JP6038212B2 - Thyroid-stimulating hormone receptor (TSHR) low molecular weight agonist - Google Patents

Description

診断、分析および治療目的のための甲状腺刺激ホルモン受容体（TSHR）のアゴニストで
ある化合物を本明細書に開示する。 Disclosed herein are compounds that are agonists of the thyrotropin receptor (TSHR) for diagnostic, analytical and therapeutic purposes.

甲状腺刺激ホルモン（TSH）は、甲状腺のホメオスタシスを調節するヘテロ二量体糖タ
ンパク質ホルモンである。TSHは、甲状腺濾胞細胞の成長および機能に関わる。TSHに対す
る細胞応答は、明白な7回膜貫通型受容体であるTSH受容体（TSHR）を介してもたらされる
。TSHRは、甲状腺（および大部分の甲状腺ガン）機能の主要な調節因子であり、骨および
脂肪細胞（脂質）の前駆細胞中で発現される。その内在性ホルモンTSHによるTSHRの活性
化は、通常の甲状腺ホメオスタシスのために必要であるだけでなく、骨および脂質代謝を
調節することもできる。 Thyroid-stimulating hormone (TSH) is a heterodimeric glycoprotein hormone that regulates thyroid homeostasis. TSH is involved in the growth and function of thyroid follicular cells. The cellular response to TSH is mediated through the TSH receptor (TSHR), an overt seven transmembrane receptor. TSHR is a major regulator of thyroid (and most thyroid cancer) function and is expressed in bone and adipocyte (lipid) progenitors. Activation of TSHR by its endogenous hormone TSH is not only required for normal thyroid homeostasis but can also regulate bone and lipid metabolism.

甲状腺は、周知のように、体内の代謝制御の一部位である。甲状腺ガンは特に一般的で
はないが、高い疾患の再発率により長期観察を必要とする。通常、甲状腺ガンの治療中に
、大多数の甲状腺腫瘍が除去されるが、放射性ヨウ素療法により治療されなければならな
い少量のものがしばしば残存する。実際、甲状腺ガンは、治療成功の後でさえ、患者の最
高30%という高い再発性を有することを特徴とする。従って、経過観察が必要である。 As is well known, the thyroid gland is a site of metabolic control in the body. Thyroid cancer is not particularly common but requires long-term observation due to the high disease recurrence rate. Usually, during the treatment of thyroid cancer, the majority of thyroid tumors are removed, but there are often small quantities that must be treated with radioiodine therapy. In fact, thyroid cancer is characterized by a high relapse of up to 30% of patients even after successful treatment. Therefore, follow-up is necessary.

手術後に、患者はもはや甲状腺ホルモンを産生しないので、患者を該ホルモンで治療す
ることが必要である。甲状腺の一つの役割は、体からヨウ素を摂取することである。従っ
て、あらゆる残存腫瘍細胞を放射性ヨウ素で処理することを可能とすべきである。しかし
ながら、残念なことに、甲状腺のガン細胞は、ヨウ素を良好に摂取しない。そのため、放
射性ヨウ素を働かせる目的で、患者を組み換えTSHで治療するか、または天然のTSHレベル
を上げてヨウ素の摂取を刺激するために甲状腺ホルモン治療を中止しなければならない。
甲状腺ホルモンの使用中止は、特に疲労、筋痙攣、膨れおよび便秘という、患者にとって
非常に不愉快な副作用がある。そのため、今日では、組み換えヒトTSH（rhTSH, Thyrogen
（登録商標）, Genzyme社）が高分化型甲状腺ガンの患者における術後のスクリーニング
用に臨床的に用いられる。しかしながら、rhTSHは遺伝子工学によりヒト細胞に作製され
る二量体糖タンパク質分子である。これは、生産が困難で、厳しい品質管理を必要とし、
非経口で投与されなければならない。 Since the patient no longer produces thyroid hormone after surgery, it is necessary to treat the patient with the hormone. One role of the thyroid gland is to get iodine from the body. Therefore, it should be possible to treat any remaining tumor cells with radioactive iodine. Unfortunately, however, thyroid cancer cells do not take iodine well. Therefore, patients must be treated with recombinant TSH for the purpose of working radioactive iodine, or thyroid hormone treatment must be discontinued to increase natural TSH levels and stimulate iodine intake.
Discontinuing use of thyroid hormone has very unpleasant side effects for patients, especially fatigue, muscle spasms, swelling and constipation. Therefore, today, recombinant human TSH (rhTSH, Thyrogen
(Registered trademark), Genzyme) is used clinically for post-operative screening in patients with well-differentiated thyroid cancer. However, rhTSH is a dimeric glycoprotein molecule created in human cells by genetic engineering. This is difficult to produce, requires strict quality control,
Must be administered parenterally.

本明細書に開示するのは、次式I：
を有する化合物、またはその薬学的に許容し得る塩であり、
式中のR¹からR⁴は、それぞれ独立してH、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシ、アミノ
カルボニルまたはハロゲンであり;
R⁵は、H、アルキル、アリール、アラルキルまたはアミノカルボニルであり;
Aは、-N=C(R¹⁵)-（左端の結合手が上記式Iのベンゼン環に結合し、右端の結合手が上記
式Iのヘテロ原子窒素に結合する）または-NH-CH(R¹⁵)-（左端の結合手が上記式Iのベンゼ
ン環に結合し、右端の結合手が上記式Iのヘテロ原子窒素に結合する）を表し;
R¹⁵は、次式IIで表され：
式中のR⁶からR⁹は、それぞれ独立してH、ヒドロキシル、アルキルまたはアルコキシであ
り;
R¹⁰からR¹⁴は、それぞれ独立してH、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシまたはアミ
ノカルボニルであり;
Xは、O、SまたはN(H)であり;
但し、式Iの化合物が下記の化合物１でないことを条件とする。
Disclosed herein is the formula I:
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
R ¹ to R ⁴ in the formula are each independently H, hydroxyl, alkyl, alkoxy, aminocarbonyl or halogen;
R ⁵ is H, alkyl, aryl, aralkyl or aminocarbonyl;
A is -N = C (R ¹⁵ )-(the leftmost bond is bonded to the benzene ring of formula I and the rightmost bond is bonded to the heteroatom nitrogen of formula I) or -NH-CH ( R ¹⁵ )-(the leftmost bond is bonded to the benzene ring of formula I and the rightmost bond is bonded to the heteroatom nitrogen of formula I);
R ¹⁵ is represented by the following formula II:
R ⁶ to R ⁹ in the formula are each independently H, hydroxyl, alkyl or alkoxy;
R ¹⁰ to R ¹⁴ are each independently H, hydroxyl, alkyl, alkoxy or aminocarbonyl;
X is O, S or N (H);
Provided that the compound of formula I is not the following compound 1.

また、ここに開示するのは、次式VIの追加化合物であり：
式中のR²⁰は、アリールまたはヘテロアリールであり;
R²¹は、アリールまたはヘテロアリールであり;
R²²は、請求項１に示す式IIのR¹⁵、ヘテロアリールまたはアリールである。 Also disclosed herein are additional compounds of formula VI:
R ²⁰ in the formula is aryl or heteroaryl;
R ²¹ is aryl or heteroaryl;
R ²² is R ^{15 of} formula II as shown in claim 1, heteroaryl or aryl.

また、本明細書に開示するのは、被検体の甲状腺ガンを検出するための方法であり、診
断学的に有効な量の次式I：
式中のR¹からR⁴は、それぞれ独立してH、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシ、アミノ
カルボニルまたはハロゲンであり;
R⁵は、H、アルキル、アリール、アラルキルまたはアミノカルボニルであり;
Aは、-N=C(R¹⁵)-（左端の結合手が上記式Iのベンゼン環に結合し、右端の結合手が上記
式Iのヘテロ原子窒素に結合する）または-NH-CH(R¹⁵)-（左端の結合手が上記式Iのベンゼ
ン環に結合し、右端の結合手が上記式Iのヘテロ原子窒素に結合する）を表し;
R¹⁵は、次式IIで表され：
式中のR⁶からR⁹は、それぞれ独立してH、ヒドロキシル、アルキルまたはアルコキシであ
り;
R¹⁰からR¹⁴は、それぞれ独立してH、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシまたはアミ
ノカルボニルであり;
Xは、O、SまたはN(H)である;
の化合物の少なくとも一つ若しくはその薬学的に許容し得る塩か、
または式VIの化合物の少なくとも一つを被検体に投与することを備える。 Also disclosed herein is a method for detecting thyroid cancer in a subject, wherein a diagnostically effective amount of the following formula I:
R ¹ to R ⁴ in the formula are each independently H, hydroxyl, alkyl, alkoxy, aminocarbonyl or halogen;
R ⁵ is H, alkyl, aryl, aralkyl or aminocarbonyl;
A is -N = C (R ¹⁵ )-(the leftmost bond is bonded to the benzene ring of formula I and the rightmost bond is bonded to the heteroatom nitrogen of formula I) or -NH-CH ( R ¹⁵ )-(the leftmost bond is bonded to the benzene ring of formula I and the rightmost bond is bonded to the heteroatom nitrogen of formula I);
R ¹⁵ is represented by the following formula II:
R ⁶ to R ⁹ in the formula are each independently H, hydroxyl, alkyl or alkoxy;
R ¹⁰ to R ¹⁴ are each independently H, hydroxyl, alkyl, alkoxy or aminocarbonyl;
X is O, S or N (H);
At least one of the compounds or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
Or comprising administering to the subject at least one of the compounds of formula VI.

本明細書に開示する更なる実施形態は、治療的に有効な量の式Iの化合物の少なくとも
一つか、または式VIの化合物の少なくとも一つを投与することを備える骨変性障害の治療
または予防方法を含む。 Further embodiments disclosed herein provide for the treatment or prevention of a bone degenerative disorder comprising administering a therapeutically effective amount of at least one compound of formula I, or at least one compound of formula VI. Including methods.

また、本明細書に開示するのは、被検体の甲状腺ガンの治療方法であり、治療的に有効
な量の式Iの化合物の少なくとも一つか、または式VIの化合物の少なくとも一つを被検体
に投与することを備える。 Also disclosed herein is a method for treating thyroid cancer in a subject, wherein a therapeutically effective amount of at least one compound of formula I or at least one compound of formula VI is administered to the subject. Providing for administration.

本明細書に開示する追加的の実施形態は、アッセイ中の甲状腺刺激ホルモン受容体の活
性化の方法を含み、甲状腺刺激ホルモン受容体を式Iの化合物の少なくとも一つか、また
は式VIの化合物の少なくとも一つと接触させることを備える。 Additional embodiments disclosed herein include a method of activation of a thyroid stimulating hormone receptor in an assay, wherein the thyroid stimulating hormone receptor is selected from at least one compound of formula I or a compound of formula VI. Contacting with at least one.

また、本明細書に開示するのは、薬学的に許容し得る担体と、式Iの化合物の少なくと
も一つか、または式VIの化合物の少なくとも一つとを含む製薬学的組成物である。 Also disclosed herein is a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier and at least one compound of formula I or at least one compound of formula VI.

前述かつ他の目的、特徴および利点は、添付図面を参照してなされる以下の詳細な説明
から明らかになるであろう。 The foregoing and other objects, features and advantages will become apparent from the following detailed description taken in conjunction with the accompanying drawings.

図1は、本明細書に開示した化合物が完全かつ選択的アゴニストであることを示すデータを表すグラフである。FIG. 1 is a graph representing data indicating that the compounds disclosed herein are complete and selective agonists. 図2は、本明細書に開示したいくつかの化合物の効能を示すデータを表すグラフである。FIG. 2 is a graph representing data showing the efficacy of some compounds disclosed herein. 図3は、ヒト甲状腺細胞の初代培養における本明細書に開示したいくつかの化合物のアゴニスト活性に関するデータを表すグラフである。FIG. 3 is a graph representing data relating to agonist activity of several compounds disclosed herein in primary cultures of human thyroid cells. 図4は、マウスモデルにおける本明細書に開示した化合物の生体内活性に関するデータを表すグラフである。FIG. 4 is a graph representing data relating to the in vivo activity of the compounds disclosed herein in a mouse model.

用語および方法の以下の説明は、本発明の化合物、組成物および方法をよりわかりやす
く記載して、本発明の実施において当業者を導くために提供される。また、本開示に用い
る用語は、特定の実施形態および実施例を記載する目的のみのものであって、限定するも
のでない。 The following descriptions of terms and methods are provided to more clearly describe the compounds, compositions and methods of the present invention and to guide those of ordinary skill in the practice of the invention. The terms used in the present disclosure are only for the purpose of describing specific embodiments and examples, and are not intended to be limiting.

本明細書中で用いる単数の用語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、明示的な断りの
ない限り、複数の指示対象を含む。同様に、「or」という単語は、明示的な断りのない限
り、「and」を含むことを目的とする。また、本明細書中で用いる「備える（comprise）
」という用語は、「含む（include）」を意味する。従って、「ＡまたはＢを備える（com
prising A or B）」は、A、B、またはAおよびBを含む（including A, B, or A and B）こ
とを意味する。 As used herein, the singular terms “a”, “an”, and “the” include plural referents unless expressly stated otherwise. Similarly, the word “or” is intended to include “and” unless explicitly stated otherwise. Also, as used herein, “comprise”
The term “” means “include”. Therefore, "A or B is provided (com
"prising A or B)" means including A, B, or A and B (including A, B, or A and B).

本明細書全体にわたって用いるR¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、n、XおよびYな
どの変数は、特に断りのない限り、前に定義したものと同一の変数である。 Variables such as R ¹ , R ² , R ³ , R ⁴ , R ⁵ , R ⁶ , R ⁷ , R ⁸ , R ⁹ , n, X and Y used throughout this specification are the same unless otherwise stated. Are the same variables as defined in.

化合物を「投与」および「投与する」とは、本明細書中に記載したような化合物、化合
物のプロドラッグまたは製薬学的組成物を提供することを意味すると理解すべきである。
化合物または組成物は、別の人により被検体に投与（例えば、静注で）することができる
か、または被検体により自己投与（例えば錠剤）することができる。 “Administering” and “administering” a compound should be understood to mean providing a compound, a prodrug or pharmaceutical composition of the compound as described herein.
The compound or composition can be administered (eg, intravenously) to the subject by another person, or can be self-administered (eg, a tablet) by the subject.

「任意の」または「任意に」とは、後に記載される事象または状況が生じる必要はない
が生じ得ること、ならびに記載がその事象または状況が生じる例および生じない例を含む
ことを意味する。 “Any” or “optionally” means that an event or situation described later may or may not occur, and that the description includes examples in which the event or situation occurs and examples that do not occur.

「誘導体」は、親化合物に由来するか、または親化合物から理論的に誘導できる化合物
または化合物の一部をいう。 “Derivative” refers to a compound or portion of a compound that is derived from or can be theoretically derived from the parent compound.

「被検体」という用語は、ヒトおよび獣医の被験体の両方を含む。   The term “subject” includes both human and veterinary subjects.

「治療」は、罹患開始後の疾患または病状の徴候または症状を改善する治療行為をいう
。本明細書で用いる疾患または病状に関して「改善する」という用語は、あらゆる観察可
能で、有益な治療効果をいう。有益な効果は、例えば、感染しやすい被検体における疾患
の臨床的徴候の遅い発症、いくらかのまたは全ての疾患の臨床的徴候の重症度における低
減、疾患のより遅い進行、患者の全体的な健康または福祉における向上、または特定の疾
患について特異的な当業界で公知である他のパラメータによって証明され得る。「疾患を
治療する」という表現は、例えば、ホルモン受容体を介する障害、特に甲状腺機能亢進性
障害または甲状腺機能低下性障害のような甲状腺障害などの疾患のリスクがある被検体に
おける疾患や症状の完全な罹患を阻害することをいう。「予防」治療は、病状進展のリス
クを減少させる目的のために、疾患の徴候を示さないかまたは初期徴候のみを示す被検体
に対してなされる治療である。「同時投与」という用語によって、少なくとも二つの化合
物のそれぞれが生物学的活性を有するそれぞれの時間がオーバーラップする時間枠の間投
与されることを意味する。従って、この用語は二つ以上の薬剤化合物の同時投与並びに連
続投与を含む。 “Treatment” refers to a therapeutic act of ameliorating a sign or symptom of a disease or condition after onset of illness. As used herein, the term “ameliorate” with respect to a disease or condition refers to any observable and beneficial therapeutic effect. Beneficial effects include, for example, late onset of clinical signs of disease in susceptible subjects, reduction in severity of clinical signs of some or all disease, slower progression of disease, overall patient health Or may be evidenced by improvements in welfare, or other parameters known in the art that are specific for a particular disease. The phrase “treating a disease” refers to, for example, a disease or symptom in a subject at risk for a disease such as a disorder mediated by a hormone receptor, particularly a thyroid disorder such as a hyperthyroid disorder or a hypothyroid disorder. It refers to inhibiting complete morbidity. “Prophylaxis” treatment is treatment given to a subject who shows no signs of disease or only early signs for the purpose of reducing the risk of disease progression. By the term “co-administration” is meant that each of the at least two compounds is administered during a time frame in which the respective times of biological activity overlap. Thus, this term includes simultaneous administration of two or more drug compounds as well as sequential administration.

「薬学的に許容し得る塩」または「薬理学的に許容し得る塩」という用語は、無機およ
び有機酸の塩基性塩を含む従来技術により調製された塩を指し、酸としては限定しないが
、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、リンゴ酸、
酢酸、シュウ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、マレイン酸、サリチル
酸、安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸などを含む。本明細書に開示する化合物の「薬
学的に許容し得る塩」は、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リチウム
、マグネシウム、亜鉛などのカチオンから形成したもの及びアンモニア、エチレンジアミ
ン、Ｎ-メチル-グルタミン、リジン、アルギニン、オルニチン、コリン、N,N'-ジベンジ
ルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、N-ベンジル
フェノールエチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス（ヒドロキシメチル）ア
ミノメタンおよびテトラメチル水酸化アンモニウなどの塩基から形成したものを含む。こ
れらの塩は、標準的な処理、例えば遊離酸を適当な有機または無機塩基と反応させること
により調製し得る。或いはまた、本明細書中に列挙したあらゆる化合物をその薬学的に許
容し得る塩として投与してもよい。「薬学的に許容し得る塩類」はまた、遊離の酸、塩基
および双性イオンの形式も含む。適当な薬学的に許容し得る塩の記載は、Handbook of Ph
armaceutical Salts, Properties, Selection and Use, Wiley VCH (2002)で見つけるこ
とができる。本明細書に開示する化合物がカルボキシ基のような酸性官能基を含むとき、
カルボキシ基に対する適当な薬学的に許容し得るカチオン対が当業者に周知であり、アル
カリ、アルカリ土類、アンモニウム、四級アンモニウムカチオンなどを含む。かかる塩は
当業者に既知である。「薬理学的に許容し得る塩類」の追加的な例に関しては、Berge et
al., J. Pharm. Sci. 66: 1 (1977).を参照のこと。 The term “pharmaceutically acceptable salt” or “pharmacologically acceptable salt” refers to salts prepared by the prior art including basic salts of inorganic and organic acids, including but not limited to acids. , Hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, malic acid,
Including acetic acid, oxalic acid, tartaric acid, citric acid, lactic acid, fumaric acid, succinic acid, maleic acid, salicylic acid, benzoic acid, phenylacetic acid, mandelic acid and the like. “Pharmaceutically acceptable salts” of the compounds disclosed herein include those formed from cations such as sodium, potassium, aluminum, calcium, lithium, magnesium, zinc, and ammonia, ethylenediamine, N-methyl-glutamine, Bases such as lysine, arginine, ornithine, choline, N, N'-dibenzylethylenediamine, chloroprocaine, diethanolamine, procaine, N-benzylphenolethylamine, diethylamine, piperazine, tris (hydroxymethyl) aminomethane, and tetramethylammonium hydroxide Including those formed from These salts can be prepared by standard procedures, such as reacting the free acid with a suitable organic or inorganic base. Alternatively, any compound listed herein may be administered as its pharmaceutically acceptable salt. “Pharmaceutically acceptable salts” also include the free acid, base and zwitterionic forms. For a description of suitable pharmaceutically acceptable salts, see Handbook of Ph.
It can be found in armaceutical Salts, Properties, Selection and Use, Wiley VCH (2002). When a compound disclosed herein contains an acidic functional group such as a carboxy group,
Suitable pharmaceutically acceptable cation pairs for the carboxy group are well known to those skilled in the art and include alkali, alkaline earth, ammonium, quaternary ammonium cations and the like. Such salts are known to those skilled in the art. For additional examples of “pharmacologically acceptable salts,” see Berge et
See al., J. Pharm. Sci. 66: 1 (1977).

「飽和または不飽和」とは、水素で飽和した置換基、完全には水素で飽和していない置
換基および部分的に水素で飽和した置換基を含む。 “Saturated or unsaturated” includes substituents saturated with hydrogen, substituents not fully saturated with hydrogen, and substituents partially saturated with hydrogen.

「アシル」という用語は、式RC(O)-の官能基を指し、ここでRは有機基である。   The term “acyl” refers to a functional group of formula RC (O) —, where R is an organic group.

「アルキル」という用語は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、
イソブチル、t-ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、デシル、テトラデシ
ル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシルなどの1〜24個の炭素原子からなる分岐ま
たは非分岐の飽和炭化水素基を指す。「低級アルキル」基は、1〜10個の炭素原子を有す
る飽和の分岐または非分岐の炭化水素である。好適なアルキル基は、1〜4個の炭素原子を
有する。アルキル基は、一つ以上の水素原子がハロゲン、シクロアルキル、アルコキシル
、アミノ、ヒドロキシ、アリールまたはカルボキシルのような置換基で置換された「置換
アルキル」でもよい。 The term “alkyl” means methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl,
A branched or unbranched saturated hydrocarbon group composed of 1 to 24 carbon atoms such as isobutyl, t-butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, decyl, tetradecyl, hexadecyl, eicosyl, tetracosyl and the like. A “lower alkyl” group is a saturated branched or unbranched hydrocarbon having 1 to 10 carbon atoms. Suitable alkyl groups have 1 to 4 carbon atoms. An alkyl group may be a “substituted alkyl” in which one or more hydrogen atoms are replaced by a substituent such as halogen, cycloalkyl, alkoxyl, amino, hydroxy, aryl or carboxyl.

「アルケニル」という用語は、2〜24個の炭素原子で、少なくとも一つの炭素-炭素二重
結合を含む構造式の炭化水素基を指す。 The term “alkenyl” refers to a hydrocarbon group of a structural formula containing from 2 to 24 carbon atoms and containing at least one carbon-carbon double bond.

「アルキニル」という用語は、2〜24個の炭素原子で、少なくとも一つの炭素-炭素三重
結合を含む構造式の炭化水素基を指す。 The term “alkynyl” refers to a hydrocarbon group of a structural formula containing from 2 to 24 carbon atoms and containing at least one carbon-carbon triple bond.

「ハロゲン化アルキル」または「ハロアルキル基」という用語は、存在する一つ以上の
水素原子をハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）で置換した上述したようなアルキル
基を指す。 The term “halogenated alkyl” or “haloalkyl group” refers to an alkyl group as described above in which one or more of the hydrogen atoms present is replaced with a halogen (fluorine, chlorine, bromine, iodine).

「シクロアルキル」という用語は、少なくとも3個の炭素原子からなる非芳香族の炭素
系の環を指す。シクロアルキル基の例は、限定しないが、シクロプロピル、シクロブチル
、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含む。「ヘテロシクロアルキル基」という用語
は、環の少なくとも一つの炭素原子が、限定しないが、窒素、酸素、硫黄またはリンなど
のヘテロ原子で置換された上述したようなシクロアルキル基である。 The term “cycloalkyl” refers to a non-aromatic carbon-based ring of at least 3 carbon atoms. Examples of cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, and the like. The term “heterocycloalkyl group” is a cycloalkyl group as described above in which at least one carbon atom of the ring is substituted with a heteroatom such as, but not limited to, nitrogen, oxygen, sulfur or phosphorus.

「脂肪族」という用語は、上述したようなアルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲ
ン化アルキルおよびシクロアルキル基を含むものとして定義される。「低級の脂肪族」基
は、１〜10個の炭素原子を有する分岐または非分岐の脂肪族基である。 The term “aliphatic” is defined to include alkyl, alkenyl, alkynyl, alkyl halide and cycloalkyl groups as described above. A “lower aliphatic” group is a branched or unbranched aliphatic group having 1 to 10 carbon atoms.

「アルコキシ」という用語は、付着点に酸素原子を含む１〜20個の炭素原子、好適には
1〜8個の炭素原子、より好適には1〜4個の炭素原子を有する直鎖、分岐鎖、または環状の
炭化水素構造およびその組合せを指す。「アルコキシ基」の例は、式-ORにより表され、
ここでRはアルキル基であり、上述したようなアルケニル、アルキニル、アリール、アラ
ルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキルまたはヘテロシクロアルキル基で任意選択
的に置換されてよい。適当なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、i-プ
ロポキシ、n-ブトキシ、i-ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、シクロプロポキシ
、シクロヘキシロキシなどを含む。 The term “alkoxy” refers to 1-20 carbon atoms containing an oxygen atom at the point of attachment, preferably
Refers to linear, branched, or cyclic hydrocarbon structures and combinations thereof having 1 to 8 carbon atoms, more preferably 1 to 4 carbon atoms. An example of an “alkoxy group” is represented by the formula —OR,
Where R is an alkyl group and may be optionally substituted with an alkenyl, alkynyl, aryl, aralkyl, cycloalkyl, alkyl halide or heterocycloalkyl group as described above. Suitable alkoxy groups include methoxy, ethoxy, n-propoxy, i-propoxy, n-butoxy, i-butoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, cyclopropoxy, cyclohexyloxy and the like.

「アルコキシカルボニル」は、アルコキシ置換カルボニルラジカル、-C(O)ORを指し、
ここでRは任意選択的に置換されたアルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、
シクロアルキルアルキルまたは類似部分をいう。 `` Alkoxycarbonyl '' refers to an alkoxy substituted carbonyl radical, -C (O) OR,
Where R is an optionally substituted alkyl, aryl, aralkyl, cycloalkyl,
Refers to cycloalkylalkyl or similar moieties.

「アルキルアミノ」という用語は、少なくとも一つの水素原子をアミノ基で置き換えた
上述したようなアルキル基を指す。 The term “alkylamino” refers to an alkyl group as described above in which at least one hydrogen atom has been replaced with an amino group.

「アミノカルボニル」は、単独または組み合わせで、アミノ置換カルボニル（カルバモイル）ラジカルを意味し、ここでアミノラジカルは任意に選択的にアルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルカノイル、アルコキシカルボニル、アラルコキシカルボニルなどのモノ-またはジ-置換体であり得る。アミノカルボニル基は、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ（ここで、Ｒは置換された基またはＨ）または−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ）とすることができる。「アミノカルボニル」はアミド基を含む。適当な−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ）はアセトアミドである。 “Aminocarbonyl”, alone or in combination, signifies an amino-substituted carbonyl (carbamoyl) radical, where the amino radical is optionally optionally alkyl, aryl, aralkyl, cycloalkyl, cycloalkylalkyl, alkanoyl, alkoxycarbonyl, It can be mono- or di-substituted, such as aralkoxycarbonyl. The aminocarbonyl group can be -N (R) -C (O) -R (where R is a substituted group or H) or -C (O) -N (R). “Aminocarbonyl” includes amide groups. A suitable —C (O) —N (R) is acetamide.

「アリール」という用語は、限定しないが、ベンゼン、ナフタレンなどを含むあらゆる
炭素系芳香族基を指す。「芳香族」という用語は、芳香族基の環内に導入された少なくと
も一つのヘテロ原子を有する芳香族基として定義される「ヘテロアリール基」も含む。ヘ
テロ原子の例は、限定しないが、窒素、酸素、硫黄およびリンを含む。アリール基は、限
定しないが、アルキル、アルキニル、アルケニル、アリール、ハライド、ニトロ、アミノ
、エステル、ケトン、アルデヒド、ヒドロキシ、カルボン酸またはアルコキシを含む一つ
以上の基で置換することができるか、またはアリール基は非置換とすることができる。 The term “aryl” refers to any carbon-based aromatic group including, but not limited to, benzene, naphthalene, and the like. The term “aromatic” also includes “heteroaryl groups” which are defined as aromatic groups having at least one heteroatom introduced into the ring of the aromatic group. Examples of heteroatoms include, but are not limited to nitrogen, oxygen, sulfur and phosphorus. The aryl group can be substituted with one or more groups including, but not limited to, alkyl, alkynyl, alkenyl, aryl, halide, nitro, amino, ester, ketone, aldehyde, hydroxy, carboxylic acid or alkoxy, or Aryl groups can be unsubstituted.

「カルボニル」は、式-C(O)-のラジカルを指す。カルボニル含有基は、アシル基、アミ
ド、カルボキシ基、エステル、尿素、カルバミン酸塩、炭酸塩およびケトンならびにアル
デヒドを含む炭素-酸素二重結合（C=O）を含有するあらゆる置換基、例えば-CORまたは-R
CHOをベースとした置換基を含み、ここでRが脂肪族、ヘテロ脂肪族、アルキル、ヘテロア
ルキル、ヒドロキシル、または二級、三級もしくは四級アミンである。 “Carbonyl” refers to a radical of the formula —C (O) —. A carbonyl-containing group can be any substituent containing a carbon-oxygen double bond (C = O), including acyl groups, amides, carboxy groups, esters, ureas, carbamates, carbonates and ketones and aldehydes, such as Or -R
Contains a CHO-based substituent, where R is aliphatic, heteroaliphatic, alkyl, heteroalkyl, hydroxyl, or a secondary, tertiary or quaternary amine.

「カルボキシル」は、COOHラジカルを指す。置換カルボキシルは、COORを指し、ここで
Rが脂肪族、ヘテロ脂肪族、アルキル、ヘテロアルキルまたはカルボン酸もしくはエステ
ルである。 “Carboxyl” refers to the COOH radical. Substituted carboxyl refers to COOR where
R is aliphatic, heteroaliphatic, alkyl, heteroalkyl or carboxylic acid or ester.

「ヒドロキシル」という用語は、式-OHにより表される。   The term “hydroxyl” is represented by the formula —OH.

「ヒドロキシアルキル」という用語は、ヒドロキシル基で置換した少なくとも一つの水
素原子を有するアルキル基を指す。「アルコキシアルキル基」という用語は、上記アルコ
キシ基で置換した少なくとも一つの水素原子を有するアルキル基として定義される。 The term “hydroxyalkyl” refers to an alkyl group having at least one hydrogen atom substituted with a hydroxyl group. The term “alkoxyalkyl group” is defined as an alkyl group having at least one hydrogen atom substituted with the above alkoxy group.

「アミン」または「アミノ」という用語は、式-NRR'の基を指し、ここでRおよびR'は独
立して上述した水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、シク
ロアルキル、ハロゲン化アルキルまたはヘテロシクロアルキル基とし得る。 The term “amine” or “amino” refers to a group of formula —NRR ′ where R and R ′ are independently hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, aralkyl, cycloalkyl, halogenated alkyl as described above. Or it can be a heterocycloalkyl group.

「アミド（amide）」または「アミド（amido）」という用語は、式-C(O)NRR’により表
され、ここでRおよびR'は独立して上述の水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ア
リール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキルまたはヘテロシクロアルキル
基とし得る。適当なアミド基はアセトアミドである。 The term “amide” or “amido” is represented by the formula —C (O) NRR ′, where R and R ′ are independently hydrogen, alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl as described above. An aralkyl, cycloalkyl, halogenated alkyl or heterocycloalkyl group. A suitable amide group is acetamide.

「アラルキル」という用語は、上述したようなアルキル基を上述のアリール基に付着し
て有するアリール基を指す。アラルキル基の例はベンジル基である。 The term “aralkyl” refers to an aryl group having an alkyl group as described above attached to the aryl group described above. An example of an aralkyl group is a benzyl group.

「任意選択的に置換したアルキル」のような任意選択的に置換した基は、置換される際
にアルコキシ、任意選択的に置換したアルコキシ、アシル、アシルアミノ、アシロキシ、
アミノ、アミノアシル、アミノアシロキシ、アリール、カルボキシアルキル、任意選択的
に置換したシクロアルキル、任意選択的に置換したシクロアルケニル、ハロゲン、任意選
択的に置換したヘテロアリール、任意選択的に置換したヘテロシクリル、ヒドロキシ、ス
ルホニル、チオールおよびチオアルコキシから選択した1〜5の置換基、通常1、2または3
個の置換基を有するアルキル基などの基を指す。特に、任意選択的に置換したアルキル基
は、例として、限定しないが、トリフルオロメチル基を含むフルオロアルキル基のような
ハロアルキル基が挙げられる。 Optionally substituted groups such as “optionally substituted alkyl” are alkoxy, optionally substituted alkoxy, acyl, acylamino, acyloxy, when substituted,
Amino, aminoacyl, aminoacyloxy, aryl, carboxyalkyl, optionally substituted cycloalkyl, optionally substituted cycloalkenyl, halogen, optionally substituted heteroaryl, optionally substituted heterocyclyl, 1 to 5 substituents selected from hydroxy, sulfonyl, thiol and thioalkoxy, usually 1, 2 or 3
It refers to a group such as an alkyl group having one substituent. In particular, optionally substituted alkyl groups include, by way of example and not limitation, haloalkyl groups such as fluoroalkyl groups including trifluoromethyl groups.

「治療学的に有効な量」または「診断学的に効果的な量」は、特定の薬剤で治療する被
検体に所望の効果を達成するに十分な該薬剤の量を指す。例えば、被検体の甲状腺ガンを
検出または治療するのに有用な本明細書に開示する化合物の量とし得る。理想的には、薬
剤の治療学的に有効な量または診断学的に有効な量は、被検体に重篤な細胞毒性作用を生
じさせることなく、疾患を阻害するかまたは治療するのに十分な量である。薬剤の治療学
的に有効な量または診断学的に有効な量は、治療される被検体、疾患の重症度、および治
療学的組成物の投与方法に依存する。 “Therapeutically effective amount” or “diagnosically effective amount” refers to an amount of an agent sufficient to achieve a desired effect in a subject treated with the particular agent. For example, it can be an amount of a compound disclosed herein useful for detecting or treating thyroid cancer in a subject. Ideally, a therapeutically effective amount or diagnostically effective amount of a drug is sufficient to inhibit or treat a disease without causing serious cytotoxic effects on the subject. It is an amount. The therapeutically or diagnostically effective amount of the agent depends on the subject being treated, the severity of the disease, and the method of administration of the therapeutic composition.

本発明化合物のプロドラッグも本明細書中で検討する。プロドラッグは、被検体にプロ
ドラッグの投与後加水分解、代謝などのような生体内の生理学的な作用により活性化合物
に化学的に変性される活性または不活性の化合物である。プロドラッグの調製および使用
に関する適合性および技術は、当業者に周知である。エステルを含むプロドラッグの一般
的な議論については、Svensson and Tunek Drug Metabolism Reviews 165 (1988) and Bu
ndgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985)を参照のこと。 Prodrugs of the compounds of the present invention are also contemplated herein. A prodrug is an active or inactive compound that is chemically modified into an active compound by physiological actions in vivo such as hydrolysis, metabolism, etc. after administration of the prodrug to a subject. The suitability and techniques for preparing and using prodrugs are well known to those skilled in the art. For a general discussion of prodrugs containing esters, see Svensson and Tunek Drug Metabolism Reviews 165 (1988) and Bu
See ndgaard Design of Prodrugs, Elsevier (1985).

製薬学的に許容し得るプロドラッグは、被検体内で代謝、例えば加水分解または酸化さ
れて本開示の抗ウイルス性化合物を形成する化合物を指す。プロドラッグの代表的な例は
、活性化合物の官能部分に対し一つ以上の生物学的に不安定な保護基を有するか、さもな
ければ該部分を遮蔽する化合物を含む。プロドラッグは、酸化、還元、アミノ化、脱アミ
ノ化、ヒドロキシル化、脱ヒドロキシル化、加水分解、脱加水分解、アルキル化、脱アル
キル化、アシル化、脱アシル化、リン酸化、脱リン酸化されて活性化合物を産生し得る化
合物を含む。一般に、本明細書に開示するプロドラッグ化合物は、ホルモン受容体を調節
する活性を有し、および／または生体内で代謝されるかさもなければ処理されて、かかる
活性を示す化合物を形成する。 A pharmaceutically acceptable prodrug refers to a compound that is metabolized, eg, hydrolyzed or oxidized, in a subject to form an antiviral compound of the present disclosure. Representative examples of prodrugs include compounds that have one or more biologically labile protecting groups to or otherwise mask the functional moiety of the active compound. Prodrugs are oxidized, reduced, aminated, deaminated, hydroxylated, dehydroxylated, hydrolyzed, dehydrolyzed, alkylated, dealkylated, acylated, deacylated, phosphorylated, dephosphorylated A compound capable of producing an active compound. In general, the prodrug compounds disclosed herein have activity to modulate hormone receptors and / or are otherwise metabolized in vivo to form compounds that exhibit such activity.

「プロドラッグ」という用語はまた、プロドラッグを被検体に投与すると、本発明の活
性な親薬物を生体内で放出する任意の共有結合的に結合された担体を含むことを意図して
いる。プロドラッグは活性薬剤に対し溶解性および生体利用効率のような治療特性をしば
しば高めるため、本明細書に開示した化合物をプロドラッグの形状で送達することができ
る。従って、本明細書に開示した化合物のプロドラッグ、プロドラッグの送達方法および
かかるプロドラッグを含有する組成物も検討する。本開示化合物のプロドラッグは、通常
修飾を日常的な取り扱いまたは生体内で開裂して親化合物を得らような方法で化合物中に
存在する一つ以上の官能基を修飾することによって調製される。プロドラッグは、生体内
で開裂されて、それぞれ対応するホスホネート基および／またはアミノ基を得るような任
意の基で官能化されたホスホネート基および／またはアミノ基を有する化合物を含む。プ
ロドラッグの例としては、限定しないが、アシル化アミノ基および／またはホスホン酸エ
ステルもしくはホスホン酸アミド基を有する化合物が挙げられる。特定の実施例において
、プロドラッグは、低級アルキルホスホン酸エステル、例えばイソプロピルホスホン酸エ
ステルである。 The term “prodrug” is also intended to include any covalently bonded carrier that releases an active parent drug of the present invention in vivo when the prodrug is administered to a subject. Because prodrugs often enhance therapeutic properties such as solubility and bioavailability for the active agent, the compounds disclosed herein can be delivered in prodrug form. Accordingly, prodrugs of the compounds disclosed herein, methods of delivering the prodrug, and compositions containing such prodrugs are also contemplated. Prodrugs of the disclosed compounds are usually prepared by modifying one or more functional groups present in the compound in such a way that the modification is routinely handled or cleaved in vivo to yield the parent compound. . Prodrugs include compounds having phosphonate and / or amino groups functionalized with any groups that are cleaved in vivo to yield the corresponding phosphonate and / or amino groups, respectively. Examples of prodrugs include, but are not limited to, compounds having an acylated amino group and / or a phosphonic acid ester or phosphonic acid amide group. In certain embodiments, the prodrug is a lower alkyl phosphonate, such as isopropyl phosphonate.

本開示化合物の保護された誘導体も検討する。本開示化合物で用いるのに適した様々な
保護基は、Greene and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis; 3rd Ed.; John
Wiley & Sons, New York, 1999に開示される。 Also contemplated are protected derivatives of the disclosed compounds. Various protecting groups suitable for use with the disclosed compounds include Greene and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis; 3rd Ed .; John
Disclosed in Wiley & Sons, New York, 1999.

一般に、保護基を分子の残り部分に影響を与えない条件下で除去する。これらの方法は
、当業界で周知であり、酸加水分解、水素化分解などを含む。一つの好適な方法は、例え
ば遊離リン酸を得るためのTMS-Br媒介エステル分解におけるようなルイス酸条件を用いる
ホスホン酸エステルの開裂のようなエステルの除去を含む。第二の好適な方法は、例えば
アルコール、酢酸などまたはその混合物のような適当な溶媒系における炭素上のパラジウ
ムを用いた水素化分解によるベンジル基の除去のような保護基の除去を含む。t-ブトキシ
カルボニル保護基を含むt-ブトキシベースの基は、水、ジオキサンおよび／または塩化メ
チレンのような適当な溶媒系において塩酸またはトリフルオロ酢酸などの無機または有機
酸を用いて除去することができる。アミノおよびヒドロキシ官能アミノ（hydroxy functi
ons amino）を保護するのに適した別の典型的な保護基は、トリチルである。他の従来の
保護基は既知であり、Greene and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis; 3rd
Ed.; John Wiley & Sons, New York, 1999を参照して、当業者により適当な保護基を選択
し得る。アミンが脱保護されると、生成した塩を容易に中和して遊離のアミンを得ること
ができる。同様に、ホスホン酸部分のような酸部分が脱保護されると、化合物を酸化合物
またはその塩として単離し得る。 In general, protecting groups are removed under conditions that do not affect the remainder of the molecule. These methods are well known in the art and include acid hydrolysis, hydrogenolysis and the like. One suitable method involves removal of the ester, such as cleavage of the phosphonate using Lewis acid conditions, such as in TMS-Br mediated ester degradation to obtain free phosphoric acid. A second suitable method involves removal of the protecting group, such as removal of the benzyl group by hydrogenolysis with palladium on carbon in a suitable solvent system such as alcohol, acetic acid and the like or mixtures thereof. A t-butoxy-based group containing a t-butoxycarbonyl protecting group may be removed using an inorganic or organic acid such as hydrochloric acid or trifluoroacetic acid in a suitable solvent system such as water, dioxane and / or methylene chloride. it can. Amino and hydroxy functional amino (hydroxy functi
another exemplary protecting group suitable for protecting ons amino) is trityl. Other conventional protecting groups are known, Greene and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis; 3rd
Ed .; John Wiley & Sons, New York, 1999, one skilled in the art can select an appropriate protecting group. Once the amine is deprotected, the resulting salt can be easily neutralized to give the free amine. Similarly, if an acid moiety, such as a phosphonic acid moiety, is deprotected, the compound can be isolated as an acid compound or salt thereof.

本明細書に開示した化合物の特定の例は、一つ以上の不斉中心を含む；従ってこれら化
合物は異なる立体異性体の形態で存在し得る。従って、化合物および組成物を、個々の純
粋なエナンチオマーとして、またはラセミ体混合物を含む立体異性体の混合物として提供
することができる。特定の実施形態において、本明細書に開示した化合物は、例えば、鏡
像異性体過剰率90％、鏡像異性体過剰率95％、鏡像異性体過剰率97％のような実質的にエ
ナンチオピュアな形態、または鏡像異性体過剰率99％超のエナンチオピュアな形態で合成
されるかまたは精製される。 Particular examples of the compounds disclosed herein contain one or more asymmetric centers; therefore these compounds may exist in different stereoisomeric forms. Thus, compounds and compositions can be provided as individual pure enantiomers or as a mixture of stereoisomers including racemic mixtures. In certain embodiments, a compound disclosed herein is in a substantially enantiopure form such as, for example, 90% enantiomeric excess, 95% enantiomeric excess, 97% enantiomeric excess. Or synthesized or purified in enantiopure form with an enantiomeric excess of greater than 99%.

本明細書に記載する化合物の置換基および置換パターンは、化学的に安定であり、かつ
当業界で既知の術、および更に本明細書に記載した方法により容易に合成し得る化合物を
提供するように当業者により選択され得る。本発明に好適な化合物について以下に詳述す
る。 The substituents and substitution patterns of the compounds described herein are intended to provide compounds that are chemically stable and that can be readily synthesized by techniques known in the art and further by the methods described herein. Can be selected by those skilled in the art. The compounds suitable for the present invention are described in detail below.

（I．化合物）
本明細書に開示するのは、TSHRを活性化する低分子量(例えば、1000ダルトン未満)の化
合物である。これらの化合物は、経口投与し得る。データを以下に示し、ヒトTSHR発現株
細胞における化合物の効能を実証する。本明細書に開示した特定の化合物は、TSHRに対す
る選択的アゴニストである（すなわち、該化合物は他のホルモン受容体、特にLHCGRおよ
びFSHRを活性化または調節しない）。化合物はまた、TSHRに対する完全フルアゴニストで
もあり得る。 (I. Compound)
Disclosed herein are low molecular weight compounds (eg, less than 1000 daltons) that activate TSHR. These compounds can be administered orally. Data are presented below and demonstrate the efficacy of the compound in human TSHR expressing cell lines. Certain compounds disclosed herein are selective agonists for TSHR (ie, the compounds do not activate or modulate other hormone receptors, particularly LHCGR and FSHR). The compound can also be a full agonist for TSHR.

本明細書に開示したTSHRアゴニストは、TSHシグナリング経路を増強または活性化する
。TSHRアゴニストは、それ自身TSHR媒介シグナリングを刺激するか、または内在性TSHま
たは別の投与された（すなわち外来性の）TSHRアゴニストの生物学的活性を増強すること
によりTSHR媒介シグナリングを刺激し得る。理論に束縛されないが、特定の実施形態では
、本明細書に開示したTSHRアゴニストがTSHR（特にTSHRの膜貫通領域）を特異的に結合し
、その後チロトロフ若しくはTSHRを自然発現する他の細胞またはTSHRを発現するよう変性
された細胞においてTSHR媒介細胞内シグナリングを誘引する。「特異的な結合」およびそ
の同族の用語は、親和定数K_Aが100マイクロモーラー未満、特に100ナノモーラー、好まし
くは50ナノモーラー未満の相互作用を指す。 The TSHR agonists disclosed herein enhance or activate the TSH signaling pathway. A TSHR agonist may itself stimulate TSHR-mediated signaling or stimulate TSHR-mediated signaling by enhancing the biological activity of endogenous TSH or another administered (ie, exogenous) TSHR agonist. Without being bound by theory, in certain embodiments, the TSHR agonist disclosed herein specifically binds TSHR (especially the transmembrane region of TSHR) and then other cells or TSHR that naturally express Tyrotroph or TSHR. Induces TSHR-mediated intracellular signaling in cells that have been modified to express. The term “specific binding” and its cognate terms refer to interactions where the affinity constant K _A is less than 100 micromolar, in particular less than 100 nanomolar, preferably less than 50 nanomolar.

かかる化合物の例は、次式I：
で表わされるか、またはその薬学的に許容し得る塩であり、
式中のR¹-R⁴はそれぞれ独立してH、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシ、アミノカル
ボニルまたはハロゲンであり;
R⁵はH、アルキル、アリール、アラルキルまたはアミノカルボニルであり;
Aは-N=C(R¹⁵)-（左端の結合手が上記式Iのベンゼン環に結合し、右端の結合手が上記式
Iのヘテロ原子窒素に結合する）または-NH-CH(R¹⁵)-（左端の結合手が上記式Iのベンゼン
環に結合し、右端の結合手が上記式Iのヘテロ原子窒素に結合する）を表し;
R¹⁵は次式IIで表され：
式中のR⁶-R⁹はそれぞれ独立してH、ヒドロキシル、アルキルまたはアルコキシであり;
R¹⁰-R¹⁴はそれぞれ独立してH、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシまたはアミノカル
ボニルであり;
XはO、SまたはN(H)である。 Examples of such compounds are those of formula I
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
R ¹ -R ⁴ in the formula are each independently H, hydroxyl, alkyl, alkoxy, aminocarbonyl or halogen;
R ⁵ is H, alkyl, aryl, aralkyl or aminocarbonyl;
A is -N = C (R ¹⁵ )-(the leftmost bond is bonded to the benzene ring of the above formula I, and the rightmost bond is the above formula
To the heteroatom nitrogen of I) or —NH—CH (R ¹⁵ ) — (the leftmost bond is bonded to the benzene ring of formula I above, and the rightmost bond is bonded to the heteroatom nitrogen of formula I above) );
R ¹⁵ is represented by the following formula II:
R ⁶ -R ⁹ in the formula are each independently H, hydroxyl, alkyl or alkoxy;
Each of R ¹⁰ -R ¹⁴ is independently H, hydroxyl, alkyl, alkoxy or aminocarbonyl;
X is O, S or N (H).

特定の実施形態では、次式
の構造を有する化合物が式Ｉに含まれない。 In certain embodiments, the following formula:
Compounds having the structure: are not included in Formula I.

特定の実施形態では、R¹-R⁴がそれぞれ独立してH、ヒドロキシルまたはアセトアミドで
ある。好適な実施例によれば、R¹-R⁴のそれぞれはHであるか;R¹-R⁴のうちの一つがアセト
アミド（好適にはR³）で、かつR¹-R⁴の残りがそれぞれＨであるか;またはR¹-R⁴のうちの
一つがヒドロキシル（好適にはR⁴）で、かつR¹-R⁴の残りがHである。 In certain embodiments, R ¹ -R ⁴ are each independently H, hydroxyl or acetamide. According to a preferred embodiment, each of R ¹ -R ⁴ is H; ^{one of} R ¹ -R ⁴ is acetamide (preferably R ³ ) and the rest of R ¹ -R ⁴ is Each H; or ^{one of} R ¹ -R ⁴ is hydroxyl (preferably R ⁴ ) and the remainder of R ¹ -R ⁴ is H.

特定の実施形態では、R⁵が-C₁-C₄アルキル-Ar（ここでArは六員環または五員環である
）のようなアラルキルである。好適な実施例によれば、R⁵が-CH₂-Ph（ここでPhはフェニ
ルまたは置換フェニル基である）；または-CH₂-ヘテロAr（ここでヘテロArが、O、Nまた
はSのような少なくとも一つのヘテロ原子を含むアリール環（例えばフリル基）である）
である。 In certain embodiments, R ⁵ is aralkyl, such as —C ₁ -C ₄ alkyl-Ar, where Ar is a 6-membered or 5-membered ring. According to a preferred embodiment, R ⁵ is —CH ₂ —Ph (where Ph is a phenyl or substituted phenyl group); or —CH ₂ -heteroAr (where hetero Ar is O, N or S) Aryl rings containing at least one heteroatom such as a furyl group)
It is.

特定の実施形態では、Aが-N=C(R¹⁵)-（左端の結合手が上記式Iのベンゼン環に結合し、
右端の結合手が上記式Iのヘテロ原子窒素に結合する）を表し、次式IVの構造：
（式IVに示されないが、R¹-R⁴も式Iに示されるように存在する）をもたらす。 In certain embodiments, A is —N═C (R ¹⁵ ) — (the leftmost bond is attached to the benzene ring of formula I above,
The rightmost bond is bound to the heteroatom nitrogen of formula I above) and has the structure of formula IV:
(Not shown in formula IV, but R ¹ -R ⁴ are also present as shown in formula I).

他の実施態様では、Aが-NH-CH(R¹⁵)-（左端の結合手が上記式Iのベンゼン環に結合し、
右端の結合手が上記式Iのヘテロ原子窒素に結合する）を表し、次式Vの構造：
（式Vに示されないが、R¹-R⁴も式Iに示されるように存在する）をもたらす。 In another embodiment, A is —NH—CH (R ¹⁵ ) — (the leftmost bond is attached to the benzene ring of formula I above,
The rightmost bond is bound to the heteroatom nitrogen of formula I above) and has the structure of formula V:
(Not shown in Formula V, but R ¹ -R ⁴ are also present as shown in Formula I).

特定の実施形態では、R⁶-R⁸はそれぞれHであり、R⁹はアルコキシ（特にメトキシ）であ
る。 In certain embodiments, R ⁶ -R ⁸ are each H and R ⁹ is alkoxy (particularly methoxy).

特定の実施形態では、R¹⁰、R¹¹、R¹³およびR¹⁴はそれぞれHであり、R¹²はアセトアミド
である。好適には、R¹⁵は次式III；
で表され、式中のXはOまたはS、好適にはOである。 In certain embodiments, R ¹⁰ , R ¹¹ , R ¹³ and R ¹⁴ are each H and R ¹² is acetamide. Suitably R ¹⁵ is of the formula III;
X in the formula is O or S, preferably O.

化合物の実例を挙げると、
を含む。 Examples of compounds
including.

他の実施形態によれば、付加的なTSHRアゴニストの例は次式VIにより表される：
式中のR²⁰はアリールまたはヘテロアリールであり;R²¹はアリールまたはヘテロアリール
であり;R²²は式IIのR¹⁵、ヘテロアリールまたはアリールである。好適な実施形態によれ
ば、R²¹はベンジルであり、またR²²は式IIのR¹⁵（特に化学式III）である。 According to other embodiments, examples of additional TSHR agonists are represented by the following formula VI:
R ²⁰ in the formula is aryl or heteroaryl; R ²¹ is aryl or heteroaryl; R ²² is R ¹⁵ in formula II, heteroaryl or aryl. According to a preferred embodiment, R ²¹ is benzyl and R ²² is R ¹⁵ of formula II (particularly formula III).

（II．一般的合成）
本明細書に開示した化合物は、通常下記のように合成することができる。スキーム1を
参照するに、2-アミノベンズアミド(1)を種々のアミンでの2-アミノ安息香酸のアミドカ
ップリング（ステップi）またはアミンとイサト酸無水物との反応（ステップii）のいず
れかにより調製した。
スキーム2を参照するに、マイクロ波照射下で種々のフェノールまたはチオフェノールと
ベンジルクロライド2との反応（ステップｉ）によりアルデヒド3を生成する。アルデヒド
3の2-アミノベンズアミド1との縮合により2, 3-ジヒドロキナゾリン-4-オン4を得る。2,
3-ジヒドロキナゾリン-4-オン4をDDQにより室温で急速に酸化して、キナゾリン-4-オン5
を生成する。
(II. General synthesis)
The compounds disclosed in this specification can be usually synthesized as follows. Referring to Scheme 1, either 2-aminobenzamide (1) is amide coupled with 2-aminobenzoic acid with various amines (step i) or the reaction of amine with isatoic anhydride (step ii). It was prepared by.
Referring to Scheme 2, aldehyde 3 is formed by reaction of various phenols or thiophenols with benzyl chloride 2 (step i) under microwave irradiation. aldehyde
Condensation of 3 with 2-aminobenzamide 1 gives 2,3-dihydroquinazolin-4-one 4. 2,
3-Dihydroquinazolin-4-one 4 is rapidly oxidized with DDQ at room temperature to give quinazolin-4-one 5
Is generated.

（III．開示化合物の組成物、投与および使用）
本明細書に開示した化合物は、甲状腺ガンスクリーニング、甲状腺ガンの治療、結節性
甲状腺腫の治療、PETスキャニングおよび化学療法治療を増強するためのＴＳＨ刺激、先
天性甲状腺機能低下症の鑑別診断、骨粗しょう症の治療（例えば、骨量減少の抑制）およ
び過体重または肥満の治療（例えば、脂肪組織の代謝率の増加）に有用である。本明細書
に開示した化合物の実例的使用は以下の通りである：
サイログロブリン（Tg）のアゴニスト試験を甲状腺抑制治療中の未検出Tgを有する患者
に用いて残存または再発甲状腺ガンの診断を排除することができる;
アゴニスト治療を放射性ヨウ素（131I）と組み合わせて用い、転移性疾患の所見がない
患者の甲状腺全摘術に続いて甲状腺残部を切除することができる;
アゴニスト試験を、甲状腺ホルモン禁断試験を受ける意志がなく、かつ治療医がより低
感度なテストの使用が理に叶うと考えている患者であって、血清Tgテストおよび放射性ヨ
ウ素イメージングを必要とする患者に用いることができる;または
アゴニスト治療および試験を、甲状腺ホルモン禁断に対して適切な内在性TSH反応を示
すことができないか、または禁断を医学的に禁忌とされる患者に用いることができる。 (III. Composition, administration and use of disclosed compounds)
The compounds disclosed herein include thyroid cancer screening, thyroid cancer treatment, nodular goiter treatment, TSH stimulation to enhance PET scanning and chemotherapy treatment, differential diagnosis of congenital hypothyroidism, bone Useful for the treatment of osteoporosis (eg, suppression of bone loss) and the treatment of overweight or obesity (eg, increased metabolic rate of adipose tissue). Illustrative uses of the compounds disclosed herein are as follows:
Thyroglobulin (Tg) agonist testing can be used in patients with undetected Tg during thyroid suppression treatment to eliminate the diagnosis of residual or recurrent thyroid cancer;
Agonist therapy can be used in combination with radioactive iodine (131I) to remove the remainder of the thyroid gland following a total thyroidectomy in patients without evidence of metastatic disease;
Patients who are not willing to undergo an agonist test for thyroid hormone withdrawal and who are willing to use a less sensitive test by the treating physician and who require serum Tg testing and radioiodine imaging Or agonist treatment and testing can be used for patients who are unable to show an adequate endogenous TSH response to thyroid hormone withdrawal or whose withdrawal is medically contraindicated.

一つの実施形態よれば、本明細書に開示した化合物（化合物1を含む）は、甲状腺ガン
スクリーニングに有用である。放射性ヨウ素を、甲状腺ガン細胞の検出に用い、また試験
感度を増大させるために放射性ヨウ素の摂取が強化されなければならない。本明細書に開
示したTSHRアゴニストの投与は、甲状腺細胞のヨウ素摂取を増大させることができる。例
えば、本明細書に開示したTSHRアゴニストは、高分化型の甲状腺ガンの患者の手術（例え
ば、甲状腺摘出術）後に、残存または再発甲状腺ガンの臨床学的にスクリーニングするた
めに組み換えヒトTSH（rhTSH、Thyrogen（商標）、Genzyme社）を置き換えることができ
た。また、本明細書に開示したTSHRアゴニストを、血清サイログロブリン（TG）試験用の
補助診断薬として用いることができる。 According to one embodiment, the compounds disclosed herein (including Compound 1) are useful for thyroid cancer screening. Radioiodine is used for detection of thyroid cancer cells and the intake of radioactive iodine must be enhanced to increase test sensitivity. Administration of a TSHR agonist disclosed herein can increase iodine uptake of thyroid cells. For example, the TSHR agonists disclosed herein may be recombinant human TSH (rhTSH) for clinical screening of residual or recurrent thyroid cancer after surgery (eg, thyroidectomy) in patients with well-differentiated thyroid cancer. , Thyrogen ™, Genzyme). In addition, the TSHR agonist disclosed herein can be used as an auxiliary diagnostic agent for serum thyroglobulin (TG) testing.

また、治療学的に有効な量の本明細書に開示したTSHRアゴニスト化合物の少なくとも一
つを投与することを含む骨変性障害の治療または予防方法を開示する。治療または予防さ
れる障害は、例えば、骨減少症、骨軟化症、骨粗鬆症、オステオミエローマ、骨形成異常
、パジェット病、骨形成不全症、骨硬化症、再生不良性骨疾患、体液性高カルシウム血症
骨髄腫、多発性骨髄腫および転移後の骨薄化を含む。治療または予防される障害は、高カ
ルシウム血症に伴う骨変性障害、慢性腎疾患（末期腎疾患を含む）、腎臓透析、続発性副
甲状腺機能亢進症およびコルチコステロイドの長期使用を更に含む。 Also disclosed is a method of treating or preventing a bone degenerative disorder comprising administering a therapeutically effective amount of at least one of the TSHR agonist compounds disclosed herein. Disorders to be treated or prevented include, for example, osteopenia, osteomalacia, osteoporosis, osteomyeloma, dysplasia, Paget's disease, osteogenesis imperfecta, osteosclerosis, aplastic bone disease, humoral hypercalcemia Symptomatic myeloma, multiple myeloma and bone thinning after metastasis. Disorders to be treated or prevented further include bone degenerative disorders associated with hypercalcemia, chronic kidney disease (including end stage renal disease), renal dialysis, secondary hyperparathyroidism and long-term use of corticosteroids.

本明細書に開示した化合物を製薬学的組成物（製薬学的組成物は、治療、診断および予
防製剤を含む）に含めることができ、通常一つ以上の薬学的に許容し得る賦形剤または担
体、および任意選択的に他の治療用または診断用の成分（例えば、放射性ヨウ素）と共に
配合される。かかる製薬学的組成物を被検体に経口、腸内、経鼻、肺内または経皮送達を
含む種々の粘膜投与モードによるか、または他の表面への局所的な送達により投与するこ
とができる。任意選択的には、組成物を筋肉内、皮下、静脈内、動脈内、関節内、腹膜内
、髄膜下、脳室内または非経口ルートを含む非粘膜ルートにより投与することができる。
他の別の実施形態では、化合物を被検体由来の細胞、組織または器官への直接露出により
生体外で投与することができる。 The compounds disclosed herein can be included in pharmaceutical compositions (pharmaceutical compositions, including therapeutic, diagnostic and prophylactic formulations), and usually one or more pharmaceutically acceptable excipients Or formulated with a carrier, and optionally other therapeutic or diagnostic components (eg, radioactive iodine). Such pharmaceutical compositions can be administered to a subject by various mucosal modes of administration including oral, enteral, nasal, pulmonary or transdermal delivery, or by local delivery to other surfaces. . Optionally, the composition can be administered by intramuscular, subcutaneous, intravenous, intraarterial, intraarticular, intraperitoneal, submeningeal, intraventricular or non-mucosal routes including parenteral routes.
In another alternative embodiment, the compound can be administered in vitro by direct exposure to cells, tissues or organs from the subject.

製薬学的組成物を処方するために、化合物を様々な製薬学的に許容し得る添加剤並びに
化合物の分散用基剤または賦形剤と配合し得る。所望の添加剤は、限定しないが、アルギ
ニン、水酸化ナトリウム、グリシン、塩酸、クエン酸などのようなpH調整剤を含む。加え
て、局所麻酔薬（例えばベンジルアルコール）、等張化剤（例えば塩化ナトリウム、マン
ニトール、ソルビトール）、吸着抑制剤（例えばTween 80）、可溶化促進剤（例えばシク
ロデクストリンおよびその誘導体）、安定化剤（例えば血清アルブミン）および還元剤（
例えば、グルタチオン）を含むことができる。当業界で周知の他の多くのアジュバンドの
うち、水酸化アルミニウム（例えば、Amphogel, Wyeth Laboratories, Madison, NJ）、
フロイントアジュバントMPL（3-O-脱アシル化モノホスホリル脂質A; Corixa、Hamilton、
IN）およびIL-12（Genetics Institute, Cambridge, MA）のようなアジュバントを組成物
に含めることができる。組成物が液体であるときは、単一物としての0.9%（w/v）生理食
塩溶液の浸透圧に準拠して測定した製剤の浸透圧を、実質的な不可逆性の組織損傷が投与
部位で何ら誘導されることのないレベルまで通常調節する。一般に、溶液の浸透圧を、約
0.3から約3.0、例えば、約0.5から約2.0、または約0.8から約1.7の値に調節する。 In order to formulate a pharmaceutical composition, the compound may be formulated with various pharmaceutically acceptable additives as well as dispersing bases or excipients for the compound. Desirable additives include, but are not limited to, pH adjusting agents such as arginine, sodium hydroxide, glycine, hydrochloric acid, citric acid and the like. In addition, local anesthetics (eg benzyl alcohol), isotonic agents (eg sodium chloride, mannitol, sorbitol), adsorption inhibitors (eg Tween 80), solubilization promoters (eg cyclodextrin and its derivatives), stable Agent (eg serum albumin) and reducing agent (
For example, glutathione) can be included. Among many other adjuvants known in the art, aluminum hydroxide (eg, Amphogel, Wyeth Laboratories, Madison, NJ),
Freund's adjuvant MPL (3-O-deacylated monophosphoryl lipid A; Corixa, Hamilton,
IN) and IL-12 (Genetics Institute, Cambridge, MA) can include adjuvants in the composition. When the composition is liquid, the osmotic pressure of the preparation measured according to the osmotic pressure of 0.9% (w / v) physiological saline solution as a single substance, the site of administration with substantial irreversible tissue damage. Usually adjust to a level that will not induce anything. In general, the osmotic pressure of the solution is about
Adjust to a value of 0.3 to about 3.0, such as about 0.5 to about 2.0, or about 0.8 to about 1.7.

化合物を分散させる能力を有する親水性化合物および任意所望の添加剤を含むことがで
きる基剤または賦形剤に化合物を分散させることができる。基剤は、限定しないが、ポリ
カルボン酸またはその塩、カルボン酸無水物（例えば無水マレイン酸）と他のモノマー（
例えばメチル（メタ）アクリレート、アクリル酸など）とのコポリマー；、ポリビニルア
セテート、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンのような親水性ビニルポリマー
；ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどのようなセルロース
誘導体；およびキトサン、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒアルロン酸
およびその無毒性の金属塩類などのような天然ポリマーを含む広範囲に渡る適当な化合物
から選択することができる。生分解性ポリマー、例えばポリ乳酸、ポリ（乳酸グリコール
酸）コポリマー、ポリヒドロキシ酪酸、ポリ（ヒドロキシ酪酸-グリコール酸）コポリマ
ーおよびその混合物が基剤または賦形剤としてしばしば選択される。あるいはまた、若し
くは加えて、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルなどのような合成脂
肪酸エステルを賦形剤として用いることができる。親水性ポリマーおよび他の賦形剤を単
独または組み合わせて用いることができ、増強した構造的完全性を部分結晶化、イオン結
合、架橋などにより賦形剤に付与することができる。賦形剤を、流体または粘性溶液、ゲ
ル、ペースト、粉体、微小球体および粘膜面への直接投与用のフィルムを含む様々な形態
で提供することができる。 The compound can be dispersed in a base or excipient that can include a hydrophilic compound having the ability to disperse the compound and any desired additives. Bases include, but are not limited to, polycarboxylic acids or salts thereof, carboxylic anhydrides (eg maleic anhydride) and other monomers (
Copolymers with methyl (meth) acrylate, acrylic acid, etc.); hydrophilic vinyl polymers such as polyvinyl acetate, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone; cellulose derivatives such as hydroxymethylcellulose, hydroxypropylcellulose; and chitosan, collagen, It can be selected from a wide range of suitable compounds including natural polymers such as sodium alginate, gelatin, hyaluronic acid and its non-toxic metal salts. Biodegradable polymers such as polylactic acid, poly (lactic acid glycolic acid) copolymers, polyhydroxybutyric acid, poly (hydroxybutyric acid-glycolic acid) copolymers and mixtures thereof are often selected as bases or excipients. Alternatively, or in addition, synthetic fatty acid esters such as polyglycerin fatty acid esters and sucrose fatty acid esters can be used as excipients. Hydrophilic polymers and other excipients can be used alone or in combination, and enhanced structural integrity can be imparted to the excipients by partial crystallization, ionic bonding, crosslinking, and the like. Excipients can be provided in a variety of forms including fluid or viscous solutions, gels, pastes, powders, microspheres and films for direct administration to the mucosal surface.

化合物を様々な方法に従って基剤または賦形剤と組み合わせることができ、また化合物
の放出を拡散、賦形剤の崩壊または関連した水チャネルの形成によるものとすることがで
きる。状況次第では、化合物を、適当なポリマー、例えばイソブチル-2-シアノアクリレ
ート（Michael et al., J. Pharmacy Pharmacol. 43:1-5, 1991参照）から調製したマイ
クロカプセル（微小球体）またはナノカプセル（ナノ粒子）中に分散し、長期間に渡って
持続的な送達および生物学的活性を付与する生体適合性分散媒体中に分散される。 The compound can be combined with a base or excipient according to various methods, and the release of the compound can be due to diffusion, dissolution of the excipient or formation of an associated water channel. Depending on the circumstances, the compounds may be prepared from suitable polymers, such as isobutyl-2-cyanoacrylate (see Michael et al., J. Pharmacy Pharmacol. 43: 1-5, 1991) microcapsules (microspheres) or nanocapsules. Dispersed in (nanoparticles) and dispersed in a biocompatible dispersion medium that provides sustained delivery and biological activity over an extended period of time.

あるいはまた、本開示の組成物が、生理的条件と同程度とするのに必要な製薬学的に許
容し得る賦形物質として、pH調製および緩衝剤、浸透圧調整剤、湿潤剤など、例えば、酢
酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソル
ビタンモノラウレートおよびトリエタノールアミンオレエートを含有し得る。固形組成物
については、従来の無毒性の製薬学的に許容し得る賦形剤を用いることができ、例えば医
薬品グレードのマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリ
ンナトリウム、滑石、セルロース、グルコース、ショ糖、炭酸マグネシウムなどを含む。 Alternatively, the pharmaceutically acceptable excipients necessary for the composition of the present disclosure to be comparable to physiological conditions include pH adjustments and buffers, osmotic pressure adjusting agents, wetting agents, etc. Sodium acetate, sodium lactate, sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride, sorbitan monolaurate and triethanolamine oleate. For solid compositions, conventional non-toxic pharmaceutically acceptable excipients can be used, such as pharmaceutical grade mannitol, lactose, starch, magnesium stearate, sodium saccharin, talc, cellulose, glucose, shochu Contains sugar, magnesium carbonate, etc.

化合物を投与するための製薬学的組成物はまた、溶液、マイクロエマルジョンまたは高
濃度の活性成分用に適した他の秩序構造として製剤化され得る。賦形剤は、例えば、水、
エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレ
ングリコールなど）およびその適当な混合物を含む溶媒または分散媒体とし得る。溶液の
適当な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングの使用によるか、分散可能な製
剤の場合所望の粒径の維持によるか、界面活性剤の使用により維持することができる。多
くの場合、等張剤、例えば糖類、マンニトールおよびソルビトールのようなポリオール、
または塩化ナトリウムを組成物中に含めることが望ましい。化合物の長期間に渡る吸収を
、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを含める
ことによってもたらすことができる。 Pharmaceutical compositions for administering the compounds can also be formulated as solutions, microemulsions or other ordered structures suitable for high concentrations of active ingredients. Excipients are for example water,
It may be a solvent or dispersion medium containing ethanol, polyol (eg glycerol, propylene glycol, liquid polyethylene glycol, etc.) and suitable mixtures thereof. The proper fluidity of a solution can be maintained, for example, by the use of a coating such as lecithin, by the maintenance of the desired particle size in the case of a dispersible preparation or by the use of surfactants. Often isotonic agents, for example, polyols such as sugars, mannitol and sorbitol,
Alternatively, it is desirable to include sodium chloride in the composition. Long-term absorption of the compound can be brought about by including in the composition an agent that delays absorption, for example, monostearate salts and gelatin.

特定の実施形態では、化合物を時間放出型製剤、例えば徐放性ポリマーを含む組成物に
付与し得る。これらの組成物は、速い放出を防ぐ賦形剤、例えばポリマー、マイクロカプ
セル化送達システムまたは生体接着性ゲルのような徐放性賦形剤を用いて調製し得る。本
開示の様々な組成物における長期間に渡る送達は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノ
ステアリン酸アルミニウムのヒドロゲルおよびゼラチンを組成物中に含めることによりも
たらすことができる。徐放性製剤が望まれる場合、本開示に従う使用に適した徐放性バイ
ンダは、活性成分に不活性で、かつ化合物および／または他の生物学的に活性な薬剤を導
入し得るあらゆる生体適合性の徐放性材料を含む。数多くのかかる材料は、当業界で既知
である。有用な徐放性バインダは、送達（例えば、粘膜表面または体液の存在下）の後で
生理的条件下徐々に代謝される材料である。適当なバインダは、限定されないが、当業界
で公知の徐放性製剤向けの生体適合性のポリマーおよびコポリマーを含む。かかる生体適
合性の化合物は、周囲の組織に無毒性かつ不活性であり、鼻炎、免疫反応、炎症などのよ
うな有害な副作用を誘発しない。これらは、生体適合性で、かつ体から容易に除去されも
する代謝産物に代謝される。 In certain embodiments, the compound may be applied to a time release formulation, such as a composition comprising a sustained release polymer. These compositions can be prepared using excipients that prevent rapid release, for example sustained release excipients such as polymers, microencapsulated delivery systems, or bioadhesive gels. Prolonged delivery in various compositions of the present disclosure can be effected by including in the composition agents that delay absorption, for example, aluminum monostearate hydrogels and gelatin. Where a sustained release formulation is desired, a sustained release binder suitable for use in accordance with the present disclosure is any biocompatible that is inert to the active ingredient and can introduce compounds and / or other biologically active agents. Sustained release materials. Many such materials are known in the art. Useful sustained release binders are materials that are gradually metabolized under physiological conditions after delivery (eg, in the presence of a mucosal surface or body fluid). Suitable binders include, but are not limited to, biocompatible polymers and copolymers for sustained release formulations known in the art. Such biocompatible compounds are non-toxic and inert to surrounding tissues and do not induce harmful side effects such as rhinitis, immune reactions, inflammation, and the like. They are metabolized into metabolites that are biocompatible and also easily removed from the body.

本開示に用いる典型的なポリマー材料は、限定されないが、加水分解性エステル結合を
有するコポリマーおよびホモポリマーのポリエステルに由来するポリマーマトリックスを
含む。これらの多くは、生物分解性であり、無毒性または低毒性の分解産物を生ずること
は当業界で既知である。典型的なポリマーは、ポリグリコール酸およびポリ乳酸、ポリ（
DL-乳酸-グリコール酸コポリマー）、ポリ（D-乳酸-グリコール酸コポリマー）およびポ
リ（L-乳酸-グリコール酸コポリマー）を含む。他の有用な生物分解可能なまたは生物浸
食可能なポリマーは、限定されないが、ポリ（ε-カプロラクトン）、ポリ（ε-カプロラ
クトン-CO-乳酸）、ポリ（ε-カプロラクトン-CO-グリコール酸）、ポリ（β-ヒドロキシ
酪酸）、ポリ（アルキル-2-シアノアクリレート）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレ
ート）のようなハイドロゲル、ポリアミド類、ポリ（アミノ酸）（例えば、L-ロイシン、
グルタミン酸、L-アスパラギン酸など）、ポリ（エステル尿素）、ポリ（2-ヒドロキシエ
チル-DL-アスパルトアミド）、ポリアセタールポリマー、ポリオルトエステル類、ポリカ
ーボネート、ポリマレアミド、多糖類およびそのコポリマーを含む。かかる製剤を調製す
る多くの方法は、当業者に周知である（例えば、Sustained and Controlled Release Dru
g Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.参
照）。他の有用な製剤は、徐放性マイクロカプセル（米国特許第4,652,441号明細書およ
び第4,917,893号明細書）、マイクロカプセルおよび他の製剤を作製する際に有用な乳酸
‐グリコール酸コポリマー（米国特許第4,677,191号明細書および第4,728,721号明細書）
、および水溶性ペプチド用の徐放性組成物（米国特許第4,675,189号明細書）を含む。 Exemplary polymeric materials used in the present disclosure include, but are not limited to, polymer matrices derived from copolymers and hydropolymeric polyesters having hydrolysable ester linkages. Many of these are biodegradable and are known in the art to produce non-toxic or low-toxic degradation products. Typical polymers are polyglycolic acid and polylactic acid, poly (
DL-lactic acid-glycolic acid copolymer), poly (D-lactic acid-glycolic acid copolymer) and poly (L-lactic acid-glycolic acid copolymer). Other useful biodegradable or bioerodible polymers include, but are not limited to, poly (ε-caprolactone), poly (ε-caprolactone-CO-lactic acid), poly (ε-caprolactone-CO-glycolic acid), Hydrogels such as poly (β-hydroxybutyric acid), poly (alkyl-2-cyanoacrylate), poly (hydroxyethyl methacrylate), polyamides, poly (amino acids) (eg L-leucine,
Glutamic acid, L-aspartic acid, etc.), poly (ester urea), poly (2-hydroxyethyl-DL-aspartamide), polyacetal polymer, polyorthoesters, polycarbonate, polymeraleamide, polysaccharides and copolymers thereof. Many methods for preparing such formulations are well known to those skilled in the art (eg, Sustained and Controlled Release Dru
g Delivery Systems, JR Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.). Other useful formulations include sustained release microcapsules (US Pat. Nos. 4,652,441 and 4,917,893), lactic acid-glycolic acid copolymers (US Pat. (4,677,191 specification and 4,728,721 specification)
And sustained release compositions for water-soluble peptides (US Pat. No. 4,675,189).

本開示の製薬学的組成物は、通常製造、保存および使用条件下で無菌かつ安定である。
無菌溶液は、必要量の化合物を適当な溶媒中に、必要に応じて本明細書中に列挙する成分
の単独または組み合わせとともに導入し、その後ろ過滅菌することによって調製すること
ができる。一般に、分散体は、基本の分散媒および本明細書に列挙するものの中で必要な
他の成分を含有する無菌賦形剤に本化合物および／または他の生物学的に活性な薬剤を導
入することによって調製される。無菌粉体の場合、調製方法としては、予めろ過滅菌した
溶液から化合物と追加的な所望の成分の粉末を得る真空乾燥および凍結乾燥が挙げられる
。微生物の働きの防止は、様々な抗菌および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタ
ノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどにより達成され得る。 The pharmaceutical compositions of this disclosure are typically sterile and stable under the conditions of manufacture, storage and use.
Sterile solutions can be prepared by introducing the required amount of the compound in a suitable solvent, optionally together with the ingredients listed herein, alone or in combination, and then filter sterilized. Generally, a dispersion introduces the compound and / or other biologically active agent into a sterile vehicle that contains a basic dispersion medium and the other ingredients necessary as listed herein. It is prepared by. In the case of sterile powders, preparation methods include vacuum drying and freeze drying to obtain a powder of the compound and additional desired ingredients from a pre-filter sterilized solution. Prevention of the action of microorganisms can be achieved by various antibacterial and antifungal agents, for example, parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal, and the like.

本開示の様々な治療方法によれば、化合物を被検体に治療または予防が求められる障害
の取扱いに伴う従来の方法論に従う手法で送達することができる。本明細書中の開示に従
って、予防学的にまたは治療学的に有効な量の化合物および／または他の生物学的に活性
な薬剤を、かかる治療を必要とする被検体に所定の疾病若しくは疾患またはその一つ以上
の兆候を予防、阻害および／または改善するに十分な時間と条件下で投与する。 According to various treatment methods of the present disclosure, a compound can be delivered to a subject in a manner that follows conventional methodology associated with the treatment of a disorder that requires treatment or prevention. In accordance with the disclosure herein, a prophylactically or therapeutically effective amount of a compound and / or other biologically active agent is administered to a subject in need of such treatment for a given disease or disorder. Or administered for a time and under conditions sufficient to prevent, inhibit and / or ameliorate one or more of its symptoms.

本開示の化合物の投与は、予防または治療目的のいずれかによりなされてよい。予防的
に提供されるときには、化合物をあらゆる徴候に先立って提供する。化合物の予防的投与
は、あらゆるその後の疾病プロセスを予防または改善するのに役立つ。治療的に提供され
るときには、化合物を疾病または感染の発症の時（またはその少し後）に提供する。 Administration of the compounds of this disclosure may be made for either prophylactic or therapeutic purposes. When provided prophylactically, the compound is provided prior to any indication. Prophylactic administration of the compound serves to prevent or ameliorate any subsequent disease process. When provided therapeutically, the compound is provided at (or shortly after) the onset of the disease or infection.

予防および治療目的のために、化合物を被検体に単回ボーラス投与で長期間に渡っての
連続送達（例えば、連続的な経皮、粘膜または静脈送達）によるか、または繰り返し投与
プロトコル（例えば、毎時、毎日、毎週の繰り返し投与のプロトコル）で投与することが
できる。治療学的に有効な投与量の化合物は、本明細書中に記載される標的疾病または疾
患に伴う一つ以上の症状または検出可能な状態を軽減するのに臨床学的に有意な結果をも
たらす長期間の予防または治療計画内で繰り返し投与として提供することができる。本明
細書における有効投与量の決定は、通常動物モデル試験と、それに続くヒトの臨床試験に
基づき、被検体の標的疾病の症状または状態の発生率または重症度を著しく低減させる投
与プロトコルにより導かれる。これに関する適当なモデルは、例えば、当業界で既知のネ
ズミ、ラット、豚、ネコ、人間以外の霊長類、および他の許容された動物モデル被検体を
含む。あるいはまた、有効な投与量を、生体外モデル（例えば、免疫学的および病理組織
学的アッセイ）を使用して決定することができる。かかるモデルを使用して、通常の算出
および調節のみが、化合物の治療学的に有効な量（例えば、所望の免疫反応を引き出すか
、または一つ以上の標的疾病の症状を軽減するのに有効な量）を投与するのに適切な濃度
および用量を決定するために必要とされる。別の実施形態では、化合物の有効な量、すな
わち有効投与量は、本明細書に記載されるように、治療または診断目的のいずれかで、疾
病または疾患と相関性がある一つ以上の選ばれた生物学的活性を単純に阻害または増強さ
せ得る。 For prophylactic and therapeutic purposes, the compound can be delivered to a subject in a single bolus over a long period of time (eg, continuous transdermal, mucosal or intravenous delivery) or repeated administration protocols (eg, (Hourly, daily, weekly repeated administration protocol). A therapeutically effective dose of the compound provides a clinically significant result in alleviating one or more symptoms or detectable conditions associated with the target disease or disorder described herein. It can be provided as repeated administration within a long-term prevention or treatment regimen. The determination of effective dose herein is usually guided by an administration protocol that significantly reduces the incidence or severity of a target disease symptom or condition based on animal model studies followed by human clinical studies. . Suitable models in this regard include, for example, mice, rats, pigs, cats, non-human primates, and other accepted animal model subjects known in the art. Alternatively, effective dosages can be determined using in vitro models (eg, immunological and histopathological assays). Using such a model, only routine calculations and adjustments are effective in eliciting a therapeutically effective amount of the compound (eg, eliciting a desired immune response or reducing the symptoms of one or more target diseases). Required) to determine the appropriate concentration and dose. In another embodiment, the effective amount of the compound, i.e., the effective dosage, is one or more choices that are correlated with the disease or disorder, either for therapeutic or diagnostic purposes, as described herein. Can simply inhibit or enhance the biological activity.

化合物の実際の投与量は、被検体の病気の兆候および特定の状態（例えば、被検体の年
齢、大きさ、適合性、症状の範囲、感受性因子など）、投与の時間およびルート、同時に
投与される他の薬や治療、並びに被検体における所望の活性または生物学的応答を引き起
こすための化合物の特異的な薬理のような因子に従って変動する。投与計画を調節して最
適な予防または治療の応答を付与することができる。治療学的に有効な量はまた、化合物
および／または他の生物学的に活性な薬剤のあらゆる毒性または有害な副作用を治療学的
に有益な効果により臨床的な意味で上回るものでもある。本開示の方法および製剤の範囲
内での化合物および／または他の生物学的に活性な薬剤の治療学的に有効な量の非制限的
な範囲は、約0.01 mg/体重kgから約10 mg/体重kg、例えば約0.05 mg/kg〜約5mg/体重kg、
または約0.2 mg/体重kg〜約2 mg/体重kgである。 The actual dose of the compound is administered at the same time as the sign of the subject's disease and the particular condition (eg, subject's age, size, suitability, range of symptoms, susceptibility factors, etc.), time and route of administration. It varies according to other drugs and treatments as well as factors such as the specific pharmacology of the compound to elicit the desired activity or biological response in the subject. Dosage regimes may be adjusted to provide the optimum prophylactic or therapeutic response. A therapeutically effective amount is also one that exceeds any toxic or adverse side effects of the compound and / or other biologically active agent in a clinical sense with a therapeutically beneficial effect. A non-limiting range of therapeutically effective amounts of compounds and / or other biologically active agents within the methods and formulations of the present disclosure is from about 0.01 mg / kg body weight to about 10 mg. / Kg body weight, for example about 0.05 mg / kg to about 5 mg / kg body weight,
Or about 0.2 mg / kg body weight to about 2 mg / kg body weight.

投与量は、標的部位（例えば、肺または体循環）で所望の濃度を維持するために主治医
により変動され得る。例えば経皮、直腸、経口、経肺、または鼻腔内送達に対する静脈内
または皮下送達など送達モードに基づいて、より高いかまたはより低い濃度を選択するこ
とができる。投与量はまた、例えば、肺内噴霧に対する粉末、徐放経口に対する注射され
た微粒子または経皮送達製剤などの投与製剤の放出速度に基づいて調節することができる
。同じ血清中の濃度レベルを達成するために、例えば、5ナノモル（標準的な条件下）の
放出速度を有する徐放性粒子は、10ナノモルの放出速度を有する粒子の約二倍の投与量で
投与されるものとする。 The dosage can be varied by the attending physician to maintain a desired concentration at the target site (eg, lung or systemic circulation). Higher or lower concentrations can be selected based on the delivery mode, eg, transdermal, rectal, oral, pulmonary, or intravenous or subcutaneous delivery for intranasal delivery. The dosage can also be adjusted based on the release rate of the dosage formulation such as, for example, a powder for intrapulmonary spray, an injected microparticle for sustained release oral or a transdermal delivery formulation. In order to achieve the same serum concentration level, for example, sustained release particles with a release rate of 5 nanomolar (under standard conditions) can be used at about twice the dose of particles with a release rate of 10 nanomolar. Shall be administered.

本開示はまた、哺乳類被検体における疾病および他の疾患の予防および治療に使用する
ための本明細書に記載の製薬学的組成物、活性成分および／またはそれらの投与手段を含
むキット、パッケージおよびマルチ容器ユニットを含む。診断用のキットも提供される。
一つの実施形態では、これらキットは本明細書に記載した一つ以上の複合体を含有する容
器または製剤を含む。一つの実施例では、この成分を被検体への送達用の製薬学的な調剤
に処方する。複合体は、大量調剤の容器もしくはユニットまたはマルチユニット製剤に任
意選択的に含まれる。任意選択的な調剤手段、例えば、経肺または鼻腔内噴霧塗布器を提
供することができる。パッケージ材は、任意選択的に、何の治療目的なのか、および／ま
たはどんな方法で充填された製薬学的薬剤を用い得るかを示すラベルまたは指示書を含む
。 The present disclosure also includes kits, packages and pharmaceutical compositions, active ingredients and / or their administration means as described herein for use in the prevention and treatment of diseases and other disorders in mammalian subjects. Includes multi-container units. A diagnostic kit is also provided.
In one embodiment, these kits include a container or formulation containing one or more conjugates described herein. In one example, this component is formulated into a pharmaceutical formulation for delivery to a subject. The complex is optionally included in a bulk dosage container or unit or multi-unit formulation. Optional dispensing means can be provided, for example, transpulmonary or intranasal spray applicators. The packaging material optionally includes a label or instructions indicating what the therapeutic purpose is and / or how the filled pharmaceutical agent can be used.

（一般的な材料および方法）
全ての市販の試薬および溶媒を購入し、更なる精製なく用いた。全てのマイクロ波反応
を、磁気攪拌棒を備えた密封マイクロ波バイアル中で行い、Biotage Initiator Microwav
e Synthesizer中で加熱した。生物学的試験用の全ての化合物を、Phenomenex Luna(登録
商標) C18逆相（5ミクロン、30×75 mm）カラムを備えた半分取ＨＰＬＣを流速45 mL/分
で用いて精製した。移動相は、各々0.1%のトリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリルお
よびH₂Oの混合物であった。精製の間、30%〜80%勾配のアセトニトリルを8分間に渡ってUV
検出（220 nM）により誘発される画分収集を伴って用いた。純粋な画分をPL-HCO₃ MP SPE
(Varian)に通してトリフルオロ酢酸を除去し、真空下凍結乾燥機で濃縮した。¹Hスペク
トルを、Inova 400(100) MHzスペクトロメーター（Varian）を用いて記録した。化学シフ
トを、内部標準としてのCDCl₃（7.27）中の¹H（残余の）を用いてδ(ppm)単位で報告する
。データを以下の通りに報告する：化学シフト、多重度（s = シングレット、d = ダブレ
ット、t = トリプレット、q = カルテット、m = マルチプレット、br = ブロード）、カ
ップリング定数および積分値。サンプルを、Zorbax(商標) Eclipse XDB-C18逆相（5ミク
ロン、4.6×150 mm）カラムを備えたAgilent 1200 series LC/MSにおいて流速1.1 mL/分
で純度について分析した。移動相は、各々0.05%のトリフルオロ酢酸を含有するアセトニ
トリルおよびH₂Oの混合物とした。分析の間、5%〜100%勾配のアセトニトリルを8分間に渡
って用いた。高分解能マススペクトル測定をAgilent 6210 Electrospray TOF mass spect
rometerで行った。 (General materials and methods)
All commercially available reagents and solvents were purchased and used without further purification. All microwave reactions were performed in sealed microwave vials with a magnetic stir bar and Biotage Initiator Microwav
Heated in e Synthesizer. All compounds for biological testing were purified using semi-preparative HPLC equipped with a Phenomenex Luna® C18 reverse phase (5 micron, 30 × 75 mm) column at a flow rate of 45 mL / min. The mobile phase was a mixture of acetonitrile and H ₂ O each containing 0.1% trifluoroacetic acid. During the purification, a 30% to 80% gradient of acetonitrile was applied to the UV for 8 minutes.
Used with fraction collection triggered by detection (220 nM). Pure fractions PL-HCO ₃ MP SPE
(Varian) removed the trifluoroacetic acid and concentrated in a lyophilizer under vacuum. ¹ H spectra were recorded using an Inova 400 (100) MHz spectrometer (Varian). Chemical shifts are reported in δ (ppm) units using ¹ H (remainder) in CDCl ₃ (7.27) as internal standard. Data are reported as follows: chemical shift, multiplicity (s = singlet, d = doublet, t = triplet, q = quartet, m = multiplet, br = broad), coupling constants and integral values. Samples were analyzed for purity at a flow rate of 1.1 mL / min on an Agilent 1200 series LC / MS equipped with a Zorbax ™ Eclipse XDB-C18 reverse phase (5 micron, 4.6 × 150 mm) column. The mobile phase was a mixture of acetonitrile and H ₂ O each containing 0.05% trifluoroacetic acid. During the analysis, a 5% to 100% gradient of acetonitrile was used for 8 minutes. Agilent 6210 Electrospray TOF mass spect for high-resolution mass spectral measurements
I went with a rometer.

（一般的な合成手順）
以下の一般的な手順を用いて、異なるが類似する構造を有する化合物を合成した。当業
者は、所要に応じて所望の転移を達成するためにこれら一般的な手法を修正する方法を認
識するであろう。 (General synthesis procedure)
The following general procedure was used to synthesize compounds with different but similar structures. Those skilled in the art will recognize how to modify these general approaches to achieve the desired transition as desired.

（イサト酸無水物からの2-アミノベンズアミド合成用の一般的な手順）
イサト酸無水物（0.163 g、1.0 mmol、1.0当量）の10 mL無水アセトニトリル溶液にア
ミン（1.05 mmol、1.05当量）を室温で加えた。生成した混合物を室温で2時間撹拌し、50
℃で4時間加熱した。その後、真空で濃縮し、固体としての生成物を90-99%の収率で得た
。 (General procedure for the synthesis of 2-aminobenzamide from isatoic anhydride)
To a solution of isatoic anhydride (0.163 g, 1.0 mmol, 1.0 eq) in 10 mL anhydrous acetonitrile was added amine (1.05 mmol, 1.05 eq) at room temperature. The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 hours,
Heat at 4 ° C. for 4 hours. It was then concentrated in vacuo to give the product as a solid in 90-99% yield.

（2-アミノ-N-ベンジルベンズアミド）
¹H NMR(400 MHz, クロロホルム-d) δ 4.61(s, 1H), 4.63(s, 1H), 5.58(br. s., 2H),
6.33(br. s., 1H), 6.62-6.66(m, 1H), 6.69-6.71(m, 1H), 7.19-7.25(m, 1H), 7.28-7.
43(m, 6H); LCMS:(電子スプレー +ve), m/z 227.1(MH)⁺; HPLC:t_R = 4.38分, UV₂₅₄ =96%
. (2-amino-N-benzylbenzamide)
¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 4.61 (s, 1H), 4.63 (s, 1H), 5.58 (br.s., 2H),
6.33 (br. S., 1H), 6.62-6.66 (m, 1H), 6.69-6.71 (m, 1H), 7.19-7.25 (m, 1H), 7.28-7.
43 (m, 6H); LCMS: (electrospray + ve), m / z 227.1 (MH) ⁺ ; HPLC: t _R = 4.38 min, UV ₂₅₄ = 96%
.

（2-アミノ-N-（フラン-2-イルメチル）ベンズアミド）
¹H NMR(400 MHz, クロロホルム-d) δ 4.60(s, 1H), 4.61(s, 1H), 5.57(br. s., 2H),
6.24-6.42(m, 3H), 6.59-6.74(m, 2H), 7.16-7.25(m, 1H), 7.33-7.39(m, 2H); LCMS:(
電子スプレー +ve), m/z 217.1(MH)⁺; HPLC:t_R = 3.77分, UV₂₅₄ = 98%. (2-Amino-N- (furan-2-ylmethyl) benzamide)
¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 4.60 (s, 1H), 4.61 (s, 1H), 5.57 (br.s., 2H),
6.24-6.42 (m, 3H), 6.59-6.74 (m, 2H), 7.16-7.25 (m, 1H), 7.33-7.39 (m, 2H); LCMS: (
Electrospray + ve), m / z 217.1 (MH) ⁺ ; HPLC: t _R = 3.77 min, UV ₂₅₄ = 98%.

（2-アミノ-N-ベンジル-6-メトキシベンズアミド）
50 mLのジクロロメタンにおける2-アミノ6-メトキシ安息香酸（0.841 g, 5.0 mmol, 1.
0当量）、ベンジルアミン（0.643 g, 6.0 mmol, 1.2当量）およびジイソプロピルエチル
アミン（1.935 g, 15.0 mmol, 3.0当量）の溶液に、2-クロロ-1,3-ジメチルイミダゾリニ
ウムクロライド（1.099 g, 6.5 mmol, 1.3当量）を室温で加えた。混合物を室温で6時間
撹拌し、水に注ぎ込み、ジクロロメタンで抽出した。有機溶液を飽和NaHCO₃および水で連
続的に洗浄した。有機層をMgSO₄で乾燥し、溶媒をロータリーエバポレーターにより除去
した。残渣をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル2%、CH₂Cl₂中の2.0 Mのアンモニア-Me
OH溶液）により精製して、2-アミノ-N-ベンジル-6-メトキシベンズアミド(0.593g, 46%)
を固体として得た。¹H NMR(400 MHz, クロロホルム-d) δ 3.81(s, 3H), 4.62(s, 1H), 4
.63(s, 1H), 6.07(vb. s., 2H), 6.19(d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.32(d, J = 8.2 Hz, 1H),
7.07(t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.14-7.54(m, 5H), 8.05(br. s., 1H); HPLC:t_R = 4.72分, U
V₂₅₄ =99%; HRMS(ESI):C₁₅H₁₆N₂O₂[M+1]⁺のm/z計算値257.1296、実測値257.1294. (2-amino-N-benzyl-6-methoxybenzamide)
2-Amino-6-methoxybenzoic acid (0.841 g, 5.0 mmol, 1.
0 eq), benzylamine (0.643 g, 6.0 mmol, 1.2 eq) and diisopropylethylamine (1.935 g, 15.0 mmol, 3.0 eq) in 2-chloro-1,3-dimethylimidazolinium chloride (1.099 g, 6.5 mmol, 1.3 eq) was added at room temperature. The mixture was stirred at room temperature for 6 hours, poured into water and extracted with dichloromethane. The organic solution was washed successively with saturated NaHCO ₃ and water. The organic layer was dried over MgSO ₄ and the solvent was removed on a rotary evaporator. The residue was purified by column chromatography (silica gel 2%, 2.0 M ammonia-Me in CH ₂ Cl ₂
2-amino-N-benzyl-6-methoxybenzamide (0.593 g, 46%)
Was obtained as a solid. ¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 3.81 (s, 3H), 4.62 (s, 1H), 4
.63 (s, 1H), 6.07 (vb.s., 2H), 6.19 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 8.2 Hz, 1H),
7.07 (t, J = 8.2 Hz , 1H), 7.14-7.54 (m, 5H), 8.05; HPLC (br s, 1H..): T R = 4.72 min, U
V ₂₅₄ = 99%; HRMS (ESI): m / z calculated for C ₁₅ H ₁₆ N ₂ O ₂ [M + 1] ⁺ 257.1296, found 257.1294.

（２-アミノ-N-ベンジル-6-ヒドロキシベンズアミド）
2-アミノ-N-ベンジル-6-メトキシベンズアミド(0.228 g, 0.89 mmol, 1.0当量)の3 mL
無水DMF溶液に1-ドデカンチオール(0.360 g, 1.78 mmol, 2.0当量)を加え、その後NaOMe(
0.385 gの25%MeOH溶液, 1.78 mmol、2.0当量)を加えた。混合物をマイクロ波シンセサイ
ザ中150℃で10分間加熱した。混合物をシリカゲルプラグに通し、酢酸エチル-メタノール
混合物(1:1)で洗浄した。粗生成物をPL-SO₃H MP SPE (Varian)により精製して、2-アミノ
-N-ベンジル-6-ヒドロキシベンズアミド(0.176g, 82%)を濃厚な油として得た。¹H NMR(40
0 MHz, クロロホルム-d) δ 3.55-4.20(vb. s., 2H), 4.60(s, 1H), 4.61(s, 1H), 6.25(
d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.50(d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.09(t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.16-7.52(
m, 5H), 8.58(br. s., 1H), 12.05(br. s., 1H); HPLC:t_R = 3.97分, UV₂₅₄ =98%;HRMS(E
SI): C₁₄H₁₄N₂O₂[M+1]⁺ のm/z計算値243.1140、実測値243.1134. (2-Amino-N-benzyl-6-hydroxybenzamide)
3 mL of 2-amino-N-benzyl-6-methoxybenzamide (0.228 g, 0.89 mmol, 1.0 equiv)
1-dodecanethiol (0.360 g, 1.78 mmol, 2.0 eq) was added to anhydrous DMF solution, followed by NaOMe (
0.385 g of 25% MeOH solution, 1.78 mmol, 2.0 eq) was added. The mixture was heated in a microwave synthesizer at 150 ° C. for 10 minutes. The mixture was passed through a silica gel plug and washed with an ethyl acetate-methanol mixture (1: 1). The crude product was purified by PL-SO ₃ H MP SPE (Varian) to give 2-amino
-N-benzyl-6-hydroxybenzamide (0.176 g, 82%) was obtained as a thick oil. ¹ H NMR (40
0 MHz, chloroform-d) δ 3.55-4.20 (vb.s., 2H), 4.60 (s, 1H), 4.61 (s, 1H), 6.25 (
d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.16-7.52 (
.. m, 5H), 8.58 (br s, 1H), 12.05 (br s, 1H); HPLC:.. t R = 3.97 _{min, UV 254 = 98%; HRMS} (E
SI): C ₁₄ H ₁₄ N ₂ O ₂ [M + 1] ⁺ m / z calculated 243.1140, measured 243.1134.

（2, 3-ジヒドロキナゾリン-4-オンおよびキナゾリン-4-オンの合成用の一般的な手順
）
1.5 mLの無水DMAにおける3-（クロロメチル）-4-メトキシベンズアルデヒド（300 μmo
l, 1.0 当量）および適切に置換されたフェノールまたはチオフェノール（360 μmol, 1.
2当量）の溶液にK₂CO₃（1.5 mmol, 5当量）を加えた。混合物をマイクロ波シンセサイザ
中150℃で10分間加熱した。固体を濾過した。透明な溶液に2-アミノベンズアミド（1.2当
量）添加し、その後トリフルオロメタンスルホン酸イッテルビウム（150 μmol, 0.5当量
）を加えた。混合物をマイクロ波シンセサイザ中200℃で10分間加熱して、所望の2, 3-ジ
ヒドロキナゾリン-4-オンを得た。DDQ（300 μmol, 1.5 Mアセトニトリル溶液, 1.0当量
）溶液を、2, 3-ジヒドロキナゾリン-4-オンを含む反応混合物に加え、生成した混合物を
1時間撹拌してキナゾリン-4-オンを得た。全ての粗生成物をHPLCにより精製した。PL-HCO
₃ MP SPEを用いてTFAを除去した。最終生成物を20-50%の収率で固体として得た。 (General procedure for the synthesis of 2,3-dihydroquinazolin-4-one and quinazolin-4-one)
3- (Chloromethyl) -4-methoxybenzaldehyde (300 μmo) in 1.5 mL anhydrous DMA
l, 1.0 eq) and appropriately substituted phenol or thiophenol (360 μmol, 1.
K ₂ CO ₃ (1.5 mmol, 5 equivalents) was added to the solution of ₂ equivalents). The mixture was heated in a microwave synthesizer at 150 ° C. for 10 minutes. The solid was filtered. To the clear solution was added 2-aminobenzamide (1.2 eq) followed by ytterbium trifluoromethanesulfonate (150 μmol, 0.5 eq). The mixture was heated in a microwave synthesizer at 200 ° C. for 10 minutes to give the desired 2,3-dihydroquinazolin-4-one. DDQ (300 μmol, 1.5 M acetonitrile solution, 1.0 equiv) solution is added to the reaction mixture containing 2,3-dihydroquinazolin-4-one and the resulting mixture is
Stirring for 1 hour gave quinazolin-4-one. All crude products were purified by HPLC. PL-HCO
TFA was removed using ₃ MP SPE. The final product was obtained as a solid in 20-50% yield.

（N-(4-(5-(3-(フラン-2-イルメチル)-4-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキナゾリン-2-
イル)-2-メトキシベンジルオキシ)フェニル)アセトアミド（化合物3））
¹H NMR(400 MHz, クロロホルム-d) δ 2.11(s, 3H)、3.72(d, J = 15.6 Hz, 1H)、3.83
(s, 3H), 4.25(v.b.s, 1H), 5.01(s, 2H), 5.26(d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.71(s, 1H), 6.
03-6.29(m, 2H), 6.48(d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.83(dd, J = 18.2, 8.8 Hz, 3H)、7.10-7.
61(m, 7H), 7.92(d, J = 7.0 Hz, 1H); HPLC:t_R = 5.40分, UV₂₅₄ = 91%; HRMS(ESI): C_2
9H₂₇N₃O₅[M+1]⁺ のm/z計算値498.2029、実測値498.2025. (N- (4- (5- (3- (furan-2-ylmethyl) -4-oxo-1,2,3,4-tetrahydroquinazoline-2-
Yl) -2-methoxybenzyloxy) phenyl) acetamide (compound 3))
¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 2.11 (s, 3H), 3.72 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.83
(s, 3H), 4.25 (vbs, 1H), 5.01 (s, 2H), 5.26 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.71 (s, 1H), 6.
03-6.29 (m, 2H), 6.48 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 18.2, 8.8 Hz, 3H), 7.10-7.
61 (m, 7H), 7.92 (d, J = 7.0 Hz, 1H); HPLC: t _R = 5.40 min, UV ₂₅₄ = 91%; HRMS (ESI): C _2
9 H ₂₇ N ₃ O ₅ [M + 1] ⁺ m / z calculated 498.2029, measured 498.2025.

（N-(4-(5-(3-ベンジル-4-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキナゾリン-2-イル)-2-メトキ
シベンジルオキシ)フェニル)アセトアミド（化合物3/2））
¹H NMR(400 MHz, クロロホルム-d) δ 2.12(s, 3H), 3.66(d, J = 15.3 Hz, 1H), 3.83
(s, 3H), 5.00(s, 2H), 5.48(d, J = 15.3 Hz, 1H), 5.57(s, 1H), 6.49(d, J = 7.8 Hz,
1H), 6.67-7.00(m, 4H), 7.05-7.57(m, 11H), 7.99(d, J = 7.8 Hz, 1H); HPLC:t_R = 5.
69分, UV₂₅₄ =98%; HRMS(ESI): C₃₁H₂₉N₃O₄[M+1]⁺ のm/z計算値508.2242、実測値508.223
3. (N- (4- (5- (3-benzyl-4-oxo-1,2,3,4-tetrahydroquinazolin-2-yl) -2-methoxybenzyloxy) phenyl) acetamide (compound 3/2))
¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 2.12 (s, 3H), 3.66 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 3.83
(s, 3H), 5.00 (s, 2H), 5.48 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 6.49 (d, J = 7.8 Hz,
1H), 6.67-7.00 (m, 4H), 7.05-7.57 (m, 11H), 7.99 (d, J = 7.8 Hz, 1H); HPLC: t _R = 5.
69 min, UV ₂₅₄ = 98%; HRMS (ESI): C ₃₁ H ₂₉ N ₃ O ₄ [M + 1] ⁺ m / z calculated 508.2242, found 508.223
3.

（N-(4-(5-(3-ベンジル-4-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキナゾリン-2-イル)-2-メトキ
シベンジルチオ)フェニル)アセトアミド（化合物3/5））
¹H NMR(400 MHz, クロロホルム-d) δ 2.14(s, 3H), 3.50(d, J = 15.4 Hz, 1H), 3.83
(s, 3H), 3.88(d, J = 13.1 Hz, 1H), 4.00(d, J = 13.1 Hz, 1H), 5.42(d, J = 15.3 Hz
, 1H), 5.45(s, 1H), 6.52(d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.74(d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.79(d, J
= 2.0 Hz, 1H), 6.84(t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.06(dd, J = 8.4, 2.2 Hz, 1H), 7.10-7.33
(m, 9H), 7.37(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.68(br. s., 1H), 7.96(d, J = 6.6 Hz, 1H); HPL
C:t_R = 5.97分, UV₂₅₄ =98%; HRMS(ESI): C₃₁H₂₉N₃O₃S[M+1]⁺ のm/z計算値524.2002、実
測値524.2002. (N- (4- (5- (3-benzyl-4-oxo-1,2,3,4-tetrahydroquinazolin-2-yl) -2-methoxybenzylthio) phenyl) acetamide (compound 3/5))
¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 2.14 (s, 3H), 3.50 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 3.83
(s, 3H), 3.88 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 4.00 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 5.42 (d, J = 15.3 Hz
, 1H), 5.45 (s, 1H), 6.52 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.79 (d, J
= 2.0 Hz, 1H), 6.84 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 8.4, 2.2 Hz, 1H), 7.10-7.33
(m, 9H), 7.37 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.68 (br. s., 1H), 7.96 (d, J = 6.6 Hz, 1H); HPL
C: t _R = 5.97 min, UV ₂₅₄ = 98%; HRMS (ESI): C ₃₁ H ₂₉ N ₃ O ₃ S [M + 1] ⁺ m / z calculated 524.2002, measured 524.2002.

（N-(4-(5-(3-ベンジル-5-ヒドロキシ-4-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキナゾリン-2-
イル)-2-メトキシベンジルオキシ)フェニル)アセトアミド（化合物3/4））
¹H NMR(400 MHz, クロロホルム-d) δ 2.16(s, 3H), 3.67(d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.87
(s, 3H), 4.38(bs, 1H), 5.05(s, 2H), 5.37(d, J = 15.2 Hz, 1H), 5.58(d, J =1.6 Hz,
1H), 5.95(dd, J = 8.0, 1.0Hz, 1H), 6.35(dd, J = 8.4, 0.9Hz, 1H), 6.80-6.92(m, 3
H), 7.09-7.40(m, 10H), 12.34(s, 1H); HPLC:t_R = 6.11分, UV₂₅₄ =96%; HRMS(ESI): C_3
1H₂₉N₃O₅[M+1]⁺ のm/z計算値524.2185、実測値524.2184. (N- (4- (5- (3-benzyl-5-hydroxy-4-oxo-1,2,3,4-tetrahydroquinazoline-2-
Yl) -2-methoxybenzyloxy) phenyl) acetamide (compound 3/4))
¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 2.16 (s, 3H), 3.67 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 3.87
(s, 3H), 4.38 (bs, 1H), 5.05 (s, 2H), 5.37 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 5.58 (d, J = 1.6 Hz,
1H), 5.95 (dd, J = 8.0, 1.0Hz, 1H), 6.35 (dd, J = 8.4, 0.9Hz, 1H), 6.80-6.92 (m, 3
H), 7.09-7.40 (m, 10H), 12.34 (s, 1H); HPLC: t _R = 6.11 min, UV ₂₅₄ = 96%; HRMS (ESI): C _3
1 H ₂₉ N ₃ O ₅ [M + 1] ⁺ m / z calculated 524.2185, measured 524.2184.

（N-(4-(5-(3-(フラン-2-イルメチル)-4-オキソ-3,4-ジヒドロキナゾリン-2-イル)-2-
メトキシベンジルオキシ)フェニル)アセトアミド（化合物3/1））
¹H NMR(400 MHz, クロロホルム-d) δ 2.15(s, 3H), 3.95(s, 3H), 5.12(s, 2H), 5.19
(s, 2H), 6.12(d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.22-6.28(m, 1H), 6.93(d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.0
0(d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.12(br. s., 1H), 7.24(s, 1H), 7.39(d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.
46-7.56(m, 2H), 7.64-7.82(m, 3H), 8.33(d, J = 8.2 Hz, 1H); HPLC:t_R = 5.49分, UV_2
54 =95%; HRMS(ESI): C₂₉H₂₅N₃O₅[M+1]⁺のm/z計算値496.1872、実測値496.1873. (N- (4- (5- (3- (furan-2-ylmethyl) -4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl) -2-
Methoxybenzyloxy) phenyl) acetamide (compound 3/1))
¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 2.15 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 5.12 (s, 2H), 5.19
(s, 2H), 6.12 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.22-6.28 (m, 1H), 6.93 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.0
0 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.12 (br. S., 1H), 7.24 (s, 1H), 7.39 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.
46-7.56 (m, 2H), 7.64-7.82 (m, 3H), 8.33 (d, J = 8.2 Hz, 1H); HPLC: t R = 5.49 min, UV _2
54 = 95%; HRMS (ESI): C ₂₉ H ₂₅ N ₃ O ₅ [M + 1] ⁺ m / z calculated 496.1872, measured 496.1873.

（N-(4-(5-(3-ベンジル-4-オキソ-3,4-ジヒドロキナゾリン-2-イル)-2-メトキシベンジ
ルオキシ)フェニル)アセトアミド（化合物3/3））
¹H NMR(400 MHz, クロロホルム-d) δ 2.13(s, 3H), 3.91(s, 3H), 5.04(s, 2H), 5.26
(s, 2H), 6.81-7.04(m, 5H), 7.11-7.26(m, 4H), 7.38(d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.46-7.58(
m, 2H), 7.71-7.83(m, 2H), 8.36(d, J = 7.8 Hz, 1H); HPLC:t_R = 5.73分, UV₂₅₄ = 98%
; HRMS(ESI): C₃₁H₂₇N₃O₄[M+1]⁺のm/z計算値506.2086、実測値506.2082. (N- (4- (5- (3-benzyl-4-oxo-3,4-dihydroquinazolin-2-yl) -2-methoxybenzyloxy) phenyl) acetamide (compound 3/3))
¹ H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ 2.13 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 5.04 (s, 2H), 5.26
(s, 2H), 6.81-7.04 (m, 5H), 7.11-7.26 (m, 4H), 7.38 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.46-7.58 (
m, 2H), 7.71-7.83 (m , 2H), 8.36 (d, J = 7.8 Hz, 1H); HPLC: t R = 5.73 min, UV ₂₅₄ = 98%
; HRMS (ESI): m / z calculated value of C ₃₁ H ₂₇ N ₃ O ₄ [M + 1] ⁺ 506.2086, measured value 506.2082.

（TSHR、LHCGRまたはFSHR安定発現細胞株の作製）
ヒトTSHRのcDNAをhTSHR-pSVL(1)からPCRにより増幅し、制限酵素サイトXhoIおよびBamH
Iを用いてpcDNA3.1（-）／ハイグロマイシンベクターに挿入した。ヒトLHCGRのcDNAをhLH
R-pGS5(2)からPCRにより増幅し、制限酵素サイトBamHIおよびXhoIを用いてpcDNA3.1（+）
／ハイグロマイシンベクターに挿入した。pcDNA3.1に組み込まれたFSHRcDNAを、Missouri
S&T cDNA Resource Center (www.cDNA.org) から入手し、pcDNA3.1（-）／ハイグロマイ
シンベクターにサブクローニングした。構築物をシーケンシング（MWG Biotech）により
確認した。FuGENE 6 Transfection試薬（Roche Diagnostics）を用いて製造業者のプロト
コルに従ってHEK-EM293細胞をTSHR、LHCGRまたはFSHRのcDNAでトランスフェクトした。ト
ランスフェクションの2日後に、細胞を10%のウシ胎児血清、100 unit/mlのペニシリンお
よび100 g/mlのストレプトマイシン(Life Technologies Inc.)、および選択マーカーとし
てハイグロマイシン（250μg/ml）が追加されたDulbecco's modified Eagle's Medium (D
MEM) に通し、生育させた。7〜10日後にハイグロマイシン耐性クローンを選択し、更なる
生育の2、3日後にcAMPアッセイに供して、適切な受容体を安定発現するクローンを同定し
た。 (Preparation of cell lines that stably express TSHR, LHCGR, or FSHR)
Human TSHR cDNA is amplified from hTSHR-pSVL (1) by PCR, and the restriction sites XhoI and BamH
I was inserted into the pcDNA3.1 (−) / hygromycin vector. CDNA of human LHCGR is hLH
Amplified by PCR from R-pGS5 (2) and pcDNA3.1 (+) using restriction enzyme sites BamHI and XhoI
/ Inserted into hygromycin vector. The FSHR cDNA incorporated in pcDNA3.1
Obtained from S & T cDNA Resource Center (www.cDNA.org) and subcloned into pcDNA3.1 (-) / hygromycin vector. The construct was confirmed by sequencing (MWG Biotech). HEK-EM293 cells were transfected with TSHR, LHCGR or FSHR cDNA using FuGENE 6 Transfection reagent (Roche Diagnostics) according to the manufacturer's protocol. Two days after transfection, cells were supplemented with 10% fetal bovine serum, 100 unit / ml penicillin and 100 g / ml streptomycin (Life Technologies Inc.), and hygromycin (250 μg / ml) as a selectable marker. Dulbecco's modified Eagle's Medium (D
MEM) and grown. Hygromycin resistant clones were selected after 7-10 days and subjected to cAMP assay a few days after further growth to identify clones that stably expressed the appropriate receptor.

（細胞培養）
TSHR、LHCGRまたはFSHRを安定発現する細胞、およびHEK293の親細胞を、10% FBS, 100
units/ml ペニシリン, 100μg/mlストレプトマイシンを含有するDMEM培地中に5%CO₂、37
℃で維持した。TSHR、LHCGRまたはFSHRを安定発現する細胞については、追加の250μg/ml
のハイグロマイシンを細胞培養中に加えた。細胞を、35 mlの培地を含むT175フラスコ中
に300万〜400万個の細胞の密度で播種し、3日間生育させて80-90%コンフルエントとした
。この密度でのHEK293細胞のフラスコには、概して合計3000万個の細胞が得られた。 (Cell culture)
Cells that stably express TSHR, LHCGR, or FSHR, and parent cells of HEK293 are treated with 10% FBS, 100
5% CO ₂ in DMEM medium containing units / ml penicillin, 100 μg / ml streptomycin, 37
Maintained at ° C. For cells that stably express TSHR, LHCGR, or FSHR, an additional 250 μg / ml
Of hygromycin was added during cell culture. Cells were seeded at a density of 3-4 million cells in T175 flasks containing 35 ml of medium and grown for 3 days to 80-90% confluence. HEK293 cell flasks at this density generally yielded a total of 30 million cells.

（均一系時間分解蛍光（HTRF）cAMPアッセイ）
化合物を、TSHR細胞株および親細胞株の両方に対してHTRF cAMP検出キット（Cisbio, B
edford, MA）を用いて分析した。簡潔には、750個の細胞を、1536ウェル平底白色プレー
ト中の2.5 μl/ウェルの完全培地（10%FCSを含むDMEM）中に播種し、DMSO溶液中の化合物
またはコントロールを20 nl/ウェルで加えた。室温で30分の培養後、2.5 μl/ウェルの標
識化d2cAMPおよび2.5 μl/ウェルの抗-cAMP抗体（いずれも溶解バッファ中に1:20で希釈
）を各ウェルに飛翔試薬ディスペンサー(Aurora Discovery, San Diego)を使用して加え
た。プレートを330ナノメートルの励起および615ナノメートルおよび660ナノメートルの
発光でEnvision plate reader(PerkinElmer, Boston, MA)を使用して測定した。 (Homogeneous time-resolved fluorescence (HTRF) cAMP assay)
Compounds were tested against HTRF cAMP detection kit (Cisbio, B) against both TSHR and parental cell lines.
edford, MA). Briefly, 750 cells are seeded in 2.5 μl / well complete medium (DMEM with 10% FCS) in a 1536 well flat bottom white plate and the compound or control in DMSO solution at 20 nl / well. added. After incubation for 30 minutes at room temperature, 2.5 μl / well of labeled d2cAMP and 2.5 μl / well of anti-cAMP antibody (both diluted 1:20 in lysis buffer) were added to each well as a flying reagent dispenser (Aurora Discovery, San Diego). Plates were measured using an Envision plate reader (PerkinElmer, Boston, Mass.) With 330 nanometer excitation and 615 nanometer and 660 nanometer emission.

（化合物の調製）
化合物を384-ウェルプレートにおいてDMSOで1:5または1：2.236に連続希釈して、7また
は15の濃度（最小限には、10mM、2mM、0.4mM、80μM、16μM、3.2μMおよび0.64μM）を
得、1,536-ウェルプレートに7 μl/ウェルで合わせた。細胞培養中の最終化合物濃度は、
1.60nMから25.0μMの範囲とした。 (Preparation of compound)
Compounds are serially diluted 1: 5 or 1: 2.236 in DMSO in 384-well plates to a concentration of 7 or 15 (minimum 10 mM, 2 mM, 0.4 mM, 80 μM, 16 μM, 3.2 μM and 0.64 μM) Was combined in a 1,536-well plate at 7 μl / well. The final compound concentration in cell culture is
The range was 1.60 nM to 25.0 μM.

（データ分析）
最大応答（100%の活性）を30 mU/mlのTSHの応答により決定し、基礎応答（0%の活性）
をTSHスクリーン中のDMSOコントロールにより測定した。化合物のEC₅₀の値は、Prism sof
tware (GraphPad Software, San Diego, CA)を用いる非線形回帰分析法による濃度反応曲
線から算出した。 (Data analysis)
Maximum response (100% activity) determined by 30 mU / ml TSH response, basal response (0% activity)
Was measured by DMSO control in a TSH screen. The EC ₅₀ value of the compound is the Prism sof
Calculations were made from concentration response curves by non-linear regression analysis using tware (GraphPad Software, San Diego, CA).

（確認cAMPアッセイおよびTSHRに対する選択性試験）
50,000細胞/ウェルを96ウェルプレート中の完全培地（10%FCSを含むDMEM）に播種した
。細胞を24時間培養した後に、5％CO₂の加湿培養器において1 mMの3-イソブチル-1-メチ
ルキサンチン(IBMX) (SIGMA)およびウシTSH(1.8 μM)またはヒトLHもしくはFSH (1000 ng
/ml)または化合物 (0.01μM-100μM)を含む無血清DMEM中で37℃で１時間培養した。化合
物での培養後に培地を吸引した後、細胞をcAMP-Screen Direct^TM System (Applied Biosy
stems, Cat # CSD200)の溶解バッファを用いて洗浄した。細胞溶解物のcAMP含有量は、製
造業者のプロトコルを用いて決定した。効能（EC₅₀）を、Windows(登録商標）版GraphPad
Prism 4でのデータ分析により投与量反応曲線（化合物0-100μM）から得た。 (Selective cAMP assay and selectivity test for TSHR)
50,000 cells / well were seeded in complete medium (DMEM with 10% FCS) in 96-well plates. After culturing the cells for 24 hours, in a humidified incubator with 5% CO ₂ , 1 mM 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX) (SIGMA) and bovine TSH (1.8 μM) or human LH or FSH (1000 ng
/ ml) or compound (0.01 μM-100 μM) and cultured in serum-free DMEM at 37 ° C. for 1 hour. After aspirating the medium after culture with compound, the cells ^{cAMP-Screen Direct TM System (Applied} Biosy
stems, Cat # CSD200). The cAMP content of the cell lysate was determined using the manufacturer's protocol. Efficacy (EC ₅₀ ), Windows (registered trademark) version GraphPad
Dose response curves (compound 0-100 μM) were obtained by data analysis with Prism 4.

以下は、均一系時間分解蛍光（HTRF）cAMPアッセイにより分析した化合物のリストであ
る。 The following is a list of compounds analyzed by homogeneous time-resolved fluorescence (HTRF) cAMP assay.

いくつかの化合物に関する確認cAMPアッセイにより決定したEC₅₀の値は：
化合物3が590nM
化合物3/4が25nM
化合物3/5が38nM
化合物3/1が100nM
化合物3/2が541nMである。 EC ₅₀ values determined by confirmatory cAMP assay for several compounds are:
Compound 3 is 590 nM
Compound 3/4 is 25 nM
Compound 3/5 is 38 nM
Compound 3/1 is 100 nM
Compound 3/2 is 541 nM.

図1は、本明細書に開示した化合物がLHCGRまたはFSHRに対してアゴニスト活性を示さな
いため、これらがTSHR選択的アゴニストであることを示す図である。 FIG. 1 shows that the compounds disclosed herein are TSHR selective agonists because they do not exhibit agonist activity against LHCGR or FSHR.

図2は、本明細書に開示したいくつかの化合物の効能を示すTSHR安定発現HEK EM 293細
胞におけるデータを表すグラフである。 FIG. 2 is a graph representing data in TSHR stably expressing HEK EM 293 cells showing the efficacy of some compounds disclosed herein.

図3は、ヒト甲状腺細胞の初代培養における本明細書に開示したいくつかの化合物のア
ゴニスト活性に関するデータのグラフである。 FIG. 3 is a graph of data relating to agonist activity of several compounds disclosed herein in primary cultures of human thyroid cells.

本発明者らは、TSHRを安定発現するHEK EM 293細胞を使用して本明細書に開示した化合
物を同定したため、ヒト甲状腺細胞の初代培養におけるそれらの活性を確認しようとした
。TSHは、甲状腺の特異的遺伝子の発現を上方制御するため、サイログロブリン（TG）お
よびサイロペルオキシダーゼ（TP0）に関するmRNAの発現について本明細書に開示した化
合物の試験を行った。24時間後、TSHRの小分子アゴニストによっては、bTSHより低いレベ
ルにまでしかTPOのmRNA表現が増加しなかったのに対して、30μMの本明細書に開示した化
合物を用いたヒト甲状腺細胞の処理によりTGのmRNAの発現がTSHと同様のレベルにまで増
加した。これは、生理学的な程度にTSHRを発現するヒト甲状腺細胞の初代培養において、
これらのリガンドが活性であることを示している。 Since the present inventors have identified the compounds disclosed herein using HEK EM 293 cells that stably express TSHR, they have sought to confirm their activity in primary cultures of human thyroid cells. TSH tested the compounds disclosed herein for expression of mRNA for thyroglobulin (TG) and siloperoxidase (TP0) to upregulate the expression of thyroid specific genes. After 24 hours, treatment of human thyroid cells with 30 μM of the compounds disclosed herein, whereas some small molecule agonists of TSHR increased TPO mRNA expression only to levels below bTSH. Increased TG mRNA expression to the same level as TSH. In primary cultures of human thyroid cells that express TSHR to a physiological level,
These ligands are shown to be active.

（ヒト甲状腺細胞の初代培養）
甲状腺細胞組織のサンプルを、無関係な理由による手術中に、National Institutes of
Health Clinical Centerから得た。患者は、IRB 承認プロトコルに対しインフォームド
コンセントを提供し、またOffice of Human Subjects Researchを介して研究活動の承認
を経て匿名で材料を受領した。試料を氷上のHBSS中に維持し、細胞の単離を手術後4時間
以内に開始した。全ての調製を、無菌条件下で行った。組織サンプルは、少量のHBSSを用
いて10cmディッシュ中で微細な外科用鉗子およびハサミにより小片に細分化した。組織片
を15mlのチューブ(Falcon) に移し、HBSSで少なくとも3回洗浄した。その後、組織片を3
mg/mlのCollagenase Type IV（Gibco）を含むHBSSを用いて培養した。単離した細胞の懸
濁液が得られるまで、37℃の水浴中で一定の振盪で30分間以上酵素消化を行った。1000rp
mで5分間遠心分離した後、上澄みを除去し、細胞を10%のFBSを有する10 mlのDMEM中に再
懸濁した。細胞を10cmの組織培養ディッシュに播種し、5％CO₂の加湿培養器において37℃
で培養した。24時間後、非接着細胞を含む上澄みを除去した。甲状腺細胞の初代培養は、
5-7日以内にコンフルエントな単層を形成した。サイログロブリンおよびサイロペルオキ
シダーゼのmRNA発現を定量するために、実験の24時間前に、甲状腺細胞を6×10⁴細胞/ウ
ェルの密度で24-ウェルプレートに播種した。 (Primary culture of human thyroid cells)
Thyroid cell tissue samples were taken during surgery for unrelated reasons during the National Institutes of
Obtained from the Health Clinical Center. The patient provided informed consent to the IRB approved protocol and received material anonymously after approval of research activity through the Office of Human Subjects Research. Samples were kept in HBSS on ice and cell isolation was started within 4 hours after surgery. All preparations were performed under aseptic conditions. Tissue samples were subdivided into small pieces with fine surgical forceps and scissors in a 10 cm dish using a small amount of HBSS. Tissue pieces were transferred to 15 ml tubes (Falcon) and washed at least three times with HBSS. Then remove the tissue piece 3
Culture was performed using HBSS containing mg / ml Collagenase Type IV (Gibco). Enzymatic digestion was performed for 30 minutes or more in a 37 ° C. water bath with constant shaking until an isolated cell suspension was obtained. 1000rp
After centrifugation at m for 5 minutes, the supernatant was removed and the cells were resuspended in 10 ml DMEM with 10% FBS. Cells are seeded in 10cm tissue culture dishes and incubated at 37 ° C in a humidified incubator with 5% CO ₂
In culture. After 24 hours, the supernatant containing non-adherent cells was removed. The primary culture of thyroid cells is
A confluent monolayer formed within 5-7 days. To quantify thyroglobulin and siloperoxidase mRNA expression, thyroid cells were seeded in 24-well plates at a density of 6 × 10 ⁴ cells / well 24 hours prior to the experiment.

（定量RT-PCR）
全RNAを、RNeasy Micro kits (Qiagen)を用いて精製した。一本鎖cDNAを、High Capaci
ty cDNA Archive Kit (Applied Biosystems)を用いて調製した。RT-PCRを、100 ngの全RN
AおよびUniversal PCR Master Mix (Applied Biosystems)から調製したcDNAを用いる25μ
lの反応中で行った。サイログロブリンおよびサイロペルオキシダーゼ用のプライマーお
よびプローブは、Assay-on-Demand (Applied Biosystems)とした。定量RT-PCRの結果を、
RNA量の差異に関して補正するために、GAPDHについて規格化した。 (Quantitative RT-PCR)
Total RNA was purified using RNeasy Micro kits (Qiagen). Single-stranded cDNA, High Capaci
It was prepared using ty cDNA Archive Kit (Applied Biosystems). RT-PCR with 100 ng total RN
25μ using cDNA prepared from A and Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems)
Performed in l reaction. Primers and probes for thyroglobulin and siloperoxidase were Assay-on-Demand (Applied Biosystems). Quantitative RT-PCR results
GAPDH was normalized to correct for differences in RNA levels.

図4は、マウスにおける本明細書に開示した化合物の生体内活性のデータのグラフであ
る。 FIG. 4 is a graph of in vivo activity data for compounds disclosed herein in mice.

本発明者らは、本明細書に開示した化合物がヒトTSHRと類似の効能および効力でマウス
TSHRを活性化することをトランスフェクトした細胞を生体外で使用して示した。TSHRの周
知の生理機能はマウスおよびヒトにおいて類似であるため、マウスにおける生体内研究は
、本明細書に開示した化合物に関して可能な臨床応用を評価するための理想的な前臨床モ
デルを提供する。本発明者らは、腹腔内注射により投与したときに、本明細書に開示した
一つの化合物がTSHRを活性化することができるかどうかを評価した。20μgの本明細書に
開示した化合物と、2%DMSOを含むPBS中の30μgのTSHを無麻酔のC57 BL/6マウスに投与し
た。実験的なエンドポイントは、化合物またはTSHの投与の2時間後に麻酔されたマウスか
ら得た屠殺前の後眼窩採血から得られる血清中の全チロキシン（T4）の測定とした。全T4
レベルは、TSHおよび本明細書に開示した化合物の注射後に確かに上昇した。 We have determined that the compounds disclosed herein have similar potency and potency to human TSHR.
Cells transfected to activate TSHR have been shown to be used in vitro. Since the well-known physiological functions of TSHR are similar in mice and humans, in vivo studies in mice provide an ideal preclinical model for evaluating possible clinical applications for the compounds disclosed herein. We evaluated whether one compound disclosed herein can activate TSHR when administered by intraperitoneal injection. 20 μg of a compound disclosed herein and 30 μg TSH in PBS containing 2% DMSO were administered to unanesthetized C57 BL / 6 mice. The experimental endpoint was the measurement of total thyroxine (T4) in serum obtained from post-orbital bleeds before sacrifice obtained from mice anesthetized 2 hours after administration of compound or TSH. All T4
The level certainly increased after injection of TSH and the compounds disclosed herein.

本開示の化合物、組成物、および方法の原理を適用し得る多くの可能な実施形態を考慮
するに、例示する実施形態は単に好適な例であり、本発明の範囲の限定と解釈されるべき
でないと理解されたい。むしろ、本発明の範囲は、以下の請求項により定められる。我々
は、従って、これらの請求項の範囲および趣旨の範囲内にある全てを、我々の本発明とし
て請求する。 In view of the many possible embodiments in which the principles of the disclosed compounds, compositions and methods may be applied, the illustrated embodiments are merely preferred examples and should be construed as limiting the scope of the invention. I want you to understand. Rather, the scope of the invention is defined by the following claims. We therefore claim as our invention all that comes within the scope and spirit of these claims.

Claims (13)

次式Ｉ：

（式中のＲ^１−Ｒ^４はそれぞれ独立してＨ、ヒドロキシル、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、−Ｎ（Ｒ）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、または−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ）（Ｒは置換された基又はＨ）であり；
Ｒ^５は−ＣＨ_２−Ｐｈ（Ｐｈは置換されたフェニル）であり、
Ａは−Ｎ＝Ｃ（Ｒ^１５）−（左端の結合手が上記式Ｉのベンゼン環に結合し、右端の結合手が上記式Ｉのヘテロ原子窒素に結合する）または−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ^１５）−（左端の結合手が上記式Ｉのベンゼン環に結合し、右端の結合手が上記式Ｉのヘテロ原子窒素に結合する）を表し
Ａが−Ｎ＝Ｃ（Ｒ ^１５ ）−の場合、Ｒ ^５ におけるフェニルの置換基が、フェニル、メトキシ、トリフルオロメチル、メチル、又はヒドロキシアセトアミドメチルであり、
Ａが−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ ^１５ ）−の場合、Ｒ ^５ におけるフェニルの置換基が、クロロ、メトキシ、トリフルオロメチル、ヒドロキシアセトアミドメチルである;
Ｒ^１５は次式ＩＩで表され：

式中のＲ^６−Ｒ^９はそれぞれ独立してＨ、ヒドロキシル、アルキルまたはアルコキシであり;
Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１３、Ｒ^１４はそれぞれ独立してＨであり;
Ｒ^１２はアセトアミドであり、
ＸはＯ、ＳまたはＮ（Ｈ）である）
で表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩。 Formula I:

(H respectively ^R 1 -R ⁴ in the formula independently, hydroxyl, alkyl, alkoxy, Ha androgenic, -N (R) -C (O ) -R or -C (O) -N, (R ) ( R is a substituted group or H) ;
R ⁵ is —CH ₂ —Ph (Ph is substituted phenyl);
A is —N═C (R ¹⁵ ) — (the leftmost bond is bonded to the benzene ring of formula I and the rightmost bond is bonded to the heteroatom nitrogen of formula I) or —NH—CH (R ¹⁵ )-(the leftmost bond is bonded to the benzene ring of the above formula I, and the rightmost bond is bonded to the heteroatom nitrogen of the above formula I)
When A is —N═C (R ¹⁵ ) —, the phenyl substituent in R ⁵ is phenyl, methoxy, trifluoromethyl, methyl, or hydroxyacetamidomethyl;
When A is —NH—CH (R ¹⁵ ) —, the phenyl substituent in R ⁵ is chloro, methoxy, trifluoromethyl, hydroxyacetamidomethyl ;
R ¹⁵ is represented by Formula II:

Each of R ⁶ -R ⁹ is independently H, hydroxyl, alkyl or alkoxy;
R ¹⁰ , R ¹¹ , R ¹³ , R ¹⁴ are each independently H;
R ¹² is acetamide;
X is O, S or N (H))
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 前記Ｒ^９がＣ_１−Ｃ_４のアルコキシである請求項１に記載の化合物。 The compound of claim 1, wherein R ⁹ is C ₁ -C ₄ alkoxy. 前記ＸがＯである請求項１または２に記載の化合物。   The compound according to claim 1, wherein X is O. 前記Ｒ^１−Ｒ^４がそれぞれ独立してＨである請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。 The said R < ¹ > -R < ⁴ > is H each independently, The compound as described in any one of Claims 1-3. 前記Ｒ^１５が式ＩＩＩで表される請求項１に記載の化合物。
The compound according to claim 1, wherein R ¹⁵ is represented by formula III.
前記Ｒ^９がメトキシであり、
前記ＸがＯであり、
前記Ａが−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ^１５）−であり、
前記Ｒ^１−Ｒ^４及びＲ^７−Ｒ^８がそれぞれ独立してＨである請求項１に記載の化合物。 R ⁹ is methoxy;
X is O;
A is —NH—CH (R ¹⁵ ) —,
The compound according to claim 1, wherein each of R ¹ -R ⁴ and R ⁷ -R ⁸ is independently H. 前記Ｒ^９がメトキシであり、
前記ＸがＯ又はＳである請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。 R ⁹ is methoxy;
Said X is O or S, The compound as described in any one of Claims 1-5. 診断学的に有効な量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む、甲状腺ガン検出用の薬剤。 An agent for detecting thyroid cancer, comprising a diagnostically effective amount of the compound according to any one of claims 1 to 7 , or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 治療学的に有効な量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む、骨変性障害の治療用または予防用の薬剤。 An agent for the treatment or prevention of bone degenerative disorders, comprising a therapeutically effective amount of the compound according to any one of claims 1 to 7 , or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 治療学的に有効な量の請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む、甲状腺ガン治療用の薬剤。 A medicament for treating thyroid cancer comprising a therapeutically effective amount of the compound according to any one of claims 1 to 7 , or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 転移性疾患の所見がない被検体の甲状腺全摘術に続いて甲状腺残部を切除するために式Ｉの化合物と同時投与される放射性ヨウ素を更に含む請求項１０に記載の薬剤。 11. The medicament of claim 10 , further comprising radioiodine co-administered with a compound of formula I to excise the rest of the thyroid following a total thyroidectomy of a subject without evidence of metastatic disease. 請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む、甲状腺刺激ホルモン受容体活性化用の薬剤。 A drug for activating thyroid stimulating hormone receptor, comprising the compound according to any one of claims 1 to 7 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 前記化合物が経口投与される、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の薬剤。 13. A medicament according to any one of claims 8 to 12 , wherein the compound is administered orally.