JP6245299B2 - 組換え安定細胞クローン、その産生およびその使用 - Google Patents
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Description
−オリジナル組換えクローンを、血清含有培地で、好ましくは選択圧なく、細胞培養物まで増殖させる工程、
−好ましくは産生条件と等しい条件である血清およびタンパク質を含まない条件下で、細胞を培養する工程、
−血清およびタンパク質を含まない条件下で、細胞培養物を、産物産生細胞について試験する工程、
−血清およびタンパク質を含まない条件下で、安定な組換え細胞クローンをクローニングする工程で、ここでは、このクローニングは、通常公知な技術(例えば、希釈による細胞の単離および個々のクローンを増殖)によって行われ得る、工程、
−血清およびタンパク質を含まない条件下で単離された細胞クローンを増殖させる工程、および
−必要に応じて、細胞培養物を、産物再生細胞について試験する工程。
−血清およびタンパク質を含まない条件下で非組換え開始細胞または細胞株を増殖し、そして血清およびタンパク質を含まない条件下で安定な非組換え細胞クローンをクローニングする工程、
−組換え核酸によって安定な細胞クローンをトランスフェクトし、そして安定な組換え細胞クローンを単離する工程、
−必要に応じて、産生条件と同じである条件下で、無血清無タンパク質培地で安定な細胞クローンのトランスフェクト体を培養する工程、
−安定な組換え細胞を、産生および産物安定性について試験する工程。
Claims (2)
- 安定な組換えCHO細胞クローンであって、第VIII因子およびvon Willebrandの因子(vWF)から選ばれる組換え産物を産生し、血清およびタンパク質を含まない培地での産生条件下で少なくとも40世代の間安定な、以下の工程を含む方法によって得られる前記クローン:
オリジナル組換え哺乳動物細胞クローンを調製する工程、ここで前記オリジナル組換え細胞クローンはCHO細胞クローンであり、選択マーカーおよび増殖マーカーを有する、
前記オリジナル組換え細胞クローンを血清含有培地で培養する工程、
前記細胞を、選択マーカーに対する選択的圧力も増殖マーカーに対する選択的圧力もなしに、無血清無タンパク質培地に適用する工程、
適用後の細胞培養物を、選択マーカーに対する選択的圧力も増殖マーカーに対する選択的圧力もなしに、安定な産物産生について試験する工程、および
安定な産物産生細胞クローンを、選択マーカーに対する選択的圧力も増殖マーカーに対する選択的圧力もなしに、血清およびタンパク質を含まない条件下でクローニングする工程。 - 第VIII因子およびvon Willebrandの因子(vWF)から選ばれる組換え産物を産生する安定な組換えCHO細胞クローンであって、前記細胞クローンにおいて選択マーカーに対する選択的圧力も増殖マーカーに対する選択的圧力もなしに、血清およびタンパク質を含まない培地での産生条件下で少なくとも40世代の間安定な前記細胞クローン。
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