JP6330237B2 - ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地、ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法及びラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法 - Google Patents
ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地、ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法及びラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法 Download PDFInfo
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Description
本発明は、ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地、ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法及びラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法に関する。
ラクトバチルス属乳酸菌は、ヒトや家畜の健康に有益な効果を示す生菌（プロバイオティクス）として食品や飼料への応用が期待されている。
しかしながら、ラクトバチルス属乳酸菌の培養は困難であり、特殊な培地で培養する必要がある。
例えば、世界的に汎用されている人工合成培地（ＭＲＳ培地）は、ラクトバチルス属乳酸菌を良好に培養することができる（例えば、非特許文献１を参照）。
また、特許文献１には、ホエーに、ａ）グルコース、ｂ）カゼイン酵素分解物、ｃ）Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、オレイン酸ナトリウムまたはデカグリセリンモノオレエート、ｄ）酵母エキス、を添加することを特徴とする乳酸桿菌用培地が開示されている。
J. C. DE MAN, et al., A MEDIUM FOR THE CULTIVATION OF LACTOBACILLI, J. Appl. Bact. 23, 130-135, 1960
しかしながら、ＭＲＳ培地は、食品に添加することが認められていない硫酸マンガン四水和物等の成分を含有しているため、ＭＲＳ培地で培養したラクトバチルス属乳酸菌の培養物は、そのまま食品に添加することができない。
一方、ホエー等の乳由来成分は、栄養成分が豊富なため、他の微生物による汚染を受けやすく、取り扱いが困難な場合がある。また、乳由来成分を含有する培地は、アレルギー源を含有するため、使用制限が生じる場合がある。
そこで、本発明は、硫酸マンガン四水和物や乳由来成分を実質的に含有しない、ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地を提供することを目的とする。本発明はまた、上記培地を用いたラクトバチルス属乳酸菌の培養方法及びラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法を提供することを目的とする。
本発明は以下の通りである。
［１］ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地であって、ペプトン、牛肉エキス（ラブ・レムコ粉末）、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を実質的に含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する、培地。
［２］ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を実質的に含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する食品グレード培地中で、ラクトバチルス属乳酸菌を培養する工程を含む、ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法。
［３］ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を実質的に含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する食品グレード培地中で、ラクトバチルス属乳酸菌を培養する工程を含む、ラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法。
［１］ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地であって、ペプトン、牛肉エキス（ラブ・レムコ粉末）、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を実質的に含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する、培地。
［２］ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を実質的に含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する食品グレード培地中で、ラクトバチルス属乳酸菌を培養する工程を含む、ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法。
［３］ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を実質的に含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する食品グレード培地中で、ラクトバチルス属乳酸菌を培養する工程を含む、ラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法。
本発明によれば、硫酸マンガン四水和物や乳由来成分を実質的に含有しないにもかかわらず、ラクトバチルス属乳酸菌を良好に培養することができる、ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地、上記培地を用いたラクトバチルス属乳酸菌の培養方法及びラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法を提供することができる。
［ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地］
１実施形態において、本発明は、ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地であって、ペプトン、牛肉エキス（ラブ・レムコ粉末）、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する、培地を提供する。
１実施形態において、本発明は、ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地であって、ペプトン、牛肉エキス（ラブ・レムコ粉末）、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する、培地を提供する。
上記培地は、ラクトバチルス属乳酸菌を良好に増殖させることができる。ラクトバチルス属乳酸菌としては、ラクトバチルス・ガセリ菌株、ラクトバチルス・アシドフィルス菌株、ラクトバチルス・カゼイ菌株、ラクトバチルス・ヘルベティカス菌株等が挙げられる。
「食品グレード」とは、上記培地が食用に適することを意味する。より具体的には、上記培地に含まれる全ての成分が、食品に添加することを認められていることを意味する。したがって、上記培地をヒトが摂取しても人体に悪影響を及ぼすことがない。培地が食品グレードであるため、上記培地で培養したラクトバチルス属乳酸菌の培養物は、そのまま簡便かつ安全に各種食品に添加することができる。
＜ＭＲＳ培地＞
世界的に汎用されている、ラクトバチルス属乳酸菌培養用人工合成培地である、ＭＲＳ培地の成分を表１に示す。
世界的に汎用されている、ラクトバチルス属乳酸菌培養用人工合成培地である、ＭＲＳ培地の成分を表１に示す。
表１に示す成分のうち、ペプトン、牛肉エキス（ラブ・レムコ粉末）、工業用酵母エキス及び硫酸マンガン四水和物は、食品に添加することが認められていないものである。
＜ペプトン＞
ペプトンとは、タンパク質を加水分解、酵素分解又は発酵することによって得られる、アミノ酸が複数結合した物質をいう。由来によって様々なペプトンが存在し、例えば、肉エキス、カゼインペプトン、魚肉ペプトン、大豆ペプトン、エンドウ豆ペプトン、小麦ペプトン、大麦ペプトン、綿実ペプトン等が挙げられる。
ペプトンとは、タンパク質を加水分解、酵素分解又は発酵することによって得られる、アミノ酸が複数結合した物質をいう。由来によって様々なペプトンが存在し、例えば、肉エキス、カゼインペプトン、魚肉ペプトン、大豆ペプトン、エンドウ豆ペプトン、小麦ペプトン、大麦ペプトン、綿実ペプトン等が挙げられる。
＜ラブ・レムコ粉末＞
ラブ・レムコ粉末とは、牛肉エキスである。
ラブ・レムコ粉末とは、牛肉エキスである。
＜工業用酵母エキス＞
工業用酵母エキスとは、培地用酵母エキスとも呼ばれて流通しているものであり、食品に添加することが認められていない酵母エキスである。
工業用酵母エキスとは、培地用酵母エキスとも呼ばれて流通しているものであり、食品に添加することが認められていない酵母エキスである。
＜硫酸マンガン四水和物＞
上述の非特許文献１に記載されているように、硫酸マンガン四水和物は、ラクトバチルス属乳酸菌の培養に必須の培地成分であると考えられている。しかしながら、硫酸マンガン四水和物には毒性があり、食品に添加することが認められていない。
上述の非特許文献１に記載されているように、硫酸マンガン四水和物は、ラクトバチルス属乳酸菌の培養に必須の培地成分であると考えられている。しかしながら、硫酸マンガン四水和物には毒性があり、食品に添加することが認められていない。
本実施形態に係る培地は、ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を実質的に含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する。ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を実質的に含有しないとは、これらの成分を、全く含有しないか、又は人体に悪影響を及ぼさない量しか含有しないことを意味する。あるいは、これらの成分を、本実施形態に係る培地を食用に適するものと管轄当局が判断する量しか含有しないことを意味する。
＜食品添加用酵母エキス＞
食品添加用酵母エキスとしては、食品用（食品添加用）に市販されているものであれば特に制限なく用いることができる。酵母エキスは、酵母の有効成分を自己消化法、酵素分解法、熱水抽出法等の方法により抽出したものである。自己消化法とは、生酵母を原料に用い、酵母自身が持つ酵素を利用して酵母の成分を分解し抽出する方法である。酵素分解法とは、酵母の持つ酵素群を、熱処理や乾燥処理等により不活化させておき、改めてタンパク質分解酵素、核酸分解酵素等の酵素を添加して酵母の成分を分解し抽出する方法である。酵母エキスの原料の酵母としては、パン酵母、ビール酵母、トルラ酵母等が挙げられる。
食品添加用酵母エキスとしては、食品用（食品添加用）に市販されているものであれば特に制限なく用いることができる。酵母エキスは、酵母の有効成分を自己消化法、酵素分解法、熱水抽出法等の方法により抽出したものである。自己消化法とは、生酵母を原料に用い、酵母自身が持つ酵素を利用して酵母の成分を分解し抽出する方法である。酵素分解法とは、酵母の持つ酵素群を、熱処理や乾燥処理等により不活化させておき、改めてタンパク質分解酵素、核酸分解酵素等の酵素を添加して酵母の成分を分解し抽出する方法である。酵母エキスの原料の酵母としては、パン酵母、ビール酵母、トルラ酵母等が挙げられる。
食品添加用酵母エキスの具体例としては、酵母エキスＳＡ−Ｒ、酵母エキスＳＡ−Ｍ、酵母エキスＳ、酵母エキスＦＲ、酵味（ペースト）、酵味（粉末）、酵母エキスＳＬ−Ｗ、酵母エキスＢＹ−Ｇ、酵母エキスＨＲ（以上、ＭＣフードスペシャリティーズ株式会社製）；酵母エキスＨ（協和発酵キリン株式会社製）；酵母エキスサンライク、酵母エキスＲＮ−１（以上、三栄源エフ・エフ・アイ株式会社製）等が挙げられる。
これらの食品添加用酵母エキスのうち、ラクトバチルス属乳酸菌の増殖性の観点からは、酵母エキスＳＡ−Ｍ、酵母エキスＳ、酵母エキスＦＲ、酵味（ペースト）、酵母エキスＨ、酵母エキスＳＬ−Ｗ、酵母エキスＨＲが好ましく、酵母エキスＳ、酵母エキスＦＲ、酵味（ペースト）、酵母エキスＨ、酵母エキスＳＬ−Ｗがより好ましく、酵母エキスＦＲ、酵母エキスＨがさらに好ましい。
また、食品添加用酵母エキスとしては、核酸分解物を含有する食品添加用酵母エキスが好ましく、グアノシンを含有する食品添加用酵母エキスがより好ましい。
ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地中の食品添加用酵母エキスの含有量は、例えば０．３〜５ｗ／ｖ％が例示できる。
１実施形態において、ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地は、食品添加用酵母エキスを唯一の窒素源として含有する。このため、食品添加用酵母エキスの濃度を制御することにより、ラクトバチルス属乳酸菌の増殖を容易に調節することができる。
ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地は、食品に添加することが認められている成分である限り、微生物用培地に通常含有される他の成分を含有していてもよい。このような成分として、例えば、グルコース、モノオレイン酸ソルビタン（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）、リン酸水素二カリウム、酢酸ナトリウム三水和物、クエン酸三アンモニウム、硫酸マグネシウム七水和物等が挙げられる。
＜乳由来成分＞
ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地は、乳由来成分を実質的に含有しないことが好ましい。乳由来成分を含有する培地は不透明な場合があり、濁度測定によるラクトバチルス属乳酸菌の生育性判定が困難な場合がある。しかしながら、乳由来成分を実質的に含有しないことにより、培地が透明となり、濁度測定により乳酸菌の生育性判定が容易となりやすい。
ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地は、乳由来成分を実質的に含有しないことが好ましい。乳由来成分を含有する培地は不透明な場合があり、濁度測定によるラクトバチルス属乳酸菌の生育性判定が困難な場合がある。しかしながら、乳由来成分を実質的に含有しないことにより、培地が透明となり、濁度測定により乳酸菌の生育性判定が容易となりやすい。
また、乳由来成分を含有する培地は、ｐＨの変化や加熱によって性状が変化しやすく、例えば遠心分離により培養後の菌体を回収するときに、凝固したカゼイン等が混入し、純粋な菌体を得ることが困難な場合がある。しかしながら、乳由来成分を実質的に含有しないことにより、遠心分離等により培養後の菌体を回収するときに、菌体以外の成分が混入することが少なく、純粋な菌体を得ることが容易である。
また、乳由来成分を含有すると、アレルギーの原因となる場合がある。しかしながら、乳由来成分を実質的に含有しないことにより、アレルギーの原因になりにくい培地を得ることができる。
乳由来成分を実質的に含有しないとは、乳由来成分を全く含有しないか、上述の問題が生じない程度しか含有しないことを意味する。乳由来成分としては、ホエー、カゼイン、乳清タンパク質濃縮物、これらを酵素処理等により加工したもの等が挙げられる。
また、本実施形態に係る培地は、従来広く用いられてきたＭＲＳ培地の約１／１０のコストで製造することができるため、食品工業等に広く応用することができる。
［ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法］
１実施形態において、本発明は、ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する食品グレード培地中で、ラクトバチルス属乳酸菌を培養する工程を含む、ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法を提供する。
１実施形態において、本発明は、ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する食品グレード培地中で、ラクトバチルス属乳酸菌を培養する工程を含む、ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法を提供する。
本実施形態に係る方法により、ラクトバチルス属乳酸菌を低コストで良好に増殖することができる。
［ラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法］
１実施形態において、本発明は、ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する食品グレード培地中で、ラクトバチルス属乳酸菌を培養する工程を含む、ラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法を提供する。
１実施形態において、本発明は、ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物を含有せず、食品添加用酵母エキスを含有する食品グレード培地中で、ラクトバチルス属乳酸菌を培養する工程を含む、ラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法を提供する。
本実施形態に係る製造方法により、ラクトバチルス属乳酸菌培養物を低コストで製造することができる。ラクトバチルス属乳酸菌培養物とは、ラクトバチルス属乳酸菌の培養液、分離した菌体、菌体外生産物を含む培養上清等を意味する。このラクトバチルス属乳酸菌培養物は、そのまま簡便かつ安全に各種食品に添加することができる。例えば、発酵乳等の食品にスターターとして添加する、プロバイオティクスとして各種食品に添加する等の用途が挙げられる。
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
（実施例１〜１０）
＜ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地の作製＞
表２に示す組成の材料に蒸留水を加えて溶解し、１Ｌになるように調整した。続いて、１Ｎ−ＮａＯＨを用いてｐＨを６．５に調整し、１２１℃、１５分の条件で高圧蒸気滅菌を行い、実施例１~１０の培地を調製した。材料としては、全て食品添加物として認可されているものを用いた。また、酵母エキスとしては、表３に示す食品添加用酵母エキスを用いた。実施例１〜１０の培地の材料のコストは、後述する比較例１の培地の約１／１０であった。
＜ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地の作製＞
表２に示す組成の材料に蒸留水を加えて溶解し、１Ｌになるように調整した。続いて、１Ｎ−ＮａＯＨを用いてｐＨを６．５に調整し、１２１℃、１５分の条件で高圧蒸気滅菌を行い、実施例１~１０の培地を調製した。材料としては、全て食品添加物として認可されているものを用いた。また、酵母エキスとしては、表３に示す食品添加用酵母エキスを用いた。実施例１〜１０の培地の材料のコストは、後述する比較例１の培地の約１／１０であった。
（比較例１）
世界的に汎用されているＭＲＳ培地（ＯＸＯＩＤ社製）を比較例１の培地とした。より具体的には、上述の表１に示す組成の材料に蒸留水を加えて溶解し、１Ｌになるように調整した。続いて、１Ｎ−ＮａＯＨを用いてｐＨを６．５に調整し、１２１℃、１５分の条件で高圧蒸気滅菌を行い、比較例１の培地とした。
世界的に汎用されているＭＲＳ培地（ＯＸＯＩＤ社製）を比較例１の培地とした。より具体的には、上述の表１に示す組成の材料に蒸留水を加えて溶解し、１Ｌになるように調整した。続いて、１Ｎ−ＮａＯＨを用いてｐＨを６．５に調整し、１２１℃、１５分の条件で高圧蒸気滅菌を行い、比較例１の培地とした。
（比較例２）
酵母エキスとして工業用酵母エキスであるＤ−３（日本製薬株式会社製）を使用した点以外は、実施例１と同様にして培地を調製し、比較例２の培地とした。
酵母エキスとして工業用酵母エキスであるＤ−３（日本製薬株式会社製）を使用した点以外は、実施例１と同様にして培地を調製し、比較例２の培地とした。
（実験例１）
＜ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株の培養＞
実施例１〜１０、比較例１及び比較例２の培地を用いて、ラクトバチルス属乳酸菌である、ラクトバチルス・ガセリ株の基準株である、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を培養し、増殖性を検討した。
＜ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株の培養＞
実施例１〜１０、比較例１及び比較例２の培地を用いて、ラクトバチルス属乳酸菌である、ラクトバチルス・ガセリ株の基準株である、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を培養し、増殖性を検討した。
＜前培養＞
（１）１５ｍＬ容遠沈管にＭＲＳ培地４．５ｍＬと供試菌液０．５ｍＬを接種した。
（２）別の遠沈管にＭＲＳ培地５．０ｍＬを加え、これをブランクとした。
（３）（１）、（２）を３７℃で２４時間静置培養した。
（１）１５ｍＬ容遠沈管にＭＲＳ培地４．５ｍＬと供試菌液０．５ｍＬを接種した。
（２）別の遠沈管にＭＲＳ培地５．０ｍＬを加え、これをブランクとした。
（３）（１）、（２）を３７℃で２４時間静置培養した。
＜本培養＞
（１）１５ｍＬ容遠沈管を遠心分離機（ＣＰ１６ＲＸ型ローター：Ｔ９Ａ３１０４３６）を用いて、３５００×ｇ、４℃、１０分の条件で遠心分離した。
（２）遠心分離後、クリーンベンチ内で上清を捨て、５ｍＬの０．８５％リン酸緩衝生理食塩水を加え、ボルテックスミキサーで撹拌した。その後３５００×ｇ、４℃、１０分の条件で遠心分離を行い、菌体を洗浄した。この作業をもう一度繰り返した。
（３）遠心分離後、クリーンベンチ内で上清を捨て、培地を５ｍＬ加え、ボルテックスミキサーでよく撹拌した。この前培養菌液を、実施例１〜１０、比較例１及び２の培地を用いた培養用にそれぞれ調製した。
（４）滅菌試験管に、実施例１〜１０、比較例１及び比較例２の培地をそれぞれ４．８５ｍＬずつ入れ、（３）で調製した各前培養菌液を０．１５ｍＬ（３容量％）ずつ接種した。これを培養開始直後及び２４時間培養後のｐＨ及び濁度測定用に各１本ずつの計４本作製し、同じ本数分のブランクも作製した。
（５）３７℃で２４時間静置培養した。
（６）培養開始直後及び２４時間培養後のｐＨ及び濁度（波長６２０ｎｍ）を培地ごとに測定し、その値を記録した。
（１）１５ｍＬ容遠沈管を遠心分離機（ＣＰ１６ＲＸ型ローター：Ｔ９Ａ３１０４３６）を用いて、３５００×ｇ、４℃、１０分の条件で遠心分離した。
（２）遠心分離後、クリーンベンチ内で上清を捨て、５ｍＬの０．８５％リン酸緩衝生理食塩水を加え、ボルテックスミキサーで撹拌した。その後３５００×ｇ、４℃、１０分の条件で遠心分離を行い、菌体を洗浄した。この作業をもう一度繰り返した。
（３）遠心分離後、クリーンベンチ内で上清を捨て、培地を５ｍＬ加え、ボルテックスミキサーでよく撹拌した。この前培養菌液を、実施例１〜１０、比較例１及び２の培地を用いた培養用にそれぞれ調製した。
（４）滅菌試験管に、実施例１〜１０、比較例１及び比較例２の培地をそれぞれ４．８５ｍＬずつ入れ、（３）で調製した各前培養菌液を０．１５ｍＬ（３容量％）ずつ接種した。これを培養開始直後及び２４時間培養後のｐＨ及び濁度測定用に各１本ずつの計４本作製し、同じ本数分のブランクも作製した。
（５）３７℃で２４時間静置培養した。
（６）培養開始直後及び２４時間培養後のｐＨ及び濁度（波長６２０ｎｍ）を培地ごとに測定し、その値を記録した。
図１は、実施例１〜１０、比較例１及び比較例２の培地でラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を２４時間培養後のｐＨの値を示したグラフである。菌が増殖するとｐＨが下がるため、ｐＨが低いほど菌が良好に増殖したことを示す。
図２は、実施例１〜１０、比較例１及び比較例２の培地でラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を２４時間培養後の濁度の値を示したグラフである。濁度が高いほど菌が良好に増殖したことを示す。ただし、実施例７の培地はもともと濁っていたため、濁度の測定が不能であった。
図１、２の結果から、実施例１〜１０の培地は、比較例１の培地と同程度にラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を増殖できることが示された。また、実施例１〜１０の培地でラクトバチルス属乳酸菌の増殖が可能であることから、ラクトバチルス属乳酸菌の増殖には、硫酸マンガン四水和物は必須ではないと考えられる。
（実験例２）
＜ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３０菌株の培養＞
実施例１〜１０、比較例１及び比較例２の培地を用いて、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株以外のラクトバチルス・ガセリ菌株を培養し、増殖性を検討した。ラクトバチルス・ガセリ菌株として、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３０菌株を培養した。培養の手順は実験例１と同様にして行った。
＜ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３０菌株の培養＞
実施例１〜１０、比較例１及び比較例２の培地を用いて、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株以外のラクトバチルス・ガセリ菌株を培養し、増殖性を検討した。ラクトバチルス・ガセリ菌株として、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３０菌株を培養した。培養の手順は実験例１と同様にして行った。
図３は、実施例１〜１０、比較例１及び比較例２の培地でラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３０菌株を２４時間培養後のｐＨの値を示したグラフである。
図４は、実施例１〜１０、比較例１及び比較例２の培地でラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３０菌株を２４時間培養後の濁度の値を示したグラフである。ただし、実施例７の培地はもともと濁っていたため、濁度の測定が不能であった。
図３、４の結果から、実施例１〜１０の培地は、比較例１の培地と同程度にラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３０菌株を増殖できることが示された。
（実験例３）
＜各種ラクトバチルス・ガセリ菌株の培養＞
ラクトバチルス・ガセリ菌株の増殖性が良好であった、実施例４の培地（酵母エキスとして酵母エキスＦＲ、キリン協和フーズ株式会社製を用いたもの）を使用して各種ラクトバチルス・ガセリ菌株を培養し、増殖性を検討した。比較例１の培地（ＭＲＳ培地）を対照に用いた。ラクトバチルス・ガセリ菌株として、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株、１１３０菌株、５３４３菌株、１１６５７菌株、８７９０菌株、１１０４６菌株を培養した。培養の手順は実験例１と同様にして行った。
＜各種ラクトバチルス・ガセリ菌株の培養＞
ラクトバチルス・ガセリ菌株の増殖性が良好であった、実施例４の培地（酵母エキスとして酵母エキスＦＲ、キリン協和フーズ株式会社製を用いたもの）を使用して各種ラクトバチルス・ガセリ菌株を培養し、増殖性を検討した。比較例１の培地（ＭＲＳ培地）を対照に用いた。ラクトバチルス・ガセリ菌株として、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株、１１３０菌株、５３４３菌株、１１６５７菌株、８７９０菌株、１１０４６菌株を培養した。培養の手順は実験例１と同様にして行った。
図５は、実施例４及び比較例１の培地で各種ラクトバチルス・ガセリ菌株を２４時間培養後のｐＨの値を示したグラフである。図６は、実施例４及び比較例１の培地で各種ラクトバチルス・ガセリ菌株を２４時間培養後の濁度の値を示したグラフである。
図５、６の結果から、実施例４の培地は、比較例１の培地と同程度に各種ラクトバチルス・ガセリ菌株を増殖できることが示された。
（実験例４）
＜酵母エキス濃度の検討＞
実施例４の培地において、酵母エキスの濃度を変化させた培地を調製し、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を培養し、増殖性を検討した。具体的には、表５に示す量の酵母エキスを含有する点以外は実施例４の培地と同様にして、実施例１１〜１４の培地を調製した。実施例４、実施例１１〜１４及び比較例１の培地を用いて、実験例１と同様にしてラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を培養し、増殖性を検討した。
＜酵母エキス濃度の検討＞
実施例４の培地において、酵母エキスの濃度を変化させた培地を調製し、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を培養し、増殖性を検討した。具体的には、表５に示す量の酵母エキスを含有する点以外は実施例４の培地と同様にして、実施例１１〜１４の培地を調製した。実施例４、実施例１１〜１４及び比較例１の培地を用いて、実験例１と同様にしてラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を培養し、増殖性を検討した。
図７は、実施例４、実施例１１〜１４及び比較例１の培地で、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を２４時間培養後のｐＨの値を示したグラフである。図８は、実施例４、実施例１１〜１４及び比較例１の培地で、ラクトバチルス・ガセリＪＣＭ１１３１Ｔ菌株を２４時間培養後の濁度の値を示したグラフである。
図７、８の結果から、培地中の酵母エキスの含有量を変化させることによって、菌株の増殖性を調節できることが示された。
（実験例５）
＜ラクトバチルス・ガセリ菌株以外のラクトバチルス属乳酸菌株の培養＞
実施例４及び比較例１の培地を用いて、ラクトバチルス・ガセリ菌株以外のラクトバチルス属乳酸菌株を培養し、増殖性を検討した。ラクトバチルス・ガセリ菌株以外のラクトバチルス属乳酸菌株として、ラクトバチルス・アシドフィルスＪＣＭ１１３２Ｔ菌株、ラクトバチルス・カゼイＪＣＭ１１３４Ｔ菌株、ラクトバチルス・ヘルベティカスＪＣＭ１１２０Ｔ菌株を培養した。培養の手順は実験例１と同様にして行った。
＜ラクトバチルス・ガセリ菌株以外のラクトバチルス属乳酸菌株の培養＞
実施例４及び比較例１の培地を用いて、ラクトバチルス・ガセリ菌株以外のラクトバチルス属乳酸菌株を培養し、増殖性を検討した。ラクトバチルス・ガセリ菌株以外のラクトバチルス属乳酸菌株として、ラクトバチルス・アシドフィルスＪＣＭ１１３２Ｔ菌株、ラクトバチルス・カゼイＪＣＭ１１３４Ｔ菌株、ラクトバチルス・ヘルベティカスＪＣＭ１１２０Ｔ菌株を培養した。培養の手順は実験例１と同様にして行った。
図９は、実施例４及び比較例１の培地で各ラクトバチルス属乳酸菌株を２４時間培養後のｐＨの値を示したグラフである。図１０は、実施例４及び比較例１の培地で各ラクトバチルス属乳酸菌株を２４時間培養後の濁度の値を示したグラフである。
図９、１０の結果から、実施例４の培地は、比較例１の培地と同程度にラクトバチルス・ガセリ菌株以外のラクトバチルス属乳酸菌株を増殖できることが示された。
本発明によれば、硫酸マンガン四水和物や乳由来成分を実質的に含有しないにもかかわらず、ラクトバチルス属乳酸菌を良好に培養することができる、ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地、上記培地を用いたラクトバチルス属乳酸菌の培養方法及びラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法を提供することができる。
Claims (3)
- ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地であって、
ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物及び乳由来成分を実質的に含有せず、食品添加用酵母エキス、グルコース、モノオレイン酸ソルビタン、リン酸水素ニカリウム、酢酸ナトリウム三水和物、クエン酸三アンモニウム及び硫酸マグネシウム七水和物を含有する、培地。 - ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物及び乳由来成分を実質的に含有せず、食品添加用酵母エキス、グルコース、モノオレイン酸ソルビタン、リン酸水素ニカリウム、酢酸ナトリウム三水和物、クエン酸三アンモニウム及び硫酸マグネシウム七水和物を含有する食品グレード培地中で、ラクトバチルス属乳酸菌を培養する工程を含む、ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法。
- ペプトン、牛肉エキス、工業用酵母エキス、硫酸マンガン四水和物及び乳由来成分を実質的に含有せず、食品添加用酵母エキス、グルコース、モノオレイン酸ソルビタン、リン酸水素ニカリウム、酢酸ナトリウム三水和物、クエン酸三アンモニウム及び硫酸マグネシウム七水和物を含有する食品グレード培地中で、ラクトバチルス属乳酸菌を培養する工程を含む、ラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法。
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