JP6536965B2 - 細胞培養用足場 - Google Patents

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Description

本発明は、細胞培養用足場(以下、便宜的に培地と称する。)に関し、特に、一方向に配列した繊維を備える培地に関する。
近年、生物組織や微生物を培養するための培地として、繊維基材が注目されている(特許文献1参照)。繊維基材は、例えば、織物、編物あるいは不織布であり、三次元の構造を備える。そのため、in vitroで生理的環境に近い状態で、生物組織や微生物を培養することができる。
特表2010−517590号公報
生物組織や微生物の成長に方向性が見られる場合、繊維基材を構成する繊維は、ある一方向に配列していることが望ましい。生物組織や微生物が成長し易くなるためである。しかし、通常、繊維基材は、繊維同士の交絡によって形状が保持されており、上記のような配列性を有さない。
本発明の一局面は、基板と、第1の面と、その反対側の第2の面と、前記第1の面から前記第2の面に貫通する1つ以上の貫通孔と、を備えるとともに、前記第1の面が対向するように前記基板に搭載される枠体と、配列した複数の繊維を含み、前記基板と前記第1の面との間に介在する繊維集合体と、前記基板と前記繊維集合体と前記枠体とを接着する接着部と、前記枠体の前記第1の面の外縁に配置された、前記枠体を前記基板に固定する枠体固定部と、を備え、前記繊維集合体の少なくとも一部が、前記貫通孔によって前記第1の面に形成された第1開口から露出しており、前記接着部が、感圧接着剤を含み、前記枠体固定部が、硬化性樹脂の硬化物を含む、細胞培養用足場に関する。
本発明の他の局面は、基板と、第1の面と、その反対側の第2の面と、前記第1の面から前記第2の面に貫通する1つ以上の貫通孔と、を備えるとともに、前記第1の面が対向するように前記基板に搭載される枠体と、配列した複数の繊維を含み、前記基板と前記第1の面との間に介在する繊維集合体と、前記基板と前記繊維集合体と前記枠体とを接着する接着部と、を備え、前記繊維集合体の少なくとも一部が、前記貫通孔によって前記第1の面に形成された第1開口から露出しており、前記接着部が、感圧接着剤を含み、前記第1開口の周囲の少なくとも一部に、前記接着剤の前記第1開口へのはみ出しを抑制する凸部が形成されている、細胞培養用足場に関する。
本発明に係る培地は、一方向に配列した繊維を備えるため、生物組織や微生物の成長が促進される。
本発明に係る培地を模式的に示す斜視図である。 本発明に係る枠体固定部を備える培地を模式的に示す断面図である。 本発明に係る枠体固定部を備える他の培地を模式的に示す断面図である。 本発明に係る枠体固定部を備えるさらに他の培地を模式的に示す断面図である。 逃げ部を備える培地を模式的に示す断面図(a)、および、同培地を基板側から基板を透過して見たときの平面図(b)である。 逃げ部を備える他の培地を、基板側から基板を透過して見たときの平面図である。 他の逃げ部を備える培地を模式的に示す断面図(a)、および、同培地を基板側から基板を透過して見たときの平面図(b)である。 他の逃げ部を備える他の培地を、基板側から基板を透過して見たときの平面図である。 はみ出し抑制部を備える培地を模式的に示す断面図(a)、および、同培地を基板側から基板を透過して見たときの平面図(b)である。 培地を製造するための各工程における巻取回転体、枠体および基板を模式的に示す側面図である((a)〜(c))。 本発明に係る巻取回転体の一例を示す斜視図である。 繊維の配列を説明するための繊維集合体の一部の領域の概略上面図である。
[培地]
本実施形態に係る培地は、例えば、生物組織や微生物を保持した状態で、これらの電位を測定するための電位測定装置に好適に利用される。
培地の一例を図1に示す。図1は、培地100を模式的に示す斜視図である。
培地100は、基板110と、基板110に搭載される枠体120と、基板110と枠体120との間に介在する繊維集合体130と、を備える。ただし、繊維集合体130は、基板110の枠体120が搭載されている搭載面110Xの全面ではなく、枠体120の一方の主面(第1の面120X)に対向する範囲内に配置されている。繊維集合体130が必要な部分にのみ配置されているため、生産性が高い。培地100は、必要に応じてホルダーなどに収容されて、電位測定装置に配置されてもよい。
(繊維集合体)
繊維集合体130は、複数の繊維131の集合体である。繊維集合体130において、複数の繊維131は一方向に配列している。複数の繊維131が一方向に配列しているとは、繊維集合体130において、繊維131同士が交差していないか、繊維131同士が交わる平均的な角度が、0°を超え60°以下であることをいう。このように、複数の繊維131が配列した状態である場合、その繊維131の配列方向に沿って繊維131が伸び易いため、生物組織や微生物へのストレスが低減される。よって、繊維131の配列方向に沿って生物組織や微生物が成長し易くなる。
ここで、繊維131同士が交わる平均的な角度は、繊維131の平均的な長さ方向の交わりから決定できる。繊維131の平均的な長さ方向は、例えば、繊維集合体130をその法線方向から見たときのSEM写真に基づいて決定することができる。図8は、繊維の配列を説明するための繊維集合体の概略上面図である。図8では、繊維集合体130を法線方向から撮影したSEM写真における繊維集合体130の状態を模している。複数の繊維131で構成される繊維集合体130を法線方向から見て、所定のサイズ(例えば、100μm×100μm)の正方形の領域Rを設定する。このとき、領域Rは、領域R内に12本以上の繊維131が入り、かつ領域R内に位置する繊維131の50%以上が領域Rの対向する2辺と交差するように決定する。この領域Rにおいて、ある繊維131が、上記の対向する2辺と交差する2点間を結んだ直線(図8では点線)の方向を、その繊維131の平均的な長さ方向とする。
繊維131同士が交わる平均的な角度は、例えば、上記領域Rにおいて、任意に選択した複数(例えば、20本)の繊維131から、さらに任意に2本の繊維131を選択し、各繊維131の平均的な長さ方向が交わる角度(例えば、図8のθ1)を求める。別の2本の繊維131を選択し、各繊維131の平均的な長さ方向が交わる角度(例えば、図8のθ2)を求める。このような作業を、選択した残りの繊維131(例えば、16本)について行う。そして、それぞれの角度の平均を算出し、繊維131同士が交わる平均的な角度とする。
繊維集合体130の単位面積に占める繊維131の面積の割合は10〜90%から選択できる。例えば、心筋細胞の培養や電位測定装置に利用する場合には、繊維集合体130はごく薄く、単位面積当たりに占める繊維131の割合は20〜50%であり、30〜40%で均一に分散して堆積していることが好ましい。なお、繊維131の面積の割合は、繊維集合体130の一方の主面(例えば、上面)において、繊維集合体130における所定の面積(例えば、短軸3mm×長軸6mmの楕円形)の領域について、光学顕微鏡等で取得した画像を2値化処理して、繊維131が占める面積を算出し、単位面積当たりの面積比率(%)に換算することにより求めることができる。
繊維131の材質は、生物組織や微生物の培地として用いることができる限り特に限定されない。なかでも、生物組織や微生物に対する親和性が高く、培養する際、生物組織や微生物にストレスを与え難い点で、繊維131は、ポリスチレンブロックおよびポリブタジエンブロックを含むブロックポリマーと、当該ブロックポリマーとは異なるスチレン樹脂と、を含むことが好ましい。繊維131は、必要に応じて各種添加剤を含んでいてもよい。
ブロックポリマーは、例えば、ポリブタジエン(PB)ブロックとポリスチレン(PS)ブロックとが連結したジブロック体であってもよいが、PBブロックとPSブロックとが交互に連結したトリブロック体以上のポリブロック体が好ましい。ブロックポリマーは、スチレン樹脂との親和性を確保する観点から、少なくとも末端にPSブロックを含むことが好ましい。PBブロックは、得られる繊維131の柔軟性や伸度を高める。
ブロックポリマー中のPBブロックの含有量は、例えば、10〜30質量%であり、15〜30質量%であることが好ましく、20〜30質量%または20〜25質量%であることがさらに好ましい。PBブロックの含有量がこのような範囲である場合、スチレン樹脂との親和性が高くなって、均質な繊維131が生成され易くなる。また、得られる繊維131は高い柔軟性および伸度を備える。さらに、繊維131を電界紡糸法により生成させる場合、高い曳糸性が確保される。
スチレン樹脂としては、上記のブロックポリマーとは異なるポリマーが使用される。スチレン樹脂としては、例えば、ポリスチレン(スチレンホモポリマー)、スチレンと他の共重合性モノマーとの共重合体が挙げられる。スチレン樹脂は、一種を単独でまたは二種以上を組み合わせてもよい。
繊維131の柔軟性と形成し易さとを両立させる観点から、ブロックポリマーとスチレン樹脂との質量比(=ブロックポリマー:スチレン樹脂)は、例えば、2:1〜1:5であり、好ましくは1:1〜1:4である。特に、溶液を用いる電界紡糸法により繊維集合体130を形成する場合には、質量比がこのような範囲であると、ブロックポリマーおよびスチレン樹脂を溶媒に溶解し易く、高い紡糸性を確保することもできる。
繊維131の平均繊維径は、例えば、0.5〜10μmが好ましく、1〜5μmがより好ましく、1.5〜4μmが特に好ましい。
なお、平均繊維径とは、繊維131の直径の平均値である。繊維131の直径とは、繊維131の長さ方向に対して垂直な断面の直径である。そのような断面が円形でない場合には、最大径を直径と見なしてよい。また、繊維集合体130の1つの主面の法線方向から見たときの、繊維131の長さ方向に対して垂直な方向の幅を、繊維の直径と見なしてもよい。平均繊維径は、例えば、繊維集合体130に含まれる任意の10本の繊維の任意の箇所の直径の平均値である。
(枠体)
枠体120は、第1の面120Xと、その反対側の第2の面120Yと、第1の面120Xから第2の面120Yに貫通する1つ以上の貫通孔121と、を備える。第1の面120Xの表面には、貫通孔121の少なくとも一部を覆うように、繊維集合体130が配置される。すなわち、貫通孔121の第1の面120X側の開口(第1開口121a。図2A等参照。)からは、繊維集合体130(繊維131)が露出する。
枠体120が基板110に搭載されると、第1開口121aが繊維集合体130を介して基板110によって塞がれて、基板110の搭載面110Xには少なくとも1つの窪みが形成される。この窪みに、貫通孔121の第2の面120Y側の開口(第2開口)から生物組織または微生物を含む培養液が注入される。注入された生物組織または微生物は、繊維集合体130を足場として成長する。繊維集合体130を構成する繊維131は、一方向に沿った状態で配列しているため、生物組織または微生物は、繊維131の長さ方向に沿って、ストレスの少ない状態で成長することができる。
枠体120の材質は特に制限されず、ガラス製や樹脂製(エラストマー製も含む)であってもよい。枠体120のサイズは、第1主面120Xの全面が基板110に対向でき、かつ、基板110に配置される電極(後述参照)の配線の妨げにならない限り、特に限定されない。
貫通孔121の数も特に限定されず、枠体120のサイズや用途に応じて適宜設定すればよい。第1開口121aおよび第2開口の形状および大きさも特に限定されず、用途等に応じて適宜設定すればよい。第1開口121aおよび第2開口の形状および大きさは、同じであってもよいし、異なっていてもよい。貫通孔121によって形成される上記窪みの形状も特に限定されない。例えば、第1開口121aおよび第2開口がともに円形である場合、窪みの形状は、円柱状であってもよいし、すり鉢状であってもよい。なかでも、培養液が注入し易い点で、上記窪みは、第2開口が大きいすり鉢状であることが好ましい。
(基板)
基板110は絶縁性であって、例えば、図示しない複数の電極(第1電極)と、第1電極と電気的に接続する複数のマイクロ電極(第2電極)とを備えている。複数の第1電極は、互いに絶縁されている。複数の第2電極203は、行列方式にて所定の間隔で形成されており、互いに絶縁されている。
複数の第1電極は、繊維集合体130に接触しないように配置されている一方、複数の第2電極は、繊維集合体130の少なくとも一部に接触するように配置されている。第1電極と第2電極との間の電圧を測定することにより、繊維集合体130(すなわち、生物組織または微生物)の電位が測定できる。このように、繊維集合体130の電位の経時的な変化や条件を変更した際の変化を計測することにより、この電位変化に基づく、生物組織または微生物の状態や機能などを評価することができる。このとき、生物組織または微生物はストレスの少ない状態でいるため、精度の高い評価が可能となる。さらには、第1電極と第2電極との間に電圧を印加することにより、生物組織または微生物に刺激(電気信号)を与えて、これらの成長を促すことができる。
基板110は、絶縁性である限り特に制限されず、用途に応じて適宜選択すればよい。基板としては、例えば、ガラス板、石英板、アクリル板などが例示される。第1電極も特に制限されず、用途に応じて適宜選択すればよい。第1電極としては、例えば、ITO(インジウムスズ酸化物)電極や白金電極などが例示される。
第2電極としては、生物組織や微生物の電位を測定可能であればよく、用途に応じて適宜選択できる。第2電極のサイズ、隣接する第2電極間の距離、第2電極の個数は、生物組織や微生物の種類やサンプルのサイズなどに応じて適宜選択できる。第2電極の一辺の長さ(円盤状の場合には直径)は、例えば、10〜100μmであり、15〜60μmであってもよい。隣接する第2電極間距離(第2電極の中心間距離)は、例えば、50〜1000μmであり、50〜500μmであってもよい。
(接着部)
基板110と枠体120と繊維集合体130とは、接着部140を介して接着されている。繊維集合体130は、一方向に配列する繊維131の集合体であるため、例えば、枠体120に接着剤を付与すると、繊維131の間に入り込んで基板110側にまで浸透し、枠体120と基板110とを接着する接着部140を形成する。同様に、基板110に接着剤を付与すると、枠体120側にまで浸透し、枠体120と基板110とを接着する接着部140を形成する。いずれの場合も、繊維集合体130の一部は、接着部140に埋め込まれるように保持される。なお、第1開口121aに対応する領域には、接着部140は形成されていない。
接着部140の材料(接着剤)は特に限定されず、例えば、感圧接着剤、ホットメルト型接着剤または硬化性接着剤等が挙げられる。
感圧接着剤は、基板110あるいは枠体120に塗布され、その粘着性により、枠体120と繊維集合体130と基板110とを接着する。感圧接着剤の材質は特に限定されず、例えば、シリコーン樹脂等が挙げられる。シリコーン樹脂としては、例えば、ジメチルシリコーン、メチルフェニルシリコーン等が挙げられる。
ホットメルト型接着剤は、加熱されながら基板110あるいは枠体120に塗布され、冷却されることによって、枠体120と繊維集合体130と基板110とを接着する。ホットメルト型接着剤の材質は特に限定されず、例えば、ポリウレタン、ポリエチレンテレフタレート等のポリエステル、ウレタン変性共重合ポリエステル等の共重合ポリエステル、ポリアミド、ポリオレフィン(例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン)等の熱可塑性樹脂を主成分(50質量%以上を占める成分)として含む。
硬化性接着剤は、基板110あるいは枠体120に塗布され、紫外線照射あるいは加熱により重合されて硬化することにより、枠体120と繊維集合体130と基板110とを接着する。硬化性接着剤の種類は特に限定されず、熱硬化性樹脂、紫外線硬化性樹脂等が挙げられる。これらの樹脂としては、例えば、アクリル樹脂、エポキシ樹脂等が挙げられる。硬化性接着剤を用いる場合、後述する転写工程の前に硬化性接着剤を半硬化状態にしておくことが好ましい。この場合、転写工程の後、あるいは、搭載工程の後、さらに硬化作業を行って、硬化性接着剤を完全に硬化させる。
なかでも、接着剤としては、硬化させるための特別なステップが省略できる点で、感圧接着剤およびホットメルト型接着剤が好ましく、さらに、接着剤を溶融させるための加熱装置が不要である点で、感圧接着剤が好ましい。なお、接着剤が、ホットメルト型接着剤および/または硬化性接着剤を含む場合、2つの部材が「接着部140を介して接着されている」とは、当該部材が「接着剤の硬化物を介して接着されている」ことを意味する。
接着部140は、第1の面120Xの第1開口以外の全面に対向するように形成されてもよいし、第1の面120Xに対向する位置に部分的に形成されてもよい。このとき、接着剤は、枠体120に付与されてもよいし、基板110に付与されてもよい。なかでも、繊維集合体130の第1の面120Xからの剥離を抑制できる点で、接着剤は、枠体120の第1の面120Xの第1開口以外の全面に付与されることが好ましい。さらにこの場合、培地100において、繊維集合体130と枠体120(第1の面120X)との距離よりも、繊維集合体130と基板110(搭載面110X)との距離が近くなり易い。よって、繊維集合体130の電位の測定の精度が高まる。
一方、繊維集合体130の剥離抑制と、基板110と枠体120との接着とを考慮すると、接着剤は、枠体120の第1の面120Xおよび基板110の搭載面110Xのそれぞれに付与されることが好ましい。第1の面120Xに付与された接着剤により形成される接着部(第1の接着部140A)と搭載面110Xに付与された接着剤により形成される接着部(第2の接着部140B)とは、それぞれ繊維131を内包しながら互いに接触し得る。なお、図示例では、便宜上、接着部140を、繊維集合体130を挟んで、枠体120側の第1の接着部140Aと、基板110側の第2の接着部140Bとにわけて示している。接着性の観点から、第1の接着部140Aおよび第2の接着部140Bは、同じ材質の接着剤(好ましくは、感圧接着剤)を含むことが好ましい。第1の接着部140Aと第2の接着部140Bとは、全面が対向していてもよいし、部分的に対向していてもよい。
接着部140(あるいは、第1の接着部140Aおよび第2の接着部140Bの合計)の単位面積当たりの質量は、特に限定されない。なかでも、繊維集合体130と枠体120との接着性、さらには基板110と枠体120との接着性を確保する観点から、上記質量は0.5〜100mg/cmであることが好ましい。
(枠体固定部)
感圧接着剤を含む接着部140は、外圧によって変形し易い一方、外圧から解放されても元の状態には戻り難い。そのため、例えば、枠体120に主面(例えば第1の面120X)方向の外圧が加わると、枠体120が、基板110に対して第1の面120Xの方向に沿ってずれる場合がある。基板110に対して枠体120がずれると、接着部140は枠体120に追随するように変形する。繊維集合体130は、その一部が接着部140に埋め込まれることによって保持されているため、接着部140が変形すると、繊維131の配向が乱れる。また、変形した接着部140の一部が第1開口121aから露出する場合もある。第1開口121aから露出した接着部140は、培養の妨げになったり、電位測定の精度の低下を引き起こしたりする。また、枠体120に第1の面120Xに垂直な方向の外圧が加わると、接着部140は押し広げられるように変形して、基板110と枠体120との距離が変わる場合がある。上記のとおり、繊維集合体130は接着部140によって保持されているため、このような接着部140の変形により繊維131が弛む。
接着部140の上記変形が抑制される点で、枠体120の第1の面120Xの外縁に、枠体120を基板110に固定する枠体固定部を配置することが好ましい。接着部140の上記変形が抑制されることにより、繊維131の初期のテンションや配列が維持されて、生物組織や微生物の成長を促進する効果が向上する。
枠体固定部は、例えば、枠体120と基板110との間に介在し、基板110と枠体120との位置関係を維持することにより、外圧による接着部140の変形を抑制する。
以下、枠体固定部について、図2A〜図2Cを参照しながら説明する。図2A〜図2Cは、培地100を模式的に示す断面図である。ただし、便宜上、繊維集合体130を省略している。
枠体固定部150は、枠体120の第1の面120Xの外縁の少なくとも一部に配置される。第1の面120Xの外縁とは、第1の面120Xの外周部と、枠体120の第1の面120X側の端面とを含む領域である。例えば、図2Aに示すように、枠体固定部150は、枠体120の第1の面120X側の端面および搭載面110Xに接触するように配置されてもよい。なお、図2Aにおいて、感圧接着剤を含む接着部140は、第1の面120Xの第1開口121a以外の全面に形成されている。
接着部140は、図2Bに示すように、第1の面120Xの外周部と第1開口121aとを除く部分に形成されてもよい。この場合、枠体固定部150は、枠体120の第1の面120X側の端面と、搭載面110Xと、第1の面120Xの外周部と、に接触するように配置され得る。これにより、枠体固定部150と枠体120との接触面積が大きくなって、枠体120の固定性が向上する。
図2Cに示すように、第1の面120X側の端面に切欠き122を設けてもよい。この場合、枠体固定部150は、切欠き122および搭載面110Xに接触するように配置され得る。これにより、枠体固定部150と枠体120との接触面積に加えて、枠体固定部150の体積を大きくすることができるため、枠体120の固定性がさらに向上する。
枠体固定部150は、外圧により変形し難い材質により形成されていればよい。このような材質としては、硬化性接着剤として例示したのと同様の熱硬化性樹脂、紫外線硬化性樹脂等の硬化性樹脂が挙げられる。この場合、例えば、枠体120を基板110に搭載した後、硬化性樹脂を枠体120の周囲に塗布して、加熱あるいは紫外線照射を行う。枠体固定部150を図2Bあるいは図2Cのように配置する場合、枠体120を基板110に搭載する前に、硬化性樹脂を第1の面120Xに塗布し、次いで枠体120を基板110に搭載した後、加熱あるいは紫外線照射を行ってもよい。硬化性樹脂の塗布量は特に限定されないが、枠体の固定性を考慮すると、10〜300mg/cmであることが好ましい。
(逃げ部)
枠体固定部150に替えて、外圧による接着部140の変形を吸収する逃げ部を設けてもよい。この場合、枠体固定部150とは逆に、接着部140の変形が抑制されることにより、基板110と枠体120との位置関係が維持される。
以下、逃げ部の第1実施形態について、図3Aおよび図3Bを参照しながら説明する。ここでも、便宜的に繊維集合体130を省略している。図3A(a)は、逃げ部160Aを備える培地100を模式的に示す断面図であり、図3A(b)は、図3A(a)の培地100を、基板110側から基板110を透過して見たときの平面図である。図3Bは、逃げ部160Aを備える他の培地100を、基板110側から基板110を透過して見たときの平面図である。なお、図3A(b)および図3Bでは、便宜的に逃げ部160Aにハッチングを付している。
逃げ部160Aは、第1の面120Xの接着部140の一部に対応する位置に形成された凹部である。外圧により接着部140が変形すると、接着部140の少なくとも一部が逃げ部160Aに収容され得る。つまり、接着部140の変形量の少なくとも一部は、逃げ部160Aに吸収される。よって、基板110と枠体120との位置関係は維持される。
逃げ部160Aの大きさは特に限定されず、接着部140の厚み等に応じて、適宜設定すればよい。なかでも、接着性を確保しながら、接着部140の変形を抑制し易い点で、第1の面120Xの法線方向から見たときの、第1の面120Xの面積に対する逃げ部160Aの面積割合(複数ある場合には合計の面積割合)は、5〜20%であることが好ましい。また、接着部140の変形を抑制し易い点で、接着部140の体積に対する逃げ部160Aの体積割合(複数ある場合には合計の体積割合)は、20〜80%であることが好ましい。
逃げ部160Aの形状(配置)も特に限定されない。例えば、図3A(b)に示すように直線状であってもよい。この場合、逃げ部160Aの長手方向は、繊維131の配向方向と交差することが好ましい。これにより、繊維131の配向方向における感圧接着剤の変形が抑制されて、繊維131の配向の乱れがさらに抑制される。このとき、さらに繊維131の配向方向と交差する方向にも直線状の逃げ部160Aを配置して、格子状にしてもよい。
逃げ部160Aは、図3Bに示すように、第1開口121aを取り囲む環状であってもよい。第1開口121aからの感圧接着剤のはみ出しを抑制する観点から、逃げ部160Aは、第1開口121aから離間させて配置することが好ましい。逃げ部160Aと第1開口121aとの間の距離(例えば、任意の10箇所の平均距離)は特に限定されないが、例えば、50μm以上であればよい。
逃げ部の第2実施形態について、図4Aおよび図4Bを参照しながら説明する。ここでも、便宜的に繊維集合体130を省略している。図4A(a)は、逃げ部160Bを備える培地100を模式的に示す断面図であり、図4A(b)は、図4A(a)の培地100を、基板110側から基板110を透過して見たときの平面図である。図4Bは、逃げ部160Bを備える他の培地100を、基板110側から基板110を透過して見たときの平面図である。なお、図4A(b)および図4Bでは、便宜的に接着部140にハッチングを付している。
逃げ部160Bは、基板110と枠体120との間に形成された空間である。逃げ部160Bは、例えば、接着部140が、第1開口121a以外の第1の面120Xの一部に配置されることにより形成される。接着部140に外圧が加わったとき、接着部140は逃げ部160Bに移動することにより変形できる。つまり、外圧による接着部140の変形量の少なくとも一部は、逃げ部160Bに吸収される。よって、基板110と枠体120との位置関係は維持される。
逃げ部160Bの大きさは特に限定されず、接着部140の厚み等に応じて、適宜設定すればよい。なかでも、接着性を確保しながら、接着部140の変形を抑制し易い点で、第1の面120Xの法線方向から見たときの、接着部140の面積に対する逃げ部160Bの面積割合(複数ある場合には合計の面積割合)は、5〜20%であることが好ましい。
逃げ部160Bの形状(配置)も特に限定されない。例えば、図4A(b)に示すように直線状であってもよい。この場合、逃げ部160Bの長手方向は、繊維131の配向方向と交差することが好ましい。これにより、繊維131の配向方向における感圧接着剤の変形が抑制されて、繊維131の配向の乱れがさらに抑制される。このとき、さらに繊維131の配向方向と交差する方向にも直線状の逃げ部160Bを配置して、格子状にしてもよい。
逃げ部160Bは、図4Bに示すように、第1開口121aを取り囲む環状であってもよい。第1開口121aからの感圧接着剤のはみ出しを抑制する観点から、逃げ部160Bは、第1開口121aから離間させて配置することが好ましい。逃げ部160Bと第1開口121aとの間の距離(例えば、任意の10箇所の平均距離)は特に限定されないが、例えば、50μm以上であればよい。
(はみ出し抑制部)
枠体固定部150および逃げ部160A、160Bに替えて、あるいは、枠体固定部150および逃げ部160A、160Bとともに、第1開口121aの周囲の少なくとも一部に、凸部を形成してもよい。この凸部は、外圧によって接着部140が変形して、第1開口121aからはみ出すのを強制的に抑制するはみ出し抑制部である。はみ出し抑制部によれば、接着部140が変形した場合、あるいは、基板110と枠体120との位置関係が変化した場合であっても、接着部140が第1開口121aからはみ出すのを抑制することができる。
はみ出し抑制部について、図5を参照しながら説明する。ここでも、便宜的に繊維集合体130を省略している。図5(a)は、はみ出し抑制部170を備える培地100を模式的に示す断面図であり、図5(b)は、図5(a)の培地100を、基板110側から基板110を透過して見たときの平面図である。なお、図5(b)では、便宜的にはみ出し抑制部170にハッチングを付している。
はみ出し抑制部170は、第1開口121aの周囲の少なくとも一部に形成されていればよい。なかでも、接着部140のはみ出しが抑制され易い点で、第1開口121aの全周を取り囲むように形成されていることが好ましい。このようなはみ出し抑制部170は、枠体120をパンチング加工して貫通孔121を形成する際に、貫通孔121とともに形成され得る突起であってもよい。
はみ出し抑制部170の大きさは特に限定されず、接着部140の厚み等に応じて、適宜設定すればよい。なかでも、接着部140のはみ出しが抑制され易い点で、培地100の断面を見たとき、接着部140の厚み(第1の面120Xの法線方向における長さ)に対する、はみ出し抑制部170の高さ(第1の面120Xの法線方向における長さ)の割合は、20〜70%であることが好ましい。
[培地の製造方法]
以下、本実施形態の製造方法を図面を参照しながら説明する。図6(a)〜(c)は、本実施形態の各工程における巻取回転体10、枠体120および基板110等を模式的に示す側面図である。
本実施形態に係る培地100は、例えば、第1の面120Xと、その反対側の第2の面120Yと、第1の面120Xから第2の面120Yに貫通する1つ以上の貫通孔121と、を備える枠体120、および、枠体120を搭載する搭載面110Xを備える基板110であって、枠体120の第1の面120Xの一部および基板110の搭載面110Xの一部の少なくとも一方に、接着部140を有する枠体120および基板110を準備する準備工程と、繊維131の原料液をノズル51から吐出して、繊維131を生成させるとともに、繊維131を巻取回転体10の周面に周回するように堆積させて、繊維集合体130を形成する堆積工程と、巻取回転体10を回転させながら、繊維集合体130を枠体120の第1の面120Xに転写する転写工程と、繊維集合体130が転写された枠体120を、第1の面120Xが対向するように、基板110に搭載する搭載工程と、を具備する方法により製造される。
この方法では、繊維131を紡糸しながら巻取回転体で巻き取っていくため、巻取回転体の周面に形成される繊維集合体130は、一方向への高い配列性を備える。さらに、この繊維131の一方向への配列を維持した状態で、繊維集合体130を枠体120の第1の面120Xに転写する。その後、繊維集合体130を備える枠体120を、第1の面120Xが対向するように基板110に搭載する。これにより、巻取回転体に巻き取られたときの高い配列性を保持したまま、繊維集合体130は、基板110と枠体120との間に配置される。
基板110の搭載面110Xは、電気配線の都合上、枠体120よりも十分に大きい面積を備える。一方、繊維集合体130は、枠体120に形成された複数の貫通孔121により形成される第1開口121aから露出するように配置されていればよい。そのため、繊維集合体130を、基板110ではなく枠体120に転写することにより、精密な位置合わせ等を行うことなく、必要な部分にのみ繊維集合体130を配置することができて、生産性が向上する。
上記製造方法は、さらに、枠体120を基板110に固定する枠体固定工程を備えていてもよい。枠体120を基板110に固定することにより、接着部140の変形が抑制されて、その結果、繊維131の初期のテンションや配列が維持され易くなる。
本実施形態の製造方法は、例えば、枠体120の第1の面120Xの一部および基板110の搭載面110Xの一部の少なくとも一方に接着部を形成する接着部形成部と、繊維131の原料液をノズルから吐出して、繊維131を生成させるとともに、繊維131を、巻取回転体10の周面に周回するように堆積させて、繊維集合体130を形成する堆積部と、巻取回転体10を回転させながら、繊維集合体130を枠体120の第1の面120Xに接着部140を介して転写する転写部と、繊維集合体130が転写された枠体120を、第1の面120Xが対向するように、基板110に搭載する搭載部と、を備える装置により実施される。枠体固定部150を配置する場合、上記装置は、さらに、枠体120の所定の位置に硬化性樹脂を塗布する硬化性樹脂塗布部を備える。
(1)準備工程
第1の面120Xと、その反対側の第2の面120Yと、第1の面120Xから第2の面120Yに貫通する1つ以上の貫通孔121と、を備える枠体120、および、枠体120を搭載するための搭載面110Xを備える基板110を準備する。
第1の面120Xあるいは搭載面110Xの少なくとも一方には、接着部140が形成されている。接着部140は、例えば、印刷、ディスペンサー等により、第1の面120Xあるいは搭載面110Xの第1開口121aに対向する部分以外の一部あるいは全部に形成される。繊維集合体130の枠体120への転写が確実に行われる点で、接着部140は、少なくとも第1の面120Xに形成されることが好ましい。
(2)堆積工程(図6(a))
原料液132から繊維131を生成させるとともに、繊維131を巻取回転体10の周面を1周以上、周回させながら堆積させる。これにより、巻取回転体10の周面には、繊維131が一方向に配向した繊維集合体130が形成される。
原料液132から繊維131を生成する方法(紡糸法)は特に限定されず、生成させる繊維131の種類等に応じて適宜選択すればよい。紡糸法としては、例えば、溶液紡糸法、溶融紡糸法および電界紡糸法等が挙げられる。
繊維131は、巻取回転体10の周面に沿って堆積するとともに、周面の法線方向に重なり合う場合もある。この繊維の法線方向の重なりは、特に、電界紡糸法により繊維を生成させる場合に多くみられる。先に堆積する繊維131は、後から堆積する繊維131の刺激によって動きやすく、配向が乱れ易い。また、後述するように、巻取回転体10が凸部10Pを備える場合、先に堆積する繊維131は、凸部10P間で弛んで、配向が乱れる場合もある。本実施形態によれば、巻取回転体10に堆積した繊維集合体130を枠体120に転写した後、さらに、この枠体120を、繊維集合体130が対向するように基板110に搭載する。そのため、得られる培地100において、後から堆積する繊維131は、枠体120の第2の面120Y側に配置される。つまり、配向の乱れの少ない繊維131が、培養液とより接触し易い方に配置される。よって、生物組織や微生物へのストレスが軽減されて、これらの成長がさらに促進される。
溶液紡糸法は、繊維131の原料を溶媒に溶解して得られた溶液を、原料液132として用いる方法である。溶媒を用いる溶液紡糸法には、いわゆる湿式紡糸法および乾式紡糸法がある。湿式紡糸法では、原料液132を凝固液中に吐出して、繊維131の原料と凝固液との化学反応により、あるいは、溶媒と凝固液との置換により、繊維131が形成される。乾式紡糸法では、原料液132を空気中に吐出した後、加熱等により溶媒を除去することにより、繊維131が形成される。なかでも、繊維131を一方向に配列させた状態で堆積させ易い点で、乾式紡糸法が好ましい。
溶融紡糸法は、繊維131の原料を加熱して溶融させた溶融液を、原料液132として用いる方法である。得られた原料液132は、空気中に吐出された後、冷却されることにより、繊維状に固化する。この場合、通常、繊維131の原料を溶解するための溶媒は使用しない。よって、溶融紡糸法は、溶媒の除去作業が省略できる点で好ましい。
電界紡糸法は、繊維131の原料を溶媒に溶解して得られた溶液を原料液132として用いる点で、溶液紡糸法と共通する。しかし、電界紡糸法では、原料液132に高電圧を印加しながら空気中に吐出する。原料液132に含まれる溶媒は、巻取回転体10の周面に到達するまでの過程において揮発する。
電界紡糸法では、原料液132に高電圧を印加するため、原料液132をプラスあるいはマイナスに帯電させる。このとき、巻取回転体10をグランドさせるか、あるいは、原料液132とは逆の極性に帯電させることにより、空気中に吐出された原料液132の吐出端は巻取回転体10に引き寄せられて、その周面に付着する。そして、原料液132を吐出しながら巻取回転体10を回転させることにより、溶液紡糸法および溶融紡糸法と同様に、繊維131は、巻取回転体10の周面に周回しながら堆積し、巻取回転体10の周面の少なくとも一部を覆い、一方向に配列する繊維131を備える繊維集合体130が形成される。
(原料液)
溶液紡糸法や電界紡糸法で利用する原料液132は、繊維131の原料と溶媒とを含む。溶融紡糸法で利用する原料液132は、溶融した繊維131の原料を含む。
溶媒としては、繊維131の原料を溶解し、揮発などにより除去可能なものであれば特に制限されず、原料の種類や製造条件に応じて、水および有機溶媒から適宜選択して使用できる。溶媒としては、非プロトン性の極性有機溶媒が好ましい。このような溶媒としては、例えば、N,N−ジメチルホルムアミド(DMF)、N,N−ジメチルアセトアミド(DMAc)、N−メチル−2−ピロリドン(NMP)などのアミド(鎖状または環状アミドなど);ジメチルスルホキシドなどのスルホキシドなどが挙げられる。これらの溶媒は一種を単独で用いてもよく、二種以上を組み合わせて用いてもよい。
原料液132の固形分濃度は、溶媒の種類などに応じて調節できるが、例えば、5〜50質量%であり、10〜30質量%であってもよい。原料液132は、必要に応じてさらに添加剤を含んでもよい。
(巻取回転体)
巻取回転体10の一例を図7に示す。図7は、巻取回転体10の斜視図である。
巻取回転体10の構成は、回転可能である限り特に限定されず、ドラム状であってもよいし、複数のロールで張架されたベルトであってもよい。後者の場合、少なくとも1本のロールを回転駆動させて、ベルトを回転させる。巻取回転体10の材質としては、例えば、金属材料、各種樹脂、各種ゴム、セラミックスおよびこれらの組み合わせが挙げられる。巻取回転体10がベルトである場合、ベルトは、金属ベルトであってもよいし、樹脂ベルトであってもよい。電界紡糸法により繊維131が紡糸される場合、樹脂ベルトは導電性を備えることが好ましい。巻取回転体10の外形は、例えば、円柱または角柱であってもよい。
繊維131は、巻取回転体10の周面を周回する方向(以下、配列方向D)に配列しながら、巻取回転体10の周面に堆積される。配列方向Dは、例えば、巻取回転体10の回転方向(すなわち、巻取回転体10の回転軸に垂直な方向)に沿う方向である。配列方向Dと回転軸とのなす角度θ(ただし、θ≦90°)は、例えば、60°以上、90°以下でもよい。なお、配列方向Dは、繊維131を巻取回転体10の周面の法線方向から見たときの、繊維131の長手方向である。繊維131の長手方向は、巻取回転体10の周面の法線方向から見たときの繊維131の近似直線をとって、求めてもよい。角度θは、複数の繊維131の配列方向Dと回転軸とのなす角度の平均値である。巻取回転体10に堆積する複数の繊維131の配列方向Dは、上記範囲内で互いに異なっていてもよい。
巻取回転体10の周面に、巻取回転体10の回転軸に沿う方向に延伸する複数の帯状の凸部10Pを配置してもよい。これにより、巻取回転体10の周面に周回するように配列した繊維131の集合体(繊維集合体130)は、巻取回転体10から剥離され易くなる。その結果、繊維131の配列を維持したまま、繊維集合体130を枠体120に容易に転写することができる。複数の凸部10Pの端部は、回転軸と交差する方向に延伸するリブ10Rにより連結されていてもよい。
凸部10Pの形状は、帯状である限り特に限定されない。帯状とは、凸部10Pの延伸方向の長さが、延伸方向に垂直な方向の長さよりも長い形状である。凸部10Pを巻取回転体10の周面の法線方向から見たときの形状としては、例えば、矩形、台形等が挙げられる。
凸部10Pの数は特に限定されず、2本以上であればよい。なかでも、繊維集合体130の剥離性の観点から、巻取回転体10の周面に3本以上配置されることが好ましく、10本以上配置されることが好ましい。また、同様の観点から、凸部10Pは等間隔に配置されることが好ましい。なお、後述するように、繊維集合体130の枠体120(図6(b)参照)への転写工程に先立って、繊維集合体130が巻取回転体10に捲回された状態で切断される場合、切断後の繊維集合体130の少なくとも一部が凸部10Pに接触した状態になるよう、繊維集合体130は凸部10P同士の間で切断される。これにより、繊維131の配列が維持され易くなる。この場合、切断予定箇所C(図6(a)参照)の凸部10P同士の間隔を、他の部分の凸部10P同士の間隔よりも小さくすることが好ましい。
凸部10Pの短手方向の長さ(幅)は特に限定されない。なかでも、繊維集合体130の剥離性の観点から、すべての凸部10Pの巻取回転体10の周面に当接する総面積が、巻取回転体10の周面の表面積の10%以上、80%以下、特に30%以上、70%以下になるように、各凸部10Pの幅を決定することが好ましい。凸部10Pの延伸方向Dの長さも特に限定されない。なかでも、巻取回転体10の周面のうち、少なくとも繊維131が堆積し得る領域にわたって、凸部10Pが延伸していることが好ましい。
凸部10Pの高さは特に限定されない。なかでも、繊維131の弛みを抑制し、一方向への配列を維持し易い点で、凸部10Pの高さは過度に高くないことが好ましい。繊維集合体130の剥離性および繊維131の弛み抑制の観点から、凸部10Pの高さは100〜5000μmであることが好ましい。凸部10Pの高さは、巻取回転体10の周面の法線方向における平均値である。
凸部10Pの材質は特に限定されず、各種樹脂材料が挙げられる。なかでも、凸部10Pは、少なくとも繊維131との接触部にシリコーンゴム層を備えることが好ましい。繊維集合体130の剥離性がさらに向上するためである。一方で、シリコーンゴムは適度な粘着性を備えるため、転写工程の前に繊維集合体130が巻取回転体10の周面から剥離することが抑制される。
シリコーンゴムとは、主鎖がケイ素−酸素結合(シロキサン結合)により形成される、熱硬化性の化合物である。シリコーンゴムとしては、例えば、メチルシリコーンゴム、ビニル−メチルシリコーンゴム、フェニル−メチルシリコーンゴム、ジメチルシリコーンゴム、フロロシリコーンゴム等が挙げられる。凸部10Pの全体がシリコーンゴムにより形成されていてもよい。なお、繊維131が電界紡糸法により生成される場合、凸部10Pは導電性を備えることが好ましい。
堆積工程の後、転写工程の前に、繊維集合体130および枠体120の少なくとも一方を加熱する加熱工程を備えていてもよい。転写工程の前に繊維集合体130を加熱することにより、繊維集合体130は軟化した状態で枠体120に転写される。これにより、繊維集合体130と枠体120との密着性が向上する。また、転写工程の前に枠体120を加熱することにより、転写後、繊維集合体130に熱が伝わって軟化する。これにより、繊維集合体130と枠体120との密着性が向上する。なかでも、枠体120を加熱する方法は、繊維131の劣化が抑制できる点で好ましい。
加熱方法は特に限定されないが、繊維131の配列が維持できる点で、非接触式であることが好ましい。非接触式の加熱装置としては、例えば、ハロゲンランプ等、公知のものが挙げられる。加熱温度は、繊維131の軟化点あるいは融点等を考慮して、適宜設定すればよい。加熱温度は、例えば、繊維131が80〜140℃になるように調整する。
(3)転写工程(図6(b))
巻取回転体10を回転させながら、繊維集合体130を枠体120に転写する。
転写工程に先立って、繊維集合体130は、巻取回転体10に捲回された状態で切断予定箇所Cにおいて切断されてもよい。切断予定箇所Cは、例えば、枠体120(あるいは第1開口121a)の形状およびサイズに応じて設定される。繊維集合体130は、例えば、巻取回転体10の回転軸に沿う方向に切断される。この切断部をきっかけにして、繊維集合体130は枠体120に転写される。
枠体120は、例えばXZステージ52に支持されたステージ53に載置されて、搬送される。XZステージ52は、ステージ53、つまりステージ53に載置される枠体120を、巻取回転体10の回転軸に垂直な方向(X軸方向)および上下方向(Z軸方向)に搬送することができる。
生産性がさらに向上する点で、転写工程は、複数の枠体120に対し一括してあるいは連続的に実施されることが好ましい。この場合、複数の枠体120は、ステージ53上にY軸方向(巻取回転体10の回転軸に沿う方向)に沿って配置されてもよいし、X軸方向に沿って配置されてもよい。また、一体的に形成された複数の枠体120の集合体に対して、転写工程が行われてもよい。この場合、転写工程の後、搭載工程の前に、上記枠体120の集合体を個々の枠体120に分離する。この方法によれば、複数の枠体120に対し、一括して繊維集合体130が転写できるとともに、巻取回転体10に堆積した繊維131の大部分が枠体120の転写に利用されるため、生産性がさらに向上する。
(4)搭載工程(図6(c))
繊維集合体130が転写された枠体120を、第1の面120Xが対向するように、基板110に搭載する。このとき、枠体120と基板110との間には、接着部140(あるいは第1の接着部140A)および繊維集合体130が介在している。基板110に第2の接着部140Bを配置して、枠体120と基板110との間にさらに第2の接着部140Bを介在させてもよい。転写工程が、複数の枠体120に対し、一括してあるいは連続的に実施された場合にも、1つの基板110には1つの枠体120が搭載される。
(5)枠体固定工程
接着部形成工程の後、あるいは搭載工程の後に、第1の面120Xの所定の位置に硬化性樹脂を塗布し硬化させることにより、枠体固定部150が形成される。
本発明により得られる培地は、一方向に配列した繊維を備えるため、特に、成長に方向性がある生物組織または微生物を培養するための培地として有用である。
10:巻取回転体
10P:凸部
10R:リブ
51:ノズル
52:XZステージ
53:ステージ
100:培地
110:基板
110X:搭載面
120:枠体
120X:第1の面
120Y:第2の面
121:貫通孔
121a:第1開口
122:切欠き
130:繊維集合体
131:繊維
132:原料液
140A:第1の接着部
140B:第2の接着部
150:枠体固定部
160A、160B:逃げ部
170:はみ出し抑制部

Claims (2)

  1. 基板と、
    第1の面と、その反対側の第2の面と、前記第1の面から前記第2の面に貫通する1つ以上の貫通孔と、を備えるとともに、前記第1の面が対向するように前記基板に搭載される枠体と、
    配列した複数の繊維を含み、前記基板と前記第1の面との間に介在する繊維集合体と、
    前記基板と前記繊維集合体と前記枠体とを接着する接着部と、
    前記枠体の前記第1の面の外縁に配置された、前記枠体を前記基板に固定する枠体固定部と、を備え、
    前記繊維集合体の少なくとも一部が、前記貫通孔によって前記第1の面に形成された第1開口から露出しており、
    前記接着部が、感圧接着剤を含み、
    前記枠体固定部が、硬化性樹脂の硬化物を含む、細胞培養用足場
  2. 基板と、
    第1の面と、その反対側の第2の面と、前記第1の面から前記第2の面に貫通する1つ以上の貫通孔と、を備えるとともに、前記第1の面が対向するように前記基板に搭載される枠体と、
    配列した複数の繊維を含み、前記基板と前記第1の面との間に介在する繊維集合体と、
    前記基板と前記繊維集合体と前記枠体とを接着する接着部と、を備え、
    前記繊維集合体の少なくとも一部が、前記貫通孔によって前記第1の面に形成された第1開口から露出しており、
    前記接着部が、感圧接着剤を含み、
    前記第1開口の周囲の少なくとも一部に、前記接着剤の前記第1開口へのはみ出しを抑制する凸部が形成されている、細胞培養用足場
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