JP6113155B2 - 計算で最適化した広い反応性を示すh1n1インフルエンザの抗原 - Google Patents
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Description
本願は、2011年6月20日に出願した米国仮出願第61/498,800号の利益を主張する。米国仮出願第61/498,800号は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
本開示は、H1N1ウイルス分離株に対して広い反応性を示す免疫応答を誘発する最適化したインフルエンザ血球凝集素タンパク質およびワクチンとしてのその使用に関する。
インフルエンザウイルスはオルトミクソウイルス科のメンバーである。インフルエンザウイルスには、A型インフルエンザ、B型インフルエンザ、およびC型インフルエンザと命名された3つのサブタイプが存在する。インフルエンザビリオンは、以下のタンパク質をコードするセグメント化ネガティブセンスRNAゲノムを含む:血球凝集素(HA)、ノイラミニダーゼ(NA)、マトリックス(M1)、プロトンイオンチャネルタンパク質(M2)、核タンパク質(NP)、ポリメラーゼ塩基性タンパク質1(PB1)、ポリメラーゼ塩基性タンパク質2(PB2)、ポリメラーゼ酸性タンパク質(PA)、および非構造タンパク質2(NS2)。HA、NA、M1、およびM2が膜結合タンパク質であるのに対して、NP、PB1、PB2、PA、およびNS2はヌクレオカプシド結合タンパク質である。M1タンパク質は、インフルエンザ粒子の最も豊富なタンパク質である。HAおよびNAタンパク質は、ウイルス付着(attachment)およびウイルス粒子の細胞への侵入を担うエンベロープ糖タンパク質であり、ウイルス中和および防御免疫のための主な免疫優性エピトープの供給源である。HAおよびNAタンパク質の両方は、インフルエンザ予防ワクチンの最も重要な成分と見なされている。
H1N1インフルエンザウイルス分離株に対して広い反応性を示す免疫応答を誘発するために最適化したH1N1インフルエンザHAポリペプチドの生成を本明細書中に開示する。最適化したHAポリペプチドを、1918〜2011年に分離された選択H1N1ウイルスに基づいた一連のHAタンパク質アラインメントおよびその後のコンセンサス配列の生成によって作製した。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される:
(項目1) 組換えインフルエンザ血球凝集素(HA)ポリペプチドであって、
配列番号1の残基2〜566と少なくとも99%同一、
配列番号2の残基2〜566と少なくとも99.2%同一、
配列番号3の残基2〜566と少なくとも99%同一、
配列番号4の残基2〜566と少なくとも99%同一、
配列番号5の残基2〜566と少なくとも98%同一、
配列番号6の残基2〜566と少なくとも99%同一、
配列番号7の残基2〜566と少なくとも97%同一、
配列番号8の残基2〜566と少なくとも99%同一、
配列番号9の残基2〜566を含む、
配列番号10の残基2〜566と少なくとも99%同一、または
配列番号11の残基2〜566と少なくとも99%同一
のアミノ酸配列を含む組換えインフルエンザ血球凝集素(HA)ポリペプチド。
(項目2) 配列番号1と少なくとも99%同一、
配列番号2と少なくとも99.2%同一、
配列番号3と少なくとも99%同一、
配列番号4と少なくとも99%同一、
配列番号5と少なくとも98%同一、
配列番号6と少なくとも99%同一、
配列番号7と少なくとも97%同一、
配列番号8と少なくとも99%同一、
配列番号9を含む、
配列番号10と少なくとも99%同一、または
配列番号11と少なくとも99%同一
のアミノ酸配列を含む項目1に記載のインフルエンザHAポリペプチド。
(項目3) 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、
(i)配列番号1と比較して5個以下のアミノ酸置換;
(ii)配列番号2と比較して4個以下のアミノ酸置換;
(iii)配列番号3と比較して6個以下のアミノ酸置換;
(iv)配列番号4と比較して8個以下のアミノ酸置換;
(v)配列番号5と比較して10個以下のアミノ酸置換;
(vi)配列番号6と比較して8個以下のアミノ酸置換;
(vii)配列番号7と比較して10個以下のアミノ酸置換;
(viii)配列番号8と比較して10個以下のアミノ酸置換;
(ix)配列番号10と比較して8個以下のアミノ酸置換;または
(x)配列番号11と比較して5個以下のアミノ酸置換
を含む、項目1または項目2に記載のインフルエンザHAポリペプチド。
(項目4) 配列番号1の残基2〜566、配列番号2の残基2〜566、配列番号3の残基2〜566、配列番号4の残基2〜566、配列番号5の残基2〜566、配列番号6の残基2〜566、配列番号7の残基2〜566、配列番号8の残基2〜566、配列番号9の残基2〜566、配列番号10の残基2〜566、または配列番号11の残基2〜566のアミノ酸配列を含む項目1に記載のインフルエンザHAポリペプチド。
(項目5) 配列番号1の残基2〜566、配列番号2の残基2〜566、配列番号3の残基2〜566、配列番号4の残基2〜566、配列番号5の残基2〜566、配列番号6の残基2〜566、配列番号7の残基2〜566、配列番号8の残基2〜566、配列番号9の残基2〜566、配列番号10の残基2〜566、または配列番号11の残基2〜566のアミノ酸配列からなる項目1に記載のインフルエンザHAポリペプチド。
(項目6) 配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、または配列番号11のアミノ酸配列を含む項目2に記載のインフルエンザHAポリペプチド。
(項目7) 配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、または配列番号11のアミノ酸配列からなる項目2に記載のインフルエンザHAポリペプチド。
(項目8) 項目1〜7のいずれか1項に記載のインフルエンザHAポリペプチドをコードする単離核酸分子。
(項目9) 前記核酸分子を哺乳動物細胞での発現のためにコドン最適化する、項目8に記載の単離核酸分子。
(項目10) 項目8または項目9に記載の核酸分子を含むベクター。
(項目11) 前記インフルエンザHAポリペプチドをコードする核酸配列に作動可能に連結したプロモーターをさらに含む項目10に記載のベクター。
(項目12) 項目10または項目11に記載のベクターを含む単離細胞。
(項目13) 項目1〜7のいずれか1項に記載のインフルエンザHAポリペプチドを含むインフルエンザウイルス様粒子(VLP)。
(項目14) インフルエンザノイラミニダーゼ(NA)タンパク質、インフルエンザマトリックス(M1)タンパク質、またはその両方をさらに含む項目13に記載のインフルエンザVLP。
(項目15) 前記HAポリペプチドをコードするベクター、インフルエンザNAタンパク質をコードするベクター、およびインフルエンザM1タンパク質をコードするベクターで宿主細胞を該HAタンパク質、該M1タンパク質、および該NAタンパク質を発現させるのに十分な条件下でトランスフェクトすることによって生成される、項目1〜7のいずれか1項に記載のインフルエンザHAポリペプチドを含むインフルエンザVLP。
(項目16) 項目1〜7のいずれか1項に記載のインフルエンザHAポリペプチドを含む融合タンパク質。
(項目17) 項目1〜7のいずれか1項に記載のインフルエンザHAポリペプチド、項目16に記載の融合タンパク質、または項目13〜15のいずれか1項に記載のVLP、および薬学的に許容され得るキャリアを含む組成物。
(項目18) 被験体におけるインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘発する方法であって、項目1〜7のいずれか1項に記載のインフルエンザHAポリペプチド、項目16に記載の融合タンパク質、項目13〜15のいずれか1項に記載のVLP、または項目17に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
(項目19) インフルエンザウイルスに対して被験体を免疫する方法であって、項目13〜15のいずれか1項に記載のVLPおよび薬学的に許容され得るキャリアを含む組成物を前記被験体に投与するステップを含む、方法。
(項目20) 前記組成物がアジュバントをさらに含む、項目19に記載の方法。
(項目21) 前記組成物を筋肉内投与する、項目19または項目20に記載の方法。
(項目22) 前記組成物が約1〜約25μgの前記VLPを含む、項目19〜21のいずれか1項に記載の方法。
(項目23) 前記組成物が約15μgの前記VLPを含む、項目22に記載の方法。
(項目24) 配列番号12のアミノ酸配列を含む組換えインフルエンザHAポリペプチド。
(項目25) 被験体におけるインフルエンザウイルスに対する免疫応答を誘発する方法で用いる項目1〜7のいずれか1項に記載のインフルエンザHAポリペプチド、項目16に記載の融合タンパク質、項目13〜15のいずれか1項に記載のVLP、または項目17に記載の組成物。
添付の配列表に列挙した核酸配列およびアミノ酸配列を、米国特許法施行規則1.822で定義のように、ヌクレオチド塩基については標準的な略語を使用し、アミノ酸については3文字表記を使用して示す。各核酸配列についてたった1つの鎖を示すが、表示の鎖を参照することによって相補鎖が含まれると理解される。添付の配列表では、以下を列挙する。
配列番号1〜11は、最適化したH1N1 HAタンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号12は、最適化したH1N1 HAタンパク質のコンセンサスアミノ酸配列である。
配列番号13は、コドン最適化したH1N1 HAの核酸配列である。
I.略語
COBRA:計算で最適化した広い反応性を示す抗原
HA:血球凝集素
HAI:赤血球凝集阻害
HRP:セイヨウワサビペルオキシダーゼ
M1:マトリックスタンパク質1
NA:ノイラミニダーゼ
PFU:プラーク形成単位
VLP:ウイルス様粒子
別途記載がない限り、技術用語を従来の用法にしたがって使用する。分子生物学における一般用語の定義を、Benjamin Lewin,Genes V,Oxford University Pressによる出版,1994(ISBN 0−19−854287−9);Kendrewら.(編集),The Encyclopedia of Molecular Biology,Blackwell Science Ltd.による出版,1994(ISBN 0−632−02182−9);およびRobert A.Meyers(編集),Molecular Biology and Biotechnology:a Comprehensive Desk Reference,VCH Publishers,Inc.による出版,1995(ISBN 1−56081−569−8)に見出すことができる。
H1N1インフルエンザに対して広い反応性を示す免疫応答を誘発するために最適化したH1N1インフルエンザHAポリペプチドの生成を本明細書中に開示する。最適化したHAポリペプチドを、1918〜2011年に分離された選択H1N1ウイルスに基づいた一連のHAタンパク質アラインメントおよびその後のコンセンサス配列の生成によって作製した。11種のHAコンセンサス配列を生成するために使用した方法を、実施例1および図1〜5に記載する。11種のコンセンサスHAポリペプチドのアミノ酸配列を、本明細書中に配列番号1〜11として示す。さらに、配列番号1〜11のアミノ酸コンセンサス配列を、配列番号12として本明細書中に提供する。
11種の異なる最適化したH1N1 HAポリペプチド配列を本明細書中に提供する。H1N1 HAアミノ酸配列を、NCBIインフルエンザウイルスリソースデータベースからダウンロードした。1918〜2011年の1134種の分離株由来のH1N1 HAタンパク質を、コンセンサス配列の生成のために使用した。実施例1は、各コンセンサス配列の生成のために使用した方法を記載している(図1〜5も参照のこと)。
インフルエンザウイルスは、オルトミクソウイルス科に属するセグメント化負鎖RNAウイルスである。インフルエンザウイルスには3つの型が存在する(A型、B型、およびC型)。A型インフルエンザウイルスは、広範な種々の鳥類および哺乳動物(ヒト、ウマ、海洋哺乳動物、ブタ、フェレット、およびニワトリが含まれる)に感染する。動物では、ほとんどのA型インフルエンザウイルスは、気道および腸管に軽度の限局性感染を引き起こす。しかし、高病原性A型インフルエンザ株(H5N1など)は、家禽類において全身性感染を引き起こし、その死亡率は100%に達し得る。A型インフルエンザに感染した動物は、しばしば、インフルエンザウイルスの保有宿主として働き、一定のサブタイプがヒトへの種の壁を超えることが示されている。
最適化したHA(配列番号1〜11のいずれか1つとして記載のアミノ酸配列を有するHAなど)を含むインフルエンザVLPを本明細書中に提供する。インフルエンザVLPは、一般に、HA、NA、およびM1タンパク質から構成される。インフルエンザVLPの生成は当該分野で記載されており、当業者の能力の範囲内である。例えば、インフルエンザVLPを、HA、NA、およびM1タンパク質をコードするプラスミドでの宿主細胞のトランスフェクションによって生成することができる。タンパク質を発現させるのに適した期間(およそ72時間など)、トランスフェクトした細胞をインキュベートした後、VLPを細胞培養上清から単離することができる。以下の実施例2は、細胞上清からのインフルエンザVLPの例示的な精製プロトコールを提供する。この実施例では、VLPを、低速遠心分離(細胞デブリ除去のため)、真空濾過、および20%グリセロールによる超遠心分離によって単離する。
A型インフルエンザH1N1 HAアミノ酸配列を、NCBIインフルエンザウイルスリソースデータベースからダウンロードした。1918〜2011年の1134種の分離株由来のH1N1 HAタンパク質を、コンセンサス配列の生成のために使用した。11種の異なるコンセンサス配列(配列番号1〜11)を、以下の方法を使用して生成した。
配列(456)を分離日順にまとめ、8種の一次コンセンサス配列を、1918〜1934(8)、1935〜1947(13)、1948〜1957(12)、1977〜1983(68)、1984〜1986(9)、1987〜1991(12)、1992〜1999(59)、および2000〜2005(263)の分離株を使用して生成した。図1に示すように、4種の二次コンセンサス配列を、日付順に一次コンセンサス配列をグループ化することによって生成した。最終コンセンサス配列(第3層コンセンサス;配列番号1)を、4種の二次コンセンサス配列のアラインメントによって生成した。
方法1と同様に、配列(456)を分離日順にまとめて8種の一次コンセンサス配列を生成した。図2に図示するように、最終コンセンサス配列(配列番号2)を、8種の一次コンセンサス配列のアラインメントによって生成した。
コンセンサス配列(配列番号3)を、1918〜2005年の456種のH1N1ウイルス分離株のアラインメントによって生成した。
図3に示すように、配列(456)を分離日順にまとめ、10種の一次コンセンサス配列を、1918〜1933(6)、1934〜1946(15)、1947〜1956(12)、1957〜1977(8)、1978〜1980(17)、1981〜1985(49)、1986〜1990(14)、1991〜1995(27)、1996〜1998(27)、および1999〜2005(281)の分離株を使用して生成した。最終コンセンサス配列(配列番号4)を、10種の一次コンセンサス配列のアラインメントによって生成した。
配列(1134)を分離日順にまとめ、12種の一次コンセンサス配列を、1918(1)、1976(4)、2009〜2011(123)、1933〜1934(8)、1935〜1947(13)、1948〜1957(12)、1977〜1983(68)、1984〜1986(9)、1987〜1991(12)、1992〜1999(27)、2000〜2005(59)、および2006〜2008(798)の分離株を使用して生成した。図4に示すように、4種の二次コンセンサス配列を、「ブタ」配列または日付順にしたがって一次コンセンサス配列をグループ化することによって生成した。最終コンセンサス配列(第3層コンセンサス;配列番号5)を、4種の二次コンセンサス配列のアラインメントによって生成した。
図5に示すように、配列(1134)を分離日順にまとめ、13種の一次コンセンサス配列を、1918(1)、1933〜1934(8)、1935〜1947(13)、1948〜1957(12)、1976(4)、1977〜1983(68)、1984〜1986(9)、1987〜1991(12)、1992〜1999(27)、2000〜2005(59)、2006(76)、2007〜2008(722)、および2009〜2011(123)の分離株を使用して生成した。最終コンセンサス配列(配列番号6)を、13種の一次コンセンサス配列のアラインメントによって生成した。
この配列(配列番号7)を、推定グリコシル化部位を除去するように方法5のコンセンサス配列(配列番号5)を変化させることによって生成した。
この配列(配列番号8)を、1918〜1957年のH1N1分離株のアラインメントによって生成した。
この配列(配列番号9)を、1977〜2005年のH1N1分離株のアラインメントによって生成した。
この配列(配列番号10)を、H1N1ヒトブタインフルエンザ分離株のアラインメントによって生成した。この配列を、1918、1976、および2009〜2011年のコンセンサス配列を使用してアラインメントした。
この配列(配列番号11)を、H1N1ブタインフルエンザ分離株のアラインメントによって生成した。この配列を、1930〜2010年のブタ配列を使用してアラインメントした。
以下の方法を使用して、最適化したHAを含むインフルエンザVLPを生成し、特徴付けることができる。マウス、フェレット、およびマカクの例示的な免疫方法も以下に記載する(GilesおよびRoss,Vaccine 29(16):3043−3054,2011も参照のこと)。
293T細胞を、M1、NA、および最適化したHAを発現するプラスミドで一過性にトランスフェクトし、37℃で72時間インキュベートする。M1、NA、およびHAのコード配列を、哺乳動物細胞での発現のためにコドン最適化することができる。上清を回収し、細胞デブリを低速遠心分離およびその後の0.22μmの滅菌フィルターによる真空濾過によって除去する。VLPを、超遠心分離(20%グリセロール(重量/容積)にて100,000×g)にて4℃で4時間精製した。次いで、ペレットをPBS(pH7.2)に再懸濁し、1回使用量のアリコートで使用するまで−80℃で保存する。総タンパク質濃度を、Micro BCA(商標)タンパク質アッセイ試薬キット(Pierce Biotechnology,Rockford,IL,USA)によって決定する。
HA比含量(specific content)を、ウェスタンブロットおよびデンシトメトリーによって決定することができる。精製組換えCOBRA HAおよび精製VLPを標準的な総タンパク質量で調製し、10%SDS−PAGEゲルにて電気泳動し、PVDF膜に転写する。ブロットをインフルエンザ感染マウス由来のマウスポリクローナル抗血清で探索し、HA−抗体複合体をセイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRP)に結合体化したヤギ抗マウスIgG(Southern Biotech;Birmingham,AL,USA)を使用して検出する。HRPを化学発光基質(Pierce Biotechnology;Rockford IL,USA)によって検出し、X線フィルム(ThermoFisher;Pittsburgh,PA,USA)に感光する。バンド密度を、ImageJソフトウェア(NIH)を使用して決定する。組換えHAバンドの密度を使用して標準曲線を計算し、精製VLPの密度を、組換えHAからの結果を使用して内挿する。
BALB/cマウス(Mus musculis、雌、6〜8週齢)を、Harlan Sprague Dawley(Indianapolis,IN,USA)から購入することができる。マウスを小型アイソレーターユニットに収容し、飼料および水を自由に利用させ、実験動物のためのUSDAガイドラインにしたがって飼育する。マウスにデンシトメトリーアッセイ由来のHA含量に基づいた3用量の精製COBRA HA VLP(1.5μg、0.3μg、または0.06μg)のうちの1つを筋肉内注射によって0週目にワクチン接種し、次いで、3週目に同一用量で追加免疫する。各用量のワクチンを、ミョウバンアジュバント(Imject Alum,Pierce Biotechnology;Rockford,IL,USA)、CpGオリゴヌクレオチド、またはビヒクルのみを使用して調合する。各ワクチン接種の14〜21日後、麻酔したマウスの後眼窩叢(retro−orbital plexus)から採血し、微量遠心チューブに移す。チューブを遠心分離し、血清を取り出し、−80±5℃で凍結する。各ワクチン群についての赤血球凝集阻害(HAI)血清抗体価を、5週目に代表的な再集合体ウイルスまたはCOBRA HA VLPを使用して決定する。
フィッチフェレット(Mustela putorius furo、雌、6〜12月齢)(インフルエンザナイーブおよび臭腺除去済み)を、Marshall Farms(Sayre,PA,USA)から購入することができる。フェレットをSani−chips実験動物用床敷(P.J.Murphy Forest Products,Montville,NJ,USA)を含むステンレススチール製ケージ(Shor−line,Kansas City,KS,USA)に対で収容する。フェレットに、Teklad Globalフェレット飼料(Harlan Teklad,Madison,WI,USA)および新鮮な水を自由に与える。COBRA HA VLPをPBS(pH7.2)で希釈して最終濃度にする。フェレットに、デンシトメトリーアッセイによって決定したHA含量に基づいた2用量の精製COBRA VLP(15μg、3μg)のうちの1つを筋肉内注射によって0週目に0.25mlの体積で大腿四頭筋にワクチン接種し、次いで、3週目に同一用量で追加免疫する。ワクチンを使用前に−80℃で保存し、使用直前にミョウバンアジュバント(Imject Alum;Pierce Biotechnology,Rockford,IL,USA)を使用して調合する。動物をワクチン接種レジメンの間、有害事象(体重減少、熱(temperature)、活動の低下、鼻汁、くしゃみ、および下痢が含まれる)について毎週モニタリングする。ワクチン接種前に、動物をHAIアッセイによって循環A型インフルエンザウイルスおよびB型インフルエンザウイルスについて血清陰性であることを確認する。各ワクチン接種の14〜21日後、麻酔したフェレットの前大静脈から採血し、微量遠心チューブに移す。チューブを遠心分離し、血清を取り出し、−80±5℃で凍結する。各ワクチン群についてのHAI血清抗体価を、5週目に代表的な再集合体ウイルスまたはCOBRA HA VLPを使用して決定する。
カニクイザル(Macaca fascicularis、雄、3〜5歳)を、Harlan Sprague Dawley(Indianapolis、IN、USA)から購入することができる。マカクにデンシトメトリーアッセイ由来のHA含量に基づいた精製COBRA HA VLP(15μg)を筋肉内注射によって0週目にワクチン接種し、次いで、3週目および6週目に同一用量で追加免疫する。ワクチンを、使用直前にミョウバンアジュバント(Imject Alum,Pierce Biotechnology;Rockford,IL,USA)を使用して調合する。各ワクチン接種の21日後、麻酔したマカクの大腿静脈から採血し、血清分離チューブに移す。チューブについて凝固を活性化させ、その後に遠心分離し、血清を取り出し、−80±5℃で凍結する。各ワクチン群についてのエンドポイントIgG力価およびHAI血清抗体価を、5週目に代表的な再集合体ウイルスまたはCOBRA HA VLPを使用して決定する。
本実施例は、マウスのCOBRA H1N1インフルエンザVLPでの接種によって有意なHAI血清抗体価が誘導され、in vitroでのCOBRA H1N1 HAの翻訳によって予測分子量のタンパク質が発現されることをさらに示すという所見を記載する。
COBRA方法1 H1N1 HAを含むインフルエンザウイルスが感染動物での抗体応答を誘発することができるかどうかを評価するために、COBRA方法1 HA(配列番号1)を含むVLPを実施例2に記載のように生成した。マウスにVLPを接種し、HAI血清抗体価決定のために感染の3、5、8、および12週間後に血清を採取した。抗血清を、季節性H1N1インフルエンザウイルス(A/ニューカレドニア/20/1999)に対して試験した。図6に示すように、HAI力価は感染5週間後から検出され始め、8週目および12週目に増加した。
実施例2に記載するように、COBRA HA方法1アミノ酸配列を逆翻訳し、哺乳動物細胞での発現のために最適化した。COBRA HAをコードする最適化した核酸配列(配列番号13)を、pTR600発現ベクターに挿入した。COBRA H1N1 HAがin vitroで適切に発現されるかどうかを評価するために、COBRA H1N1 HAをコードするpTR600発現ベクターで細胞をトランスフェクトした。細胞培養物のライセートを、SDS−PAGEおよびその後のインフルエンザHAの検出のためのウェスタンブロットによって分析した。図7に示すように、COBRA HAはその予測分子量に移動し、in vitroでの合成タンパク質の発現が確認された。
Claims (17)
- 被験体におけるインフルエンザウイルスに対して広い反応性を示す免疫応答を誘発するための組成物であって、該組成物は、配列番号1のアミノ酸配列を含む組換えインフルエンザ血球凝集素(HA)ポリペプチドを含む、組成物。
- 被験体におけるH1N1インフルエンザウイルスに対して広い反応性を示す免疫応答を誘発するための、請求項1に記載の組成物。
- 前記インフルエンザHAポリペプチドが、配列番号1のアミノ酸配列からなる請求項1または2に記載の組成物。
- 請求項1〜3のいずれか1項において定義されるインフルエンザHAポリペプチドをコードする単離核酸分子。
- 前記核酸分子を哺乳動物細胞での発現のためにコドン最適化する、請求項4に記載の単離核酸分子。
- 請求項4または請求項5に記載の核酸分子を含むベクター。
- 前記インフルエンザHAポリペプチドをコードする核酸配列に作動可能に連結したプロモーターをさらに含む請求項6に記載のベクター。
- 請求項11または請求項7に記載のベクターを含む単離細胞。
- 請求項1〜3のいずれか1項において定義されるインフルエンザHAポリペプチドを含むインフルエンザウイルス様粒子(VLP)を含む組成物。
- 前記インフルエンザVLPが、インフルエンザノイラミニダーゼ(NA)タンパク質、インフルエンザマトリックス(M1)タンパク質、またはその両方をさらに含む請求項9に記載の組成物。
- 請求項1〜3のいずれか1項において定義されるインフルエンザHAポリペプチドを含むインフルエンザVLPを生成する方法であって、該方法は、HAポリペプチドをコードするベクター、インフルエンザNAタンパク質をコードするベクター、およびインフルエンザM1タンパク質をコードするベクターで宿主細胞を該HAポリペプチド、該M1タンパク質、および該NAタンパク質を発現させるのに十分な条件下でトランスフェクトするステップを含む、方法。
- 請求項1〜3のいずれか1項において定義されるインフルエンザHAポリペプチドを含む融合タンパク質を含む組成物。
- 薬学的に許容され得るキャリアを含む、請求項1〜3、9、10または12のいずれか一項に組成物。
- 薬学的に許容され得るキャリアおよびアジュバントをさらに含む、請求項9または10に記載の組成物。
- 前記組成物が筋肉内投与されることを特徴とする、請求項14に記載の組成物。
- 前記組成物が1〜25μgの前記VLPを含む、請求項14〜15のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記組成物が15μgの前記VLPを含む、請求項16に記載の組成物。
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