JP6510276B2 - Sensor using molecularly imprinted polymer thin film - Google Patents

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Description

本発明は、分子インプリント高分子薄膜を用いたセンサ、及び前記センサを用いた測定方法に関する。   The present invention relates to a sensor using a molecularly imprinted polymer thin film, and a measurement method using the sensor.

副作用の強い治療薬を有効に使用するためには、その血中濃度が有効域にあることを確認する治療薬モニタリング（TDM）が求められている。しかし適切なセンシング技術が存在せず、医療現場におけるTDMの普及は進んでいない。   In order to effectively use a therapeutic agent with strong side effects, therapeutic drug monitoring (TDM) is required to confirm that the blood concentration is in the effective range. However, there is no appropriate sensing technology, and the spread of TDM in medical practice is not progressing.

分子インプリント高分子（MIP）は、認識対象物質（鋳型）の存在下で、それに対して親和性を持つモノマー（機能性モノマー）と架橋性モノマーと共重合することで得られる分子認識素子である。簡便かつ経済的なプロセスで、任意の対象物質に対してテーラーメイド的に調製できる分子認識素子である。本発明者は、表面にMIPをグラフトした電極における酸化還元電流は、鋳型の濃度に依存することを見出した。これは鋳型とMIPの特異的相互作用によって、レドックス種の基盤電極へのアクセシビリティの変化（ゲート効果）が生じるためと考えられる。この電流を測定することで鋳型を簡便かつ迅速にセンシングできる。この知見に基づいて、特許文献１には、分子インプリント高分子を固定化した基板から構成される抗凝固薬測定用センサが記載されている。   A molecularly imprinted polymer (MIP) is a molecular recognition element obtained by copolymerizing a monomer (functional monomer) having an affinity for it with a crosslinkable monomer in the presence of a substance to be recognized (template). is there. It is a molecular recognition element that can be tailored to any target substance in a simple and economical process. The inventors have found that the redox current at the electrode grafted with MIP on the surface is dependent on the concentration of the template. This is considered to be due to the change in accessibility (gate effect) of the redox species to the base electrode due to the specific interaction between the template and the MIP. By measuring this current, the template can be sensed simply and quickly. Based on this finding, Patent Document 1 describes a sensor for anticoagulant measurement, which is composed of a substrate on which a molecularly imprinted polymer is immobilized.

また非特許文献１には、バンコマイシンの検出のための分子インプリント高分子の電気活性ナノ粒子を用いた電気化学センサが報告されている。   In addition, Non-Patent Document 1 reports an electrochemical sensor using electroactive nanoparticles of molecularly imprinted polymer for detection of vancomycin.

国際公開ＷＯ２０１２／１２４８００号公報International Publication WO2012 / 124800

Antonio Turco 他、Innovative Electrochemical Sensor Based on Electroactive Nanoparticles of Molecularly Imprinted Polymers for the Indirect Detection of Vancomicyn, XII International Conference on Nanostructured Materials (NANO 2014) July 13-18, 2014, Moscow, Russia,http://www.nano2014.org/thesis/view/4804Antonio Turco et al., Innovative Electrochemical Sensor Based on Electroactive Nanoparticles of Molecularly Imprinted Polymers for the Indirect Detection of Vanucicyn, XII International Conference on Nanostructured Materials (NANO 2014) July 13-18, 2014, Moscow, Russia, http: //www.nano2014 .org / thesis / view / 4804

従来の特許文献１に記載の方法では、試料にレドックス種をマーカーとして添加する必要があった。このレドックス種の添加を省いたリエージェントレス測定が可能になれば、操作の簡便さは格段に向上し、治療薬モニタリング用センサとして広い普及が望める。また、非特許文献１に記載の方法は、鋳型を固体表面に固定するため、鋳型の官能基を損ねるという問題、導電高分子層を使用するので鋳型がＭＩＰにアクセスしにくく高速反応が困難になるという問題、並びに製造工程数が多いという問題があった。本発明は、上記の問題点を解消することを解決すべき課題とした。即ち、本発明は、試料にレドックス種をマーカーとして添加することなく、測定物質の測定を行うことができるセンサを提供することを解決すべき課題とする。   In the conventional method described in Patent Document 1, it has been necessary to add a redox species as a marker to the sample. If reagentless measurement without the addition of this redox species is possible, the ease of operation is greatly improved, and a wide spread as a sensor for therapeutic drug monitoring can be expected. In addition, since the method described in Non-Patent Document 1 fixes the template on the solid surface, the functional group of the template is damaged, and the conductive polymer layer is used, so the template is difficult to access MIP and high-speed reaction is difficult. And the number of manufacturing processes is large. The present invention has an object to be solved to solve the above-mentioned problems. That is, an object of the present invention is to provide a sensor capable of measuring a measurement substance without adding a redox species as a marker to a sample.

本発明者は上記課題を解決すべく鋭意検討し、分子インプリント高分子を表面上に直接固定化した基板から構成されるセンサであって、レドックス種が、前記分子インプリント高分子及び／又は前記基板に固定化されているセンサを作製し、リエージェントレスセンシングの可能性を評価した。その結果、上記センサにより、測定物質のモニタリングが可能であることを実証し、本発明を完成するに至った。   The inventors of the present invention have intensively studied to solve the above problems, and a sensor comprising a substrate on which a molecularly imprinted polymer is directly immobilized on a surface, wherein the redox species is the molecularly imprinted polymer and / or A sensor immobilized on the substrate was fabricated to evaluate the possibility of agentless sensing. As a result, it has been demonstrated that monitoring of the measurement substance is possible by the above-mentioned sensor, and the present invention has been completed.

すなわち、本発明の態様は以下に関する。
（１）分子インプリント高分子を表面上に直接固定化した基板から構成されるセンサであって、レドックス種が、前記分子インプリント高分子及び／又は前記基板に固定化されている前記センサ。
（２）基板が電極である、（１）に記載のセンサ。
（３）分子インプリント高分子を表面上に直接固定化した基板が、開始剤を固定化した基板に、レドックス種と機能性モノマーと架橋性モノマーと測定物質とを接触させて重合させることにより得られる基板である、（１）又は（２）に記載のセンサ。
（４）分子インプリント高分子を表面上に直接固定化した基板が、開始剤及びレドックス種を固定化した基板に、機能性モノマーと架橋性モノマーと測定物質とを接触させて重合させることにより得られる基板である、（１）又は（２）に記載のセンサ。
（５）機能性モノマーが、カチオン性モノマーである、（３）又は（４）に記載のセンサ。
（６）機能性モノマーが、メタクリル酸、又はメタクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライドである、（３）から（５）の何れかに記載のセンサ。
（７）架橋性モノマーが、メチレンビスアクリルアミドである、（３）から（６）の何れかに記載のセンサ。
（８）重合の際に、さらに架橋度調整用モノマーを基板に接触させる、（３）から（７）の何れかに記載のセンサ。
（９）架橋度調整用モノマーがアクリルアミドである、（８）に記載のセンサ。
（１０）基板上に導電性高分子層を有さない、（１）から（９）の何れかに記載のセンサ。
（１１）測定物質が、ホルモン、抗菌剤、又は抗凝固薬である、（１）から（１０）の何れかに記載のセンサ。
（１２）測定物質が、セロトニン、バンコマイシン、又はヘパリン類である、（１）から（１１）の何れかに記載のセンサ。 That is, the aspects of the present invention relate to the following.
(1) A sensor comprising a substrate on which a molecularly imprinted polymer is directly immobilized on a surface, wherein the redox species is immobilized on the molecularly imprinted polymer and / or the substrate.
(2) The sensor according to (1), wherein the substrate is an electrode.
(3) The substrate on which the molecularly imprinted polymer is directly immobilized on the surface is brought into contact with the substrate on which the initiator is immobilized, the redox species, the functional monomer, the crosslinkable monomer, and the measurement substance to be polymerized. The sensor according to (1) or (2), which is a substrate obtained.
(4) The substrate on which the molecularly imprinted polymer is directly immobilized on the surface is brought into contact with the substrate on which the initiator and the redox species are immobilized, the functional monomer, the crosslinkable monomer, and the measurement substance to polymerize. The sensor according to (1) or (2), which is a substrate obtained.
(5) The sensor according to (3) or (4), wherein the functional monomer is a cationic monomer.
(6) The sensor according to any one of (3) to (5), wherein the functional monomer is methacrylic acid or methacryloxyethyl trimethyl ammonium chloride.
(7) The sensor according to any one of (3) to (6), wherein the crosslinkable monomer is methylene bis acrylamide.
(8) The sensor according to any one of (3) to (7), wherein a monomer for adjusting the degree of crosslinking is further brought into contact with the substrate during polymerization.
(9) The sensor according to (8), wherein the crosslinking degree adjusting monomer is acrylamide.
(10) The sensor according to any one of (1) to (9), which does not have a conductive polymer layer on a substrate.
(11) The sensor according to any one of (1) to (10), wherein the substance to be measured is a hormone, an antibacterial agent, or an anticoagulant.
(12) The sensor according to any one of (1) to (11), wherein the substance to be measured is serotonin, vancomycin or heparins.

（１３）（１）から（１２）の何れかに記載のセンサに、測定物質を含有する試料を接触させ、信号の変化を検出することを含む、測定物質の測定方法。
（１４）（２）に記載のセンサに、測定物質を含有する試料を接触させ、信号の変化として電流の変化を検出することを含む、測定物質の測定方法。
（１５）前記試料が全血または血液成分である、（１３）又は（１４）に記載の測定方法。 (13) A method for measuring a measurement substance, comprising bringing a sample containing the measurement substance into contact with the sensor according to any one of (1) to (12) and detecting a change in signal.
(14) A method for measuring a measurement substance, which comprises bringing a sample containing the measurement substance into contact with the sensor according to (2) and detecting a change in current as a change in signal.
(15) The measurement method according to (13) or (14), wherein the sample is whole blood or a blood component.

本発明のセンサによれば、試料にレドックス種をマーカーとして添加することなく、測定物質の測定を行うことができる。また、本発明のセンサによれば、鋳型を固体表面に固定しないため、鋳型の官能基を損ねることなくインプリントでき、導電高分子層を用いないため、鋳型がMIPにアクセスしやすく高速な応答を期待することができ、さらに製造工程が少ないことから製造が簡便である。   According to the sensor of the present invention, it is possible to measure a measurement substance without adding a redox species as a marker to a sample. In addition, according to the sensor of the present invention, since the template is not fixed to the solid surface, imprinting can be performed without damaging the functional group of the template, and the conductive polymer layer is not used. In addition, manufacturing is simple because the number of manufacturing steps is small.

図１は、分子インプリントの原理を示す。FIG. 1 shows the principle of molecular imprinting. 図２は、レドックス種が分子インプリント高分子に固定化されている場合の模式図を示す。FIG. 2 shows a schematic view when the redox species is immobilized on the molecularly imprinted polymer. 図３は、レドックス種が基板に固定化されている場合の模式図を示す。FIG. 3 shows a schematic view when the redox species is immobilized on the substrate. 図４は、分子インプリント高分子固定電極の作製を示す。FIG. 4 shows the preparation of a molecularly imprinted polymer fixed electrode. 図５は、セロトニン（丸）及びＬ−トリプトファン（四角）の濃度に対するフェロセニル基を含むセロトニンインプリント電極における異なる微分パルスボルタンメトリーの陽極電流の依存性を示す。（Ａ）では、フェロセニル基を、ＩＴＯの基板電極に直接導入した。（Ｂ）では、フェロセニル基を、ビニルフェロセンとの共重合によりＭＩＰ内に内在化させた。FIG. 5 shows the dependence of the anodic current of different differential pulse voltammetry at a serotonin imprinted electrode containing ferrocenyl groups on the concentration of serotonin (circles) and L-tryptophan (squares). In (A), the ferrocenyl group was directly introduced into the substrate electrode of ITO. In (B), the ferrocenyl group was internalized in the MIP by copolymerization with vinylferrocene. 図６は、ビニルフェロセンを含むバノマイシンインプリント高分子でグラフト修飾したＩＴＯ電極における電流強度に対するバンコマイシン濃度の影響を示す。FIG. 6 shows the effect of vancomycin concentration on the current intensity at an ITO electrode grafted with vanomycin imprinted polymer containing vinylferrocene. 図７は、フェロセンカルボン酸で修飾し、ヘパリンインプリント高分子でグラフト化したＩＴＯ電極における電流強度に対するヘパリン濃度の影響を示す。FIG. 7 shows the effect of heparin concentration on current intensity in ITO electrodes modified with ferrocene carboxylic acid and grafted with heparin imprinted polymer.

以下、本発明の実施の形態について説明する。
本発明のセンサは、分子インプリント高分子を表面上に直接固定化した基板から構成されるセンサであって、レドックス種が、前記分子インプリント高分子及び／又は前記基板に固定化されていることを特徴とする。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described.
The sensor of the present invention is a sensor comprising a substrate on which a molecularly imprinted polymer is directly immobilized on the surface, wherein a redox species is immobilized on the molecularly imprinted polymer and / or the substrate. It is characterized by

特定の物質（鋳型）とそれに可逆的に結合する機能性モノマーが自己組織した状態で、機能性モノマーを架橋性モノマーと共重合させることで鋳型の分子構造を記憶し、それと特異的に再結合する分子インプリント高分子を合成することができる(図１)。この分子インプリント高分子は、生体高分子に比べると化学的かつ物理的安定性に富み、低コストかつ短時間に調製できる。分子インプリント高分子をセンサ用素子として用いるには、鋳型の特異結合に応じた電気信号などのシグナルを発生させる必要がある。しかし、この方法が確立されていなかったため、分子インプリント高分子のバイオセンサへの応用は進んでいなかった。本発明者は、鋳型と特異反応することで分子インプリント高分子の薄膜内部の空隙の大きさが変化し、さらに、分子インプリント高分子薄膜の中の溶質の通過する速度が著しく変化することを見出し（J.Chem.Eng.Jpn., 34, 1466-1469, 2001）、この現象をゲート効果と命名している。   In the self-assembled state of a specific substance (template) and a functional monomer that reversibly binds to it, the functional monomer is copolymerized with the crosslinkable monomer to store the molecular structure of the template, and specifically recombine with it Molecularly imprinted polymers can be synthesized (Figure 1). This molecularly imprinted polymer is rich in chemical and physical stability as compared to a biopolymer, and can be prepared at low cost and in a short time. In order to use a molecularly imprinted polymer as a sensor element, it is necessary to generate a signal such as an electric signal according to the specific binding of a template. However, since this method has not been established, the application of molecularly imprinted polymers to biosensors has not progressed. In the present inventors, the specific reaction with the template changes the size of the voids inside the thin film of the molecularly imprinted polymer, and furthermore, the passing speed of the solute in the molecularly imprinted polymer thin film significantly changes (J. Chem. Eng. Jpn., 34, 1466-1469, 2001), this phenomenon is named as the gate effect.

本発明においては、レドックス種が、分子インプリント高分子及び／又は前記基板に固定化されている。
レドックス種が固定化された分子インプリント高分子は、機能性モノマーと架橋性モノマーの重合を鋳型とレドックス種の存在下において行うことにより製造することができる。本発明のセンサは、開始剤を固定化した基板に、レドックス種を含むモノマーと機能性モノマーと架橋性モノマーと鋳型（測定物質）とを接触させて重合させることにより製造することができる（第一の製造方法）。例えば、本発明のセンサは、基板（電極など）に開始剤（光重合開始剤など）を固定し、レドックス種を含むモノマー、機能性モノマー、架橋度調整用モノマー、架橋性モノマー及び測定物質（鋳型）を含む溶液に、前記基板を浸し、光重合によりレドックス種を含む測定物質の分子インプリント高分子（MIP）を基板に固定することを含む方法により製造することができる。レドックス種が分子インプリント高分子に固定化されている場合のセンシングの模式図を図２に示す。MIPのサイトに鋳型が特異的に侵入することにより、MIP内の親疎水性または荷電などが変化することにより、レドックス基と電極の間の電子移動が、促進または抑制する機構を持つ。この促進または抑制がそれぞれ酸化還元反応を増加または減少させる。この増加または減少の度合いを測ることにより、試験液内の鋳型の量を定量できる。 In the present invention, the redox species is immobilized on the molecularly imprinted polymer and / or the substrate.
A molecularly imprinted polymer in which a redox species is immobilized can be produced by carrying out the polymerization of a functional monomer and a crosslinking monomer in the presence of a template and a redox species. The sensor of the present invention can be produced by bringing a substrate on which an initiator is immobilized into contact with a monomer containing a redox species, a functional monomer, a crosslinkable monomer, and a template (measurement substance) to polymerize (No. One manufacturing method). For example, in the sensor of the present invention, an initiator (such as a photopolymerization initiator) is fixed to a substrate (such as an electrode), and a monomer containing a redox species, a functional monomer, a crosslinking degree adjusting monomer, a crosslinking monomer, and a measuring substance ( The substrate may be immersed in a solution containing a template, and the method may comprise the step of immobilizing a molecularly imprinted polymer (MIP) of a measurement substance containing a redox species by photopolymerization on the substrate. A schematic view of sensing when the redox species is immobilized on the molecularly imprinted polymer is shown in FIG. The template specifically penetrates the site of MIP, thereby changing the hydrophilicity or the charge or the like in MIP, so that the electron transfer between the redox group and the electrode has a mechanism to promote or suppress. This promotion or suppression respectively increases or decreases the redox reaction. By measuring the degree of increase or decrease, the amount of template in the test solution can be quantified.

レドックス種が固定化された基板は、レドックス種を化学反応により基板に共有結合することにより製造することができる。例えば、本発明のセンサは、開始剤及びレドックス種を固定化した基板に、機能性モノマーと架橋性モノマーと測定物質とを接触させて重合させることにより製造することができる（第二の製造方法）。例えば、本発明のセンサは、基板（電極など）にレドックス種と開始剤（光重合開始剤など）を固定し、機能性モノマー、架橋度調整用モノマー、架橋性モノマー及び測定物質（鋳型）を含む溶液に、前記基板を浸し、光重合により測定物質の分子インプリント高分子（MIP）を基板に固定することを含む方法により製造することができる。レドックス種が基板に固定化されている場合のセンシングの模式図を図３に示す。この場合、電極電位の変動によって、レドックス種の酸化還元反応が発生する。分子インプリント高分子のサイトに鋳型が特異的に浸入し、MIPの親疎水性、荷電などが変化することにより、電極に固定されたレドックス種の酸化還元反応収率や速度にも変化が生じる。この性質を利用すれば、酸化還元電流を測定することにより、鋳型の分子インプリント高分子への特異結合を検出でき、試験液内の鋳型の量を定量することができる。   The substrate on which the redox species are immobilized can be produced by covalently bonding the redox species to the substrate by a chemical reaction. For example, the sensor of the present invention can be produced by contacting and polymerizing a functional monomer, a crosslinkable monomer, and a measurement substance on a substrate on which an initiator and a redox species are immobilized (second production method) ). For example, in the sensor of the present invention, a redox species and an initiator (such as a photopolymerization initiator) are fixed to a substrate (such as an electrode), and a functional monomer, a monomer for adjusting the degree of crosslinking, a crosslinking monomer, and a measuring substance (template) It can be manufactured by a method including immersing the substrate in a solution containing it and immobilizing the molecularly imprinted polymer (MIP) of the measurement substance on the substrate by photopolymerization. A schematic view of sensing when the redox species is immobilized on a substrate is shown in FIG. In this case, the redox potential of the redox species occurs due to the fluctuation of the electrode potential. The template specifically penetrates the site of the molecularly imprinted polymer, and changes in the hydrophilicity / hydrophobicity, charge and the like of the MIP cause changes in the yield and speed of the redox reaction of the redox species immobilized on the electrode. By utilizing this property, by measuring the redox current, it is possible to detect the specific binding of the template to the molecularly imprinted polymer, and to quantify the amount of template in the test solution.

本発明のセンサの製造方法は、上記の第一及び第二の製造方法の組み合わせてもよい。即ち、本発明のセンサは、開始剤及びレドックス種を固定化した基板に、レドックス種と機能性モノマーと架橋性モノマーと鋳型（測定物質）とを接触させて重合させることにより製造することもできる。   The method of manufacturing the sensor of the present invention may be a combination of the first and second manufacturing methods described above. That is, the sensor of the present invention can also be produced by contacting a substrate on which an initiator and a redox species are immobilized with a redox species, a functional monomer, a crosslinkable monomer and a template (measurement substance) and polymerizing the substrate. .

レドックス種としては、レドックス性のフェロセニル基を有する化合物（例えば、フェロセンカルボン酸、アミノフェロセン、ビニルフェロセン、メルカプトアルキルフェロセンなど）、ベンゾキノン基を持つ化合物（アルキル基導入ベンゾキノンなど）、ルテニウム錯体（テトラクロロルテニウム）を導入した化合物、オスミウム錯体、ヘミン化合物、チトクロームCなどなどを使用することができる。   As a redox species, a compound having a redox property ferrocenyl group (eg, ferrocene carboxylic acid, aminoferrocene, vinylferrocene, mercaptoalkylferrocene etc.), a compound having a benzoquinone group (alkyl group introduced benzoquinone etc.), a ruthenium complex (tetrachloro) Compounds introduced with ruthenium), osmium complexes, hemin compounds, cytochrome C and the like can be used.

上記の通り、分子インプリント高分子を固定化した基板は、例えば、開始剤を固定化した基板に機能性モノマーと架橋性モノマーと測定物質（鋳型）を接触させて重合させることによって製造することができる。   As described above, the substrate on which the molecularly imprinted polymer is immobilized is produced, for example, by contacting the substrate on which the initiator is immobilized with the functional monomer, the crosslinkable monomer, and the measuring substance (template) to polymerize. Can.

本発明で用いる機能性モノマーは、特に限定されず、アクリル酸、メタクリル酸、イタコン酸、ビニルフェニルボロン酸、アクリルアミドボロン酸、2-アクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸、2-（トリフルオロメチル）アクリル酸などを使用することができる。また、ヘパリンを測定するセンサを製造するためには、カチオン性モノマーを使用することが好ましい。ヘパリンは、スルホン酸基を多数含むため、カチオン性の機能性モノマーを使用することにより、ヘパリンと特異結合する分子インプリント高分子を合成することが可能になる。カチオン性モノマーとしては、１〜３級アミノ基含有（メタ）アクリルアミド、１〜３級アミノ基含有（メタ）アクリレート、４級アンモニウム塩基含有（メタ）アクリルアミド、４級アンモニウム塩基含有（メタ）アクリレート、ジアリルジアルキルアンモニウムハライド等のように、分子内にカチオン性基を有するものである。３級アミノ基含有（メタ）アクリルアミドとしては、ジメチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド、ジエチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリルアミド、ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリルアミド等が挙げられる。３級アミノ基含有（メタ）アクリレートとしては、ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリレート、ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート、ジエチルアミノプロピル（メタ）アクリレート、ジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレート等が挙げられる。また、１〜２級アミノ基含有（メタ）アクリルアミドとしては、アミノエチル（メタ）アクリルアミドなどの１級アミノ基含有（メタ）アクリルアミド、或は、メチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、エチルアミノエチル（メタ）アクリルアミド、ｔ−ブチルアミノエチル（メタ）アクリルアミドなどの２級アミノ基含有（メタ）アクリルアミド等が挙げられる。１〜２級アミノ基含有（メタ）アクリレートとしては、アミノエチル（メタ）アクリレートなどの１級アミノ基含有（メタ）アクリレート、或は、メチルアミノエチル（メタ）アクリレート、エチルアミノエチル（メタ）アクリレート、ｔ−ブチルアミノエチル（メタ）アクリレートなどの２級アミノ基含有（メタ）アクリレート等が挙げられる。４級アンモニウム塩基含有（メタ）アクリルアミドおよび４級アンモニウム塩基含有（メタ）アクリレートとしては、３級アミノ基含有（メタ）アクリルアミド又は３級アミノ基含有（メタ）アクリレートを、塩化メチル、塩化ベンジル、硫酸メチル、エピクロルヒドリンなどの４級化剤で４級化したモノ４級塩基含有モノマーが挙げられる。具体的には、アクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド、アクリルアミドプロピルベンジルジメチルアンモニウムクロリド、メタクリロイロキシエチルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、アクリロイロキシエチルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、（メタ）アクリロイルアミノエチルトリメチルアンモニウムクロリド、（メタ）アクリロイルアミノエチルトリエチルアンモニウムクロリド、（メタ）アクリロイロキシエチルトリメチルアンモニウムクロリド、（メタ）アクリロイロキシエチルトリエチルアンモニウムクロリドなどが挙げられる。上記の中でも、カチオン性モノマーの具体例としては、例えば、メタクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライド、ビニルピリジン、ジエチルアミノエチルメタクリレートなどがある。これらを１種または２種以上を組み合わせて用いてもよい。   The functional monomer used in the present invention is not particularly limited, and acrylic acid, methacrylic acid, itaconic acid, vinylphenylboronic acid, acrylamidoboronic acid, 2-acrylamido-2-methylpropanesulfonic acid, 2- (trifluoromethyl) Acrylic acid etc. can be used. It is also preferred to use cationic monomers to produce a sensor that measures heparin. Since heparin contains a large number of sulfonic acid groups, the use of a cationic functional monomer makes it possible to synthesize a molecularly imprinted polymer that specifically binds to heparin. Examples of the cationic monomer include primary to tertiary amino group-containing (meth) acrylamide, primary to tertiary amino group-containing (meth) acrylate, quaternary ammonium base-containing (meth) acrylamide, quaternary ammonium base-containing (meth) acrylate, It has a cationic group in the molecule, such as diallyldialkyl ammonium halide. Examples of tertiary amino group-containing (meth) acrylamides include dimethylaminoethyl (meth) acrylamide, dimethylaminopropyl (meth) acrylamide, diethylaminoethyl (meth) acrylamide, diethylaminopropyl (meth) acrylamide, dialkylaminoalkyl (meth) acrylamide and the like Can be mentioned. Examples of tertiary amino group-containing (meth) acrylates include dimethylaminoethyl (meth) acrylate, dimethylaminopropyl (meth) acrylate, diethylaminoethyl (meth) acrylate, diethylaminopropyl (meth) acrylate, dialkylaminoalkyl (meth) acrylate and the like Can be mentioned. In addition, as the primary to secondary amino group-containing (meth) acrylamide, primary amino group-containing (meth) acrylamide such as aminoethyl (meth) acrylamide, or methylaminoethyl (meth) acrylamide, ethylaminoethyl 2.) A secondary amino group-containing (meth) acrylamide such as acrylamide, t-butylaminoethyl (meth) acrylamide, etc. may be mentioned. Primary to secondary amino group-containing (meth) acrylates include primary amino group-containing (meth) acrylates such as aminoethyl (meth) acrylate, or methylaminoethyl (meth) acrylate and ethylaminoethyl (meth) acrylate And secondary amino group-containing (meth) acrylates such as t-butylaminoethyl (meth) acrylate. Examples of quaternary ammonium base-containing (meth) acrylamide and quaternary ammonium base-containing (meth) acrylate include tertiary amino group-containing (meth) acrylamide or tertiary amino group-containing (meth) acrylate; methyl chloride, benzyl chloride, sulfuric acid Mono quaternary base-containing monomers quaternized with a quaternizing agent such as methyl and epichlorohydrin can be mentioned. Specifically, acrylamidopropyl trimethyl ammonium chloride, acrylamido propyl benzyl dimethyl ammonium chloride, methacryloyloxyethyl dimethyl benzyl ammonium chloride, acryloyloxy ethyl dimethyl benzyl ammonium chloride, (meth) acryloylaminoethyl trimethyl ammonium chloride, (meth) acryloyl Aminoethyltriethylammonium chloride, (meth) acryloyloxyethyltrimethylammonium chloride, (meth) acryloyloxyethyltriethylammonium chloride and the like can be mentioned. Among the above, specific examples of the cationic monomer include, for example, methacryloxyethyl trimethyl ammonium chloride, vinyl pyridine, diethylaminoethyl methacrylate and the like. You may use these 1 type or in combination of 2 or more types.

本発明で用いる架橋性モノマーとしては、例えば、メチレンビスアクリルアミド、１，４−ブチルジアクリレート、１，６−ヘキサンジオールジメタクリレート、ポリエチレングリコールジメタクリレート、テトラエチレングリコールジメタクリレート、エチレングリコールジメタクリレート、ジエチレングリコールジメタクリレート、トリエチレングリコールジメタクリレート、ノナエチレングリコールジメタクリレート、ジビニルベンゼン、ポリプロピレングリコールジメタクリレート、ネオペンチルグリコールジメタクリレート、ペンタエリスリトールジメタクリレート、トリメチロールプルパントリメタクリレート、ペンタエリスリトールトリメタクリレート、ペンタエリスリトールテトラメタクリレート、ジペンタエリスリトールヘキサメタクリレート、エポキシアクリレート、ポリエステルアクリレート、ウレタンアクリレートなどが挙げられる。上記の中でも特に好ましくは、例えば、メチレンビスアクリルアミド、ポリエチレングリコールジメタクリレートなどがある。これらを１種または２種以上を組み合わせて用いてもよい。   As the crosslinkable monomer used in the present invention, for example, methylene bis acrylamide, 1,4-butyl diacrylate, 1,6-hexanediol dimethacrylate, polyethylene glycol dimethacrylate, tetraethylene glycol dimethacrylate, ethylene glycol dimethacrylate, diethylene glycol Dimethacrylate, triethylene glycol dimethacrylate, nona ethylene glycol dimethacrylate, divinylbenzene, polypropylene glycol dimethacrylate, neopentyl glycol dimethacrylate, pentaerythritol dimethacrylate, trimethylol pullupane trimethacrylate, pentaerythritol trimethacrylate, pentaerythritol tetramethacrylate , Dipentaerythritol Kisa methacrylate, epoxy acrylate, polyester acrylate, and urethane acrylate. Among the above, particularly preferred are, for example, methylene bis acrylamide, polyethylene glycol dimethacrylate and the like. You may use these 1 type or in combination of 2 or more types.

重合の際には、架橋度調整用モノマーを使用することができる。架橋度調整用モノマーとしては、アクリルアミドなどを使用することができる。これらを１種または２種以上を組み合わせて用いてもよい。   At the time of polymerization, a monomer for adjusting the degree of crosslinking can be used. Acrylamide etc. can be used as a monomer for crosslinking degree adjustment. You may use these 1 type or in combination of 2 or more types.

本発明のセンサを用いては測定する測定物質は特に限定されず、ホルモン（セロトニン、ドーパミン、アドレナリン、アセチルコリン、γ-アミノ酪酸など）、抗菌剤（バンコマイシン、テイコプラニンなど）、抗凝固薬、麻酔薬、農薬、抗がん剤（ゲフィチニブ、フルオロウラシル、メトトレキサートなど）など任意の物質を測定することができる。   The substance to be measured using the sensor of the present invention is not particularly limited, and hormones (serotonin, dopamine, adrenalin, acetylcholine, γ-aminobutyric acid, etc.), antibacterial agents (vancomycin, teicoplanin, etc.), anticoagulants, anesthetics It is possible to measure any substance such as pesticides, anticancer agents (gefitinib, fluorouracil, methotrexate, etc.).

抗凝固薬としては、ヘパリン、ヘパリン類似物質（低分子量ヘパリンなどを含む）、ワルファリン、アセノクマロール、フェニンジオンなどを挙げることができるが、特にこれらに限定されるものではない。なお、本明細書の実施例で用いたヘパリンは、未分画ヘパリンで分子量範囲は7000〜25000（大部分は１万〜２万）のものであるが、本発明では未分画ヘパリンのみならず、低分子量ヘパリン（分子量4000〜8000）を測定対象とすることもできる。   Examples of anticoagulants include heparin, heparin analogues (including low molecular weight heparin and the like), warfarin, acenocoumarol, phenindione and the like, but are not particularly limited thereto. The heparin used in the examples of the present specification is an unfractionated heparin having a molecular weight range of 7,000 to 25,000 (mostly 10,000 to 20,000), but in the present invention, only unfractionated heparin is used. Alternatively, low molecular weight heparin (molecular weight of 4000 to 8000) can also be measured.

本発明のセンサとしては、電気化学的センサでもよいし、非電気化学的センサでもよい。分子インプリント高分子を固定化した基板として、分子インプリント高分子を固定化した電極を使用することにより、電気化学的センサを構成することができる。また、非電気化学的センサとしては、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサ（例えばBIACORE）、水晶発振子マイクロバランス（ＱＣＭ）センサなどを構成することができる。   The sensor of the present invention may be an electrochemical sensor or a non-electrochemical sensor. An electrochemical sensor can be configured by using an electrode on which the molecularly imprinted polymer is immobilized as a substrate on which the molecularly imprinted polymer is immobilized. In addition, as a non-electrochemical sensor, a surface plasmon resonance (SPR) sensor (for example, BIACORE), a quartz crystal microbalance (QCM) sensor, or the like can be configured.

本発明の一例によれば、ヘパリンを電気化学的に測定するヘパリンセンサが提供される。鋳型であるヘパリンナトリウム、機能性モノマーであるメタクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライド、親水性モノマーであるアクリルアミドを水に溶解し、架橋性モノマーであるメチレンビスアクリルアミドを有機溶媒のジメチルホルムアミドに溶解した。両液を混合し、準安定溶液にして、分子インプリント高分子の合成に用いることができる。電極に予め、ラジカル重合剤を共有結合によって固定し、上記の準安定溶液に浸し、光照射してグラフト重合することによって分子インプリント高分子の薄膜を形成することができる（図４）。なお、図４においては、レドックス種については図示していないが、上記の通り、本発明においてはレドックス種が、分子インプリント高分子及び／又は基板に固定化されている。   According to one example of the present invention, a heparin sensor for electrochemically measuring heparin is provided. Heparin sodium as a template, methacryloxyethyl trimethyl ammonium chloride as a functional monomer, and acrylamide as a hydrophilic monomer were dissolved in water, and methylene bis acrylamide as a crosslinkable monomer was dissolved in dimethylformamide as an organic solvent. Both solutions can be mixed to form a metastable solution and used for the synthesis of molecularly imprinted polymers. A radically polymerizing agent is fixed in advance by covalent bonding to an electrode, immersed in the above metastable solution, and irradiated with light for graft polymerization to form a thin film of molecularly imprinted polymer (FIG. 4). Although the redox species are not illustrated in FIG. 4, as described above, in the present invention, the redox species is immobilized on the molecularly imprinted polymer and / or the substrate.

本発明によれば、上記したセンサに、測定物質を含有する試料を接触させ、信号の変化を検出することによって、測定物質を測定することができる。試料としては、全血または血液成分（例えば、血漿又は血清など）を使用することができる。   According to the present invention, the measurement substance can be measured by bringing the above-described sensor into contact with a sample containing the measurement substance and detecting a change in signal. As a sample, whole blood or a blood component (eg, plasma or serum etc.) can be used.

本発明の分子インプリント固定電極をセンサとして用いる場合は、上記電極を対極、参照電極と共に浸し、試験液に浸し、電位を印加して、得られる酸化還元電流（電流の変化）を測定する方法を採用することができる。本発明のセンサは、体外循環用の装置に装着することができる。例えば、本発明のセンサに、灌流血液を接触させ、変化を検出することによって、血液中の測定物質を測定することもできる。   When the molecularly imprinted fixed electrode of the present invention is used as a sensor, the method of immersing the above electrode together with a counter electrode and a reference electrode, immersing in a test solution, applying a potential, and measuring the resulting redox current (change in current) Can be adopted. The sensor of the present invention can be attached to a device for extracorporeal circulation. For example, it is also possible to measure the measurement substance in blood by bringing perfused blood into contact with the sensor of the present invention and detecting a change.

以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は以下の実施例により特に限定されるものではない。   The present invention will be more specifically described by the following examples, but the present invention is not particularly limited by the following examples.

（１）方法
既報(Y. Yoshimi et al., Analyst 138, 5121-5128 (2013))の手順によって、インジウム・スズ酸化物（ITO）ガラス電極の表面に、２通りの方法で、レドックス性のフェロセニル基と、セロトニンに対するMIP薄膜層を共に固定した電極を作製した。 (1) Method According to the procedure of the previous report (Y. Yoshimi et al., Analyst 138, 5121-5128 (2013)), the surface of indium-tin-oxide (ITO) glass electrode was redoxed in two ways. An electrode was prepared in which a ferrocenyl group and an MIP thin film layer for serotonin were fixed together.

（Ａ−１）フェロセニル基をITO表面に直接固定する方法（鋳型がセロトニンの場合）
インジウム・スズ酸化物電極（ITO）を3-アミノプロピルトリメトキシシラン10質量％トルエン溶液に浸して８０℃に加熱してアミノ化し、次いで、0.2 M の水溶性カルボジイミドとともに0.09Mのフェロセンカルボン酸と0.01 Mの4-クロロメチル安息香酸を含んだジメチルホルムアミド溶液に浸した。これを0.075 g/mLのN,N-ジメチルジチオカルバミド酸ナトリウムを含んだエタノール溶液に浸し、フェロセニル基と光重合開始剤であるジメチルジチオカルバミド酸ベンジル基を共に導入されたITO（レドックス基と開始剤を固定した電極）を得た。一方、セロトニン（鋳型） 360 mg、メタクリル酸（機能性モノマー）360 mg、アクリルアミド（架橋度調整用モノマー） 360 mg、メチレンビスアクリルアミド（架橋性モノマー）1,000 mgを水 (6ｍL)-ジメチルホルムアミド（0.9 ｍL）混合溶媒に溶かした。この液にレドックス基と開始剤を固定した電極を浸した。そこに紫外線を照射し、グラフト重合によってMIP固定電極を得た。 (A-1) A method of directly fixing a ferrocenyl group to an ITO surface (when the template is serotonin)
Indium tin oxide electrode (ITO) is immersed in a 10% by weight solution of 3-aminopropyltrimethoxysilane and heated to 80 ° C. for amination, and then with 0.09 M ferrocene carboxylic acid with 0.2 M water-soluble carbodiimide It was immersed in a dimethylformamide solution containing 0.01 M 4-chloromethylbenzoic acid. This is immersed in an ethanol solution containing 0.075 g / mL sodium N, N-dimethyldithiocarbamate, and a ferrocenyl group and an ITO having a photopolymerization initiator dimethyldithiocarbamic acid benzyl group introduced together (redox group and initiation The electrode on which the agent was fixed was obtained. On the other hand, 360 mg of serotonin (template), 360 mg of methacrylic acid (functional monomer), 360 mg of acrylamide (monomer for adjusting crosslinking degree), 1,000 mg of methylenebisacrylamide (crosslinking monomer) in water (6 mL)-dimethylformamide (0.9) mL) dissolved in mixed solvent. The electrode which fixed the redox group and the initiator was immersed in this liquid. The resultant was irradiated with ultraviolet light and graft polymerization was performed to obtain a MIP fixed electrode.

（Ａ−２）フェロセニル基をITO表面に直接固定する方法（鋳型がヘパリンの場合）
抗凝固剤ヘパリン（鋳型） 80 mg、メタクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライド（機能性モノマー） 225 mg、アクリルアミド（架橋度調整用モノマー） 250 mg、メチレンビスアクリルアミド（架橋性モノマー） 250 mgを水（1 ｍL）-ジメチルホルムアミド(3 ｍL)混合溶媒に溶かした。この液にレドックス基と光重合開始剤を固定した電極を浸した。そこに紫外線を照射し、グラフト重合によってMIP固定電極を得た。 (A-2) A method of directly fixing a ferrocenyl group to an ITO surface (when the template is heparin)
Anticoagulant heparin (template) 80 mg, methacryloxyethyl trimethyl ammonium chloride (functional monomer) 225 mg, acrylamide (monomer for adjusting the degree of crosslinking) 250 mg, methylene bisacrylamide (crosslinking monomer) 250 mg water (1 mL) ) -Dimethylformamide (3 mL) was dissolved in a mixed solvent. The electrode which fixed the redox group and the photoinitiator was immersed in this liquid. The resultant was irradiated with ultraviolet light and graft polymerization was performed to obtain a MIP fixed electrode.

（Ｂ−１）MIP層の中にフェロセニル基を含ませる方法（鋳型がセロトニンの場合）
前報(Y. Yoshimi et al., Analyst 138, 5121-5128 (2013))の手順で開始剤のみを固定したITOを、レドックス性のビニルフェロセン 90 mgとセロトニン（鋳型） 360 mg、メタクリル酸（機能性モノマー） 360 mg、アクリルアミド（架橋度調整用モノマー） 360 mg、メチレンビスアクリルアミド（架橋性モノマー） 1,000 mgを水（6 ｍL）-ジメチルホルムアミド（0.9 ｍL）混合溶媒に溶かした。この中に重合開始剤ジメチルジチオカルバミド酸ベンジル基のみを導入したITOを浸した。そこに紫外線を照射し、グラフト重合によってMIP固定電極を得た。 (B-1) Method of including ferrocenyl group in MIP layer (when the template is serotonin)
ITO, on which only the initiator was immobilized by the procedure described in the previous report (Y. Yoshimi et al., Analyst 138, 5121-5128 (2013)), 90 mg of redox vinylferrocene and 360 mg of serotonin (template), methacrylic acid ( 360 mg of the functional monomer, 360 mg of acrylamide (monomer for adjusting the degree of crosslinking), and 1,000 mg of methylenebisacrylamide (crosslinking monomer) were dissolved in a water (6 mL) -dimethylformamide (0.9 mL) mixed solvent. Into this, ITO in which only a polymerization initiator, dimethyldithiocarbamic acid benzyl group was introduced was immersed. The resultant was irradiated with ultraviolet light and graft polymerization was performed to obtain a MIP fixed electrode.

（Ｂ−２）MIP層の中にフェロセニル基を含ませる方法（鋳型がバンコマイシンの場合）
セロトニン 360 mgの代わりに抗菌剤バンコマイシン120 mgを使用する以外は、上記（Ｂ−１）と同様にしてMIP固定電極を得た。 (B-2) Method of including ferrocenyl group in MIP layer (when the template is vancomycin)
An MIP fixed electrode was obtained in the same manner as (B-1) above, except that 120 mg of the antibacterial agent vancomycin was used instead of 360 mg of serotonin.

上記（Ａ−１）及び（Ｂ−１）で得られたMIP電極を作用極として、0.1Mの塩化ナトリウムと0.05 Mのリン酸緩衝塩（pH 7.4）を含むセロトニン水溶液中での微分パルスボルタメトリー（DPV）を行った。得られた酸化電流とセロトニン濃度の関係を観察した。また、上記（Ａ−２）で得られたMIP電極については、セロトニン水溶液（0-10 mM）の代わりにヘパリン水溶液（0-50 ｍM）を用いて同様に観察し、上記（Ｂ−２）で得られたMIP電極については、セロトニン水溶液の代わりにバンコマイシン水溶液（0-4 mM）を用いて同様に観察した。   Derivative pulse voltamer in an aqueous solution of serotonin containing 0.1 M sodium chloride and 0.05 M phosphate buffer (pH 7.4) with the MIP electrode obtained in (A-1) and (B-1) as a working electrode The measurements (DPV) were performed. The relationship between the obtained oxidation current and the serotonin concentration was observed. Moreover, about the MIP electrode obtained by said (A-2), it observes similarly using heparin aqueous solution (0-50 mM) instead of a serotonin aqueous solution (0-10 mM), and said (B-2) The MIP electrode obtained in the above was similarly observed using vancomycin aqueous solution (0-4 mM) instead of the serotonin aqueous solution.

（２）結果及び考察
上記（Ａ−１）及び（Ｂ−１）の二つの方法でセロトニンを鋳型として作られたフェロセニル基含有MIP固定電極における酸化電流と、セロトニン濃度およびそれに構造が類似するL-トリプトファンとの関係を図５に示す。いずれの方法で作られた電極においても、酸化電流はセロトニン濃度の増加と共に増大するのに対し、L-トリプトファン濃度には依存しなかった。いずれの方法で作られたMIPにおいても、鋳型とMIP中のサイトの特異的な反応が、フェロセニル基とITO電極との間の電子移動に強く影響することを示している。 (2) Results and discussion: Oxidation current in the ferrocenyl group-containing MIP fixed electrode made by using serotonin as a template by the two methods (A-1) and (B-1) above, L having a serotonin concentration and structure similar thereto The relationship with-tryptophan is shown in FIG. In the electrodes produced by either method, the oxidation current increased with the increase of the serotonin concentration, but was not dependent on the L-tryptophan concentration. In MIPs produced by any method, it is shown that the specific reaction between the template and the site in the MIP strongly influences the electron transfer between the ferrocenyl group and the ITO electrode.

また鋳型を抗菌剤バンコマイシンに変えて（Ｂ−２）の手順で作製されたMIP固定電極を用いて同様にDPVを行うと、図６に示すようにバンコマイシン濃度の増大に伴って、酸化電流は増加した。また鋳型を抗凝固剤ヘパリン、機能性モノマーをメタクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライドに替えて(Ａ−２)の手順で作製されたMIP固定電極を用いると、得られる電流は図７のようにヘパリンの濃度の増加に伴って減少した。   When DPV is similarly performed using the MIP fixed electrode prepared in the procedure of (B-2) by changing the template to the antibacterial agent vancomycin, as shown in FIG. 6, the oxidation current is increased with an increase in the concentration of vancomycin. Increased. Also, when using the MIP fixed electrode prepared according to the procedure of (A-2) in which the template is anticoagulant heparin and the functional monomer is changed to methacryloxyethyl trimethyl ammonium chloride, the obtained current is as shown in FIG. It decreases as the concentration increases.

ヘパリンもバンコマイシンも血液中濃度のモニタリングが有効とされる治療薬である （日本化学療法学会TDMガイドライン作製委員会ほか編, "抗菌剤TDMガイドライン", pp. 19-35, 日本化学療法学会, 東京, 2012；及び北口勝康ら, 臨床麻酔, 25 (Suppl), 311-322, 2001）。レドックス基を内在したMIP固定電極は、このような薬剤のリエージェントレスなモニタリングセンサとして期待できることが示された。   Both heparin and vancomycin are effective therapeutic agents for monitoring blood levels (The Japan Chemotherapy Association TDM Guideline Preparation Committee et al., Ed., "Antimicrobial Agents TDM Guidelines", pp. 19-35, The Japan Chemotherapy Association, Tokyo , 2012; and Kitaguchi Katsuyasu et al., Clinical Anesthesia, 25 (Suppl), 311-322, 2001). It has been shown that the MIP fixed electrode containing a redox group can be expected as a agent-less monitoring sensor of such a drug.

Claims (15)

分子インプリント高分子を表面上に直接固定化した基板から構成されるセンサであって、レドックス種が、前記分子インプリント高分子及び／又は前記基板に固定化されている前記センサ。 A sensor comprising a substrate on which a molecularly imprinted polymer is directly immobilized on a surface, wherein the redox species is immobilized on the molecularly imprinted polymer and / or the substrate. 基板が電極である、請求項１に記載のセンサ。 The sensor according to claim 1, wherein the substrate is an electrode. 分子インプリント高分子を表面上に直接固定化した基板が、開始剤を固定化した基板に、レドックス種と機能性モノマーと架橋性モノマーと測定物質とを接触させて重合させることにより得られる基板である、請求項１又は２に記載のセンサ。 A substrate obtained by immobilizing a molecularly imprinted polymer directly on the surface and contacting the substrate on which the initiator is immobilized with a redox species, a functional monomer, a crosslinkable monomer, and a measurement substance and polymerizing the substrate The sensor according to claim 1 or 2, which is 分子インプリント高分子を表面上に直接固定化した基板が、開始剤及びレドックス種を固定化した基板に、機能性モノマーと架橋性モノマーと測定物質とを接触させて重合させることにより得られる基板である、請求項１又は２に記載のセンサ。 A substrate obtained by immobilizing a molecularly imprinted polymer directly on the surface, bringing a functional monomer, a crosslinkable monomer, and a measurement substance into contact with a substrate on which an initiator and a redox species are immobilized and polymerizing the substrate The sensor according to claim 1 or 2, which is 機能性モノマーが、カチオン性モノマーである、請求項３又は４に記載のセンサ。 The sensor according to claim 3 or 4, wherein the functional monomer is a cationic monomer. 機能性モノマーが、メタクリル酸、又はメタクリロキシエチルトリメチルアンモニウムクロライドである、請求項３から５の何れか一項に記載のセンサ。 The sensor according to any one of claims 3 to 5, wherein the functional monomer is methacrylic acid or methacryloxyethyl trimethyl ammonium chloride. 架橋性モノマーが、メチレンビスアクリルアミドである、請求項３から６の何れか一項に記載のセンサ。 The sensor according to any one of claims 3 to 6, wherein the crosslinking monomer is methylene bis acrylamide. 重合の際に、さらに架橋度調整用モノマーを基板に接触させる、請求項３から７の何れか一項に記載のセンサ。 The sensor according to any one of claims 3 to 7, wherein a monomer for adjusting the degree of crosslinking is further brought into contact with the substrate during polymerization. 架橋度調整用モノマーがアクリルアミドである、請求項８に記載のセンサ。 The sensor according to claim 8, wherein the crosslinking degree adjusting monomer is acrylamide. 基板上に導電性高分子層を有さない、請求項１から９の何れか一項に記載のセンサ。 The sensor according to any one of the preceding claims, wherein the sensor does not have a conductive polymer layer on the substrate. 測定物質が、ホルモン、抗菌剤、又は抗凝固薬である、請求項１から１０の何れか一項に記載のセンサ。 The sensor according to any one of claims 1 to 10, wherein the substance to be measured is a hormone, an antibacterial agent, or an anticoagulant. 測定物質が、セロトニン、バンコマイシン、又はヘパリン類である、請求項１から１１の何れか一項に記載のセンサ。 The sensor according to any one of claims 1 to 11, wherein the substance to be measured is serotonin, vancomycin or heparins. 請求項１から１２の何れか一項に記載のセンサに、測定物質を含有する試料を接触させ、信号の変化を検出することを含む、測定物質の測定方法。 A method for measuring a measurement substance, comprising bringing a sample according to any one of claims 1 to 12 into contact with a sample containing the measurement substance, and detecting a change in signal. 請求項２に記載のセンサに、測定物質を含有する試料を接触させ、信号の変化として電流の変化を検出することを含む、測定物質の測定方法。 A method of measuring a measurement substance, comprising bringing a sensor according to claim 2 into contact with a sample containing the measurement substance and detecting a change in current as a change in signal. 前記試料が全血または血液成分である、請求項１３又は１４に記載の測定方法。 The measurement method according to claim 13 or 14, wherein the sample is whole blood or a blood component.
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