JP6371393B2 - マススペクトルと赤外スペクトルによる微生物同定 - Google Patents
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Description
a) 参照マススペクトルのライブラリおよび種固有に取得された参照IRスペクトルのライブラリの提供。
b) サンプルからの微生物分離株の培養。
c) 微生物種のマススペクトル判定
d) この種の参照IRスペクトルのライブラリ用の微生物が取得された、種固有の仕様に従った分離株の微生物の培養と調整。
e) 赤外スペクトルの取得。
f) 種固有の参照IRスペクトルを用いて、数理統計学的な分類方法による亜種および/または変種の判定。
enteropathogenic E. coli (EPEC、腸管病原性大腸菌)、enterotoxigenic E. coli (ETEC、毒素病原性大腸菌)、enteroinvasive E. coli (EIEC、腸管侵入性大腸菌)、enteroaggregative E. coli (EAEC、腸管凝集性大腸菌) およびdiffusely adherent E. coli (DAEC、分散接着性大腸菌)。ここでも、細胞成分の1つからIRスペクトルを取得する前に、微生物細胞を破壊して細胞成分を互いに分離する基本的方法を適用することが好都合であり得る。特定の成分(例えば細胞壁) のみが、IRスペクトル測定に使用される。
Claims (15)
- サンプル中の未知の微生物を同定するための方法であって、
その属または種の分類レベルまで遡るマススペクトル判定が、培養および/または調製された前記微生物への赤外スペクトルによる少なくともその属または種の一段階下層の分類レベルまたは変種の詳細な判定によって補完され、ここにおいて、より下層の該分類レベルまたは変種の該詳細な判定のために、前記マススペクトル判定に基づく属もしくは種に限定された参照IRスペクトルのライブラリが使用される、方法。 - 前記種の前記マススペクトル判定が、赤外スペクトルによるその亜種および/または変種の詳細な判定によって補完され、ここにおいて、参照IRスペクトルの種固有ライブラリが該亜種/または変種の該詳細な判定に使用される、請求項1に記載の方法。
- 前記種の前記マススペクトル判定が、赤外スペクトルによるその血清型、病原型または耐性挙動の詳細な判定によって補完され、参照IRスペクトルの種固有ライブラリが該詳細な判定に使用される、請求項1に記載の方法。
- 前記属の前記マススペクトル判定が、赤外スペクトルによる前記種の詳細な判定によって補完され、参照IRスペクトルの属固有ライブラリが該詳細な判定に使用される、請求項1に記載の方法。
- 前記詳細な判定に使用される前記赤外スペクトルが、前記マススペクトル判定に使用される該マススペクトル取得の前に取得され、同じ微生物物質の少なくとも一部が両方の取得に使用される、請求項1〜請求項4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記詳細な判定のための前記微生物の培養および/または調製が、前記属もしくは種に限定された前記参照IRスペクトルのライブラリが取得されたのと同一の条件を用いて行われる、請求項1〜請求項4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記微生物の前記調製に、個々の細胞成分の選択または分離が含まれ、これに対して前記IRスペクトルが後に取得される、請求項6に記載の方法。
- 精製細胞壁が、前記IRスペクトルの前記取得のために使用される、請求項7に記載の方法。
- 勾配遠心分離により取得された細胞成分の断片が、前記IRスペクトルの前記取得のために使用される、請求項7に記載の方法。
- 誘導体化細胞成分が、前記IRスペクトルの前記取得のために使用される、請求項7に記載の方法。
- サンプル中の未知の微生物を同定するための方法であって、
参照マススペクトルを含むライブラリと、参照IRスペクトルを含むライブラリとを提供する工程と、
前記サンプルから微生物分離株を培養する工程と、
前記微生物分離株の微生物種のマススペクトル判定を行う工程と、
マススペクトル判定に基づく属もしくは種に限定された参照IRスペクトルのライブラリを選択する工程と、
該選択されたライブラリのために該微生物が取得されたのと同一の条件を用いて、該微生物分離株の微生物の培養と調製を行う工程と、
該培養・調製済みの微生物の赤外スペクトルを取得する工程と、
該選択されたライブラリの該参照IRスペクトルを用いて、数理統計学的な分類方法によるその亜種または変種を判定する工程と、を含む、方法。 - サンプル中の未知の微生物を同定するための方法であって、
前記サンプル中に特定の微生物種が存在すると仮定的に推定する工程と、
参照マススペクトルを含むライブラリと、推定微生物種の参照IRスペクトルを含むライブラリとを提供する工程と、
該参照IRスペクトルのライブラリのために該微生物が取得されたのと同一の条件を用いて、IRサンプルサポートプレート上の該サンプルからの微生物分離株を培養・調製する工程と、
該微生物分離株の該培養・調製済みの微生物の赤外スペクトルを取得する工程と、
MALDIイオン化のために該微生物分離株の該微生物を調製する工程と、
該微生物分離株の該微生物種のマススペクトルの取得と判定を行う工程と、
該微生物分離株についての該仮定的推定が確認された場合、前記マススペクトルの判定に基づく属もくは種に限定された該ライブラリの該参照IRスペクトルを使用して、既に取得された該IRスペクトルの数理統計学的な分類を用いてその亜種または変種を判定する工程と、を含む、方法。 - 前記IRサンプルサポートプレートが、セレン化亜鉛またはシリコンから構成される、請求項12に記載の方法。
- 前記サンプルからの前記微生物分離株がさらに、同じ前記IRサンプルサポートプレート上でMALDIイオン化のために調製される、請求項12または請求項13に記載の方法。
- Shigella属の種またはEscherichia coli種の前記マススペクトル判定の後に、該Shigella属および該Escherichia coli種の微生物の赤外スペクトルのみを含む参照IRスペクトルのライブラリを使用して、赤外スペクトルを用いた前記種の前記詳細な判定を行う、請求項1に記載の方法。
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