した。洗浄を三回繰り返し、そして残余のペレットを１０ｍＬのＰＢＳで、最終ｈＲＢＣ濃度が５％となるように再懸濁した。ｈＲＢＣ懸濁液（５０μＬ）を各ウェルに加え、そしてプレートを室温で４時間培養した。最小溶血濃度（ＭＨＣ）のエンドポイントは溶媒期間後にウェルの目視検査によって決定した。各プレートのコントロールにはブランクの培地のコントロール（５０μｌＰＢＳ＋５０μｌｈＲＢＣ懸濁液）及び溶血活性コントロール（ｍＱ脱イオン水５０μＬ＋５０μＬｈＲＢＣ懸濁液）を含んだ。 Hemolytic Assay To determine the minimum hemolytic concentration (MHC), prepare an aqueous peptide dendrimer solution as an 8 mg / mL stock solution, and 50 μL in a 96 well plate (Cornstar or Nunc, polystyrene, untreated), 50 μL PBS ( Dilution was continuously carried out by ½ at pH 7.4). Human red blood cells (hRBCs) were obtained by centrifuging 1.5 mL of whole blood from a reliable subject at 3000 rpm for 15 minutes. The plasma was discarded and the pellet was resuspended with up to 5 mL PBS in a 15 mL Falcon tube. The washing was repeated three times and the remaining pellet was resuspended with 10 mL PBS to a final hRBC concentration of 5%. hRBC suspension (50 μL) was added to each well and the plates were incubated at room temperature for 4 hours. The end point of minimum hemolysis concentration (MHC) was determined by visual inspection of the wells after the solvent period. Controls on each plate contained blank media control (50 μl PBS + 50 μl hRBC suspension) and hemolytic activity control (mQ deionized water 50 μL + 50 μL hRBC suspension).

予備の耐性発現アッセイ
枯草菌ＢＲ１５１への化合物のＭＩＣは、化合物濃度がＭＩＣの値の半分であるウェル（１／２ＭＩＣウェル）からの細胞を用いて１５日間毎日決定した。各化合物において、従前のアッセイプレートからの１／２ＭＩＣウェルからの細菌はＬＢ培養液で再懸濁され、３７℃で２〜４時間培養し、そしてＯＤ_６００を決定した。再懸濁液をその後ＬＢ培養液で５×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍｌまで希釈し（ＯＤ_６００＝０．１であり、その後１：１００倍に希釈してＯＤ_６００＝０．００１となる）、そして以前これらの細胞を曝したものと同一の化合物のＭＩＣを再度決定するために用いた。全てのＭＩＣの決定はデュプリケートで行った。 Preliminary Resistance Expression Assay The MIC of compounds to Bacillus subtilis BR151 was determined daily for 15 days using cells from wells where the compound concentration was half the value of the MIC (1/2 MIC well). For each compound, bacteria from 1/2 MIC wells from previous assay plates were resuspended in LB medium, incubated at 37 ° C. for 2-4 hours, and OD ₆₀₀ determined. The resuspension is then diluted with LB medium to 5 × 10 ⁵ cells / ml (OD ₆₀₀ = 0.1, then diluted 1: 100 to OD ₆₀₀ = 0.001), and It was used to again determine the MIC of the same compounds as those previously exposed to these cells. All MIC determinations were made in duplicate.

生体内研究
動物：生後４〜６週間のオスのウィスター系ラット（体重範囲２００〜５００ｇ）を毒性実験に用いた。ラットはベルンティアスタール本部（ベルン大学臨床研究部）から得て、そしてケージ毎に４匹収容した。各実験グループは２匹のラットを含む。動物の全ての処置、世話及び取扱いはスイス国、ベルン州の獣医療サービスによって再検討及び承認され、そしてベルン大学の臨床研究部の、ユーグ・アブリエル教授のグループの協力のもと行った。 In vivo research
Animals: 4-6 week old male Wistar rats (weight range 200-500 g) were used for toxicity experiments. Rats were obtained from Berntia Stahl Headquarters (Brunn University Clinical Research Department) and were housed 4 per cage. Each experimental group contains 2 rats. All treatment, care and handling of the animals was reviewed and approved by the Veterinary Services of Bern, Switzerland, and in cooperation with the group of Prof. Jug Abiel of the University of Bern clinical research department.

処置：ラットは誘導室内で４％イソフルラン及び１Ｌ／ｍｉｎ酸素で麻痺させた。ラットが眠っているときにラットを臨床用のドレープの上に移し、そしてマスクによって１〜２％イソフルラン及び０．８ｌ／ｍｉｎの酸素で麻痺させた。尾を温水で温め、そして７０％エタノールで消毒した。尾静脈への静脈（ｉ．ｖ．）注射は５００μＬＰＢＳ中の２ｍｇ／ｋｇラットのＡＭＰＤの単回投与を含んだ。注射前に各ラットを個別に体重を測り、そして正確な投与量を決定した。注射無し及び５００μＬＰＢＳの静脈注射のコントロールのグループを含む全てのラットについて、２日間の生存及び挙動を観察した。 Treatment: Rats were paralyzed with 4% isoflurane and 1 L / min oxygen in the induction chamber. When the rat was asleep, it was transferred onto a clinical drape and paralyzed by mask with 1-2% isoflurane and 0.8 l / min oxygen. The tail was warmed with warm water and disinfected with 70% ethanol. Intravenous (iv) injection into the tail vein included a single dose of 2 mg / kg rat AMPD in 500 μL PBS. Prior to injection, each rat was weighed individually and the exact dose determined. Two days of survival and behavior were observed for all rats, including no injection and a control group of 500 μl PBS iv injection.

ＷＳＴ−８細胞生存性アッセイ
細胞生存性は緑膿菌（ＰＡＯ１株）に対して試験した。細菌のコロニーをＬＢ培地で３７℃、一晩培養した。濃度は６００ｎｍでの吸光度を測定することで定量化し、そしてＯＤ_６００＝０．１（１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬ）まで希釈した。サンプルは１ｍｇ・ｍＬ^−１水溶液を原液として調製し、そして９６ウェルのマイクロプレート（ＴＰＰ、未処理）中で、５０μｇ／ｍＬの濃度までＬＢで希釈した。サンプル溶液（５０μＬ）はＯＤ_{６００ｎｍ}が０．００１の希釈細菌懸濁液（５０μＬ）と混合した。これにより５×１０^５ＣＦＵ／ｍＬの最終希望植菌が生じた。プレートを３７℃で１、３、６、８及び２４時間培養した。各時点で別個のプレートを分析した。各テストに対し、プレートの２つのカラムを無菌のコントロール（ＳＣ、培養液のみ）及び増殖コントロール（ＧＣ、培養液及び細菌種菌、抗体なし）として保持した。培養後、１５μＬのＷＳＴ−８希釈標準溶液（３．３１ｍｇ／ｍＬのＷＳＴ−８（Ｏｃｈｅｍ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、０．０７４ｍｇ／ｍＬのＰＥＳ（フェナジンエトスルファート））を各ウェルに加え、そして細胞を３７℃でＧＣが希望値になるまで培養した。反応が起こった後、最終吸光度は４５０ｎｍを示した。計算において、ＧＣの値は細胞生存率１００％に設定し、かつネガティブコントロール（細菌なし、ＳＣ）の値は細胞生存率０％に設定した。これらの２つの値を用いて較正曲線を作成した。 WST-8 Cell Viability Assay Cell viability was tested against P. aeruginosa (strain PAO1). Bacterial colonies were cultured overnight at 37 ° C. in LB medium. Concentrations were quantified by measuring absorbance at 600 nm and diluted to OD ₆₀₀ = 0.1 (1 × 10 ⁸ CFU / mL). Samples were prepared using ¹ mg · mL ⁻¹ aqueous solution as stock solution and diluted with LB to a concentration of 50 μg / mL in a 96-well microplate (TPP, untreated). The sample solution (50 μL) was mixed with a diluted bacterial suspension (50 μL) with an OD _{600 nm} of 0.001. This resulted in a final desired inoculum of 5 × 10 ⁵ CFU / mL. Plates were incubated at 37 ° C. for 1, 3, 6, 8 and 24 hours. Separate plates were analyzed at each time point. For each test, two columns of the plate were maintained as sterile controls (SC, medium only) and growth controls (GC, medium and bacterial inoculum, no antibody). After incubation, add 15 μL of WST-8 diluted standard solution (3.31 mg / mL WST-8 (Ochem Corporation), 0.074 mg / mL PES (phenazine ethosulphate)) to each well and cells The culture was carried out at <0> C until the GC reached the desired value. After the reaction occurred, the final absorbance showed 450 nm. In the calculation, the GC value was set at 100% cell viability and the negative control (no bacteria, SC) value was set at 0% cell viability. A calibration curve was generated using these two values.

ヒト血清によるペプチド及びペプチドデンドリマーのタンパク質分解安定性
ペプチド及びペプチドデンドリマーを２００μＭのＰＢＳ溶液を原液として調製した。２５％ヒト血清（ＤＭＥＭ希釈）を１４０００ｒｐｍで１５分遠心分離して脂質を除去し、そして上澄みを回収して、３７℃で１５分間培養した。タンパク質分解は５０μＬの試験ペプチド又はペプチドデンドリマーの５０μＬの血清への添加及び３７℃での振とうによって開始した。最終ペプチド濃度は１００μＭである。反応混合物は０、１、６、２４時間後に氷冷した１０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を添加して血清タンパクを沈殿させることで分析した。１４０００ｒｐｍで１５分遠心分離後に、上澄みをサンプルごとに回収し、そしてＳｐｅｅｄＶａｃで蒸発させた。個体を１００μＬのｍＱ水に溶解後、それらをＲＰ−ＨＰＬＣで分析した（流速：１．２ｍＬ／ｍｉｎ、勾配：７．５分でＡ／Ｄ＝１００／０〜０／１００）。残余のペプチド及びペプチドデンドリマーの転換は、Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎソフトウェアを用いることによる、２１４ｎｍでの吸光度の積分によって算出した。 Proteolytic stability of peptides and peptide dendrimers with human serum Peptides and peptide dendrimers were prepared using 200 μM PBS solution as stock solution. The 25% human serum (DMEM diluted) was centrifuged at 14000 rpm for 15 minutes to remove lipids, and the supernatant was collected and incubated at 37 ° C. for 15 minutes. Proteolysis was initiated by addition of 50 μL of test peptide or peptide dendrimer to 50 μL of serum and shaking at 37 ° C. The final peptide concentration is 100 μM. The reaction mixture was analyzed after 0, 1, 6, 24 hours by adding ice cold 10% trichloroacetic acid (TCA) to precipitate serum proteins. After centrifugation at 14000 rpm for 15 minutes, the supernatant was collected for each sample and evaporated on a SpeedVac. After dissolving the individuals in 100 μL of mQ water, they were analyzed by RP-HPLC (flow rate: 1.2 mL / min, gradient: A / D = 100/0 to 0/100 at 7.5 minutes). The conversion of residual peptide and peptide dendrimer was calculated by integration of absorbance at 214 nm by using Chromeleon software.

細菌存在下のペプチドの検出
ペプチド及びペプチドデンドリマーは２００μＭ水溶液の原液として調製した。細菌のコロニーはＬＢ培地中で、３７℃で一晩培養した。濃度は６００ｎｍでの吸光度を測定することで定量化し、そしてＯＤ_６００＝０．２まで希釈した。分解は５０μＬの試験ペプチド又はペプチドデンドリマーの５０μＬの細菌懸濁液への添加及び３７℃での振とうによって開始した。最終ペプチド濃度は１００μＭであり、かつ細菌の最終濃度ＯＤ_６００＝０．１（１×１０^８ＣＦＵ／ｍＬ）であった。反応化合物は０、１、６、９、２４時間後に９５℃で５分間加熱し、続いて１４０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した後に分析した。５０μＬの上澄みをサンプルごとに回収し、そして５０μＬのＡを加えて濃度を５０μＭとした。５μＬの４−ヒドロキシ安息香酸（標準）を添加した後、ＲＰ−ＨＰＬＣで分析した（流速：１．２ｍＬ／ｍｉｎ、勾配：７．５分でＡ／Ｄ＝１００／０〜０／１００）。残余のペプチド及びペプチドデンドリマーの転換は、Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎソフトウェアを用いることによる、２１４ｎｍでの吸光度の積分によって算出した。 Detection of peptides in the presence of bacteria Peptides and peptide dendrimers were prepared as a stock solution of 200 μM aqueous solution. Bacterial colonies were cultured overnight at 37 ° C. in LB medium. The concentration was quantified by measuring the absorbance at 600 nm and diluted to OD ₆₀₀ = 0.2. Degradation was initiated by the addition of 50 μL of test peptide or peptide dendrimer to 50 μL of bacterial suspension and shaking at 37 ° C. The final peptide concentration was 100 μM and the final concentration of bacteria OD ₆₀₀ = 0.1 (1 × 10 ⁸ CFU / mL). The reaction compounds were analyzed after 0, 1, 6, 9, 24 hours after heating at 95 ° C. for 5 minutes, followed by centrifugation at 14000 rpm for 15 minutes. 50 μL of supernatant was collected for each sample and 50 μL of A was added to a concentration of 50 μM. After adding 5 μL of 4-hydroxybenzoic acid (standard), analysis by RP-HPLC (flow rate: 1.2 mL / min, gradient: A / D = 100/0 to 0/100 at 7.5 minutes). The conversion of residual peptide and peptide dendrimer was calculated by integration of absorbance at 214 nm by using Chromeleon software.

脂質小胞実験
調製
２５ｍｇＥｇｇＰＣ又はＥｇｇＰＧの１ｍＬメタノール／トリクロロメタン溶液１／１を、ロータリーエバポレーター（ｒｔ）及びその後の一晩真空下で、溶液を蒸発させることで脂質薄膜を調製した。結果物である膜を１ｍＬのバッファー（５０ｍＭ ＣＦ、１０ｍＭ ＴＲＩＳ、１０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）で３０分水和し、凍結融解サイクル（７回）及びポリカーボネート膜（孔経１００ｎｍ）を通した押出（１５回）に供した。小胞外の成分を１０ｍＭ ＴＲＩＳ、１０７ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４によるゲル濾過（Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−５０）によって除去した。最終条件：〜２．５ｍＭ Ｅｇｇ ＰＣ又はＥｇｇ ＰＧ；内部：５０ｍＭ ＣＦ、１０ｍＭ ＴＲＩＳ,、１０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４；外部：１０ｍＭ ＴＲＩＳ、１０７ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４。 Lipid Vesicle Experiment Preparation A lipid film was prepared by evaporating 25 mg EggPC or EggPG 1 mL methanol / trichloromethane solution 1/1 into a solution on a rotary evaporator (rt) and then overnight under vacuum. Hydrate the resulting membrane with 1 mL of buffer (50 mM CF, 10 mM TRIS, 10 mM NaCl, pH 7.4) for 30 minutes, freeze-thaw cycles (7 times) and extrude through polycarbonate membrane (pore size 100 nm) 15 times). Extravesicular components were removed by gel filtration (Sephadex G-50) with 10 mM TRIS, 107 mM NaCl, pH 7.4. Final conditions: ̃2.5 mM Egg PC or Egg PG; Internal: 50 mM CF, 10 mM TRIS, 10 mM NaCl, pH 7.4; External: 10 mM TRIS, 107 mM NaCl, pH 7.4.

実験
Ｅｇｇ ＰＣ又はＥｇｇ ＰＧの原液（３７．５μＬ）をバッファー（１０ｍＭ ＴＲＩＳ、１０７ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）で希釈し、恒温蛍光キュベット（２５℃）内に入れ、そして緩やかに撹拌した（キュベット内の全容積〜３０００μＬ；最終脂質濃度〜３１．２５μＭ）。ＣＦ流出は、λ_ｅｍ５１７ｎｍ（λ_ｅｘ４９２ｎｍ）で、ｔ＝５０秒での最終濃度が１、５、７．５、１０、１５、２０、２５、３０μｇ／ｍＬとなる２０μＬのペプチドデンドリマーのバッファー（１０ｍＭ ＴＲＩＳ、１０７ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）溶液の添加、及びｔ＝３００秒でのｔｒｉｔｏｎＸ−１００（３０μＬ、０．０１２％最終濃度）の添加後の時間関数として測定した。蛍光強度はＩ（ｔ）＝（Ｉ_ｔ−Ｉ_０）／（Ｉ_∞−Ｉ_０）（式中、Ｉ_０＝Ｉ_ｔでペプチドデンドリマーを添加し、Ｉ_∞＝Ｉ_ｔで溶菌が飽和する）を用いて、部分発光強度Ｉ（ｔ）に正規化された。 Experiment A stock solution of Egg PC or Egg PG (37.5 μL) was diluted with buffer (10 mM TRIS, 107 mM NaCl, pH 7.4), placed in a thermostatic fluorescence cuvette (25 ° C.) and gently stirred (in a cuvette) Total volume ~ 3000 μL; final lipid concentration ~ 31.25 μM). The CF efflux was 20 μL of peptide dendrimer buffer at a final concentration of 1, 5, 7.5, 10, 15, 20, 25, 30 μg / mL at t = 50 seconds at λ _em 517 nm (λ _ex 492 nm) Measured as a function of time after addition of a solution (10 mM TRIS, 107 mM NaCl, pH 7.4) and addition of triton X-100 (30 μL, 0.012% final concentration) at t = 300 seconds. The fluorescence intensity _{I (t) = (I t} -I 0) / (I ∞ -I 0) ( _where the addition of peptide dendrimers with I 0 = _{I t,} lysis is saturated with _{I ∞} = I _t) Was normalized to the partial emission intensity I (t).

結果論及び考察
分岐部分間に１つ、２つ又は３つのアミノ酸を含む抗微生物ペプチドデンドリマー（ＡＭＰＤ）の設計及び合成
抗微生物作用を有するデンドリマーを特定するために、直鎖抗微生物ペプチドの一般的な特徴を樹状骨格内に組み込んだ（図１）。リシン及びアルギニンのようなカチオン性アミノ酸はペプチドデンドリマーに変化を起こすために選択し、かつ、ロイシン、イソロイシン、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン及びアラニンは両親媒性を持たせるための疎水性対応物として選択した。 Results and discussion : Design of antimicrobial peptide dendrimers (AMPD) containing one, two or three amino acids between branching moieties and to identify dendrimers with synthetic antimicrobial activity to identify linear antimicrobial The general features of the peptide were incorporated into the dendritic framework (Figure 1). Cationic amino acids such as lysine and arginine were selected to cause changes in peptide dendrimers, and leucine, isoleucine, tyrosine, phenylalanine, tryptophan, and alanine were selected as hydrophobic counterparts to make them amphiphilic. .

７８個のペプチドデンドリマーのライブラリー（５３個の標準、１８個のアルキル鎖を含むもの、７個のＧ４及びＧ５、さらに２個の直鎖ペプチド、６個の二量体）を標準のＦｍｏｃ−ＳＰＰＳ（メリーフィールド、Ｒ．ら、１９６３、Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、８５、２１４９−２１５４；ケント、Ｓ．Ｂ．ら、２００９、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．、３８、３３８−５１）を用いて、Ｒｉｎｋ−ａｍｉｄｅレジン上で合成した（図２）。コア内に疎水性尾部を含むＡＭＰＤにおいて、側鎖の直交保護基としてＡｌｌｏｃを含む追加のリジンを合成の第１アミノ酸として配置した。０．２５当量のＰｄ（ＰＰｈ_３）_４及び２５当量のＰｈＳｉＨ_３によるＡｌｌｏｃ脱保護（グリエコ、Ｐ．ら、２００１、Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｓ．、５７、２５０−２５６）の後、６〜２４個の範囲の炭素原子である、異なる炭素側鎖をカルボン酸として、ＤＭＦ中のＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡ又はＮＭＰ中のＨＯＢｔ／ＤＩＣ／ＤＩＰＥＡという古典的なカップリング条件下で結合させた。ペプチドデンドリマーの側鎖の脱保護及び付随する酸分解は最後のＦｍｏｃ脱保護の後に行われ、続いてＲＰ−ＨＰＬＣ精製を行った。表２〜表７は全ての世代及び分岐部分間のアミノ酸の数が異なる、極めて良好（４４〜１０％）から良好（１０〜１％）な収率である全ての合成されたＡＭＰＤを示す。ＨＰＬＣからの精製留分、合成及び精製に対応する収率は最適化しなかった。第３世代のペプチドデンドリマー及びアルキル鎖が結合した第２世代の構造式は図４に示す。 A library of 78 peptide dendrimers (53 standards, containing 18 alkyl chains, 7 G4 and G5, plus 2 linear peptides, 6 dimers) was added to the standard Fmoc − Using SPPS (Maryfield, R. et al., 1963, Am. Chem. Soc., 85, 2149-2154; Kent, SB et al., 2009, Chem. Soc. Rev., 38, 338-51) And synthesized on a Rink-amide resin (FIG. 2). In AMPD with a hydrophobic tail in the core, an additional lysine containing Alloc as an orthogonal protecting group in the side chain was placed as the synthetic first amino acid. After 0.25 equivalents of Pd (PPh ₃ ) ₄ and 25 equivalents of PhSiH ₃ , Alloc deprotection (Glyeco, P. et al., 2001, J. Peptide Res., 57, 250-256) followed by 6-24 A range of carbon atoms, different carbon side chains, were combined as carboxylic acids under classical coupling conditions of HATU / DIPEA in DMF or HOBt / DIC / DIPEA in NMP. Peptide dendrimer side-chain deprotection and concomitant acid degradation was performed after the last Fmoc deprotection followed by RP-HPLC purification. Tables 2 to 7 show all synthesized AMPDs with very good (44-10%) to good (10-1%) yields with different numbers of amino acids between all generations and branches. The yield corresponding to the purified fraction from HPLC, synthesis and purification was not optimized. A third generation peptide dendrimer and a second generation structural formula in which an alkyl chain is linked are shown in FIG.

以下の全ての表において、ペプチドデンドリマーの配列はＮ末端からＣ末端までである。１文字表記はアミノ酸に用いられ、大文字はＬ−エナンチオマーを示し、かつ、小文字はＤ−エナンチオマーを示す。ＤａｂはＬ−２、３−ジアミノ酪酸であり、かつ、ＢはＬ−２、３−ジアミノプロピオン酸である。分岐するジアミノ酸は斜字体で示す。他に記載のない限り、全てのペプチドはＣ末端でカルボアミド（ＣＯＮＨ_２）である。収率を示す所では、これらはＴＦＡ塩としてのＲＰ−ＨＰＬＣ精製産物と関係する。 In all the tables below, the sequence of the peptide dendrimer is from the N-terminus to the C-terminus. One letter code is used for amino acids, upper case indicates L-enantiomer and lower case indicates D-enantiomer. Dab is L-2, 3-diaminobutyric acid and B is L-2, 3-diaminopropionic acid. Branching diamino acids are shown in italics. Unless otherwise stated, all peptides are carboamide (CONH ₂ ) at the C-terminus. Where yields are indicated, these relate to the RP-HPLC purified product as a TFA salt.

ＭＩＣ（最小発育阻害濃度）及びＭＨＣ（最小溶血濃度、ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）で決定した）の値はμｇ／ｍＬの単位である。検出可能な溶血活性が何ら観察されなかった場合、最終測定濃度は治療指数（ＴＩ）の算出に用いた。ＴＩ（治療指数）＝ＭＨＣ（μｇ／ｍｌ）／ＭＩＣ（μｇ／ｍｌ）の幾何平均。より大きな値はより強い抗微生物特異性を示す。 The values for MIC (minimum growth inhibitory concentration) and MHC (minimum hemolytic concentration, determined with human erythrocytes (hRBC)) are in units of μg / mL. If no detectable hemolytic activity was observed, the final measured concentration was used to calculate the therapeutic index (TI). TI (therapeutic index) = geometric mean of MHC (μg / ml) / MIC (μg / ml). Larger values indicate stronger antimicrobial specificity.

表２：第３世代ＡＭＰＤのアミノ酸配列、収率及びＭＳ分析
Table 2: Amino acid sequence, yield and MS analysis of third generation AMPD

ＡＭＰＤの第１系列は第３世代のペプチドデンドリマーから成った。最初は一般的に天然抗微生物ペプチドとして存在するアミノ酸を樹状構造に組み込んだ。第１段階ではリジン分岐間でロイシン、アラニン、トリプトファン、フェニルアラニン、チロシンの疎水性アミノ酸がリジン又はアルギニンと交代する。より強固に作成するために、より小さな分岐部分のＢ（Ｌ−２、３−ジアミノプロピオン酸）部分が用いられた。第２設計では、荷電及び疎水性を中心又は外圏のいずれかに集中させた。ペプチドデンドリマーは明確に定義された二次構造なしに、非常に柔軟な分子である。機構的な研究及び生理学的条件についてのより高い安定性のために、４つの有望な配列を全てＤ−エナンチオマーとして合成した。異なるアミノ酸によって正電荷に変化するだけでなく、側鎖の長さが活性に影響を与えるかどうかを確かめるために、側鎖に４つのメチレン基を含むリジンのうち２つのメチレンのみをＤａｂ（Ｌ−２、３−ジアミノ酪酸）に置換した。 The first series of AMPD consisted of third generation peptide dendrimers. Initially, amino acids generally present as natural antimicrobial peptides were incorporated into the dendritic structure. In the first stage, hydrophobic amino acids of leucine, alanine, tryptophan, phenylalanine and tyrosine are replaced with lysine or arginine between lysine branches. To make it more robust, a smaller branched B (L-2,3-diaminopropionic acid) moiety was used. In the second design, charge and hydrophobicity were concentrated in either the center or the outer sphere. Peptide dendrimers are very flexible molecules without a well-defined secondary structure. All four promising sequences were synthesized as D-enantiomers for higher stability for mechanistic studies and physiological conditions. In addition to changing to a positive charge by different amino acids, only two methylenes out of lysines containing four methylene groups in the side chain were tested with Dab (L Substituted with 2,3-diaminobutyric acid).

表３：第２世代のＡＭＰＤのアミノ酸配列、収率及びＭＳ分析を示す。
Table 3: Amino acid sequence, yield and MS analysis of second generation AMPD.

広範囲の構造をカバーするため、第２世代のペプチドデンドリマーを調製した。これらの合成は容易かつ迅速であり、かつ、それにより高い収率につながる。第２世代ＡＭＰＤのＭＳｔ−１４６、ＭＳｔ−１３８、ＭＳｔ−１３９、ＭＳｔ−１１９、ＭＳｔ−１７６及びＭＳｔ−２０１は第３世代の類似体と同じ特徴を有するが、分子量は半分に過ぎない。他の構造的可能性を調査するため、第４及び第５世代のペプチドデンドリマー並びに第２世代のペプチド二量体を同様に生成した（表４及び５）。 Second generation peptide dendrimers were prepared to cover a wide range of structures. These syntheses are easy and rapid and lead to high yields. The second generation AMPDs MSt-146, MSt-138, MSt-139, MSt-119, MSt-176 and MSt-201 have the same characteristics as the third generation analogs, but only half the molecular weight. To investigate other structural possibilities, fourth and fifth generation peptide dendrimers and second generation peptide dimers were similarly generated (Tables 4 and 5).

ペプチドデンドリマーのＳＰＰＳは最大で第３世代のビーズに限られるため、第４世代及び第５世代のＡＭＰＤは公開された手順（ウーリヒ、Ｎ．Ａ．ら；Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１１、９、７０８４）を用いた収斂接近（ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈ）によって合成した。従って第２及び第３世代ペプチドデンドリマーはＮ末端をクロロアセチル基として調製した。チオエーテル連結ではこれらのペプチドデンドリマー及びＣ末端に追加のシステインを含む第１又は第２世代のペプチドデンドリマーを結合して、第４及び第５世代のＡＭＰＤを良好な収率で形成した（表４）。 Since the SPPS of peptide dendrimers is limited to 3rd generation beads at the maximum, 4th and 5th generation AMPD are published procedures (Uhrich, NA et al; Org. Biomol. Chem. 2011, 9, 7084) was synthesized by convergent approach. Therefore, 2nd and 3rd generation peptide dendrimers were prepared with the N-terminus as a chloroacetyl group. Thioether linkages combined these peptide dendrimers and first or second generation peptide dendrimers containing an additional cysteine at the C-terminus to form fourth and fifth generation AMPD in good yield (Table 4). .

表４：チオエーテル連結戦略によって調製した第４及び第５世代のＡＭＰＤ。
Table 4: Fourth and fifth generation AMPD prepared by thioether linking strategy.

表５：システイン（Ｃ）によるホモ二量体化によって調製した、分岐部分間に２つのアミノ酸を含むペプチドデンドリマー二量体。
Table 5: Peptide dendrimer dimers prepared by homodimerization with cysteine (C), containing two amino acids between the branching parts.

表６：分岐間に１つのアミノ酸を含む第３世代ＡＭＰＤ。
Table 6: Third generation AMPD with 1 amino acid between branches.

表７：分岐間に２つ又は３つのアミノ酸を含む第２及び第３世代ＡＭＰＤ。
Table 7: Second and third generation AMPDs containing two or three amino acids between branches.

表８：直鎖ＡＭＰのアミノ酸配列、収率、及びＭＳ分析
Table 8: Amino acid sequence of linear AMP, yield, and MS analysis

その上、システイン残基を組み込んだ第１又は第２世代のペプチドデンドリマーはジスルフィド結合の形成によって二量化し、ホモ二量体を良好な収率で得る（表５）。 In addition, first or second generation peptide dendrimers incorporating cysteine residues dimerize by formation of disulfide bonds, resulting in good yields of homodimers (Table 5).

最後の方法では、分岐間のアミノ酸の数の影響をよりよく理解し、かつ、より強固、又はより柔軟のいずれかのＡＭＰＤを作成するために、１１１１（ＭＳｔ−１４７、ＭＳｔ−１４８、ＭＳｔ−１４９）、３３３３（ＭＩＳ−０２、ＭＩＳ−０３、ＭＩＳ−０４、ＭＩＳ−０６、ＭＩＳ−０８）、２２３３（ＹＧＯ−００８、ＹＧＯ−００９、ＹＧＯ−０１０、ＹＧＯ−１１）ＡＭＰＤを作成した。１１１１系列は、グラム陰性緑膿菌に対する活性ではなくグラム陽性枯草菌に対する活性がある前述の１１１１ＡＭＰＤと比べて、同じトポロジーを有するが、異なるアミノ酸組成を有する。電荷／疎水性モチーフを入れ替え、かつ、ＭＳｔ−１１２と同じアミノ酸分布を有するＭＳｔ−１１７、及び緑膿菌に対する活性があると文献に記載されるＲＨｅ−９の、２つの直鎖配列を参考として調製した。 In the last method, in order to better understand the effect of the number of amino acids between branches and create either a stronger or more flexible AMPD, 1111 (MSt-147, MSt-148, MSt- 149), 3333 (MIS-02, MIS-03, MIS-04, MIS-06, MIS-08), 2233 (YGO-008, YGO-009, YGO-010, YGO-11) AMPD were prepared. The 1111 series has the same topology but a different amino acid composition compared to the aforementioned 1111AMPD, which has activity against Gram-positive Bacillus subtilis but not against Gram-negative Pseudomonas aeruginosa. Reference is made to two linear sequences of MSt-117 having the same amino acid distribution as MSt-112 and RHe-9 described in the literature as having activity against Pseudomonas aeruginosa, with the charge / hydrophobic motif replaced. Prepared.

表９：疎水性側鎖を含む第３世代ＡＭＰＤのアミノ酸配列、収率、ＭＳ分析
Table 9: Amino acid sequence, yield, MS analysis of 3rd generation AMPD containing hydrophobic side chains

ＡＭＰＤの構造を、天然抗微生物ペプチドの反復性成分である疎水性アルキル鎖を結合させることで、第２及び第３世代のペプチドデンドリマーへとさらに変更した。固相ペプチド合成はコアのアルキル鎖の１つのコピー又は複数のコピーをＮ末端に結合しうるように容易に拡張しうる。６個、８個、１０個、１２個、１６個、１８個及び２４個の炭素の鎖を有するカルボン酸を用いた。合計で１８個の疎水性アルキル鎖を含むＡＭＰＤを調製した（表９）。 The structure of AMPD was further transformed into second and third generation peptide dendrimers by coupling hydrophobic alkyl chains, which are repetitive components of natural antimicrobial peptides. Solid phase peptide synthesis can be easily extended to allow one or more copies of the core alkyl chain to be attached at the N-terminus. Carboxylic acids with chains of 6, 8, 10, 12, 16, 18, and 24 carbons were used. AMPDs containing a total of 18 hydrophobic alkyl chains were prepared (Table 9).

ヒト病原体の緑膿菌に対するＡＭＰＤの活性及びヒト赤血球（ｈＲＢＣ）に対するＡＭＰＤの毒性
ＭＩＣ（最小発育阻害濃度）の値を決定するために、液体希釈アッセイ（ウィーガンド、Ｉら、２００８、Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．、３、１６３−７５；臨床・検査標準委員会資料Ｍ７−Ａ７、第７版）で、全てのペプチドの緑膿菌ＰＡＯ１に対する活性を試験した。ペプチドデンドリマーの原液は９６ウェルのマイクロタイタープレート内で、栄養素ＬＢで２／３ずつ連続希釈した。細菌を栄養素ＬＢ中で一晩、３７℃で培養した。希釈後に細菌にペプチドを添加し、そして一晩（１８〜２４時間）３７℃で培養した。全ての合成した第３世代のＡＭＰＤのＭＩＣ値は、ポリミキシン（２μｇ／ｍＬ）及びトブラマイシン（０．５μｇ／ｍＬ）と同様の範囲の極めて高い活性（２μｇ／ｍＬ）から活性がある（１４μｇ／ｍＬ）範囲まで及んだ（表１０）。最も効力のある配列は、各世代で交互に並ぶ、荷電した（リジン、アルギニン、Ｌ−２、３−ジアミノ酪酸）及び疎水性の（ロイシン、トリプトファン、フェニルアラニン）のアミノ酸を含む。疎水性アミノ酸がＣ末端から１番目に数えられ、かつ荷電したアミノ酸が２番目の位置にある場合、分岐部分間のアミノ酸の位置は最適であると考えられる。追加の疎水性アミノ酸としてアラニンを導入すると活性が減少する（ＭＳｔ−１２０）。荷電したアミノ酸の性質は活性に大きな影響を与えないが、活性の変化を疎水性アミノ酸の変化と比較すると、結果としてロイシンが最善であり、トリプトファン及びフェニルアラニンが続き、一方でチロシンは活性が大幅に減少する傾向となる。分岐部分をリジンからより強固なＤａｐ（２、３−ジアミノプロピオン酸）に変更すると活性は著しく減少はしなかった。デンドリマー上の電荷が疎水性アミノ酸と離れ、その結果外圏又はコア部分のいずれかが荷電する場合、活性は大幅に減少する。同様に、分岐部分間で荷電した又は疎水性の領域が集合すると活性の減少に至る一方で、Ｌ−アミノ酸をＤ−アミノ酸に変更すると活性が維持され、活性機構は受容体媒介ではないという仮説に繋がる。非常に効果的なＡＭＰＤは天然、非天然及びＤ−アミノ酸で調製し、そしてそれら全てが非常に高い活性を示した。 To determine the activity of AMPD against the human pathogen P. aeruginosa and the value of MIC (minimum growth inhibitory concentration) of AMPD against human red blood cells (hRBC), a liquid dilution assay (Wegand, I et al., 2008, Nat. Protoc. 3, 163-75; Clinical and Laboratory Standards Committee Material M7-A7, 7th Edition), all peptides were tested for activity against Pseudomonas aeruginosa PAO1. The stock solution of peptide dendrimer was serially diluted 2/3 with nutrient LB in a 96 well microtiter plate. Bacteria were cultured overnight at 37 ° C. in nutrient LB. Peptides were added to the bacteria after dilution and incubated overnight (18-24 hours) at 37 ° C. The MIC values of all synthesized third-generation AMPD are active (14 μg / mL) from very high activity (2 μg / mL) in the same range as polymyxin (2 μg / mL) and tobramycin (0.5 μg / mL) ) To the extent (Table 10). The most potent sequences include charged (lysine, arginine, L-2, 3-diaminobutyric acid) and hydrophobic (leucine, tryptophan, phenylalanine) amino acids alternating in each generation. When the hydrophobic amino acid is counted first from the C-terminus and the charged amino acid is in the second position, the position of the amino acids between the branched parts is considered to be optimal. Introduction of alanine as an additional hydrophobic amino acid reduces the activity (MSt-120). The nature of the charged amino acids does not significantly affect the activity, but comparing the change in activity to the change in hydrophobic amino acids, the result is best leucine, followed by tryptophan and phenylalanine, while tyrosine has significant activity It tends to decrease. When the branched portion was changed from lysine to stronger Dap (2,3-diaminopropionic acid), the activity was not significantly reduced. If the charge on the dendrimer separates from the hydrophobic amino acid, so that either the outer sphere or the core portion is charged, the activity is greatly reduced. Similarly, it is hypothesized that changing an L-amino acid to a D-amino acid maintains activity and that the activation mechanism is not receptor-mediated, while the charged or hydrophobic regions at the bifurcation lead to a reduction in activity. Lead to Highly effective AMPD was prepared with natural, non-natural and D-amino acids, and they all showed very high activity.

表１０：第３世代ＡＭＰＤのＭＩＣ、ＭＨＣ及びＴＩの値
Table 10: MIC, MHC and TI values for 3rd generation AMPD

第３世代のＡＭＰＤが新規の抗生物質として有用であり得るかどうかを試験するために、第３世代のＡＭＰＤについて、それらのヒト赤血球（ｈＲＢＣ）への溶血活性を試験した（表１０）。最小溶血濃度（ＭＨＣ）の値は１μｇ／ｍＬから非常に高い９００μｇ／ｍＬまで及ぶ。ＭＨＣの値への最も大きい影響は荷電したアミノ酸の性質であると思われる。明らかにリジン又はＬ−２、３−ジアミノプロピオン酸を含むペプチドはアルギニンを含むペプチドよりも溶血性が低い。疎水性アミノ酸のロイシン、トリプトファン、チロシン又はアラニンは互いに比較してＭＨＣに大きな影響を与えず、かつ、ＭＨＣの値はそれらのＭＩＣの値より依然としてはるかに高い。 To test whether third generation AMPD could be useful as a novel antibiotic, the third generation AMPD was tested for their hemolytic activity on human erythrocytes (hRBC) (Table 10). Minimum hemolytic concentration (MHC) values range from 1 μg / mL to very high 900 μg / mL. The greatest effect on the value of MHC appears to be the nature of the charged amino acid. Apparently, peptides containing lysine or L-2,3-diaminopropionic acid are less hemolytic than peptides containing arginine. The hydrophobic amino acids leucine, tryptophan, tyrosine or alanine do not significantly affect MHC compared to each other, and MHC values are still much higher than their MIC values.

ＴＩ（治療指数＝ＭＨＣ（μｇ／ｍＬ）／ＭＩＣ（μｇ／ｍＬ））は異なるＡＭＰＤを互いに比較するために有用な手段である。より高いＴＩはより活性が高く、かつより毒性の低いＡＭＰＤである。それ故にＴＩはさらなる開発、機構の研究において、及び潜在的な抗菌性として非常に興味深い。最も高いＴＩを有するＡＭＰＤひいては最も潜在力の高いペプチドは、ＭＳｔ−１１２、ＭＳｔ−１１４、ＭＳｔ−１３６、ＭＳｔ−２００、ＭＳｔ−２０３であり、かつ、さらに評価され、かつ議論されることになる。ここでの焦点は、天然のアミノ酸を含むペプチドデンドリマーは全体的に毒性作用が低いことから、天然のアミノ酸を含むペプチドデンドリマーに当てるべきである。 TI (therapeutic index = MHC (μg / mL) / MIC (μg / mL)) is a useful tool to compare different AMPDs with each other. The higher TI is the more active and less toxic AMPD. Hence, TI is of great interest in further development, mechanism studies and as a potential antimicrobial. The AMPD with the highest TI and thus the most potent peptides are MSt-112, MSt-114, MSt-136, MSt-200, MSt-203 and will be further evaluated and discussed. . The focus here should be on peptide dendrimers containing natural amino acids, since peptide dendrimers containing natural amino acids have a low overall toxic effect.

第３世代のＡＭＰＤで発見し、かつそれらのＭＩＣ及びＭＨＣを評価した、最良のモチーフに従って第２世代のＡＭＰＤを合成した（表１１）。前述の通り、荷電したアミノ酸をリジンからＬ−２、３−ジアミノ酪酸又はアルギニンに変更することでの活性の著しい差異は発見し得なかったが、ＭＨＣは一般的にリジンからアルギニン、Ｌ−２、３−ジアミノ酪酸へと減少した。同様に分岐部分をリジンからＬ−２、３−ジアミノプロピオン酸へと変更することによる関連する変化は見られなかった。ロイシン又はトリプトファンのチロシン又はアラニンへの置換により結果として活性の喪失が起こった。興味深いことに、第２世代のＡＭＰＤのＭＨＣの値は、分子内の正電荷残基の数が少ないことが原因である可能性がある、第３世代の類似体と比較して、非常に高く、より高いＴＩの値をもたらす。従って第２世代のＡＭＰＤは、特にそれらのＳＰＰＳからの容易な入手可能性が結果としてもたらすより高い収率のため、さらなる開発及び調査の有望な候補である。 Second generation AMPDs were synthesized according to the best motifs found in the third generation AMPDs and their MICs and MHCs were evaluated (Table 11). As described above, no significant difference in activity was found by changing the charged amino acid from lysine to L-2,3-diaminobutyric acid or arginine. However, MHC is generally lysine to arginine, L-2. , Reduced to 3-diaminobutyric acid. Similarly, no related change was seen by changing the branched moiety from lysine to L-2,3-diaminopropionic acid. Substitution of leucine or tryptophan for tyrosine or alanine resulted in loss of activity. Interestingly, the MHC value of the second generation AMPD is very high compared to the third generation analog, which may be due to the low number of positively charged residues in the molecule. , Resulting in higher TI values. Second-generation AMPD is therefore a promising candidate for further development and research, especially because of the higher yields that result from their easy availability from SPPS.

一般的な効果を完全に理解するために、ＭＳｔ−１１２及びＭＳｔ−１４６のＫ分岐間にＫＬモチーフを有する、効果のある配列を含む第１世代及び０世代（ジペプチド）のＡＭＰＤ類似体のＭＩＣ及びＭＨＣもまた試験した。これらの２つのペプチドは溶血活性が低いが、緑膿菌に対する活性がない（表１１）。 In order to fully understand the general effects, the MICs of first generation and zero generation (dipeptide) AMPD analogs containing an effective sequence with a KL motif between the K branches of MSt-112 and MSt-146 And MHC were also tested. These two peptides have low hemolytic activity but no activity against Pseudomonas aeruginosa (Table 11).

表１１：第２世代のＡＭＰＤのＭＩＣ、ＭＨＣ及びＴＩの値
Table 11: MIC, MHC and TI values of second generation AMPD

チオエーテル連結によって合成した第４及び第５世代のＡＭＰＤは、それらの第２及び第３世代の類似体と比較してわずかに低い、緑膿菌に対する活性を有する（表１２）。それらのより大きいサイズのため、ｈＲＢＣを溶解する効力は極めて高く、故にＴＩは相対的に低い。興味深いことにアルギニンの変化は活性が低くなり、かつ、溶血性が高くなり、第３世代のＡＭＰＤと同様の効果であることが明らかである。 Fourth and fifth generation AMPDs synthesized by thioether linkages have a slightly lower activity against P. aeruginosa as compared to their second and third generation analogues (Table 12). Because of their larger size, the potency to dissolve hRBCs is extremely high, hence TI is relatively low. Interestingly, changes in arginine are less active and more hemolytic, which is clearly the same effect as third generation AMPD.

表１２：チオエーテル連結によって調製された分岐間に２つのアミノ酸を含む第４及び第５世代のＡＭＰＤのＭＩＣ、ＭＨＣ及びＴＩの値
Table 12: MIC, MHC and TI values of fourth and fifth generation AMPDs containing two amino acids between branches prepared by thioether linkage

容易に入手可能な第１及び第２世代の二量体もまた緑膿菌に対して検査した（表１３）。分岐間に２つのアミノ酸を含む第１及び第２世代の二量体は、第２及び第３世代のＡＭＰＤと同じくらいの活性（ＣＣＳ−３）であるか、少し低い活性（ＣＣＳ−５、ＣＣＳ−１９、ＣＣＳ−１８）である。 Easily available first and second generation dimers were also tested for Pseudomonas aeruginosa (Table 13). The first and second generation dimers containing two amino acids between the branches are as active (CCS-3) as the second and third generation AMPD or slightly less active (CCS-5, CCS-19, CCS-18).

表１３：（システインＣによるホモ二量体化によって調製した）分岐間に２つのアミノ酸を含むペプチドデンドリマー二量体のアミノ酸配列、収率及びＭＳ分析
Table 13: Amino acid sequence, yield and MS analysis of peptide dendrimer dimers containing two amino acids between branches (prepared by homodimerization with cysteine C)

前述の通り、１１１１の第３世代のＡＭＰＤは枯草菌、グラム陽性細菌に対して活性があったが、緑膿菌に対しては活性がなかった。２２２２の第３世代のＡＭＰＤの成功したモチーフに倣い、新規の１１１１の第３世代のＡＭＰＤを設計し、そしてそれらの溶血活性を液体希釈アッセイで試験した。ＭＳｔ−１４７（配列：（Ｌ）_８（ＫＫ）_４（ＫＬ）_２（ＫＫ））のみが、非常に低い溶血性（１９３７μｇ／ｍＬ；ＴＩ＞１６０）及び１２μｇ／ｍＬのＭＩＣの活性を示した。 As mentioned above, 1111 third generation AMPD was active against B. subtilis, gram positive bacteria but not against P. aeruginosa. Following the successful motif of 2222 third generation AMPD, novel 1111 third generation AMPDs were designed and their hemolytic activity was tested in a liquid dilution assay. Only MSt-147 (sequence: (L) ₈ (KK) ₄ (KL) ₂ (KK)) showed very low hemolyticity (1937 μg / mL; TI> 160) and activity of 12 μg / mL MIC .

分岐部分間のアミノ酸の数の減少はＡＭＰＤのより高い活性をもたらさず、より高い活性のＡＭＰＤを求めて、アミノ酸の数を２から３に増加させることを次に試験した。４つの３３３３の第２世代のＡＭＰＤ、２つの３３３３の第３世代のＡＭＰＤ及び交互に位置するＫＬモチーフを含む４つの２２３３の第３世代のＡＭＰＤを緑膿菌に対して試験した。分岐間に非常に高いリジン含有量を含むＭＩＳ−０３及び分岐点間で離れている高いリジン含有量を含むＭＩＳ−０５を除いて、全ての配列は２２２２の第２及び第３世代のＡＭＰＤと同等の活性を示した。それらのＡＭＰＤは、ＴＩと同等に至る極めて高い溶血値を有する。ＭＩＳ−０６及びＭＩＳ−０８の、３３３３の第３世代のＡＭＰＤは高い疎水性のため極めて高い溶血性である。 The reduction of the number of amino acids between the branched parts did not result in the higher activity of AMPD, and it was next tested to increase the number of amino acids from 2 to 3 in search of higher activity of AMPD. Four 3333 second generation AMPDs, two 3333 third generation AMPDs and four 2233 third generation AMPDs containing alternating KL motifs were tested against Pseudomonas aeruginosa. Except for MIS-03, which contains a very high lysine content between branches, and MIS-05, which contains a high lysine content that is separated between branch points, all sequences are 2222 second and third generation AMPDs. The activity was equivalent. Those AMPDs have extremely high hemolysis values as high as TI. The third generation AMPD of 3333 of MIS-06 and MIS-08 is extremely hemolytic because of its high hydrophobicity.

表１４：分岐間に２つ又は３つのアミノ酸を含む第３世代のＡＭＰＤのＭＩＣ、ＭＨＣ及びＴＩの値
Table 14: MIC, MHC and TI values of 3 rd generation AMPD containing 2 or 3 amino acids between branches

Ｋ分岐間にＫＬモチーフを含む第２（ＭＳｔ−２６０：Ｃ_６、ＭＳｔ−２６１：Ｃ_８、ＭＳｔ−２６２：Ｃ_１０、ＭＳｔ−２６３：Ｃ_１２、ＭＳｔ−２８６：Ｃ_１８、ＭＳｔ−２８７：Ｃ_２４）及び第３（ＭＳｔ−２６３：Ｃ_６、ＭＳｔ−２６５：Ｃ_８、ＭＳｔ−２６６：Ｃ_１０、ＭＳｔ−２６７：Ｃ_１２、ＭＳｔ−３０１：Ｃ_１６、ＭＳｔ−２８４：Ｃ_１８、ＭＳｔ−２８５：Ｃ_２４）世代のＡＭＰＤのコアへの疎水性炭素側鎖の結合は，結果としてＣ_６−Ｃ_１２側鎖において非常に高い活性の配列、及びＣ_１６−Ｃ_２４側鎖において低い活性をもたらす（表１５）。第２世代のＡＭＰＤであるＭＳｔ−２６０〜ＭＳｔ−２６３は、溶血性が、炭素側鎖がより長くなるにつれて増加するにもかかわらず、高いＭＨＣ値をもたらす。ＭＳｔ−２６４〜ＭＳｔ−２６７への異なるカルボン酸の結合は、溶血性が、炭素側鎖がより長くなるにつれて増加することと同じ効果である非常に低いＭＨＣの値をもたらす。ＭＳｔ−３０２、ＭＳｔ−２８６、ＭＳｔ−２８７、ＭＳｔ−３０１、ＭＳｔ−２８４、ＭＳｔ−２８５は全て低濃度で溶血性を示し、それ故に低いＴＩである。第２及び第３世代のＡＭＰＤ（ＭＳｔ−２８８、ＭＳｔ−２９０）のＮ末端へのＣ_６又はＣ_１２カルボン酸の固定、従って炭素鎖の４つ又は８つのコピーのいずれかの導入は、Ｃ６の炭素鎖ではＡＭＰＤの活性を維持したが、Ｃ１２の類似体では活性を喪失した。 K first _{2 (MSt-260} containing KL motif between branches: C 6, MSt-261: C 8, MSt-262: C 10, MSt-263: C 12, MSt-286: C 18, MSt-287: C ₂₄₎ and the _{3 (MSt-263: C 6} , MSt-265: C 8, MSt-266: C 10, MSt-267: C 12, MSt-301: C 16, MSt-284: C 18, MSt _{-285: C 24)} binding the hydrophobic carbon side chains to generation AMPD core, resulting in _C 6 _-C very high sequence activity in ₁₂ side chain, and _C 16 _{-C 24} side lower in strand activity (Table 15). The second generation AMPD, MSt-260-MSt-263, provides high MHC values despite the fact that hemolysis increases with longer carbon side chains. The binding of different carboxylic acids to MSt-264 to MSt-267 results in very low MHC values that have the same effect as hemolysis increases with longer carbon side chains. MSt-302, MSt-286, MSt-287, MSt-301, MSt-284, MSt-285 are all hemolytic at low concentrations and therefore have a low TI. Immobilization of C ₆ or C ₁₂ carboxylic acid to the N-terminus of second and third generation AMPD (MSt-288, MSt-290), and thus introduction of either four or eight copies of the carbon chain, is C6 Maintained the activity of AMPD in its carbon chain, but lost its activity in the C12 analog.

コアにおいてＣ６〜Ｃ１２の炭素鎖を持つ第３世代のＡＭＰＤ及び特に第２世代の類似体であり、類似したＴＩ値を有するデンドリマーは、臨床的単離株及び機構的な研究といった、変異株を用いるさらなる試験にとてもよく適する。 3rd generation AMPD with a C6-C12 carbon chain in the core, and especially 2nd generation analogs, dendrimers with similar TI values can be used to isolate mutant strains such as clinical isolates and mechanistic studies. Very well suited for further tests to use.

表１５：疎水性側鎖を含む第３世代のＡＭＰＤのＭＩＣ、ＭＨＣ及びＴＩの値
Table 15: MIC, MHC and TI values of 3 rd generation AMPD containing hydrophobic side chains

枯草菌及び大腸菌に対するＡＭＰＤの活性
広い範囲の異なる細菌をカバーするため、グラム陽性細菌である枯草菌ＢＲ１５１、及び別のグラム陰性細菌である大腸菌ＤＨ５αに対するＡＭＰＤの抗微生物活性をＡＭＰＤライブラリーで試験した。枯草菌に対する第３世代のＡＭＰＤのＭＩＣはすべて１〜１０μｇ／ｍＬの範囲のむしろ良い活性であり、ＭＳｔ−１７９はより低い効果である（表１６）。従って明確な構造活性相関は全く証明され得なかったが、明らかに疎水性アミノ酸のアラニン及びチロシンは活性の減少に重要な影響を及ぼすと考えられる。第３世代のＡＭＰＤを大腸菌に対して用いる場合、それらは緑膿菌と同じ効果の傾向を示す（表１０）が、いくつかのペプチド、ＭＳｔ−１９９、ＭＳｔ−１１４、ＭＳｔ−１２０は大幅に活性が低い。 Activity of AMPD against Bacillus subtilis and E. coli To cover a wide range of different bacteria, the antimicrobial activity of AMPD against Bacillus subtilis BR151, a Gram-positive bacterium, and Escherichia coli DH5α, another Gram-negative bacterium, was tested in an AMPD library. . The third generation AMPD MICs against Bacillus subtilis are all rather good activities in the range of 1-10 μg / mL, with MSt-179 being less effective (Table 16). Thus, although no clear structure-activity relationship could be demonstrated, it is clear that the hydrophobic amino acids alanine and tyrosine have an important effect on the decrease in activity. When third generation AMPD is used against E. coli, they show the same trend of effects as Pseudomonas aeruginosa (Table 10), but some peptides, MSt-199, MSt-114, MSt-120 are significantly more Low activity.

表１６：第３世代のＡＭＰＤのＭＩＣ、ＭＨＣ及びＴＩの値
Table 16: MIC, MHC and TI values for 3rd generation AMPD

第２世代のＡＭＰＤは枯草菌及び大腸菌のどちらにも活性がない一方、第２世代のＡＭＰＤは緑膿菌に非常に効果がある（表１１）。１つの配列である、アミノ酸としてＬ−２、３−ジアミノ酪酸及びトリプトファンを含むＭＳｔ−１７６は例外であると考えられる。トリプトファンを含む第２世代のＡＭＰＤは枯草菌に対しても同様に活性があり、グラム陽性細菌に対する活性に関する、非常に疎水的なアミノ酸の考えられる作用を示唆する。さらにＭＳｔ−１３９及びＭＳｔ−１１９は１６μｇ／ｍＬ及び２０μｇ／ｍＬでわずかに効果的であると考えられる。 Second-generation AMPD is not active against either B. subtilis or E. coli, while second-generation AMPD is very effective against P. aeruginosa (Table 11). One sequence, MSt-176 with L-2, 3-diaminobutyric acid and tryptophan as amino acids is considered to be an exception. Second generation AMPD containing tryptophan is equally active against Bacillus subtilis, suggesting a possible effect of very hydrophobic amino acids on activity against gram positive bacteria. In addition, MSt-139 and MSt-119 are considered to be slightly effective at 16 μg / mL and 20 μg / mL.

表１７：第２世代のＡＭＰＤのＭＩＣ、ＭＨＣ及びＴＩの値
Table 17: MIC, MHC and TI values of second generation AMPD

より大きい第４及び第５世代のペプチドデンドリマーは、第２世代より枯草菌及び大腸菌に対する活性がずっと高いが、第３世代の類似体は同様の範囲である（表１８）。低いＭＨＣの値のため、第４及び第５世代のペプチドデンドリマーのＴＩは第３世代のＡＭＰＤのＴＩより低い。二量体のＭＩＣデータは表１９に示す。 The larger fourth and fifth generation peptide dendrimers are much more active against Bacillus subtilis and E. coli than the second generation, but the third generation analogs are in a similar range (Table 18). Due to the low MHC values, TIs of the 4th and 5th generation peptide dendrimers are lower than those of 3 rd generation AMPD. The MIC data for the dimers are shown in Table 19.

表１８：チオエーテル連結によって調製された、分岐間に２つのアミノ酸を含む第４及び第５世代のＡＭＰＤのＭＩＣ、ＭＨＣ及びＴＩの値。
Table 18: MIC, MHC and TI values of 4th and 5th generation AMPDs with 2 amino acids between branches prepared by thioether linkage.

表１９：（システインＣによるホモ二量体化によって調製した）分岐間に２つのアミノ酸を含むペプチドデンドリマー二量体のアミノ酸配列、収率及びＭＳ分析
Table 19: Amino acid sequence, yield and MS analysis of peptide dendrimer dimers containing two amino acids between branches (prepared by homodimerization with cysteine C)

既報の通り、１１１１の第３世代のＡＭＰＤは２〜５μｇ／ｍＬの濃度で枯草菌に対する活性がある。同じトポロジーであるがリジン及びロイシンのみが異なる位置にある、ＭＳｔ−１４８及びＭＳｔ−１４９は依然として活性があるが、効果は小さい（表２０）。ＭＳｔ−１４８及びＭＳｔ−１４９は、それらをアップスケールのための理想的なペプチドにさせるように、よい収率を伴って容易かつ迅速な合成されるにもかかわらず、今までのところＭＳｔ−１４８及びＭＳｔ−１４９は、グラム陰性及びグラム陽性細菌へは他のペプチドデンドリマーと同等の効果は示さなかった。 As previously reported, 1111 third generation AMPD is active against Bacillus subtilis at a concentration of 2-5 μg / mL. MSt-148 and MSt-149, which are in the same topology but in positions that differ only in lysine and leucine, are still active but have a small effect (Table 20). Even though MSt-148 and MSt-149 have been synthesized easily and rapidly with good yields to make them ideal peptides for upscaling, so far MSt-148 And MSt-149 did not show the same effect on Gram negative and Gram positive bacteria as other peptide dendrimers.

表２０：（分岐間に１つのアミノ酸を含む）１１１１の第３世代のＡＭＰＤのＭＩＣ及びＴＩの値
Table 20: MIC and TI values of 3rd generation AMPD at 1111 (including one amino acid between branches)

３３３３の第２及び第３世代のＡＭＰＤであるＭＩＳ−０２、ＭＩＳ−０３、ＭＩＳ−０４、ＭＩＳ−０６及びＭＩＳ−０８（表２１）は全て枯草菌に対する活性が、０．５〜６μｇ／ｍＬと非常に効果が高く、ＭＩＳ−０５を除いて緑膿菌よりもずっと良好であった。これらは全て非常に溶血性が高く、故にこれらのＴＩはＭＩＳ−０４を除いて非常に低い。ＭＩＳ−０４は一般的なグラム陽性細菌のための、さらなる開発及び調査の有望な候補になるであろう。２２３３の第３世代のＡＭＰＤ（ＹＧＯ−００８、ＹＧＯ−００９、ＹＧＯ−０１０、ＹＧＯ−０１１）は大腸菌についてのみ試験したが、緑膿菌と同等の範囲である、２〜３μｇ／ｍＬという（表２１）優れた活性を示した（表１４）。 3333 second and third generation AMPDs, MIS-02, MIS-03, MIS-04, MIS-06 and MIS-08 (Table 21), all have an activity against Bacillus subtilis of 0.5-6 μg / mL. It was very effective and was much better than Pseudomonas aeruginosa except for MIS-05. They are all very hemolytic and therefore their TI is very low except for MIS-04. MIS-04 will be a promising candidate for further development and research for common gram positive bacteria. 2233 3rd generation AMPD (YGO-008, YGO-009, YGO-010, YGO-011) was tested only on E. coli but was in the same range as Pseudomonas aeruginosa, 2-3 μg / mL (Table 21) showed excellent activity (Table 14).

表２１：分岐間に２つ又は３つのアミノ酸を含む第３世代のＡＭＰＤのＭＩＣ、ＭＨＣ及びＴＩの値
Table 21: MIC, MHC and TI values of 3 rd generation AMPD containing 2 or 3 amino acids between branches

比較判断のため選択された２つの直鎖のペプチドであるＭＳｔ−１１７及びＲＨｅ−９は、緑膿菌（表１２）と比較して、枯草菌及び大腸菌（表２２）への活性において同じ傾向を示す。ＭＳｔ−１１７は第３世代のＡＭＰＤより非常に低い効能であり、かつ非常に溶血性がある。ＲＨｅ−９はグラム陽性細菌及びグラム陰性細菌の両方に非常に効果があり、かつ、溶血性がなく、結果として第３世代のＡＭＰＤと同等のＴＩである。 Two linear peptides selected for comparative judgment, MSt-117 and RHe-9, have the same trend in activity against Bacillus subtilis and E. coli (Table 22) compared to Pseudomonas aeruginosa (Table 12). Indicates MSt-117 is much less potent than third generation AMPD and is very hemolytic. RHe-9 is very effective against both gram positive and gram negative bacteria and is not hemolytic, resulting in a TI equivalent to third generation AMPD.

表２２：直鎖のＡＭＰのＭＩＣ、ＭＨＣ及びＴＩの値
Table 22: MIC, MHC and TI values for linear AMP

表２３は、ペプチドデンドリマーのＣ末端に疎水性炭素側鎖を含む、第２及び第３世代のＡＭＰＤを枯草菌及び大腸菌に対してリストする。全ての配列はＭＩＣが１〜６μｇ／ｍＬで、両方の細菌に非常に高い効果がある。Ｎ末端にＣ_２４の炭素鎖を含むＭＳｔ−２８５及びＭＳｔ−２８７、Ｃ_１６の炭素鎖を含むＭＳｔ−３０２及びＭＳｔ−３０１、Ｃ_６の炭素鎖を含むＭＳｔ−２６０のようなほんの数個の例外があり、全て非常に疎水的であり、かつ緑膿菌に全く活性がない（表１５）。それにもかかわらず、より溶血性が高くなると、より疎水的となり、結果としてより低いＴＩである（表２３）が、依然として強力な場合は１００より高い、ＭＳｔ−２６１、ＭＳｔ−２６２、ＭＳｔ−２６３、ＭＳｔ−２６４、ＭＳｔ−２６５、ＭＳｔ−２６６、ＭＳｔ−２６７、ＭＳｔ−２８４、ＭＳｔ−２８６、ＭＳｔ−２８８、ＭＳｔ−２９０のような、依然として非常に効果の高いＡＭＰＤがある。従って、ＭＳｔ−２６１、ＭＳｔ−２６２、ＭＳｔ−２６３、ＭＳｔ−２６４、ＭＳｔ−２６５、ＭＳｔ−２６６、ＭＳｔ−２６７は３種の試験細菌全てに対して非常に効果が高く、かつ大きな可能性がある。 Table 23 lists second and third generation AMPDs for B. subtilis and E. coli that contain hydrophobic carbon side chains at the C-terminus of the peptide dendrimer. All sequences have MICs of 1 to 6 μg / mL and are very effective against both bacteria. MSt-285 and MSt-287 to N-terminus contains a carbon chain of _{C 24, C 16} only a few, such as that MSt-302 and MSt-301, MSt-260 containing carbon chains of _{C 6,} including a carbon chain There are exceptions, all very hydrophobic and not active at all in P. aeruginosa (Table 15). Nevertheless, the more hemolytic, the more hydrophobic, and consequently the lower the TI (Table 23), but still higher than 100 if strong, MSt-261, MSt-262, MSt-263. There are still very effective AMPD, such as MSt-264, MSt-265, MSt-266, MSt-267, MSt-284, MSt-286, MSt-288, MSt-290. Therefore, MSt-261, MSt-262, MSt-263, MSt-264, MSt-265, MSt-266, MSt-267 are very effective against all three test bacteria and have a great potential is there.

表２３：１つ、４つ又は８つの疎水性側鎖を含む第２及び第３世代のＡＭＰＤのＭＩＣ及びＴＩの値
Table 23: MIC and TI values for 2nd and 3rd generation AMPD containing 1, 4 or 8 hydrophobic side chains

表２４：Ｃ１０アルキルカルボン酸側鎖を含む／含まないＧ２ ＡＭＰＤのＭＨ培地中で、ヒト血清存在下でのＰＡＯ１に対しての結果−アルキルカルボン酸側鎖のないＧ２はＬＢ中では活性を示すが、ＭＨ中では活性がない；
Table 24: Results for PAO1 in the presence of human serum in MH medium of G2 AMPD with / without C10 alkyl carboxylic acid side chain-G2 without alkyl carboxylic acid side chain shows activity in LB But no activity in MH;

表２５：ＭＨ培地中のＤａｂを含む化合物、及びＤＡＢを含まない化合物の、ＰＡＯ１に対するＭＩＣの値。結果はトリプリケートで行った２つの独立した実験（ＭＨ培地、１２〜１８時間）に対してである
Table 25: MIC values for PAO1 for compounds with and without DAB in MH medium. Results are for two independent experiments performed in triplicate (MH medium, 12-18 hours).

表２６：ＭＨ培地中のＤａｂを含む化合物、及びＤＡＢを含まない化合物の、緑膿菌ＭＤＲ臨床分離株、黄色ブドウ球菌及びアシネトバクター・バウマニに対するＭＩＣの値。結果はトリプリケートで行った２つの独立した実験（ＭＨ培地、１２〜１８時間）に対してである
Table 26: MIC values for compounds with Dab and without DAB in MH media against Pseudomonas aeruginosa MDR clinical isolates, Staphylococcus aureus and Acinetobacter baumannii. Results are for two independent experiments performed in triplicate (MH medium, 12-18 hours).

表２７：緑膿菌及びアシネトバクター・バウマニにの薬剤耐性株に対するＧ３ＫＬのＭＩＣの値
Table 27: G3KL MIC values for drug resistant strains in Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter baumannii

表２８：数個の薬剤耐性病原体に対するＧ３ＫＬのＭＩＣの値
Table 28: G3KL MIC values for several drug-resistant pathogens

臨床的な緑膿菌、黄色ブドウ球菌、アシネトバクター・バウマニ単離株に対するＡＭＰＤの最小発育阻止濃度及び耐性分析
最も有望な１０個の化合物（図５）について、緑膿菌の４つの単離株（ＺＥＭ９．Ａ，ＺＥＭ１．Ａ，ＰＥＪ２．６，ＰＥＪ９．１）、黄色ブドウ球菌の１つの単離株（ＣＯＬ，ＭＲＳＡ参考株）及び１つのアシネトバクター・バウマニ菌株に対する効率（ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）を試験した。ジュネーブにおける実験では、ペプチドデンドリマー及び参照化合物（ポリミキシン）はＰＢＳに溶解され、２倍希釈のミューラー・ヒントン（ＭＨ）培養液によって分析された。 Minimal Inhibitory Concentrations and Tolerance Analysis of AMPD against Clinical Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Acinetobacter baumannii Isolates Four isolates of Pseudomonas aeruginosa (FIG. 5) for the 10 most promising compounds (FIG. 5) ZEM9.A, ZEM1.A, PEJ2.6, PEJ9.1), one isolate of S. aureus (COL, MRSA reference strain) and efficiency against one Acinetobacter baumannii strain were tested. In experiments in Geneva, peptide dendrimers and reference compounds (polymyxins) were dissolved in PBS and analyzed by a 2-fold dilution of Mueller Hinton (MH) broth.

４つの緑膿菌臨床単離株に対して試験をした全てのＡＭＰＤは２０μｇ／ｍｌより低い活性を示し、リシン（ＭＳｔ−２４２）の代わりにアルギニンと結合した第３世代のデンドリマーのみが、緑膿菌ＥＺＭ９．Ａに対してわずかに高い活性を示した。これらの単離株は、イミペネム、メロペネム、トリメトプリム及びスルホンアミドのような汎用的に使われる抗生物質に対して耐性があり、それ故に代替物として高い可能性を有する。これらのＡＭＰＤは、もう１つの病原グラム陰性菌であるアシネトバクター・バウマニに対して６−１９μｇ／ｍＬの範囲の活性を示す。一度耐性を発現すると問題となり得る、グラム陰性菌である黄色ブドウ球菌はまた分析に含められ、第２世代ＡＭＰＤのＭｓｔ−１７６、Ｍｓｔ−２６３及び第３世代ＡＭＰＤのＭｓｔ−２４２は２０μｇ／ｍＬよりも低い活性を示した。 All AMPDs tested against 4 P. aeruginosa clinical isolates showed activity below 20 μg / ml, and only the third generation dendrimer bound to arginine instead of lysine (MSt-242) Pseudomonas aeruginosa EZM9. It showed slightly higher activity against A. These isolates are resistant to commonly used antibiotics such as imipenem, meropenem, trimethoprim and sulfonamide and therefore have a high potential as an alternative. These AMPDs show activity in the range of 6-19 μg / mL against another pathogenic Gram-negative bacterium, Acinetobacter baumannii. The gram-negative staphylococcus aureus, which can be problematic once it develops resistance, is also included in the analysis, with second generation AMPD Mst-176, Mst-263 and third generation AMPD Mst-242 starting at 20 μg / mL It also showed low activity.

ヒト血清中のＡＭＰＤの安定性
ペプチドデンドリマーは、前述のとおり、その直線の類似体と比較してタンパク質分解に非常に安定である。それらの分岐点である開裂部位は、プロテアーゼが作用し難いからである。分岐単位の間のアミノ酸の数もまた、より高い安定性にとって重要である。 Stable peptide dendrimers of AMPD in human serum, as mentioned above, are very stable to proteolysis compared to their linear analogues. This is because the cleavage site, which is the branching point thereof, is difficult for proteases to act. The number of amino acids between the branching units is also important for higher stability.

ペプチドは、プロテアーゼに対するＡＭＰＤの安定性を測定するために、最終的なペプチド濃度が１００μｍになるようにヒト血清（事前にＤＭＥＭにより希釈した）と混合され、かつ３７℃において０、１、６又は２４時間培養された。ＴＣＡによってタンパク質を沈殿させた後、溶液を分析的ＲＰ−ＵＰＬＣにより分析した。２４時間にわたって、ＡＭＰＤのＭＳｔ−１１２及びＭＳｔ−１８１のシグナルは一定を維持し、それ故にタンパク質分解は起こらないか、又は少しだけ起こった。ところが、直線状のペプチドＲＨｅ−９（ＳＥＱ ＩＤ １）は完全に消滅する。これは、このペプチドが２４時間にわたり完全にタンパク質分解を起こすことを示唆している。興味深いことに、Ｄ−エナンチオマーのＭＳｔ−１８１に比べて、全てのＬ−エナンチオマーのＭｓｔ−１１２は同じ挙動を示す。これは、Ｌ−エナンチオマーＡＭＰＤは既に十分に安定であり、かつＤ−エナンチオマーはその可能性としてある毒性は避けることができることを示す。ＡＭＰＤのＭｓｔ−１１４、Ｍｓｔ−１３６、Ｍｓｔ−１３８、Ｍｓｔ−１３９、Ｍｓｔ−１４０及びＭｓｔ−１７６の安定性がまた調べられた。Ｍｓｔ−１３６、Ｍｓｔ−１３８及びＭｓｔ−１３９は２４時間安定であり、しかしながらペプチドデンドリマーＭｓｔ−１１４及びＭｓｔ−１３９は完全には分解しなかったが、少しの分解を示した。ヒト血清中の、天然Ｌ−アミノ酸のみが結合したペプチドデンドリマーの安定性は、天然でない物質が結合したペプチドと比較して、治療薬の開発において著しい優位点を示す。 Peptides are mixed with human serum (previously diluted with DMEM) to a final peptide concentration of 100 μm and measured at 0, 1, 6 or 37 ° C. to measure the stability of AMPD against protease. Incubated for 24 hours. After protein precipitation by TCA, the solution was analyzed by analytical RP-UPLC. Over 24 hours, the AMPD MSt-112 and MSt-181 signals remained constant and therefore no or very little proteolysis occurred. However, the linear peptide RHe-9 (SEQ ID 1) disappears completely. This suggests that this peptide undergoes complete proteolysis over 24 hours. Interestingly, all L-enantiomers Mst-112 show the same behavior compared to the D-enantiomer MSt-181. This indicates that the L-enantiomer AMPD is already sufficiently stable, and the D-enantiomer can avoid its possible toxicity. The stability of AMst Mst-114, Mst-136, Mst-138, Mst-139, Mst-140 and Mst-176 was also examined. Mst-136, Mst-138 and Mst-139 were stable for 24 hours; however, the peptide dendrimers Mst-114 and Mst-139 did not completely degrade but showed little degradation. The stability of peptide dendrimers to which only natural L-amino acids are linked in human serum represents a significant advantage in the development of therapeutic agents as compared to peptides to which non-natural substances are linked.

ＡＭＰＤの安定性を示すもう１つの実験は、緑膿菌ＰＡＯ１の細菌懸濁液とペプチドとの培養である。細菌をＬＢ中で一晩培養し、ＯＤ_６００＝０．２まで希釈した。１００μＭの濃度になるようにペプチドを加えた後、サンプルを３７℃で０、１、６、９、２４時間培養した。懸濁液を９５℃で５分加熱し、遠心分離した後、溶液はＵＰＬＣに供し、残ったペプチドはＣｈｒｏｍｅｌｅｏｎソフトウェアを用いて分析した。分析は、２４時間経った後でさえ、細菌懸濁液はＡＭＰＤのＭｓｔ−１１２、Ｍｓｔ−１１４、Ｍｓｔ−１３６、Ｍｓｔ−１３８、Ｍｓｔ−１３９、Ｍｓｔ−１４０、Ｍｓｔ−１７６、及びＭｓｔ−１８１を減成させないこと、一方で、ＲＨｅ−９（ＳＥＱ ＩＤ １）は９時間後において検出されないことを示した。 Another experiment demonstrating the stability of AMPD is the culture of bacterial suspensions of P. aeruginosa PAO1 with peptides. Bacteria were grown overnight in LB and diluted to an OD ₆₀₀ = 0.2. After adding the peptide to a concentration of 100 μM, the samples were incubated at 37 ° C. for 0, 1, 6, 9, 24 hours. After the suspension was heated at 95 ° C. for 5 minutes and centrifuged, the solution was subjected to UPLC and the remaining peptides were analyzed using Chromeleon software. The analysis shows that even after 24 hours, the bacterial suspension is AMPD Mst-112, Mst-114, Mst-136, Mst-138, Mst-139, Mst-140, Mst-176, and Mst-181. , While RHe-9 (SEQ ID 1) was not detected after 9 hours.

真核生物及び原核生物の細胞膜にとってのモデル系としての、大規模単層ベシクル（ＬＵＶｓ）とＡＭＰＤとの相互作用
細菌膜は、曝されたアニオン性脂質の比較的多くを含む。一方で植物及び動物の膜の外側は、主に正味荷電のない脂質によって構成されている。そのような膜の荷電の構成はリン脂質小胞によって模倣され得る。負の電荷を帯びたＰＧ（ホスファチジルグリセロール）又はＰＣ（ホスファチジルコリン）を含む中性のリン脂質により構成された大規模単層ベシクル（ＬＵＶｓ）が調製され、５（６）−カルボキシフルオレセイン（ＣＦ）をカプセル化した。これらのＬＵＶｓはＡＭＰＤのＭｓｔ−１１２、Ｍｓｔ−１１４、Ｍｓｔ−１７６、及びＭｓｔ−１８１、並びに不活性なペプチドデンドリマーであるＭｓｔ−１３８、Ｍｓｔ−１３９により、それぞれ異なる濃度で処理された。ホスファチジルグリセロールからのＬＵＶｓ溶液に、５０秒で活性のある第３世代のＡＭＰＤであるＭｓｔ−１１２を加えたところ、蛍光の増加が起こった。Ｍｓｔ−１１２の濃度が高いほど、ＣＦの漏出が多くなった（図６Ａ）。ホスファチジルグリセロールＬＵＶｓにおける（on）不活性なＭｓｔ−１１３は１００μｍ／ｍＬにおいてさえも即座に増加を示すことはなく、時間が経過しても無視できる程度の漏出を示すのみであった（図６Ｂ）。既知の膜攪乱物質であるポリミキシン並びに、全ての活性なＡＭＰＤ（Ｍｓｔ−１１４、Ｍｓｔ−１７６、及びＭｓｔ−１８１）は、ペプチドの添加に伴い、同様のＣＦの即座の漏出を示す。細菌中でのタンパク質の生合成を妨害する抗生物質であるＭｓｔ−１３８及びトブラマイシンは、Ｍｓｔ−１１３のようにＣＦの漏出を示さない。一方で、同じ濃度における活性なＡＭＰＤとは異なって、Ｍｓｔ−１３９はＣＦを漏出する。全ての活性なＡＭＰＤは負の電荷を帯びた膜と相互作用を起こし、ＣＦを漏出する。それ故に、膜の透過処理及び攪乱は起こりそうに思われるが、一方で、不活性なペプチドはＬＵＶｓの脂質と部分的に相互作用するか又は相互作用しない。 Interaction of large scale unilamellar vesicles (LUVs) with AMPD as a model system for eukaryotic and prokaryotic cell membranes Bacterial membranes contain relatively many of the exposed anionic lipids. On the other hand, the outside of plant and animal membranes is mainly composed of lipids with no net charge. Such membrane charge organization can be mimicked by phospholipid vesicles. Large scale unilamellar vesicles (LUVs) composed of neutral phospholipids containing negatively charged PG (phosphatidyl glycerol) or PC (phosphatidyl choline) were prepared, and 5 (6) -carboxyfluorescein (CF) Encapsulated. These LUVs were treated with AMPD's Mst-112, Mst-114, Mst-176, and Mst-181, and inactive peptide dendrimers Mst-138 and Mst-139 at different concentrations. The addition of Mst-112, an active third generation AMPD at 50 seconds to the LUVs solution from phosphatidyl glycerol, resulted in an increase in fluorescence. The higher the concentration of Mst-112, the more CF leaked (FIG. 6A). (On) Inactive Mst-113 in phosphatidylglycerol LUVs did not show an immediate increase even at 100 μm / mL, only a negligible leakage over time (FIG. 6B). . Polymyxin, a known membrane disruptor, and all active AMPDs (Mst-114, Mst-176, and Mst-181) show similar immediate leakage of CF with the addition of peptides. Antibiotics Mst-138 and tobramycin, which interfere with protein biosynthesis in bacteria, do not show CF leakage like Mst-113. On the other hand, unlike active AMPD at the same concentration, Mst-139 leaks CF. All active AMPD interacts with the negatively charged membrane and leaks CF. Therefore, membrane permeabilization and perturbation are likely to occur, while inactive peptides partially or not interact with the LUVs lipids.

Ｍｓｔ−１１２がホスファチジルコリン由来のＬＵＶｓ溶液に供された場合、ＭＩＣ値と比較して非常に高い濃度でさえ、ＣＦは漏出しない（図７Ａ）。他の全ての活性なＡＭＰＤ及びポリミキシンは同様にふるまう。一方で、高い疎水性の第２世代ペプチドであり、他に比べてより高い溶血性を示す（表１１）Ｍｓｔ−１７６は、ＣＦの漏出を誘発する。Ｍｓｔ−１１３（図７Ｂ）、Ｍｓｔ−１３８及びＭｓｔ−１３９並びにトブラマイシンはＣＦを漏出しないという同じ挙動を示す。 When Mst-112 is subjected to LUVs solution derived from phosphatidyl choline, CF does not leak even at very high concentration compared to MIC value (FIG. 7A). All other active AMPD and polymyxins behave similarly. On the other hand, Mst-176, which is a highly hydrophobic second generation peptide and shows higher hemolysis than others (Table 11), induces CF leakage. Mst-113 (FIG. 7B), Mst-138 and Mst-139 and tobramycin show the same behavior as not leaking CF.

第２世代（Ｍｓｔ−２６０、Ｍｓｔ−２６１、Ｍｓｔ−２６２、Ｍｓｔ−２６３）及び第３世代（Ｍｓｔ−２６４、Ｍｓｔ−２６５、Ｍｓｔ−２６６、Ｍｓｔ−２６７）ＡＭＰＤに炭素の側鎖を導入した場合は、ホスファチジルグリセロールＬＵＶｓ溶液に、Ｍｓｔ−１１２と同様の方法で、５０秒でさまざまな濃度でペプチドデンドリマーを添加した後に、ＣＦは即座に漏出する（図８ＡのＭｓｔ−２６０に示されている）。唯一の違いは、様々な濃度における第２世代及び第３世代ＡＭＰＤの強度である。１つの追加の世代では、同一の濃度で増加する蛍光はより高い。従って、これらの全てのＡＭＰＤは負の電荷を帯びたモデル膜と相互作用し、完全な状態の膜を妨害して、ＣＦを漏出させる。正味荷電が無いモデル膜であるホスファチジルコリンが使用された場合は、ＣＦ漏出は高いペプチドデンドリマー濃度においてのみ観察される（図８ＢのＭｓｔ−２６０）。疎水性側鎖中の炭素原子数の増加に伴って、ＣＦ漏出の強度は強くなる。これはｈＲＢＣの溶解に一致し、ここでより長い炭素鎖はより低い濃度における溶血を誘発する。 Carbon side chains were introduced into the second generation (Mst-260, Mst-261, Mst-262, Mst-263) and third generation (Mst-264, Mst-265, Mst-266, Mst-267) AMPD. In some cases, CF leaks immediately after adding peptide dendrimers in phosphatidylglycerol LUVs solution at various concentrations in the same manner as Mst-112 in 50 seconds (shown in Mst-260 in FIG. 8A). ). The only difference is the intensity of the second and third generation AMPD at various concentrations. In one additional generation, the fluorescence increasing at the same concentration is higher. Thus, all these AMPDs interact with the negatively charged model membrane and interfere with the intact membrane to leak CF. CF leakage is only observed at high peptide dendrimer concentrations when phosphatidylcholine, a model membrane with no net charge, is used (Mst-260 in FIG. 8B). As the number of carbon atoms in the hydrophobic side chain increases, the strength of CF leakage increases. This is consistent with hRBC lysis, where longer carbon chains induce hemolysis at lower concentrations.

殺菌の反応速度論
ＡＭＰＤの殺菌反応速度論を明らかにするために、ＡＭＰＤと培養した後の時間関数としての生菌量を測定した。生菌を検知するためのＷＳＴ−８を用いた分析を使用した（Ｒｏｅｈｍ，Ｎ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１４２，２５７−２６５；Ｃｈａｎｇ，Ｊ．−Ｙ．ｅｔ ａｌ．，１９９１ Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９７，５２−５８）。それ故緑膿菌は、生菌に比例する、ホルマザンの４５０ｎｍの吸光度を測定する前に、ＡＭＰＤ又は不活性なペプチドデンドリマーにより、２５μｍ／ｍＬの濃度で、０、１、３、６、８、２４時間培養した。図９は２４時間に渡る細菌生存を示す。全てのＡＭＰＤ（Ｍｓｔ−１１２、Ｍｓｔ−１７６、Ｍｓｔ−１８１）は、ペプチドデンドリマーの添加直後に、細菌の少なくとも６０％がまだ生きているという、同じ挙動を示した。ほとんどのＡＭＰＤは、完全な殺菌に３時間を要する。参照化合物であり、緑膿菌を即座に殺菌するポリミキシン及びトブラマイシンと比較して、ＡＭＰＤはより遅く作用するようである。予期されるとおり、不活性なペプチドデンドリマーＭｓｔ−１３８及びＭｓｔ−１３９は、２４時間後に細菌量を減少させることはできなかった。ＡＭＰＤのＭｓｔ−１１４の性能として、それは非常に強いものであるが、他のＡＭＰＤとは異なる。２４時間後においてのみ、ほぼ全ての細菌が殺菌された。 Kinetic Kinetics To clarify the sterilizing kinetics of AMPD, the amount of viable bacteria as a function of time after incubation with AMPD was measured. Analysis using WST-8 to detect viable bacteria was used (Roehm, NW et al., 1991, J. immunol. Methods, 142, 257-265; Chang, J.-Y. et. al., 1991 Anal. Biochem, 197, 52-58). Therefore, Pseudomonas aeruginosa was measured at 0, 1, 3, 6, 8, at a concentration of 25 μm / mL with AMPD or an inactive peptide dendrimer before measuring the absorbance at 450 nm of formazan, which is proportional to viable bacteria. Cultured for 24 hours. FIG. 9 shows bacterial survival over 24 hours. All AMPD (Mst-112, Mst-176, Mst-181) showed the same behavior that at least 60% of the bacteria were still alive immediately after addition of the peptide dendrimer. Most AMPDs require 3 hours for complete sterilization. Compared to polymyxin and tobramycin, which are reference compounds and immediately kill Pseudomonas aeruginosa, AMPD appears to act more slowly. As expected, the inactive peptide dendrimers Mst-138 and Mst-139 were unable to reduce bacterial load after 24 hours. As the performance of Mst-114 of AMPD, it is very strong, but different from other AMPD. Only after 24 hours almost all bacteria were killed.

コアにおいてＣ_８（Ｍｓｔ−２６１及びＭｓｔ−２６３）又はＣ_１２（Ｍｓｔ−２６５及びＭｓｔ−２６７）の炭素側鎖と結合する第２世代及び第３世代ＡＭＰＤと、Ｍｓｔ−１１２とを比較すると、異なる挙動が現れた。すなわち添加のすぐ後に６０％の細菌が殺菌され、１時間後にその数は既にゼロになった。それ故、炭素側鎖の結合は殺菌の反応速度論を変化させると思われる。この分析は、ＡＭＰＤの殺菌の反応速度論の第１の示唆を与えるが、生体外での殺菌に要する時間を決定するためには、さらなる実験が必要である。 A comparison of Mst-112 with second- and third-generation AMPD, which combines with carbon side chains of C ₈ (Mst-261 and Mst-263) or C ₁₂ (Mst-265 and Mst-267) in the core, Different behavior appeared. Thus, 60% of the bacteria were killed shortly after the addition and after one hour their number had already become zero. Therefore, the attachment of carbon side chains is believed to alter the kinetics of sterilization. Although this analysis provides the first indication of the kinetics of sterilization of AMPD, further experimentation is necessary to determine the time required for sterilization in vitro.

耐性分析
ＡＭＰＤがどのぐらい早く耐性を発現し得るかの初期の見積りのために、ＭＩＣを１５日連続して繰り返し測定し、測定日毎に決定した。通常の培養液希釈分析法においてＭＩＣ値を得た後、１／２ＭＩＣウェルからの細菌（枯草菌）を２〜５時間培養し、希釈分析を繰り返した。この手順は１５日実行され、測定日毎のＭＩＣが比較された。ＭＩＣが増加する場合には、ＡＭＰＤに対する耐性が示唆される。この実験においては、とても効力の強いＭｓｔ−１１２、Ｍｓｔ−１７６、Ｍｓｔ−１８１は１５日に渡ってそのＭＩＣ値は著しく変化することはなかった。これに対して、効力がより弱いＭｓｔ−１１４、Ｍｓｔ−１３９、Ｍｓｔ−１４０は、５〜１０日後において、既に活性の喪失を示した。 Resistance analysis For initial estimation of how quickly AMPD can develop resistance, MIC was measured repeatedly for 15 consecutive days and determined every measurement day. After obtaining the MIC value in the usual culture broth dilution analysis method, the bacteria (Bacillus subtilis) from the 1/2 MIC well were cultured for 2 to 5 hours, and the dilution analysis was repeated. This procedure was carried out for 15 days, and the MICs for each measurement day were compared. Increased MICs indicate resistance to AMPD. In this experiment, the very potent Mst-112, Mst-176, and Mst-181 did not significantly change their MIC values over 15 days. In contrast, the less potent Mst-114, Mst-139, Mst-140 already showed a loss of activity after 5-10 days.

ＡＭＰＤの毒性−ラットを用いた予備の生体内試験
ＫＬモチーフ（ｍｏｔｉｖｅ）を含む第３世代のＡＭＰＤであるＭｓｔ−１１２化合物、Ｍｓｔ−１８１のＤ−エナンチオマー類似体、ＲＬモチーフ（motive）を含む第３世代のＡＭＰＤであるＭｓｔ−２４２、及びリシンの代わりにチロシンを含む第３世代のＭｓｔ−１１４が、毒性を査定するための、雄のウィスター系ラットを用いた生体内試験に使用された。これらの化合物は、それらの活性に比べて少なくとも１０倍の高さである、高いＭＨＣ値及びその効力の強さのために選ばれた。それぞれの化合物（２ｍｇ／ｋｇの濃度である）は、ＡＭＰＤの耐性が十分に発現しているか、又は副作用を引き起こし得るかを観察するために、２匹のラットに対し、尾の静脈注射に適用された。ＭＩＣより約５〜１０倍高い濃度を使用した。ＡＭＰＤのＭｓｔ−１１２及びＭｓｔ−２４２を注入した後、ラットは標準的な振る舞いをし、かつ目に見える効果は観察されなかった。ＡＭＰＤのＭｓｔ−１１４及びＭｓｔ−１８１の注入により、四肢がわずかに青みを帯びたが、これは約５分の後に治まった。ラットは標準的な振る舞いをした。ラットを２日間観察した結果、ラットの振る舞いに異常は見られず、また生存率は１００％であった。５００μＬのＰＢＳを注入したか、又は注入をしていないコントロールのラットはまた、２日の間に標準的な振る舞いを示し、かつ１００％の生存率を示した。それ故、ラットはＡＭＰＤによく耐え、目に見えるサイト効果又は傷さえもないように思われた。 AMPD Toxicity-Preliminary in vivo testing with rats Mst-112 compound, a third generation AMPD containing KL motif (motive), D-enantiomer analogue of Mst-181, RL motif (motive) The 3rd generation AMPD Mst-242 and the 3rd generation Mst-114 containing tyrosine instead of lysine were used for in vivo testing with male Wistar rats to assess toxicity. These compounds were chosen for their high MHC values and their potency, which is at least 10 times higher than their activity. Each compound (at a concentration of 2 mg / kg) was applied to tail vein injection in 2 rats to observe whether AMPD tolerance was fully developed or could cause side effects It was done. A concentration about 5-10 times higher than the MIC was used. After injection of AMPD Mst-112 and Mst-242, the rats behaved normally and no visible effect was observed. The injection of AMPD Mst-114 and Mst-181 caused the limbs to be slightly bluish, which subsided after about 5 minutes. The rat behaved normally. As a result of observing the rats for 2 days, no abnormality was observed in the behavior of the rats, and the survival rate was 100%. Control rats injected or not injected with 500 μL of PBS also showed normal behavior during 2 days and 100% survival. Therefore, the rats well tolerated AMPD and appeared to have no visible site effects or even scratches.

結論
病原性のグラム陰性菌である緑膿菌に対する、７８の化合物のペプチドデンドリマーライブラリーのスクリーニングの後、赤血球の、低い溶血性及び高い活性を持つのいくつかのデンドリマーが発見された。いくつかは第２世代のペプチドデンドリマー（Ｍｓｔ−１３８、Ｍｓｔ−１３９、Ｍｓｔ−１７６）であり、他は第３世代のペプチドデンドリマー（Ｍｓｔ−１１２、Ｍｓｔ−１８１、Ｍｓｔ−２４２）である。グラム陰性菌である大腸菌及びグラム陰性菌である枯草菌に対する追加のスクリーニングによって、Ｍｓｔ−１７６、Ｍｓｔ−１１２、Ｍｓｔ−１１８及びＭｓｔ−２４２の幅広い効果が明らかとなった。緑膿菌は一般的な抗生物質に対する耐性を示すが、この臨床単離株によるさらなる研究において、第２世代のＡＭＰＤであるＭｓｔ−１７６及び第３世代のＡＭＰＤであるＭｓｔ−１１２、Ｍｓｔ−１１８及びＭｓｔ−２４２は同様に有効であった。グラム陰性菌でアシネトバクター・バウマニに対して、それらはいくらかの活性を示した。 Conclusions After screening a peptide dendrimer library of 78 compounds against Pseudomonas aeruginosa, a pathogenic Gram-negative bacterium, several dendrimers with low hemolytic and high activity of erythrocytes were discovered. It was. Some are second generation peptide dendrimers (Mst-138, Mst-139, Mst-176) and others are third generation peptide dendrimers (Mst-112, Mst-181, Mst-242). Additional screening against Gram-negative bacteria E. coli and Gram-negative bacteria Bacillus subtilis revealed a broad effect of Mst-176, Mst-112, Mst-118 and Mst-242. Although P. aeruginosa is resistant to common antibiotics, in further studies with this clinical isolate, the second generation AMPD Mst-176 and the third generation AMPD Mst-112, Mst-118 And Mst-242 were equally effective. They showed some activity against Gram-negative bacteria and Acinetobacter baumannii.

Ｃ６からＣ_１２の範囲のアルキル鎖を、第２世代のＡＭＰＤのコアに結合させることで、より広い殺菌スペクトルを持つ抗菌剤が生成された。これらの配列はまたアシネトバクター・バウマニ及び院内耐性菌に対して有効である。最良の化合物の活性は、クリニックで最後の手段として使用される、効力がとても強いポリミキシンの活性と同じ範囲にある。他のペプチド性化合物と比較した際のＡＭＰＤの優位点は、それらのヒト赤血球への低毒性、プロテアーゼによる分解が遅いこと、及び天然のアミノ酸のみが存在することである。集められた証拠は同様に、細胞膜が崩壊し、細胞が溶解し、かつ細菌が死滅する作用機構を指し示す。緑膿菌変異株、ＬＵＶｓ及び殺菌反応速度論の実験は細胞膜崩壊に向けられる。ここで、ＬＰＳ構造はペプチドデンドリマーを妨害しない。それ故、ＡＭＰＤを用いた治療は耐性を急速に発現させることはなさそうである。 Alkyl chains ranging from C6 to C _12, that is coupled to the core of the second generation of AMPD, antibacterial agents with a broader fungicidal spectrum was generated. These sequences are also effective against Acinetobacter baumannii and nosocomial resistant bacteria. The activity of the best compounds is in the same range as that of the very potent polymyxin used as a last resort in the clinic. The advantages of AMPD as compared to other peptidic compounds are their low toxicity to human erythrocytes, slow degradation by proteases, and the presence of only natural amino acids. Collected evidence also points to a mechanism of action in which cell membranes collapse, cells lyse, and bacteria die. Experiments with Pseudomonas aeruginosa mutants, LUVs and bactericidal kinetics are directed to cell membrane disruption. Here, the LPS structure does not interfere with the peptide dendrimer. Therefore, treatment with AMPD is unlikely to rapidly develop tolerance.

我々の、新種の抗菌剤である、分岐単位の間の２又は３のアミノ酸を含むＡＭＰＤは、非毒性であり安定な系である。これは、好収率で容易に合成され、生体外で、ヒト病原体に対して高い効果を示す。活性な配列はアルキル鎖を含む又は含まない（with or without）第３世代、第２世代である可能性がある。ペプチドデンドリマーは、１つの精製工程のみを伴って固相担体上で調製され、より低位の世代の２つのデンドリマー（ｃｃｓ−２０を見よ）から溶液中に集められ、好収率で第３世代のデンドリマーを提供する。構造の柔軟さは、直線又は環状の対応物では見られない、我々のペプチドデンドリマーの比類のない特徴であり、かつ、希望の薬物動態を持つ化合物を得るための更なる適正化に関する優位点を与える。記載された生体外の試験は、今、生体内の試験の枠組みを示し、これはペプチドデンドリマーに基づいた治療薬の開発の目標に向かう工程となるだろう。 Our new class of antimicrobials, AMPD, which contains 2 or 3 amino acids between branching units, is a non-toxic and stable system. It is easily synthesized in good yield and exhibits high efficacy against human pathogens in vitro. The active sequences may be third generation, second generation, with or without alkyl chains. Peptide dendrimers are prepared on a solid support with only one purification step, collected in solution from two lower generation dendrimers (see ccs-20), and in good yields of third generation Provide dendrimers. Structural flexibility is an unrivaled feature of our peptide dendrimers not found in linear or cyclic counterparts, and offers the advantage of further optimization to obtain compounds with the desired pharmacokinetics. give. The described in vitro test now represents an in vivo test framework, which will be a step towards the goal of developing therapeutic agents based on peptide dendrimers.

ヒト血清（ＭＨ培地中の３０％血清）の存在下での抗菌活性が調べられ、ＭＨ培地中で観察された低いＭＩＣを維持するためにＧ３ＫＬが示された。タンパク質分解安定性を測定し、ＭＨ培地中で非常に高い活性を示すが、血清中ではタンパク質分解のために効力を失う直線の配列と対照的に、Ｇ３ＫＬは血清中で極めて安定であった。 Antibacterial activity in the presence of human serum (30% serum in MH medium) was examined and indicated G3 KL to maintain the low MIC observed in MH medium. Proteolytic stability was measured and showed very high activity in MH medium, but G3KL was very stable in serum, in contrast to a linear sequence that lost potency due to proteolysis in serum.

他剤耐性病原体の大形のパネル（pannel）を、Ｇ３ＫＬにより調べた。デンドリマーは、耐性のメカニズムから独立して試験された緑膿菌及びアシネトバクター・バウマニのほぼ全ての株に対して、非常に高い活性を示した。Ｇ３ＫＬのＭＢＣがまた調べられ、これは、デンドリマーがＭＩＣと同一又は非常に近いＭＢＣの値で殺菌力を示した。デンドリマーは、延長して暴露した後で、ヒトの細胞に対して非毒性であった。 A large panel of other drug resistant pathogens was examined by G3KL. Dendrimers showed very high activity against almost all strains of P. aeruginosa and Acinetobacter baumannii tested independently of the mechanism of resistance. G3KL MBC was also examined, which showed that the dendrimer showed bactericidal activity at values of MBC identical or very close to MIC. Dendrimers were non-toxic to human cells after prolonged exposure.

コアＧ２ＫＬＣ１０において、脂質側鎖Ｃ１０（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３）を含む第２世代ペプチドデンドリマー及び類似体はまた、緑膿菌（ＰＡ）に対して非常に高い活性を示すことが発見された。とりわけ、臨床単離株を含むＰＡに対して非常に高い活性を示す３つの新しい化合物が特定される可能性がある。加えて、１つのＧ２Ｃ１０であるＡＭＰＤがＭＲＳＡに対して良好な活性を示した。第２世代のデンドリマーは第３世代のデンドリマー（Ｇ２ＫＬ １７アミノ酸残基及びＧ２ＫＬ ３７アミノ酸残基）よりも小さいが、脂質鎖を含むＧ２デンドリマーは血清の存在下で活性を示し、かつ血清中で良好な安定性を示す（Ｇ２ＫＬＣ１０及びＴＮＳ−１２２を見よ）。

In the core G2KLC10, second-generation peptide dendrimers and analogs containing lipid side chain _{C10 (CO (CH 2) 8} CH 3) may also be been found to exhibit very high activity against Pseudomonas aeruginosa (PA) It was. In particular, three new compounds with very high activity against PAs including clinical isolates may be identified. In addition, one G2C10, AMPD, showed good activity against MRSA. Although second generation dendrimers are smaller than third generation dendrimers (G2 KL 17 amino acid residues and G2 KL 37 amino acid residues), G2 dendrimers containing lipid chains show activity in the presence of serum and are good in serum (See G2KLC10 and TNS-122).

Claims (15)

一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、かつ、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するＤのアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓ（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）であり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１であり、
Ｚは中心部分であり、
それぞれのＢ（Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６）はその他のＢから独立して分岐部分であり、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ−１（ＮＨ）_２ＣＯ−で表されるジアミノアルキルカルボン酸部分を表し（式中、Ｈは水素原子であり、かつ、Ｃは炭素原子である。）、ｎは２〜１０の間の数であり、
それぞれのＤ（Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６）はその他のＤから独立して、
ｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ、又は
ｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）
である。）
で表される、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマー。 Formula _{^{X- (B 2 - [Y 2}} ] s -D 1) 2 -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 ) _8- (B ^3- [Y ³ ] _r -D ² ) ₄ , and
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of the binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of the D amino acid adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in (wherein H comprises a hydrophobic side chain Any amino acid, and C is any amino acid comprising a cationic side chain).
o, p, q, r and s are 0 or 1,
Z is the central part,
Each B (B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ ) is a branching moiety independently of the other B and has the general formula C _n H _{2 n-1} (NH) ₂ CO- Represents a diaminoalkylcarboxylic acid moiety represented by (wherein H is a hydrogen atom and C is a carbon atom) , n is a number between 2 and 10 ,
Their Re Each of ^{D (D 1, D 2,} D 3, D 4, D 5 and ^{D 6)} is independent of the other and D,
i. Dipeptide CH, HC, CC or HH, or ii. Tripeptides HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(Wherein, H is any amino acid comprising a hydrophobic side chain, and C is any amino acid comprising a cationic side chain)
It is. )
A peptide dendrimer for use as a drug represented by: ａ．Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６は独立して、リジン、オルニチン、（Ｌ）−２、３−ジアミノプロピオン酸及び（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸から選択され、
ｂ．前記疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であるＨはロイシン、フェニルアラニン、アラニン、チロシン又はトリプトファンから選択され、及び／又は
ｃ．前記カチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸であるＣはリジン、アルギニン又は（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸から選択される、請求項１に記載の、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマー。 a. B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ are independently selected from lysine, ornithine, (L) -2,3-diaminopropionic acid and (L) -2,3-diaminobutyric acid. And
b. H which is any amino acid comprising said hydrophobic side chain is selected from leucine, phenylalanine, alanine, tyrosine or tryptophan and / or c. The peptide dendrimer for use as a medicament according to claim 1, wherein C, which is any amino acid comprising a cationic side chain, is selected from lysine, arginine or (L) -2,3-diaminobutyric acid. Ｚは、Ｚのアミノ官能基とＢ^１のカルボン酸炭素との間のアミド結合によってＢと結合し、かつ、Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６はそれぞれ、それらの各々の結合パートナーであるＢ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６と、Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６のアミノ窒素とＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６のカルボン酸炭素との間のアミド結合によって結合することを特徴とする、請求項１又は２に記載の、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマー。 Z is linked to B by the amide bond between the amino functional group of Z and the carboxylic acid carbon of B ¹ and D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ are each of them Amino nitrogen and D ¹ of each binding partner B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ and B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ , respectively. ^{D 2, D 3, D 4} , D characterized by binding via an amide bond between the ⁵ and D ⁶ carboxylic acid carbon, according to claim 1 or 2, peptide dendrimers for use as a medicament . ＺはジペプチドＣＨ若しくはトリペプチドＨＣＨであり（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）、又はＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ｌｅｕ、Ｄａｂ−Ｔｒｐ、Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ若しくはＬｅｕから選択され、かつ、ＤはＬｙｓ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ｌｅｕ及びＤａｂ−Ｔｒｐから選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマー。 Z is a dipeptide CH or a tripeptide HCH, where H is any amino acid containing a hydrophobic side chain and C is any amino acid containing a cationic side chain , or Z is Lys 4. The method of claim 1, wherein the selected from -Leu, Arg-Leu, Dab-Trp, Lys-Leu-Lys, Lys or Leu, and D is selected from Lys-Leu, Arg-Leu and Dab-Trp. A peptide dendrimer for use as a medicament according to any one of the preceding claims. 下記の式：
ａ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｂ．（ＫＬ）_４−（Ｂ−ＫＬ）_２−Ｂ−ＫＬ
ｃ．（ＲＬ）_４−（Ｂ−ＲＬ）_２−Ｂ−ＲＬ
ｄ．（ＫＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２ Ｋ−ＫＬ
ｅ．（ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｆ．（ＤａｂＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＤａｂＬ
ｇ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｈ．（ＲＬ）_８−（Ｋ−ＲＬ）_４−（Ｋ−ＲＬ）_２−Ｋ−ＲＬ
ｉ．（ＬＫ）_８−（Ｋ−ＬＫ）_４−（Ｋ−ＬＫ）_２−Ｋ−ＬＫ
ｊ．（ＫＹ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｋ．（ＬＡ）_８−（Ｋ−ＬＫ）_４−（Ｋ−ＬＡ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｌ．（ＫＷ）_８−（Ｋ−ＫＷ）_４−（Ｋ−ＫＷ）_２−Ｋ−ＫＷ
ｍ．（ＫＦ）_８−（Ｋ−ＫＦ）_４−（Ｋ−ＫＦ）_２−Ｋ−ＫＦ
ｎ．（ＫＬ）_８−（Ｂ−ＫＬ）_４−（Ｂ−ＫＬ）_２−Ｂ−ＫＬ
ｏ．（ＲＬ）_８−（Ｂ−ＲＬ）_４−（Ｂ−ＲＬ）_２−Ｂ−ＲＬ
ｐ．（ＬＬ）_８−（Ｋ−ＫＫ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＫＫ
ｑ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＤａｂＬ
ｒ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｓ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｔ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＬ
ｕ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＡ
ｖ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＡ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｗ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＡ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｘ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬＣＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｙ．（ＫＬ）_１６−（Ｋ−ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬＣＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｚ．（ＫＬ）_１６−（Ｋ−ＫＬＣＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ａａ．（ＲＬ）_８−（Ｋ−ＲＬＣＲＬ）_４−（Ｋ−ＲＬ）_２−Ｋ−ＲＬ
ｂｂ．（ＫＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＫＬ）_２−Ｋ−ＫＫＬ
ｃｃ．（ＫＬＬ）_４−（Ｋ−ＫＬＬ）_２−Ｋ−ＫＬＬ
ｄｄ．（ＬＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＬＫＬ
ｅｅ．（ＫＬＬ）_８−（Ｋ−ＫＬＬ）_４−（Ｋ−ＫＬＬ）_２−Ｋ−ＫＬＬ
ｆｆ．（ＬＫＬ）_８−（Ｋ−ＬＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＬＫＬ
ｇｇ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＫＫＬ
ｈｈ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＬ
ｉｉ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ
ｊｊ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＬＫＬ
ｋｋ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３
ｌｌ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３
ｍｍ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｎｎ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１０ＣＨ_３
ｏｏ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３
ｐｐ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３
ｑｑ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｒｒ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１０ＣＨ_３
ｓｓ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１４ＣＨ_３
ｔｔ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３
ｕｕ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_２２ＣＨ_３
ｖｖ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３
ｗｗ．（ＣＨ_３（ＣＨ_２）_４ＣＯ−ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｘｘ．（ＣＨ_３（ＣＨ_２）_４ＣＯ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｙｙ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＫＫ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＬＬ
ｚｚ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＬＬ）_４−（Ｋ−ＫＫ）_２−Ｋ−ＬＬ
ａａａ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１４ＣＨ_３
ｂｂｂ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_２２ＣＨ_３
ｃｃｃ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＬＬ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｄｄｄ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＫＫ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｅｅｅ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＫＫ）_４−（Ｋ−ＫＫ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｆｆｆ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＬＬ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｇｇｇ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｈｈｈ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｉｉｉ．（ＫＡ）_８−（Ｋ−ＫＡ）_４−（Ｋ−ＫＡ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｊｊｊ．（ＫＨ）_８−（Ｋ−ＫＨ）_４−（Ｋ−ＫＨ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｋｋｋ．（ＲＬ）_８−（Ｋ−ＬＬ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｌｌｌ．（ＲＬ）_８−（Ｋ−ＲＬ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｍｍｍ．（ＲＬ）_８−（Ｋ−ＲＬ）_４−（Ｋ−ＲＬ）_２−Ｋ−ＧＳＣ
ｎｎｎ．（ＯｒｎＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＦ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｏｏｏ．（ＯｒｎＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｐｐｐ．（ＲＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｑｑｑ．（ＯｒｎＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｒｒｒ．（ＯｒｎＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＦ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｓｓｓ．（ＲＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
（式中、Ｄａｂは（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸であり、Ｂは（Ｌ）−２、３−ジアミノプロピオン酸であり、−（ＣＯ（ＣＨ _２ ） _ｎ ＣＨ _３ 又はＣＨ _３ （ＣＨ _２ ） _ｎ ＣＯ−で表される部分（式中、ｎは４，６，８、１０，１４，１６又は２２であり、Ｈは水素原子であり、かつ、Ｃは炭素原子である。）はアルキルカルボン酸部分であり、１文字表記はアミノ酸に用いられ及び大文字はＬ−エナンチオマーを示し、並びに分岐するジアミノ酸は下線で示している。）
のいずれかによって特徴付けられる、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマー。 The following formula:
a. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KL
b. _{(KL) 4 - (B -KL} ) 2 - B -KL
c. _{(RL) 4 - (B -RL} ) 2 - B -RL
d. _{(KKL) 4 - (K -KL} ) 2 K -KL
e. _{(DabW) 4 - (K -DabW} ) 2 - K -DabW
f. _{(DabL) 4 - (K -DabL} ) 2 - K -DabL
g. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
h. _{(RL) 8 - (K -RL} ) 4 - (K -RL) 2 - K -RL
i. _{(LK) 8 - (K -LK} ) 4 - (K -LK) 2 - K -LK
j. _{(KY) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
k. _{(LA) 8 - (K -LK} ) 4 - (K -LA) 2 - K -KL
l. _{(KW) 8 - (K -KW} ) 4 - (K -KW) 2 - K -KW
m. _{(KF) 8 - (K -KF} ) 4 - (K -KF) 2 - K -KF
n. _{(KL) 8 - (B -KL} ) 4 - (B -KL) 2 - B -KL
o. _{(RL) 8 - (B -RL} ) 4 - (B -RL) 2 - B -RL
p. _{(LL) 8 - (K -KK} ) 4 - (K -LL) 2 - K -KK
q. _{(DabL) 8 - (K -DabL} ) 4 - (K -DabL) 2 - K -DabL
r. _{(DabL) 8 - (K -DabW} ) 4 - (K -DabL) 2 - K -DabW
s. _{(DabL) 8 - (K -DabL} ) 4 - (K -DabW) 2 - K -DabW
t. _{(DabL) 8 - (K -DabW} ) 4 - (K -DabW) 2 - K -DabL
u. _{(DabL) 8 - (K -DabW} ) 4 - (K -DabW) 2 - K -DabA
v. _{(DabL) 8 - (K -DabW} ) 4 - (K -DabA) 2 - K -DabW
w. _{(DabL) 8 - (K -DabA} ) 4 - (K -DabW) 2 - K -DabW
x. _{(KL) 8 - (K -KLCKL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
y. _{(KL) 16 - (K -KL} ) 8 - (K -KLCKL) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
z. _{(KL) 16 - (K -KLCKL} ) 8 - (K -KL) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
aa. _{(RL) 8 - (K -RLCRL} ) 4 - (K -RL) 2 - K -RL
bb. _{(KKL) 4 - (K -KKL} ) 2 - K -KKL
cc. _{(KLL) 4 - (K -KLL} ) 2 - K -KLL
dd. _{(LKL) 4 - (K -LKL} ) 2 - K -LKL
ee. _{(KLL) 8 - (K -KLL} ) 4 - (K -KLL) 2 - K -KLL
ff. _{(LKL) 8 - (K -LKL} ) 4 - (K -LKL) 2 - K -LKL
gg. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -LKL) 2 - K -KKL
hh. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -LKL) 2 - K -KLL
ii. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -LKL) 2 - K -KLK
jj. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -LKL) 2 - K -LKL
kk. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 4 CH 3
ll. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 6 CH 3
mm. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
nn. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 10 CH 3
oo. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 4 CH 3
pp. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 6 CH 3
qq. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
rr. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 10 CH 3
ss. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 14 CH 3
tt. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 16 CH 3
uu. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 22 CH 3
vv. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 16 CH 3
www. _{(CH 3 (CH 2) 4} CO-KL) 8 - (K -KL) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
xx. _{(CH 3 (CH 2) 4} CO-KL) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
yy. _{(KK) 8 - (K -KK} ) 4 - (K -LL) 2 - K -LL
zz. _{(KK) 8 - (K -LL} ) 4 - (K -KK) 2 - K -LL
aaa. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 14 CH 3
bbb. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 22 CH 3
ccc. _{(KK) 8 - (K -LL} ) 4 - (K -LL) 2 - K -GSC
ddd. _{(KK) 8 - (K -KK} ) 4 - (K -LL) 2 - K -GSC
eee. _{(KK) 8 - (K -KK} ) 4 - (K -KK) 2 - K -GSC
fff. _{(KL) 8 - (K -LL} ) 4 - (K -LL) 2 - K -GSC
ggg. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -LL) 2 - K -GSC
hhh. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -GSC
iii. _{(KA) 8 - (K -KA} ) 4 - (K -KA) 2 - K -GSC
jjj. _{(KH) 8 - (K -KH} ) 4 - (K -KH) 2 - K -GSC
kkk. _{(RL) 8 - (K -LL} ) 4 - (K -LL) 2 - K -GSC
lll. _{(RL) 8 - (K -RL} ) 4 - (K -LL) 2 - K -GSC
mmm. _{(RL) 8 - (K -RL} ) 4 - (K -RL) 2 - K -GSC
nnn. _{(OrnL) 4 - (K -DabF} ) 2 - K -KL
oo. _{(OrnF) 4 - (K -DabL} ) 2 - K -KL
ppp. _{(RF) 4 - (K -DabL} ) 2 - K -KL
qqq. _{(OrnF) 4 - (K -DabL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
rrr. _{(OrnL) 4 - (K -DabF} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
sss. _{(RF) 4 - (K -DabL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
(Where Dab is (L) -2,3-diaminobutyric acid, B is (L) -2,3-diaminopropionic acid, and — (CO (CH ₂ ) _n CH ₃ or CH ₃ (CH ₂ ) A moiety represented by _n CO- (wherein n is 4, 6, 8, 10, 14, 16, or 22; H is a hydrogen atom; and C is a carbon atom). (Alkylcarboxylic acid moiety, single letter notation used for amino acids and capital letters indicate L-enantiomers, and diamino acids that are branched are underlined.)
A peptide dendrimer for use as a medicament, characterized by any of. デンドリマーのＺ及び／又はＮ末端のＤがアルキルカルボン酸部分と結合する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマー。 5. A peptide dendrimer for use as a medicament according to any one of claims 1 to 4 , wherein the Z of the dendrimer and / or the N terminal D is attached to an alkyl carboxylic acid moiety. 細菌感染症の予防又は治療において使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載の、薬剤として使用するためのペプチドデンドリマー。 For use in the prevention or treatment of bacterial infections, according to any one of 請 Motomeko 1-6, peptide dendrimers for use as a medicament. 一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、かつ、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するＤのアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓ（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）であり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１でありえ、
Ｚは中心部分であり、
Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６はその他のＢからそれぞれ独立して分岐部分であり、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ−１（ＮＨ）_２ＣＯ−で表されるジアミノアルキルカルボン酸部分を表し（式中、Ｈは水素原子であり、かつ、Ｃは炭素原子である。）、ｎは２〜１０の間の数であり、
Ｄ ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６はその他のＤからそれぞれ独立して、
ｉ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ若しくはＨＨ、又は
ｉｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ若しくはＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃは（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸であることを特徴とする。）
である。）
で表される、ペプチドデンドリマー。 Formula _{^{X- (B 2 - [Y 2}} ] s -D 1) 2 -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 ) _8- (B ^3- [Y ³ ] _r -D ² ) ₄ , and
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of the binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of the D amino acid adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in (wherein H comprises a hydrophobic side chain Any amino acid, and C is any amino acid comprising a cationic side chain).
o, p, q, r and s can be 0 or 1;
Z is the central part,
B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ are each independently a branched portion from B , and are diaminos represented by the general formula C _n H _2n-1 (NH) ₂ CO— Represents an alkyl carboxylic acid moiety (wherein H is a hydrogen atom and C is a carbon atom) , n is a number between 2 and 10 ;
D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ are each independently from the other D
i. Dipeptide CH, HC, CC or HH, or ii. Tripeptides HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(Wherein H is any amino acid containing a hydrophobic side chain, and C is characterized by (L) -2, 3-diaminobutyric acid).
It is. )
A peptide dendrimer represented by Ｚは、Ｚのアミノ官能基とＢ^１のカルボン酸炭素との間のアミド結合によってＢと結合し、かつ、Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６はそれぞれ、それらの各々の結合であるパートナーＢ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６と、Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６のアミノ窒素とＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６のカルボン酸炭素との間のアミド結合によって結合することを特徴とする、請求項８に記載のペプチドデンドリマー。 Z is linked to B by the amide bond between the amino functional group of Z and the carboxylic acid carbon of B ¹ and D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ are each of them Amino nitrogen and D ^{1 of} partners B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ , and B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ which are each binding of ^{D 2, D 3, D 4} , characterized by binding via an amide bond between the carboxylic acid carbon in ^{D 5} and ^{D 6,} a peptide dendrimer according to claim 8. Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６は独立して、リジン、オルニチン、（Ｌ）−２、３−ジアミノプロピオン酸及び（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸から選択される、請求項８又は９に記載のペプチドデンドリマー。 B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ are independently selected from lysine, ornithine, (L) -2,3-diaminopropionic acid and (L) -2,3-diaminobutyric acid. The peptide dendrimer according to claim 8 or 9. 一般式Ｘ−（Ｂ^２−［Ｙ^２］_ｓ−Ｄ^１）_２−Ｂ^１−Ｚ
（式中、Ｘは
（Ｄ^２）_４、
（Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、
（Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４、又は
（Ｄ^６）_６４−（Ｂ^６−［Ｙ^６］_ｏ−Ｄ^５）_３２−（Ｂ^５−［Ｙ^５］_ｐ−Ｄ^４）_１６−（Ｂ^４−［Ｙ^４］_ｑ−Ｄ^３）_８−（Ｂ^３−［Ｙ^３］_ｒ−Ｄ^２）_４であり、かつ、
それぞれのＹ（Ｙ^２、Ｙ^３、Ｙ^４、Ｙ^５及びＹ^６）はその他のＹから独立して、下記の式
に例示されるチオエーテル部分によって、Ｃ末端に隣接するＤのアミノ酸のＮ末端と結合する、結合部分のジペプチド又はトリペプチドのＨ−Ｃｙｓ又はＣＨ−Ｃｙｓ（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）であり、
ｏ、ｐ、ｑ、ｒ及びｓは０又は１であり、
Ｚは中心部分であり、
Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６はその他のＢからそれぞれ独立して分岐部分であり、一般式Ｃ_ｎＨ_２ｎ−１（ＮＨ_２）_２ＣＯ−で表されるジアミノアルキルカルボン酸部分を表し（式中、Ｈは水素原子であり、かつ、Ｃは炭素原子である。）、ｎは２〜１０の間の数であり、
Ｄ ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６はその他のＤからそれぞれ独立して、
ｉｖ．アミノ酸Ｃ又はＨ
ｖ．ジペプチドＣＨ、ＨＣ、ＣＣ又はＨＨ
ｖｉ．トリペプチドＨＣＨ、ＨＨＣ、ＣＨＨ、ＣＣＨ、ＣＨＣ、ＨＣＣ、ＨＨＨ又はＣＣＣ
（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸であることを特徴とする。）
であり、Ｚ及び／又はＮ末端のＤがアルキルカルボン酸と結合することを特徴とする。）
で表される、ペプチドデンドリマー。 Formula _{^{X- (B 2 - [Y 2}} ] s -D 1) 2 -B 1 -Z
(Wherein X is (D ² ) ₄ ,
_{^{(D 3) 8 - (B}} 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 4) 16 - (B}} 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4,
_{^{(D 5) 32 - (B}} 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3) 8 - (B 3 - [Y 3] r -D 2) 4 or _{^{(D 6) 64 - (B}} 6 - [Y 6] o -D 5) 32 - (B 5 - [Y 5] p -D 4) 16 - (B 4 - [Y 4] q -D 3 ) _8- (B ^3- [Y ³ ] _r -D ² ) ₄ , and
Each Y (Y ² , Y ³ , Y ⁴ , Y ⁵ and Y ⁶ ), independently of the other Y, has the formula
H-Cys or CH-Cys of the binding moiety dipeptide or tripeptide bound to the N-terminus of the D amino acid adjacent to the C-terminus by the thioether moiety exemplified in (wherein H comprises a hydrophobic side chain Any amino acid, and C is any amino acid comprising a cationic side chain).
o, p, q, r and s are 0 or 1,
Z is the central part,
B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ are each independently a branched part from other B, and are represented by the general formula C _n H _2n-1 (NH ₂ ) ₂ CO—. Represents a diaminoalkylcarboxylic acid moiety (wherein H is a hydrogen atom and C is a carbon atom) , and n is a number between 2 and 10 ,
D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ are each independently from the other D
iv. Amino acid C or H
v. Dipeptide CH, HC, CC or HH
vi. Tripeptide HCH, HHC, CHH, CCH, CHC, HCC, HHH or CCC
(Wherein H is any amino acid comprising a hydrophobic side chain, and C is characterized as any amino acid comprising a cationic side chain)
Wherein Z and / or N-terminal D binds to an alkyl carboxylic acid. )
A peptide dendrimer represented by 前記アルキルカルボン酸部分が一般式ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯ−によって表される（式中、Ｈは水素原子であり、かつ、Ｃは炭素原子である。）、請求項１１に記載のペプチドデンドリマー。 The carboxylic acid moiety is you express by the general formula _{CH 3 (CH 2) n CO-} ( wherein, H is a hydrogen atom, and, C is a carbon atom.) The peptide according to claim 11 Dendrimer. ａ．ＺはジペプチドＣＨ若しくはトリペプチドＨＣＨであり（式中、Ｈは疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であり、かつ、Ｃはカチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸である。）、又はＺはＬｙｓ−Ｌｅｕ、Ａｒｇ−Ｌｅｕ、Ｄａｂ−Ｔｒｐ及びＬｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓから選択され、
ｂ．Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６は独立して、リジン、オルニチン、（Ｌ）−２、３−ジアミノプロピオン酸及び（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸から選択され、
ｃ．前記疎水性側鎖を含む任意のアミノ酸であるＨはロイシン、フェニルアラニン、アラニン、チロシン又はトリプトファンから選択され、及び／又は
ｄ．前記カチオン性側鎖を含む任意のアミノ酸であるＣはリジン、アルギニン又は（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸から選択される、請求項１１又は１２に記載のペプチドデンドリマー。 a. Z is a dipeptide CH or a tripeptide HCH, where H is any amino acid containing a hydrophobic side chain and C is any amino acid containing a cationic side chain , or Z is Lys -Selected from Leu, Arg-Leu, Dab-Trp and Lys-Leu-Lys,
b. B ¹ , B ² , B ³ , B ⁴ , B ⁵ and B ⁶ are independently selected from lysine, ornithine, (L) -2,3-diaminopropionic acid and (L) -2,3-diaminobutyric acid. And
c. H, which is any amino acid comprising said hydrophobic side chain, is selected from leucine, phenylalanine, alanine, tyrosine or tryptophan, and / or d. 13. The peptide dendrimer according to claim 11 or 12, wherein C, which is any amino acid containing a cationic side chain, is selected from lysine, arginine or (L) -2,3-diaminobutyric acid. Ｚは、Ｚのアミノ官能基とＢ^１のカルボン酸炭素との間のアミド結合によってＢと結合し、かつ、Ｄ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６はそれぞれ、それらの各々の結合パートナーであるＢ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６と、Ｂ^１、Ｂ^２、Ｂ^３、Ｂ^４、Ｂ^５及びＢ^６のアミノ窒素とＤ^１、Ｄ^２、Ｄ^３、Ｄ^４、Ｄ^５及びＤ^６のカルボン酸炭素との間のアミド結合によって結合することを特徴とする、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載のペプチドデンドリマー。 Z is bonded to B by an amide bond between the amino functional group of Z and the carboxylic acid carbon of B ¹ , and D ¹ , D ² , D ³ , D ⁴ , D ⁵ and D ⁶ are respectively ^B 1 is a respective binding ^{partner, B 2, B 3, B} 4, B ⁵ and ^{B 6, B 1, B 2} , B 3, B 4, B 5 and the amino nitrogen and ^D 1 of the ^{B 6, D 2, D 3, D 4} , D 5 and characterized by binding via an amide bond between the carboxylic acid carbon in ^{D 6,} a peptide dendrimer according to any one of claims 11 to 13. 下記の式：
ａ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｂ．（ＫＬ）_４−（Ｂ−ＫＬ）_２−Ｂ−ＫＬ
ｃ．（ＲＬ）_４−（Ｂ−ＲＬ）_２−Ｂ−ＲＬ
ｄ．（ＫＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｅ．（ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｆ．（ＤａｂＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＤａｂＬ
ｇ．（ＬＫ）_８−（Ｋ−ＬＫ）_４−（Ｋ−ＬＫ）_２−Ｋ−ＬＫ
ｈ．（ＫＹ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｉ．（ＬＡ）_８−（Ｋ−ＬＫ）_４−（Ｋ−ＬＡ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｊ．（ＫＷ）_８−（Ｋ−ＫＷ）_４−（Ｋ−ＫＷ）_２−Ｋ−ＫＷ
ｋ．（ＫＦ）_８−（Ｋ−ＫＦ）_４−（Ｋ−ＫＦ）_２−Ｋ−ＫＦ
ｌ．（ＫＬ）_８−（Ｂ−ＫＬ）_４−（Ｂ−ＫＬ）_２−Ｂ−ＫＬ
ｍ．（ＲＬ）_８−（Ｂ−ＲＬ）_４−（Ｂ−ＲＬ）_２−Ｂ−ＲＬ
ｎ．（ＬＬ）_８−（Ｋ−ＫＫ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＫＫ
ｏ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＤａｂＬ
ｐ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｑ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｒ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＬ
ｓ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＡ
ｔ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＷ）_４−（Ｋ−ＤａｂＡ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｕ．（ＤａｂＬ）_８−（Ｋ−ＤａｂＡ）_４−（Ｋ−ＤａｂＷ）_２−Ｋ−ＤａｂＷ
ｖ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬＣＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｗ．（ＫＬ）_１６−（Ｋ−ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬＣＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｘ．（ＫＬ）_１６−（Ｋ−ＫＬＣＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｙ．（ＲＬ）_８−（Ｋ−ＲＬＣＲＬ）_４−（Ｋ−ＲＬ）_２−Ｋ−ＲＬ
ｚ．（ＫＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＫＬ）_２−Ｋ−ＫＫＬ
ａａ．（ＫＬＬ）_４−（Ｋ−ＫＬＬ）_２−Ｋ−ＫＬＬ
ｂｂ．（ＬＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＬＫＬ
ｃｃ．（ＫＬＬ）_８−（Ｋ−ＫＬＬ）_４−（Ｋ−ＫＬＬ）_２−Ｋ−ＫＬＬ
ｄｄ．（ＬＫＬ）_８−（Ｋ−ＬＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＬＫＬ
ｅｅ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＫＫＬ
ｆｆ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＬ
ｇｇ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ
ｈｈ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＬＫＬ）_２−Ｋ−ＬＫＬ
ｉｉ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３
ｊｊ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３
ｋｋ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｌｌ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１０ＣＨ_３
ｍｍ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_４ＣＨ_３
ｎｎ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３
ｏｏ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｐｐ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１０ＣＨ_３
ｑｑ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１４ＣＨ_３
ｒｒ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３
ｓｓ．（ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_２２ＣＨ_３
ｔｔ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１６ＣＨ_３
ｕｕ．（ＣＨ_３（ＣＨ_２）_４ＣＯ−ＫＬ）_８−（Ｋ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｖｖ．（ＣＨ_３（ＣＨ_２）_４ＣＯ−ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｗｗ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＫＫ）_４−（Ｋ−ＬＬ）_２−Ｋ−ＬＬ
ｘｘ．（ＫＫ）_８−（Ｋ−ＬＬ）_４−（Ｋ−ＫＫ）_２−Ｋ−ＬＬ
ｙｙ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_１４ＣＨ_３
ｚｚ．（ＫＬ）_４−（Ｋ−ＫＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_２２ＣＨ_３
ａａａ．（ＯｒｎＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＦ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｂｂｂ．（ＯｒｎＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｃｃｃ．（ＲＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬ
ｄｄｄ．（ＯｒｎＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｅｅｅ．（ＯｒｎＬ）_４−（Ｋ−ＤａｂＦ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
ｆｆｆ．（ＲＦ）_４−（Ｋ−ＤａｂＬ）_２−Ｋ−ＫＬＫ−（ＣＯ（ＣＨ_２）_８ＣＨ_３
（式中、Ｄａｂは（Ｌ）−２、３−ジアミノ酪酸であり、Ｂは（Ｌ）−２、３−ジアミノプロピオン酸であり、−（ＣＯ（ＣＨ _２ ） _ｎ ＣＨ _３ 又はＣＨ _３ （ＣＨ _２ ） _ｎ ＣＯ−で表される部分（式中、ｎは４，６，８、１０，１４，１６又は２２であり、Ｈは水素原子であり、かつ、Ｃは炭素原子である。）はアルキルカルボン酸部分であり、１文字表記はアミノ酸に用いられ及び大文字はＬ−エナンチオマーを示し、並びに分岐するジアミノ酸は下線で示している。）によって特徴付けられる、ペプチドデンドリマー。 The following formula:
a. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KL
b. _{(KL) 4 - (B -KL} ) 2 - B -KL
c. _{(RL) 4 - (B -RL} ) 2 - B -RL
d. _{(KKL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KL
e. _{(DabW) 4 - (K -DabW} ) 2 - K -DabW
f. _{(DabL) 4 - (K -DabL} ) 2 - K -DabL
g. _{(LK) 8 - (K -LK} ) 4 - (K -LK) 2 - K -LK
h. _{(KY) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
i. _{(LA) 8 - (K -LK} ) 4 - (K -LA) 2 - K -KL
j. _{(KW) 8 - (K -KW} ) 4 - (K -KW) 2 - K -KW
k. _{(KF) 8 - (K -KF} ) 4 - (K -KF) 2 - K -KF
l. _{(KL) 8 - (B -KL} ) 4 - (B -KL) 2 - B -KL
m. _{(RL) 8 - (B -RL} ) 4 - (B -RL) 2 - B -RL
n. _{(LL) 8 - (K -KK} ) 4 - (K -LL) 2 - K -KK
o. _{(DabL) 8 - (K -DabL} ) 4 - (K -DabL) 2 - K -DabL
p. _{(DabL) 8 - (K -DabW} ) 4 - (K -DabL) 2 - K -DabW
q. _{(DabL) 8 - (K -DabL} ) 4 - (K -DabW) 2 - K -DabW
r. _{(DabL) 8 - (K -DabW} ) 4 - (K -DabW) 2 - K -DabL
s. _{(DabL) 8 - (K -DabW} ) 4 - (K -DabW) 2 - K -DabA
t. _{(DabL) 8 - (K -DabW} ) 4 - (K -DabA) 2 - K -DabW
u. _{(DabL) 8 - (K -DabA} ) 4 - (K -DabW) 2 - K -DabW
v. _{(KL) 8 - (K -KLCKL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
w. _{(KL) 16 - (K -KL} ) 8 - (K -KLCKL) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
x. _{(KL) 16 - (K -KLCKL} ) 8 - (K -KL) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
y. _{(RL) 8 - (K -RLCRL} ) 4 - (K -RL) 2 - K -RL
z. _{(KKL) 4 - (K -KKL} ) 2 - K -KKL
aa. _{(KLL) 4 - (K -KLL} ) 2 - K -KLL
bb. _{(LKL) 4 - (K -LKL} ) 2 - K -LKL
cc. _{(KLL) 8 - (K -KLL} ) 4 - (K -KLL) 2 - K -KLL
dd. _{(LKL) 8 - (K -LKL} ) 4 - (K -LKL) 2 - K -LKL
ee. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -LKL) 2 - K -KKL
ff. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -LKL) 2 - K -KLL
gg. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -LKL) 2 - K -KLK
hh. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -LKL) 2 - K -LKL
ii. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 4 CH 3
jj. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 6 CH 3
kk. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
ll. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 10 CH 3
mm. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 4 CH 3
nn. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 6 CH 3
oo. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
pp. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 10 CH 3
qq. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 14 CH 3
rr. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 16 CH 3
ss. _{(KL) 8 - (K -KL} ) 4 - (K -KL) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 22 CH 3
tt. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 16 CH 3
uu. _{(CH 3 (CH 2) 4} CO-KL) 8 - (K -KL) 4 - (K -KL) 2 -K-KL
vv. _{(CH 3 (CH 2) 4} CO-KL) 4 - (K -KL) 2 - K -KL
www. _{(KK) 8 - (K -KK} ) 4 - (K -LL) 2 - K -LL
xx. _{(KK) 8 - (K -LL} ) 4 - (K -KK) 2 - K -LL
yy. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 14 CH 3
zz. _{(KL) 4 - (K -KL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 22 CH 3
aaa. _{(OrnL) 4 - (K -DabF} ) 2 - K -KL
bbb. _{(OrnF) 4 - (K -DabL} ) 2 - K -KL
ccc. _{(RF) 4 - (K -DabL} ) 2 - K -KL
ddd. _{(OrnF) 4 - (K -DabL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
eee. _{(OrnL) 4 - (K -DabF} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
fff. _{(RF) 4 - (K -DabL} ) 2 - K -KLK- (CO (CH 2) 8 CH 3
(Wherein, Dab is (L) -2, 3-diaminobutyric acid, B is (L) -2, 3-diaminopropionic acid,-(CO (CH ₂ ) _n CH ₃ or CH ₃ (CH ₂ ) The moiety represented by _n CO- (wherein, n is 4, 6, 8, 10, 14, 16 or 22, H is a hydrogen atom, and C is a carbon atom) is A peptide dendrimer, characterized in that it is an alkyl carboxylic acid moiety, one-letter code is used for amino acids and capital letters denote L-enantiomers, and branched diamino acids are underlined .