JP6478632B2 - Peptide oligonucleotide conjugate - Google Patents

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Description

関連出願の引用
本願は、２０１１年５月５日に出願された米国特許出願第１３／１０１，９４２号および２０１１年５月１３日に出願された米国特許出願第１３／１０７，５２８号に対する米国特許法第１２０条の下での利益を主張する。これらの出願は、それらの全体が本明細書中に参考として援用される。 This application claims the benefit of U.S. Patent Application Serial No. 13 / 101,942 filed May 5, 2011 and US Patent Application Serial Number 13 / 107,528 filed May 13, 2011 Claim the benefits under Article 120 of the Patent Act. These applications are hereby incorporated by reference in their entirety.

背景
技術分野
本発明は、一般的に、アンチセンス化合物として有用なオリゴヌクレオチド化合物（オリゴマー）に関し、より詳細には、細胞浸透性ペプチドにコンジュゲートされたオリゴマー化合物、および、アンチセンス用途におけるこのようなオリゴマー化合物の使用に関する。 BACKGROUND 1. Technical Field The present invention relates generally to oligonucleotide compounds (oligomers) useful as antisense compounds, and more particularly, to oligomeric compounds conjugated to cell penetrating peptides, and such in antisense applications The use of certain oligomeric compounds.

関連出願の説明
潜在的に有用な生物学的活性を有する多くの薬剤における実用性は、多くの場合、このような薬剤のそれらの標的への送達の困難性により妨害される。細胞内に送達される化合物は、一般的には、大部分は水性細胞外環境から送達され、次いで、細胞に入り込むために、脂溶性の細胞膜を浸透しなければならない。物質が特定の輸送メカニズムにより能動的に輸送されない限り、多くの分子、特に大きな分子は、実際の可溶化には脂溶性であり過ぎるか、または、前記膜を浸透するには親水性であり過ぎるかのいずれかである。 Description of Related Applications The utility of many agents with potentially useful biological activity is often hampered by the difficulty of delivering such agents to their targets. Compounds that are delivered intracellularly are generally delivered mostly from the aqueous extracellular environment and then have to penetrate lipid soluble cell membranes in order to enter the cells. As long as the substance is not actively transported by a specific transport mechanism, many molecules, especially large ones, are either too lipid soluble for actual solubilization or too hydrophilic to penetrate the membrane It is either.

アミノ酸残基４９〜５７からなるＨＩＶ Ｔａｔタンパク質の断片（配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲを有する、Ｔａｔ４９ ５７）が、生物学的に活性なペプチドおよびタンパク質を、細胞に送達するのに使用されてきた（例えば、Ｂａｒｓｏｕｍら、１９９４，国際公開第９４／０４６８６号）。Ｔａｔ（４９ ６０）が、ホスホロチオアートオリゴヌクレオチドの送達を向上するのに使用されてきた（Ａｓｔｒｉａｂ−Ｆｉｓｈｅｒ，Ｓｅｒｇｕｅｅｖら、２０００；Ａｓｔｒｉａｂ−Ｆｉｓｈｅｒ，Ｓｅｒｇｕｅｅｖら、２００２）。リバースＴａｔまたはｒＴａｔ（５７〜４９）（ＲＲＲＱＲＲＫＫＲ）が、Ｔａｔ（４９ ５７）と比較して、フルオレセインを細胞内に、向上された有効性で送達することが報告されてきた（Ｗｅｎｄｅｒ，Ｍｉｔｃｈｅｌｌら、２０００；Ｒｏｔｈｂａｒｄ，Ｋｒｅｉｄｅｒら、２００２）。ＲｏｔｈｂａｒｄおよびＷｅｎｄｅｒは、他のアルギニンリッチ輸送ポリマーも開示してきた（特許文献１（国際公開第０１／６２２９７号）；特許文献２（米国特許第６，３０６，９９３号明細書）；特許文献３（米国特許出願公開第２００３／００３２５９３号明細書））。   A fragment of HIV Tat protein consisting of amino acid residues 49-57 (with sequence RKKRRQRRR, Tat4957) has been used to deliver biologically active peptides and proteins to cells (eg, Barsoum et al. , 1994, WO 94/04686). Tat (4960) has been used to improve the delivery of phosphorothioate oligonucleotides (Astriab-Fisher, Sergueev et al., 2000; Astriab-Fisher, Sergueev et al., 2002). Reverse Tat or rTat (57-49) (RRRQRRKKR) has been reported to deliver fluorescein intracellularly with improved efficacy compared to Tat (49 57) (Wender, Mitchell et al., 2000; Rothbard, Kreider et al., 2002). Rothbard and Wender have also disclosed other arginine rich transport polymers (US Pat. No. 6,306,993); US Pat. No. 6,306,993; US Pat. U.S. Patent Application Publication No. 2003/0032593)).

オリゴヌクレオチドは、治療的使用に対して多くの場合、送達が妨害される、潜在的に有用な薬剤化合物の一分類である。ホスホロジアミダート結合モルホリノオリゴマー（ＰＭＯ；例えば、Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ ａｎｄ Ｗｅｌｌｅｒ，１９９７を参照のこと）が、荷電したオリゴヌクレオチド類似体、例えば、ホスホロチオアートより、この点で有望であることが見出されてきた。前記ＰＭＯは、水溶性であり、荷電していない、もしくは、実質的に荷電していない、スプライシングの進展、または、翻訳機構成分の結合を妨害することにより、遺伝子発現を阻害するアンチセンス分子である。ＰＭＯが、ウイルス複製を阻害または妨害することも示されてきた（Ｓｔｅｉｎ，Ｓｋｉｌｌｉｎｇら、２００１；ＭｃＣａｆｆｒｅｙ，Ｍｅｕｓｅら、２００３）。それらは、酵素消化に対して非常に抵抗性である（Ｈｕｄｚｉａｋ，Ｂａｒｏｆｓｋｙら、１９９６）。ＰＭＯは、無細胞および細胞培養モデルでの、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて（Ｓｔｅｉｎ，Ｆｏｓｔｅｒら、１９９７；Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ ａｎｄ Ｗｅｌｌｅｒ １９９７）、および、ゼブラフィッシュ、カエルおよびウニの胚での、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて（Ｈｅａｓｍａｎ，Ｋｏｆｒｏｎら、２０００；Ｎａｓｅｖｉｃｉｕｓ ａｎｄ Ｅｋｋｅｒ ２０００）、ならびに、成体動物モデル、例えば、ラット、マウス、ウサギ、イヌおよびブタにおいて（例えば、Ａｒｏｒａ ａｎｄ Ｉｖｅｒｓｅｎ ２０００；Ｑｉｎ，Ｔａｙｌｏｒら、２０００；Ｉｖｅｒｓｅｎ ２００１；Ｋｉｐｓｈｉｄｚｅ，Ｋｅａｎｅら、２００１；Ｄｅｖｉ ２００２；Ｄｅｖｉ，Ｏｌｄｅｎｋａｍｐら、２００２；Ｋｉｐｓｈｉｄｚｅ，Ｋｉｍら、２００２；Ｒｉｃｋｅｒ，Ｍａｔａら、２００２を参照のこと）、高いアンチセンス特異性および有効性を示してきた。   Oligonucleotides are a class of potentially useful drug compounds in which delivery is often interrupted for therapeutic use. Phosphorodiamidate-linked morpholino oligomers (PMO; see, eg, Summerton and Weller, 1997) are found to be more promising in this regard than charged oligonucleotide analogues, eg, phosphorothioates. It has The PMO is an antisense molecule that is soluble in water, is not charged or is not substantially charged, inhibits the progress of splicing or the binding of translational machinery components, thereby inhibiting gene expression. is there. PMO has also been shown to inhibit or prevent viral replication (Stein, Skilling et al., 2001; McCaffrey, Meuse et al., 2003). They are very resistant to enzymatic digestion (Hudziak, Barofsky et al., 1996). PMO is in vitro (Stein, Foster et al., 1997; Summerton and Weller 1997) in cell-free and cell culture models, and in vivo in zebrafish, frog and sea urchin embryos (Heasman, Kofron et al. , 2000; Nasevicius and Ekker 2000), and in adult animal models such as rats, mice, rabbits, dogs and pigs (eg, Arora and Iversen 2000; Qin, Taylor et al., 2000; Iversen 2001; Kipshidze, Keane et al., 2001; Devi 2002; Devi, Oldenkamp et al., 2002; Kipshidze, Kim et al., 2002; icker, Mata et al., see 2002), it has shown a high antisense specificity and efficacy.

アンチセンスＰＭＯオリゴマーが、細胞内に取り込まれ、他の幅広く使用されているアンチセンスオリゴヌクレオチドより、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて一貫して効果的であり、ほとんど非特異的な効能を示さないことが示されてきた（例えば、Ｐ．Ｉｖｅｒｓｅｎ，“Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ Ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ Ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ”，ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓ．Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００１を参照のこと）。アルギニンリッチペプチドへの前記ＰＭＯの接合は、それらの細胞内への取り込みを向上することが示されてきた（例えば、特許文献４（米国特許第７，４６８，４１８号明細書）を参照のこと）。しかしながら、前記コンジュゲートの毒性が、有望な薬剤候補としての開発を遅らせてきた。   Antisense PMO oligomers have been shown to be taken up into cells and consistently more effective in vivo and show little non-specific efficacy than other widely used antisense oligonucleotides (See, eg, P. Iversen, "Phosphoramidite Morpholino Oligomers", in Antisense Drug Technology, S. T. Crooke, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 2001). Conjugation of the PMO to arginine rich peptides has been shown to improve their uptake into cells (see, eg, US Pat. No. 7,468,418). ). However, the toxicity of the conjugate has delayed the development as a promising drug candidate.

顕著な進展がなされてきたが、改善されたアンチセンスまたはアンチジーン性能を有するオリゴヌクレオチドコンジュゲートについての、当該分野における必要性が残っている。このような改善されたアンチセンスまたはアンチジーン性能としては、配列選択性を損なうことのない、より低い毒性、ＤＮＡおよびＲＮＡに対するより強力な親和性；改善された薬物動態および組織分布；改善された細胞送達および信頼性、ならびに、ｉｎ ｖｉｖｏにおける分布の制御可能性があげられる。   Although significant progress has been made, there remains a need in the art for oligonucleotide conjugates with improved antisense or antisense performance. Such improved antisense or antigene performances include lower toxicity without compromising sequence selectivity, more potent affinity to DNA and RNA; improved pharmacokinetics and tissue distribution; improved Cell delivery and reliability, as well as controllability of distribution in vivo.

国際公開第０１／６２２９７号WO 01/62297 米国特許第６，３０６，９９３号明細書U.S. Patent No. 6,306,993 米国特許出願公開第２００３／００３２５９３号明細書US Patent Application Publication No. 2003/0032593 米国特許第７，４６８，４１８号明細書U.S. Patent No. 7,468,418

簡単な概要
本発明の化合物は、これらの課題を解決し、当該分野における既存のアンチセンス分子についての改善を提供する。細胞浸透性ペプチドを、実質的に荷電していない核酸類似体に、グリシンまたはプロリンアミノ酸を介して結合することにより、本発明者らは、他のペプチドオリゴマーコンジュゲートに関連する毒性の課題を解決した。さらに、サブユニット間のリンケージの修飾、ならびに／または、オリゴヌクレオチド類似体、例えば、モルホリノオリゴヌクレオチドの５’末端および／もしくは３’末端への末端部分の接合も、前記コンジュゲートの特性を改善し得る。例えば、ある実施形態では、本開示のコンジュゲートは、他のオリゴヌクレオチド類似体と比較して、毒性を低下させ、ならびに／または、細胞送達、有効性および／もしくは組織分布を向上し、ならびに／または、標的器官に、より効果的に送達され得る。これらの優れた特性は、好ましい治療的指標、臨床用量の減少ならびに、物品の費用低下をもたらす。 BRIEF SUMMARY The compounds of the present invention solve these problems and provide an improvement over existing antisense molecules in the art. By linking cell penetrating peptides to substantially uncharged nucleic acid analogs via glycine or proline amino acids, we solve the toxicity challenges associated with other peptide oligomer conjugates. did. In addition, modification of linkages between subunits and / or conjugation of terminal moieties to the 5 'and / or 3' ends of oligonucleotide analogues, eg morpholino oligonucleotides, also improve the properties of said conjugates obtain. For example, in certain embodiments, conjugates of the present disclosure reduce toxicity and / or improve cell delivery, efficacy and / or tissue distribution, and / or as compared to other oligonucleotide analogs. Or, it can be delivered more effectively to the target organ. These superior properties result in favorable therapeutic indicators, reduced clinical dose, and reduced cost of goods.

したがって、本開示の一実施形態では、
（ａ）アミノ酸サブユニットを含むキャリアペプチド；および、
（ｂ）実質的に荷電していない骨格および、標的核酸に対する配列特異的結合用のターゲッティング塩基配列を含む核酸類似体；を含み、
前記アミノ酸サブユニットのうちの２個以上が、正電荷を有するアミノ酸であり、前記キャリアペプチドが、前記キャリアペプチドのカルボキシ末端に、グリシン（Ｇ）またはプロリン（Ｐ）アミノ酸を含み、前記キャリアペプチドが、前記核酸類似体に共有結合している、コンジュゲートを提供する。上記コンジュゲートと、薬学的に許容され得る媒体とを含む組成物も、提供する。 Thus, in one embodiment of the present disclosure:
(A) a carrier peptide comprising an amino acid subunit;
(B) a nucleic acid analogue comprising a substantially uncharged backbone and a targeting base sequence for sequence specific binding to a target nucleic acid;
Two or more of the amino acid subunits are positively charged amino acids, and the carrier peptide comprises glycine (G) or proline (P) amino acids at the carboxy terminus of the carrier peptide, and the carrier peptide is , Providing a conjugate covalently linked to said nucleic acid analogue. Also provided is a composition comprising the above conjugate and a pharmaceutically acceptable vehicle.

もう１つの実施形態では、本開示は、タンパク質の生成を阻害する方法であって、前記タンパク質をコードする核酸を、本開示のコンジュゲートに曝す工程を含む方法を提供する。   In another embodiment, the present disclosure provides a method of inhibiting the production of a protein, comprising exposing a nucleic acid encoding said protein to a conjugate of the present disclosure.

本開示のもう１つの態様は、細胞内への核酸類似体の輸送を向上するための方法であって、請求項１記載のキャリアペプチドを、核酸類似体にコンジュゲートする工程を含み、前記細胞内への前記核酸類似体の輸送が、非コンジュゲート型の前記核酸類似体と比較して向上される、方法を含む。   Another aspect of the present disclosure is a method for improving the transport of nucleic acid analogues into cells, comprising the step of conjugating the carrier peptide according to claim 1 to nucleic acid analogues, said cells Included is a method wherein the transport of said nucleic acid analogue into is improved as compared to said nucleic acid analogue in non-conjugated form.

もう１つの実施形態では、本開示は、被験体における疾患を処置する方法であって、治療的に有効量の開示されたコンジュゲートを、前記被験体に投与する工程を含む、方法に関する。前記コンジュゲートを製造する方法、それを使用するための方法、および、核酸類似体にコンジュゲートするのに有用なキャリアペプチドも提供する。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
（ａ）アミノ酸サブユニットを含むキャリアペプチド；および、
（ｂ）実質的に荷電していない骨格および、標的核酸に対する配列特異的結合用のターゲッティング塩基配列を含む核酸類似体；を含むコンジュゲートであって、
ここで、該アミノ酸サブユニットのうちの２個以上が、正電荷を有するアミノ酸であり、該キャリアペプチドが、該キャリアペプチドのカルボキシ末端に、グリシン（Ｇ）またはプロリン（Ｐ）アミノ酸サブユニットを含み、７個以下連続したアミノ酸サブユニットが、アルギニンであり、該キャリアペプチドが、該核酸類似体に共有結合している、
コンジュゲート。
（項目２）
前記キャリアペプチドが、前記カルボキシ末端に、グリシンアミノ酸を含む、項目１記載のコンジュゲート。
（項目３）
前記キャリアペプチドが、前記カルボキシ末端に、プロリンアミノ酸を含む、項目１記載のコンジュゲート。
（項目４）
前記キャリアペプチドが、４から４０個のアミノ酸サブユニットを含む、項目１記載のコンジュゲート。
（項目５）
前記キャリアペプチドが、６から２０個のアミノ酸サブユニットを含む、項目１記載のコンジュゲート。
（項目６）
前記正電荷を有するアミノ酸が、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはそれらの組み合わせである、項目１記載のコンジュゲート。
（項目７）
前記正電荷を有するアミノ酸のうちの少なくとも１個が、アルギニンである、項目１記載のコンジュゲート。
（項目８）
前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリン以外の前記アミノ酸サブユニットの各々が、正電荷を有するアミノ酸である、項目１記載のコンジュゲート。
（項目９）
前記正電荷を有するアミノ酸の各々が、アルギニンである、項目１記載のコンジュゲート。
（項目１０）
前記正電荷を有するアミノ酸のうちの少なくとも１個が、アルギニン類似体であり、前記アルギニン類似体が、構造Ｒ ａ Ｎ＝Ｃ（ＮＨ ２ ）Ｒ ｂ の側鎖を含むカチオン性α−アミノ酸であり、ここで、Ｒ ａ がＨまたはＲ ｃ であり；Ｒ ｂ がＲ ｃ 、ＮＨ ２ 、ＮＨＲまたはＮ（Ｒ ｃ ） ２ であり、Ｒ ｃ が低級アルキルまたは低級アルケニルであり、および、場合により、酸素または窒素を含み、または、Ｒ ａ およびＲ ｂ が、共に環を形成してもよく；前記側鎖が、Ｒ ａ またはＲ ｂ を介して、前記アミノ酸に結合される、項目１記載のコンジュゲート。
（項目１１）
前記アミノ酸サブユニットのうちの少なくとも２０％が、正電荷を有するアミノ酸である、項目１記載のコンジュゲート。
（項目１２）
前記アミノ酸サブユニットのうちの少なくとも５０％が、正電荷を有するアミノ酸である、項目１記載のコンジュゲート。
（項目１３）
前記アミノ酸サブユニットのうちの少なくとも８０％が、正電荷を有するアミノ酸である
、項目１記載のコンジュゲート。
（項目１４）
前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリン以外の全ての前記アミノ酸サブユニットが、正電荷を有するアミノ酸である、項目１記載のコンジュゲート。
（項目１５）
前記キャリアペプチドが、配列（Ｒ ｄ ） ｍ を含み、Ｒ ｄ が、各出現箇所で独立して、正電荷を有するアミノ酸であり、ｍが、２から１２の範囲の整数である、項目１記載のコンジュゲート。
（項目１６）
Ｒ ｄ が、各出現箇所で独立して、アルギニン、ヒスチジンまたはリジンである、項目１５記載のコンジュゲート。
（項目１７）
各Ｒ ｄ が、アルギニンである、項目１５記載のコンジュゲート。
（項目１８）
前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリン以外の各アミノ酸サブユニットが、アルギニンである、項目１記載のコンジュゲート。
（項目１９）
前記キャリアペプチドが、少なくとも１つの疎水性アミノ酸を含み、該疎水性アミノ酸が、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキルの側鎖を含み、該アルキル、アルケニルおよびアルキニルの側鎖が、６つの炭素原子毎に、多くても１つのヘテロ原子を含む、項目１記載のコンジュゲート。
（項目２０）
前記キャリアペプチドが、２つ以上の疎水性アミノ酸を含む、項目１９記載のコンジュゲート。
（項目２１）
前記キャリアペプチドが、２つ以上連続した疎水性アミノ酸を含む、項目１９記載のコンジュゲート。
（項目２２）
前記疎水性アミノ酸のうちの少なくとも１つが、フェニルアラニンである、項目１９記載のコンジュゲート。
（項目２３）
前記疎水性アミノ酸の各々が、フェニルアラニンである、項目１９記載のコンジュゲート。
（項目２４）
前記キャリアペプチドが、下記構造（Ｙ ｂ ）：


を有する、少なくとも１つの中性アミノ酸を含み、式中、ｎが、２から７であり、各Ｒ ｅ が各出現箇所で独立して、水素またはメチルである、項目１記載のコンジュゲート。
（項目２５）
前記キャリアペプチドが、配列［（Ｒ ｄ Ｙ ｂ Ｒ ｄ ） ｘ （Ｒ ｄ Ｒ ｄ Ｙ ｂ ） ｙ ］ ｚ を含み、Ｒ ｄ が、各出現箇所で独立して、正電荷を有するアミノ酸であり、ｘおよびｙが、各出現箇所で独立して、０または１であり、但し、ｘ＋ｙが１または２であり、ｚが、１から６の範囲の整数である、項目２４記載のコンジュゲート。
（項目２６）
Ｒ ｄ が、各出現箇所で独立して、アルギニン、ヒスチジンまたはリジンである、項目２５記載のコンジュゲート。
（項目２７）
各Ｒ ｄ が、アルギニンである、項目２５記載のコンジュゲート。
（項目２８）
少なくとも１つのＹ ｂ が、６−アミノヘキサン酸またはβ−アラニンである、項目２５記載のコンジュゲート。
（項目２９）
前記キャリアペプチドが、配列ＩＬＦＱＹを含む、項目１記載のコンジュゲート。
（項目３０）
前記キャリアペプチドが、配列ＩＬＦＱ、ＩＷＦＱまたはＩＬＩＱを含む、項目１記載のコンジュゲート。
（項目３１）
前記キャリアペプチドが、配列ＰＰＭＷＳ、ＰＰＭＷＴ、ＰＰＭＦＳまたはＰＰＭＹＳを含む、項目１記載のコンジュゲート。
（項目３２）
前記キャリアペプチドが、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリンまたはスレオニンのうちの少なくとも１つを含む、項目１記載のコンジュゲート。
（項目３３）
前記キャリアペプチドが、前記キャリアペプチドのアミノ末端に、アセチル、ベンゾイルまたはステアロイル部分を含む、項目１記載のコンジュゲート。
（項目３４）
前記アミノ酸サブユニットの各々が、天然アミノ酸である、項目１記載のコンジュゲート。
（項目３５）
前記荷電していない骨格が、サブユニット間リンケージにより結合されたモルホリノ環構造の配列を含み、前記サブユニット間リンケージが、１つのモルホリノ環構造の３’端を、隣接するモルホリノ環構造の５’端に結合し、前記オリゴマーが前記標的核酸に、配列特異的な方法で結合し得るように、各モルホリノ環構造が、塩基対合部分に結合され、前記サブユニット間リンケージが、下記一般構造（Ｉ）：


または、その塩もしくはその異性体を有し、該サブユニット間リンケージ（Ｉ）の各々が、独立して、リンケージ（Ａ）またはリンケージ（Ｂ）であり：
リンケージ（Ａ）に関して：
Ｗが各出現箇所で独立して、ＳまたはＯであり；
Ｘが各出現箇所で独立して、−Ｎ（ＣＨ ３ ） ２ 、−ＮＲ １ Ｒ ２ 、−ＯＲ ３ または；


であり；
Ｙが各出現箇所で独立して、Ｏまたは−ＮＲ ２ であり；
Ｒ １ が各出現箇所で独立して、水素またはメチルであり；
Ｒ ２ が各出現箇所で独立して、水素または−ＬＮＲ ４ Ｒ ５ Ｒ ７ であり；
Ｒ ３ が各出現箇所で独立して、水素またはＣ １ −Ｃ ６ アルキルであり；
Ｒ ４ が各出現箇所で独立して、水素、メチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ ２ 、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ ２ または−［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ ｍ Ｈであり、Ｚが、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｒ’が、天然に存在するアミノ酸の側鎖またはその１つもしくは２つの炭素同族体であり、ｍが、１から６であり；
Ｒ ５ が各出現箇所で独立して、水素、メチルまたは電子対であり；
Ｒ ６ が各出現箇所で独立して、水素またはメチルであり；
Ｒ ７ が各出現箇所で独立して、水素、Ｃ １ −Ｃ ６ アルキルまたはＣ １ −Ｃ ６ アルコキシアルキルであり；
Ｌが、アルキル、アルコキシもしくはアルキルアミノの基またはそれらの組み合わせを含む、長さ１８原子以下の必要に応じたリンカーであり、ならびに、
リンケージ（Ｂ）に関して：
Ｗが各出現箇所で独立して、ＳまたはＯであり；
Ｘが各出現箇所で独立して、−ＮＲ ８ Ｒ ９ または−ＯＲ ３ であり；および、
Ｙが各出現箇所で独立して、Ｏまたは−ＮＲ １０ であり、
Ｒ ８ が各出現箇所で独立して、水素またはＣ ２ −Ｃ １２ アルキルであり；
Ｒ ９ が各出現箇所で独立して、水素、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキル、Ｃ １ −Ｃ １２ アラルキルまたはアリールであり；
Ｒ １０ が各出現箇所で独立して、水素、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキルまたは−ＬＮＲ ４ Ｒ ５ Ｒ ７ であり；
Ｒ ８ およびＲ ９ が結合して、５〜１８員の単環複素環もしくは二環複素環を形成してもよく、または、Ｒ ８ 、Ｒ ９ またはＲ ３ がＲ １０ と結合して、５〜７員の複素環を形成し、Ｘが４−ピペラジノである場合、Ｘが下記構造（ＩＩＩ）：


を有し、式中：
Ｒ １１ が各出現箇所で独立して、Ｃ ２ −Ｃ １２ アルキル、Ｃ １ −Ｃ １２ アミノアルキル、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり；および、
Ｒが各出現箇所で独立して、電子対、水素またはＣ １ −Ｃ １２ アルキルであり；および、
Ｒ １２ が各出現箇所で独立して、水素、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキル、Ｃ １ −Ｃ １２ アミノアルキル、−ＮＨ ２ 、−ＣＯＮＨ ２ 、−ＮＲ １３ Ｒ １４ 、−ＮＲ １３ Ｒ １４ Ｒ １５ 、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキルカルボニル、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニル グアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コラート、デオキシコラート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−ＳＲ １３ またはＣ １ −Ｃ １２ アルコキシであり、Ｒ １３ 、Ｒ １４ およびＲ １５ が、各出現箇所で独立して、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキルである、項目１記載のコンジュゲート。
（項目３６）
前記モルホリノ環構造のうちの少なくとも１つが、下記構造（ｉ）：


を有し、式中、Ｐｉが、各出現箇所で独立して、塩基対合部分である、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目３７）
前記サブユニット間リンケージのうちの少なくとも１つが、リンケージ（Ａ）である、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目３８）
前記サブユニット間リンケージの各々が、リンケージ（Ａ）である、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目３９）
各リンケージ（Ａ）が、各出現箇所で同じ構造を有する、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目４０）
リンケージ（Ａ）の少なくとも１つ出現箇所に関して、Ｘが、−Ｎ（ＣＨ ３ ） ２ である、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目４１）
リンケージ（Ａ）の各出現箇所で、Ｘが、−Ｎ（ＣＨ ３ ） ２ である、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目４２）
各リンケージが、リンケージ（Ａ）であり、Ｘが、−Ｎ（ＣＨ ３ ） ２ である、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目４３）
リンケージ（Ａ）の少なくとも１つの出現箇所に関して、Ｘが、下記構造：


有する、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目４４）
リンケージ（Ｂ）の少なくとも１つの出現箇所に関して、Ｘが、下記構造：


有する、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目４５）
リンケージ（Ｂ）の少なくとも１つの出現箇所に関して、Ｘが、下記構造：


有する、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目４６）
ＷおよびＹが、各出現箇所でＯである、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目４７）
前記サブユニット間リンケージのうちの少なくとも５％が、リンケージ（Ｂ）である、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目４８）
各リンケージ（Ｂ）が、各出現箇所で同じ構造を有する、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目４９）
前記核酸類似体が、下記構造（ＸＶＩＩ）：


または、その塩もしくは異性体を有し、式中：
Ｒ １７ が各出現箇所で独立して、存在しないか、水素またはＣ １ −Ｃ ６ アルキルであり；
Ｒ １８ およびＲ １９ が各出現箇所で独立して、存在しないか、水素、前記キャリアペプチド、Ｃ ２ −Ｃ ３０ アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ ２１ またはＲ ２０ であり；
Ｒ ２０ が各出現箇所で独立して、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ １ −Ｃ ３０ アルキル、Ｃ ３ −Ｃ ８ シクロアルキル；Ｃ ６ −Ｃ ３０ アリール、Ｃ ７ −Ｃ ３０ アラルキル、Ｃ ３ −Ｃ ３０ アルキルカルボニル、Ｃ ３ −Ｃ ８ シクロアルキルカルボニル、Ｃ ３ −Ｃ ８ シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ ７ −Ｃ ３０ アリールカルボニル、Ｃ ７ −Ｃ ３０ アラルキルカルボニル、Ｃ ２ −Ｃ ３０ アルキルオキシカルボニル、Ｃ ３ −Ｃ ８ シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ ７ −Ｃ ３０ アリールオキシカルボニル、Ｃ ８ −Ｃ ３０ アラルキルオキシカルボニルまたは−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ ２２ ） ２ であり；
Ｒ ２１ が、１つ以上のエーテル結合、ヒドロキシル部分またはそれらの組み合わせを含むＣ １ −Ｃ ３０ アルキルであり；
各Ｒ ２２ が独立して、Ｃ ６ −Ｃ １２ アリールオキシであり；
Ｐｉが、塩基対合部分であり；
Ｌ １ およびＬ ２ がそれぞれ、直接結合または、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、カルボニル、カルバマート、ホスホロジアミダート、ホスホロアミダート、ホスホロチオアートおよびホスホジエステルから選択される結合を含む、長さ１８原子以下のリンカーであり；
ｘが、０またはそれより大きい整数であり；および、
Ｒ １７ およびＲ １８ が両方とも存在し、Ｒ １８ またはＲ １９ のうちの少なくとも１つが、前記キャリアペプチドである、項目３５記載のコンジュゲート。
（項目５０）
Ｒ １８ が、前記キャリアペプチドである、項目４９記載のコンジュゲート。
（項目５１）
Ｒ １９ が、前記キャリアペプチドである、項目４９記載のコンジュゲート。
（項目５２）
Ｒ １８ またはＲ １９ のうちの少なくとも１つが、Ｒ ２０ である、項目４９記載のコンジュゲート。
（項目５３）
Ｒ １９ が、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ ２１ である、項目４９記載のコンジュゲート。
（項目５４）
Ｒ １９ が、


である、項目５３記載のコンジュゲート。
（項目５５）
Ｌ １ が、ホスホロジアミダートおよびピペラジン結合を含む、項目４９記載のコンジュゲート。
（項目５６）
Ｌ １ が、下記構造（ＸＸＩＸ）：


を有し、式中、Ｒ ２４ が存在しないか、ＨまたはＣ １ −Ｃ ６ アルキルである、項目５５記載のコンジュゲート。
（項目５７）
Ｒ ２４ が、存在しない、項目５６記載のコンジュゲート。
（項目５８）
Ｒ １８ が、前記キャリアペプチドであり、Ｌ ２ が、直接結合であり、前記キャリアペプチドが、前記キャリアペプチドのカルボキシ末端と前記核酸類似体の３’末端窒素との間の結合を形成する、項目４９記載のコンジュゲート。
（項目５９）
項目１記載のコンジュゲートと、薬学的に許容され得る媒体とを含む、組成物。
（項目６０）
被験体における疾患を処置する方法であって、治療的に有効量の項目１記載のコンジュゲートを、前記被験体に投与する工程を含む、方法。
（項目６１）
前記疾患が、ウイルス感染、神経筋疾患、細菌感染、炎症または多発性嚢胞腎である、請
求項６０記載の方法。
（項目６２）
前記ウイルス感染が、インフルエンザである、項目６１記載の方法。
（項目６３）
前記神経筋疾患が、デュシェンヌ型筋ジストロフィーである、項目６１記載の方法。
（項目６４）
細胞内への核酸類似体の輸送を向上するための方法であって、項目１記載のキャリアペプチドを、核酸類似体にコンジュゲートする工程を含み、該細胞内への該核酸類似体の輸送が、非コンジュゲート型の該核酸類似体と比較して向上される、方法。
（項目６５）
前記核酸類似体が、モルホリノオリゴマーである、項目６４記載の方法。 In another embodiment, the present disclosure relates to a method of treating a disease in a subject comprising administering a therapeutically effective amount of the disclosed conjugate to said subject. Also provided are methods of making the conjugates, methods for their use, and carrier peptides useful for conjugation to nucleic acid analogs.
In certain embodiments, for example, the following is provided:
(Item 1)
(A) a carrier peptide comprising an amino acid subunit;
(B) a conjugate comprising: a substantially non-charged backbone; and a nucleic acid analogue comprising a targeting base sequence for sequence specific binding to a target nucleic acid;
Here, two or more of the amino acid subunits are positively charged amino acids, and the carrier peptide contains a glycine (G) or proline (P) amino acid subunit at the carboxy terminus of the carrier peptide. Or less and 7 consecutive amino acid subunits are arginine, and the carrier peptide is covalently linked to the nucleic acid analogue,
Conjugate.
(Item 2)
The conjugate according to item 1, wherein the carrier peptide comprises a glycine amino acid at the carboxy terminus.
(Item 3)
The conjugate according to item 1, wherein the carrier peptide comprises a proline amino acid at the carboxy terminus.
(Item 4)
The conjugate according to item 1, wherein the carrier peptide comprises 4 to 40 amino acid subunits.
(Item 5)
The conjugate according to item 1, wherein the carrier peptide comprises 6 to 20 amino acid subunits.
(Item 6)
The conjugate according to item 1, wherein the positively charged amino acid is histidine (H), lysine (K), arginine (R) or a combination thereof.
(Item 7)
The conjugate according to item 1, wherein at least one of the positively charged amino acids is arginine.
(Item 8)
The conjugate according to item 1, wherein each of the amino acid subunits other than the carboxy terminal glycine or proline is a positively charged amino acid.
(Item 9)
The conjugate according to item 1, wherein each of the positively charged amino acids is arginine.
(Item 10)
At least one of the positively charged amino acids is an arginine analog, and the arginine analog is a cationic α-amino acid comprising a side chain of the structure R a N = C (NH 2 ) R b Wherein R a is H or R c ; R b is R c , NH 2 , NHR or N (R c ) 2 , R c is lower alkyl or lower alkenyl, and, optionally, The conjugate according to item 1, wherein the conjugate comprises oxygen or nitrogen, or R a and R b may together form a ring; and the side chain is linked to the amino acid via R a or R b Gate.
(Item 11)
The conjugate according to item 1, wherein at least 20% of the amino acid subunits are positively charged amino acids.
(Item 12)
The conjugate according to item 1, wherein at least 50% of the amino acid subunits are positively charged amino acids.
(Item 13)
At least 80% of the amino acid subunits are positively charged amino acids
, A conjugate according to item 1.
(Item 14)
The conjugate according to item 1, wherein all the amino acid subunits other than the carboxy-terminal glycine or proline are positively charged amino acids.
(Item 15)
The item ( 1 ) , wherein the carrier peptide comprises the sequence (R d ) m , R d is, independently at each occurrence, a positively charged amino acid, and m is an integer ranging from 2 to 12 Conjugates of
(Item 16)
16. The conjugate according to item 15, wherein R d is independently at each occurrence arginine, histidine or lysine.
(Item 17)
16. The conjugate according to item 15, wherein each R d is arginine.
(Item 18)
The conjugate according to item 1, wherein each amino acid subunit other than glycine or proline at the carboxy terminus is arginine.
(Item 19)
The carrier peptide comprises at least one hydrophobic amino acid, wherein the hydrophobic amino acid comprises substituted or unsubstituted alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl or aralkyl side chains, wherein the alkyl, alkenyl and alkynyl side chains are , A conjugate according to item 1, comprising at most one heteroatom for every six carbon atoms.
(Item 20)
20. The conjugate according to item 19, wherein said carrier peptide comprises two or more hydrophobic amino acids.
(Item 21)
20. The conjugate according to item 19, wherein the carrier peptide comprises two or more consecutive hydrophobic amino acids.
(Item 22)
20. The conjugate according to item 19, wherein at least one of the hydrophobic amino acids is phenylalanine.
(Item 23)
The conjugate according to item 19, wherein each of the hydrophobic amino acids is phenylalanine.
(Item 24)
The carrier peptide has the following structure (Y b ):


3. A conjugate according to item 1 comprising at least one neutral amino acid having, wherein n is from 2 to 7 and each R e independently at each occurrence is hydrogen or methyl.
(Item 25)
The carrier peptide comprises the sequence [(R d Y b R d ) x (R d R d Y b ) y ] z , and R d is an amino acid having a positive charge independently at each occurrence, The conjugate according to item 24, wherein x and y are independently 0 or 1 at each occurrence, provided that x + y is 1 or 2 and z is an integer in the range of 1 to 6.
(Item 26)
26. The conjugate according to item 25, wherein R d is independently at each occurrence arginine, histidine or lysine.
(Item 27)
26. The conjugate according to item 25, wherein each R d is arginine.
(Item 28)
26. The conjugate according to item 25, wherein at least one Y b is 6-aminohexanoic acid or β-alanine.
(Item 29)
The conjugate according to claim 1, wherein the carrier peptide comprises the sequence ILFQY.
(Item 30)
The conjugate according to item 1, wherein the carrier peptide comprises the sequence ILFQ, IWFQ or ILIQ.
(Item 31)
The conjugate according to item 1, wherein the carrier peptide comprises the sequence PPMWS, PPMWT, PPMFS or PPMYS.
(Item 32)
The conjugate according to item 1, wherein the carrier peptide comprises at least one of alanine, asparagine, cysteine, glutamine, glycine, histidine, lysine, methionine, serine or threonine.
(Item 33)
The conjugate according to item 1, wherein the carrier peptide comprises an acetyl, benzoyl or stearoyl moiety at the amino terminus of the carrier peptide.
(Item 34)
The conjugate according to item 1, wherein each of the amino acid subunits is a natural amino acid.
(Item 35)
The uncharged backbone comprises a sequence of morpholino ring structures linked by an intersubunit linkage, wherein the intersubunit linkage is 5 'of one morpholino ring structure, 5' of the adjacent morpholino ring structure Each morpholino ring structure is attached to a base pairing moiety such that the morpholino ring structure is attached to the end, so that the oligomer can bind to the target nucleic acid in a sequence specific manner, and the intersubunit linkage is I):


Or having a salt or an isomer thereof, each of the intersubunit linkages (I) independently being linkage (A) or linkage (B):
Regarding linkage (A):
W is S or O independently at each occurrence;
X is independently in each occurrence, -N (CH 3) 2, -NR 1 R 2, -OR 3 or;


And
Y is independently at each occurrence O or -NR 2 ;
R 1 is independently at each occurrence hydrogen or methyl;
R 2 is independently at each occurrence hydrogen or -LNR 4 R 5 R 7 ;
R 3 is independently at each occurrence hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
R 4 independently at each occurrence: hydrogen, methyl, -C (= NH) NH 2 , -ZL -NHC (= NH) NH 2 or-[C (O) CHR'NH] m H And Z is carbonyl (C (O)) or a direct bond, R 'is the side chain of a naturally occurring amino acid or one or two carbon homologs thereof, m is 1 to 6 Yes;
R 5 is independently at each occurrence hydrogen, methyl or an electron pair;
R 6 is independently at each occurrence hydrogen or methyl;
R 7 is independently at each occurrence hydrogen, C 1 -C 6 alkyl or C 1 -C 6 alkoxyalkyl;
L is an optional linker of up to 18 atoms in length comprising an alkyl, alkoxy or alkylamino group or combinations thereof, and
Regarding linkage (B):
W is S or O independently at each occurrence;
X is -NR 8 R 9 or -OR 3 independently at each occurrence ; and
Y independently at each occurrence is O or -NR 10 ,
R 8 is independently at each occurrence hydrogen or C 2 -C 12 alkyl;
R 9 is independently at each occurrence hydrogen, C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aralkyl or aryl;
R 10 is independently at each occurrence hydrogen, C 1 -C 12 alkyl or -LNR 4 R 5 R 7 ;
R 8 and R 9 may be combined to form a 5- to 18-membered monocyclic or bicyclic heterocycle, or R 8 , R 9 or R 3 is combined with R 10 to When forming a -7 membered heterocyclic ring and X is 4-piperazino, X has the following structure (III):


In the formula:
R 11 is independently at each occurrence C 2 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aminoalkyl, C 1 -C 12 alkylcarbonyl, aryl, heteroaryl or heterocyclyl;
R is independently at each occurrence an electron pair, hydrogen or C 1 -C 12 alkyl; and
R 12 independently at each occurrence: hydrogen, C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aminoalkyl, -NH 2 , -CONH 2 , -NR 13 R 14 , -NR 13 R 14 R 15 , C 1 -C 12 alkylcarbonyl, oxo, -CN, trifluoromethyl, amidyl, amidinyl, amidinylalkyl, amidinylalkylcarbonyl guanidinyl, guanidinylalkyl, guanidinylalkylcarbonyl, cholate, deoxycholate, aryl , Heteroaryl, heterocycle, -SR 13 or C 1 -C 12 alkoxy, wherein R 13 , R 14 and R 15 are each independently C 1 -C 12 alkyl at each occurrence; Conjugates of
(Item 36)
At least one of the morpholino ring structures has the following structure (i):


36. A conjugate according to item 35, wherein Pi is independently at each occurrence a base pairing moiety.
(Item 37)
36. The conjugate according to item 35, wherein at least one of said intersubunit linkages is linkage (A).
(Item 38)
36. The conjugate according to item 35, wherein each of said intersubunit linkages is linkage (A).
(Item 39)
36. The conjugate according to item 35, wherein each linkage (A) has the same structure at each occurrence.
(Item 40)
For at least one occurrence of the linkage (A), X is a -N (CH 3) 2, a conjugate of item 35, wherein.
(Item 41)
Each occurrence of the linkage (A), X is a -N (CH 3) 2, a conjugate of item 35, wherein.
(Item 42)
Each linkage is a linkage (A), X is a -N (CH 3) 2, a conjugate of item 35, wherein.
(Item 43)
With respect to at least one occurrence of linkage (A), X has the following structure:


The conjugate according to item 35, having.
(Item 44)
For at least one occurrence of linkage (B), X has the following structure:


The conjugate according to item 35, having.
(Item 45)
For at least one occurrence of linkage (B), X has the following structure:


The conjugate according to item 35, having.
(Item 46)
36. The conjugate according to item 35, wherein W and Y are O at each occurrence.
(Item 47)
36. The conjugate according to item 35, wherein at least 5% of the intersubunit linkage is linkage (B).
(Item 48)
36. The conjugate according to item 35, wherein each linkage (B) has the same structure at each occurrence.
(Item 49)
The nucleic acid analogue has the following structure (XVII):


Or having a salt or isomer thereof, wherein:
R 17 independently at each occurrence is absent, hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
R 18 and R 19 independently at each occurrence are absent, hydrogen, said carrier peptide, C 2 -C 30 alkylcarbonyl, —C (= O) OR 21 or R 20 ;
R 20 independently at each occurrence: guanidinyl, heterocyclyl, C 1 -C 30 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl; C 6 -C 30 aryl, C 7 -C 30 aralkyl, C 3 -C 30 alkyl Carbonyl, C 3 -C 8 cycloalkylcarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkylalkyl carbonyl, C 7 -C 30 arylcarbonyl, C 7 -C 30 aralkylcarbonyl, C 2 -C 30 alkyloxycarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aryloxycarbonyl, C 8 -C 30 aralkyloxycarbonyl or -P (= O) (R 22 ) 2 ;
R 21 is C 1 -C 30 alkyl comprising one or more ether linkages, hydroxyl moieties or combinations thereof ;
Each R 22 is independently C 6 -C 12 aryloxy;
Pi is a base pairing moiety;
L 1 and L 2 are each selected from direct bond or alkyl, hydroxyl, alkoxy, alkylamino, amide, ester, carbonyl, carbamate, phosphorodiamidate, phosphoroamidate, phosphorothioate and phosphodiester A linker of up to 18 atoms in length, including a bond;
x is an integer of 0 or greater; and
36. The conjugate according to item 35, wherein R 17 and R 18 are both present and at least one of R 18 or R 19 is the carrier peptide.
(Item 50)
The conjugate according to item 49, wherein R 18 is the carrier peptide.
(Item 51)
The conjugate according to item 49, wherein R 19 is the carrier peptide.
(Item 52)
50. The conjugate according to item 49 , wherein at least one of R 18 or R 19 is R 20 .
(Item 53)
The conjugate according to item 49 , wherein R 19 is -C (= O) OR 21 .
(Item 54)
R 19 is


54. The conjugate according to item 53, which is
(Item 55)
50. The conjugate according to item 49, wherein L 1 comprises a phosphorodiamidate and piperazine linkage.
(Item 56)
L 1 has the following structure (XXIX):


56. The conjugate according to item 55 , wherein R 24 is absent or is H or C 1 -C 6 alkyl.
(Item 57)
56. The conjugate according to item 56, wherein R 24 is absent.
(Item 58)
R 18 is a said carrier peptide, L 2 is a direct bond, said carrier peptide to form a bond between the 3 'terminal nitrogen of the nucleic acid analog and the carboxy terminus of the carrier peptide, item 49. The conjugate according to
(Item 59)
A composition comprising the conjugate according to item 1 and a pharmaceutically acceptable medium.
(Item 60)
A method of treating a disease in a subject, comprising administering to said subject a therapeutically effective amount of the conjugate according to item 1.
(Item 61)
Said disease is viral infection, neuromuscular disease, bacterial infection, inflammation or polycystic kidney disease,
Method according to claim 60.
(Item 62)
76. The method of paragraph 61, wherein said viral infection is influenza.
(Item 63)
76. The method of paragraph 61, wherein said neuromuscular disease is Duchenne muscular dystrophy.
(Item 64)
A method for improving transport of a nucleic acid analogue into a cell, comprising the step of conjugating the carrier peptide according to item 1 to a nucleic acid analogue, wherein the transport of the nucleic acid analogue into the cell is , A method that is improved as compared to said non-conjugated form of said nucleic acid analogue.
(Item 65)
The method according to item 64, wherein the nucleic acid analogue is a morpholino oligomer.

本発明のこれらの態様および他の態様は、下記の詳細な説明を参照することにより明らかであろう。この目的を達成するために、本願明細書において、特定の背景情報、手順、化合物および／または組成物を、より詳細に記載する、種々の参考文献が説明され、それらの全体が参照により、それぞれ本願明細書に取り込まれる。   These and other aspects of the invention will be apparent upon reference to the following detailed description. To achieve this end, various references are set forth herein, which describe in more detail certain background information, procedures, compounds and / or compositions, each of which is incorporated by reference in its entirety. Incorporated herein by reference.

図１Ａは、ホスホロジアミダートリンケージを含む、典型的なモルホリノオリゴマー構造を示す。FIG. 1A shows an exemplary morpholino oligomeric structure containing phosphorodiamidate linkages. 図１Ｂは、キャリアペプチドに、５’端でコンジュゲートされたモルホリノオリゴマーを示す。FIG. 1B shows morpholino oligomers conjugated at the 5 'end to the carrier peptide. 図１Ｃは、キャリアペプチドに、３’端でコンジュゲートされたモルホリノオリゴマーを示す。FIG. 1C shows morpholino oligomers conjugated at the 3 'end to the carrier peptide. 図１Ｄ〜Ｇは、典型的なモルホリノオリゴヌクレオチドである、指定された１Ｄから１Ｇの繰り返しサブユニットセグメントを示す。FIGS. 1D-G show designated 1D to 1G repeating subunit segments, which are exemplary morpholino oligonucleotides. 図１Ｄ〜Ｇは、典型的なモルホリノオリゴヌクレオチドである、指定された１Ｄから１Ｇの繰り返しサブユニットセグメントを示す。FIGS. 1D-G show designated 1D to 1G repeating subunit segments, which are exemplary morpholino oligonucleotides. 図１Ｄ〜Ｇは、典型的なモルホリノオリゴヌクレオチドである、指定された１Ｄから１Ｇの繰り返しサブユニットセグメントを示す。FIGS. 1D-G show designated 1D to 1G repeating subunit segments, which are exemplary morpholino oligonucleotides. 図１Ｄ〜Ｇは、典型的なモルホリノオリゴヌクレオチドである、指定された１Ｄから１Ｇの繰り返しサブユニットセグメントを示す。FIGS. 1D-G show designated 1D to 1G repeating subunit segments, which are exemplary morpholino oligonucleotides. 図２は、モルホリノ−Ｔ部分に結合される、典型的なサブユニット間リンケージを示す。FIG. 2 shows an exemplary intersubunit linkage linked to a morpholino-T moiety. 図３は、固相合成用リンカーの調製を示す反応スキームである。FIG. 3 is a reaction scheme showing the preparation of a linker for solid phase synthesis. 図４は、オリゴマー合成用固体支持体の調製を示す。FIG. 4 shows the preparation of a solid support for oligomer synthesis. 図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃは、マウスの大腿四頭筋、横隔膜および心臓のそれぞれにおいて、既知のコンジュゲートと比較した、典型的なコンジュゲートについての、エクソンスキッピングデータを示す。Figures 5A, 5B and 5C show exon skipping data for a typical conjugate compared to known conjugates in the quadriceps muscles of the mouse, the diaphragm and the heart, respectively. 図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃは、マウスの大腿四頭筋、横隔膜および心臓のそれぞれにおいて、既知のコンジュゲートと比較した、典型的なコンジュゲートについての、エクソンスキッピングデータを示す。Figures 5A, 5B and 5C show exon skipping data for a typical conjugate compared to known conjugates in the quadriceps muscles of the mouse, the diaphragm and the heart, respectively. 図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃは、マウスの大腿四頭筋、横隔膜および心臓のそれぞれにおいて、既知のコンジュゲートと比較した、典型的なコンジュゲートについての、エクソンスキッピングデータを示す。Figures 5A, 5B and 5C show exon skipping data for a typical conjugate compared to known conjugates in the quadriceps muscles of the mouse, the diaphragm and the heart, respectively. 図６Ａ、６Ｂおよび６Ｃは、マウスの大腿四頭筋、横隔膜および心臓のそれぞれにおいて、既知のコンジュゲートと比較した、典型的なコンジュゲートについての、エクソンスキッピングデータの別の表現である。Figures 6A, 6B and 6C are another representation of exon skipping data for a typical conjugate compared to known conjugates in the quadriceps muscles of the mouse, the diaphragm and the heart, respectively. 図６Ａ、６Ｂおよび６Ｃは、マウスの大腿四頭筋、横隔膜および心臓のそれぞれにおいて、既知のコンジュゲートと比較した、典型的なコンジュゲートについての、エクソンスキッピングデータの別の表現である。Figures 6A, 6B and 6C are another representation of exon skipping data for a typical conjugate compared to known conjugates in the quadriceps muscles of the mouse, the diaphragm and the heart, respectively. 図６Ａ、６Ｂおよび６Ｃは、マウスの大腿四頭筋、横隔膜および心臓のそれぞれにおいて、既知のコンジュゲートと比較した、典型的なコンジュゲートについての、エクソンスキッピングデータの別の表現である。Figures 6A, 6B and 6C are another representation of exon skipping data for a typical conjugate compared to known conjugates in the quadriceps muscles of the mouse, the diaphragm and the heart, respectively. 図７Ａおよび７Ｂは、種々のペプチド−オリゴマーコンジュゲートそれぞれで処置されたマウスにおける、血中尿素窒素（ＢＵＮ）レベルおよび生存率を示すグラフである。7A and 7B are graphs showing blood urea nitrogen (BUN) levels and viability in mice treated with each of the various peptide-oligomer conjugates. 図７Ａおよび７Ｂは、種々のペプチド−オリゴマーコンジュゲートそれぞれで処置されたマウスにおける、血中尿素窒素（ＢＵＮ）レベルおよび生存率を示すグラフである。7A and 7B are graphs showing blood urea nitrogen (BUN) levels and viability in mice treated with each of the various peptide-oligomer conjugates. 図８Ａおよび８Ｂは、種々のペプチド−オリゴマーコンジュゲートそれぞれで処置されたマウスについての、腎傷害マーカー（ＫＩＭ）データおよびクラステリン（Ｃｌｕ）データを示す。Figures 8A and 8B show kidney injury marker (KIM) data and clusterin (Clu) data for mice treated with various peptide-oligomer conjugates, respectively. 図８Ａおよび８Ｂは、種々のペプチド−オリゴマーコンジュゲートそれぞれで処置されたマウスについての、腎傷害マーカー（ＫＩＭ）データおよびクラステリン（Ｃｌｕ）データを示す。Figures 8A and 8B show kidney injury marker (KIM) data and clusterin (Clu) data for mice treated with various peptide-oligomer conjugates, respectively. 図９Ａ、９Ｂ、９Ｃおよび９Ｄは、既知のコンジュゲートと比較した、典型的なコンジュゲートで処置されたマウスにおける、エクソンスキッピング、ＢＵＮレベル、パーセント生存およびＫＩＭレベルのそれぞれを比較するグラフである。Figures 9A, 9B, 9C and 9D are graphs comparing exon skipping, BUN levels, percent survival and KIM levels, respectively, in mice treated with a typical conjugate compared to known conjugates. 図９Ａ、９Ｂ、９Ｃおよび９Ｄは、既知のコンジュゲートと比較した、典型的なコンジュゲートで処置されたマウスにおける、エクソンスキッピング、ＢＵＮレベル、パーセント生存およびＫＩＭレベルのそれぞれを比較するグラフである。Figures 9A, 9B, 9C and 9D are graphs comparing exon skipping, BUN levels, percent survival and KIM levels, respectively, in mice treated with a typical conjugate compared to known conjugates. 図９Ａ、９Ｂ、９Ｃおよび９Ｄは、既知のコンジュゲートと比較した、典型的なコンジュゲートで処置されたマウスにおける、エクソンスキッピング、ＢＵＮレベル、パーセント生存およびＫＩＭレベルのそれぞれを比較するグラフである。Figures 9A, 9B, 9C and 9D are graphs comparing exon skipping, BUN levels, percent survival and KIM levels, respectively, in mice treated with a typical conjugate compared to known conjugates. 図９Ａ、９Ｂ、９Ｃおよび９Ｄは、既知のコンジュゲートと比較した、典型的なコンジュゲートで処置されたマウスにおける、エクソンスキッピング、ＢＵＮレベル、パーセント生存およびＫＩＭレベルのそれぞれを比較するグラフである。Figures 9A, 9B, 9C and 9D are graphs comparing exon skipping, BUN levels, percent survival and KIM levels, respectively, in mice treated with a typical conjugate compared to known conjugates. 図１０は、種々のコンジュゲートで処置されたマウスについての、ＫＩＭデータを示す。FIG. 10 shows KIM data for mice treated with various conjugates. 図１１は、種々のコンジュゲートで処置されたマウスの、ＢＵＮ分析の結果を示す。FIG. 11 shows the results of BUN analysis of mice treated with different conjugates. 図１２は、マウス腎臓組織における種々のオリゴマーの濃度を示すグラフである。FIG. 12 is a graph showing the concentration of various oligomers in mouse kidney tissue.

詳細な説明
Ｉ．定義
下記の記載では、ある特定の詳細は、種々の実施形態についての理解を通じて提供されるために、説明される。ただし、当業者であれば、本発明が、これらの詳細なしに実施され得ることを理解するであろう。他の例では、周知の構成は、その実施形態の記載が不要に曖昧になるのを避けるために、詳細には示しておらず、記載していない。特に断らない限り、下記の明細書および特許請求の範囲全体を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」の語ならびに、その変形、例えば、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」および「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」は、オープンに包含的な意味、すなわち、「含むが、限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ，ｂｕｔ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ）」として解釈される。さらに、本願明細書で提供された見出しは、便宜上のみであり、特許請求の範囲の発明のスコープまたは意味を説明するものではない。 Detailed Description I. Definitions In the following description, certain details are set forth to provide a thorough understanding of various embodiments. However, one skilled in the art will understand that the invention may be practiced without these details. In other instances, well known structures are not shown or described in detail to avoid unnecessarily obscuring the description of the embodiments. Unless otherwise stated, the word "comprise" and its variants, eg, "comprises" and "comprises" have an openly inclusive meaning, ie, throughout the following specification and claims. Interpreted as "including, but not limited to". Further, the headings provided herein are for convenience only and do not explain the scope or meaning of the claimed invention.

本明細書全体を参照して、「一実施形態（ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」または「実施形態（ａｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」は、その実施形態に関連して記載される特定の特性、構造または特徴が、少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。したがって、本明細書の各所における「一実施形態では（ｉｎ ｏｎｅ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」または「実施形態では（ｉｎ ａｎ ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔ）」の句の出現は、同じ実施形態の全てを言及する必要がない。さらに、前記特定の特性、構造または特徴は、１つ以上の実施形態において、任意の適切な方法で組み合わせられてもよい。また、本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形である「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、特に断らない限り、複数の指示対象を含む。特に断らない限り、「または（ｏｒ）」の用語は、一般的に、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を含む意味において使用されることに、留意すべきである。   As used throughout the specification, “one embodiment” or “an embodiment” refers to at least one of the specific features, structures or characteristics described in connection with the embodiments. Is meant to be included in one embodiment. Thus, the appearances of the phrase "in one embodiment" or "in an embodiment" in various places throughout the specification are not necessarily all referring to the same embodiment. Furthermore, the particular features, structures or features may be combined in any suitable manner in one or more embodiments. Also, as used in this specification and the appended claims, the singular forms "a", "an" and "the" include plural referents unless the context clearly dictates otherwise. It should be noted that the term "or" is generally used in its sense including "and / or" unless specifically stated otherwise.

本願明細書で使用する場合、以下の用語は、特に断らない限り、下記の意味を有する。   As used herein, the following terms have the following meanings, unless otherwise indicated.

「アミノ」は、−ＮＨ２基を意味する。 "Amino" refers to the group -NH 2.

「シアノ」または「ニトリル」は、−ＣＮ基を意味する。   "Cyano" or "nitrile" means a -CN group.

「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」は、−ＯＨ基を意味する。   "Hydroxy" or "hydroxyl" means an -OH group.

「イミノ」は、＝ＮＨ置換基を意味する。   "Imino" means = = NH substituent.

「グアニジニル」は、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２置換基を意味する。 "Guanidinyl" means -NHC (= NH) NH 2 substituent.

「アミジニル」は、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２置換基を意味する。 "Amidinyl" means -C (= NH) NH 2 substituent.

「ニトロ」は、−ＮＯ２基を意味する。 "Nitro" refers to the group -NO 2.

「オキソ」は、＝Ｏ置換基を意味する。   "Oxo" means = O substituent.

「チオキソ」は、＝Ｓ置換基を意味する。   "Thioxo" means the = S substituent.

「コラート」は、下記構造：

を意味する。 "Korato" has the following structure:

Means

「デオキシコラート」は、下記構造：

を意味する。 "Deoxycholate" has the following structure:

Means

「アルキル」は、１から３０個の炭素原子を有し、単結合により分子の残部に付着される、飽和または不飽和（すなわち、１つ以上の二重結合および／または三重結合を含む）の、直鎖状または分岐鎖状の炭化水素鎖基を意味する。１から３０の任意の数の炭素原子を含むアルキルが含まれる。３０個以下の炭素原子を含むアルキルは、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、同様に例えば、１２個以下の炭素原子を含むアルキルは、Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。他の数の炭素原子を含むアルキル（および本願明細書で規定される他の部分）は、同様に表される。アルキル基としては、制限されず、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、Ｃ１−Ｃ１５アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ２アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８アルキルおよびＣ４−Ｃ８アルキルがあげられる。典型的なアルキル基としては、制限されず、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル（ｉｓｏ−プロピル）、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）、３−メチルヘキシル、２−メチルヘキシル、エテニル、プロプ−１−エニル、ブト−１−エニル、ペント−１−エニル、ペンタ−１，４−ジエニル、エチニル、プロピニル、ブト−２−イニル、ブト−３−イニル、ペンチニル、ヘキシニル等があげられる。本明細書において特に断らない限り、アルキル基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Alkyl" has 1 to 30 carbon atoms and is attached to the remainder of the molecule by a single bond, saturated or unsaturated (ie containing one or more double bonds and / or triple bonds) Or a straight or branched hydrocarbon chain group. Included are alkyl containing any number of carbon atoms from 1 to 30. Alkyl containing 30 carbon atoms or less is C 1 -C 30 alkyl, likewise for example alkyl containing 12 carbon atoms or less is C 1 -C 12 alkyl. Alkyls containing other numbers of carbon atoms (and other moieties as defined herein) are similarly represented. The alkyl group is not limited, and C 1 -C 30 alkyl, C 1 -C 20 alkyl, C 1 -C 15 alkyl, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 8 alkyl, C 1 -C 6 alkyl C 1 -C 4 alkyl, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 2 alkyl, C 2 -C 8 alkyl, C 3 -C 8 alkyl and C 4 -C 8 alkyl. Typical alkyl groups include, but are not limited to, methyl, ethyl, n-propyl, 1-methylethyl (iso-propyl), n-butyl, i-butyl, s-butyl, n-pentyl, 1,1- Dimethylethyl (t-butyl), 3-methylhexyl, 2-methylhexyl, ethenyl, prop-1-enyl, but-1-enyl, pent-1-enyl, penta-1,4-dienyl, ethynyl, propynyl, Examples include but-2-ynyl, but-3-ynyl, pentynyl, hexynyl and the like. Unless otherwise specified herein, alkyl groups may optionally be substituted as described below.

「アルキレン」または「アルキレン鎖」は、前記分子の残部をラジカル基に結合する、直鎖状または分岐鎖状の二価の炭化水素鎖を意味する。アルキレンは、飽和でもよいし、または不飽和でもよい（すなわち、１つ以上の二重結合および／または三重結合を含む）。典型的なアルキレンとしては、制限されず、Ｃ１−Ｃ１２アルキレン、Ｃ１−Ｃ８アルキレン、Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ４アルキレン、Ｃ１−Ｃ３アルキレン、Ｃ１−Ｃ２アルキレン、Ｃ１アルキレンがあげられる。典型的なアルキレン基としては、制限されず、メチレン、エチレン、プロピレン、ｎ−ブチレン、エテニレン、プロペニレン、ｎ−ブテニレン、プロピニレン、ｎ−ブチニレン等があげられる。前記アルキレン鎖は、単結合または二重結合により、前記分子の残部に付着され、単結合または二重結合により、ラジカル基に付着される。前記分子の残部および前記ラジカル基への前記アルキレン鎖の付着点は、前記鎖内における１つの炭素または任意の２つの炭素を介し得る。本明細書において特に断らない限り、アルキレン鎖は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Alkylene" or "alkylene chain" means a straight or branched divalent hydrocarbon chain which links the remainder of the molecule to the radical group. Alkylene may be saturated or unsaturated (ie, contain one or more double bonds and / or triple bonds). Exemplary alkylenes include, but are not limited to, C 1 -C 12 alkylene, C 1 -C 8 alkylene, C 1 -C 6 alkylene, C 1 -C 4 alkylene, C 1 -C 3 alkylene, C 1 -C 2 alkylene and C 1 alkylene can be mentioned. Typical alkylene groups include, but are not limited to, methylene, ethylene, propylene, n-butylene, ethenylene, propenylene, n-butenylene, propynylene, n-butynylene and the like. The alkylene chain is attached to the remainder of the molecule by a single bond or a double bond, and to a radical group by a single bond or a double bond. The remainder of the molecule and the point of attachment of the alkylene chain to the radical group may be via one carbon or any two carbons in the chain. Unless otherwise stated herein, the alkylene chain may be optionally substituted as described below.

「アルコキシ」は、式−ＯＲａの基を意味し、式中、Ｒａは、定義のように、アルキル基である。本明細書において特に断らない限り、アルコキシ基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Alkoxy" means a group of the formula -OR a , where Ra is, as defined, an alkyl group. Unless otherwise stated herein, alkoxy groups may optionally be substituted as described below.

「アルコキシアルキル」は、式−ＲｂＯＲａの基を意味し、式中、Ｒａは、定義のように、アルキル基であり、Ｒｂは、定義のように、アルキレン基である。本明細書において特に断らない限り、アルコキシアルキル基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Alkoxyalkyl" means a group of the formula -R b OR a , where R a is, as defined, an alkyl group, and R b is, as defined, an alkylene group. Unless otherwise stated herein, an alkoxyalkyl group may be optionally substituted as described below.

「アルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａの基を意味し、式中、Ｒａは、定義のように、アルキル基である。本明細書において特に断らない限り、アルキルカルボニル基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Alkylcarbonyl" means a group of the formula -C (= O) Ra, wherein Ra is an alkyl group, as defined. Unless otherwise stated herein, alkylcarbonyl groups may be optionally substituted as described below.

「アルキルオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａの基を意味し、式中、Ｒａは、定義のように、アルキル基である。本明細書において特に断らない限り、アルキルオキシカルボニル基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Alkyloxycarbonyl" means a group of the formula -C (= O) OR a , where Ra is an alkyl group as defined. Unless stated otherwise specifically in the specification, the alkyloxycarbonyl group may be optionally substituted as described below.

「アルキルアミノ」は、式−ＮＨＲａまたは−ＮＲａＲａの基を意味し、式中、各Ｒａは、独立して、上記定義のように、アルキル基である。本明細書において特に断らない限り、アルキルアミノ基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Alkylamino" means a group of the formula -NHR a or -NR a R a , wherein each R a is independently an alkyl group, as defined above. Unless stated otherwise specifically in the specification, the alkylamino group may optionally be substituted as described below.

「アミジル」は、式−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒａの基を意味し、式中、Ｒａは、本願明細書で定義するように、アルキル基またはアリール基である。本明細書において特に断らない限り、アミジル基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Amidyl" means a group of the formula -N (H) C (= O) Ra, wherein Ra is an alkyl or aryl group as defined herein. Unless otherwise stated herein, the amidyl group may be optionally substituted as described below.

「アミジニルアルキル」は、式−Ｒｂ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２の基を意味し、式中、Ｒｂは、上記定義のように、アルキレン基である。本明細書において特に断らない限り、アミジニルアルキル基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Ami isoxazolidinyl alkyl" means a formula -R b -C (= NH) NH 2 group, wherein, R b, as defined above, is an alkylene group. Unless otherwise stated herein, amidinylalkyl groups may be optionally substituted as described below.

「アミジニルアルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２の基を意味し、式中、Ｒｂは、上記定義のように、アルキレン基である。本明細書において特に断らない限り、アミジニルアルキルカルボニル基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Ami isoxazolidinyl Alkylcarbonyl" means a formula -C (= O) R b -C (= NH) NH 2 group, wherein, R b, as defined above, is an alkylene group. Unless otherwise stated herein, the amidinylalkylcarbonyl group may be optionally substituted as described below.

「アミノアルキル」は、式−Ｒｂ−ＮＲａＲａの基を意味し、式中、Ｒｂは、上記定義のように、アルキレン基であり、各Ｒａは、独立して、水素またはアルキル基である。 “Aminoalkyl” means a group of the formula —R b —NR a R a , wherein R b is an alkylene group as defined above, and each R a is independently hydrogen or It is an alkyl group.

「チオアルキル」は、式−ＳＲａの基を意味し、式中、Ｒａは、上記定義のように、アルキル基である。本明細書において特に断らない限り、チオアルキル基は、場合により置換されてもよい。 "Thioalkyl" means a group of the formula -SRa, wherein Ra is an alkyl group, as defined above. Unless otherwise stated herein, the thioalkyl group may be optionally substituted.

「アリール」は、水素、６から３０個の炭素原子および少なくとも１つの芳香環を含む、炭化水素環系由来の基を意味する。前記アリール基は、単環、二環、三環または四環の系でもよく、縮合環系または架橋環系を含んでもよい。アリール基としては、制限されず、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、フロオランテン、フルオレン、ａｓ−インダセン、ｓ−インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、フェナレン、フェナンスレン、プレイアデン、ピレンおよびトリフェニレンの炭化水素環系由来のアリール基があげられる。本明細書において特に断らない限り、「アリール」の用語または「ａｒ−」の接頭辞（例えば、「アラルキル（ａｒａｌｋｙｌ）」）は、場合により、置換されたアリール基を含むことを意味する。   "Aryl" means a group derived from a hydrocarbon ring system comprising hydrogen, 6 to 30 carbon atoms and at least one aromatic ring. The aryl group may be a monocyclic, bicyclic, tricyclic or tetracyclic system, and may include a fused ring system or a bridged ring system. Examples of the aryl group include, but are not limited to, aceanthrylene, acenaphthylene, acephenanthrylene, anthracene, azulene, benzene, chrysene, fluoranthene, fluorene, as-indacene, s-indacene, indane, indene, naphthalene, phenarene, phenanthrene, These include aryl groups derived from hydrocarbon ring systems of Pleiadene, pyrene and triphenylene. Unless otherwise indicated herein, the term "aryl" or the prefix "ar-" (e.g., "aralkyl") is meant to include an optionally substituted aryl group.

「アラルキル」は、式−Ｒｂ−Ｒｃの基を意味し、Ｒｂは、上記定義のように、アルキレン鎖であり、Ｒｃは、上記定義のように、１つ以上のアリール基、例えば、ベンジル、ジフェニルメチル、トリチル等である。本明細書において特に断らない限り、アラルキル基は、場合により置換されてもよい。 "Aralkyl" means a group of the formula -R b -R c , R b is an alkylene chain as defined above, R c is one or more aryl groups as defined above, For example, benzyl, diphenylmethyl, trityl and the like. Unless otherwise stated herein, aralkyl groups may be optionally substituted.

「アリールカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃの基を意味し、Ｒｃは、上記定義のように、１つ以上のアリール基、例えば、フェニルである。本明細書において特に断らない限り、アリールカルボニル基は、場合により置換されてもよい。 "Arylcarbonyl" means a group of the formula -C (= O) R c, R c is as defined above, one or more aryl groups, for example phenyl. Unless otherwise stated herein, the arylcarbonyl group may be optionally substituted.

「アリールオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃの基を意味し、Ｒｃは、上記定義のように、１つ以上のアリール基、例えば、フェニルである。本明細書において特に断らない限り、アリールオキシカルボニル基は、場合により置換されてもよい。 "Aryloxycarbonyl" means a radical of the formula -C (= O) OR c, R c is as defined above, one or more aryl groups, for example phenyl. Unless otherwise stated herein, the aryloxycarbonyl group may be optionally substituted.

「アラルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ−Ｒｃの基を意味し、Ｒｂは、上記定義のように、アルキレン鎖であり、Ｒｃは、上記定義のように、１つ以上のアリール基、例えば、フェニルである。本明細書において特に断らない限り、アラルキルカルボニル基は、場合により置換されてもよい。 "Aralkylcarbonyl" means a radical of the formula -C (= O) R b -R c, R b , as defined above, is an alkylene chain, R c is as defined above, 1 And one or more aryl groups, such as phenyl. Unless otherwise stated herein, the aralkylcarbonyl group may be optionally substituted.

「アラルキルオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｂ−Ｒｃの基を意味し、Ｒｂは、上記定義のように、アルキレン鎖であり、Ｒｃは、上記定義のように、１つ以上のアリール基、例えば、フェニルである。本明細書において特に断らない限り、アラルキルオキシカルボニル基は、場合により置換されてもよい。 "Aralkyloxycarbonyl" means a group of the formula -C (= O) OR b -R c , R b is an alkylene chain as defined above, R c is as above defined One or more aryl groups, such as phenyl. Unless otherwise stated herein, the aralkyloxycarbonyl group may be optionally substituted.

「アリールオキシ」は、式−ＯＲｃの基を意味し、Ｒｃは、上記定義のように、１つ以上のアリール基、例えば、フェニルである。本明細書において特に断らない限り、アリールカルボニル基は、場合により置換されてもよい。 "Aryloxy" means a group of the formula -OR c , wherein R c is one or more aryl groups, eg phenyl, as defined above. Unless otherwise stated herein, the arylcarbonyl group may be optionally substituted.

「シクロアルキル」は、安定的な非芳香族性の、単環または多環の炭素環式環を意味し、縮合環系または架橋環系を含んでもよく、飽和でもよいし、または、不飽和でもよく、単結合により前記分子の残部に付着される。典型的なシクロアルキルとしては、制限されず、３から１５個の炭素原子、および、３から８個の炭素原子を有するシクロアルキルがあげられる。単環のシクロアルキル基としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルがあげられる。多環基としては、例えば、アダマンチル、ノルボルニル、デカリニルおよび、７，７−ジメチル−ビシクロ［２．２．１］ヘプタニルがあげられる。本明細書において特に断らない限り、シクロアルキル基は、場合により置換されてもよい。   "Cycloalkyl" means a stable non-aromatic mono- or polycyclic carbocyclic ring, which may include fused or bridged ring systems, may be saturated or is unsaturated Or may be attached to the remainder of the molecule by a single bond. Exemplary cycloalkyls include, but are not limited to, cycloalkyls having 3 to 15 carbon atoms and 3 to 8 carbon atoms. Examples of monocyclic cycloalkyl groups include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl and cyclooctyl. Examples of the polycyclic group include adamantyl, norbornyl, decalinyl and 7,7-dimethyl-bicyclo [2.2.1] heptanyl. Unless stated otherwise specifically in the specification, the cycloalkyl group may be optionally substituted.

「シクロアルキルアルキル」は、式−ＲｂＲｄの基を意味し、Ｒｂは、上記定義のように、アルキレン鎖であり、Ｒｄは、上記定義のように、シクロアルキル基である。本明細書において特に断らない限り、シクロアルキルアルキル基は、場合により置換されてもよい。 "Cycloalkylalkyl" means a radical of the formula -R b R d, R b, as defined above, is an alkylene chain, R d, as defined above, a cycloalkyl group. Unless otherwise stated herein, cycloalkylalkyl groups may be optionally substituted.

「シクロアルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｄの基を意味し、Ｒｄは、上記定義のように、シクロアルキル基である。本明細書において特に断らない限り、シクロアルキルカルボニル基は、場合により置換されてもよい。 "Cycloalkylcarbonyl" means a group of the formula -C (= O) R d , wherein R d is a cycloalkyl group as defined above. Unless otherwise stated herein, the cycloalkylcarbonyl group may be optionally substituted.

「シクロアルキルオキシカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｄの基を意味し、Ｒｄは、上記定義のように、シクロアルキル基である。本明細書において特に断らない限り、シクロアルキルオキシカルボニル基は、場合により置換されてもよい。 "Cycloalkyloxycarbonyl" means a group of the formula -C (= O) OR d , wherein R d is a cycloalkyl group as defined above. Unless otherwise stated herein, the cycloalkyloxycarbonyl group may be optionally substituted.

「縮合」は、既存の環構造に縮合された、本願明細書に記載の任意の環構造である。前記縮合環がヘテロシクリル環またはヘテロアリール環である場合、前記縮合ヘテロシクリル環または縮合ヘテロアリール環の部分となる、既存の環構造上の任意の炭素原子が、窒素原子に置換されてもよい。   "Fused" is any ring structure described herein fused to an existing ring structure. When the fused ring is a heterocyclyl ring or a heteroaryl ring, any carbon atom on the existing ring structure which becomes a part of the fused heterocyclyl ring or the fused heteroaryl ring may be substituted with a nitrogen atom.

「グアニジニルアルキル」は、式−Ｒｂ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２の基を意味し、Ｒｂは、上記定義のように、アルキレン基である。本明細書において特に断らない限り、グアニジニルアルキル基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 "Guanidinylalkyl" means a group of the formula -R b -NHC (= NH) NH 2 , wherein R b is an alkylene group as defined above. Unless otherwise stated herein, guanidinylalkyl groups may optionally be substituted as described below.

「グアニジニルアルキルカルボニル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２の基を意味し、Ｒｂは、上記定義のように、アルキレン基である。本明細書において特に断らない限り、グアニジニルアルキルカルボニル基は、場合により、以下に記載のように、置換されてもよい。 “Guanidinylalkylcarbonyl” refers to a group of the formula —C (OO) R b —NHC (= NH) NH 2 , wherein R b is an alkylene group, as defined above. Unless otherwise stated herein, the guanidinylalkylcarbonyl group may be optionally substituted as described below.

「ハロ」または「ハロゲン」は、ブロモ、クロロ、フルオロまたはヨードを意味する。   "Halo" or "halogen" means bromo, chloro, fluoro or iodo.

「ハロアルキル」は、１つ以上のハロ基、上記定義のように、例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、フルオロメチル、トリクロロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、１，２−ジフロオロエチル、３−ブロモ−２−フロオロプロピル、１，２−ジブロモエチル等により置換された、上記定義のようなアルキル基を意味する。本明細書において特に断らない限り、ハロアルキル基は、場合により置換されてもよい。   “Haloalkyl” is one or more halo groups, as defined above, such as trifluoromethyl, difluoromethyl, fluoromethyl, trichloromethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, 1,2-difluoroethyl, 3 -Means an alkyl group as defined above which is substituted by bromo-2-fluoropropyl, 1,2-dibromoethyl and the like. Unless otherwise stated herein, haloalkyl groups may be optionally substituted.

「パーハロ」または「パーフロオロ」は、各水素原子それぞれが、ハロ原子またはフッ素原子により置換されている部分を意味する。   "Perhalo" or "perfluoro" means a moiety in which each hydrogen atom is substituted by a halo atom or a fluorine atom.

「ヘテロシクリル」「ヘテロサイクル」または「複素環」は、２から２３個の炭素原子ならびに、窒素、酸素、リンおよび硫黄からなる群から選択される、１から８個のヘテロ原子を含む、安定的な３員から２４員の非芳香族環の基を意味する。本明細書において特に断らない限り、前記ヘテロシクリル基は、単環、二環、三環または四環系でもよく、縮合環系または架橋環系を含んでもよい。前記ヘテロシクリル基における、窒素、炭素または硫黄原子は、場合により酸化されてもよく、窒素原子は、場合により四級化されてもよい。前記ヘテロシクリル基は、部分的または完全に飽和でもよい。このようなヘテロシクリル基の例としては、制限されず、ジオキソラニル、チエニル［１，３］ジチアニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、オキサゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、キヌクリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフリル、トリチアニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、チアモルホリニル、１−オキソ−チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリニル、１２−クラウン−４、１５−クラウン−５、１８−クラウン−６、２１−クラウン−７、アザ−１８−クラウン−６、ジアザ−１８−クラウン−６、アザ−２１−クラウン−７およびジアザ−２１−クラウン−７があげられる。本明細書において特に断らない限り、ヘテロシクリル基は、場合により置換されてもよい。   "Heterocyclyl" "Heterocycle" or "Heterocycle" is a stable compound containing 2 to 23 carbon atoms and 1 to 8 heteroatoms selected from the group consisting of nitrogen, oxygen, phosphorus and sulfur. Means a 3- to 24-membered non-aromatic ring group. Unless otherwise specified herein, the heterocyclyl group may be a mono-, bi-, tri- or tetracyclic ring system and may include fused ring systems or bridged ring systems. The nitrogen, carbon or sulfur atom in the heterocyclyl group may be optionally oxidized and the nitrogen atom may be optionally quaternized. The heterocyclyl group may be partially or completely saturated. Examples of such heterocyclyl groups include, but are not limited to, dioxolanyl, thienyl [1,3] dithianyl, decahydroisoquinolyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, isothiazolidinyl, isoxazolidinyl, morpholinyl, octahydroin Drill, octahydroisoindolyl, 2-oxopiperazinyl, 2-oxopiperidinyl, 2-oxopyrrolidinyl, oxazolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, 4-piperidinyl, pyrrolidinyl, pyrazolidinyl, quinuclidinyl, thiazolidinyl, tetrahydrofuryl, Tritianyl, tetrahydropyranyl, thiomorpholinyl, thiamorpholinyl, 1-oxo-thiomorpholinyl, 1,1-dioxo-thiomorpholinyl, 12-crown-4,15-crown-5,18-qu Un -6,21- crown -7, aza-18-crown-6, diaza-18-crown-6, aza-21-crown -7 and diaza-21-crown-7 and the like. Unless otherwise stated herein, heterocyclyl groups may be optionally substituted.

「ヘテロアリール」は、水素原子、１から１３個の炭素原子、窒素、酸素、リンおよび硫黄からなる群から選択される、１から６個のヘテロ原子、ならびに、少なくとも１つの芳香族環を含む、５員から１４員の環系基を意味する。本発明の目的のために、前記ヘテロアリール基は、単環、二環、三環または四環系でもよく、縮合環系または架橋環系を含んでもよい。前記ヘテロアリール基における、窒素、炭素または硫黄原子は、場合により酸化されてもよく、窒素原子は、場合により四級化されてもよい。例としては、制限さずれ、アゼピニル、アクリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズインドリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾフラニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキセピニル、１，４−ベンゾジオキサニル、ベンゾナフトフラニル、ベンゾキサゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキシニル、ベンゾピラニル、ベンゾピラノニル、ベンゾフラニル、ベンゾフラノニル、ベンゾチエニル（ベンゾチオフェニル）、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［４，６］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、ジベンゾフラニル、ジベンゾチオフェニル、フラニル、フラノニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、インダゾリル、インドリル、インダゾリル、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、イソキノリル、インドリジニル、イソキサゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキソアゼピニル、オキサゾリル、オキシラニル、１−オキシドピリジニル、１−オキシドピリミジニル、１−オキシドピラジニル、１−オキシドピリダジニル、１−フェニル−１Ｈ−ピロリル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、フタラジニル、プテリジニル、プリニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、キノリニル、キヌクリジニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニルおよびチオフェニル（すなわち、チエニル）があげられる。本明細書において特に断らない限り、ヘテロアリール基は、場合により置換されてもよい。   "Heteroaryl" includes hydrogen atom, 1 to 13 carbon atoms, 1 to 6 heteroatoms selected from the group consisting of nitrogen, oxygen, phosphorus and sulfur, and at least one aromatic ring And 5- to 14-membered ring systems are meant. For the purposes of the present invention, said heteroaryl group may be a mono-, bi-, tri- or tetracyclic ring system and may comprise fused ring systems or bridged ring systems. The nitrogen, carbon or sulfur atom in the heteroaryl group may be optionally oxidized and the nitrogen atom may be optionally quaternized. Examples include, but are not limited to, azepinyl, acridinyl, benzimidazolyl, benzothiazolyl, benzindolyl, benzodioxolyl, benzofuranyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, benzothiadiazolyl, benzo [b] [1,4] dioxepinyl 1,4-benzodioxanyl, benzonaphthofuranyl, benzoxazolyl, benzodioxolyl, benzodioxinyl, benzopyranyl, benzopyranonyl, benzofuranyl, benzofuranyl, benzothienyl (benzothiophenyl), benzotriazolyl, Benzo [4,6] imidazo [1,2-a] pyridinyl, carbazolyl, cinnolinyl, dibenzofuranyl, dibenzothiophenyl, furanyl, furonyl, isothiazolyl, imidazolyl, indazolyl, indoli , Indazolyl, isoindolyl, indolinyl, isoindolinyl, isoquinolyl, indolizinyl, isoxazolyl, naphthyridinyl, oxadiazolyl, 2-oxoazepinyl, oxazolyl, oxiranyl, 1-oxidopyridinyl, 1-oxidopyrimidinyl, 1-oxidopyridinyl, 1-oxidopyryl Dazinyl, 1-phenyl-1H-pyrrolyl, phenazinyl, phenothiazinyl, phenoxazinyl, phthalazinyl, pteridinyl, purinyl, pyrrolyl, pyrazolyl, pyridinyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, quinazolinyl, quinolinyl, quinuclidinyl, isoquinolinyl, tetrahydroquinolihyl Nil, thiazolyl, thiadiazolyl, triazolyl, tetrazolyl, triazinyl and thioff Alkenyl (i.e., thienyl) and the like. Unless otherwise stated herein, heteroaryl groups may be optionally substituted.

上記全ての基は、置換されてもよいし、または非置換のいずれでもよい。本願明細書で使用する場合、「置換された」の用語は、さらに官能化され得る、上記基のいずれか（すなわち、アルキル、アルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アルキルアミノ、アミジル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニル、アミノアルキル、アリール、アラルキル、アリールカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルカルボニル、シクロアルキルアルキルカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、ハロアルキル、ヘテロシクリルおよび／またはヘテロアリール）を意味する。少なくとも１つの水素原子が、非水素原子置換基への結合により置換される。本明細書において特に断らない限り、置換基は、オキソ、−ＣＯ２Ｈ、ニトリル、ニトロ、−ＣＯＮＨ２、ヒドロキシル、チオオキシ、アルキル、アルキレン、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキルカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリール、アラルキル、アリールカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルカルボニル、シクロアルキルアルキルカルボニル、シクロアルキルオキシカルボニル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ジアルキルアミン、アリールアミン、アルキルアリールアミン、ジアリールアミン、Ｎ−オキシド、イミドおよびエナミン；例えば、トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル基、アルキルジアリールシリル基、トリアリールシリル基の基におけるケイ素原子、パーフルオロアルキルもしくはパーフルオロアルコキシ、例えば、トリフルオロメチルもしくはトリフルオロメトキシから選択される、１つ以上の置換基を含んでもよい。「置換された」は、１つ以上の水素原子が、より高い順の結合（例えば、二重結合または三重結合）により、ヘテロ原子、例えば、オキソ、カルボニル、カルボキシルおよびエステルの基における酸素；ならびに、例えば、イミン、オキシム、ヒドラゾンおよびニトリルの基における窒素に置換される、上記基のいずれかも意味する。例えば、「置換された」は、１つ以上の水素原子が、−ＮＲｇＣ（＝Ｏ）ＮＲｇＲｈ、−ＮＲｇＣ（＝Ｏ）ＯＲｈ、−ＮＲｇＳＯ２Ｒｈ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲｇＲｈ、−ＯＲｇ、−ＳＲｇ、−ＳＯＲｇ、−ＳＯ２Ｒｇ、−ＯＳＯ２Ｒｇ、−ＳＯ２ＯＲｇ、＝ＮＳＯ２Ｒｇおよび−ＳＯ２ＮＲｇＲｈで置換される、上記基のいずれかを含む。「置換された」は、１つ以上の水素原子が、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｇ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｇ、−ＣＨ２ＳＯ２Ｒｇ、−ＣＨ２ＳＯ２ＮＲｇＲｈ、−ＳＨ、−ＳＲｇまたは−ＳＳＲｇで置換される、上記基のいずれかも意味する。前述において、ＲｇおよびＲｈは、同一でも異なってもよく、独立して、水素、アルキル、アルコキシ、アルキルアミノ、チオアルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、Ｎ−ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、ヘテロアリール、Ｎ−ヘテロアリールおよび／またはヘテロアリールアルキルである。さらに、前述の各置換基は、場合により、１つ以上の上記置換基で置換されてもよい。さらに、上記基のいずれかは、置換されて、１つ以上の内部酸素原子または硫黄原子を含んでもよい。例えば、アルキル基は、１つ以上の内部酸素原子で置換されて、エーテルまたはポリエーテル基を形成してもよい。同様に、アルキル基は、１つ以上の内部硫黄原子で置換されて、チオエーテル、ジスルフィド等を形成してもよい。アミジル部分は、２つ以下のハロ原子で置換されてもよく、一方、上記他の基は、１つ以上のハロ原子で置換されてもよい。上記基のいずれかは、アミノ、モノアルキルアミノ、グアニジニルまたはアミジニルで置換されてもよい。上記基のいずれかについての任意の置換基は、アリールホスホリル、例えば、−ＲａＰ（Ａｒ）３も含み、Ｒａは、アルキレンであり、Ａｒは、アリール部分、例えば、フェニルである。 All the above groups may be substituted or unsubstituted. As used herein, the term "substituted" may be any of the above groups which may be further functionalized (ie, alkyl, alkylene, alkoxy, alkoxyalkyl, alkylcarbonyl, alkyloxycarbonyl, alkylamino, Amidyl, amidinylalkyl, amidinylalkylcarbonyl, aminoalkyl, aryl, aralkyl, arylcarbonyl, aryloxycarbonyl, aralkylcarbonyl, aralkyloxycarbonyl, aryloxy, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, cycloalkylcarbonyl, cycloalkyl Alkylcarbonyl, cycloalkyloxycarbonyl, guanidinylalkyl, guanidinylalkylcarbonyl, haloalkyl, heterocyclyl and / or heteroaryl ) Means. At least one hydrogen atom is replaced by a bond to a non-hydrogen atom substituent. In the present specification, unless otherwise specified, the substituent is oxo, -CO 2 H, nitrile, nitro, -CONH 2 , hydroxyl, thiooxy, alkyl, alkylene, alkoxy, alkoxyalkyl, alkylcarbonyl, alkyloxycarbonyl, aryl, Aralkyl, arylcarbonyl, aryloxycarbonyl, aralkylcarbonyl, aralkyloxycarbonyl, aryloxy, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, cycloalkylcarbonyl, cycloalkylalkylcarbonyl, cycloalkyloxycarbonyl, heterocyclyl, heteroaryl, dialkylamine, arylamine , Alkylarylamines, diarylamines, N-oxides, imides and enamines; for example, trialkylsilyl groups, Containing one or more substituents selected from alkylarylsilyl group, alkyldiarylsilyl group, silicon atom in the group of triarylsilyl group, perfluoroalkyl or perfluoroalkoxy, for example, trifluoromethyl or trifluoromethoxy May be. "Substituted" means that one or more hydrogen atoms are bound by a higher order bond (e.g., a double or triple bond) to a heteroatom such as oxygen at the oxo, carbonyl, carboxyl and ester groups; For example, any of the above groups substituted by nitrogen in groups of, for example, imine, oxime, hydrazone and nitrile are also meant. For example, "substituted" means that one or more hydrogen atoms, -NR g C (= O) NR g R h, -NR g C (= O) OR h, -NR g SO 2 R h, - OC (= O) NR g R h, -OR g, -SR g, -SOR g, -SO 2 R g, -OSO 2 R g, -SO 2 oR g, = NSO 2 R g and -SO 2 NR Includes any of the above groups substituted with g R h . In “substituted”, one or more hydrogen atoms are —C (= O) R g , —C (= O) OR g , —CH 2 SO 2 R g , —CH 2 SO 2 NR g R h , -SH, substituted with -SR g or -SSR g, means any of the above groups. In the above, R g and R h may be the same or different, and independently hydrogen, alkyl, alkoxy, alkylamino, thioalkyl, aryl, aralkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, haloalkyl, heterocyclyl, N-heterocyclyl Heterocyclylalkyl, heteroaryl, N-heteroaryl and / or heteroarylalkyl. Furthermore, each of the aforementioned substituents may optionally be substituted with one or more of the above-mentioned substituents. Additionally, any of the above groups may be substituted to include one or more internal oxygen or sulfur atoms. For example, an alkyl group may be substituted with one or more internal oxygen atoms to form an ether or polyether group. Similarly, alkyl groups may be substituted with one or more internal sulfur atoms to form thioethers, disulfides, and the like. The amidyl moiety may be substituted with up to two halo atoms, while the other groups may be substituted with one or more halo atoms. Any of the above groups may be substituted with amino, monoalkylamino, guanidinyl or amidinyl. Optional substituents for any of the above groups, aryl phosphoryl, for example, also include -R a P (Ar) 3, R a is an alkylene, Ar is an aryl moiety, such as phenyl.

「アンチセンスオリゴマー」または「アンチセンス化合物」の用語は、互換的に使用され、リボースもしくは他のペントース糖またはモルホリノ基で構成される骨格サブユニットに保有される塩基をそれぞれ有する、サブユニットの配列を意味する。前記骨格基は、前記化合物における塩基を、ワトソン−クリック塩基対合により、核酸（典型的にＲＮＡ）における標的配列にハイブリダイズさせて、核酸：オリゴマーヘテロ二本鎖を、標的配列内に形成させる、サブユニット間リンケージにより結合される。前記オリゴマーは、前記標的配列に対する正確な配列相補性、または、近い相補性を有し得る。このようなアンチセンスオリゴマーは、前記標的配列を含むｍＲＮＡの翻訳を妨害または阻害し、それがハイブリダイズする配列に「向けられる」と言われ得る。   The terms "antisense oligomer" or "antisense compound" are used interchangeably and are sequences of subunits, each having a base carried in the backbone subunit composed of a ribose or other pentose sugar or morpholino group Means The backbone group hybridizes the base in the compound to a target sequence in nucleic acid (typically RNA) by Watson-Crick base pairing to form a nucleic acid: oligomer heteroduplex in the target sequence , Inter-subunit linkage is linked. The oligomer may have exact sequence complementarity or close complementarity to the target sequence. Such antisense oligomers may be said to be "directed" to the sequences to which they interfere or inhibit the translation of mRNA containing said target sequence and to which it hybridizes.

「モルホリノオリゴマー」または「ＰＭＯ」は、典型的なポリヌクレオチドに水素結合可能な塩基を支持する骨格を有するポリマー分子を意味する。前記ポリマーは、ペントース糖骨格部分、より具体的には、ヌクレオチドおよびヌクレオシドに特有の、ホスホジエステル結合により結合されたリボース骨格を欠いているが、代わりに環窒素により連結する環窒素を含む。典型的な「モルホリノ」オリゴマーは、１つのサブユニットのモルホリノ窒素を、隣接するサブユニットの５’環外炭素に結合する、（チオ）ホスホロアミダートまたは（チオ）ホスホロジアミダートのリンケージにより、互いに結合されるモルホリノサブユニット構造を有する。各サブユニットが、塩基特異的水素結合により、ポリヌクレオチドにおける塩基に結合するのに有効な、プリンまたはピリミジン塩基対合部分を含む。モルホリノオリゴマー（アンチセンスオリゴマーを含む）は、例えば、米国特許第５，６９８，６８５；５，２１７，８６６；５，１４２，０４７；５，０３４，５０６；５，１６６，３１５；５，１８５，４４４；５，５２１，０６３；５，５０６，３３７号明細書、および、係属中の米国特許出願特願１２／２７１，０３６；１２／２７１，０４０号；ならびに、国際公開第２００９／０６４４７１号に詳述され、それらすべては、それらの全体が、参照により本願明細書に取り込まれる。典型的なＰＭＯとしては、前記サブユニット間リンケージがリンケージ（Ａ１）であるＰＭＯがあげられる。   By "morpholino oligomer" or "PMO" is meant a polymer molecule having a backbone that supports a base capable of hydrogen bonding to a typical polynucleotide. The polymer lacks a pentose sugar backbone, more specifically a ribose backbone linked by phosphodiester bonds, which is characteristic of nucleotides and nucleosides, but instead comprises ring nitrogens linked by ring nitrogens. A typical "morpholino" oligomer has a (thio) phosphoroamidate or (thio) phosphorodiamidate linkage that links the morpholino nitrogen of one subunit to the 5 'exocyclic carbon of an adjacent subunit , Having morpholino subunit structures linked to one another. Each subunit comprises a purine or pyrimidine base pairing moiety effective to bind a base in a polynucleotide by base-specific hydrogen bonding. Morpholino oligomers (including antisense oligomers) are described, for example, in U.S. Patent Nos. 5,698,685; 5,217,866; 5,142,047; 5,034,506; 5,166,315; 5,185, No. 444; 5,521, 063; 5,506, 337, and pending US Patent Application Nos. 12 / 271,036; 12 / 271,040; and WO 2009/064471. The details of which are all incorporated herein by reference in their entirety. Typical PMOs include PMOs in which the intersubunit linkage is linkage (A1).

「ＰＭＯ＋」は、以前に記載されている（例えば、その全体が参照により本願明細書に取り込まれる、国際公開第２００８／０３６１２７号を参照のこと）任意の数の、（１−ピペラジノ）ホスフィニリデンオキシ、（１−（４−（ω−グアニジノ−アルカノイル））−ピペラジノ）ホスフィニリデンオキシのリンケージ（Ａ２およびＡ３）を含む、ホスホロジアミダートモルホリノオリゴマーを意味する。   “PMO +” may be any number of (1-piperazino) phosfinini as previously described (see, eg, WO 2008/036127, incorporated herein by reference in its entirety). A phosphorodiamidate morpholino oligomer comprising a linkage (A2 and A3) of (1) (1- (4-(. Omega.-guanidino-alkanoyl))-piperazino) phosphinylideneoxy.

「ＰＭＯ−Ｘ」は、少なくとも１つのリンケージ（Ｂ）または少なくとも１つの開示された末端修飾を含む、本願明細書に開示されたホスホロジアミダートモルホリノオリゴマーを意味する。   "PMO-X" means a phosphorodiamidate morpholino oligomer disclosed herein comprising at least one linkage (B) or at least one disclosed end modification.

「ホスホロアミダート」基は、３つの付着された酸素原子および１つの付着された窒素原子を有するリンを含む。一方、「ホスホロジアミダート」基（例えば、図１Ｄ〜Ｅを参照のこと）は、２つの付着された酸素原子および２つの付着された窒素原子を有するリンを含む。本願明細書、および、同時係属の米国特許出願特願６１／３４９，７８３および１１／８０１，８８５号に記載されている、前記オリゴマーの、荷電していないサブユニット間リンケージ、または、修飾されたサブユニット間リンケージにおいて、１つの窒素が、常に骨格鎖にぶら下がっている。ホスホロジアミダートリンケージにおける２番目の窒素は、典型的には、モルホリノ環構造における前記環窒素である。   A "phosphoroamidate" group comprises phosphorus having three attached oxygen atoms and one attached nitrogen atom. On the other hand, "phosphorhodiamidate" groups (see, eg, FIGS. 1D-E) contain phosphorus with two attached oxygen atoms and two attached nitrogen atoms. The uncharged intersubunit linkage or modification of said oligomers described in this specification and co-pending US Patent Application Nos. 61 / 349,783 and 11 / 801,885 In the intersubunit linkage, one nitrogen always hangs in the backbone chain. The second nitrogen in the phosphorodiamidate linkage is typically the ring nitrogen in the morpholino ring structure.

「チオホスホロアミダート」または「チオホスホロジアミダート」のリンケージは、１つの酸素原子、典型的には、骨格にぶら下がった酸素が硫黄に置換されている、それぞれ、ホスホロアミダートまたはホスホロジアミダートのリンケージである。   The "thiophosphoroamidate" or "thiophosphorodiamidate" linkage is a single phosphor atom, typically a phosphoramidite or phospho-digestion in which the oxygen at the backbone is replaced by sulfur, respectively. It is a linkage of Lodiamidat.

「サブユニット間リンケージ」は、２つのモルホリノサブユニットを連結するリンケージ、例えば、構造（Ｉ）を意味する。   "Intersubunit linkage" means a linkage linking two morpholino subunits, such as structure (I).

本願明細書で使用する場合、「荷電した」、「荷電していない」、「カチオン性」および「アニオン性」は、中性ｐＨ付近、例えば、約６から８において、化学部分の主な状態を意味する。例えば、前記用語は、生理学的ｐＨ、すなわち、約７．４における化学部分の主な状態を意味してもよい。   As used herein, "charged", "uncharged", "cationic" and "anionic" refer to the main state of the chemical moiety near neutral pH, eg, about 6 to 8 Means For example, the term may refer to the physiological pH, ie, the main state of the chemical moiety at about 7.4.

「低級アルキル」は、１から６個の炭素原子のアルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、イソアミル、ｎ−ペンチルおよびイソペンチルを意味する。ある実施形態では、「低級アルキル」基は、１から４個の炭素原子を有する。他の実施形態では、「低級アルキル」基は、１から２個の炭素原子、すなわち、メチルまたはエチルを有する。同様に、「低級アルケニル」は、２から６個のアルケニル基を意味し、好ましくは、３または４個の炭素原子、例えば、アリルおよびブテニルを意味する。   "Lower alkyl" means an alkyl group of one to six carbon atoms such as methyl, ethyl, n-butyl, i-butyl, t-butyl, isoamyl, n-pentyl and isopentyl. In certain embodiments, "lower alkyl" groups have 1 to 4 carbon atoms. In another embodiment, "lower alkyl" groups have 1 to 2 carbon atoms, ie, methyl or ethyl. Similarly, "lower alkenyl" means 2 to 6 alkenyl groups, preferably 3 or 4 carbon atoms, eg allyl and butenyl.

「非干渉」置換基は、目的の標的に結合するための本願明細書に記載のアンチセンスオリゴマーの能力に悪影響を及ぼさないものである。このような置換基としては、小さくて、および／または、比較的に非極性の基、例えば、メチル、エチル、メトキシ、エトキシまたはフルオロがあげられる。   "Non-interfering" substituents are those that do not adversely affect the ability of the antisense oligomer described herein to bind to the target of interest. Such substituents include small and / or relatively nonpolar groups such as methyl, ethyl, methoxy, ethoxy or fluoro.

オリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーは、前記オリゴマーが生理学的条件下において、Ｔｍが３７℃より高く、４５℃より高く、好ましくは、少なくとも５０℃、および典型的には、６０℃〜８０℃以上で、標的にハイブリダイズする場合、標的ポリヌクレオチドに、「特異的にハイブリダイズする」。前記オリゴマーにおける「Ｔｍ」は、相補的なポリヌクレオチドに、５０％がハイブリダイズする温度である。Ｔｍは、例えば、Ｍｉｙａｄａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：９４−１０７（１９８７）に記載のように、生理食塩水における標準的な条件下において決定される。このようなハイブリダイゼーションは、前記標的配列に対する、前記アンチセンスオリゴマーの「近似する」または「実質的な」相補、ならびに、正確な相補により起こり得る。 The oligonucleotide or antisense oligomer may have a Tm of greater than 37 ° C. and greater than 45 ° C., preferably at least 50 ° C., and typically at least 60 ° C. to 80 ° C., under physiological conditions of said oligomer. When specifically hybridized to a target, it "specifically hybridizes" to a target polynucleotide. " Tm " in the oligomer is the temperature at which 50% hybridizes to the complementary polynucleotide. T m is described, for example, in Miyada et al., Methods Enzymol. 154: 94-107 (1987), determined under standard conditions in saline. Such hybridization may occur by "approximate" or "substantial" complementation of the antisense oligomer to the target sequence, as well as by exact complementation.

ポリヌクレオチドは、ハイブリダイゼーションが、２本の一本鎖ポリヌクレオチド間で逆平衡の構成で起こる場合、互いに「相補的」であると記載される。相補性（１つのポリヌクレオチドがもう１つと相補的である度合い）は、一般的に認められた塩基対合規則に基づいて、互いに水素結合を形成することが予期される、反対鎖における塩基の割合の観点から定量化可能である。   Polynucleotides are described as "complementary" to each other when hybridization occurs in a reverse equilibrium configuration between two single stranded polynucleotides. Complementarity (the degree to which one polynucleotide is complementary to another) is based on the commonly accepted base pairing rules, and is expected to form hydrogen bonds with each other, of bases in opposite strands It can be quantified in terms of proportions.

第１の配列が第２のポリヌクレオチド配列と、生理学的条件下において特異的に結合する、または、特異的にハイブリダイズするポリヌクレオチドの配列である場合、第１の配列は、第２の配列に対する「アンチセンス配列」である。   If the first sequence is a sequence of a polynucleotide that specifically binds or specifically hybridizes with a second polynucleotide sequence under physiological conditions, the first sequence is a second sequence Is the "antisense sequence" for

「ターゲッティング配列」の用語は、ＲＮＡゲノムにおける前記標的配列に相補的である（さらに、実質的に相補的であることを意味する）、前記オリゴヌクレオチド類似体における配列である。前記類似体化合物の配列全体または一部のみが、前記標的配列に相補的でもよい。例えば、２０塩基を有する類似体において、１２〜１４個のみが、ターゲッティング配列でもよい。典型的に、前記ターゲッティング配列は、前記類似体において、連続した塩基で形成されるが、あるいは、前記標的配列に及ぶ構成配列が、例えば、前記類似体の反対側から位置する場合、非連続的な配列で形成されてもよい。   The term "targeting sequence" is a sequence in said oligonucleotide analogue which is complementary (meaning also substantially complementary) to said target sequence in the RNA genome. Only the whole or a part of the sequence of the analog compound may be complementary to the target sequence. For example, in an analog having 20 bases, only 12 to 14 may be targeting sequences. Typically, the targeting sequence is formed of contiguous bases in the analogue, or alternatively, non-contiguous if the constituent sequences spanning the target sequence are located, for example, from the opposite side of the analogue It may be formed by the following arrangement.

オリゴヌクレオチド類似体（例えば、荷電していないオリゴヌクレオチド類似体）の「骨格」は、前記塩基対合部分；例えば、本願明細書に記載のように、モルホリノオリゴマーを支持する構造を意味する。前記「骨格」は、サブユニット間リンケージ（例えば、リン含有リンケージ）により連結されるモルホリノ環構造を含む。「実質的に荷電していない骨格」は、５０％未満のサブユニット間リンケージが、中性付近のｐＨで荷電している、オリゴヌクレオチド類似体の骨格を意味する。例えば、実質的に荷電していない骨格は、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満またはさらに０％の、中性付近のｐＨで荷電しているサブユニット間リンケージを含んでもよい。一部の実施形態では、前記実質的に荷電していない骨格は、４つの（生理学的ｐＨで）荷電していないリンケージ毎に、多くても１つの（生理学的ｐＨで）荷電したサブユニット間リンケージ、８つの荷電していないリンケージ毎に多くても１つ、または、１６個の荷電していないリンケージ毎に多くても１つを含む。一部の実施形態では、本願明細書に記載の核酸類似体は、完全に荷電していない。   The “backbone” of an oligonucleotide analogue (eg, an uncharged oligonucleotide analogue) refers to a structure that supports the base pairing moiety; eg, a morpholino oligomer, as described herein. The “backbone” includes morpholino ring structures linked by intersubunit linkages (eg, phosphorus-containing linkages). "Substantially uncharged backbone" means a backbone of oligonucleotide analogs in which less than 50% of the intersubunit linkages are charged at a pH near neutral. For example, a substantially uncharged backbone may be charged at a pH near neutrality of less than 50%, less than 40%, less than 30%, less than 20%, less than 10%, less than 5% or even 0%. Inter-subunit linkage may be included. In some embodiments, the substantially non-charged backbone comprises at most one inter-subunit (at physiological pH) charged subunit per four (non-physiological pH) uncharged linkages. Linkage, at most one every eight uncharged linkages, or at most one every sixteen uncharged linkages. In some embodiments, the nucleic acid analogs described herein are not fully charged.

標的とターゲッティング配列は、ハイブリダイゼーションが逆平行の構成において起こる場合、互いに「相補的」であると記載される。ターゲティング配列は、前記標的配列に対して、「近似する」または「実質的な」相補性、および、目下記載された方法の目的の機能を有してもよく、すなわち「相補的」である。好ましくは、目下記載された方法に使用される前記オリゴヌクレオチド類似体化合物は、１０個のヌクレオチド毎に標的配列に対する多くても１つのミスマッチを有し、好ましくは、２０個から多くても１つのミスマッチを有する。または、使用される前記アンチセンスオリゴマーは、本願明細書で指定されるように、典型的なターゲッティング配列についての、少なくとも８０％、少なくとも９０％の配列相同性、または、少なくとも９５％の配列相同性を有する。ＲＮＡ標的に対する相補的結合の目的に関して、以下に記載のように、グアニン塩基は、シトシンまたはウラシルＲＮＡ塩基のいずれかに相補的でもよい。   The target and targeting sequences are described as "complementary" to each other if hybridization occurs in an antiparallel configuration. The targeting sequence may have "approximate" or "substantial" complementarity to said target sequence and the desired function of the presently described method, ie "complementary". Preferably, said oligonucleotide analogue compound used in the method described at the moment has at most one mismatch to the target sequence every ten nucleotides, preferably from twenty to at most one. Have a mismatch. Alternatively, said antisense oligomer used is at least 80%, at least 90% sequence homology, or at least 95% sequence homology for a typical targeting sequence, as specified herein. Have. For purposes of complementary binding to RNA targets, guanine bases may be complementary to either cytosine or uracil RNA bases, as described below.

「ヘテロ二本鎖」は、オリゴヌクレオチド類似体と標的ＲＮＡの相補的部分との間の二本鎖を意味する。「ヌクレアーゼ耐性ヘテロ二本鎖」は、前記ヘテロ二本鎖が、二本鎖ＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡの複合体を切断可能な、細胞内および細胞外ヌクレアーゼ、例えば、ＲＮＡｓｅＨによる、ｉｎ ｖｉｖｏでの分解に対して、実質的に耐性であるように、アンチセンスオリゴマーをその相補的な標的に結合することにより形成されるヘテロ二本鎖を意味する。   "Heteroduplex" refers to a duplex between an oligonucleotide analogue and the complementary portion of a target RNA. A "nuclease resistant heteroduplex" is an in vivo antibody which is capable of cleaving double stranded RNA / RNA or RNA / DNA complexes in which the heteroduplex is capable of cleaving double-stranded RNA / RNA or RNA / DNA complexes, such as RNAse H, in vivo And a heteroduplex formed by binding the antisense oligomer to its complementary target so as to be substantially resistant to degradation of

薬剤が、細胞膜を通した受動拡散以外のメカニズムにより細胞に入り得る場合、「哺乳類の細胞により能動的に取り込まれる」。前記薬剤は、例えば、ＡＴＰ依存性輸送メカニズムにより、哺乳類の細胞膜を通して薬剤を輸送することを意味する「能動輸送」、または、輸送タンパク質への前記薬剤の結合を必要とし、次いで、前記膜を通して結合された薬剤の通過を促進する輸送メカニズムにより、前記細胞膜を通してアンチセンス剤を輸送することを意味する「促進輸送」により、薬剤が輸送されてもよい。   A drug is "actively taken up by mammalian cells" if it can enter the cell by mechanisms other than passive diffusion through cell membranes. Said drug requires, for example, "active transport", which means transport of the drug across the mammalian cell membrane by means of an ATP-dependent transport mechanism, or binding of said drug to a transport protein, which is then bound through said membrane The drug may be transported by “facilitated transport”, which means transporting the antisense agent through the cell membrane, by a transport mechanism that promotes the passage of the drug.

「発現を調節する」および／または「アンチセンス活性」の用語は、ＲＮＡの発現または翻訳を妨害することにより、所定のタンパク質の発現を向上または、より典型的には、低下させるかのいずれかのアンチセンスオリゴマーの能力を意味する。タンパク質の発現を低下させる場合では、前記アンチセンスオリゴマーは、所定の遺伝子の発現を直接妨害してもよいし、その遺伝子から転写されたＲＮＡの加速された分解に寄与してもよい。本願明細書で記載する時、モルホリノオリゴマーは、前者（立体妨害）のメカニズムを介して機能すると考えられる。好ましいアンチセンスは、ＡＴＧ開始コドン領域、スプライス部位、スプライス部位にごく近接する領域および、ｍＲＮＡの５’−非翻訳領域を含む立体妨害するオリゴマーを標的とするが、他の領域は、モルホリノオリゴマーを使用して、うまく標的にされている。   The terms "modulate expression" and / or "antisense activity" either enhance or, more typically, reduce the expression of a given protein by interfering with the expression or translation of RNA. Means the ability of antisense oligomers. In the case of reducing protein expression, the antisense oligomer may directly disrupt the expression of a given gene or may contribute to the accelerated degradation of RNA transcribed from that gene. As described herein, morpholino oligomers are believed to function through the former (steric hindrance) mechanism. Preferred antisenses target steric hindrance oligomers, including the ATG start codon region, the splice site, the region in close proximity to the splice site, and the 5'-untranslated region of the mRNA, while the other regions contain morpholino oligomers Use is well targeted.

「アミノ酸サブユニット」は、一般的に、α−アミノ酸残基（−ＣＯ−ＣＨＲ−ＮＨ−）であるが、β−または他のアミノ酸残基（例えば、−ＣＯ−ＣＨ２ＣＨＲ−ＮＨ−）でもよく、Ｒは、アミノ酸側鎖である。 "Amino acid subunit" generally, alpha-amino acid residue (-CO-CHR-NH-) a but, beta-or other amino acid residue (e.g., -CO-CH 2 CHR-NH- ) R may be an amino acid side chain.

「天然に存在するアミノ酸」の用語は、天然に見出されるタンパク質に存在するアミノ酸を意味する。「非天然アミノ酸」の用語は、天然に見出されるタンパク質に存在しないそれらのアミノ酸を意味し、例えば、ベータ−アラニン（β−Ａｌａ）および６−アミノヘキサン酸（Ａｈｘ）があげられる。   The term "naturally occurring amino acids" refers to amino acids present in proteins found in nature. The term "non-naturally occurring amino acids" refers to those amino acids which are not present in proteins found in nature, such as beta-alanine (β-Ala) and 6-aminohexanoic acid (Ahx).

「有効量」または「治療的に有効量」は、単回投与、または、一連の投与の一部のいずれかとして、哺乳類の被験体に投与され、典型的には、選択された標的核酸配列の翻訳を阻害することによる所望の治療効果を生じるのに有効な、アンチセンスオリゴマーの量を意味する。   An "effective amount" or a "therapeutically effective amount" is administered to a mammalian subject, either as a single dose or as part of a series of doses, and typically is a selected target nucleic acid sequence The amount of antisense oligomer that is effective to produce the desired therapeutic effect by inhibiting the translation of

個体（例えば、ヒト等の哺乳類）または細胞の「処置」は、前記個体または細胞の自然経過を変えるための試みに使用される、任意の種類の治療介入である。処置としては、制限されず、薬学的組成物の投与があげられ、予防的にまたは、病的な事象の始まりもしくは病原体との接触後のいずれかで行われてもよい。   "Treatment" of an individual (e.g., a mammal such as a human) or cell is any type of therapeutic intervention used in an attempt to alter the natural history of said individual or cell. Treatment includes, but is not limited to, administration of pharmaceutical compositions and may be performed either prophylactically or after the onset of a pathological event or after contact with a pathogen.

ＩＩ．キャリアペプチド
Ａ．前記キャリアペプチドの特性
前述のように、本開示は、キャリアペプチドと核酸類似体とのコンジュゲートに関する。前記キャリアペプチドは、一般的に、前記核酸類似体の細胞浸透を向上するのに効果的である。さらに、本願出願人は、驚くべきことに、前記核酸類似体と前記キャリアペプチドの（例えば、前記キャリアペプチドのカルボキシ末端またはアミノ末端における）残部との間に、グリシン（Ｇ）またはプロリン（Ｐ）アミノ酸サブユニットを含むことが、前記キャリアペプチドと核酸類似体との間に、異なるリンケージを有するコンジュゲートと比較して、前記有効性が同等か、または向上されながら、前記コンジュゲートの毒性を低下させることを発見した。このため、本開示のコンジュゲートは、他のペプチド−オリゴマーコンジュゲートより、良好な治療的手段を有し、薬剤候補としての見込みがある。 II. Carrier peptide A. Properties of the Carrier Peptides As mentioned above, the present disclosure relates to conjugates of carrier peptides and nucleic acid analogues. The carrier peptide is generally effective to improve cell penetration of the nucleic acid analog. Furthermore, the applicant has surprisingly found that a glycine (G) or proline (P) between the nucleic acid analogue and the remainder of the carrier peptide (e.g. at the carboxy or amino terminus of the carrier peptide). Containing an amino acid subunit reduces the toxicity of the conjugate while equalizing or improving the efficacy as compared to a conjugate having different linkages between the carrier peptide and the nucleic acid analogue I found it to Thus, the conjugates of the present disclosure have better therapeutic means than other peptide-oligomer conjugates and have potential as drug candidates.

毒性低減に加えて、前記核酸類似体と前記キャリアペプチドとの間のグリシンまたはプロリンアミノ酸サブユニットの存在が、更なる利点を提供するものと考えられる。例えば、グリシンは、安価であり、ラセミ化の可能性なしに、前記核酸類似体（または、必要に応じたリンカー）に容易に連結される。同様に、プロリンは、ラセミ化なしに容易に連結され、へリックス形成剤でないキャリアペプチドも提供する。プロリンの疎水性は、前記キャリアペプチドと細胞の脂質二重層との相互作用についての、特定の利点を有してもよく、（例えば、ある実施形態では、）複数のプロリンを含むキャリアペプチドは、Ｇ四重体形成に抵抗してもよい。最後に、ある実施形態では、前記プロリン部分が、アルギニンアミノ酸サブユニットに隣接する場合、前記プロリン部分は、アルギニン−プロリンのアミド結合が、一般的なエンドペプチダーゼにより切断できないため、前記コンジュゲートに代謝性を付与する。   In addition to the reduced toxicity, the presence of glycine or proline amino acid subunits between the nucleic acid analogue and the carrier peptide is believed to provide an additional advantage. For example, glycine is inexpensive and easily linked to the nucleic acid analog (or optional linker) without the possibility of racemization. Similarly, proline is readily linked without racemization to provide a carrier peptide that is not a helix former. The hydrophobicity of proline may have certain advantages for the interaction of said carrier peptide with the lipid bilayer of the cell, and (in one embodiment, for example) a carrier peptide comprising more than one proline, You may resist G quadruple formation. Finally, in one embodiment, where the proline moiety is adjacent to an arginine amino acid subunit, the proline moiety is metabolized to the conjugate because the arginine-proline amide bond can not be cleaved by common endopeptidases. Add gender.

前述のように、グリシンまたはプロリンアミノ酸サブユニットを介して核酸類似体に結合されたキャリアペプチドを含むコンジュゲートは、他の既知のコンジュゲートと比較して、より低い毒性と同等の有効性を有する。本出願のサポートにおいて行われた実験は、他のコンジュゲートと比較して、本開示のコンジュゲートにより、腎毒性マーカーが非常に低いことを示す（例えば、実施例３０に記載される、腎傷害マーカー（ＫＩＭ）および血中尿素窒素（ＢＵＮ）のデータを参照のこと）。理論に拘束される訳ではないが、本発明者は、本開示のコンジュゲートの低減された毒性は、前記核酸類似体に付着されるペプチドの部分（例えば、カルボキシ末端）に、非天然のアミノ酸、例えば、アミノヘキサン酸またはβ−アラニンが存在しないことに関連すると考えている。これらの非天然のアミノ酸は、ｉｎ ｖｉｖｏで切断されないため、切断されないペプチドの毒性濃度が蓄積し、毒性を引き起こし得ると考えられる。   As mentioned above, conjugates comprising a carrier peptide linked to a nucleic acid analogue via a glycine or proline amino acid subunit have efficacy comparable to lower toxicity compared to other known conjugates . Experiments performed in support of the present application show that the conjugates of the present disclosure have a very low nephrotoxic marker compared to other conjugates (eg, kidney injury as described in Example 30) See marker (KIM) and blood urea nitrogen (BUN) data). Without being bound by theory, it is believed that the reduced toxicity of the disclosed conjugates is due to the non-naturally occurring amino acids in the portion of the peptide attached to the nucleic acid analogue (e.g., the carboxy terminus). For example, it is believed to be related to the absence of aminohexanoic acid or β-alanine. Since these non-natural amino acids are not cleaved in vivo, it is believed that toxic concentrations of uncleaved peptides can accumulate and cause toxicity.

前記グリシンまたはプロリン部分は、前記キャリアペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれでもよく、一部の例では、前記キャリアペプチドは、前記グリシンまたはプロリンサブユニットを介して、前記核酸類似体に直接結合されてもよいし、または、前記キャリアペプチドは、必要に応じたリンカーを介して前記核酸類似体に結合されてもよい。   The glycine or proline moiety may be at either the amino or carboxy terminus of the carrier peptide, and in some cases the carrier peptide is directly linked to the nucleic acid analogue via the glycine or proline subunit Alternatively, the carrier peptide may be linked to the nucleic acid analogue via an optional linker.

一実施形態では、本開示は、
（ａ）アミノ酸サブユニットを含むキャリアペプチド；および、
（ｂ）実質的に荷電していない骨格および、標的核酸に対する配列特異的結合用のターゲッティング塩基配列を含む核酸類似体；を含み、
２つ以上の前記アミノ酸サブユニットが、正電荷を有するアミノ酸であり、前記キャリアペプチドが、前記キャリアペプチドのカルボキシ末端に、グリシン（Ｇ）またはプロリン（Ｐ）アミノ酸サブユニットを含み、前記キャリアペプチドが、前記核酸類似体に共有結合している、コンジュゲートに関する。一部の実施形態では、７個以下連続したアミノ酸サブユニットが、アルギニンであり、例えば、６個以下連続したアミノ酸サブユニットが、アルギニンである。一部の実施形態では、前記キャリアペプチドは、前記カルボキシ末端に、グリシンアミノ酸サブユニットを含む。他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、前記カルボキシ末端に、プロリンアミノ酸サブユニットを含む。さらに他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、前記カルボキシ末端に、単一のグリシンまたはプロリンを含む（すなわち、前記カルボキシ末端に、グリシンまたはプロリンの二量体または三量体等を含まない）。 In one embodiment, the present disclosure is:
(A) a carrier peptide comprising an amino acid subunit;
(B) a nucleic acid analogue comprising a substantially uncharged backbone and a targeting base sequence for sequence specific binding to a target nucleic acid;
Two or more of the amino acid subunits are positively charged amino acids, and the carrier peptide comprises glycine (G) or proline (P) amino acid subunits at the carboxy terminus of the carrier peptide, and the carrier peptide comprises , A conjugate covalently linked to said nucleic acid analogue. In some embodiments, no more than 7 consecutive amino acid subunits are arginine, eg, no more than 6 consecutive amino acid subunits are arginine. In some embodiments, the carrier peptide comprises a glycine amino acid subunit at the carboxy terminus. In another embodiment, the carrier peptide comprises a proline amino acid subunit at the carboxy terminus. In still another embodiment, the carrier peptide comprises a single glycine or proline at the carboxy terminus (ie, does not comprise a glycine or proline dimer or trimer, etc. at the carboxy terminus).

ある実施形態では、（ｉ）前記アンチセンスオリゴマーのその標的配列への結合が、前記コードされるタンパク質用の翻訳開始コドンを妨害するのに有効な場合に、コンジュゲートされていないオリゴマーにより提供されたそれと比較して、コードされたタンパク質の発現における減少、または、
（ｉｉ）前記アンチセンスオリゴマーのその標的配列への結合が、正確にスプライシングされた、前記タンパク質をコードするプレ−ｍＲＮＡにおける異常なスプライス部位を妨害するのに有効な場合に、コンジュゲートされていないオリゴマーにより提供されたそれと比較して、コードされたタンパク質の発現における増加、からも明らかなように、実質的に荷電していない骨格を有するアンチセンスオリゴマーにコンジュゲートされた場合、前記キャリアペプチドは、コンジュゲートされていない状態でのアンチセンスオリゴマーと比較して、その標的配列へのアンチセンスオリゴマーの結合を向上するのに有効である。これらの効果の測定に適したアッセイは、以下にさらに記載される。一実施形態では、前記ペプチドの接合は、本願明細書で記載する時、無細胞翻訳アッセイにおけるこの活性を提供する。一部の実施形態では、活性は、少なくとも２つの因子、少なくとも５つの因子または少なくとも１０個の因子により向上される。 In one embodiment, (i) the conjugation of said antisense oligomer to its target sequence is provided by a non-conjugated oligomer when effective to interfere with the translation initiation codon for said encoded protein A decrease in the expression of the encoded protein, or
(Ii) not conjugated if the binding of the antisense oligomer to its target sequence is effective to prevent aberrant splice sites in the correctly spliced, pre-mRNA encoding the protein As also evident from the increase in expression of the encoded protein as compared to that provided by the oligomer, said carrier peptide is conjugated to the antisense oligomer with a substantially uncharged backbone It is effective to improve the binding of the antisense oligomer to its target sequence as compared to the antisense oligomer in the unconjugated state. Assays suitable for measuring these effects are further described below. In one embodiment, conjugation of the peptides, as described herein, provides this activity in a cell free translation assay. In some embodiments, the activity is enhanced by at least two factors, at least five factors or at least ten factors.

もう１つの方法として、またはさらに、前記キャリアペプチドは、コンジュゲートされていない状態の類似体と比較して、細胞内への前記核酸類似体の輸送を向上するのに効果的である。ある実施形態では、輸送は、少なくとも２つの因子、少なくとも２つの因子、少なくとも５つの因子または少なくとも１０個の因子により向上される。   Alternatively, or additionally, the carrier peptide is effective to enhance the transport of the nucleic acid analogue into cells as compared to the analogue in the unconjugated state. In certain embodiments, transport is enhanced by at least two factors, at least two factors, at least five factors, or at least ten factors.

他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、末端グリシンまたはプロリンアミノサブユニットを欠いたキャリアペプチドを含むコンジュゲートと比較して、前記コンジュゲートの毒性を低減する（すなわち、最大耐性用量が増加する）のに有効である。ある実施形態では、毒性は、少なくとも２つの因子、少なくとも２つの因子、少なくとも５つの因子または少なくとも１０個の因子により低減される。   In another embodiment, the carrier peptide reduces the toxicity of the conjugate (ie, increases the maximum tolerated dose) as compared to a conjugate comprising a carrier peptide lacking a terminal glycine or proline amino subunit. It is effective. In certain embodiments, the toxicity is reduced by at least two factors, at least two factors, at least five factors, or at least ten factors.

前記ペプチド輸送部分の更なる利点は、アンチセンスオリゴマーとその標的核酸配列との間の二本鎖を安定化するための、その予期された能力である。理論に拘束される訳ではないが、二本鎖を安定化するこの能力は、正電荷を有する輸送部分と負電荷を有する核酸との間の静電相互作用に起因し得る。   A further advantage of the peptide transport moiety is its anticipated ability to stabilize the duplex between the antisense oligomer and its target nucleic acid sequence. Without being bound by theory, this ability to stabilize the duplex can be attributed to electrostatic interactions between the positively charged transport moiety and the negatively charged nucleic acid.

前記キャリアペプチドの長さは、特に制限されず、種々の実施形態で変化する。一部の実施形態では、前記キャリアペプチドは、４から４０個のアミノ酸サブユニットを含む。他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、６から３０個、６から２０個、８から２５個または１０から２０個のアミノ酸サブユニットを含む。一部の実施形態では、前記キャリアペプチドは、直鎖状であり、一方、他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、分岐鎖状である。   The length of the carrier peptide is not particularly limited, and varies in various embodiments. In some embodiments, the carrier peptide comprises 4 to 40 amino acid subunits. In another embodiment, the carrier peptide comprises 6 to 30, 6 to 20, 8 to 25 or 10 to 20 amino acid subunits. In some embodiments, the carrier peptide is linear, while in other embodiments, the carrier peptide is branched.

一部の実施形態では、前記キャリアペプチドは、正電荷を有するアミノ酸サブユニット、例えば、アルギニンアミノ酸サブユニットリッチである。少なくとも１０％のアミノ酸サブユニットが正電荷を有する場合、キャリアペプチドは、正電荷を有するアミノ酸「リッチ」である。例えば、一部の実施形態では、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％のアミノ酸サブユニットが、正電荷を有する。さらに他の実施形態では、グリシンまたはプロリンアミノ酸サブユニットを除くすべてのアミノ酸サブユニットが、正電荷を有する。さらに他の実施形態では、前記正電荷を有するアミノ酸サブユニットの全てが、アルギニンである。   In some embodiments, the carrier peptide is rich in positively charged amino acid subunits, eg, arginine amino acid subunits. If at least 10% of the amino acid subunits carry a positive charge, the carrier peptide is "rich" with a positively charged amino acid. For example, in some embodiments, at least 20%, at least 30%, at least 40%, at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, or at least 90% of the amino acid subunits are positively charged. Have. In still other embodiments, all amino acid subunits except the glycine or proline amino acid subunit carry a positive charge. In yet another embodiment, all of the positively charged amino acid subunits are arginine.

他の実施形態では、前記キャリアペプチドにおける正電荷を有するアミノ酸サブユニットの数は、１から２０個、例えば、１から１０個または１から６個の範囲である。ある実施形態では、前記キャリアペプチドにおける正電荷を有するアミノ酸サブユニットの数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個である。   In another embodiment, the number of positively charged amino acid subunits in the carrier peptide is in the range of 1 to 20, such as 1 to 10 or 1 to 6. In one embodiment, the number of positively charged amino acid subunits in the carrier peptide is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 pieces.

前記正電荷を有するアミノ酸は、天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、合成アミノ酸、修飾アミノ酸または天然アミノ酸の類似体であり得る。例えば、正味の正電荷を有する修飾アミノ酸は、以下により詳細に記載するように、本発明に使用するために特別に設計されてもよい。アミノ酸に対する、多くの種々の種類の修飾が、当該分野において周知である。ある実施形態では、前記正電荷を有するアミノ酸は、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）またはアルギニン（Ｒ）である。他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、天然のアミノ酸サブユニットのみを含む（すなわち、非天然のアミノ酸を含まない）。他の実施形態では、前記末端アミノ酸は、例えば、アセチル、ベンゾイル、ステアリル部分により、例えば、Ｎ末端でキャップされてもよい。   The positively charged amino acids may be naturally occurring amino acids, non-naturally occurring amino acids, synthetic amino acids, modified amino acids or analogs of natural amino acids. For example, modified amino acids having a net positive charge may be specifically designed for use in the present invention, as described in more detail below. Many different types of modifications to amino acids are well known in the art. In one embodiment, the positively charged amino acid is histidine (H), lysine (K) or arginine (R). In another embodiment, the carrier peptide comprises only naturally occurring amino acid subunits (ie, does not comprise non-naturally occurring amino acids). In other embodiments, the terminal amino acid may be capped, eg, at the N-terminus, eg, with an acetyl, benzoyl, stearyl moiety.

任意の数、組み合わせおよび／または配列の、Ｈ、Ｋおよび／またはＲが、前記キャリアペプチドに存在し得る。一部の実施形態では、前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリン以外の、全てのアミノ酸サブユニットが、正電荷を有するアミノ酸である。他の実施形態では、前記正電荷を有するアミノ酸のうちの少なくとも１個が、アルギニンである。例えば、一部の実施形態では、正電荷を有するアミノ酸の全てが、アルギニンであり、さらに他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、アルギニンと前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリンとからなる。さらに他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、７つ以下連続したアルギニン、例えば、６個以下連続したアルギニンを含む。   Any number, combination and / or sequence of H, K and / or R may be present in the carrier peptide. In some embodiments, all amino acid subunits other than the carboxy-terminal glycine or proline are positively charged amino acids. In another embodiment, at least one of the positively charged amino acids is arginine. For example, in some embodiments, all of the positively charged amino acids are arginine, and in still other embodiments, the carrier peptide consists of arginine and glycine or proline at the carboxy terminus. In still other embodiments, the carrier peptide comprises 7 or less consecutive arginines, eg, 6 or less consecutive arginines.

他の種類の正電荷を有するアミノ酸も、想定される。例えば、ある実施形態では、前記正電荷を有するアミノ酸のうちの少なくとも１個は、アルギニン類似体である。例えば、前記アルギニン類似体は、構造ＲａＮ＝Ｃ（ＮＨ２）Ｒｂ（ここで、ＲａがＨまたはＲｃであり；ＲｂがＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲまたはＮ（Ｒｃ）２であり、Ｒｃが低級アルキルまたは低級アルケニルであり、および、場合により、酸素または窒素を含み、または、ＲａおよびＲｂが、共に環を形成する）の側鎖を含むカチオン性α−アミノ酸でもよく、前記側鎖は、ＲａまたはＲｂを介して前記アミノ酸に結合される。前記キャリアペプチドは、任意の数のこれらのアルギニン類似体を含んでもよい。 Amino acids with other types of positive charges are also envisioned. For example, in one embodiment, at least one of the positively charged amino acids is an arginine analog. For example, the arginine analogue may have the structure R a N = C (NH 2 ) R b (where R a is H or R c ; R b is R c , NH 2 , NHR or N (R c ) 2 and a cationic α- containing a side chain of R c is lower alkyl or lower alkenyl, and optionally contains oxygen or nitrogen, or R a and R b together form a ring) It may be an amino acid and the side chain is linked to the amino acid via Ra or Rb . The carrier peptide may comprise any number of these arginine analogues.

前記正電荷を有するアミノ酸は、前記キャリアペプチド内の任意の配列に生じてもよい。例えば、一部の実施形態では、前記正電荷を有するアミノ酸は、交互でもよいし、または、連続でもよい。例えば、前記キャリアペプチドは、配列（Ｒｄ）ｍを含んでもよく、Ｒｄは、各出現箇所で独立して、正電荷を有するアミノ酸であり、ｍが、２から１２、２から１０、２から８または２から６の範囲の整数である。例えば、ある実施形態では、Ｒｄは、アルギニンであり、前記キャリアペプチドは、（Ｒ）４、（Ｒ）５、（Ｒ）６、（Ｒ）７および（Ｒ）８から選択され、または、（Ｒ）４、（Ｒ）５、（Ｒ）６および（Ｒ）７から選択される配列を含む。例えば、特定の実施形態では、前記キャリアペプチドは、配列（Ｒ）６、例えば、（Ｒ）６Ｇまたは（Ｒ）６Ｐを含む。 The positively charged amino acid may occur in any sequence within the carrier peptide. For example, in some embodiments, the positively charged amino acids may be alternating or contiguous. For example, the carrier peptide may comprise the sequence (R d ) m , wherein R d is independently a positively charged amino acid at each occurrence and m is 2 to 12, 2 to 10, 2 Are integers in the range of 8 or 2 to 6. For example, in one embodiment, R d is arginine and the carrier peptide is selected from (R) 4 , (R) 5 , (R) 6 , (R) 7 and (R) 8 or It comprises a sequence selected from (R) 4 , (R) 5 , (R) 6 and (R) 7 . For example, in certain embodiments, the carrier peptide comprises the sequence (R) 6 , eg, (R) 6 G or (R) 6 P.

他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、配列（Ｒｄ）ｍと、前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリンとからなり、Ｒｄは、各出現箇所で独立して、正電荷を有するアミノ酸であり、ｍが、２から１２、２から１０、２から８または２から６の範囲の整数である。ある実施形態では、Ｒｄは、各出現箇所で独立して、アルギニン、ヒスチジンまたはリジンである。例えば、ある実施形態では、Ｒｄは、アルギニンであり、前記キャリアペプチドは、（Ｒ）４、（Ｒ）５、（Ｒ）６、（Ｒ）７および（Ｒ）８から選択される配列と、前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリンとからなる。例えば、特定の実施形態では、前記キャリアペプチドは、配列（Ｒ）６Ｇまたは（Ｒ）６Ｐからなる。 In another embodiment, the carrier peptide consists of the sequence (R d ) m and glycine or proline at the carboxy terminus, and R d is independently a positively charged amino acid at each occurrence, m is an integer in the range of 2 to 12, 2 to 10, 2 to 8 or 2 to 6; In certain embodiments, R d is independently at each occurrence arginine, histidine or lysine. For example, in one embodiment, R d is arginine and the carrier peptide is a sequence selected from (R) 4 , (R) 5 , (R) 6 , (R) 7 and (R) 8 , And the carboxy terminal glycine or proline. For example, in certain embodiments, the carrier peptide consists of the sequences (R) 6 G or (R) 6 P.

一部の他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、１つ以上の疎水性アミノ酸サブユニットを含んでもよい。前記疎水性アミノ酸サブユニットは、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキルの側鎖を含み、前記アルキル、アルケニルおよびアルキニルの側鎖は、６つの炭素原子酸毎に、多くても１つのヘテロ原子を含む。一部の実施形態では、前記疎水性アミノ酸は、フェニルアラニン（Ｆ）である。例えば、前記キャリアペプチドは、２個以上連続した疎水性アミノ酸、例えば、フェニルアラニン（Ｆ）、例えば、２個連続したフェニルアラニン部分を含んでもよい。前記疎水性アミノ酸は、前記キャリアペプチド配列における任意の箇所に存在し得る。   In some other embodiments, the carrier peptide may comprise one or more hydrophobic amino acid subunits. The hydrophobic amino acid subunits comprise substituted or unsubstituted alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl or aralkyl side chains, the alkyl, alkenyl and alkynyl side chains being at most every six carbon atom acid It contains one hetero atom. In some embodiments, the hydrophobic amino acid is phenylalanine (F). For example, the carrier peptide may comprise two or more consecutive hydrophobic amino acids, such as phenylalanine (F), such as two consecutive phenylalanine moieties. The hydrophobic amino acid may be present at any place in the carrier peptide sequence.

他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、配列［（ＲｄＹｂＲｄ）ｘ（ＲｄＲｄＹｂ）ｙ］ｚまたは［（ＲｄＲｄＹｂ）ｙ（ＲｄＹｂＲｄ）ｘ］ｚを含み、Ｒｄは、各出現箇所で独立して、正電荷を有するアミノ酸であり、ｘおよびｙは、各出現箇所で独立して、０または１であり、ｘ＋ｙは、１または２であることが提供され、ｚは、１、２、３、４、５または６であり、および、Ｙｂは、
であり、
式中、ｎは、２から７であり、各Ｒｅは、各出現箇所で独立して、水素またはメチルである。一部のこれらの実施形態では、Ｒｄは、各出現箇所で独立して、アルギニン、ヒスチジンまたはリジンである。他の実施形態では、各Ｒｄは、アルギニンである。他の実施形態では、ｎは５であり、Ｙｂは、アミノヘキサン酸部分である。他の実施形態では、ｎは２であり、Ｙｂは、β−アラニン部分である。さらに他の実施形態では、Ｒｅは、水素である。 In another embodiment, the carrier peptide has the sequence [(R d Y b R d ) x (R d R d Y b ) y ] z or [(R d R d Y b ) y (R d Y b R d ) x ] z is contained, R d is an amino acid having a positive charge independently at each occurrence, x and y are each independently 0 or 1 at each occurrence, and x + y is Provided that it is 1 or 2, z is 1, 2, 3, 4, 5 or 6 and Y b is
And
Where n is 2 to 7 and each R e is independently hydrogen or methyl at each occurrence. In some of these embodiments, R d is independently at each occurrence arginine, histidine or lysine. In another embodiment, each R d is arginine. In another embodiment, n is 5 and Y b is an aminohexanoic acid moiety. In another embodiment, n is 2 and Y b is a β-alanine moiety. In still other embodiments, R e is hydrogen.

前述のある実施形態では、ｘは１であり、ｙは０であり、前記キャリアペプチドは、配列（ＲｄＹｂＲｄ）ｚを含む。他の実施形態では、ｎは５であり、Ｙｂは、アミノヘキサン酸部分である。他の実施形態では、ｎは２であり、Ｙｂは、β−アラニン部分である。さらに他の実施形態では、Ｒｅは、水素である。 In certain embodiments of the foregoing, x is 1 and y is 0, and the carrier peptide comprises the sequence (R d Y b R d ) z . In another embodiment, n is 5 and Y b is an aminohexanoic acid moiety. In another embodiment, n is 2 and Y b is a β-alanine moiety. In still other embodiments, R e is hydrogen.

前述のさらに他の実施形態では、ｘは０であり、ｙは１であり、前記キャリアペプチドは、配列（ＲｄＲｄＹｂ）ｚを含む。他の実施形態では、ｎは５であり、Ｙｂは、アミノヘキサン酸部分である。他の実施形態では、ｎは２であり、Ｙｂは、β−アラニン部分である。さらに他の実施形態では、Ｒｅは、水素である。 In still other embodiments of the foregoing, x is 0, y is 1 and the carrier peptide comprises the sequence (R d R d Y b ) z . In another embodiment, n is 5 and Y b is an aminohexanoic acid moiety. In another embodiment, n is 2 and Y b is a β-alanine moiety. In still other embodiments, R e is hydrogen.

他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、配列（ＲｄＹｂ）ｐを含む。ＲｄおよびＹｂは、上記定義のとおりであり、ｐは、２から８の範囲の整数である。他の実施形態では、各Ｒｄは、アルギニンである。他の実施形態では、ｎは５であり、Ｙｂは、アミノヘキサン酸部分である。他の実施形態では、ｎは２であり、Ｙｂは、β−アラニン部分である。さらに他の実施形態では、Ｒｅは、水素である。 In another embodiment, the carrier peptide comprises the sequence (R d Y b ) p . R d and Y b are as defined above, and p is an integer ranging from 2 to 8. In another embodiment, each R d is arginine. In another embodiment, n is 5 and Y b is an aminohexanoic acid moiety. In another embodiment, n is 2 and Y b is a β-alanine moiety. In still other embodiments, R e is hydrogen.

他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、配列ＩＬＦＱＹを含む。前記ペプチドは、ＩＬＦＱＹ配列に加えて、本願明細書に開示の任意の他の配列を含んでもよい。例えば、前記キャリアペプチドは、ＩＬＦＱＹおよび、［（ＲｄＹｂＲｄ）ｘ（ＲｄＲｄＹｂ）ｙ］ｚ、［（ＲｄＲｄＹｂ）ｙ（ＲｄＹｂＲｄ）ｘ］ｚ、（ＲｄＹｂ）ｐまたはそれらの組み合わせを含んでもよく、Ｒｄ、ｘ、ｙおよびＹｂは、上記定義のとおりである。前記［（ＲｄＹｂＲｄ）ｘ（ＲｄＲｄＹｂ）ｙ］ｚ、［（ＲｄＲｄＹｂ）ｙ（ＲｄＹｂＲｄ）ｘ］ｚまたは（ＲｄＹｂ）ｐの配列は、前記ＩＬＦＱＹ配列のアミノ末端、カルボキシ末端または両方に存在してもよい。ある実施形態では、ｘは１であり、ｙは０であり、前記キャリアペプチドは、任意のＺリンカーを介して、前記ＩＬＦＱＹ配列に結合される（ＲｄＹｂＲｄ）ｚを含む。 In another embodiment, the carrier peptide comprises the sequence ILFQY. The peptide may comprise, in addition to the ILFQY sequence, any other sequence disclosed herein. For example, the carrier peptide, ILFQY and, [(R d Y b R d) x (R d R d Y b) y] z, [(R d R d Y b) y (R d Y b R d) x ] z , (R d Y b ) p or a combination thereof, wherein R d , x, y and Y b are as defined above. [(R d Y b R d ) x (R d R d Y b ) y ] z , [(R d R d Y b ) y (R d Y b R d ) x ] z or (R d Y b) The sequence of p ) may be present at the amino terminus, carboxy terminus or both of said ILFQY sequences. In one embodiment, x is 1 and y is 0, and the carrier peptide comprises (R d Y b R d ) z linked to the ILFQY sequence via an optional Z linker.

他の関連する実施形態では、前記キャリアペプチドは、配列ＩＬＦＱ、ＩＷＦＱまたはＩＬＩＱを含む。他の実施形態は、配列ＰＰＭＷＳ、ＰＰＭＷＴ、ＰＰＭＦＳまたはＰＰＭＹＳを含むキャリアペプチドを含む。前記キャリアペプチドは、これらの配列に加えて、本願明細書に記載の任意の他の配列、例えば、さらに、配列［（ＲｄＹｂＲｄ）ｘ（ＲｄＲｄＹｂ）ｙ］ｚ、［（ＲｄＲｄＹｂ）ｙ（ＲｄＹｂＲｄ）ｘ］ｚ、または（ＲｄＹｂ）ｐを含んでもよく、Ｒｄ、ｘ、ｙおよびＹｂは、上記定義のとおりである。 In another related embodiment, the carrier peptide comprises the sequence ILFQ, IWFQ or ILIQ. Other embodiments include carrier peptides comprising the sequences PPMWS, PPMWT, PPMFS or PMYS. Said carrier peptide may, in addition to these sequences, also any other sequences as described herein, for example, the sequence [(R d Y b R d ) x (R d R d Y b ) y ] z , [(R d R d Y b ) y (R d Y b R d ) x ] z , or (R d Y b ) p , wherein R d , x, y and Y b are as defined above That's right.

前記キャリアペプチドの一部の実施形態では、天然に存在するアミノ酸サブユニットに対する修飾を有し、例えば、前記アミノ末端またはカルボキシ末端のアミノ酸サブユニットが、修飾され得る。このような修飾としては、結合していないアミノまたは結合していないカルボキシを、疎水性基でキャップすることを含む。例えば、前記アミノ末端は、アセチル、ベンゾイルまたはステアロイル部分によりキャップされてもよい。例えば、表１における任意のペプチド配列が、前記表において特別に示されていなくても、このような修飾を有し得る。これらの実施形態では、前記キャリアペプチドのアミノ末端は、下記のように示され得る。   In some embodiments of the carrier peptide, one may have modifications to naturally occurring amino acid subunits, eg, the amino or carboxy terminal amino acid subunits may be modified. Such modifications include capping the unbound amino or the unbound carboxy with a hydrophobic group. For example, the amino terminus may be capped by an acetyl, benzoyl or stearoyl moiety. For example, any of the peptide sequences in Table 1 may have such modifications, even if not specifically indicated in said table. In these embodiments, the amino terminus of the carrier peptide may be indicated as follows.

さらに他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリンまたはスレオニンのうちの少なくとも１つを含む。   In yet another embodiment, the carrier peptide comprises at least one of alanine, asparagine, cysteine, glutamine, glycine, histidine, lysine, methionine, serine or threonine.

本願明細書に開示の一部の実施形態では、前記キャリアペプチドは、上記の配列と、前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリンアミノ酸サブユニットとからなる。   In some embodiments disclosed herein, the carrier peptide consists of the above sequence and a glycine or proline amino acid subunit at the carboxy terminus.

一部の実施形態では、前記キャリアペプチドは、下記の配列（アミノ末端からカルボキシ末端）：Ｒ６Ｇ、Ｒ７Ｇ、Ｒ８Ｇ、Ｒ５ＧＲ４Ｇ、Ｒ５Ｆ２Ｒ４Ｇ、Ｔａｔ−Ｇ、ｒＴａｔ−Ｇ、（ＲＸＲ２Ｇ２）２または（ＲＸＲ３Ｘ）２Ｇを構成しない。さらに他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、Ｒ８Ｇ、Ｒ９ＧまたはＲ９Ｆ２Ｇを構成しない。さらに他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、下記の配列：Ｔａｔ−Ｇ、ｒＴａｔ−Ｇ、Ｒ９Ｆ２Ｇ、Ｒ５Ｆ２Ｒ４、Ｒ４Ｇ、Ｒ５Ｇ、Ｒ６Ｇ、Ｒ７Ｇ、Ｒ８Ｇ、Ｒ９Ｇ、（ＲＸＲ）４Ｇ、（ＲＸＲ）５Ｇ、（ＲＸＲＲＢＲ）２Ｇ、（ＲＡＲ）４Ｆ２または（ＲＧＲ）４Ｆ２を構成しない。他の実施形態では、前記キャリアペプチドは、「ペネトラチン」または「Ｒ６Ｐｅｎ」を構成しない。
もう１つの態様では、本開示は、
実質的に荷電していない骨格およびターゲッティング塩基配列を有する核酸類似体、および、
前記核酸類似体に共有結合され、前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリンのアミノ酸サブユニットを含み、Ｒｄサブユニット、Ｙサブユニットおよび任意のＺサブユニットから選択される、８から１６個の更なる他のサブユニットからなり、少なくとも８つのＲｄサブユニット、少なくとも２つのＹサブユニットおよび、多くても３つのＺサブユニットを含み、前記サブユニットの＞５０％が、Ｒｄサブユニットである、ペプチドを含み、
（ａ）各Ｒｄサブユニットは、独立して、アルギニンまたはアルギニン類似体で表わされ、前記アルギニン類似体が、構造ＲａＮ＝Ｃ（ＮＨ２）Ｒｂ（ここで、ＲａがＨまたはＲｃであり；ＲｂがＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲまたはＮ（Ｒｃ）２であり、Ｒｃが低級アルキルまたは低級アルケニルであり、および、場合により、酸素または窒素を含み、または、ＲａおよびＲｂが、共に環を形成する）の側鎖を含むカチオン性α−アミノ酸であり、前記側鎖は、ＲａまたはＲｂを介してアミノ酸に結合され、
（ｂ）前記少なくとも２つのＹサブユニットは、ＹａまたはＹｂであり、
（ｉ）各Ｙａは、独立して、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびアラルキルから独立して選択される側鎖を有する、中性のα−アミノ酸サブユニットであり、置換されたアルキル、アルケニルおよびアルキニルから選択された場合、前記側鎖は、２つ毎、好ましくは４つ毎、およびより好ましくは、６つの炭素原子毎に多くても１つのヘテロ原子を含み、前記サブユニットは、連続的であるか、または、リンカー部分に隣接しており、および、
（ｉｉ）Ｙｂは、

であり、式中、ｎは、２から７であり、各Ｒｅは、各出現箇所で独立して、水素またはメチルであり、
（ｃ）Ｚは、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリン、スレオニンおよび、生理学的ｐＨで負に荷電している側鎖（例えば、カルボキシレート側鎖）を除く、天然に存在する側鎖の１つまたは２つの炭素同族体である側鎖を有するアミノ酸から選択されるアミノ酸サブユニットを表わす、ペプチド−核酸類似体コンジュゲートを提供する。一部の実施形態では、前記側鎖は、中性である。他の実施形態では、前記Ｚ側鎖は、天然に存在するアミノ酸の側鎖である。一部の実施形態では、前記任意のＺサブユニットは、アラニン、グリシン、メチオニン、セリンおよびスレオニンから選択される。前記キャリアペプチドは、０、１、２または３つのＺサブユニットを含んでもよく、一部の実施形態では、多くても２つのＺサブユニットを含む。 In some embodiments, the carrier peptide has the following sequence (amino-terminus to carboxy-terminus): R 6 G, R 7 G, R 8 G, R 5 GR 4 G, R 5 F 2 R 4 G, Tat -G, rTat-G, (RXR 2 G 2) 2 or (RXR 3 X) does not constitute a 2 G. In yet another embodiment, the carrier peptide does not constitute R 8 G, R 9 G or R 9 F 2 G. In yet another embodiment, the carrier peptide has the following sequence: Tat-G, rTat-G, R 9 F 2 G, R 5 F 2 R 4 , R 4 G, R 5 G, R 6 G, R 7 G, R 8 G, R 9 G, (RXR) 4 G, (RXR) 5 G, (RXRRBR) 2 G, (RAR) 4 F 2 or (RGR) 4 F 2 are not configured. In another embodiment, the carrier peptide does not constitute "Penetratin" or "R 6 Pen".
In another aspect, the disclosure is
A nucleic acid analogue having a substantially uncharged backbone and a targeting base sequence;
The covalently bound to the nucleic acid analogue comprises an amino acid subunit of the glycine or proline of the carboxy terminus, R d subunits, is selected from Y subunit and any Z subunits, yet another from 8 to 16 A peptide consisting of at least eight R d subunits, at least two Y subunits and at most three Z subunits, wherein> 50% of said subunits are R d subunits Including
(A) Each R d subunit is independently represented by arginine or an arginine analogue, wherein said arginine analogue has the structure R a N = C (NH 2 ) R b (where R a is H or be a R c; R b is R c, is NH 2, NHR or N (R c) 2, R c is lower alkyl or lower alkenyl, and, optionally, include an oxygen or nitrogen, or, R a and R b are cationic α-amino acids comprising the side chain of the ring) together, said side chain being linked to the amino acid via R a or R b ,
(B) said at least two Y subunits are Y a or Y b ,
(I) Each Y a is a neutral α-amino acid subunit having a side chain independently selected from substituted or unsubstituted alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl and aralkyl, and substitution When selected from selected alkyls, alkenyls and alkynyls, the side chain contains at most one heteroatom, preferably every two, preferably every four, and more preferably every six carbon atoms, The subunits are contiguous or adjacent to the linker moiety, and
(Ii) Y b is

In which n is from 2 to 7 and each R e is independently hydrogen or methyl at each occurrence;
(C) Z excludes alanine, asparagine, cysteine, glutamine, glycine, histidine, lysine, methionine, serine, threonine and side chains negatively charged at physiological pH (eg, carboxylate side chains), Peptide-nucleic acid analog conjugates are provided that represent amino acid subunits selected from amino acids having side chains that are one or two carbon homologs of naturally occurring side chains. In some embodiments, the side chain is neutral. In another embodiment, the Z side chain is the side chain of a naturally occurring amino acid. In some embodiments, the optional Z subunit is selected from alanine, glycine, methionine, serine and threonine. The carrier peptide may comprise 0, 1, 2 or 3 Z subunits and in some embodiments at most 2 Z subunits.

選択された実施形態では、前記キャリアペプチドは、Ｙａ型のＹサブユニットを、正確に２つ有する。前記Ｙサブユニットは、連続しているか、または、システインサブユニットに隣接している。一部の実施形態では、前記２つのＹａサブユニットは、連続している。他の実施形態では、Ｙａサブユニットについての側鎖は、生理学的ｐＨで荷電している側鎖を除く、天然に存在するアミノ酸の側鎖、および、それらの１つまたは２つの炭素同族体を含む。他の可能性のある側鎖は、天然に存在するアミノ酸の側鎖である。更なる実施形態では、前記側鎖は、アリールまたはアラルキルの側鎖であり、例えば、各Ｙａは、独立して、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ロイシン、イソロイシンおよびバリンから選択されてもよい。 In selected embodiments, the carrier peptide is a Y a type Y subunit has two accurately. The Y subunit is either contiguous or adjacent to the cysteine subunit. In some embodiments, the two Y a subunit is continuous. In other embodiments, the side chain of Y a subunit, excluding side chains that are charged at physiological pH, the side chain of a naturally occurring amino acid, and, one of them or two carbon homolog including. Another potential side chain is the side chain of a naturally occurring amino acid. In a further embodiment, the side chain is a side chain of aryl or aralkyl, for example, each Y a is independently phenylalanine, tyrosine, tryptophan, leucine, may be selected from isoleucine and valine.

選択された実施形態では、各Ｙａは、独立して、フェニルアラニンおよびチロシンから選択される。更なる実施形態では、各Ｙａは、フェニルアラニンである。これにより、例えば、アルギニンサブユニット、フェニルアラニンサブユニット、前記グリシンまたはプロリンアミノ酸サブユニット、必要に応じたリンカー部分および核酸類似体からなるコンジュゲートが含まれる。１つのこのようなコンジュゲートは、式Ａｒｇ９Ｐｈｅ２ａａを有するペプチドを含み、ａａは、グリシンまたはプロリンである。 In selected embodiments, each Y a is independently selected from phenylalanine and tyrosine. In a further embodiment, each Y a is phenylalanine. This includes, for example, conjugates consisting of an arginine subunit, a phenylalanine subunit, the glycine or proline amino acid subunit, an optional linker moiety and a nucleic acid analogue. One such conjugate comprises a peptide having the formula Arg 9 Phe 2 aa, where aa is glycine or proline.

前述のキャリアペプチドは、ＩＬＦＱＹ、ＩＬＦＱ、ＩＷＦＱまたはＩＬＩＱを含んでもよい。他の実施形態は、前記配列ＰＰＭＷＳ、ＰＰＭＷＴ、ＰＰＭＦＳまたはＰＰＭＹＳを含む、前述のキャリアペプチドを含む   The aforementioned carrier peptides may comprise ILFQY, ILFQ, IWFQ or ILIQ. Another embodiment comprises the aforementioned carrier peptide, which comprises the sequences PPMWS, PPMWT, PPMFS or PMYS.

本発明のペプチド−オリゴマーコンジュゲートは、コンジュゲートしていないオリゴマーより、無細胞翻訳系を含むタンパク質発現系における標的のｍＲＮＡの発現阻害；標的のプレ−ｍＲＮＡのスプライシング阻害；および、ウイルスの核酸複製またはｍＲＮＡ転写を制御するシス作用性要素を標的とすることにより、ウイルスの複製を阻害することを含む、種々の機能において効果的である。   The peptide-oligomer conjugates of the present invention inhibit the expression of target mRNA in a protein expression system including a cell-free translation system than the unconjugated oligomer; inhibits the splicing of target pre-mRNA; Alternatively, by targeting cis-acting elements that control mRNA transcription, they are effective in a variety of functions, including inhibiting viral replication.

他の薬物（すなわち、核酸類似体でない）と、前記キャリアペプチドとのコンジュゲートも、本発明のスコープ内に含まれる。具体的には、一部の実施形態は、
（ａ）アミノ酸サブユニットを含むキャリアペプチド；および
（ｂ）薬物；を含み、
２つ以上の前記アミノ酸サブユニットが、正電荷を有するアミノ酸であり、前記キャリアペプチドが、前記キャリアペプチドのカルボキシ末端に、グリシン（Ｇ）またはプロリン（Ｐ）アミノ酸サブユニットを含み、前記キャリアペプチドが、前記薬物に共有結合しているコンジュゲートを提供する。これらの実施形態における前記キャリアペプチドは、本願明細書に記載の任意のキャリアペプチドでもよい。前記薬物を前記キャリアペプチドにコンジュゲートすることにより、前記薬物を送達するための方法も提供される。 Conjugates of other drugs (ie, not nucleic acid analogs) with the carrier peptide are also included within the scope of the present invention. Specifically, in some embodiments,
(A) a carrier peptide comprising an amino acid subunit; and (b) a drug;
Two or more of the amino acid subunits are positively charged amino acids, and the carrier peptide comprises glycine (G) or proline (P) amino acid subunits at the carboxy terminus of the carrier peptide, and the carrier peptide comprises , Providing a conjugate covalently attached to the drug. The carrier peptide in these embodiments may be any carrier peptide described herein. Methods are also provided for delivering the drug by conjugating the drug to the carrier peptide.

送達される前記薬物は、生物学的に活性な薬剤、例えば、治療剤または診断剤でもよく、前記薬物は、検出に使用される化合物、例えば、蛍光化合物でもよい。生物学的に活性な薬剤としては、生体分子、例えば、ペプチド、タンパク質、糖類または核酸、特にアンチセンスオリゴヌクレオチド、または、「小分子」の有機もしくは無機の化合物から選択される原薬があげられる。「小分子」化合物は、前述の生体分子ではない、有機、無機または有機金属の化合物として、幅広く規定されてもよい。典型的には、このような化合物は、１０００未満、一実施形態では、５００未満の分子量を有する。   The drug to be delivered may be a biologically active agent, such as a therapeutic or diagnostic agent, and the drug may be a compound used for detection, such as a fluorescent compound. Biologically active agents include drug substances selected from biomolecules, such as peptides, proteins, saccharides or nucleic acids, in particular antisense oligonucleotides, or "small molecule" organic or inorganic compounds . "Small molecule" compounds may be broadly defined as organic, inorganic or organometallic compounds which are not the aforementioned biomolecules. Typically, such compounds have a molecular weight of less than 1000, and in one embodiment less than 500.

一実施形態では、送達される前記薬物は、単一のアミノ酸、ジペプチドまたはトリペプチドを含まないと考えられる。別の実施形態では、送達される前記薬物は、短いオリゴペプチド；すなわち、６つ以下のアミノ酸サブユニットを有するオリゴペプチドを含まない。更なる実施形態では、送達される前記薬物は、より長いオリゴペプチド；すなわち、７個と２０個との間のアミノ酸サブユニットを有するオリゴペプチドを含まない。更なる実施形態では、送達される前記薬物は、２０個より多いアミノ酸サブユニットを有するポリペプチドまたはタンパク質を含まない。   In one embodiment, the drug to be delivered is considered not to comprise a single amino acid, dipeptide or tripeptide. In another embodiment, the drug to be delivered does not comprise a short oligopeptide; ie an oligopeptide having 6 or fewer amino acid subunits. In a further embodiment, the drug to be delivered does not comprise longer oligopeptides; ie oligopeptides having between 7 and 20 amino acid subunits. In a further embodiment, the drug to be delivered does not comprise a polypeptide or protein having more than 20 amino acid subunits.

前記キャリアペプチドは、コンジュゲートされていない状態での前記薬物と比較して、細胞内への前記薬物の輸送を向上するのに効果的であり、および／または、グリシンまたはプロリンサブユニットを欠いている相当するペプチドにコンジュゲートされた前記薬物と比較して、より低い毒性を有する。一部の実施形態では、輸送は、少なくとも２つ、少なくとも５つまたは少なくとも１０個の因子により向上される。他の実施形態では、毒性は、少なくとも２つ、少なくとも５つまたは少なくとも１０個の因子により低減される（すなわち、最大耐性用量が増加される）。   The carrier peptide is effective to improve transport of the drug into cells as compared to the drug in the unconjugated state, and / or lacks a glycine or proline subunit It has lower toxicity compared to the drug conjugated to the corresponding peptide. In some embodiments, transport is enhanced by at least two, at least five or at least ten factors. In other embodiments, the toxicity is reduced by at least two, at least five or at least ten factors (ie, the maximum tolerated dose is increased).

Ｂ．ペプチドリンカー
前記キャリアペプチドは、当業者に利用可能な各種の方法により、送達される前記薬剤（例えば、核酸類似体、薬物等）に結合され得る。一部の実施形態では、前記キャリアペプチドは、介在リンカーなしに、前記核酸類似体に直接結合される。この点で、末端アミノ酸と、前記核酸類似体上の結合していないカルボキシルの結合していないアミンとの間のアミド結合の形成は、前記コンジュゲートの形成に有用であり得る。ある実施形態では、前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリンサブユニットは、前記核酸類似体の３’端に、直接結合される。例えば、前記キャリアペプチドは、前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリン部分と、３’モルホリノ環窒素との間にアミド結合を形成することにより、結合されてもよい（例えば、図１Ｃを参照のこと）。 B. Peptide Linker The carrier peptide can be linked to the agent (eg, nucleic acid analogue, drug, etc.) to be delivered by various methods available to one skilled in the art. In some embodiments, the carrier peptide is attached directly to the nucleic acid analog without an intervening linker. In this regard, the formation of an amide bond between the terminal amino acid and the non-bound carboxyl non-bound amine on the nucleic acid analog may be useful for the formation of the conjugate. In one embodiment, the carboxy-terminal glycine or proline subunit is directly linked to the 3 'end of the nucleic acid analogue. For example, the carrier peptide may be linked by forming an amide bond between the carboxy-terminal glycine or proline moiety and the 3 'morpholino ring nitrogen (see, eg, FIG. 1C).

一部の実施形態では、前記核酸類似体は、ＹａまたはＹｂサブユニット、システインサブユニットおよび、荷電していない非アミノ酸リンカー部分から選択されるリンカー部分を介して、前記キャリアペプチドにコンジュゲートされる。他の実施形態では、前記核酸類似体は、前記キャリアペプチドに、前記グリシンまたはプロリン部分を介して、前記核酸類似体の５’端または３’端のいずれかに直接結合される。一部の実施形態では、前記キャリアペプチドは、前記グリシンまたはプロリンアミノ酸サブユニットを介して、前記核酸類似体の３’に、直接結合され、例えば、アミド結合を介して、３’モルホリノ窒素に直接結合される。 In some embodiments, the nucleic acid analog, Y a or Y b subunit, cysteine subunits and, via a linker moiety selected from non-amino acid linker moiety uncharged, conjugated to the carrier peptide Be done. In another embodiment, the nucleic acid analogue is directly linked to the carrier peptide via the glycine or proline moiety either to the 5 'end or the 3' end of the nucleic acid analogue. In some embodiments, the carrier peptide is attached directly to the 3 'of the nucleic acid analog via the glycine or proline amino acid subunit, for example directly to the 3' morpholino nitrogen via an amide bond. Combined.

他の実施形態では、前記コンジュゲートは、前記末端グリシンまたはプロリンアミノ酸サブユニット間に、結合部分を含む。一部の実施形態では、前記リンカーは、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、カルボニル、カルバマート、ホスホロジアミダート、ホスホロアミダート、ホスホロチオアートおよびホスホジエステルから選択される結合を含む、長さ１８原子以下である。ある実施形態では、前記リンカーは、ホスホロジアミダートおよびピペラジン結合を含む。例えば、一部の実施形態では、前記リンカーは、下記構造（ＸＸＩＸ）：

を有し、ここで、Ｒ２４は存在しないか、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。ある実施形態では、Ｒ２４は存在せず、他の実施形態では、構造（ＸＸＩＸ）は、核酸類似体（例えば、モルホリノオリゴマー）の５’端を、前記キャリアペプチドに結合する（例えば、図１Ｂを参照のこと）。 In another embodiment, the conjugate comprises a binding moiety between the terminal glycine or proline amino acid subunits. In some embodiments, the linker is a bond selected from alkyl, hydroxyl, alkoxy, alkylamino, amide, ester, carbonyl, carbamate, phosphorodiamidate, phosphoroamidate, phosphorothioate and phosphodiester And not more than 18 atoms in length. In one embodiment, the linker comprises phosphorodiamidate and piperazine linkages. For example, in some embodiments, the linker has the structure (XXIX):

In which R 24 is absent or H or C 1 -C 6 alkyl. In one embodiment, R 24 is absent, and in other embodiments, structure (XXIX) links the 5 'end of the nucleic acid analog (eg, morpholino oligomer) to the carrier peptide (eg, FIG. 1B) checking).

一部の実施形態では、前記Ｒｄサブユニットの側鎖部分は、独立して、グアニジル（ＨＮ＝Ｃ（ＮＨ２）ＮＨ−）、アミジニル（ＨＮ＝Ｃ（ＮＨ２）Ｃ＜）、２−アミノジヒドロピリミジル、２−アミノテトラヒドロピリミジル、２−アミノピリジルおよび２−アミノピリミジルから選択される。 In some embodiments, the side chain moieties of the R d subunits are independently guanidyl (HN = C (NH 2 ) NH—), amidinyl (HN = C (NH 2 ) C <), 2- It is selected from aminodihydropyrimidyl, 2-aminotetrahydropyrimidyl, 2-aminopyridyl and 2-aminopyrimidyl.

複数のキャリアペプチドは、必要に応じて、単一の化合物に付着され得る。または、複数の化合物は、単一の輸送体にコンジュゲートされ得る。前記キャリアペプチドと前記核酸類似体との間の前記リンカーは、天然のアミノ酸または非天然のアミノ酸（例えば、６−アミノヘキサン酸またはβ−アラニン）から構成されてもよい。前記リンカーは、前記輸送体ペプチドのカルボキシ末端と、前記核酸類似体のアミンまたはヒドロキシ基（例えば、３’モルホリノ窒素または５’ＯＨ）との間に、例えば、カルボジイミドにより促進された縮合により形成された、直接結合を含んでもよい。   Multiple carrier peptides can optionally be attached to a single compound. Alternatively, multiple compounds can be conjugated to a single transporter. The linker between the carrier peptide and the nucleic acid analogue may be composed of natural amino acids or non-natural amino acids (eg 6-aminohexanoic acid or β-alanine). The linker is formed, for example, by carbodiimide-promoted condensation between the carboxy terminus of the transporter peptide and an amine or hydroxy group of the nucleic acid analogue (eg, 3 'morpholino nitrogen or 5' OH) Also, it may include a direct bond.

一般的に、前記リンカーは、前記コンジュゲートの輸送または機能を妨害しない、任意の非反応性部分を含んでもよい。リンカーは、例えば、エーテル、チオエーテル、アミドまたはカルバマート結合を含む、通常の使用条件下において、非開裂性であるものから選択され得る。他の実施形態では、前記リンカーは、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて開裂可能な、前記キャリアペプチドと化合物（例えば、オリゴヌクレオチド類似体、薬物等）との間のリンケージを含むことが望まれる。ｉｎ ｖｉｖｏにおいて開裂可能な結合は、当該分野において公知であり、例えば、酵素的に加水分解されるカルボン酸エステル、および、グルタチオンの存在下において開裂されるジスルフィドがあげられる。適切な波長の放射の適用により、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、光分解で開裂可能なリンケージ、例えば、オルト−ニトロフェニルエーテルを、開裂するのに適していてもよい。開裂性のジスルフィド基をさらに含む、典型的なヘテロ二機能性結合剤としては、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル ３−［（４−アジドフェニル）ジチオ］プロピオネートおよび、Ｖａｎｉｎ，Ｅ．Ｆ．ａｎｄ Ｊｉ，Ｔ．Ｈ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０：６７５４−６７６０（１９８１）に記載の他のものがあげられる。   In general, the linker may comprise any non-reactive moiety that does not interfere with the transport or function of the conjugate. The linker may, for example, be selected from those which are non-cleavable under the usual conditions of use, including ether, thioether, amide or carbamate linkages. In another embodiment, it is desired that the linker include a linkage between the carrier peptide and a compound (eg, an oligonucleotide analogue, a drug, etc.) which is cleavable in vivo. In vivo cleavable bonds are known in the art and include, for example, enzymatically hydrolyzed carboxylic acid esters and disulfides which are cleaved in the presence of glutathione. With the application of appropriate wavelength radiation, it may be suitable to cleave photocleavable linkages in vivo, such as, for example, ortho-nitrophenyl ether. Exemplary heterobifunctional binders further comprising a cleavable disulfide group include N-hydroxysuccinimidyl 3-[(4-azidophenyl) dithio] propionate and Vanin, E., et al. F. and Ji, T .; H. Biochemistry 20: 6754-6760 (1981).

Ｃ．典型的なキャリアペプチド
典型的なキャリアペプチドの配列およびオリゴヌクレオチド配列の表が、以下の表１に提供される。一部の実施形態では、本開示は、ペプチドオリゴマーコンジュゲートを提供し、前記ペプチドは、表１における前記ペプチド配列のいずれか１つを含むか、または、前記いずれか１つからなる。もう１つの実施形態では、前記核酸類似体は、表１における前記オリゴヌクレオチド配列のいずれかを含むか、または、前記いずれかからなる。さらに他の実施形態では、本開示は、ペプチドオリゴマーコンジュゲートを提供し、前記ペプチドは、表１における前記ペプチド配列のいずれか１つを含むか、または、前記いずれか１つからなり、前記核酸類似体は、表１における前記オリゴヌクレオチド配列のいずれかを含むか、または、前記いずれかからなる。他の実施形態では、本開示は、表１における前記配列のいずれか１つを含むか、または、前記いずれか１つからなるペプチドを提供する。 C. Exemplary Carrier Peptides A table of exemplary carrier peptide sequences and oligonucleotide sequences is provided in Table 1 below. In some embodiments, the disclosure provides peptide oligomer conjugates, wherein the peptide comprises or consists of any one of the peptide sequences in Table 1. In another embodiment, the nucleic acid analog comprises or consists of any of the oligonucleotide sequences in Table 1. In still other embodiments, the disclosure provides peptide oligomer conjugates, wherein said peptide comprises or consists of any one of said peptide sequences in Table 1 and said nucleic acid Analogs comprise or consist of any of the oligonucleotide sequences in Table 1. In another embodiment, the present disclosure provides a peptide comprising or consisting of any one of the above sequences in Table 1.
















ａａ＝グリシンまたはプロリン；Ｂ＝β−アラニン；Ｘ＝６−アミノヘキサン酸；ｔｇ＝非修飾アミノ末端または、アセチル、ベンゾイルもしくはステアロイルの基によりキャップされたアミノ末端（すなわち、アセチルアミド、ベンゾイルアミドまたはステアロイルアミド）、ならびに、Ｙｂは、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨＲｅ）ｎ−ＮＨ−であり、ｎは、２から７であり、各Ｒｅは、各出現箇所で独立して、水素またはメチルである。分かりやすくするために、全ての配列が、末端ｔｇ基を有することに言及しているわけではない。ただし、上記各配列は、非修飾アミノ末端または、アセチル、ベンゾイルもしくはステアロイルの基によりキャップされたアミノ末端を含んでもよい。 aa = glycine or proline; B = β-alanine; X = 6-aminohexanoic acid; tg = unmodified amino terminus or amino terminus capped by acetyl, benzoyl or stearoyl groups (ie acetylamide, benzoylamide or stearoyl amide), and, Y b is, -C (O) - (CHR e) an n -NH-, n is 2 to 7, each R e is independently at each occurrence, hydrogen Or methyl. It is not mentioned that all sequences have a terminal tg group, for the sake of clarity. However, each of the above sequences may comprise an unmodified amino terminus or an amino terminus capped by an acetyl, benzoyl or stearoyl group.

ＩＩＩ．アンチセンスオリゴマー
本発明のコンジュゲートに含まれる核酸類似体は、ポリヌクレオチドの標的配列に、塩基特異的に結合可能な、実質的に荷電していない合成オリゴマー、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド類似体である。このような類似体としては、例えば、メチルホスホネート、ペプチド核酸、実質的に荷電していないＮ３’→Ｐ５’ホスホロアミダートおよびモルホリノオリゴマーがあげられる。 III. Antisense Oligomer The nucleic acid analogue contained in the conjugate of the present invention is a substantially non-charged synthetic oligomer capable of base-specifically binding to a target sequence of a polynucleotide, such as an antisense oligonucleotide analogue. is there. Such analogs include, for example, methyl phosphonates, peptide nucleic acids, substantially uncharged N3 '->P5' phosphoramidates and morpholino oligomers.

類似体骨格により支持された塩基対合基により提供される、前記核酸類似体の塩基配列は、任意の配列とすることができ、前記支持された塩基対合基としては、標準もしくは修飾されたＡ、Ｔ、Ｃ、ＧおよびＵの塩基、または、非標準的なイノシン（Ｉ）および７−デアザ−Ｇ塩基があげられる。   The base sequence of the nucleic acid analogue provided by the base pairing group supported by the analog backbone may be any sequence, and the supported base pairing group may be a standard or modified basepairing group. A, T, C, G and U bases or non-standard inosine (I) and 7-deaza-G bases are mentioned.

一部の実施形態では、前記核酸類似体は、モルホリノオリゴマー、すなわち、図１に示される型のモルホリノサブユニット構造で構成されるオリゴヌクレオチド類似体である。（ｉ）前記構造は、長さ１〜３原子、好ましくは長さ２原子のリン含有リンケージが、１つのサブユニットの前記モルホリノ窒素を、隣接するサブユニットの５’環外炭素に結合することにより、互いに結合される。（ｉｉ）ＰｉおよびＰｊは、塩基特異的な水素結合により、ポリヌクレオチドにおける塩基に結合するのに効果的な、プリンまたはピリミジンの塩基対合部分である。前記プリンまたはピリミジンの塩基対合部分は、典型的に、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシルまたはチミンである。前記モルホリノオリゴマーの合成、構造および結合特性は、以下でさらに記載され、米国特許第５，６９８，６８５、５，２１７，８６６、５，１４２，０４７、５，０３４，５０６、５，１６６，３１５、５，５２１，０６３および５，５０６，３３７号明細書に詳述されており、それらの全てが参照により本願明細書に取り込まれる。   In some embodiments, the nucleic acid analog is a morpholino oligomer, ie, an oligonucleotide analog comprised of morpholino subunit structures of the type shown in FIG. (I) The structure is such that a phosphorus-containing linkage of 1 to 3 atoms in length, preferably 2 atoms in length, links the morpholino nitrogen of one subunit to the 5 'exocyclic carbon of an adjacent subunit Are coupled together. (Ii) Pi and Pj are purine or pyrimidine base pairing moieties that are effective to bind bases in polynucleotides by base-specific hydrogen bonding. The purine or pyrimidine base pairing moiety is typically adenine, cytosine, guanine, uracil or thymine. The synthesis, structure and binding properties of said morpholino oligomers are further described below, and in U.S. Patents 5,698,685, 5,217,866, 5,142,047, 5,034,506, 5,166,315 No. 5,521,063 and 5,506,337, all of which are incorporated herein by reference.

前記モルホリノベースのオリゴマーの所望の化学的特性としては、８〜１４塩基の短さのオリゴマーでさえ高いＴｍを有する標的ＲＮＡを含む、相補的塩基標的核酸と選択的にハイブリダイズする能力、哺乳類の細胞内に能動的に輸送される能力、および、ＲＮＡｓｅ分解に耐性を有するオリゴマー：ＲＮＡヘテロ二本鎖の能力があげられる。 Desirable chemical properties of the morpholino-based oligomers include the ability to selectively hybridize to complementary base target nucleic acids, including target RNAs having high T m even with short oligomers of 8 to 14 bases, Mammals The ability to be actively transported into cells in the cells, and the ability of an oligomer having resistance to RNAse degradation: RNA heteroduplex.

好ましい実施形態では、前記モルホリノオリゴマーは、長さが約８〜４０個のサブユニットである。より典型的には、前記オリゴマーは、長さが約８〜２０個、約８〜１６個、約１０〜３０個または約１２〜２５個のサブユニットである。一部の用途、例えば、抗菌に関して、例えば、長さが約８〜１２個のサブユニットの短いオリゴマーが、本願明細書に開示のように、ペプチド輸送体に付着される場合、特に有利であり得る。   In a preferred embodiment, the morpholino oligomer is about 8 to 40 subunits in length. More typically, the oligomer is about 8 to 20, about 8 to 16, about 10 to 30, or about 12 to 25 subunits in length. For some applications, eg, for antimicrobials, it is particularly advantageous if, for example, short oligomers of about 8 to 12 subunits in length are attached to the peptide transporter as disclosed herein. obtain.

Ａ．修飾されたサブユニット間リンケージを有するオリゴマー
本開示の一実施形態は、修飾されたサブユニット間リンケージを含む核酸類似体（例えば、モルホリノオリゴマー）を含む、ペプチド−オリゴマーコンジュゲートに関する。一部の実施形態では、前記コンジュゲートは、対応する非修飾オリゴマーが有するより高い、ＤＮＡおよびＲＮＡに対する親和性を有し、他のサブユニット間リンケージを有するオリゴマーと比較して、改善された細胞送達、有効性および／または組織分布特性を示す。一実施形態では、前記コンジュゲートは、以下に定義されるように、１つ以上の（Ａ）型のサブユニット間リンケージを含む。他の実施形態では、前記コンジュゲートは、以下に定義されるように、少なくとも１つの（Ｂ）型のサブユニット間リンケージを含む。さらに他の実施形態では、前記コンジュゲートは、（Ａ）型および（Ｂ）型のサブユニット間リンケージを含む。さらに他の実施形態では、前記コンジュゲートは、以下により詳細に記載するように、モルホリノオリゴマーを含む。種々のリンケージ型およびオリゴマーの構造的特徴および特性は、下記記載においてより詳細に記載される。 A. Oligomers Having Modified Intersubunit Linkage One embodiment of the present disclosure relates to peptide-oligomer conjugates that include nucleic acid analogs (eg, morpholino oligomers) that include modified intersubunit linkage. In some embodiments, the conjugate has improved cellularity with higher affinity for DNA and RNA than the corresponding unmodified oligomer and compared to oligomers with other intersubunit linkages. Indicate delivery, efficacy and / or tissue distribution characteristics. In one embodiment, the conjugate comprises one or more inter-subunit linkages of type (A), as defined below. In another embodiment, the conjugate comprises at least one inter-subunit linkage of type (B), as defined below. In yet another embodiment, the conjugate comprises an intersubunit linkage of type (A) and (B). In still other embodiments, the conjugate comprises morpholino oligomers, as described in more detail below. The structural features and properties of the various linkage types and oligomers are described in more detail in the following description.

１．リンケージ（Ａ）
本願出願人は、アンチセンス活性、生体内分布および／または他の所望の特性の向上が、種々のサブユニット間リンケージを有するオリゴマーを調製することにより最適化され得ることを見出した。例えば、前記オリゴマーは、場合により、１つ以上の（Ａ）型のサブユニット間リンケージを含んでもよい。ある実施形態では、前記オリゴマーは、少なくとも１つの（Ａ）型のリンケージを含み、例えば、各リンケージが、（Ａ）型でもよい。一部の他の実施形態では、各（Ａ）型リンケージは、同じ構造を有する。（Ａ）型のリンケージは、その全体が参照により本願明細書に取り込まれる、共所有の米国特許第７，９４３，７６２号明細書に開示されたリンケージを含んでもよい。リンケージ（Ａ）は、３’および５’が、それぞれ、前記モルホリノ環（すなわち、以下に記載される構造（ｉ））の３’端および５’端に対する付着点を示す下記構造（Ｉ）

または、その塩もしくはその異性体を有し、式中、
Ｗは、各出現箇所で独立して、ＳまたはＯであり；
Ｘは、各出現箇所で独立して、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ３または

であり；
Ｙは、各出現箇所で独立して、Ｏまたは−ＮＲ２であり；
Ｒ１は、各出現箇所で独立して、水素またはメチルであり；
Ｒ２は、各出現箇所で独立して、水素または−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７であり；
Ｒ３は、各出現箇所で独立して、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４は、各出現箇所で独立して、水素、メチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２または−［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ｍＨであり、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）−または直接結合であり、Ｒ’は、天然に存在するアミノ酸または１つもしくは２つのその炭素同族体の側鎖であり、ｍは、１から６であり；
Ｒ５は、各出現箇所で独立して、水素、メチルまたは電子対であり；
Ｒ６は、各出現箇所で独立して、水素またはメチルであり；
Ｒ７は、各出現箇所で独立して、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルコキシアルキルであり；
Ｌは、アルキル、アルコキシもしくはアルキルアミノの基またはそれらの組み合わせを含む、長さ１８個原子以下の必要に応じたリンカーである。 1. Linkage (A)
Applicants have found that the improvement of antisense activity, biodistribution and / or other desired properties can be optimized by preparing oligomers with various intersubunit linkages. For example, the oligomer may optionally include one or more inter-subunit linkages of type (A). In one embodiment, the oligomer comprises at least one linkage of type (A), for example, each linkage may be of type (A). In some other embodiments, each (A) type linkage has the same structure. The linkage of type (A) may comprise the linkage disclosed in co-owned US Pat. No. 7,943,762, which is incorporated herein by reference in its entirety. The linkage (A) has the following structure (I) in which 3 'and 5' respectively indicate attachment points to the 3 'end and 5' end of the morpholino ring (ie structure (i) described below)

Or having a salt or an isomer thereof, wherein
W is S or O independently at each occurrence;
X is independently at each occurrence, -N (CH 3 ) 2 , -NR 1 R 2 , -OR 3 or

And
Y is independently O or -NR 2 at each occurrence;
R 1 is independently hydrogen or methyl at each occurrence;
R 2 is independently at each occurrence hydrogen or -LNR 4 R 5 R 7 ;
R 3 is independently at each occurrence hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
R 4 is hydrogen, methyl, -C (= NH) NH 2 , -ZL-NHC (= NH) NH 2 or-[C (O) CHR'NH] m H independently at each occurrence point Z is -C (= O)-or a direct bond, R 'is the side chain of a naturally occurring amino acid or one or two of its carbon homologs, m is 1 to 6 And
R 5 is independently at each occurrence hydrogen, methyl or an electron pair;
R 6 is independently at each occurrence hydrogen or methyl;
R 7 independently at each occurrence is hydrogen, C 1 -C 6 alkyl or C 1 -C 6 alkoxyalkyl;
L is an optional linker up to 18 atoms in length, comprising an alkyl, alkoxy or alkylamino group or combinations thereof.

一部の例では、前記オリゴマーは、少なくとも１つの（Ａ）型リンケージを含む。一部の他の実施形態では、前記オリゴマーは、少なくとも２個連続した（Ａ）型リンケージを含む。更なる実施形態では、前記オリゴマーにおける少なくとも５％のリンケージが、（Ａ）型である。例えば、一部の実施形態では、５％−９５％、１０％から９０％、１０％から５０％または１０％から３５％の前記リンケージが、（Ａ）型リンケージでもよい。一部の特定の実施形態では、少なくとも１つの（Ａ）型リンケージは、−Ｎ（ＣＨ３）２である。他の実施形態では、各（Ａ）型リンケージは、−Ｎ（ＣＨ３）２である。さらに他の実施形態では、前記オリゴマーにおける各リンケージは、−Ｎ（ＣＨ３）２である。他の実施形態では、少なくとも１つの（Ａ）型リンケージは、ピペリジン−１−イル、例えば、非置換のピペラジン−１−イル（例えば、Ａ２またはＡ３）である。他の実施形態では、各（Ａ）型リンケージは、ピペリジン−１−イル、例えば、非置換のピペラジン−１−イルである。 In some instances, the oligomer comprises at least one (A) type linkage. In some other embodiments, the oligomer comprises at least two consecutive (A) type linkages. In a further embodiment, at least 5% of the linkages in said oligomer are of type (A). For example, in some embodiments, 5% -95%, 10% to 90%, 10% to 50%, or 10% to 35% of the linkage may be type (A) linkage. In certain embodiments, at least one type (A) linkage is a -N (CH 3) 2. In other embodiments, the (A) type linkage is a -N (CH 3) 2. In still other embodiments, the linkage in the oligomers is a -N (CH 3) 2. In other embodiments, at least one (A) type linkage is piperidin-1-yl, such as unsubstituted piperazin-1-yl (eg, A2 or A3). In another embodiment, each (A) type linkage is piperidin-1-yl, such as unsubstituted piperazin-1-yl.

一部の実施形態では、Ｗは、各出現箇所で独立して、ＳまたはＯであり、ある実施形態では、Ｗは、Ｏである。   In some embodiments, W is, independently at each occurrence, S or O, and in certain embodiments W is O.

一部の実施形態では、Ｘは、各出現箇所で独立して、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＲ１Ｒ２、−ＯＲ３である。一部の実施形態では、Ｘは、−Ｎ（ＣＨ３）２である。他の態様では、Ｘは、−ＮＲ１Ｒ２であり、他の例では、Ｘは、−ＯＲ３である。 In some embodiments, X is independently in each occurrence, -N (CH 3) 2, -NR 1 R 2, is -OR 3. In some embodiments, X is -N (CH 3) 2. In another aspect, X is -NR < 1 > R < 2 >, and in another example X is -OR < 3 >.

一部の実施形態では、Ｒ１は、各出現箇所で独立して、水素またはメチルである。一部の実施形態では、Ｒ１は、水素である。他の実施形態では、Ｘは、メチルである。 In some embodiments, R 1 is independently hydrogen or methyl at each occurrence. In some embodiments, R 1 is hydrogen. In another embodiment, X is methyl.

一部の実施形態では、Ｒ２は、各出現箇所で水素である。他の実施形態では、Ｒ２は、各出現箇所で−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７である。一部の実施形態では、Ｒ３は、各出現箇所で独立して、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルである。他の実施形態では、Ｒ３は、メチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ３は、エチルである。一部の他の実施形態では、Ｒ３は、ｎ−プロピルまたはイソプロピルである。一部の他の実施形態では、Ｒ３は、Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ３は、Ｃ５アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ３は、Ｃ６アルキルである。 In some embodiments, R 2 is hydrogen at each occurrence. In another embodiment, R 2 is -LNR 4 R 5 R 7 at each occurrence. In some embodiments, R 3 is independently at each occurrence hydrogen or C 1 -C 6 alkyl. In another embodiment, R 3 is methyl. In still other embodiments, R 3 is ethyl. In some other embodiments, R 3 is n-propyl or isopropyl. In some other embodiments, R 3 is C 4 alkyl. In another embodiment, R 3 is C 5 alkyl. In some other embodiments, R 3 is C 6 alkyl.

ある実施形態では、Ｒ４は、各出現箇所で独立して、水素である。他の実施形態では、Ｒ４は、メチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ４は、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。他の実施形態では、Ｒ４は、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。さらに他の実施形態では、Ｒ４は、−［Ｃ（＝Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ｍＨである。一実施形態では、Ｚは、−Ｃ（＝Ｏ）−であり、もう１つの実施形態では、Ｚは、直接結合である。Ｒ’は、天然に存在するアミノ酸の側鎖である。一部の実施形態では、Ｒ’は、１つまたは２つの、天然に存在するアミノ酸の側鎖の炭素同族体である。 In certain embodiments, R 4 is independently hydrogen at each occurrence. In another embodiment, R 4 is methyl. In yet another embodiment, R 4 is —C (= NH) NH 2 . In another embodiment, R 4 is -Z-L-NHC (= NH ) NH 2. In still other embodiments, R 4 is — [C (= O) CHR′NH] m H. In one embodiment, Z is -C (= O)-and in another embodiment Z is a direct bond. R 'is the side chain of a naturally occurring amino acid. In some embodiments, R ′ is a carbon homolog of the side chain of one or two naturally occurring amino acids.

ｍは、１から６の整数である。ｍは、１でもよい。ｍは、２でもよい。ｍは、３でもよい。ｍは、４でもよい。ｍは、５でもよい。ｍは、６でもよい。   m is an integer of 1 to 6; m may be 1. m may be 2. m may be three. m may be 4. m may be five. m may be six.

一部の実施形態では、Ｒ５は、各出現箇所で独立して、水素、メチルまたは電子対である。一部の実施形態では、Ｒ５は、水素である。他の実施形態では、Ｒ５は、メチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ５は、電子対である。 In some embodiments, R 5 is independently at each occurrence hydrogen, methyl or electron pair. In some embodiments, R 5 is hydrogen. In another embodiment, R 5 is methyl. In yet another embodiment, R 5 is an electron pair.

一部の実施形態では、Ｒ６は、各出現箇所で独立して、水素またはメチルである。一部の実施形態では、Ｒ６は、水素である。他の実施形態では、Ｒ６は、メチルである。 In some embodiments, R 6 is independently hydrogen or methyl at each occurrence. In some embodiments, R 6 is hydrogen. In another embodiment, R 6 is methyl.

他の実施形態では、Ｒ７は、各出現箇所で独立して、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ２−Ｃ６アルコキシアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ７は、水素である。他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ６アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ２−Ｃ６アルコキシアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ７は、メチルである。他の実施形態では、Ｒ７は、エチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ７は、ｎ−プロピルまたはイソプロピルである。一部の他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ５アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ６アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ２アルコキシアルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ３アルコキシアルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ４アルコキシアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ５アルコキシアルキルである。他の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ６アルコキシアルキルである。 In another embodiment, R 7 is independently at each occurrence hydrogen, C 1 -C 6 alkyl or C 2 -C 6 alkoxyalkyl. In some embodiments, R 7 is hydrogen. In another embodiment, R 7 is C 1 -C 6 alkyl. In still other embodiments, R 7 is C 2 -C 6 alkoxyalkyl. In some embodiments, R 7 is methyl. In another embodiment, R 7 is ethyl. In still other embodiments, R 7 is n-propyl or isopropyl. In some other embodiments, R 7 is C 4 alkyl. In some embodiments, R 7 is C 5 alkyl. In some embodiments, R 7 is C 6 alkyl. In still other embodiments, R 7 is C 2 alkoxyalkyl. In some other embodiments, R 7 is C 3 alkoxyalkyl. In still other embodiments, R 7 is C 4 alkoxyalkyl. In some embodiments, R 7 is C 5 alkoxyalkyl. In another embodiment, R 7 is C 6 alkoxyalkyl.

前述のように、リンカー基Ｌは、Ｌにおける末端原子（例えば、カルボニルまたは窒素に隣接するもの）が炭素原子であるという条件で、アルキル（例えば、−ＣＨ２−ＣＨ２−）、アルコキシ（例えば、−Ｃ−Ｏ−Ｃ−）およびアルキルアミノ（例えば、−ＣＨ２−ＮＨ−）から選択されるその骨格における結合を含む。分岐鎖状のリンケージ（例えば、−ＣＨ２−ＣＨＣＨ３−）が可能であるが、前記リンカーは、一般的に非分岐鎖状である。一実施形態では、前記リンカーは、炭化水素リンカーである。このようなリンカーは、構造（ＣＨ２）ｎ−を有してもよく、ｎは、１−１２、好ましくは２−８、および、より好ましくは２−６である。 As mentioned above, the linker group L is alkyl (eg -CH 2 -CH 2- ), alkoxy (eg eg -CH 2 -CH 2- ), provided that the terminal atom at L (eg carbonyl or adjacent to nitrogen) is a carbon atom , including binding in its backbone selected from -C-O-C-) and alkylamino (e.g., -CH 2 -NH-). Branched linkage (e.g., -CH 2 -CHCH 3 -), but are possible, the linker is typically unbranched. In one embodiment, the linker is a hydrocarbon linker. Such linkers structure (CH 2) n - may have, n is 1-12, preferably 2-8, and more preferably 2-6.

任意の数の（Ａ）型リンケージを有するオリゴマーが、提供される。一部の実施形態では、前記オリゴマーは、（Ａ）型リンケージを含まない。ある実施形態では、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０パーセントの前記リンケージが、（Ａ）型リンケージである。選択された実施形態では、１０から８０、２０から８０、２０から６０、２０から５０、２０から４０または２０から３５パーセントの前記リンケージが、（Ａ）型リンケージである。さらに他の実施形態では、各リンケージが、（Ａ）型である。   Oligomers having any number of (A) type linkages are provided. In some embodiments, the oligomer does not include (A) type linkage. In one embodiment, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 or 90 percent of the linkages are type (A) linkages. In selected embodiments, 10 to 80, 20 to 80, 20 to 60, 20 to 50, 20 to 40 or 20 to 35 percent of said linkages are type (A) linkages. In yet another embodiment, each linkage is of type (A).

２．リンケージ（Ｂ）
一部の実施形態では、前記オリゴマーは、少なくとも１つの（Ｂ）型リンケージを含む。例えば、前記オリゴマーは、１、２、３、４、５、６個以上の（Ｂ）型リンケージを含んでもよい。前記（Ｂ）型リンケージは、隣接してもよいし、または、前記オリゴマー全体に分散されてもよい。（Ｂ）型リンケージは、下記化合構造（Ｉ）：

または、その塩もしくはその異性体を有する。式中、
Ｗは、各出現箇所で独立して、ＳまたはＯであり；
Ｘは、各出現箇所で独立して、−ＮＲ８Ｒ９または−ＯＲ３であり；および、
Ｙは、各出現箇所で独立して、Ｏまたは−ＮＲ１０であり、
Ｒ３は、各出現箇所で独立して、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ８は、各出現箇所で独立して、水素またはＣ２−Ｃ１２アルキルであり；
Ｒ９は、各出現箇所で独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アラルキルまたはアリールであり；
Ｒ１０は、各出現箇所で独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７であり；
Ｒ８およびＲ９が結合して、５〜１８員の単環もしくは二環複素環、または、Ｒ８、Ｒ９またはＲ３がＲ１０と結合して、５〜７員の複素環を形成する。Ｘが４−ピペラジノである場合、Ｘは、下記構造（ＩＩＩ）：

を有する。式中、
Ｒ１１は、各出現箇所で独立して、Ｃ２−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり；
Ｒは、各出現箇所で独立して、電子対、水素またはＣ１−Ｃ１２アルキルであり；および、
Ｒ１２は、各出現箇所で独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、−ＮＨ２、−ＣＯＮＨ２、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｒ１４Ｒ１５、Ｃ１−Ｃ１２アルキルカルボニル、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニル、グアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コラート、デオキシコラート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−ＳＲ１３またはＣ１−Ｃ１２アルコキシであり、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、各出現箇所で独立して、Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。 2. Linkage (B)
In some embodiments, the oligomer comprises at least one (B) type linkage. For example, the oligomer may comprise one, two, three, four, five, six or more (B) type linkages. The (B) type linkage may be contiguous or may be dispersed throughout the oligomer. (B) The type linkage has the following compound structure (I):

Or it has the salt or its isomer. During the ceremony
W is S or O independently at each occurrence;
X is -NR 8 R 9 or -OR 3 independently at each occurrence; and
Y is independently O or -NR 10 at each occurrence;
R 3 is independently at each occurrence hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
R 8 independently at each occurrence is hydrogen or C 2 -C 12 alkyl;
R 9 independently at each occurrence is hydrogen, C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aralkyl or aryl;
R 10 is, independently at each occurrence, hydrogen, C 1 -C 12 alkyl or -LNR 4 R 5 R 7 ;
R 8 and R 9 are combined to form a 5- to 18-membered monocyclic or bicyclic heterocycle, or R 8 , R 9 or R 3 is combined to R 10 to form a 5- to 7-membered heterocycle. Do. When X is 4-piperazino, X has the following structure (III):

Have. During the ceremony
R 11 is independently at each occurrence C 2 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aminoalkyl, C 1 -C 12 alkylcarbonyl, aryl, heteroaryl or heterocyclyl;
R is independently at each occurrence an electron pair, hydrogen or C 1 -C 12 alkyl; and
R 12 is independently hydrogen at each occurrence, C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aminoalkyl, -NH 2 , -CONH 2 , -NR 13 R 14 , -NR 13 R 14 R 15 , C 1 -C 12 alkylcarbonyl, oxo, -CN, trifluoromethyl, amidyl, amidinyl, amidinylalkyl, amidinylalkylcarbonyl, guanidinyl, guanidinylalkyl, guanidinylalkylcarbonyl, cholate, deoxycholate , Aryl, heteroaryl, heterocycle, -SR 13 or C 1 -C 12 alkoxy, and R 13 , R 14 and R 15 are each independently C 1 -C 12 alkyl at each occurrence.

一部の実施例では、前記オリゴマーは、１つの（Ｂ）型リンケージを含む。一部の他の実施形態では、前記オリゴマーは、２つの（Ｂ）型リンケージを含む。一部の他の実施形態では、前記オリゴマーは、３つの（Ｂ）型リンケージを含む。一部の他の実施形態では、前記オリゴマーは、４つの（Ｂ）型リンケージを含む。さらに他の実施形態では、前記（Ｂ）型リンケージは、連続的である（すなわち、前記（Ｂ）型リンケージは、互いに隣接する）。更なる実施形態では、前記オリゴマーにおける少なくとも５％の前記リンケージは、（Ｂ）型である。例えば、一部の実施形態では、５％−９５％、１０％から９０％、１０％から５０％または１０％から３５％の前記リンケージが、（Ｂ）型リンケージでもよい。   In some embodiments, the oligomer comprises one (B) type linkage. In some other embodiments, the oligomer comprises two (B) type linkages. In some other embodiments, the oligomer comprises three (B) type linkages. In some other embodiments, the oligomer comprises four (B) type linkages. In yet another embodiment, the (B) type linkage is continuous (ie, the (B) type linkages are adjacent to one another). In a further embodiment, at least 5% of the linkages in the oligomer are of type (B). For example, in some embodiments, 5% -95%, 10% to 90%, 10% to 50%, or 10% to 35% of the linkage may be type (B) linkage.

他の実施形態では、Ｒ３は、各出現箇所で独立して、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ３は、メチルでもよい。一部の実施形態では、Ｒ３は、エチルでもよい。一部の他の実施形態では、Ｒ３は、ｎ−プロピルまたはイソプロピルでもよい。さらに他の実施形態では、Ｒ３は、Ｃ４アルキルでもよい。一部の実施形態では、Ｒ３は、Ｃ５アルキルでもよい。一部の実施形態では、Ｒ３は、Ｃ６アルキルでもよい。 In another embodiment, R 3 is independently at each occurrence hydrogen or C 1 -C 6 alkyl. In still other embodiments, R 3 may be methyl. In some embodiments, R 3 may be ethyl. In some other embodiments, R 3 may be n-propyl or isopropyl. In still other embodiments, R 3 may be C 4 alkyl. In some embodiments, R 3 may be C 5 alkyl. In some embodiments, R 3 may be C 6 alkyl.

一部の実施形態では、Ｒ８は、各出現箇所で独立して、水素またはＣ２−Ｃ１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ８は、水素である。さらに他の実施形態では、Ｒ８は、エチルである。一部の他の実施形態では、Ｒ８は、ｎ−プロピルまたはイソプロピルである。一部の実施形態では、Ｒ８は、Ｃ４アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ８は、Ｃ５アルキルである。他の実施形態では、Ｒ８は、Ｃ６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ８は、Ｃ７アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ８は、Ｃ８アルキルである。他の実施形態では、Ｒ８は、Ｃ９アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ８は、Ｃ１０アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ８は、Ｃ１１アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ８は、Ｃ１２アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ８は、Ｃ２−Ｃ１２アルキルであり、前記Ｃ２−Ｃ１２アルキルは、１つ以上の二重結合（例えば、アルケン）、三重結合（例えば、アルキン）または両方を含む。一部の実施形態では、Ｒ８は、非置換のＣ２−Ｃ１２アルキルである。 In some embodiments, R 8 is independently at each occurrence hydrogen or C 2 -C 12 alkyl. In some embodiments, R 8 is hydrogen. In still other embodiments, R 8 is ethyl. In some other embodiments, R 8 is n-propyl or isopropyl. In some embodiments, R 8 is C 4 alkyl. In still other embodiments, R 8 is C 5 alkyl. In another embodiment, R 8 is C 6 alkyl. In some embodiments, R 8 is C 7 alkyl. In still other embodiments, R 8 is C 8 alkyl. In another embodiment, R 8 is C 9 alkyl. In still other embodiments, R 8 is C 10 alkyl. In some other embodiments, R 8 is C 11 alkyl. In still other embodiments, R 8 is C 12 alkyl. In some other embodiments, R 8 is C 2 -C 12 alkyl, wherein said C 2 -C 12 alkyl is one or more double bonds (eg, alkenes), triple bonds (eg, alkynes) ) Or both. In some embodiments, R 8 is unsubstituted C 2 -C 12 alkyl.

一部の実施形態では、Ｒ９は、各出現箇所で独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アラルキルまたはアリールである。一部の実施形態では、Ｒ９は、水素である。さらに他の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。他の実施形態では、Ｒ９は、メチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ９は、エチルである。一部の他の実施形態では、Ｒ９は、ｎ−プロピルまたはイソプロピルである。一部の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ５アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ６アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ７アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ９アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ１０アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ１１アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ１２アルキルである。 In some embodiments, R 9 is, independently at each occurrence, hydrogen, C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aralkyl or aryl. In some embodiments, R 9 is hydrogen. In still other embodiments, R 9 is C 1 -C 12 alkyl. In another embodiment, R 9 is methyl. In yet another embodiment, R 9 is ethyl. In some other embodiments, R 9 is n-propyl or isopropyl. In some embodiments, R 9 is C 4 alkyl. In some embodiments, R 9 is C 5 alkyl. In still other embodiments, R 9 is C 6 alkyl. In some other embodiments, R 9 is C 7 alkyl. In some embodiments, R 9 is C 8 alkyl. In some embodiments, R 9 is C 9 alkyl. In some other embodiments, R 9 is C 10 alkyl. In some other embodiments, R 9 is C 11 alkyl. In still other embodiments, R 9 is C 12 alkyl.

一部の他の実施形態では、Ｒ９は、Ｃ１−Ｃ１２アラルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ９は、ベンジルであり、前記ベンジルは、場合により、フェニル環またはベンジル炭素のいずれかにおいて置換されてもよい。この点で、置換基としては、アルキルおよびアルコキシの基、例えば、メチルまたはメトキシがあげられる。一部の実施形態では、前記ベンジル基は、前記ベンジル炭素において、メチルで置換される。例えば、一部の実施形態では、Ｒ９は、下記構造（ＸＩＶ）：

を有する。 In some other embodiments, R 9 is C 1 -C 12 aralkyl. For example, in some embodiments, R 9 is benzyl, which may optionally be substituted at either the phenyl ring or the benzyl carbon. In this regard, substituents include alkyl and alkoxy groups such as methyl or methoxy. In some embodiments, the benzyl group is substituted with methyl at the benzyl carbon. For example, in some embodiments, R 9 has the following structure (XIV):

Have.

他の実施形態では、Ｒ９は、アリールである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ９は、フェニルであり、前記フェニルは、場合により置換されてもよい。この点で、置換基としては、アルキルおよびアルコキシの基、例えば、メチルまたはメトキシがあげられる。他の実施形態では、Ｒ９は、フェニルであり、前記フェニルは、クラウンエーテル部分、例えば、１２〜１８員のクラウンエーテルを含む。一実施形態では、前記クラウンエーテルは、１８員環であり、なお更なるフェニル部分を含んでもよい。例えば、一実施形態では、Ｒ９は、下記構造（ＸＶ）または（ＸＶＩ）：

の１つを有する。 In another embodiment, R 9 is aryl. For example, in some embodiments, R 9 is phenyl, which may be optionally substituted. In this regard, substituents include alkyl and alkoxy groups such as methyl or methoxy. In another embodiment, R 9 is phenyl, said phenyl comprising a crown ether moiety, for example a 12-18 membered crown ether. In one embodiment, the crown ether is an 18-membered ring and may contain an additional phenyl moiety. For example, in one embodiment, R 9 has the following structure (XV) or (XVI):

Have one.

一部の実施形態では、Ｒ１０は、各出現箇所で独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７であり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ７は、リンケージ（Ａ）に関して上記定義のとおりである。他の実施形態では、Ｒ１０は、水素である。他の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１０は、−ＬＮＲ４Ｒ５Ｒ７である。一部の実施形態では、Ｒ１０は、メチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１０は、エチルである。一部の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ４アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ５アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ６アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ７アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ９アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ１０アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ１１アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１０は、Ｃ１２アルキルである。 In some embodiments, R 10 is, independently at each occurrence, hydrogen, C 1 -C 12 alkyl or -LNR 4 R 5 R 7 and R 4 , R 5 and R 7 are linkages ( It is as the above-mentioned definition regarding A). In another embodiment, R 10 is hydrogen. In another embodiment, R 10 is C 1 -C 12 alkyl. In another embodiment, R 10 is -LNR 4 R 5 R 7 . In some embodiments, R 10 is methyl. In still other embodiments, R 10 is ethyl. In some embodiments, R 10 is C 3 alkyl. In some embodiments, R 10 is C 4 alkyl. In still other embodiments, R 10 is C 5 alkyl. In some other embodiments, R 10 is C 6 alkyl. In another embodiment, R 10 is C 7 alkyl. In still other embodiments, R 10 is C 8 alkyl. In some embodiments, R 10 is C 9 alkyl. In another embodiment, R 10 is C 10 alkyl. In still other embodiments, R 10 is C 11 alkyl. In some other embodiments, R 10 is C 12 alkyl.

一部の実施形態では、Ｒ８およびＲ９が結合して、５〜１８員の単環もしくは二環複素環を形成する。一部の実施形態では、前記複素環は、５または６員の単環複素環である。例えば、一部の実施形態では、リンケージ（Ｂ）は、下記構造（ＩＶ）：

を有する。式中、Ｚは、５または６員の単環複素環を表わす。 In some embodiments, R 8 and R 9 combine to form a 5-18 membered monocyclic or bicyclic heterocycle. In some embodiments, the heterocycle is a 5 or 6 membered single ring heterocycle. For example, in some embodiments, linkage (B) has the following structure (IV):

Have. In the formula, Z represents a 5- or 6-membered single ring heterocyclic ring.

他の実施形態では、複素環は、二環、例えば、１２員の二環複素環である。前記複素環は、ピペリジンでもよい。前記複素環は、モルホリノでもよい。前記複素環は、ピペリジニルでもよい。前記複素環は、デカヒドロイソキノリンでもよい。典型的な複素環としては、下記：

が挙げられる。 In another embodiment, the heterocycle is a bicyclic, eg a 12 membered bicyclic heterocycle. The heterocycle may be piperidine. The heterocycle may be morpholino. The heterocycle may be piperidinyl. The heterocycle may be decahydroisoquinoline. The following are typical heterocyclic rings:

Can be mentioned.

一部の実施形態では、Ｒ１１は、各出現箇所で独立して、Ｃ２−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルである。 In some embodiments, R 11 is, independently at each occurrence, C 2 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aminoalkyl, aryl, heteroaryl or heterocyclyl.

一部の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ２−Ｃ１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、エチルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ３アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１１は、イソプロピルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ５アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ６アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ７アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ８アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ９アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１０アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１１アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１２アルキルである。 In some embodiments, R 11 is C 2 -C 12 alkyl. In some embodiments, R 11 is ethyl. In another embodiment, R 11 is C 3 alkyl. In still other embodiments, R 11 is isopropyl. In some other embodiments, R 11 is C 4 alkyl. In another embodiment, R 11 is C 5 alkyl. In some embodiments, R 11 is C 6 alkyl. In another embodiment, R 11 is C 7 alkyl. In some embodiments, R 11 is C 8 alkyl. In another embodiment, R 11 is C 9 alkyl. In still other embodiments, R 11 is C 10 alkyl. In some other embodiments, R 11 is C 11 alkyl. In some embodiments, R 11 is C 12 alkyl.

他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、メチルアミノである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、エチルアミノである。他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ３アミノアルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ４アミノアルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ５アミノアルキルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ６アミノアルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ７アミノアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ８アミノアルキルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ９アミノアルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１０アミノアルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１１アミノアルキルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１２アミノアルキルである。 In another embodiment, R 11 is C 1 -C 12 aminoalkyl. In some embodiments, R 11 is methylamino. In some embodiments, R 11 is ethylamino. In another embodiment, R 11 is C 3 aminoalkyl. In still other embodiments, R 11 is C 4 aminoalkyl. In some other embodiments, R 11 is C 5 aminoalkyl. In another embodiment, R 11 is C 6 aminoalkyl. In still other embodiments, R 11 is C 7 aminoalkyl. In some embodiments, R 11 is C 8 aminoalkyl. In another embodiment, R 11 is C 9 aminoalkyl. In still other embodiments, R 11 is C 10 aminoalkyl. In some other embodiments, R 11 is C 11 aminoalkyl. In another embodiment, R 11 is C 12 aminoalkyl.

他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１−Ｃ１２アルキルカルボニルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１アルキルカルボニルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ２アルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ３アルキルカルボニルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ４アルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ５アルキルカルボニルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ６アルキルカルボニルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ７アルキルカルボニルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ８アルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ９アルキルカルボニルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１０アルキルカルボニルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１１アルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１１は、Ｃ１２アルキルカルボニルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１１は、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈであり、ｎは、１から６である。例えば、一部の実施形態では、ｎは、１である。他の実施形態では、ｎは、２である。さらに他の実施形態では、ｎは、３である。一部の他の実施形態では、ｎは、４である。さらに他の実施形態では、ｎは、５である。他の実施形態では、ｎは、６である。 In another embodiment, R 11 is C 1 -C 12 alkylcarbonyl. In still other embodiments, R 11 is C 1 alkylcarbonyl. In another embodiment, R 11 is C 2 alkylcarbonyl. In some embodiments, R 11 is C 3 alkylcarbonyl. In still other embodiments, R 11 is C 4 alkylcarbonyl. In some embodiments, R 11 is C 5 alkylcarbonyl. In some other embodiments, R 11 is C 6 alkylcarbonyl. In another embodiment, R 11 is C 7 alkylcarbonyl. In still other embodiments, R 11 is C 8 alkylcarbonyl. In some embodiments, R 11 is C 9 alkylcarbonyl. In still other embodiments, R 11 is C 10 alkylcarbonyl. In some other embodiments, R 11 is C 11 alkylcarbonyl. In some embodiments, R 11 is C 12 alkylcarbonyl. In still other embodiments, R 11 is —C (= O) (CH 2 ) n CO 2 H, and n is 1 to 6. For example, in some embodiments, n is 1. In another embodiment, n is 2. In yet another embodiment, n is 3. In some other embodiments, n is four. In yet another embodiment, n is five. In another embodiment, n is six.

他の実施形態では、Ｒ１１は、アリールである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１１は、フェニルである。一部の実施形態では、前記フェニルは、例えば、ニトロ基により置換される。 In another embodiment, R 11 is aryl. For example, in some embodiments, R 11 is phenyl. In some embodiments, the phenyl is, for example, substituted by a nitro group.

他の実施形態では、Ｒ１１は、ヘテロアリールである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１１は、ピリジニルである。他の実施形態では、Ｒ１１は、ピリミジニルである。 In another embodiment, R 11 is heteroaryl. For example, in some embodiments, R 11 is pyridinyl. In another embodiment, R 11 is pyrimidinyl.

他の実施形態では、Ｒ１１は、ヘテロシクリルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１１は、ピペリジニル、例えば、ピペリジン−４−イルである。 In another embodiment, R 11 is heterocyclyl. For example, in some embodiments, R 11 is piperidinyl, such as piperidin-4-yl.

一部の実施形態では、Ｒ１１は、エチル、イソプロピル、ピペリジニル、ピリミジニル、コラート、デオキシコラートまたは−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈであり、ｎは、１から６である。 In some embodiments, R 11 is ethyl, isopropyl, piperidinyl, pyrimidinyl, cholate, deoxycholate or —C (= O) (CH 2 ) n CO 2 H, and n is 1 to 6.

一部の実施形態では、Ｒは、電子対である。他の実施形態では、Ｒは、水素である。他の実施形態では、Ｒは、Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒは、メチルである。一部の実施形態では、Ｒは、エチルである。他の実施形態では、Ｒは、Ｃ３アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒは、イソプロピルである。一部の他の実施形態では、Ｒは、Ｃ４アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒは、Ｃ５アルキルである。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ６アルキルである。他の実施形態では、Ｒは、Ｃ７アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒは、Ｃ８アルキルである。他の実施形態では、Ｒは、Ｃ９アルキルである。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ１０アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒは、Ｃ１１アルキルである。一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ１２アルキルである。 In some embodiments, R is an electron pair. In another embodiment, R is hydrogen. In another embodiment, R is C 1 -C 12 alkyl. In some embodiments, R is methyl. In some embodiments, R is ethyl. In another embodiment, R is C 3 alkyl. In still other embodiments, R is isopropyl. In some other embodiments, R is C 4 alkyl. In still other embodiments, R is C 5 alkyl. In some embodiments, R is C 6 alkyl. In another embodiment, R is C 7 alkyl. In still other embodiments, R is C 8 alkyl. In another embodiment, R is C 9 alkyl. In some embodiments, R is C 10 alkyl. In still other embodiments, R is C 11 alkyl. In some embodiments, R is C 12 alkyl.

一部の実施形態では、Ｒ１２は、各出現箇所で独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、−ＮＨ２、−ＣＯＮＨ２、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｒ１４Ｒ１５、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニル グアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コラート、デオキシコラート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−ＳＲ１３またはＣ１−Ｃ１２アルコキシであり、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、各出現箇所で独立して、Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。 In some embodiments, R 12 is, independently at each occurrence, hydrogen, C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aminoalkyl, -NH 2 , -CONH 2 , -NR 13 R 14 , -NR 13 R 14 R 15 , oxo, -CN, trifluoromethyl, amidyl, amidinyl, amidinylalkyl, amidinylalkylcarbonyl guanidinyl, guanidinylalkyl, guanidinylalkylcarbonyl, cholate, deoxycholate, aryl , Heteroaryl, heterocycle, -SR 13 or C 1 -C 12 alkoxy, and R 13 , R 14 and R 15 are each independently C 1 -C 12 alkyl at each occurrence.

一部の実施形態では、Ｒ１２は、水素である。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、−ＮＨ２である。一部の実施形態では、Ｒ１２は、−ＣＯＮＨ２である。一部の実施形態では、Ｒ１２は、−ＮＲ１３Ｒ１４である。一部の実施形態では、Ｒ１２は、−ＮＲ１３Ｒ１４Ｒ１５である。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１−Ｃ１２アルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、オキソである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、−ＣＮである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、トリフルオロメチルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、アミジルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、アミジニルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、アミジニルアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、アミジニルアルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、グアニジニル、例えば、モノメチルグアニジニルまたはジメチルグアニジニルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、グアニジニルアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、アミジニルアルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、コラートである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、デオキシコラートである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、アリールである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、ヘテロアリールである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、複素環である。一部の実施形態では、Ｒ１２は、−ＳＲ１３である。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、ジメチルアミンである。 In some embodiments, R 12 is hydrogen. In some embodiments, R 12 is C 1 -C 12 alkyl. In some embodiments, R 12 is C 1 -C 12 aminoalkyl. In some embodiments, R 12 is —NH 2 . In some embodiments, R 12 is -CONH 2 . In some embodiments, R 12 is —NR 13 R 14 . In some embodiments, R 12 is -NR 13 R 14 R 15 . In some embodiments, R 12 is C 1 -C 12 alkylcarbonyl. In some embodiments, R 12 is oxo. In some embodiments, R 12 is -CN. In some embodiments, R 12 is trifluoromethyl. In some embodiments, R 12 is amidyl. In some embodiments, R 12 is amidinyl. In some embodiments, R 12 is amidinylalkyl. In some embodiments, R 12 is amidinylalkylcarbonyl. In some embodiments, R 12 is guanidinyl, such as monomethyl guanidinyl or dimethyl guanidinyl. In some embodiments, R 12 is guanidinylalkyl. In some embodiments, R 12 is amidinylalkylcarbonyl. In some embodiments, R 12 is cholate. In some embodiments, R 12 is deoxycholate. In some embodiments, R 12 is aryl. In some embodiments, R 12 is heteroaryl. In some embodiments, R 12 is a heterocycle. In some embodiments, R 12 is -SR 13 . In some embodiments, R 12 is C 1 -C 12 alkoxy. In some embodiments, R 12 is dimethylamine.

他の実施形態では、Ｒ１２は、メチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、エチルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、イソプロピルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ５アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ６アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ７アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ８アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ９アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１０アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１１アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１２アルキルである。さらに他の実施形態では、前記アルキル部分は、１つ以上の酸素原子により置換されて、エーテル部分、例えば、メトキシメチル部分を形成する。 In another embodiment, R 12 is methyl. In still other embodiments, R 12 is ethyl. In some embodiments, R 12 is C 3 alkyl. In some embodiments, R 12 is isopropyl. In some embodiments, R 12 is C 4 alkyl. In another embodiment, R 12 is C 5 alkyl. In still other embodiments, R 12 is C 6 alkyl. In some other embodiments, R 12 is C 7 alkyl. In some embodiments, R 12 is C 8 alkyl. In still other embodiments, R 12 is C 9 alkyl. In some embodiments, R 12 is C 10 alkyl. In still other embodiments, R 12 is C 11 alkyl. In another embodiment, R 12 is C 12 alkyl. In still other embodiments, the alkyl moiety is substituted by one or more oxygen atoms to form an ether moiety, eg, a methoxymethyl moiety.

一部の実施形態では、Ｒ１２は、メチルアミノである。他の実施形態では、Ｒ１２は、エチルアミノである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ３アミノアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ４アミノアルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ５アミノアルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ６アミノアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ７アミノアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ８アミノアルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ９アミノアルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１０アミノアルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１１アミノアルキルである。他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１２アミノアルキルである。一部の実施形態では、前記アミノアルキルは、ジメキルアミノアルキルである。 In some embodiments, R 12 is methylamino. In another embodiment, R 12 is ethylamino. In still other embodiments, R 12 is C 3 aminoalkyl. In some embodiments, R 12 is C 4 aminoalkyl. In still other embodiments, R 12 is C 5 aminoalkyl. In some other embodiments, R 12 is C 6 aminoalkyl. In some embodiments, R 12 is C 7 aminoalkyl. In some embodiments, R 12 is C 8 aminoalkyl. In still other embodiments, R 12 is C 9 aminoalkyl. In some other embodiments, R 12 is C 10 aminoalkyl. In still other embodiments, R 12 is C 11 aminoalkyl. In another embodiment, R 12 is C 12 aminoalkyl. In some embodiments, the aminoalkyl is dimethylalkyl.

さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、アセチルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ２アルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ３アルキルカルボニルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ４アルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ５アルキルカルボニルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ６アルキルカルボニルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ７アルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ８アルキルカルボニルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ９アルキルカルボニルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１０アルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１１アルキルカルボニルである。他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１２アルキルカルボニルである。前記アルキルカルボニルは、カルボキシ部分により置換される。例えば、前記アルキルカルボニルは、置換されて、コハク酸部分（すなわち、３−カルボキシアルキルカルボニル）を形成する。他の実施形態では、前記アルキルカルボニルは、末端−ＳＨ基により置換される。 In still other embodiments, R 12 is acetyl. In some other embodiments, R 12 is C 2 alkylcarbonyl. In some embodiments, R 12 is C 3 alkylcarbonyl. In still other embodiments, R 12 is C 4 alkylcarbonyl. In some embodiments, R 12 is C 5 alkylcarbonyl. In still other embodiments, R 12 is C 6 alkylcarbonyl. In some other embodiments, R 12 is C 7 alkylcarbonyl. In some embodiments, R 12 is C 8 alkylcarbonyl. In still other embodiments, R 12 is C 9 alkylcarbonyl. In some other embodiments, R 12 is C 10 alkylcarbonyl. In some embodiments, R 12 is C 11 alkylcarbonyl. In another embodiment, R 12 is C 12 alkylcarbonyl. The alkylcarbonyl is substituted by a carboxy moiety. For example, the alkylcarbonyl is substituted to form a succinic acid moiety (ie, 3-carboxyalkylcarbonyl). In another embodiment, the alkylcarbonyl is substituted with a terminal -SH group.

一部の実施形態では、Ｒ１２は、アミジルである。一部の実施形態では、前記アミジルは、例えば、−ＳＨ、カルバマートまたは、それらの組み合わせにより、さらに置換されたアルキル部分を含む。他の実施形態では、前記アミジルは、アリール部分、例えば、フェニルにより置換される。ある実施形態では、Ｒ１２は、下記構造（ＩＸ）：

を有してもよい。 In some embodiments, R 12 is amidyl. In some embodiments, the amidyl comprises an alkyl moiety further substituted, for example, by -SH, carbamate, or a combination thereof. In another embodiment, the amidyl is substituted by an aryl moiety, such as phenyl. In one embodiment, R 12 has the following structure (IX):

May be included.

式中、Ｒ１６は、各出現箇所で独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、−ＣＮ、アリールまたはヘテロアリールである。 Wherein R 16 is, independently at each occurrence, hydrogen, C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 alkoxy, -CN, aryl or heteroaryl.

一部の実施形態では、Ｒ１２は、メトキシである。他の実施形態では、Ｒ１２は、エトキシである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ３アルコキシである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ４アルコキシである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ５アルコキシである。一部の他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ６アルコキシである。他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ７アルコキシである。一部の他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ８アルコキシである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ９アルコキシである。他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１０アルコキシである。一部の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１１アルコキシである。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１２アルコキシである。 In some embodiments, R 12 is methoxy. In another embodiment, R 12 is ethoxy. In still other embodiments, R 12 is C 3 alkoxy. In some embodiments, R 12 is C 4 alkoxy. In some embodiments, R 12 is C 5 alkoxy. In some other embodiments, R 12 is C 6 alkoxy. In another embodiment, R 12 is C 7 alkoxy. In some other embodiments, R 12 is C 8 alkoxy. In some embodiments, R 12 is C 9 alkoxy. In another embodiment, R 12 is C 10 alkoxy. In some embodiments, R 12 is C 11 alkoxy. In still other embodiments, R 12 is C 12 alkoxy.

ある実施形態では、Ｒ１２は、ピロリジニル、例えば、ピロリジン−１−イルである。他の実施形態では、Ｒ１２は、ピペリジニル、例えば、ピペリジン−１−イルまたはピペリジン−４−イルである。他の実施形態では、Ｒ１２は、モルホリノ、例えば、モルホリン−４−イルである。他の実施形態では、Ｒ１２は、フェニルであり、なお更なる実施形態では、前記フェニルは、例えば、ニトロ基により置換される。さらに他の実施形態では、Ｒ１２は、ピリミジニル、例えば、ピリミジン−２−イルである。 In one embodiment, R 12 is pyrrolidinyl, for example pyrrolidin-1-yl. In another embodiment, R 12 is piperidinyl, such as piperidin-1-yl or piperidin-4-yl. In another embodiment, R 12 is morpholino, eg morpholin-4-yl. In another embodiment, R 12 is phenyl, and in a still further embodiment said phenyl is, for example, substituted by a nitro group. In still other embodiments, R 12 is pyrimidinyl, eg, pyrimidin-2-yl.

他の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は、各出現箇所で独立して、Ｃ１−Ｃ１２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、メチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、エチルである。他の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、Ｃ３アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、イソプロピルである。他の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、Ｃ４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、Ｃ５アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、Ｃ６アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、Ｃ７アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、Ｃ８アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、Ｃ９アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、Ｃ１０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、Ｃ１１アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１３、Ｒ１４またはＲ１５は、Ｃ１２アルキルである。 In another embodiment, R 13 , R 14 and R 15 are independently C 1 -C 12 alkyl at each occurrence. In some embodiments, R 13 , R 14 or R 15 is methyl. In still other embodiments, R 13 , R 14 or R 15 is ethyl. In another embodiment, R 13 , R 14 or R 15 is C 3 alkyl. In still other embodiments, R 13 , R 14 or R 15 is isopropyl. In another embodiment, R 13 , R 14 or R 15 is C 4 alkyl. In some embodiments, R 13 , R 14 or R 15 is C 5 alkyl. In some other embodiments, R 13 , R 14 or R 15 is C 6 alkyl. In another embodiment, R 13 , R 14 or R 15 is C 7 alkyl. In still other embodiments, R 13 , R 14 or R 15 is C 8 alkyl. In another embodiment, R 13 , R 14 or R 15 is C 9 alkyl. In some embodiments, R 13 , R 14 or R 15 is C 10 alkyl. In some embodiments, R 13 , R 14 or R 15 is C 11 alkyl. In still other embodiments, R 13 , R 14 or R 15 is C 12 alkyl.

上記のように、一部の実施形態では、Ｒ１２は、アリール部分により置換されたアミジルである。この点で、各Ｒ１６は、同じでも、異なってもよい。あるこれらの実施形態では、Ｒ１６は、水素である。他の実施形態では、Ｒ１６は、−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１６は、ヘテロアリール、例えば、テトラゾリルである。ある他の実施形態では、Ｒ１６は、メトキシである。他の実施形態では、Ｒ１６は、アリールであり、前記アリールは、場合により置換される。この点で、任意の置換基としては、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、例えば、メトキシ；トリフルオロメトキシ；ハロ、例えば、クロロ；およびトリフルオロメチルがあげられる。 As mentioned above, in some embodiments, R 12 is amidyl substituted with an aryl moiety. In this regard, each R 16 may be the same or different. In certain of these embodiments, R 16 is hydrogen. In another embodiment, R 16 is -CN. In another embodiment, R 16 is heteroaryl, such as tetrazolyl. In certain other embodiments, R 16 is methoxy. In another embodiment, R 16 is aryl, said aryl is optionally substituted. In this regard, optional substituents include C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 alkoxy such as methoxy; trifluoromethoxy; halo such as chloro; and trifluoromethyl.

他の実施形態では、Ｒ１６は、メチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１６は、エチルである。一部の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ３アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１６は、イソプロピルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ４アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ５アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ６アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ７アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ８アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ９アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ１０アルキルである。他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ１１アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ１２アルキルである。 In another embodiment, R 16 is methyl. In still other embodiments, R 16 is ethyl. In some embodiments, R 16 is C 3 alkyl. In some other embodiments, R 16 is isopropyl. In still other embodiments, R 16 is C 4 alkyl. In another embodiment, R 16 is C 5 alkyl. In still other embodiments, R 16 is C 6 alkyl. In some other embodiments, R 16 is C 7 alkyl. In some embodiments, R 16 is C 8 alkyl. In still other embodiments, R 16 is C 9 alkyl. In some other embodiments, R 16 is C 10 alkyl. In another embodiment, R 16 is C 11 alkyl. In some other embodiments, R 16 is C 12 alkyl.

一部の実施形態では、Ｒ１６は、メトキシである。一部の実施形態では、Ｒ１６は、エトキシである。さらに他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ３アルコキシである。一部の他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ４アルコキシである。他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ５アルコキシである。一部の他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ６アルコキシである。さらに他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ７アルコキシである。一部の他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ８アルコキシである。さらに他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ９アルコキシである。一部の他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ１０アルコキシである。一部の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ１１アルコキシである。一部の他の実施形態では、Ｒ１６は、Ｃ１２アルコキシである。 In some embodiments, R 16 is methoxy. In some embodiments, R 16 is ethoxy. In still other embodiments, R 16 is C 3 alkoxy. In some other embodiments, R 16 is C 4 alkoxy. In another embodiment, R 16 is C 5 alkoxy. In some other embodiments, R 16 is C 6 alkoxy. In still other embodiments, R 16 is C 7 alkoxy. In some other embodiments, R 16 is C 8 alkoxy. In still other embodiments, R 16 is C 9 alkoxy. In some other embodiments, R 16 is C 10 alkoxy. In some embodiments, R 16 is C 11 alkoxy. In some other embodiments, R 16 is C 12 alkoxy.

一部の他の実施形態では、Ｒ８およびＲ９が結合して、１２〜１８員のクラウンエーテルを形成する。例えば、一部の実施形態では、前記クラウンエーテルは、１８員であり、他の実施形態では、前記クラウンエーテルは、１５員である。ある実施形態では、Ｒ８およびＲ９が結合して、下記構造（Ｘ）または（ＸＩ）：

の１つを有する複素環を形成する。 In some other embodiments, R 8 and R 9 combine to form a 12-18 membered crown ether. For example, in some embodiments, the crown ether is 18-membered, and in other embodiments, the crown ether is 15-membered. In certain embodiments, R 8 and R 9 combine to provide a structure (X) or (XI):

Form a heterocycle having one of the following:

一部の実施形態では、Ｒ８、Ｒ９またはＲ３がＲ１０と結合して、５〜７員の複素環を形成する。例えば、一部の実施形態では、Ｒ３がＲ１０と結合して、５〜７員の複素環を形成する。一部の実施形態では、前記複素環は、５員である。他の実施形態では、前記複素環は、６員である。他の実施形態では、前記複素環は、７員である。一部の実施形態では、前記複素環は、下記構造（ＸＩＩ）：

で表わされる。式中、Ｚ’は、５〜７員の複素環を表わす。構造（ＸＩ）のある実施形態では、Ｒ１２は、各出現箇所で水素である。例えば、リンケージ（Ｂ）が、下記構造（Ｂ１）、（Ｂ２）または（Ｂ３）：

の１つを有してもよい。 In some embodiments, R 8 , R 9 or R 3 is combined with R 10 to form a 5- to 7-membered heterocyclic ring. For example, in some embodiments, R 3 combines with R 10 to form a 5-7 membered heterocycle. In some embodiments, the heterocycle is 5-membered. In another embodiment, the heterocycle is 6-membered. In another embodiment, the heterocycle is 7-membered. In some embodiments, the heterocycle has the following structure (XII):

It is represented by. In the formula, Z 'represents a 5- to 7-membered heterocyclic ring. In certain embodiments of structure (XI), R 12 is hydrogen at each occurrence. For example, linkage (B) has the following structure (B1), (B2) or (B3):

You may have one of these.

ある他の実施形態では、Ｒ１２は、Ｃ１−Ｃ１２アルキルカルボニルまたは、アリールホスホリル部分、例えば、トリフェニルホスホリル部分により、さらに置換されたアミジルである。この構造を有するリンケージの例としては、Ｂ５６およびＢ５５があげられる。 In certain other embodiments, R 12 is C 1 -C 12 alkylcarbonyl or amidyl additionally substituted with an aryl phosphoryl moiety, such as a triphenyl phosphoryl moiety. Examples of linkages having this structure include B56 and B55.

ある実施形態では、リンケージ（Ｂ）は、構造Ａ１〜Ａ５のいずれも有さない。
表２は、（Ａ）型および（Ｂ）型の典型的なリンケージを示す。 In one embodiment, linkage (B) does not have any of structures A1-A5.
Table 2 shows typical linkages of types (A) and (B).












以下の配列および記載において、前記リンケージについての上記名称が、多くの場合使用される。例えば、ＰＭＯａｐｎリンケージを含む塩基は、ａｐｎＢとして示される。Ｂは、塩基である。他のリンケージも、同様に指名される。さらに、略称が使用されてもよく、例えば、上記丸括弧内の略称が使用されてもよい（例えば、ａＢは、ａｐｎＢを意味する）。他の直ちに識別可能な略称も使用され得る。 In the following sequences and descriptions, the above mentioned names for the linkage are often used. For example, a base containing a PMO apn linkage is designated as apnB . B is a base. Other linkages are similarly named. Furthermore, abbreviations may be used, for example, the abbreviations in the above parentheses may be used (eg, a B means apn B). Other readily identifiable abbreviations may also be used.

Ｂ．修飾末端基を有するオリゴマー
前記キャリアペプチドに加えて、前記コンジュゲートは、修飾末端基を含むオリゴマーを含んでもよい。本願出願人は、種々の化学的部分による前記オリゴマーの３’端および／または５’端の修飾が、前記コンジュゲートに有利な治療特性（例えば、向上された細胞送達、有効性および／または組織分布等）を提供することを見出した。種々の実施形態において、前記修飾末端基は、疎水性部分を含む。一方、他の実施形態では、前記修飾末端基は、親水性部分を含む。前記修飾末端基は、前述のリンケージと共に、または、前述のリンケージなしに存在してもよい。例えば、一部の実施形態では、前記キャリアペプチドにコンジュゲートされた前記オリゴマーは、１つ以上の修飾末端基と、（Ａ）型リンケージ、例えば、Ｘが−Ｎ（ＣＨ３）２であるリンケージとを含む。他の実施形態では、前記オリゴマーは、１つ以上の修飾末端基と、（Ｂ）型リンケージ、例えば、Ｘが４−アミノピペリジン−１−イル（すなわち、ＡＰＮ）であるリンケージとを含む。さらに他の実施形態では、前記オリゴマーは、１つ以上の修飾末端基と、リンケージ（Ａ）および（Ｂ）の混合物とを含む。例えば、前記オリゴマーは、１つ以上の修飾末端基（例えば、トリチルまたはトリフェニルアセチル）と、Ｘが−Ｎ（ＣＨ３）２であるリンケージ、および、Ｘが４−アミノピペリジン−１−イルであるリンケージとを含んでもよい。修飾末端基と修飾リンケージとの他の組み合わせも、好ましい治療特性を前記オリゴマーに提供する。 B. Oligomer Having Modified End Groups In addition to the carrier peptide, the conjugate may comprise an oligomer comprising modified end groups. Applicants have found that modification of the 3 'end and / or 5' end of the oligomer by various chemical moieties is advantageous for the therapeutic properties of the conjugate (eg, improved cell delivery, efficacy and / or tissue) Found to provide a distribution etc.). In various embodiments, the modified end group comprises a hydrophobic moiety. On the other hand, in another embodiment, the modified end group comprises a hydrophilic moiety. Said modified end group may be present with or without said linkage. For example, in some embodiments, the oligomer conjugated to the carrier peptide includes one or more modified end groups, (A) type linkage, e.g., X is -N (CH 3) 2 Linkage And. In another embodiment, the oligomer comprises one or more modified end groups and (B) type linkages, eg, linkages where X is 4-aminopiperidin-1-yl (ie, APN). In yet another embodiment, the oligomer comprises one or more modified end groups and a mixture of linkages (A) and (B). For example, the oligomer may include one or more modified terminal groups (e.g., trityl or triphenylmethyl acetyl), the linkage X is -N (CH 3) 2, and, X is 4-amino-piperidin-1-yl It may include a certain linkage. Other combinations of modified end groups and modified linkages also provide the oligomer with desirable therapeutic properties.

一実施形態では、修飾末端を含む前記オリゴマーは、下記構造（ＸＶＩＩ）：

または、その塩もしくはその異性体を有し、式中、Ｘ、ＷおよびＹは、リンケージ（Ａ）および（Ｂ）のいずれかについての上記定義の通りであり、
Ｒ１７は、各出現箇所で独立して、存在しないか、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１８およびＲ１９は、各出現箇所で独立して、存在しないか、水素、前記キャリアペプチド、天然もしくは非天然のアミノ酸、Ｃ２−Ｃ３０アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ２１またはＲ２０であり；
Ｒ２０は、各出現箇所で独立して、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６−Ｃ３０アリール、Ｃ７−Ｃ３０アラルキル、Ｃ３−Ｃ３０アルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アラルキルカルボニル、Ｃ２−Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールオキシカルボニル、Ｃ８−Ｃ３０アラルキルオキシカルボニルまたは−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２であり；
Ｐｉは、各出現箇所で独立して、塩基対合部分であり；
Ｌ１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、ジスルフィド、カルボニル、カルバマート、ホスホロジアミダート、ホスホロアミダート、ホスホロチオアート、ピペラジンおよびホスホジエステルから選択される結合を含む、長さ１８個原子以下の必要に応じたリンカーであり；および、
ｘは、０またはそれより大きい整数であり；および、
Ｒ１８またはＲ１９の少なくとも１つが、Ｒ２０であり；および、
Ｒ１８またはＲ１９の少なくとも１つが、Ｒ２０であり、但し、Ｒ１７およびＲ１８は両方とも存在する。 In one embodiment, the oligomer comprising a modified terminus has the structure (XVII):

Or having a salt or an isomer thereof, wherein X, W and Y are as defined above for any of linkages (A) and (B),
R 17 independently at each occurrence is absent, hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
R 18 and R 19 independently at each occurrence are absent, hydrogen, said carrier peptide, a natural or unnatural amino acid, C 2 -C 30 alkylcarbonyl, —C (= O) OR 21 or R 20 ;
R 20 is independently at each occurrence guanidinyl, heterocyclyl, C 1 -C 30 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl; C 6 -C 30 aryl, C 7 -C 30 aralkyl, C 3 -C 30 Alkyl carbonyl, C 3 -C 8 cycloalkyl carbonyl, C 3 -C 8 cycloalkyl alkyl carbonyl, C 7 -C 30 aryl carbonyl, C 7 -C 30 aralkyl carbonyl, C 2 -C 30 alkyloxycarbonyl, C 3- C 8 cycloalkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aryloxycarbonyl, C 8 -C 30 aralkyloxycarbonyl or -P (= O) (R 22 ) 2 ;
Pi is, independently at each occurrence, a base pairing moiety;
L 1 comprises a bond selected from alkyl, hydroxyl, alkoxy, alkylamino, amide, ester, disulfide, carbonyl, carbamate, phosphorodiamidate, phosphoroamidate, phosphorothioate, piperazine and phosphodiester, Optional linker of up to 18 atoms in length; and
x is an integer of 0 or greater; and
At least one of R 18 or R 19 is R 20 ;
At least one of R 18 or R 19 is R 20 , provided that both R 17 and R 18 are present.

修飾末端基を有する前記オリゴマーは、任意の数の（Ａ）型および（Ｂ）型リンケージを含み得る。例えば、前記オリゴマーは、（Ａ）型リンケージのみを含んでもよい。例えば、各リンケージにおけるＸは、−Ｎ（ＣＨ３）２でもよい。または、前記オリゴマーは、リンケージ（Ｂ）のみを含んでもよい。ある実施形態では、前記オリゴマーは、リンケージ（Ａ）および（Ｂ）の混合物を含み、例えば、１から４個のリンケージが（Ｂ）型であり、残りのリンケージが（Ａ）型である。この点で、リンケージとしては、制限されず、Ｘが、（Ｂ）型についてはアミノピペリジニル、および、（Ａ）型についてはジメチルアミノであるリンケージがあげられる。 The oligomer with modified end groups may contain any number of (A) and (B) type linkages. For example, the oligomer may comprise only type (A) linkage. For example, X in each linkage, -N (CH 3) may be 2. Alternatively, the oligomer may contain only linkage (B). In one embodiment, the oligomer comprises a mixture of linkages (A) and (B), eg, 1 to 4 linkages are of type (B) and the remaining linkages are of type (A). In this regard, linkages are not limited and include those in which X is aminopiperidinyl for type (B) and dimethylamino for type (A).

一部の実施形態では、Ｒ１７は、存在しない。一部の実施形態では、Ｒ１７は、水素である。一部の実施形態では、Ｒ１７は、Ｃ１−Ｃ６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１７は、メチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１７は、エチルである。一部の実施形態では、Ｒ１７は、Ｃ３アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１７は、イソプロピルである。他の実施形態では、Ｒ１７は、Ｃ４アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ１７は、Ｃ５アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ１７は、Ｃ６アルキルである。 In some embodiments, R 17 is absent. In some embodiments, R 17 is hydrogen. In some embodiments, R 17 is C 1 -C 6 alkyl. In some embodiments, R 17 is methyl. In still other embodiments, R 17 is ethyl. In some embodiments, R 17 is C 3 alkyl. In some other embodiments, R 17 is isopropyl. In another embodiment, R 17 is C 4 alkyl. In still other embodiments, R 17 is C 5 alkyl. In some other embodiments, R 17 is C 6 alkyl.

他の実施形態では、Ｒ１８は、存在しない。一部の実施形態では、Ｒ１８は、水素である。一部の実施形態では、Ｒ１８は、前記キャリアペプチドである。一部の実施形態では、Ｒ１８は、天然もしくは非天然のアミノ酸、例えば、トリメチルグリシンである。一部の実施形態では、Ｒ１８は、Ｒ２０はである。 In another embodiment, R 18 is absent. In some embodiments, R 18 is hydrogen. In some embodiments, R 18 is the carrier peptide. In some embodiments, R 18 is a natural or non-natural amino acid, such as trimethylglycine. In some embodiments, R 18 is R 20 .

他の実施形態では、Ｒ１９は、存在しない。一部の実施形態では、Ｒ１９は、水素である。一部の実施形態では、Ｒ１９は、前記キャリアペプチドである。一部の実施形態では、Ｒ１９は、天然もしくは非天然のアミノ酸、例えば、トリメチルグリシンである。一部の実施形態では、Ｒ１９は、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ１７であり、例えば、Ｒ１９は、下記構造：

を有してもよい。 In another embodiment, R 19 is absent. In some embodiments, R 19 is hydrogen. In some embodiments, R 19 is the carrier peptide. In some embodiments, R 19 is a natural or non-natural amino acid, such as trimethylglycine. In some embodiments, R 19 is —C (= O) OR 17 , eg, R 19 has the following structure:

May be included.

他の実施形態では、Ｒ１８またはＲ１９は、Ｃ２−Ｃ３０アルキルカルボニル、例えば、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈであり、ｎは、１から６、例えば、２である。他の例では、Ｒ１８またはＲ１９は、アセチルである。 In another embodiment, R 18 or R 19 is C 2 -C 30 alkylcarbonyl, such as —C (= O) (CH 2 ) n CO 2 H, and n is 1 to 6, eg 2 It is. In another example, R 18 or R 19 is acetyl.

一部の実施形態では、Ｒ２０は、各出現箇所で独立して、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６−Ｃ３０アリール、Ｃ７−Ｃ３０アラルキル、Ｃ３−Ｃ３０アルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ６−Ｃ３０アリールカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アラルキルカルボニル、Ｃ２−Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールオキシカルボニル、Ｃ８−Ｃ３０アラルキルオキシカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ２１または−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２である。Ｒ２１は、１つ以上の酸素もしくはヒドロキシル部分またはそれらの組み合わせを含むＣ１−Ｃ３０アルキルである。各Ｒ２２は、Ｃ６−Ｃ１２アリールオキシである。 In some embodiments, R 20 is, independently at each occurrence, guanidinyl, heterocyclyl, C 1 -C 30 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl; C 6 -C 30 aryl, C 7 -C 30 Aralkyl, C 3 -C 30 alkylcarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkylcarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkylalkylcarbonyl, C 6 -C 30 arylcarbonyl, C 7 -C 30 aralkylcarbonyl, C 2 -C 30 Alkyloxycarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aryloxycarbonyl, C 8 -C 30 aralkyloxycarbonyl, —C (= O) OR 21 or —P (= O) (R 22 ) 2 ). R 21 is C 1 -C 30 alkyl containing one or more oxygen or hydroxyl moieties or combinations thereof. Each R 22 is C 6 -C 12 aryloxy.

ある他の実施形態では、Ｒ１９は、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ２１であり、Ｒ１８は、水素、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６−Ｃ３０アリール、Ｃ３−Ｃ３０アルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アラルキルカルボニル、Ｃ２−Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールオキシカルボニル、Ｃ８−Ｃ３０アラルキルオキシカルボニルまたは−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２である。各Ｒ２２は、Ｃ６−Ｃ１２アリールオキシである。 In certain other embodiments, R 19 is —C (= O) OR 21 , R 18 is hydrogen, guanidinyl, heterocyclyl, C 1 -C 30 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl; C 6 − C 30 aryl, C 3 -C 30 alkylcarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkyl carbonyl, C 3 -C 8 cycloalkyl alkylcarbonyl, C 7 -C 30 arylcarbonyl, C 7 -C 30 aralkylcarbonyl, C 2 - C 30 alkyloxy carbonyl, C 3 -C 8 cycloalkyl alkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aryloxycarbonyl, C 8 -C 30 aralkyloxycarbonyl or -P (= O) (R 22 ) 2. Each R 22 is C 6 -C 12 aryloxy.

他の実施形態では、Ｒ２０は、各出現箇所で独立して、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６−Ｃ３０アリール、Ｃ３−Ｃ３０アルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アラルキルカルボニル、Ｃ２−Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールオキシカルボニル、Ｃ８−Ｃ３０アラルキルオキシカルボニルまたは−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２である。一方、他の例では、Ｒ２０は、各出現箇所で独立して、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６−Ｃ３０アリール、Ｃ７−Ｃ３０アラルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アラルキルカルボニル、Ｃ２−Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールオキシカルボニル、Ｃ８−Ｃ３０アラルキルオキシカルボニルまたは−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２である。 In another embodiment, R 20 is, independently at each occurrence, guanidinyl, heterocyclyl, C 1 -C 30 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl; C 6 -C 30 aryl, C 3 -C 30 alkyl Carbonyl, C 3 -C 8 cycloalkylcarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkylalkyl carbonyl, C 7 -C 30 arylcarbonyl, C 7 -C 30 aralkylcarbonyl, C 2 -C 30 alkyloxycarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aryloxycarbonyl, a C 8 -C 30 aralkyloxycarbonyl or -P (= O) (R 22 ) 2. While in other instances, R 20 is, independently at each occurrence, guanidinyl, heterocyclyl, C 1 -C 30 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl; C 6 -C 30 aryl, C 7 -C 30 Aralkyl, C 3 -C 8 cycloalkylcarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkylalkylcarbonyl, C 7 -C 30 arylcarbonyl, C 7 -C 30 aralkylcarbonyl, C 2 -C 30 alkyloxycarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aryloxycarbonyl, a C 8 -C 30 aralkyloxycarbonyl or -P (= O) (R 22 ) 2.

一部の実施形態では、Ｒ２０は、グアニジニル、例えば、モノメチルグアニジニルまたはジメチルグアニジニルである。他の実施形態では、Ｒ２０は、ヘテロシクリルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ２０は、ピペリジン−４−イルである。一部の実施形態では、ピペリジン−４−イルは、トリチルまたはＢｏｃの基により置換される。他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルである。他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ６−Ｃ３０アリールである。 In some embodiments, R 20 is guanidinyl, such as monomethyl guanidinyl or dimethyl guanidinyl. In another embodiment, R 20 is heterocyclyl. For example, in some embodiments, R 20 is piperidin-4-yl. In some embodiments, piperidin-4-yl is substituted with a trityl or Boc group. In another embodiment, R 20 is C 3 -C 8 cycloalkyl. In another embodiment, R 20 is C 6 -C 30 aryl.

一部の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ７−Ｃ３０アリールカルボニルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ２０は、下記構造（ＸＶＩＩＩ）：

を有する。式中、Ｒ２３は、各出現箇所で独立して、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ１−Ｃ３０アルコキシ、Ｃ１−Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａｌｋｙｌ）である。１つのＲ２３は、もう１つのＲ２３と結合して、ヘテロシクリル環を形成してもよい。一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ２３は、水素であり、例えば、一部の実施形態では、各Ｒ２３は、水素である。他の実施形態では、少なくとも１つのＲ２３は、Ｃ１−Ｃ３０アルコキシであり、例えば、一部の実施形態では、各Ｒ２３は、メトキシである。他の実施形態では、少なくとも１つのＲ２３は、ヘテロアリールであり、例えば、一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ２３は、下記構造（ＸＶＩＩＩａ）または（ｏｆ）（ＸＶＩＩＩｂ）：

の１つを有する。 In some embodiments, R 20 is C 7 -C 30 arylcarbonyl. For example, in some embodiments, R 20 has the following structure (XVIII):

Have. Wherein R 23 is, independently at each occurrence, hydrogen, halo, C 1 -C 30 alkyl, C 1 -C 30 alkoxy, C 1 -C 30 alkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aralkyl, aryl , Heteroaryl, heterocyclyl or heterocycloalkyl. One R 23 may combine with another R 23 to form a heterocyclyl ring. In some embodiments, at least one R 23 is hydrogen, eg, in some embodiments, each R 23 is hydrogen. In other embodiments, at least one R 23 is C 1 -C 30 alkoxy, eg, in some embodiments, each R 23 is methoxy. In other embodiments, at least one R 23 is heteroaryl, eg, in some embodiments, at least one R 23 has the following structure (XVIIIa) or (of) (XVIIIb):

Have one.

さらに他の実施形態では、１つのＲ２３は、もう１つのＲ２３と結合して、ヘテロシクリル環を形成する。例えば、一実施形態では、Ｒ２０は、５−カルボキシフルオレセインである。 In still other embodiments, one R 23 is joined to another R 23 to form a heterocyclyl ring. For example, in one embodiment, R 20 is 5-carboxyfluorescein.

他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ７−Ｃ３０アラルキルカルボニルである。例えば、種々の実施形態では、Ｒ２０は、下記構造（ＸＩＸ）、（ＸＸ）または（ＸＸＩ）：

の１つを有する。 In another embodiment, R 20 is C 7 -C 30 aralkylcarbonyl. For example, in various embodiments, R 20 has the following structure (XIX), (XX) or (XXI):

Have one.

式中、Ｒ２３は、各出現箇所で独立して、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ１−Ｃ３０アルコキシ、Ｃ１−Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａｌｋｙｌ）である。１つのＲ２３は、もう１つのＲ２３と結合して、ヘテロシクリル環を形成してもよい。Ｘは、−ＯＨまたはハロである。ｍは、０から６の整数である。一部の特定の実施形態では、ｍは、０である。他の実施形態では、ｍは、１である。一方、他の実施形態では、ｍは、２である。他の実施形態では、少なくとも１つのＲ２３は、水素であり、例えば、一部の実施形態では、各Ｒ２３は、水素である。一部の実施形態では、Ｘは、水素である。他の実施形態では、Ｘは、−ＯＨである。他の実施形態では、Ｘは、Ｃｌである。他の実施形態では、少なくとも１つのＲ２３は、Ｃ１−Ｃ３０アルコキシであり、例えば、メトキシである。 Wherein R 23 is, independently at each occurrence, hydrogen, halo, C 1 -C 30 alkyl, C 1 -C 30 alkoxy, C 1 -C 30 alkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aralkyl, aryl , Heteroaryl, heterocyclyl or heterocycloalkyl. One R 23 may combine with another R 23 to form a heterocyclyl ring. X is -OH or halo. m is an integer of 0 to 6; In certain embodiments, m is 0. In another embodiment, m is 1. On the other hand, in another embodiment, m is 2. In other embodiments, at least one R 23 is hydrogen, eg, in some embodiments, each R 23 is hydrogen. In some embodiments, X is hydrogen. In another embodiment, X is -OH. In another embodiment, X is Cl. In another embodiment, at least one R 23 is C 1 -C 30 alkoxy, eg, methoxy.

さらに他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ７−Ｃ３０アラルキル、例えば、トリチルである。他の実施形態では、Ｒ２０は、メトキシトリチルである。一部の実施形態では、Ｒ２０は、下記構造（ＸＸＩＩ）：

を有する。ここで、Ｒ２３は、各出現箇所で独立して、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ１−Ｃ３０アルコキシ、Ｃ１−Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａｌｋｙｌ）である。１つのＲ２３は、もう１つのＲ２３と結合して、ヘテロシクリル環を形成してもよい。例えば、一部の実施形態では、各Ｒ２３は、水素である。他の実施形態では、少なくとも１つのＲ２３は、Ｃ１−Ｃ３０アルコキシであり、例えば、メトキシである。 In still other embodiments, R 20 is C 7 -C 30 aralkyl, such as trityl. In another embodiment, R 20 is methoxytrityl. In some embodiments, R 20 has the following structure (XXII):

Have. Wherein, R 23 is independently at each occurrence, hydrogen, halo, C 1 -C 30 alkyl, C 1 -C 30 alkoxy, C 1 -C 30 alkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aralkyl, aryl , Heteroaryl, heterocyclyl or heterocycloalkyl. One R 23 may combine with another R 23 to form a heterocyclyl ring. For example, in some embodiments, each R 23 is hydrogen. In another embodiment, at least one R 23 is C 1 -C 30 alkoxy, eg, methoxy.

さらに他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ７−Ｃ３０アラルキルであり、Ｒ２０は、下記構造（ＸＸＩＩＩ）：

を有する。 In still another embodiment, R 20 is C 7 -C 30 aralkyl and R 20 is a compound of structure (XXIII):

Have.

一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ２３は、ハロ、例えば、クロロである。一部の他の実施形態では、１つのＲ２３は、パラ位におけるクロロである。 In some embodiments, at least one R 23 is halo, eg, chloro. In some other embodiments, one R 23 is chloro in the para position.

他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ１−Ｃ３０アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ４−Ｃ２０アルキルであり、場合により、１つ以上の二重結合を含む。例えば、一部の実施形態では、Ｒ２０は、三重結合、例えば、末端三重結合を含むＣ４−Ｃ１０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２０は、ヘキシン−６−イルである。一部の実施形態では、Ｒ２０は、下記構造（ＸＸＩＶ）、（ＸＸＶ）、（ＸＸＶＩ）または（ＸＸＶＩＩ）：

の１つを有する。 In another embodiment, R 20 is C 1 -C 30 alkyl. For example, in some embodiments, R 20 is C 4 -C 20 alkyl, optionally comprising one or more double bonds. For example, in some embodiments, R 20 is a triple bond, eg, C 4 -C 10 alkyl including a terminal triple bond. In some embodiments, R 20 is hexyn-6-yl. In some embodiments, R 20 has the following structure (XXIV), (XXV), (XXVI) or (XXVII):

Have one.

さらに他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ３−Ｃ３０アルキルカルボニル、例えば、Ｃ３−Ｃ１０アルキルカルボニルである。一部の実施形態では、Ｒ２０は、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｐＳＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｐＳＳＨｅｔであり、ｐは、１から６の整数であり、Ｈｅｔは、ヘテロアリールである。例えば、ｐは、１でもよいし、または、ｐは、２でもよい。他の例では、Ｈｅｔは、ピリジニル、例えば、ピリジン−２−イルである。他の実施形態では、Ｃ３−Ｃ３０アルキルカルボニルは、更なるオリゴマーにより置換される。例えば、一部の実施形態では、前記オリゴマーは、前記オリゴマーをもう１つのオリゴマーの３’位に結合する、Ｃ３−Ｃ３０アルキルカルボニルを、３’位に含む。このような末端修飾は、本開示のスコープ内に含まれる。 In still other embodiments, R 20 is C 3 -C 30 alkylcarbonyl, such as C 3 -C 10 alkylcarbonyl. In some embodiments, R 20 is —C (= O) (CH 2 ) p SH or —C (= O) (CH 2 ) p SSHet, and p is an integer of 1 to 6, Het is heteroaryl. For example, p may be 1, or p may be 2. In another example, Het is pyridinyl, for example pyridin-2-yl. In another embodiment, the C 3 -C 30 alkylcarbonyl is substituted by a further oligomer. For example, in some embodiments, the oligomer comprises a C 3 -C 30 alkylcarbonyl at the 3 ′ position, which links the oligomer to the 3 ′ position of another oligomer. Such terminal modifications are included within the scope of the present disclosure.

他の実施形態では、Ｒ２０は、アリールホスホリル部分、例えば、トリフェニルホスホリルにより、さらに置換されたＣ３−Ｃ３０アルキルカルボニルである。このようなＲ２０基の例としては、表３における構造３３があげられる。 In another embodiment, R 20 is C 3 -C 30 alkylcarbonyl further substituted with an arylphosphoryl moiety, such as triphenylphosphoryl. An example of such an R 20 group is structure 33 in Table 3.

他の例では、Ｒ２０は、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルカルボニル、例えば、Ｃ５−Ｃ７アルキルカルボニルである。これらの実施形態では、Ｒ２０は、下記構造（ＸＸＶＩＩＩ）：

を有する。式中、Ｒ２３は、各出現箇所で独立して、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ１−Ｃ３０アルコキシ、Ｃ１−Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アラルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａｌｋｙｌ）である。１つのＲ２３は、もう１つのＲ２３と結合して、ヘテロシクリル環を形成してもよい。一部の実施形態では、Ｒ２３は、ヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａｌｋｙｌ）であり、例えば、一部の実施形態では、Ｒ２３は、下記構造：

を有する。 In another example, R 20 is C 3 -C 8 cycloalkylcarbonyl, such as C 5 -C 7 alkylcarbonyl. In these embodiments, R 20 has the following structure (XXVIII):

Have. Wherein R 23 is, independently at each occurrence, hydrogen, halo, C 1 -C 30 alkyl, C 1 -C 30 alkoxy, C 1 -C 30 alkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aralkyl, aryl , Heteroaryl, heterocyclyl or heterocycloalkyl. One R 23 may combine with another R 23 to form a heterocyclyl ring. In some embodiments, R 23 is heterocycloalkyl (eg, in some embodiments, R 23 is

Have.

一部の他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルアルキルカルボニルである。他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ２−Ｃ３０アルキルオキシカルボニルである。他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニルである。他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ７−Ｃ３０アリールオキシカルボニルである。他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ８−Ｃ３０アラルキルオキシカルボニルである。他の実施形態では、Ｒ２０は、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２であり、各Ｒ２２は、Ｃ６−Ｃ１２アリールオキシである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ２０は、下記構造（Ｃ２４）：

を有する。 In some other embodiments, R 20 is C 3 -C 8 cycloalkylalkylcarbonyl. In another embodiment, R 20 is C 2 -C 30 alkyloxycarbonyl. In another embodiment, R 20 is C 3 -C 8 cycloalkyloxycarbonyl. In another embodiment, R 20 is C 7 -C 30 aryloxycarbonyl. In another embodiment, R 20 is C 8 -C 30 aralkyloxycarbonyl. In another embodiment, R 20 is —P (= O) (R 22 ) 2 and each R 22 is C 6 -C 12 aryloxy. For example, in some embodiments, R 20 has the following structure (C24):

Have.

他の実施形態では、Ｒ２０は、１つ以上のハロ原子を含む。例えば、一部の実施形態では、Ｒ２０は、上記Ｒ２０部分のいずれかの、パーフルオロ類似体を含む。他の実施形態では、Ｒ２０は、ｐ−トリフルオロメチルフェニル、ｐ−トリフルオロメチルトリチル、パーフルオロペンチルまたはペンタフルオロフェニルを含む。 In another embodiment, R 20 contains one or more halo atoms. For example, in some embodiments, R 20 comprises a perfluoro analog of any of the above R 20 moieties. In another embodiment, R 20 comprises p-trifluoromethylphenyl, p-trifluoromethyltrityl, perfluoropentyl or pentafluorophenyl.

一部の実施形態では、３’末端が、修飾を含み、他の実施形態では、５’末端が、修飾を含む。他の実施形態では、３’末端および５’末端の両方が、修飾を含む。したがって、一部の実施形態では、Ｒ１８は、存在せず、Ｒ１９は、Ｒ２０である。他の実施形態では、Ｒ１９は、存在せず、Ｒ１８は、Ｒ２０である。さらに他の実施形態では、Ｒ１８およびＲ１９はそれぞれ、Ｒ２０である。 In some embodiments, the 3 'end comprises a modification, and in other embodiments, the 5' end comprises a modification. In other embodiments, both the 3 'end and the 5' end comprise modifications. Thus, in some embodiments, R 18 is absent and R 19 is R 20 . In another embodiment, R 19 is absent and R 18 is R 20 . In still other embodiments, R 18 and R 19 are each R 20 .

一部の実施形態では、前記オリゴマーは、３’または５’修飾に加えて、細胞浸透性ペプチドを含む。したがって、一部の実施形態では、Ｒ１９は、細胞浸透性ペプチドであり、Ｒ１８は、Ｒ２０である。他の実施形態では、Ｒ１８は、細胞浸透性ペプチドであり、Ｒ１９は、Ｒ２０である。前述の更なる実施形態では、前記細胞浸透性ペプチドは、アルギニンリッチのペプチドである。 In some embodiments, the oligomer comprises a cell penetrating peptide in addition to the 3 'or 5' modification. Thus, in some embodiments, R 19 is a cell penetrating peptide and R 18 is R 20 . In another embodiment, R 18 is a cell penetrating peptide and R 19 is R 20 . In further embodiments of the foregoing, the cell penetrating peptide is an arginine rich peptide.

一部の実施形態では、５’末端基（すなわち、Ｒ１９）を前記オリゴマーに結合するリンカーＬ１は、存在してもよいし、または、存在しなくてもよい。前記リンカーは、任意の数の官能基と、前記リンカーが、前記５’末端基を前記オリゴマーに結合するためのその能力を保持することが提供され、前記リンカーが、配列特異的に標的配列に結合するための前記オリゴマーの能力を妨害しないことが提供される、長さとを含む。一実施形態では、Ｌは、ホスホロジアミダートおよびピペラジン結合を含む。例えば、一部の実施形態では、Ｌは、下記構造（ＸＸＩＸ）：

を有する。 In some embodiments, a linker L 1 may be present or absent which links the 5 'end group (ie, R 19 ) to the oligomer. The linker is provided to retain any number of functional groups and the linker retains its ability to attach the 5 'end group to the oligomer, wherein the linker is sequence specific to the target sequence. And a length provided not to interfere with the ability of said oligomer to bind. In one embodiment, L comprises phosphorodiamidate and piperazine linkages. For example, in some embodiments, L has the following structure (XXIX):

Have.

式中、Ｒ２４は、存在しないか、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２４は、存在しない。一部の実施形態では、Ｒ２４は、水素である。一部の実施形態では、Ｒ２４は、Ｃ１−Ｃ６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２４は、メチルである。他の実施形態では、Ｒ２４は、エチルである。さらに他の実施形態では、Ｒ２４は、Ｃ３アルキルである。一部の他の実施形態では、Ｒ２４は、イソプロピルである。さらに他の実施形態では、Ｒ２４は、Ｃ４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２４は、Ｃ５アルキルである。さらに他の実施形態では、Ｒ２４は、Ｃ６アルキルである。 In the formula, R 24 is absent, hydrogen or C 1 -C 6 alkyl. In some embodiments, R 24 is absent. In some embodiments, R 24 is hydrogen. In some embodiments, R 24 is C 1 -C 6 alkyl. In some embodiments, R 24 is methyl. In another embodiment, R 24 is ethyl. In still other embodiments, R 24 is C 3 alkyl. In some other embodiments, R 24 is isopropyl. In still other embodiments, R 24 is C 4 alkyl. In some embodiments, R 24 is C 5 alkyl. In still other embodiments, R 24 is C 6 alkyl.

さらに他の実施形態では、Ｒ２０は、Ｃ３−Ｃ３０アルキルカルボニルである。Ｒ２０は、下記構造（ＸＸＸ）：

を有する。式中、Ｒ２５は、水素または−ＳＲ２６であり、Ｒ２６は、水素、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、ヘテロシクリル、アリールまたはヘテロアリールである。ｑは、０から６の整数である。 In still other embodiments, R 20 is C 3 -C 30 alkylcarbonyl. R 20 has the following structure (XXX):

Have. In the formula, R 25 is hydrogen or -SR 26 and R 26 is hydrogen, C 1 -C 30 alkyl, heterocyclyl, aryl or heteroaryl. q is an integer of 0 to 6;

上記のいずれかの更なる実施形態では、Ｒ２３は、各出現箇所で独立して、水素、ハロ、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ１−Ｃ３０アルコキシ、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａｌｋｙｌ）である。 In any of the above further embodiments, R 23 is, independently at each occurrence, hydrogen, halo, C 1 -C 30 alkyl, C 1 -C 30 alkoxy, aryl, heteroaryl, heterocyclyl or heterocyclo. It is an alkyl (heterocyclyl).

一部の他の実施形態では、前記オリゴマーの３’末端のみが、上記基の１つにコンジュゲートされる。一部の他の実施形態では、前記オリゴマーの５’末端のみが、上記基の１つにコンジュゲートされる。他の実施形態では、前記３’および５’末端の両方が、上記基の１つを含む。前記末端基は、上記基のいずれか１つ、または、表３に示される特定の基のいずれかから選択されてもよい。   In some other embodiments, only the 3 'end of the oligomer is conjugated to one of the above groups. In some other embodiments, only the 5 'end of the oligomer is conjugated to one of the above groups. In another embodiment, both the 3 'and 5' ends comprise one of the above groups. The end group may be selected from any one of the above groups or any of the specific groups shown in Table 3.






Ｃ．コンジュゲートの特性
前述のように、本開示は、キャリアペプチドとオリゴヌクレオチド類似体（すなわち、オリゴマー）とのコンジュゲートに関する。前記オリゴマーは、前記オリゴマーに所望の特性（例えば、向上されたアンチセンス活性）を付与する、種々の修飾を含んでもよい。
ある実施形態では、前記オリゴマーは、サブユニット間リンケージにより結合されたモルホリノ環構造の配列を含む骨格を含む。前記サブユニット間リンケージは、１つのモルホリノ環構造の３’端を、隣接するモルホリノ環構造の５’端に結合する。各モルホリノ環構造は、前記オリゴマーが、配列特異的な方法で、標的核酸に結合し得るように、塩基対合部分に結合される。前記モルホリノ環構造は、下記構造（ｉ）：

を有してもよい。
式中、Ｐｉは、各出現箇所で独立して、塩基対合部分である。 C. Conjugate Properties As noted above, the present disclosure relates to conjugates of carrier peptides and oligonucleotide analogs (ie, oligomers). The oligomer may comprise various modifications that impart the desired properties (eg, enhanced antisense activity) to the oligomer.
In one embodiment, the oligomer comprises a backbone comprising a sequence of morpholino ring structures linked by intersubunit linkages. The intersubunit linkage joins the 3 'end of one morpholino ring structure to the 5' end of an adjacent morpholino ring structure. Each morpholino ring structure is attached to a base pairing moiety such that the oligomer can bind to the target nucleic acid in a sequence specific manner. The morpholino ring structure has the following structure (i):

May be included.
Where Pi is, independently at each occurrence, a base pairing moiety.

各モルホリノ環構造は、塩基対合部分（Ｐｉ）を支持して、細胞または処置被験体における選択されたアンチセンス標的にハイブリダイズするために、典型的に設計された塩基対合部分の配列を形成する。前記塩基対合部分は、天然のＤＮＡまたはＲＮＡにおいて見出される、プリンもしくはピリミジン（Ａ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＵ）または、類似体、例えば、ヒポキサンチン（ヌクレオシドイノシンの塩基成分）もしくは５−メチルシトシンであり得る。前記オリゴマーに改善された結合親和性を付与する類似体塩基も、使用され得る。この点で、典型的な類似体としては、Ｃ５−プロピニル−修飾ピリミジン、９−（アミノエトキシ）フェノキサジン（Ｇ−クランプ）等があげられる。   Each morpholino ring structure supports a base pairing moiety (Pi) to typically match the sequence of a base pairing moiety designed to hybridize to a selected antisense target in a cell or treatment subject Form. The base pairing moiety may be purine or pyrimidine (A, G, C, T or U) or an analogue such as hypoxanthine (base component of nucleoside inosine) or 5-methyl, which is found in natural DNA or RNA. It may be cytosine. Analog bases that impart improved binding affinity to the oligomers may also be used. In this respect, typical analogues include C5-propynyl-modified pyrimidine, 9- (aminoethoxy) phenoxazine (G-clamp) and the like.

前述のように、前記オリゴマーは、本発明の態様に基づいて修飾されて、１つ以上のリンケージ（Ｂ）を、例えば、２〜５個の荷電していないリンケージ毎に約１個以下、典型的には、１０個の荷電していないリンケージ毎に３〜５個含んでもよい。ある実施形態は、１つ以上の（Ｂ）型リンケージも含む。一部の実施形態では、アンチセンス活性における最適な改善は、約半分以下の骨格リンケージが（Ｂ）型である場合に見られる。おおよそ、最大向上は、典型的には、例えば、１０〜２０％の少量のリンケージ（Ｂ）でも見られる。   As mentioned above, the oligomer is modified in accordance with aspects of the present invention to provide one or more linkages (B), for example, about 1 or less per 2 to 5 uncharged linkages, In fact, three to five may be included for every 10 uncharged linkages. Certain embodiments also include one or more (B) type linkages. In some embodiments, the optimal improvement in antisense activity is seen when about half or less of the backbone linkage is of type (B). Roughly, maximum enhancement is also typically seen with small amounts of linkage (B), for example 10-20%.

一実施形態では、（Ａ）型および（Ｂ）型リンケージは、前記骨格に沿ってちりばめられている。一部の実施形態では、前記オリゴマーは、その長さ全体に沿って、リンケージ（Ａ）および（Ｂ）の代替パターンを厳密に有していない。前記キャリアペプチドに加えて、前記オリゴマーは、場合により、前述のように、５’および／または３’修飾を含み得る。   In one embodiment, the (A) and (B) type linkages are interspersed along the backbone. In some embodiments, the oligomer does not exactly have an alternative pattern of linkages (A) and (B) along its entire length. In addition to the carrier peptide, the oligomer may optionally include 5 'and / or 3' modifications as described above.

オリゴマーは、リンケージ（Ａ）のブロックとリンケージ（Ｂ）のブロックとを有するとも考えられる。例えば、リンケージ（Ａ）の中央ブロックが、リンケージ（Ｂ）のブロックにより、側面に位置されてもよく、逆もまた同様である。一実施形態では、前記オリゴマーは、おおよそ等しい長さの、５’、３；および中央の領域を有する。前記中央領域におけるリンケージ（Ｂ）または（Ａ）の割合は、約５０％より高く、または（ｏ）、約７０％より高い。アンチセンス用途に使用するオリゴマーは、一般的に、長さが約１０個から約４０個のサブユニット、より好ましくは約１５個から２５個のサブユニットの範囲である。例えば、１９〜２０個のサブユニットを有し、アンチセンスオリゴマーとして有用な長さを有する本発明のオリゴマーは、理想的には、２から７個、例えば、４から６個または３から５個のリンケージ（Ｂ）および、残りのリンケージ（Ａ）を有してもよい。１４〜１５個のサブユニットを有するオリゴマーは、理想的には、２から５個、例えば、３または４個のリンケージ（Ｂ）および、残りのリンケージ（Ａ）を有してもよい。   Oligomers are also considered to have a block of linkage (A) and a block of linkage (B). For example, the central block of linkage (A) may be flanked by blocks of linkage (B) and vice versa. In one embodiment, the oligomer has 5 ', 3; and a central region of approximately equal length. The percentage of linkage (B) or (A) in the central region is greater than about 50%, or (o) greater than about 70%. Oligomers used for antisense applications generally range in length from about 10 to about 40 subunits, more preferably from about 15 to 25 subunits. For example, an oligomer of the invention having 19 to 20 subunits and having a useful length as an antisense oligomer is ideally 2 to 7, eg 4 to 6 or 3 to 5 And the remaining linkage (A). Oligomers having 14 to 15 subunits may ideally have 2 to 5, for example 3 or 4, linkages (B) and the remaining linkages (A).

前記モルホリノサブユニットは、以下にさらに記載するように、非リンベースのサブユニット間リンケージにより結合されてもよい。   The morpholino subunits may be linked by non-phosphorus based intersubunit linkages, as described further below.

その非修飾状態で荷電していないが、ペンダントアミン置換基も有し得る、他のオリゴヌクレオチド類似体リンケージも使用され得る。例えば、モルホリノ環上の５’窒素原子は、スルファミドリンケージ（または、リンが炭素または硫黄にそれぞれ置換された場合、尿素リンケージ）に使用され得る。   Other oligonucleotide analog linkages may also be used, which in their unmodified state are not charged but may also have pendant amine substituents. For example, the 5 'nitrogen atom on the morpholino ring can be used for sulfamide linkage (or urea linkage when phosphorus is substituted for carbon or sulfur respectively).

アンチセンス用途についての一部の実施形態では、前記オリゴマーは、前記核酸標的配列に、１００％相補的であってもよく、または、前記オリゴマーと核酸標的配列との間に形成されたヘテロ二本鎖が、細胞ヌクレアーゼの作用および、ｉｎ ｖｉｖｏで起こり得る他の方式の分解に抵抗するのに十分安定している限りは、例えば、変異を調整するためのミスマッチを含んでもよい。ミスマッチが存在する場合、中央におけるより、ハイブリッド二本鎖の末端領域に向かって不安定になる。許容されるミスマッチの数は、二本鎖の安定性において十分理解された原理に基づいて、前記オリゴマーの長さ、前記二本鎖におけるＧ：Ｃ塩基対の割合、および、前記二本鎖におけるミスマッチの位置により決まるであろう。このようなアンチセンスオリゴマーは、核酸標的配列に対して、必ずしも１００％相補的ではないが、前記核酸標的の生物学的活性、例えば、コードされたタンパク質の発現が調節されるように、前記標的配列に対する安定的で、特異的な結合に効果的である。   In some embodiments for antisense applications, the oligomer may be 100% complementary to the nucleic acid target sequence, or a heteroduplex formed between the oligomer and the nucleic acid target sequence. As long as the strand is sufficiently stable to resist the action of cellular nucleases and other modes of degradation that may occur in vivo, it may contain, for example, mismatches to adjust mutations. When a mismatch is present, it becomes more unstable towards the end region of the hybrid duplex than in the middle. The allowable number of mismatches is based on the principle well understood in the stability of duplex, the length of the oligomer, the ratio of G: C base pairs in the duplex, and in the duplex. It will depend on the position of the mismatch. Such an antisense oligomer is not necessarily 100% complementary to the nucleic acid target sequence, but the target is such that the biological activity of the nucleic acid target, eg, expression of the encoded protein, is modulated. It is effective for stable and specific binding to the sequence.

オリゴマーと前記標的配列との間で形成された前記二本鎖の安定性は、結合Ｔｍと、細胞酵素的開裂に対する前記二本鎖の感受性との作用である。相補的な配列ＲＮＡに対するアンチセンス化合物のＴｍは、従来の方法、例えば、Ｈａｍｅｓら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８５，ｐｐ．１０７−１０８により記載されたものにより、または、Ｍｉｙａｄａ Ｃ．Ｇ．ａｎｄ Ｗａｌｌａｃｅ Ｒ．Ｂ．，１９８７，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｖｏｌ．１５４ ｐｐ．９４−１０７に記載のように、測定され得る。 The stability of the duplex formed between the oligomer and the target sequence is the effect of the binding Tm and the sensitivity of the duplex to cellular enzymatic cleavage. The Tm of an antisense compound to a complementary sequence RNA can be determined using conventional methods, eg, Hames et al., Nucleic Acid Hybridization, IRL Press, 1985, pp. 107-108 or by Miyada C. et al. G. and Wallace R. B. , 1987, Oligonucleotide hybridization techniques, Methods Enzymol. Vol. 154 pp. It can be measured as described in 94-107.

一部の実施形態では、各アンチセンスオリゴマーは、体温より高い、または、他の実施形態では、５０℃より高い、相補的な配列ＲＮＡに対する結合Ｔｍを有する。他の実施形態では、Ｔｍは、６０−８０℃より高い範囲である。周知の原理に基づいて、相補性ベースのＲＮＡハイブリッドに対するオリゴマー化合物のＴｍは、前記二本鎖におけるＣ：Ｇ対塩基の比率の増加により、および／または、前記ヘテロ二本鎖の（塩基対における）長さの増加により、向上され得る。同時に、細胞取り込みを最適化する目的のために、前記オリゴマーのサイズを制限するのが有効であり得る。この理由に関して、長さ２０塩基以下で、高いＴｍ（５０℃より高い）を示す化合物は、高いＴｍ値のために、２０塩基より長いのを必要とするものに対して、一般的に好ましい。一部の用途に関して、より長い、例えば、２０塩基より長いオリゴマーは、特定の利点を有し得る。例えば、ある実施形態では、より長いオリゴマーにより、エクソンスキッピングまたはスプライス調節に使用するための特定の有用性が見出され得る。 In some embodiments, each antisense oligomer has a binding T m to complementary sequence RNA above body temperature, or in other embodiments above 50 ° C. In another embodiment, the Tm is in the range of greater than 60-80 ° C. Based on well-known principles, T m of the oligomeric compound against complementarity based RNA hybrid, C in the double-stranded: an increase in the ratio of G to base, and / or, the heteroduplex strands (bp Can be improved by increasing the length). At the same time, it may be effective to limit the size of the oligomer for the purpose of optimizing cellular uptake. For this reason, compounds which show a high T m (above 50 ° C.) with a length of 20 bases or less are generally relative to those which require longer than 20 bases for high T m values. preferable. For some applications, longer oligomers, eg, longer than 20 bases, may have certain advantages. For example, in certain embodiments, longer oligomers may find particular utility for use in exon skipping or splice modulation.

前記ターゲッティング配列塩基は、通常のＤＮＡ塩基でもよいし、または、その類似体、例えば、標的配列ＲＮＡ塩基にワトソン−クリック塩基対合が可能な、ウラシルおよびイノシンでもよい。   The targeting sequence base may be a conventional DNA base, or an analog thereof, such as uracil and inosine, capable of Watson-Crick base pairing to the target sequence RNA base.

前記オリゴマーは、標的ヌクレオチドがウラシル残基の場合、アデニンの代わりにグアニン塩基を包含してもよい。このことは、前記標的配列が、種々のウイルス種にわたって変化し、任意の所定のヌクレオチド残基での変異が、シトシンまたはウラシルのいずれかである場合、有用である。前記ターゲッティングオリゴマーにおいて、可変部分にグアニンを使用することにより、ウラシルとの塩基対（Ｃ／Ｕ：Ｇ塩基対と呼ばれる）に対するグアニンの周知の能力が、利用され得る。これらの位置にグアニンを包含することにより、単一のオリゴマーが、幅広い範囲のＲＮＡ標的可変性を、効果的に標的とし得る。   The oligomer may include guanine base instead of adenine when the target nucleotide is a uracil residue. This is useful when the target sequence varies across different virus species and the mutation at any given nucleotide residue is either cytosine or uracil. By using guanine as a variable part in the targeting oligomer, the known ability of guanine to base pair with uracil (referred to as C / U: G base pair) can be utilized. By including guanine at these positions, a single oligomer can effectively target a wide range of RNA target variability.

前記化合物（例えば、オリゴマー、サブユニット間リンケージ、末端基）には、種々の異性体、例えば、構造異性体（例えば、互換異性体）が存在してもよい。立体異性体に関しては、前記化合物は、キラル中心を有してもよく、ラセミ化合物、鏡像異性体的に濃縮された混合物、個々の鏡像体、ジアステレオマーの混合物または個々のジアステレオマーとして存在してもよい。全てのこのような異性体は、それらの混合物を含めて、本発明内に含まれる。前記化合物は、アトロプ異性体をもたらし得る軸性キラリティーを有してもよい。さらに、前記化合物における一部の結晶形は、多形体として存在してもよく、前記多形体は、本発明に含まれる。さらに、一部の化合物は、水との溶媒和物、または、他の有機溶媒和物を形成してもよい。このような溶媒和物は、同様に、本発明のスコープ内に含まれる。   Various isomers, for example, structural isomers (for example, compatible isomers) may exist in the compound (for example, oligomer, intersubunit linkage, terminal group). With regard to stereoisomers, said compounds may have a chiral center and exist as racemates, enantiomerically enriched mixtures, individual enantiomers, mixtures of diastereomers or individual diastereomers You may All such isomers, as well as mixtures thereof, are included within the present invention. The compounds may have axial chirality that can result in atropisomers. Furthermore, some of the crystalline forms of the compound may exist as polymorphs, which are included in the present invention. In addition, some compounds may form solvates with water or other organic solvates. Such solvates are likewise included within the scope of the present invention.

本願明細書に記載の前記オリゴマーは、タンパク質の産生またはウイルスの複製を阻害する方法に使用されてもよい。したがって、一実施形態では、このようなタンパク質をコードする核酸は、本願明細書に開示のオリゴマーに曝される。前述の更なる実施形態では、前記アンチセンスオリゴマーは、本願明細書に開示のように、５’もしくは３’修飾末端基のいずれか、またはそれらの組み合わせを含み、前記塩基対部分Ｂは、前記タンパク質の産生を阻害するのに効果的な位置における前記核酸の部分に対して、ハイブリダイズするのに効果的な配列を形成する。一実施形態では、前記位置は、ｍＲＮＡのＡＴＧ開始コドン領域、プレ−ｍＲＮＡのスプライス部位、または、以下に記載するウイルスの標的配列である。   The oligomers described herein may be used in methods of inhibiting protein production or viral replication. Thus, in one embodiment, nucleic acids encoding such proteins are exposed to the oligomers disclosed herein. In further embodiments of the foregoing, the antisense oligomer comprises any of the 5 'or 3' modified end groups, or combinations thereof, as disclosed herein, and wherein the base pair moiety B is An effective sequence for hybridizing is formed to the portion of the nucleic acid at a position effective to inhibit protein production. In one embodiment, the position is the ATG start codon region of mRNA, a splice site of pre-mRNA, or the target sequence of a virus described below.

一実施形態では、前記オリゴマーは、前記標的配列への結合に対して、約５０℃より高いＴｍを有し、哺乳類の細胞または細菌の細胞により取り込まれる。もう１つの実施形態では、前記オリゴマーは、本願明細書に記載のように、輸送部分、例えば、アルギニンリッチペプチドにコンジュゲートされて、このような取り込みを促進し得る。もう１つの実施形態では、本願明細書に記載の前記末端修飾は、輸送部分として機能して、哺乳類および／または細菌の細胞による取り込みを促進し得る。 In one embodiment, the oligomer has a T m greater than about 50 ° C. for binding to the target sequence, and is taken up by mammalian cells or bacterial cells. In another embodiment, the oligomer may be conjugated to a transport moiety, eg, an arginine rich peptide as described herein, to facilitate such uptake. In another embodiment, the terminal modification described herein may function as a transport moiety to facilitate mammalian and / or bacterial cellular uptake.

モルホリノオリゴマーの調製および特性は、以下により詳細に記載され、および、米国特許第５，１８５，４４４号明細書および国際公開第２００９／０６４４７１号に記載されており、それらの全体は参照に本願明細書に取り込まれる。   The preparation and properties of morpholino oligomers are described in more detail below and in US Pat. No. 5,185,444 and WO 2009/064441, which are hereby incorporated by reference in their entirety. Included in the book.

Ｄ．コンジュゲートの配合および投与
本開示は、前記開示されたコンジュゲートの配合および送達も提供する。したがって、一実施形態では、本開示は、本願明細書に開示のペプチド−オリゴマーコンジュゲートと、薬学的許容され得る媒体とを含む組成物に関する。 D. Formulation and Administration of Conjugates The present disclosure also provides the formulation and delivery of the above disclosed conjugates. Thus, in one embodiment, the present disclosure relates to a composition comprising a peptide-oligomer conjugate as disclosed herein and a pharmaceutically acceptable medium.

前記標的核酸に対する前記コンジュゲートの効果的な送達は、処置の重要な態様である。アンチセンスオリゴマー送達の経路としては、制限されず、経口および非経口の経路、例えば、静脈、皮下、腹腔内および筋肉内を含む種々の全身経路、ならびに吸入、経皮的送達および局所送達があげられる。適切な経路は、処置下の被験体の症状に適合するように、当業者により決定され得る。例えば、皮膚のウイルス感染の処置におけるアンチセンスオリゴマーの送達に適した経路は、局所送達である。一方、ウイルスの呼吸器感染の処置用のアンチセンスオリゴマーの送達は、吸入による。前記オリゴマーは、ウイルス感染部位に直接送達されてもよいし、または、血流に送達されてもよい。   Effective delivery of the conjugate to the target nucleic acid is an important aspect of treatment. Routes of antisense oligomer delivery include, but are not limited to, oral and parenteral routes, various systemic routes including intravenous, subcutaneous, intraperitoneal and intramuscular, and inhalation, transdermal and topical delivery. Be The appropriate route can be determined by one skilled in the art to be compatible with the condition of the subject under treatment. For example, a suitable route for delivery of antisense oligomers in the treatment of viral infections of the skin is local delivery. On the other hand, delivery of antisense oligomers for the treatment of respiratory infections of the virus is by inhalation. The oligomers may be delivered directly to the site of viral infection or may be delivered to the bloodstream.

前記コンジュゲートは、生理学的および／または薬学的に許容され得る、任意の便利な媒体において投与されてもよい。このような組成物は、当業者により使用される、任意の各種の標準的な薬学的に許容され得るキャリアを含んでもよい。例えば、制限されず、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、水、水性エタノール、エマルジョン、例えば、油／水エマルジョンまたはトリグリセリドエマルジョン、錠剤およびカプセルがあげられる。適切な生理学的に許容され得るキャリアの選択は、選択される投与方式に応じて変更されるであろう。   The conjugate may be administered in any convenient medium that is physiologically and / or pharmaceutically acceptable. Such compositions may comprise any of a variety of standard pharmaceutically acceptable carriers used by those skilled in the art. For example, without limitation, saline, phosphate buffered saline (PBS), water, aqueous ethanol, emulsions such as oil / water emulsions or triglyceride emulsions, tablets and capsules can be mentioned. The choice of appropriate physiologically acceptable carrier will vary depending on the mode of administration chosen.

本発明の化合物（例えば、コンジュゲート）は、一般的に、遊離酸または遊離塩基として使用され得る。または、本発明の化合物は、酸または塩基付加塩の状態で使用され得る。本発明の遊離アミノ化合物の酸付加塩は、当該分野における周知の方法により調製され、有機および無機の酸から形成され得る。適切な有機酸としては、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデル酸、桂皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グリコール酸、グルタミン酸およびベンゼンスルホン酸があげられる。適切な無機酸としては、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸および硝酸があげられる。塩基付加塩は、カルボン酸アニオンと形成するそれらの塩を含み、有機および無機のカチオン、例えば、アルカリ金属およびアルカリ土類金属（例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、バリウムおよびカルシウム）ならびに、アンモニウムイオンならびに、それらの置換誘導体（例えば、ジベンジルアンモニウム、ベンジルアンモニウム、２−ヒドロキシエチルアンモニウム等）から選択されるものと形成される塩を含む。このため、構造（Ｉ）の「薬学的に許容され得る塩」の用語は、任意および全ての許容され得る塩形態を包含することを意図する。   Compounds of the invention (eg, conjugates) can generally be used as the free acid or free base. Alternatively, the compounds of the present invention may be used in the form of acid or base addition salts. Acid addition salts of the free amino compounds of the invention are prepared by methods well known in the art and may be formed from organic and inorganic acids. Suitable organic acids include maleic acid, fumaric acid, benzoic acid, ascorbic acid, succinic acid, methanesulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, oxalic acid, propionic acid, tartaric acid, salicylic acid, citric acid, gluconic acid, lactic acid, Mandelic acid, cinnamic acid, aspartic acid, stearic acid, palmitic acid, glycolic acid, glutamic acid and benzenesulfonic acid can be mentioned. Suitable inorganic acids include hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid and nitric acid. Base addition salts include those salts that form with the carboxylate anion, organic and inorganic cations, such as alkali metals and alkaline earth metals (eg, lithium, sodium, potassium, magnesium, barium and calcium) and ammonium Ions as well as salts formed with those selected from their substituted derivatives (e.g. dibenzyl ammonium, benzyl ammonium, 2-hydroxyethyl ammonium etc). Thus, the term "pharmaceutically acceptable salt" of structure (I) is intended to encompass any and all acceptable salt forms.

さらに、プロドラッグも、本発明の文脈内に含まれる。プロドラッグは、このようなプロドラッグが患者に投与された際、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて構造（Ｉ）の化合物を放出する、任意に共有結合されたキャリアである。プロドラッグは、一般的に、ルーチン操作により、または、ｉｎ ｖｉｖｏのいずれかで、前記修飾が開裂されて、親化合物を生じるような方法において、官能基を修飾することにより調製される。プロドラッグとしては、例えば、患者に投与され、開裂して、ヒドロキシ、アミンまたはスルフヒドリルの基を形成する場合、ヒドロキシ、アミンまたはスルフヒドリルの基が任意の基に結合される、本発明の化合物があげられる。したがって、典型的なプロドラッグとしては、（制限されず）構造（Ｉ）の化合物におけるアルコールおよびアミン官能基の酢酸塩、ギ酸塩および安息香酸塩誘導体があげられる。さらに、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）の場合、エステル、例えば、メチルエステル、エチルエステル等が使用され得る。   Furthermore, prodrugs are also included within the context of the present invention. Prodrugs are optionally covalently bonded carriers that release a compound of structure (I) in vivo when such prodrugs are administered to a patient. Prodrugs are generally prepared either by routine manipulation or in vivo by modifying functional groups in such a way that the modifications are cleaved to yield the parent compound. Prodrugs include, for example, compounds of the present invention in which a hydroxy, amine or sulfhydryl group is bound to any group when it is administered to a patient and cleaved to form a hydroxy, amine or sulfhydryl group. Be Thus, typical prodrugs include (but are not limited to) acetate, formate and benzoate derivatives of alcohol and amine functional groups in compounds of structure (I). Furthermore, in the case of carboxylic acids (-COOH), esters such as methyl esters, ethyl esters etc. may be used.

一部の例では、細胞内への前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの取り込みを促進するために、リポソームが使用され得る（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｓ．Ａ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １０（１２）：１９８０−１９８９，１９９６；Ｌａｐｐａｌａｉｎｅｎら、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２３：１１９，１９９４；Ｕｈｌｍａｎｎら、ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ａ ｎｅｗ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｖｏｌｕｍｅ ９０，Ｎｏ．４，ｐａｇｅｓ ５４４−５８４，１９９０；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．，Ｃｈａｐｔｅｒ １４，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｐｐ．２８７−３４１，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９７９を参照のこと）。例えば、国際公開第９３／０１２８６号に記載のように、アンチセンスオリゴマー投与用の媒体として、ヒドロゲルが使用されてもよい。または、前記オリゴヌクレオチドは、マイクロスフェアまたはマイクロ粒子で投与されてもよい（例えば、Ｗｕ，Ｇ．Ｙ．ａｎｄ Ｗｕ，Ｃ．Ｈ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２，１９８７を参照のこと）。または、米国特許第６，２４５，７４７号明細書に記載のように、アンチセンスオリゴマーと複合されたガス充填マイクロバブルの使用が、標的組織への送達を向上し得る。持続放出性の組成物も使用され得る。これらは、成形した物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態における、半透過性ポリマーマトリクスを含んでもよい。   In some cases, liposomes may be used to facilitate uptake of the antisense oligonucleotide into cells (eg, Williams, SA, Leukemia 10 (12): 1980-1989, 1996; Lappalainen et al, Antiviral Res. 23: 119, 1994; Uhlmann et al, anti-antisense oligonucleotides: a new therapeutic principles, Chemical Reviews, Volume 90, No. 4, pages 544-584, 1990; Gregoriadis, G., Chapter 14, Liposomes, Drug Carriers in Biology and Medicine, pp. 28 -341, see Academic Press, 1979). Hydrogels may be used as a vehicle for antisense oligomer administration, as described, for example, in WO 93/01286. Alternatively, the oligonucleotide may be administered in microspheres or microparticles (see, for example, Wu, G.Y. and Wu, C.H., J. Biol. Chem. 262: 4429-4432, 1987. ). Alternatively, as described in US Pat. No. 6,245,747, the use of gas-filled microbubbles complexed with antisense oligomers can improve delivery to target tissues. Sustained release compositions may also be used. These may comprise semipermeable polymer matrices in the form of shaped articles, eg films or microcapsules.

一実施形態では、アンチセンス阻害は、特定のウイルスの複製を阻害するのに効果的なアンチセンス剤とウイルスに感染した細胞とを接触させることにより、ウイルスによる宿主動物における感染を処置するのに効果的である。前記アンチセンス剤は、適切な薬学的なキャリアで、所定のウイルスに感染した哺乳類の被験体、例えば、ヒトまたは家畜に投与される。前記アンチセンスオリゴヌクレオチドは、宿主におけるＲＮＡウイルスの増殖を阻害することが、考慮される。前記宿主の正常な成長または発達に対する有害作用がほとんどないか、または、前記有害作用がない状態で、前記ＲＮＡウイルスは、数が減少され、または、除去される。   In one embodiment, antisense inhibition is used to treat an infection in a host animal with a virus by contacting the virus-infected cells with an antisense agent effective to inhibit replication of the particular virus. It is effective. The antisense agent is administered to a mammalian subject, eg, human or livestock, infected with a predetermined virus, with a suitable pharmaceutical carrier. The antisense oligonucleotides are considered to inhibit the growth of RNA viruses in the host. With little or no adverse effect on the normal growth or development of the host, the RNA virus is reduced in number or eliminated.

前記方法の一態様では、前記被験体は、ヒトの被験体、例えば、局所または全身性のウイルス感染を有すると診断された患者である。患者の症状、例えば、（１）免疫不全である；（２）やけど患者である；（３）留置カテーテルを有する、または（４）外科手術を受けるもしくは最近受けた患者の場合も、本発明のアンチセンスオリゴマーの予防的投与に影響する。好ましい一実施形態では、前記オリゴマーは、薬学的に許容され得るキャリアに含まれるホスホロジアミダートモルホリノオリゴマーであり、経口的に送達される。もう１つの好ましい実施形態では、前記オリゴマーは、薬学的に許容され得るキャリアに含まれるホスホロジアミダートモルホリノオリゴマーであり、静脈に送達される（ｉ．ｖ．）。   In one aspect of the method, the subject is a human subject, eg, a patient diagnosed as having a local or systemic viral infection. The patient's condition, such as (1) immunodeficiency; (2) burn patient; (3) having an indwelling catheter, or (4) also for patients who have or recently received surgery Affects the prophylactic administration of antisense oligomers. In a preferred embodiment, the oligomer is a phosphorodiamidate morpholino oligomer comprised in a pharmaceutically acceptable carrier and delivered orally. In another preferred embodiment, the oligomer is a phosphorodiamidate morpholino oligomer comprised in a pharmaceutically acceptable carrier and delivered intravenously (iv).

本発明の別の用途では、前記被験体は、家畜動物、例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ、ウシまたはヤギ等である。前記処置は、予防または治療のいずれかである。本発明は、治療量以下の量の上記種類の抗ウイルス性アンチセンス化合物を補った穀類を含む、家畜および家禽の飼料組成物も含む。治療量以下のレベルの抗ウイルス剤を補った穀類で家畜および家禽を飼育する方法において、穀類が、前述のように、治療量以下の量の抗ウイルス性オリゴヌクレオチド組成物で補われる、改善も考慮される。   In another application of the invention, said subject is a domestic animal, such as a chicken, turkey, pig, cow or goat. The treatment is either prophylactic or therapeutic. The invention also includes livestock and poultry feed compositions comprising cereals supplemented with a subtherapeutic amount of an antiviral antisense compound of the type described above. In a method of rearing livestock and poultry with cereals supplemented with subtherapeutic levels of antiviral agent, cereals are also supplemented with subtherapeutic amounts of antiviral oligonucleotide compositions, as described above. Will be considered.

一実施形態では、前記コンジュゲートは、少なくとも２００〜４００ｎＭのアンチセンスオリゴマーのピーク血中濃度をもたらすのに効果的な量および方法で投与される。典型的に、アンチセンスオリゴマーの１回以上の投与が、一般的に、約１から２週間の期間に、一定間隔で投与される。経口投与についての好ましい投与量は、７０ｋｇあたりに、約１〜１０００ｍｇのオリゴマーである。一部の場合には、１０００ｍｇオリゴマー／患者より多い投与量が必要となる場合がある。ｉ．ｖ．投与に関して、好ましい投与量は、７０ｋｇあたりに、約０．５ｍｇから１０００ｍｇのオリゴマーである。前記コンジュゲートは、例えば、２週間以内の短い期間に毎日一定間隔で投与されてもよい。ただし、一部の場合には、前記コンジュゲートは、長期間にわたって断続的に投与される。投与は、抗生物質の投与または他の治療的処置に続けられてもよいし、または、併用されてもよい。処置計画は、処置下における被験体の免疫学的アッセイ、他の生化学試験および生理学的実験の結果に基づいて、適応があれば、（投与量、頻度、経路等を）調節され得る。   In one embodiment, the conjugate is administered in an amount and in an amount effective to provide peak blood concentrations of the antisense oligomer of at least 200-400 nM. Typically, one or more doses of the antisense oligomer are generally administered at regular intervals, for a period of about 1 to 2 weeks. The preferred dosage for oral administration is about 1 to 1000 mg of oligomer per 70 kg. In some cases, higher doses than 1000 mg oligomer / patient may be required. i. v. For administration, the preferred dosage is about 0.5 mg to 1000 mg of oligomer per 70 kg. The conjugate may be administered at regular intervals every day, for example, within a short period of two weeks. However, in some cases, the conjugate is administered intermittently over an extended period of time. Administration may be continued or in combination with administration of an antibiotic or other therapeutic treatment. The treatment regimen may be adjusted (dose, frequency, route, etc.), as indicated, based on the results of the subject's immunological assays, other biochemical tests and physiological experiments under treatment.

本発明のコンジュゲートを使用するｉｎ ｖｉｖｏでの処置計画における有効性は、投与の継続期間、投与量、頻度および経路ならびに、処置下における被験体の症状に基づいて、変動し得る（すなわち、予防投与対、局所または全身性感染に対する投与）。したがって、このようなｉｎ ｖｉｖｏの治療は、最適な治療結果を達成するために、多くの場合、処置下において、特定の種類のウイルス感染に適した試験によりモニタリングし、投与量または処置計画における対応する調節をする必要があるであろう。処置は、例えば、疾病および／または感染の一般的な指針、例えば、完全血球算定（ＣＢＣ）、核酸検出法、免疫診断試験、ウイルス培養またはヘテロ二本鎖検出によりモニターされてもよい。   Efficacy in in vivo treatment regimens using the conjugates of the invention may vary based on duration of administration, dose, frequency and route, and symptoms of the subject under treatment (ie, prophylaxis) Administration vs. administration for local or systemic infections). Thus, such in vivo therapies are often monitored by tests suitable for the particular type of viral infection, in response to doses or treatment regimens, to achieve optimal therapeutic outcome. You will need to make adjustments. Treatment may be monitored, for example, by general guidance of the disease and / or infection, such as complete blood count (CBC), nucleic acid detection, immunodiagnostic tests, virus culture or heteroduplex detection.

ｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与された本発明の抗ウイルスコンジュゲートの、１種類以上のＲＮＡウイルスの増殖を阻害または除去することにおける有効性は、前記アンチセンスオリゴマーの投与前、投与中および投与後に被験体から採取した、生物学的サンプル（組織、血液、尿等）から決定され得る。このようなサンプルのアッセイはとしては、（１）当業者に公知の手法、例えば、電気泳動ゲル移動度アッセイを使用し、標的および非標的配列とのヘテロ二本鎖形成の有無をモニターすること；（２）標準的な技術、例えば、ＥＬＩＳＡまたはウェスタンブロッティングにより測定する場合の、ウイルスタンパク質産生量をモニターすること、または（３）例えば、スペアマン−カーバー法により、ウイルス力価における効果を測定すること（例えば、Ｐａｒｉ，Ｇ．Ｓ．ら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ３９（５）：１１５７−１１６１，１９９５；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｐ．ら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ４０（９）：２００４−２０１１，１９９６，Ｃｏｔｔｒａｌ，Ｇ．Ｅ．（ｅｄ）ｉｎ：Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｐｐ．６０−９３，１９７８を参照のこと）があげられる。   The efficacy of the antiviral conjugates of the invention administered in vivo in inhibiting or eliminating the growth of one or more RNA viruses is determined by the subject prior to, during and after administration of said antisense oligomer It can be determined from biological samples (tissue, blood, urine, etc.) collected. Such samples may be assayed as follows: (1) monitor the presence or absence of heteroduplex formation with target and non-target sequences using techniques known to those skilled in the art, for example, electrophoresis gel mobility assays (2) monitor the amount of viral protein production as measured by standard techniques, eg ELISA or Western blotting, or (3) measure the effect on virus titer, eg by the Spearman-Carver method (E.g., Pari, GS et al., Antimicrob. Agents and Chemotherapy 39 (5): 1157-1161, 1995; Anderson, K. P. et al., Antimicrob. Agents and Chemotherapy 40 (9): 2004-201. , 1996, Cottral, G.E (ed) in:. Manual of Standard Methods for Veterinary Microbiology, see pp.60-93,1978), and the like.

Ｅ．コンジュゲートの調製
前記モルホリノサブユニット、前記修飾サブユニット間リンケージおよび、それらを含むオリゴマーは、実施例ならびに、その全体が参照により本願明細書に取り込まれる、米国特許第５，１８５，４４４および７，９４３，７６２号明細書に記載のように、調製され得る。前記モルホリノサブユニットは、下記の一般的な反応スキームＩに基づいて調製され得る。 E. Preparation of Conjugates The morpholino subunits, the linkages between the modified subunits, and the oligomers comprising them are described in the examples and in the US, in US Pat. Nos. 5,185,444 and 7, which are incorporated herein by reference in their entirety. It can be prepared as described in U.S. Patent No. 943,762. The morpholino subunit can be prepared based on the general reaction scheme I below.

反応スキーム１．モルホリノサブユニットの調製
Reaction scheme 1. Preparation of morpholino subunit

反応スキーム１を参照して、Ｂは、塩基対部分を表わし、ＰＧは、保護基を表わす。前記モルホリノサブユニットは、対応するリボヌクレオシド（１）から、示されるように調製され得る。前記モルホリノサブユニット（２）は、場合により、適切な保護基前駆体、例えば、塩化トリチルとの反応により保護されてもよい。３’保護基は、一般的に、以下により詳細に記載されるように、固相オリゴマー合成中に除去される。塩基対合部分（ｐｏｉｅｔｙ）は、固相オリゴマー合成の間に、適切に保護され得る。適切な保護基としては、アデニンおよびシトシンについてはベンゾイル、グアニンについてはフェニルアセチル、ヒポキサンチン（Ｉ）についてはピバロイルオキシメチルがあげられる。前記ピバロイルオキシメチル基は、ヒポキサンチン複素環塩基のＮ１位上に導入され得る。保護されていないヒポキサンチンサブユニットが使用されてもよいが、前記塩基が保護された場合、活性化反応における収率が、はるかに優れている。他の適切な保護基としては、その全体が参照により本願明細書に取り込まれる、同時係属の米国特許出願特願１２／２７１，０４０号に開示されたものがあげられる。   Referring to Reaction Scheme 1, B represents a base pair moiety and PG represents a protecting group. The morpholino subunit may be prepared as shown from the corresponding ribonucleoside (1). The morpholino subunit (2) may optionally be protected by reaction with a suitable protecting group precursor, such as trityl chloride. The 3 'protecting group is generally removed during solid phase oligomer synthesis as described in more detail below. Base pairing moieties (poiesies) can be suitably protected during solid phase oligomer synthesis. Suitable protecting groups include benzoyl for adenine and cytosine, phenylacetyl for guanine and pivaloyloxymethyl for hypoxanthine (I). The pivaloyloxymethyl group may be introduced onto the N1 position of the hypoxanthine heterocyclic base. Unprotected hypoxanthine subunits may be used, but when the base is protected, the yield in the activation reaction is much better. Other suitable protecting groups include those disclosed in co-pending US patent application Ser. No. 12 / 271,040, which is incorporated herein by reference in its entirety.

３と活性化リン化合物４との反応は、所望のリンケージ部分（５）を有するモルホリノサブユニットをもたらす。構造４の化合物は、当業者に公知の任意数の方法を使用して調製され得る。例えば、このような化合物は、対応するアミンとオキシ塩化リンとの反応により調製され得る。この点で、前記アミン開始材料は、当該分野において公知の任意の方法、例えば、実施例および、米国特許第７，９４３，７６２号明細書に記載された方法を使用して調製され得る。上記スキームは、（Ｂ）型（例えば、Ｘが−ＮＲ８Ｒ９である）リンケージの調製を示すが、（Ａ）型リンケージ（例えば、Ｘが、ジメチルアミンである）が、類似の方法で調製され得る。 Reaction of 3 with activated phosphorus compound 4 results in morpholino subunits with the desired linkage moiety (5). Compounds of structure 4 can be prepared using any number of methods known to those skilled in the art. For example, such compounds may be prepared by the reaction of the corresponding amine with phosphorous oxychloride. In this regard, the amine starting material may be prepared using any method known in the art, for example, the methods described in the Examples and US Pat. No. 7,943,762. The above scheme shows the preparation of linkages of type (B) (eg, X is -NR 8 R 9 ), but linkages of type (A) (eg, X is dimethylamine) are similar It can be prepared.

構造５の化合物は、前記サブユニット間リンケージを含むオリゴマーの調製についての、固相自動化オリゴマー合成に使用され得る。このような方法は、当該分野において周知である。つまり、構造５の化合物は、固体支持体に対するリンカーを含むように、５’端で修飾され得る。例えば、化合物５は、Ｌ１および／またはＲ１９を含むリンカーにより、固体支持体に結合され得る。典型的な方法は、図３および４に示される。このようにして、前記オリゴは、オリゴマー合成が完了し、前記オリゴマーが前記固体支持体から切断された後に、５’末端修飾を含み得る。支持される時点で、５の保護基（例えば、トリチル）は除去され、結合していないアミンが、構造５の第２の化合物における活性化リン部分と反応される。所望の長さのオリゴが得られるまで、この順序が繰り返される。５’末端における前記保護基は、除去されてもよいし、５’修飾が必要であれば残してもよい。前記オリゴは、任意数の方法、または、前記固体支持体に対する前記リンケージを切断するための塩基との実施例の処理を使用して、前記固体支持体から除去され得る。 Compounds of structure 5 may be used in solid phase automated oligomer synthesis for the preparation of oligomers comprising said intersubunit linkage. Such methods are well known in the art. That is, compounds of structure 5 may be modified at the 5 'end to include a linker to a solid support. For example, compound 5 can be attached to a solid support by a linker comprising L 1 and / or R 19 . Exemplary methods are shown in FIGS. 3 and 4. In this way, the oligo may contain a 5 'end modification after oligomer synthesis is complete and the oligomer is cleaved from the solid support. When supported, the 5 protecting group (eg, trityl) is removed and the unbound amine is reacted with the activated phosphorus moiety in the second compound of structure 5. This sequence is repeated until the desired length of oligo is obtained. The protecting group at the 5 'end may be removed or may be left if 5' modification is required. The oligos can be removed from the solid support using any number of methods or treatment of the example with a base to cleave the linkage to the solid support.

ペプチドオリゴマーコンジュゲートは、（当該分野において公知の標準的なペプチド合成法に基づいて調製された）所望のペプチドと、結合していないＮＨ（例えば、モルホリノオリゴマーの３’ＮＨ）を含むオリゴマーとを、適切な活性化試薬（例えば、ＨＡＴＵ）の存在下において結合することにより、調製され得る。コンジュゲートは、当該分野において公知の多数の技術、例えば、ＳＣＸクロマトグラフィーを使用して、精製され得る。   Peptide-oligomeric conjugates comprise the desired peptide (prepared on the basis of standard peptide synthesis methods known in the art) and an oligomer comprising unconjugated NH (e.g. 3 'NH of the morpholino oligomer) Can be prepared by conjugation in the presence of a suitable activating reagent such as HATU. Conjugates can be purified using a number of techniques known in the art, such as SCX chromatography.

修飾モルホリノサブユニットおよびペプチドオリゴマーコンジュゲートの調製は、実施例により詳細に記載されている。任意数の修飾リンケージを含む前記ペプチドオリゴマーコンジュゲートは、本願明細書に記載の方法、当該分野において公知の方法および／または本願明細書での参考文献に記載される方法を使用して、調製され得る。実施例に記載されたものは、以前に記載された（例えば、国際公開第２００８０３６１２７号を参照のこと）のと同様に、調製されたＰＭＯ＋モルホリノオリゴマーの全体的な修飾である。   The preparation of modified morpholino subunits and peptide oligomer conjugates is described in more detail in the Examples. Said peptide oligomer conjugates comprising any number of modified linkages may be prepared using the methods described herein, methods known in the art and / or described in the references herein. obtain. What has been described in the examples is an overall modification of the prepared PMO + morpholino oligomers, as has been described previously (see, for example, WO2008036127).

Ｆ．オリゴマーのアンチセンス活性
本開示は、タンパク質の産生を阻害する方法も提供する。前記方法は、前記タンパク質をコードする核酸を、本願明細書に開示のペプチド−オリゴマーコンジュゲートに曝す工程を含む。したがって、一実施形態では、このようなタンパク質をコードする核酸は、本願明細書に開示のように、コンジュゲートに曝される。前記塩基対合部分Ｐｉが、前記タンパク質の産生を阻害するのに効果的な位置において、前記核酸の一部にハイブリダイズするのに効果的な配列を形成する。前記オリゴマーは、例えば、ｍＲＮＡのＡＴＧ開始コドン領域、プレ−ｍＲＮＡのスプライス部位、または、以下に記載するウイルスの標的配列を標的としてもよい。 F. Oligomeric Antisense Activity The present disclosure also provides methods of inhibiting protein production. The method comprises the steps of exposing the nucleic acid encoding the protein to a peptide-oligomer conjugate as disclosed herein. Thus, in one embodiment, a nucleic acid encoding such a protein is exposed to a conjugate as disclosed herein. The base pairing moiety Pi forms a sequence effective to hybridize to a portion of the nucleic acid at a position effective to inhibit production of the protein. The oligomer may target, for example, the ATG start codon region of mRNA, the splice site of pre-mRNA, or the target sequence of the virus described below.

もう１つの実施形態では、本開示は、モルホリノサブユニットの配列を有し、サブユニット間リンケージにより結合され、塩基対合部分を支持する、オリゴヌクレオチド類似体を含む、ペプチドオリゴマーコンジュゲートのアンチセンス活性を向上する方法を提供する。前記方法は、本願明細書に記載のキャリアペプチドを、前記オリゴヌクレオチドにコンジュゲートする工程を含む。   In another embodiment, the present disclosure is an antisense of a peptide oligomer conjugate comprising an oligonucleotide analogue having the sequence of morpholino subunits, linked by intersubunit linkage, and supporting a base pairing moiety Provide a way to improve activity. The method comprises the step of conjugating a carrier peptide as described herein to the oligonucleotide.

一部の実施形態では、アンチセンス活性の向上は、
（ｉ）前記アンチセンスオリゴマーのその標的配列への結合が、前記コードされるタンパク質用の翻訳開始コドンを妨害するのに効果的な場合に、対応する非修飾のオリゴマーにより提供されたそれと比較して、コードされたタンパク質の発現における減少、または、
（ｉｉ）前記アンチセンスオリゴマーのその標的配列への結合が、正確にスプライシングされた、前記タンパク質をコードするプレ−ｍＲＮＡにおける異常なスプライス部位を妨害するのに効果的な場合に、対応する非修飾のオリゴマーにより提供されたそれと比較して、コードされたタンパク質の発現における増加により証明され得る。これらの効果の測定に適したアッセイは、以下にさらに記載される。一実施形態では、修飾は、無細胞翻訳アッセイ、細胞培養におけるスプライス修正翻訳アッセイ、または、本願明細書に記載の機能性動物モデル系のスプライス修正ゲインにおいて、この活性を提供する。一実施形態では、活性は、少なくとも２つ、少なくとも５つまたは少なくとも１０個の因子により向上される。 In some embodiments, the improvement in antisense activity is
(I) when the binding of the antisense oligomer to its target sequence is effective to interfere with the translation initiation codon for the encoded protein, as compared to that provided by the corresponding unmodified oligomer Decrease in the expression of the encoded protein, or
(Ii) the corresponding unmodified if binding of the antisense oligomer to its target sequence is effective to prevent correctly spliced splice sites in the correctly encoded pre-mRNA encoding the protein This can be evidenced by the increase in expression of the encoded protein as compared to that provided by the oligomers of. Assays suitable for measuring these effects are further described below. In one embodiment, the modification provides this activity in a cell-free translation assay, a splice correction translation assay in cell culture, or a splice correction gain of a functional animal model system as described herein. In one embodiment, the activity is enhanced by at least two, at least five or at least ten factors.

本発明のコンジュゲートについての、抗ウイルス用途、神経筋疾患の処置、細菌感染、炎症および多発性嚢胞腎を含む、種々の典型的な用途が、以下に記載される。この記載は、決して本発明を限定することを意味しておらず、本願明細書に記載のコンジュゲートを使用して解決され得る、ヒトおよび動物の疾患症状の範囲を例示するのに役立つものである。   Various exemplary applications, including antiviral applications, treatment of neuromuscular diseases, bacterial infections, inflammation and polycystic kidneys, for the conjugates of the invention are described below. This description is not meant to limit the invention in any way, but serve to illustrate the range of human and animal disease symptoms that can be solved using the conjugates described herein. is there.

Ｇ．コンジュゲートの典型的な治療的使用
前記キャリアペプチドにコンジュゲートされた前記オリゴマーは、良好な有効性と低い毒性とを含み、このため、他のオリゴマーまたはペプチド−オリゴマーコンジュゲートで得られるよりも、良好な治療的手段をもたらす。下記の記載は、制限されず、前記コンジュゲートの典型的な治療的使用の例を提供する。 G. Typical Therapeutic Uses of Conjugates The oligomers conjugated to the carrier peptide contain good efficacy and low toxicity, so that they can be obtained rather than obtained with other oligomers or peptide-oligomer conjugates. Provides a good therapeutic measure. The following description is not limiting and provides an example of typical therapeutic use of the conjugate.

１．ｓｓＲＮＡウイルスのステム−ループ２次構造のターゲッティグ
典型的なアンチセンス抗ウイルス化合物の一分類は、１２−４０個のサブユニットの配列を有し、標的ウイルスのポジティブセンスＲＮＡ鎖の５’末端の４０塩基内における、ステム−ループ２次構造に関連する領域に相補的な配列を標的とする、本願明細書に記載のモルホリノオリゴマーである（例えば、参照により本願明細書に取り込まれる、国際公開第２００６／０３３９３３号または米国特許出願公開第２００６０２６９９１１および２００５００９６２９１号明細書を参照こと）。 1. Targeting of stem-loop secondary structure of ssRNA virus A class of typical antisense antiviral compounds has a sequence of 12-40 subunits and is at the 5 'end of the positive-sense RNA strand of the target virus It is a morpholino oligomer as described herein that targets a sequence complementary to a region related to the stem-loop secondary structure within 40 bases (e.g., incorporated herein by reference). See, for example, 2006/033933 or U.S. Patent Application Publication Nos. 20060269911 and 20050096291).

前記方法は、まず、配列が内部ステム−ループ２次構造を形成可能な、感染ウイルスにおけるポジティブ鎖の５’末端の４０塩基内の領域を、ウイルスの標的配列として同定する工程を含む。次いで、内部二本鎖構造を形成可能なウイルス−ゲノム領域に相補的な、少なくとも１２個のサブユニットのターゲッティング配列を有するモルホリノオリゴマーが、段階的な固相合成により構築される。前記オリゴマーは、前記ウイルスのポジティブセンス鎖と前記オリゴヌクレオチド化合物とから構成され、Ｔｍが少なくとも４５℃の乖離、このようなステム−ループ構造の分解により特徴付けられる、ウイルス標的配列についてのヘテロ二本鎖構造を形成可能である。前記オリゴマーは、本願明細書に記載のキャリアペプチドにコンジュゲートされる。   The method comprises the steps of first identifying a region within 40 bases of the 5 'end of the positive strand in the infectious virus, wherein the sequence is capable of forming an internal stem-loop secondary structure, as the target sequence of the virus. Then, morpholino oligomers having targeting sequences of at least 12 subunits complementary to the virus-genome region capable of forming an internal double-stranded structure are constructed by stepwise solid phase synthesis. The oligomer is composed of a positive sense strand of the virus and the oligonucleotide compound, and has a Tm of at least 45 ° C., characterized by the degradation of such stem-loop structure, a heteroduplex for the viral target sequence It is possible to form a chain structure. The oligomer is conjugated to a carrier peptide as described herein.

前記標的配列は、５’末端配列、例えば、５’末端の４０塩基を、入力ＲＮＡ配列の最少自由エネルギー状態についての調査に基づく、２次構造予測を実行可能なコンピュータプログラムにより分析することにより特定され得る。   The target sequence is identified by analyzing the 5 'end sequence, for example, 40 bases at the 5' end, by a computer program that can execute secondary structure prediction based on the search for the minimum free energy state of the input RNA sequence. It can be done.

関連する態様では、前記コンジュゲートは、一本鎖のポジティブ−センスゲノムを有し、フラビウイルス、ピコルナウイルス、カリシウイルス、トガウイルス、アルテリウイルス、コロナウイルス、アストロウイルスまたはヘペウイルスの科の１つから選択される、感染ＲＮＡウイルスの複製を、哺乳類の宿主細胞において阻害する方法に使用され得る。前記方法は、感染した宿主細胞に、ウイルス阻害量の本願明細書に記載の、内部ステム−ループ２次構造を形成可能な、ポジティブ鎖ウイルスゲノムの５’末端の４０塩基内の領域に相補的な、少なくとも１２個のサブユニットのターゲッティング配列を有するコンジュゲートを投与する工程を含む。前記コンジュゲートは、（ｉ）前記ウイルスのポジティブセンス鎖と前記オリゴヌクレオチド化合物とから構成され、（ｉｉ）Ｔｍが少なくとも４５℃の乖離および、このようなステム−ループ２次構造の分解により特徴付けられる、ヘテロ二本鎖構造を形成するために、前記宿主細胞に投与された場合、効果的である。前記コンジュゲートは、前記ウイルスに感染した、または、前記ウイルスによる感染リスクがある哺乳類の被験体に投与され得る。   In a related aspect, said conjugate has a single-stranded positive-sense genome and is one of the family Flavivirus, Picornavirus, Calicivirus, Togavirus, Arterivirus, Coronavirus, Astrovirus or Hepevirus The method can be used in a method of inhibiting replication of an infectious RNA virus selected from among mammalian host cells. The method is complementary to a region within 40 bases of the 5 'end of the positive strand virus genome capable of forming an internal stem-loop secondary structure, as described herein, in a virus inhibiting amount to infected host cells. Administering a conjugate having a targeting sequence of at least 12 subunits. The conjugate is characterized by (i) consisting of the positive sense strand of the virus and the oligonucleotide compound, and (ii) Tm of at least 45 ° C. dissociation and degradation of such stem-loop secondary structure Are effective when administered to the host cell to form a heteroduplex structure. The conjugate may be administered to a mammalian subject infected with or at risk for infection with the virus.

デング熱ウイルスおよび日本脳炎ウイルスの末端ステムループ構造を標的とする典型的なターゲッティング配列は、配列番号１および２として、以下にそれぞれ列記される。   Exemplary targeting sequences that target the terminal stem-loop structure of Dengue fever virus and Japanese encephalitis virus are listed below as SEQ ID NOS: 1 and 2, respectively.

ｓｓＲＮＡウイルスの末端ステムループ構造を標的とする、更なる典型的なターゲッティング配列が、参照により本願明細書に取り込まれる、米国特許出願特願１１／８０１，８８５号および国際公開第２００８／０３６１２７号にも見出され得る。   In U.S. patent application Ser. No. 11 / 801,885 and WO 2008/036127, additional exemplary targeting sequences targeting the terminal stem loop structure of ssRNA virus are incorporated herein by reference. It can also be found.

２．ｓｓＲＮＡウイルスの第１のオープンリーディングフレームのターゲッティング
典型的なコンジュゲートの第２分類は、一本鎖で、１２ｋｂ未満のポジティブセンスゲノムおよび、多機能性タンパク質を含むポリタンパク質をコードする、第１のオープンリーディングフレームを有する、ピコルナウイルス、カリシウイルス、トガウイルス、コロナウイルスおよびフラビウイルスの科のウイルスについての増殖の阻害における使用についてである。特定の実施形態では、前記ウイルスは、コロナウイルス科または、フラビウイルスの科由来の西ナイルウイルス、黄熱病ウイルスまたはデング熱ウイルス由来のＲＮＡウイルスである。前記阻害性コンジュゲートは、本願明細書に記載の、前記ウイルスゲノムの第１のオープンリーディングフレームのＡＵＧ開始部位に及ぶ、ウイルス標的配列に対して実質的に相補的なターゲッティング塩基配列を有する、アンチセンスオリゴマーを含む。前記方法の一実施形態では、前記コンジュゲートは、前記ウイルスに感染した哺乳類の被験体に投与される。例えば、参照により本願明細書に取り込まれる、国際公開第２００５／００７８０５号および米国特許出願公開第２００３２２４３５３号明細書を参照のこと。 2. Targeting of the first open reading frame of the ssRNA virus A second class of typical conjugates is single stranded, a positive sense genome less than 12 kb and a polyprotein encoding a multifunctional protein, the first For use in the inhibition of growth for viruses of the Picornavirus, Calicivirus, Togavirus, Coronavirus and Flavivirus families, which have an open reading frame. In a particular embodiment, the virus is a RNA virus from West Nile virus, Yellow fever virus or Dengue fever virus from the family Coronavirus or Flaviviridae. The inhibitory conjugate has an anti-targeting sequence substantially complementary to a viral target sequence, which spans the AUG start site of the first open reading frame of the viral genome as described herein. Contains sense oligomers. In one embodiment of the method, the conjugate is administered to a mammalian subject infected with the virus. See, for example, WO 2005/007805 and U.S. Patent Application Publication No. 2003224353, which are incorporated herein by reference.

好ましい標的配列は、前記ウイルスゲノムの第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ１）のＡＵＧ開始部位に及ぶ領域である。前記第１のＯＲＦは、一般的に、非構造タンパク質、例えば、ポリメラーゼ、ヘリカーゼおよびプロテアーゼを含むポリタンパク質をコードする。「ＡＵＧ開始部位に及ぶ」は、前記標的配列が、一方の側のＡＵＧ開始部位上の少なくとも３つの塩基、および、他のものの少なくとも２つの塩基（合計で少なくとも８つの塩基）を含むことを意味する。好ましくは、前記標的配列が、両側の前記開始部位上の少なくとも４つの塩基（合計で少なくとも１１個の塩基）を含む。   A preferred target sequence is the region spanning the AUG start site of the first open reading frame (ORF1) of the viral genome. The first ORF generally encodes a polyprotein comprising nonstructural proteins, such as polymerases, helicases and proteases. “AUG start site covers” means that the target sequence contains at least 3 bases on the AUG start site on one side and at least 2 bases of the other (at least 8 bases in total) Do. Preferably, the target sequence comprises at least 4 bases on both sides of the start site (at least 11 bases in total).

より一般的には、好ましい標的部位は、各種ウイルス単離株間に保存される標的を含む。他の好ましい部位としては、ＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）、トランス活性化タンパク質結合部位および複製開始部位があげられる。複数の不必要な遺伝子を提供し得る複合体および大きなウイルスゲノムは、ウイルス侵入およびウイルスの存在に対する宿主応答用にコードする宿主細胞遺伝子を標的とすることより、効果的に標的にされ得る。   More generally, preferred target sites include targets that are conserved among various virus isolates. Other preferred sites include the IRES (internal ribosome entry site), transactivation protein binding site and replication initiation site. Complexes and large viral genomes that can provide multiple unnecessary genes can be effectively targeted by targeting host cell genes that encode for host response to viral entry and the presence of virus.

各種のウイルス−ゲノム配列は、周知の供給元、例えば、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｂａｎｋデータベースから入手できる。ＯＲＦ１のＡＵＧ開始部位は、前記遺伝子データベースまたは参考文献によっても特定され得る。または、ＯＲＦ１のＡＵＧ開始部位は、予測されたＯＲＦ１開始部位の領域において、ＡＵＧコドンについての配列をスキャンすることにより見出され得る。   Various virus-genome sequences are available from well-known sources, such as the NCBI Genbank database. The AUG start site of ORF1 can also be identified by the gene database or reference. Alternatively, the AUG start site of ORF1 can be found by scanning the sequence for the AUG codon in the region of the predicted ORF1 start site.

４種類のウイルス科それぞれについての、全体的なゲノム機構は、以下の通りであり、続けて、各科内で選択されたメンバー（属、種または株）についての典型的な標的配列を得た。   The overall genomic organization for each of the four virus families is as follows, followed by typical target sequences for selected members (genus, species or strains) within each family .

３．インフルエンザウイルスのターゲッティング
典型的なコンジュゲートの第３の分類は、オルソミクソウイルス科のウイルスの増殖阻害、および、ウイルス感染の処置に使用される。一実施形態では、前記宿主細胞は、本願明細書に記載のコンジュゲートに接触される。例えば、前記コンジュゲートは、下記：１）ネガティブセンスウイルスＲＮＡ断片の５’末端または３’末端の２５塩基；２）ポジティブセンスｃＲＮＡの５’末端または３’末端の末端２５塩基；３）インフルエンザウイルスのｍＲＮＡにおけるＡＵＧ開始コドン付近の４５塩基；４）選択的スプライシングの影響を受けるインフルエンザｍＲＮＡのスプライスドナーまたはアクセプター部位付近の５０塩基から選択される標的領域にハイブリダイズするのに効果的な塩基配列を含む（例えば、参照により本願明細書に取り込まれる、国際公開第２００６／０４７６８３号；米国特許出願公開第２００７０００４６６１号明細書；ならびに、国際特許出願特願第２０１０／０５６６１３号および米国特許出願特願第１２／９４５，０８１号を参照のこと）。 3. Influenza Virus Targeting A third class of exemplary conjugates is used for growth inhibition of Orthomyxoviridae viruses and treatment of viral infections. In one embodiment, the host cell is contacted with a conjugate as described herein. For example, the conjugate comprises: 1) 25 bases at the 5 'or 3' end of the negative sense viral RNA fragment; 2) 25 bases at the 5 'or 3' end of the positive sense cRNA; 3) influenza virus A base sequence effective to hybridize to a target region selected from the 45 bases near the AUG start codon in mRNA of 4; 4) the splice donor or acceptor site of influenza mRNA affected by alternative splicing (E.g., WO 2006/047683; U.S. Patent Application Publication No. 20070004661; incorporated by reference herein); and International Patent Application No. 2010/056613 and U.S. Patent Application No. Japanese Patent Application No. See 12 / 945,081 ).

この点で、典型的なコンジュゲートとしては、配列番号３を含むオリゴマーを含むコンジュゲートがあげられる。
＊＊３’−ベンズヒドリル；＊＋リンケージは、ＰＭＯプラスリンケージでアシル化されたトリメチルグリシンである；ＰＭＯｍは、３−窒素部位にメチル基を有するＴ塩基を表わす。 In this regard, exemplary conjugates include those comprising an oligomer comprising SEQ ID NO: 3.
** 3'-Benzhydryl; * + linkage is trimethyloglycine acylated with PMO plus linkage; PMOm stands for T base with methyl group at the 3-nitrogen site.

前記コンジュゲートは、哺乳類におけるインフルエンザウイルス感染の処置に、特に有用である。前記コンジュゲートは、前記インフルエンザウイルスに感染した、または、前記インフルエンザウイルスによる感染リスクがある哺乳類の被験体に投与され得る。   The conjugates are particularly useful for the treatment of influenza virus infection in mammals. The conjugate may be administered to a mammalian subject infected with or at risk of infection with the influenza virus.

４．ピコルナウイルス科のウイルスのターゲッティング
典型的なコンジュゲートの第４の分類は、ピコルナウイルス科のウイルスの増殖阻害、および、ウイルス感染の処置に使用される。前記コンジュゲートは、哺乳類におけるエンテロウイルスおよび／またはライノウイルス感染の処置に、特に有用である。この実施形態では、前記コンジュゲートは、ウイルスの５’非翻訳領域における３２個の保存されたヌクレオチド領域の２つのうちのどちらか内に、ウイルスＲＮＡ配列に関連する領域に相補的な、ターゲッティング配列を有する少なくとも１２個のサブユニットを含む、１２〜４０個のサブユニットの配列を有するモルホリノオリゴマーを含む（例えば、参照により本願明細書に取り込まれる、国際公開第２００７／０３０５７６および２００７／０３０６９１号または、同時係属および共所有の米国特許出願特願第１１／５１８，０５８および１１／５１７，７５７号を参照のこと）。典型的なターゲッティング配列は、以下の配列番号６に列記される。 4. Targeting of Picornaviridae Viruses A fourth class of exemplary conjugates is used to inhibit the growth of Picornaviridae viruses and to treat viral infections. The conjugates are particularly useful for the treatment of enterovirus and / or rhinovirus infections in mammals. In this embodiment, the conjugate is a targeting sequence that is complementary to a region related to viral RNA sequences within either of two of the 32 conserved nucleotide regions in the 5 'untranslated region of the virus. Comprising a morpholino oligomer having a sequence of 12 to 40 subunits comprising at least 12 subunits having (for example, WO 2007/030576 and 2007/030691 or incorporated herein by reference) Co-pending and co-owned U.S. Patent Application Nos. 11 / 518,058 and 11 / 517,757). An exemplary targeting sequence is listed in SEQ ID NO: 6 below.

５．フラビウイルス科のウイルスのターゲッティング
典型的なコンジュゲートの第５の分類は、動物細胞におけるフラビウイルスの複製阻害に使用される。この分類の典型的なコンジュゲートは、長さ８〜４０個の間のヌクレオチド塩基で、ポジティブ鎖フラビウイルスＲＮＡの、少なくとも５’環化配列（５’−ＣＳ）または３’−ＣＳ配列の一部を含む、ウイルスのポジティブ鎖ＲＮＡゲノムの領域に相補的な少なくとも８個の塩基の配列を有するモルホリノオリゴマーを含む。非常に好ましい標的は、前記３’−ＣＳであり、デング熱ウイルス用の典型的なターゲッティング配列は、以下の配列番号７に列記される（例えば、参照により本願明細書に取り込まれる、国際公開第２００５／０３０８００号、または、同時係属および共所有の米国特許出願特願第１０／９１３，９９６号を参照のこと）。 5. Targeting Flaviviridae Viruses A fifth class of exemplary conjugates is used to inhibit the replication of flaviviruses in animal cells. A typical conjugate of this class is between 8 and 40 nucleotide bases in length and at least one of the 5 'circularization sequence (5'-CS) or 3'-CS sequences of positive strand flavivirus RNA. And morpholino oligomers having a sequence of at least 8 bases complementary to a region of the positive strand RNA genome of the virus, including sections. A highly preferred target is said 3'-CS and a typical targeting sequence for dengue virus is listed in SEQ ID NO: 7 below (e.g. / 030 800 or co-pending and co-owned US patent application Ser. No. 10 / 913,996).

６．ニドウイルス科のウイルスのターゲッティング
典型的なコンジュゲートの第６の分類は、ウイルス感染した動物細胞におけるニドウイルスの複製阻害に使用される。この分類の典型的なコンジュゲートは、８〜２５個の間のヌクレオチド塩基を含み、ポジティブ鎖ウイルスゲノムの５’リーダー部位、および、ネガティブ鎖の３’サブゲノム領域における、転写調整配列（ＴＲＳ）間での塩基対合を妨害可能な配列を有するモルホリノオリゴマーを含む（例えば、参照により本願明細書に取り込まれる、国際公開第２００５／０６５２６８号または米国出願公開第２００７００３７７６３号明細書を参照のこと）。 6. Targeting of Nidovirus Family Viruses A sixth class of exemplary conjugates is used to inhibit replication of nidovirus in virus-infected animal cells. A typical conjugate of this class contains between 8 and 25 nucleotide bases, between the 5 'leader site of the positive strand virus genome and the transcription regulatory sequence (TRS) in the 3' subgenomic region of the negative strand. And morpholino oligomers having sequences capable of interfering with base pairing at (see, for example, WO 2005/065268 or US Patent Application No. 20070037763 which is incorporated herein by reference).

７．フィロウイルスのターゲッティング
別の実施形態では、本願明細書に記載の１つ以上のコンジュゲートは、エボラウイルスまたはマールブルクウイルスの宿主細胞内での複製を、前記細胞を、本願明細書に記載のコンジュゲート、例えば、以下にさらに記載するように、ポジティブ鎖ｍＲＮＡのＡＵＧ開始部位領域内における、少なくとも１２個連続した塩基から構成される標的配列に相補的な、ターゲッティング塩基配列を有するコンジュゲートと接触させることにより、阻害する方法に使用され得る。 7. Targeting of Filoviruses In another embodiment, one or more of the conjugates described herein replicates Ebola virus or Marburg virus in a host cell, the cells described in a conjugate described herein. Contact with a gate, eg, a conjugate having a targeting sequence complementary to a target sequence comprised of at least 12 consecutive bases within the AUG start site region of the positive strand mRNA, as described further below Can be used in methods of inhibition.

フィロウイルスのウイルスゲノムは、セグメント化されておらず、アンチセンス方向における一本鎖ＲＮＡの、おおよそ１９，０００塩基である。前記ゲノムは、ｖＲＮＡに相補的なモノシストロン性のｍＲＮＡから、７つのタンパク質をコードする。   The phylovirus viral genome is not segmented and is approximately 19,000 bases of single stranded RNA in the antisense orientation. The genome encodes seven proteins from monocistronic mRNAs complementary to vRNA.

標的配列は、選択されたエボラウイルスのタンパク質のＡＵＧ開始コドンのすぐ下流（２５塩基以内）もしくは上流（１００塩基以内）または、マイナス鎖ウイルスＲＮＡの３’末端における３０個の塩基に及ぶか、または、同下流もしくは上流または前記塩基である、ポジティブ鎖（センス）ＲＮＡ配列である。好ましいタンパク質の標的は、ウイルスのポリメラーゼサブユニットＶＰ３５およびＶＰ２４であるが、Ｌ、核タンパク質ＮＰおよびＶＰ３０も考慮される。これらの中でも、最初のタンパク質が好ましく、例えば、ＶＰ３５が後者の発現されたＬポリメラーゼに対して好ましい。   The target sequence may extend immediately downstream (within 25 bases) or upstream (within 100 bases) of the AUG start codon of the selected Ebola virus protein, or 30 bases at the 3 'end of the minus strand viral RNA, or , The same downstream or upstream or said bases, positive strand (sense) RNA sequences. Preferred protein targets are the viral polymerase subunits VP35 and VP24, but L, nuclear proteins NP and VP30 are also considered. Among these, the first protein is preferred, for example, VP35 is preferred for the latter expressed L polymerase.

別の実施形態では、本願明細書に記載の１つ以上のコンジュゲートは、エボラウイルスまたはマールブルクウイルスの宿主細胞内での複製を、前記細胞を、フィロウイルスのｍＲＮＡ配列におけるポジティブ鎖ｍＲＮＡのＡＵＧ開始部位領域内における、少なくとも１２個連続した塩基から構成される標的配列に相補的な、ターゲッティング塩基配列を有する、本願明細書に記載のコンジュゲートと接触させることにより、阻害する方法に使用され得る（例えば、参照により本願明細書に取り込まれる、国際公開第２００６／０５０４１４号または米国特許第７，５２４，８２９および７，５０７，１９６号明細書、ならびに、米国特許出願特願第１２／４０２，４５５；１２／４０２，４６１；１２／４０２，４６４；および１２／８５３，１８０号による継続出願を参照のこと）。   In another embodiment, one or more of the conjugates described herein replicates the Ebola virus or Marburg virus in a host cell, and the cells contain the positive strand mRNA AUG in the mRNA sequence of the phylovirus. It can be used in methods of inhibition by contacting with a conjugate described herein having a targeting base sequence that is complementary to a target sequence consisting of at least 12 consecutive bases within the start site region (E.g., WO 2006/050414 or U.S. Patent Nos. 7,524,829 and 7,507,196, which are incorporated herein by reference, and U.S. Patent Application No. 12/402, 455; 12/402, 461; 12/402, 464; and 12/853. See pending application by 180 No.).

８．アレナウイルスのターゲッティング
別の実施形態では、本願明細書に記載のコンジュゲートは、アレナウイルス科における種による哺乳類細胞におけるウイルス感染を阻害するための方法に使用され得る。一態様では、前記コンジュゲートは、前記ウイルスに感染した哺乳類の被験体を処置するのに使用され得る（例えば、参照により本願明細書に取り込まれる、国際公開第２００７／１０３５２９号または米国特許第７，５８２，６１５号明細書を参照のこと）。 8. Targeting of Arenaviruses In another embodiment, the conjugates described herein can be used in methods to inhibit viral infection in mammalian cells by species in the Arenaviridae. In one aspect, the conjugate may be used to treat a mammalian subject infected with the virus (e.g., WO 2007/103529 or U.S. Patent No. 7, incorporated herein by reference). , 582, 615)).

表５は、その旧世界または新世界のアレナウイルス分類によりまとめられた場合の、本発明のコンジュゲートにより標的とされた標的ウイルスの典型的な一覧表である。
Table 5 is a typical listing of target viruses targeted by the conjugates of the invention, as summarized by the Old World or New World Arenavirus classification.

アレナウイルスのゲノムは、Ｓ（小型）およびＬ（大型）と指定された、２本の一本鎖ＲＮＡセグメントからなる。ビリオンにおいて、Ｌ−セグメントＲＮＡに対するＳ−セグメントＲＮＡのモル比は、おおよそ２：１である。完全なＳ−セグメントＲＮＡ配列は、複数のアレナウイルスについて決定され、３，３６６から３，５３５個のヌクレオチドの範囲である。完全なＬ−セグメントＲＮＡ配列も、複数のアレナウイルスについて決定され、７，１０２から７，２７９個のヌクレオチドの範囲である。ＳおよびＬのＲＮＡセグメントにおける３’末端配列は、最後の１９個のうちの１７個のヌクレオチドで同一である。これらの末端配列は、全ての既知のアレナウイルスの中で保存されている。各ゲノムＲＮＡの始めにおける５’末端の１９または２０個のヌクレオチドは、それぞれ対応する３’端と不十分に相補的である。この相補性のために、３’末端および５’末端は、塩基対と考えられ、パンハンドル構造を形成する。   The genome of the arenavirus consists of two single-stranded RNA segments designated S (small) and L (large). In virions, the molar ratio of S-segment RNA to L-segment RNA is approximately 2: 1. The complete S-segment RNA sequence is determined for multiple Arenaviruses and ranges from 3,366 to 3,535 nucleotides. The complete L-segment RNA sequence is also determined for multiple arenaviruses, ranging from 7,102 to 7,279 nucleotides. The 3 'end sequences in the S and L RNA segments are identical at 17 of the last 19 nucleotides. These terminal sequences are conserved among all known Arenaviruses. The 19 or 20 nucleotides at the 5 'end at the beginning of each genomic RNA are each poorly complementary to the corresponding 3' end. Because of this complementarity, the 3'and 5'ends are considered base pairs to form a panhandle structure.

アンチゲノムの、ウイルス−相補的ＲＮＡ（ｖｃＲＮＡ）鎖を形成するための、感染ビリオンまたはウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）の複製が、感染細胞で起こる。ｖＲＮＡおよびｖｃＲＮＡの両方が、相補的なｍＲＮＡをコードする。したがって、アレナウイルスは、ネガティブセンスＲＮＡウイルスまたはポジティブセンスＲＮＡウイルスよりもむしろ、アンビセンスＲＮＡウイルスとして分類される。ウイルス遺伝子のアンビセンス配向は、Ｌ−セグメントおよびＳ−セグメントの両方である。前記ＮＰおよびポリメラーゼ遺伝子は、ＳおよびＬのｖＲＮＡセグメントにおける３’端に、それぞれ存在し、従来のネガティブンセンスにおいてコードされる（すなわち、それらは、ｖＲＮＡまたはゲノム相補的なｍＲＮＡの転写を通して発現される）。ＳおよびＬのｖＲＮＡセグメントの５’端に位置する遺伝子である、ＧＰＣおよびＺはそれぞれ、ｍＲＮＡセンスにおいてコードされるが、ゲノムｖＲＮＡから直接翻訳される証拠がない。これらの遺伝子は、アンチゲノム由来のゲノム−センスｍＲＮＡ（すなわち、ｖｃＲＮＡ）の転写を通してよりも、複製中間体として機能するゲノムｖＲＮＡの全長相補的複製により発現される。   Replication of infected virions or viral RNA (vRNA) to form an antigenome, virus-complementary RNA (vcRNA) strand occurs in infected cells. Both vRNA and vcRNA encode complementary mRNAs. Thus, arenaviruses are classified as ambisense RNA viruses, rather than negative sense RNA viruses or positive sense RNA viruses. The ambisense orientation of the viral gene is both an L-segment and an S-segment. The NP and polymerase genes are present at the 3 'end of the S and L vRNA segments, respectively, and are encoded in conventional negative sense (ie, they are expressed through transcription of vRNA or genomic complement mRNAs) ). GPC and Z, genes located at the 5 'end of the S and L vRNA segments, respectively, are encoded in the mRNA sense, but have no evidence of direct translation from genomic vRNA. These genes are expressed by full-length complementary replication of genomic vRNAs that function as replication intermediates, rather than through transcription of genome-sense mRNAs (ie, vcRNAs) from antigenomes.

アレナウイルス科のウイルス用の典型的なターゲッティング配列は、以下の配列番号８に列記される。   An exemplary targeting sequence for arenaviridae viruses is listed in SEQ ID NO: 8 below.

９．呼吸器合胞体ウイルスのターゲッティング
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、幼児における最も重要な唯一の呼吸器病原体である。ＲＳＶ起因性下呼吸器症状、例えば、細気管支炎および肺炎は、多くの場合、一歳未満の子供における入院を必要とする。心肺の疾患を有する子供および未熟児は、特に、この感染から重篤な障害を経験しがちである。ＲＳＶ感染は、高齢者および危険性の高い成人において、重要な病気でもある。ＲＳＶ感染は、高齢者におけるウイルス性肺炎の、２番目に最も一般的に特定される原因である（Ｆａｌｓｅｙ，Ｈｅｎｎｅｓｓｅｙら、２００５）。世界保健機関は、ＲＳＶが、毎年世界中で６４００万人の臨床感染および１６万人の死者の原因となっていると推定している。現在、ＲＳＶ感染を予防するワクチンは、利用できるものがない。ＲＳＶの生物学、疫学、病態生理学および宿主免疫反応の我々の理解における多くの主要な進歩は、数十年前から存在するが、ＲＳＶに感染した幼児および子供の最適な管理に関する議論がかなり続けられている。リバビリンは、ＲＳＶ感染を処置するための、唯一認可された抗ウイルス剤であるが、その使用は、危険性の高いまたは重篤な幼児に限定されている。リバビリンの有用性は、そのコスト、利用可能な有効性、耐性ウイルス発生の傾向（Ｍａｒｑｕａｒｄｔ １９９５；Ｐｒｉｎｃｅ ２００１）によって制限されてきた。更なる有効な抗ＲＳＶ剤についての現在の必要性が、十分認識されている。 9. Targeting of Respiratory Syncytial Virus Respiratory syncytial virus (RSV) is the single most important respiratory pathogen in infants. RSV-induced lower respiratory symptoms such as bronchiolitis and pneumonia often require hospitalization in children younger than one year. Children with cardiopulmonary disease and premature infants, in particular, tend to experience severe damage from this infection. RSV infection is also an important disease in the elderly and high-risk adults. RSV infection is the second most commonly identified cause of viral pneumonia in the elderly (Falsey, Hennessey et al., 2005). The World Health Organization estimates that RSV is responsible for 64 million clinical infections and 160,000 deaths worldwide each year. Currently, no vaccine is available to prevent RSV infection. Although many major advances in our understanding of RSV biology, epidemiology, pathophysiology and host immune responses have existed for decades, there has been considerable debate about optimal management of RSV-infected infants and children It is done. Although ribavirin is the only approved antiviral agent to treat RSV infection, its use is limited to high-risk or severe infants. The usefulness of ribavirin has been limited by its cost, available availability, and the tendency of resistant virus development (Marquardt 1995; Prince 2001). The current need for further effective anti-RSV agents is well recognized.

ペプチドがコンジュゲートしたＰＭＯ（ＰＰＭＯ）が、組織培養およびｉｎ ｖｉｖｏでの動物モデル系の両方において、ＲＳＶ阻害に有効であり得ることが知られている（Ｌａｉ，Ｓｔｅｉｎら、２００８）。ＲＳＶ Ｌ ｍＲＮＡの５’末端領域および翻訳開始部位領域を含む配列を標的にするために設計された、２種類のアンチセンスＰＰＭＯが、２種類のヒト気道細胞株の培養において、抗ＲＳＶ活性について試験された。それらのうちの１つ（ＳＲＶ−ＡＵＧ−２；配列番号１０）は、ウイルス力価を＞２．０ｌｏｇ１０まで低下させた。ＲＳＶ接種前でのＲＳＶ−ＡＵＧ−２ ＰＰＭＯによる、ＢＡＬＢ／ｃマウスの鼻腔内（ｉ．ｎ．）処置により、感染後（ｐ．ｉ．）５日での肺組織において、ウイルス力価を１．２ｌｏｇ１０に低下させ、および、感染後７日での肺炎症を軽減した。これらのデータは、ＲＳＶ−ＡＵＧ−２が、潜在的な治療用途についての候補として更なる研究に値する強力な抗ＲＳＶ活性を提供したことを示した（Ｌａｉ，Ｓｔｅｉｎら、２００８）。前述のように、ＲＳＶ−ＡＵＧ−２ ＰＰＭＯによる成功にも関わらず、以前のペプチドコンジュゲートに関する毒性を解決するために、本願明細書に開示のコンジュゲートを使用することが望まれる。このため、本発明の別の実施形態では、本願明細書に記載の１つ以上のコンジュゲートは、ＲＳＶの宿主細胞内での複製を、前記細胞を本願明細書に記載のコンジュゲート、例えば、以下にさらに記載するように、ＲＳＶ由来のｍＲＮＡのＡＵＧ開始部位領域内に、少なくとも１２個連続した塩基で構成される、標的配列に相補的なターゲッティング塩基配列を有するコンジュゲートと接触させることにより、阻害する方法に使用され得る。 It is known that peptide conjugated PMO (PPMO) may be effective for RSV inhibition in both tissue culture and in vivo animal model systems (Lai, Stein et al., 2008). Two antisense PPMOs, designed to target sequences containing the 5 'end region and translation initiation site region of RSV L mRNA, tested for anti-RSV activity in cultures of two human airway cell lines It was done. One of them (SRV-AUG-2; SEQ ID NO: 10), the virus titer> was reduced to 2.0 log 10. Intranasal (i.n.) treatment of BALB / c mice with RSV-AUG-2 PPMO prior to RSV vaccination results in a virus titer of 1 in lung tissue at 5 days post infection (pi) Reduced to 2 log 10 and reduced lung inflammation at 7 days post infection. These data indicated that RSV-AUG-2 provided potent anti-RSV activity worthy of further study as a candidate for potential therapeutic applications (Lai, Stein et al., 2008). As mentioned above, despite the success with RSV-AUG-2 PPMO, it is desirable to use the conjugates disclosed herein to resolve the toxicity associated with previous peptide conjugates. Thus, in another embodiment of the present invention, one or more of the conjugates described herein can be used to replicate RSV in a host cell, such as a conjugate described herein, eg, As described further below, by contacting with a conjugate having a targeting sequence complementary to the target sequence comprised of at least 12 consecutive bases within the AUG start site region of the RSV derived mRNA: It can be used in methods of inhibition.

ＲＳＶのＬ遺伝子は、ウイルスＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ複合体の重要な成分をコードする。ＲＳＶ Ｌ遺伝子ｍＲＮＡのＡＵＧ翻訳開始部位コドンに及ぶ配列に対して、ＲＳＶ−ＡＵＧ−２ ＰＰＭＯの状態で設計されたアンチセンスＰＰＭＯは、Ｌ ｍＲＮＡの５’末端からそのコード配列における１３ｎｔに存在する「遺伝子開始」配列（ＧＳ）由来の配列に相補的である。したがって、好ましいＬ遺伝子ターゲッティング配列は、以下の表６において、配列番号９として示されるＬ遺伝子ｍＲＮＡの、５’端から３’方向に伸長する４０個の塩基からの任意の１２個連続した塩基、または、Ｌ遺伝子コード配列内の２２個の塩基に相補的である。典型的なＲＳＶ Ｌ遺伝子ターゲッティング配列は、以下の表６において、配列番号１０〜１４として列記される。本願明細書に記載の本発明のサブユニット間修飾のいずれかが、前記オリゴマーに包含されて、向上されたアンチセンス活性、改善された細胞内送達および／または改善された治療活性についての組織特異性を提供し得る。本発明のサブユニット間リンケージを含む典型的なオリゴマー配列は、以下の表６に列記される。
The L gene of RSV encodes an important component of the viral RNA-dependent RNA polymerase complex. Antisense PPMO designed in the state of RSV-AUG-2 PPMO is present from the 5 'end of L mRNA to 13 nt in its coding sequence relative to the sequence extending to the AUG translation initiation site codon of RSV L gene mRNA It is complementary to the sequence from the "gene start" sequence (GS). Therefore, a preferred L gene targeting sequence is any 12 consecutive bases from 40 bases extending in the 3 'direction from the 5' end of the L gene mRNA shown as SEQ ID NO: 9 in Table 6 below. Alternatively, it is complementary to 22 bases in the L gene coding sequence. Exemplary RSV L gene targeting sequences are listed as SEQ ID NOS: 10-14 in Table 6 below. Any of the inter-subunit modifications of the invention described herein is included in the oligomer to provide tissue specificity for improved antisense activity, improved intracellular delivery and / or improved therapeutic activity. Can provide sex. Exemplary oligomeric sequences comprising the intersubunit linkages of the invention are listed in Table 6 below.

１０．神経筋疾患
別の実施形態では、治療的コンジュゲートが、哺乳類の被験体における神経筋疾患に関連する疾患症状の処置に使用するのに提供される。アンチセンスオリゴマー（例えば、配列番号１６）は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）についてのＭＤＸマウスモデルにおいて、活性を有することが示されてきた。一部の実施形態において使用されるリンケージを包含する典型的なオリゴマー配列は、以下の表７に列記される。一部の実施形態では、前記コンジュゲートは、
（ａ）以前に記載されたように（例えば、参照により本願明細書に取り込まれる、米国特許出願特願第１２／４９３，１４０号；および、国際公開第２００６／０８６６６７号を参照のこと）、筋肉疲労症状を処置するための、配列番号１８により特定されたヒトのミオスタチンｍＲＮＡの標的領域における、少なくとも１２個連続した塩基に相補的な塩基配列を有する、ヒトのミオスタチンを標的とするアンチセンスオリゴマー（典型的なマウスのターゲッティング配列は、配列番号１９〜２０として列記される）；および、
（ｂ）以前に記載されたように（例えば、参照により本願明細書にそれら全てが取り込まれる、国際公開第２０１０／０４８５８６および２００６／００００５７号、または、米国特許出願公開第０９／０６１９６０号明細書を参照のこと）、ＤＭＤを処置するための、ジストロフィンタンパク質の部分的な活性を回復させるために、ＤＭＤタンパク質（ジストロフィン）においてエクソンスキッピングを発生可能なアンチセンスオリゴマー、例えば、配列番号２２から３５から選択された配列を有するＰＭＯ、から選択されるオリゴマーを含む。 10. Neuromuscular Disease In another embodiment, a therapeutic conjugate is provided for use in the treatment of a disease condition associated with neuromuscular disease in a mammalian subject. Antisense oligomers (eg, SEQ ID NO: 16) have been shown to have activity in the MDX mouse model for Duchenne muscular dystrophy (DMD). Exemplary oligomer sequences, including the linkages used in some embodiments, are listed in Table 7 below. In some embodiments, the conjugate is
(A) as previously described (see, eg, US Patent Application No. 12 / 493,140; and WO 2006/086667, which are incorporated herein by reference); Antisense oligomer targeting human myostatin having a base sequence complementary to at least 12 consecutive bases in the target region of human myostatin mRNA specified by SEQ ID NO: 18 for treating muscle fatigue symptoms (Typical mouse targeting sequences are listed as SEQ ID NOs: 19-20); and
(B) WO 2010/048586 and 2006/000057, or U.S. Patent Application 09/061960 as previously described (e.g., all of which are incorporated herein by reference) ), To restore the partial activity of the dystrophin protein to treat DMD, an antisense oligomer capable of generating exon skipping in the DMD protein (dystrophin), eg from SEQ ID NO: 22 to 35 An oligomer selected from PMO, having a selected sequence.

複数の他の神経筋疾患は、本発明の修飾リンケージおよび末端基を使用して、処置され得る。脊髄性筋萎縮（ＳＭＡ）および筋強直性ジストロフィー（ＤＭ）の処置に関する典型的な化合物が、以下に記載される。   Several other neuromuscular diseases can be treated using the modified linkages and end groups of the present invention. Exemplary compounds for the treatment of spinal muscular atrophy (SMA) and myotonic dystrophy (DM) are described below.

ＳＭＡは、脊髄におけるアルファ−運動ニューロンの慢性欠損により引き起こされる、常染色体劣性疾患であり、子供および大人の両方に影響を及ぼす。残った運動ニューロン（ＳＭＮ）の低下した発現は、前記疾患の原因となる（Ｈｕａ，Ｓａｈａｓｈｉら、２０１０）。ＳＭＡを引き起こす変異は、ＳＭＮＩ遺伝子に位置するが、欠損エクソン７（デルタ７ＳＭＮ２）を形成する選択的スプライスから発現された場合、パラロガス遺伝子であるＳＭＮ２が、ＳＭＮ１欠損を補償することにより、利用可能となる。イントロン（ｉｎｔｏｎ）６、エクソン７およびイントロン７を標的とするアンチセンス化合物は全て、変異の程度を含んだエクソン７を誘導することが示された。イントロン７を標的にするアンチセンス化合物が好ましい（例えば、国際公開第２０１０／１４８２４９、２０１０／１２０８２０、２００７／００２３９０号および米国特許第７８３８６５７号明細書を参照のこと）。前記ＳＭＮ２のプレｍＲＮＡを標的にし、改善されたエクソン７含有物を誘導する、典型的なアンチセンス配列は、配列番号３６〜３８として、以下に列記される。本願明細書に記載の修飾リンケージおよび末端基を使用する、これらのオリゴマー配列の選択された修飾は、当該分野において公知のものと比較して、改善された特性を有するであろうと考慮される。さらに、ＳＭＮ２遺伝子のイントロン７を標的とし、本発明の特徴を包含する任意のオリゴマーは、エクソン７含有物を誘導し、ＳＭＡ患者に治療的利益を提供する可能性を有すると考えられる。筋強直性ジストロフィー１型（ＤＭ１）および２型（ＤＭ２）は、神経筋変性の原因となる毒性ＲＮＡの発現により引き起こされる、優性の遺伝性疾患である。ＤＭ１およびＤＭ２は、筋強直性異栄養症プロテインキナーゼ（ＤＭＰＫ）およびジンクフィンガータンパク質９（ＺＮＦ９）それぞれの、３’−ＵＴＲおよびイントロン１領域における、長いポリＣＵＧおよびポリＣＣＵＧの繰り返しに関連する（例えば、国際公開第２００８／０３６４０６号を参照のこと）。正常な個体は、３０回ものＣＴＧ繰り返しを有するが、ＤＭ１患者は、５０から１０００の範囲の多くの回数の繰り返しを有する。前記疾患の重症度と発病の年齢とは、繰り返しの数と相互に関連がある。成人発症の患者は、軽度の症候を示し、１００回未満の繰り返しを有する。若年発症のＤＭ１患者は５００回もの繰り返しを有し、先天性の場合は、通常、１０００回近くのＣＴＧ繰り返しを有する。ＣＵＧ繰り返しを含む延長された転写産物は、二次構造を形成し、核焦点の状態で核に蓄積し、ＲＮＡ結合タンパク質（ＲＮＡ−ＢＰ）を捕捉する。ｍｕｓｃｌｅｂｌｉｎｄ−ｌｉｋｅ（ＭＢＮＬ）タンパク質およびＣＵＧ結合タンパク質（ＣＵＧＢＰ）を含む、複数のＲＮＡ−ＢＰは、前記疾患に関与してきた。ＭＢＮＬタンパク質は、光受容体および筋肉分化に必要とされる、ショウジョウバエｍｕｓｃｌｅｂｌｉｎｄ（Ｍｂｌ）タンパク質と相同である。ＭＢＮＬおよびＣＵＧＢＰは、ＤＭ１、例えば、心臓トロポニンＴ（ｃＴＮＴ）、インスリン受容体（ＩＲ）および筋特異的塩化物チャネル（ＣｌＣ−１）に影響を受ける、転写産物の拮抗性スプライシング調節遺伝子として特定された。   SMA is an autosomal recessive disorder caused by chronic loss of alpha-motor neurons in the spinal cord and affects both children and adults. Reduced expression of the remaining motor neurons (SMN) is responsible for the disease (Hua, Sahashi et al., 2010). The mutation that causes SMA is located in the SMNI gene, but when expressed from an alternative splice that forms defective exon 7 (delta 7 SMN 2), the paralogous gene SMN 2 is available by compensating for the SMN 1 deficiency. Become. Antisense compounds targeting intron 6, exon 7 and intron 7 were all shown to induce exon 7, which contained the degree of mutation. Antisense compounds which target intron 7 are preferred (see, eg, WO 2010/148249, 2010/120820, 2007/002390 and US Pat. No. 7,838,657). Exemplary antisense sequences that target the SMN2 pre-mRNA and induce improved exon 7 content are listed below as SEQ ID NOs: 36-38. It is contemplated that selected modifications of these oligomeric sequences using modified linkages and end groups described herein will have improved properties as compared to those known in the art. In addition, any oligomer that targets intron 7 of the SMN2 gene and incorporates features of the invention is believed to have the potential to induce exon 7 inclusions and provide therapeutic benefit to SMA patients. Myotonic dystrophy type 1 (DM1) and type 2 (DM2) are dominantly inherited diseases caused by the expression of toxic RNA responsible for neuromuscular degeneration. DM1 and DM2 are associated with long poly-CUG and poly-CCUG repeats in the 3'-UTR and intron 1 regions of myotonic dystrophy protein kinase (DMPK) and zinc finger protein 9 (ZNF9), respectively , WO 2008/036406)). Normal individuals have as many as 30 CTG repeats, but DM1 patients have many repeats ranging from 50 to 1000. The severity of the disease and the age of onset are correlated with the number of repetitions. Adult-onset patients show mild symptoms and have less than 100 repetitions. Young-onset DM1 patients have as many as 500 repetitions, and congenital ones usually have nearly 1000 CTG repetitions. Extended transcripts containing CUG repeats form secondary structures, accumulate in the nucleus in nuclear foci, and capture RNA binding protein (RNA-BP). Several RNA-BPs have been implicated in the disease, including muscleblind-like (MBNL) protein and CUG binding protein (CUGBP). The MBNL protein is homologous to the Drosophila muscleblind (Mbl) protein, which is required for photoreceptors and muscle differentiation. MBNL and CUGGB have been identified as antagonistic splicing regulatory genes of transcripts that are affected by DM1, eg, cardiac troponin T (cTNT), insulin receptor (IR) and muscle specific chloride channel (ClC-1) The

ＤＭＰＫ遺伝子の延長された繰り返しを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＤＭ１の動物モデルにおいて、ＲＮＡ−ＢＰ隔離を置換し、筋強直症状を逆行させることは、当該分野において公知である（国際公開第２００８／０３６４０６号）。本発明の特徴を包含するオリゴマーは、ＤＭ１およびＤＭ２の患者についての、改善された活性および治療的可能性を提供するであろうことが考慮される。前述のポリＣＵＧおよびポリＣＣＵＧ繰り返しを標的とする典型的な配列は、配列番号３９−５５として、以下に列記され、その全体が本願明細書に取り込まれる米国特許出願特願１３／１０１，９４２号に、さらに記載されている。   It is known in the art that antisense oligonucleotides targeted to extended repeats of the DMPK gene replace RNA-BP sequestration and reverse myotonic symptoms in animal models of DM1 (WO 2008/036406). It is contemplated that the oligomers comprising the features of the present invention will provide improved activity and therapeutic potential for DM1 and DM2 patients. Exemplary sequences that target the aforementioned poly CUG and poly CCUG repeats are listed below as SEQ ID NOs: 39-55, US Patent Application No. 13 / 101,942, which is incorporated herein in its entirety. Is further described.

神経筋障害を処置するための本発明における更なる実施形態は、他のＤＮＡ繰り返し不安定遺伝子障害を処置するように設計されたオリゴマーを見込み、含む。これらの疾患はとしては、国際公開第２００８／０１８７９５号に記載のように、ハンチントン病、脊髄小脳失調、Ｘ連鎖性球脊髄性筋委縮症および脊髄小脳失調１０型（ＳＣＡ１０）があげられる。   Further embodiments of the invention for treating neuromuscular disorders include prospective oligomers designed to treat other DNA repeat instability gene disorders. These diseases include Huntington's disease, spinocerebellar ataxia, X-linked bulbar and spinal muscular atrophy and spinocerebellar ataxia type 10 (SCA10) as described in WO 2008/018795.





＊二量体化は、前記オリゴマーが、２つのモノマーの３’端を結合するリンケージにより二量体化されていることを示す。例えば、前記リンケージは、−ＣＯＣＨ２ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ（ＣＯＮＨ２）ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−、または、他の適切なリンケージであり得る。ＥＧ３は、トリエチレングリコールテールを意味する（例えば、実施例３０および３１におけるコンジュゲートを参照のこと）。 * Dimerization indicates that the oligomer is dimerized by the linkage that connects the 3 'ends of the two monomers. For example, the linkage, -COCH 2 CH 2 -S-CH (CONH 2) CH 2 -CO-NHCH 2 CH 2 CO-, or may be other suitable linkage. EG3 means triethylene glycol tail (see, eg, the conjugates in Examples 30 and 31).

１１．抗菌用途
別の実施形態では、本発明は、哺乳類の宿主における細菌感染を処置するのに使用するための、抗菌性アンチセンスオリゴマーを含むコンジュゲートを含む。一部の実施形態では、前記オリゴマーは、１０〜２０個の間の塩基を含み、アシルキャリアタンパク質（ａｃｐＰ）、ギラーゼＡサブユニット（ｇｙｒＡ）、ｆｔｓＺ、リボゾームタンパク質Ｓ１０（ｒｐｓＪ）、ｌｅｕＤ、ｍｇｔＣ、ｐｉｒＧ、ｐｃａＡおよびｃｍａｌ遺伝子についての、感染細菌のｍＲＮＡの標的領域に相補的な、少なくとも１０個連続した塩基のターゲッティング配列を含む。前記標的領域は、細菌性ｍＲＮＡの翻訳開始コドン、または、前記翻訳開始コドンの上流（すなわち、５’）方向または下流（すなわち、３’）方向に２０個以内の塩基である配列を含む。前記オリゴマーは、ｍＲＮＡに結合して、ヘテロ二本鎖を形成し、これにより、前記細菌の複製を阻害する。 11. Antimicrobial Use In another embodiment, the present invention includes a conjugate comprising an antimicrobial antisense oligomer for use in treating a bacterial infection in a mammalian host. In some embodiments, the oligomer comprises between 10-20 bases, an acyl carrier protein (acpP), gyrase A subunit (gyrA), ftsZ, ribosomal protein S10 (rpsJ), leuD, mgtC, For the pirG, pcaA and cmal genes, it contains targeting sequences of at least 10 contiguous bases complementary to the target region of the infected bacterial mRNA. The target region includes a translation initiation codon of a bacterial mRNA, or a sequence that is within 20 bases in the upstream (ie, 5 ') or downstream (ie, 3') direction of the translation initiation codon. The oligomers bind to mRNA to form heteroduplexes, thereby inhibiting replication of the bacteria.

１２．核ホルモン受容体の調節
別の実施形態では、本発明は、核ホルモン受容体スーパーファミリー（ＮＨＲＳＦ）由来の核ホルモン受容体（ＮＨＲ）の発現を、主に、前記受容体についてコードするプレ−ｍＲＮＡのスプライシングを制御または変更することにより、調節するための組成物および方法に関する。具体的なＮＨＲの例としては、グルココルチコイド受容体（ＧＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）およびアンドロゲン受容体（ＡＲ）があげられる。ある実施形態では、本願明細書に記載のコンジュゲートは、リガンド非依存性または他の選択された型の前記受容体の向上された発現をもたらし、その不活性型の低下された発現をもたらす。 12. Modulation of Nuclear Hormone Receptors In another embodiment, the present invention provides a pre-mRNA encoding expression of nuclear hormone receptors (NHR) from the nuclear hormone receptor superfamily (NHRSF), mainly for said receptors The present invention relates to compositions and methods for modulating by controlling or altering the splicing of Specific examples of NHRs include glucocorticoid receptor (GR), progesterone receptor (PR) and androgen receptor (AR). In certain embodiments, the conjugates described herein result in enhanced expression of the ligand independent or other selected form of the receptor, resulting in reduced expression of its inactive form.

本発明の実施形態は、オリゴマー、例えば、本願明細書に記載のＮＨＲ−ドメインの中でも、ＮＨＲＳＦプレ−ｍＲＮＡの「リガンド結合エクソン」および／または隣接するイントロンを含む、選択されたＮＨＲのエクソン配列またはイントロン配列に相補的なオリゴマーを含むコンジュゲートを含む。「リガンド結合エクソン」の用語は、野生型のｍＲＮＡに存在するが、リガンド非依存性型のｍＲＮＡを産生するために、一次転写（「プレ−ｍＲＮＡ」）から除去されるエクソンを意味する。ある実施形態では、相補性は、スプライス部位に及ぶプレ−ｍＲＮＡの配列における配列に基づき得る。前記スプライス部位は、制限されず、エクソン−イントロン結合に及ぶ配列に基づく相補性を含む。他の実施形態では、相補性は、前記イントロンの配列にのみ基づき得る。他の実施形態では、相補性は、前記エクソンの配列にのみ基づき得る（例えば、参照により本願明細書に取り込まれる米国特許出願特願１３／０４６，３５６号を参照のこと）。   Embodiments of the invention include oligomers, eg, the exon sequences of selected NHRs, including “ligand binding exons” and / or adjacent introns of NHRSF pre-mRNA, among the NHR-domains described herein. Conjugates comprising oligomers complementary to intron sequences are included. The term "ligand binding exon" refers to an exon that is present in wild type mRNA but is removed from primary transcription ("pre-mRNA") to produce ligand independent mRNA. In one embodiment, complementarity may be based on the sequence in the pre-mRNA sequence spanning the splice site. The splice sites are not limited and include complementarity based on sequences spanning exon-intron junctions. In another embodiment, complementarity may be based solely on the sequence of said intron. In other embodiments, complementarity may be based solely on the sequence of said exons (see, eg, US Patent Application No. 13 / 046,356, which is incorporated herein by reference).

ＮＨＲ修飾因子は、転写がＮＨＲにより刺激または抑制される遺伝子の発現産物に関連する疾患を含む、ＮＨＲ関連疾患を処置するのに有用であり得る。例えば、ＡＰ−１および／またはＮＦ−κＢを阻害するＮＨＲの修飾因子が、炎症および免疫の疾患および障害、例えば、特に本願明細書に記載され、当該分野において公知の、変形性関節症、関節リウマチ、多発性硬化症、ぜんそく、炎症性大腸炎、移植拒絶反応、移植片対宿主疾患の処置に有用であり得る。転写促進と拮抗する化合物は、グルココルチコイドの向上したレベルに関連する代謝疾患、例えば、特に糖尿病、骨粗しょう症および緑内障を処置するのに有用であり得る。また、転写促進を刺激する化合物は、グルココルチコイドの欠如に関連する代謝疾患、例えば、特にアジソン病を処置するのに有用であり得る。   NHR modulators may be useful for treating NHR related diseases, including diseases where transcription is related to the expression product of a gene whose transcription is stimulated or repressed by NHR. For example, modulators of NHR that inhibit AP-1 and / or NF-κB are inflammatory and immune diseases and disorders, such as osteoarthritis, joints, particularly described herein and known in the art. It may be useful in the treatment of rheumatism, multiple sclerosis, asthma, inflammatory colitis, transplant rejection, graft versus host disease. Compounds that antagonize transcriptional facilitation may be useful for treating metabolic diseases associated with improved levels of glucocorticoids such as, in particular, diabetes, osteoporosis and glaucoma. Also, compounds that stimulate transactivation may be useful for treating metabolic diseases associated with the absence of glucocorticoids, such as, in particular, Addison's disease.

本発明の実施形態は、前記キャリアタンパク質と、１つのサブユニットのモルホリノ窒素を、隣接するサブユニットの５’環外炭素に結合するリン含有サブユニット間リンケージにより結合されるモルホリノサブユニットから構成される、アンチセンスオリゴマーとを含むコンジュゲートに、細胞を接触させる工程を含む、細胞核のＮＨＲ活性または細胞における発現を調節する方法を含む。前記オリゴヌクレオチドは、１０〜４０個の間の塩基、および、標的配列に相補的な、少なくとも１０個連続した塩基のターゲッティング配列を含む。前記標的配列は、ＮＨＲのプレ−ｍＲＮＡ転写産物である。これにより、ＮＨＲの活性または発現を調節する。ある実施形態では、前記オリゴマーは、プレ−ｍＲＮＡ転写産物のスプライシングを変更し、ＮＨＲの変異体の発現を増加させる。一部の実施形態では、前記オリゴマーは、前記プレ−ｍＲＮＡ転写産物における１つ以上のエクソンの、完全または部分的なエクソンスキッピングを誘導する。ある実施形態では、前記１つ以上のエクソンは、ＮＨＲのリガンド結合ドメインの、少なくとも一部をコードし、前記変異体は、リガンド非依存性型のＮＨＲである。ある実施形態では、前記１つ以上のエクソンは、ＮＨＲの転写促進ドメインの少なくとも一部をコードし、前記変異体は、転写活性化活性を低下させる。ある実施形態では、前記１つ以上のエクソンは、ＮＨＲのＤＮＡ結合ドメインの少なくとも一部をコードする。ある実施形態では、前記１つ以上のエクソンは、ＮＨＲのＮ−末端活性化ドメインの少なくとも一部をコードする。ある実施形態では、前記１つ以上のエクソンは、ＮＨＲのカルボキシ末端ドメインの少なくとも一部をコードする。特定の実施形態では、前記変異体は、ＮＦ−κＢ、ＡＰ−１または両方に結合し、１つ以上のその炎症誘発標的遺伝子の転写を低下させる。   An embodiment of the present invention comprises the carrier protein and a morpholino subunit linked by a phosphorus-containing intersubunit linkage that links the morpholino nitrogen of one subunit to the 5 'exocyclic carbon of the adjacent subunit And a method comprising modulating cell nucleus NHR activity or cell expression comprising contacting cells with a conjugate comprising an antisense oligomer. The oligonucleotide comprises between 10 and 40 bases and a targeting sequence of at least 10 consecutive bases complementary to the target sequence. The target sequence is a pre-mRNA transcript of NHR. This modulates the activity or expression of NHR. In one embodiment, the oligomer alters the splicing of pre-mRNA transcripts and increases expression of variants of NHR. In some embodiments, the oligomer induces complete or partial exon skipping of one or more exons in the pre-mRNA transcript. In one embodiment, the one or more exons encode at least a portion of the ligand binding domain of NHR, and the variant is a ligand independent NHR. In one embodiment, the one or more exons encode at least a portion of a transcription promoting domain of NHR, and the variant reduces transcription activation activity. In one embodiment, the one or more exons encode at least a portion of the DNA binding domain of NHR. In one embodiment, the one or more exons encode at least a portion of the N-terminal activation domain of NHR. In one embodiment, the one or more exons encode at least a portion of the carboxy-terminal domain of NHR. In certain embodiments, the variant binds to NF-BB, AP-1, or both and reduces transcription of one or more of its proinflammatory target genes.

ある実施形態では、前記オリゴマーは、ＮＨＲの転写活性の転写活性を刺激する。他の実施形態では、前記オリゴマーは、ＮＨＲの転写活性の転写活性と拮抗する。ある実施形態では、前記オリゴマーは、ＮＨＲの転写抑制活性を刺激する。他の実施形態では、前記オリゴマーは、ＮＨＲの転写抑制活性と拮抗する。特定の実施形態では、前記オリゴマーは、ＮＨＲの転写活性の転写活性と拮抗し、ＮＨＲの転写抑制活性を刺激する（例えば、参照により本願明細書に取り込まれる、米国特許出願特願６１／３１３，６５２号を参照のこと）。   In one embodiment, the oligomer stimulates the transcriptional activity of the transcriptional activity of NHR. In another embodiment, the oligomer antagonizes the transcriptional activity of the transcriptional activity of NHR. In one embodiment, the oligomer stimulates the transcriptional repression activity of NHR. In another embodiment, the oligomer antagonizes the transcriptional repression activity of NHR. In certain embodiments, the oligomer antagonizes the transcriptional activity of the transcriptional activity of NHR and stimulates the transcriptional repression activity of NHR (e.g., incorporated herein by reference). See 652).

特に断らない限り、全ての化学物質を、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ−Ｆｌｕｋａから入手した。ベンゾイルアデノシン、ベンゾイルシチジンおよびフェニルアセチルグアノシンを、Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ Ｌｉｍｉｔｅｄ、ＵＫから入手した。   All chemicals were obtained from Sigma-Aldrich-Fluka unless otherwise noted. Benzoyl adenosine, benzoyl cytidine and phenylacetyl guanosine were obtained from Carbosynth Limited, UK.

ＰＭＯ、ＰＭＯ＋、ＰＰＭＯおよび、本願明細書に記載の更なるリンケージ修飾を含むＰＭＯの合成を、当該分野において公知であり、それらの全体が参照により本願明細書に組み込まれる、係属中の米国特許出願特願１２／２７１，０３６号および１２／２７１，０４０号ならびに国際公開２００９／０６４４７１号に記載の方法を使用して行った。   The synthesis of PMO, PMO +, PPMO and PMO, including further linkage modifications as described herein, is known in the art and pending US patent application, which is incorporated herein by reference in its entirety. It carried out using the method as described in Japanese Patent Application No. 12 / 271,036 and 12 / 271,040 and WO 2009/064471.

３’トリチル修飾を有するＰＭＯを、脱トリチル工程を省略すること以外は、基本的に国際公開２００９／０６４４７１号に記載のように合成する。   A PMO with a 3'trityl modification is synthesized essentially as described in WO 2009/064471, except that the detritylation step is omitted.

（実施例１）
ＴＥＲＴ−ブチル−４−（２，２，２−トリフルオロアセタミド）ピペリジン−１−カルボキシレート
Example 1
TERT-Butyl-4- (2,2,2-trifluoroacetamide) piperidine-1-carboxylate

ＤＣＭ（２５０ｍＬ）における、ｔｅｒｔ−ブチル ４−アミノピペリジン−１−カルボキシレート（４８．７ｇ、０．２４３ｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１３０ｍＬ、０．７４９ｍｏｌ）の懸濁液に、エチルトリフルオロアセテート（３５．６ｍＬ、０．３００ｍｏｌ）を、攪拌しながら滴下して添加した。２０時間後、前記溶液を、クエン酸溶液（２００ｍＬ×３、１０％ｗ／ｖ水溶液）および重炭酸ナトリウム溶液（２００ｍＬ×３、濃縮水溶液）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、シリカ（２４ｇ）を通してろ過した。前記シリカを、ＤＣＭで洗浄し、合わせた溶出液を、部分的に濃縮し（１００ｍＬ）、次の工程に直接使用した。Ｃ１２Ｈ１９Ｆ３Ｎ２Ｏ３のＡＰＣＩ／ＭＳ計算値２９６．１、実測値ｍ／ｚ＝２９４．９（Ｍ−１）。 Ethyl trifluoroacetate (35.6 mL) in a suspension of tert-butyl 4-aminopiperidine-1-carboxylate (48.7 g, 0.243 mol) and DIPEA (130 mL, 0.749 mol) in DCM (250 mL) , 0.300 mol) were added dropwise with stirring. After 20 hours, the solution is washed with citric acid solution (200 mL × 3, 10% w / v aqueous solution) and sodium bicarbonate solution (200 mL × 3, concentrated aqueous solution), dried (MgSO 4 ) and silica (24 g) Filtered through). The silica was washed with DCM and the combined eluate was partially concentrated (100 mL) and used directly in the next step. C 12 H 19 F 3 N 2 O 3 of APCI / MS calcd 296.1, found m / z = 294.9 (M- 1).

（実施例２）
２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−（ピペリジン−４−イル）アセタミド塩酸塩
(Example 2)
2,2,2-trifluoro-N- (piperidin-4-yl) acetamide hydrochloride

実施例１における表題の化合物の攪拌ＤＣＭ溶液（１００ｍＬ）に、１，４−ジオキサン（４Ｍ）における塩化水素の溶液（２５０ｍＬ、１．０ｍｏｌ）を滴下して添加した。攪拌を６時間継続し、次いで、懸濁液をろ過し、固形物をジエチルエーテル（５００ｍＬ）で洗浄して、白色の固形物として、表題の化合物（５４．２ｇ、収率９６％）を得た。
Ｃ７Ｈ１１Ｆ３Ｎ２ＯのＡＰＣＩ／ＭＳ計算値１９６．１、実測値ｍ／ｚ＝１９６．９（Ｍ＋１）。 To a stirred DCM solution (100 mL) of the title compound in Example 1 was added dropwise a solution of hydrogen chloride (250 mL, 1.0 mol) in 1,4-dioxane (4 M). Stirring is continued for 6 hours, then the suspension is filtered and the solid is washed with diethyl ether (500 mL) to give the title compound (54.2 g, 96% yield) as a white solid The
C 7 H 11 F 3 N 2 O in APCI / MS calcd 196.1, found m / z = 196.9 (M + 1).

（実施例３）
（４−（２，２，２−トリフルオロアセタミド）ピペリジン−１−イル）ホスホン酸ジクロライド
(Example 3)
(4- (2,2,2-trifluoroacetamide) piperidin-1-yl) phosphonic acid dichloride

ＤＣＭ（２５０ｍＬ）における、実施例２における表題の化合物（５４．２ｇ、０．２３３ｍｏｌ）についての、冷却した懸濁液（氷／水浴）に、オキシ塩化リン（２３．９ｍＬ、０．２５６ｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１２１．７ｍＬ、０．６９９ｍｏｌ）を滴下して添加し、攪拌した。１５分後、前記浴を取り除き、周囲温度に温まるように、前記混合物を攪拌し続けた。１時間後、前記混合物を部分的に濃縮し（１００ｍＬ）、懸濁液をろ過し、固形物をジエチルエーテルで洗浄して、白色の固形物として、表題の化合物（４３．８ｇ、収率６０％）を得た。溶出液を部分的に濃縮し（１００ｍＬ）、得られた懸濁液をろ過し、固形物をジエチルエーテルで洗浄して、追加の表題の化合物（６．５ｇ、収率９％）を得た。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ１７Ｈ２２ＣｌＦ３Ｎ５Ｏ４ＰのＥＳＩ／ＭＳ計算値４８３．１、実測値ｍ／ｚ＝４８２．１（Ｍ−１）。 Phosphorus oxychloride (23.9 mL, 0.256 mol) and a cooled suspension (ice / water bath) for the title compound in Example 2 (54.2 g, 0.233 mol) in DCM (250 mL) and DIPEA (121.7 mL, 0.699 mol) was added dropwise and stirred. After 15 minutes, the bath was removed and the mixture continued to stir as it warmed to ambient temperature. After 1 h, the mixture is partially concentrated (100 mL), the suspension is filtered and the solid is washed with diethyl ether to give the title compound (43.8 g, yield 60) as a white solid %) Got. The eluate was partially concentrated (100 mL), the resulting suspension was filtered and the solid was washed with diethyl ether to give additional title compound (6.5 g, 9% yield) . 1- (4-nitrophenyl) piperazine derivative C 17 H 22 ClF 3 N 5 O 4 P of ESI / MS calcd 483.1, found m / z = 482.1 (M- 1).

（実施例４）
（（２Ｓ，６Ｓ）−６−（（Ｒ）−５−メチル−２，６−ジオキソ−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−３−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−（２，２，２−トリフルオロアセタミド）ピペリジン−１−イル）ホスホノクロリデート
(Example 4)
((2S, 6S) -6-((R) -5-methyl-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydropyridin-3-yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methyl (4- (2,2,2-Trifluoroacetamide) piperidin-1-yl) phosphonochloridate

ＤＣＭ（１００ｍＬ）における、実施例３における表題の化合物（２９．２ｇ、９３．３ｍｍｏｌ）の、攪拌冷却溶液（氷／水浴）に、Ｍｏ（Ｔｒ）Ｔ＃（２２．６ｇ、４６．７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１００ｍＬ）、２，６−ルチジン（２１．７ｍＬ、１８７ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（１．１４ｇ、９．３３ｍｍｏｌ）を、１０分にわたって、滴下して添加した。前記浴を、室温に温めさせた。１５時間後、前記溶液を、クエン酸溶液（２００ｍＬ×３、１０％ｗ／ｖ水溶液）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濃縮し、粗製油を、直接カラムに載せた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２カラム（１２０ｇ）、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ溶出液（勾配１：１から０：１）、３回繰り返し］画分を濃縮して、白色の固形物として、表題の化合物（２７．２ｇ、収率７７％）を提供した。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ４６Ｈ５０Ｆ３Ｎ８Ｏ８ＰのＥＳＩ／ＭＳ計算値９３０．３、実測値ｍ／ｚ＝９２９．５（Ｍ−１）。 Mo (Tr) T # (22.6 g, 46.7 mmol) in a stirred, cooled solution (ice / water bath) of the title compound in Example 3 (29.2 g, 93.3 mmol) in DCM (100 mL) DCM solution (100 mL), 2,6-lutidine (21.7 mL, 187 mmol) and 4- (dimethylamino) pyridine (1.14 g, 9.33 mmol) were added dropwise over 10 minutes. The bath was allowed to warm to room temperature. After 15 h, the solution was washed with citric acid solution (200 mL × 3, 10% w / v aqueous solution), dried (MgSO 4 ), concentrated and the crude oil loaded directly onto the column. Chromatography [SiO 2 column (120 g), hexane / EtOAc eluent (gradient 1: 1 to 0: 1), repeat 3 times] concentrate the fractions as a white solid, title compound (27.2 g , A yield of 77%). 1- (4-nitrophenyl) piperazine derivative C 46 H 50 F 3 N 8 O 8 P of ESI / MS calcd 930.3, found m / z = 929.5 (M- 1).

（実施例５）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（６−ベンズアミド−９Ｈ−プリン−９−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル（４−（２，２，２−トリフルオロアセタミド）ピペリジン−１−イル）ホスホノクロリデート
(Example 5)
((2S, 6R) -6- (6-benzamido-9H-purin-9-yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methyl (4- (2,2,2-trifluoroacetamide) piperidine 1-yl) phosphonochloridate

表題の化合物を、実施例４に記載の方法に類似した方法で合成して、白色固形物として、表題の化合物（１５．４ｇ、収率６６％）を得た。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ５３Ｈ５３Ｆ３Ｎ１１Ｏ７ＰのＥＳＩ／ＭＳ計算値１０４３．４、実測値ｍ／ｚ＝１０４２．５（Ｍ−１）。 The title compound was synthesized in a manner analogous to that described in Example 4 to give the title compound (15.4 g, 66% yield) as a white solid. 1- (4-nitrophenyl) piperazine derivative C 53 H 53 F 3 N 11 O 7 P of ESI / MS calcd 1043.4, found m / z = 1042.5 (M- 1).

（実施例６）
（Ｒ）−メチル（１−フェニルエチル）ホスホロアミド二塩化物
(Example 6)
(R) -methyl (1-phenylethyl) phosphoroamidodichloride

ＤＣＭ（３０ｍＬ）におけるオキシ塩化リン（２．８３ｍＬ、３０．３ｍｍｏｌ）の冷却溶液（氷／水浴）に、２，６−ルチジン（７．０６ｍＬ、６０．６ｍｍｏｌ）および、（Ｒ）−（＋）−Ｎ，ａ−ジメチルベンジルアミン（３．７３ｇ、２７．６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液を、攪拌しながら、続けて滴下して添加した。５分後、前記浴を取り除き、反応混合物を、室温に温めさせた。１時間後、前記反応溶液を、クエン酸溶液（５０ｍＬ×３、１０％ｗ／ｖ水溶液）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ＳｉＯ２を通してろ過し、濃縮して、白色の泡状物質として、表題の化合物（３．８０ｇ）を提供した。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ１９Ｈ２５Ｎ４Ｏ４ＰのＥＳＩ／ＭＳ計算値４０４．２、実測値ｍ／ｚ＝４０３．１（Ｍ−１）。 2,6-lutidine (7.06 mL, 60.6 mmol) and (R)-(+) in a cooled solution (ice / water bath) of phosphorous oxychloride (2.83 mL, 30.3 mmol) in DCM (30 mL) A solution of -N, a-dimethylbenzylamine (3.73 g, 27.6 mmol) in DCM was continuously added dropwise with stirring. After 5 minutes, the bath was removed and the reaction mixture was allowed to warm to room temperature. After 1 h, the reaction solution is washed with citric acid solution (50 mL × 3, 10% w / v aqueous solution), dried (MgSO 4 ), filtered through SiO 2 and concentrated to a white foam Provided the title compound (3.80 g). 1- (4-nitrophenyl) piperazine derivative C 19 H 25 N 4 O 4 P of ESI / MS calcd 404.2, found m / z = 403.1 (M- 1).

（実施例７）
（Ｓ）−メチル（１−フェニルエチル）ホスホロアミド二塩化物
(Example 7)
(S) -Methyl (1-phenylethyl) phosphoroamidodichloride

表題の化合物を、実施例６に記載の方法に類似した方法で合成して、白色の泡状物質として、表題の化合物（３．９５ｇ）を得た。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ１９Ｈ２５Ｎ４Ｏ４ＰのＥＳＩ／ＭＳ計算値４０４．２、実測値ｍ／ｚ＝４０３．１（Ｍ−１）。 The title compound was synthesized in a manner analogous to that described in Example 6 to give the title compound (3.95 g) as a white foam. 1- (4-nitrophenyl) piperazine derivative C 19 H 25 N 4 O 4 P of ESI / MS calcd 404.2, found m / z = 403.1 (M- 1).

（実施例８）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル メチル（（Ｒ）−１−フェニルエチル）ホスホロアミドクロリデート
(Example 8)
((2S, 6R) -6- (5-Methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methyl methyl ((R) -1-phenylethyl) phosphoroamido chloridate

表題の化合物を、実施例４に記載の方法に類似した方法で合成して、白色の固形物として、表題のクロロホスホロアミダート（４．４６ｇ、収率２８％）を得た。Ｃ３８Ｈ４０ＣｌＮ４Ｏ５ＰのＥＳＩ／ＭＳ計算値６９８．２、実測値ｍ／ｚ＝６９７．３（Ｍ−１）。 The title compound was synthesized in a manner analogous to that described in Example 4 to give the title chlorophosphoroamidate (4.46 g, 28% yield) as a white solid. C 38 H 40 ClN 4 O 5 P of ESI / MS calcd 698.2, found m / z = 697.3 (M- 1).

（実施例９）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル メチル（（Ｓ）−１−フェニルエチル）ホスホロアミドクロリデート
(Example 9)
((2S, 6R) -6- (5-Methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methyl methyl ((S) -1-phenylethyl) phosphoroamido chloridate

表題の化合物を、実施例４に記載の方法に類似した方法で合成して、白色の固形物として、表題のクロロホスホロアミダート（４．６５ｇ、収率２３％）を得た。Ｃ３８Ｈ４０ＣｌＮ４Ｏ５ＰのＥＳＩ／ＭＳ計算値６９８．２、実測値ｍ／ｚ＝６９７．３（Ｍ−１）。 The title compound was synthesized in a manner analogous to that described in Example 4 to give the title chlorophosphoroamidate (4.65 g, 23% yield) as a white solid. C 38 H 40 ClN 4 O 5 P of ESI / MS calcd 698.2, found m / z = 697.3 (M- 1).

（実施例１０）
（４−（ピロリジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）ホスホン酸二塩化物塩酸塩
(Example 10)
(4- (Pyrrolidin-1-yl) piperidin-1-yl) phosphonic acid dichloride hydrochloride

ＤＣＭ（３０ｍＬ）におけるオキシ塩化リン（５．７０ｍＬ、５５．６ｍｍｏｌ）の冷却溶液（氷／水浴）に、２，６−ルチジン（１９．４ｍＬ、１６７ｍｍｏｌ）および、４−（１−ピロリジニル）−ピペリジン（８．５８ｇ、５５．６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（３０ｍＬ）を添加し、１時間攪拌した。懸濁液をろ過し、固形物を過剰のジエチルエーテルで洗浄して、白色の固形物として、表題のピロリジン（１７．７ｇ、収率９１％）を得た。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ１９Ｈ３０Ｎ５Ｏ４ＰのＥＳＩ／ＭＳ計算値４２３．２、実測値ｍ／ｚ＝４２２．２（Ｍ−１）。 2,6-lutidine (19.4 mL, 167 mmol) and 4- (1-pyrrolidinyl) -piperidine in a cooled solution (ice / water bath) of phosphorus oxychloride (5.70 mL, 55.6 mmol) in DCM (30 mL) A solution of (8.58 g, 55.6 mmol) in DCM (30 mL) was added and stirred for 1 hour. The suspension was filtered and the solid was washed with excess diethyl ether to give the title pyrrolidine (17.7 g, 91% yield) as a white solid. 1- (4-nitrophenyl) piperazine derivative C 19 H 30 N 5 O 4 P of ESI / MS calcd 423.2, found m / z = 422.2 (M- 1).

（実施例１１）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル） メチル（４−（ピロリジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）ホスホノクロリデート塩酸塩
(Example 11)
((2S, 6R) -6- (5-Methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methyl (4- (pyrrolidine) -1-yl) piperidin-1-yl) phosphonochloridate hydrochloride

ＤＣＭ（１００ｍＬ）におけるジクロロホスホロアミダート８（１７．７ｇ、５０．６ｍｍｏｌ）の攪拌冷却溶液（氷／水浴）に、Ｍｏ（Ｔｒ）Ｔ＃（２４．５ｇ、５０．６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１００ｍＬ）、２，６−ルチジン（１７．７ｍＬ、１５２ｍｍｏｌ）および１−メチルイミダゾール（０．４０１ｍＬ、５．０６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（１００ｍＬ）を、１０分にわたって、滴下して添加した。懸濁液を攪拌しながら、前記浴を、室温に温めさせた。６時間後、前記懸濁液を、ジエチルエーテル（１Ｌ）に注ぎ、１５分攪拌し、ろ過し、固形物を、更なるエーテルで洗浄して、白色の固形物（４５．４ｇ）を得た。前記粗製生成物を、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２カラム（１２０グラム）、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ溶出液（勾配１：０から６：４）］により精製し、合わせた画分を、ジエチルエーテル（２．５Ｌ）に注ぎ、１５分攪拌し、ろ過し、得られた固形物を、更なるエーテルで洗浄して、白色の固形物として、表題の化合物（２３．１ｇ、収率６０％）を得た。１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン誘導体Ｃ４８Ｈ５７Ｎ８Ｏ７ＰのＥＳＩ／ＭＳ計算値８８８．４、実測値ｍ／ｚ＝８８７．６（Ｍ−１）。 A solution of Mo (Tr) T # (24.5 g, 50.6 mmol) in DCM (100 mL) in a stirred, cooled solution (ice / water bath) of dichlorophosphoroamidate 8 (17.7 g, 50.6 mmol) in DCM (100 mL) A solution of 100 mL), 2,6-lutidine (17.7 mL, 152 mmol) and 1-methylimidazole (0.401 mL, 5.06 mmol) in DCM (100 mL) was added dropwise over 10 minutes. The bath was allowed to warm to room temperature while stirring the suspension. After 6 hours, the suspension was poured into diethyl ether (1 L), stirred for 15 minutes, filtered and the solid washed with more ether to give a white solid (45.4 g) . The crude product is purified by chromatography [SiO 2 column (120 grams), DCM / MeOH eluent (gradient 1: 0 to 6: 4)] and the combined fractions are diethyl ether (2.5 L) The solution was stirred for 15 minutes, filtered, and the obtained solid was washed with more ether to give the title compound (23.1 g, 60% yield) as a white solid. 1- (4-nitrophenyl) piperazine derivative C 48 H 57 N 8 O 7 P of ESI / MS calcd 888.4, found m / z = 887.6 (M- 1).

（実施例１２）
３−（ＴＥＲＴ−ブチルジスルファニル）−２−（イソブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸
(Example 12)
3- (TERT-butyldisulfanyl) -2- (isobutoxycarbonylamino) propanoic acid

ＣＨ３ＣＮ（４０ｍＬ）におけるＳ−ｔｅｒｔ−ブチルメルカプト−Ｌ−システイン（１０ｇ、４７．８ｍｍｏｌ）に、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）におけるＫ２ＣＯ３（１６．５ｇ、１１９．５ｍｍｏｌ）を添加した。１５分間の攪拌後、ｉｓｏ−ブチルクロロギ酸（９．４ｍＬ、７２ｍｍｏｌ）を、ゆっくり入れた。前記反応を、３時間行った。白色固形物を、セライトを通してろ過し、ろ液を濃縮して、ＣＨ３ＣＮを除去した。残渣を、酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解し、１Ｎ ＨＣｌ（４０ｍｌ×３）、塩水（４０×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。所望の生成物（２）を、クロマトグラフィー（５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）後に得た。 CH in 3 CN (40 mL) in S-tert-butyl-mercapto -L- cysteine (10g, 47.8mmol), K 2 CO 3 was added in H 2 O (20mL) (16.5g , 119.5mmol). After stirring for 15 minutes, iso-butyl chloroformate (9.4 mL, 72 mmol) was slowly added. The reaction was performed for 3 hours. The white solid was filtered through Celite, and the filtrate was concentrated to remove the CH 3 CN. The residue was dissolved in ethyl acetate (200 mL), washed with 1 N HCl (40 ml × 3), brine (40 × 1) and dried over Na 2 SO 4 . The desired product (2) was obtained after chromatography (5% MeOH / DCM).

（実施例１３）
ＴＥＲＴ−ブチル ４−（３−（ＴＥＲＴ−ブチルジスルファニル）−２−（イソブトキシカルボニルアミノ）プロパンアミド）ピペリジン−１−カルボキシレート
(Example 13)
TERT-Butyl 4- (3- (TERT-Butyldisulfanyl) -2- (isobutoxycarbonylamino) propanamide) piperidine-1-carboxylate

ＤＭＦ（５０ｍｌ）における前記酸（実施例１２からの化合物２、６．９８ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）に、ＨＡＴＵ（８．５８ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、Ｈｕｎｉｇ塩基（４．７１ｍｌ、２７．１ｍｍｏｌ）および１−Ｂｏｃ−４−アミノピペリジン（５．４３ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）を、前記混合物に添加した。反応を、ＲＴでもう３時間攪拌しながら継続した。ＤＭＦを高真空で除去し、粗製残渣をＥｔＡｃ（３００ｍｌ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（５０ｍｌ×３）で洗浄した。最終生成物（３）を、ＩＳＣＯ精製（５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）後に得た。 To the above acid (compound 2, 6.98 g, 22.6 mmol from Example 12) in DMF (50 ml) was added HATU (8.58 g, 22.6 mmol). After 30 minutes, Hunig's base (4.71 ml, 27.1 mmol) and 1-Boc-4-aminopiperidine (5.43 g, 27.1 mmol) were added to the mixture. The reaction was continued with stirring for another 3 h at RT. The DMF was removed in high vacuum and the crude residue was dissolved in EtAc (300 ml) and washed with H 2 O (50 ml × 3). The final product (3) was obtained after ISCO purification (5% MeOH / DCM).

（実施例１４）
イソブチル ３−（ＴＥＲＴ−ブチルジスルファニル）−１−オキソ−１−（ピペリジン−４−イルアミノ）プロパン−２−イルカルバメート
(Example 14)
Isobutyl 3- (TERT-butyldisulfanyl) -1-oxo-1- (piperidin-4-ylamino) propan-2-ylcarbamate

実施例１３で調製された化合物３（７．０８５ｇ、１８．１２ｍｍｏｌ）に、３０ｍＬの４Ｍ ＨＣｌ／ジオキサンを添加した。反応を、ＲＴで２時間後に完了した。塩酸塩（４）を、さらに精製せずに、次の工程に使用した。   To compound 3 (7.085 g, 18.12 mmol) prepared in Example 13 was added 30 mL of 4 M HCl / dioxane. The reaction was complete after 2 hours at RT. The hydrochloride salt (4) was used in the next step without further purification.

（実施例１５）
イソブチル ３−（ＴＥＲＴ−ブチルジスルファニル）−１−（１−（ジクロロホスホリル）ピペリジン−４−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルカルバメート
(Example 15)
Isobutyl 3- (TERT-butyldisulfanyl) -1- (1- (dichlorophosphoryl) piperidin-4-ylamino) -1-oxopropan-2-ylcarbamate

−７８℃でのＤＣＭ（２００ｍｌ）における、実施例１５で調製した化合物４（７．７４６ｇ、１８．１２ｍｍｏｌ）に、Ａｒ下において、ＰＯＣｌ３（１．６９ｍｌ、１８．１２ｍｍｏｌ）を、ゆっくり入れ、続けて、Ｅｔ３Ｎ（７．５８ｍｌ、５４．３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応を、ＲＴで５時間撹拌し、濃縮して、過剰の塩基および溶媒を除去した。ＩＳＣＯ精製（５０％ ＥｔＡｃ／ヘキサン）後に、生成物（５）を、白色の固形物として得た。 In DCM (200 ml) at -78 ° C., Example 15 Compound 4 prepared in (7.746g, 18.12mmol), under Ar, POCl 3 and (1.69ml, 18.12mmol), slowly placed, followed by the addition of Et 3 N (7.58ml, 54.36mmol) . The reaction was stirred at RT for 5 hours and concentrated to remove excess base and solvent. After ISCO purification (50% EtAc / hexane) the product (5) was obtained as a white solid.

（実施例１６）
イソブチル ３−（ＴＥＲＴ−ブチルジスルファニル）−１−（１−クロロ（（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メトキシ）ホスホリル）ピペリジン−４−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルカルバメート
(Example 16)
Isobutyl 3- (TERT-butyldisulfanyl) -1- (1-chloro (((2S, 6R) -6- (5-methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidine-1 (2H)-) Yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methoxy) phosphoryl) piperidin-4-ylamino) -1-oxopropan-2-ylcarbamate

０℃でのＤＣＭ（１００ｍｌ）における、１−（（２Ｒ，６Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）−５−メチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（ｍｏＴ（Ｔｒ））（５．５７６ｇ、１０．９８ｍｍｏｌ）に、ルチジン（１．９２ｍｌ、１６．４７ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（６６９ｍｇ、５．５ｍｍｏｌ）を添加し、続けて、４（６．１３ｇ、１２．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応を、ＲＴで１８時間、撹拌したままにしておいた。ＩＳＣＯ精製（５０％ ＥｔＡｃ／ヘキサン）後に、所望の生成物（６）を得た。   1-((2R, 6S) -6- (hydroxymethyl) -4-tritylmorpholin-2-yl) -5-methylpyrimidine-2,4 (1H, 3H)-in DCM (100 ml) at 0 ° C. To dione (moT (Tr)) (5.576 g, 10.98 mmol), lutidine (1.92 ml, 16.47 mmol) and DMAP (669 mg, 5.5 mmol) were added, followed by 4 (6.13 g, 12.08 mmol) was added. The reaction was left to stir at RT for 18 h. The desired product (6) was obtained after ISCO purification (50% EtAc / hexane).

（実施例１７）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル ヘキシル（メチル）ホスホロアミドクロリデート
(Example 17)
((2S, 6R) -6- (5-Methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methyl hexyl (methyl) phospho Loamide chloridate

Ｎ−ヒドロキシルメチルアミン（４．８５ｍｌ、３２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８０ｍｌ）溶液を、Ｎ２下において、−７８℃に冷却した。ＤＣＭ（１０ｍｌ）における塩化ホスホリル（２．９８ｍｌ、３２ｍｍｏｌ）の溶液、続けて、ＤＣＭ（１０ｍｌ）におけるＥｔ３Ｎ（４．４６ｍｌ、３２ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくり添加した。反応をオーバーナイトでＲＴに温めながら、撹拌を継続した。ＩＳＣＯ精製（２０％ ＥｔＡｃ／ヘキサン）後に、所望の生成物（１）を、透明なオイルとして得た。 N- hydroxylamine methylamine (4.85 ml, 32 mmol) and DCM (80 ml) was added under N 2 and cooled to -78 ° C.. A solution of phosphoryl chloride (2.98 ml, 32 mmol) in DCM (10 ml) was added slowly, followed by a solution of Et 3 N (4.46 ml, 32 mmol) in DCM (10 ml). Stirring was continued while warming the reaction to RT overnight. After ISCO purification (20% EtAc / hexane) the desired product (1) was obtained as a clear oil.

０℃でのＤＣＭ（１００ｍｌ）におけるｍｏＴ（Ｔｒ）（５．１０ｇ、１０．５４ｍｍｏｌ）に、ルチジン（３．６８ｍｌ、３１．６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（６４２ｍｇ、５．２７ｍｍｏｌ）を添加し、続けて、１（４．８９ｇ、２１．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応を、ＲＴで１８時間、撹拌したままにした。ＩＳＣＯ精製（５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）後に、所望の生成物（２）を得た。   Add lutidine (3.68 ml, 31.6 mmol) and DMAP (642 mg, 5.27 mmol) to moT (Tr) (5.10 g, 10.54 mmol) in DCM (100 ml) at 0 ° C., followed by 1 (4.89 g, 21.08 mmol) was added. The reaction was left to stir at RT for 18 h. The desired product (2) was obtained after ISCO purification (50% EtOAc / hexanes).

（実施例１８）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル ドデシル（メチル）ホスホロアミドクロリデート
(Example 18)
((2S, 6R) -6- (5-Methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methyl dodecyl (methyl) phospho Loamide chloridate

表題の化合物を、実施例６および８に記載の、一般的な手順に基づいて調製した。   The title compound was prepared based on the general procedure described in Examples 6 and 8.

（実施例１９）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル モルホリノホスホノクロリデート
(Example 19)
((2S, 6R) -6- (5-Methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methyl morpholinophosphonochloridate

表題の化合物を、実施例６および８に記載の、一般的な手順に基づいて調製した。   The title compound was prepared based on the general procedure described in Examples 6 and 8.

（実施例２０）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル （Ｓ）−２−（メトキシメチル）ピロリジン−１−イルホスホノクロリデート
Example 20
((2S, 6R) -6- (5-Methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methyl (S) -2 -(Methoxymethyl) pyrrolidin-1-ylphosphonochloridate

表題の化合物を、実施例６および８に記載の、一般的な手順に基づいて調製した。   The title compound was prepared based on the general procedure described in Examples 6 and 8.

（実施例２１）
（（２Ｓ，６Ｒ）−６−（５−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル）−４−トリチルモルホリン−２−イル）メチル ４−（３，４，５−トリメトキシベンズアミド）ピペリジン−１−イルホスホノクロリデート
(Example 21)
((2S, 6R) -6- (5-Methyl-2,4-dioxo-3,4-dihydropyrimidin-1 (2H) -yl) -4-tritylmorpholin-2-yl) methyl 4- (3, 4,5-Trimethoxybenzamido) piperidin-1-ylphosphonochloridate

ＤＣＭ（２０ｍｌ）における１−Ｂｏｃ−４−ピペリジン（１ｇ、５ｍｍｏｌ）に、Ｈｕｎｉｇ塩基（１．７４ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、続けて、３，４，５−トリメトキシベンゾイルクロリド（１．３８ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加した。反応を、ＲＴで３時間行い、濃縮して溶媒および過剰な塩基を除去した。残渣を、ＥｔＡｃ（１００ｍｌ）に溶解し、０．０５Ｎ ＨＣｌ（３×１５ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２×１５ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。ＩＳＣＯ精製（５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）後に、生成物（１）を得た。 To 1-Boc-4-piperidine (1 g, 5 mmol) in DCM (20 ml) is added Hunig's base (1.74 ml, 10 mmol) followed by 3,4,5-trimethoxy benzoyl chloride (1.38 g, 6 mmol) were added. The reaction was run for 3 h at RT and concentrated to remove solvent and excess base. The residue was dissolved in EtAc (100 ml), washed with 0.05 N HCl (3 × 15 ml), saturated NaHCO 3 (2 × 15 ml) and dried over Na 2 SO 4 . The product (1) was obtained after ISCO purification (5% MeOH / DCM).

７に、１５ｍｌの４Ｎ ＨＣｌ／ジオキサンを添加し、反応を、４時間後に終了した。８を、白色の固形物として得た。   To 7 was added 15 ml of 4N HCl / dioxane and the reaction was finished after 4 hours. 8 was obtained as a white solid.

８（１．２３ｇ、４．１８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍｌ）溶液を、Ｎ２下において、−７８℃に冷却した。ＤＣＭ（２ｍｌ）における塩化ホスホリル（０．３９ｍｌ、４．１８ｍｍｏｌ）の溶液、続けて、ＤＣＭ（２ｍｌ）におけるＥｔ３Ｎ（０．５８３ｍｌ、４．１８ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくり添加した。反応をオーバーナイトでＲＴに温めながら、撹拌を継続した。ＩＳＣＯ精製（５０％ ＥｔＡｃ／ヘキサン）後に、所望の生成物（９）を得た。 A solution of 8 (1.23 g, 4.18 mmol) in DCM (20 ml) was cooled to −78 ° C. under N 2 . A solution of phosphoryl chloride (0.39 ml, 4.18 mmol) in DCM (2 ml) was added slowly, followed by a solution of Et 3 N (0.583 ml, 4.18 mmol) in DCM (2 ml). Stirring was continued while warming the reaction to RT overnight. The desired product (9) was obtained after ISCO purification (50% EtAc / hexane).

０℃でのＤＣＭ（２０ｍｌ）におけるｍｏＴ（Ｔｒ）（１．９３３ｇ、４．０ｍｍｏｌ）に、ルチジン（０．９３ｍｌ、８ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４９ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を添加し、続けて、９（１．６４７ｇ、４ｍｍｏｌ）を添加した。反応を、ＲＴで１８時間、撹拌したままにした。ＩＳＣＯ精製（５０％ ＥｔＡｃ／ヘキサン）後に、所望の生成物（１０）を得た。   To moT (Tr) (1.933 g, 4.0 mmol) in DCM (20 ml) at 0 ° C., add lutidine (0.93 ml, 8 mmol) and DMAP (49 mg, 0.4 mmol) followed by 9 ( 1.647 g, 4 mmol) were added. The reaction was left to stir at RT for 18 h. The desired product (10) was obtained after ISCO purification (50% EtAc / hexane).

（実施例２２）
サブユニット（ＣＰＴ）を含むシクロホスホロアミドの合成
(Example 22)
Synthesis of cyclophosphoroamide containing subunit ( CPT )

ｍｏＴサブユニット（２５ｇ）を、ＤＣＭ（１７５ｍｌ）に懸濁し、ＮＭＩ（Ｎ−メチルイミダゾール、５．９４ｇ、１．４当量）を添加して、透明な溶液を得た。塩化トシルを、前記反応混合物に添加し、反応の進行を、終了するまで（約２時間）、ＴＬＣによりモニターした。水性処理を、０．５Ｍ クエン酸緩衝液（ｐＨ＝５）、続けて、塩水による洗浄により行った。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を、ロータリーエバポレータで除去して、粗生成物を得た。その粗生成物を、さらに精製することなく、次の工程に使用した。 The moT subunit (25 g) was suspended in DCM (175 ml) and NMI (N-methylimidazole, 5.94 g, 1.4 equivalents) was added to give a clear solution. Tosyl chloride was added to the reaction mixture, and the progress of the reaction was monitored by TLC until completion (about 2 hours). Aqueous workup was performed by washing with 0.5 M citrate buffer (pH = 5) followed by brine. The organic layer was separated and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was removed on a rotary evaporator to give a crude product. The crude product was used in the next step without further purification.

上記で調製したｍｏＴトシレートを、プロパノールアミン（１ｇ／１０ｍｌ）と混合した。次いで、反応混合物を、４５℃でオーバーナイト、オーブンに置き、続けて、ＤＣＭ（１０ｍｌ）で希釈した。水性処理を、０．５Ｍ クエン酸緩衝液（ｐＨ＝５）、続けて、塩水による洗浄により行った。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を、ロータリーエバポレータで除去して、粗生成物を得た。前記粗生成物を、ＮＭＲおよびＨＰＬＣにより分析、測定して、さらに精製することなく、次の工程に準備した。 The moT tosylate prepared above was mixed with propanolamine (1 g / 10 ml). The reaction mixture was then placed in an oven overnight at 45 ° C. and subsequently diluted with DCM (10 ml). Aqueous workup was performed by washing with 0.5 M citrate buffer (pH = 5) followed by brine. The organic layer was separated and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was removed on a rotary evaporator to give a crude product. The crude product was analyzed and measured by NMR and HPLC to prepare for the next step without further purification.

前記粗生成物を、ＤＣＭ（２．５ｍｌ ＤＣＭ／ｇ、１当量）に溶解し、ＤＩＥＡ（３当量）と混合した。この溶液を、ドライアイス−アセトンで冷却し、ＰＯＣｌ３（１．５当量）を、滴下して添加した。得られた混合物を、室温でオーバーナイト撹拌した。水性処理を、０．５Ｍ クエン酸緩衝液（ｐＨ＝５）、続けて、塩水による洗浄により行った。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を、ロータリーエバポレータで除去して、黄色の固形物として、粗生成物を得た。前記粗生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（粗生成物／シリカ＝１から５の比率、勾配 ＤＣＭから５０％ＥＡ／ＤＣＭ）により精製し、画分を、ＴＬＣ分析に基づいてプールした。溶媒を除去して、ジアステレオマーの混合物として、所望の生成物を得た。前記精製された生成物を、ＨＰＬＣ（ＮＰＰ停止）およびＮＭＲ（Ｈ−１およびＰ−３１）により分析した。 The crude product was dissolved in DCM (2.5 ml DCM / g, 1 eq) and mixed with DIEA (3 eq). The solution, a dry ice - cooled with acetone, POCl 3 (1.5 eq) was added dropwise. The resulting mixture was stirred at room temperature overnight. Aqueous workup was performed by washing with 0.5 M citrate buffer (pH = 5) followed by brine. The organic layer was separated and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was removed on a rotary evaporator to give the crude product as a yellow solid. The crude product was purified by silica gel chromatography (crude product / silica = 1-5 ratio, gradient DCM to 50% EA / DCM) and fractions were pooled based on TLC analysis. The solvent is removed to give the desired product as a mixture of diastereomers. The purified product was analyzed by HPLC (NPP stop) and NMR (H-1 and P-31).

前記ジアステレオマー混合物を、下記の手順に基づいて分離した。前記混合物（２．６ｇ）を、ＤＣＭに溶解した。このサンプルを、ＲｅｄｉＳｅｐＲｆカラム（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏにより製造された、８０ｇの順相）に載せ、１０％ＥＡ／ＤＣＭから５０％ＥＡ／ＤＣＭで、２０分にわたって溶出した。画分を収集し、ＴＬＣにより分析した。画分を、ＴＬＣ分析に基づいてプールし、室温でロータリーエバポレータにより、溶媒を除去した。プールした画分のジアステレオマー比率を、Ｐ−３１ ＮＭＲおよびＮＰＰ−ＴＦＡ分析により決定した。必要に応じて、前記ジアステレオマー比率が９７％に達するまで、上記手順を繰り返した。   The diastereomeric mixture was separated according to the following procedure. The mixture (2.6 g) was dissolved in DCM. The sample was loaded on a RediSepRf column (manufactured by Teledyne Isco, 80 g normal phase) and eluted over 10 minutes with 10% EA / DCM to 50% EA / DCM. Fractions were collected and analyzed by TLC. Fractions were pooled based on TLC analysis and the solvent was removed by rotary evaporator at room temperature. The diastereomeric ratio of the pooled fractions was determined by P-31 NMR and NPP-TFA analysis. The above procedure was repeated, as necessary, until the diastereomer ratio reached 97%.

（実施例２３）
ＰＭＯプラスの全体的なコール酸修飾
(Example 23)
Overall cholic acid modification of PMO plus

スクシンイミド活性化コール酸誘導体を、下記の手順に基づいて調製した。コール酸（１２ｇ、２９．４ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（４．０ｇ、３４．８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣｌ（５．６ｇ、２９．３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコに入れた。ＤＣＭ（４００ｍｌ）およびＴＨＦ（４０ｍｌ）を添加して、溶解した。反応混合物を、室温でオーバーナイト攪拌した。次いで、水（４００ｍｌ）を、前記反応混合物に添加し、有機層を分離し、水（２×４００ｍｌ）、続けて、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍｌ）および塩水（３００ｍｌ）で洗浄した。次いで、前記有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒をロータリーエバポレータで除去して、白色の固形物を得た。粗生成物を、クロロホルム（１００ｍｌ）に溶解し、ヘプタン（１０００ｍｌ）に沈殿させた。固形物を、ろ過により収集し、ＨＰＬＣおよびＮＭＲにより分析し、さらに精製することなく使用した。 Succinimido activated cholic acid derivatives were prepared according to the following procedure. Cholic acid (12 g, 29.4 mmol), N-hydroxysuccinimide (4.0 g, 34.8 mmol), EDCl (5.6 g, 29.3 mmol) and DMAP (1 g, 8.2 mmol) are placed in a round bottom flask The DCM (400 ml) and THF (40 ml) were added and dissolved. The reaction mixture was stirred at room temperature overnight. Water (400 ml) was then added to the reaction mixture and the organic layer was separated and washed with water (2 × 400 ml) followed by saturated NaHCO 3 (300 ml) and brine (300 ml). The organic layer was then dried over Na 2 SO 4 . The solvent was removed on a rotary evaporator to give a white solid. The crude product was dissolved in chloroform (100 ml) and precipitated in heptane (1000 ml). The solid was collected by filtration, analyzed by HPLC and NMR and used without further purification.

適切な量のＰＭＯプラス（２０ｍｇ、２．８μｍｏｌ）を、バイアル（４ｍｌ）に秤量し、ＤＭＳＯ（５００μｌ）に溶解した。活性化コール酸エステル（１３ｍｇ、２５μｍｏｌ）を、１つの修飾部位あたりに、２当量の活性エステルの比率に基づいて、反応混合物に添加し、続けて、室温でオーバーナイト攪拌した。反応の進行を、ＭＡＬＤＩおよびＨＰＬＣ（Ｃ−１８またはＳＡＸ）により測定した。   The appropriate amount of PMO Plus (20 mg, 2.8 μmol) was weighed into a vial (4 ml) and dissolved in DMSO (500 μl). Activated cholic acid ester (13 mg, 25 μmol) was added to the reaction mixture based on the ratio of 2 equivalents of active ester per modification site, followed by overnight stirring at room temperature. The progress of the reaction was measured by MALDI and HPLC (C-18 or SAX).

前記反応が完了した後（開始ＰＭＯプラスの消滅により決定）、１ｍｌの濃アンモニアを、前記反応が完了した時点で、前記反応混合物に添加した。次いで、反応バイアルを、オーブン（４５℃）に、オーバーナイト（１８時間）入れ、続けて、室温に冷却し、水（１０ｍｌ）における１％のアンモニアで希釈した。このサンプルを、ＳＰＥカラム（２ｃｍ）に載せ、前記バイアルを、１％のアンモニア溶液（２×２ｍｌ）ですすいだ。前記ＳＰＥカラムを、水における１％のアンモニア（３×６ｍｌ）で洗浄し、生成物を、水（６ｍｌ）における１％のアンモニアにおける４５％アセトニトリルで溶出した。オリゴマーを含む画分を、ＵＶ光学密度測定により特定した。生成物を、凍結乾燥により単離した。純度および同一性を、ＭＡＬＤＩおよびＨＰＬＣ（Ｃ−１８および／またはＳＡＸ）により測定した。   After the reaction was complete (as determined by the disappearance of the starting PMO plus), 1 ml of concentrated ammonia was added to the reaction mixture when the reaction was complete. The reaction vial was then placed in an oven (45 ° C.) overnight (18 hours), followed by cooling to room temperature and diluting with 1% ammonia in water (10 ml). The sample was loaded onto a SPE column (2 cm) and the vial was rinsed with 1% ammonia solution (2 × 2 ml). The SPE column was washed with 1% ammonia in water (3 × 6 ml) and the product was eluted with 45% acetonitrile in 1% ammonia in water (6 ml). Fractions containing oligomers were identified by UV optical density measurement. The product was isolated by lyophilization. Purity and identity were determined by MALDI and HPLC (C-18 and / or SAX).

これと同じ手順は、デオキシコール酸活性化およびＰＭＯ＋への接合に適用可能である。 The same procedure is applicable to deoxycholic acid activation and conjugation to PMO + .

（実施例２４）
ＰＭＯプラスの全体的なグアニジニル化 (Example 24)
Overall guanidinylation of PMO plus

適切な量のＰＭＯプラス（２５ｍｇ、２．８μｍｏｌ）を、バイアル（６ｍｌ）に秤量した。１Ｈ−ピロゾール−１−カルボキサミジン塩化物（１５ｍｇ、１０２μｍｏｌ）および炭酸カリウム（２０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を、前記バイアルに添加した。水（５００μｌ）を添加し、反応混合物を、室温でオーバーナイト（約１８時間）攪拌した。反応の完了を、ＭＡＬＤＩにより決定した。 The appropriate amount of PMO plus (25 mg, 2.8 μmol) was weighed into a vial (6 ml). 1 H-Pyrozole-1-carboxamidine chloride (15 mg, 102 μmol) and potassium carbonate (20 mg, 0.15 mmol) were added to the vial. Water (500 μl) was added and the reaction mixture was stirred overnight at room temperature (about 18 hours). The completion of the reaction was determined by MALDI.

完了した時点で、前記反応を、水（１０ｍｌ）における１％のアンモニアで希釈し、ＳＰＥカラム（２ｃｍ）に載せた。前記バイアルを、１％のアンモニア溶液（２×２ｍｌ）ですすぎ、前記ＳＰＥカラムを、水における１％のアンモニア（３×６ｍｌ）で洗浄した。生成物を、水（６ｍｌ）における１％のアンモニアにおける４５％アセトニトリルで溶出した。オリゴマーを含む画分を、ＵＶ光学密度測定により特定した。生成物を、凍結乾燥により単離した。純度および同一性を、ＭＡＬＤＩおよびＨＰＬＣ（Ｃ−１８および／またはＳＡＸ）により測定した。   When complete, the reaction was diluted with 1% ammonia in water (10 ml) and loaded onto a SPE column (2 cm). The vial was rinsed with 1% ammonia solution (2 × 2 ml) and the SPE column was washed with 1% ammonia in water (3 × 6 ml). The product was eluted with 45% acetonitrile in 1% ammonia in water (6 ml). Fractions containing oligomers were identified by UV optical density measurement. The product was isolated by lyophilization. Purity and identity were determined by MALDI and HPLC (C-18 and / or SAX).

（実施例２５）
ＰＭＯプラス（Ｍ２３Ｄ）の全体的なチオアセチル修飾
(Example 25)
Overall thioacetyl modification of PMO plus (M23D)

適切な量のＰＭＯプラス（２０ｍｇ、２．３μｍｏｌ）を、バイアル（４ｍｌ）に秤量し、ＤＭＳＯ（５００μｌ）に溶解した。Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）（７ｍｇ、２８μｍｏｌ）を、反応混合物に添加し、室温でオーバーナイト攪拌させた。反応の進行を、ＭＡＬＤＩおよびＨＰＬＣによりモニターした。   An appropriate amount of PMO Plus (20 mg, 2.3 μmol) was weighed into a vial (4 ml) and dissolved in DMSO (500 μl). N-Succinimidyl-S-acetylthioacetate (SATA) (7 mg, 28 μmol) was added to the reaction mixture and allowed to stir overnight at room temperature. The progress of the reaction was monitored by MALDI and HPLC.

完了した時点で、水における１％のアンモニアを、前記反応混合物に添加し、室温で２時間攪拌した。この溶液を、ＳＰＥカラム（２ｃｍ）に載せた。前記バイアルを、１％のアンモニア溶液（２×２ｍｌ）ですすいだ。前記ＳＰＥカラムを、水における１％のアンモニア（３×６ｍｌ）で洗浄した。生成物を、水（６ｍｌ）における１％のアンモニアにおける４５％アセトニトリルで溶出した。オリゴマーを含む画分を、ＵＶ光学密度測定により特定した。生成物を、凍結乾燥により単離した。純度および同一性を、ＭＡＬＤＩおよびＨＰＬＣ（Ｃ−１８および／またはＳＡＸ）により測定した。   Once complete, 1% ammonia in water was added to the reaction mixture and stirred at room temperature for 2 hours. The solution was loaded onto a SPE column (2 cm). The vial was rinsed with 1% ammonia solution (2 × 2 ml). The SPE column was washed with 1% ammonia in water (3 × 6 ml). The product was eluted with 45% acetonitrile in 1% ammonia in water (6 ml). Fractions containing oligomers were identified by UV optical density measurement. The product was isolated by lyophilization. Purity and identity were determined by MALDI and HPLC (C-18 and / or SAX).

（実施例２６）
ＰＭＯプラスの全体的なコハク酸修飾
(Example 26)
Overall succinate modification of PMO plus

適切な量のＰＭＯプラス（３２ｍｇ、３．７μｍｏｌ）を、バイアル（４ｍｌ）に秤量し、ＤＭＳＯ（５００μｌ）に溶解した。Ｎ−エチルモルホリノ（１２ｍｇ、１００μｍｏｌ）および無水コハク酸（１０ｍｇ、１００μｍｏｌ）を、反応混合物に添加し、室温でオーバーナイト攪拌させた。反応の進行を、ＭＡＬＤＩおよびＨＰＬＣによりモニターした。   The appropriate amount of PMO Plus (32 mg, 3.7 μmol) was weighed into a vial (4 ml) and dissolved in DMSO (500 μl). N-ethylmorpholino (12 mg, 100 μmol) and succinic anhydride (10 mg, 100 μmol) were added to the reaction mixture and allowed to stir overnight at room temperature. The progress of the reaction was monitored by MALDI and HPLC.

完了した時点で、水における１％のアンモニアを、前記反応混合物に添加し、室温で２時間攪拌した。この溶液を、ＳＰＥカラム（２ｃｍ）に載せた。前記バイアルを、１％のアンモニア溶液（２×２ｍｌ）ですすいだ。前記ＳＰＥカラムを、水における１％のアンモニア（３×６ｍｌ）で洗浄した。生成物を、水（６ｍｌ）における１％のアンモニアにおける４５％アセトニトリルで溶出した。オリゴマーを含む画分を、ＵＶ光学密度測定により特定した。生成物を、凍結乾燥により単離した。純度および同一性を、ＭＡＬＤＩおよびＨＰＬＣ（Ｃ−１８および／またはＳＡＸ）により測定した。   Once complete, 1% ammonia in water was added to the reaction mixture and stirred at room temperature for 2 hours. The solution was loaded onto a SPE column (2 cm). The vial was rinsed with 1% ammonia solution (2 × 2 ml). The SPE column was washed with 1% ammonia in water (3 × 6 ml). The product was eluted with 45% acetonitrile in 1% ammonia in water (6 ml). Fractions containing oligomers were identified by UV optical density measurement. The product was isolated by lyophilization. Purity and identity were determined by MALDI and HPLC (C-18 and / or SAX).

上記手順を、さらに、ＰＭＯプラスのグルタル酸（無水グルタル酸）およびテトラメチレングルタル酸（無水テトラメチレングルタル酸）修飾に適応した。
The above procedure was further adapted to PMO plus glutaric acid (glutaric anhydride) and tetramethylene glutaric acid (tetramethylene glutaric anhydride) modification.

（実施例２７）
修飾末端基を含むオリゴヌクレオチド類似体の調製 (Example 27)
Preparation of oligonucleotide analogues containing modified end groups

ＤＭＳＯ（３００μＬ）における、結合していない３’端を含む、２５塩基長のＰＭＯ（２７．７ｍｇ、３．２２６μｍｏｌ）の溶液に、臭化ファルネシル（１．７５μｌ、６．４５２μｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（２．２４μＬ、１２．９μｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で５時間攪拌した。前記粗製反応混合物を、１０ｍＬの１％のＮＨ４ＯＨ水溶液で希釈し、次いで、２ｍＬのＡｍｂｅｒｃｈｒｏｍｅ ＣＧ３００Ｍカラムに載せた。次いで、前記カラムを、カラムの３倍量の水ですすいだ。生成物を、６ｍＬの、１：１ アセトニトリルおよび水（ｖ／ｖ）で溶出した。次いで、前記溶液を、凍結乾燥して、白色の固形物として、表題の化合物を得た。 Farnesyl bromide (1.75 μl, 6.452 μmol) and diisopropylethylamine (1.75 μl, 6.452 μmol) in a solution of 25 base length PMO (27.7 mg, 3.226 μmol) in DMSO (300 μL), including the unbound 3 'end 2.24 μL, 12.9 μmol) were added. The reaction mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The crude reaction mixture was diluted with 10 mL of 1% aqueous NH 4 OH and then loaded onto a 2 mL Amberchrome CG300M column. The column was then rinsed with 3 column volumes of water. The product was eluted with 6 mL of 1: 1 acetonitrile and water (v / v). The solution was then lyophilized to give the title compound as a white solid.

（実施例２８）
モルホリノオリゴマーの調製
トリチルピペラジンフェニルカルバマート３５（図３を参照のこと）の調製：
ジクロロメタン（６ｍＬ／ｇ １１）における化合物１１の冷却懸濁液に、水（４ｍＬ／ｇ 炭酸カリウム）における炭酸カリウムの溶液（３．２当量）を添加した。この二相混合物に、ジクロロメタン（２ｇ／ｇ フェニルクロロギ酸）におけるフェニルクロロギ酸の溶液（１．０３当量）を、ゆっくり添加した。反応混合物を、２０℃に温めた。反応完了（１〜２時間）の状態で、前記層を分離した。有機層を、水で洗浄し、無水炭酸カリウムで乾燥させた。生成物３５を、アセトニトリルから結晶化により単離した。収率＝８０％。 (Example 28)
Preparation of morpholino oligomers Preparation of trityl piperazine phenyl carbamate 35 (see FIG. 3):
To a cooled suspension of compound 11 in dichloromethane (6 mL / g 11) was added a solution of potassium carbonate (3.2 equivalents) in water (4 mL / g potassium carbonate). To this biphasic mixture, a solution of phenyl chloroformate (1.03 equivalents) in dichloromethane (2 g / g phenyl chloroformate) was added slowly. The reaction mixture was warmed to 20.degree. The layers were separated when the reaction was complete (1-2 hours). The organic layer was washed with water and dried over anhydrous potassium carbonate. The product 35 was isolated by crystallization from acetonitrile. Yield = 80%.

カルバミン酸アルコール３６の調製：
水素化ナトリウム（１．２当量）を、１−メチル−２−ピロリジノン（３２ｍＬ／ｇ 水素化ナトリウム）に懸濁した。この懸濁液に、トリエチレングリコール（１０．０当量）および化合物３５（１．０当量）を添加した。得られたスラリーを、９５℃に加熱した。反応完了（１〜２時間）の状態で、混合物を、２０℃に冷却した。この混合物に、３０％のジクロロメタン／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ｖ：ｖ）および水を添加した。引き続いて、生成物含有有機層を、ＮａＯＨ水溶液、コハク酸水溶液および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。生成物３６を、ジクロロメタン／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル／ヘプタンから、結晶化により単離した。収率＝９０％。 Preparation of carbamic acid alcohol 36:
Sodium hydride (1.2 eq) was suspended in 1-methyl-2-pyrrolidinone (32 mL / g sodium hydride). To this suspension was added triethylene glycol (10.0 equivalents) and compound 35 (1.0 equivalents). The resulting slurry was heated to 95 ° C. At reaction completion (1-2 hours), the mixture was cooled to 20 ° C. To this mixture was added 30% dichloromethane / methyl tert-butyl ether (v: v) and water. Subsequently, the product-containing organic layer was washed with aqueous NaOH solution, aqueous succinic acid solution and aqueous saturated sodium chloride solution. The product 36 was isolated by crystallization from dichloromethane / methyl tert-butyl ether / heptane. Yield = 90%.

テール酸（ｔａｉｌ ａｃｉｄ）３７の調製：
テトラヒドロフラン（７ｍＬ／ｇ ３６）における化合物３６の溶液に無水コハク酸（２．０当量）およびＤＭＡＰ（０．５当量）を添加した。混合物を、５０℃に加熱した。反応完了（５時間）の状態で、前記混合物を、２０℃に冷却し、ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８．５に調節した。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを添加し、生成物を、水層中に抽出した。ジクロロメタンを添加し、混合物を、クエン酸水溶液でｐＨ３に調節した。生成物含有有機層を、ｐＨ＝３の、クエン酸緩衝液と飽和塩化ナトリウム水溶液との混合物で洗浄した。３７のジクロロメタン溶液を単離せずに、化合物３８の調製に使用した。 Preparation of tail acid 37:
Succinic anhydride (2.0 eq) and DMAP (0.5 eq) were added to a solution of compound 36 in tetrahydrofuran (7 mL / g 36). The mixture was heated to 50.degree. At reaction completion (5 h), the mixture was cooled to 20 ° C. and adjusted to pH 8.5 with aqueous NaHCO 3 solution. Methyl tert-butyl ether was added and the product was extracted into the aqueous layer. Dichloromethane was added and the mixture was adjusted to pH 3 with aqueous citric acid solution. The product-containing organic layer was washed with a mixture of citrate buffer and saturated aqueous sodium chloride at pH = 3. The 37 dichloromethane solution was used for the preparation of compound 38 without isolation.

３８の調製：
化合物３７の前記溶液に、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボン酸イミド（ＨＯＮＢ）（１．０２当量）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．３４当量）を添加し、次いで、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（１．１当量）を添加した。混合物を、５５℃に加熱した。反応完了（４〜５時間）の状態で、前記混合物を、２０℃に冷却し、引き続いて、１：１ ０．２Ｍクエン酸／塩水、および塩水で洗浄した。前記ジクロロメタン溶液を、アセトンに溶媒交換し、次いで、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶媒交換した。生成物を、アセトン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドから、飽和塩化ナトリウム水溶液中への沈殿により単離した。粗生成物を、水に複数回、再スラリー化して、残ったＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよび塩を除去した。化合物３６からの３８への収率＝７０％。ジスルフィドアンカー樹脂上への、活性型「テール（Ｔａｉｌ）」の導入を、固相合成中に、サブユニットの取り込みに使用される手順により、ＮＭＰにおいて行った。 Preparation of 38:
N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide (HONB) (1.02 equivalents), 4-dimethylaminopyridine (DMAP) (0.34 equivalents) are added to the solution of compound 37, Then 1- (3-Dimethylaminopropyl) -N'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) (1.1 eq.) Was added. The mixture was heated to 55 ° C. At reaction completion (4-5 hours), the mixture was cooled to 20 ° C. and subsequently washed with 1: 1 0.2 M citric acid / brine and brine. The dichloromethane solution was solvent exchanged to acetone and then to N, N-dimethylformamide. The product was isolated from acetone / N, N-dimethylformamide by precipitation into saturated aqueous sodium chloride solution. The crude product was reslurried multiple times in water to remove remaining N, N-dimethylformamide and salts. Yield to compound 38 from 38 = 70%. Introduction of activated "Tail" onto the disulfide anchor resin was performed in NMP by the procedure used for subunit incorporation during solid phase synthesis.

モルホリノオリゴマーの合成用固体支持体の調製：
この手順を、粗大気孔群（４０〜６０μｍ）のガラスフリット、オーバーヘッドスターラーおよび、前記フリットによるＮ２のバブリングまたは真空抽出のための、３方向テフロン（登録商標）コックを有する、シラン化、被覆ペプチド容器（ＣｈｅｍＧｌａｓｓ、ＮＪ、ＵＳＡによる特注）において行った。温度制御を、循環水浴により、前記反応容器において達成した。 Preparation of solid supports for the synthesis of morpholino oligomers:
This procedure consists of a glass frit of coarse air holes (40-60 μm), an overhead stirrer, and a silanized, coated peptide with a 3-way Teflon® cock for bubbling or vacuum extraction of N 2 with said frit. It was carried out in a vessel (custom order by ChemGlass, NJ, USA). Temperature control was achieved in the reaction vessel by means of a circulating water bath.

下記の手順における樹脂処理／洗浄工程は、２つの基本的な操作：樹脂流体化および溶媒／溶液抽出からなる。樹脂流体化に関して、前記コックを、Ｎ２が前記フリットを通して流れ込むように位置させ、特定の樹脂処理／洗浄を、前記反応器に添加し、充満させ、完全に前記樹脂を湿らせた。次いで、混合を開始し、樹脂スラリーを所定の時間混合した。溶媒／溶液抽出に関して、混合およびＮ２フローを停止し、真空ポンプを開始し、次いで、前記コックを、樹脂処理／洗浄から廃棄物に排出するように位置させた。全ての樹脂処理／洗浄容量を、特に断らない限り、１５ｍＬ／ｇの樹脂とした。 The resin treatment / washing step in the following procedure consists of two basic operations: resin fluidization and solvent / solution extraction. For resin fluidization, the cock was positioned so that N 2 flowed through the frit and specific resin treatment / washing was added to the reactor to fill and completely wet the resin. Then, mixing was started, and the resin slurry was mixed for a predetermined time. For solvent / solution extraction, stop mixing and N 2 flow, start vacuum pump, then place the faucet to drain waste from resin treatment / wash. All resin processing / washing volumes were 15 mL / g resin unless otherwise stated.

シラン化、被覆ペプチド容器における、アミノメチルポリスチレン樹脂（１００〜２００メッシュ；約１．０ｍｍｏｌ／ｇ Ｎ２置換；７５ｇ、１当量、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｓ、ＵＫ、ｐａｒｔ＃１４６４−Ｘ７９９）に、１−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ；２０ｍｌ／ｇ 樹脂）を添加し、１〜２時間混合しながら、樹脂を膨張させた。続けて、前記膨張した溶媒を排出し、前記樹脂を、ジクロロメタン（２×１〜２分）、２５％イソプロパノール／ジクロロメタンにおける、５％のジイソプロピルエチルアミン（２×３〜４分）およびジクロロメタン（２×１〜２分）で洗浄した。最後の洗浄の排出後、前記樹脂を、１−メチル−２−ピロリジノンにおけるジスルフィドアンカー３４（０．１７Ｍ；１５ｍＬ／ｇ 樹脂、約２．５当量）の溶液で流体化し、前記樹脂／試薬混合物を、４５℃で６０時間加熱した。反応完了の状態で、加熱を完了し、前記アンカー溶液を廃棄し、前記樹脂を、１−メチル−２−ピロリジノン（４×３−４分）およびジクロロメタン（６×１〜２分）で洗浄した。前記樹脂を、ジクロロメタンにおける１０％（ｖ／ｖ）の重炭酸ジエチルの溶液（１６ｍＬ／ｇ；２×５〜６分）で処理し、次いで、ジクロロメタン（６×１〜２分）で洗浄した。樹脂３９（図４を参照のこと）を、Ｎ２の流れ下で１〜３時間、次いで真空下において、一定重量（±２％）に乾燥させた。収率：元の樹脂重量の１１０〜１５０％。 Aminomethyl polystyrene resin (100-200 mesh; about 1.0 mmol / g N 2 substitution; 75 g, 1 equivalent, Polymer Labs, UK, part # 1464-X799) in a silanized, coated peptide container, 1-methyl- 2-Pyrrolidinone (NMP; 20 ml / g resin) was added and the resin was allowed to swell while mixing for 1 to 2 hours. The expelled solvent is subsequently drained off and the resin is dissolved in dichloromethane (2 × 1-2 minutes), 5% diisopropylethylamine (2 × 3-4 minutes) in 25% isopropanol / dichloromethane and dichloromethane (2 × 1 to 2 minutes). After draining the last wash, fluidize the resin with a solution of disulfide anchor 34 (0.17 M; 15 mL / g resin, approximately 2.5 equivalents) in 1-methyl-2-pyrrolidinone, and mix the resin / reagent mixture And heated at 45 ° C. for 60 hours. Upon reaction completion, heating was complete, the anchor solution was discarded, and the resin was washed with 1-methyl-2-pyrrolidinone (4 × 3 to 4 minutes) and dichloromethane (6 × 1 to 2 minutes) . The resin was treated with a solution of 10% (v / v) diethyl bicarbonate (16 mL / g; 2 × 5-6 minutes) in dichloromethane and then washed with dichloromethane (6 × 1-2 minutes). Resin 39 (see FIG. 4) was dried to constant weight (± 2%) under a stream of N 2 for 1 to 3 hours and then under vacuum. Yield: 110-150% of the original resin weight.

アミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂の電荷の測定：
前記樹脂の電荷（利用できる可能性のある反応性部位の数）を、樹脂１グラムあたりのトリフェニルメチル（トリル）基の数についての、分光アッセイにより測定した。 Measurement of charge of aminomethyl polystyrene-disulfide resin:
The charge of the resin (number of potential reactive sites available) was determined by spectroscopic assay for the number of triphenylmethyl (tolyl) groups per gram of resin.

既知の重量の乾燥樹脂（２５±３ｍｇ）を、容積２５ｍｌの、シラン化フラスコに移し、約５ｍＬの、ジクロロメタンにおける２％（ｖ／ｖ）のトリフルオロ酢酸を添加した。内容物を、穏やかに攪拌することにより混合し、次いで、３０分間静置した。容量を、更なるジクロロメタンにおける２％（ｖ／ｖ）のトリフルオロ酢酸で２５ｍＬにし、内容物を完全に混合した。容積式ピペットを使用して、トリチル含有溶液のアリコート（５００μＬ）を、容積１０ｍＬのフラスコに移し、容積を、メタンスルホン酸で１０ｍＬにした。   A dry resin (25 ± 3 mg) of known weight was transferred to a silanization flask with a volume of 25 ml and about 5 mL of 2% (v / v) of trifluoroacetic acid in dichloromethane was added. The contents were mixed by gentle stirring and then allowed to stand for 30 minutes. The volume was brought to 25 mL with additional 2% (v / v) trifluoroacetic acid in dichloromethane and the contents mixed thoroughly. Using a positive displacement pipette, an aliquot (500 μL) of the trityl containing solution was transferred to a 10 mL volumetric flask and the volume was brought to 10 mL with methanesulfonic acid.

最終的な溶液におけるトリチルカチオン含量を、４３１．７ｎｍでのＵＶ吸光度により測定し、前記樹脂の電荷を、樹脂１ｇあたりのトリチル基（μｍｏｌ／ｇ）において、適切な容量、希釈、吸光度係数（ε：４１μｍｏｌ−１ｃｍ−１）および樹脂重量を使用して算出した。前記アッセイを３回行い、平均電荷を算出した。 The trityl cation content in the final solution is measured by UV absorbance at 431.7 nm, and the charge of the resin is determined at the appropriate volume, dilution, absorbance coefficient (ε) at trityl groups (μmol / g) per gram of resin. : 41μmol -1 cm -1) and was calculated using the resin weight. The assay was performed three times and the average charge was calculated.

本実施例における樹脂電荷手順により、おおよそ５００μｍｏｌ／ｇの電荷を有する樹脂が提供されるであろう。前記ジスルフィドアンカー取り込み工程を、室温で２４時間行う場合、３００〜４００μｍｏｌ／ｇの電荷が得られた。   The resin charge procedure in this example will provide a resin with a charge of approximately 500 μmol / g. When the disulfide anchor incorporation step is performed for 24 hours at room temperature, a charge of 300 to 400 μmol / g was obtained.

テール電荷：
アミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂の調製と同様の設定および容量を使用して、前記テールが、前記分子に導入され得る。連結工程に関して、４−エチルモルホリン（ＮＥＭ、０．４Ｍ）を含むＮＭＰにおける、３８の溶液（０．２Ｍ）を、前記ジスルフィドアンカー溶液の代わりに使用した。４５℃で２時間後、２５％のイソプロパノール／ジクロロメタンにおける、５％のジイソプロピルエチルアミンで２回、ＤＣＭで１回、樹脂３９を洗浄した。安息香酸無水物（０．４Ｍ）およびＮＥＭ（０．４Ｍ）の溶液を、前記樹脂に添加した。２５分後、反応器ジャケットを、室温に冷却し、前記樹脂を、２５％のイソプロパノール／ジクロロメタンにおける、５％のジイソプロピルエチルアミンで２回、および、ＤＣＭで８回洗浄した。樹脂４０をろ過し、高真空下において乾燥させた。樹脂４０についての電荷を、前記テール電荷に使用した元のアミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂３９の電荷であると規定した。 Tail charge:
The tail can be introduced into the molecule using settings and volumes similar to the preparation of aminomethyl polystyrene-disulfide resin. For the coupling step, a solution of 38 (0.2 M) in NMP containing 4-ethylmorpholine (NEM, 0.4 M) was used instead of the disulfide anchor solution. After 2 hours at 45 ° C., resin 39 was washed twice with 5% diisopropylethylamine in 25% isopropanol / dichloromethane and once with DCM. A solution of benzoic anhydride (0.4 M) and NEM (0.4 M) was added to the resin. After 25 minutes, the reactor jacket was cooled to room temperature and the resin was washed twice with 5% diisopropylethylamine in 25% isopropanol / dichloromethane and 8 times with DCM. The resin 40 was filtered and dried under high vacuum. The charge for resin 40 was defined as the charge of the original aminomethyl polystyrene-disulfide resin 39 used for the tail charge.

固相合成：
モルホリノオリゴマーを、Ｇｉｌｓｏｎ ＡＭＳ−４２２ 自動ペプチド合成機における２ｍＬのＧｉｌｓｏｎポリプロピレン反応カラム（Ｐａｒｔ＃３９８０２７０）において調製した。水流用の流路を有するアルミニウムブロックを、前記合成機上に位置するように、前記カラムの周りに置いた。前記ＡＭＳ−４２２は、二者択一的に、試薬／洗浄溶液を添加し、特定時間保持し、真空を使用してカラムを廃棄するであろう。 Solid phase synthesis:
The morpholino oligomers were prepared on a 2 mL Gilson polypropylene reaction column (Part # 3980270) on a Gilson AMS-422 automated peptide synthesizer. An aluminum block having a water flow path was placed around the column so as to be located on the synthesizer. The AMS-422 will alternatively add reagent / wash solution, hold for a specific time, and use vacuum to discard the column.

長さ約２５個のサブユニット以下の範囲におけるオリゴマーに関して、５００μｍｏｌ／ｇ樹脂付近の電荷を有するアミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂が好ましい。より大きいオリゴマーに関して、３００−４００μｍｏｌ／ｇ樹脂の電荷を有するアミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂が好ましい。５’−テールを有する分子が望まれる場合、テールにより電荷された樹脂が、同様の電荷指針により選択される。   For oligomers in the range of about 25 subunits or less in length, aminomethyl polystyrene-disulfide resins having a charge near 500 μmol / g resin are preferred. For larger oligomers, aminomethyl polystyrene-disulfide resins with a charge of 300-400 μmol / g resin are preferred. If a molecule with a 5'-tail is desired, the resin charged by the tail is selected by the same charge regime.

下記の試薬溶液を調製した。
脱トリチル溶液：４：１のジクロロメタン／アセトニトリルにおける、１０％のシアノ酢酸（ｗ／ｖ）；中和溶液：３：１のジクロロメタン／イソプロパノールにおける、５％のジイソプロピルエチルアミン；連結溶液：１，３−ジメチルイミダゾリジノンにおける、所望の塩基およびリンケージ型の、０．１８Ｍ（または、２０個のサブユニットより長い伸長を有するオリゴマーに関して、０．２４Ｍ）活性化モルホリノサブユニット、および、０．４Ｍ Ｎエチルモルホリン。ジクロロメタン（ＤＣＭ）を、異なる試薬溶液洗浄液を分離する暫定的な洗浄液として使用した。 The following reagent solutions were prepared.
Detrityl solution: 10% cyanoacetic acid (w / v) in 4: 1 dichloromethane / acetonitrile; neutralization solution: 5% diisopropylethylamine in 3: 1 dichloromethane / isopropanol; coupling solution: 1,3- Desired base and linkage type of 0.18 M (or 0.24 M for an oligomer with an extension longer than 20 subunits) in dimethylimidazolidinone, and 0.4 M N ethyl and Morpholine. Dichloromethane (DCM) was used as an interim wash to separate different reagent solution washes.

前記合成機において、前記ブロックを、４２℃に設定し、３０ｍｇのアミノメチルポリスチレン−ジスルフィド樹脂（またはテール樹脂）を含む各カラムに、２ｍＬの１−メチル−２−ピロリジノンを添加し、室温
に３０分間静置した。２ｍＬのジクロロメタンで２回洗浄した後、下記の合成サイクルを使用した。 In the synthesizer, set the block to 42 ° C., add 2 mL of 1-methyl-2-pyrrolidinone to each column containing 30 mg of aminomethyl polystyrene-disulfide resin (or tail resin), 30 at room temperature Let stand for a minute. After washing twice with 2 mL of dichloromethane, the following synthesis cycle was used.

各カラムが適切な配列における適切な連結溶液（Ａ、Ｃ、Ｇ，Ｔ、Ｉ）を受け取るように、個々のオリゴマーの配列を、前記合成機にプログラムした。カラムにおける前記オリゴマーが、その最後のサブユニットの取り込みを完了した場合、前記カラムを、前記ブロックから取り出し、最終的なサイクルを、０．８９Ｍ ４−エチルモノホリンを含む、４−メトキシトリフェニルメチル塩化物を含んだ連結溶液（ＤＭＩにおける０．３２Ｍ）により、手動で行った。   The sequences of the individual oligomers were programmed into the synthesizer such that each column received the appropriate ligation solution (A, C, G, T, I) in the appropriate sequence. If the oligomer in the column has completed its uptake of its last subunit, the column is removed from the block and the final cycle is 4-methoxytriphenylmethyl containing 0.89 M 4-ethyl monophorin The manual was done with a ligation solution containing chloride (0.32 M in DMI).

前記樹脂からの開裂、塩基および骨格保護基の除去：
メトキシトリチル化後に、前記樹脂を、２ｍＬの１−メチル−２−ピロリジノンで８回洗浄した。１ｍＬの、１−メチル−２−ピロリジノンにおける、０．１Ｍ １，４−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）および０．７３Ｍ トリエチルアミンからなる開裂溶液を添加し、前記カラムのふたをし、室温で３０分間静置した。その時間後、前記溶液を、１２ｍＬのＷｈｅａｔｏｎバイアル内に排出した。非常に収縮した樹脂を、３００μＬの開裂溶液で２回洗浄した。前記溶液に、４．０ｍＬの濃アンモニア水溶液（−２０℃で保存）を添加し、しっかりバイアルのふた（テフロン（登録商標）裏打ちのスクリューキャップ）をし、混合物を、前記溶液を混合するために攪拌した。前記バイアルを、４５℃のオーブンに、１６〜２４時間置き、塩基および骨格保護基の開裂を達成した。 Cleavage from the resin, removal of the base and backbone protecting groups:
After methoxytritylation, the resin was washed eight times with 2 mL of 1-methyl-2-pyrrolidinone. Add a cleavage solution consisting of 0.1 M 1,4-dithiothreitol (DTT) and 0.73 M triethylamine in 1 mL of 1-methyl-2-pyrrolidinone, cap the column and allow to sit for 30 minutes at room temperature. Placed. After that time, the solution was drained into a 12 mL Wheaton vial. The highly shrunk resin was washed twice with 300 μL of cleavage solution. To the solution, add 4.0 mL of concentrated aqueous ammonia solution (stored at -20 ° C), tightly cap the vial (Teflon® lined screw cap) and mix the solution to mix the solution It stirred. The vial was placed in an oven at 45 ° C. for 16 to 24 hours to achieve base and backbone protecting group cleavage.

初期のオリゴマー単離：
バイアルに入った加アンモニア分解溶液を、前記オーブンから取り出し、室温に冷却させた。前記溶液を、２０ｍＬの、０．２８％のアンモニア水溶液で希釈し、Ｍａｃｒｏｐｒｅｐ ＨＱ樹脂（ＢｉｏＲａｄ）を含む、２．５×１０ｃｍのカラムに通した。塩勾配（Ａ：０．２８％のアンモニアと、Ｂ：０．２８％のアンモニアにおける１Ｍ 塩化ナトリウム；０〜１００％Ｂ、６０分）を使用して、メトキシトリチル含有ピークを溶出した。合わせた画分をプールし、さらに、所望の生成物に応じて処理した。 Initial Oligomer Isolation:
The ammolysis solution contained in the vial was removed from the oven and allowed to cool to room temperature. The solution was diluted with 20 mL of 0.28% aqueous ammonia and passed through a 2.5 × 10 cm column containing Macroprep HQ resin (BioRad). The methoxytrityl containing peak was eluted using a salt gradient (A: 0.28% ammonia, B: 1 M sodium chloride in 0.28% ammonia; 0-100% B, 60 minutes). The combined fractions were pooled and further processed depending on the desired product.

モルホリノオリゴマーの脱メトキシトリチル化：
前記Ｍａｃｒｏｐｒｅｐ精製からの前記プール画分を、ｐＨ２．５以下で、１Ｍ Ｈ３ＰＯ４で処理した。最初の混合後、サンプルを、室温に４分間静置した。その時点で、前記サンプルを、２．８％のアンモニア／水で、ｐＨ１０−１１に中和した。生成物を、固相抽出（ＳＰＥ）により精製した。 Demethoxytritylation of morpholino oligomers:
The pooled fractions from the Macroprep purification were treated with 1M H 3 PO 4 at pH 2.5 or less. After initial mixing, the sample was allowed to stand at room temperature for 4 minutes. At that point, the sample was neutralized to pH 10-11 with 2.8% ammonia / water. The product was purified by solid phase extraction (SPE).

Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍｅ ＣＧ−３００Ｍ（Ｒｏｈｍ ａｎｄ Ｈａａｓ；Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ）（３ｍＬ）を、２０ｍＬのフリットカラム（ＢｉｏＲａｄ Ｅｃｏｎｏ−Ｐａｃ クロマトグラフィーカラム（７３２〜１０１１））に詰め、前記樹脂を、３ｍＬの下記：０．２８％ＮＨ４ＯＨ／８０％アセトニトリル；０．５Ｍ ＮａＯＨ／２０％エタノール；水；５０ｍＭ Ｈ３ＰＯ４／８０％アセトニトリル；水；０．５ ＮａＯＨ／２０％エタノール；水；０．２８％のＮＨ４ＯＨですすいだ。 Amberchrome CG-300M (Rohm and Haas; Philadelphia, PA) (3 mL) is packed in a 20 mL fritted column (BioRad Econo-Pac chromatography column (732-1011)), and the resin is added to 3 mL of the following: 0.28 % NH 4 OH / 80% acetonitrile; 0.5 M NaOH / 20% ethanol; water; 50 mM H 3 PO 4 /80% acetonitrile; water; 0.5 NaOH / 20% ethanol; water; 0.28% NH 4 It was rinsing with OH.

脱メトキシトリチル化からの溶液を、前記カラムに載せ、前記樹脂を、３〜６ｍＬの０．２８％のアンモニア水溶液で３回すすいだ。Ｗｈｅａｔｏｎバイアル（１２ｍＬ）を、前記カラムの下に置き、生成物を、２ｍＬの、０．２８％のアンモニア水溶液における４５％のアセトニトリルでの、２回の洗浄により溶出させた。前記溶液を、ドライアイスで凍結させ、前記バイアルを、凍結乾燥機に入れて、ふわふわした白色の粉末を生成した。サンプルを水に溶解し、シリンジを使用して、０．２２ミクロンフィルタ（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、０．２ミクロンのＨＴ Ｔｕｆｆｒｙｎ膜を有する、Ａｃｒｏｄｉｓｃ ２５ｍｍシリンジフィルタ）を通してろ過した。光学密度（ＯＤ）を、ＵＶ分光計で測定して、存在するオリゴマーのＯＤ単位、および、分析用の投与サンプルを決定した。次いで、前記溶液を、凍結乾燥用のＷｈｅａｔｏｎバイアルに入れ直した。   The solution from demethoxytritylation was loaded onto the column and the resin was rinsed 3 times with 3-6 mL of 0.28% aqueous ammonia solution. A Wheaton vial (12 mL) was placed under the column and the product was eluted by two washes with 2 mL of 45% acetonitrile in 0.28% aqueous ammonia. The solution was frozen on dry ice and the vial was placed in a lyophilizer to produce a fluffy white powder. The sample was dissolved in water and filtered through a 0.22 micron filter (Pall Life Sciences, Acrodisc 25 mm syringe filter with a 0.2 micron HT Tuffryn membrane) using a syringe. Optical density (OD) was measured with a UV spectrometer to determine the OD units of oligomers present and the dose sample for analysis. The solution was then placed back in a Wheaton vial for lyophilization.

モルホリノオリゴマーの分析：
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析計を、精製における画分の組成を決定し、前記オリゴマーの同一性（分子量）についての証拠を提供するのに使用した。マトリクスとして、３，５−ジメトキシ−４−ヒドロキシケイ皮酸（シナピン酸）、３，４，５−トリヒドロキシアセトフェノン（ｔｒｉｈｙｄｏｘｙａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ）（ＴＨＡＰ）またはアルファ−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸（ａｌｐｈａ−ｃｙａｎｏ−４−ｈｙｄｏｘｙｃｉｎｎａｍｉｃ ａｃｉｄ）（ＨＣＣＡ）の溶液で、サンプルの希釈を行った。 Analysis of morpholino oligomers:
A MALDI-TOF mass spectrometer was used to determine the composition of the fractions in the purification and to provide evidence for the identity (molecular weight) of the oligomers. As a matrix, 3,5-dimethoxy-4-hydroxycinnamic acid (sinapic acid), 3,4,5-trihydroxyacetophenone (THAP) or alpha-cyano-4-hydroxycinnamic acid (alpha-cyano) The sample was diluted with a solution of -4-hydroxycinnamic acid (HCCA).

Ｄｉｏｎｅｘ ＰｒｏＰａｃ ＳＣＸ−１０、４×２５０ｍｍカラム（Ｄｉｏｎｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用し、２５ｍＭ ｐＨ＝５の、酢酸ナトリウム ２５％アセトニトリル（緩衝液Ａ）および、２５ｍＭ ｐＨ＝５の、酢酸ナトリウム ２５％アセトニトリル １．５Ｍ 塩化カリウム（緩衝液Ｂ）（１５分で、勾配 Ｂ１０〜１００％）または、ｐＨ＝３．５での、２５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４ ２５％アセトニトリル（緩衝液Ａ）および、ｐＨ＝３．５での、１．５Ｍ 塩化カリウムを含む２５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４ ２５％アセトニトリル（緩衝液Ｂ）（１５分で、勾配 Ｂ０〜３５％）を使用して、カチオン交換（ＳＣＸ）ＨＰＬＣを行った。前者の系を、付着したペプチドを有さない、正電荷を有するオリゴマーに使用した。一方、後者を、ペプチドコンジュゲートに使用した。 Dionex ProPac SCX-10, 4 × 250 mm column (Dionex Corporation; Sunnyvale, Calif.), 25 mM pH = 5, sodium acetate 25% acetonitrile (buffer A) and 25 mM pH = 5, sodium acetate 25% Acetonitrile 1.5 M potassium chloride (buffer B) (15 min, gradient B 10-100%) or 25 mM KH 2 PO 4 25% acetonitrile (buffer A) at pH = 3.5, pH = 3 Cation Exchange (SCX) HPLC was performed using 25 mM KH 2 PO 4 25% acetonitrile (buffer B) with 1.5 M potassium chloride (buffer B at 15 minutes, gradient at 0. 5) . The former system was used for positively charged oligomers without attached peptides. On the other hand, the latter was used for peptide conjugates.

カチオン交換クロマトグラフィーによるモルホリノオリゴマーの精製：
サンプルを、２０ｍＭ 酢酸ナトリウム、ｐＨ＝４．５（緩衝液Ａ）に溶解し、Ｓｏｕｒｃｅ３０カチオン交換樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のカラムにアプライし、２０ｍＭ 酢酸ナトリウムおよび４０％アセトニトリルにおける０．５Ｍ 塩化ナトリウムｐＨ＝４．５（緩衝液Ｂ）の勾配で溶出した。生成物を含むプール画分を、濃アンモニア水溶液で中和し、Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍｅ ＳＰＥカラムにアプライした。生成物を、上記と同様に、溶出、凍結および凍結乾燥した。 Purification of morpholino oligomers by cation exchange chromatography:
The sample is dissolved in 20 mM sodium acetate, pH = 4.5 (buffer A), applied to a column of Source 30 cation exchange resin (GE Healthcare), 0.5 M sodium chloride pH = 20 mM sodium acetate and 40% acetonitrile Elution was with a gradient of 4.5 (buffer B). The pooled fractions containing the product were neutralized with concentrated aqueous ammonia and applied to an Amberchrome SPE column. The product was eluted, frozen and lyophilized as described above.

（実施例２９）
典型的なコンジュゲートの調製 (Example 29)
Preparation of a typical conjugate

ペプチド配列ＡｃＲ６Ｇを、当該分野において公知の標準的なペプチド合成法に基づいて調製した。ＤＭＳＯ（３ｍＬ）における、前記ＰＭＯ（ＮＧ−０５−０２５５、３’−Ｈ：Ｍ２３Ｄ：５’−ＥＧ３、ｍｄｘマウスのエクソン２３に結合する配列、３５０ｍｇ、１当量）、ＡｃＲ６Ｇ（１４２ｍｇ、２当量）、ＨＡＴＵ（３１ｍｇ、２当量）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（３６μＬ、５当量）を、室温で添加した。１時間後、反応を後処理し、所望のペプチド−オリゴマーコンジュゲートを、ＳＣＸクロマトグラフィー（勾配による溶出：Ａ：２５％アセトニトリル／Ｈ２Ｏにおける２０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．０；Ｂ：２５％アセトニトリル／Ｈ２Ｏにおける１．５Ｍ グアニジンＨＣｌおよび２０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．０）により精製した。合わせた画分を、固相抽出（１Ｍ ＮａＣｌ、続けて水による溶出）に供した。凍結乾燥後に、前記コンジュゲートを、白色の粉末（２５７ｍｇ、収率６５．５％）として得た。 The peptide sequence AcR 6 G was prepared based on standard peptide synthesis methods known in the art. The above PMO (NG-05-0255, 3'-H: M23D: 5'-EG3, a sequence binding to exon 23 of mdx mouse, 350 mg, 1 equivalent) in DMSO (3 mL), AcR 6 G (142 mg, 2 To a solution of HATU (31 mg, 2 eq.), Diisopropylethylamine (36 μL, 5 eq.) Was added at room temperature. After 1 hour, the reaction is worked up and the desired peptide-oligomer conjugate is purified by SCX chromatography (elution by gradient: A: 20 mM NaH 2 PO 4 in 25% acetonitrile / H 2 O, pH 7.0; B: 25 % With 0.1 M guanidine HCl and 20 mM NaH 2 PO 4 , pH 7.0) in% acetonitrile / H 2 O. The combined fractions were subjected to solid phase extraction (1 M NaCl followed by elution with water). After lyophilization, the conjugate was obtained as a white powder (257 mg, 65.5% yield).

（実施例３０）
本発明の典型的なコンジュゲートによるＭＤＸマウスの処置
前記ＭＤＸマウスは、承認され、ジストロフィン遺伝子のｅｘｓｏｎ２３に変異を含むデュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）についての動物モデルとして十分特徴付けられている。Ｍ２３Ｄアンチセンス配列（配列番号：１５）は、エクソン２３のスキッピングおよび機能性ジストロピン発現の修復を誘導することが知られている。ＭＤＸマウスを、下記コンジュゲートの１つで、尾静脈注射により、１回（５０ｍｇ／ｋｇ）投与した。
１．5’-EG3-M23D-BX(RXRRBR)2 (AVI5225);
２．5’-EG3-M23D-G(R)5 (NG-11-0045);
３．5’-EG3-M23D-G(R)6 (NG-11-0009);
４．5’-EG3-M23D-G(R)7 (NG-11-0010);または、
５．5’-EG3-M23D-G(R)8 (NG-11-0216) (Example 30)
Treatment of MDX Mice with Exemplary Conjugates of the Invention The MDX mice are approved and well characterized as an animal model for Duchenne muscular dystrophy (DMD) containing a mutation in the exson 23 of the dystrophin gene. The M23D antisense sequence (SEQ ID NO: 15) is known to induce exon 23 skipping and repair of functional dystropin expression. MDX mice were dosed once (50 mg / kg) by tail vein injection with one of the following conjugates.
1.5'-EG3-M23D-BX (RXRRBR) 2 (AVI5225);
2.5'-EG3-M23D-G (R) 5 (NG-11-0045);
3.5'-EG3-M23D-G (R) 6 (NG-11-0009);
4.5'-EG3-M23D-G (R) 7 (NG-11-0010); or
5.5'-EG3-M23D-G (R) 8 (NG-11-0216)

Ｍ２３Ｄは、配列GGCCAAACCTCGGCTTACCTGAAATを有するモルホリノオリゴヌクレオチドであり、「ＥＧ３」は、ピペラジンリンカー（すなわち、構造ＸＸＩＸ）を介して前記オリゴマーの５’端に結合した下記構造：

を意味する。 M23D is a morpholino oligonucleotide having the sequence GGCCAAACTCTCGGCT TACTCGAAAT, "EG3" is attached to the 5 'end of said oligomer via a piperazine linker (ie structure XXIX):

Means

注射後１週間で、前記ＭＤＸマウスを犠牲にし、ＲＮＡを種々の筋肉組織から抽出した。エンドポイントＰＣＲを使用して、エクソン２３を含むジストロフィンｍＲＮＡと、アンチセンス誘導エクソンスキッピングによるエクソン２３欠損ｍＲＮＡとの相対存在量を測定した。パーセントエクソン２３スキッピングは、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるアンチセンス活性の測定である。図５および６は、それぞれ処置後１週間での、大腿四頭筋（ＱＣ、図５Ａおよび６Ａ）、横隔膜（ＤＴ、図５Ｂおよび６Ｂ）および心臓（ＨＴ、図５Ｃおよび６Ｃ）からの結果を示す。ＡＶＩ−５２２５と他のコンジュゲートとの間の用量反応は、同様であった。アルギニン系の中でも、Ｒ６Ｇペプチドは、大腿四頭筋および横隔膜において、最も高い有効性を有し、心臓において他のアルギニン系ペプチドと同等であった。 One week after injection, the MDX mice were sacrificed and RNA was extracted from various muscle tissues. Endpoint PCR was used to determine the relative abundance of dystrophin mRNA containing exon 23 and exon 23 deleted mRNA by antisense induced exon skipping. Percent exon 23 skipping is a measure of antisense activity in vivo. Figures 5 and 6 show the results from quadriceps femoris (QC, Figures 5A and 6A), diaphragm (DT, Figures 5B and 6B) and heart (HT, Figures 5C and 6C) one week after treatment, respectively. Show. The dose response between AVI-5225 and the other conjugates was similar. Among the arginines, the R 6 G peptide had the highest efficacy in the quadriceps femoris and the diaphragm, and was comparable to other arginine based peptides in the heart.

（実施例３１）
典型的なコンジュゲートで処置されたマウスのＢＵＮレベルおよび生存率 (Example 31)
BUN levels and viability of mice treated with typical conjugates

マウスを、実施例３０記載の前記コンジュゲートで処置し、ＫＩＭ−１レベル、ＢＵＮレベルおよび生存率を、以下の実施例３２に記載され、当該分野において公知の一般的な手順に基づいて測定した。驚くべきことに、図７Ａは、全てのグリシン結合コンジュゲートが、ＸＢ結合コンジュゲート（ＡＶＩ−５２２５）より、顕著に低いＢＵＮレベルを有したことを示す。さらに、グリシン結合コンジュゲートで処置したマウスは、ＸＢ結合コンジュゲート、アルギニンポリマーの最小耐性であるＲ８Ｇコンジュゲートより、高い投与量で、より長く生存した（図７Ｂ）。前記Ｒ６Ｇコンジュゲート（ＮＧ−１１−０００９）で処置した全てのマウスは、４００ｍｇ／ｋｇ以下の投与量で生存した（データを示さず）。 Mice were treated with the conjugate described in Example 30, and KIM-1 levels, BUN levels and viability were measured according to the general procedures described in Example 32 below and known in the art. . Surprisingly, FIG. 7A shows that all glycine binding conjugates had significantly lower BUN levels than XB binding conjugate (AVI-5225). In addition, mice treated with a glycine binding conjugate survived longer at higher doses than the XB binding conjugate, an R 8 G conjugate that is minimally resistant to arginine polymer (FIG. 7B). All mice treated with the R 6 G conjugate (NG-11-0009) survived at doses of 400 mg / kg or less (data not shown).

グリシン結合コンジュゲートで処置したマウスの、前記ＫＩＭ−１（図８Ａ）およびクラステリン（図８Ｂ）のレベルは、ＡＶＩ−５２２５で処置したマウスより、顕著に低かった。このデータは、本発明のコンジュゲートが、従来のコンジュゲートより低い毒性を有し、上記実施例３０に示すように、前記コンジュゲートの有効性が低下しないことを示す。したがって、本発明のコンジュゲートは、他の公知のコンジュゲートより、良好な治療手段を有し、潜在的により良好な薬剤候補である。   The levels of the KIM-1 (FIG. 8A) and clusterin (FIG. 8B) of the glycine-conjugated conjugate treated mice were significantly lower than the mice treated with AVI-5225. This data indicates that the conjugates of the invention have lower toxicity than conventional conjugates and, as shown in Example 30 above, the efficacy of the conjugate is not diminished. Thus, the conjugates of the invention have better therapeutic means and are potentially better drug candidates than other known conjugates.

（実施例３２）
典型的なコンジュゲートの毒性学
本発明における４つの典型的なコンジュゲートを、マウスにおけるその毒性学について試験した。前記コンジュゲートは、下記のとおりである。
１．5’-EG3-M23D-BX(RXRRBR)2 (AVI5225);
２．5’-EG3-M23D-G(RXRRBR)2 (NG-11-0654);
３．5’-EG3-M23D-BX(R)6 (NG-11-0634);および、
４．5’-EG3-M23D-G(R)6(NG-11-0009) (Example 32)
Toxicology of Exemplary Conjugates Four exemplary conjugates in the present invention were tested for their toxicology in mice. The conjugate is as follows.
1.5'-EG3-M23D-BX (RXRRBR) 2 (AVI5225);
2.5'-EG3-M23D-G (RXRRBR) 2 (NG-11-0654);
3.5'-EG3-M23D-BX (R) 6 (NG-11-0634); and
4.5'-EG3-M23D-G (R) 6 (NG-11-0009)

Ｍ２３Ｄは、配列GGCCAAACCTCGGCTTACCTGAAATを有するモルホリノオリゴヌクレオチドであり、「ＥＧ３」は、ピペラジンリンカー（すなわち、構造ＸＸＩＸ）を介して前記オリゴマーの５’端に結合した下記構造：

を意味する。 M23D is a morpholino oligonucleotide having the sequence GGCCAAACTCTCGGCT TACTCGAAAT, "EG3" is attached to the 5 'end of said oligomer via a piperazine linker (ie structure XXIX):

Means

８周齢のメスのマウス（Ｃ５７／ＢＬ６；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、１８〜２２グラム）を、生理食塩水に配合した上記コンジュゲートで処置した。前記マウスを、実験手順の開始前に、最短５日間で順応させた。   Eight-week-old female mice (C57 / BL6; Jackson Laboratories, 18-22 grams) were treated with the above conjugate formulated in saline. The mice were allowed to acclimate for a minimum of 5 days before the start of the experimental procedure.

前記動物を、承認された照射接触巣材を有する、透明なポリカーボネートのマイクロアイソレーターケージに、１ケージあたりに３匹以下で収容した。前記ケージは、動物保護法（全ての修正を含む）およびｔｈｅ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，２０１０で説明される基準に従った。   The animals were housed up to 3 per cage in clear polycarbonate micro-isolator cages with approved irradiated contact materials. The cages are protected by the animal protection method (with all modifications) and the Guide for the Care and Use of Laboratory Animal, National Academy Press, Washington, D .; C. , In accordance with the criteria described in 2010.

動物を、以下の表に規定するケージ重量に基づいて、処置群を無作為に選んだ。群割当を、研究記録に記録した。   Animals were randomly selected for treatment based on the cage weights specified in the table below. Group assignments were recorded in the study record.

前記研究における投与日を、研究日１として指定した。コンジュゲートを、尾静脈を介して、ゆっくり押すボーラス投与（約５秒）として投与した。全ての動物を、２日にわたって投与した。群１〜８を初日に投与し、群９〜１６を、２日目に投与した。処置群（ＴＧ）１３〜１６を、上記表で投与した。これらのＴＧからの結果は、他のＴＧに対する進展に影響を及ぼさなかった。各コンジュゲートの最初の２ＴＧは、上記表で投与した。１００ｍｇ／ｋｇの群における全ての動物が死んだ場合、次いで、その試験項目についての残りのＴＧには投与せず、研究を終了したであろう。少なくとも１匹の動物が、１００ｍｇ／ｋｇの群において、投与後２時間で生存した場合、次いで、１５０ｍｇ／ｋｇの群を投与した。１５０ｍｇ／ｋｇの群における全ての動物が死んだ場合、次いで、その試験項目についての残りのＴＧには投与せず、研究を終了したであろう。少なくとも１匹の動物が、１５０ｍｇ／ｋｇの群において、投与後２時間で生存した場合、次いで、２００ｍｇ／ｋｇの群を投与した。   The dosing day in the study was designated as study day 1. The conjugate was administered as a slowly pushing bolus dose (approximately 5 seconds) via the tail vein. All animals were dosed over 2 days. Groups 1-8 were dosed on the first day and Groups 9-16 were dosed on day 2. Treatment groups (TG) 13-16 were administered in the above table. The results from these TGs did not affect the progress towards the other TGs. The first 2 TGs of each conjugate were administered in the above table. If all animals in the 100 mg / kg group died then the study would not have been administered to the remaining TG for that test item and the study would have ended. If at least one animal survived 2 hours post dose in the 100 mg / kg group, then the 150 mg / kg group was administered. If all animals in the 150 mg / kg group died then the study would not have been administered to the remaining TG for that test item and the study would have ended. If at least one animal survived 2 hours post dose in the 150 mg / kg group, then the 200 mg / kg group was administered.

動物を、瀕死および死亡率について、１日１回観察した。苦痛のサイン、特に死が明らかに迫っているサインを示す任意の動物を、Ｎｕｍｉｒａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓに基づいて、人道的に安楽死させた。到着日、投与日および解剖日において、体重を記録した。詳細な臨床観察を、投与後０分、１５分および２時間で実行、記録して、注射の耐性を評価した。   Animals were observed once daily for moribund mortality and mortality. Any animal showing a sign of distress, in particular a sign that death is clearly imminent, was humanely euthanized according to Numira Biosciences Standard Operating Procedures. Body weight was recorded on the day of arrival, day of administration and day of dissection. Detailed clinical observations were performed and recorded at 0 minutes, 15 minutes and 2 hours after dosing to assess the tolerance of the injection.

血液サンプル（最大容量、おおよそ１ｍＬ）を、３日目投与後の解剖前に、心穿刺により全ての動物から得た。血液サンプルを、赤色栓ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブに収集し、遠心前に、少なくとも３０分から６０分以内の間、室温で保持した。サンプルを、おおよそ１５００〜２５００ｒｐｍで、１５〜２０分間遠心して、血清を得た。   Blood samples (maximal volume, approximately 1 mL) were obtained from all animals by cardiac puncture prior to dissection after the third day of administration. Blood samples were collected in red plug microtainer tubes and kept at room temperature for at least 30 to 60 minutes prior to centrifugation. Samples were centrifuged at approximately 1500-2500 rpm for 15-20 minutes to obtain serum.

次の定期的な観察まで生存の見込みのない動物を、秤量し、安楽死させた。死んでいることが発見された動物を秤量し、死んだ時間を可能な限り細かく推定した。血液および組織のサンプルを、収集しなかった。   Animals with no hope of survival were weighed and euthanized until the next regular observation. The animals found dead were weighed and the time of death estimated as closely as possible. Blood and tissue samples were not collected.

３日目（投与後２日）において、全ての動物を、二酸化炭素で人道的に安楽死させた。安楽死は、承認された米国獣医師会（ＡＶＭＡ）安楽死のガイドライン Ｊｕｎｅ ２００７に基づいて行った。   On day 3 (2 days after dosing) all animals were humanely euthanized with carbon dioxide. Euthanasia was based on the approved American Veterinary Medical Association (AVMA) Euthanasia Guidelines June 2007.

一部の全体的な解剖は、実験および研究結果の記録を含んだ。全ての外表面および開口部を、評価した。組織の収集中に観察された全ての異常を、完全に記載し、記録した。更なる組織を不要とした。   Some global dissection included recording of experimental and research results. All exterior surfaces and openings were evaluated. All abnormalities observed during tissue collection were fully described and recorded. No need for further organization.

左右の腎臓を収集した。組織を、安楽死から１５分以内に収集した。使用した全ての器具およびツールを、処置群間で交換した。全ての組織を、収集後可能な限り早く、急速冷凍し、＜−７０℃で保存した。   Left and right kidneys were collected. Tissues were collected within 15 minutes of euthanasia. All instruments and tools used were exchanged between treatment groups. All tissues were flash frozen as soon as possible after collection and stored at <-70 <0> C.

腎傷害マーカーデータを、下記のようにして取得した。マウス腎臓組織からのＲＮＡを、Ｑｕｉｃｋ Ｇｅｎｅ Ｍｉｎｉ８０ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ ＳＩＩ（Ｆｕｊｉ Ｆｉｌｍ）を使用して精製した。つまり、おおよそ４０ｍｇの組織を、ＭａｇｎａＬｙｓｅｒ Ｇｒｅｅｎ Ｂｅａｄバイアル（Ｒｏｃｈｅ）において、０．５ｍｌの溶解緩衝液（０．５ｍｌの溶解緩衝液における５μｌの２−メルカプトエタノール）に添加し、ＭａｇＮＡ Ｌｙｓｅｒ（Ｒｏｃｈｅ）を使用して、３×３８００ＲＰＭを２セット、および、１×６５００ＲＰＭを３セットで、均一化した。サンプルを、各低速セットおよび各高速の実行間に、氷上で３〜４分冷却した。ホモジネートを、４００×ｇで室温において５分間遠心した。前記ホモジネートを、Ｑｕｉｃｋ Ｇｅｎｅ Ｍｉｎｉ８０のプロトコルに基づいて、直ちにＲＮＡ精製について処理した。サンプルを、カラム上で５分間、ＤＮａｓｅ Ｉ（Ｑｉａｇｅｎ）でＤＮＡ消化させた。トータルＲＮＡを、ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００分光計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で定量した。   Renal injury marker data were obtained as follows. RNA from mouse kidney tissue was purified using Quick Gene Mini 80 Tissue Kit SII (Fuji Film). Briefly, approximately 40 mg of tissue is added to 0.5 ml of lysis buffer (5 μl of 2-mercaptoethanol in 0.5 ml of lysis buffer) in a MagnaLyser Green Bead vial (Roche) and MagNA Lyser (Roche) Using 3 sets of 3 × 3800 RPM and 3 sets of 1 × 6500 RPM were equalized. The samples were chilled on ice for 3 to 4 minutes between each low speed set and each high speed run. The homogenate was centrifuged at 400 × g for 5 minutes at room temperature. The homogenate was immediately processed for RNA purification based on the Quick Gene Mini 80 protocol. The samples were DNA digested with DNase I (Qiagen) for 5 minutes on the column. Total RNA was quantified with a NanoDrop 2000 spectrometer (Thermo Scientific).

ｑＲＴ−ＰＣＲを、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ試薬（１−ステップＲＴ−ＰＣＴ）およびプレデザインしたプライマー／プローブセット（ＡＣＴＢ、ＧＡＰＤＨ、ＫＩＭ−１、クラステリン−ＦＡＭレポーター）を使用して行った。   qRT-PCR was performed using Applied Biosystems reagent (1-step RT-PCT) and predesigned primer / probe sets (ACTB, GAPDH, KIM-1, clusterin-FAM reporter).

各反応は、下記（合計３０μｌ）を含んだ。
１５μｌ ＡＢＩ Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ ｋｉｔからの２×ｑＲＴ−ＰＣＲ緩衝液
１．５μｌ プライマー／プローブミックス
８．７５μｌ ヌクレアーゼフリー水
０．７５μｌ ４０×マルチスクリプト＋ＲＮａｓｅ阻害剤
４μｌ ＲＮＡテンプレート（１００ｎｇ／μｌ）
ｑＲＴ １−ステッププログラムを、下記のとおり実行した。
１．４８Ｃ、３０分間
２．９５Ｃ、１０分間
３．９５Ｃ、１５秒間
４．６０Ｃ、１分間
５．ステップ３〜４を３９回繰り返し、合計４０サイクル Each reaction contained the following (total 30 μl).
2 × q RT-PCR buffer from 15 μl ABI One-Step kit 1.5 μl Primer / probe mix 8.75 μl Nuclease free water 0.75 μl 40 × Multiscript + RNase inhibitor 4 μl RNA template (100 ng / μl)
qRT 1-step program was run as follows.
1.48C, 30 minutes 2.95C, 10 minutes 3.95C, 15 seconds 4.60C, 1 minute 5. Repeat steps 3 to 4 39 times for a total of 40 cycles

サンプルを、３つのウェルで行い、更なる分析のために平均化した。分析を、ΔΔＣｔ法を使用して行った。つまり、コントロールΔＣｔ［Ｃｔ（標的）−Ｃｔ（参照）］により差し引いた、実験から得たΔＣｔ［Ｃｔ（標的）−Ｃｔ（参照）］＝ΔΔＣｔである。倍数変化範囲を、算出した：２＾−（ΔΔＣｔ＋ＳＤ）から２＾−（ΔΔＣｔ−ＳＤ）。コントロール＝（プールした）媒体処置動物群、ターゲット＝ＫＩＭ−１；参照＝ＧＡＰＤＨ；ＳＤ＝Ｓｑｒｔ［（ＳＤターゲット＾２）＋（ＳＤ参照＾２）］。   Samples were run in 3 wells and averaged for further analysis. Analysis was performed using the ΔΔCt method. That is, it is ΔCt [Ct (target)-Ct (reference)] = ΔΔCt obtained from the experiment, which is subtracted by the control ΔCt [Ct (target)-Ct (reference)]. The fold change range was calculated: 2 ^-(ΔΔCt + SD) to 2 ^-(ΔΔCt-SD). Control = (pooled) vehicle treated animal group, target = KIM-1; reference = GAPDH; SD = Sqrt [(SD target ^ 2) + (SD reference ^ 2)].

ＫＩＭデータの結果を、図１０に示す。末端グリシンを有するキャリアペプチドを含むコンジュゲートは、最も低いＲ６Ｇペプチドで、より低いＫＩＭ濃度を有した。末端Ｇおよび非天然アミン酸（アミノヘキサン酸）の存在の両方が、前記コンジュゲートの毒性において役割を果たすことが明らかである。 The results of the KIM data are shown in FIG. Conjugates containing carrier peptides with terminal glycine had lower KIM concentrations with the lowest R 6 G peptide. It is clear that both the terminal G and the presence of unnatural amine acid (aminohexanoic acid) play a role in the toxicity of the conjugate.

凍結血清サンプルを、処理するために、ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｅｓｔ Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ、ＣＡ）にドライアイスで送った。必要に応じて、血清希釈を、ＩＤＥＸＸ標準操作手順（ＳＯＰ）で行った。血液化学の結果を、分析した。血液尿素窒素レベルを、図１１に示す。改めて、前記Ｇ結合コンジュゲートは、より低いＢＵＮレベルを有した。末端Ｇおよびペプチド配列全体の両方が、前記コンジュゲートの毒性プロファイルにおいて役割を果たすことが明らかである。   Frozen serum samples were sent on dry ice to IDEXX Laboratories (West Sacramento, CA) for processing. Serum dilutions were made with IDEXX standard operating procedures (SOPs) as needed. The results of blood chemistry were analyzed. Blood urea nitrogen levels are shown in FIG. Again, the G-linked conjugate had lower BUN levels. It is clear that both the terminal G and the entire peptide sequence play a role in the toxicity profile of the conjugate.

腎臓組織（おおよそ１５０ｍｇ）を、セラミックビーズで部分的に満たした、２ｍＬのスクリューキャップバイアルに正確に量りとった。５体積部の、１０Ｕ／ｍＬのプロテイナーゼＫ（Ｓｉｇｍａ）を含む組織ＰＥ ＬＢ緩衝液（Ｇ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、１部の組織に添加した。サンプルを、Ｒｏｃｈｅ ＭａｇｎａＬｙｓｅｒ（操作の間に冷却しながら、４×４０秒 ＠７，０００ｒｐｍ）でホモジナイズし、４０℃で３０分間インキュベートした。必要な場合に、組織ホモジネートを、ＢＳＡｓａｌ（３ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ＋２０ｍＭ ＮａＣｌ）で希釈して、較正範囲内の高サンプル濃度にした。   Kidney tissue (approximately 150 mg) was accurately weighed into 2 mL screw cap vials partially filled with ceramic beads. Five volumes of tissue PE LB buffer (G Biosciences) containing 10 U / mL proteinase K (Sigma) was added to one part of tissue. The samples were homogenized in Roche MagnaLyser (4 x 40 seconds @ 7,000 rpm with cooling between runs) and incubated for 30 minutes at 40 ° C. When necessary, tissue homogenates were diluted with BSAsal (3 mg / mL BSA + 20 mM NaCl) to high sample concentrations within the calibration range.

較正サンプルを、既知量の適切な分析参照標準を含む２０ｍＭ ＮａＣｌにおける、３ｍｇ／ｍＬのＢＳＡの溶液を添加することにより調製した。８つのサンプルの２セットを、それぞれ調製した。ＵＬＯＱは、４０μｇ／ｍＬとし、ＬＬＯＱは、０．０６５５３６μｇ／ｍＬとした。内部標準（ＮＧ−０７−０７７５）を、（薬剤および内部標準を含まない）二重ブランクとして指定された一部のブランクサンプル以外は、全てのサンプルに添加した。３倍体積のメタノールで１００μＬのアリコートをボルテックスすることにより、サンプルを抽出した。   Calibration samples were prepared by adding a solution of 3 mg / mL BSA in 20 mM NaCl containing known amounts of the appropriate analytical reference standard. Two sets of eight samples were prepared respectively. ULOQ was at 40 μg / mL and LLOQ was at 0.065536 μg / mL. An internal standard (NG-07-0775) was added to all samples except some blank samples designated as double blanks (without drug and internal standard). Samples were extracted by vortexing 100 μL aliquots with 3 volumes of methanol.

遠心（１５分、１４，０００ｒｐｍ）後、上清を、新たなチューブに移し、Ｓｐｅｅｄｖａｃで乾燥させた。乾燥サンプルを、［１０ｍＭ トリスｐＨ８．０＋１ｍＭ ＥＤＴＡ＋１００ｍＭ ＮａＣｌ］−アセトニトリル（７５〜２５）における、適量のＦＤＮＡ（5’ d FAM-ATTTCAGGTAAGCCGAGGTTTGGCC 3’）で再構成した。   After centrifugation (15 minutes, 14,000 rpm), the supernatant was transferred to a new tube and dried on a Speedvac. The dry sample was reconstituted with an appropriate amount of FDNA (5 'd FAM-ATTTC AGGTAAGCCGAGGTTTTGGCC 3') in [10 mM Tris pH 8.0 + 1 mM EDTA + 100 mM NaCl]-acetonitrile (75-25).

サンプルを、Ｄｉｏｎｅｘ ＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００ ＨＰＬＣ上で、アニオン交換クロマトグラフィー（Ｄｉｏｎｅｘ ＤＮＡＰａｃ ４×２５０ｍｍカラム）を使用して分析した。注入量は、５μＬとした。移動相を、２５ｍＭ トリスｐＨ８．０を含む２０％アセトニトリルおよび８０％水、ならびに、ＮａＣｌ濃度を増加する勾配で構成した。流速は、１ｍＬ／分とし、実行時間は、１サンプルあたり１０分とした。蛍光検出器を、ＥＸ４９４ｎｍおよびＥＭ５２０ｎｍに設定した。ピークの同一性は、保持時間に基づいた。ピーク高さ比（分析対象：内部標準）を、定量に使用した。検量線を、（一方のセットがバッチの開始で実行され、他のセットがバッチの終了で実行された）２つの較正サンプルの平均応答因子に基づいて算出した。１／ｘの重み係数に適合する線形曲線を使用した。ブランクサンプル（参照化合物が含まれていない較正サンプル）および二重ブランクサンプル（内部標準添加）を使用して、アッセイ特異性およびキャリーオーバーが無いことを確認した。   The samples were analyzed on Dionex UltiMate 3000 HPLC using anion exchange chromatography (Dionex DNAPac 4 × 250 mm column). The injection volume was 5 μL. The mobile phase consisted of 20% acetonitrile and 80% water with 25 mM Tris pH 8.0, and a gradient of increasing NaCl concentration. The flow rate was 1 mL / min and the run time was 10 minutes per sample. The fluorescence detector was set to EX 494 nm and EM 520 nm. Peak identity was based on retention time. The peak height ratio (analytical target: internal standard) was used for quantification. A calibration curve was calculated based on the average response factor of two calibration samples (one set performed at the start of the batch and the other set performed at the end of the batch). A linear curve was used that fitted a weighting factor of 1 / x. Blank samples (calibration samples without reference compound) and double blank samples (with internal standard added) were used to confirm the absence of assay specificity and carryover.

図１２は、腎臓濃度が前記試験したコンジュゲートの中で同様であったことを示す。   FIG. 12 shows that kidney concentrations were similar among the conjugates tested.

上記データは、本発明のコンジュゲートが、他のコンジュゲートと比較して、同様の有効性および改善された毒性を有することを示す。図９Ａ〜Ｄは、Ｒ６Ｇコンジュゲート（ＮＧ−１１−０００９）に関する、これらの結果をまとめている。 The above data show that the conjugates of the invention have similar efficacy and improved toxicity as compared to other conjugates. 9A-D summarize these results for the R 6 G conjugate (NG-11-0009).

上記の種々の実施形態は、組み合わされて、更なる実施形態を提供し得る。本明細書で言及および／または出願データシートに列記した、全ての米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国の特許、外国の特許出願および非特許文献は、それらの全体を、参照により本願明細書に取り込まれる。前記実施形態の態様は、更なる実施形態を提供するために、種々の特許、出願および刊行物の概念を使用する必要がある場合、修飾され得る。これらの変更および他の変更は、上記詳細な説明の観点における前記実施形態になされ得る。一般に、下記の特許請求の範囲では、使用される用語は、明細書および特許請求の範囲に開示された特定の実施形態に、前記特許請求の範囲を限定して解釈されるべきではなく、このような特許請求の範囲が権利を受けるのと均等物の完全な範囲に沿った、全ての可能性のある実施形態を含むと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示により限定されない。   The various embodiments described above may be combined to provide further embodiments. All U.S. patents, U.S. patent applications, U.S. patent applications, U.S. patent applications, foreign patents, foreign patent applications and non-patent documents mentioned and / or listed in the application data sheet are herein incorporated by reference in their entirety. Incorporated herein by reference. The aspects of the above embodiments can be modified if it is necessary to use the concepts of the various patents, applications and publications to provide further embodiments. These and other changes can be made to the embodiments in the context of the above detailed description. Generally, in the following claims, the terms used should not be construed as limiting the claims to the specific embodiments disclosed in the specification and claims. Such claims should be construed to include all possible embodiments, along with the full scope of equivalents to which such claims are entitled. Accordingly, the claims are not limited by the disclosure.

Claims (63)

（ａ）４から４０個のアミノ酸を含む細胞浸透性ペプチドであって、ここで、該細胞浸透性ペプチドのカルボキシ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ）またはプロリン（Ｐ）である、細胞浸透性ペプチド；
（ｂ）実質的に荷電していない骨格と、標的核酸に対する配列特異的結合のためのターゲッティング塩基配列とを含む核酸類似体；および、
（ｃ）該核酸類似体と該細胞浸透性ペプチドとの間の共有結合付着点であって、該共有結合付着点は該カルボキシ末端のグリシンまたはプロリンに対するアミド結合からなる、共有結合付着点；
を含むコンジュゲートであって、
ここで、該アミノ酸のうちの２個以上が、正電荷を有するアミノ酸であり、７個以下連続したアミノ酸が、アルギニンであり、
該核酸類似体が、アンチセンスモルホリノオリゴマーであり、該核酸類似体は、サブユニット間リンケージにより結合された一連のモルホリノ環構造を含み、該サブユニット間リンケージが、下記一般構造（Ｉ）：
または、その塩を有し、該サブユニット間リンケージ（Ｉ）の各々が、独立して、リンケージ（Ａ）またはリンケージ（Ｂ）であり：
リンケージ（Ａ）に関して：
Ｗが各出現箇所で独立して、ＳまたはＯであり；
Ｘが各出現箇所で独立して、−Ｎ（ＣＨ ３ ） ２ 、−ＮＲ １ Ｒ ２ 、−ＯＲ ３ または；
であり；
Ｙが各出現箇所で独立して、Ｏまたは−ＮＲ ２ であり；
Ｒ １ が各出現箇所で独立して、水素またはメチルであり；
Ｒ ２ が各出現箇所で独立して、水素または−ＬＮＲ ４ Ｒ ５ Ｒ ７ であり；
Ｒ ３ が各出現箇所で独立して、水素またはＣ １ −Ｃ ６ アルキルであり；
Ｒ ４ が各出現箇所で独立して、水素、メチル、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ ２ 、−Ｚ−Ｌ−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ ２ または−［Ｃ（Ｏ）ＣＨＲ’ＮＨ］ ｍ Ｈであり、Ｚが、カルボニル（Ｃ（Ｏ））または直接結合であり、Ｒ’が、天然に存在するアミノ酸の側鎖またはその１つもしくは２つの炭素同族体であり、ｍが、１から６であり；
Ｒ ５ が各出現箇所で独立して、水素、メチルまたは電子対であり；
Ｒ ６ が各出現箇所で独立して、水素またはメチルであり；
Ｒ ７ が各出現箇所で独立して、水素、Ｃ １ −Ｃ ６ アルキルまたはＣ １ −Ｃ ６ アルコキシアルキルであり；
Ｌが、直接結合であるか、または、アルキル、アルコキシもしくはアルキルアミノの基またはそれらの組み合わせを含む、長さ１８原子以下のリンカーであり、ならびに、
リンケージ（Ｂ）に関して：
Ｗが各出現箇所で独立して、ＳまたはＯであり；
Ｘが各出現箇所で独立して、−ＮＲ ８ Ｒ ９ または−ＯＲ ３ であり；および、
Ｙが各出現箇所で独立して、Ｏまたは−ＮＲ １０ であり、
Ｒ ８ が各出現箇所で独立して、水素またはＣ ２ −Ｃ １２ アルキルであり；
Ｒ ９ が各出現箇所で独立して、水素、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキル、Ｃ １ −Ｃ １２ アラルキルまたはアリールであり；
Ｒ １０ が各出現箇所で独立して、水素、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキルまたは−ＬＮＲ ４ Ｒ ５ Ｒ ７ であり；
Ｒ ８ およびＲ ９ が結合して、５〜１８員の単環複素環もしくは二環複素環を形成してもよく、または、Ｒ ８ 、Ｒ ９ またはＲ ３ がＲ １０ と結合して、５〜７員の複素環を形成し、Ｘが４−ピペラジノである場合、Ｘが下記構造（ＩＩＩ）：
を有し、式中：
Ｒ １１ が各出現箇所で独立して、Ｃ ２ −Ｃ １２ アルキル、Ｃ １ −Ｃ １２ アミノアルキル、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり；および、
Ｒが各出現箇所で独立して、電子対、水素またはＣ １ −Ｃ １２ アルキルであり；
Ｒ １２ が各出現箇所で独立して、水素、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキル、Ｃ １ −Ｃ １２ アミノアルキル、−ＮＨ ２ 、−ＣＯＮＨ ２ 、−ＮＲ １３ Ｒ １４ 、−ＮＲ １３ Ｒ １４ Ｒ １５ 、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキルカルボニル、オキソ、−ＣＮ、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニル グアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コラート、デオキシコラート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−ＳＲ １３ またはＣ １ −Ｃ １２ アルコキシであり、Ｒ １３ 、Ｒ １４ およびＲ １５ が、各出現箇所で独立して、Ｃ １ −Ｃ １２ アルキルであり；および、
Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ 、Ｒ ７ およびＬが、リンケージ（Ａ）において定義したものと同じである、
コンジュゲート。 (A) a cell penetrating peptide comprising 4 to 40 amino acids, wherein the carboxy terminal amino acid of the cell penetrating peptide is glycine (G) or proline (P);
(B) a nucleic acid analogue comprising a substantially non-charged backbone and a targeting base sequence for sequence specific binding to a target nucleic acid ;
(C) a covalent attachment point between the nucleic acid analog and the cell-penetrating peptides, the covalent attachment point is an amide bond to glycine or proline of the carboxy terminus, covalent attachment points;
A conjugate comprising
Here, more than two of the amino acid is an amino acid having a positive charge, more than 7 consecutive amino acids, Ri arginine der,
The nucleic acid analog is an antisense morpholino oligomer, and the nucleic acid analog comprises a series of morpholino ring structures linked by an intersubunit linkage, wherein the intersubunit linkage has the following general structure (I):
Or having the salt, each of the intersubunit linkages (I) independently being linkage (A) or linkage (B):
Regarding linkage (A):
W is S or O independently at each occurrence;
X is independently in each occurrence, -N (CH 3) 2, -NR 1 R 2, -OR 3 or;
And
Y is independently at each occurrence O or -NR 2 ;
R 1 is independently at each occurrence hydrogen or methyl;
R 2 is independently at each occurrence hydrogen or -LNR 4 R 5 R 7 ;
R 3 is independently at each occurrence hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
R 4 independently at each occurrence: hydrogen, methyl, -C (= NH) NH 2 , -ZL -NHC (= NH) NH 2 or-[C (O) CHR'NH] m H And Z is carbonyl (C (O)) or a direct bond, R 'is the side chain of a naturally occurring amino acid or one or two carbon homologs thereof, m is 1 to 6 Yes;
R 5 is independently at each occurrence hydrogen, methyl or an electron pair;
R 6 is independently at each occurrence hydrogen or methyl;
R 7 is independently at each occurrence hydrogen, C 1 -C 6 alkyl or C 1 -C 6 alkoxyalkyl;
L is a linker of up to 18 atoms in length, which is a direct bond or which comprises an alkyl, alkoxy or alkylamino group or a combination thereof, and
Regarding linkage (B):
W is S or O independently at each occurrence;
X is -NR 8 R 9 or -OR 3 independently at each occurrence ; and
Y independently at each occurrence is O or -NR 10 ,
R 8 is independently at each occurrence hydrogen or C 2 -C 12 alkyl;
R 9 is independently at each occurrence hydrogen, C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aralkyl or aryl;
R 10 is independently at each occurrence hydrogen, C 1 -C 12 alkyl or -LNR 4 R 5 R 7 ;
R 8 and R 9 may be combined to form a 5- to 18-membered monocyclic or bicyclic heterocycle, or R 8 , R 9 or R 3 is combined with R 10 to When forming a -7 membered heterocyclic ring and X is 4-piperazino, X has the following structure (III):
In the formula:
R 11 is independently at each occurrence C 2 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aminoalkyl, C 1 -C 12 alkylcarbonyl, aryl, heteroaryl or heterocyclyl;
R is independently at each occurrence an electron pair, hydrogen or C 1 -C 12 alkyl;
R 12 independently at each occurrence: hydrogen, C 1 -C 12 alkyl, C 1 -C 12 aminoalkyl, -NH 2 , -CONH 2 , -NR 13 R 14 , -NR 13 R 14 R 15 , C 1 -C 12 alkylcarbonyl, oxo, -CN, trifluoromethyl, amidyl, amidinyl, amidinylalkyl, amidinylalkylcarbonyl guanidinyl, guanidinylalkyl, guanidinylalkylcarbonyl, cholate, deoxycholate, aryl , Heteroaryl, heterocycle, -SR 13 or C 1 -C 12 alkoxy, and R 13 , R 14 and R 15 are each independently C 1 -C 12 alkyl at each occurrence ;
R 3, R 4, R 5 , R 7 and L are to be the same as those defined in the linkage (A),
Conjugate. 前記細胞浸透性ペプチドが、前記カルボキシ末端に、グリシンアミノ酸を含む、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein the cell penetrating peptide comprises a glycine amino acid at the carboxy terminus. 前記細胞浸透性ペプチドが、前記カルボキシ末端に、プロリンアミノ酸を含む、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein the cell penetrating peptide comprises a proline amino acid at the carboxy terminus. 前記細胞浸透性ペプチドが、４から４０個のアミノ酸を含む、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein the cell penetrating peptide comprises 4 to 40 amino acids. 前記細胞浸透性ペプチドが、６から２０個のアミノ酸を含む、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein the cell penetrating peptide comprises 6 to 20 amino acids. 前記正電荷を有するアミノ酸が、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）またはそれらの組み合わせである、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein the positively charged amino acid is histidine (H), lysine (K), arginine (R) or a combination thereof. 前記正電荷を有するアミノ酸のうちの少なくとも１個が、アルギニンである、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein at least one of the positively charged amino acids is arginine. 前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリン以外の前記アミノ酸の各々が、正電荷を有するアミノ酸である、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein each of the amino acids other than glycine at the carboxy terminus or proline is a positively charged amino acid. 前記正電荷を有するアミノ酸の各々が、アルギニンである、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein each of the positively charged amino acids is arginine. 前記正電荷を有するアミノ酸のうちの少なくとも１個が、アルギニン類似体であり、該アルギニン類似体が、構造ＲａＮ＝Ｃ（ＮＨ２）Ｒｂの側鎖を含むカチオン性α−アミノ酸であり、ここで、ＲａがＨまたはＲｃであり；ＲｂがＲｃ、ＮＨ２、ＮＨＲまたはＮ（Ｒｃ）２であり、ここで、ＲｃがＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ １ −Ｃ ６ アルキレンまたはＣ ２ −Ｃ ６ アルケニレンであるか、あるいは、ＲａおよびＲｂが、共に環を形成してもよく；前記側鎖が、ＲａまたはＲｂを介して、前記アミノ酸のα炭素に結合される、請求項１記載のコンジュゲート。 At least one of the positively charged amino acids is an arginine analog, and the arginine analog is a cationic α-amino acid comprising the side chain of the structure R a N = C (NH 2 ) R b Where R a is H or R c ; R b is R c , NH 2 , NHR or N (R c ) 2 , where R c is C 1 -C 6 alkyl , C 2- C 6 alkenyl , C 1 -C 6 alkylene or C 2 -C 6 alkenylene , or alternatively, R a and R b may together form a ring; said side chain being R a or R b The conjugate according to claim 1, wherein the conjugate is linked to the alpha carbon of said amino acid. 前記アミノ酸のうちの少なくとも２０％が、正電荷を有するアミノ酸である、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate of claim 1, wherein at least 20% of the amino acids are positively charged amino acids. 前記アミノ酸のうちの少なくとも５０％が、正電荷を有するアミノ酸である、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate of claim 1, wherein at least 50% of the amino acids are positively charged amino acids. 前記アミノ酸のうちの少なくとも８０％が、正電荷を有するアミノ酸である、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein at least 80% of the amino acids are positively charged amino acids. 前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリン以外の全ての前記アミノ酸が、正電荷を有するアミノ酸である、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein all the amino acids other than glycine or proline at the carboxy terminus are positively charged amino acids. 前記細胞浸透性ペプチドが、配列（Ｒｄ）ｍを含み、Ｒｄが、各出現箇所で独立して、正電荷を有するアミノ酸であり、ｍが、２から１２の範囲の整数である、請求項１記載のコンジュゲート。 The cell penetrating peptide comprises the sequence (R d ) m , wherein R d is independently a positively charged amino acid at each occurrence and m is an integer in the range of 2 to 12 The conjugate according to item 1. Ｒｄが、各出現箇所で独立して、アルギニン、ヒスチジンまたはリジンである、請求項１５記載のコンジュゲート。 16. The conjugate according to claim 15, wherein R d independently at each occurrence is arginine, histidine or lysine. 各Ｒｄが、アルギニンである、請求項１５記載のコンジュゲート。 16. The conjugate of claim 15, wherein each R d is arginine. 前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリン以外の各アミノ酸が、アルギニンである、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein each amino acid other than glycine or proline at the carboxy terminus is arginine. 前記細胞浸透性ペプチドが、少なくとも１つの疎水性アミノ酸を含み、該疎水性アミノ酸が、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはアラルキルの側鎖を含み、該アルキル、アルケニルおよびアルキニルの側鎖が、６つの炭素原子毎に、多くても１つのヘテロ原子を含む、請求項１記載のコンジュゲート。 The cell penetrating peptide comprises at least one hydrophobic amino acid, wherein the hydrophobic amino acid comprises a substituted or unsubstituted alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl or aralkyl side chain, the alkyl, alkenyl and alkynyl side The conjugate according to claim 1, wherein the chain contains at most one heteroatom every six carbon atoms. 前記細胞浸透性ペプチドが、２つ以上の疎水性アミノ酸を含む、請求項１９記載のコンジュゲート。 20. The conjugate of claim 19, wherein the cell penetrating peptide comprises two or more hydrophobic amino acids. 前記細胞浸透性ペプチドが、２つ以上連続した疎水性アミノ酸を含む、請求項１９記載のコンジュゲート。 20. The conjugate of claim 19, wherein said cell penetrating peptide comprises two or more consecutive hydrophobic amino acids. 前記疎水性アミノ酸のうちの少なくとも１つが、フェニルアラニンである、請求項１９記載のコンジュゲート。 20. The conjugate of claim 19, wherein at least one of the hydrophobic amino acids is phenylalanine. 前記疎水性アミノ酸の各々が、フェニルアラニンである、請求項１９記載のコンジュゲート。 20. The conjugate of claim 19, wherein each of the hydrophobic amino acids is phenylalanine. 前記細胞浸透性ペプチドが、下記構造（Ｙｂ）：
を有する、少なくとも１つの中性アミノ酸を含み、式中、ｎが、２から７であり、各Ｒｅが各出現箇所で独立して、水素またはメチルである、請求項１記載のコンジュゲート。 The cell penetrating peptide has the following structure (Y b ):
The conjugate according to claim 1, comprising at least one neutral amino acid having: wherein n is 2 to 7 and each R e independently at each occurrence is hydrogen or methyl. 前記細胞浸透性ペプチドが、配列［（ＲｄＹｂＲｄ）ｘ（ＲｄＲｄＹｂ）ｙ］ｚを含み、Ｒｄが、各出現箇所で独立して、正電荷を有するアミノ酸であり、ｘおよびｙが、各出現箇所で独立して、０または１であり、但し、ｘ＋ｙが１または２であり、ｚが、１から６の範囲の整数である、請求項２４記載のコンジュゲート。 The cell penetrating peptide comprises the sequence [(R d Y b R d ) x (R d R d Y b ) y ] z , and R d is an amino acid with a positive charge independently at each occurrence. 25. The conjugate according to claim 24, wherein x and y are, independently at each occurrence, 0 or 1, provided that x + y is 1 or 2 and z is an integer in the range of 1 to 6. Gate. Ｒｄが、各出現箇所で独立して、アルギニン、ヒスチジンまたはリジンである、請求項２５記載のコンジュゲート。 26. The conjugate according to claim 25, wherein R d independently at each occurrence is arginine, histidine or lysine. 各Ｒｄが、アルギニンである、請求項２５記載のコンジュゲート。 26. The conjugate of claim 25, wherein each R d is arginine. 少なくとも１つのＹｂが、６−アミノヘキサン酸またはβ−アラニンである、請求項２５記載のコンジュゲート。 26. The conjugate according to claim 25, wherein at least one Y b is 6-aminohexanoic acid or β-alanine. 前記細胞浸透性ペプチドが、配列ＩＬＦＱＹを含む、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein the cell penetrating peptide comprises the sequence ILFQY. 前記細胞浸透性ペプチドが、配列ＩＬＦＱ、ＩＷＦＱまたはＩＬＩＱを含む、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein the cell penetrating peptide comprises the sequence ILFQ, IWFQ or ILIQ. 前記細胞浸透性ペプチドが、配列ＰＰＭＷＳ、ＰＰＭＷＴ、ＰＰＭＦＳまたはＰＰＭＹＳを含む、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein the cell penetrating peptide comprises the sequence PPMWS, PPMWT, PPMFS or PPMYS. 前記細胞浸透性ペプチドが、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、リジン、メチオニン、セリンまたはスレオニンのうちの少なくとも１つを含む、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein the cell penetrating peptide comprises at least one of alanine, asparagine, cysteine, glutamine, glycine, histidine, lysine, methionine, serine or threonine. 前記細胞浸透性ペプチドが、前記細胞浸透性ペプチドのアミノ末端に、アセチル、ベンゾイルまたはステアロイル部分を含む、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein the cell penetrating peptide comprises an acetyl, benzoyl or stearoyl moiety at the amino terminus of the cell penetrating peptide. 前記アミノ酸の各々が、天然アミノ酸である、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate according to claim 1, wherein each of the amino acids is a natural amino acid. 前記モルホリノ環構造のうちの少なくとも１つが、下記構造（ｉ）：
を有し、式中、Ｐｉが、各出現箇所で独立して、塩基対合部分である、請求項１記載のコンジュゲート。 At least one of the morpholino ring structures has the following structure (i):
The a, wherein, Pi is independently at each occurrence, is a base-pairing moiety, according to claim 1 of the conjugate. 前記サブユニット間リンケージのうちの少なくとも１つが、リンケージ（Ａ）である、請求項１記載のコンジュゲート。 At least one of the linkage between the subunits, a linkage (A), according to claim 1, wherein the conjugate. 前記サブユニット間リンケージの各々が、リンケージ（Ａ）である、請求項１記載のコンジュゲート。 Wherein each of the intersubunit linkage is the linkage (A), according to claim 1, wherein the conjugate. 各リンケージ（Ａ）が、各出現箇所で同じ構造を有する、請求項１記載のコンジュゲート。 Each linkage (A) has the same structure at each occurrence, according to claim 1 of the conjugate. リンケージ（Ａ）の少なくとも１つ出現箇所に関して、Ｘが、−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項１記載のコンジュゲート。 For at least one occurrence of the linkage (A), X is a -N (CH 3) 2, claim 1 of the conjugate. リンケージ（Ａ）の各出現箇所で、Ｘが、−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項１記載のコンジュゲート。 Each occurrence of the linkage (A), X is a -N (CH 3) 2, claim 1 of the conjugate. 各リンケージが、リンケージ（Ａ）であり、Ｘが、−Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項１記載のコンジュゲート。 Each linkage is a linkage (A), X is a -N (CH 3) 2, claim 1 of the conjugate. リンケージ（Ａ）の少なくとも１つの出現箇所に関して、Ｘが、下記構造：
有する、請求項１記載のコンジュゲート。 With respect to at least one occurrence of linkage (A), X has the following structure:
Has, according to claim 1, wherein the conjugate. リンケージ（Ｂ）の少なくとも１つの出現箇所に関して、Ｘが、下記構造：
有する、請求項１記載のコンジュゲート。 For at least one occurrence of linkage (B), X has the following structure:
Has, according to claim 1, wherein the conjugate. リンケージ（Ｂ）の少なくとも１つの出現箇所に関して、Ｘが、下記構造：
有する、請求項１記載のコンジュゲート。 For at least one occurrence of linkage (B), X has the following structure:
Has, according to claim 1, wherein the conjugate. ＷおよびＹが、各出現箇所でそれぞれＯである、請求項１記載のコンジュゲート。 W and Y are each O in each occurrence, according to claim 1 of the conjugate. 前記サブユニット間リンケージのうちの少なくとも５％が、リンケージ（Ｂ）である、請求項１記載のコンジュゲート。 Wherein at least 5% of the intersubunit linkage is the linkage (B), according to claim 1 of the conjugate. 各リンケージ（Ｂ）が、各出現箇所で同じ構造を有する、請求項１記載のコンジュゲート。 Each linkage (B) has the same structure at each occurrence, according to claim 1 of the conjugate. 前記コンジュゲートが、下記構造（ＸＶＩＩ）：
または、その塩を有し、式中：
Ｒ１７が各出現箇所で独立して、存在しないか、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１８およびＲ１９が各出現箇所で独立して、存在しないか、水素、前記細胞浸透性ペプチド、Ｃ２−Ｃ３０アルキルカルボニル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ２１またはＲ２０であり；
Ｒ２０が各出現箇所で独立して、グアニジニル、ヘテロシクリル、Ｃ１−Ｃ３０アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル；Ｃ６−Ｃ３０アリール、Ｃ７−Ｃ３０アラルキル、Ｃ３−Ｃ３０アルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルアルキルカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アラルキルカルボニル、Ｃ２−Ｃ３０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルオキシカルボニル、Ｃ７−Ｃ３０アリールオキシカルボニル、Ｃ８−Ｃ３０アラルキルオキシカルボニルまたは−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ２２）２であり；
Ｒ２１が、１つ以上のエーテル結合、ヒドロキシル部分またはそれらの組み合わせを含むＣ１−Ｃ３０アルキルであり；
各Ｒ２２が独立して、Ｃ６−Ｃ１２アリールオキシであり；
Ｐｉが、塩基対合部分であり；
Ｒ１９が存在しない場合、Ｌ１が、ピペラジン、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、カルボニル、カルバマート、ホスホロジアミダート、ホスホロアミダート、ホスホロチオアートおよびホスホジエステルから選択される結合を含む、長さ１８以下の原子を含み；または、
Ｒ１９が存在する場合、Ｌ１が、直接結合であるか、または、ピペラジン、アルキレン、アルコキシアルキレン、アルキルイミノ、アミド、エステル、カルボニル、カルバマート、ホスホロジアミダート、ホスホロアミダート、ホスホロチオアートおよびホスホジエステルから選択される結合を含む、長さ１８以下の原子を含み；かつ、
Ｒ１８が存在しない場合、Ｌ２が、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、カルボニル、カルバマート、ホスホロジアミダート、ホスホロアミダート、ホスホロチオアートおよびホスホジエステルから選択される結合を含む、長さ１８以下の原子を含み；または、
Ｒ１８が存在する場合、Ｌ２が、直接結合であるか、または、アルキレン、アルコキシアルキレン、アルキルイミノ、アミド、エステル、カルボニル、カルバマート、ホスホロジアミダート、ホスホロアミダート、ホスホロチオアートおよびホスホジエステルから選択される結合を含む、長さ１８以下の原子を含み；
Ｚが、０〜３８の整数であり；および、
Ｒ１７およびＲ１８の両方が存在しないことはなく、Ｒ１８またはＲ１９のうちの少なくとも１つが、前記細胞浸透性ペプチドである、請求項１記載のコンジュゲート。 The conjugate has the following structure (XVII):
Or with its salt, in the formula:
R 17 independently at each occurrence is absent, hydrogen or C 1 -C 6 alkyl;
R 18 and R 19 independently at each occurrence are absent, hydrogen, said cell penetrating peptide, C 2 -C 30 alkyl carbonyl, —C (CO) OR 21 or R 20 ;
R 20 independently at each occurrence: guanidinyl, heterocyclyl, C 1 -C 30 alkyl, C 3 -C 8 cycloalkyl; C 6 -C 30 aryl, C 7 -C 30 aralkyl, C 3 -C 30 alkyl Carbonyl, C 3 -C 8 cycloalkylcarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkylalkyl carbonyl, C 7 -C 30 arylcarbonyl, C 7 -C 30 aralkylcarbonyl, C 2 -C 30 alkyloxycarbonyl, C 3 -C 8 cycloalkyloxycarbonyl, C 7 -C 30 aryloxycarbonyl, C 8 -C 30 aralkyloxycarbonyl or -P (= O) (R 22 ) 2 ;
R 21 is C 1 -C 30 alkyl comprising one or more ether linkages, hydroxyl moieties or combinations thereof;
Each R 22 is independently C 6 -C 12 aryloxy;
Pi is a base pairing moiety;
When R 19 is absent, L 1 is selected from piperazine, alkyl, hydroxyl, alkoxy, alkylamino, amide, ester, carbonyl, carbamate, phosphorodiamidate, phosphoroamidate, phosphorothioate and phosphodiester Containing atoms of length 18 or less, including
If R 19 is present, L 1 is either a direct bond or a piperazine, an alkylene, alkoxyalkylene, alkylimino, amide, ester, carbonyl, carbamate, phosphorodiamidate, phosphoramidate, phosphoro Containing atoms of length 18 or less, including bonds selected from thioates and phosphodiesters; and
When R 18 is absent, L 2 is a bond selected from alkyl, hydroxyl, alkoxy, alkylamino, amide, ester, carbonyl, carbamate, phosphorodiamidate, phosphoroamidate, phosphorothioate and phosphodiester Containing atoms of length 18 or less; or
If R 18 is present, L 2 is either a direct bond or alkylene, alkoxy alkylene, alkyl imino, amide, ester, carbonyl, carbamate, phosphorodiamidate, phosphoramidates, phosphorothioates Containing atoms of length 18 or less, including bonds selected from and phosphodiesters;
Z is an integer of 0 to 38; and
Never both R 17 and R 18 is absent, at least one of R 18 or R 19, wherein a cell-permeable peptide of claim 1, wherein the conjugate. Ｒ１８が、前記細胞浸透性ペプチドである、請求項４８記載のコンジュゲート。 R 18 is a said cell-penetrating peptide, according to claim 4 8, wherein the conjugate. Ｒ１９が、前記細胞浸透性ペプチドである、請求項４８記載のコンジュゲート。 R 19 is a said cell-penetrating peptide, according to claim 4 8, wherein the conjugate. Ｒ１８またはＲ１９のうちの１つが、Ｒ２０である、請求項４８記載のコンジュゲート。 One of R 18 or R 19 but is R 20, claim 4 8, wherein the conjugate. Ｒ１９が、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ２１である、請求項４８記載のコンジュゲート。 R 19 is, -C (= O) is OR 21, claim 4 8, wherein the conjugate. Ｒ１９が、
である、請求項５２記載のコンジュゲート。 R 19 is
In it, according to claim 5 wherein the conjugate. Ｌ１が、ホスホロジアミダートおよびピペラジン結合を含む、請求項４８記載のコンジュゲート。 L 1 comprises a phosphorodiamidate and piperazine coupling, according to claim 4 8, wherein the conjugate. Ｌ１が、下記構造（ＸＸＩＸ）：
を有し、式中、Ｒ２４が存在しないか、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項５４記載のコンジュゲート。 L 1 has the following structure (XXIX):
The a, wherein, absent the R 24, is H or C 1 -C 6 alkyl, according to claim 5 4 wherein the conjugate. Ｒ２４が、存在しない、請求項５５記載のコンジュゲート。 R 24 is absent, claim 5 5 wherein the conjugate. Ｒ１８が、前記細胞浸透性ペプチドであり、Ｌ２が、直接結合であり、前記細胞浸透性ペプチドが、前記細胞浸透性ペプチドのカルボキシ末端と前記核酸類似体の３’末端窒素との間の結合を形成する、請求項４８記載のコンジュゲート。 R 18 is the cell penetrating peptide, L 2 is a direct bond, and the cell penetrating peptide is between the carboxy terminus of the cell penetrating peptide and the 3 'terminal nitrogen of the nucleic acid analogue It forms a bond, according to claim 4 8, wherein the conjugate. 請求項１記載のコンジュゲートと、薬学的に許容され得る媒体とを含む、組成物。 A composition comprising the conjugate of claim 1 and a pharmaceutically acceptable vehicle. 被験体における疾患を処置するための組成物であって、治療的に有効量の請求項１記載のコンジュゲートを含む、組成物。 A composition for treating a disease in a subject, comprising a therapeutically effective amount of the conjugate according to claim 1. 前記疾患が、ウイルス感染、神経筋疾患、細菌感染、炎症または多発性嚢胞腎である、請求項５９記載の組成物。 60. The composition of claim 59 , wherein the disease is viral infection, neuromuscular disease, bacterial infection, inflammation or polycystic kidney disease. 前記ウイルス感染が、インフルエンザである、請求項６０記載の組成物。 Wherein said viral infection is an influenza claim 6 0 composition. 前記神経筋疾患が、デュシェンヌ型筋ジストロフィーである、請求項６０記載の組成物。 The neuromuscular disease is Duchenne muscular dystrophy, claim 6 0 composition. 細胞内への核酸類似体の輸送を向上するためのインビトロの方法であって、請求項１記載の細胞浸透性ペプチドを、請求項１に記載の核酸類似体に共有結合によりコンジュゲートする工程を含み、該細胞内への該核酸類似体の輸送が、非コンジュゲート型の該核酸類似体と比較して向上され、該共有結合付着点が、前記カルボキシ末端のグリシンまたはプロリンに対するアミド結合からなる、方法。 An in vitro method for improving the transport of nucleic acid analogues into cells, comprising the step of covalently conjugating the cell penetrating peptide according to claim 1 to the nucleic acid analogue according to claim 1 wherein the transport of the nucleic acid analogs into the intracellular, are improved as compared to said nucleic acid analogue unconjugated, the covalent attachment point, it amide bond to glycine or proline of the carboxy-terminal Method.
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