JP6522063B2 - Use of PEDF-Derived Polypeptides for Treating Alopecia and / or Hair Depigmentation - Google Patents
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Description
(発明の背景)
(1.発明の分野)
BACKGROUND OF THE INVENTION
(1. Field of the Invention)
本開示は、脱毛症及び/又は毛髪色素脱失の治療に関する。開示する発明は、特に、脱
毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療するためのPEDF由来のポリペプチドの使用に関する。
The present disclosure relates to the treatment of alopecia and / or depigmentation of hair. The disclosed invention relates in particular to the use of PEDF-derived polypeptides for treating alopecia and / or hair loss.
（2.関連技術の説明） (2. Description of Related Art)
脱毛症とは、頭部又は体からの毛の喪失を意味し、かつ瘢痕性(傷跡)脱毛症又は非瘢痕
性(非傷跡)脱毛症のいずれかに分類することができる。瘢痕性脱毛症患者において、毛包
は、破壊され、かつ瘢痕組織と置き換えられるのに対し、非瘢痕性脱毛症患者においては
、そのような不可逆的損傷は存在しない。脱毛症は、致命的ではなくとも、容姿に影響を
及ぼし、結果的に個人の社会的交流、自尊心、及び心理的快適さに影響を及ぼす。
Alopecia means loss of hair from the head or body and can be classified as either scarring (scar) alopecia or non-scarring (non-scarring) alopecia. In scarring alopecia patients, hair follicles are destroyed and replaced with scar tissue, whereas in non-scarring alopecia patients there is no such irreversible damage. Alopecia, although not fatal, affects appearance and consequently affects the social interaction, self-esteem and psychological comfort of the individual.
非瘢痕性脱毛症は、アナゲン脱毛、テロゲン脱毛、アンドロゲン性脱毛症、及び円形脱
毛症を含み、その各々は、異なる生物学的欠損の結果である。対象が経験し得る脱毛症の
種類に応じて、毛包に対するその影響は異なる。
Non-scarring alopecia includes anagen hair loss, telogenic hair loss, androgenic alopecia, and alopecia areata, each of which is the result of a different biological defect. Depending on the type of alopecia that a subject may experience, its impact on hair follicles varies.
アナゲン脱毛は一般に、アナゲン毛包の毛母細胞における有糸***活性の突然の中止に
より引き起こされる。従って、これらの毛包は、無髪か、又は破砕及び喪失の運命にある
細い欠陥のある毛鞘のいずれかを生じる。アナゲン脱毛は、化学療法又は放射線療法を受
けた患者において一般的である。概して、一旦アナゲン脱毛の原因が存在しなくなると、
毛包は、それらの当初の成長周期を再開する。従ってほとんどの症例において、治療の終
了後に、毛髪の再成長が始まる。しかし、新たに成長した毛髪の色及び組織(texture)は
、当初の毛髪のものとは異なることがある。
Anagen hair loss is generally caused by a sudden cessation of mitotic activity in the hair matrix cells of anagen hair follicles. Thus, these hair follicles give rise to either hair loss or thin defective hair sheaths which are destined for fracturing and loss. Anagen hair loss is common in patients who have received chemotherapy or radiation therapy. Generally, once the cause of anagen hair loss ceases to exist,
The hair follicles resume their initial growth cycle. Thus, in most cases, after the end of treatment, regrowth of the hair begins. However, the color and texture of newly grown hair may differ from that of the original hair.
テロゲン脱毛は、毛包の周期が、時期尚早に毛髪成長周期のテロゲン期に進入する際に
生じ、これにより過剰な毛髪の脱落が引き起こされる。これは、偏った食事、薬物治療(
例えば、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、抗うつ薬、及び非ステロイド系抗炎症薬
など)、分娩、高熱、大手術、過剰又は過小活性の甲状腺、重度の感染症、重度の慢性疾
患、及び重度の精神的ストレスを含む、様々なストレスに関連した状態により引き起こさ
れ得る。一般に、脱毛は、個体が何らかのストレス発生を経験した後、3〜4ヶ月で出現し
；かつ、抜けた毛髪は、6〜12ヶ月以内に置き換えられるであろう。
Telogen hair loss occurs when the hair follicle cycle enters the telogen phase of the hair growth cycle prematurely, which causes excessive hair loss. It is a biased diet, drug treatment (
For example, beta-blockers, calcium channel blockers, antidepressants and non-steroidal anti-inflammatory drugs etc), labor, hyperthermia, major surgery, excessive or underactive thyroid, severe infections, severe chronic diseases, and It can be caused by a variety of stress related conditions, including severe mental stress. Generally, hair loss appears three to four months after the individual experiences some stress development; and shed hair will be replaced within six to twelve months.
アンドロゲン性脱毛症(男性型禿頭としても知られる)は、男性脱毛の最も一般的な型で
ある。アンドロゲン性脱毛症は、男性及び女性の両方に影響を及ぼすが、女性対象は、男
性対象よりも脱毛が少ない傾向がある。アンドロゲン性脱毛症の基礎となる機序は、よく
分かっていない。しかし、ジヒドロテストステロン(アンドロゲンの誘導体)に対する毛包
の過敏が、男性におけるアンドロゲン性脱毛症の発症に関連していると考えられている。
この過敏は、毛包の縮小を引き起こし、かつ毛包細胞のアナゲン期間を短縮し、これによ
り棍毛の形成を生じ、これは最終的には毛包から脱落する。
Androgenic alopecia (also known as male baldness) is the most common type of male hair loss. Androgenetic alopecia affects both men and women, but female subjects tend to have less hair loss than male subjects. The mechanisms underlying androgenic alopecia are not well understood. However, hypersensitivity of hair follicles to dihydrotestosterone (a derivative of androgen) is thought to be associated with the onset of androgenic alopecia in men.
This hypersensitivity causes shrinking of the hair follicle and shortens the anagen period of the hair follicle cells, which results in the formation of flagella, which eventually shed from the hair follicle.
現在、アンドロゲン性脱毛症の治療のために米食品医薬品局(FDA)により承認された2種
の薬物が存在する：局所性ミノキシジル(商品名：ROGAINE(登録商標))及び経口フィナス
テリド(商品名：Propecia(登録商標))。ミノキシジルは、毛包のアナゲン期間を延長し、
テロゲンからアナゲンへの転換を刺激し、かつ包のサイズの拡大を促進することにより、
毛包に影響を及ぼすカリウムチャネル作動薬である。ミノキシジルはまた、化学療法によ
り引き起こされたアナゲン脱毛に加え円形脱毛症の治療に適用可能である。フィナステリ
ドは、テストステロンをジヒドロテストステロン(DHT)へ変換する酵素であるII型5-α-レ
ダクターゼの競合的阻害薬である。従って、フィナステリドは、II型5-α-レダクターゼ
の活性を遮断することにより、アンドロゲン性脱毛症を治療する。これら2種の薬物は、
一部の患者において毛髪再成長を刺激するが、これらは投薬期間に有効なだけであり、結
果的に患者は、この薬物療法を連続して服用するように助言される。加えて、ミノキシジ
ル又はフィナステリドの使用は、場合によっては数多くの副作用を伴うことが分かってい
る。ミノキシジルの可能性のある副作用は、頭皮そう痒又は発疹；***減退；心拍数上昇
；呼吸困難；体重増加；及び、多毛症を含む。フィナステリドの可能性のある副作用は、
皮膚発疹；***肥大又は圧痛；睾丸痛；***減退；***量減少；及び、インポテンスを含
む。
Currently, there are two drugs approved by the US Food and Drug Administration (FDA) for the treatment of androgenic alopecia: topical minoxidil (trade name: ROGAINE ®) and oral finasteride (trade name: Propecia (R)). Minoxidil prolongs the hair follicle anagen period,
By stimulating the conversion of telogen to anagen and promoting the expansion of the package size,
It is a potassium channel agonist that affects hair follicles. Minoxidil is also applicable to the treatment of alopecia areata in addition to anagen hair loss caused by chemotherapy. Finasteride is a competitive inhibitor of type II 5-α-reductase, an enzyme that converts testosterone to dihydrotestosterone (DHT). Thus, finasteride treats androgenic alopecia by blocking the activity of type II 5-alpha-reductase. These two drugs are
Although they stimulate hair regrowth in some patients, they are only effective during the dosing period and as a result the patient is advised to take this medication continuously. In addition, the use of minoxidil or finasteride has been found to be sometimes accompanied by numerous side effects. Possible side effects of Minoxidil include scalp itching or rash; decreased libido; increased heart rate; dyspnea; weight gain; and hirsutism. The possible side effects of finasteride are:
Skin rash; breast hypertrophy or tenderness; testicular pain; reduced libido; reduced ejaculation; and impotence.
毛髪の色は、毛髪の色素沈着の結果である。色素(すなわちメラニン)のメラニン形成細
胞からの供給が減少した場合、新たに成長した毛髪は、その当初の色を失い、一般には毛
髪色素脱失として知られている現象の、より明るい色を又は白色さえも示すであろう。毛
髪色素脱失を引き起こす因子は、少なくとも加齢、ストレス、障害(例えばまだら症)など
を含む。加えて、毛髪色素脱失は、過去に化学療法又は放射線療法を受けた患者の新たに
成長した毛髪においても認められることが多い。今日まで、脱色素した毛髪に、その以前
の色を取り戻させるのに有効な医学的治療は存在しない。従って毛髪色素脱失を経験して
いるほとんどのヒトは、毛染め又はカツラの装着により、それらの外観に対処するか又は
脱色素された毛髪を隠している。
Hair color is the result of pigmentation of the hair. When the supply of pigment (i.e. melanin) from melanocytes is reduced, the newly grown hair loses its original color and generally has a brighter color, a phenomenon known as hair depigmentation or Even white will be shown. Factors causing hair loss include at least aging, stress, disorders (eg, mottle) and the like. In addition, depigmentation of hair is also often found in the newly grown hair of patients who have received chemotherapy or radiation therapy in the past. To date, there is no effective medical treatment for depigmented hair to regain its previous color. Thus, most people who are experiencing depigmentation address their appearance or hide their depigmented hair by wearing a hair dye or wig.
前述の観点から、様々な型の脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を有効に治療する手段の必
要性が、当該技術分野において存在する。
In view of the foregoing, there exists a need in the art for means for effectively treating various types of alopecia and / or hair loss.
(概要)
以下は、読者に基本的理解を提供するために、本開示の簡単な概要を提供する。この概
要は、本開示の広範な全体像ではなく、本発明の鍵となる/重要な要素を確定せず、本発
明の範囲の線引きもしない。その唯一の目的は、後に提供する、より詳細な説明への前置
きとしての簡単な形で、本明細書に開示されるある種の概念を提供することである。
(Overview)
The following provides a brief summary of the disclosure in order to provide the reader with a basic understanding. This summary is not an extensive overview of the present disclosure, and does not identify key / critical elements of the invention or delineate the scope of the invention. Its sole purpose is to provide certain concepts disclosed herein in a simplified form as a prelude to the more detailed description that is presented later.
本開示は、色素上皮由来因子(PEDF)に由来する合成ペプチドが、毛包を保護することが
でき、結果的にこれらが対象における脱毛及び/又は毛髪色素脱失の予防及び/又は改善に
有効であるという発見に少なくとも基づいている。具体的には、本明細書に提供される試
験実施例は、様々なPEDF-由来の合成ペプチドは、毛包ジストロフィー及び包細胞アポト
ーシスを阻害し、並びに/又は毛包内のメラノサイト幹細胞(MSC)の未熟な分化を防止する
ことが可能であることを指摘している。従って、本発明のPEDF由来の合成ペプチドは、脱
毛及び/又は毛髪色素脱失を予防及び/又は改善するための薬剤又は医薬品として有用であ
る。
The present disclosure shows that synthetic peptides derived from pigment epithelium-derived factor (PEDF) can protect hair follicles and, as a result, they are effective for preventing and / or improving hair loss and / or hair loss in a subject At least based on the discovery that it is. Specifically, the test examples provided herein demonstrate that various PEDF-derived synthetic peptides inhibit hair follicle dystrophy and pellucocyte apoptosis and / or melanocyte stem cells (MSCs) within hair follicles It is pointed out that it is possible to prevent premature differentiation of Therefore, the synthetic peptide derived from PEDF of the present invention is useful as a drug or medicine for preventing and / or improving hair loss and / or hair loss.
従って、一態様では、本開示は、対象における脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療す
るための合成ペプチドに関する。
Thus, in one aspect, the present disclosure relates to synthetic peptides for treating alopecia and / or hair loss in a subject.
本開示の実施態様によれば、この合成ペプチドは、20〜44アミノ酸残基の長さであり、
かつ、配列番号:10と少なくとも80％同一であるアミノ酸配列を有する。また、該アミノ
酸配列は、配列番号:10の残基16〜35と少なくとも90％同一である少なくとも20個の連続
的な残基を含み、その結果、該合成ペプチドが、脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療す
るのに有用となる。
According to an embodiment of the present disclosure, the synthetic peptide is 20-44 amino acid residues in length,
And have an amino acid sequence that is at least 80% identical to SEQ ID NO: 10. The amino acid sequence also comprises at least 20 consecutive residues which are at least 90% identical to residues 16 to 35 of SEQ ID NO: 10, such that the synthetic peptide is alopecia and / or hair. Useful for treating hypopigmentation.
本開示の任意の実施態様によれば、この合成ペプチドの少なくとも4個の連続的な残基
は、配列番号:10の残基16〜19(すなわち「SLGA残基」)と同一である。こうした合成ペプ
チドの非制限的な例としては、それぞれ、配列番号:10(44-mer)、配列番号:1(39-mer)、
配列番号:2(34-mer)、配列番号:3(29-mer)、配列番号:5(24-mer)、配列番号:6(20-mer)、
配列番号:8(MO 29-mer)、及び配列番号:9(MO 20-mer)のアミノ酸配列を有するものが挙げ
られる。本開示のいくつかの実施態様では、合成ペプチドのアミノ酸配列は、配列番号:1
0(44-mer)、配列番号:3(29-mer)、配列番号:5(24-mer)、又は配列番号:6(20-mer)のいず
れかである。
According to any embodiment of the present disclosure, at least four consecutive residues of this synthetic peptide are identical to residues 16 to 19 of SEQ ID NO: 10 (ie “SLGA residues”). Non-limiting examples of such synthetic peptides are SEQ ID NO: 10 (44-mer), SEQ ID NO: 1 (39-mer), respectively.
SEQ ID NO: 2 (34-mer), SEQ ID NO: 3 (29-mer), SEQ ID NO: 5 (24-mer), SEQ ID NO: 6 (20-mer),
Those having the amino acid sequences of SEQ ID NO: 8 (MO 29-mer) and SEQ ID NO: 9 (MO 20-mer) can be mentioned. In some embodiments of the present disclosure, the amino acid sequence of the synthetic peptide is SEQ ID NO: 1.
0 (44-mer), SEQ ID NO: 3 (29-mer), SEQ ID NO: 5 (24-mer), or SEQ ID NO: 6 (20-mer).
本開示の様々な実施態様によれば、脱毛症は、アナゲン脱毛(例えば、化学療法若しく
は放射線療法により引き起こされるもの)、テロゲン脱毛(例えば、ストレス、偏った食事
、薬物療法、若しくは感染症により引き起こされるもの)、又はアンドロゲン性脱毛症で
あることができる。
According to various embodiments of the present disclosure, alopecia is caused by anagen hair loss (eg, caused by chemotherapy or radiation therapy), telogen hair loss (eg, stress, unbalanced diet, drug therapy, or infection) Or androgenic alopecia.
いくつかの実施態様において、毛髪色素脱失は、化学療法又は放射線療法により引き起
こされることがある。いくつかの他の実施態様において、毛髪色素脱失は、ストレス又は
加齢により引き起こされることがある。
In some embodiments, hair depigmentation may be caused by chemotherapy or radiation therapy. In some other embodiments, hair depigmentation may be caused by stress or aging.
本開示の様々な実施態様により、対象は、ヒトを含めた哺乳類に分類されるあらゆる動
物であり得る。
According to various embodiments of the present disclosure, the subject may be any animal classified as a mammal, including humans.
別の態様では、本開示は、対象における脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療するため
の局所性医薬組成物に関する。対象は、ヒトを含めた哺乳類に分類されるあらゆる動物で
あり得る。
In another aspect, the present disclosure relates to a topical pharmaceutical composition for treating alopecia and / or hair loss in a subject. The subject can be any animal classified as a mammal, including humans.
本開示の一実施態様によれば、この局所性医薬組成物は、前述の態様/実施態様のいず
れかによる合成ペプチドを含み、かつ、該合成ペプチドは、対象における脱毛症及び/又
は毛髪色素脱失を治療するのに十分な有効量で存在する。この医薬組成物はまた、合成ペ
プチドのための医薬として許容し得る賦形剤も含む。
According to one embodiment of the present disclosure, the topical pharmaceutical composition comprises a synthetic peptide according to any of the above aspects / embodiments, and the synthetic peptide is for alopecia and / or hair pigmentation in a subject Present in an effective amount sufficient to treat the loss. The pharmaceutical composition also comprises a pharmaceutically acceptable excipient for the synthetic peptide.
本開示の様々な実施態様によれば、局所性医薬組成物は、液剤、噴霧剤、エアゾール剤
、泡剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏、ゲル剤、又は貼付剤に製剤化されることがで
きる。
According to various embodiments of the present disclosure, the topical pharmaceutical composition may be formulated into a solution, a spray, an aerosol, a foam, a cream, a lotion, an ointment, a gel, or a patch. it can.
本開示の任意の実施態様によれば、この合成ペプチドは、約0.1〜100μM、好ましくは
約1〜25μMの量で、医薬組成物中に存在する。
According to any embodiment of the present disclosure, the synthetic peptide is present in the pharmaceutical composition in an amount of about 0.1 to 100 μM, preferably about 1 to 25 μM.
さらに別の態様では、本発明は、対象における脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療す
るための方法に関する。対象は、ヒトを含めた哺乳類に分類されるあらゆる動物であり得
る。
In yet another aspect, the invention relates to a method for treating alopecia and / or hair loss in a subject. The subject can be any animal classified as a mammal, including humans.
一実施態様では、該方法は、対象に、前述の態様/実施態様のいずれかによる有効量の
合成ペプチドを投与することを含む。本開示の様々な実施態様によれば、合成ペプチドは
、局所的に又は全身的に送達されることができる。好ましくは、合成ペプチドは、局所的
に投与される。
In one embodiment, the method comprises administering to the subject an effective amount of a synthetic peptide according to any of the above aspects / embodiments. According to various embodiments of the present disclosure, synthetic peptides can be delivered locally or systemically. Preferably, the synthetic peptide is administered locally.
任意の実施態様によれば、この合成ペプチドは、本開示の前述の態様/実施態様による
局所性医薬組成物に製剤化される。一例において、本局所性医薬組成物は、対象の頭皮に
塗布されることができる。
According to any embodiment, the synthetic peptide is formulated into a topical pharmaceutical composition according to the above aspects / embodiments of the present disclosure. In one example, the topical pharmaceutical composition can be applied to the subject's scalp.
本開示の付随的な特徴及び利点の多くは、添付の図面と関連付けて考慮される以下の詳
細な説明を参照して、いっそう良く理解されるようになるであろう。
Many of the attendant features and advantages of the present disclosure will become better understood with reference to the following detailed description considered in conjunction with the accompanying drawings.
(図面の簡単な説明)
本特許及び出願のファイルは、カラーで製作された少なくとも1つの図面を含む。カラ
ーの図面を伴うこの特許又は特許出願公開の複写は、請求及び必要な料金の支払い後に、
事務局によって提供されることとなる。
(A brief description of the drawing)
The patent and application file contains at least one drawing executed in color. A copy of this patent or patent application publication with color drawings will be issued after the claim and payment of the necessary fee.
It will be provided by the secretariat.
本発明の説明は、添付の図面に照らして読む以下の詳細な説明から、いっそう良く理解
されるであろう。
The description of the present invention will be better understood from the following detailed description read in light of the accompanying drawings.
(説明)
添付の図面に関連して以下に提供する詳細な説明は、本発明の実施例の説明を目的とし
、本発明の実施例が構成又は利用され得る唯一の形態を表すことを意図しない。この説明
は、実施例の機能、並びに実施例を構成及び操作するためのステップの順序を述べる。し
かし、異なる例によって、同一又は同等の機能及び順序を実現することもできる。
(Description)
The detailed description provided below in connection with the accompanying drawings is for the purpose of describing the embodiments of the present invention and is not intended to represent the only forms in which the embodiments of the present invention may be constructed or utilized. This description sets forth the functions of the example, as well as the sequence of steps for constructing and operating the example. However, the same or equivalent functions and sequences may be realized by different examples.
便宜上、(明細書、実施例、及び添付の特許請求の範囲を含めて)出願全体において用い
られるある種の用語を、ここにまとめる。本明細書で別段に定義されない限り、本開示で
用いられる科学技術用語は、当分野の技術者によって普通に理解及び使用される意味を有
するものとする。文脈によって他に必要とされない限り、単数形の用語には、複数形の同
一のものが含まれるものとし、複数形の用語には、単数形が含まれるものとすることを理
解されたい。具体的には、本明細書及び特許請求の範囲では、文脈によってそうではない
と明らかに示されない限り、単数形「a」及び「an」には、複数の指示物が含まれる。
For convenience, certain terms employed throughout the application (including the specification, examples, and appended claims) are collected here. Unless defined otherwise herein, technical and scientific terms used in this disclosure shall have the meanings that are commonly understood and used by those skilled in the art. It is to be understood that singular terms shall include the same plural and plural terms shall include the singular unless the context otherwise requires otherwise. Specifically, in the present specification and claims, the singular forms "a" and "an" include plural referents unless the context clearly indicates otherwise.
本発明の広い範囲を説明する数値範囲及びパラメータは、おおよその値であるものの、
具体例において説明する数値は、可能な限り正確に報告する。しかし、いかなる数値も、
それぞれの試験測定において判明する標準偏差から必然的に生じるある種の誤差を本質的
に含んでいる。また、本明細書で使用する場合、用語「約」は一般に、所与の値又は範囲
の10％、5％、1％、又は0.5％以内を意味する。あるいは、用語「約」は、当分野の技術
者によって判断される場合には、平均の許容し得る標準誤差以内を意味する。具体例/試
験実施例以外では、又は他に指定がない限り、本明細書に開示される、材料の量、時間、
温度、操作条件、量の割合、及びこれらと同類のものに対するものなどの、数値範囲、量
、値、及び割合は全て、全ての場合において、用語「約」によって修飾されるものと理解
されるべきである。従って、そうではないと示されない限り、本開示及び添付の特許請求
の範囲に示される数値パラメータは、所望される場合に変動し得るおおよその値である。
最低限でも、各数値パラメータは、少なくとも、報告される有効数字の数を考慮して、か
つ、通常の丸め技術を適用することによって解釈されるべきである。
Numerical ranges and parameters which describe the broad scope of the invention are approximate values, though
The figures described in the examples should be reported as accurately as possible. But any numbers,
It inherently contains certain errors necessarily resulting from the standard deviation found in each test measurement. Also, as used herein, the term "about" generally means within 10%, 5%, 1%, or 0.5% of a given value or range. Alternatively, the term "about" means within an acceptable standard error of the mean, as judged by the person skilled in the art. Amounts of materials, times, hours, etc., disclosed herein, other than the specific examples / test examples, or unless otherwise specified.
Numerical ranges, quantities, values and proportions such as temperature, operating conditions, proportions of quantities, and the like are all understood to be modified by the term "about" in all cases. It should. Thus, unless indicated to the contrary, the numerical parameters set forth in the present disclosure and appended claims are approximate values that may vary if desired.
At the very least, each numerical parameter should be interpreted at least taking into account the number of significant figures to be reported and by applying conventional rounding techniques.
本明細書で使用する場合、用語「ペプチド」は、アミノ酸残基のポリマーを指す。用語
「合成ペプチド」は、本明細書で使用する場合、天然に存在する全長タンパク質分子を含
まないペプチドを意味する。ペプチドは、化学合成、組換え遺伝子技術、又は全長タンパ
ク質の断片化などの技術を使用する、人の介入によって製造することができる点で、「合
成」である。本開示全体を通して、あるペプチド内の任意の特定のアミノ酸残基の位置は
、ペプチドのN末端を始点に番号付けされる。
As used herein, the term "peptide" refers to a polymer of amino acid residues. The term "synthetic peptide" as used herein means a peptide that does not include a naturally occurring full-length protein molecule. Peptides are "synthetic" in that they can be produced by human intervention using techniques such as chemical synthesis, recombinant genetics, or fragmentation of full-length proteins. Throughout the disclosure, the positions of any particular amino acid residue within a peptide are numbered starting from the N-terminus of the peptide.
用語「幹細胞」とは、本明細書で使用する場合、ある種の環境下で実質的に分化せずに
増殖する能力；更には、特定の環境下で、より特化した又は分化した表現型に分化する能
力又は潜在的可能性を保持する細胞をいう。
The term "stem cell" as used herein is the ability to proliferate substantially without differentiation under certain circumstances; furthermore, a more specialized or differentiated phenotype under certain circumstances. Cells that retain the ability or potential to differentiate into
本明細書で使用する場合、「増殖すること」及び「増殖」とは、細胞***による、集団
中の細胞数の増加をいう。
As used herein, "proliferating" and "proliferation" refer to an increase in the number of cells in a population due to cell division.
本明細書で特定される合成ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性の割合(％)
」は、配列を整列させ、かつ、最大の割合の配列同一性を得るために必要であればギャッ
プを導入した後の、配列同一性の一部としてのいかなる保存的置換も考慮しない、特定の
ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である候補配列内のアミノ酸残基の割合と定義
される。配列同一性の割合を決定する目的のアラインメントは、当分野の技術の範囲内の
様々な方式で、例えば、BLAST、BLAST-2、ALIGN、又はMegalign(DNASTAR)ソフトウェアな
どの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、実現することができる。当
分野の技術者は、比較される配列の完全長にわたる最大アラインメントを実現するために
必要とされるあらゆるアルゴリズムを含めた、アラインメントを測定するための適切なパ
ラメータを決定することができる。本明細書の目的では、2つのアミノ酸配列間の配列比
較は、米国立生物工学情報センター(NCBI)によってオンラインで提供されているコンピュ
ータプログラムBlastp(タンパク質-タンパク質BLAST)によって実施した。所与のアミノ酸
配列Bに対する所与のアミノ酸配列Aのアミノ酸配列同一性の割合(あるいは、これは、所
与のアミノ酸配列Bに対するアミノ酸配列同一性が、いくらかの％である、所与のアミノ
酸配列Aと表現することができる)は、以下の通りの式によって算出する:
プログラムによって同一のマッチとしてスコア化される、アミノ酸残基の数であり、Yは
、A又はB内のいずれか短い方のアミノ酸残基の総数である。
"Percentage of amino acid sequence identity (%) with respect to the synthetic polypeptide sequences identified herein
Is a sequence that does not consider any conservative substitutions as part of the sequence identity, after aligning the sequences and introducing gaps if necessary to obtain the greatest percentage of sequence identity. Defined as the percentage of amino acid residues within the candidate sequence that are identical to the amino acid residues within the polypeptide sequence. Alignments for the purpose of determining percent sequence identity may be made available in various ways within the skill of the art, eg, publicly available such as BLAST, BLAST-2, ALIGN or Megalign (DNASTAR) software. It can be implemented using computer software. One skilled in the art can determine appropriate parameters for measuring alignment, including any algorithms needed to achieve maximal alignment over the full length of the sequences being compared. For the purposes of this specification, sequence comparisons between two amino acid sequences were performed by the computer program Blastp (protein-protein BLAST) provided online by the National Center for Biotechnology Information (NCBI). Percentage of amino acid sequence identity of a given amino acid sequence A to a given amino acid sequence B (or alternatively, this is a given amino acid sequence in which the amino acid sequence identity to a given amino acid sequence B is some% A) can be calculated by the following equation:
用語「治療」及び「治療すること」は、本明細書では、所望の医薬的及び/又は生理学
的効果を生じる、予防的(例えば、予防薬)、治癒的、又は緩和的治療を含むように使用さ
れる。該効果は、脱毛症又は毛髪色素脱失を部分的又は完全に治癒又は予防するという観
点から、治療的であることが好ましい。用語「治療すること」とは、本明細書で使用する
場合、ある特定の疾患、障害、及び/又は状態の1以上の症状又は特徴を部分的又は完全に
、緩和する、改善させる、軽減する、発症を遅らせる、進行を妨げる、重篤度を軽減する
、及び/又は発生率を低下させる目的での、医学的状態、該状態の症状、該状態に続発す
る疾患若しくは障害、又は該状態への素因を有する対象への、本開示の合成ペプチド又は
医薬組成物の適用又は投与をいう。治療は、疾患、障害、及び/若しくは状態の徴候を示
さない対象に、並びに/又は、疾患、障害、及び/若しくは状態の初期の徴候のみを示す対
象に、該疾患、障害、及び/又は状態に関連する病理を発症するリスクを低下させる目的
で、投与することができる。本明細書において使用される症状、疾患、障害又は状態は、
脱毛症又は毛髪色素脱失であることができる。治療は、一般に、この用語が本明細書で定
義される通り、1以上の症状又は臨床マーカーが低下した場合に「有効」である。
The terms "treatment" and "treating" as used herein include prophylactic (eg, prophylactic), curative, or palliative treatment to produce the desired pharmaceutical and / or physiological effects. used. The effect is preferably therapeutic from the viewpoint of partially or completely curing or preventing alopecia or depigmentation of the hair. The term "treating" as used herein partially, completely ameliorates, ameliorates, alleviates one or more symptoms or features of a particular disease, disorder, and / or condition. A medical condition, a symptom of the condition, a disease or disorder secondary to the condition, or a condition for the purpose of delaying the onset, preventing the progression, reducing the severity and / or reducing the incidence Refers to the application or administration of a synthetic peptide or pharmaceutical composition of the present disclosure to a subject who is predisposed to Treatment is for a subject who does not show symptoms of the disease, disorder and / or condition and / or for subjects who show only the initial signs of the disease, disorder and / or condition. It can be administered to reduce the risk of developing pathologies associated with The conditions, diseases, disorders or conditions used herein are:
It can be alopecia or hair loss. Treatment is generally "effective" if one or more symptoms or clinical markers are reduced, as the term is defined herein.
用語「有効量」とは、本明細書で使用する場合、所望の反応をもたらすのに十分な成分
の量をいう。用語「治療有効量」とは、本明細書で使用する場合、先に定義した通りの所
望の「有効な治療」をもたらす医薬組成物中の治療薬の量をいう。具体的な治療有効量は
、治療される特定の状態、患者の身体的状態(例えば、患者の体重、年齢、又は性別)、治
療される哺乳類又は動物の種類、治療の期間、(もしあれば)併用療法の特性、及び用いら
れる具体的な製剤などの要因によって変動することとなる。治療有効量はまた、化合物又
は組成物の治療的に有益な効果が、いかなる有毒又は有害な作用も上回る量でもある。
The term "effective amount" as used herein refers to an amount of component sufficient to effect the desired reaction. The term "therapeutically effective amount" as used herein refers to the amount of therapeutic agent in a pharmaceutical composition that results in the desired "effective treatment" as defined above. The specific therapeutically effective amount is the particular condition being treated, the physical condition of the patient (e.g., the patient's weight, age, or gender), the type of mammal or animal being treated, the duration of treatment, if any. The nature of the combination therapy will vary depending on such factors as the particular formulation used. A therapeutically effective amount is also one in which any therapeutically beneficial effects of the compound or composition are outweighed by any toxic or detrimental effects.
用語「適用」又は「投与」は、本明細書において互換的に使用され、脱毛症及び/又は
毛髪色素脱失を治療するために、対象へ、本発明の合成ペプチド又は医薬組成物を提供す
る手段をいう。本開示の様々な実施態様により、局所的適用が、好ましい投与経路である
。例えば、本発明の合成ペプチド又は医薬組成物は、対象の生物学的表面(例えば、皮膚
、頭皮、又は毛髪)に局所的に適用され、その結果この合成ペプチド又は本医薬組成物は
、脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を防止又は改善するように、標的部位(例えば毛包)に到
達する。
The terms "application" or "administration" are used interchangeably herein to provide the subject with a synthetic peptide or pharmaceutical composition of the invention to treat alopecia and / or hair loss. I say a means. According to various embodiments of the present disclosure, topical application is a preferred route of administration. For example, a synthetic peptide or pharmaceutical composition of the invention is topically applied to a biological surface of the subject (e.g. skin, scalp or hair) such that the synthetic peptide or the pharmaceutical composition is alopecia The target site (eg, hair follicle) is reached to prevent and / or improve hair loss.
本明細書において使用される用語「賦形剤」は、本開示の合成PEDFペプチドのためのビ
ヒクル/担体を形成する任意の不活性物質(粉末又は液体など)を意味する。賦形剤は、一
般に安全で、無毒であり、かつ広い意味で、例えば充填剤、希釈剤、凝集剤、結合剤、滑
沢剤、流動促進剤、安定剤、着色剤、湿潤剤、崩壊剤など、医薬組成物の調製に有用な製
薬産業において任意の公知の物質を含む。
The term "excipient" as used herein means any inert substance (such as a powder or liquid) that forms a vehicle / carrier for a synthetic PEDF peptide of the present disclosure. Excipients are generally safe, non-toxic and in a broad sense eg fillers, diluents, flocculants, binders, lubricants, glidants, stabilizers, colorants, wetting agents, disintegrants And any known substance in the pharmaceutical industry useful for the preparation of pharmaceutical compositions.
本明細書で使用する場合、「医薬として許容し得る」成分は、妥当なベネフィット/リ
スク比と釣り合った過度の有害な副作用(毒性、刺激、及びアレルギー反応)を伴わないヒ
ト及び/又は動物での使用に適している成分である。各賦形剤はまた、医薬製剤の他の成
分と適合性があるという意味で、「許容し得る」ものでなければならない。
As used herein, a "pharmaceutically acceptable" ingredient is in humans and / or animals without excessive adverse side effects (toxicity, irritation, and allergic reactions) commensurate with a reasonable benefit / risk ratio. Component that is suitable for use in Each excipient must also be "acceptable" in the sense of being compatible with the other ingredients of the pharmaceutical formulation.
用語「対象」とは、本発明の合成ペプチド、組成物、及び/又は方法で治療可能である
、ヒト種を含めた哺乳類をいう。用語「対象」は、一方の性別が特に示されない限り、男
性と女性の両方を指すものとする。
The term "subject" refers to a mammal, including human species, that is treatable with the synthetic peptides, compositions, and / or methods of the invention. The term "subject" shall refer to both male and female unless one gender is specifically indicated.
動物の毛の成長には三段階が存在する：カタゲン、テロゲン、及びアナゲン。アナゲン
は、毛が活発に成長する相であり、その間毛球中の細胞は、迅速に***しかつ毛幹へと分
化する。平均して、ヒト頭髪は、この活発なアナゲン期に約3〜5年間留まるのに対し、マ
ウスの毛は、アナゲン期に約11日間留まる。アナゲン期には、カタゲン期が続く。この期
間に、毛の成長は停止し、包細胞の約70％は、アポトーシス及び再吸収を受け、これによ
り棍毛の形成を生じる。カタゲン期は、ヒト頭髪について約1〜2週間続く、一過性の段階
である。カタゲンの後、毛は、テロゲン期へと進む。テロゲンは、静止相であり、これは
ヒト頭髪については約3ヶ月続く。この相の間に、毛包は、完全に静止し、棍毛が完全に
形成される。アナゲンの毛と比べ、テロゲンの毛(棍毛)は、比較的容易に引き抜くことが
でき、脱落する傾向がある。
There are three stages to animal hair growth: catagens, telogens, and anagens. Anagen is a phase in which hair grows actively, during which cells in the hair bulb divide rapidly and differentiate into hair shaft. On average, human hair remains in this active anagen for about 3 to 5 years, while mouse hair remains in the anagen for about 11 days. The anagen phase is followed by the catagen phase. During this time, hair growth ceases and about 70% of the follicles undergo apoptosis and resorption, which results in the formation of flagella. The catagen phase is a transient phase that lasts about 1 to 2 weeks for human hair. After catagen, the hair goes to the telogen phase. The telogen is the stationary phase, which lasts about 3 months for human hair. During this phase, the hair follicles are completely stationary and the eyelashes are completely formed. Compared to anagen hair, telogen hair (flagellum) can be pulled out relatively easily and tends to fall off.
毛包幹細胞(FSC)及びメラノサイト幹細胞(MSC)は、毛包の***領域内に存在し、かつ各
々、毛の再生及び毛の色素沈着に係わっている。多くの要因が、毛包幹細胞及び/又はメ
ラノサイト幹細胞の幹細胞性を脅かすことはわかっている。例えばこれらの幹細胞は、加
齢、環境のオキシダント、毛包に関連した障害、化学療法、又は対象の遺伝子構造の作用
下で、それらの幹細胞性を失い得る。幹細胞性の喪失は、それらの後代の生活環に影響を
及ぼし、これは次に脱毛症又は毛髪色素脱失を引き起こし得る。
Hair follicle stem cells (FSCs) and melanocyte stem cells (MSCs) are present in the raised area of the hair follicle and are involved in hair regeneration and hair pigmentation, respectively. Many factors are known to threaten the stemness of hair follicle stem cells and / or melanocyte stem cells. For example, these stem cells may lose their stemness under the action of aging, environmental oxidants, hair follicle related disorders, chemotherapy, or gene structure of interest. Loss of stemness affects the life cycle of their offspring, which in turn can cause alopecia or depigmentation of the hair.
色素上皮由来因子(PEDF)は、抗血管新生機能、抗腫瘍形成機能、及び神経栄養機能を有
する、多機能の分泌タンパク質である。ヒトPEDFタンパク質(配列番号:11)は、サイズが
およそ50kDa、長さが418アミノ酸の分泌タンパク質である。PEDFの34-mer断片(残基44〜7
7)及び44-mer断片(残基78〜121；配列番号:10)は、それぞれ、抗血管新生特性及び神経栄
養特性を有することが確定されている。
Dye epithelium derived factor (PEDF) is a multifunctional secreted protein with anti-angiogenic, anti-tumorigenic and neurotrophic functions. The human PEDF protein (SEQ ID NO: 11) is a secreted protein approximately 50 kDa in size and 418 amino acids in length. PEDF 34-mer fragment (
7) and 44-mer fragments (residues 78 to 121; SEQ ID NO: 10) have been determined to have anti-angiogenic and neurotrophic properties, respectively.
本開示は、少なくとも、44-mer PEDF由来の合成ペプチドは、様々な機序を介して毛包
を保護することができるという知見を基にしている。例えばこの合成ペプチドは、毛包の
縮小を阻害し、メラノサイト幹細胞のメラニン形成細胞への未熟な分化を防止し、及びメ
ラニンの凝集を減少する。いずれかの理論に結びつけられるものではないが、これらの保
護的機序は、毛包における幹細胞の幹細胞性を維持する上で、及び/又はそのような幹細
胞の後代細胞をそれらの正常な生活環に保持する上で助けとなり、その結果毛包は、異常
な脱落傾向を減らし、及び/又はそれらの当初の色を保存し、健康で正常な毛を生じると
考えられている。本発明の別の独創的特徴は、この合成ペプチドが、完全長PEDFよりもか
なり短い(20〜44アミノ酸残基)ので、高い製造コスト、低い生物学的利用能、及び不十分
な薬物動態を含む従来のタンパク質薬物の臨床使用に伴う制限を克服することにある。従
って、本合成ペプチドは、脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療するために有用である。
The present disclosure is based at least on the finding that synthetic peptides derived from 44-mer PEDF can protect hair follicles through various mechanisms. For example, this synthetic peptide inhibits hair follicle shrinkage, prevents immature differentiation of melanocyte stem cells into melanocytes, and reduces melanin aggregation. While not being bound to any theory, these protective mechanisms may be used to maintain the stemness of stem cells in the hair follicle and / or the progeny of such stem cells in their normal life cycle. It is believed that the hair follicles help reduce the tendency for abnormal shedding and / or preserve their original color, resulting in healthy and normal hair. Another unique feature of the present invention is that this synthetic peptide is considerably shorter (20-44 amino acid residues) than full-length PEDF, thus resulting in high production costs, low bioavailability, and poor pharmacokinetics. And to overcome the limitations associated with the clinical use of conventional protein drugs. Thus, the present synthetic peptides are useful for treating alopecia and / or hair loss.
従って、一態様において、本開示は、対象において脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治
療するための合成ペプチドに関する。
Thus, in one aspect, the present disclosure relates to synthetic peptides for treating alopecia and / or hair loss in a subject.
本開示の実施態様によれば、この合成ペプチドは、長さが20〜44アミノ酸残基であり、
かつ、
プチドは、配列番号:10とのアミノ酸配列同一性が、約80、81、82、83、84、85、86、87
、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、又は100％であり得る。また、こ
の合成ペプチドは、配列番号:10の残基16〜35と少なくとも90％同一である少なくとも20
個の連続的な残基を含む。具体的には、この20個の連続的なアミノ酸残基は、配列番号:1
0の残基16〜35とのアミノ酸配列同一性が、約90、91、92、93、94、95、96、97、98、99
、又は100％であり得る。
According to an embodiment of the present disclosure, the synthetic peptide is 20-44 amino acid residues in length,
And,
, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, or 100%. Also, the synthetic peptide is at least 20% at least 90% identical to residues 16 to 35 of SEQ ID NO: 10
Contains two consecutive residues. Specifically, the 20 consecutive amino acid residues have SEQ ID NO: 1
Amino acid sequence identity with 0 residues 16 to 35 is approximately 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99
Or 100%.
一実施態様において、この合成ペプチドは、44-merである。同時係属出願US 13/428,99
6及びTW 100138168(それらの全体を参照により本明細書に組み込む)に開示されているも
のなどの、本発明者らによって実施された以前の実験、及び、以下に提供される実験は、
この44-merに由来するいくつかの短い合成のPEDFペプチドが、対象における脱毛症及び/
又は毛髪色素脱失を治療することが可能であることを明らかにしている。具体的には、台
湾特許出願番号第100138168号は、PEDF 44-merは、化学療法又はストレスにより誘導され
た脱毛症及び毛髪色素脱失の予防及び/又は改善に加え、アンドロゲン性脱毛症の予防及
び/又は改善に有効であることを開示している。
In one embodiment, the synthetic peptide is 44-mer. Co-pending application US 13/428, 99
Previous experiments carried out by the inventors, such as those disclosed in US Pat. No. 6, and TW 100138168 (incorporated herein by reference in its entirety), and the experiments provided below
Several short synthetic PEDF peptides derived from this 44-mer are associated with alopecia and / or in the subject.
Or it has become clear that it is possible to treat hair loss. Specifically, Taiwan Patent Application No. 100138168 shows that PEDF 44-mer prevents and / or amelioration of androgenic alopecia in addition to the prevention and / or amelioration of chemotherapy- or stress-induced alopecia and depigmentation of hair. It is disclosed that it is effective for improvement and / or improvement.
例えば、先願と本出願との両方において開示されている実験に基づくと、
療するのに有効である。この39-merペプチドは、ヒトPEDFの残基83〜121に相当し、従っ
て既知のPEDF 44-mer(PEDFの残基78〜121に対応)に由来した短い変種である。上で提供さ
れた2つの所与の配列間の配列同一性の割合を推定するためのプロセスによれば、この39-
merは、44-merとのアミノ酸配列同一性が100％であり、39-merの第11〜第30アミノ酸残基
は、44-merのアミノ酸残基16〜35とのアミノ酸配列同一性が100％である。
For example, based on the experiments disclosed in both the prior application and the present application:
The mer is 100% in amino acid sequence identity with the 44-mer, and the 11th to 30th amino acid residues of the 39-mer are 100% in amino acid sequence identity with the amino acid residues 16-35 of the 44-mer. %.
別の実施例において、先願と本出願の両方において開示されている実験に基づくと、
療するのに有効である。この34-merペプチドは、ヒトPEDFの残基88〜121に相当している
。この34-merは、44-merとのアミノ酸配列同一性が100％であり、34-merの第6〜第25アミ
ノ酸残基は、44-merのアミノ酸残基16〜35とのアミノ酸配列同一性が100％である。
In another embodiment, based on the experiments disclosed in both the prior application and the present application:
さらに、以下の様々な実施例によれば、
又は改善するのに有効であることが確認されている。この29-merはまた、先願と本出願の
両方において開示されている実験に基づくと、化学療法又はストレスにより引き起こされ
た脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療するのに有効であると考えられる。この29-merペ
プチドは、44-merに対する100％アミノ酸配列同一性を有するヒトPEDFの残基93〜121に相
当する。また、29-merの第1〜第20アミノ酸残基は、44-merのアミノ酸残基16〜35とのア
ミノ酸配列同一性が100％である。
Furthermore, according to the various embodiments below,
Or it is confirmed that it is effective for improving. The 29-mer is also effective for treating alopecia and / or hair depigmentation caused by chemotherapy or stress, based on the experiments disclosed in both the prior application and the present application. Conceivable. This 29-mer peptide corresponds to residues 93 to 121 of human PEDF with 100% amino acid sequence identity to the 44-mer. Also, the 29th-mer first to twentieth amino acid residues have 100% amino acid sequence identity with the 44-mer amino acid residues 16-35.
いくつかの実施例では、24-merが、対象におけるアンドロゲン性脱毛症を予防及び/又
は改善するのに有効であることが確認されている。また、24-merは、先願と本出願の両方
において開示されている実験に基づくと、化学療法又はストレスにより引き起こされた脱
毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療するのに有効であると考えられる。この24-merは、ヒ
トPEDFの残基93〜116に相当する
、その最初の20個のアミノ酸残基は、44-merのアミノ酸残基16〜35とのアミノ酸配列同一
性が100％である。
In some embodiments, it has been determined that a 24-mer is effective in preventing and / or ameliorating androgenic alopecia in a subject. Also, based on the experiments disclosed in both the prior application and the present application, the 24-mer is said to be effective in treating alopecia and / or hair depigmentation caused by chemotherapy or stress. Conceivable. This 24-mer corresponds to residues 93 to 116 of human PEDF
他の実施例では、20-merが、対象におけるアンドロゲン性脱毛症を予防及び/又は改善
することができることが確立されている。また、20-merは、先願と本出願の両方において
開示されている実験に基づくと、化学療法又はストレスにより引き起こされた脱毛症及び
/又は毛髪色素脱失を治療するのに有効であると考えられる。この20-merは、ヒトPEDFの
残基93〜112に相当する
％アミノ酸配列同一性)であり、かつ44-merとのアミノ酸配列同一性が100％である。
In another embodiment, it has been established that 20-mers can prevent and / or ameliorate androgenetic alopecia in a subject. Also, based on the experiments disclosed in both the prior application and the present application, the 20-mer is alopecia caused by chemotherapy or stress and
It is believed to be effective in treating hair loss. This 20-mer corresponds to residues 93 to 112 of human PEDF
% Amino acid sequence identity) and 100% amino acid sequence identity with the 44-mer.
先願と本出願との両方において開示されている実験に基づくと、マウスPEDFに由来する
2種の合成ペプチドもまた、対象におけるアンドロゲン性脱毛症、若しくは化学療法又は
ストレスにより引き起こされた脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を予防及び/又は改善するこ
とができる。最初のマウス由来ペプチドは、本開示では、「Mo 29-mer」と呼ばれる。Mo
29-merは、
ミノ酸残基の、44-merの16〜35アミノ酸残基とのアミノ酸配列同一性が90％である。別の
マウス由来のペプチド、Mo 20-merは、
ノ酸配列同一性が90％である。
Based on the experiments disclosed in both the prior application and the present application, it is derived from mouse PEDF
Two synthetic peptides can also prevent and / or ameliorate androgenetic alopecia or alopecia caused by chemotherapy or stress and / or depigmentation of hair in a subject. The first mouse-derived peptide is referred to in the present disclosure as "Mo 29-mer". Mo
The 29-mer is
任意に、この合成ペプチドは、配列番号:10の残基16〜19と同一である4つの連続する残
基を含む。配列番号:10の残基16〜19(すなわちSLGA)は、短いPEDFペプチドの生物学的機
能の維持において重要な役割を果たすと考えられている。例えば、以下で提供する様々な
実施例によれば、SLGA残基を有しない18-merペプチド
との両方において開示されている実験に基づくと、SLGA残基を伴わない25-merペプチド
れる。
Optionally, the synthetic peptide comprises four consecutive residues which are identical to residues 16-19 of SEQ ID NO: 10. Residues 16-19 of SEQ ID NO: 10 (ie, SLGA) are believed to play an important role in maintaining the biological function of the short PEDF peptide. For example, according to various embodiments provided below, an 18-mer peptide having no SLGA residue
本発明の合成ペプチドは、α-アミノ基のt-BOC又はFMOC保護などの一般に使用される方
法によって合成することができる。どちらの方法も、ペプチドのC末端から開始する、各
ステップで単独のアミノ酸が付加される段階的合成に関与している。本発明のペプチドは
、周知の固相ペプチド合成方法によって合成することもできる。
The synthetic peptides of the invention can be synthesized by commonly used methods such as t-BOC or FMOC protection of α-amino groups. Both methods involve step-wise synthesis starting at the C-terminus of the peptide, where a single amino acid is added at each step. The peptides of the present invention can also be synthesized by known solid phase peptide synthesis methods.
39-merに関する保存的変形を伴う他の合成ペプチドも考えられる。用語「保存的変形」
は、本明細書で使用する場合、アミノ酸残基の、別の生物学的に類似の残基による置き換
えを示す。保存的変形の例としては、イソロイシン、バリン、ロイシン、若しくはメチオ
ニンなどのある疎水性残基への、別の疎水性残基からの置換、又は、ある極性残基への、
別の極性残基からの置換、例えば、リジンからアルギニンへの、アスパラギン酸からグル
タミン酸への、アスパラギンからグルタミンへの置換などが挙げられる。用語「保存的変
形」はまた、置換されたポリペプチドに対して産生される抗体が、置換されていないポリ
ペプチドとも免疫反応するという条件で、置換されていない親アミノ酸の代わりの置換さ
れたアミノ酸の使用も含む。
Other synthetic peptides with conservative variations for the 39-mer are also contemplated. Term "conservative deformation"
As used herein, denotes the replacement of an amino acid residue by another, biologically similar residue. Examples of conservative variations include substitution of one hydrophobic residue such as isoleucine, valine, leucine or methionine from another hydrophobic residue, or one polar residue,
Substitutions from other polar residues are included, such as, for example, a substitution of lysine to arginine, aspartic acid to glutamic acid, or asparagine to glutamine. The term "conservative variant" also refers to a substituted amino acid instead of the parent amino acid which is not substituted, provided that the antibody raised against the substituted polypeptide also immunoreacts with the non-substituted polypeptide. Including the use of
本開示の様々な実施態様によると、脱毛症は、アナゲン脱毛(例えば、化学療法又は放
射線療法により引き起こされるもの)、テロゲン脱毛(例えば、ストレス、偏った食事、薬
物療法、又は感染症により引き起こされるもの)、又はアンドロゲン性脱毛症であること
ができる。
According to various embodiments of the present disclosure, alopecia is caused by anagen hair loss (e.g., caused by chemotherapy or radiation therapy), telogen hair loss (e.g., stress, unbalanced diet, drug therapy, or infection) Or androgenic alopecia.
いくつかの実施態様において、毛髪色素脱失は、化学療法又は放射線療法により引き起
こされることがある。いくつかの他の実施態様において、毛髪色素脱失は、ストレス又は
加齢により引き起こされることがある。
In some embodiments, hair depigmentation may be caused by chemotherapy or radiation therapy. In some other embodiments, hair depigmentation may be caused by stress or aging.
本開示の様々な実施態様により、対象は、ヒトを含む哺乳類として分類される任意の動
物であってよい。
According to various embodiments of the present disclosure, the subject may be any animal classified as a mammal, including a human.
前述の実施態様による合成ペプチドは、対象における脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を
治療するための局所性医薬組成物に製剤化することができ、これは、本開示の他の態様に
含まれる。
The synthetic peptides according to the foregoing embodiments can be formulated into a topical pharmaceutical composition for treating alopecia and / or hair loss in a subject, which is included in other aspects of the present disclosure .
本開示の一実施態様によれば、局所性医薬組成物は、前述の態様/実施態様のいずれか
による合成ペプチドを含み、かつ、該合成ペプチドは、対象における脱毛症及び/又は毛
髪色素脱失を治療するのに十分に有効な量で存在する。該医薬組成物はまた、合成ペプチ
ドのための、医薬として許容し得る賦形剤も含む。
According to one embodiment of the present disclosure, the topical pharmaceutical composition comprises a synthetic peptide according to any of the above aspects / embodiments, and said synthetic peptide is alopecia and / or depigmentation in a subject In an amount effective to treat the The pharmaceutical composition also comprises a pharmaceutically acceptable excipient for synthetic peptides.
「レミントン薬科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)」第17版、Alfonoso R. G
ennaro編集、Mack Publishing社、ペンシルバニア州、Easton (1985)などに記載されたよ
うな、許容し得る医薬的手順に従い、医薬組成物が調製される。
"Remington's Pharmaceutical Sciences" 17th Edition, Alfonoso R. G
Pharmaceutical compositions are prepared according to acceptable pharmaceutical procedures such as those described in ennaro, Mack Publishing, Easton, PA (1985), and the like.
合成ペプチドと共に使用されることとなる医薬として許容し得る賦形剤の選択は、基本
的には、局所性医薬組成物が投与されることとなる方式によって決定される。本開示の任
意の一実施態様によれば、局所性医薬組成物は、対象の生物学的表面(例えば、皮膚、頭
皮、又は毛髪)上へ、塗り広げるか、塗沫するか、マッサージするか、噴霧するか、又は
その他塗布することができ、その結果、合成ペプチドは、毛包の能動吸収(付属器吸収性
経路)によるか、又は経細胞経路若しくは細胞内経路を通る経真皮送達を介して、標的部
位(毛包など)に到達することができる。
The choice of pharmaceutically acceptable excipient to be used with the synthetic peptide is basically determined by the manner in which the topical pharmaceutical composition is to be administered. According to one optional embodiment of the present disclosure, whether the topical pharmaceutical composition is spread, smeared or massaged onto the biological surface of the subject (e.g. skin, scalp or hair) It can be sprayed, or otherwise applied, so that the synthetic peptide is either by active absorption of the hair follicle (appendant resorbable pathway) or through transdermal delivery through transcellular or intracellular pathways. Can reach a target site (such as a hair follicle).
当該技術分野において周知の多種多様な皮膚科的に許容し得る不活性賦形剤を、使用す
ることができる。典型的不活性賦形剤は、例えば、水、エチルアルコール、ポリビニルピ
ロリドン、プロピレングリコール、鉱油、ステアリルアルコール、軟膏基剤、及びゲル生
成物質である。
A wide variety of dermatologically acceptable inert excipients well known in the art can be used. Typical inert excipients are, for example, water, ethyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, propylene glycol, mineral oil, stearyl alcohol, ointment bases and gel formers.
任意に、本発明の医薬組成物はまた、当該技術分野において周知の様々な医薬として-(
特に皮膚科において-)許容し得る添加剤を含むことができる。該添加剤は、乾燥剤、抗掻
痒剤、消泡剤、緩衝剤、中和剤、pH調整剤、着色剤、脱色剤、緩和剤、乳化剤、エマルシ
ョン安定剤、粘度上昇剤、保湿剤、着香剤、保存剤、抗酸化剤、化学安定剤、増粘剤、硬
化剤、又は懸濁化剤を含むが、これらに限定されるものではない。
Optionally, the pharmaceutical composition of the present invention is also used as various medicaments well known in the art-(
Especially in dermatology-) acceptable additives can be included. The additive includes a desiccant, an antipruritic agent, an antifoaming agent, a buffer, a neutralizing agent, a pH adjuster, a coloring agent, a decolorizing agent, an emollient, an emulsifier, an emulsion stabilizer, a viscosity raising agent, a moisturizing agent, It includes, but is not limited to, fragrances, preservatives, antioxidants, chemical stabilizers, thickeners, curing agents, or suspending agents.
本開示の様々な実施態様において、局所性医薬組成物は、液剤、噴霧剤、エアゾール剤
、泡剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏、ゲル剤、又は貼付剤など、様々な剤形で製剤
化されてよい。
In various embodiments of the present disclosure, the topical pharmaceutical composition is formulated in various dosage forms, such as solutions, sprays, aerosols, foams, creams, lotions, ointments, gels, or patches. May be done.
本開示の任意の実施態様によると、この合成ペプチドは、約0.1〜100μM、及び好まし
くは約1〜25μMの量で、医薬組成物中に存在する。例えば、合成ペプチドの濃度は、約0.
1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.3、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20
、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、又は100μMであって
よい。具体的には、マウス(体重約20g)について以下の試験実施例において使用される濃
度は、約25μMである。当業者は、本明細書に提供される動物投与量を基に本合成ペプチ
ド又は医薬組成物について、ヒト相当量(HEQ)を算出することができる。例えば、米国食
品医薬品局(FDA)は、「健常成人志願者の治療に関する初期臨床試験における安全な最大
開始用量の算出(Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Tri
als for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers)」と題する産業用指針を公表して
いる。
According to any embodiment of the present disclosure, the synthetic peptide is present in the pharmaceutical composition in an amount of about 0.1 to 100 μM, and preferably about 1 to 25 μM. For example, the concentration of synthetic peptide is about 0.
1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.3, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20
, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, or 100 μM. Specifically, the concentration used in the following test examples for mice (about 20 g body weight) is about 25 μM. One skilled in the art can calculate the human equivalent (HEQ) for the present synthetic peptides or pharmaceutical compositions based on the animal dosages provided herein. For example, the US Food and Drug Administration (FDA) states that “the safest starting dose in initial clinical trials for the treatment of healthy adult volunteers is calculated.
It publishes the industrial guidelines entitled “als for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers”.
任意に、この合成ペプチドは、治療のより延長された治療作用を確実にするために、持
続放出剤形に製剤化されてよい。例えば、合成ペプチドは、リポソーム、ミクロスフェア
、又はナノソームなどのビヒクルにより最初に封入され、次に所望の剤形へ製剤化されて
よい。これらの小胞-形成ビヒクル(例えば、リポソーム)の一部はまた、本合成ペプチド
又は医薬組成物の送達速度を促進する利点がある。
Optionally, the synthetic peptide may be formulated into a sustained release dosage form to ensure a more prolonged therapeutic effect of treatment. For example, synthetic peptides may be first encapsulated by a vehicle such as liposomes, microspheres or nanosomes and then formulated into the desired dosage form. Some of these vesicle-forming vehicles (eg, liposomes) also have the advantage of facilitating the delivery rate of the present synthetic peptides or pharmaceutical compositions.
更に任意に、この合成ペプチドは、コーティング材料へと製剤化され、これはその後コ
ーティングされるか、含浸されるか、又はそうでなければ基体の表面上若しくは細孔中に
保持され、これにより貼付剤などを製造することができる。この基体は、少なくとも1種
の天然の材料、少なくとも1種の合成材料、又は両方の組合せから調製されてよい。例え
ば天然の材料は、コラーゲン、ヒアルロン酸、アルギン酸塩、若しくはキトサン、又はそ
れらの誘導体であることができ；他方で、合成材料は、ポリウレタン、ポリグリコール酸
、若しくはポリビニルピロリドン、又はそれらの誘導体であることができる。該コーティ
ング材料及び/又は基体は、好適な生体接着性を有し、結果的にこの貼付剤は、対象の生
物学的表面(例えば頭皮)に付着することができ、かつ貼付剤が除去された場合に、毛髪成
長に対し有害作用を有さないであろう。
Further optionally, the synthetic peptide is formulated into a coating material which is then coated, impregnated or otherwise retained on the surface of the substrate or in the pores, thereby affixing Can be produced. The substrate may be prepared from at least one natural material, at least one synthetic material, or a combination of both. For example, the natural material can be collagen, hyaluronic acid, alginate, or chitosan, or derivatives thereof; on the other hand, the synthetic material is polyurethane, polyglycolic acid, or polyvinylpyrrolidone, or derivatives thereof be able to. The coating material and / or the substrate have suitable bioadhesive properties such that the patch can be attached to the biological surface of the subject (eg scalp) and the patch removed In some cases, it will have no detrimental effect on hair growth.
また別の態様において、本発明は、対象における脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療
する方法に関する。本対象は、ヒトを含む哺乳類として分類される任意の動物であってよ
い。
In yet another aspect, the invention relates to a method of treating alopecia and / or hair loss in a subject. The subject may be any animal classified as a mammal, including humans.
一実施態様において、本方法は、前述の態様/実施態様のいずれかによる合成ペプチド
の有効量を、対象へ投与することを含む。本開示の様々な実施態様により、合成ペプチド
は、局所的に又は全身的に送達され得る。好ましくは、合成ペプチドは、局所的に投与さ
れる。より好ましくは、合成ペプチドは、対象の生物学的表面(例えば皮膚、頭皮、又は
毛髪)に、局所的に投与され、結果的に合成ペプチドは、標的部位(例えば毛包)に到達し
、毛髪成長及び/又は毛髪色素沈着を促進する。
In one embodiment, the method comprises administering to the subject an effective amount of a synthetic peptide according to any of the above aspects / embodiments. According to various embodiments of the present disclosure, synthetic peptides can be delivered locally or systemically. Preferably, the synthetic peptide is administered locally. More preferably, the synthetic peptide is administered topically to the biological surface of the subject (e.g. skin, scalp or hair) such that the synthetic peptide reaches the target site (e.g. hair follicle) and the hair Promotes growth and / or hair pigmentation.
任意の実施態様により、この合成ペプチドは、本開示の前述の態様/実施態様による局
所性医薬組成物へ製剤化される。一例において、本局所性医薬組成物は、対象の生物学的
表面(例えば皮膚、頭皮、又は毛髪)に、塗布されてよい。
According to any embodiment, the synthetic peptide is formulated into a topical pharmaceutical composition according to the above aspects / embodiments of the present disclosure. In one example, the topical pharmaceutical composition may be applied to a biological surface of the subject (eg, skin, scalp or hair).
加えて、本開示の実施態様による合成ペプチド又は局所性医薬組成物は、特定の条件(
例えば、特定の湿度又は温度)下で投与することができる。例えば、より湿った暖かい環
境下での投与は、標的部位による合成ペプチドの吸着を促進することができる。
In addition, synthetic peptides or topical pharmaceutical compositions according to embodiments of the present disclosure may be
For example, it can be administered under specific humidity or temperature). For example, administration in a damper, warmer environment can facilitate adsorption of the synthetic peptide by the target site.
いくつかの実施態様により、対象は、異常な毛髪喪失を引き起こす、アナゲン脱毛、テ
ロゲン脱毛、又はアンドロゲン性脱毛症などの脱毛症に罹患していることがある。いくつ
かの他の実施態様により、対象は、化学療法、放射線療法、酸化的ストレス、又は加齢に
より引き起こされる毛髪色素脱失に罹患していることがある。同じく、対象は、対象の遺
伝子構造に起因した脱毛症及び/又は毛髪色素脱失に罹患していることがある。
In some embodiments, the subject may be suffering from alopecia, such as anagen hair loss, telogenic hair loss, or androgenic alopecia, which causes abnormal hair loss. According to some other embodiments, the subject may be suffering from hair loss due to chemotherapy, radiation therapy, oxidative stress, or aging. Also, the subject may be suffering from alopecia and / or depigmentation of hair due to the genetic structure of the subject.
本発明のある種の態様を明らかにするために、また、当分野の技術者が本発明を実施す
るのを助けるために、以下の実施例を提供する。これらの実施例は、決して、本発明の範
囲をいかなる方法によっても制限するものとみなされるべきではない。さらなる詳説がな
くとも、当分野の技術者は、本明細書の説明に基づいて、本発明を最大限に利用すること
ができると考えられる。本明細書に引用した全ての刊行物の全体を、参照により本明細書
に組み込む。
To illustrate certain aspects of the present invention and to assist one of ordinary skill in the art in practicing the present invention, the following examples are provided. These examples should in no way be considered as limiting the scope of the present invention in any way. Without further elaboration, it is believed that one skilled in the art can, based on the description herein, utilize the present invention to its fullest extent. The entire contents of all the publications cited herein are incorporated herein by reference.
（実施例）
（材料及び方法）
(Example)
(Materials and Methods)
（材料） (material)
ダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)、ウシ胎仔血清(FBS)、及び0.25％トリプシンは、I
nvitrogen社(カリフォルニア州、Carlsbad)から購入した。ジヒドロテストステロン(DHT)
、エチルアルコール、1-オレオイル-rac-グリセロール、軽質鉱油、ヒドロキシプロピル
メチルセルロース、ジメチルスルホキシド(DMSO)、インスリン、ヒドロコルチゾン、ウシ
血清アルブミン(BSA)、5-ブロモ-2'-デオキシウリジン(BrdU)、Hoechst 33258色素、及び
Hoechst 33342色素は全て、Sigma-Aldrich社(ミズーリ州、St.Louis)から得た。抗-BrdU
抗体は、GeneTex社(台湾、台北)から得た。抗-c-kit抗体(No. 3074)は、Cell Signaling
Technology社(No.3074；米国、マサチューセッツ州、Beverley)から得た。抗-チロシナー
ゼ抗体(No.sc-7833)及び全ての蛍光色素-結合型二次抗体は、Santa Cruz Biotechnology
社(カリフォルニア州、Santa Cruz)から購入した。ヘマトキシリン及びエオシン(H&E)色
素は、Merck社(米国、ニュージャージー州、Rayway)から購入した。
Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM), fetal bovine serum (FBS), and 0.25% trypsin were
Purchased from nvitrogen (Carlsbad, California). Dihydrotestosterone (DHT)
Ethyl alcohol, 1-oleoyl-rac-glycerol, light mineral oil, hydroxypropyl methylcellulose, dimethyl sulfoxide (DMSO), insulin, hydrocortisone, bovine serum albumin (BSA), 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU), Hoechst 33258 dye, and
All Hoechst 33342 dyes were obtained from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Anti-BrdU
Antibodies were obtained from GeneTex (Taipei, Taiwan). Anti-c-kit antibody (No. 3074) is cell signaling
Technology (No. 3074; Beverley, Mass., USA). Anti-tyrosinase antibody (No. sc-7833) and all fluorochrome-conjugated secondary antibodies are available from Santa Cruz Biotechnology
Company (Santa Cruz, CA). Hematoxylin and eosin (H & E) dyes were purchased from Merck (Rayway, NJ).
FITC-結合型29-mer及び他の短い合成PEDFペプチド(44-mer(配列番号:10)、29-mer(配列
番号:3)、24-mer(配列番号:5)、20-mer(配列番号:6)、18-mer(配列番号:7)、及びMo 20-m
er(配列番号:9)を含めて)を合成し、NH2末端でのアセチル化、及びCOOH末端でのアミド化
により修飾した。修飾されたペプチドを引き続き、質量分析(＞95％純度)によって特徴付
けた(GenScript社(ニュージャージー州、Piscataway))。
FITC-conjugated 29-mer and other short synthetic PEDF peptides (44-mer (SEQ ID NO: 10), 29-mer (SEQ ID NO: 3), 24-mer (SEQ ID NO: 5), 20-mer (sequences) Number: 6), 18-mer (SEQ ID NO: 7), and Mo 20-m
The er (including SEQ ID NO: 9) was synthesized and modified by acetylation at the NH 2 end and amidation at the COOH end. The modified peptides were subsequently characterized by mass spectrometry (> 95% purity) (GenScript, Piscataway, NJ).
（動物） (animal)
本開示の実施態様において使用される全ての動物は、温度コントロール(24〜25℃)及び
12:12明暗周期下で、動物飼育室で飼育した。標準の実験用飼料及び水道水は、自由に摂
取可能であった。実験手順は、Mackay Memorial Hospital Review Board(台湾(R.O.C.)、
New Taipei City)によって承認され、国内の動物福祉規定に従って実施した。
All animals used in embodiments of the present disclosure have a temperature control (24-25.degree. C.) and
The animals were bred in an animal breeding room under a 12:12 light-dark cycle. Standard laboratory feed and tap water were freely available. The experimental procedure is Mackay Memorial Hospital Review Board (Taiwan (ROC),
Approved by New Taipei City) and implemented according to domestic animal welfare regulations.
（局所性軟膏又はゲル製剤） (Topical ointment or gel formulation)
各PEDF由来の短い合成ペプチド(FITC-結合型29-mer、44-mer、29-mer、24-mer、20-mer
、18-mer、又はMo 20-mer;以下、PEDFペプチド)を、ストック液(5mM)として、DMSO中に再
構成し、更なる使用のために-20℃で貯蔵した。
Short synthetic peptides from each PEDF (FITC-conjugated 29-mer, 44-mer, 29-mer, 24-mer, 20-mer
18-mer or Mo 20-mer; hereinafter PEDF peptide) was reconstituted in DMSO as a stock solution (5 mM) and stored at -20 ° C. for further use.
使用前に、44-merを含有するストック液を、試験希釈物へ調製し、次にこれらを、硫酸
ネオマイシン5mg/g及びバシトラシン12.5mg/gを含有する抗生物質軟膏と混合し、44-mer
25μMを含有する抗生物質軟膏を得た。他のPEDFペプチドについては、5mM PEDFペプチド
ストック液5μlを、エチルアルコール(蒸留水中30％w/w)中に徐々に溶解し、その後1-オ
レオイル-rac-グリセロール(1％w/w、皮膚浸透促進剤)及び軽質鉱油(1％w/w)を、徐々に
添加した。この溶液を最後に、ヒドロキシプロピルメチルセルロース(5％w/w)を最終容積
1mlまで添加することにより、ゲル化した。ペプチド製剤に対応するDMSOビヒクルを、イ
ンビボ比較を目的として調製した。またFITC-29-merも、皮膚の表面に塗布するために、
同じ製剤中に溶解し、FITC-29-merの毛包分布を決定した。
Before use, stock solutions containing 44-mers are prepared into test dilutions, which are then mixed with an antibiotic ointment containing 5 mg / g neomycin sulfate and 12.5 mg / g bacitracin,
An antibiotic ointment containing 25 μM was obtained. For other PEDF peptides, slowly dissolve 5 μl of 5 mM PEDF peptide stock solution in ethyl alcohol (30% w / w in distilled water) and then 1-oleoyl-rac-glycerol (1% w / w, skin) Penetration enhancers) and light mineral oil (1% w / w) were added gradually. Finally, hydroxypropyl methylcellulose (5% w / w)
It gelled by addition to 1 ml. DMSO vehicles corresponding to peptide formulations were prepared for in vivo comparison. FITC-29-mer is also applied to the surface of the skin
It was dissolved in the same formulation and the hair follicle distribution of FITC-29-mer was determined.
局所治療のために、PEDFペプチド25μMを含有する軟膏又はゲル剤350mgを、マウス別に
背側皮膚に優しく塗り広げた。
For topical treatment, 350 mg of an ointment or gel containing 25 μM PEDF peptide was gently spread on the dorsal skin separately for each mouse.
(組織診断、免疫組織化学、及び定量化) (Tissue diagnosis, immunohistochemistry, and quantification)
毛包を貫通する縦方向の切片を得るために、マウスの背中の皮膚を、脊椎ラインと平行
して採取した。背側皮膚は、4％パラホルムアルデヒドで固定し、パラフィンブロック中
に包埋し、縦方向の切片を得た。組織を、5-μm切片にスライスした。使用前に、固定さ
れた試料を、キシレン中で脱パラフィン処理し、段階的な一連のエタノール中で再水和し
た。H&E色素を使用して、一般的な組織診断を実施した。デジタル顕微鏡写真(Zeiss落射
蛍光顕微鏡；Jena、独国)を、固定倍率100×で、代表的領域から撮影した。
The skin on the back of the mouse was taken parallel to the spine line in order to obtain longitudinal sections through the hair follicle. The dorsal skin was fixed with 4% paraformaldehyde and embedded in paraffin blocks to obtain longitudinal sections. Tissues were sliced into 5-μm sections. Before use, the fixed samples were deparaffinized in xylene and rehydrated in a graded series of ethanol. General histology was performed using H & E dyes. Digital micrographs (Zeiss epifluorescence microscope; Jena, Germany) were taken from a representative area at a fixed magnification of 100 ×.
HF形態形成の分析のために、動物を、脱毛後15日目に安楽死させた。形態形成の異なる
段階での毛包の割合を、Muller-Roverらの文献(Journal of Investigative Dermatology
(2001) 117, 3-15)に説明された、容認されたマウスのHF形態学的判定基準の基本を基に
評価した。6〜10匹のDHT-処置した動物から得た少なくとも24個の縦方向に切断したHF切
片を、分析した。DHT-処置した皮膚におけるPEDFペプチド-依存性のカタゲンの遅延を明
らかにするために、単独の代表的皮膚切片の5-to-7の連続した顕微鏡視野を撮影し、コン
ピュータ-支援画像分析装置(Adobe Photoshop CS3 10.0)を用いて統合した。
Animals were euthanized 15 days after hair removal for analysis of HF morphogenesis. The percentage of hair follicles at different stages of morphogenesis is described by Muller-Rover et al. (Journal of Investigative Dermatology).
(2001) 117, 3-15), it was evaluated based on the basis of HF morphological criteria of accepted mice. At least 24 longitudinally cut HF sections obtained from 6-10 DHT-treated animals were analyzed. A 5-to-7 continuous microscopic field of view of a single representative skin section was taken to reveal PEDF peptide-dependent catagen delays in DHT-treated skin and a computer-assisted image analyzer ( Integrated using Adobe Photoshop CS3 10.0).
免疫染色のために、脱パラフィン処理した組織切片を、10％ヤギ血清で1時間ブロッキ
ングした。二重染色は、c-kit(1:100希釈；赤色)及びチロシナーゼ(1:100希釈)に対する
一次抗体を用い、37℃で2時間行い、その後ローダミン-結合型ヤギ抗-ウサギIgG抗体(1:5
00希釈)と共に室温で1時間インキュベーションした後、ヘマトキシリン(青色)で約7分間
対比染色を行った。
For immunostaining, deparaffinized tissue sections were blocked with 10% goat serum for 1 hour. Double staining is performed at 37 ° C. for 2 hours with primary antibodies against c-kit (1: 100 dilution; red) and tyrosinase (1: 100 dilution), followed by Rhodamine-conjugated goat anti-rabbit IgG antibody (1 :Five
After incubation for 1 hour at room temperature with (00 dilution), counterstaining was performed for about 7 minutes with hematoxylin (blue).
洞毛毛包凍結切片を、PBS中で3回洗浄した。ホルマリン固定し、パラフィン-包埋した
皮膚標本を、キシレン中で脱パラフィン処理し、段階的な一連のエタノール中で再水和し
た。その後切片を、TdT-媒介型dUTPニック末端標識(TUNEL)-ベースキット(Roche Molecul
ar Biochemicals社、インディアナ州、Indianapolis)により製造業者の指示に従い染色し
た。細胞数を、Hoechst 33258(青色)による対比染色によりモニタリングした。核を、Zei
ss落射蛍光顕微鏡(400×、10視野／試料)により、3つの異なるチャンバーの10の無作為に
選択した視野において計算した。写真を、Zeissソフトウェアに記録した。
The sinus hair follicle frozen sections were washed 3 times in PBS. Formalin-fixed, paraffin-embedded skin specimens were deparaffinized in xylene and rehydrated in a graded series of ethanol. The sections are then transferred to TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) -based kit (Roche Molecul
Staining was performed by ar Biochemicals, Inc., Indianapolis, IN according to the manufacturer's instructions. Cell numbers were monitored by counter staining with Hoechst 33258 (blue). The nucleus, Zei
ss epifluorescence microscopy (400 ×, 10 fields / sample) was calculated in 10 randomly selected fields of 3 different chambers. Photos were recorded on Zeiss software.
4％パラホルムアルデヒドで固定した後、細胞を、冷メタノールに2分間曝し、その後1N
HClにより室温で1時間処理し、その後免疫蛍光測定を行った。BrdU-標識したDNAを、ポ
リクローナル抗-BrdU抗体及びローダミン-結合型ロバ抗-ウサギIgGにより検出した。
After fixation with 4% paraformaldehyde, the cells are exposed to cold methanol for 2 minutes and then 1N.
Treatment with HCl for 1 hour at room temperature followed by immunofluorescence measurements. BrdU-labeled DNA was detected by polyclonal anti-BrdU antibody and rhodamine-conjugated donkey anti-rabbit IgG.
動物試験のために、BrdUを、ストック液(80mM)として、DMSO中に再構成した。PBS 90μ
lと混合したBrdU 10μlを、マウスへ腹腔内注射し、16時間後に安楽死させた。ホルマリ
ン固定し、パラフィン-包埋した皮膚標本を、キシレン中で脱パラフィン処理し、段階的
な一連のエタノール中で再水和し、その後免疫組織化学評価を行った。洞毛毛包凍結切片
を、PBS中で3回洗浄し、その後1N HClに室温で1時間曝し、引き続き免疫組織化学評価を
行った。
For animal studies, BrdU was reconstituted in DMSO as a stock solution (80 mM). PBS 90μ
10 μl of BrdU mixed with 1 was injected intraperitoneally into mice and euthanized 16 hours later. Formalin-fixed, paraffin-embedded skin specimens were deparaffinized in xylene and rehydrated in a graded series of ethanol prior to immunohistochemical evaluation. Sinus hair follicle frozen sections were washed three times in PBS and then exposed to 1 N HCl for 1 hour at room temperature, followed by immunohistochemical evaluation.
（細胞培養） (Cell culture)
マウス洞毛毛包を、以下のように培養した。簡単に述べると、ひげのパッド(whisker p
ad)を、マウスの顔面から切り出し、PBS及び1％抗生物質混合物を含むペトリ皿に移した
。アナゲンにある各洞毛毛包を、ひげのパッドから単離し、インスリン(10μg/ml)、ヒド
ロコルチゾン(10ng/ml、Sigma-Aldrich社)、1％ペニシリン/ストレプトマイシン抗生物質
混合物及びL-グルタミン(2mM)を補充したDMEM中で、24-ウェル培養プレート(1ウェルにつ
き3洞毛毛包)を使用し培養し、5％CO2中、37℃でインキュベーションした。10〜15のHFを
、各実験群において試験し、かつ3回繰り返した。DMSOに溶解したDHT及びPEDFペプチドを
、インスリン及びヒドロコルチゾンを補充したHF培養物に添加した(DMSOの最終濃度は、0
.05％未満であった)。
Mouse sinus hair follicles were cultured as follows. Briefly, the whisker pad (whisker p
ad) were dissected from the face of the mouse and transferred to a petri dish containing PBS and 1% antibiotic mixture. Each sinus hair follicle in anagen is isolated from the pad of a whisker, insulin (10 μg / ml), hydrocortisone (10 ng / ml, Sigma-Aldrich), 1% penicillin / streptomycin antibiotic mixture and L-glutamine (2 mM) The cells were cultured in 24-well culture plates (3 sinus hair follicles per well) in DMEM supplemented with and incubated at 37 ° C. in 5% CO 2 . Ten to fifteen HFs were tested in each experimental group and repeated three times. DHT and PEDF peptides dissolved in DMSO were added to HF cultures supplemented with insulin and hydrocortisone (final concentration of DMSO is 0
Less than .05%).
不死化したヒトケラチノサイト細胞株(HaCaT)を、10％FBS-DMEM中37℃で培養した。5％
FBS-DMEM中に播種した細胞について、PEDFペプチド及び組み換えヒトTGFβ1(R&D Systems
社)による処理を行った。
The immortalized human keratinocyte cell line (HaCaT) was cultured at 37 ° C. in 10% FBS-DMEM. Five%
For cells seeded in FBS-DMEM, PEDF peptide and recombinant human TGFβ1 (R & D Systems
Company's).
（統計解析） (Statistical analysis)
結果は、平均±平均値の標準誤差(SEM)として表した。統計比較のために、一元配置ANO
VAを使用した。別段の指定がない限り、P＜0.05を、有意であるとみなした。
The results were expressed as mean ± standard error of the mean (SEM). One-way ANO for statistical comparison
I used a VA. P <0.05 was considered to be significant unless otherwise specified.
（実施例1） Example 1
（PEDFペプチドは、化学療法により誘導された脱毛及び色素脱失を予防/改善する） (PEDF peptide prevents / ameliorates chemotherapy-induced hair loss and depigmentation)
正常な黒色毛皮を有する(すなわち、これらは重度にメラニン化された末端毛幹を有す
る)、6週齢の雌C57BL/6マウスを、本実施例に使用した。4回の独立した実験において、合
計80匹のマウスを使用した。C57BL-6マウスは、化学療法により誘導された脱毛症及び毛
髪-色素脱失の研究に広く使用されている。毛髪周期の静止段階(テロゲン)にあるマウス
のみを、これらの研究に使用した。マウスにおける色素生成(メラニン形成)は、専らアナ
ゲンの毛包において生じるので、テロゲンC57BL-6マウスは、それらの背中の皮膚の均一
に桃色がかった色により認めることができる。アナゲンを、脱毛によるテロゲンマウスの
背中の皮膚において誘導した。
Six-week-old female C57BL / 6 mice with normal black fur (ie, they have heavily melaninated terminal hair shafts) were used in this example. A total of 80 mice were used in 4 independent experiments. C57BL-6 mice are widely used to study chemotherapy-induced alopecia and hair-pigmentation loss. Only mice in the stationary phase of the hair cycle (telogen) were used for these studies. Since pigment formation (melanogenesis) in mice occurs exclusively in the anagen hair follicles, telogen C57BL-6 mice can be seen by the uniformly pinkish color of their back skin. Anagen was induced in the skin of the back of telogen mice by hair loss.
アナゲン発育の正確に同じ段階にあるマウスを得るために、背側の毛を、電気バリカン
により慎重に剃毛した。脱毛後の9日間に、桃色(テロゲン皮膚)から灰色(アナゲンVIの初
期段階)への皮膚の色により判定されるように、アナゲン期へ、毛は成長した。
The dorsal hair was carefully shaved with an electric clipper to obtain mice at exactly the same stage of anagen development. Nine days after hair removal, the hair grew to the anagen phase as judged by the color of the skin from pink (telogen skin) to gray (early stage of Anagen VI).
脱毛後9日目に、マウスに、ゾレチル(6mg/kg)及びキシラジン(3mg/kg)の混合液の腹腔
内注射により麻酔をかけた。マウスは、下記実験群に無作為に割り当てた。CYP/ビヒクル
群において、マウスは、シクロホスファミド(CYP、抗癌剤)(150mg/kg)の腹腔内注射を受
け取り、同時に抗生物質軟膏350mgを背中の皮膚に塗布された。CYP/44-mer群において、
マウスは、CYP(150mg/kg)の腹腔内注射を受け取り、同時に44-mer PEDFを含有する抗生物
質軟膏350mgを、背中の皮膚に塗布された。ビヒクル群及び44-mer群においては、マウス
は、CYPの腹腔内注射を受けず、かつ各々、抗生物質軟膏350mg及び44-mer PEDFを含有す
る抗生物質軟膏350mgで処置された。その後、抗生物質軟膏350mg(44-mer PEDFを含む又は
含まない)を、マウスの背中の皮膚へ7日間毎日塗布した。ブランク対照については、マウ
スは、CYP注射でも抗生物質軟膏塗布でも処置しなかった。
Nine days after hair removal, mice were anesthetized by intraperitoneal injection of a mixture of zolethyl (6 mg / kg) and xylazine (3 mg / kg). The mice were randomly assigned to the following experimental groups. In the CYP / vehicle group, mice received an intraperitoneal injection of cyclophosphamide (CYP, anticancer agent) (150 mg / kg) and simultaneously applied 350 mg of the antibiotic ointment to the skin of the back. In the CYP / 44-mer group,
Mice received an intraperitoneal injection of CYP (150 mg / kg) and simultaneously applied 350 mg of an antibiotic ointment containing 44-mer PEDF to the skin of the back. In the vehicle and 44-mer groups, mice received no intraperitoneal injection of CYP and were treated with 350 mg of antibiotic ointment and 350 mg of antibiotic ointment containing 44-mer PEDF, respectively. Thereafter, 350 mg of an antibiotic ointment (with or without 44-mer PEDF) was applied daily to the back skin of the mice for 7 days. For blank controls, mice were not treated with CYP injection or antibiotic ointment application.
図1は、各々、脱毛後9日目(すなわち、CYP注射後0日目)、脱毛後16日目(すなわち、CYP
注射後7日目)、及び脱毛後45日目(すなわち、CYP注射後36日目)の、各群のマウスの写真
を提供する。CYP/ビヒクル群とCYP/44-mer群のマウスを比較することにより、本発明者ら
は、CYP/44-merマウスは各々、CYP注射後7日目及び36日目に、より良い毛の成長活性を示
したことがわかった。
Figure 1 shows, respectively, the 9th day after hair removal (i.e., 0th day after injection of CYP) and the 16th day after hair removal (i.e., CYP)
A photograph of each group of mice is provided, 7 days after injection, and 45 days after hair loss (ie, 36 days after CYP injection). By comparing the mice in the CYP / vehicle group with the CYP / 44-mer group, we show that the CYP / 44-mer mice have better hair on days 7 and 36 after CYP injection, respectively. It turned out that the growth activity was shown.
マウスへのCYP 150mg/kgの投与は、ケラチノサイトのアポトーシス、更には包ジストロ
フィーを引き起こすことは、わかっている。従って、TUNEL染色を行い、アポトーシス性
細胞を染色し、PEDFペプチドのケラチノサイトに対する保護効果を評価した。図2は、代
表的蛍光画像を提供し、かつ定量的結果は、表1にまとめている。TUNEL-陽性細胞の標識
指標(％)は、標識された細胞数を、核を持つ細胞総数で除算することによりコンピュータ
算出した。
これらの結果は、44-mer-含有軟膏で処置したマウスにおけるアポトーシス性TUNNEL-陽
性細胞の数は、ビヒクル軟膏のみで処置したマウスと比べ、有意に減少したことを明らか
にした。従って、PEDFペプチドの投与は、化学療法剤(CYPなど)により引き起こされる損
傷に対し、ケラチノサイトを保護し得、これにより化学療法により引き起こされる脱毛を
予防及び/又は改善すると考えられる。
These results revealed that the number of apoptotic TUNNEL-positive cells in mice treated with 44-mer-containing ointment was significantly reduced as compared to mice treated with vehicle ointment alone. Thus, it is believed that administration of PEDF peptide can protect keratinocytes against damage caused by chemotherapeutic agents (such as CYP), thereby preventing and / or ameliorating the hair loss caused by chemotherapy.
メラノサイト幹細胞は、メラニン芽細胞及びメラニン形成細胞などの分化した後代の毛
根への供給、及びそれらの後代の分化周期の調節に係わっている。最近の研究は、生態的
適所(niche)におけるMSCの成熟メラニン形成細胞への異常な分化は、MSCの喪失及び不可
逆的毛髪の白髪化に繋がることを指摘しており；この現象は、「異所的に色素沈着された
メラニン形成細胞(EPM)」と称される。
Melanocyte stem cells are involved in the supply of differentiated progeny hair roots such as melanoblasts and melanocytes, and regulation of their progeny differentiation cycle. Recent studies have indicated that abnormal differentiation of MSCs into mature melanocytes in ecological niche leads to loss of MSCs and irreversible hair loss; this phenomenon It is called in situ pigmented melanocytes (EPM).
毛球中に存在するメラニンのみが、毛幹を色素沈着することが可能である。具体的には
、毛球中のメラニンにより生成されたメラニン顆粒は、ケラチノサイトへ輸送され、これ
により色素沈着された毛髪を生じる。更に完全に分化したメラニン形成細胞は、カタゲン
期の間にアポトーシスを受け、かつ毛包から除去されるであろう。毛包がジストロフィー
性アナゲンを経験する場合、アナゲンの包中のメラニンレベルは、異常に減少し、メラニ
ン分布は均一ではなく、このことが、メラニン凝集を生じる。ジストロフィー性カタゲン
を経験している毛髪について、メラニンは、毛球の外側で凝集するであろう。
Only melanin present in the hair bulb is capable of pigmenting the hair shaft. Specifically, melanin granules produced by melanin in the hair bulb are transported to keratinocytes, thereby producing a pigmented hair. Furthermore, fully differentiated melanocytes will undergo apoptosis during the catagen phase and will be removed from the hair follicles. When the hair follicles experience dystrophic anagen, the melanin levels in the anagen's capsule are abnormally reduced and the melanin distribution is not uniform, which results in melanin aggregation. For hair experiencing dystrophic catagen, melanin will aggregate outside the hair bulb.
更に図1に言及するように、CYP注射後36日目に、CYP群及びCYP/ビヒクル群のマウスは
、より灰色及び白色の毛を有したのに対し、CYP/44-mer群のマウスは、実質的により暗色
の毛を有したことがわかった。これらの結果は、CYP群及びCYP/ビヒクル群において、MSC
は、CYPにより損傷を受け、従ってこれらは、メラニンの生成に十分なメラニン形成細胞
を供給することができないことを示唆している。
As further noted in FIG. 1, at day 36 post CYP injection, mice in the CYP and CYP / vehicle groups had more gray and white hair, whereas mice in the CYP / 44-mer group had It was found that it had substantially darker hair. These results show that in the CYP group and the CYP / vehicle group, MSC
Suggest that they are damaged by CYP, so they can not supply enough melanocytes to produce melanin.
MSCの活性を、メラニン形成細胞系統マーカー(c-kit)及びチロシナーゼの発現により評
価した。図3に言及したように、この免疫染色分析は、c-kit及びチロシナーゼの発現は、
CYP/ビヒクル群のマウスのバルジ(bulge)においてかろうじて検出されたことを明らかに
し、このことはバルジにおけるMSC活性はかなり低いことを指摘している。対照的に、CYP
/44-mer群のマウスのバルジにおいて、c-kit及びチロシナーゼの発現が認められた。まと
めると、これらのデータは、本PEDFペプチドは、CYPにより引き起こされた損傷に対するM
SCの保護において有効であることを示唆している。
The activity of MSCs was assessed by the expression of melanocyte lineage marker (c-kit) and tyrosinase. As mentioned in FIG. 3, this immunostaining analysis showed that c-kit and tyrosinase expression
It was revealed that it was barely detected in the bulges of mice of the CYP / vehicle group, which indicates that the MSC activity in the bulges is quite low. In contrast, the CYP
Expression of c-kit and tyrosinase was observed in bulges of / 44-mer group mice. Taken together, these data show that the PEDF peptide is an M to the injury caused by CYP.
It suggests that it is effective in the protection of SC.
結論として、実施例1の結果は、44-mer PEDFペプチドは、CYPにより引き起こされる、
毛包の縮小、メラニン凝集、並びに毛包細胞及びケラチノサイトのアポトーシスを減少す
るのに有効であることを明らかにした。従って、44-mer PEDFペプチドは、化学療法によ
り誘導された脱毛及び/又は毛髪色素脱失を予防及び/又は改善することが可能である。更
に、本発明者らの先行する研究及び下記実施例3に提示される例は、44-merに由来した39-
mer PEDF及び39-mer PEDFに由来したいくつかの短いPEDFペプチドの生理活性は、44-mer
のものと類似していることを指摘している。従って本発明者らは、配列番号:1(39-mer)、
配列番号:2(34-mer)、配列番号:3(29-mer)、配列番号:5(24-mer)、配列番号:6(20-mer)、
配列番号:8(MO 29-mer)、及び配列番号:9(MO 20-mer)を含む、これらの短い合成PEDFペプ
チドも、化学療法により誘導された脱毛症及び/又は毛髪色素脱失の治療において有効で
あることを推論している。
In conclusion, the results of Example 1 show that the 44-mer PEDF peptide is triggered by CYP
It has been shown to be effective in reducing hair follicle shrinkage, melanin aggregation, and apoptosis of hair follicle cells and keratinocytes. Thus, the 44-mer PEDF peptide is capable of preventing and / or ameliorating chemotherapy induced hair loss and / or hair loss. Furthermore, our prior work and the example presented in Example 3 below were derived from the 44-mer 39-
The bioactivity of some short PEDF peptides derived from mer PEDF and 39-mer PEDF is 44-mer
It is pointed out that it is similar to Thus, we have SEQ ID NO: 1 (39-mer),
SEQ ID NO: 2 (34-mer), SEQ ID NO: 3 (29-mer), SEQ ID NO: 5 (24-mer), SEQ ID NO: 6 (20-mer),
These short synthetic PEDF peptides, including SEQ ID NO: 8 (MO 29-mer) and SEQ ID NO: 9 (MO 20-mer), also treat chemotherapy-induced alopecia and / or hair loss Is inferred to be effective.
（実施例2） (Example 2)
（PEDFペプチドは、ストレスにより誘導された脱毛及び色素脱失を予防/改善する） (PEDF peptide prevents / improves stress induced hair loss and depigmentation)
紫外線照射、炎症、又は精神情動などの、様々な環境因子及び内因性因子は、酸化的ス
トレスを引き起こすことがわかっており、これは次に(in terms)加齢過程を加速する。同
じく、対象の遺伝子構造も、これらの因子に対する対象の耐性に影響を及ぼし得る。先行
する研究は、加齢した毛包内に数マイクロモルの過酸化水素が存在することを確立した。
また、動物モデルにおいて、内因性酸化的ストレスは、毛包中のメラニン形成細胞のアポ
トーシスを増大し、これは最終的に毛髪の白髪化に繋がることも、確認されている。
Various environmental and intrinsic factors, such as ultraviolet radiation, inflammation, or mental affect, have been found to cause oxidative stress, which accelerates the aging process in terms. Likewise, the genetic structure of interest can also affect the resistance of the subject to these factors. Prior studies have established the presence of several micromoles of hydrogen peroxide in aged hair follicles.
Also, in animal models, it has also been determined that endogenous oxidative stress increases the apoptosis of melanocytes in hair follicles, which ultimately leads to hair bleaching.
この実施例において、内因性チャレンジ(例えばオキシダント)により引き起こされたス
トレスと、脱毛及び毛髪白髪化の間の関係を調べた。上記実施例1に説明したように、マ
ウスを選択し、かつ脱毛した。脱毛後9日目に、マウスに、過酸化水素を投与量10ml/体重
kgで皮下注射した。比較のために、44-mer PEDFを含む又は含まない抗生物質軟膏350mgを
、H2O2/ビヒクル群及びH2O2/44-mer群のマウスの背中の皮膚へ、各々塗布した。
In this example, the relationship between stress caused by an endogenous challenge (eg oxidant) and hair loss and hair bleaching was investigated. As described in Example 1 above, mice were selected and depilated. On day 9 after hair removal, mice were given a dose of hydrogen peroxide of 10 ml / body weight
It was injected subcutaneously in kg. For comparison, 350 mg of antibiotic ointment with or without 44-mer PEDF was respectively applied to the skin on the back of mice in the H 2 O 2 / vehicle group and H 2 O 2 / 44-mer group.
図4は、各々、脱毛後9日目(すなわちH202注射後0日目)及び脱毛後31日目(すなわちH2O2
注射後22日目)の各群のマウスの写真を提供している。H202/ビヒクル群とH202/44-mer群
のマウスを比較することにより、H202/44-merマウスは、H202注射後22日間、より良い毛
成長活性を示したことがわかった。同じく、毛の色は、44-mer PEDF 25μMを含有する抗
生物質軟膏で処置したマウスにおいてより暗色となった。従って、44-mer PEDFは、スト
レス(酸化的ストレスなど)により引き起こされた脱毛及び/又は毛髪色素脱失を予防及び/
又は改善するのに有効である。
FIG. 4 shows, respectively, the 9th day after hair removal (i.e. 0 day after H 2 O 2 injection) and the 31st day after hair removal (ie H 2 O 2
A photograph of each group of mice is provided at day 22 after injection. By comparing H 2 0 2 / vehicle group and H 2 0 2 / 44-mer group mice, H 2 0 2 / 44-mer mice have better hair growth activity for 22 days after H 2 0 2 injection It turned out that it showed. Also, the color of the hair became darker in mice treated with antibiotic ointment containing 25 μM of 44-mer PEDF. Thus, 44-mer PEDF prevents and / or prevents hair loss and / or hair loss caused by stress (such as oxidative stress).
Or it is effective to improve.
更に、本発明者らの先行する研究及び下記実施例3に提示される例は、44-mer PEDFに由
来したいくつかの短いPEDFペプチドの生理活性は、44-merのものと類似していることを指
摘している。従ってこれらの結果は、配列番号:1(39-mer)、配列番号:2(34-mer)、配列番
号:3(29-mer)、配列番号:5(24-mer)、配列番号:6(20-mer)、配列番号:8(MO 29-mer)、及
び配列番号:9(MO 20-mer)を含む、これらの短い合成PEDFペプチドも、ストレスにより誘
導された脱毛症及び/又は毛髪色素脱失の治療において有効であることを示唆している。
Furthermore, our previous studies and the example presented in Example 3 below show that the physiological activity of some short PEDF peptides derived from 44-mer PEDF is similar to that of 44-mer Point out that. Accordingly, these results are as follows: SEQ ID NO: 1 (39-mer), SEQ ID NO: 2 (34-mer), SEQ ID NO: 3 (29-mer), SEQ ID NO: 5 (24-mer), SEQ ID NO: 6 These short synthetic PEDF peptides, including (20-mer), SEQ ID NO: 8 (MO 29-mer), and SEQ ID NO: 9 (MO 20-mer), are also stress-induced alopecia and / or hair. It is suggested to be effective in the treatment of hypopigmentation.
（実施例3） (Example 3)
（PEDFペプチドはアンドロゲン性脱毛症を予防/改善する） (PEDF peptide prevents and ameliorates androgenic alopecia)
インビトロ及びインビボ分析を、本PEDFペプチドのアンドロゲン性脱毛症に対する効果
を評価するために、実行した。
In vitro and in vivo analyzes were performed to evaluate the effect of the PEDF peptide on androgenic alopecia.
（実施例3.1） Example 3.1
（PEDFペプチドはインビトロにおいてDHTにより誘導されたケラチノサイトの成長停止及
びアポトーシスに拮抗する）
(PEDF peptide antagonizes DHT-induced keratinocyte growth arrest and apoptosis in vitro)
各PEDFペプチド(29-mer、24-mer、20-mer、又はMo 20-mer)を、雄のマウス洞毛の毛包(
HF)の臓器培養物へ16時間添加し、次に100nM DHTを更に48時間添加した。比較的高倍率で
の組織学的分析は、DHTは、未処置のHFと比べ、細胞の脱組織化した毛母体及びメラニン
凝集を引き起こしたことを明らかにした(図5)。対照的に、20-mer PEDFで予備処置したHF
における毛母体のほとんどの領域は、規則的に整列されたケラチノサイト、及びはるかに
少ない異常なメラニン粒子を有した(図5)。
Each PEDF peptide (29-mer, 24-mer, 20-mer, or Mo 20-mer) was added to the hair follicles of male mouse sinus hair (
HF) was added to the organ cultures for 16 hours, then 100 nM DHT was added for another 48 hours. Histological analysis at relatively high magnification revealed that DHT caused cellular disorganized hair matrix and melanin aggregation as compared to untreated HF (FIG. 5). In contrast, HF pretreated with 20-mer PEDF
Most areas of the hair matrix in had had regularly aligned keratinocytes and much less abnormal melanocytes (Figure 5).
凍結切片におけるTUNEL-及びBrdU-陽性細胞の免疫検出を、各々、HF上皮におけるアポ
トーシス及び増殖活性の評価に使用した。定量的結果を、表2にまとめている。TUNEL-及
びBrdU-陽性細胞の標識指標(％)は、標識された細胞数を、核を持つ細胞総数で除算する
ことによりコンピュータ算出した。
表2に認められるように、インビトロにおいて自然発生する毛母体におけるケラチノサ
イトアポトーシスは、非常に低い(1.7±0.76％；未処置群)のに対して、有意な細胞死が
、100nM DHTの存在下で、真皮乳頭(DP)の周囲のケラチノサイトにおいて認められた(28.5
±4.90％；DHT/ビヒクル群)。同じく、本開示のPEDFペプチド(例えば、29-mer、24-mer、
20-mer、及びMo 20-mer)により処置した洞毛は、ビヒクル又は18-mer PEDFペプチドによ
り処置した洞毛と比べ、はるかに少ないTUNEL-陽性ケラチノサイトを示した。これらの結
果は、本PEDF治療は、DHTにより誘導されたケラチノサイトアポトーシスの減少において
有効であることを示唆している。
As seen in Table 2, keratinocyte apoptosis in the hair matrix naturally occurring in vitro is very low (1.7 ± 0.76%; untreated group) whereas significant cell death is in the presence of 100 nM DHT. Was observed in keratinocytes around dermal papilla (DP) (28.5
± 4.90%; DHT / vehicle group). Similarly, PEDF peptides of the disclosure (eg, 29-mer, 24-mer,
Sinus hair treated with 20-mer and Mo 20-mer showed much less TUNEL-positive keratinocytes compared to that treated with vehicle or 18-mer PEDF peptide. These results suggest that this PEDF treatment is effective in reducing DHT-induced keratinocyte apoptosis.
表2の結果はまた、毛母体におけるケラチノサイトの細胞***は、未処置のHFと比べ、D
HTにより抑制されたことを示した(DHT/ビヒクル：9.0±1.92％、対、未処置：15.8±2.08
％)。他方で、本PEDFペプチドにより処置した細胞に関するより高いBrdU標識指標は、本
治療による包ケラチノサイトの増殖活性の改善を指摘した。
The results in Table 2 also show that keratinocyte cell division in the hair matrix is D compared to untreated HF.
It was shown that it was suppressed by HT (DHT / vehicle: 9.0 ± 1.92% vs. untreated: 15.8 ± 2.08
%). On the other hand, higher BrdU labeling index for cells treated with this PEDF peptide indicated an improvement in the proliferation activity of enveloped keratinocytes by this treatment.
DHTは、真皮乳頭細胞(DPC)におけるトランスフォーミング増殖因子-β1(TGF-β1)の発
現を誘導し、かつTGF-β1は、アンドロゲン性脱毛を伴う対象において、毛の成長及び包
ケラチノサイト成長を抑制する、カタゲンインデューサーであることがわかっている。PE
DF-由来のペプチドが、ケラチノサイトをDHT-媒介性成長抑制から保護することができる
ことをさらに確認するために、TGF-β1及びPEDF-由来のペプチドに反応するヒト上皮ケラ
チノサイト(HaCaT)の細胞***を、BrdU取込みにより評価した。定量的結果を、表3にまと
めている。BrdU-陽性細胞の標識指標(％)は、標識された細胞数を、核を持つ細胞総数で
除算することによりコンピュータ算出した。
To further confirm that DF-derived peptides can protect keratinocytes from DHT-mediated growth suppression, cell division of human epithelial keratinocytes (HaCaT) in response to TGF-β1 and PEDF-derived peptides , Assessed by BrdU incorporation. The quantitative results are summarized in Table 3. The labeling index (%) of BrdU-positive cells was calculated by dividing the number of labeled cells by the total number of cells having nuclei.
表3に認められるように、HaCaTのTGF-β1(4ng/ml、24時間)による処置は、BrdU-陽性細
胞のレベルを、未処置の細胞のそれと比べ、実質的に低下した。しかし、細胞を20-merに
より16時間予備処置した場合、TGF-β1＋20-mer処置群において、TGF-β1は、HaCaTの増
殖活性を抑制することができなかった。
As seen in Table 3, treatment of HaCaT with TGF-β1 (4 ng / ml, 24 h) substantially reduced the levels of BrdU-positive cells compared to that of untreated cells. However, when cells were pretreated with a 20-mer for 16 hours, TGF-β1 failed to suppress the proliferative activity of HaCaT in the TGF-β1 + 20-mer treatment group.
まとめると、PEDF-由来のペプチドは、DHT(及びTGFβ1)のケラチノサイトに対する抗増
殖効果をブロックすることができる。
Taken together, PEDF-derived peptides can block the antiproliferative effect of DHT (and TGFβ1) on keratinocytes.
（実施例3.2） Example 3.2
（PEDFペプチドはインビボにおいてDHTにより誘導されたカタゲン進展を遅延する） (PEDF peptide delays DHT-induced catagen development in vivo)
インビボ分析のために、5α-ジヒドロテストステロン(DHT)動物モデルを利用した。毛
周期のテロゲン段階にある6週齢の雄C57BL/6マウス(体重15〜20g)を、溶融したワックス/
ロジン混合物(1：1)を軽い麻酔下で用いて脱毛し、アナゲン段階を誘導した。DHTを、DMS
O中に溶解し、50mg/mlストック溶液を作製した。脱毛後11日目に、マウス(1実験条件につ
き6〜10匹のマウス)に、DHT溶液を、剃毛した背側領域に皮下注射した(30mg/体重kg；1匹
のマウスにつきオリーブ油200μl中に混合したDHT 1.5mg)。DHT注射後、350mgビヒクルゲ
ル又はPEDFペプチド(29-mer、24-mer、20-mer、又は18-mer)25μMを含有するゲルを、3日
間にわたり、1日1回、マウスの背中の皮膚へ局所的に塗布した。
The 5α-dihydrotestosterone (DHT) animal model was utilized for in vivo analysis. 6 week old male C57BL / 6 mice (weight 15-20 g) in telogen phase of hair cycle, melted wax /
The rosin mixture (1: 1) was used to remove hair under light anesthesia to induce anagen stages. DHT, DMS
Dissolve in O to make a 50 mg / ml stock solution. On day 11 after depilation mice (6-10 mice per experimental condition) were injected subcutaneously with DHT solution into the shaved dorsal area (30 mg / kg body weight; in 200 μl olive oil per mouse) Mixed with DHT 1.5 mg). Topical 350 mg vehicle gel or gel containing 25 μM PEDF peptide (29-mer, 24-mer, 20-mer, or 18-mer) 25 μM once daily for 3 days on the back skin of the mouse after DHT injection Applied.
図6に提示したように、組織学的分析を、脱毛後15日目(すなわちDHT注射後4日目)に行
い、DHT処置しなかったマウス(未処置群)由来のHFは、アナゲン及び自然発生的カタゲン
の開始から構成されたのに対し、DHT/ビヒクル及びDHT/18-merマウスのHFは、予想された
ようにカタゲンへと進んだことが明らかになった。対照的に、29-mer及び20-merにより処
置したマウスのHFは、ほとんどがアナゲン期であり、このことは、DHTにより増強された
カタゲン進行は、ブロックされたことを指摘している。各実験群における各周期相の毛包
の割合に注目する定量的評価を、表4にまとめた。
表4のデータは、DHT/29-mer、DHT/24-mer、及びDHT/20-mer群において、有意に高い割
合の毛包が、アナゲン期、及び早期カタゲン期(カタゲン期IからIII)において認められた
ことを指摘している。他方で、ビヒクル又は18-merで処置したマウスにおける毛包の大半
は、中期及び後期カタゲン期(カタゲン期IVからVIII)にあった。
The data in Table 4 show that significantly higher proportions of hair follicles in the DHT / 29-mer, DHT / 24-mer, and DHT / 20-mer groups are anagen and early catagen (catagen I to III) Point out that it was recognized in On the other hand, the majority of hair follicles in mice treated with vehicle or 18-mer were in mid and late catagen (catagen IV to VIII).
前述の組織形態学的分析を確認するために、BrdU及びTUNEL染色を、脱毛後15日目に行
った。定量的結果を、表5にまとめている。毛母体(HM)及び外毛根鞘(ORS)におけるTUNNEL
-陽性細胞の数を、1毛包当たりのTUNNEL-陽性細胞として表した。毛球(HB)中のBrdU-陽性
細胞の標識指標(％)は、標識された細胞数を、核を持つ細胞総数で除算することによりコ
ンピュータ算出した。
The number of positive cells was expressed as TUNNEL-positive cells per hair follicle. The labeling index (%) of BrdU-positive cells in hair bulbs (HB) was calculated by dividing the number of labeled cells by the total number of cells with nuclei.
未処置群とDHT/ビヒクル群を比較することにより、近接したアナゲンHFにおける増殖活
性の減少に加えて、毛母体及び外毛根鞘(ORS)におけるTUNEL-陽性細胞の量の劇的な増加
により明らかにされるように、DHT注射は、カタゲン進展を増強したことが認められる。2
0-mer、24-mer、又は29-merにより処置したDHT-注射したマウスにおいて、マウスは、1つ
のHF当たりのTUNEL-陽性細胞(1未満)及びBrdU-陽性ケラチノサイトの濃密なクラスターを
ほとんど有さず、このことは、本PEDFペプチドは、毛包退縮(regression)に対するDHT作
用に拮抗することを確認した。
Comparison of untreated and DHT / vehicle groups reveals a dramatic increase in the amount of TUNEL-positive cells in the hair matrix and the outer root sheath (ORS) in addition to the decrease in proliferative activity in adjacent anagen HF As noted, DHT injection has been observed to enhance catagen progression. 2
In DHT-injected mice treated with 0-mer, 24-mer, or 29-mer, mice have most of the dense clusters of TUNEL-positive cells (less than 1) and BrdU-positive keratinocytes per HF. This confirmed that the PEDF peptide antagonized the DHT action on hair follicle regression.
まとめると、包ケラチノサイトの細胞増殖停止及びアポトーシスの証拠としてのDHT-誘
導したカタゲン移行は、本PEDF-由来ペプチド(例えば、29-mer、24-mer及び20-mer)の局
所塗布によりブロックされる。これらの結果は、本PEDF-由来ペプチドは、DHT-誘導した
未熟なアナゲンからカタゲンへの移行を遅延することができることを確認している。
Taken together, DHT-induced catagen translocation as evidence of cell growth arrest and apoptosis of entrapped keratinocytes is blocked by topical application of the present PEDF-derived peptides (eg, 29-mer, 24-mer and 20-mer) . These results confirm that the present PEDF-derived peptides can delay the DHT-induced transition of immature anagen to catagen.
（実施例3.3） Example 3.3
（PEDFペプチドはインビボにおいて毛包の発達を持続する） (PEDF peptide sustains hair follicle development in vivo)
毛成長の再開に対するPEDFペプチドの効果を評価するために、実施例3.2に説明したよ
うに、C57BL/6マウスを脱毛した。脱毛後11日目に、マウス(1実験条件につき6〜10匹のマ
ウス)に、DHT溶液(オリーブ油200μl中に混合したDHT 1.5mg)を、剃毛した背側領域に皮
下注射し(30mg/体重kg)、その後マウスに、本試験の期間中、週2回DHTを注射した。初回D
HT注射後、350mgビヒクルゲル又はPEDFペプチド(29-mer、24-mer、20-mer、又は18-mer)2
5μMを含有するゲルを、14日間にわたり、1日1回、マウスの背中の皮膚へ局所的に塗布し
た。被毛状態の変化を、デジタルカメラで写真撮影することにより記録し(図7)、かつ暗
色になり始めた剃毛した領域(再成長した毛)の割合を測定した。DHT注射後の毛再成長の
スコアを、下記スケールを用いて評価した：0、0％(毛成長なし)；1、＜20％；2、20〜39
％；3、40〜59％；4、60〜79％；5、80〜100％。皮下組織深さの単位長さ(1mm)当たりの
毛球の数を、前述のようにカウントした。結果を表6にまとめている。
After HT injection, 350 mg vehicle gel or PEDF peptide (29-mer, 24-mer, 20-mer or 18-mer) 2
The gel containing 5 μM was topically applied to the skin on the back of the mouse once a day for 14 days. Changes in hair status were recorded by photography with a digital camera (FIG. 7) and the percentage of shaved area (regrown hair) that began to darken was measured. Hair regrowth scores after DHT injection were evaluated using the following scale: 0, 0% (no hair growth); 1, <20%; 2, 20-39.
%; 3, 40 to 59%; 4, 60 to 79%; 5, 80 to 100%. The number of hairballs per unit length (1 mm) of subcutaneous tissue depth was counted as described above. The results are summarized in Table 6.
図7及び表6の結果は、毛周期の成長相(アナゲン)は、脱毛により背側皮膚において誘導
された(未処置群)ことを指摘している。対照的に、DHT/ビヒクル群及びDHT/18-mer群のマ
ウスは、脱毛後18日目であっても、毛再成長の顕著な遅延を示し；これは、アンドロゲン
性脱毛症のよく受け容れられる動物モデルの予想される知見である。他方で、29-mer、24
-mer、又は20-merの毎日塗布により処置したDHT-注射したマウスは、毛再成長の遅延の改
善を示し、及び実質的毛成長が生じた。統計解析の結果は、29-mer、24-mer、及び20-mer
で処置したDHT-注射したマウスは、DHT/ビヒクル対照群よりも、脱毛後、より良い成長ス
コアを示したことを指摘している。
The results in FIG. 7 and Table 6 indicate that the growth phase of the hair cycle (anagen) was induced in the dorsal skin by hair loss (untreated group). In contrast, mice in the DHT / vehicle and DHT / 18-mer groups show marked retardation of hair regrowth, even on
DHT-injected mice treated with daily application of -mer, or 20-mer showed improved retardation of hair regrowth and substantial hair growth occurred. Statistical analysis results are 29-mer, 24-mer and 20-mer
It is pointed out that DHT-injected mice treated with 3D showed a better growth score after depilation than the DHT / vehicle control group.
更に表6に関して、ビヒクル又は18-merで処置したマウスと比べ、毛球の有意に増加し
た総数(1.6倍)が、29-mer、24-mer又は20-merのいずれかで処置したマウスにおいて認め
られた。これらの結果は、有意な数のHFが、DHTの作用を回避し、本PEDFペプチドの保護
的効果の下で、アナゲン期へと移動したことを示唆している。
Further with respect to Table 6, the significantly increased total number (1.6-fold) of hairballs compared to vehicle or 18-mer treated mice is in mice treated with either 29-mer, 24-mer or 20-mer. Admitted. These results suggest that a significant number of HFs avoided the effects of DHT and migrated to the anagen phase under the protective effect of this PEDF peptide.
結論として、実施例3(実施例3.1から3.3を含む)に示されたデータは、本PEDFペプチド
は、DHTにより誘導された脱毛の治療に有効であることを明らかにしている。従って、PED
Fペプチドの局所性投与は、アンドロゲン性脱毛症により引き起こされる脱毛を予防又は
改善するであろう。
In conclusion, the data presented in Example 3 (including Examples 3.1 to 3.3) demonstrate that the PEDF peptide is effective in the treatment of hair loss induced by DHT. Therefore, PED
Topical administration of F peptide will prevent or ameliorate hair loss caused by androgenic alopecia.
本開示は、短い合成PEDFペプチドの局所塗布は、毛包に対し治療的効果を有することを
最初に明らかにしたものである。従来の完全長PEDFペプチドを発現するベクターの静脈内
又は筋肉内送達と比べ、短い合成PEDFペプチドの局所的送達は、安全かつより経費のかか
らない方策である。
The present disclosure is the first to demonstrate that topical application of short synthetic PEDF peptides has a therapeutic effect on hair follicles. Local delivery of short synthetic PEDF peptides is a safe and less expensive strategy, as compared to intravenous or intramuscular delivery of vectors expressing conventional full-length PEDF peptides.
実施態様の上記の説明は、例示目的でのみ与えられ、当分野の技術者によって様々な改変を行うことができることが理解されよう。上記の明細書、実施例、及びデータは、本発明の例示的な実施態様の構造及び使用の完全な説明を提供する。本発明の種々の実施態様を、ある程度の具体性を伴って、又は、1以上の個々の実施態様に関して先に記載してきたが、当分野の技術者は、本発明の精神及び範囲を逸脱せずに、開示した実施態様に対して多くの変更を行うことができるであろう。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
（構成１）
20〜44アミノ酸残基の長さであり、かつ、配列番号:10と少なくとも80％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列であって、配列番号:10の残基16〜35とのアミノ酸配列同一性が少なくとも90％である少なくとも20個の連続的な残基を含む前記アミノ酸配列からなる、対象における脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療するための合成ペプチド。
（構成２）
前記合成ペプチドの少なくとも4個の連続的な残基が、配列番号:10の残基16〜19と同一である、構成1記載の合成ペプチド。
（構成３）
前記脱毛症が、アナゲン脱毛又はアンドロゲン性脱毛症である、構成1記載の合成ペプチド。
（構成４）
前記毛髪色素脱失が、化学療法、放射線療法、ストレス、遺伝、又は加齢により引き起こされる、構成1記載の合成ペプチド。
（構成５）
前記対象が、ヒト対象である、構成1記載の合成ペプチド。
（構成６）
構成1記載の合成ペプチドの有効量；及び
医薬として許容し得る賦形剤：
を含む、対象における脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療するための局所性医薬組成物。
（構成７）
前記合成ペプチドの少なくとも4個の連続的な残基が、配列番号:10の残基16〜19と同一である、構成6記載の局所性医薬組成物。
（構成８）
前記局所性医薬組成物が、液剤、噴霧剤、エアゾール剤、泡剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏、ゲル剤、又は貼付剤の形状である、構成6記載の局所性医薬組成物。
（構成９）
前記脱毛症が、アナゲン脱毛又はアンドロゲン性脱毛症である、構成6記載の局所性医薬組成物。
（構成１０）
前記毛髪色素脱失が、化学療法、放射線療法、ストレス、遺伝、又は加齢により引き起こされる、構成6記載の局所性医薬組成物。
（構成１１）
前記対象が、ヒト対象である、構成6記載の局所性医薬組成物。
（構成１２）
対象において脱毛症及び/又は毛髪色素脱失を治療する方法であって、
有効量の構成1記載の合成ペプチドを対象へ投与することを含む、方法。
（構成１３）
前記合成ペプチドの少なくとも4個の連続的な残基が、配列番号:10の残基16〜19と同一である、構成12記載の方法。
（構成１４）
前記合成ペプチドが、合成ペプチド及び医薬として許容し得る賦形剤を含む、局所性医薬組成物に製剤化されている、構成12記載の方法。
（構成１５）
前記局所性医薬組成物が、液剤、噴霧剤、エアゾール剤、泡剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏、ゲル剤、又は貼付剤の形状である、構成14記載の方法。
（構成１６）
前記合成ペプチドが、医薬組成物中に、0.1〜100μMの濃度で存在する、構成14記載の方法。
（構成１７）
前記濃度が、1〜25μMである、構成16記載の方法。
（構成１８）
前記脱毛症が、アナゲン脱毛又はアンドロゲン性脱毛症である、構成11記載の方法。
（構成１９）
前記毛髪色素脱失が、化学療法、放射線療法、ストレス、遺伝、又は加齢により引き起こされる、構成11記載の方法。
（構成２０）
前記対象が、ヒト対象である、構成11記載の方法。
It will be appreciated that the above description of the embodiments is given for the purpose of illustration only and that various modifications can be made by those skilled in the art. The above specification, examples and data provide a complete description of the structure and use of exemplary embodiments of the present invention. While various embodiments of the invention have been described above with some particularity, or with respect to one or more individual embodiments, those skilled in the art will recognize that they may depart from the spirit and scope of the invention. Rather, many modifications can be made to the disclosed embodiments.
The present application provides the invention of the following configuration.
(Configuration 1)
An amino acid sequence that is 20 to 44 amino acid residues long and has at least 80% amino acid sequence identity with SEQ ID NO: 10, wherein the amino acid sequence identity with residues 16 to 35 of SEQ ID NO: 10 A synthetic peptide for treating alopecia and / or hair depigmentation in a subject consisting of said amino acid sequence comprising at least 20 consecutive residues of at least 90% sex.
(Configuration 2)
The synthetic peptide according to Configuration 1, wherein at least four consecutive residues of said synthetic peptide are identical to residues 16-19 of SEQ ID NO: 10.
(Configuration 3)
The synthetic peptide according to Configuration 1, wherein said alopecia is anagen hair loss or androgenic alopecia.
(Configuration 4)
The synthetic peptide according to constitution 1, wherein said hair loss is caused by chemotherapy, radiation therapy, stress, heredity, or aging.
(Configuration 5)
The synthetic peptide according to Configuration 1, wherein said subject is a human subject.
(Configuration 6)
An effective amount of the synthetic peptide according to configuration 1; and
Pharmaceutically acceptable excipients:
A topical pharmaceutical composition for treating alopecia and / or hair loss in a subject, comprising
(Configuration 7)
7. The topical pharmaceutical composition according to arrangement 6, wherein at least four consecutive residues of said synthetic peptide are identical to residues 16-19 of SEQ ID NO: 10.
(Configuration 8)
5. The topical pharmaceutical composition according to aspect 6, wherein the topical pharmaceutical composition is in the form of a solution, a spray, an aerosol, a foam, a cream, a lotion, an ointment, a gel or a patch.
(Configuration 9)
7. The topical pharmaceutical composition according to configuration 6, wherein the alopecia is anagen hair loss or androgenic alopecia.
(Configuration 10)
7. The topical pharmaceutical composition according to arrangement 6, wherein the hair loss is caused by chemotherapy, radiation therapy, stress, heredity, or aging.
(Configuration 11)
7. The topical pharmaceutical composition according to configuration 6, wherein said subject is a human subject.
(Configuration 12)
A method of treating alopecia and / or hair loss in a subject, comprising
Administering an effective amount of the synthetic peptide of Configuration 1 to the subject.
(Configuration 13)
The method according to aspect 12, wherein at least four consecutive residues of said synthetic peptide are identical to residues 16-19 of SEQ ID NO: 10.
(Configuration 14)
The method according to configuration 12, wherein the synthetic peptide is formulated into a topical pharmaceutical composition comprising the synthetic peptide and a pharmaceutically acceptable excipient.
(Configuration 15)
The method according to configuration 14, wherein the topical pharmaceutical composition is in the form of a solution, a spray, an aerosol, a foam, a cream, a lotion, an ointment, a gel, or a patch.
(Configuration 16)
The method according to configuration 14, wherein the synthetic peptide is present in the pharmaceutical composition at a concentration of 0.1 to 100 μM.
(Configuration 17)
17. The method according to arrangement 16, wherein the concentration is 1-25 μM.
(Configuration 18)
11. The method according to configuration 11, wherein the alopecia is anagen hair loss or androgenic alopecia.
(Configuration 19)
11. The method according to configuration 11, wherein said hair loss is caused by chemotherapy, radiation therapy, stress, heredity, or age.
(Configuration 20)
11. The method according to configuration 11, wherein said subject is a human subject.
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