JP5954790B2 - Composition for treating cancer pain and use thereof - Google Patents
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Description
本発明は、癌性疼痛を処置するための組成物およびその利用に関する。 The present invention relates to a composition for treating cancer pain and use thereof.
血小板活性化因子（Platelet-Activating factor；ＰＡＦ）は、好塩基球由来の血小板凝集因子として発見されたリン脂質である。刺激に応じて好中球、単球、好塩基球、血管内皮細胞などの種々の細胞によって産生されるＰＡＦは、免疫系細胞の活性化（白血球浸潤作用、好酸球遊走作用、好中球遊走作用等)、強い血管透過性亢進作用や気管支収縮作用を有している。また、ＰＡＦ受容体遺伝子改変マウスの解析などによって、ＰＡＦは全身アナフィラキシーショックや、急性肺障害（acute lung injury）、急性呼吸窮迫症候群（acute respiratory distress syndrome；ＡＲＤＳ）での肺浮腫や気管支喘息の重要なメディエーターとされている。中枢神経系においても、ＰＡＦは海馬長期増強の惹起、記憶の促進、興奮性シナプス伝達の促進、ＰＡＦアンタゴニストによる虚血後の神経細胞死の保護など、神経成長、神経伝達、あるいは神経障害、さらには脳の発育に関与する。 Platelet-activating factor (PAF) is a phospholipid discovered as a basophil-derived platelet aggregation factor. PAF produced by various cells such as neutrophils, monocytes, basophils, and vascular endothelial cells in response to stimulation activates immune system cells (leukocyte infiltration, eosinophil migration, neutrophils) Migratory action, etc.), strong vascular permeability enhancing action and bronchoconstriction action. In addition, analysis of PAF receptor gene-modified mice revealed that PAF is important for pulmonary edema and bronchial asthma in systemic anaphylactic shock, acute lung injury, and acute respiratory distress syndrome (ARDS). It is considered as a mediator. Even in the central nervous system, PAF induces long-term potentiation of hippocampus, promotes memory, promotes excitatory synaptic transmission, protects neuronal cell death after ischemia with PAF antagonists, nerve growth, neurotransmission, or neuropathy. Is involved in brain development.
このように、ＰＡＦは、１９７０年代初頭に発見されて以来、多くの注目を集めている。炎症性またはアレルギー性の疾患や気管支喘息、脳血管障害、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、ショック等の有望な治療薬として、多くのＰＡＦアンタゴニスト（ギンコライド；ginkgolide類を含む）が研究および開発されてきている。 Thus, PAF has received much attention since it was discovered in the early 1970s. Research and development of many PAF antagonists (including ginkgolides; ginkgolides) as promising therapeutic agents for inflammatory or allergic diseases, bronchial asthma, cerebrovascular disorders, disseminated intravascular coagulation syndrome (DIC), shock, etc. Has been.
本発明者らは、これまでに、ＰＡＦの生理機能および病態生理に関する研究を長年行っている。中でも、脊髄腔内に投与した極めて微量（０．１ｐｇ）のＰＡＦが、神経障害性疼痛の指標である痛覚過敏症状や触覚性疼痛（アロディニア）症状を誘発すること、この作用が３−ブロモ−５−（Ｎ−フェニル−Ｎ−（２−（（２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−２−イソキノリルカルボニルオキシ）エチル）カルバモイル）エチル）カルバモイル）−１−プロピルピリジニウム・ニトラート（以下、ＴＣＶ−３０９ともいう。）をはじめとするＰＡＦ受容体拮抗薬で消失することを明らかにした（非特許文献１参照）。脊髄損傷時には脊髄においてＰＡＦが高濃度で遊離されることなどから、ＰＡＦが脊髄損傷時の神経障害性疼痛の原因を成す可能性を示唆している。そして、このＰＡＦ受容体刺激の下流に、グルタミン酸や、ＮＯ／ｃＧＭＰを介する、抑制性グリシン神経活性を抑制することが痛みを増強するという機序を明らかした（非特許文献２参照）。さらに病態生理学的疼痛の発症におけるＰＡＦの役割について、ＰＡＦアンタゴニストを用いた薬理学的検討から、ＰＡＦが、神経障害性疼痛や慢性炎症性疼痛、急性炎症性疼痛、さらには熱刺激または機械刺激等の短時間の侵害刺激による疼痛など、原因の異なる種々の疼痛の発症および維持に重要な役割を果たしていることを明らかにした（非特許文献３参照）。同様に、ＰＡＦアンタゴニストの鎮痛作用は脊髄損傷モデルにおいても示された（非特許文献４参照）。さらに、ＲＮＡ干渉による脊髄ＰＡＦ受容体ノックダウンによっても神経障害性の疼痛が抑制されることから、ＰＡＦアンタゴニストの鎮痛作用は、ＰＡＦアンタゴニストの何らかの非特異的作用によるのではなく、特異的ＰＡＦ受容体阻害に基づいて発現していることを確認している。 The present inventors have conducted research on the physiological function and pathophysiology of PAF for many years. Among them, a very small amount (0.1 pg) of PAF administered into the spinal cavity induces hyperalgesia symptoms and tactile pain (allodynia) symptoms, which are indicators of neuropathic pain, and this action is 3-bromo- 5- (N-phenyl-N- (2-((2- (1,2,3,4-tetrahydro-2-isoquinolylcarbonyloxy) ethyl) carbamoyl) ethyl) carbamoyl) -1-propylpyridinium nitrate (Hereinafter also referred to as TCV-309) and other PAF receptor antagonists have been clarified (see Non-Patent Document 1). The fact that PAF is released at a high concentration in the spinal cord at the time of spinal cord injury suggests that PAF may cause neuropathic pain at the time of spinal cord injury. And downstream of this PAF receptor stimulation, the mechanism that suppression of inhibitory glycine nerve activity via glutamic acid or NO / cGMP enhances pain was clarified (see Non-Patent Document 2). Furthermore, regarding the role of PAF in the pathogenesis of pathophysiological pain, PAF is considered to be neuropathic pain, chronic inflammatory pain, acute inflammatory pain, thermal stimulation or mechanical stimulation, etc. based on pharmacological studies using PAF antagonists. It has been clarified that it plays an important role in the onset and maintenance of various pains with different causes, such as pain caused by short-term nociceptive stimulation (see Non-Patent Document 3). Similarly, the analgesic action of PAF antagonists has been shown in a spinal cord injury model (see Non-Patent Document 4). Furthermore, since neuropathic pain is also suppressed by spinal PAF receptor knockdown due to RNA interference, the analgesic action of the PAF antagonist is not due to any nonspecific action of the PAF antagonist, but to a specific PAF receptor. It is confirmed that it is expressed based on inhibition.
疼痛の中枢への伝達は、一次知覚神経から二次知覚神経の脊髄後角での中継点で下行性疼痛抑制系により制御を受けている。即ち、下行性疼痛抑制経路は中脳中心灰白質（ＰＡＧ）および延髄吻側腹内側部（ＲＶＭ）のニューロンが脊髄後角に下行線維を伸ばし、内因性のオピオイド、ノルアドレナリンやセロトニンなどの伝達物質を放出し、神経を直接的もしくは間接的に抑制する。間接的抑制系には、オピオイド、ＧＡＢＡ、グリシンといった抑制性ニューロンが介在し、一次知覚神経や二次知覚神経の興奮を抑制する。オピオイド系鎮痛薬（例えば、モルヒネ、オキシコドン、フエンタニル、ペチジンなどの麻薬性鎮痛薬；ベンタゾシン、トラマゾール、ブプレノルフィン、エプタゾシン、ブトルファノールなどの非麻薬性鎮痛薬）、三環系抗うつ薬、選択的セロトニン・再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）やセロトニン・ノルアドレナリン再取り込み阻害薬（ＳＮＲＩ）の鎮痛作用にはこれら下行性疼痛抑制系を賦活する機序が重要である。神経障害時には，抑制性神経伝達系の機能が低下することが知られている。ＰＡＦアンタゴニストはグリシン抑制のＰＡＦによる減弱に拮抗して下行性疼痛抑制系を賦活することが、上記のような原因の異なる疼痛に対し、広い鎮痛スペクトルを示し得る原因と考えられる。 Transmission of pain to the center is controlled by the descending pain suppression system at the relay point at the dorsal horn of the secondary sensory nerve from the primary sensory nerve. In other words, the descending pain suppression pathway consists of central brain gray matter (PAG) and medullary rostral ventral medial (RVM) neurons that extend descending fibers to the dorsal horn of the spinal cord, and mediators such as endogenous opioids, noradrenaline and serotonin , And directly or indirectly suppress the nerve. The indirect inhibitory system is mediated by inhibitory neurons such as opioids, GABA, and glycine, and suppresses the excitement of the primary sensory nerve and the secondary sensory nerve. Opioid analgesics (for example, narcotic analgesics such as morphine, oxycodone, fuentanyl, pethidine; non-narcotic analgesics such as bentazosin, tramazole, buprenorphine, eptazosin, butorphanol), tricyclic antidepressants, selective serotonin The mechanism for activating these descending pain suppression systems is important for the analgesic action of reuptake inhibitors (SSRI) and serotonin / noradrenaline reuptake inhibitors (SNRI). It is known that the function of the inhibitory neurotransmission system is reduced during neuropathy. It is considered that the PAF antagonist antagonizes the attenuation by glycine-suppressed PAF and activates the descending pain suppression system, which can show a broad analgesic spectrum for pains having different causes as described above.
神経障害性疼痛の治療に有効であるＰＡＦアンタゴニストの、さらなる機能を見出すことを目的とする。 The aim is to find out further functions of PAF antagonists that are effective in the treatment of neuropathic pain.
本発明者らは、癌性疼痛に対するＰＡＦアンタゴニストの効果を検討したところ、ＰＡＦアンタゴニストが、単独であっても強力であり、かつ癌性疼痛に対して持続時間の長い緩和作用を有していること、モルヒネの鎮痛効果を増強しかつモルヒネの副作用を軽減し得、その結果、モルヒネの用量を減少させることができること、癌性疼痛に対するモルヒネの作用の持続時間を延長できることを見出し、本発明を完成するに至った。これまで、ＰＡＦアンタゴニストが癌性疼痛の緩和に有効である旨の報告は存在しない。 When the present inventors examined the effect of the PAF antagonist with respect to cancer pain, even if PAF antagonist alone is powerful, it has a long duration relieving action with respect to cancer pain. It has been found that the analgesic effect of morphine can be enhanced and the side effects of morphine can be reduced, and as a result, the dose of morphine can be reduced, and the duration of the action of morphine on cancer pain can be extended. It came to be completed. To date, there has been no report that PAF antagonists are effective in alleviating cancer pain.
本発明の第１の組成物は、癌性疼痛を処置するために、ＰＡＦアンタゴニストを含有していることを特徴としている。 The first composition of the present invention is characterized by containing a PAF antagonist in order to treat cancer pain.
上記構成によって、既存の癌性疼痛治療薬と比較して強力な疼痛緩和作用を迅速に得ることができるとともに、顕著に長く持続される癌性疼痛緩和作用を得ることができる。 By the said structure, while being able to obtain a powerful pain relieving effect rapidly compared with the existing cancer pain therapeutic agent, the cancer pain relieving effect sustained remarkably long can be obtained.
本発明の第１の組成物は、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子をさらに含有していてもよい。 The first composition of the present invention may further contain a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord.
上記構成によって、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子（例えば、モルヒネ等のオピオイド系鎮痛薬、ＳＳＲＩ（選択的セロトニン再取り込み阻害薬）、ＳＮＲＩ（選択的セロトニン・ノルアドレナリン再取り込み阻害薬）等）の機能を増強することができるので、上記因子の使用量を低減させることができるとともに、上記因子の副作用を抑制することができる。 By the above configuration, factors that enhance the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord (for example, opioid analgesics such as morphine, SSRI (selective serotonin reuptake inhibitor), SNRI (selective serotonin / noradrenaline reuptake inhibitor) The function of the drug) and the like) can be enhanced, so that the amount of the factor used can be reduced and the side effects of the factor can be suppressed.
本発明の第２の組成物は、疼痛を処置するために、ＰＡＦアンタゴニストを含有しており、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子と併用されるために用いられることを特徴としており、上記因子をさらに含有していることが好ましい。本組成物において、上記疼痛は癌性疼痛であることが好ましい。 The second composition of the present invention contains a PAF antagonist to treat pain, and is used to be used in combination with a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord. It is preferable that the above-mentioned factors are further contained. In the present composition, the pain is preferably cancer pain.
上記構成によって、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の機能を増強することができるので、上記因子の使用量を低減させることができるとともに、上記因子の副作用を抑制することができる。なお、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を適用する前に被験体に適用されることが好ましく、反復投与されることもまた好ましい。 With the above configuration, the function of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord can be enhanced, so that the amount of the factor used can be reduced and the side effects of the factor can be suppressed. it can. In addition, it is preferable to apply to a subject before applying the factor which enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord, and repeated administration is also preferable.
本発明の第１のキットは、疼痛を処置するために、ＰＡＦアンタゴニスト、および、必要に応じて、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を備えていることを特徴としており、疼痛を処置するための使用手順が記載された指示書をさらに備えていることが好ましい。本キットにおいて、上記疼痛は癌性疼痛であることが好ましく、癌性疼痛を処置するための使用手順が記載された指示書をさらに備えていることがより好ましい。 The first kit of the present invention is characterized by comprising a PAF antagonist and optionally a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord to treat pain, It is preferred to further comprise instructions describing the use procedures for treating pain. In this kit, the pain is preferably cancer pain, and more preferably further provided with instructions describing the use procedure for treating cancer pain.
上記構成によって、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の機能を増強することができるので、上記因子の使用量を低減させることができるとともに、上記因子の副作用を抑制することができる。なお、第１のキットに備えられたＰＡＦアンタゴニストは、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を適用する前に被験体に適用されることが好ましく、反復投与されることもまた好ましい。 With the above configuration, the function of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord can be enhanced, so that the amount of the factor used can be reduced and the side effects of the factor can be suppressed. it can. The PAF antagonist provided in the first kit is preferably applied to the subject before applying a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord, and may be repeatedly administered. preferable.
本発明の第２のキットは、上述した組成物を調製するために、ＰＡＦアンタゴニスト、および、必要に応じて、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を備えていることを特徴としており、上述した組成物を調製するための使用手順が記載された指示書をさらに備えていることが好ましい。 The second kit of the present invention comprises a PAF antagonist and, optionally, a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord in order to prepare the above-described composition. It is preferable to further include instructions describing the use procedures for preparing the above-described composition.
本発明の方法は、疼痛を処置するために、有効量のＰＡＦアンタゴニストを被験体に投与する工程を包含する。本発明の方法に用いられるＰＡＦアンタゴニストは、化合物として提供されても上述した組成物の態様にて提供されてもよく、また上述したキットに備えられた一材料として提供されてもよい。 The methods of the invention include administering to a subject an effective amount of a PAF antagonist to treat pain. The PAF antagonist used in the method of the present invention may be provided as a compound, in the form of the composition described above, or may be provided as a material provided in the kit described above.
上述したように、ＰＡＦアンタゴニストは、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の機能を増強することができるので、上記因子の使用量を低減させることができるとともに、上記因子の副作用を抑制することができる。すなわち、本発明の方法は、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の作用を増強させるために行われても、上記因子の副作用を抑制するために行われてもよい。 As described above, since the PAF antagonist can enhance the function of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord, the amount of the factor used can be reduced and the side effect of the factor can be reduced. Can be suppressed. That is, the method of the present invention may be performed to enhance the action of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord, or may be performed to suppress the side effects of the factor.
本発明のスクリーニング方法は、癌性疼痛を処置し得る化合物をスクリーニングするために、候補化合物がＰＡＦの作用を阻害するか否かを調べる工程を包含することを特徴としている。 The screening method of the present invention is characterized by including a step of examining whether a candidate compound inhibits the action of PAF in order to screen for a compound capable of treating cancer pain.
本発明を用いれば、癌性疼痛に対して、少量で十分な鎮痛効果が得られ、効果が長時間にわたって持続し、かつ副作用が少ないという効果を奏する。さらに、本発明を用いれば、モルヒネの鎮痛効果を十分に高めることができ、モルヒネの投与量を低減し、副作用を軽減するという効果を奏する。 By using the present invention, a sufficient amount of analgesic effect can be obtained with a small amount for cancer pain, and the effect can be maintained for a long time and there are few side effects. Furthermore, if this invention is used, the analgesic effect of morphine can fully be improved, and there exists an effect of reducing the dosage amount of morphine and reducing a side effect.
〔１：癌性疼痛〕
癌に起因する疼痛（癌性疼痛）は、癌病変の治療を受けている患者ではその３０〜５０％において認められ、進行癌の患者ではその７０〜９０％において認められる。近年、癌の治療だけでなく癌患者の症状コントロールを充実させることが求められており、緩和ケアの必要性が注目されている。[1: Cancer pain]
Pain resulting from cancer (cancer pain) is found in 30-50% of patients undergoing treatment for cancerous lesions and in 70-90% of patients with advanced cancer. In recent years, not only cancer treatment but also symptom control of cancer patients has been demanded, and the need for palliative care has been attracting attention.
身体的な痛みは、持続的であり、次第に増強されることが多い。すなわち、痛みは新たな痛みを生み出す悪循環の性質を有している。さらに、痛みは不眠や食欲低下などを引き起こすので、患者を不安や恐怖に追いやり、その苦痛を増大させる。また、原疾患に対する治療の進歩に伴って予後が延長してきていることに伴い、癌性疼痛は慢性疾患としての一面を有するようになってきた。癌患者において、癌による痛みを克服することは生活の質（ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｌｉｆｅ：ＱＯＬ）を向上させるに重要な問題である。 Physical pain is persistent and often increases. That is, pain has a vicious circle that creates new pain. In addition, pain causes insomnia and loss of appetite, which drives patients to anxiety and fear and increases their pain. Further, along with the progress of treatment for the primary disease, the prognosis has been extended, and cancer pain has one aspect as a chronic disease. In cancer patients, overcoming the pain caused by cancer is an important issue for improving quality of life (QOL).
現在、癌性疼痛の治療は、非オピオイド系鎮痛薬とオピオイド系鎮痛薬との組合せを中心とした、ＷＨＯの癌除痛ラダーに従って行われており、その有効性が示されている。 Currently, cancer pain is treated according to the WHO cancer analgesic ladder centering on a combination of a non-opioid analgesic and an opioid analgesic, and its effectiveness has been shown.
しかしながら、ＷＨＯ方式では、１０〜３０％の症例において痛みが十分に緩和されず、進行性癌患者の約３０％が痛みの中にて死を迎えている。癌性疼痛に対する現在の治療法は、オピオイド系鎮痛薬を併用してコントロールすることを試みるものであるが、種々の要因から引き起こされる種々の癌性疼痛の全てをコントロールすることは難しい。 However, in the WHO system, pain is not sufficiently relieved in 10 to 30% of cases, and about 30% of advanced cancer patients die in pain. Current treatments for cancer pain attempt to control in combination with opioid analgesics, but it is difficult to control all of the various cancer pains caused by various factors.
癌性疼痛の中でも、骨転移による痛みや、腫瘍の神経浸潤に伴う痛みは、難治性である。これらの疼痛に対しては、モルヒネ等のオピオイド系鎮痛薬を増量する、あるいは、非オピオイド系鎮痛薬（非ステロイド性抗炎症薬、アセトアミノフェン等）や鎮痛補助薬を併用する等の処置が試みられている。オピオイド系鎮痛薬の増量は、便秘、眠気、悪心／嘔吐などの強い副作用と、長期間投与することによって薬物耐性、薬物依存、耽溺のような好ましくない副作用を生じる。併用される鎮痛補助薬としては、抗痙攣薬（抗てんかん薬）、局所麻酔薬、向精神薬、抗不安薬、ＮＭＤＡ受容体拮抗薬、筋弛緩薬、抗うつ薬、副腎皮質ホルモン、抗不整脈薬、ビスホスホネート製剤、カンナビノイドなどが挙げられる。これらの薬物は、オピオイド系鎮痛薬に対する十分な鎮痛補助効果が得られないにもかかわらず、その副作用を常に考慮しなければならない。鎮痛補助薬の最も一般的な副作用は、便秘、悪心・嘔吐、鎮静作用および傾眠である。癌患者の多くは高齢者であり、高齢者は鎮静作用が顕著に持続すると、日常生活に必要な多くの機能が退化する危険性がある。また、治療に複数の薬物の投与を必要とすると、患者の服薬順守が著しく低下する。 Among cancer pains, pain due to bone metastasis and pain associated with tumor invasion are intractable. For these pains, treatments such as increasing the amount of opioid analgesics such as morphine, or combining non-opioid analgesics (nonsteroidal anti-inflammatory drugs, acetaminophen, etc.) and analgesics Has been tried. Increasing the amount of opioid analgesics produces strong side effects such as constipation, drowsiness, nausea / vomiting, and undesirable side effects such as drug resistance, drug dependence, and epilepsy when administered for long periods. Anti-convulsants (antiepileptics), local anesthetics, psychotropic drugs, anxiolytics, NMDA receptor antagonists, muscle relaxants, antidepressants, corticosteroids, antiarrhythmic drugs Drugs, bisphosphonate preparations, cannabinoids and the like. Even though these drugs do not provide sufficient analgesic effect for opioid analgesics, their side effects must always be considered. The most common side effects of analgesics are constipation, nausea / vomiting, sedation and somnolence. Many cancer patients are elderly, and when the sedation is significantly sustained, many functions necessary for daily life are at risk of degeneration. In addition, if the treatment requires administration of multiple drugs, patient compliance is significantly reduced.
薬剤の持続時間もまた、癌性疼痛を治療する際に重要な要素である。薬剤の持続時間の延長は、疼痛、特に夜間に疼痛が生じる患者にとって、うつや不眠症、その他の要因の改善をもたらす可能性があるためにその生活全体に好ましい影響を与える。最近の研究では、慢性疼痛と同時にうつ病および不眠症を有する患者が最高レベルの疼痛関連障害を訴えることや、不眠症が疼痛および苦痛の増大に関連することが明らかにされている。従来の鎮痛薬は、一晩に１回以上（例えば、モルヒネの場合は４時間毎）の投与を必要とするため，睡眠が妨害され、その結果、患者のＱＯＬが悪化する。就寝中にわたる十分な鎮痛効果の持続期間の延長は、疼痛の軽減に重要である。 The duration of the drug is also an important factor in treating cancer pain. Prolonging the duration of the drug has a positive impact on the whole of the life because it can lead to improvements in depression, insomnia, and other factors for patients with pain, especially at night. Recent studies have shown that patients with depression and insomnia at the same time as chronic pain complain of the highest level of pain-related disorders, and that insomnia is associated with increased pain and distress. Conventional analgesics require administration more than once a night (eg, every 4 hours for morphine), thus disturbing sleep and resulting in worsening of the patient's QOL. Prolonging the duration of sufficient analgesic effect during bedtime is important for pain relief.
癌性疼痛は、種々の要因によって成り立っており、侵害性受容疼痛、炎症性疼痛、神経障害性疼痛、情動、感情等の種々の要素が影響している。そして、これらが病状の経過と共に複雑に変化するので、個々の要素を抑制するだけでは癌性疼痛を緩和することができない。このような癌性疼痛を緩和するための治療には、既存の鎮痛薬や鎮痛補助薬を応用するだけでは限界がある。癌性疼痛に対する絶対的な治療薬は依然として見出されていない。 Cancer pain is composed of various factors, and various factors such as nociceptive pain, inflammatory pain, neuropathic pain, emotion, and emotion are affected. And since these change complicatedly with the progress of a medical condition, cancer pain cannot be relieved only by suppressing each element. Treatment for alleviating such cancer pain is limited only by applying existing analgesics and analgesics. No absolute cure for cancer pain has yet been found.
癌性疼痛、特に骨癌性疼痛の発生と維持には、癌の発育、進展に伴い痛み発生の要因も変化しており、それが癌性疼痛の大きな特徴の１つとなっている。癌細胞からは種々の炎症性・発痛性メディエーターが遊離され、侵害受容性疼痛を引き起こす。加えて、骨癌では、癌組織増殖に伴い神経組織を圧迫することによる痛みが生じる。この場合、骨組織は柔軟性がないので、骨膜に豊富に存在する一次知覚神経がより強い物理的障害を受けることになり、強い痛みが生じる。また、このような圧迫が持続すると神経の脱髄が生じ、神経障害が起る。この神経障害を補償すべく新たに神経が再生しようとして未熟な神経が再生されると自発痛が生じ、触覚性の神経（Ａβ）とエファプス結合を生じるなどにより、触刺激が痛みを伝えるアロディニアという現象が生じる。骨癌では、さらに癌細胞が骨吸収因子を遊離して骨の吸収を引き起こす。この時に活性化された破骨細胞は骨を破壊するためにプロトン（Ｈ＋）を遊離し、知覚神経末端の酸性を感受するＡＳＩＣ（酸感受性イオンチャネル）が開口して痛みを誘発する。さらに、骨破壊が進むと支持組織が失われ体を動かすことにより激しい痛みを生じるようになる。このように複数の因子が癌進行のステージに応じて複雑に絡み合って生じる癌性疼痛は、耐え難い苦痛をもたらし、患者のＱＯＬを著しく低下させる。（難治性疼痛の薬物療法 樋口比登実編 pp73-75（昭和大学病院緩和ケアセンター長）南山堂 2010）。In the generation and maintenance of cancer pain, especially bone cancer pain, the factors causing the pain change as the cancer develops and progresses, which is one of the major characteristics of cancer pain. Various inflammatory and analgesic mediators are released from cancer cells, causing nociceptive pain. In addition, in bone cancer, pain is caused by pressing nerve tissue as the cancer tissue grows. In this case, since the bone tissue is not flexible, the primary sensory nerves abundantly present in the periosteum are subjected to stronger physical damage, resulting in strong pain. Moreover, if such compression continues, nerve demyelination occurs and neuropathy occurs. When an immature nerve is regenerated to regenerate new nerves to compensate for this neuropathy, spontaneous pain occurs, and tactile nerves (Aβ) and ephapse connect, and so on. A phenomenon occurs. In bone cancer, cancer cells also release bone resorption factors and cause bone resorption. The osteoclasts activated at this time release protons (H + ) to destroy the bone, and an ASIC (acid-sensitive ion channel) that senses the acidity of sensory nerve terminals opens to induce pain. Furthermore, as bone destruction progresses, the supporting tissue is lost, causing severe pain by moving the body. Thus, cancer pain caused by complex intertwining of multiple factors depending on the stage of cancer progression results in unbearable pain and significantly lowers the patient's QOL. (Pharmacotherapy for intractable pain, Hito Higuchi, pp 73-75 (Director, Palliative Care Center, Showa University Hospital) Nanzan-do 2010).
このように、癌性疼痛において、多くの要因が、推移する様々な痛みのステージに関与する、とされている。このことが、モルヒネをはじめとするオピオイド系鎮痛薬の効力に限界をもたらしている。除痛が十分でない場合は，可能な限り除痛が得られるまでオピオイド系鎮痛薬を増量することも可能であるが、中枢抑制などの副作用が顕在化する。鎮痛補助薬についても、効力と副作用との関係からその有効性は限られている。また、モルヒネのように持続時間の短い薬物は、頻回投与が必要である。徐放剤を用いる場合であっても、１日１回以上の投与が必要である。 Thus, in cancer pain, many factors are considered to be involved in various stages of pain that change. This limits the efficacy of opioid analgesics such as morphine. If analgesia is not sufficient, opioid analgesics can be increased until analgesia is obtained as much as possible, but side effects such as central depression become apparent. The effectiveness of analgesics is limited due to the relationship between efficacy and side effects. In addition, a drug having a short duration such as morphine needs to be administered frequently. Even when a sustained-release agent is used, administration once a day or more is necessary.
癌性疼痛に対する鎮痛薬として、（１）新たな作用機序を有すること、（２）少量で十分な鎮痛効果が得られかつ副作用が少ないこと、（３）モルヒネとの併用によりモルヒネの鎮痛効果を十分に高めることができること、（４）モルヒネの投与量を低減し、副作用を軽減すること、（５）作用が長時間にわたって持続すること、などの条件を満たすものが非常に好ましい。 As an analgesic for cancer pain, (1) it has a new mechanism of action, (2) sufficient analgesic effect can be obtained with a small amount and less side effects, and (3) analgesic effect of morphine when used in combination with morphine It is very preferable to satisfy the conditions such as (4) the dose of morphine can be reduced, side effects can be reduced, and (5) the action can be sustained for a long time.
〔２：ＰＡＦアンタゴニストによる癌性疼痛の処置〕
本発明は、癌性疼痛を治療する新たな技術を提供する。本発明者らは、標準的な癌性疼痛モデル動物（ＮＣＴＣ２４７２腫瘍細胞をマウス大腿骨に移植して作製した大腿骨癌モデル）に対してＰＡＦアンタゴニストを投与（全身投与および脊髄腔内投与）することによって、驚くほど効果的に癌性疼痛を軽減または排除することを見出した。特に、ＰＡＦアンタゴニストは、全身投与（０．０１〜０．３ｍｇ／ｋｇ静脈内投与、０．３ｍｇ／ｋｇ経口投与）または脊髄腔内投与（１０ｐｇ）により、５〜６日間にわたって癌性疼痛関連症状を有意に緩和することを見出した。このような持続的な効果は，既存の鎮痛薬、鎮痛補助薬、神経障害性疼痛薬等において認められないものであり、既存の慢性疼痛治療薬や癌性疼痛治療薬と比較して著しく有利であるといえる。なお、この大腿骨癌モデルは、オピオイド類（Pain 99, 397(2002); J Pharmacol Sci. 111, 60,(2009)）、ビスホスホネート（Pain 111,169,(2004)）、抗NGF（神経成長因子）抗体Tanezumab（Pain 115, 128,(2005））、TRPV1(一過性受容器電位バニロイド1)拮抗薬（J Neurosci. 25, 3126(2005)）、ガパベンチン（Exp Neurol. 193, 85,(2005)）、抗RANKL（破骨細胞分化因子）抗体 Denosumab（Cancer Res. 61, 4038, (2001); Nat Med. 6, 521, (2000)）などの疼痛抑制効果を確認する際に使用されているため、本モデルを用いて本発明を実証したことは、癌性疼痛治療薬を開発する際の前臨床試験としての有効性を示したといえる。このように、ＰＡＦアンタゴニストは，既存の治療薬に非感受性である癌性疼痛関連状態に対する有効な治療法となり得る。[2: Treatment of cancer pain with PAF antagonist]
The present invention provides a new technique for treating cancer pain. The present inventors administer PAF antagonist (systemic administration and intrathecal administration) to a standard cancer pain model animal (femoral cancer model prepared by transplanting NCTC2472 tumor cells into mouse femur). Have been found to surprisingly and effectively reduce or eliminate cancer pain. In particular, PAF antagonists have been associated with cancer pain-related symptoms over 5-6 days by systemic administration (0.01-0.3 mg / kg intravenous administration, 0.3 mg / kg oral administration) or intraspinal administration (10 pg). Was found to significantly relax. Such sustained effects are not observed in existing analgesics, analgesics, neuropathic pain drugs, etc., and are significantly more advantageous than existing chronic pain treatments and cancer pain treatments. You can say that. This femoral cancer model includes opioids (Pain 99, 397 (2002); J Pharmacol Sci. 111, 60, (2009)), bisphosphonate (Pain 111,169, (2004)), anti-NGF (nerve growth factor) Antibody Tanezumab (Pain 115, 128, (2005)), TRPV1 (transient receptor potential vanilloid 1) antagonist (J Neurosci. 25, 3126 (2005)), Gapavenin (Exp Neurol. 193, 85, (2005) ), Anti-RANKL (osteoclast differentiation factor) antibody Denosumab (Cancer Res. 61, 4038, (2001); Nat Med. 6, 521, (2000)) Therefore, it can be said that demonstrating the present invention using this model has shown its effectiveness as a preclinical test in developing a therapeutic agent for cancer pain. Thus, PAF antagonists can be an effective treatment for cancer pain-related conditions that are insensitive to existing therapeutic agents.
上述したように、ＰＡＦアンタゴニストは多数知られており、ＰＡＦまたはＰＡＦアナログのアンタゴニスト（すなわち、ＰＡＦアゴニストの作用を拮抗的に阻害する物質）であれば、天然物由来の化合物またはその誘導体であってもよく、例えば、Braquet, P. et al. Perspectives in platelet-activating factor research. Pharmacol. Rev., 39: 97-145, 1987、Hosford D, Braquet P. Antagonists of p1atelet-activating factor: chemistry,Pharmacology and c1inical applications. Prog Med Chem. 27: 325-380, 1990、Hwang S-B. Specific receptors of platelet-activating factor, receptor heterogeneity, and signal transduction mechanisms. J. Lipid Mediators, 2: 123-158, 1990、Summers JB et a1., Platelet-activating factor antagonists. Current Pharmaceutica1 Design. 1(2): 161-190, 1995、Negro Alvarez, HU. et al. Platelet-activating factor antagonists. Allergol. Immunopathol. (Madr.), 25(5): 249-258, 1997、Bohlin L et al., Bioassays using the phospholipid mediator PAF in the search for anti-inflammatory natural products. Current Organic Chemistry 1(4): 345-360, 1997、相良博典 他 PAF受容体拮抗薬 日本臨床54(11): 180-185, 1996、Blood Vessels 16: 559-572, 1985、特開平０２−７６８５４号公報、特開昭６１−１７６５９１号公報等に開示されている化合物が挙げられる。これら化合物を表１に示す。 As described above, many PAF antagonists are known, and any PAF or PAF analog antagonist (ie, a substance that antagonistically inhibits the action of a PAF agonist) is a compound derived from a natural product or a derivative thereof. For example, Braquet, P. et al. Perspectives in platelet-activating factor research.Pharmacol. Rev., 39: 97-145, 1987, Hosford D, Braquet P. Antagonists of p1atelet-activating factor: chemistry, Pharmacology and c1inical applications.Prog Med Chem. 27: 325-380, 1990, Hwang SB.Specific receptors of platelet-activating factor, receptor heterogeneity, and signal transduction mechanisms.J. Lipid Mediators, 2: 123-158, 1990, Summers JB et a1., Platelet-activating factor antagonists. Current Pharmaceutica1 Design. 1 (2): 161-190, 1995, Negro Alvarez, HU. et al. Platelet-activating factor antagonists. Allergol. Immunopathol. (Madr.), 25 (5 ): 249-258, 1997, Bohlin L et al., Bioassays using the phospholipid mediator PAF in the search for anti-inflammatory natural products. Current Organic Chemistry 1 (4): 345-360, 1997, Hironori Sagara and others PAF receptor antagonist Japanese Clinical 54 (11): 180- 185, 1996, Blood Vessels 16: 559-572, 1985, Japanese Patent Laid-Open No. 02-76854, Japanese Patent Laid-Open No. 61-175991, and the like. These compounds are shown in Table 1.
また、これらの化合物の他、それを含有する植物エキス、例えば、ginkgolide類を含むイチョウ(Ginkgo biloba)葉エキス[Braquet, PG. et al. Blood Vessels, 16, 558 (1985)]、リグナン類(lignans)のkadsurenone (カズレノン)を含むフウトウカズラ(風籐葛、Piper kadzura)茎抽出エキス[Shen, TY. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 672 (1985)]、他のリグナン類を含有するゴボウシ(牛蒡子、Arctii Fructus)及びレンギョウ(Forsythiae Fructus)、arnicolide類を含有する石胡ずい(Centipeda minima)（Iwakami, S. et al. Chem. Pharm. Bull., 40, 1196 (1992)参照）やアルニカ(Arnica)（三川 潮：植物細胞工学、16, 118 (1994)参照）エキス等、neolignan類を含有するオコテア（Ocotea macrophylla Kunth；Whiting DA, Nat. Prod. Rep., 2, 191-211, 1985； Nat. Prod. Rep., 18, 583-606、2001）エキス、また、Alpinia galangal (タイ産ナンキョウ) Boesenbergia pandurata（薬草プエラリア ミリフィカ）、Curcuma aeruginosa （ムラサキガジュツ）、C. domestica（ウコン）、C. ochorrhiza（）、C. xanthorrhiza（クスリウコン、ジャワウコン）、Aingiber officinal（生姜）、Z. zerumbet（ハナショウガ、白ウコン）などのエキス等，更に，PAFに関連して抗炎症作用を持つ天然物質(Bohlin L et al., Current Organic Chemistry, 1(4), 345-360, 1997参照)も好ましく用いることができる。上記した化合物の中でもギンゴライドＡ、ギンゴライドＢ、ギンゴライドＣ、ギンゴライドＪまたはＢＮ−５２０６３などのギンゴライドおよびその誘導体；ＢＮ５２１１、ＡＫＳ−１６８、ＣＶ−３９８８、ＣＶ−６２０９、Ｅ５８８０、Ｒ７４７１９、Ｒ ７４６５４、ＡＢＴ−２９９、ＳＤＺ ６４６１９、ＴＣＶ−３０９、ＵＲ−１０３２４、ＵＲ−１１３５３、ＫＯ−２８６０１１などのピリジニウム誘導体；ＢＵ５０７３９、Ｅ６１２３、Ｒｏ２４−４７３６４、ＳＴＹ−２１０８４、ＷＥＢ２０８６、ＷＥＢ−２１７０、ＷＥＢ−２３４７などのトリアゾロ―１，４―ジアゼピン系化合物が好ましく、とりわけ、ギンゴライド誘導体のギンゴライドＡ、ギンゴライドＢ、ギンゴライドＣ、ピリジニウム誘導体のＴＣＶ３０９、トリアゾロ―１，４―ジアゼピン系化合物のＢＵ５０７３９、ＷＥＢ２０８６が好ましい。 In addition to these compounds, plant extracts containing them, for example, Ginkgo biloba leaf extract containing ginkgolides [Braquet, PG. Et al. Blood Vessels, 16, 558 (1985)], lignans ( lignans) kadsurenone (pipe kadzura) stem extract (Shen, TY. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 672 (1985)), other lignans Burdock containing cows (Arctii Fructus) and forsythiae Fructus, stone pepper (Centipeda minima) containing arnicolides (Iwakami, S. et al. Chem. Pharm. Bull., 40, 1196 ( 1992)) and Arnica (Ushikawa Mikawa: Plant Cell Engineering, see 16, 118 (1994)) extracts, etc. that contain neolignans (Ocotea macrophylla Kunth; Whiting DA, Nat. Prod. Rep., 2 , 191-211, 1985; Nat. Prod. Rep., 18, 583-606, 2001) extract and Alpinia galangal (Thailand Nanbo) Boesenbergia pandurata (medicinal herb pue Laria Mirifica, Curcuma aeruginosa, C. domestica, C. ochorrhiza, C. xanthorrhiza, Aingiber officinal, Z. zerumbet, white turmeric In addition, natural substances having an anti-inflammatory action related to PAF (see Bohlin L et al., Current Organic Chemistry, 1 (4), 345-360, 1997) can also be preferably used. Among the above-mentioned compounds, ginkgolides such as gingolide A, gingolide B, gingolide C, gingolide J or BN-52063 and derivatives thereof; BN5211, AKS-168, CV-3388, CV-6209, E5880, R74719, R74654, ABT- Pyridinium derivatives such as 299, SDZ 64619, TCV-309, UR-10324, UR-11353, KO-286011; triazolo such as BU50739, E6123, Ro24-47364, STY-21084, WEB2086, WEB-2170, WEB-2347 1,4-diazepine-based compounds are preferred, especially gingolide derivatives Gingolide A, Gingolide B, Gingolide C, pyridinium derivatives TCV309, Riazolo-1,4-diazepine compounds BU50739 and WEB2086 are preferred.
癌性疼痛に対する基本的な対処法は、以下のとおりである：[1]可能であれば予防処置を講じる；[2]早期に治療を開始する；[3]鎮痛と共に機能の改善または回復を評価する；[4]情動的問題および精神的問題に対してもケアする（患者や周囲の人々の理解と積極性が重要）。ＰＡＦアンタゴニストは、疼痛の発症から維持過程に到る全てのステージで有効であることに加え、疼痛発生の前に投与することで癌性疼痛の発症から保護することができる。このことは、ＰＡＦアンタゴニストが、公知の鎮痛薬と異なった作用機序を有し、癌性疼痛の発症を予防し得る先行除痛薬としても有効であることを示唆する。 The basic treatment for cancer pain is as follows: [1] Take preventive measures if possible; [2] Start treatment early; [3] Improve or restore function with analgesia Evaluate; [4] Care for emotional and mental problems (understanding and aggressiveness of the patient and those around them is important). In addition to being effective at all stages from the onset of pain to the maintenance process, the PAF antagonist can be protected from the onset of cancer pain by being administered before the onset of pain. This suggests that the PAF antagonist has an action mechanism different from that of known analgesics and is effective as a prior analgesic that can prevent the onset of cancer pain.
また、既存のオピオイド系鎮痛薬および多くの鎮痛補助薬の主要な副作用として鎮静作用が知られているが、ＰＡＦアンタゴニストはこのような中枢作用を示さないので、本発明は、従来公知の癌性疼痛治療よりもはるかに有利である。 In addition, sedation is known as a major side effect of existing opioid analgesics and many analgesics, but since PAF antagonists do not exhibit such a central action, the present invention is not limited to conventionally known cancerous properties. It is much more advantageous than pain treatment.
ＰＡＦアンタゴニストは、癌性疼痛を治療するに有効な非オピオイド系鎮痛薬（非ステロイド性抗炎症薬（例えばロキソプロフェン、ジクロフェナク、インドメタシン、エトドラク、ピロキシカム、セレコキシブやアセトアミノフェン））あるいは鎮痛補助薬と組み合わせて投与されてもよく、この場合、ＰＡＦアンタゴニストと異なる作用機序を有する鎮痛補助薬が好ましく、上記中枢作用を示さないものがより好ましい。ＰＡＦアンタゴニストと異なる作用機序を有する鎮痛補助薬としては、例えば，抗てんかん薬（抗痙攣薬）であるカルバマゼピン、フェニトイン、パルプロ酸ナトリウム、クロナゼパム、ガバペンチン、プレガバリン、ラモトリギン；抗不整脈薬であるリドカイン、メキシレチン、フレカイニド；局所麻酔薬であるリドカインやメキシレチン；向精神薬であるリスペリドン、クロルプロマジン、ハロベリドール、ヒドロキシジン、ポロクロルパラジン；抗不安薬であるジアゼパム、クロルジアゼポキシド；ＮＭＤＡ受容体拮抗薬であるケタミンやイフェンプロジル；筋弛緩薬であるチザニジン、バクロフェン；抗うつ薬であるアミトリプチリン、ノルトリプチリン、ミルナシプラン、マプロチリン；副腎皮質ホルモンでありヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドノゾロン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン；ビスホスホネート製剤であるゾレドロン酸、リセドロン酸；カンナビノイド等が挙げられるがこれらに限定されない。このような鎮痛補助薬との併用によって、単独投与よりも大きな治療効果が期待される。 PAF antagonists combined with non-opioid analgesics (non-steroidal anti-inflammatory drugs (eg loxoprofen, diclofenac, indomethacin, etodolac, piroxicam, celecoxib and acetaminophen)) or analgesic aids effective in treating cancer pain In this case, an analgesic adjuvant having a mechanism of action different from that of the PAF antagonist is preferable, and one that does not exhibit the above-described central action is more preferable. Analgesic adjuvants that have a mechanism of action different from that of PAF antagonists include, for example, antiepileptics (anticonvulsants) carbamazepine, phenytoin, sodium parproate, clonazepam, gabapentin, pregabalin, lamotrigine; lidocaine, an antiarrhythmic drug, Mexiletine, flecainide; lidocaine and mexiletine as local anesthetics; risperidone, chlorpromazine, haloberidol, hydroxyzine, polochlorparadine as psychotropic drugs; diazepam, chlordiazepoxide as anti-anxiety drugs; ketamine as an NMDA receptor antagonist Ifenprodil; muscle relaxant tizanidine, baclofen; antidepressants amitriptyline, nortriptyline, milnacipran, maprotiline; corticosteroid and hydrocortisone Not but cannabinoids like limitation; prednisolone, methylprednisolone de Nozo Ron, triamcinolone, dexamethasone, betamethasone; a bisphosphonate zoledronic acid, risedronic acid. The combined use with such an analgesic is expected to have a greater therapeutic effect than single administration.
ＰＡＦアンタゴニストの好ましい投与方法としては、全身性投与および局所投与（例えば、脊髄および三叉神経脊髄路核への直接送達）が挙げられる。また、これらの投与に適用される経路には、経口、動脈内、鞘内、髄腔内、筋肉内、腹腔内、静脈内、鼻腔内、吸入経路が含まれるが、これらに限定されず、被験体の状態、年齢、治療中の他の疾患、用いられている医薬品などを考慮して、臨床医によって適宜選択される。 Preferred methods of administration of PAF antagonists include systemic administration and local administration (eg, direct delivery to the spinal cord and trigeminal spinal tract nucleus). The routes applied for these administrations include, but are not limited to, oral, intraarterial, intrathecal, intrathecal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, intranasal, and inhalation routes. It is appropriately selected by a clinician in consideration of the condition of the subject, age, other diseases being treated, pharmaceuticals used, and the like.
ＰＡＦアンタゴニストは、脊髄後角または三叉神経脊髄路核に作用してＧｌｙＲα３機能の抑制から保護することによって鎮痛作用をもたらす。当該部位近傍の脳脊髄液中に投与する場合、全身投与に比べて投与量をはるかに少なくすることができるので、全身性の毒性を考慮する必要がない程度に抑えることが可能である。このように、最も好ましい投与様式は、鞘内投与（脊髄を取り囲む脳脊髄液中への投与）であるといえる。さらにＣＥＤ（Ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎ−Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）法を採用することによって薬剤濃度を注入量および注入速度によって制御することが可能である。 PAF antagonists provide analgesia by acting on the dorsal horn of the spinal cord or the trigeminal spinal tract nucleus to protect against inhibition of GlyRα3 function. When administered in the cerebrospinal fluid in the vicinity of the site, the dose can be much reduced compared to systemic administration, and thus it can be suppressed to a level that does not require consideration of systemic toxicity. Thus, it can be said that the most preferable mode of administration is intrathecal administration (administration into the cerebrospinal fluid surrounding the spinal cord). Further, by adopting a CED (Collision-Enhanced Delivery) method, the drug concentration can be controlled by the injection amount and the injection speed.
ＰＡＦアンタゴニストの有効量は、被験体（患者）の状態（年齢、体重、健康状態など）、医療専門家の判断、組成物中に含有される各活性薬剤の効果および毒性を考慮して、適宜決定され得る。 The effective amount of the PAF antagonist is appropriately determined in consideration of the condition of the subject (patient) (age, weight, health condition, etc.), judgment of a medical professional, the effect and toxicity of each active agent contained in the composition. Can be determined.
ＰＡＦアンタゴニストの作用の持続時間は著しく長く、このことは疼痛の治療における患者の負担を軽減し、さらに医療費削減の面からも有利である。また、作用機序が、ＰＡＦ受容体のインターナリゼーションによることを明らかにしており（データ示さず）、耐性、蓄積作用などの副作用の可能性が少ない。これもまた、既存の鎮痛薬にはない利点といえる。 The duration of action of the PAF antagonist is remarkably long, which reduces the burden on the patient in the treatment of pain and is also advantageous in terms of reducing medical costs. Moreover, it has been clarified that the mechanism of action is due to internalization of the PAF receptor (data not shown), and there is little possibility of side effects such as tolerance and accumulation action. This is another advantage over existing analgesics.
ＰＡＦアンタゴニストについて、ＴＣＶ−３０９についての第二相試験が終了しており、ＷＥＢ ２０８６についての後期第二相試験がすでに終了しており、第三相試験が実施されている。これらの治験からヒトに対する安全性も確認されており，重大な副作用が出現する可能性は極めて少ないものと考えられる。 For PAF antagonists, Phase II trials for TCV-309 have been completed, late Phase II trials for WEB 2086 have already been completed, and Phase III trials are being conducted. These clinical trials have confirmed the safety of humans, and it is highly unlikely that serious side effects will occur.
本発明において、ＰＡＦアンタゴニストは、化合物として用いられても、後述する組成物またはキットの形態で用いられてもよい。 In the present invention, the PAF antagonist may be used as a compound, or may be used in the form of the composition or kit described below.
一実施形態において、本発明は、ＰＡＦアンタゴニストを含有する組成物を提供する。本発明の組成物は、疼痛を処置するための薬学的組成物であっても、このような薬学的組成物を調製するための組成物であってもよい。本明細書中にて使用される場合、用語「処置」は、症状の軽減（緩和）または排除が意図され、治療的（発症後）に行われ得るものだけでなく、予防的（発症前）に行われ得るものもまた包含される。本発明の組成物による疼痛の処置は、ＰＡＦアンタゴニストによる疼痛緩和作用、または下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の作用を増強する効果に起因している。 In one embodiment, the present invention provides a composition containing a PAF antagonist. The composition of the present invention may be a pharmaceutical composition for treating pain or a composition for preparing such a pharmaceutical composition. As used herein, the term “treatment” is intended to alleviate (ameliorate) or eliminate symptoms and can be performed therapeutically (after onset), as well as prophylactic (pre-onset). Also included are those that can be performed. The treatment of pain with the composition of the present invention is due to the effect of enhancing the action of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway or the pain relieving action by the PAF antagonist.
処置されるべき疼痛としては、癌性疼痛が好ましく、骨癌性の疼痛が最も好ましいが、癌性疼痛を形成する疼痛であれば特に限定されず、神経障害性疼痛、急性炎症性疼痛、慢性炎症性疼痛、短時間の侵害刺激（例えば、熱刺激または機械刺激等）による侵害性受容疼痛等が挙げられる。複雑なメカニズムによって発症する骨癌性の疼痛を処置し得ることを、後述する実施例にて骨癌モデル動物を用いて実証した本発明は、当業者が容易に想到し得るものでなく、当業者の予測の範囲を超えた顕著な効果を示すといえる。 The pain to be treated is preferably cancer pain, most preferably bone cancer pain, but is not particularly limited as long as it is cancer pain, neuropathic pain, acute inflammatory pain, chronic Inflammatory pain, nociceptive pain caused by short-term noxious stimulation (for example, thermal stimulation or mechanical stimulation), and the like can be mentioned. The present invention, which has been demonstrated using bone cancer model animals in the examples described later, that treatment of bone cancer pain that develops through a complicated mechanism can be treated, is not easily conceived by those skilled in the art. It can be said that it shows a remarkable effect beyond the scope of the contractor's prediction.
癌性疼痛の痛みは一定に推移するものではなく、痛みのコントロール中に出現する突発的な激痛（痛みの増強）時にはモルヒネ等のオピオイド系鎮痛薬によるレスキューが行われる。ＰＡＦアンタゴニストによって痛みのコントロールを行っている際にモルヒネの投与の必要性が生じた場合、その量を著しく低減し得る。後述するように、モルヒネは、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子である。すなわち、本発明の組成物は、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子をさらに含有してもよい。また、上述したような、疼痛を治療するに有効な鎮痛補助薬をさらに含有してもよいが、この場合、ＰＡＦアンタゴニストと異なる作用機序を有するものが好ましく、上記中枢作用を示さないものがより好ましい。 The pain of cancer pain does not change constantly, and rescue is performed by opioid analgesics such as morphine in the case of sudden severe pain (pain enhancement) appearing during pain control. If the need for morphine administration arises when controlling pain with a PAF antagonist, the amount can be significantly reduced. As will be described later, morphine is a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord. That is, the composition of the present invention may further contain a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord. Moreover, although it may further contain an analgesic aid effective for treating pain as described above, in this case, those having an action mechanism different from that of the PAF antagonist are preferable, and those that do not exhibit the above-mentioned central action More preferred.
薬学的組成物として用いられる場合、本発明の組成物中に使用されるキャリアおよび賦形剤は、薬学的に受容可能なものであれば特に限定されない。本明細書中にて使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、組成物を受容した個体において有害な抗体の産生をそれ自体は誘導しない任意のキャリアが意図される。このようなキャリアは当業者に周知である。また、薬学的に受容可能な賦形剤については、当該分野において公知であり、例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ（Ｍｅｒｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．， Ｎ．Ｊ．１９９１）に十分に記載されている。さらに、本発明の組成物は、水、生理食塩水、グリセロール、またはエタノールのような１つ以上の成分をさらに含み得る。さらに、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝化物質、安定化剤、抗酸化剤などのような補助物質が、本発明の組成物中に存在し得る。 When used as a pharmaceutical composition, the carriers and excipients used in the composition of the present invention are not particularly limited as long as they are pharmaceutically acceptable. As used herein, “pharmaceutically acceptable carrier” intends any carrier that does not itself induce the production of harmful antibodies in an individual receiving the composition. Such carriers are well known to those skilled in the art. Also, pharmaceutically acceptable excipients are known in the art and are fully described, for example, in REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Merck Pub. Co., NJ 1991). Furthermore, the composition of the present invention may further comprise one or more components such as water, saline, glycerol, or ethanol. In addition, auxiliary substances such as wetting or emulsifying agents, pH buffering substances, stabilizers, antioxidants and the like may be present in the compositions of the invention.
本発明の組成物は、経口投与に好ましい粉末、顆粒、錠剤、カプセルなどの形態として調製され得る。また、本発明の組成物は、液体溶液もしくは懸濁液、または注射のための液体ビヒクル中の溶液もしくは懸濁液のために適切な固体形態、あるいは局所的に塗布されるクリームとしてとして調製され得る。そして、本発明の組成物の直接送達は、一般に、経口、注射（皮下、皮内、腹腔内、管腔内、髄腔内、胃内、腸内、静脈内、筋肉内または骨髄内）、または塗布により達成される。経口送達の場合、本発明の組成物は、粉末状、タブレット状、顆粒状、カプセル状、液状などの経口的に摂取可能な形状であり得、所望の作用を発現させる量のＰＡＦアンタゴニストが含有されていれば、その形状が特に限定されない。 The compositions of the present invention can be prepared in the form of powders, granules, tablets, capsules and the like that are preferred for oral administration. The compositions of the present invention may also be prepared as a liquid solution or suspension, or a solid form suitable for solution or suspension in a liquid vehicle for injection, or as a topically applied cream. obtain. And direct delivery of the compositions of the invention is generally oral, injection (subcutaneous, intradermal, intraperitoneal, intraluminal, intrathecal, intragastric, intestinal, intravenous, intramuscular or intramedullary), Or achieved by coating. In the case of oral delivery, the composition of the present invention can be in an orally ingestible form such as powder, tablet, granule, capsule, liquid, etc., and contains an amount of PAF antagonist that exhibits the desired effect. If it is, the shape is not particularly limited.
本発明の組成物は、製薬分野における公知の方法により製造することができる。本発明の組成物におけるＰＡＦアンタゴニストの含有量は、投与形態、投与方法などを考慮し、当該組成物を用いてＰＡＦアンタゴニストを投与できるような量であれば特に限定されない。また、本発明の組成物の投与量は、その製剤形態、投与方法、使用目的、および投与対象である患者の年齢、体重、症状によって適宜設定される。投与は、所望の投与量範囲内において、１日内において単回で、または数回に分けて行われてもよい。 The composition of the present invention can be produced by a known method in the pharmaceutical field. The content of the PAF antagonist in the composition of the present invention is not particularly limited as long as the PAF antagonist can be administered using the composition in consideration of the administration form, administration method and the like. In addition, the dosage of the composition of the present invention is appropriately set depending on the preparation form, administration method, purpose of use, and age, weight, and symptoms of the patient to be administered. Administration may be performed in a single dose or divided into several doses within a desired dose range.
他の実施形態において、本発明は、ＰＡＦアンタゴニストを備えているキットを提供する。本発明のキットは、疼痛を処置するための組成物を調製するためのキットであり得る。本発明のキットは、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子をさらに備えていてもよい。また、上述したような、疼痛を治療するに有効な鎮痛補助薬をさらに備えていてもよいが、この場合、ＰＡＦアンタゴニストと異なる作用機序を有するものが好ましく、上記中枢作用を示さないものがより好ましい。 In other embodiments, the present invention provides kits comprising PAF antagonists. The kit of the present invention may be a kit for preparing a composition for treating pain. The kit of the present invention may further comprise a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord. In addition, an analgesic adjuvant effective for treating pain as described above may be further provided, but in this case, those having a mechanism of action different from that of the PAF antagonist are preferable, and those that do not exhibit the above-mentioned central action. More preferred.
本明細書中にて使用される場合、用語「キット」は、特定の材料を、容器（例えば、ボトル、プレート、チューブ、ディッシュなど）に内包された態様にて備えた包装が意図される。好ましくは、上記材料を使用するための指示書を備えており、本発明による効果を得るための手順（例えば、疼痛、特に癌性疼痛を処置するための使用手順）が記載された指示書を備えている。本明細書中にてキットの局面において使用される場合、「備えた（備えている）」は、キットを構成する個々の容器のいずれかの中に内包されている状態が意図される。また、本発明のキットは、複数の異なる組成物を１つに梱包した包装であってもよく、容器中に内包された溶液形態の組成物を梱包していてもよい。本発明のキットは、異なる２つ以上の物質を同一の容器に混合して備えても別々の容器に備えてもよい。「指示書」は、紙またはその他の媒体に書かれていても印刷されていてもよく、あるいは電子媒体に付されてもよい。本発明のキットは、上述した組成物を構成するために用いられてもよく、上述した組成物に含まれる物質を別々に備えていても、上述した組成物とさらなる成分とを別々に備えていてもよい。 As used herein, the term “kit” intends a package comprising a particular material in a form that is contained within a container (eg, bottle, plate, tube, dish, etc.). Preferably, instructions are provided for using the above materials, and instructions describing the procedures for obtaining the effect according to the present invention (for example, procedures for treating pain, in particular cancer pain) are provided. I have. As used herein in the context of a kit, “comprising” is intended to mean being contained within any of the individual containers that make up the kit. Further, the kit of the present invention may be a package in which a plurality of different compositions are packed together, or may be a solution in a form of a solution contained in a container. The kit of the present invention may be prepared by mixing two or more different substances in the same container or in separate containers. “Instructions” may be written on paper or other media, printed, or attached to electronic media. The kit of the present invention may be used to constitute the above-described composition, and may comprise the substances contained in the above-described composition separately, or may comprise the above-described composition and additional components separately. May be.
さらなる実施形態において、本発明は、疼痛を処置するための方法を提供する。本発明の方法は、有効量のＰＡＦアンタゴニストを被験体に投与する工程を包含する。これにより、被験体が受けている疼痛を治療することができるだけでなく、疼痛の発生を予防することができる。すなわち、本発明が適用される被験体は、すでに疼痛を生じている患者であっても、癌を患っているものの疼痛を生じていない患者であってもよい。さらに、有効量のＰＡＦアンタゴニストの投与によって、疼痛緩和の持続的効果が示される。例えば、有効量のＴＣＶ−３０９の投与は、少なくとも１２時間以上、好ましくは２４時間以上、１日間、２日間、３日間、４日間、５〜６日間、またはそれ以上（７〜３０日）の、長期間にわたって疼痛の緩和を持続させ得る。これは、現在市販されている多くの神経障害性疼痛薬剤とは対照的である。 In a further embodiment, the present invention provides a method for treating pain. The methods of the invention include the step of administering to a subject an effective amount of a PAF antagonist. Thereby, not only the pain which the subject is receiving can be treated, but also the occurrence of pain can be prevented. That is, the subject to which the present invention is applied may be a patient who already has pain, or a patient who has cancer but does not have pain. Furthermore, administration of an effective amount of a PAF antagonist shows a sustained effect of pain relief. For example, administration of an effective amount of TCV-309 is at least 12 hours or more, preferably 24 hours or more, 1 day, 2 days, 3 days, 4 days, 5-6 days, or longer (7-30 days) Can sustain pain relief over a long period of time. This is in contrast to many neuropathic pain drugs currently on the market.
また、本発明の方法は、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を被験体に投与する工程をさらに包含してもよい。上記因子を投与する工程は、ＰＡＦアンタゴニストを投与する工程と同時に行われても、ＰＡＦアンタゴニストを投与する前に行われても、ＰＡＦアンタゴニストを投与した後に行われてもよい。また、上述したような、疼痛を治療するに有効な鎮痛補助薬を被験体に投与する工程をさらに包含してもよいが、この場合、ＰＡＦアンタゴニストと異なる作用機序を有するものが好ましく、上記中枢作用を示さないものがより好ましい。 The method of the present invention may further include the step of administering to the subject a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord. The step of administering the factor may be performed simultaneously with the step of administering the PAF antagonist, may be performed before administering the PAF antagonist, or may be performed after administering the PAF antagonist. In addition, the method may further include the step of administering an analgesic adjuvant effective for treating pain, as described above, to the subject. In this case, it preferably has a mechanism of action different from that of the PAF antagonist, Those that do not exhibit central effects are more preferred.
本発明の方法はさらに、被験体における疼痛の程度を調べる工程をさらに包含してもよい。ＰＡＦアンタゴニストを投与する工程の前後に本工程を行うことによって、被験体が受けている疼痛を治療したか否かを知ることができるだけでなく、疼痛の発生を予防することができたか否かを知ることができる。 The method of the present invention may further include the step of examining the degree of pain in the subject. By performing this step before and after the step of administering the PAF antagonist, not only can it be known whether or not the pain experienced by the subject has been treated, but also whether or not the occurrence of pain has been prevented. I can know.
〔３：ＰＡＦアンタゴニストの組合せ療法〕
本発明は、癌性疼痛に適用されるだけでなく、脊髄における下行性疼痛抑制経路の機能を増強する因子が用いられる疼痛において併用されることもまた好ましい。[3: Combination therapy of PAF antagonist]
In addition to being applied to cancer pain, the present invention is also preferably used in combination with pain in which a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord is used.
本発明は、脊髄における下行性疼痛抑制経路の機能を増強する因子との併用に好適な新たな技術を提供する。通常、痛み刺激の情報伝達は、脊髄の下行性疼痛抑制系経路によって強く抑制されている。下行性疼痛抑制系経路はグリシン作動性神経にも投射しており、神経終末からグリシン遊離を促進することもその機序の一部に含まれる。ＰＡＦアンタゴニストは、ＰＡＦによる抑制性グリシン神経活性の変調（脱抑制）を阻害することによって、この系を強化する。実施例に示すように、ＰＡＦアンタゴニストを用いることによって、併用するオピオイド系鎮痛薬の量を減らすことができる。具体的には、単独でほとんど鎮痛作用を示さないモルヒネ０．３ｍｇ／ｋｇの皮下投与に、ＰＡＦアンタゴニスト（モルヒネ投与の２４時間前に１〜１０μｇ／ｋｇ静脈内投与）を併用することによって顕著な疼痛抑制が示された。軽度の鎮痛作用を示すモルヒネ１０ｍｇ／ｋｇに、ＰＡＦアンタゴニスト１０μｇ／ｋｇを併用することによってほぼ完全な疼痛抑制が示され、この効果はモルヒネの投与量を１０μｇ／ｋｇに低減した場合も同様に示された。また、ＰＡＦアンタゴニスト３０〜３００μｇ／ｋｇの投与７日後にモルヒネ０．３ｍｇ／ｋｇを皮下投与することによって顕著な鎮痛作用が示された。このように、ＰＡＦアンタゴニストとの併用は、モルヒネの投与量を著しく減らすことができる。このようなＰＡＦアンタゴニストの作用は、モルヒネと同様の作用機序を有するオピオイド系鎮痛薬と併用した場合においても同様に発揮されることが期待できる。このことは、オピオイド系鎮痛薬の副作用として最も懸念される「便秘」が、もはや問題でなくなる。よって、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子との併用によって、相乗効果、および副作用発現のリスクの軽減が示唆される。 The present invention provides a new technique suitable for use in combination with factors that enhance the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord. Usually, information transmission of pain stimulation is strongly suppressed by the descending pain suppression system pathway of the spinal cord. The descending pain suppression pathway also projects to glycinergic nerves, and the promotion of glycine release from nerve endings is part of the mechanism. PAF antagonists enhance this system by inhibiting the modulation (deinhibition) of inhibitory glycine neuronal activity by PAF. As shown in the Examples, the amount of opioid analgesic used in combination can be reduced by using a PAF antagonist. Specifically, it is prominent by concomitantly using a PAF antagonist (1-10 μg / kg intravenously 24 hours before morphine administration) in combination with subcutaneous administration of morphine 0.3 mg / kg, which hardly shows analgesic action alone. Pain suppression was shown. When combined with 10 μg / kg of a PAF antagonist in combination with 10 mg / kg of morphine having a mild analgesic effect, almost complete pain suppression is shown, and this effect is similarly shown when the dose of morphine is reduced to 10 μg / kg. It was done. In addition, a remarkable analgesic effect was shown by subcutaneous administration of 0.3 mg / kg of morphine 7 days after administration of 30 to 300 μg / kg of the PAF antagonist. Thus, concomitant use with a PAF antagonist can significantly reduce the dose of morphine. Such an action of the PAF antagonist can be expected to be similarly exerted even when used in combination with an opioid analgesic having the same mechanism of action as morphine. This is no longer a problem of “constipation”, which is most concerned as a side effect of opioid analgesics. Thus, the combined use with factors that enhance the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord suggests a synergistic effect and a reduced risk of side effects.
モルヒネ等のオピオイド系鎮痛薬の最も煩わしい副作用は、鎮痛効果が得られるより少量であっても、便秘を引き起こすことであり、オピオイド療法の間にわたって強い便秘に見舞われることである。モルヒネ１〜５０ｍｇ／ｋｇの皮下投与によって引き起こされる脱糞抑制は、ＰＡＦアンタゴニスト１０μｇ／ｋｇの併用によって、全く影響を受けなかった。このことは、ＰＡＦアンタゴニストはモルヒネの鎮痛作用を著しく増強するにもかかわらず脱糞抑制作用を増強しないことを示し、モルヒネを減量することにより便秘を軽減することができることを示している。 The most annoying side effect of opioid analgesics such as morphine is that it causes constipation, even at lower doses than the analgesic effect, and suffers strong constipation during opioid therapy. Defecation suppression caused by subcutaneous administration of morphine 1-50 mg / kg was not affected at all by the combined use of the PAF antagonist 10 μg / kg. This indicates that the PAF antagonist does not enhance the defecation-inhibiting action despite significantly enhancing the analgesic action of morphine, and that constipation can be reduced by reducing the amount of morphine.
本発明において、ＰＡＦアンタゴニストは、化合物として用いられても、上述した組成物またはキットの形態で用いられてもよい。組成物の場合、疼痛を処置するために、ＰＡＦアンタゴニストを含有しており、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子と併用されるために用いられることを特徴としており、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を適用する前に被験体に適用されることが好ましく、反復投与されることもまた好ましい。キットの場合、疼痛を処置するために、ＰＡＦアンタゴニスト、および、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を備えていることを特徴としており、キットに備えられたＰＡＦアンタゴニストは、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を適用する前に被験体に適用されることが好ましく、反復投与されることもまた好ましい。また、上記キットは、上述した組成物を調製するために用いられてもよい。さらに、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を用いた治療が意図されている被験体に対して、有効量のＰＡＦアンタゴニストを投与する工程を包含する方法もまた、本発明の範囲内である。本方法において、上記工程は、複数回反復されてもよい。 In the present invention, the PAF antagonist may be used as a compound or may be used in the form of the composition or kit described above. In the case of a composition, it contains a PAF antagonist to treat pain and is used to be used in combination with factors that enhance the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord, Preferably, it is applied to the subject prior to applying a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway, and repeated administration is also preferred. In the case of a kit, it is characterized by comprising a PAF antagonist and a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord to treat pain. Preferably, it is applied to the subject prior to applying a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway, and repeated administration is also preferred. Moreover, the said kit may be used in order to prepare the composition mentioned above. Furthermore, a method comprising administering an effective amount of a PAF antagonist to a subject intended for treatment with a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord is also of the present invention. Within range. In the present method, the above steps may be repeated multiple times.
本項における組成物、キットおよび方法について、上記「ＰＡＦアンタゴニストによる癌性疼痛の処置」の項の記載が参照されるべきであることを、本明細書を読んだ当業者は容易に理解する。 Those skilled in the art who have read this specification will readily understand that the composition, kit and method in this section should be referred to the description in the section “Treatment of cancer pain by PAF antagonist” above.
〔４：治療薬のスクリーニング〕
上述したように、本発明は、ＰＡＦアンタゴニストの新規機能を見出したことに基づいている。このことは、ＰＡＦアンタゴニストであるか否かを知ることによって、癌性疼痛を処置し得る化合物を得ることができるということを示している。すなわち、本発明は、癌性疼痛を処置し得る化合物をスクリーニングする方法を提供する。[4: therapeutic drug screening]
As described above, the present invention is based on the discovery of a novel function of a PAF antagonist. This indicates that it is possible to obtain a compound capable of treating cancer pain by knowing whether or not it is a PAF antagonist. That is, the present invention provides a method for screening a compound capable of treating cancer pain.
本発明のスクリーニング方法は、癌性疼痛を処置し得る化合物をスクリーニングするために、候補化合物がＰＡＦの作用を阻害するか否かを調べる工程を包含することを特徴としており、候補化合物がＰＡＦのＰＡＦ受容体に対する結合を拮抗阻害するか否かを調べる工程をさらに包含してもよい。本発明のスクリーニング方法は、癌性疼痛モデル動物に対して疼痛抑制作用を有している候補化合物を選択する工程をさらに包含することが好ましい。本発明のスクリーニング方法は、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の機能を増強する化合物をスクリーニングするために用いられても、上記因子の副作用を抑制する化合物をスクリーニングするために用いられてもよい。 The screening method of the present invention comprises a step of examining whether or not a candidate compound inhibits the action of PAF in order to screen for a compound capable of treating cancer pain, wherein the candidate compound is PAF. A step of examining whether or not to competitively inhibit the binding to the PAF receptor may be further included. It is preferable that the screening method of the present invention further includes a step of selecting a candidate compound having a pain suppressing action on a cancer pain model animal. The screening method of the present invention is used for screening a compound that suppresses a side effect of the above factor even if it is used for screening a compound that enhances the function of a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord. May be used.
本発明のスクリーニング方法は、癌性疼痛を処置し得る化合物をスクリーニングするために、候補化合物がＰＡＦの作用を阻害するか否かを調べる工程を包含することを特徴としており、ＰＡＦまたはＰＡＦアナログのＰＡＦ受容体に対する結合を、候補化合物が拮抗的に阻害するか否かを調べる工程をさらに包含してもよい。本発明のスクリーニング方法は、疼痛モデル動物において候補化合物が疼痛抑制作用を有しているか否かを調べる工程をさらに包含することが好ましい。本発明のスクリーニング方法は、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の機能を増強する化合物をスクリーニングするために用いられてもよい。 The screening method of the present invention comprises a step of examining whether a candidate compound inhibits the action of PAF in order to screen for a compound capable of treating cancer pain. A step of examining whether the candidate compound competitively inhibits binding to the PAF receptor may be further included. The screening method of the present invention preferably further includes a step of examining whether or not the candidate compound has a pain suppressing action in the pain model animal. The screening method of the present invention may be used to screen for a compound that enhances the function of a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord.
候補化合物がＰＡＦの作用を阻害するか否かを調べるには、公知のバイオアッセイが用いられればよく、スクリーニングの指標として利用されるＰＡＦの作用としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：血小板凝集作用；多形核白血球（ＰＭＮｓ）における白血球エラスターゼ分泌；ＰＭＮｓにおける白血球β−Ｄ−グルクロニダーゼの分泌；ＰＭＮｓにおける活性酸素生成。また、ＰＭＮｓおよび好中球様に分化させたＨＬ−６０細胞、ＰＡＦ受容体を過剰発現した細胞株を用いて、ＰＡＦによる細胞遊走能の亢進を阻害するか否かを調べることにより、候補化合物がＰＡＦの作用を阻害するか否かを調べることができる。 In order to examine whether a candidate compound inhibits the action of PAF, a known bioassay may be used, and the action of PAF used as a screening index includes, but is not limited to, the following: Platelet aggregation; Leukocyte elastase secretion in polymorphonuclear leukocytes (PMNs); Leukocyte β-D-glucuronidase secretion in PMNs; Reactive oxygen production in PMNs. In addition, by using HL-60 cells differentiated into PMNs and neutrophils, cell lines overexpressing the PAF receptor, whether or not the enhancement of cell migration ability by PAF is inhibited, candidate compounds are obtained. Whether or not inhibits the action of PAF.
ＰＡＦまたはＰＡＦアナログのＰＡＦ受容体に対する結合を、候補化合物が拮抗的に阻害するか否かを調べるには、ＰＡＦ受容体が発現している細胞を、蛍光標識または放射標識したＰＡＦと、候補化合物の存在下／非存在下にてインキュベートし、次いで細胞膜画分を調製し、当該画分における放射活性の有無を調べればよい。 In order to examine whether a candidate compound competitively inhibits the binding of PAF or a PAF analog to a PAF receptor, cells expressing the PAF receptor are labeled with a fluorescently or radiolabeled PAF, and the candidate compound. And then in the presence / absence of a cell membrane, a cell membrane fraction is prepared, and the presence or absence of radioactivity in the fraction may be examined.
血小板凝集作用の測定は、血液を採取・分離して得た洗浄血小板浮遊液を作製し、ＰＡＦを添加することによる血小板凝集をアグリゴメーターにて測定すればよい。ＰＭＮｓにおける白血球エラスターゼ分泌の測定は、血液を採取・分離して得た白血球浮遊液にＰＡＦを添加した後、遠心分離して得たメディウム中のエラスターゼ活性を測定すればよい。 The platelet aggregation action may be measured by preparing a washed platelet suspension obtained by collecting and separating blood and measuring the platelet aggregation by adding PAF with an aggregometer. The measurement of leukocyte elastase secretion in PMNs may be performed by measuring elastase activity in a medium obtained by adding PAF to a leukocyte suspension obtained by collecting and separating blood and then centrifuging.
ＰＭＮｓにおける白血球β−Ｄ−グルクロニダーゼ分泌の測定は、血液を採取・分離して得た白血球浮遊液にＰＡＦを添加した後、遠心分離して得たメディウム中のβ−Ｄ−グルクロニダーゼ活性を測定すればよい。ＰＭＮｓにおける活性酸素産生の測定は、血液を採取・分離して得た白血球浮遊液にＰＡＦを添加した後、産生された活性酸素の一種であるスーパーオキシド(Ｏ２−)をシトクロムＣ還元法、スーパーオキシドジスムターゼ(ＳＯＤ)を用いた化学発光法、フローサイトメーターを用いた蛍光法、ＮＢＴ還元法を用いて測定すればよい。ＰＭＮｓおよび好中球様に分化させたＨＬ−６０細胞、ＰＡＦ受容体を過剰発現した細胞株を用いた細胞遊走能の測定は、細胞浮遊液とＰＡＦ溶液をフィルターを挟んでセットし、ＰＡＦの濃度勾配に従ってフィルターの小径を通過した細胞数を測定すればよい。Leukocyte β-D-glucuronidase secretion in PMNs is measured by adding β-D-glucuronidase activity in a medium obtained by adding PAF to a leukocyte suspension obtained by collecting and separating blood and then centrifuging it. That's fine. In the measurement of active oxygen production in PMNs, after adding PAF to leukocyte suspension obtained by collecting and separating blood, superoxide (O 2− ), which is a kind of produced active oxygen, is reduced by cytochrome C reduction, Measurement may be performed using a chemiluminescence method using superoxide dismutase (SOD), a fluorescence method using a flow cytometer, or an NBT reduction method. Measurement of cell migration using PMNs and neutrophil-like differentiated HL-60 cells and cell lines overexpressing the PAF receptor was performed by setting the cell suspension and PAF solution with a filter in between. What is necessary is just to measure the cell number which passed the small diameter of the filter according to the concentration gradient.
本発明のスクリーニング方法に用いられ得る疼痛モデル動物としては、公知の癌性疼痛モデル動物であれば特に限定されないが、後述する実施例にて用いた、ＮＣＴＣ２４７２腫瘍細胞をマウス大腿骨に移植して作製した大腿骨癌モデルが最も好ましい。すなわち、本発明のスクリーニング方法は、骨癌性の癌性疼痛を処置し得る化合物をスクリーニングする方法であり得る。 The pain model animal that can be used in the screening method of the present invention is not particularly limited as long as it is a known cancer pain model animal, but NCTC2472 tumor cells used in Examples described later are transplanted into a mouse femur. The prepared femur cancer model is most preferable. That is, the screening method of the present invention can be a method for screening a compound capable of treating bone cancerous cancer pain.
なお、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中にて参考として援用される。 In addition, all the academic literatures and patent literatures described in this specification are incorporated by reference in this specification.
本発明は、以下の実施例によってさらに詳細に説明されるが、これに限定されるべきではない。 The invention is illustrated in more detail by the following examples, but should not be limited thereto.
〔１．材料および方法〕
〔１．１．試薬〕
特異的ＰＡＦアンタゴニストとして、ＴＣＶ−３０９（武田薬品工業，大阪より譲渡）、ＢＮ ５０７３９（Institute Henri Beaufour, Le Plessis Robinson, Franceより譲渡）、およびＷＥＢ ２０８６（Tocris Cookson Limited, Bristol UK） を使用した(図１）。作用機序の異なる比較対照として、ガバペンチン（Sigma/RBI, Natick, MA）を用いた。[1. Materials and methods〕
[1.1. reagent〕
TCV-309 (taken from Takeda Pharmaceutical, Osaka), BN 50739 (assigned from Institute Henri Beaufour, Le Plessis Robinson, France), and WEB 2086 (Tocris Cookson Limited, Bristol UK) were used as specific PAF antagonists ( FIG. 1). Gabapentin (Sigma / RBI, Natick, MA) was used as a comparative control with different mechanisms of action.
ＢＮ ５０７３９を、４５％ 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin（Sigma/RBI, Natick, MA）に溶解し、１Ｍ ＮａＯＨでｐＨ６．０に調整（５ｍｇ／ｍＬ）した後に、人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）または生理食塩水で希釈した。その他の試薬は、ＡＣＳＦまたは生理食塩水に溶解した。ＡＣＳＦの組成は、ＮａＣｌ １４２ｍＭ、ＫＣｌ ５ｍＭ、ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ２ｍＭ、ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ２ｍＭ、ＮａＨ２ＰＯ４ １．２５ｍＭ、Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ １０ｍＭ、ＨＥＰＥＳ １０ｍＭで、ｐＨ７．４に調整した。試薬を、静脈内投与、経口投与または脊髄くも膜下腔内投与した。静脈内投与（i.v.投与）について、各種試薬（５ｍＬ／ｋｇ体重）をマウス尾静脈より投与した。経口投与（p.o.投与）について、マウス用経口針を用いて各種試薬（５ｍＬ／ｋｇ体重）を胃腔内に直接投与した。脊髄くも膜下腔内投与（i.t.投与）について、ＡＣＳＦ ５μＬに溶解した各種試薬（５ｍＬ／ｋｇ体重）を、Hamilton micro syringe（２７ゲージ１／２の注射針）でマウスの第５、第６腰椎間からゆっくり投与した。針が脊髄くも膜下腔内へ刺入されたことを、マウスの尾の反射性の速い動き「flick」によって確認した。脊髄腔内投与した薬物の分布については、malachit greenまたはcommassie brilliant blueの脊髄腔内投与による染色分布から脊髄の腰椎部分に限定されることが示されている。BN 50739 was dissolved in 45% 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin (Sigma / RBI, Natick, MA), adjusted to pH 6.0 with 1M NaOH (5 mg / mL), and then artificial cerebrospinal fluid (ACSF) or Dilute with saline. Other reagents were dissolved in ACSF or saline. The composition of ACSF was NaCl 142 mM, KCl 5 mM, CaCl 2 · 2H 2 O 2 mM, MgCl 2 · 6H 2 O 2 mM, NaH 2 PO 4 1.25 mM, D-glucose 10 mM, HEPES 10 mM, and adjusted to pH 7.4. . Reagents were administered intravenously, orally or intrathecally. For intravenous administration (iv administration), various reagents (5 mL / kg body weight) were administered from the mouse tail vein. For oral administration (po administration), various reagents (5 mL / kg body weight) were directly administered into the stomach cavity using an oral needle for mice. For intrathecal administration (it administration) of the spinal cord, various reagents (5 mL / kg body weight) dissolved in 5 μL of ACSF were used with a Hamilton micro syringe (27 gauge 1/2 injection needle) for the fifth and sixth lumbar intervertebral Was administered slowly. The needle was inserted into the spinal subarachnoid space and confirmed by “flick”, a fast reflex movement of the mouse tail. It has been shown that the distribution of drugs administered intrathecally is limited to the lumbar portion of the spinal cord due to the distribution of malachit green or commassie brilliant blue by intraspinal administration.
〔１．２．動物〕
実験には、生後6週齢、２５〜３０ｇのＣ３Ｈ／ＨｅＮ系雄性マウスを用いた。１ケージ当たり５匹の状態で、室温２２±１℃、湿度５５±１０％、１２時間の明暗サイクル（明期：午前８時〜午後８時）の環境下で飼育した。飼料および水を自由に摂取させた。実験は。明サイクルの間に実施した。動物の取り扱いは全て、日本薬理学会動物取り扱いガイドラインおよび広島大学動物取り扱いガイドラインに準拠して行った。短期間での体重の著しい減少（２０％以上）、或いは、摂水や摂食が困難となり衰弱の著しいマウスは、苦痛軽減をはかるため、安楽死処置した。[1.2. animal〕
In the experiment, 25- to 30-g C3H / HeN male mice aged 6 weeks were used. The animals were housed in an environment of a room temperature of 22 ± 1 ° C., a humidity of 55 ± 10%, and a 12-hour light / dark cycle (light period: 8 am to 8 pm) with 5 animals per cage. Feed and water were available ad libitum. Experiment. Performed during the light cycle. All animals were handled according to the Japanese Pharmacological Society Animal Handling Guidelines and the Hiroshima University Animal Handling Guidelines. Mice that were significantly debilitated in a short period of time (20% or more), or that were debilitated due to difficulty in drinking or feeding, were treated with euthanasia in order to reduce pain.
〔１．３．マウス大腿骨癌モデルの作製〕
マウス大腿骨癌モデル（ＦＢＣマウス）を、Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウス左大腿骨骨髄内に骨溶解性肉腫細胞ＮＣＴＣ２４７２を移植して作製した。Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウスをsodium pentobarbital （５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内投与）麻酔下にて皮膚を切開し、大腿骨を露出させた。歯科用リーマー（２５号）を用いて、大腿骨の遠位部に注入口を作製した。２×１０７個／ｍＬ（ＨＢＳＳ）に調整した細胞浮遊液を５μＬ、３０Ｇ注射針およびマイクロシリンジを用いて注入口から注入した。歯科用セメント（キャビトン）で注入口を塞ぎ、皮膚を縫合した。Ｓｈａｍマウスは、細胞の代わりにＨＢＳＳを５μＬ注入して作製した。各種処置群への無作為化および薬物投与を、術後１１日目に行った。[1.3. Preparation of mouse femur cancer model]
A mouse femoral cancer model (FBC mouse) was prepared by transplanting osteolytic sarcoma cells NCTC2472 into the left femur bone marrow of C3H / HeN mice. C3H / HeN mice were subjected to skin incision under sodium pentobarbital (50 mg / kg, intraperitoneal administration) anesthesia to expose the femur. An injection port was created in the distal part of the femur using a dental reamer (No. 25). The cell suspension adjusted to 2 × 10 7 cells / mL (HBSS) was injected from the injection port using 5 μL, 30 G injection needle and microsyringe. The injection port was closed with dental cement (Caviton), and the skin was sutured. Sham mice were prepared by injecting 5 μL of HBSS instead of cells. Randomization and drug administration to the various treatment groups was performed on the 11th postoperative day.
〔１．４．細胞培養〕
ＮＣＴＣ２４７２細胞を、１０％ウシ胎児血清、１００ｕｎｉｔ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを含むDulbecco's Modified Eagle's Medium （ＤＭＥＭ）を用いて、５％ＣＯ２、９５％空気の環境下にて３７℃で培養した。[1.4. Cell culture)
NCTC2472 cells were cultured at 37 ° C. in an environment of 5% CO 2 and 95% air using Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) containing 10% fetal bovine serum, 100 units / mL penicillin, 100 μg / mL streptomycin. .
〔１．５．癌性疼痛の強度の評価〕
癌性疼痛の重篤度は以下の[1]〜[4]によって評価した：
[1]アロディニアスコア（Allodyina score）；ペイントブラシで軽く患部を撫でる触覚刺激に対する逃避行動（疼痛関連行動）の程度をスコア化して評価した．すなわち、「0: 反応なし，1: 軽く鳴く，筆から逃れようとする，2: 激しく鳴く，筆にかみつこうとする，筆から激しく逃れようとする」を基準とした．
[2]アロディニア閾値（Withdrawal threshold）；von Frey hairsフィラメントによる患肢足蹠刺激に対するマウス後足の逃避行動閾値より評価した．刺激強度閾値剛性はグラムで表した．
[3]Guarding behavior（安静時に患肢を持ち上げる行動）；マウスを底が金網のプラスチックケージ内で自由に行動させ、２分間の観察中に患肢の防御行動（guarding behavior）、すなわち、患肢を床から持ち上げている防御行動の時間を測定して評価した．
[4]Limb-use abnormality（体動時に患肢を不自然に使う行動）；マウスの歩行異常の程度をスコア化して評価した．すなわち、「0: 正常な歩行，1: 軽い跛行，2: 明らかな跛行，3: 患肢を一部使用せずに歩行，4: 患肢を使用せずに歩行」を基準とした。[1.5. (Evaluation of the intensity of cancer pain)
The severity of cancer pain was assessed by the following [1]-[4]:
[1] Allodyina score: The degree of escape behavior (pain-related behavior) in response to a tactile stimulus that was gently stroked with a paint brush was evaluated. That is, “0: no response, 1: lightly screaming, trying to escape from the brush, 2: screaming violently, trying to bite the brush, trying to escape from the brush” was the standard.
[2] Allodynia threshold (Withdrawal threshold); Evaluated from the escape behavior threshold of the mouse hind paw to the toes stimulation of the affected limb with von Frey hairs filament. The stimulus intensity threshold stiffness was expressed in grams.
[3] Guarding behavior (moving the affected limb at rest); the mouse is allowed to move freely in a plastic cage with a metal mesh at the bottom, and the guarding behavior of the affected limb during 2 minutes of observation, ie the affected limb We measured and evaluated the time of defensive behavior when we lifted off the floor.
[4] Limb-use abnormality (behavioral use of the affected limb during body movement); The degree of gait abnormality in mice was scored and evaluated. That is, the criteria were “0: normal walking, 1: light lameness, 2: clear lameness, 3: walking without using some affected limbs, 4: walking without using affected limbs”.
評価を、薬物の投与前、および投与後の所定の時点で行った。研究は観察者に処置群を判別し得ない環境下にて行った。 Evaluation was performed before and after drug administration at predetermined time points. The study was conducted in an environment where the observer could not discriminate between treatment groups.
〔１．６．脊髄ＰＡＦ受容体ノックダウンマウスの作製〕
ＲＮＡ干渉によるｉｎ ｖｉｖｏでの標的遺伝子のノックダウンを、マウスＰＡＦ受容体遺伝子に特異的な配列からＰＡＦ受容体特異的２本鎖ＲＮＡ（small interfering RNA，ｓｉＲＮＡ）を作製し、hemagglutinating virus of Japan envelope vector system（HVJ-Envelope Vector Kit GenomeONE; Ishihara Sangyo Kaisha, Ltd., Osaka, Japan）に封入した後に、マウスの第５、第６腰椎間から脊髄腔内投与することによって行った．標的タンパク質の発現を、免疫ブロット法および免疫組織化学分析によって確認した。同一量のmutant siRNAおよびHVJ-Envelope Vectorのみを投与したものを、対照群とした。[1.6. Preparation of spinal PAF receptor knockdown mouse]
In vivo knockdown of the target gene by RNA interference, a PAF receptor-specific double-stranded RNA (siRNA) is prepared from a sequence specific to the mouse PAF receptor gene, and hemagglutinating virus of Japan envelope After encapsulating in a vector system (HVJ-Envelope Vector Kit GenomeONE; Ishihara Sangyo Kaisha, Ltd., Osaka, Japan), it was administered by intrathecal administration from the fifth and sixth lumbar vertebrae of mice. Target protein expression was confirmed by immunoblotting and immunohistochemical analysis. A control group was administered with only the same amounts of mutant siRNA and HVJ-Envelope Vector.
〔１．７．便秘の評価〕
モルヒネ投与による便秘を、脱糞量の減少、および肛門括約筋と膀胱括約筋の収縮により生じるとされるマウスの挙尾反応の亢進によって評価した。マウスを薬物投与２４時間前からテストケージ（床が格子状のアクリルケージに濾紙を敷いた）の中で飼育することによって環境に順化させた。飼料および水を自由に摂取させた。モルヒネ（０．１〜１０ ｍｇ／ｋｇ）を皮下投与した後に、脱糞量と挙尾反応の有無について１時間観察した。観察中は試料および水を与えなかった。１時間の脱糞量を、マウスの体重で補正した。挙尾反応は実験時間中に尾を４５°以上に挙上したマウスの割合で評価した。マウスを、１回の実験にのみ使用した。[1.7. Evaluation of constipation)
Constipation due to morphine administration was assessed by a decrease in defecation volume and an increase in the tail reaction of mice, which is attributed to contraction of the anal and bladder sphincters. Mice were acclimated to the environment by raising them in a test cage (filter paper in a grid-like acrylic cage with floors) starting 24 hours before drug administration. Feed and water were available ad libitum. After subcutaneous administration of morphine (0.1-10 mg / kg), the amount of defecation and the presence or absence of a tail reaction were observed for 1 hour. No sample or water was given during the observation. The amount of defecation for 1 hour was corrected by the weight of the mouse. The tail reaction was evaluated by the percentage of mice that raised their tails to 45 ° or more during the experiment. Mice were used for only one experiment.
〔１．８．統計処理〕
有意差検定を、Dunnett’s Post-hoc Procedure によって行った（＊Ｐ＜０．０５）。[1.8. Statistical processing)
Significance test was performed by Dunnett's Post-hoc Procedure (* P <0.05).
〔２．結果〕
〔２．１．ＰＡＦアンタゴニストによるＦＢＣマウスにおける疼痛緩和作用〕
ＮＣＴＣ２４７２細胞の移植１１日後のＦＢＣマウスに、ＴＣＶ−３０９（０．０１〜３ｍｇ／ｋｇ）、ＷＥＢ２０８６（０．１ｍｇ／ｋｇ）、およびＢＮ５０７３９（０．１ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクルとして生理的食塩水、２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ−β−ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ溶液を、静脈内投与した。アロディニアスコア、アロディニア閾値、Guarding behavior、Limb-use abnormalityについて、投与後１０日間にわたって経時的にモニタリングした。[2. result〕
[2.1. Pain relief in FBC mice by PAF antagonist]
FBC mice 11 days after transplantation of NCTC2472 cells were treated with TCV-309 (0.01 to 3 mg / kg), WEB2086 (0.1 mg / kg), and BN50739 (0.1 mg / kg), or saline as vehicle. 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin solution was administered intravenously. Allodynia score, allodynia threshold, Guarding behavior, and Limb-use abnormality were monitored over time for 10 days after administration.
癌細胞の移植１１日後には、アロディニアスコア（触刺激に対する逃避行動）は最大（スコア２）に達した。ＴＣＶ−３０９の静脈内投与によって、アロディニアスコアは顕著に減少し、０．１ｍｇ／ｋｇ以上の用量で、投与１〜３日後にはほとんどアロディニア反応を示さなかった（図２Ａ）。この効果は、０．０１ｍｇ／ｋｇから０．３ｍｇ／ｋｇまでにおいて用量依存的に認められた。また、この効果は、投与５〜６日後まで持続した。ＴＣＶ−３０９静脈内投与は、アロディニア閾値（痛覚閾値（ｇｍ））を上昇させ、この効果はアロディニアスコアと同様に長期間にわたって持続した（図２Ｂ）。癌細胞の移植後のマウスが、安静時に患肢を持ち上げる行動（Guarding behavior）は、疼痛の１つの指標と考えられる。Guarding behavior時間は、ＴＣＶ−３０９の静脈内投与によって、用量依存的に短縮し（０．０１ｍｇ／ｋｇから０．３ｍｇ／ｋｇ）、投与３日後までほとんどGuarding behaviorは見られなくなった。この効果は、投与７日後まで観察され、１０日後には回復していた（図２Ｃ）。マウスの歩行異常を指標とするLimb-use abnormalityスコアもまた、他の結果と同様に、用量依存的に抑制された（０．０１ｍｇ／ｋｇから０．３ｍｇ／ｋｇ；図２Ｄ）。 11 days after the transplantation of cancer cells, the allodynia score (escape behavior against tactile stimulation) reached the maximum (score 2). Intravenous administration of TCV-309 significantly reduced the allodynia score, and showed almost no allodynia response 1 to 3 days after administration at a dose of 0.1 mg / kg or more (FIG. 2A). This effect was observed in a dose-dependent manner from 0.01 mg / kg to 0.3 mg / kg. Moreover, this effect lasted until 5 to 6 days after administration. Intravenous administration of TCV-309 increased the allodynia threshold (nociception threshold (gm)) and this effect persisted over a long period of time, similar to the allodynia score (FIG. 2B). Guarding behavior of the mouse after transplantation of cancer cells when the affected limb is lifted at rest is considered as one indicator of pain. The guarding behavior time was shortened in a dose-dependent manner by the intravenous administration of TCV-309 (0.01 mg / kg to 0.3 mg / kg), and almost no guarding behavior was observed until 3 days after administration. This effect was observed until 7 days after administration, and recovered after 10 days (FIG. 2C). The Limb-use abnormality score using mouse gait abnormality as an index was also suppressed in a dose-dependent manner (0.01 mg / kg to 0.3 mg / kg; FIG. 2D), similar to the other results.
同様の疼痛緩和作用が、経口投与（ＴＣＶ−３０９、０．３ｍｇ／ｋｇ）によって認められ、この効果は、投与後８日間にわたって認められた（図３Ａ〜Ｄ）。ＦＢＣマウスにおいては、癌細胞の移植３日後から疼痛反応が発現し、１０日後には最大反応となった（図４）。癌細胞の移植と同時にＴＣＶ−３０９投与を開始することによって、疼痛の発現が抑制され、ＴＣＶ−３０９を４日毎に８回にわたって連続投与することによって２８日間にわたって疼痛反応が全くみられなかった。また、その鎮痛効果に耐性を生じることはなかった（図４）。これらの結果は、癌性疼痛の発生前に、あるいはごく初期段階に、ＴＣＶ−３０９を用いることによって、痛みの増悪反応を回避することができること、および、より効果的な疼痛緩和効果が得られることを示唆する。 A similar pain relieving effect was observed by oral administration (TCV-309, 0.3 mg / kg), and this effect was observed over 8 days after administration (FIGS. 3A-D). In FBC mice, a pain response was observed 3 days after transplantation of cancer cells, and the maximum response was observed 10 days later (FIG. 4). By starting TCV-309 administration at the same time as cancer cell transplantation, the onset of pain was suppressed, and by continuously administering TCV-309 8 times every 4 days, no pain response was observed for 28 days. Moreover, tolerance was not produced in the analgesic effect (FIG. 4). These results indicate that the use of TCV-309 before or at the very early stage of cancer pain can avoid an exacerbation of pain and provide a more effective pain relieving effect. I suggest that.
このように、ＰＡＦアンタゴニストＴＣＶ−３０９は、極めて少量で、長期間持続する疼痛緩和作用を発揮することが示された。このＴＣＶ−３０９による作用が、ＰＡＦ受容体に対して特異的に拮抗的阻害作用を及ぼすことによって発現していることを確認するために、化学構造の異なる他のＰＡＦアンタゴニストを用いて検討した。ＷＥＢ２０８６（０．１ｍｇ／ｋｇ）またはＢＮ５０７３９（０．１ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した場合もまた、ＴＣＶ−３０９と同様の疼痛緩和作用が認められた（図５Ａ〜Ｄ）。このことから、ＰＡＦアンタゴニストによる疼痛緩和作用は、個々の化合物の構造に起因するのでなく、ＰＡＦ受容体を阻害することに起因しているということが強く示唆された。 Thus, it was shown that the PAF antagonist TCV-309 exerts a pain relieving action that lasts for a long time in a very small amount. In order to confirm that this action by TCV-309 is expressed by exerting an antagonistic action specifically on the PAF receptor, examination was performed using other PAF antagonists having different chemical structures. When WEB2086 (0.1 mg / kg) or BN50739 (0.1 mg / kg) was intravenously administered, the same pain relieving action as TCV-309 was observed (FIGS. 5A to 5D). This strongly suggests that the pain relieving action by the PAF antagonist is not due to the structure of the individual compounds but due to inhibition of the PAF receptor.
ＰＡＦアンタゴニストの作用点を明確にするために、ＴＣＶ−３０９を脊髄腔内に投与した時の影響について検討した（図６Ａ〜Ｄ）。極めて微量のＴＣＶ−３０９（１０ｐｇ／マウス）を脊髄腔内投与した場合に、３〜４日間持続する強力な疼痛緩和作用が惹起された。したがって、ＴＣＶ−３０９の作用点には少なくとも脊髄が含まれることが示唆された。 In order to clarify the action point of the PAF antagonist, the effect when TCV-309 was administered intrathecally was examined (FIGS. 6A to 6D). When a very small amount of TCV-309 (10 pg / mouse) was administered intrathecally, a powerful pain relieving action lasting 3 to 4 days was induced. Therefore, it was suggested that the action point of TCV-309 includes at least the spinal cord.
しかし、どのような化合物であっても、目的の作用以外の非特異的作用を有している可能性を完全に否定することはできない。そこで、化学物質が生体分子に直接結合して何らかの作用を発現する可能性を排除するために、ＰＡＦ受容体のｍＲＮＡに特異的なｓｉＲＮＡを用いて、脊髄ＰＡＦ受容体タンパク質の発現を抑制したマウスにおける効果を検討した。ＦＢＣマウスにおいて、ｓｉＲＮＡを用いて脊髄ＰＡＦ受容体をノックダウンした。ｓｉＲＮＡの投与２〜３日後をピークとする疼痛緩和作用が観察された。具体的には、アロディニアスコア、アロディニア閾値、Guarding behavior、Limb-use abnormalityのいずれの疼痛指標においても、同様の経時的な変化が認められた（図７Ａ〜Ｄ）。このタイムコースは、ＰＡＦ受容体タンパク質の発現消長の経時的な変化と対応していた（図示せず）。これらの結果より、ＰＡＦアンタゴニストの疼痛緩和作用の機序には、少なくとも脊髄のＰＡＦ受容体の特異的阻害が含まれる可能性が示唆された。 However, it cannot be completely denied that any compound has a non-specific action other than the intended action. Therefore, in order to eliminate the possibility that a chemical substance directly binds to a biomolecule and expresses some action, a mouse in which the expression of spinal PAF receptor protein is suppressed using siRNA specific for the mRNA of PAF receptor. The effect on was examined. In FBC mice, siRNA was used to knock down spinal PAF receptors. Pain relieving action was observed peaking at 2 to 3 days after siRNA administration. Specifically, similar changes over time were observed in all pain indices of allodynia score, allodynia threshold, Guarding behavior, and Limb-use abnormality (FIGS. 7A to 7D). This time course corresponded to changes over time in the expression fluctuation of the PAF receptor protein (not shown). From these results, it was suggested that the mechanism of the pain relieving action of the PAF antagonist may include at least specific inhibition of the spinal PAF receptor.
〔２．２．ＦＢＣマウスにおけるモルヒネの疼痛緩和作用の、ＰＡＦアンタゴニストによる増強〕
ＴＣＶ−３０９（０．０１ ｍｇ／ｋｇ）の投与１日後のＦＢＣマウスにモルヒネ（０．３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、その２０分後または４時間後の疼痛緩和作用を検討した。ＴＣＶ−３０９単独投与（モルヒネなし）の場合、アロディニスコアは約５０％抑制され、モルヒネ単独投与（ＴＣＶ−３０９なし）の場合、アロディニアスコアを全く抑制されなかったが、ＴＣＶ−３０９とモルヒネとを併用することによって、モルヒネ投与２０分後のアロディニアスコアはほぼ完全に抑制された（図８Ａ左）。アロディニア閾値（図８Ｂ左）、Guarding behavior（図８Ｃ左）、Limb-use abnormality（図８Ｄ左）についても、ＴＣＶ−３０９とモルヒネとを併用することによって、顕著な疼痛緩和作用が認められた。このことは、ＴＣＶ−３０９が、モルヒネの本来の作用持続時間内でモルヒネの効果を増強したこと、あるいはモルヒネの存在がＴＣＶ−３０９の効果を増強したことを示している。しかし，モルヒネ投与４時間後に観察した疼痛緩和作用は、ＴＣＶ−３０９単独投与（モルヒネなし）の場合と同程度であった（図８Ａ右〜８Ｄ右）。このことは、モルヒネの鎮痛作用が投与４時間後には消失していること、および、ＴＣＶ−３０９がモルヒネの作用持続時間を延長しないことを示している。[2.2. Enhancement of pain relief of morphine in FBC mice by PAF antagonist]
Morphine (0.3 mg / kg or 10 mg / kg) was administered to FBC mice one day after administration of TCV-309 (0.01 mg / kg), and the pain relieving action was examined 20 minutes or 4 hours later. . When TCV-309 alone was administered (without morphine), the allodynic score was suppressed by about 50%, and when morphine alone was administered (without TCV-309), the allodynia score was not suppressed at all, but TCV-309, morphine and In combination, the allodynia score 20 minutes after administration of morphine was almost completely suppressed (FIG. 8A left). With regard to allodynia threshold (FIG. 8B left), Guarding behavior (FIG. 8C left), and Limb-use abnormality (FIG. 8D left), a remarkable pain relieving action was recognized by using TCV-309 in combination with morphine. This indicates that TCV-309 enhanced the effect of morphine within the original duration of action of morphine, or the presence of morphine enhanced the effect of TCV-309. However, the pain relieving effect observed 4 hours after morphine administration was similar to that observed with TCV-309 alone (no morphine) (FIG. 8A right to 8D right). This indicates that the analgesic action of morphine has disappeared 4 hours after administration, and that TCV-309 does not prolong the duration of action of morphine.
種々の濃度のＴＣＶ−３０９（０．０１ｍｇ／ｋｇ〜０．３ｍｇ／ｋｇ）の投与７日後のＦＢＣマウスにモルヒネ（０．３ｍｇ／ｋｇ）を投与し、その２０分後の疼痛緩和作用を検討した。ＴＣＶ−３０９単独投与による疼痛緩和作用は、投与７日後にほぼ消失していた（図９Ａ）。ＴＣＶ−３０９（０．０１ｍｇ／ｋｇ）にモルヒネ（０．３ｍｇ／ｋｇ）を併用しても抗アロディニア作用がみられなかったが、ＴＣＶ−３０９（０．０３ｍｇ／ｋｇ〜０．３ｍｇ／ｋｇ）にモルヒネ（０．３ｍｇ／ｋｇ）を併用した場合、ＴＣＶ−３０９の用量依存的に強い抗アロディニア作用が認められた（図９Ａ）。アロディニア閾値（図９Ｂ）、Guarding behavior（図９Ｃ）、Limb-use abnormality（図９Ｄ）のいずれにおいても、同様の増強作用が認められた。これらの効果は、ＴＣＶ−３０９の代りにＷＥＢ２０８６またはＢＮ５０７３９を用いた場合においても、観察された（図１０Ａ〜Ｄ）。これらのことは、ＰＡＦアンタゴニストによる疼痛緩和作用が持続性であることを示すとともに、モルヒネの作用を増強する効果もまた持続性であることを示している。 Morphine (0.3 mg / kg) was administered to FBC mice 7 days after administration of various concentrations of TCV-309 (0.01 mg / kg to 0.3 mg / kg), and the pain alleviating effect 20 minutes later was examined. did. The pain alleviating effect of TCV-309 alone was almost disappeared 7 days after administration (FIG. 9A). Even when morphine (0.3 mg / kg) was used in combination with TCV-309 (0.01 mg / kg), no antiallodynia action was observed, but TCV-309 (0.03 mg / kg to 0.3 mg / kg) When morphine (0.3 mg / kg) was used in combination with TCV-309, a strong antiallodynic effect was observed in a dose-dependent manner (FIG. 9A). A similar potentiating action was observed in any of the allodynia threshold (FIG. 9B), Guarding behavior (FIG. 9C), and Limb-use abnormality (FIG. 9D). These effects were also observed when WEB2086 or BN50739 was used instead of TCV-309 (FIGS. 10A-D). These indicate that the pain relieving action by the PAF antagonist is persistent, and the effect of enhancing the action of morphine is also persistent.
図１１に、ＦＢＣマウスにおける、モルヒネ単独投与の疼痛緩和作用の経時的変化を示す。モルヒネは１０ｍｇ／ｋｇ以上の皮下投与で鎮痛効果を示し、鎮痛効果の持続時間は２〜３時間であった。しかし、モルヒネの用量依存性は、ｖｏｎ Ｆｒｅｙ ｔｅｓｔ （Ｂ）以外では認められなかった。これは、モルヒネの用量が１０ｍｇ／ｋｇ以上の場合に、自発運動が用量依存的に著明な亢進したために、疼痛強度を正当に評価することができなかったためであると推測される。 FIG. 11 shows changes over time in the pain alleviating effect of morphine alone administered in FBC mice. Morphine showed an analgesic effect when administered subcutaneously at 10 mg / kg or more, and the duration of the analgesic effect was 2 to 3 hours. However, no dose dependence of morphine was observed except for von Frey test (B). This is presumed to be because when the morphine dose was 10 mg / kg or more, the locomotor activity was significantly increased in a dose-dependent manner, so that the pain intensity could not be properly evaluated.
このことを確認するために、ＴＣＶ−３０９（３μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ）の投与１日後のＦＢＣマウスに種々の用量のモルヒネを投与し、その２０分後の疼痛緩和作用を調べた。ＴＣＶ−３０９（３μｇ／ｋｇおよび１０μｇ／ｋｇ）を予め投与しておくことによってモルヒネの鎮痛作用が強力に増強され、しかも、低用量のモルヒネ（０．１ｍｇ／ｋｇ）によってほぼ完全な鎮痛効果が得られることがわかった（図１２Ａ〜Ｄ）。さらに、種々の用量のＴＣＶ−３０９（０．１μｇ／ｋｇ〜１０μｇ／ｋｇ）の投与１日後のＦＢＣマウスにモルヒネ（０．３ｍｇ／ｋｇ）を投与し、その２０分後の疼痛緩和作用を調べた。低用量（１μｇ／ｋｇ）であってもＴＣＶ−３０９を予め投与しておくことによってモルヒネの鎮痛作用が強力に増強されることがわかった（図１３Ａ〜Ｄ）。 In order to confirm this, various doses of morphine were administered to FBC mice one day after administration of TCV-309 (3 μg / kg, 10 μg / kg), and the pain alleviating effect 20 minutes later was examined. Pre-administration of TCV-309 (3 μg / kg and 10 μg / kg) strongly enhances the analgesic action of morphine, and low dose morphine (0.1 mg / kg) provides almost complete analgesic effect. It was found that it was obtained (FIGS. 12A to 12D). Furthermore, morphine (0.3 mg / kg) was administered to FBC mice one day after administration of various doses of TCV-309 (0.1 μg / kg to 10 μg / kg), and the pain alleviating effect 20 minutes later was examined. It was. It was found that the analgesic effect of morphine was strongly enhanced by pre-administration of TCV-309 even at a low dose (1 μg / kg) (FIGS. 13A to 13D).
図１４に、ＴＣＶ−３０９をモルヒネと併用した場合の、ＦＢＣマウスにおける疼痛緩和作用の経時的変化を示す。高用量のモルヒネ（１０ｍｇ／ｋｇ以上）の単独投与の場合（図１１）と同様に、鎮痛効果の持続時間は２〜３時間であった。このことは、ＴＣＶ−３０９をモルヒネと併用することによってモルヒネの鎮痛作用が強力に増強されるものの、持続時間には影響しないことがわかった。 FIG. 14 shows the change over time in the pain alleviating effect in FBC mice when TCV-309 is used in combination with morphine. Similar to the case of high dose morphine (10 mg / kg or more) administered alone (FIG. 11), the duration of analgesic effect was 2-3 hours. It was found that the combined use of TCV-309 with morphine strongly enhances the analgesic action of morphine but does not affect the duration.
上述した、疼痛緩和作用がＰＡＦアンタゴニストに特異的な効果であることを検証するために、難治性疼痛の緩和に期待されているガバペンチン（抗痙攣薬）の作用を調べた（図１５Ａ〜Ｄ）。ガバペンチンは、短時間（２時間以内）での鎮痛効果を用量依存的に示したが、その作用は高用量の静脈内投与（３０ｍｇ／ｋｇ）であっても弱かった。また、高用量のガバペンチンの静脈内投与（３０ｍｇ／ｋｇ）によってマウス自発運動量が亢進し、１．５時間程度持続した。さらに、ガバペンチン（１０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した３０分後にモルヒネ（１ｍｇ／ｋｇ）を皮下投与しても、さらなる鎮痛効果は得られなかった。このことは、有望なガバペンチンであっても、有効な疼痛緩和作用を示すことはなく、また、モルヒネの鎮痛作用を増強しないことを示す。図中の各測定値は、６〜７例の平均値±標準誤差で示している。 In order to verify that the above-mentioned pain relieving action is specific to the PAF antagonist, the action of gabapentin (anticonvulsant) expected to relieve intractable pain was examined (FIGS. 15A to 15D). . Gabapentin showed an analgesic effect in a short time (within 2 hours) in a dose-dependent manner, but its effect was weak even at high dose intravenous administration (30 mg / kg). In addition, the locomotor activity of mice was increased by intravenous administration of high dose of gabapentin (30 mg / kg), which lasted for about 1.5 hours. Furthermore, even if morphine (1 mg / kg) was subcutaneously administered 30 minutes after intravenous administration of gabapentin (10 mg / kg), no further analgesic effect was obtained. This indicates that even promising gabapentin does not show an effective pain relieving action and does not enhance the analgesic action of morphine. Each measured value in the figure is shown as an average value ± standard error of 6 to 7 examples.
〔２．３．モルヒネによって誘発される排便抑制に対する効果〕
モルヒネの副作用として、便秘がよく知られており、モルヒネの有効量の２％程度を用いるだけで便秘が生じる。そこで、モルヒネの副作用に対するＰＡＦアンタゴニストによる効果を検証した。[2.3. Effect on suppression of defecation induced by morphine
Constipation is well known as a side effect of morphine, and constipation occurs only by using about 2% of the effective amount of morphine. Therefore, the effect of a PAF antagonist on the side effects of morphine was verified.
ＴＣＶ−３０９（１０μｇ／ｋｇ）の静脈内投与３時間後のＦＢＣマウスにモルヒネ（０．０１−１０ｍｇ／ｋｇ）の皮下投与を行い、その脱糞量および挙尾反応を調べた（図１６）。高用量のモルヒネ（０．３ｍｇ／ｋｇ以上）を投与した場合は、脱糞量の減少が、モルヒネの用量依存的に観察された。しかし、低用量のモルヒネ（０．０３ｍｇ／ｋｇおよび０．０１ｍｇ／ｋｇ）を投与した場合は、脱糞量に差異はなかった（便秘が認められなかった）（図１６Ａ）。ＴＣＶ−３０９はモルヒネの挙尾反応には影響しなかった（図１６Ｂ）。 Morphine (0.01-10 mg / kg) was subcutaneously administered to FBC mice 3 hours after intravenous administration of TCV-309 (10 μg / kg), and their defecation amount and tail reaction were examined (FIG. 16). When high doses of morphine (0.3 mg / kg or higher) were administered, a decrease in defecation was observed in a morphine dose-dependent manner. However, when low doses of morphine (0.03 mg / kg and 0.01 mg / kg) were administered, there was no difference in defecation (no constipation was observed) (FIG. 16A). TCV-309 did not affect the tail response of morphine (FIG. 16B).
〔２．４．ＰＡＦアンタゴニストによるＦＢＣマウスの延命効果〕
ＦＢＣマウスに、ＮＣＴＣ２４７２細胞の移植直後から４日間隔でＴＣＶ−３０９（０．３ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した。対照群として生理食塩水を４日間隔で移植の１日後〜１６日後まで投与した。図１６Ｃ・Ｄに、ＦＢＣマウスにおけるＰＡＦアンタゴニストの延命効果を示す。縦軸は死亡率（がん死亡および安楽死を含む。）を示す。生理食塩水投与群（ｎ＝４６）において、移植１７日後からマウスは摂水／摂食が困難になる例が出現し始め、移植２６日後では５０％以上のマウスが、移植６０日後では全てのマウスが極度の衰弱に陥り、生命維持が困難な状態（安楽死の対象）となった。しかし、ＴＣＶ−３０９投与群（ｎ＝３２）では、移植３０日後でも全てのマウスの摂食状態は良好であった。なお、移植３２日後から衰弱が観察され初め、５２日後に５０％のマウスが、７９日後に全てのマウスが生命維持が困難な状態となった（図１６Ｃ）。ＴＣＶ−３０９を１日１回で６〜７日間にわたって連続的に頻回静脈内投与（ｎ＝１４〜２１）することによって、癌のステージにかかわらず（すなわち癌細胞移植直後であっても、疼痛が顕著になった後であっても、癌細胞移植５５日後であっても）、全てのマウスの状態は良好であった。なお、移植６０日後前後から衰弱が観察され始め、９０日後で３６〜４１％のマウスが生命維持が困難な状態となった（図１６Ｄ）。このことよりＰＡＦアンタゴニストによる延命効果が期待される。[2.4. Life-prolonging effect of FBC mice by PAF antagonist]
TCV-309 (0.3 mg / kg) was intravenously administered to FBC mice at intervals of 4 days immediately after transplantation of NCTC2472 cells. As a control group, physiological saline was administered every 4 days from 1 day to 16 days after transplantation. FIGS. 16C and 16D show the life-prolonging effect of the PAF antagonist in FBC mice. The vertical axis shows the mortality rate (including cancer death and euthanasia). In the physiological saline administration group (n = 46), mice began to appear to be difficult to feed / feed after 17 days after transplantation, and more than 50% of mice reached 26 days after transplantation, and all mice reached 60 days after transplantation. The mouse fell into extreme weakness, making it difficult to maintain life (subject to euthanasia). However, in the TCV-309 administration group (n = 32), the feeding status of all mice was good even 30 days after transplantation. In addition, weakness began to be observed 32 days after transplantation, and 50% of mice became difficult after 52 days, and all mice became difficult to maintain life after 79 days (FIG. 16C). Regardless of the stage of cancer (ie, immediately after cancer cell transplantation), TCV-309 is administered intravenously (n = 14-21) frequently and continuously once a day for 6-7 days. All the mice were in good condition (even after pain became prominent or 55 days after cancer cell transplantation). In addition, weakness began to be observed around 60 days after transplantation, and 36-41% of mice became difficult to maintain life 90 days later (FIG. 16D). From this, the life-prolonging effect by the PAF antagonist is expected.
〔２．５．ＰＡＦアンタゴニストのｉｎ ｖｉｖｏでの阻害様式および受容体の内在化〕
種々の濃度のＰＡＦを脊髄腔内投与することによって発症させたアロディニアに対するＰＡＦアンタゴニストの阻害動態に基づいて、ＰＡＦアンタゴニストのｉｎ ｖｉｖｏでの阻害様式を評価した。ＰＡＦ（１０ｐｇ、０．１ｎｇ、１ｎｇ）の脊髄腔内投与によりアロディニアを発症させた後、ＴＣＶ−３０９（０．１ｍｇ／ｋｇ）の静脈内投与による抗アロディニア作用を経時的に評価した。また、ＴＣＶ−３０９の抗アロディニア作用のキネティクスを、各濃度のＰＡＦを脊髄腔内に投与したことによるアロディニアの強度に対する、ＴＣＶ−３０９（０．１ｍｇ／ｋｇ）の静脈内投与による２０分間前処置および３日間前処置の作用から求めた。[2.5. In vivo inhibition mode of PAF antagonist and receptor internalization]
Based on the inhibition kinetics of PAF antagonists against allodynia caused by intrathecal administration of various concentrations of PAF, the mode of inhibition of PAF antagonists in vivo was evaluated. After allodynia was developed by intrathecal administration of PAF (10 pg, 0.1 ng, 1 ng), the antiallodynia effect by intravenous administration of TCV-309 (0.1 mg / kg) was evaluated over time. In addition, kinetics of anti-allodynia action of TCV-309 was pretreated for 20 minutes by intravenous administration of TCV-309 (0.1 mg / kg) against the strength of allodynia caused by administration of each concentration of PAF into the spinal cavity. And from the effect of pretreatment for 3 days.
無処置マウスにおけるＰＡＦ（１０ｐｇ、０．１ｎｇ、１ｎｇ）の脊髄腔内投与によるアロディニア発症の３０分後にＴＣＶ−３０９（０．１ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した際の抗アロディニア効果を検討した。ＴＣＶ−３０９投与後直ちにアロディニアスコアは減少し１０〜２０分後には抗アロディニア作用は最高値に達し、その作用はＰＡＦの投与量に依存しており、１０ｐｇ、０．１ｎｇおよび１ｎｇのＰＡＦに対してそれぞれ９７％、３７％、１０％の阻害を示した。ＴＣＶ−３０９の抗アロディニア作用は、その後６時間後まで強度が一定していたが、６〜１２時間後の間に急速に強まり、１２時間後にはＰＡＦの作用を完全に拮抗した。対照的にｖｅｈｉｃｌｅ（溶剤）処置群ではＰＡＦのアロディニア強度は投与６時間までは一定に推移したが、６時間後以降に軽度の減少を示した（図１７Ａ）。 The antiallodynia effect when TCV-309 (0.1 mg / kg) was intravenously administered 30 minutes after the onset of allodynia by intrathecal administration of PAF (10 pg, 0.1 ng, 1 ng) in untreated mice was examined. The allodynia score decreases immediately after TCV-309 administration, and the antiallodynia effect reaches its maximum value after 10 to 20 minutes, and the action depends on the dose of PAF, which is 10 pg, 0.1 ng and 1 ng of PAF. 97%, 37% and 10% inhibition, respectively. The antiallodynic effect of TCV-309 was constant in intensity until 6 hours thereafter, but rapidly increased between 6 and 12 hours, and completely antagonized the effect of PAF after 12 hours. In contrast, in the vehicle-treated group, the PAF allodynia intensity remained constant until 6 hours after administration, but showed a slight decrease after 6 hours (FIG. 17A).
ＴＣＶ−３０９（０．１ｍｇ／ｋｇ）の２０分間前処置では、ＰＡＦ誘発アロディニア反応の用量−作用曲線を右に平行移動（競合的拮抗阻害）させた。ＴＣＶ−３０９を３日間前処置するとＰＡＦの用量−作用曲線は右にシフトし、かつ、その最大反応は顕著に抑制（非競合的拮抗阻害）された（図１７Ｂ）。ＰＡＦアンタゴニストはｉｎ ｖｉｖｏにおいて投与後短時間ではＰＡＦ受容体をＰＡＦと競合拮抗の様式で阻害するが、長時間経過すると非可逆的な阻害様式に推移することが明らかになった。 A 20 minute pretreatment with TCV-309 (0.1 mg / kg) translated the dose-effect curve of the PAF-induced allodynia response to the right (competitive competitive inhibition). Pretreatment of TCV-309 for 3 days shifted the PAF dose-effect curve to the right and markedly suppressed (noncompetitive competitive inhibition) its maximum response (FIG. 17B). It was revealed that PAF antagonists inhibit PAF receptors in a competitive antagonistic manner with PAF in a short time after administration in vivo, but transition to an irreversible inhibition mode after a long time.
ＰＡＦアンタゴニストの阻害様式が時間経過とともに競合的な拮抗阻害から非競合的な拮抗阻害に様式を変化させる可能性として、長時間作用することで非可逆的な阻害様式に変化する可能性、および、ＰＡＦ受容体の細胞内移行（内在化）が促進される可能性が考えられる。ＰＡＦ受容体は７回膜貫通型のＧ蛋白質共役型受容体であり、アゴニストが作用することによって受容体内在化が起こることが知られている。そこで、ＰＡＦ受容体内在化におけるＰＡＦアンタゴニストの影響について検討した。 The possibility that the inhibition mode of the PAF antagonist may change from competitive competitive inhibition to non-competitive competitive inhibition over time, as it may change to an irreversible inhibition mode by acting for a long time, and There is a possibility that the intracellular movement (internalization) of the PAF receptor is promoted. The PAF receptor is a 7-transmembrane G protein-coupled receptor, and it is known that receptor internalization occurs when an agonist acts. Therefore, the effect of a PAF antagonist on PAF receptor internalization was examined.
ＰＡＦ受容体は、脊髄において、神経細胞、ミクログリアおよび脊髄後角神経節細胞に発現しているが、その発現量が少ない。よって、細胞膜上に発現するＰＡＦ受容体の量をウエスタンブロットによって解析することは困難であった。ミクログリアはＰＡＦ受容体を高発現しており、ＰＡＦ刺激によって強力に活性化され、種々の細胞機能が亢進される。また、本発明者らは脊髄でＰＡＦ誘発のアロディニア反応にミクログリアの活性化が関与することを示している。これらの観点から、脊髄から単離培養したミクログリアを用いて、ＰＡＦ受容体の内在化に対するＰＡＦアンタゴニストの作用を検討した。 The PAF receptor is expressed in nerve cells, microglia, and dorsal horn ganglion cells in the spinal cord, but its expression level is low. Therefore, it was difficult to analyze the amount of PAF receptor expressed on the cell membrane by Western blot. Microglia highly expresses a PAF receptor, and is strongly activated by PAF stimulation, and various cell functions are enhanced. The present inventors have also shown that microglia activation is involved in the PAF-induced allodynia reaction in the spinal cord. From these viewpoints, the effect of the PAF antagonist on the internalization of the PAF receptor was examined using microglia isolated and cultured from the spinal cord.
新生児のマウス脊髄から単離培養したミクログリアを、ＴＣＶ−３０９（０．１５μＭ）と培養した後に、細胞膜表面のタンパク質をビオチン標識した。さらに、細胞を溶解した後に、細胞表面タンパク質をストレプトアビジンによって回収した。細胞膜表面に発現するＰＡＦ受容体の量をウエスタンブロット法によって解析し、細胞膜に発現するＰＡＦ受容体の量の減少に基づいて、受容体内在化に対するＴＣＶ−３０９の作用を評価した。 Microglia isolated and cultured from the neonatal mouse spinal cord were cultured with TCV-309 (0.15 μM), and then proteins on the cell membrane surface were labeled with biotin. In addition, cell surface proteins were recovered with streptavidin after cell lysis. The amount of PAF receptor expressed on the cell membrane surface was analyzed by Western blotting, and the effect of TCV-309 on receptor internalization was evaluated based on the decrease in the amount of PAF receptor expressed on the cell membrane.
〔１〕マウス脊髄ミクログリアの単離培養
マウス脊髄ミクログリアを、新生児マウス（生後１〜２日目）の脊髄の初代培養細胞から得た（Motoyoshi et al., Neurochem Int 52(6):1290-1296, 2008）。ミクログリアの純度は、ＣＤ１１ｂ（ＯＸ−４２）免疫細胞化学染色において９８％以上であった。[1] Isolated culture of mouse spinal cord microglia Mouse spinal cord microglia were obtained from primary cultured cells of the spinal cord of newborn mice (1 to 2 days after birth) (Motoyoshi et al., Neurochem Int 52 (6): 1290-1296). , 2008). The purity of microglia was 98% or more in CD11b (OX-42) immunocytochemical staining.
〔２〕細胞膜表面蛋白質画分標品の調製
ミクログリアを、ＰＡＦアンタゴニストＴＣＶ−３０９（０．１５μＭ）で６〜２４時間、３７℃でインキュベートした後、氷冷したＰＢＳで洗浄し、次いで、Sulfo-SS-NHS-biotin EZ-linkと４℃で３０分間反応させ、細胞膜表面タンパク質をビオチン標識した（Altin et al., Anal Biochem 224:382-389, 1995）。ビオチン標識された細胞膜表面タンパク質画分をウエスタンブロット解析に使用した。[2] Preparation of cell membrane surface protein fraction microglia were incubated with the PAF antagonist TCV-309 (0.15 μM) for 6 to 24 hours at 37 ° C., washed with ice-cold PBS, and then Sulfo- Reaction with SS-NHS-biotin EZ-link at 4 ° C. for 30 minutes to label the cell membrane surface protein with biotin (Altin et al., Anal Biochem 224: 382-389, 1995). The biotin-labeled cell membrane surface protein fraction was used for Western blot analysis.
ビオチン化した細胞膜画分に含まれるＰＡＦ受容体の量を、細胞表面に発現するＰＡＦ受容体の量としてウエスタンブロット法により測定した。ミクログリアをＴＣＶ−３０９（０．１５μＭ）の存在下で８時間または２４時間にわたって培養すると、細胞膜表面に発現する受容体の量は、対照群のそれぞれ６０％および４１％であり、経時的に著明に減少した（図１７Ｃ）。全細胞画分におけるＰＡＦ受容体の量に変化は認められなかった（データ示さず）。 The amount of PAF receptor contained in the biotinylated cell membrane fraction was measured by Western blotting as the amount of PAF receptor expressed on the cell surface. When microglia were cultured in the presence of TCV-309 (0.15 μM) for 8 or 24 hours, the amount of receptors expressed on the cell membrane surface was 60% and 41%, respectively, in the control group, which was marked over time. It decreased clearly (FIG. 17C). There was no change in the amount of PAF receptor in the whole cell fraction (data not shown).
このように、ＰＡＦアンタゴニストがＰＡＦ受容体の内在化を促進することを見出した。ＰＡＦアンタゴニストによるＰＡＦ受容体の内在化の亢進が阻害薬の長い作用持続時間に関与する可能性が示唆される。 Thus, it was found that PAF antagonists promote internalization of PAF receptors. This suggests that enhanced internalization of the PAF receptor by the PAF antagonist may be involved in the long duration of action of the inhibitor.
〔２．６．活性化アストロサイトの脊髄移植によるアロディニア発現とＰＡＦアンタゴニストの影響〕
ＰＡＦ受容体はミクログリアやアストロサイトに発現しており、ＰＡＦ受容体刺激によって活性化された細胞が、サイトカイン、活性酸素種等の炎症／疼痛に関連する物質を産生／遊離するとともにＰＡＦを産生／遊離する。ＰＡＦアンタゴニストが癌性疼痛の発症初期から後期に至る全てのステージにおいて鎮痛作用を発揮することを示した。これらの疼痛の際にはＰＡＦの産生遊離が亢進している可能性が示唆される。疼痛時のＰＡＦの供給源の候補としてミクログリアおよびアストロサイトが考えられる。そこで、活性化アストロサイトの脊髄移植により、疼痛が惹起される可能性並びに疼痛発症におけるＰＡＦの関与について検討した。[2.6. Expression of allodynia by spinal cord transplantation of activated astrocytes and influence of PAF antagonist]
PAF receptor is expressed in microglia and astrocytes, and cells activated by PAF receptor stimulation produce / release cytokine / reactive oxygen species and other substances related to inflammation / pain and produce PAF / Liberate. It was shown that the PAF antagonist exerts analgesic action in all stages from the early stage to the late stage of onset of cancer pain. It is suggested that the production and release of PAF may be enhanced during these pains. Microglia and astrocytes are possible candidates for the source of PAF during pain. Therefore, the possibility of causing pain by spinal cord transplantation of activated astrocytes and the involvement of PAF in the onset of pain were examined.
〔１〕アストロサイト培養法
ｄｄＹ系新生児マウス（生後０〜３日目）の脊髄を用いて、マウス脊髄アストロサイトの初代培養を行った（Takano et al., Neurochem Int 57(7):812-818, 2010）。この細胞をアストロサイトとして実験に供した純度はＧＦＡＰを用いた免疫細胞化学染色によって９６％以上であった。[1] Astrocyte culture method The primary culture of mouse spinal cord astrocytes was performed using the spinal cord of ddY newborn mice (0-3 days after birth) (Takano et al., Neurochem Int 57 (7): 812- 818, 2010). The purity of the cells subjected to the experiment using astrocytes was 96% or more by immunocytochemical staining using GFAP.
〔２〕アストロサイトの脊髄移植実験
継代したアストロサイトを非コートシャーレに４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、４８時間培養した後、アストロサイトをＰＡＦ（０．４ｎＭ）またはＡＴＰ（１００μＭ）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ）で２時間培養することによって活性化（炎症反応性を獲得）させた。活性化アストロサイトを、ｄｄＹ系正常マウスの脊髄くも膜下腔内に移植した。アストロサイトを移植されたマウスのアロディニアスコアおよびアロディニア閾値を経時的に評価した。また、上記活性化アストロサイトを洗浄した後にｆｒｅｓｈ ｍｅｄｉｕｍで１２時間培養した後、培養ｍｅｄｉｕｍを採取し、遠心分離にて細胞上清を分離しアストロサイトｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍとした。これを正常マウスの脊髄腔内に投与し、アロディニアスコア、アロディニア閾値を経時的に評価した。[2] Spinal cord transplantation experiment of astrocytes After passage of the passaged astrocytes in a non-coated petri dish at a density of 4.0 × 10 5 cells / well and culturing for 48 hours, the astrocytes were treated with PAF (0.4 nM) or It was activated (obtained inflammatory reactivity) by culturing with ATP (100 μM) and Escherichia coli LPS (1 μg / mL) for 2 hours. Activated astrocytes were transplanted into the subarachnoid space of ddY normal mice. Allodynia scores and allodynia thresholds of mice implanted with astrocytes were evaluated over time. In addition, after washing the activated astrocytes and culturing with fresh medium for 12 hours, the culture medium was collected, and the cell supernatant was separated by centrifugation to obtain an astrocyte conditioned medium. This was administered into the spinal cavity of normal mice, and the allodynia score and the allodynia threshold were evaluated over time.
マウス脊髄から単離培養したアストロサイトをＰＡＦ、ＡＴＰまたはＬＰＳで刺激した後に、正常マウスの脊髄腔に移植することによって、移植６時間後にはアロディニア応答を惹起した。アロディニア応答は、１２時間後にピークに達し、４ヶ月以上持続した（図１８ＡおよびＢ）。また、このアロディニア応答はアストロサイト活性化阻害薬Ｆｌｕｏｒｏ ｃｉｔｒａｔｅにより抑制された（図１８Ｃ）。活性化アストロサイトの移植により脊髄アストロサイトの持続した活性化が惹起され、このことが疼痛の維持に寄与することを明らかにした。 Astrocytes isolated and cultured from mouse spinal cord were stimulated with PAF, ATP or LPS, and then transplanted into the spinal cavity of normal mice, thereby inducing an allodynia response 6 hours after transplantation. The allodynia response peaked after 12 hours and persisted for over 4 months (FIGS. 18A and B). This allodynia response was suppressed by the astrocyte activation inhibitor Fluoro citrate (FIG. 18C). It has been clarified that transplantation of activated astrocytes induces sustained activation of spinal cord astrocytes, which contributes to maintenance of pain.
活性化アストロサイト移植１日後のマウスにＰＡＦアンタゴニストを投与するとアロディニアは消失し、以降１２０日以上経過しても疼痛は発現しなかった（図１８Ａ〜Ｃ）。移植２８日後のマウスにＰＡＦアンタゴニストを投与するとアロディニア応答は一過性の抑制に留まった（図１９Ｃ）。活性化アストロサイトの培養上清を脊髄腔内投与しても一過性のアロディニア応答を惹起し、ＰＡＦアンタゴニストで抑制された（図１９ＡおよびＢ）。これらのことから、活性化アストロサイトがｉｎ ｖｉｖｏ、 ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＰＡＦを産生／遊離することが明らかとなった。移植された活性化アストロサイトによる脊髄アストロサイトの活性化が起こる前にＰＡＦアンタゴニストを投与することで活性化が阻害され、疼痛の維持機構が成立しなくなった可能性が考えられる。 When a PAF antagonist was administered to mice one day after transplantation of activated astrocytes, allodynia disappeared, and no pain developed even after 120 days had passed (FIGS. 18A to 18C). When PAF antagonists were administered to mice 28 days after transplantation, the allodynia response was only transiently suppressed (FIG. 19C). Even when the culture supernatant of activated astrocytes was administered intrathecally, a transient allodynia response was induced and suppressed by PAF antagonists (FIGS. 19A and B). These facts revealed that activated astrocytes produce / release PAF in vivo and in vitro. It is considered that the PAF antagonist was administered before the activation of the spinal cord astrocytes by the transplanted activated astrocytes, whereby the activation was inhibited and the pain maintenance mechanism was not established.
〔２．７．ＰＡＦアンタゴニスト連続頻回投与による癌性疼痛の永続的な緩和作用〕
活性化アストロサイト移植実験の結果から、神経障害により産生されたＰＡＦがミクログリアやアストロサイトを活性化し、ＰＡＦ系の活性化を誘導して、持続的にＰＡＦ産生を促進する。この ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｅｅｄｂａｃｋ ｌｏｏｐが疼痛の発症と維持に寄与するという作業仮説が考えられる。[2.7. Permanent alleviation of cancer pain by continuous administration of PAF antagonist]
From the results of the activated astrocyte transplantation experiment, PAF produced by neuropathy activates microglia and astrocytes, induces activation of the PAF system, and continuously promotes PAF production. There may be a working hypothesis that this positive feedback loop contributes to the onset and maintenance of pain.
そこで、ＰＡＦ系の誘導を妨げるような処置によって、癌性疼痛の発症および維持を抑制することが出来る可能性を検討した。すなわち、疼痛の永続的な緩和治療が可能ではないかとの考えに基づいて、「ＰＡＦ受容体を長期間阻害する→アストロサイトの活性化を長期間抑える→ＰＡＦ系の活性化を阻止する→永続的な疼痛緩和治療が可能となる」と考えた。そこで、ＰＡＦアンタゴニストを連続的に頻回投与することの影響を詳細に検討した。 Therefore, the possibility of suppressing the onset and maintenance of cancer pain by a treatment that prevents the induction of the PAF system was examined. That is, based on the idea that a permanent palliative treatment of pain is possible, “PAF receptor is inhibited for a long time → activation of astrocytes is suppressed for a long time → PAF system activation is blocked → permanent It will be possible to treat pain relief. " Therefore, the effect of continuous and frequent administration of a PAF antagonist was examined in detail.
図２０に、癌性疼痛モデルマウスにおいて、種々の様々なタイミングでＴＣＶ−３０９の連続的な頻回静脈内投与を行った際の疼痛緩和作用を示す。図は、投与時期に関わらず３０日前後までアロディニアスコアの増加が抑制され、その後ゆっくりとしたスコアの増加が認められたこと、投与時期に関わらず３０日前後までアロディニア閾値の低下を抑制し、その後ゆっくりとした閾値の低下が認められたこと、投与時期に関わらず３０日前後まで安静時痛の発現を抑制し、その後ゆっくりとした疼痛の発現が認められたこと、そして、投与時期に関わらず３０日前後まで体動痛の発現を抑制し、その後ゆっくりとした疼痛の発現が認められたことを示す。具体的には、以下のとおりである。 FIG. 20 shows the pain relieving action when continuous frequent intravenous administration of TCV-309 is performed at various various timings in a cancer pain model mouse. The figure shows that the increase in allodynia score was suppressed until around 30 days regardless of the administration time, and then a slow increase in score was observed, and the decrease in the allodynia threshold was suppressed until around 30 days regardless of the administration time, Thereafter, a slow decrease in threshold was observed, the onset of resting pain was suppressed until about 30 days regardless of the administration time, and then the slow onset of pain was observed, and regardless of the administration time. It shows that the onset of body movement pain was suppressed until around 30 days, and then the onset of slow pain was observed. Specifically, it is as follows.
癌性疼痛モデル（ＦＢＣモデル）において、ＮＣＴＣ２４７２溶骨性骨肉腫細胞の移植によって移植３〜６日後からアロディニア応答（図２０ＡおよびＢ）およびＧｕａｒｄｉｎｇ ｂｅｈａｖｉｏｒ発症時間（体動痛の指標、図２０Ｃ）、Ｌｉｍｂ−ｕｓｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙの程度（安静時痛の指標、図２０Ｄ）の発症が認められ、以降経時的に増悪が認められた。ＰＡＦアンタゴニスト（ＴＣＶ−３０９、０．３ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．）を癌細胞の移植直後（すなわち、３時間後）および１日１回で６日間連続投与することによって、アロディニアおよびＧｕａｒｄｉｎｇ ｂｅｈａｖｉｏｒ、 Ｌｉｍｂ−ｕｓｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙの発症は移植後３０日前後まで認められず、その後ゆっくりとした疼痛反応の発現が認められた。１〜６日連続投与、３〜８日連続投与の場合であっても同様に癌性疼痛の発症は移植後３０日前後まで抑制された。さらに、移植７日後、１２日後（癌性疼痛の発症後）においてもＴＣＶ−３０９連続投与によって、投与直後から疼痛反応が消失し、移植３０日前後まで疼痛反応を抑制することができた（図２０Ａ〜Ｄ）。 In the cancer pain model (FBC model), allodynia response (FIGS. 20A and B) and Guarding behavior onset time (index of body movement pain, FIG. 20C) from 3 to 6 days after transplantation by transplantation of NCTC2472 osteolytic osteosarcoma cells, Onset of the degree of Limb-use abnormality (an index of resting pain, FIG. 20D) was observed, and thereafter exacerbation was observed over time. By administering a PAF antagonist (TCV-309, 0.3 mg / kg iv) immediately after cancer cell transplantation (ie, 3 hours later) and once daily for 6 consecutive days, allodynia and guarding behavior, Limb -Onset of use abnormality was not recognized until around 30 days after transplantation, and then a slow pain response was observed. Even in the case of continuous administration for 1 to 6 days and continuous administration for 3 to 8 days, the onset of cancer pain was similarly suppressed until around 30 days after transplantation. Furthermore, even after 7 days and 12 days after transplantation (after the onset of cancer pain), the TCV-309 continuous administration disappeared the pain response immediately after administration, and the pain response could be suppressed until around 30 days after transplantation (Fig. 20A-D).
このように、ＰＡＦアンタゴニストを連続頻回投与することによって、持続的な「ＰＡＦ系の活性化」経路の形成を中断し、癌性疼痛の永続的な緩和治療が可能になるこがを明らかになった。 Thus, it is clear that continuous frequent administration of PAF antagonists interrupts the formation of the continuous “activation of PAF system” pathway and enables permanent palliative treatment of cancer pain became.
〔３．考察〕
ＰＡＦアンタゴニストは、ＦＢＣマウスにおいて、極めて少量で疼痛緩和作用を示し、この効果は、モルヒネと比較してはるかに長期間持続した。癌細胞移植後の疼痛発生の前にＰＡＦ受容体拮抗薬を投与し、引き続き反復投与することによって、疼痛の発生を抑制することができた。また、その効果に耐性を生じることはなかった。[3. (Consideration)
PAF antagonists showed pain relief in very small amounts in FBC mice, and this effect lasted much longer compared to morphine. By administering a PAF receptor antagonist before the onset of pain after cancer cell transplantation and subsequently repeatedly administering it, the occurrence of pain could be suppressed. Moreover, tolerance was not produced in the effect.
ＰＡＦアンタゴニストの鎮痛作用の機序には、少なくとも脊髄のＰＡＦ受容体の特異的阻害が含まれる可能性が示唆された。 It has been suggested that the analgesic mechanism of PAF antagonists may include at least specific inhibition of spinal PAF receptors.
ＦＢＣマウスにおいて、ＰＡＦアンタゴニストとモルヒネとの併用は、モルヒネの疼痛緩和作用を著しく増強し、モルヒネの疼痛緩和作用をもたらす必要量を大幅に減少させた。 In FBC mice, the combination of a PAF antagonist and morphine significantly enhanced morphine's pain relieving action and significantly reduced the amount required to provide morphine's pain relieving action.
ＰＡＦアンタゴニストとモルヒネとの併用は，モルヒネの投与量を軽減できることにより、モルヒネの便秘作用を軽減することができた。 The combined use of a PAF antagonist and morphine could reduce morphine constipation by reducing the dose of morphine.
ＰＡＦアンタゴニストの反復投与により，延命効果が認められた。癌性疼痛患者での予後の改善が期待される。 Prolonged life was observed by repeated administration of PAF antagonist. Expected to improve prognosis in patients with cancer pain.
このように、本発明は以下のような態様であり得る：
［１］ＰＡＦアンタゴニストを含有している、癌性疼痛を処置するための組成物。
［２］脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子をさらに含有している、１に記載の組成物。
［３］脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の作用を増強させるために用いられる、１〜２に記載の組成物。
［４］脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の副作用を抑制するために用いられる、１〜２に記載の組成物。
［５］疼痛を処置するための組成物であって、
ＰＡＦアンタゴニストを含有しており、
脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子と併用される、組成物。
［６］前記疼痛が癌性疼痛である、５に記載の組成物。
［７］脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を適用する前に被験体に適用される、５〜６に記載の組成物。
［８］脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の作用を増強させるために用いられる、５〜７に記載の組成物。
［９］脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の副作用を抑制するために用いられる、５〜７に記載の組成物。
［１０］脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子をさらに含有している、５〜９に記載の組成物。
［１１］ＰＡＦアンタゴニスト、および、必要に応じて、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を備えている、キット。
［１２］疼痛を処置するための使用手順が記載された指示書を備えている、１１に記載のキット。
［１３］前記疼痛が癌性疼痛である、１２に記載のキット。
［１４］脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の作用を増強させるための使用手順が記載された指示書を備えている、１１に記載のキット。
［１５］脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の副作用を抑制するための使用手順が記載された指示書を備えている、１１に記載のキット。
［１６］１〜１０に記載の組成物を調製する手順が記載されている、１１に記載のキット。
［１７］有効量のＰＡＦアンタゴニストを被験体に投与する工程を包含する、疼痛を処置する方法。
［１８］有効量のＰＡＦアンタゴニストを被験体に投与する工程を包含する、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の作用を増強させる方法。
［１９］有効量のＰＡＦアンタゴニストを被験体に投与する工程を包含する、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の副作用を抑制する方法。
［２０］脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子を被験体に投与する工程をさらに包含する、１７〜１９に記載の方法。
［２１］ＰＡＦアンタゴニストを被験体に投与する工程を、前記因子を被験体に投与する工程よりも前に行う、１７〜２０に記載の方法。
［２２］候補化合物がＰＡＦの作用を阻害するか否かを調べる工程を包含する、癌性疼痛を処置し得る化合物をスクリーニングする方法。
［２３］候補化合物がＰＡＦの作用を阻害するか否かを調べる工程を包含する、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の作用を増強させる化合物をスクリーニングする方法。
［２４］候補化合物がＰＡＦの作用を阻害するか否かを調べる工程を包含する、脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子の副作用を抑制する化合物をスクリーニングする方法。
［２５］ＰＡＦまたはＰＡＦアナログのＰＡＦ受容体に対する結合を、候補化合物が拮抗的に阻害するか否かを調べる工程をさらに包含する、２２〜２４に記載の方法。
［２６］疼痛モデル動物に対して疼痛抑制作用を有している候補化合物を選択する工程をさらに包含する、２２〜２５に記載の方法。Thus, the present invention can be in the following aspects:
[1] A composition for treating cancer pain, comprising a PAF antagonist.
[2] The composition according to 1, further comprising a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord.
[3] The composition according to 1-2, which is used to enhance the action of a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord.
[4] The composition according to 1-2, which is used to suppress a side effect of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord.
[5] A composition for treating pain,
Contains a PAF antagonist,
A composition for use in combination with a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord.
[6] The composition according to 5, wherein the pain is cancer pain.
[7] The composition according to 5 to 6, which is applied to a subject before applying a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord.
[8] The composition according to 5 to 7, which is used to enhance the action of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord.
[9] The composition according to 5 to 7, which is used for suppressing a side effect of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord.
[10] The composition according to 5 to 9, further comprising a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord.
[11] A kit comprising a PAF antagonist and, optionally, a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord.
[12] The kit according to 11, comprising an instruction sheet describing a use procedure for treating pain.
[13] The kit according to 12, wherein the pain is cancer pain.
[14] The kit according to 11, comprising an instruction describing a use procedure for enhancing an action of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord.
[15] The kit according to 11, comprising an instruction sheet describing a use procedure for suppressing a side effect of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord.
[16] The kit according to 11, wherein a procedure for preparing the composition according to 1 to 10 is described.
[17] A method of treating pain, comprising administering an effective amount of a PAF antagonist to a subject.
[18] A method of enhancing the action of a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord, comprising administering an effective amount of a PAF antagonist to a subject.
[19] A method for suppressing a side effect of a factor that enhances the function of a descending pain suppression system pathway in the spinal cord, comprising a step of administering an effective amount of a PAF antagonist to a subject.
[20] The method according to 17 to 19, further comprising administering to the subject a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord.
[21] The method according to 17 to 20, wherein the step of administering the PAF antagonist to the subject is performed before the step of administering the factor to the subject.
[22] A method for screening a compound capable of treating cancer pain, comprising a step of examining whether a candidate compound inhibits the action of PAF.
[23] A method for screening a compound that enhances the action of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord, which comprises the step of examining whether the candidate compound inhibits the action of PAF.
[24] A method for screening for a compound that suppresses a side effect of a factor that enhances the function of the descending pain suppression system pathway in the spinal cord, comprising the step of examining whether the candidate compound inhibits the action of PAF.
[25] The method according to 22 to 24, further comprising examining whether the candidate compound competitively inhibits the binding of PAF or a PAF analog to the PAF receptor.
[26] The method according to 22 to 25, further comprising a step of selecting a candidate compound having a pain suppressing action on a pain model animal.
なお、１〜２６において、ＰＡＦアンタゴニストは、例えば、〔２：ＰＡＦアンタゴニストによる癌性疼痛の処置〕の項にて列挙した化合物が好ましく用いられる。 In addition, in 1-26, for example, the compounds listed in the section [2: Treatment of cancer pain by PAF antagonist] are preferably used as the PAF antagonist.
このような本発明による具体的な効果としては、以下が挙げられる：
（１）癌性疼痛（特に骨癌性の疼痛）を、強く、長時間にわたって抑制することができる。
（２）骨癌移植動物に対する延命効果を示したことから、原発性骨癌患者または骨転移癌患者に対する延命効果も期待することができる。
（３）１日１回で６〜７日間にわたる頻回連続投与が、癌のステージにかかわらず（すなわち癌細胞移植直後であっても、疼痛が顕著になった後であっても）、投薬終了の３０日後以降であっても疼痛反応を発現させなかったことから、癌性疼痛の発症を予防し、疼痛緩和効果を長期（１２時間、２４時間、１〜３０日間）にわたって持続することができる。
（４）モルヒネ等の脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子との併用により、上記因子の鎮痛作用を著しく増強することができる。
（５）ＰＡＦアンタゴニストと上記因子との併用は、ＰＡＦアンタゴニスト単独または上記因子単独にて疼痛緩和効果をもたらす用量よりも低い用量で癌性疼痛を緩和することができる。
（６）低用量にて使用することが可能であるため、ＰＡＦアンタゴニストおよび／または上記因子の副作用を軽減することができる。特に、モルヒネ等のオピオイド系鎮痛剤で問題となる便秘、嘔吐、眠気、体の不安感、錯乱、発汗、ミオクローヌス、狡猾、うつ状態、および身体的依存等を軽減することができる。これにより、ＱＯＬ（生活の質）を保持することができる。
（７）活性化アストロサイト移植により触刺激誘発疼痛反応（アロディニア）が誘発され、ＰＡＦアンタゴニスト（ＴＣＶ−３０９，０．３ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｖ．）を投与するとアロディニアは消失した。癌性疼痛モデルマウスにおいて，ＴＣＶ−３０９を癌細胞移植直後および術後１〜６日（１日１回）連続投与し，以後薬物投与を中断してもアロディニアの発現は３０日以降まで遅延させることができた。このことから、ＰＡＦアンタゴニストを連続頻回投与することで、アストロサイトを介した持続的な「ＰＡＦ」活性化経路（ＰＡＦ受容体刺激‐ＰＡＦ遊離の誘導を介したｆｅｅｄｂａｃｋ ｌｏｏｐ）の形成を中断して，癌の慢性疼痛の永続的な緩和治療が可能になり得る。
（８）ＰＡＦアンタゴニストであるか否かを指標にすることによって、癌性疼痛（特に骨癌性の疼痛）を処置し得る化合物を容易に得ることができる。Specific effects of the present invention include the following:
(1) Cancer pain (especially bone cancer pain) can be strongly suppressed over a long period of time.
(2) Since a life-prolonging effect on bone cancer transplanted animals has been shown, a life-prolonging effect on primary bone cancer patients or bone metastatic cancer patients can also be expected.
(3) frequent continuous administration once a day for 6 to 7 days, regardless of the stage of cancer (that is, even immediately after cancer cell transplantation or after pain becomes prominent) Since no pain reaction was developed even after 30 days from the end, the onset of cancer pain can be prevented and the pain relieving effect can be sustained over a long period (12 hours, 24 hours, 1 to 30 days) it can.
(4) The analgesic action of the above factor can be remarkably enhanced by the combined use with a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord such as morphine.
(5) The combined use of a PAF antagonist and the above factor can alleviate cancer pain at a dose lower than the dose that provides a pain relieving effect with the PAF antagonist alone or the above factor alone.
(6) Since it can be used at a low dose, the side effects of the PAF antagonist and / or the above factors can be reduced. In particular, constipation, vomiting, drowsiness, body anxiety, confusion, sweating, myoclonus, epilepsy, depression, physical dependence, etc., which are problems with opioid analgesics such as morphine, can be reduced. Thereby, QOL (quality of life) can be maintained.
(7) Tactile stimulation-induced pain response (allodynia) was induced by activated astrocyte transplantation, and allodynia disappeared when a PAF antagonist (TCV-309, 0.3 mg / kg, iv) was administered. In cancer pain model mice, TCV-309 is continuously administered immediately after cancer cell transplantation and 1 to 6 days after surgery (once a day), and even if drug administration is interrupted thereafter, allodynia expression is delayed until 30 days I was able to. Thus, continuous and frequent administration of PAF antagonists disrupts the formation of a sustained “PAF” activation pathway (PAF receptor stimulation-feedback loop through induction of PAF release) via astrocytes. Permanent palliative treatment of chronic pain in cancer may be possible.
(8) By using whether or not it is a PAF antagonist as an index, a compound capable of treating cancer pain (particularly bone cancer pain) can be easily obtained.
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。 The present invention is not limited to the above-described embodiments, and various modifications are possible within the scope shown in the claims, and embodiments obtained by appropriately combining technical means disclosed in different embodiments. Is also included in the technical scope of the present invention.
本発明を用いれば、疼痛を効果的に処置することができ、特に、難治性の癌性疼痛を劇的に緩和することができる。このように優れたツールを提供する本発明は、医学、薬学の分野において利用可能であり、医薬品、生化学試薬の開発に大いに寄与することができる。 By using the present invention, pain can be effectively treated, and particularly refractory cancer pain can be dramatically relieved. The present invention providing such an excellent tool can be used in the fields of medicine and pharmacy and can greatly contribute to the development of pharmaceuticals and biochemical reagents.
Claims (6)
前記ＰＡＦアンタゴニストがＴＣＶ−３０９、ＷＥＢ２０８６およびＢＮ５０７３９からなる群より選択される少なくとも一種の化合物であり、
前記脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子がモルヒネであることを特徴とする組成物。 A composition for treating cancer pain comprising a PAF antagonist and a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord , comprising:
The PAF antagonist is at least one compound selected from the group consisting of TCV-309, WEB2086 and BN50739;
A composition that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord is morphine .
ＴＣＶ−３０９、ＷＥＢ２０８６およびＢＮ５０７３９からなる群より選択される少なくとも一種のＰＡＦアンタゴニストを含有しており、
脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子であるモルヒネと併用される、組成物。 A composition for treating pain, comprising:
Containing at least one PAF antagonist selected from the group consisting of TCV-309, WEB2086 and BN50739 ;
A composition for use in combination with morphine , a factor that enhances the function of the descending pain suppression pathway in the spinal cord.
ＴＣＶ−３０９、ＷＥＢ２０８６およびＢＮ５０７３９からなる群より選択される少なくとも一種のＰＡＦアンタゴニスト、および
脊髄における下行性疼痛抑制系経路の機能を増強する因子であるモルヒネ
を備えている、キット。 A kit for preparing the composition according to any one of claims 1 to 3 ,
At least one PAF antagonist selected from the group consisting of TCV-309, WEB2086 and BN50739 , and
And a morphine <br/> is a factor that enhances the function of descending pain inhibitory system pathway in spinal cord, kit.
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| JPN6012002285; Ｊ Ｏｒａｌ Ｂｉｏｓｃｉ．， ２００９， Ｖｏｌ．５１ Ｓｕｐｐｌ． ｐ．１５２（Ｐ２-０９１） * |
| JPN6012002286; 日本薬理学雑誌、２００６， Ｖｏｌ．１２７ Ｎｏ．３ ｐ．１７１-１７５ * |
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