JP6195630B2 - マイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物 - Google Patents
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Description
さらにまた、ワクチン免疫は有効なマイコプラズマ感染の制御方法である。いくつかのマイコプラズマ菌に対して有効なワクチンが先行技術として記載されている。WO2009058833(A2)はワクチン免疫用の弱毒化した非病毒性マイコプラズマ・ボビス菌株を例示的に記載している。さらにまた、WO2009126356(A2)はマイコプラズマ・ヒオニューモニアエに対する免疫原性組成物を記載している。しかしながら必要とされるものは、多数の病原体に対して防御を提供する効果的な組み合わせワクチンである。そのような組み合わせワクチンは、多数の病原体に対する防御を付与するために必要な免疫回数を最小限にするために、投与コストを削減するために、さらに許容及び対応率を高めるために希求される。しかしながら抗原干渉の問題がマルチ成分ワクチンの開発を複雑にしている。特に抗原干渉は、多数の抗原の投与は、ある種の抗原を個々に投与するときに認められる免疫応答と対比してそのような抗原に対する応答を低下させる結果をしばしばもたらすという観察に当てはまる。
したがって、多数の病原体に対する防御を提供する効果的な組み合わせワクチンが希求される。
さらにまた、本発明は免疫原性組成物を提供し、前記組成物は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原及びM.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;並びにb)医薬的に許容できる担体を含む。
有益なことには、本発明が提供する実験データは、本明細書で提供する免疫原性組成物の有効性及び抗原干渉が存在しないことを示す。具体的には、M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの抗原を含む免疫原性組成物の投与後に、M.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエの有効性に関して干渉が存在しないことが示された。
したがってある特徴にしたがえば、本出願は免疫原性組成物を提供し、前記組成物は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原、M.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;b)M.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原;及びc)医薬的に許容できる担体を含む。
通常は、“免疫学的応答”は以下の作用の1つ以上を含む(ただしこれらに限定されない):本発明の免疫原性組成物に含まれる1つの抗原又は複数の抗原を特異的に指向する、抗体、B細胞、ヘルパーT細胞、サプレッサーT細胞、及び/又は細胞傷害性T細胞、及び/又はガンマ-デルタT細胞の産生又は活性化。好ましくは、該宿主は防御性免疫学的応答又は治療性応答を示すであろう。
“防御性免疫学的応答”は、感染宿主が通常示す臨床徴候の軽減又は欠如、迅速な回復時間、及び/又は感染性を示す期間の減少、又は感染宿主の組織若しくは体液若しくは分泌物中の病源体力価の低下によって明示されるであろう。
新規感染に対する抵抗性が増強され、及び/又は、当該疾患の臨床重篤度が軽減されるように宿主が防御性免疫学的応答を示す場合には、該免疫原性組成物は“ワクチン”と記載される。
“治療性応答”は、ある宿主が、通常1つの臨床徴候又は複数の臨床徴候を引き起こす病原体(例えばマイコプラズマ)に既に感染しているときに、そのような宿主は通常示すそのような臨床徴候の軽減及び/又は治癒を示すであろう。
“マイコプラズマ”という用語は当業者には公知である。“マイコプラズマ”は例えば以下に記載された細菌の属を指す:Blanchard, A., and G. F. Browning (eds.). 2005. Mycoplasmas: Molecular biology, pathogenicity and strategies for control. Horizon Bioscience, Wymondham U.K.;Kobisch M. and Friis N.F. 1996, Swine mycoplasmoses, Rev. Sci.Tech. Off. Int. Epiz. 15, 1569-1605。細菌は、それらの生化学的及び生物学的特性の他にそれらの形態学に基づいて分類され得る。これらの分類基準は当業界で周知である。概して、当該マイコプラズマ感染は本記述の他の個所に記載した臨床徴候を伴う。
本明細書で用いられる“マイコプラズマ”という用語は、M.ヒオリーニス又はM.ヒオリーニス及びM.ヒオシノビアエ又はM.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエを指す。M.ヒオリーニスの完全なゲノム配列は、例えば以下に例示的に提供される:Liu, W. et al., J. Bacteriol. 2010, vol. 192 (21), 5844-45 doi: 10.1128/JB.00946-10. Epub 2010 Aug 27;又はCalcutt MJ. et al., 2012, J. Bacteriol. Vol. 194 (7), 1848 doi: 10.1128/JB.00033-12。M.ヒオシノビアエの単離株は、例えばアメリカンタイプカルチャーコレクションにアクセッション番号ATCC 25591又はATCC 27095で寄託されている。マイコプラズマ・ヒオニューモニアエの単離株は、例えばアメリカンタイプカルチャーコレクションにアクセッション番号ATCC 25095、ATCC 25617及びATCC 25934で寄託されている。マイコプラズマ・ヒオニューモニアエJ-株のゲノムDNAは、アメリカンタイプカルチャーコレクションにアクセッション番号ATCC 25934Dで寄託されている。
本発明のある特徴では、該抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。前記1つ以上の全不活化抗原は、M.ヒオリーニス;M.ヒオシノビアエ;M.ヒオニューモニアエ;M.ヒオリーニス及びM.ヒオシノビアエ;並びにM.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエから成る群から選択される全不活化バクテリンであり得る。
したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原;及びM.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;並びにb)医薬的に許容できる担体を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、M.ヒオリーニス;M.ヒオシノビアエ;又はM.ヒオリーニス及びM.ヒオシノビアエ抗原は全不活化バクテリンである。
別の特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原;M.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原及びM,ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原、及びb)医薬的に許容できる担体を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該M.ヒオリーニス;M.ヒオシノビアエ;及び/又はM.ヒオニューモニアエの抗原は全不活化バクテリンである。本発明のこの特徴は、M.ヒオリーニスの抗原は全不活化バクテリンであるか、又はM.ヒオニューモニアエの抗原は全不活化バクテリンであるか、又はM.ヒオシノビアエの抗原は全不活化バクテリンであるということを包含する。しかしながら、本発明のこの特徴はまた、本発明の免疫原性組成物の全ての抗原が全不活化バクテリンであるということを包含する。すなわち、M.ヒオリーニス及びM.ヒオシノビアエの抗原、又はM.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの抗原は全不活化バクテリンである。
好ましいホルマリン不活化条件は、約0.02%(v/v)−2.0%(v/v)、より好ましくは約0.1%(v/v)−1.0%%(v/v)、さらに好ましくは約0.15%(v/v)−0.8%(v/v)、さらに好ましくは約0.16%(v/v)−0.6%(v/v)、もっとも好ましくは約0.2%(v/v)−0.4%(v/v)のホルマリン濃度を含む。インキュベーション時間はマイコプラズマ種の耐性に左右される。一般に不活化プロセスは、適切な培養系でマイコプラズマの増殖が検出できなくなるまで実施される。
本発明の不活化バクテリン成分は、公知の技術(例えば以下に記載されたもの:Nature, 1974, 252, 252-254;又はJournal of Immunology, 1978, 120, 1109-13)を用いてリポソームに取り込むことができる。本発明の別の実施態様では、本発明の不活化バクテリン成分は、適切な生物学的化合物(例えば多糖類、ペプチド、タンパク質など又は前記の組み合わせ)と複合物を形成させることができる。
さらに別の特徴では、本明細書で提供する、さらにまたM.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原を含む免疫原性組成物は、必要がある対象動物において、M.ヒオニューモニアエによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である。したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原;M.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;b)M.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原;及びc)医薬的に許容できる担体を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、そのような免疫原性組成物は、必要がある対象動物において、M.ヒオニューモニアエによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である。さらに別の特徴にしたがえば、そのような免疫原性組成物は、必要がある対象動物において、M.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である。さらに別の特徴にしたがえば、該1つ以上のマイコプラズマ抗原は、上記に記載のマイコプラズマ種の全不活化バクテリンである。
“治療及び/又は予防”は一般に、必要があるか又はそのような治療/予防により利益を受け得る対象動物又は対象動物の群れに有効量の本発明の免疫原性組成物を投与することを含む。“治療”という用語は、ひとたび対象動物又は群れの少なくとも数匹の動物がそのようなマイコプラズマに感染したら、さらにそのような動物がそのようなマイコプラズマ感染によって引き起こされるか若しくは前記感染に付随するいくつかの臨床徴候を示す場合に該免疫原性組成物の有効量を投与することを指す。“予防”という用語は、対象動物のマイコプラズマによるいずれの感染よりも前に、又は少なくともそのような動物若しくは一群の動物のいずれもがそのようなマイコプラズマによる感染によって引き起こされるか若しくは前記感染に付随するいずれの臨床徴候も示さない場合に、対象動物に投与することを指す。
好ましくは、臨床徴候の発生率又は重篤度は、治療されていないか又は本発明より前に利用可能であった免疫原性組成物で治療されたが続いて特定のマイコプラズマ菌に感染した対象動物と比較して、少なくとも10%、より好ましくは少なくとも20%、さらに好ましくは少なくとも30%、さらに好ましくは少なくとも40%、さらに好ましくは少なくとも50%、さらに好ましくは少なくとも60%、さらに好ましくは少なくとも70%、さらに好ましくは少なくとも80%、さらに好ましくは少なくとも90%、もっとも好ましくは少なくとも95%軽減される。
対象動物における特定のマイコプラズマ感染によって引き起こされるか又は前記感染に付随する臨床徴候の発生率の低下又は重篤度の軽減は、本発明の免疫原性組成物の1用量以上を必要がある対象動物に投与することによって達成できる。実施例2及び3で示されるように、本明細書で提供する免疫原性組成物は、必要がある対象動物への1用量の投与後に有効であることが証明された。したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原;及びM.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;及びb)医薬的に許容できる担体を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、そのような免疫原性組成物は、必要がある対象動物において単一用量の投与後に、M.ヒオリーニスによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である。さらに別の特徴にしたがえば、そのような免疫原性組成物はさらにM.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原を含む。さらに別の特徴にしたがえば、該1つ以上のマイコプラズマ抗原は、上記に記載のマイコプラズマ種の全不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原;及びM.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;及びb)医薬的に許容できる担体を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、該免疫原性組成物は、ブタでM.ヒオリーニスによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である。さらに別の特徴にしたがえば、そのような免疫原性組成物は、ブタでM.ヒオリーニスによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である。そのような免疫原性組成物がさらにM.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原を含むとき、さらに別の特徴にしたがえば、前記はブタでM.ヒオニューモニアエによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である。さらに別の特徴にしたがえば、そのような免疫原性組成物(M.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原を含む)は、ブタでM.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である。繰り返せば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は、上記に記載のマイコプラズマ種の全不活化バクテリンであり得る。
本発明のさらに別の特徴では、免疫原性組成物はワクチンである。したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原;及びM.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;及びb)医薬的に許容できる担体を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、該免疫原性組成物はワクチンである。そのようなワクチンはまたM.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原を含むことができる。本発明のワクチンは、必要がある対象動物に投与されるとき、該免疫原性組成物について記載した特性と同じ有益な特性を有する。
本発明のある特徴では、医薬的に許容できる担体は水中油中水エマルジョン又はカルボマーである。したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原;及びM.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;及びb)医薬的に許容できる担体を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、該医薬的に許容できる担体は水中油中水エマルジョン又はカルボマーである。そのようなワクチンはまたM.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原を含むことができる。さらにまた、そのようなマイコプラズマ種の抗原は上記記載の全不活化バクテリンとして提供され得る。
本発明のある特徴では、水中油中水エマルジョンはモンタニド(Montanido)ISA207VG又はカルボポール(CARBOPOL(商標))である。モンタニドISA207 VGは、非鉱物油中に溶液の無水マンニトールのオレイン酸エステルを含むアジュバントであり、水中油中水ワクチンエマルジョンを生成するように考案されている。モンタニドISA207 VGは当業者に周知である。したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原;及びM.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;及びb)医薬的に許容できる担体を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、該医薬的に許容できる担体はモンタニドISA207VG又はCARBOPOL(商標)である。上記で述べたように、そのようなワクチンはまたM.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原を含むことができる。さらにまた、そのようなマイコプラズマ種の抗原は上記記載の全不活化バクテリンとして提供され得る。
“培養”という用語は当業者には公知である。前記用語は、当該生物の外部において培養状態で細胞を増殖させることに関する。特に“培養”という用語は、当該生物の外部において細胞系で細胞を増殖させることに関する。
“細胞系”という用語は当業者には公知である。特に、“細胞系”という用語は、微生物(例えばマイコプラズマ菌)の培養のためのin vitro細胞培養系である。そのような細胞系は、宿主細胞及び当該生物の外部でそのような細胞を増殖させるために適切な細胞培養培地を含む。特に、宿主細胞はマイコプラズマ菌の感染に感受性であることもないこともある。そのような宿主細胞は、生きている細胞として、不活化形で又は細胞フラグメントとして存在し得る。好ましくは、そのような宿主細胞はマイコプラズマ菌による感染に感受性である。本明細書に記載の方法の実施に用いることができる宿主細胞には、メイジン-ダービー(Madin-Darby)イヌ腎上皮(MDCK)細胞(例えばアメリカンタイプカルチャーコレクションにアクセッション番号ATCC CCL-34又はATCC CRL-2285で寄託されたメイジン-ダービーイヌ腎上皮細胞)又はマッコイ(McCoy)細胞(例えばアメリカンタイプカルチャーコレクションにアクセッション番号ATCC CRL-1696で寄託されたもの)が含まれるが、ただしこれらに限定されない。適切な細胞培養培地は当業者には公知であり、市場で入手できる。それらは、栄養物、塩、増殖因子、抗生物質、血清(例えばウシ胎児血清)及びpHインジケーター(例えばフェノールレッド)を含むことができる。
“血清が低減された”という用語は、無細胞培養系でマイコプラズマ菌の培養に用いられる血清の量と比較して、真核細胞系で同じ種のマイコプラズマ菌の培養に添加される血清の量が低下していることを指す。無細胞培養系でのマイコプラズマ菌培養のための血清の量と比較して、真核細胞系でのマイコプラズマ菌培養のための血清の量は、少なくとも10%、好ましくは少なくとも20%、より好ましくは少なくとも30%、さらに好ましくは少なくとも40%、さらに好ましくは少なくとも50%、さらに好ましくは少なくとも60%、さらに好ましくは少なくとも70%、さらに好ましくは少なくとも80%、さらに好ましくは少なくとも90%、さらに好ましくは少なくとも95%、さらに好ましくは少なくとも96%、さらに好ましくは少なくとも97%、さらに好ましくは少なくとも98%、さらに好ましくは少なくとも99%、もっとも好ましくは100%低減される。したがって、本発明にしたがえば、マイコプラズマ菌は、もっとも好ましくは血清を全く欠く真核細胞系で培養されると理解されねばならない。
本明細書で用いられる“無細胞培養系”という用語は、マイコプラズマ菌を除いて細胞を全く含まない培養系を指す。
MDCK細胞を含む真核細胞系でのマイコプラズマ菌の培養のための好ましい血清量は、約0−6%(v/v)、より好ましくは約1−5%(v/v)、さらに好ましくは約2−4%(v/v)、さらに好ましくは約2−3%(v/v)の間の血清濃度、もっとも好ましくは約2%(v/v)の血清濃度を含む。
マッコイ細胞を含む真核細胞系でのマイコプラズマ菌の培養のための好ましい血清量は、約0−10%(v/v)、より好ましくは約1−9%(v/v)、さらに好ましくは約2−8%(v/v)、さらに好ましくは約3−7%(v/v)、さらに好ましくは約4−6%(v/v)の間の血清濃度、もっとも好ましくは約5%(v/v)の血清濃度を含む。
“採集”という用語はマイコプラズマ菌の抗原をトランスフェクトした真核細胞系から収集又は回収することを指す。当業界で公知の任意の通常的方法(例えば任意の分離方法)を前記マイコプラズマ抗原の回収に用いることができる。当業界で周知の方法は遠心分離又はろ過(例えば一定の孔サイズを有する半透膜を用いる)を含む。
“単離”という用語はマイコプラズマ抗原の単離工程を含む。マイコプラズマ菌の抗原を感染真核細胞系から単離する方法は当業者には公知である。そのような方法は物理的及び/又は化学的方法を含み、前記には凍結融解の繰り返し、超音波処理などが含まれる(ただしこれらに限定されない)。
単離株から抗原を“精製”する方法は当業者には公知であり、例えば以下に記載の方法による:Protein purification methods - a practical approach, E.L.V. Harris and S. Angel, eds., IRL Press at Oxford University Press。そのような方法には、遠心分離及び/又はろ過による分離、沈殿、サイズ排除(ゲルろ過)クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、金属キレートクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、共有結合クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーなどが含まれるが、ただしこれらに限定されない。抗原は、精製された純粋な形態で入手し得るか、或いは他の細胞性物質若しくは培養液などを含まないか又は実質的に前記を含まない状態であり得る。前記単離及び/又は精製後、抗原は、少なくとも80%、好ましくは80%−90%、より好ましくは90%−97%、もっとも好ましくは97%の純度から夾雑物を全く含まない完全に純粋な形態までの純度を示す。
更なる特徴にしたがえば、本明細書で用いられる“入手”はまた、更なる仕上工程(例えば緩衝剤の添加、不活化、中和工程など)を含むことができる。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオリーニスの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造される。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造される。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオニューモニアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造される。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオリーニス及びM.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造される。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造される。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造される。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。
上記で述べたように、真核細胞系はMDCK細胞株又はマッコイ細胞株の細胞を含むことができる。したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は免疫原性組成物を調製する方法を提供し、ここで、該方法は、a)M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ、及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の血清が低減された真核細胞系での培養;b)そのようなマイコプラズマ菌の抗原の入手;及びc)医薬的に許容できる担体の添加を含み、該真核細胞系はMDCK細胞株又はマッコイ細胞株を含む。
本明細書で用いられる“増大した免疫原性”という用語は、問題の抗原を含む免疫原性組成物によって引き起こされる免疫学的応答が、同じ抗原を含む参照免疫原性組成物と比較して増進することを意味し、ここで参照免疫原性組成物の抗原は無細胞培養系で培養されたマイコプラズマ菌から調製される。
“増大”という用語は、細胞性及び/又は抗体媒介免疫応答が、同じ抗原を含む参照免疫原性組成物(参照免疫原性組成物の抗原は無細胞培養系で培養されたマイコプラズマ菌から調製される)によって誘引される細胞性及び/又は抗体媒介免疫応答と比較して少なくとも10%、好ましくは少なくとも20%、より好ましくは少なくとも30%、さらに好ましくは少なくとも40%、さらに好ましくは少なくとも50%、さらに好ましくは少なくとも75%、もっとも好ましくは少なくとも100%増進することを意味する。細胞性及び/又は抗体媒介免疫応答の測定の仕方は当業者の一般的な知識である。特に、問題の免疫原性組成物の細胞媒介免疫応答と参照物の細胞媒介免疫応答との比較、又は問題の免疫原性組成物の抗体媒介免疫応答と参照物のそれとの比較はそのような当業者には明白であるが、問題の免疫原性組成物の細胞媒介免疫応答と参照物の抗体媒介免疫応答との比較又はその逆は自明ではない。さらにまた、細胞媒介免疫応答は、例えば問題の免疫原性組成物/抗原による細胞傷害性T細胞の活性化の測定によって測定できる。抗体媒介免疫応答は、例えば、当該抗原を含む免疫原性組成物を動物に投与することによって生成される抗原特異的抗体の量の測定によって測定できる。細胞性及び/又は抗体媒介免疫応答は、例えばマウスモデル、ネコモデル、ウシモデル又はブタモデルを用いることによって測定できる。しかしながら、実施例4及び5に記載するアッセイは、M.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエに対する免疫学的応答を検出する参照アッセイとして用いられるであろう。
有益なことには、本発明が提供する実験データは、上記記載の方法によって提供されるマイコプラズマ抗原は、無細胞培養系で培養されたマイコプラズマ菌から入手される抗原と比較して増大した免疫原性を示すことを開示する。具体的には、MDCKに依るM.ヒオリーニスワクチンはより早期の血清転換の開始、より大多数の血清陽性豚、及びより高い血清学的力価を示した。
したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ、及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の血清が低減された真核細胞系での培養;b)そのようなマイコプラズマ菌の抗原の入手;及びc)医薬的に許容できる担体の添加を含む方法によって得られる免疫原性組成物を提供し、ここで、前記免疫原性組成物は、無細胞培養系で培養されたマイコプラズマから入手される同じ抗原を含む免疫原性組成物と比較して増大した免疫原性を示す。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造され、前記免疫原性組成物は、無細胞培養系で培養されたマイコプラズマから入手される同じ抗原を含む免疫原性組成物と比較して増大した免疫原性を示す。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。さらにまた、更なる特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造され、前記免疫原性組成物は、無細胞培養系で培養されたマイコプラズマから入手される同じ抗原を含む免疫原性組成物と比較して増大した免疫原性を示す。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。さらにまた、更なる特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが不活化バクテリン、好ましくはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造され、前記免疫原性組成物は、無細胞培養系で培養されたマイコプラズマから入手される同じ抗原を含む免疫原性組成物と比較して増大した免疫原性を示す。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。さらにまた、更なる特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが不活化バクテリン、好ましくはホルマリン不活化バクテリンである。
さらに別の特徴では、該マイコプラズマ抗原は血清が低減された真核細胞系で製造され、ここで、該免疫原性組成物は前記真核細胞系の真核細胞の成分を含む。
したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ、及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の血清が低減された真核細胞系での培養;b)そのようなマイコプラズマ菌の抗原の入手;及びc)医薬的に許容できる担体の添加を含む方法によって得られる免疫原性組成物を提供し、ここで、前記免疫原性組成物は前記真核細胞系の真核細胞の成分を含む。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造され、該免疫原性組成物は前記真核細胞系の真核細胞の成分を含む。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。さらにまた、更なる特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造され、該免疫原性組成物は前記真核細胞系の真核細胞の成分を含む。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。さらにまた、更なる特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが不活化バクテリン、好ましくはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造され、該免疫原性組成物は前記真核細胞系の真核細胞の成分を含む。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。さらにまた、更なる特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが不活化バクテリン、好ましくはホルマリン不活化バクテリンである。
さらに別の特徴では、該マイコプラズマ抗原は血清が低減された真核細胞系で製造され、ここで、前記真核細胞の成分は該マイコプラズマ抗原に接着している。
したがって、ある特徴にしたがえば、本出願は、a)M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ、及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の血清が低減された真核細胞系での培養;b)そのようなマイコプラズマ菌の抗原の入手;及びc)医薬的に許容できる担体の添加を含む方法によって得られる免疫原性組成物を提供し、ここで、前記真核細胞成分はマイコプラズマ抗原に接着している。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造され、前記真核細胞成分はマイコプラズマ抗原に接着している。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。さらにまた、更なる特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造され、前記真核細胞成分はマイコプラズマ抗原に接着している。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。さらにまた、更なる特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが不活化バクテリン、好ましくはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明はM.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系で製造され、前記真核細胞成分はマイコプラズマ抗原に接着している。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが血清が低減された真核細胞系で製造される。さらにまた、更なる特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の全てが不活化バクテリン、好ましくはホルマリン不活化バクテリンである。
繰り返せば、本発明は、M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択される1つ以上のマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物を提供し、ここで該マイコプラズマ抗原の1つ以上は血清が低減された真核細胞系から得られる。したがって、さらに別の特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエから成る群から選択される1つ以上の抗原、並びに真核細胞系の1つ以上の成分を含む免疫原性組成物を提供する。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原及び真核細胞系の1つ以上の成分を含む免疫原性組成物を提供する。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオニューモニアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原及び真核細胞系の1つ以上の成分を含む免疫原性組成物を提供する。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオリーニス及びM.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原、並びに真核細胞系の1つ以上の成分を含む免疫原性組成物を提供する。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原、並びに真核細胞系の1つ以上の成分を含む免疫原性組成物を提供する。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの1つ以上のマイコプラズマ抗原、並びに真核細胞系の1つ以上の成分を含む免疫原性組成物を提供する。さらに別の特徴にしたがえば、該マイコプラズマ抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
“免疫する”という用語は、免疫されるべき対象動物へ免疫原性組成物を投与し、それによってそのような免疫原性組成物に含まれる抗原に対する免疫学的応答を引き起こす能動免疫に関する。
好ましくは、免疫は、群れにおける特定のマイコプラズマ感染の発生率の低下又は特定のマイコプラズマ感染によって引き起こされる若しくは前記に付随する臨床徴候の重篤度の軽減をもたらす。
さらに別の特徴にしたがえば、本発明は、本明細書で提供する免疫原性組成物のいずれか1つで対象動物を免疫する方法を提供し、前記方法は本発明の免疫原性組成物をそのような対象動物に投与する工程を含む。
そのような免疫原性組成物は、a)M.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原並びにM.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオリーニス並びに前記の組合せから成る群から選択される1つ以上の抗原;及びb)医薬的に許容できる担体を含む。
免疫原性組成物が本明細書記載の血清が低減された真核細胞系で製造される場合、該免疫原性組成物は、本明細書にさらに規定するように、一般にM.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の1つ以上の抗原を含むことができる。上記規定の更なる特徴にしたがえば、そのような免疫原性組成物は、M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の1つ以上の抗原に加えて、真核細胞系の1つ以上の成分を含むことができる。
さらに別の特徴にしたがえば、必要がある対象動物の免疫に用いられるマイコプラズマ抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。本発明のこの特徴は、マイコプラズマ抗原のどれか1つが全不活化バクテリンであるということを包含する。しかしながら、本発明のこの特徴はまた、本発明の免疫原性組成物の全ての抗原が全不活化バクテリンであるということも包含する。すなわち、M.ヒオリーニス抗原、M.ヒオシノビアエ抗原及び/又はM.ヒオニューモニアエ抗原は全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
さらに別の特徴にしたがえば、必要がある対象動物の本明細書で提供される免疫原性組成物による免疫は、マイコプラズマ感染による対象動物の感染症を予防する。さらに好ましくは、免疫は、マイコプラズマ感染に対する有効で長期間持続する免疫学的応答をもたらす。前記期間は2カ月を超えて、好ましくは3カ月を超えて、より好ましくは4ヶ月を超えて、より好ましくは5ヶ月を超えて、より好ましくは6ヶ月を超えて持続するであろうということは理解されよう。免疫された対象動物の全で免疫が有効であるとは限らないこともあることは理解されるべきである。しかしながら、前記用語は、群れの対象動物の有意な部分が効果的に免疫されることを要求する。
好ましくは、本文脈では、通常の場合に(すなわち免疫されていない場合に)マイコプラズマ感染によって通常引き起こされるか又は前記に付随する臨床徴候を発する一群の対象動物が意図される。群れを構成する対象動物が効果的に免疫されているか否かは、当業者による大変な作業を行うことなく決定できる。好ましくは、免疫されていない対象動物又は本発明の前に利用可能であった免疫原性組成物で免疫されたがその後で特定のマイコプラズマ菌に感染した対象動物と比較して、ある群れの対象動物の少なくとも33%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、又は少なくとも90%で、臨床徴候が発生又は重篤度において少なくとも10%、より好ましくは少なくとも20%、さらに好ましくは少なくとも30%、さらに好ましくは少なくとも40%、さらに好ましくは少なくとも50%、さらに好ましくは少なくとも60%、さらに好ましくは少なくとも70%、さらに好ましくは少なくとも80%、さらに好ましくは少なくとも90%、もっとも好ましくは少なくとも95%軽減されるならば、該免疫は有効であろう。
本発明のある特徴では、免疫原性組成物は1回投与される。したがって、さらに別の特徴にしたがえば、対象動物を免疫する方法が提供され、前記方法は本発明の免疫原性組成物を対象動物に投与する工程を含み、ここで、該免疫原性組成物は、当該対象動物への当該免疫原性組成物の1用量投与後に、群れの特定のマイコプラズマ感染の発生率の低下又は特定のマイコプラズマ感染によって引き起こされる若しくは前記に付随する臨床徴候の重篤度の軽減に有効である。1用量はただ1回投与されることは理解されよう。実施例2及び3に示すように、本明細書で提供する免疫原性組成物は、必要がある対象動物への単一用量投与後に有効であることが証明された。
好ましくは、該1用量は、約0.5mLから2.5mLの間、より好ましくは約0.6mLから2.0mL、さらに好ましくは約0.7mLから1.75mL、さらに好ましくは約0.8mLから1.5mL、さらに好ましくは約0.9mLから1.25mLの総体積を有し、1用量1.0mLがもっとも好ましい。
典型的には、細菌抗原、例えばマイコプラズマバクテリンが用いられるときは、免疫原性組成物は、1用量につき約103から約1010コロニー形成単位(CFU)の細菌抗原、好ましくは1用量につき約104から約109CFUの細菌抗原、より好ましくは1用量につき約105から約106CFUの細菌抗原の量を含む。不活化バクテリンが免疫原性組成物に用いられる場合は、CFU値は不活化前のマイコプラズマ菌の量を指す。
例えば、M.ヒオニューモニアエの抗原を含む本発明の免疫原性組成物は、好ましくは1用量につき約102から約1010CFU、好ましくは1用量につき約103から約109CFUの量で、さらに好ましくは1用量につき約104から約108CFUの量で、もっとも好ましくは1用量につき約105から約107CFUの量で用いられる。M.ヒオリーニスの抗原を含む本発明の免疫原性組成物は、好ましくは1用量につき約102から約1010CFU、好ましくは1用量につき約103から約109CFUの量で、さらに好ましくは1用量につき約104から約108CFUの量で、もっとも好ましくは1用量につき約105から約107CFUの量で用いられる。M.ヒオシノビアエの抗原を含む本発明の免疫原性組成物は、好ましくは1用量につき約102から約1010CFU、好ましくは1用量につき約103から約109CFUの量で、さらに好ましくは1用量につき約104から約108CFUの量で、もっとも好ましくは1用量につき約105から約107CFUの量で用いられる。
本発明のある特徴では、必要がある対象動物を免疫する方法は、同じ種の非免疫コントロール群の対象動物と比較して、菌血症持続期間の短縮、細菌負荷の低下又は前記の組み合わせから成る群から選択される有効性パラメーターの改善をもたらす。
“菌血症持続期間の短縮”という用語は、免疫原性組成物で免疫された対象動物の菌血症の持続時間が、免疫されていないか又は本発明前に利用可能であった免疫原性組成物で免疫されたが続いて特定のマイコプラズマ菌に感染した対象動物と比較して、少なくとも10%、より好ましくは少なくとも20%、さらに好ましくは少なくとも30%、さらに好ましくは少なくとも40%、さらに好ましくは少なくとも50%、さらに好ましくは少なくとも60%、さらに好ましくは少なくとも70%、さらに好ましくは少なくとも80%、さらに好ましくは少なくとも90%、もっとも好ましくは少なくとも100%短縮されることを意味する。菌血症の持続期間は、比較する前に各群(非免疫及び免疫群)の対象動物の代表的な数で決定されることは理解されよう。
したがってさらに別の特徴にしたがえば、対象動物を免疫する方法が提供され、前記方法は本発明の免疫原性組成物を対象動物に投与する工程を含み、必要がある対象動物の免疫は、同じ種の非免疫コントロール群の対象動物と比較して、菌血症持続期間の短縮、細菌負荷の低下又は前記の組み合わせから成る群から選択される有効性パラメーターの改善をもたらす。
有益なことには、本発明が提供する実験データは、該免疫原性組成の約3週齢の仔豚での有効性を開示する。
好ましくは、免疫される前記対象動物は1日齢から21日齢である。より好ましくは、免疫される前記対象動物は、1日齢から10日齢、さらに好ましくは1日齢から9日齢、さらに好ましくは1日齢から8日齢、さらに好ましくは1日齢から7日齢、さらに好ましくは1日齢から6日齢、さらに好ましくは1日齢から5日齢、さらに好ましくは1日齢から4日齢、さらに好ましくは1日齢から3日齢、さらに好ましくは1日齢又は2日齢、もっとも好ましくは1日齢である。
したがって、ある特徴にしたがえば、対象動物を免疫する方法が提供され、前記方法は、本発明の免疫原性組成物を対象動物に投与して必要がある対象動物を免疫する工程を含み、ここで、免疫される前記対象動物は1日齢から21日齢である。
そのような免疫原性組成物は、a)M.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原並びにM.ヒオニューモニアエ、M.ヒオリーニス及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択される1つ以上の抗原;及びb)医薬的に許容できる担体を含む。
さらに別の特徴にしたがえば、本発明の免疫原性組成物は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原及びM.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;及びb)医薬的に許容できる担体を含む。さらに別の特徴にしたがえば、該免疫原性組成物はまたM.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原を含む。
該免疫原性組成物が本明細書に記載する血清が低減された真核細胞系で製造される場合、該免疫原性組成物は一般に本明細書でさらに規定されるようにM.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の1つ以上の抗原を含む。上記で規定されるさらに別の特徴にしたがえば、そのような免疫原性組成物は、M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の1つ以上の抗原に加えて、真核細胞系の1つ以上の成分を含むことができる。
好ましくは、そのような使用は、群れにおける特定のマイコプラズマ感染の発生率の低下又は特定のマイコプラズマ感染によって引き起こされる若しくは前記に付随する臨床徴候の重篤度の軽減をもたらす。
本発明はまた、対象動物のマイコプラズマ感染の治療及び/又は予防のため、又はマイコプラズマ感染に対する対象動物の免疫のための、本明細書に記載する免疫原性組成物の使用に関する。
そのような免疫原性組成物は、a)M.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原並びにM.ヒオニューモニアエ、M.ヒオリーニス及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択される1つ以上の抗原;及びb)医薬的に許容できる担体を含む。
さらに別の特徴にしたがえば、本発明の免疫原性組成物は、a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原及びM.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;及びb)医薬的に許容できる担体を含む。さらに別の特徴にしたがえば、該免疫原性組成物はまたM.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原を含む。
さらに別の特徴にしたがえば、必要がある対象動物を免疫するために用いられるマイコプラズマ抗原の1つ以上は全不活化バクテリンである。本発明のこの特徴は、マイコプラズマ抗原のどれか1つは全不活化バクテリンであるということを包含する。しかしながら、本発明のこの特徴はまた、本発明の該免疫原性組成物の全ての抗原が全不活化バクテリンであるということを包含する。すなわち、M.ヒオリーニス抗原、M.ヒオシノビアエ抗原、及び/又はM.ヒオニューモニアエ抗原は全不活化バクテリンである。そのような全不活化バクテリンは本明細書記載の不活化方法によって得ることができる。好ましくは、そのような全不活化バクテリンはホルマリン不活化バクテリンである。
好ましくは、そのような使用は、群れにおける特定のマイコプラズマ感染の発生率の低下又は特定のマイコプラズマ感染によって引き起こされる若しくは前記に付随する臨床徴候の重篤度の軽減をもたらす。
本発明の具体的態様をいくつか以下に例示する。
(1)a)M.ヒオリーニスの1つ以上の抗原及びM.ヒオシノビアエの1つ以上の抗原;
並びに
b)医薬的に許容できる担体を含む、免疫原性組成物。
(2)さらにM.ヒオニューモニアエの1つ以上の抗原を含む、(1)に記載の免疫原性組成物。
(3)抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである、(1)又は(2)に記載の免疫原性組成物。
(4)全不活化バクテリンがホルマリン不活化バクテリンである、(3)に記載の免疫原性組成物。
(5)免疫原性組成物が、必要がある対象動物で、M.ヒオリーニスによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である、(1)から(4)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(6)免疫原性組成物が、必要がある対象動物で、M.ヒオニューモニアエによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である、(2)から(4)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(7)a)M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の血清が低減された真核細胞系での培養;b)そのようなマイコプラズマ菌の抗原の入手;及びc)医薬的に許容できる担体の添加を含む方法によって得られる、免疫原性組成物。
(8)イコプラズマ抗原がM.ヒオリーニスの抗原である、(7)に記載の免疫原性組成物。
(9)マイコプラズマ抗原がM.ヒオニューモニアエの抗原である、(7)又は(8)に記載の免疫原性組成物。
(10)マイコプラズマ抗原が、M.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエの抗原、又はM.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの抗原である、(9)に記載の免疫原性組成物。
(11)血清がブタ血清を含まない、(7)から(10)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(12)真核細胞系がMDCK細胞又はマッコイ細胞又は前記の1つ以上の成分を含む、(7)から(11)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(13)無細胞培養系で培養されたマイコプラズマから入手される同じマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物と比較して増大した免疫原性を示す、(7)から(12)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(14)前記真核細胞系の真核細胞成分を含む、(7)から(13)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(15)真核細胞成分が該マイコプラズマ抗原に接着している、(14)に記載の免疫原性組成物。
(16)抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである、(7)から(15)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(17)全不活化バクテリンがホルマリン不活化バクテリンである、(16)に記載の免疫原性組成物。
(18)必要がある対象動物で、M.ヒオリーニスによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である、(8)から(17)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(19)必要がある対象動物で、M.ヒオニューモニアエによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である、(9)から(18)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(20)a)M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ、M.ヒオシノビアエ及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の1つ以上のマイコプラズマ抗原;及びb)真核細胞系の1つ以上の成分含む、免疫原性組成物。
(21)マイコプラズマ抗原がM.ヒオリーニスの抗原である、(20)に記載の免疫原性組成物。
(22)マイコプラズマ抗原がM.ヒオニューモニアエの抗原である、(20)又は(21)に記載の免疫原性組成物。
(23)マイコプラズマ抗原が、M.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエの抗原、又はM.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの抗原である、(20)又は(21)に記載の免疫原性組成物。
(24)真核細胞系がMDCK細胞又はマッコイ細胞又は前記の1つ以上の成分を含む、(20)から(23)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(25)真核細胞系の成分が血清を含む、(20)から(24)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(26)ブタ血清を含まない、(20)から(25)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(27)真核細胞成分が該マイコプラズマ抗原に接着している、(20)から(26)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(28)抗原の1つ以上が全不活化バクテリンである、(20)から(27)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(29)該全不活化バクテリンがホルマリン不活化バクテリンである、(28)に記載の免疫原性組成物。
(30)無細胞培養系で培養されたマイコプラズマから入手される同じマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物と比較して増大した免疫原性を示す、(20)から(29)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(31)必要がある対象動物で、M.ヒオリーニスによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である、(21)から(30)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(32)必要がある対象動物で、M.ヒオニューモニアエによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である、(22)から(31)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(33)対象動物が、ブタ、ウシ、ネコ及びイヌから成るリストから選択される、(18)、(19)、(30)又は(31)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(34)ワクチンである、(1)から(33)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(35)単一用量投与用に処方される、(1)から(34)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(36)医薬的に許容できる担体が、溶媒、分散媒体、被覆剤、安定化剤、希釈剤、保存料、抗菌及び抗カビ剤、等張剤、吸着遅延剤、アジュバント、免疫刺激剤、並びに前記の組み合わせから成る群から選択される、(1)から(35)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(37)医薬的に許容できる担体が、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、サポニン、油中水エマルジョン、水中油エマルジョン、水中油中水エマルジョン、アクリル酸又はメタクリル酸のポリマー、無水マレイン酸及びアルケニル誘導体のコポリマー、RIBIアジュバント系、ブロックコポリマー、SAF-M、モノホスホリル脂質A、アブリジン脂質-アミン、大腸菌(E. coli)の易熱性エンテロトキシン(組換え体又はそうでないもの)、コレラトキシン、IMS1314、ムラミルジペプチド、並びに前記の組み合わせから成る群から選択されるアジュバントである、(1)から(36)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(38)医薬的に許容できる担体が、水中油中水エマルジョン又はカルボマーである、(1)から(37)のいずれかに記載の免疫原性組成物。
(39)対象動物を免疫する方法であって、前記方法が、(1)から(38)のいずれかに記載の免疫原性組成物を対象動物に投与する工程を含む、前記方法。
(40)対象動物がブタ、ウシ、ネコ及びイヌから成るリストから選択される、(39)に記載の方法。
(41)免疫原性組成物が1回投与される、(39)又は(40)に記載の方法。
(42)同じ種の非免疫コントロール群の対象動物と比較して、菌血症持続期間の短縮及び細菌負荷の低下又は前記の組み合わせから成る群から選択される有効性パラメーターで改善をもたらす、(18)から(24)のいずれかに記載の方法。
(43)3週齢以上の対象動物に適切である、(39)から(42)のいずれかに記載の方法。
(44)対象動物でのマイコプラズマ感染の治療及び/又は予防のための、(1)から(38)のいずれかに記載の免疫原性組成物の使用。
(45)対象動物でマイコプラズマ感染を治療及び/又は予防する方法で使用される、(1)から(38)のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
実施例
以下の実施例は本発明を例示することのみを意図する。それらは特許請求の範囲を如何なる態様でも制限するものではない。
A.M.ヒオリーニス、M.ヒオシノビアエ及びM.ヒオニューモニアエのMDCK細胞での培養
M.ヒオリーニス:
MDCK細胞のコンフルエントなT75フラスコをトリプシン処理し、MEM+5%FBSを用いて5枚のT150フラスコに継代培養する(1:10分割)。ほぼ95−100%コンフルエントな単層が認められるまで、37℃+5%CO2でフラスコをインキュベートする。培養液をデカントし、フラスコを1xPBSで2回洗浄する。4−5mLのM.ヒオリーニスを各フラスコに添加する(MOI=10−100)。上記と同じインキュベーション条件下で2時間を下まわらない時間でフラスコのコンフルエントな細胞を感染させる。感染期間後に、ほぼ37℃に予め温めた十分な感染培養液(MEM+2%FBS)を合計体積60mL/フラスコで各フラスコに添加する。90%を超えるCPE が観察されるまで(ほぼ3−7日)フラスコをインキュベートする。細胞懸濁物を各フラスコから収集し、一緒にプールする(継代=n)。前記プールした材料を用いて、ほぼ95−100%コンフルエントなMDCK細胞の新しいフラスコを先の感染と同じ態様で感染させ(継代=n+1)、用いるフラスコの数を増加させながら必要と考える十分な最終体積を達成する(継代=n+2、継代=n+3など)。
M.ヒオシノビアエ:
以下のようにいくらか改変しつつM.ヒオリーニスと同じ態様でM.ヒオシノビアエを培養する:感染培養液はDMEM+2%FBS+1%アルギニン溶液を含む;M.ヒオシノビアエは典型的にはCPEを示さないので、培養液の色の変化及び濁度が次の継代培養への重要な指標である。
M.ヒオニューモニアエ:
M.ヒオニューモニアエをM.ヒオリーニスと同じ態様で培養する。感染に用いる株に応じて、CPEは示すことも示さないこともある。したがって、培養液の色の変化及び濁度を次の継代培養への指標として用いることができる。
M.ヒオリーニス:
攪拌フラスコ中の10%FBS補充改変EMEMでマッコイ細胞を懸濁培養として増殖させる。105−106細胞/mLの最終濃度を有するように細胞を新しいフラスコに播種することによって継代する。M.ヒオリーニスの場合、3Lのフラスコに500mLの細胞懸濁物(105−106細胞/mLの濃度)を1mLの107−108CFUとともに播種する。磁気攪拌プレート上で3−7日間、5%CO2の存在下に37℃でフラスコをインキュベートする。マイコプラズマの増殖は眼に見える酸性pH変化及び濁度の増加によって確認される。マイコプラズマ増殖はまたPFUアッセイで評価して総数を決定する。
M.ヒオシノビアエ:
M.ヒオシノビアエはM.ヒオリーニスと類似の態様で培養される。 3Lのフラスコに500mLの細胞懸濁物(105−106細胞/mLの濃度)を1mLの105−107CFUとともに播種する。磁気攪拌プレート上でほぼ2週間、5%CO2の存在下に37℃でフラスコをインキュベートする。pH変化及び濁度の増加の両方を用いて増殖を決定し、さらにPFUアッセイで総数を決定する。
M.ヒオニューモニアエ:
M.ヒオニューモニアエは、M.ヒオリーニス及びM.ヒオシノビアエと類似の態様で培養される。 3Lのフラスコに500mLの細胞懸濁物(105−106細胞/mLの濃度)を1mLの105−107CFUとともに播種する。磁気攪拌プレート上でほぼ2週間、5%CO2の存在下に37℃でフラスコをインキュベートする。pH変化及び濁度の増加の両方を用いて増殖を決定し、さらにPFUアッセイで総数を決定することができる。
あるマイコプラズマ種が種々の種に由来する血清中で培養できるか否かを評価するために、MDCK細胞をM.ヒオリーニスに感染させ、ウシ胎児血清、ブタ血清、ウサギ血清、ニワトリ血清又はウマ血清中で培養する。各血清タイプについて、MDCK細胞でのM.ヒオリーニスの培養を上記のように実施する(すなわち細胞増殖に5%血清及び感染に2%血清)。M.ヒオリーニスを標準的方法により感染後4日で採集する。CCU(色変化単位(color changing unit))アッセイを実施してM.ヒオリーニスの生力価を決定する。さらにまた、qPCR(定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応)を実施して、M.ヒオリーニスの総ゲノム含有量を決定する。例示的実験を表1に示す。
最後の継代で採集できるようになったときに(90%を超えるCPEが存在する)凍結融解を1回だけ全フラスコで実施する。凍結融解は以下の工程によって実施する:全フラスコをフリーザー(<-60℃)に2時間より長く静置する、37℃で急速融解する、溶解物を収集及びプールする、さらに数回ピペットで上下させて均質化する。通常10−20%のグリセロールを懸濁物に添加し均質化する。懸濁物を作業用体積に小分けする。必要とされるまでストックを-60℃より低温で維持する。
上記ストックの適切な体積を0.2%のホルマリンで不活化する。ワクチンをブレンドするときに、過剰なホルマリンを重亜硫酸ナトリウムで中和する。ワクチンをモンタニドTMISA207 VGアジュバント又はCARBOPOL(商標)アジュバントとブレンドする。ワクチンは2−7℃で保存する。
ワクチンの有効性は、ブタに投与した後で抗体応答を誘発する能力(及びELISAによる力価)を基準に評価する。
動物のケア:
動物は試験開始前に良好な健康及び栄養状態にある。任意抽出手順の前に、健康審査を実施する。試験期間を通して医薬が添加されていない飼料を用いる。飼料比率は、施設の標準作業手順にしたがい試験動物の齢、状態及び種について適切である。試験の間水は常時供給される。
M.ヒオリーニス:
D0及びD21に再度、通常の仔豚(6週齢+/-5日)の筋肉内にM.ヒオリーニスワクチンの2mL用量(7.1−7.3log10CCU/用量)を投与する。M.ヒオリーニスは上記のように調製する(すなわち上記のようにMDCK細胞で培養する)。ワクチンにモンタニドISA207VG又はCARBOPOL(商標)をアジュバントとして添加する。PBSをプラセボとして用いる。全身の健康状態についてブタを毎日観察する。D0(ワクチン接種前)、7、14、21、28、35及び42に血液を収集する。BIVI R&DインダイレクトELISAにより、M.ヒオリーニス特異抗体について血清を検査する。BIVI R&D ELISAの場合、0.200を超えるS/P比を陽性とみなす。
表2に示す例では、M.ヒオリーニスELISAは強い抗体応答を示す。M.ヒオリーニス-MDCK+モンタニドISA207VG でワクチン接種した6/6(100%)の動物が、第1の用量の2週間後(D14)に陽性であった。全動物がD42までずっと陽性を維持し、第二の用量の1週間後(D28)に力価は上昇する。
ワクチン接種後に同様な抗体応答の結果が、マッコイ細胞で培養されたM.ヒオリーニスを用いて得られた(データは示されていない)。さらにまた、ワクチン接種後の抗体応答について同様な結果が3週齢+/-5日の仔豚で得られた(データは示されていない)。同様な結果が1用量投与後に得られた(データは示されていない)。
M.ヒオニューモニアエ:
D0及びD21に再度、通常の仔豚(6週齢+/-5日)の筋肉内にM.ヒオニューモニアエワクチンの2mL用量(8.0−8.5log10CCU/用量)を投与した。ワクチンにモンタニドISA207VGをアジュバントとして添加する。PBSをプラセボとして用いる。全身の健康状態についてブタを毎日観察する。D0(ワクチン接種前)、7、14、21、28、35及び42に血液を収集し、M.ヒオニューモニアエ抗体の存在について検査する。表3に示す例では、市販のIDEXX ELISAを用いた。IDEXX ELISA の場合、0.400を超えるS/P比を陽性とみなす。
表3に示す例では、M.ヒオニューモニアエELISAは強い抗体応答を示した。M.ヒオニューモニアエMDCK+ISA207ワクチン接種動物の場合、D14で3/6(50%)の動物が、D21で5/6(83.3%)が陽性で、6/6(100%)はD28,35及び42で陽性であった。
54匹のCD/CD動物(8週齢+/-5日)を6グループに分ける。グループV1及びV2は各々、それぞれMDCK細胞及びCM(複合培養液:例えばブタ血清及び酵母抽出液を含むプロテオースペプトン系培養液又はフリース(Friis)系培養液)で培養された、不活化M.ヒオリーニス単離株を投与され、グループV3及びV4は、それぞれMDCK細胞及びCMで培養された不活化M.ヒオリーニス単離株を投与される。全てのワクチンはモンタニドISA207VGアジュバントを添加され、投与量及び経路は2x2mL用量でD0に1用量及びD21に第二の用量が筋肉内注射される。グループCC(コントロールグループ)には抗原を含まないプラセボ(PBS)が同じ態様で投与される。グループSC(厳密コントロール)は試験を通して全く処置を受けず、厳密なコントロール動物として供される。D42、43及び44に、グループV1−V4及びCCのブタをビルレントなM.ヒオリーニスでチャレンジする。投与の量及び経路は、それぞれ40mL腹腔内、15mL静脈内及び15mL鼻内である。M.ヒオリーニス特異的ELISA検査のためにD0から試験の終了(D58)まで毎週血液を収集する。R&D M.ヒオリーニスELISAの場合、0.200を超えるS/P比を陽性とみなした。表4に示す例示的な試験では、グループSCの全てのブタがこの試験を通して陰性を維持し、M.ヒオリーニスに曝露されていないことを示した。グループV1−V4及びCCはD0及び7では陰性であった。しかしながら血清学の結果はCM系及びMDCK系ワクチン間で変化を示した。CM系ワクチンと比較したとき、MDCK系ワクチンは、血清転換のより早期の開始、はるかに多数の血清陽性豚、及びより高い血清学的力価を示した。
M.ヒオリーニスを上記に記載したようにマッコイ細胞で培養するか、又はCM(複合培養液)でそれぞれ培養する。
未希釈抗原(“マッコイ+ISA未希釈”)、1:10抗原(“マッコイ+ISA1:10”)及び1:100抗原(“マッコイ+ISA1:100”)を用いマッコイ抗原からワクチンを作製し、全てをアジュバントとしてモンタニドISA207VGとブレンドする。CM由来抗原を用いるワクチンを同じ態様で作製する。
ブタ(ワクチン接種時に3週齢)を2mLの1用量でD0のIM投与によりワクチン免疫する。
表5に示すように、例示的試験のグループ平均はいずれもチャレンジ前(D0−D21)には“陰性”であったが、“マッコイ+ISA未希釈”及び“マッコイ+ISA1:10”は、陽性傾向の応答を示した。チャレンジ後1週間(D28)で、“CM+ISA1:100”を除いて全ワクチングループが応答した。
表5から、各抗原タイプ(マッコイ、CM)が標準的な滴定効果(未希釈>1:10>1:100)を示すことは明らかである。さらにまた表5から、“マッコイ+ISA未希釈”及び“マッコイ+ISA1:10”ワクチンは、“CM+ISA未希釈”抗原よりも高い平均スコアを有すること、及びD42の終了まで前記を維持することは明白である。チャレンジ後に陽性(S/Pが0.200以上)平均を有するグループは、“マッコイ+ISA未希釈”及び“マッコイ+ISA1:10”グループである。マッコイ未希釈ワクチン及び1:10稀釈は、チャレンジ前及びチャレンジ後の両方でCM未希釈ワクチンよりも高い血清応答を示した。さらにまた、マッコイ1:100でワクチン免疫した動物もまた、プラセボグループ(非ワクチン接種動物)及びCM1:100グループとは区別し得る応答を示した(CM1:100応答又はその欠如は非ワクチン接種動物と同等であった)。力価測定実験は、細胞培養系ワクチンは、無細胞系で培養したマイコプラズマ菌に由来するワクチンと比較してより良好な血清学的結果を有することを示した。
本実験では、15匹のCD/CD動物(11週齢+/-5日)に1用量2mLの三価プロトタイプマイコプラズマ組み合わせワクチンをIM投与した。前記ワクチンは不活化M.ヒオリーニス、不活化M.ヒオニューモニアエ及び不活化M.ヒオシノビアエから成る。全てのマイコプラズマ種をMDCK細胞で調製した。ワクチンにモンタニドISA207VGをアジュバントとして添加した。血液サンプルを0日目から28日目まで収集した。血清の抗体レベルをM.ヒオリーニスBIVI R&D ELISA及びM.ヒオニューモニアエIDEXX ELISAでモニターした。この実験のときには、M.ヒオシノビアエについての血清学的アッセイは入手できなかった。
M.ヒオリーニスELISAはワクチン接種後2週間(D14)で強い抗体応答を示して11/15(73.3%)のブタが陽性であり、D21までに15/15(100%)が陽性であった。
M.ヒオニューモニアエIDEXX ELISAの結果は、4匹のブタがD0でM.ヒオニューモニアエ抗体について陽性(S/P>0.400)であることを示した。これら4匹のブタを排除すると、5匹の別個のブタがD28までにM.ヒオニューモニアエに血清転換した。これら5匹のうち3匹はD21に陽性であった。
Claims (17)
- a)M.ヒオリーニス、M.ヒオニューモニアエ及び前記の任意の組み合わせから成る群から選択されるマイコプラズマ菌の1つ以上のマイコプラズマ抗原;及び
b)真核細胞系の1つ以上の成分、
を含み、前記抗原の1つ以上が完全体不活化バクテリンであり、前記真核細胞経の成分がMDCK細胞又はマッコイ細胞又はそれらの1つ以上の成分を含む、免疫原性組成物。 - マイコプラズマ抗原が、M.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエの抗原、又はM.ヒオリーニス及びM.ヒオニューモニアエ及びM.ヒオシノビアエの抗原である、請求項1に記載の免疫原性組成物。
- ブタ血清を含まない、請求項1又は2に記載の免疫原性組成物。
- 真核細胞成分が該マイコプラズマ抗原に接着している、請求項1から3のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 抗原の1つ以上がホルマリン不活化バクテリンである、請求項1から4のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 無細胞培養系で培養されたマイコプラズマから入手される同じマイコプラズマ抗原を含む免疫原性組成物と比較して増大した免疫原性を示す、請求項1から5のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 必要がある対象動物で、M.ヒオリーニスによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である、請求項1から6のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 必要がある対象動物で、M.ヒオニューモニアエによって引き起こされる臨床徴候の治療及び/又は予防に有効である、請求項1から7のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 対象動物が、ブタ、ウシ、ネコ及びイヌから成るリストから選択される、請求項7又は8に記載の免疫原性組成物。
- ワクチンである、請求項1から9のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- さらに医薬的に許容できる担体を含み、前記医薬的に許容できる担体が、水中油中水エマルジョン又はカルボマーである、請求項1から10のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
- 非ヒト対象動物を免疫する方法であって、請求項1から11のいずれか1項に記載の免疫原性組成物を非ヒト対象動物に投与する工程を含む、前記方法。
- 対象動物がブタ、ウシ、ネコ及びイヌから成るリストから選択される、請求項12に記載の方法。
- 免疫原性組成物が1回投与される、請求項12又は13に記載の方法。
- 同じ種の非免疫コントロール群の非ヒト対象動物と比較して、菌血症持続期間の短縮及び細菌負荷の低下又は前記の組み合わせから成る群から選択される有効性パラメーターで改善をもたらす、請求項12から14のいずれか1項に記載の方法。
- 3週齢以上の非ヒト対象動物に適切である、請求項12から15のいずれか1項に記載の方法。
- 対象動物でマイコプラズマ感染を治療及び/又は予防するための、請求項1から11のいずれか1項に記載の免疫原性組成物。
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