JP6479777B2 - 生物学的に活性な特異的カーゴペプチドと結合したヒト由来の細胞透過性ペプチドの構造、製造および使用 - Google Patents
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Description
本明細書にはASCII形式で電子的に提出した配列表が含まれており、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。2015年9月16日作成のかかるアスキーファイルのコピーファイル名は89352-8002.WO00_SL.txtであり、サイズは180,964バイトである。
本明細書に開示する実施形態は、一般に、細胞透過性ペプチド複合体を投与することによってさまざまな状態または疾患を治療するための組成物および方法に関し、特に、限定されるわけではないが非限定的に、その形態が、ヒトホメオボックス(HOX)遺伝子および細胞透過化特性を備えるホメオドメインを含有する他のヒト遺伝子によりコードされるホメオドメインのアミノ酸配列に由来するペプチドを使用した、融合タンパク質またはタンパク質/核酸複合体であることに関する。より詳細には、諸実施形態は、1以上の機能性もしくは調節性のペプチドまたはタンパク質に連結された、ヒトホメオドメインまたは多様体またはその一部を含む送達系に関する。これらのペプチドにより、組織、細胞および細胞の核への侵入が促進されるため、生物学的に活性な第2の領域、すなわち「カーゴ(積み荷)」を含んだ融合タンパク質または複合体を治療のための作用部位に到達させることができる。
(a)HOX C12およびHOX D12のどちらか1つのHOX遺伝子の、アミノ酸60個からなるドメインまたはその多様性部分を含む第1の領域、および
(b)かかる第1の領域に非人工的には会合していない第2の領域を含み、ここで、少なくとも第1の領域は非変性である。
(a)細胞透過化能力を有するヒトホメオドメインを含む第1の領域と、
(b)これを連結して、かかる第1の領域に非人工的には会合していない、機能酵素などのタンパク質を含む第2の領域とを含むことができる。
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLL
である。
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVV
である。
(a)宿主細胞内の発現ベクターから前記複合体を発現させる条件下で宿主細胞を培養すること、および
(b)前記複合体を回収することを含み、これにおいて、回収は、
(i)アミノ酸尾部または別の特異的リガンドを前記複合体に融合させ、ここで、尾部は、少なくとも1つの基質に結合することができるが別の基質には結合せず、また、前記複合体または融合タンパク質は、少なくとも1つの基質に尾部を介して結合させられ、かつ、前記宿主細胞の構成要素はこの基質に結合しない、および
(ii)前記複合体および残りの宿主細胞構成要素を別の基質と接触させ、その別の基質に前記複合体は結合しないが残りの宿主細胞構成要素は結合するようにすることを含む、複合体または融合タンパク質の調製方法である。
(i)プロモーターに機能的に連結され、融合タンパク質をコードする核酸を含む発現ベクターにより形質転換した宿主細胞を培養し、これにおいて、
(a)第1の領域は、HOXペプチドまたは他のヒトホメオドメインペプチドを含み、
(b)前記第1の領域に非人工的には会合していない第2の領域は、前記宿主細胞内の発現ベクターから前記融合タンパク質を発現させる条件下で、ペプチドまたはタンパク質を含むこと、および
(ii)前記融合タンパク質を回収し、かかる回収方法は、アミノ酸尾部または別のリガンドを前記複合体に融合させることを含み、ここで、尾部は、少なくとも1つの基質に結合することができるが別の基質には結合せず、また、前記複合体を少なくとも1つの基質に尾部を介して結合させ宿主細胞の構成要素がこの基質に結合しないようにすること、および、前記複合体を別の基質と接触させ、その別の基質に前記複合体は結合しないが残りの宿主細胞の構成要素は結合するようにすることを含む、複合体または融合タンパク質の調製方法である。
(1)ヒトHOX遺伝子、または(2)配列番号1〜19のいずれかに記載の配列を有する他のヒト遺伝子に由来する構造を含んでおり、これにおいて、1〜20、1〜15、または1〜10個のアミノ酸残基が置換、欠失、付加、および/または挿入されている第1の領域、および
第2の領域は、第1の領域に非人工的には会合していない、機能性または調節性のポリペプチドまたはタンパク質であること、を含む。さまざまな実施形態では、第2の領域は、NBDペプチド、PC1 CTT由来p200、PC1 CTT由来p21、グルコセレブロシダーゼ、アルファ-L-イズロニダーゼ、イズロニデート(iduronidate)-2-スルファターゼ、網膜のグアニル酸シクラーゼ、ZF6xHunt-Kox-1ジンクフィンガーペプチド構成体、ZF12xHunt-Kox-1ジンクフィンガーペプチド構成体、およびZF18xHunt-Kox-1ジンクフィンガーペプチド構成体からなる群から選択される。
(1)ヒトHOX遺伝子、または(2)配列番号1〜19のいずれかに記載の配列を有する他のヒト遺伝子に由来する構造を含んでおり、これにおいて、1〜20、1〜15、または1〜10個のアミノ酸残基が置換、欠失、付加、および/または挿入されており、また、前記アミノ酸は、(i)ヒトホメオドメイン活性を有するアミノ酸、(ii)ヒトHOX遺伝子または細胞透過化特性を備えるホメオドメインを含有する他のヒト遺伝子のヘリックス領域が持つ細胞透過化活性を維持するアミノ酸である、第1の領域、および
第2の領域は、第1の領域に非人工的には会合していない、機能性または調節性のポリペプチドまたはタンパク質であることを含む。さまざまな実施形態では第2の領域は、NBDペプチド、PC1 CTT由来p200、PC1 CTT由来p21、グルコセレブロシダーゼ、アルファ-L-イズロニダーゼ、イズロニデート(iduronidate)-2-スルファターゼ、網膜グアニル酸シクラーゼ、ZF6xHunt-Kox-1ジンクフィンガーペプチド構成体、ZF12xHunt-Kox-1ジンクフィンガーペプチド構成体、およびZF18xHunt-Kox-1ジンクフィンガーペプチド構成体、からなる群から選択される。
(a)息切れまたは呼吸困難の減少;
(b)サイトカイン産生の低下;
(c)TNF-αの血中濃度の低下;
(d)IL-1の血中濃度の低下;
(e)IL-6の血中濃度の低下;
(f)気管支肺胞洗浄液(BALF)の炎症細胞数の減少;
(g)BALFサイトカインレベル(例えば、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8)の低下;
(h)肺機能(例えば、FEV1)の改善;
(i)機能的(運動を含む)能力の改善;
(j)救急の治療または入院を要するCOPD増悪の低下;
(k)涙液分泌の正常値への回復;
(l)脱毛の減少;
(m)毛髪の成長促進;
(n)MRIにおける脳組織の壊死領域の縮小;
(o)C反応性タンパク質(CRP)の減少;
(p)急性の死亡率(すなわち、発症後1か月)の低下;
(q)超音波測定による心筋梗塞後(MI)心拍出量の改善;
(r)発症後1か月のNIHSSスコアが17未満である患者の割合を測定して求めた、脳卒中後の神経学的機能の改善;
(s)腎肥大の抑制;
(t)カーゴである第2の領域のみを使用した先の治療に比較して、アミノ酸60個のヒトホメオドメイン(または多様体またはその一部)の複合体または融合タンパク質に対するアレルギー反応および輸注反応の軽減;
(u)抗カーゴペプチド特異性抗体レベルの低下;
(v)GCase基質のグリコシルセラミド(glycosylceramide)の蓄積の減少;
(w)デルマタン硫酸の尿中***の減少;
(x)ヘパラン硫酸の尿中***の減少;
(y)網膜電図(ERG)に見る機能の回復;
(z)標準的臨床方法で測定した視力の回復;
(aa)ハンチントン病統一評価尺度(UHDRS)の合計運動スコア、および/または臨床的に検証済みの他のスコアリング方法を使用して評価した場合の正常化または運動障害の改善;
(bb)成長および発育を評価する標準的な小児科技術により評価した際の骨格発達の正常化;
(cc)標準的な小児科技術により評価した際の脳の発達の正常化;
(dd)MRIで評価した腎嚢胞の肥大化および数の増加の遅延;
(ee)血液中の抗炎症性インターロイキン10(IL-10)レベルの上昇;
(ff)BALF中の抗炎症性インターロイキン10(IL-10)レベルの上昇;
(gg)血液中のIP-10レベルの低下;
(hh)BALF中のIP-10レベルの低下;および/または
(ii)血液中のアミロイドAタンパク質(SAA)の低下;
(jj)血中またはBALF中のマウスKcまたはヒトIL-8の低下;
(kk)血中またはBALF中のGM-CSFの低下;
(ll)硝子体混濁の段階および/または前房内細胞の段階の進行予防;
(mm)視力の悪化予防;
(nn)腫瘍細胞の増殖抑制および/または腫瘍の増殖抑制;
(oo)DYRK1bの発現抑制;および/または
(pp)NF-κBの調節を受けた遺伝子の活性化抑制。
(a)NF-κBの転写活性の阻害;
(b)サイトカイン産生の低下;
(c)TNF-αの血中濃度の抑制;
(d)IL-1の血中濃度の抑制;
(e)IL-6の血中濃度の抑制;
(f)気管支肺胞洗浄液(BALF)の炎症細胞数の減少;
(g)気管支肺胞洗浄液(BALF)のサイトカインレベル(例えば、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8)の減少;
(h)角膜上皮の杯細胞浸潤の低下;
(i)結膜杯細胞の消失の減弱;
(j)リンパ管新生の低下;
(k)涙液分泌の正常値への回復;
(l)脱毛の減少または毛髪成長促進;
(m)MRIにより評価した脳組織の壊死領域の減少;
(n)C反応性タンパク質(CRP)の減少;
(o)急性の死亡率(すなわち、1か月)の低下;
(p)超音波測定による心筋梗塞後(MI)心拍出量の改善;
(q)脳卒中発症後1か月のNIHSSスコアが17未満である患者の割合により測定した脳卒中後の神経学的機能の改善;
(r)腎肥大の抑制;
(s)ヒトホメオドメイン-p200の融合タンパク質または複合体、例えば、HOX C12-p200またはHOX D12-p200を用いた治療で誘導された変化と比較した場合の、オステオカルシン血中濃度の弱い変化;
(t)リンパ球による3H-チミジンの取り込みから評価した、アミノ酸60個のヒトホメオドメイン(または多様体またはその一部)の複合体または融合タンパク質に対するアレルギー反応および輸注反応の軽減;
(u)抗カーゴペプチド特異性抗体レベルの減少;
(v)GCase基質のグリコシルセラミド(glycosylceramide)の蓄積の減少;
(w)脳におけるα-シヌクレイン/ユビキチン凝集体の蓄積の減少;
(x)デルマタン硫酸の尿中***の減少;
(y)ヘパラン硫酸の尿中***の減少;
(z)組織病理学により測定したデルマタン硫酸の低下;
(aa)組織病理学により測定したヘパラン硫酸の低下;
(bb)網膜電図(ERG)に見る機能の回復;
(cc)標準的臨床方法で測定した視力の回復;
(dd)HDマウスモデルにおける変異型ハンチンチン遺伝子の発現の低下または抑制;
(ee)ハンチントン病統一評価尺度(UHDRS)の合計運動スコアを使用して評価した、患者の運動障害の正常化または改善;
(ff)公開されている、ビームテスト用ロータロッド上で協調性を評価する方法および前足握力を評価する方法を使用して評価した、マウスの運動障害の正常化または改善;
(gg)HDマウスモデルにおいて分子的手法および組織学的解析により評価した、神経細胞の消失および/または線条体細胞の容積縮小の減少;
(hh)血液中の抗炎症性インターロイキン10(IL-10)レベルの上昇;
(ii)BALF中の抗炎症性インターロイキン10(IL-10)レベルの上昇;
(jj)血液中のIP-10レベルの低下;
(kk)BALF中のIP-10レベルの低下;
(ll)血液中の血清アミロイドAタンパク質(SAA)の低下;
(mm)血中またはBALF中のヒトIL-8の減少;
(nn)血中またはBALF中のGM-CSFの低下;
(oo)硝子体混濁の段階および/または前房内細胞の段階の進行予防;
(pp)視力の悪化予防;
(qq)腫瘍細胞の増殖抑制および/または腫瘍の増殖抑制;
(rr)DYRK1bの発現抑制;および/または
(ss)NF-κBの調節を受けた遺伝子の活性化抑制。
(a)NF-κBの転写活性が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))抑制される;
(b)血中および/またはBALF中のサイトカイン産生および/または濃度が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(c)TNF-α血中濃度および/またはBALF中濃度が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(d)IL-1血中濃度および/またはBALF中濃度が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(e)IL-6血中濃度および/またはBALF中濃度が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(f)気管支肺胞洗浄液(BALF)の炎症細胞数が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))減少する;
(g)気管支肺胞洗浄液(BALF)のサイトカイン(例えば、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8)が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(h)角膜上皮の杯細胞浸潤が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))減少する;
(i)結膜杯細胞の消失が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))減弱する;
(j)リンパ管新生が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(k)シルマー試験により測定した、シルマー試験紙の濡れる長さが、20mm以上、15mm以上、10mm以上、5mm以上、例えば、5mm〜20mm、10mm〜20mm、5mm〜15mm、5mm〜10mmまたは15mm〜20mm(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))の範囲で長くなり、涙液分泌が正常値へ向け回復する;
(l)脱毛の減少または毛髪成長促進が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))である;
(m)脳組織の壊死領域が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))減少する;
(n)血清C反応性タンパク質(CRP)が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(o)急性の死亡率(すなわち、1か月)が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(p)超音波で測定した場合の心筋梗塞後(MI)心拍出量が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))改善する;
(q)発症後1か月ののNIHSSスコアが17未満である患者の割合により測定した、脳卒中後の神経学的機能が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))改善する;
(r)腎肥大が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))抑制される;
(s)HOX C12-p21、HOX D12-p21、またはp21を含有する他の融合タンパク質もしくは複合体を使用し、細胞膜透過化特性が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(例えば、HOX C12-p200の融合タンパク質もしくは複合体、または細胞膜透過化特性を有するヒトホメオドメインを含む、他のp200含有融合タンパク質もしくは複合体を用いた治療により誘導された変化と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))であるヒトホメオドメインを含む血液中のオステオカルシン濃度の変化が弱い;
(t)アミノ酸60個のヒトホメオドメイン(または多様体またはその一部)複合体または融合タンパク質に対するアレルギー反応および輸注反応の低下を、これらのカーゴタンパク質のみ輸注した場合と比較し、リンパ球による3H-チミジンの取り込み評価が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(実際の変化(%)または変化の中央値(%)ベースラインまたは対照を基準)である;
(u)アミノ酸60個のヒトホメオドメイン(または多様体またはその一部)複合体または融合タンパク質を用いた治療後の抗カーゴペプチド特異性抗体レベルを、これらのカーゴタンパク質のみを用いた治療と比較した場合、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(実際の変化(%)または変化の中央値(%)ベースラインまたは対照を基準)低下する;
(v)GCase基質のグリコシルセラミド(glycosylceramide)の蓄積が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(w)α-シヌクレイン/ユビキチン凝集体の脳内蓄積が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(x)デルマタン硫酸の尿中***が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(y)ヘパラン硫酸の尿中***が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(z)組織病理学的に測定したデルマタン硫酸が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(aa)組織病理学的に測定したヘパラン硫酸が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(bb)網膜電図(ERG)に見る機能が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))が回復する;
(cc)標準的臨床方法で測定した視力が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))が回復する;
(dd)HDマウスモデルにおける変異型ハンチンチン遺伝子の発現が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下するまたは抑制される;
(ee)患者の運動障害をハンチントン病統一評価尺度(UHDRS)の合計運動スコアを使用して評価した場合に、絶対量で、少なくとも約4ポイント、少なくとも約3ポイント、少なくとも約2ポイント、少なくとも約1.5ポイント、少なくとも約1ポイント、少なくとも約0.5ポイント、少なくとも約0.4ポイント、少なくとも約0.3ポイント、または、少なくとも約0.2ポイント、例えば、約0.5〜約2ポイント、約1〜約2ポイント、または約1.5〜約2.5ポイントの正常化もしくは改善があり、さらに/または合計運動スコアが、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、約10%〜約80%、約10%〜約30%、約10%〜約20%、約20%〜約40%、約30%〜約50%(ベースラインおよび未治療対照群と比較)改善する;
(ff)マウスにおける運動障害を、公開されている、ビームテスト用ロータロッド上で協調性を評価する方法および前足握力を評価する方法を使用して評価した場合に、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、約10%〜約80%、約10%〜約30%、約10%〜約20%、約20%〜約40%、約30%〜約50%(ベースラインおよび未治療対照群と比較)正常化または改善する;
(gg)HDマウスモデルにおいて分子的手法および組織学的解析により評価した場合に、神経細胞消失の減少および/または線条体細胞の容積縮小が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))である;
(hh)血漿中(血中)および/またはBALF中のIL-10が、少なくとも約3,000%、少なくとも約2,000%、少なくとも約1,000%、少なくとも約500%、少なくとも約380%、少なくとも約360%、少なくとも約340%、少なくとも約320%、少なくとも約300%、少なくとも約280%、少なくとも約260%、少なくとも約240%、少なくとも約220%、少なくとも約200%、少なくとも約180%、少なくとも約160%、少なくとも約140%、少なくとも約120%、少なくとも約110%、少なくとも約100%、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約400%〜約500%、約450%〜約500%、約420%〜約480%、約300%〜約450%、約350%〜約430%、約320%〜約380%、約200%〜約350%、約250%〜約330%、約220%〜約280%、約100%〜約250%、約150%〜約230%、約120%〜約180%、約50%〜約150%、約60%〜約130%、約80%〜約110%、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))増加する;
(ii)血中またはBALF中のIL-10が、最少約300pg/mLまで、少なくとも約400pg/mLまで、最少約500pg/mLまで、最少約600pg/mLまで、最少約800pg/mLまで、最少約1000pg/mLまで、最少約1200pg/mLまで、最少約1400pg/mLまで、最少約1600pg/mLまで、最少約1800pg/mLまで、最少約2000pg/mLまで、最少約2200pg/mLまで、最少約2400pg/mLまで、最少約2600pg/mLまで、最少約2800pg/mLまで、最少約3000pg/mLまで、少なくとも約4000pg/mlまで、例えば、約300mg/mL〜約3900pg/mL、約380pg/mL〜約2900pg/mL、約400pg/mL〜約2800pg/mL、約450pg/mL〜約2500pg/mL、約500pg/mL〜約2400pg/mL、約800pg/mL〜約3000pg/mL、約900pg/mL〜約2900pg/mL、約1200pg/mL〜約2900pg/mL、約1400pg/mL〜約2900pg/mL、約1800pg/mL〜約2900pg/mL、約2000pg/mL〜約2900pg/mL、約2200pg/mL〜約2900pg/mL、約2200pg/mL〜約3000pg/mL、約2500pg/mL〜約3000pg/mL、または約2500pg/mL〜約3000pg/mL増加する。
(jj)血中およびBALF中のIP-10レベルが、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))減少する、
(kk)血液(血漿)中の血清アミロイドAタンパク質(SAA)が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(ll)血中および/またはBALF中のマウスKcまたはヒトIL-8が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(mm);血中またはBALF中のGM-CSFが、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))低下する;
(nn)当該分野の専門家に公知の一般的に認められている臨床基準に基づいた、硝子体混濁の段階および/または前房内細胞の段階の臨床上有意な進行を予防する。
(oo)当該分野の専門家に公知の一般的に使用され認められている基準に基づいた、臨床上有意な視力変化の悪化を予防する;
(pp)腫瘍細胞の増殖抑制および/または腫瘍の増殖抑制が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))である;および/または
(rr)DYRK1bの発現抑制が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))である;および/または
(ss)NF-κBの調節を受けた遺伝子の活性化が、少なくとも約99%、少なくとも約95%、少なくとも約90%、少なくとも約80%、少なくとも約70%、少なくとも約60%、少なくとも約50%、少なくとも約40%、少なくとも約35%、少なくとも約30%、少なくとも約20%、少なくとも約15%、少なくとも約10%、または、少なくとも約5%、例えば、約30%〜約99%、約80%〜約90%、約70%〜約90%、約60%〜約90%、約50%〜約90%、約40%〜約90%、約35%〜約90%、約30%〜約90%、約25%〜約90%、約5%〜約85%、または約10%〜約80%(ベースラインまたは対照と比較した、実際の変化(%)または変化の中央値(%))抑制される。
アミノ酸60個のヒトホメオドメインおよびNF-κB転写因子生成を抑制するカーゴNBDペプチドで構成される複合体または融合ペプチドまたはタンパク質は、タンパク質-タンパク質相互作用に干渉することにより遺伝子発現を調節する実施形態例である。
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLL
である。
別の実施形態では、HOX D12アミノ酸配列の第1の領域は配列番号2:
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVV
である。
これらの2つの実施形態では、この第1の領域は、NF-κB必須修飾因子(NEMO)結合領域、略してNBD(NEMO binding domain)という、「カーゴ(積み荷)」ペプチドに、単純なペプチド結合または、代替としは、当技術分野で公知のリンカー(表2を参照のこと)を介して連結している。リンカーは、その付加により複合体の機能が損なわれない限り、任意のリンカーを使用してよい。NBDアミノ酸配列は、配列番号20の第2の領域であり:
TALDWSWLQTE
HOX C12の第1の領域(配列番号1)を組み込んだ、2領域の連結にペプチド結合のみを含有する、融合タンパク質全体の配列の実施形態は:
配列番号21
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLTALDWSWLQTE
である。HOX D12の第1の領域(配列番号2)を組み込んだ、2領域の連結にペプチド結合のみを含有する、融合タンパク質全体の配列の実施形態は:
配列番号22:
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVTALDWSWLQTE
である。
多発性嚢胞腎のPC1細胞質内C末端尾部ペプチド
タンパク質-タンパク質相互作用を抑制する、ヒトHOX C12もしくはHOX D12ホメオドメイン(または多様体またはその一部)融合タンパク質の別の実施形態は、第2の領域がアミノ酸200からなるペプチドで構成されているもので、これにおいて、かかるペプチドの配列は、p200とも呼ばれる、PC1タンパク質の細胞質内C末端尾部領域(PC1 CTT)に由来している(Lal et al. “Polycystin-1 C-terminal tail associates with β-catenin and inhibits canonical Wnt Signaling” Hum. Mol. Genet. 17(20):3105-17, Oct. 15, 2008、補足資料を含む)。PC1遺伝子および/またはPC2遺伝子は、一般に、多発性嚢胞腎(PKD)では変異している。これらの変異は、遺伝性または体細胞変異の結果またはこれらの組み合わせによるもので、PC1タンパク質のC末端の細胞質内尾部領域から切断された転写因子により遺伝子の活性化が調節されなくなる。p200タンパク質は、この転写因子の作用を遮断するが、このタンパク質の尿細管細胞内作用部位まで有効に送達できれば、PKD患者の尿細管の発達を正常に戻すことが可能であり得る。
配列番号1(表3):
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLL
である。
別の実施形態では、第1の領域のヒトHOX D12ホメオドメインの60アミノ酸配列は、
配列番号2(表3):
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVV
であり、それに連結している第2の領域は、PC1 CTT配列由来のp200ペプチドであり、この第2部分のアミノ酸配列は、
配列番号23(表3):
VILRWRYHALRGELYRPAWEPQDYEMVELFLRRLRLWMGLSKVKEFRHKVRFEGMEPLPSRSSRGSKVSPDVPPPSAGSDASHPSTSSSQLDGLSVSLGRLGTRCEPEPSRLQAVFEALLTQFDRLNQATEDVYQLEQQLHSLQGRRSSRAPAGSSRGPSPGLRPALPSRLARASRGVDLATGPSRTPLRAKNKVHPSST
である。さらに他の実施形態では、第2の領域は、ここに示したカーゴ配列の変形配列である。開始因子メチオニンを付加した、HOX C12を含む融合タンパク質全体の配列の実施形態を、配列番号24として示す(表3):
MSRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLVILRWRYHALRGELYRPAWEPQDYEMVELFLRRLRLWMGLSKVKEFRHKVRFEGMEPLPSRSSRGSKVSPDVPPPSAGSDASHPSTSSSQLDGLSVSLGRLGTRCEPEPSRLQAVFEALLTQFDRLNQATEDVYQLEQQLHSLQGRRSSRAPAGSSRGPSPGLRPALPSRLARASRGVDLATGPSRTPLRAKNKVHPSST
また、開始因子メチオニンを付加した、HOX D12を含む融合タンパク質全体の配列の実施形態を、配列番号25として示す(表3):
MARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVVILRWRYHALRGELYRPAWEPQDYEMVELFLRRLRLWMGLSKVKEFRHKVRFEGMEPLPSRSSRGSKVSPDVPPPSAGSDASHPSTSSSQLDGLSVSLGRLGTRCEPEPSRLQAVFEALLTQFDRLNQATEDVYQLEQQLHSLQGRRSSRAPAGSSRGPSPGLRPALPSRLARASRGVDLATGPSRTPLRAKNKVHPSST。
リンカーは機能には必要ではないが、機能が損なわれなければ、配列番号1と、配列番号23もしくはその一部との間、または配列番号2と、配列番号23、もしくはその一部との間にリンカーを含めてよい。当技術分野で公知のリンカーを使用してよいが、それにより、配列番号24および25の実施形態は、リンカー配列で各複合体の第1と第2の領域がつながる程度に、少なくとも一部、改変されることが考えられる。
IRRIRLWMGLSKVKEFRHKVR
である。さらに他の実施形態では、第2の領域は、ここで示したカーゴ配列の変形配列である。
配列番号27:
MSRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLIRRIRLWMGLSKVKEFRHKVR
配列番号28:
MARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVIRRIRLWMGLSKVKEFRHKVR。
リソソーム蓄積症の細胞透過性ペプチド酵素補充療法
細胞透過性ペプチドは抗体などの大きな「カーゴ(積み荷)」ペプチドまたはタンパク質が細胞に侵入できるようにすことができるという強力な証拠がある。HOX由来ペプチド、または開示に類似する、他のヒトホメオドメインの細胞透過性ペプチドを含む複合体もしくは融合タンパク質の実施形態は、大きい分子が細胞膜を通過して細胞内の作用部位へ入るのを助ける(chaperone)ことができる。これらの実施形態は、他の場合には抗原性となるカーゴペプチドおよびタンパク質の免疫原性も低下させるため、こうしたペプチドおよびタンパク質が血液脳関門を通過してCNSへ入ることができる。したがって、開示した実施形態およびそれらの修正形態形態は、複合体または融合タンパク質の第1の領域がアミノ酸60個のヒトホメオドメインまたは多様体またはその一部であり、第2の領域が活性酵素である実施形態も含む。これらの化合物により、リソソーム蓄積症などの先天性酵素欠損の患者の酵素機能が回復されるであろう。ここに、リソソーム蓄積症および関連「カーゴ(積み荷)」構造の3実施例を含めるが((1)ゴーシェ病のための、例えば、配列番号30に示すグルコセレブロシダーゼ(GCase)、(2)ハーラー症候群のための、例えば、配列番号45に示すアルファ-L-イズロニダーゼ;および(3)ハンター症候群のための、例えば、配列番号48に示すイズロン酸-2-スルファターゼ)、他のリソソーム蓄積症において欠如しているまたは欠陥のある酵素を積んだ他の「カーゴ(積み荷)」を有するヒトホメオドメイン融合タンパク質または複合体に対しても同一の原則が適用される。
ゴーシェ病は、GBA1遺伝子の欠如または変異が原因で起こる先天性のリソソーム蓄積障害であり、そのためにGBA1産物であるグルコセレブロシダーゼ(GCase)の欠損を招く。GCaseの静脈内投与によりゴーシェ病患者の症状が一部軽減される。GCaseの欠損はパーキンソン病の遺伝性の型の一部にも寄与する。
配列番号1(表3):
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLL
である。別の実施形態では、第1の領域のヒトHOX D12ホメオドメインの60アミノ酸配列は、
配列番号2(表3):
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVV
であり、
いくつかの実施形態では、それに連結する第2の部分はGCaseアミノ酸配列:
配列番号30(表3):
ARPCIPKSFGYSSVVCVCNATYCDSFDPPTFPALGTFSRYESTRSGRRMELSMGPIQANHTGTGLLLTLQPEQKFQKVKGFGGAMTDAAALNILALSPPAQNLLLKSYFSEEGIGYNIIRVPMASCDFSIRTYTYADTPDDFQLHNFSLPEEDTKLKIPLIHRALQLAQRPVSLLASPWTSPTWLKTNGAVNGKGSLKGQPGDIYHQTWARYFVKFLDAYAEHKLQFWAVTAENEPSAGLLSGYPFQCLGFTPEHQRDFIARDLGPTLANSTHHNVRLLMLDDQRLLLPHWAKVVLTDPEAAKYVHGIAVHWYLDFLAPAKATLGETHRLFPNTMLFASEACVGSKFWEQSVRLGSWDRGMQYSHSIITNLLYHVVGWTDWNLALNPEGGPNWVRNFVDSPIIVDITKDTFYKQPMFYHLGHFSKFIPEGSQRVGLVASQKNDLDAVALMHPDGSAVVVVLNRSSKDVPLTIKDPAVGFLETISPGYSIHTYLWRRQ
である。さらに他の実施形態では、第2の領域はここで示したカーゴ配列の変形配列である。開始因子メチオニンを付加した別の実施形態では、HOX C12を有する融合タンパク質のペプチド全体配列は
配列番号31(表3):
MSRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLARPCIPKSFGYSSVVCVCNATYCDSFDPPTFPALGTFSRYESTRSGRRMELSMGPIQANHTGTGLLLTLQPEQKFQKVKGFGGAMTDAAALNILALSPPAQNLLLKSYFSEEGIGYNIIRVPMASCDFSIRTYTYADTPDDFQLHNFSLPEEDTKLKIPLIHRALQLAQRPVSLLASPWTSPTWLKTNGAVNGKGSLKGQPGDIYHQTWARYFVKFLDAYAEHKLQFWAVTAENEPSAGLLSGYPFQCLGFTPEHQRDFIARDLGPTLANSTHHNVRLLMLDDQRLLLPHWAKVVLTDPEAAKYVHGIAVHWYLDFLAPAKATLGETHRLFPNTMLFASEACVGSKFWEQSVRLGSWDRGMQYSHSIITNLLYHVVGWTDWNLALNPEGGPNWVRNFVDSPIIVDITKDTFYKQPMFYHLGHFSKFIPEGSQRVGLVASQKNDLDAVALMHPDGSAVVVVLNRSSKDVPLTIKDPAVGFLETISPGYSIHTYLWRRQ
である。開始因子メチオニンを付加したさらに別の実施形態では、HOX D12を有する融合タンパク質のペプチド全体配列は
配列番号32(表3):
MARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVARPCIPKSFGYSSVVCVCNATYCDSFDPPTFPALGTFSRYESTRSGRRMELSMGPIQANHTGTGLLLTLQPEQKFQKVKGFGGAMTDAAALNILALSPPAQNLLLKSYFSEEGIGYNIIRVPMASCDFSIRTYTYADTPDDFQLHNFSLPEEDTKLKIPLIHRALQLAQRPVSLLASPWTSPTWLKTNGAVNGKGSLKGQPGDIYHQTWARYFVKFLDAYAEHKLQFWAVTAENEPSAGLLSGYPFQCLGFTPEHQRDFIARDLGPTLANSTHHNVRLLMLDDQRLLLPHWAKVVLTDPEAAKYVHGIAVHWYLDFLAPAKATLGETHRLFPNTMLFASEACVGSKFWEQSVRLGSWDRGMQYSHSIITNLLYHVVGWTDWNLALNPEGGPNWVRNFVDSPIIVDITKDTFYKQPMFYHLGHFSKFIPEGSQRVGLVASQKNDLDAVALMHPDGSAVVVVLNRSSKDVPLTIKDPAVGFLETISPGYSIHTYLWRRQ
である。
もう一つのリソソーム蓄積症であるムコ多糖症I型(MPS I)のハーラー症候群はムコ多糖症の一種で、グリコサミノグリカン(GAG)、すなわちムコ多糖類の分解に関与する、リソソームの特異的酵素の欠損に起因する遺伝性疾患の一群である。部分的に分解されたGAGが蓄積すると、細胞、組織、および臓器機能での障害が引き起こされる。ハーラー症候群は、IDUA遺伝子構造またはIDUA遺伝子調節の異常によりアルファ-L-イズロニダーゼが先天的に欠損していることによるもので、認められている臨床・病型は、主に、ハーラー(MPS IH)症候群、シャイエ(MPS IS;607016)症候群、およびハーラー-シャイエ(MPS IH/S)症候群の3つに大別され、広範な表現型を引き起こし得る。ハーラー症候群およびシャイエ症候群は、それぞれ、重症型MPS I型および軽症型MPS I型の臨床像を呈する表現型であり、ハーラー-シャイエ症候群はその中間型の表現型を発症する。
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLL。
別の実施形態では、HOX D12アミノ酸配列の第1の領域は配列番号2である:
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVV。第2の領域は、例えば、配列番号45(表3):
MRPLRPRAALLALLASLLAAPPVAPAEAPHLVHVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCA RPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNPの653アミノ酸アルファ-L-イズロニダーゼ配列(27アミノ酸シグナルペプチドを含む)であり得る。さらに他の実施形態では、第2の領域はここで示したカーゴ配列の変形配列である。また、開始因子メチオニンを有するHOX C12ホメオドメインを含むこの実施形態の完全配列は、例えば、配列番号46(表3):
MSRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLMRPLRPRAALLALLASLLAAPPVAPAEAPHLVHVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCA RPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP
であり得る。開始因子メチオニンを有するHOX D12ホメオドメインを含む別の実施形態の完全配列は、例えば、配列番号47(表3):
MARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVMRPLRPRAALLALLASLLAAPPVAPAEAPHLVHVDAARALWPLRRFWRSTGFCPPLPHSQADQYVLSWDQQLNLAYVGAVPHRGIKQVRTHWLLELVTTRGSTGRGLSYNFTHLDGYLDLLRENQLLPGFELMGSASGHFTDFEDKQQVFEWKDLVSSLARRYIGRYGLAHVSKWNFETWNEPDHHDFDNVSMTMQGFLNYYDACSEGLRAASPALRLGGPGDSFHTPPRSPLSWGLLRHCHDGTNFFTGEAGVRLDYISLHRKGARSSISILEQEKVVAQQIRQLFPKFADTPIYNDEADPLVGWSLPQPWRADVTYAAMVVKVIAQHQNLLLANTTSAFPYALLSNDNAFLSYHPHPFAQRTLTARFQVNNTRPPHVQLLRKPVLTAMGLLALLDEEQLWAEVSQAGTVLDSNHTVGVLASAHRPQGPADAWRAAVLIYASDDTRAHPNRSVAVTLRLRGVPPGPGLVYVTRYLDNGLCSPDGEWRRLGRPVFPTAEQFRRMRAAEDPVAAAPRPLPAGGRLTLRPALRLPSLLLVHVCA RPEKPPGQVTRLRALPLTQGQLVLVWSDEHVGSKCLWTYEIQFSQDGKAYTPVSRKPSTFNLFVFSPDTGAVSGSYRVRALDYWARPGPFSDPVPYLEVPVPRGPPSPGNP
であり得る。
ハンター症候群またはムコ多糖症II型(MPS II)は、リソソーム酵素のイズロン酸-2-スルファターゼの欠損に起因するまれなX連鎖劣性疾患であり、ほぼすべての細胞種、組織、および臓器にグリコサミノグリカンが徐々に蓄積されていく。MPS II型患者では、過剰な量のコンドロイチン硫酸B(デルマタン硫酸)およびヘパリチン硫酸(ヘパラン硫酸)が尿中に***される。MPS II型は多系統疾患である。MPS2の患児は重症型を呈し、骨格変形、肝脾腫大、および進行性の心肺状態の悪化を含む早期の身体異常を伴う。顕著特徴は神経学的損傷であり、発達遅滞および活動性亢進として現れるが精神遅滞および認知症へと進行する。患児は、通常、閉塞性気道疾患または心不全のため15歳までに死亡する。対照的に、MPS2の軽症型の患児は成人期まで生存する場合があり、軽症の身体的合併症を伴い、また、精神遅滞を伴わないことが多い(Wraith, J. E. et al. “Mucopolysaccharidosis type II (Hunter syndrome): a clinical review and recommendations for treatment in the era of enzyme replacement therapy” Europ. J. Pediat. 167: 267-277, 2008)。
配列番号1(表3):
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLL
である。別の実施形態では、第1の領域のヒトHOX D12ホメオドメインの60アミノ酸配列は、
配列番号2(表3):
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVV
である。また、第2の領域は、例えば、配列番号48:
MPPPRTGRGLLWLGLVLSSVCVALGSETQANSTTDALNVLLIIVDDLRPSLGCYGDKLVRSPNIDQLASHSLLFQNAFAQQAVCAPSRVSFLTGRRPDTTRLYDFNSYWRVHAGNFSTIPQYFKENGYVTMSVGKVFHPGISSNHTDDSPYSWSFPPYHPSSEKYENTKTCRGPDGELHANLLCPVDVLDVPEGTLPDKQSTEQAIQLLEKMKTSASPFFLAVGYHKPHIPFRYPKEFQKLYPLENITLAPDPEVPDGLPPVAYNPWMDIRQREDVQALNISVPYGPIPVDFQRKIRQSYFASVSYLDTQVGRLLSALDDLQLANSTIIAFTSDHGWALGEHGEWAKYSNFDVATHVPLIFYVPGRTASLPEAGEKLFPYLDPFDSASQLMEPGRQSMDLVELVSLFPTLAGLAGLQVPPRCPVPSFHVELCREGKNLLKHFRFRDLEEDPYLPGNPRELIAYSQYPRPSDIPQWNSDKPSLKDIKIMGYSIRTIDYRYTVWVGFNPDEFLANFSDIHAGELYFVDSDPLQDHNMYNDSQGGDLFQLLMPのイズロン酸-2-スルファターゼ酵素(25アミノ酸シグナル配列を含む550アミノ酸)であり得る。さらに他の実施形態では、第2の領域はここで示したカーゴ配列の変形配列である。第1の(HOX C12)と開始因子メチオニンを有する第2の領域とを組み合わせた完全なアミノ酸配列実施形態は、例えば、配列番号49:
MSRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLMPPPRTGRGLLWLGLVLSSVCVALGSETQANSTTDALNVLLIIVDDLRPSLGCYGDKLVRSPNIDQLASHSLLFQNAFAQQAVCAPSRVSFLTGRRPDTTRLYDFNSYWRVHAGNFSTIPQYFKENGYVTMSVGKVFHPGISSNHTDDSPYSWSFPPYHPSSEKYENTKTCRGPDGELHANLLCPVDVLDVPEGTLPDKQSTEQAIQLLEKMKTSASPFFLAVGYHKPHIPFRYPKEFQKLYPLENITLAPDPEVPDGLPPVAYNPWMDIRQREDVQALNISVPYGPIPVDFQRKIRQSYFASVSYLDTQVGRLLSALDDLQLANSTIIAFTSDHGWALGEHGEWAKYSNFDVATHVPLIFYVPGRTASLPEAGEKLFPYLDPFDSASQLMEPGRQSMDLVELVSLFPTLAGLAGLQVPPRCPVPSFHVELCREGKNLLKHFRFRDLEEDPYLPGNPRELIAYSQYPRPSDIPQWNSDKPSLKDIKIMGYSIRTIDYRYTVWVGFNPDEFLANFSDIHAGELYFVDSDPLQDHNMYNDSQGGDLFQLLMP
である。第1の(HOX D12)と開始因子メチオニンを有する第2の領域とを組み合わせた完全なアミノ酸配列実施形態は、例えば配列番号50:
MARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVMPPPRTGRGLLWLGLVLSSVCVALGSETQANSTTDALNVLLIIVDDLRPSLGCYGDKLVRSPNIDQLASHSLLFQNAFAQQAVCAPSRVSFLTGRRPDTTRLYDFNSYWRVHAGNFSTIPQYFKENGYVTMSVGKVFHPGISSNHTDDSPYSWSFPPYHPSSEKYENTKTCRGPDGELHANLLCPVDVLDVPEGTLPDKQSTEQAIQLLEKMKTSASPFFLAVGYHKPHIPFRYPKEFQKLYPLENITLAPDPEVPDGLPPVAYNPWMDIRQREDVQALNISVPYGPIPVDFQRKIRQSYFASVSYLDTQVGRLLSALDDLQLANSTIIAFTSDHGWALGEHGEWAKYSNFDVATHVPLIFYVPGRTASLPEAGEKLFPYLDPFDSASQLMEPGRQSMDLVELVSLFPTLAGLAGLQVPPRCPVPSFHVELCREGKNLLKHFRFRDLEEDPYLPGNPRELIAYSQYPRPSDIPQWNSDKPSLKDIKIMGYSIRTIDYRYTVWVGFNPDEFLANFSDIHAGELYFVDSDPLQDHNMYNDSQGGDLFQLLMP
である。
先天盲における網膜グアニル酸シクラーゼ(RetGC-1)補充療法
レーバー先天性黒内障1型(LCA1):ヒトRetGC-1は、アミノ酸1103個のタンパク質であり、シグナルペプチドがなくても酵素のみをコードするアミノ酸52〜1103を含む。RetGC-1は、RPE65の遺伝子産物であり、欠如または変異があると失明する。この疾患では、保存された錐体-光受容体の視力は変異体の生化学的特性と相関しており、このことは、網膜のRetGC-1酵素活性を回復させることができれば視力回復の達成が可能であることを示す。したがって、本明細書に開示する実施形態およびそれらの修正形態は、細胞透過性ペプチドである60アミノ酸ヒトHOX C12もしくはHOX D12ホメオドメイン(または多様体またはその一部)を含む融合タンパク質または複合体と、カーゴペプチドとしてのRetGC-1酵素とを含み、任意の数または製剤の実施形態においてこれらを定期的に眼内注射または局所投与することができる。
配列番号1(表3):
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLL
である。別の実施形態では、第1の領域のヒトHOX D12ホメオドメインの60アミノ酸配列は、
配列番号2(表3):
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVV
であり、連結される第2の領域は、例えば、
配列番号33(表3):
AVFTVGVLGPWACDPIFSRARPDLAARLAAARLNRDPGLAGGPRFEVALLPEPCRTPGSLGAVSSALARVSGLVGPVNPAACRPAELLAEEAGIALVPWGCPWTQAEGTTAPAVTPAADALYALLRAFGWARVALVTAPQDLWVEAGRSLSTALRARGLPVASVTSMEPLDLSGAREALRKVRDGPRVTAVIMVMHSVLLGGEEQRYLLEAAEELGLTDGSLVFLPFDTIHYALSPGPEALAALANSSQLRRAHDAVLTLTRHCPSEGSVLDSLRRAQERRELPSDLNLQQVSPLFGTIYDAVFLLARGVAEARAAAGGRWVSGAAVARHIRDAQVPGFCGDLGGDEEPPFVLLDTDAAGDRLFATYMLDPARGSFLSAGTRMHFPRGGSAPGPDPSCWFDPNNICGGGLEPGLVFLGFLLVVGMGLAGAFLAHYVRHRLLHMQMVSGPNKIILTVDDITFLHPHGGTSRKVAQGSRSSLGARSMSDIRSGPSQHLDSPNIGVYEGDRVWLKKFPGDQHIAIRPATKTAFSKLQELRHENVALYLGLFLARGAEGPAALWEGNLAVVSEHCTRGSLQDLLAQREIKLDWMFKSSLLLDLIKGIRYLHHRGVAHGRLKSRNCIVDGRFVLKITDHGHGRLLEAQKVLPEPPRAEDQLWTAPELLRDPALERRGTLAGDVFSLAIIMQEVVCRSAPYAMLELTPEEVVQRVRSPPPLCRPLVSMDQAPVECILLMKQCWAEQPELRPSMDHTFDLFKNINKGRKTNIIDSMLRMLEQYSSNLEDLIRERTEELELEKQKTDRLLTQMLPPSVAEALKTGTPVEPEYFEQVTLYFSDIVGFTTISAMSEPIEVVDLLNDLYTLFDAIIGSHDVYKVETIGDAYMVASGLPQRNGQRHAAEIANMSLDILSAVGTFRMRHMPEVPVRIRIGLHSGPCVAGVVGLTMPRYCLFGDTVNTASRMESTGLPYRIHVNLSTVGILRALDSGYQVELRGRTELKGKGAEDTFWLVGRRGFNKPIPKPPDLQPGSSNHGISLQEIPPERRRKLEKARPGQFSなどのRetGC-1酵素配列である。さらに他の実施形態では、第2の領域はここで示したカーゴ配列の変形配列である。また、開始因子メチオニンを付加した別の実施形態では、HOX C12を含む融合タンパク質のペプチド全体配列は、例えば:
配列番号34(表3):
MSRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLAVFTVGVLGPWACDPIFSRARPDLAARLAAARLNRDPGLAGGPRFEVALLPEPCRTPGSLGAVSSALARVSGLVGPVNPAACRPAELLAEEAGIALVPWGCPWTQAEGTTAPAVTPAADALYALLRAFGWARVALVTAPQDLWVEAGRSLSTALRARGLPVASVTSMEPLDLSGAREALRKVRDGPRVTAVIMVMHSVLLGGEEQRYLLEAAEELGLTDGSLVFLPFDTIHYALSPGPEALAALANSSQLRRAHDAVLTLTRHCPSEGSVLDSLRRAQERRELPSDLNLQQVSPLFGTIYDAVFLLARGVAEARAAAGGRWVSGAAVARHIRDAQVPGFCGDLGGDEEPPFVLLDTDAAGDRLFATYMLDPARGSFLSAGTRMHFPRGGSAPGPDPSCWFDPNNICGGGLEPGLVFLGFLLVVGMGLAGAFLAHYVRHRLLHMQMVSGPNKIILTVDDITFLHPHGGTSRKVAQGSRSSLGARSMSDIRSGPSQHLDSPNIGVYEGDRVWLKKFPGDQHIAIRPATKTAFSKLQELRHENVALYLGLFLARGAEGPAALWEGNLAVVSEHCTRGSLQDLLAQREIKLDWMFKSSLLLDLIKGIRYLHHRGVAHGRLKSRNCIVDGRFVLKITDHGHGRLLEAQKVLPEPPRAEDQLWTAPELLRDPALERRGTLAGDVFSLAIIMQEVVCRSAPYAMLELTPEEVVQRVRSPPPLCRPLVSMDQAPVECILLMKQCWAEQPELRPSMDHTFDLFKNINKGRKTNIIDSMLRMLEQYSSNLEDLIRERTEELELEKQKTDRLLTQMLPPSVAEALKTGTPVEPEYFEQVTLYFSDIVGFTTISAMSEPIEVVDLLNDLYTLFDAIIGSHDVYKVETIGDAYMVASGLPQRNGQRHAAEIANMSLDILSAVGTFRMRHMPEVPVRIRIGLHSGPCVAGVVGLTMPRYCLFGDTVNTASRMESTGLPYRIHVNLSTVGILRALDSGYQVELRGRTELKGKGAEDTFWLVGRRGFNKPIPKPPDLQPGSSNHGISLQEIPPERRRKLEKARPGQFS
である。また、開始因子メチオニンを付加したさらに別の実施形態では、HOX D12を含む融合タンパク質のペプチド全体配列は、例えば:
配列番号35(表3):
MARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVAVFTVGVLGPWACDPIFSRARPDLAARLAAARLNRDPGLAGGPRFEVALLPEPCRTPGSLGAVSSALARVSGLVGPVNPAACRPAELLAEEAGIALVPWGCPWTQAEGTTAPAVTPAADALYALLRAFGWARVALVTAPQDLWVEAGRSLSTALRARGLPVASVTSMEPLDLSGAREALRKVRDGPRVTAVIMVMHSVLLGGEEQRYLLEAAEELGLTDGSLVFLPFDTIHYALSPGPEALAALANSSQLRRAHDAVLTLTRHCPSEGSVLDSLRRAQERRELPSDLNLQQVSPLFGTIYDAVFLLARGVAEARAAAGGRWVSGAAVARHIRDAQVPGFCGDLGGDEEPPFVLLDTDAAGDRLFATYMLDPARGSFLSAGTRMHFPRGGSAPGPDPSCWFDPNNICGGGLEPGLVFLGFLLVVGMGLAGAFLAHYVRHRLLHMQMVSGPNKIILTVDDITFLHPHGGTSRKVAQGSRSSLGARSMSDIRSGPSQHLDSPNIGVYEGDRVWLKKFPGDQHIAIRPATKTAFSKLQELRHENVALYLGLFLARGAEGPAALWEGNLAVVSEHCTRGSLQDLLAQREIKLDWMFKSSLLLDLIKGIRYLHHRGVAHGRLKSRNCIVDGRFVLKITDHGHGRLLEAQKVLPEPPRAEDQLWTAPELLRDPALERRGTLAGDVFSLAIIMQEVVCRSAPYAMLELTPEEVVQRVRSPPPLCRPLVSMDQAPVECILLMKQCWAEQPELRPSMDHTFDLFKNINKGRKTNIIDSMLRMLEQYSSNLEDLIRERTEELELEKQKTDRLLTQMLPPSVAEALKTGTPVEPEYFEQVTLYFSDIVGFTTISAMSEPIEVVDLLNDLYTLFDAIIGSHDVYKVETIGDAYMVASGLPQRNGQRHAAEIANMSLDILSAVGTFRMRHMPEVPVRIRIGLHSGPCVAGVVGLTMPRYCLFGDTVNTASRMESTGLPYRIHVNLSTVGILRALDSGYQVELRGRTELKGKGAEDTFWLVGRRGFNKPIPKPPDLQPGSSNHGISLQEIPPERRRKLEKARPGQFS
である。
ハンチントン舞踏病(HD)のための調節ペプチド
ハンチントン舞踏病(HD)は、筋協調に障害を与え認知力低下をもたらす遺伝性神経変性疾患であり、変異型ハンチンチン遺伝子(HTT)の発現により引き起こされる。30代半ばから40代前半にかけて発現することが多いが、早期に身体的および精神的能力の経時的低下を伴う場合があり、徐々に協調運動が非常に困難になる。臨床的には、眼球運動、発話および認知力の問題を含むわずかな障害もHD患者で多数観察されている。変異型HTTの発現は、脳の一部であり運動を制御する線条体に特異的であり、線条体での神経細胞の消失および/または炎症がHDの臨床徴候の根底にあると考えられる。
配列番号1(表3):
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLL
である。別の実施形態では、第1の領域のヒトHOX D12ホメオドメインの60アミノ酸配列は、
配列番号2(表3):
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVV
であり、
連結される第2の領域は、例えば、ZF6xHunt-Kox-1配列;
配列番号36(表3):
TGAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVSSLSPQHSAVTQGIIKNKEGMDAKSLTAWSRTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEPWLVEREIHQETHPDSETAFEIKSSV
である。さらに他の実施形態では、第2の領域はここで示したカーゴ配列の変形配列である。また、開始因子メチオニンを付加した別の実施形態では、HOX C12ペプチドを含む融合タンパク質のペプチド全体配列は、例えば:
配列番号37(表3):
MSRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLTGAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVSSLSPQHSAVTQGIIKNKEGMDAKSLTAWSRTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEPWLVEREIHQETHPDSETAFEIKSSV
であり、開始因子メチオニンを付加したさらに別の実施形態では、HOX D12ペプチドを含む融合タンパク質のペプチド全体配列は、例えば:
配列番号38(表3):
MARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVTGAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVSSLSPQHSAVTQGIIKNKEGMDAKSLTAWSRTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEPWLVEREIHQETHPDSETAFEIKSSV
である。
配列番号39(表3):
TGAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVGTAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVSSLSPQHSAVTQGIIKNKEGMDAKSLTAWSRTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEPWLVEREIHQETHPDSETAFEIKSSV
配列番号42(表3):
TGAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVGTAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVGTAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVSSLSPQHSAVTQGIIKNKEGMDAKSLTAWSRTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEPWLVEREIHQETHPDSETAFEIKSSV
配列番号40(表3):
MSRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLTGAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVGTAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVSSLSPQHSAVTQGIIKNKEGMDAKSLTAWSRTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEPWLVEREIHQETHPDSETAFEIKSSV
配列番号41(表3):
MARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVTGAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVGTAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVSSLSPQHSAVTQGIIKNKEGMDAKSLTAWSRTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEPWLVEREIHQETHPDSETAFEIKSSV
配列番号43(表3):
MSRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLTGAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVGTAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVGTAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVSSLSPQHSAVTQGIIKNKEGMDAKSLTAWSRTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEPWLVEREIHQETHPDSETAFEIKSSV
配列番号44(表3):
MARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVTGAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVGTAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVGTAERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHTGSERPFQCRICMRNFSQRATLQRHIRTHTGEKPFACDICGRKFAQRATLQRHTKIHLRQKDGGGGSGGGGSGGGGSQLVSSLSPQHSAVTQGIIKNKEGMDAKSLTAWSRTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQIVYRNVMLENYKNLVSLGYQLTKPDVILRLEKGEEPWLVEREIHQETHPDSETAFEIKSSV
細胞膜透過性ペプチドおよびワクチン用途.細胞膜透過性ペプチド(CPP)は、樹状細胞などの抗原提示細胞の細胞質内への抗原エピトープの送達を促進して、CD8およびCD4それぞれのT細胞に依存的に、対応する主要組織適合複合体(MHC)クラスIまたはクラスIIにおける抗原プロセッシングと抗原提示を可能にし、有効な免疫応答を引き起こすことが示されている(Brooks, et al. Cell-penetrating peptides: Application in vaccine delivery, Biochimica et Biophysica Acta 1805:25-34, 2010)。抗原エピトープとの結合にフリン感受性リンカーを使用するCPPは、CpGモチーフ含有オリゴデオキシヌクレオチドとともに投与した場合にCD8T細胞の抗原特異的な細胞傷害性応答を誘発するうえで有効であることが示されている(Lu et al. TAP-independent presentation of CTL epitopes by Trojan antigens, J. Immunol. 166:7063-7071, 2001.)。抗原性カーゴを抗原提示細胞に放出させることができる他の結合方法には、細胞質グルタチオンで開裂されるジスルフィド結合の使用(Kim et al. Introduction of soluble proteins into the MHC class I pathway by conjugation to an HIV tat peptide, J. Immunol. 159:1666-68, 1997)、およびスルホスクシンイミジル4-マレイミドメチルシクロヘキサンカルボン酸(SMCC)(sulfosuccinimidyl 4-maleimidomethylcyclohexane carboxylate)で処理した後にC末端をシステイン修飾したCPPと反応させた抗原ペプチドの使用が挙げられる(Apostolopoulos et.al. Delivery of tumor associated antigens to antigen presenting cells using penetratin induces potent immune responses, Vaccine 24:3191-202, 2006)。リンカーを持たないCPP融合タンパク質も、腫瘍抗原に対する特異的なT細胞応答を発生させるために使用され成功している(Batchu et.al. Protein transduction of dendritic cells for NY-ESO-1-based immunotherapy of myeloma, Cancer Res. 65:10041-49, 2005、Scheller et.al. Human cytomegalovirus protein pp65: an efficient protein carrier system into human dendritic cells, Gene Ther. 15:318-325, 2008、Viehl et.al. Tat mammaglobin fusion protein transduced dendritic cells stimulate mammaglobin-specific CD4 and CD8 T cells, Breast Cancer Res. Treat.91:271-78, 2005)。
Ag85A99-118エピトープの4ペプチドうちの1ペプチドは配列番号51:
ETFLTSELPGWLQAN
であり;
Ag85A99-118エピトープの4ペプチドうちの2ペプチドは配列番号54:
SELPGWLQANRHVKP
であり;
Ag85A99-118エピトープの4ペプチドうちの3ペプチドは配列番号57:
WLQANRHVKPTGSAV
であり;
Ag85A99-118エピトープの4ペプチドうちの4ペプチドは配列番号60:
RHVKPTGSAVVGLSM
である。さらに他の実施形態では、第2の領域は、これらの4ペプチドのうちの1以上についての変形ペプチドである。これらの複合体の幾つかの配列番号を表3に示す。例えば、ある実施形態では、第1の領域(HOX C12)および第2の領域の配列番号51を組み合わせた、Ag85A99-118エピトープの完全アミノ酸配列は配列番号52:
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLETFLTSELPGWLQAN
である。同様に、別の実施形態では、第1の領域(HOX D12)および第2の領域の配列番号51を組み合わせた、Ag85A99-118エピトープの完全アミノ酸配列は配列番号53:
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVETFLTSELPGWLQAN
である。
Ag85A70-78エピトープの3ペプチドのうちの1ペプチドは配列番号63:
QSGLSVVMPVGGQSS
であり;
Ag85A70-78エピトープの3ペプチドのうちの2ペプチドは配列番号66:
VVMPVGGQSSFYSDW
であり;
Ag85A70-78エピトープの3ペプチドのうちの3ペプチドは配列番号69:
GGQSSFYSDWYQPAC
である。さらに他の実施形態では、第2の領域は、これらの3つのペプチドのうちの1以上についての変形ペプチドである。これらの複合体の幾つかの配列番号も表3に示す。例えば、ある実施形態では、第1の領域(HOX C12)および第2の領域の配列番号63を組み合わせた、Ag85A70-78エピトープの完全アミノ酸配列は配列番号64:
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLLQSGLSVVMPVGGQSS
である。同様に、別の実施形態では、第1の領域(HOX D12)および第2の領域の配列番号63を組み合わせた、Ag85A70-78エピトープの完全アミノ酸配列は配列番号65:
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVVQSGLSVVMPVGGQSS
である。
MQLVDRVRGA VTGMSRRLVV GAVGAALVSG LVGAVGGTAT AGAFSRPGLP VEYLQVPSPS MGRDIKVQFQ SGGANSPALY LLDGLRAQDD FSGWDINTPA FEWYDQSGLS VVMPVGGQSS FYSDWYQPAC GKAGCQTYKW ETFLTSELPG WLQANRHVKP TGSAVVGLSM AASSALTLAI YHPQQFVYAG AMSGLLDPSQ AMGPTLIGLA MGDAGGYKAS DMWGPKEDPA WQRNDPLLNV GKLIANNTRV WVYCGNGKPS DLGGNNLPAK FLEGFVRTSN IKFQDAYNAG GGHNGVFDFP DSGTHSWEYW GAQLNAMKPD LQRALGATPN TGPAPQGA:
(配列番号106)である。
AFSRPGLP VEYLQVPSPS MGRDIKVQFQ SGGANSPALY LLDGLRAQDD FSGWDINTPA FEWYDQSGLS VVMPVGGQSS FYSDWYQPAC GKAGCQTYKW ETFLTSELPG WLQANRHVKP TGSAVVGLSM AASSALTLAI YHPQQFVYAG AMSGLLDPSQ AMGPTLIGLA MGDAGGYKAS DMWGPKEDPA WQRNDPLLNV GKLIANNTRV WVYCGNGKPS DLGGNNLPAK FLEGFVRTSN IKFQDAYNAG GGHNGVFDFP DSGTHSWEYW GAQLNAMKPD LQRALGATPN TGPAPQGA
と考えられる。このAg85Aカーゴペプチドの配列番号(配列番号72)を表3に示すが、それとともに、Ag85Aカーゴペプチドまたは変形ペプチドが複合体もしくは融合タンパク質の第2の領域を含んでいる、数ある可能な実施形態のうちの2形態、すなわち、第1の領域にHOX C12(配列番号73)配列またはHOX D12(配列番号74)配列を含有するものを示す。分子生物学/生物工学技術分野の当業者であれば、表3に示すこれらおよび他のあらゆる配列の多数の変形が本明細書に開示の実施形態の範囲に入ることを理解されるであろう。
ヒト由来のCPP構造には、HOX D12ホメオドメイン、HOX C12ホメオドメイン、または表3に記載の構造(配列番号1〜19)のような他の第1の領域の構造を含むことができる第1の領域が含まれるが、これらに制限されない。第1の領域を第2の領域に結合させ、第1の領域に、疾患状態で異常発現の可能性のある細胞内および/または核内の標的まで「カーゴ(積み荷)」を運ばせるように使用することができる。このような標的には、遺伝子、メッセンジャーRNAおよびmiRNAなどの核酸構造が含まれ得る。ここで、DNA、RNA、LNA、PNA、γPNA、他の標準的もしくは修飾を受けた核酸またはこれらの構成要素の組み合わせを設計して、これらの細胞内および/または核内の標的に結合し、疾患状態の異常な発現または活性化特性を抑制することができる。表4はヌクレオチド配列を示し、以下に3実施例を記載する。
SRKKRKPYSKLQLAELEGEFLVNEFITRQRRRELSDRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRLL
である。別の実施形態では、HOX D12アミノ酸配列の第1の領域は配列番号2:
ARKKRKPYTKQQIAELENEFLVNEFINRQKRKELSNRLNLSDQQVKIWFQNRRMKKKRVV
である。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
(構成1)
ホメオドメイン構造を含み、配列番号1〜19に記載のいずれか1つのポリペプチド配列またはその多様体を有する第1の領域、および
前記第1の領域に非人工的には会合していない、機能性または調節性のポリペプチドもしくはタンパク質を含む第2の領域、を含む複合体。
(構成2)
HOX D12ホメオドメインまたはHOX C12ホメオドメインを少なくとも1つ含む第1の領域、および
前記第1の領域に非人工的には会合していない、機能性または調節性のポリペプチドもしくはタンパク質を含む第2の領域、を含む複合体。
(構成3)
前記第2の領域が、NEMO結合ドメイン、PC1 CTT由来の融合タンパク質、先天的な酵素欠損を有する被検者の酵素機能を回復させる酵素、RPE65遺伝子産物、ジンクフィンガーペプチド、Ag85A99-118エピトープペプチド、またはAg85A70-78エピトープペプチドの少なくとも1つを含む、構成1または構成2に記載の複合体。
(構成4)
前記NEMO結合ドメインが、配列番号20に記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成3に記載の複合体。
(構成5)
前記PC1 CTT由来の融合タンパク質が、配列番号23または26の少なくとも1つに記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成3に記載の複合体。
(構成6)
先天的な酵素欠損を有する被検者の酵素機能を回復させる酵素が、配列番号30、45、もしくは48の少なくとも1つのポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成3に記載の複合体。
(構成7)
前記RPE65遺伝子産物が、少なくとも配列番号33またはその多様体を含むポリペプチド配列を有する、構成3に記載の複合体。
(構成8)
前記ジンクフィンガーペプチド配列が、配列番号36、29、もしくは42またはその多様体を少なくとも1つ含む、構成3に記載の複合体。
(構成9)
前記Ag85A99-118エピトープペプチドが、配列番号51、54、57、もしくは60またはその多様体を少なくとも1つ含む配列を有する、構成3に記載の複合体。
(構成10)
前記Ag85A70-78エピトープペプチドが、配列番号63、66、もしくは69またはその多様体を少なくとも1つ含む配列を有する、構成3に記載の複合体。
(構成11)
前記第2の領域が、前記第1の領域のC末端に結合している、構成1または構成2に記載の複合体。
(構成12)
前記第2の領域が、前記第1の領域のN末端に結合している、構成1または構成2に記載の複合体。
(構成13)
融合タンパク質の形態にある、構成1および構成2のいずれか1に記載の複合体。
(構成14)
前記第2の領域が、細胞内標的および/または核内標的と相互作用する、構成1および構成2のいずれか1に記載の複合体。
(構成15)
前記第2の領域と前記細胞内標的および/または前記核内標的との相互作用が、NF-κB活性化、ぶどう膜炎、多発性嚢胞腎変異を有する尿細管細胞のPC1転写因子活性、GCaseのゴーシェ病変異を有する細胞のグルコセレブロシダーゼ基質、ハーラー症候群またはハンター症候群被検者のグリコサミノグリカン、網膜グアニル酸シクラーゼが欠損している網膜細胞の網膜グアニル酸シクラーゼ基質、ハンチントン舞踏病変異を有する細胞の変異ハンチンチン遺伝子の転写調節、および、感染症に暴露されている被検者の結核を予防するための結核ワクチンのようなワクチン実施形態において有効な免疫応答を誘発するための、抗原提示細胞の細胞質内への抗原エピトープの送達、の1つ以上に影響を与える、構成14に記載の複合体。
(構成16)
前記第2の領域が、配列番号23もしくは26またはその多様体を含むポリペプチド配列を有し、かつ、前記複合体が非競合的V2受容体拮抗因子をさらに含む、構成1または構成2いずれかに記載の複合体。
(構成17)
前記第2の領域が、配列番号20、23、26、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60、63、66、69、および72からなる群から選択されるポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成1または構成2に記載の複合体。
(構成18)
前記第1および第2の領域間にリンカー配列をさらに含む、構成1または構成2に記載の複合体。
(構成19)
前記第1および第2の領域の組み合わせが、配列番号21、22、24、25、27、28、31、32、34、35、37、38、40、41、43、44、46、47、49、並びに50、52、53、55、56、58、59、61、62、64、65、67、68、70、71、73および74からなる群から選択されるポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成1に記載の複合体。
(構成20)
前記配列の開始因子メチオニン残基は、活性剤および/または治療剤として使用する前に除去される、構成19に記載の複合体。
(構成21)
前記第1および第2の領域の組み合わせが、ホメオドメイン構造および少なくとも1つのNEMO結合ドメイン、PC1 CTT由来の融合タンパク質、先天的な酵素欠損を有する被検者の酵素機能を回復させる酵素、RPE65遺伝子産物、ジンクフィンガーペプチド、Ag85A99-118エピトープペプチド、並びにAg85A70-78エピトープペプチドを含む配列を有する、構成1に記載の複合体。
(構成22)
前記第2の領域が、細胞内標的および/または核内標的と相互作用する、構成21に記載の複合体。
(構成23)
前記第2の領域と細胞内標的および/または核内標的との相互作用が、NF-κB活性化、ぶどう膜炎、多発性嚢胞腎変異を有する尿細管細胞のPC1転写因子活性、GCaseのゴーシェ病変異を有する細胞のグルコセレブロシダーゼ基質、ハーラー症候群またはハンター症候群被検者のグリコサミノグリカン、網膜グアニル酸シクラーゼが欠損している網膜細胞の網膜グアニル酸シクラーゼ基質、ハンチントン舞踏病変異を有する細胞の変異ハンチンチン遺伝子の転写調節、および、例えば、感染症に暴露されている被検者の結核を予防するための結核ワクチン内のようにワクチン活性成分として有効な免疫応答を誘発するための、抗原提示細胞の細胞質内への抗原エピトープの送達、の1以上に影響を与える、構成22に記載の複合体。
(構成24)
前記第1および第2の領域間にリンカー配列をさらに含む、構成19または構成21に記載の複合体。
(構成25)
構成1に記載の複合体および薬理学的に許容される担体を含む組成物。
(構成26)
構成2に記載の複合体および薬理学的に許容される担体を含む組成物。
(構成27)
前記組成物が、吸入可能な組成物、局所用または注射用の点眼製剤他の眼用組成物、浣腸剤、外用組成物、または持続的放出のための注射可能なインプラントなどの注射可能な組成物の形態である、構成25または構成24に記載の組成物。
(構成28)
製剤で被検者に投与した場合に、前記複合体が中枢神経系に侵入する、構成1または構成2に記載の複合体。
(構成29)
製剤で被検者に投与した場合に、前記複合体が、前記第1の領域に結合させない場合の前記第2の領域によって誘発される望ましくない免疫応答よりも、前記被検者の望ましくない免疫応答の抑制を誘導する、構成1または構成2に記載の複合体。
(構成30)
構成1または構成2に記載の複合体を含む製剤を前記被検者に投与することを含み、これにおいて、前記複合体が被検者の前記中枢神経系に侵入する、被検者の状態の治療方法。
(構成31)
構成21に記載の複合体を含む製剤を前記被検者に投与することを含み、これにおいて、前記複合体が前記被検者の前記中枢神経系に侵入する、被検者の状態の治療方法。
(構成32)
構成1または構成2に記載の複合体を含む製剤を前記被検者に投与することを含み、これにおいて、前記複合体は、(a)ペプチド暴露の有意な低下がないこと、および(b)免疫介在性の有害な臨床事象の発生率に有意な増加がないこと、の少なくとも1つが見られるよう、抗原ペプチドに対する被検者の免疫応答を予防または改善する、被検者の状態の治療方法。
(構成33)
構成1または構成2に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第1の領域がNEMO結合ドメインに結合している、被検者のドライアイの治療方法。
(構成34)
前記NEMO結合ドメインが、配列番号20に記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成33に記載の方法。
(構成35)
構成1に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインである、被検者の自己免疫および炎症関連の脱毛の治療方法。
(構成36)
構成2に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインである、被検者の自己免疫および炎症関連の脱毛の治療方法。
(構成37)
前記NEMO結合ドメインが、配列番号20に記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成35または構成36に記載の方法。
(構成38)
構成1に記載の複合体を含む吸入可能な製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインである、被検者の炎症性気道疾患の治療方法。
(構成39)
構成2に記載の複合体を含む吸入可能な製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインである、被検者の炎症性気道疾患の治療方法。
(構成40)
前記炎症性気道疾患は慢性閉塞性肺疾患である、構成38または構成39に記載の方法。
(構成41)
前記NEMO結合ドメインが配列番号20に記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成38に記載の方法。
(構成42)
構成1に記載の複合体を含む浣腸製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインである、被検者の結腸直腸炎症性腸疾患の治療方法。
(構成43)
構成2に記載の複合体を含む浣腸製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインである、被検者の結腸直腸炎症性腸疾患の治療方法。
(構成44)
前記NEMO結合ドメインが、配列番号20に記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成42または構成43に記載の方法。
(構成45)
構成1に記載の複合体を含む全身投与用製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインである、被検者の状態の治療方法。
(構成46)
構成2に記載の複合体を含む全身投与用製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインである、被検者の状態の治療方法。
(構成47)
前記状態が、不安定狭心症、急性心筋梗塞および急性脳卒中の少なくとも1つである、構成45または構成46に記載の方法。
(構成48)
前記NEMO結合ドメインが、配列番号20に記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成45または構成46に記載の方法。
(構成49)
構成1に記載の複合体を含む全身投与用製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインである、被検者における一過性の虚血の後の虚血再潅流傷害の治療方法。
(構成50)
構成2に記載の複合体を含む全身投与用製剤を投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインである、被検者における一過性の虚血の後の虚血再潅流傷害の治療方法。
(構成51)
前記虚血再潅流傷害が脳、腎臓または心臓にある、構成49または構成50に記載の方法。
(構成52)
前記NEMO結合ドメインが、配列番号20に記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成49または構成50に記載の方法。
(構成53)
構成1に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域が、PC1 CTT由来の融合タンパク質、PC1 CTT由来のp200ペプチドまたはPC1 CTT由来のp21ペプチドである、被検者の多発性嚢胞腎の治療方法。
(構成54)
構成2に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域が、PC1 CTT由来の融合タンパク質、PC1 CTT由来のp200ペプチドまたはPC1 CTT由来のp21ペプチドである、被検者の多発性嚢胞腎の治療方法。
(構成55)
第2の領域が、配列番号23または26の少なくとも1つに記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成53または構成54に記載の方法。
(構成56)
複合体が、集合管細胞の腎嚢胞を標的にするために、さらに非競合的V2受容体拮抗因子に結合している、構成53または構成54に記載の方法。
(構成57)
構成1に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記複合体の前記第2の領域が、先天的な酵素欠損を有する被検者の酵素機能を回復させる酵素を含む、被検者のリソソーム蓄積症の治療方法。
(構成58)
構成2に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記複合体の前記第2の領域が、先天的な酵素欠損を有する被検者の酵素機能を回復させる酵素を含む、被検者のリソソーム蓄積症の治療方法。
(構成59)
酵素が、グルコセレブロシダーゼ、アルファ-L-イズロニダーゼ、およびイズロニデート(iduronidate)-2-スルファターゼからなる群から選択される、構成57または構成58に記載の方法。
(構成60)
酵素が、配列番号30、45、もしくは48の少なくとも1つに記載のポリペプチド配列またはその多様体を含む、構成57または構成58に記載の方法。
(構成61)
構成1に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がRPE65遺伝子産物を含む、被検者のレーバー・コンジェンティタル黒内障(Leber Congentital Amourosis)1型の治療方法。
(構成62)
構成2に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がRPE65遺伝子産物を含む、被検者のレーバー・コンジェンティタル黒内障(Leber Congentital Amourosis)1型の治療方法。
(構成63)
RPE65遺伝子産物が、配列番号33に記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成61または構成62に記載の方法。
(構成64)
構成1に記載の複合体を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がジンクフィンガーペプチドを含む、被検者ハンチントン舞踏病の治療方法。
(構成65)
構成2に記載の複合体を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がジンクフィンガーペプチドを含む、被検者ハンチントン舞踏病の治療方法。
(構成66)
前記ジンクフィンガーペプチド配列が、配列番号36、29、もしくは42またはその多様体を少なくとも1つ含む、構成64または構成65に記載の方法。
(構成67)
構成1に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がAg85A99-118エピトープペプチドを含む、被検者の結核の治療方法。
(構成68)
構成2に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がAg85A99-118エピトープペプチドを含む、被検者の結核の治療方法。
(構成69)
前記Ag85A99-118エピトープペプチド配列が、配列番号51、54、57、もしくは60またはその多様体を少なくとも1つ含む、構成67または構成68に記載の方法。
(構成70)
構成1に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がAg85A70-78エピトープペプチドを含む、被検者の結核の治療方法。
(構成71)
構成2に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がAg85A70-78エピトープペプチドを含む、被検者の結核の治療方法。
(構成72)
前記Ag85A70-78エピトープペプチド配列が、配列番号63、66、もしくは69またはその多様体を少なくとも1つ含む、構成70または構成71に記載の方法。
(構成73)
複数工程を含む方法により調製される複合体であって、
構成1に記載の複合体をコードする核酸を含む発現ベクターで形質転換した宿主細胞を、その宿主細胞内に前記複合体が発現される条件下で培養し、
前記複合体をアフィニティー精製により回収する、方法で調整される複合体。
(構成74)
ホメオドメイン構造を含む第1の領域、および
第1の領域に非人工的には会合していない、機能性もしくは調節性の核酸またはペプチド核酸を含む第2の領域、を含む複合体。
(構成75)
前記第1の領域がHOX D12ホメオドメインである、構成74に記載の複合体。
(構成76)
前記第1の領域がHOX C12ホメオドメインである、構成74に記載の複合体。
(構成77)
配列番号1〜19のいずれか1つに記載のポリペプチド配列またはその多様体を有するホメオドメイン構造を含む第1の領域、および
前記第1の領域に非人工的には会合していない、機能性もしくは調節性の核酸またはペプチド核酸を含む第2の領域、を含む複合体。
(構成78)
前記第2の領域が、DNA、RNA、LNA、PNA、γPNA、または細胞内での生物学的活性を有する、これらの構成要素の組み合わせを含む、構成74〜77のいずれか1に記載の複合体。
(構成79)
前記第2の領域が、miRNA21またはDYRK1bに結合する核酸を含む、構成74〜77のいずれか1に記載の複合体。
(構成80)
前記第2の領域が、配列番号76、78、もしくは79の少なくとも1つに記載のヌクレオチド配列またはその多様体を有する、構成74〜78のいずれか1に記載の複合体。
(構成81)
前記第2の領域が、前記第1の領域のC末端に結合している、構成74〜79のいずれか1に記載の複合体。
(構成82)
前記第2の領域が、前記第1の領域のN末端に結合している、構成74〜79のいずれか1に記載の複合体。
(構成83)
前記第1の領域が、前記第2の領域にペプチド結合で連結している、構成74〜79のいずれか1に記載の複合体。
(構成84)
前記第2の領域が、前記第1の領域に非ペプチド結合を介して結合している、構成74〜79のいずれか1に記載の複合体。
(構成85)
前記第2の領域が細胞内標的および/または核内標的と相互作用する、構成74〜79のいずれか1に記載の複合体。
(構成86)
前記第2の領域が、細胞内標的および/または核内標的との相互作用を、miRNAまたはmiRNAを結合するタンパク質複合体との相互作用を介して行う、構成85に記載の複合体。
(構成87)
前記第2の領域が、Ras経路に影響を与えるためにmiRNA132に結合する、核酸またはPNAである、構成86に記載の複合体。
(構成88)
前記第2の領域が、配列番号75に記載のmiRNAヌクレオチド配列またはその多様体に安定にハイブリダイズする核酸配列もしくはPNAである、構成86に記載の複合体。
(構成89)
前記第2の領域が、配列番号78に記載のヌクレオチド配列、または、miRNA132に安定にハイブリダイズする前記配列の一部もしくはその多様体のヌクレオチド配列を有する、構成88に記載の複合体。
(構成90)
前記第2の領域が、miRNA132との相互作用の特異性に基づいて選択される、構成88に記載の複合体。
(構成91)
前記第2の領域が、安定性向上または分解抑制のために修飾ヌクレオチドで構成される、構成88に記載の複合体。
(構成92)
前記第2の領域が、腫瘍抑制因子の経路または腫瘍増殖に影響を与えるためにmiRNA21に結合する核酸配列もしくはPNAである、構成86に記載の複合体。
(構成93)
前記第2の領域が、配列番号76に記載のヌクレオチド配列またはその多様体を含むか、または配列番号77に記載のヌクレオチド配列またはその多様体に安定にハイブリダイズ可能である、構成92に記載の複合体。
(構成94)
前記第1の領域のホメオドメイン構造が、配列番号2に記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成74、75および構成77〜93のいずれか1に記載の複合体。
(構成95)
前記第2の領域が、細胞内標的および/または核内標的との相互作用を、スプライシングまたはタンパク質翻訳に影響を与えるためにメッセンジャーRNAとの相互作用を介して行う、構成74〜79のいずれか1に記載の複合体。
(構成96)
前記第2の領域がDYRK1bに結合する、構成95に記載の複合体。
(構成97)
前記第2の領域が、配列番号79に記載のヌクレオチド配列またはその多様体を有する、構成96に記載の複合体。
(構成98)
前記第1の領域および前記第2の領域が、「クリックケミストリー」を介して結合している、構成74に記載の複合体。
(構成99)
前記第2の領域がPNAを含み、かつ、前記第1の領域と前記第2の領域とがペプチド結合を介して結合している、構成74に記載の複合体。
(構成100)
構成74に記載の複合体を含む製剤を患者に投与することを含む、被検者の癌の治療方法。
(構成101)
構成95に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含む、被検者の癌の治療方法。
(構成102)
構成96に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含む、被検者の癌の治療方法。
(構成103)
構成97に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含む、被検者の癌の治療方法。
(構成104)
構成74に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含む、被検者のメタボリック症候群、脂質障害および/または肥満の治療方法。
(構成105)
構成95に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含む、被検者のメタボリック症候群、脂質障害および/または肥満の治療方法。
(構成106)
構成96に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含む、被検者のメタボリック症候群、脂質障害および/または肥満の治療方法。
(構成107)
構成97に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含む、被検者のメタボリック症候群、脂質障害または肥満の治療方法。
(構成108)
静脈投与用液としての製剤を投与することを含む、構成100に記載の癌の治療方法。
(構成109)
持続的放出形態の製剤を投与することを含む、構成104に記載のメタボリック症候群、脂質障害および/または肥満の治療方法。
(構成110)
構成1に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、第2の領域が、Ag85A99-118エピトープペプチドまたはAg85A70-78エピトープペプチドの1つの少なくとも一部を含む、被検者の結核の治療方法。
(構成111)
構成110に記載の被検者の結核の治療方法であって、
前記製剤を、吸入経路、経鼻経路を介して、および/または筋肉内、皮内または皮下の注射により少なくとも1日1回前記被検者に投与すること、および
前記製剤の投与により、結核菌による活発な肺感染症が前記被検者に発症するのを防ぐ防御的免疫応答が引き起こされること、を含む結核の治療方法。
(構成112)
構成1に記載の複合体を含む製剤を被検者に投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域が、配列番号51、54、57、60、63、66、69および72の少なくとも1つに記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、被検者の結核の治療方法。
(構成113)
被検者において、ドライアイ、自己免疫関連脱毛、炎症関連脱毛、慢性閉塞性肺疾患、炎症性気道疾患、不安定狭心症、急性心筋梗塞、急性脳卒中、および臓器への虚血再潅流傷害のうち任意の1以上を治療する方法であって、
構成1に記載の複合体を含む製剤を少なくとも1日1回投与することを含み、これにおいて、前記第2の領域がNEMO結合ドメインを含み、
これにおいて、前記製剤の投与により、NF-κB活性阻害、TNF-α、IP-10、SAA、IL-6、Kcおよび/またはGM-CSFの血中濃度の低下、並びに/または血中インターロイキン10レベルの上昇がもたらされる、治療方法。
(構成114)
前記第2の領域が、配列番号20に記載のポリペプチド配列またはその多様体を有する、構成113に記載の方法。
(構成115)
前記第1の領域が、配列番号1または2に記載の任意のポリペプチド配列またはその多様体を含む、構成113に記載の方法。
(構成116)
前記第1の領域がヒト遺伝子由来のポリペプチド配列を含む、構成1、2、74および77のいずれか1に記載の複合体。
(構成117)
前記第2の領域が、ヒト遺伝子またはその多様体に由来するポリペプチド配列を含む、構成116に記載の複合体。
(構成118)
前記第2の領域が、ヒト遺伝子またはその多様体に由来する核酸配列を含む、構成116に記載の複合体。
(構成119)
前記被検者がヒトである、構成30〜72および100〜115のいずれか1に記載の方法。
以上
Claims (7)
- 配列番号22のポリペプチド配列からなる、細胞膜透過性ペプチド複合体。
- 前記細胞膜透過性ペプチドが、細胞内標的および/または核内標的と相互作用する、請求項1に記載の細胞膜透過性ペプチド複合体。
- 前記細胞膜透過性ペプチドと前記細胞内標的および/または前記核内標的との相互作用が、NF-κB活性化、および/またはぶどう膜炎に影響を与える、請求項2に記載の細胞膜透過性ペプチド複合体。
- 前記配列の開始因子メチオニン残基は、活性剤および/または治療剤として使用する前に除去される、請求項1に記載の細胞膜透過性ペプチド複合体。
- 請求項1記載の細胞膜透過性ペプチド複合体を含む、組成物。
- 前記組成物が、吸入可能な組成物、局所用または注射用の点眼製剤他の眼用組成物、浣腸剤、外用組成物、または持続的放出のための注射可能なインプラントを含む注射可能な組成物の形態である、請求項5に記載の組成物。
- ドライアイまたは他の炎症性眼状態の治療に使用するための、請求項1〜4のいずれか一項に記載の細胞膜透過性ペプチド複合体、または請求項5もしくは6に記載の組成物。
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