JP6165953B1 - Virus inactivating agent and sanitary material for vesivirus and / or norovirus - Google Patents
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Abstract
【課題】低いｐＨであっても充分にウイルス不活性化作用を示すノロウイルス不活性化剤を提供する。【解決手段】エタノールと、酸剤とを含むノロウイルス不活性化剤であって、上記酸剤は、クエン酸、酒石酸、リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸及びフィチン酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸であり、上記ノロウイルス不活性化剤のｐＨは、１．０〜６．０であることを特徴とするノロウイルス不活性化剤。【選択図】 なしThe present invention provides a norovirus inactivating agent that exhibits sufficient virus inactivating action even at a low pH. A norovirus inactivating agent comprising ethanol and an acid agent, wherein the acid agent is at least selected from the group consisting of citric acid, tartaric acid, phosphoric acid, pyrophosphoric acid, polyphosphoric acid and phytic acid. A norovirus inactivating agent, wherein the norovirus inactivating agent is one acid and has a pH of 1.0 to 6.0. [Selection figure] None
Description
本発明は、ノロウイルス不活性化剤及び衛生資材に関する。 The present invention relates to a norovirus inactivating agent and a sanitary material.
近年、ヒトノロウイルスによる感染性胃腸炎あるいは食中毒の発生が一年を通じて多発しており、特に１１〜３月が発生のピークとなっている。ヒトノロウイルスは、カリシウイルス科、ノロウイルス属に分類されるエンベローブを持たないＲＮＡウイルス（以下、「ノロウイルス等」と記載する）であり、アルコール（エタノール、イソプロパノール等）、熱、酸性（胃酸等）、又は、乾燥等に対して強い抵抗力を有する。潜伏期間は１〜２日であると考えられており、嘔気、嘔吐、下痢の主症状が出るが、腹痛、頭痛、発熱、悪寒、筋痛、咽頭痛、倦怠感等を伴うこともある。 In recent years, the occurrence of infectious gastroenteritis or food poisoning due to human norovirus has occurred frequently throughout the year, and the peak of the outbreak is in particular from 11 to March. Human norovirus is an RNA virus (hereinafter referred to as “norovirus etc.”) that does not have an envelope classified into the Caliciviridae and Norovirus genus, alcohol (ethanol, isopropanol etc.), heat, acid (gastric acid etc.), Or it has a strong resistance to drying and the like. The incubation period is considered to be 1-2 days, and the main symptoms are nausea, vomiting, and diarrhea, but may also be accompanied by abdominal pain, headache, fever, chills, myalgia, sore throat, malaise, and the like.
ヒトノロウイルスは、培養細胞を用いても増殖させることができない。
そのため、ヒトノロウイルスの不活性化に対する各種消毒剤等の消毒効果の検証には、代替ウイルスとしてネコカリシウイルス（ＦＣＶ）が広く用いられている。ＦＣＶは、形態的特徴やゲノムの構造から、ヒトノロウイルスに近縁なウイルスであることが明らかにされている。
Human norovirus cannot be propagated using cultured cells.
For this reason, feline calicivirus (FCV) is widely used as an alternative virus for verifying the disinfection effect of various disinfectants and the like for inactivation of human norovirus. FCV has been shown to be a virus closely related to human norovirus based on its morphological characteristics and genome structure.
一方で、近年、ＦＣＶに比べてヒトノロウイルスに遺伝学的に近縁、かつ、細胞培養可能なウイルスとして、マウスノロウイルス（ＭＮＶ）が発見された。
本発明者らは、ＦＣＶ及びＭＮＶを用いて不活性化試験を行ったところ、ＭＮＶは、ＦＣＶに比べて薬剤耐性が強いという知見を得た。よって、ＦＣＶに対して優れた消毒効果を有するとしてこれまでに開発されてきた消毒液は、実際のヒトノロウイルスに対しても優れた消毒効果を有するとは言い難い。
On the other hand, in recent years, mouse norovirus (MNV) has been discovered as a virus genetically related to human norovirus and capable of cell culture compared to FCV.
The present inventors conducted an inactivation test using FCV and MNV, and obtained knowledge that MNV has higher drug resistance than FCV. Therefore, it is difficult to say that the disinfecting solution that has been developed so far as having an excellent disinfecting effect on FCV also has an excellent disinfecting effect on actual human noroviruses.
例えば、非特許文献１には、エタノール製剤を用いたＦＣＶ及びＭＮＶの不活性化試験が記載されている。非特許文献１によれば、ＦＣＶに対してはエタノール製剤のｐＨが低くても充分なウイルス不活性化作用を示すことが記載されているが、ＭＮＶに対しては、エタノール製剤のｐＨが低いと充分なウイルス不活性化作用を示さないことが記載されている。
上記の通り、ヒトノロウイルスの不活性化に対する各種消毒剤等のウイルス不活性化作用の検証には、代替ウイルスとしてＦＣＶが広く用いられているが、ＦＣＶ及びＭＮＶの両方にウイルス不活性化作用を示す方が、ヒトノロウイルスに対してもウイルス不活性化作用を示す可能性が高いと予測される。
そのため、非特許文献１に記載されたｐＨが低いエタノール製剤は、ヒトノロウイルスへのウイルス不活性化作用が不充分である可能性がある。
For example, Non-Patent Document 1 describes an FCV and MNV inactivation test using an ethanol preparation. According to Non-Patent Document 1, it is described that a sufficient virus inactivating action is exhibited even when the pH of an ethanol preparation is low against FCV, but the pH of an ethanol preparation is low against MNV. And not exhibiting sufficient virus inactivating action.
As described above, FCV is widely used as an alternative virus for verification of virus inactivation action of various disinfectants, etc. against inactivation of human norovirus. However, both FCV and MNV have virus inactivation action. It is predicted that the possibility of exhibiting a virus inactivating effect on human norovirus is higher.
Therefore, the ethanol preparation with a low pH described in Non-Patent Document 1 may have an insufficient virus inactivating action on human norovirus.
本発明は、上記の課題を解決するためになされたものであり、低いｐＨであっても充分にウイルス不活性化作用を示すノロウイルス不活性化剤を提供することである。 The present invention has been made to solve the above-mentioned problems, and is to provide a norovirus inactivating agent that exhibits a sufficient virus inactivating action even at a low pH.
上記目的を達成するために、本発明者らは、エタノールと、特定の酸剤とを併用することにより、ｐＨが低くても、ウイルス不活性化作用が充分に高くなることを見出し、本発明を完成させた。 In order to achieve the above object, the present inventors have found that by using ethanol and a specific acid agent in combination, the virus inactivating action can be sufficiently increased even when the pH is low. Was completed.
すなわち、本発明のノロウイルス不活性化剤は、エタノールと、酸剤とを含むノロウイルス不活性化剤であって、上記酸剤は、クエン酸、酒石酸、リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸及びフィチン酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸であり、上記ノロウイルス不活性化剤のｐＨは、１．０〜６．０であることを特徴とする。 That is, the norovirus inactivating agent of the present invention is a norovirus inactivating agent containing ethanol and an acid agent, and the acid agent is citric acid, tartaric acid, phosphoric acid, pyrophosphoric acid, polyphosphoric acid and phytic acid. It is at least 1 sort (s) of acid selected from the group which consists of, The pH of the said norovirus inactivating agent is 1.0-6.0, It is characterized by the above-mentioned.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、クエン酸、酒石酸、リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸及びフィチン酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸からなる酸剤を含む。
これらの酸は、低いｐＨのノロウイルス不活性化剤においてエタノールのウイルス不活性化作用を向上させることができる。
そのため、ノロウイルス不活性化剤のｐＨが、１．０〜６．０であったとしても、本発明のノロウイルス不活性化剤は、充分なウイルス不活性化作用を示す。
なお、本明細書におけるｐＨは、２５℃におけるｐＨを意味する。
The norovirus inactivating agent of the present invention includes an acid agent comprising at least one acid selected from the group consisting of citric acid, tartaric acid, phosphoric acid, pyrophosphoric acid, polyphosphoric acid and phytic acid.
These acids can improve the virus inactivating action of ethanol at low pH norovirus inactivating agents.
Therefore, even if the pH of the norovirus inactivating agent is 1.0 to 6.0, the norovirus inactivating agent of the present invention exhibits a sufficient virus inactivating action.
In addition, pH in this specification means pH at 25 degreeC.
本発明のノロウイルス不活性化剤のｐＨは、１．０〜４．０であることがより望ましい。
このように低いｐＨであったとしても、本発明のノロウイルス不活性化剤は、充分なウイルス不活性化作用を示す。
The pH of the norovirus inactivating agent of the present invention is more preferably 1.0 to 4.0.
Even in such a low pH, the norovirus inactivating agent of the present invention exhibits a sufficient virus inactivating action.
本発明のノロウイルス不活性化剤では、上記ノロウイルス不活性化剤中の上記酸剤の濃度は、０．０１〜０．４ｍｏｌ／Ｌであることが望ましい。
本発明のノロウイルス不活性化剤では、このように低濃度の酸剤を含むだけでウイルス不活性化作用を充分に向上させることができる。
ノロウイルス不活性化剤中の酸剤の濃度が、０．０１ｍｏｌ／Ｌ未満であると、酸剤の濃度が低すぎ、エタノールのウイルス不活性化作用を充分に向上させにくくなる。
ノロウイルス不活性化剤中の酸剤の濃度が、０．４ｍｏｌ／Ｌを超えると、酸剤の濃度が高すぎ、ノロウイルス不活性化剤を噴霧等した際に、べとつきやすくなり、また、酸剤の析出が生じやすくなる。
In the norovirus inactivating agent of the present invention, the concentration of the acid agent in the norovirus inactivating agent is preferably 0.01 to 0.4 mol / L.
In the norovirus inactivating agent of the present invention, the virus inactivating action can be sufficiently improved only by containing a low concentration acid agent.
When the concentration of the acid agent in the norovirus inactivating agent is less than 0.01 mol / L, the concentration of the acid agent is too low, and it becomes difficult to sufficiently improve the virus inactivating action of ethanol.
When the concentration of the acid agent in the norovirus inactivating agent exceeds 0.4 mol / L, the concentration of the acid agent is too high, and when the norovirus inactivating agent is sprayed, the acid agent is easily sticky. Precipitation tends to occur.
本発明のノロウイルス不活性化剤では、上記ノロウイルス不活性化剤中の上記エタノールの濃度は、８．０５〜８５．７０重量％であることが望ましい。
ノロウイルス不活性化剤中のエタノールの濃度が８．０５重量％未満であると、エタノールの割合が少ないので、エタノールが含まれることによるウイルス不活性化作用が発揮されにくくなる。
ノロウイルス不活性化剤中のエタノールの濃度が８５．７０重量％を超えると、ノロウイルス不活性化剤中のエタノールの濃度が高すぎ、引火しやすくなる。
In the norovirus inactivating agent of the present invention, the ethanol concentration in the norovirus inactivating agent is desirably 8.05 to 85.70% by weight.
When the concentration of ethanol in the norovirus inactivating agent is less than 8.05% by weight, since the proportion of ethanol is small, the virus inactivating action due to the inclusion of ethanol is difficult to be exhibited.
If the concentration of ethanol in the norovirus inactivating agent exceeds 85.70% by weight, the concentration of ethanol in the norovirus inactivating agent is too high, and it becomes easy to ignite.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、上記クエン酸及び上記リン酸を共に含むこと、上記クエン酸及び上記酒石酸を共に含むこと、又は、上記リン酸及び上記酒石酸を共に含むことが望ましい。
本発明のノロウイルス不活性化剤において、これらの酸が共存していると、エタノールのウイルス不活性化作用がさらに向上する。
The norovirus inactivating agent of the present invention preferably contains both the citric acid and the phosphoric acid, contains the citric acid and the tartaric acid, or contains both the phosphoric acid and the tartaric acid.
When these acids coexist in the norovirus inactivating agent of the present invention, the virus inactivating action of ethanol is further improved.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、ベシウイルス属ウイルス及び／又はノロウイルス属ウイルスに対して高いウイルス不活性化作用を示し、ネコカリシウイルス、マウスノロウイルス及びヒトノロウイルスからなる群から選択される少なくとも１種のウイルスに対して特に高いウイルス不活性化作用を示す。 The norovirus inactivating agent of the present invention exhibits a high virus inactivating action against vesicvirus and / or norovirus viruses, and is at least one selected from the group consisting of feline calicivirus, mouse norovirus and human norovirus. It exhibits a particularly high virus inactivating action against certain viruses.
本発明の衛生資材は、上記本発明のノロウイルス不活性化剤を含むことを特徴とする。 The sanitary material of the present invention includes the above-described norovirus inactivating agent of the present invention.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、ウイルス不活性化作用を示すので、このようなノロウイルス不活性化剤を含む本発明の衛生資材を用いることにより、ウイルス感染を防ぐことができる。 Since the norovirus inactivating agent of the present invention exhibits a virus inactivating action, viral infection can be prevented by using the sanitary material of the present invention containing such a norovirus inactivating agent.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、低いｐＨであっても充分に高いウイルス不活性化作用を示す。 The norovirus inactivating agent of the present invention exhibits a sufficiently high virus inactivating action even at a low pH.
以下、本発明のノロウイルス不活性化剤について具体的な実施形態を示しながら説明する。しかしながら、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を変更しない範囲において適宜変更して適用することができる。 Hereinafter, the norovirus inactivating agent of the present invention will be described with reference to specific embodiments. However, the present invention is not limited to the following embodiments, and can be applied with appropriate modifications without departing from the scope of the present invention.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、エタノールと、酸剤とを含むノロウイルス不活性化剤であって、上記酸剤は、クエン酸、酒石酸、リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸及びフィチン酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸であり、上記ノロウイルス不活性化剤のｐＨは、１．０〜６．０であることを特徴とする。 The norovirus inactivating agent of the present invention is a norovirus inactivating agent containing ethanol and an acid agent, and the acid agent comprises citric acid, tartaric acid, phosphoric acid, pyrophosphoric acid, polyphosphoric acid and phytic acid. It is at least one acid selected from the group, and the pH of the norovirus inactivating agent is 1.0 to 6.0.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、クエン酸、酒石酸、リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸及びフィチン酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸からなる酸剤を含む。
これらの酸は、低いｐＨのノロウイルス不活性化剤においてエタノールのウイルス不活性化作用を向上させることができる。
そのため、ノロウイルス不活性化剤のｐＨが、１．０〜６．０であったとしても、本発明のノロウイルス不活性化剤は、充分なウイルス不活性化作用を示す。
The norovirus inactivating agent of the present invention includes an acid agent comprising at least one acid selected from the group consisting of citric acid, tartaric acid, phosphoric acid, pyrophosphoric acid, polyphosphoric acid and phytic acid.
These acids can improve the virus inactivating action of ethanol at low pH norovirus inactivating agents.
Therefore, even if the pH of the norovirus inactivating agent is 1.0 to 6.0, the norovirus inactivating agent of the present invention exhibits a sufficient virus inactivating action.
本発明のノロウイルス不活性化剤では、上記ノロウイルス不活性化剤中の上記酸剤の濃度は、０．０１〜０．４ｍｏｌ／Ｌであることが望ましく、０．０５〜０．３ｍｏｌ／Ｌであることがより望ましい。
本発明のノロウイルス不活性化剤では、このように低濃度の酸剤を含むだけでウイルス不活性化作用を充分に向上させることができる。
ノロウイルス不活性化剤中の酸剤の濃度が、０．０１ｍｏｌ／Ｌ未満であると、酸剤の濃度が低すぎ、エタノールのウイルス不活性化作用を充分に向上させにくくなる。
ノロウイルス不活性化剤中の酸剤の濃度が、０．４ｍｏｌ／Ｌを超えると、酸剤の濃度が高すぎ、ノロウイルス不活性化剤を噴霧等した際に、べとつきやすくなり、また、酸剤の析出が生じやすくなる。
In the norovirus inactivating agent of the present invention, the concentration of the acid agent in the norovirus inactivating agent is preferably 0.01 to 0.4 mol / L, preferably 0.05 to 0.3 mol / L. More desirable.
In the norovirus inactivating agent of the present invention, the virus inactivating action can be sufficiently improved only by containing a low concentration acid agent.
When the concentration of the acid agent in the norovirus inactivating agent is less than 0.01 mol / L, the concentration of the acid agent is too low, and it becomes difficult to sufficiently improve the virus inactivating action of ethanol.
When the concentration of the acid agent in the norovirus inactivating agent exceeds 0.4 mol / L, the concentration of the acid agent is too high, and when the norovirus inactivating agent is sprayed, the acid agent is easily sticky. Precipitation tends to occur.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、クエン酸、酒石酸、リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸及びフィチン酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸からなる酸剤以外の酸剤として、Ｄ−リンゴ酸、Ｌ−リンゴ酸、乳酸等を含んでいてもよい。 The norovirus inactivating agent of the present invention is an acid agent other than an acid agent consisting of at least one acid selected from the group consisting of citric acid, tartaric acid, phosphoric acid, pyrophosphoric acid, polyphosphoric acid and phytic acid. Malic acid, L-malic acid, lactic acid and the like may be contained.
本発明のノロウイルス不活性化剤のｐＨは、１．０〜４．０であることがより望ましく、２．０〜４．０であることがさらに望ましい。
このように低いｐＨであったとしても、本発明のノロウイルス不活性化剤は、充分なウイルス不活性化作用を示す。
なお、ｐＨの調整は、本発明のノロウイルス不活性化剤に含まれる酸剤の濃度を調整すること、または、酸剤の塩を添加することにより行うことができる。
The pH of the norovirus inactivating agent of the present invention is more preferably 1.0 to 4.0, and further preferably 2.0 to 4.0.
Even in such a low pH, the norovirus inactivating agent of the present invention exhibits a sufficient virus inactivating action.
In addition, pH adjustment can be performed by adjusting the density | concentration of the acid agent contained in the norovirus inactivating agent of this invention, or adding the salt of an acid agent.
本発明のノロウイルス不活性化剤では、上記ノロウイルス不活性化剤中の上記エタノールの濃度は、８．０５〜８５．７０重量％であることが望ましく、２４．６９〜７４．７０重量％であることがより望ましく、３３．３８〜６０．００重量％であることがさらに望ましい。
ノロウイルス不活性化剤中のエタノールの濃度が８．０５重量％未満であると、エタノールの割合が少ないので、エタノールが含まれることによるウイルス不活性化作用が発揮されにくくなる。
ノロウイルス不活性化剤中のエタノールの濃度が８５．７０重量％を超えると、ノロウイルス不活性化剤中のエタノールの濃度が高すぎ、引火しやすくなる。
In the norovirus inactivating agent of the present invention, the concentration of the ethanol in the norovirus inactivating agent is preferably from 8.05 to 85.70% by weight, and from 24.69 to 74.70% by weight. It is more desirable that the content be 33.38 to 60.00% by weight.
When the concentration of ethanol in the norovirus inactivating agent is less than 8.05% by weight, since the proportion of ethanol is small, the virus inactivating action due to the inclusion of ethanol is difficult to be exhibited.
If the concentration of ethanol in the norovirus inactivating agent exceeds 85.70% by weight, the concentration of ethanol in the norovirus inactivating agent is too high, and it becomes easy to ignite.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、上記クエン酸及び上記リン酸を共に含むこと、上記クエン酸及び上記酒石酸を共に含むこと、又は、上記リン酸及び上記酒石酸を共に含むことが望ましい。
本発明のノロウイルス不活性化剤において、これらの酸が共存していると、エタノールのウイルス不活性化作用がさらに向上する。
The norovirus inactivating agent of the present invention preferably contains both the citric acid and the phosphoric acid, contains the citric acid and the tartaric acid, or contains both the phosphoric acid and the tartaric acid.
When these acids coexist in the norovirus inactivating agent of the present invention, the virus inactivating action of ethanol is further improved.
本発明のノロウイルス不活性化剤がクエン酸及びリン酸を含む場合、そのモル比は、３：１〜１：３であることが望ましい。
本発明のノロウイルス不活性化剤がクエン酸及び酒石酸を含む場合、そのモル比は、３：１〜１：３であることが望ましい。
本発明のノロウイルス不活性化剤がリン酸及び酒石酸を含む場合、そのモル比は、３：１〜１：３であることが望ましい。
When the norovirus inactivating agent of the present invention contains citric acid and phosphoric acid, the molar ratio is desirably 3: 1 to 1: 3.
When the norovirus inactivating agent of the present invention contains citric acid and tartaric acid, the molar ratio is desirably 3: 1 to 1: 3.
When the norovirus inactivating agent of the present invention contains phosphoric acid and tartaric acid, the molar ratio is desirably 3: 1 to 1: 3.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、ベシウイルス属ウイルス及び／又はノロウイルス属ウイルスに対して高いウイルス不活性化作用を示し、ネコカリシウイルス、マウスノロウイルス及びヒトノロウイルスからなる群から選択される少なくとも１種のウイルスに対して特に高いウイルス不活性化作用を示す。 The norovirus inactivating agent of the present invention exhibits a high virus inactivating action against vesicvirus and / or norovirus viruses, and is at least one selected from the group consisting of feline calicivirus, mouse norovirus and human norovirus. It exhibits a particularly high virus inactivating action against certain viruses.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、ネコカリシウイルスを試験ウイルスとした下記ウイルス感染力価測定において、作用時間３０秒におけるウイルス感染力価の値が、作用時間０秒におけるウイルス感染力価の値より２．０以上小さいことが望ましく、４．０以上小さいことがより望ましい。
本発明のノロウイルス不活性化剤が、このようなウイルス不活性化作用を奏すると、カリシウイルス科ウイルスの感染を防止することができる。
In the norovirus inactivating agent of the present invention, the virus infectivity titer at an action time of 30 seconds is the virus infectivity titer value at an action time of 0 seconds in the following virus infection titration measurement using feline calicivirus as a test virus It is preferably 2.0 or more and more preferably 4.0 or more.
When the norovirus inactivating agent of the present invention exerts such a virus inactivating action, infection with the caliciviridae virus can be prevented.
（ネコカリシウイルス感染力価測定）
（１）ネコカリシウイルスを、ネコ腎由来株化細胞であるＣＲＦＫ細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−９４）に感染させて細胞を培養する。
（２）次に、ネコカリシウイルスが感染したかどうかを細胞変性効果（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｅｆｆｅｃｔ：ＣＰＥ）により確認する。
細胞変性効果を確認した後、培養細胞の凍結融解を繰り返すことにより、培養細胞を破砕する。
（３）次に、得られた培養細胞破砕液を遠心分離し、上清をウイルス溶液とする。
（４）ノロウイルス不活性化剤と、ウイルス溶液とを９：１の割合（容量）で混合し、室温で３０秒経過後、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地で１００倍希釈することにより、ノロウイルス不活性化剤のウイルスに対する作用を停止させる。
この工程により得られた溶液をノロウイルス不活性化剤３０秒作用ウイルス溶液とする。
（５）ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地と、ウイルス溶液とを９：１の割合（容量）で混合した直後、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地で１００倍希釈することにより、得られた溶液をノロウイルス不活性化剤０秒作用ウイルス溶液とする。
（６）ノロウイルス不活性化剤０秒作用ウイルス溶液、ノロウイルス不活性化剤３０秒作用ウイルス溶液を、それぞれ、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地により１０倍段階希釈した。ＣＲＦＫ細胞を培養した９６ｗｅｌｌマイクロプレートの培地を捨て、段階希釈液を１００μＬずつ加える。
（７）ノロウイルス不活性化剤０秒作用ウイルス溶液及びノロウイルス不活性化剤３０秒作用ウイルス溶液の段階希釈液が加えられたＣＲＦＫ細胞を３７℃、５％ＣＯ２の条件で、４日間培養する。
（８）培養したＣＲＦＫ細胞のＣＰＥを指標にＴＣＩＤ５０（Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｏｓｅ ５０％）により各ウイルス溶液のウイルス感染力価（対数）を定量する。
（９）上記（１）〜（８）の工程を３回独立に行い、ノロウイルス不活性化剤０秒作用ウイルス溶液を用いて算出されたウイルス感染力価の平均値を、作用時間０秒におけるウイルス感染力価とし、ノロウイルス不活性化剤３０秒作用ウイルス溶液を用いて算出されたウイルス感染力価の平均値を、作用時間３０秒におけるウイルス感染力価の値とする。
(Measurement of feline calicivirus infection titer)
(1) CRFK cells (ATCC CCL-94), a feline kidney-derived cell line, are infected with feline calicivirus, and the cells are cultured.
(2) Next, whether or not feline calicivirus is infected is confirmed by a cytopathic effect (CPE).
After confirming the cytopathic effect, the cultured cells are disrupted by repeating freeze-thawing of the cultured cells.
(3) Next, the obtained cultured cell lysate is centrifuged, and the supernatant is used as a virus solution.
(4) A norovirus inactivating agent and a virus solution are mixed at a ratio (volume) of 9: 1, and after 30 seconds at room temperature, the norovirus inactivating agent is diluted 100-fold with an OPTI-MEM medium. Stop the action on viruses.
The solution obtained by this step is used as a norovirus inactivating agent 30-second acting virus solution.
(5) Immediately after the OPTI-MEM medium and the virus solution were mixed at a ratio (volume) of 9: 1, the resulting solution was diluted 100-fold with the OPTI-MEM medium, whereby the obtained solution was treated with a norovirus inactivating agent for 0 sec. Use a working virus solution.
(6) Norovirus inactivator 0 second-acting virus solution and Norovirus inactivator 30-second-acting virus solution were each diluted 10-fold in an OPTI-MEM medium. Discard the medium of the 96-well microplate in which CRFK cells were cultured, and add 100 μL of serial dilutions.
(7) CRFK cells, to which serially diluted Norovirus inactivating agent 0 second acting virus solution and Norovirus inactivating agent 30 second acting virus solution are added, are cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 for 4 days. .
(8) The virus infection titer (logarithm) of each virus solution is quantified by TCID 50 (Tissue Culture Infectious Dose 50%) using CPE of the cultured CRFK cells as an index.
(9) The above steps (1) to (8) are independently carried out three times, and the average value of the virus infectivity titer calculated using the norovirus inactivating agent 0 second action virus solution is calculated at the action time of 0 seconds. The virus infection titer is defined as the average value of the virus infection titer calculated using the norovirus inactivating agent 30 second acting virus solution as the virus infection titer value at the action time of 30 seconds.
本発明のノロウイルス不活性化剤は、マウスノロウイルスを試験ウイルスとした下記ウイルス感染力価測定において、作用時間３０秒におけるウイルス感染力価の値が、作用時間０秒におけるウイルス感染力価の値より２．０以上小さいことが望ましく、４．０以上小さいことがより望ましい。
本発明のノロウイルス不活性化剤が、このようなウイルス不活性化作用を奏すると、カリシウイルス科ウイルスの感染を防止することができる。
In the norovirus inactivating agent of the present invention, in the following virus infection titer measurement using mouse norovirus as a test virus, the virus infection titer value at an action time of 30 seconds is greater than the virus infection titer value at an action time of 0 seconds. It is preferably 2.0 or more and more preferably 4.0 or more.
When the norovirus inactivating agent of the present invention exerts such a virus inactivating action, infection with the caliciviridae virus can be prevented.
（マウスノロウイルス感染力価測定）
（１）マウスノロウイルスを、マウスのマクロファージ由来細胞株であるＲＡＷ ２６４．７細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ−７１）に感染させて細胞を培養する。
（２）次に、マウスノロウイルスが感染したかどうかを細胞変性効果（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ ｅｆｆｅｃｔ：ＣＰＥ）により確認する。
細胞変性効果を確認した後、培養細胞の凍結融解を繰り返すことにより、培養細胞を破砕する。
（３）次に、得られた培養細胞破砕液を遠心分離し、上清をウイルス溶液とする。
（４）ノロウイルス不活性化剤と、ウイルス溶液とを９：１の割合（容量）で混合し、室温で３０秒経過後、１０％牛胎児血清含有ＤＭＥＭ培地で１００倍希釈することにより、ノロウイルス不活性化剤のウイルスに対する作用を停止させる。
この工程により得られた溶液をノロウイルス不活性化剤３０秒作用ウイルス溶液とする。
（５）１０％牛胎児血清含有ＤＭＥＭ培地と、ウイルス溶液とを９：１の割合（容量）で混合した直後、１０％牛胎児血清含有ＤＭＥＭ培地で１００倍希釈することにより、得られた溶液をノロウイルス不活性化剤０秒作用ウイルス溶液とする。
（６）ノロウイルス不活性化剤０秒作用ウイルス溶液及びノロウイルス不活性化剤３０秒作用ウイルス溶液を、それぞれ、１０％牛胎児血清含有ＤＭＥＭ培地により、１０倍段階希釈する。１ウェルにＲＡＷ ２６４．７細胞を５０μＬずつ分注した９６ｗｅｌｌマイクロプレートに、各段階希釈液を５０μＬずつ加える。
（７）ノロウイルス不活性化剤０秒作用ウイルス溶液及びノロウイルス不活性化剤３０秒作用ウイルス溶液の段階希釈液が加えられたＲＡＷ ２６４．７細胞を３７℃、５％ＣＯ２の条件で、４日間培養する。
（８）培養したＲＡＷ ２６４．７細胞のＣＰＥを指標にＴＣＩＤ５０（Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｏｓｅ ５０％）により各ウイルス溶液のウイルス感染力価（対数）を定量する。
（９）上記（１）〜（８）の工程を３回独立に行い、ノロウイルス不活性化剤０秒作用ウイルス溶液を用いて算出されたウイルス感染力価の平均値を、作用時間０秒におけるウイルス感染力価とし、ノロウイルス不活性化剤３０秒作用ウイルス溶液を用いて算出されたウイルス感染力価の平均値を、作用時間３０秒におけるウイルス感染力価の値とする。
(Measurement of mouse norovirus infection titer)
(1) A mouse norovirus is infected with RAW 264.7 cells (ATCC TIB-71), which is a mouse macrophage-derived cell line, and the cells are cultured.
(2) Next, it is confirmed by cytopathic effect (CPE) whether mouse norovirus was infected.
After confirming the cytopathic effect, the cultured cells are disrupted by repeating freeze-thawing of the cultured cells.
(3) Next, the obtained cultured cell lysate is centrifuged, and the supernatant is used as a virus solution.
(4) Norovirus inactivating agent and virus solution are mixed at a ratio (volume) of 9: 1, and after 30 seconds at room temperature, diluted 100-fold with DMEM medium containing 10% fetal calf serum, norovirus Stop the action of the inactivating agent on the virus.
The solution obtained by this step is used as a norovirus inactivating agent 30-second acting virus solution.
(5) Immediately after mixing the DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and the virus solution at a ratio (volume) of 9: 1, the solution obtained by diluting 100 times with the DMEM medium containing 10% fetal bovine serum Is a norovirus inactivating agent 0 second acting virus solution.
(6) Norovirus inactivator 0-second action virus solution and Norovirus inactivator 30-second action virus solution are each diluted 10-fold in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum. 50 μL of each serial dilution is added to a 96-well microplate containing 50 μL of RAW 264.7 cells per well.
(7) RAW 264.7 cells to which serially diluted Norovirus inactivating agent 0 second acting virus solution and Norovirus inactivating agent 30 second acting virus solution were added under conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 Incubate for days.
(8) The virus infection titer (logarithm) of each virus solution is quantified by TCID 50 (Tissue Culture Infectious Dose 50%) using CPE of cultured RAW 264.7 cells as an index.
(9) The above steps (1) to (8) are independently carried out three times, and the average value of the virus infectivity titer calculated using the norovirus inactivating agent 0 second action virus solution is calculated at the action time of 0 seconds. The virus infection titer is defined as the average value of the virus infection titer calculated using the norovirus inactivating agent 30 second acting virus solution as the virus infection titer value at the action time of 30 seconds.
エタノールは、細菌に対する殺菌効果を有する。
また、エタノールを殺菌成分として含む殺菌剤は、ｐＨが低いと殺菌効果が向上する。
本発明のノロウイルス不活性化剤は、エタノールを含むので、殺菌剤としても機能する。
さらに、本発明のノロウイルス不活性化剤は、ｐＨが１．０〜６．０と充分に低い。
そのため、本発明のノロウイルス不活性化剤は、細菌に対しても高い殺菌効果を示す。
Ethanol has a bactericidal effect on bacteria.
In addition, a bactericidal agent containing ethanol as a bactericidal component improves the bactericidal effect when the pH is low.
Since the norovirus inactivating agent of the present invention contains ethanol, it also functions as a bactericidal agent.
Furthermore, the norovirus inactivating agent of the present invention has a sufficiently low pH of 1.0 to 6.0.
Therefore, the norovirus inactivating agent of the present invention shows a high bactericidal effect against bacteria.
本発明のノロウイルス不活性化剤を細菌に対して用いる場合には、ノロウイルス不活性化剤のｐＨは、１．０〜４．０であることが望ましく、２．０〜４．０であることがより望ましい。 When the norovirus inactivating agent of the present invention is used against bacteria, the pH of the norovirus inactivating agent is preferably 1.0 to 4.0, and preferably 2.0 to 4.0. Is more desirable.
本発明のノロウイルス不活性化剤には、さらにグリセリン脂肪酸エステル等が含まれていてもよい。
グリセリン脂肪酸エステルとしては、モノグリセリン脂肪酸エステルであってもよく、ポリグリセリン脂肪酸エステルであってもよい。例えば、モノグリセリンカプリル酸エステル、モノグリセリンカプリン酸エステル、モノグリセリンラウリン酸エステル、ジグリセリンカプリル酸エステル、ヘキサグリセリンラウリン酸エステル、デカグリセリンラウリン酸エステル等があげられる。
本発明のノロウイルス不活性化剤がこれらの成分を含むと、細菌に対する殺菌効果が向上する。
The norovirus inactivating agent of the present invention may further contain glycerin fatty acid ester and the like.
The glycerin fatty acid ester may be a monoglycerin fatty acid ester or a polyglycerin fatty acid ester. For example, monoglycerin caprylic acid ester, monoglycerin capric acid ester, monoglycerin lauric acid ester, diglycerin caprylic acid ester, hexaglycerin lauric acid ester, decaglycerin lauric acid ester and the like can be mentioned.
When the norovirus inactivating agent of the present invention contains these components, the bactericidal effect against bacteria is improved.
また、本発明のノロウイルス不活性化剤には、上記の成分以外に保湿剤、エモリエント剤、香料、色素、天然抽出物、陽イオン界面活性剤、増粘剤、消炎剤等を含んでいてもよい。 The norovirus inactivating agent of the present invention may contain a moisturizer, emollient, fragrance, pigment, natural extract, cationic surfactant, thickener, anti-inflammatory agent, etc. in addition to the above components. Good.
次に、本発明のノロウイルス不活性化剤の使用方法を説明する。
本発明のノロウイルス不活性化剤は、ポンプボトルやスプレーガンに詰めて、必要量を消毒対象に塗布したり、噴きつけて使用してもよい。
Next, a method for using the norovirus inactivating agent of the present invention will be described.
The norovirus inactivating agent of the present invention may be packed in a pump bottle or a spray gun and applied to a disinfectant or sprayed for use.
また、本発明のノロウイルス不活性化剤を衛生資材に使用してもよい。このような衛生資材は、本発明の衛生資材でもある。 Moreover, you may use the norovirus inactivating agent of this invention for a sanitary material. Such a sanitary material is also the sanitary material of the present invention.
本発明の衛生資材は、上記本発明のノロウイルス不活性化剤を含むことを特徴とする。
本発明のノロウイルス不活性化剤は、ウイルス不活性化作用を奏するので、このようなノロウイルス不活性化剤を含む衛生資材を用いることにより、ウイルス感染を防ぐことができる。
The sanitary material of the present invention includes the above-described norovirus inactivating agent of the present invention.
Since the norovirus inactivating agent of the present invention exerts a virus inactivating action, viral infection can be prevented by using a sanitary material containing such a norovirus inactivating agent.
本発明の衛生資材は、特に限定されるものではないが、例えば、マスク、使い捨て手袋、使い捨て布巾、ティッシュペーパー、ウエットティッシュ等があげられる。 The sanitary material of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include a mask, disposable gloves, disposable cloths, tissue paper, and wet tissue.
以下に本発明をより具体的に説明する実施例を示すが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 Examples for more specifically explaining the present invention are shown below, but the present invention is not limited to these examples.
（実施例１）
エタノールが５５．００重量％、Ｌ−酒石酸が０．１ｍｏｌ／Ｌとなるように、これら化合物と、精製水とを混合して実施例１に係るノロウイルス不活性化剤を作成した。
実施例１に係るノロウイルス不活性化剤のｐＨは、２．７であった。
Example 1
These compounds and purified water were mixed so that ethanol was 55.00% by weight and L-tartaric acid was 0.1 mol / L to prepare the norovirus inactivating agent according to Example 1.
The pH of the norovirus inactivating agent according to Example 1 was 2.7.
（実施例２〜１０）及び（比較例１〜８）
ノロウイルス不活性化剤の材料の種類及び割合を表１に示すように変更した以外は、実施例１と同様に実施例２〜１０及び比較例１〜８に係るノロウイルス不活性化剤を作製した。
なお、表１中「％」は重量％を意味する。
また、表１中の酸剤の商品名及び製造元は以下の通りである。
Ｌ−酒石酸：Ｌ−酒石酸 扶桑化学工業株式会社製
クエン酸：精製クエン酸（無水） 扶桑化学工業株式会社製
リン酸：りん酸 米山薬品工業株式会社製
ピロリン酸：二りん酸 米山薬品工業株式会社製
ポリリン酸：ポリりん酸 米山薬品工業株式会社製
フィチン酸：フィチン酸５０％水溶液（ＩＰ６） 築野食品工業株式会社製
乳酸：ムサシノ乳酸５０ 株式会社武蔵野化学研究所製
酢酸：９０％純良酢酸 日和合精株式会社製
リンゴ酸：リンゴ酸フソウ 扶桑化学工業株式会社製
コハク酸：コハク酸 扶桑化学工業株式会社製
グルコン酸：グルコン酸液（５０％） 扶桑化学工業株式会社製
ソルビン酸：特級 ソルビン酸 キシダ化学株式会社製
(Examples 2 to 10) and (Comparative Examples 1 to 8)
The norovirus inactivating agent according to Examples 2 to 10 and Comparative Examples 1 to 8 was prepared in the same manner as in Example 1 except that the type and ratio of the norovirus inactivating agent were changed as shown in Table 1. .
In Table 1, “%” means% by weight.
Moreover, the brand name and manufacturer of the acid agent in Table 1 are as follows.
L-tartaric acid: L-tartaric acid Citric acid manufactured by Fuso Chemical Industry Co., Ltd .: Purified citric acid (anhydrous) Phosphoric acid manufactured by Fuso Chemical Industries Co., Ltd. Phosphoric acid manufactured by Yoneyama Pharmaceutical Co., Ltd. Polyphosphoric acid: Polyphosphoric acid Yoneyama Pharmaceutical Co., Ltd. Phytic acid: Phytic acid 50% aqueous solution (IP6) Tsukino Foods Industries Co., Ltd. Wako Seisaku Co., Ltd. Malic acid: Fuso malate Fuso Chemical Industry Co., Ltd. Succinic acid: Succinic acid Fuso Chemical Industry Co., Ltd. Gluconic acid: Gluconic acid solution (50%) Fuso Chemical Industry Co., Ltd. Sorbic acid: Special grade Sorbic acid Made by Kishida Chemical Co., Ltd.
（ネコカリシウイルスの感染力価測定）
ノロウイルス不活性化剤として、各実施例及び各比較例に係るノロウイルス不活性化剤を用い、上記（ネコカリシウイルス感染力価測定）の方法に基づき、作用時間０秒におけるウイルス感染力価の値と、作用時間３０秒におけるウイルス感染力価の値との差を算出して評価した。評価基準は以下の通りである。結果を表１に示す。
◎：４．０以上の感染力価の減少（充分な効果あり）
○：２．０以上、４．０未満の感染力価の減少（効果あり）
×：２．０未満の感染力価の減少（効果なし）
(Infectious titer measurement of feline calicivirus)
Using the norovirus inactivating agent according to each example and each comparative example as a norovirus inactivating agent, based on the method of the above (feline calicivirus infectious titer measurement), the value of the virus infectious titer at an action time of 0 seconds And the difference between the virus infectious titer value at an action time of 30 seconds was calculated and evaluated. The evaluation criteria are as follows. The results are shown in Table 1.
A: Decrease in infectious titer of 4.0 or more (sufficient effect)
○: Decrease in infectious titer of 2.0 or more and less than 4.0 (effective)
X: Decrease in infectious titer of less than 2.0 (no effect)
（マウスノロウイルスの感染力価測定）
ノロウイルス不活性化剤として、各実施例及び各比較例に係るノロウイルス不活性化剤を用い、上記（マウスノロウイルスの感染力価測定）の方法に基づき、作用時間０秒におけるウイルス感染力価の値と、作用時間３０秒におけるウイルス感染力価の値との差を算出して評価した。評価基準は以下の通りである。結果を表１に示す。
◎：４．０以上の感染力価の減少（充分な効果あり）
○：２．０以上、４．０未満の感染力価の減少（効果あり）
×：２．０未満の感染力価の減少（効果なし）
(Measurement of infectious titer of mouse norovirus)
Using the norovirus inactivating agent according to each example and each comparative example as a norovirus inactivating agent, the value of the virus infectious titer at 0 seconds of action based on the above method (measurement of infectious titer of mouse norovirus) And the difference between the virus infectious titer value at an action time of 30 seconds was calculated and evaluated. The evaluation criteria are as follows. The results are shown in Table 1.
A: Decrease in infectious titer of 4.0 or more (sufficient effect)
○: Decrease in infectious titer of 2.0 or more and less than 4.0 (effective)
X: Decrease in infectious titer of less than 2.0 (no effect)
（噴霧後の跡残り評価）
各実施例及び各比較例に係るノロウイルス不活性化剤を、スプレーガン（吐出量１ｍＬ／１回）に詰め、プラスチックボードに３回噴霧した。その後、室温で一晩、自然乾燥させた。
乾燥後のプラスチックボードを目視で観察してノロウイルス不活性化剤の跡残り具合を確認し、さらに、プラスチックボードを手で触り、べとつきを確認した。
評価基準は以下の通りである。結果を表１に示す。
○：ノロウイルス不活性化剤の跡残りが少なく、べとつかない
×：ノロウイルス不活性化剤の跡残りが多く、べとつく
(Remaining evaluation after spraying)
The norovirus inactivating agent according to each example and each comparative example was packed in a spray gun (discharge amount 1 mL / 1 time) and sprayed three times on a plastic board. Then, it was naturally dried overnight at room temperature.
The dried plastic board was visually observed to confirm the trace of the norovirus inactivating agent, and the plastic board was touched by hand to check for stickiness.
The evaluation criteria are as follows. The results are shown in Table 1.
○: There is little trace of norovirus inactivator and is not sticky ×: There is much trace of norovirus inactivator and is sticky
カリシウイルス科ウイルスの感染力価測定の結果、各実施例に係るノロウイルス不活性化剤は、ネコカリシウイルス及びマウスノロウイルスに対し、高いウイルス不活性化作用を示した。
現在、ヒトノロウイルスは、培養細胞を用いても増殖させることができない。そのため、ノロウイルスの不活性化に対する検証には、代替ウイルスとしてネコカリシウイルス及びマウスノロウイルスが広く用いられている。
表１に示す結果より、各実施例に係るノロウイルス不活性化剤は、ヒトノロウイルスに対しても高いウイルス不活性化作用を示すと予測される。
As a result of measuring the infectious titer of the caliciviridae virus, the norovirus inactivating agent according to each example showed a high virus inactivating effect on feline calicivirus and mouse norovirus.
Currently, human norovirus cannot be propagated using cultured cells. Therefore, feline calicivirus and mouse norovirus are widely used as alternative viruses for verification of inactivation of norovirus.
From the results shown in Table 1, it is predicted that the norovirus inactivating agent according to each Example shows a high virus inactivating action against human norovirus.
また、表１に示すように、実施例１〜１０に係るノロウイルス不活性化剤の噴霧後の跡残り評価は全て良好であった。
そのため、実施例１〜１０に係るノロウイルス不活性化剤を噴霧して用いる場合には、噴霧後のノロウイルス不活性化剤の跡残りをほとんど気にしなくてもよいことが示された。
Moreover, as shown in Table 1, all the remaining evaluations after spraying the norovirus inactivating agent according to Examples 1 to 10 were good.
Therefore, when spraying and using the norovirus inactivating agent which concerns on Examples 1-10, it was shown that it is not necessary to care about the trace of the norovirus inactivating agent after spraying.
Claims (6)
前記酸剤は、酒石酸、ピロリン酸、ポリリン酸及びフィチン酸からなる群から選択される少なくとも１種の酸であり、
前記ベシウイルス属ウイルス及び／又はノロウイルス属ウイルス用ウイルス不活性化剤のｐＨは、１．０〜６．０であり、
前記ベシウイルス属ウイルス及び／又はノロウイルス属ウイルス用ウイルス不活性化剤は、抗菌剤微粒子を含まないことを特徴とするベシウイルス属ウイルス及び／又はノロウイルス属ウイルス用ウイルス不活性化剤。 A virus inactivating agent for vesivirus and / or norovirus, comprising ethanol and an acid agent,
The acid agent is at least one acid selected from the group consisting of tartaric acid, pyrophosphoric acid, polyphosphoric acid and phytic acid,
The pH of the virus inactivating agent for the Besivirus and / or Norovirus is 1.0 to 6.0,
The virus inactivating agent for the genus Besivirus and / or the virus of the genus Norovirus, wherein the virus inactivating agent for the genus Besivirus and / or the virus of the genus Norovirus does not contain fine particles of the antibacterial agent.
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