JP6034834B2

JP6034834B2 - 抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物およびその漢方薬草抽出物により製造された抗子宮筋腫薬物の製造方法

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Publication number: JP6034834B2
Application number: JP2014137330A
Authority: JP
Inventors: 世強李; 崇喜劉; 怡旻劉; 家茹張
Original assignee: 康力生技股▲分▼有限公司
Priority date: 2014-07-03
Filing date: 2014-07-03
Publication date: 2016-11-30
Anticipated expiration: 2034-07-03
Also published as: JP2016013991A

Description

本発明は、漢方薬草合成物に関するもので、特に、抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物に係るもので、さらに、本発明は漢方薬草抽出物により製造された抗子宮筋腫薬物の製造方法に関するものである。

子宮筋腫（uterine fibroid）は子宮筋層（myometrium）から発生する良性の腫瘍（leiomyoma）で、３０才から５０才の女性に多く発生され、大多数の子宮筋腫には明らかな症状は見られない。しかしながら、子宮筋腫の増長に従い、重い月経痛（heavy painful periods）、異常な産婦人科の出血（abnormal gynecologic hemorrhage）が生じるだけではなく、甚だしい場合は不妊（infertility）の現象が生じてしまうかもしれず、この時には子宮筋腫摘出（uterine myomectomy）手術によって除去することになる。

子宮筋腫の病症を改善するのに用いられる従来の薬物として、例えば、非ステロイド抗炎症薬（non-steroidal anti-inflammatory drug、以下、ＮＳＡＩＤと称する）を利用して子宮筋腫から発生する疼痛を治療したり、または経口避妊薬（oral contraceptive pill、以下、ＯＣＰと称する）を使用して出血の現象を減らしたりする。この他に、生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン類似物（gonadotropin-releasing hormone analog、以下、ＧｎＲＨ類似物と称する）を服用して体内のエストロゲン（estrogen）の含量を低く抑えることにより、子宮筋腫の生長を抑制することができる。

しかしながら、上記ＧｎＲＨ類似物を長期に服用すると、骨粗鬆症（osteoporosis）または閉経後症候（postmenopausal symptom）などの症状が生じる虞があり、そして投薬を停止した後、子宮筋腫は依然として生長し続けるかもしれないため、特定患者だけの使用を勧めている。そして、上述した従来の薬物は例えば、米国公開第２００６／０２５１５８１号に掲示されている（特許文献１）。

これにより、子宮筋腫の病症に対応するため、依然として漢方薬草合成物を提供する必要がある。

米国公開第２００６／０２５１５８１号公報

本発明は、このような問題点に鑑みて発明されたものであって、その目的とするところは、子宮筋腫の生長を抑制することができると抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物を提供することにある。

本発明の第二の目的は、上記漢方薬草合成物から抽出した活性成分によって子宮筋腫の病状を改善し、患者の生活品質を高めることができる抗子宮筋腫薬物に用いられる漢方薬草合成物の抽出物を提供することにある。

上記目的を達成するために、本発明による抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物は、質量百分率で２５％〜７５％の牛樟茸、２０．８％〜６２．５％の黄耆および４．２％〜１２．５％の益母草を含む。

また、本発明による抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物は、上記漢方薬草合成物に質量百分率で７５％の牛樟茸を含むこともできる。また、上記漢方薬草合成物に質量百分率で２０．８％の黄耆を含むこともできる。また、上記漢方薬草合成物に質量百分率で４．２％の益母草を含むこともできる。また、上記漢方薬草合成物は質量百分率で７５％の牛樟茸、２０．８％の黄耆および４．２％の益母草を含むこともできる。

また、本発明による抗子宮筋腫薬物を製造するのに用いられる漢方薬草の抽出物は、その漢方薬草の抽出物は下記の段階を含む方法によって製造され、上記の何れかの組成を有する漢方薬草合成物を提供する段階と、５０℃〜８０℃で９５％の酒精によって上記漢方薬草合成物を８時間〜１２時間で抽出する段階と、抽出産物に対して濃縮を行うことにより、上記漢方薬草の抽出物を獲得する段階とを含み、上記漢方薬草合成物と上記９５％の酒精の重量体積比は１：２で、上記牛樟茸は子実体で、上記黄耆は根部で、上記益母草は地上部位である。

本発明によれば、抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物は、牛樟茸、黄耆および益母草の組成配分により、需要者の体内のエストロゲンと黄体ホルモンの含量を低く抑えることができるため、子宮筋腫の生長を抑制できるという効果を達成することができるという利点がある。

本発明によれば、抗子宮筋腫薬物を製造するのに用いられる漢方薬草の抽出物は、牛樟茸、黄耆および益母草からの活性成分を抽出し、子宮筋腫の生長を有効に抑制することにより、患者は子宮筋腫の増長による月経痛、異常な出血などの病症を免除することができ、さらに患者の生活品質を高めるという効果を達成することができるという利点がある。

図１は、第Ｃ０組大鼠の子宮切片のＨ＆Ｅ染色結果である。図２は、第Ｃ０組大鼠の子宮角切片のＨ＆Ｅ染色結果である。図３は、第Ｃ１組大鼠の子宮切片のＨ＆Ｅ染色結果である。図４は、第Ｃ１組大鼠の子宮角切片のＨ＆Ｅ染色結果である。

本発明の実施の形態について、以下、図面を参照して説明する。

本発明の漢方薬草合成物は牛樟茸（Antrodia cinnamomea）、黄耆（Astragali radix）および益母草（Leonurus japonicus）を含み、牛樟茸、黄耆および益母草の組成配分によって上記漢方薬草合成物は子宮筋腫の生長の活性を抑制することができる。

さらに詳しく言えば、上記漢方薬草合成物は質量百分率で２５％〜７５％の牛樟茸、２０．８％〜６２．５％の黄耆および４．２％〜１２．５％の益母草を含み、上記漢方薬草合成物は、好ましくは、さらに質量百分率で７５％の牛樟茸、２０．８％の黄耆および４．２％の益母草を含む。これにより、上記漢方薬草合成物は多種の活性成分の共同作用によって子宮筋腫の生長を抑制し、さらに子宮筋腫患者による月経痛、異常な出血などの病症を免除することができる。

また、牛樟茸は皿培養式の牛樟茸子実体を選択して使用し、多くのテルペン類が含まれる。黄耆は選択的に荳科植物のモンゴルキバナオウギ（Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. Var. mongholicus (Bge.) Hsiao）または膜莢キバナオウギ（Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge．）の乾燥根からなり、豊富なグリコシド、多糖類、フラボン化合物、アミノ酸と微量元素が含有される。益母草は選択的に植物の乾燥の地上部分からなり、レオヌリン（Leonurine、Ｃ₁₄Ｈ₂₁Ｎ₃Ｏ₅）、レオヌリジン（Leonuridine、Ｃ₁₅Ｈ₂₄Ｏ₉）、スタキドリンなどの多種のアルカロイドが含有され、さらに安息香酸、塩化カリウム、ラウリン酸、リノレン酸、オレイン酸、ビタミンＡとフラボン物質が含有される。

本発明の漢方薬草合成物は、子宮筋腫の生長を有効に抑制することができるため、子宮筋腫の抑制を補助する一種の活性成分とすることができ、好ましくは、上記漢方薬草合成物から抽出して獲得される漢方薬草の抽出物を、子宮筋腫を予防または治療する薬物または健康食品の製造に応用することができる。上記漢方薬草の抽出物は医薬学で接受できる担体または賦形剤と組み合せて一つの医薬合成物として形成することができる。また、上記漢方薬草の抽出物はいかなる食用に便利な形態にも製造することができる。例えば、錠剤、任何方便食用の型式、如錠剤、カプセル剤、粉薬、粒剤または液剤など、或いは、上記漢方薬草の抽出物をその他の食品または飲料と組み合せることにより、一つの食用の態様として生物体に経口して服用するように提供することができる。

また、上記漢方薬草の抽出物は、好ましくは、以下の段階を含む方法によって製造される。上述した漢方薬草合成物を提供する段階と、５０℃〜８０℃で９５％の酒精によって上記漢方薬草合成物を８時間〜１２時間で抽出する段階と、抽出の産物に対して濃縮を行うことにより、上記漢方薬草の抽出物を獲得する段階とを含む。

さらに詳しく言えば、上記漢方薬草合成物は重量体積比が１：２の比率で上記９５％の酒精と混合することにより、上記漢方薬草合成物に多く含まれる多種の活性成分は上記９５％の酒精に溶出することができる。

本実施例においては、５００グラムの漢方薬草合成物で１リットルの９５％の酒精で抽出を行い、６０℃の一定温度で１０時間還流し、繰り返し３回の抽出を行い、最後に真空ろ過、減圧濃縮と冷凍乾燥によって上記漢方薬草の抽出物を獲得する。

また、上記漢方薬草の抽出物は一人の需要者に投与することができ、例えば、需要者の体重１キログラム当り３００ミリグラムの上記漢方薬草の抽出物を毎日投与し、かつ２８日間連続に投与することにより、各種の活性成分は上記需要者の体内において作用することができるため、子宮筋腫の生長を抑制することができる。

本発明の漢方薬草合成物は確かに抗子宮筋腫の活性を有することを証明すべく、下記の試験を行った。

（Ａ）漢方薬草の抽出物の製造および活性成分の含量の検出
本試験において、各組の漢方薬草合成物の組成比率は表１に示す如くであり、そして上記漢方薬草の抽出物の製造方法は上述したとおりで、それぞれ５００グラムの各組の漢方薬草合成物を１リットルの９５％の酒精で抽出を行った後、ろ過、濃縮そして冷凍乾燥を経てから、直ちに各組の漢方薬草の抽出物を獲得した。

それぞれ０．２グラムの各組の漢方薬草の抽出物を量り取って一個の螺旋試験管の中に入れ、５ｍＬのメタノールを加え、超音波で１５分間振動させ、それから３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、５ｍＬの上清液を取って一個のきれいな試験管に入れ、それから１００℃で湯煎して乾燥されるまで加熱する。

引き続き、Purospher ＳＴＡＲ (Merck) ＲＰ−１８ｅ（５μｍ）２５０mm×４mmの管柱を選択的に使用して分析を行うことにより、４７：５３の体積比でアセトニトリル（Acetonitrile、以下、ＡＣＮと称する）と０．０８５％のりん酸溶液を混合して移動相とし、流速は１ｍＬ／ｍｉｎで、検出波長は２５４ｎｍの吸光度で、さらに各組のトリテルペノイドが占める総面積の百分率を分析した結果を表２に示す。

また、さらにガラクトースを標準品とし、その濃度と吸光度を利用して標準曲線を製造する。引き続き各組の漢方薬草の抽出溶液を配置し、１ｍＬの各組の漢方薬草の抽出物を取って１ｍＬの５％のフェノール溶液に加え、それから５ｍＬの濃硫酸を加え、１０分間放置した後、振動によって均一に混合させ、さらに分光光度計を利用して各組の４９０ｎｍにおける吸光度を測定し、それから標準曲線によってその濃度を計算した。その結果を表２に記録する。

上述した試験結果に基づき、各組の漢方薬草の抽出物は全て多くのトリテルペノイドと多糖類を含み、その内に第Ａ３組の含量が最高である。

（Ｂ）子宮の肉腫細胞に対する生存影響
本試験においては、選択的に人類の子宮の肉腫細胞（MES-SA cells）を使用し、食品工業発展研究所（BCRC 60333）から購入し、上記子宮の肉腫細胞は１．５ｍＭのＬ−グルタミン酸（L-Glutamine）と１０％の牛胎児血清（ＦＢＳ）の９０％ＭｃＣｏｙ’ｓ５ａを含有する培養液に培養され、さらに培養温度３７℃、二酸化炭素の濃度５％および湿度９５％の培養箱に放置し、二日毎に一回の新鮮な培養液に取り替えた。

上記子宮の肉腫細胞は継代培養の時に先ず培養液と細胞を１０００ｒｐｍで５分間遠心分離させ、上清液を除去した後、再び新しい培養液を加え、さらに１０センチのペトリ皿において細胞数が約１×１０５〜１×１０６cell／mLであるように維持させる。

本試験を行う時、すでに８〜９割まで生長した上記子宮の肉腫細胞が入っている１０ｃｍのペトリ皿を取り出し、すでに変色した培養液を除去し、８ｍＬのＰＢＳ緩衝液で細胞を一回洗い流し、加入トリプシン／エチレンジアミン四酢酸（Trypsin／EDTA）を加えて１〜３分間反応した後、ペトリ皿を軽く揺らして細胞を壁から脱落させ、すでに再加温された培養液を加え、細胞を軽く流し散らし、それから細胞を含んだ培養液をそれぞれ遠心分離管の中に入れ、１５００ｒｐｍで１０分間遠心分離させた。分離溶液の上清液を除去した後、再び血清を含んだ培養液を加えて細胞を均一に分散させ、さらに２０μＬの細胞を取り出し、２０μＬの０．０４％のトリパン青（Trypan Blue）を加えて染色を行い、それから細胞計数器を入れ、顕微鏡で生細胞の数を計数した。細胞の生存率は８５％より小さくならない状態であれば、後続の試験を行うことができる。

血清を含んだ培養液で上記子宮の肉腫細胞の濃度を１×１０５cell／mLになるように調整し、さらに１００μＬの上記子宮の肉腫細胞をそれぞれ取って９６孔の平皿に接種し、全ての孔に１×１０４の細胞を含有させ、さらに温度が３７℃で、二酸化炭素の濃度が５％の培養箱で夜通しの培養を行った。

２４時間の培養を経た後、１００μＬの表３に示す漢方薬草の抽出物（２mg／mLの濃度で、ＤＭＳＯの中に溶けている）をそれぞれ加え、均一に混合させた後、温度が３７℃で、二酸化炭素の濃度が５％の培養箱で引き続き２４時間夜通しの培養を行った。

２４時間後、培養液を移動して除去し、りん酸緩衝液で洗い流した後、再び１００μＬのＣＣＫ−８を含有する新鮮な培養液を加え、温度が３７℃で、二酸化炭素の濃度が５％の培養箱で放置して２時間反応した後、５分間振って揺らした後、全ての孔が４５０ｎｍの波長における吸光度を検出し、さらにいかなる薬物の処理を行っていない制御組の吸光度の結果に基づいて生存率を計算した。その結果が表３に示されている。

表３を参照すると、上述した試験の結果に基づき、上記漢方薬草の抽出物は確かに子宮の肉腫細胞の生長を抑制できる能力を有し、かつ第Ａ３組の漢方薬草の抽出物は最良な効力を有するる。そのため、引き続き上記第Ａ３組の漢方薬草の抽出物を用いて後続の試験を行った。

（Ｃ）子宮の肉腫に対する大鼠の影響
本試験においては選択的に財団法人国家実験研究院国家実験動物センターから購入したＷｉｓｔａｒの雌性大鼠を使用し、上記大鼠達は全て８週以上の週齢で、体重が１８０グラム〜１９０グラムの間に介在するものである。上記大鼠達は大仁科技大学の動物センターで飼育され、室温が２０℃〜２２℃に維持される動物室で、照明時間と暗黒時間はそれぞれ１２時間で、上記大鼠達は自由に食事と飲水することができる環境下で飼育された。

それぞれ胃管を経てＲＯ水（第Ｃ０組）または第Ａ３組の漢方薬草の抽出物（第Ｃ１組）を大鼠（投予される投薬量は毎日１キログラム毎の大鼠に３００ミリグラムの漢方薬草の抽出物を投与する）に投与し、同時に腹腔注射によってエストロゲン（投薬量は２００マイクログラム/回である）を投与し、毎日に各組の大鼠の体重、摂食量と飲水量を記録し、４週間後、腹腔の動脈から採血し、血液中のエストロゲンと黄体ホルモン（progesterone）の含量を測定し、さらに子宮を取り出し、組織切片とＨ＆Ｅ染色（hematoxylin-eosin）を行った。その結果はそれぞれ表４と図１〜図４に示すとおりである。

表４を参照すると、本試験における各組の大鼠の２８日後の体重、摂食量、飲水量は明らかな差異を有せず、そして上記漢方薬草の抽出物を投与した第Ｃ１組の大鼠では血液中のエストロゲンと黄体ホルモンの含量は明らかに降下（エストロゲンに対する抑制率は４７．５±４．８％に達し、そして黄体ホルモンに対する抑制率は３３．１±５．１％である）になるため、上記漢方薬草の抽出物は確かに体内のエストロゲンと黄体ホルモンの含量を低く抑えることができる能力を有することを表す。

図１は、第Ｃ０組大鼠の子宮切片のＨ＆Ｅ染色結果を示し、図２は、第Ｃ０組大鼠の子宮角切片のＨ＆Ｅ染色結果を示している。図１、２を参照すると、子宮の平滑筋細胞は肥大状態（hypertrophy）に形成され、エオジン嗜好性細胞質を有し、細胞の境界は比較的はっきりせず、排列が交錯して混乱しており、そして細胞有糸***の現象を観察することができず、第Ｃ０組の大鼠に子宮筋腫が生じることに成功したことを表している。

図３は第Ｃ１組大鼠の子宮切片のＨ＆Ｅ染色結果で、図４は第Ｃ１組大鼠の子宮角切片のＨ＆Ｅ染色結果である。図３、４を参照すると、第Ｃ１組の大鼠の組織切片の染色の結果かる知ることができ、上記漢方薬草の抽出物を経口服用すると子宮の平滑筋の増長と肥大を抑制することに成功し、そして上記漢方薬草の抽出物によって子宮の平滑筋の増長と肥大現象の活性を確実に改善することができるを表している。

総合すると、本発明の抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物は、牛樟茸、黄耆および益母草の組成配分により、需要者の体内のエストロゲンと黄体ホルモンの含量を低く抑えることができるため、子宮筋腫の生長を抑制できるという効果を達成することができる。

また、本発明の抗子宮筋腫薬物を製造するのに用いられる漢方薬草の抽出物によれば、牛樟茸、黄耆および益母草からの活性成分を抽出し、子宮筋腫の生長を有効に抑制することにより、患者は子宮筋腫の増長による月経痛、異常な出血などの病症を免除することができ、さらに患者の生活品質を高めるという効果を達成することができる。

本発明は、その精神および必須の特徴事項から逸脱することなく他のやり方で実施することもできる。従って、本明細書に記載した好ましい実施形態は例示的なものであり、限定を意図するものではない。

Claims

質量百分率で２５％〜７５％の牛樟茸、２０．８％〜６２．５％の黄耆および４．２％〜１２．５％の益母草を含むことを特徴とする抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物。
上記漢方薬草合成物は質量百分率で７５％の牛樟茸を含むことを特徴とする請求項１に記載の抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物。
上記漢方薬草合成物は質量百分率で２０．８％の黄耆を含むことを特徴とする請求項１に記載の抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物。
上記漢方薬草合成物は質量百分率で４．２％の益母草を含むことを特徴とする請求項１に記載の抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物。
上記漢方薬草合成物は質量百分率で７５％の牛樟茸、２０．８％の黄耆および４．２％の益母草を含むことを特徴とする請求項１に記載の抗子宮筋腫用の漢方薬草合成物。
抗子宮筋腫薬物を製造するのに用いられる漢方薬草の抽出物が、
請求項１〜５の何れか１項に記載される漢方薬草合成物を提供する段階と、
５０℃〜８０℃で９５％の酒精によって上記漢方薬草合成物を８時間〜１２時間で抽出する段階と、
抽出の産物に対して濃縮を行うことにより、上記漢方薬草抽出物を獲得する段階と
を含む方法によって製造され、
上記漢方薬草合成物と上記９５％の酒精の重量体積比は１：２であり、上記牛樟茸は子実体、上記黄耆は根部、上記益母草は地上部位である
ことを特徴とする漢方薬草抽出物により製造された抗子宮筋腫薬物の製造方法。