JP5951996B2 - イミノ糖及びアレナウイルス感染症を治療する方法 - Google Patents

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２００９年２月２４日出願の米国仮特許出願第６１／２０２，３９１号及び２００９年９月４日出願の同第６１／２７２，２５１号の優先権を主張し、これらはともに、それらの全体が参照によって組み込まれる。

本出願は、イミノ糖、及び、ウイルス感染症をイミノ糖により治療する方法に関連し、具体的には、アレナウイルス科に属するウイルスによって引き起こされるウイルス感染症、又は、アレナウイルス科に属するウイルスに関連するウイルス感染症を治療及び予防するためのイミノ糖の使用に関する。

１つの実施形態が、アレナウイルス科に属するウイルスによって引き起こされるか、又は、アレナウイルス科に属するウイルスに関連する疾患又は状態を治療又は予防する方法であって、その必要性のある対象に下記の式の化合物を投与することを含む方法である。

［式中、Ｒは、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のシクロアルキル基、置換又は非置換のアリール基、或いは、置換又は非置換のオキサアルキル基から選択されるか、または、Ｒは、

（Ｒ_１は置換又は非置換のアルキル基である；
Ｘ_１〜５は独立して、Ｈ、ＮＯ_２、Ｎ_３又はＮＨ_２から選択される；
Ｙは非存在であるか、或いは、カルボニル以外の、置換又は非置換のＣ_１−アルキル基である；及び
Ｚは結合叉はＮＨから選択される；但し、Ｚが結合であるときは、Ｙは非存在であり、、ＺがＮＨであるときは、Ｙは、カルボニル以外の、置換又は非置換のＣ_１−アルキル基である）である；及び
Ｗ_１〜４は独立して、水素、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のハロアルキル基、置換又は非置換のアルカノイル基、置換又は非置換のアロイル基、或いは、置換又は非置換のハロアルカノイル基から選択される。］

（Ａ）−（Ｅ）はイミノ糖の化学式を示す：Ａ）Ｎ−ブチルデオキシノジリマイシン（ＮＢ−ＤＮＪ又はＵＶ−１；Ｂ）Ｎ−ノニルデオキシノジリマイシン（ＮＮ−ＤＮＪ又はＵＶ−２）；Ｃ）Ｎ−（７−オキサデシル）デオキシノジリマイシン（Ｎ７−Ｏ−ＤＮＪ又はＵＶ−３）；Ｄ）Ｎ−（９−メトキシノニル）デオキシノジリマイシン（Ｎ９−ＤＮＪ又はＵＶ−４）；Ｅ）Ｎ−（Ｎ−｛４’−アジド−２’−ニトロフェニル｝−６−アミノヘキシル）デオキシノジリマイシン（ＮＡＰ−ＤＮＪ又はＵＶ−５） ＮＮ−ＤＮＪの合成スキームである。 図３Ａ−ＤはＮ７−Ｏ−ＤＮＪの合成を例示し、図３ＡはＮ７−Ｏ−ＤＮＪに至る一連の反応を示す。 図３Ｂは６−プロピルオキシ−１−ヘキサノールの調製を例示する。図３Ｃは６−プロピルオキシ−１−ヘキサナールの調製を例示する。図３ＤはＮ７−Ｏ−ＤＮＪの合成を例示する。 図４Ａ−ＣはＮ−（９−メトキシノニル）デオキシノジリマイシンの合成に関連する。図４Ａは９−メトキシ−１−ノナノールの調製を例示する。図４Ｂは９−メトキシ−１−ノナナールの調製を例示する。図４ＣはＮ−（９−メトキシノニル）デオキシノジリマイシンの合成を例示する。 ＮＢ−ＤＮＪ、Ｎ７−Ｏ−ＤＮＪ及びＮ９−ＤＮＪによるピチンデウイルス放出の阻害に関するデータを示す。 ピチンデウイルス（ＰＩＣＶ）及びフニンウイルス（ＪＵＮＶ）に対する選択されたイミノ糖の活性を示す。 ＰＩＣＶに対する、ＮＢ−ＤＮＪ、Ｎ７−Ｏ−ＤＮＪ及びＮ９−ＤＮＪの抗ウイルス活性を示す。 ＪＵＮＶに対する、ＮＢ−ＤＮＪ、ＮＮ−ＤＮＪ、Ｎ７−Ｏ−ＤＮＪ、Ｎ９−ＤＮＪ及びＮＡＰ−ＤＮＪの抗ウイルス活性を示す。

用語の定義
別途規定されない限り、「a」又は「an」は「one or more」（１つ又はそれ以上）を意味する。
本明細書中で使用される用語「ウイルス感染（症）」は、ウイルスが健康な細胞に浸入し、増殖又は複製するために細胞の再生産装置を使用し、最終的には細胞を溶解し、その結果、細胞死、ウイルス粒子の放出、及び、新たに産生された子孫ウイルスによる他の細胞の感染を生じさせる病的状態を表す。ある種のウイルスによる潜在性感染もまた、ウイルス感染の起こり得る結果である。

本明細書中で使用される用語「ウイルス感染を治療又は予防する」は、その特定ウイルスの複製を阻害すること、ウイルスの伝染を阻害すること、又は、ウイルスがその宿主において自身を確立することを妨げること、及び、ウイルス感染によって引き起こされる疾患の症状を改善又は緩和することを意味する。治療は、ウイルス量の減少、致死率及び／又は罹患率における低下が認められる場合、治療的であると見なされる。
ＩＣ５０又はＩＣ９０（阻害濃度５０又は阻害濃度９０）は、ウイルス量の５０％減少又は９０％減少をそれぞれ達成するために使用される治療剤（例えば、イミノ糖など）の濃度である。

関連出願
本出願は、２００９年２月２４日出願の米国仮特許出願第６１／２０２，３９１号を参照によってその全体において組み込む。

本発明者らは、ある種のイミノ糖が、例えば、デオキシノジリマイシン誘導体などが、アレナウイルス科に属するウイルスに対して効果的であり得ることを発見した。具体的には、デオキシノジリマイシン誘導体が、アレナウイルス科に属するウイルスによって引き起こされるか、又は、アレナウイルス科に属するウイルスに関連する疾患又は状態を治療又は予防するために有用であり得る。

アレナウイルス科に属するウイルスには、アレナウイルス属に属するアレナウイルスが含まれる。アレナウイルスは数多くのウイルス性出血熱を引き起こし得る。アレナウイルス属には、イッピーウイルス、ラッサウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、モバラウイルス、モペイアウイルス、アマパリウイルス、フレクサルウイルス、グアナリトウイルス、フニンウイルス、ラチノウイルス、マチュポウイルス、オリベロスウイルス、パラナウイルス、ピチンデウイルス、ピリタルウイルス、サビアウイルス、タカリベウイルス、タミアミウイルス、ホワイトウォーターアロヨ（Whiterwater arroyo）ウイルス及びチャパレ（Chapare）ウイルスが含まれる。アレナウイルスは多くの場合、ウイルス保有宿主としての役割を果たし得る齧歯類との接触によって伝染し得る。アレナウイルス感染症は世界各地で地域固有的であり得るし、毎年、１００万を超える症例を引き起こし、数千人が死亡している。ピチンデウイルス（アレナウイルス属の一員）は、他のアレナウイルスほどヒトに対して危険性がないので、この属に対する化学化合物の活性を試験するためにモデルとして頻繁に使用される。

アレナウイルスによって引き起こされるか、又は、アレナウイルスに関連する疾患には、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルスによって引き起こされるリンパ球性脈絡髄膜炎；ラッサウイルスによって引き起こされるラッサ熱；フニンウイルスによって引き起こされるアルゼンチン出血熱；マチュポウイルスによって引き起こされるボリビア出血熱；グアラニト（Guaranito）ウイルスによって引き起こされるベネズエラ出血熱；サビアウイルスによって引き起こされるブラジル出血熱；タカリベウイルスに関連するタカリベ熱；フレクサルウイルスに関連するインフルエンザ様疾患；ホワイトウォーターアロヨウイルスに関連する出血熱が含まれる。

多くの実施形態において、イミノ糖は、Ｎ−置換されたデオキシノジリマイシンであり得る。いくつかの実施形態において、そのようなＮ−置換されたデオキシノジリマイシンは下記の式の化合物であり得る：

式中、Ｗ_１〜４は独立して、水素、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のハロアルキル基、置換又は非置換のアルカノイル基、置換又は非置換のアロイル基、或いは、置換又は非置換のハロアルカノイル基から選択される。

いくつかの実施形態において、Ｒは、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のシクロアルキル基、置換又は非置換のアリール基、或いは、置換又は非置換のオキサアルキル基から選択することができる。

いくつかの実施形態において、Ｒは置換又は非置換のアルキル基であり得るし、及び／或いは、置換又は非置換のオキサアルキル基は、１個〜１６個の炭素原子、４個〜１２個の炭素原子、又は、８個〜１０個の炭素原子を含む。用語「オキサアルキル」は、１個〜５個の酸素原子、又は、１個〜３個の酸素原子、又は、１個〜２個の酸素原子を含有し得るアルキル誘導体を示す。用語「オキサアルキル」には、ヒドロキシ末端のアルキル誘導体及びメトキシ末端のアルキル誘導体が含まれる。

いくつかの実施形態において、Ｒは、−（ＣＨ_２）_６ＯＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_６ＯＣＨ_２ＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_６Ｏ（ＣＨ_２）_２ＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_６Ｏ（ＣＨ_２）_３ＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_２Ｏ（ＣＨ_２）_５ＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_２Ｏ（ＣＨ_２）_６ＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_２Ｏ（ＣＨ_２）_７ＣＨ_３、−（ＣＨ_２）_９−ＯＨ、−（ＣＨ_２）_９ＯＣＨ_３から選択することができ、しかし、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、Ｒは分岐又は非分岐の置換又は非置換のアルキル基であり得る。特定の実施形態において、アルキル基は、Ｃ６−Ｃ２０アルキル基、Ｃ８−Ｃ１６アルキル基、又は、Ｃ８−Ｃ１０アルキル基であり得る長鎖アルキル基であり得る。いくつかの実施形態において、Ｒは、長鎖オキサアルキル基、すなわち、１個〜５個の酸素原子、１個〜３個の酸素原子、又は、１個〜２個の酸素原子を含有し得る長鎖アルキル基であり得る。

いくつかの実施形態において、Ｒは下記の式を有することができる：

式中、Ｒ_１は置換又は非置換のアルキル基である；
Ｘ_１〜５は独立して、Ｈ、ＮＯ_２、Ｎ_３又はＮＨ_２から選択される；
Ｙは非存在であるか、或いは、カルボニル以外の、置換又は非置換のＣ_１−アルキル基である；及び
Ｚは結合叉はＮＨから選択される；但し、Ｚが結合であるときは、Ｙは非存在であり、、ＺがＮＨであるときは、Ｙは、カルボニル以外の、置換又は非置換のＣ_１−アルキル基である。
いくつかの実施形態において、ＺがＮＨであり、、Ｒ_１−Ｙが置換又は非置換のアルキル基（例えば、Ｃ２−Ｃ２０アルキル基、又は、Ｃ４−Ｃ１２アルキル基、又は、Ｃ４−Ｃ１０アルキル基など）である。

いくつかの実施形態において、Ｘ_１がＮＯ_２であり、、Ｘ_３がＮ_３である。いくつかの実施形態において、Ｘ_２、Ｘ_４及びＸ_５のそれぞれが水素である。

いくつかの実施形態において、イミノ糖は、米国特許出願公開第２００７／０２７５９９８号に開示されるＤＮＪ誘導体であり得る（これは参照によって本明細書中に組み込まれる）。いくつかの実施形態において、デオキシノジリマイシン誘導体は、図１に示される化合物の１つであり得る。

デオキシノジリマイシン誘導体を合成する方法が、例えば、米国特許第５，６２２，９７２号、同第５，２００，５２３号、同第５，０４３，２７３号、同第４，９９４，５７２号、同第４，２４６，３４５号、同第４，２６６，０２５号、同第４，４０５，７１４号及び同第４，８０６，６５０号、並びに、米国特許出願公開第２００７／０２７５９９８号に開示される（これらはすべてが参照によって本明細書中に組み込まれる）。

いくつかの実施形態において、イミノ糖は、無機酸又は有機酸に由来する塩の形態であり得る。医薬的に許容され得る塩、及び、塩形態物を調製するための方法が、例えば、Ｂｅｒｇｅ他（J. Pharm. Sci.、66:1〜18、1977）に開示される。適切な塩の例には、下記の塩が含まれるが、それらに限定されない：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラート、メシラート及びウンデカン酸塩。

いくつかの実施形態において、イミノ糖はまた、プロドラッグの形態で使用することができる。ＤＮＪ誘導体のプロドラッグ、例えば、６−ホスホリル化ＤＮＪ誘導体などが、米国特許第５，０４３，２７３号及び同第５，１０３，００８号に開示される。

いくつかの実施形態において、イミノ糖は組成物の一部として使用することができ、この場合、組成物はさらに、医薬的に許容され得るキャリア、及び／又は、組成物を動物に送達するために有用な成分を含む。組成物をヒトに送達するために有用な数多くの医薬的に許容され得るキャリア、及び、組成物を他の動物（例えば、家畜など）に送達するために有用な成分が当分野では公知である。そのようなキャリア及び成分を本発明の組成物に加えることは、十分に当業者のレベルの範囲内である。

いくつかの実施形態において、医薬組成物は、Ｎ−置換されたデオキシノジリマイシンから本質的になり得る。このことは、Ｎ−置換されたデオキシノジリマイシンが組成物における唯一の有効成分であることを意味し得る。
それにもかかわらず、いくつかの実施形態において、Ｎ−置換されたデオキシノジリマイシンは１つ又はそれ以上のさらなる抗ウイルス化合物とともに投与することができる。

いくつかの実施形態において、イミノ糖はリポソーム組成物中に用いることができ、例えば、米国特許出願公開第２００８／０１３８３５１号、米国特許出願第１２／４１０，７５０号（２００９年３月２５日出願）及び米国仮特許出願第６１／２０２，６９９号（２００９年３月２７日出願）に開示されるリポソーム組成物などにおいて使用することができる。
イミノ糖、例えば、ＤＮＪ誘導体などを、ウイルスによって冒された細胞又は動物に投与することができる。イミノ糖はウイルスの形態形成を阻害することができ、又は、イミノ糖は個体を治療することができる。当該治療は動物におけるウイルス感染を軽減することができ、又は和らげることができ、又は弱めることができる。

アレナウイルス科に属するウイルスが感染し得る動物には、脊椎動物、例えば、鳥類及び哺乳動物（霊長類、ヒト、齧歯類及びコウモリを含む）などが含まれる。本発明の方法に従って動物又は動物細胞に投与されるイミノ糖の量は、細胞からの、アレナウイルス科に属するウイルスの形態形成を阻害するために効果的である量であり得る。用語「阻害する」は、本明細書中で使用される場合、イミノ糖の非存在下で呈示される生物学的活性の検出可能な減少及び／又は排除を示し得る。用語「効果的な量」は、示された効果を達成するために必要なイミノ糖の量を示し得る。用語「治療」は、本明細書中で使用される場合、対象における症状を軽減又は緩和すること、或いは、症状が悪化又は進行することを妨げること、或いは、原因となる病原体の阻害又は排除、或いは、アレナウイルス科に属するウイルスに関連づけられる感染又は障害を、そのような感染又は障害を有しない対象において予防することを示し得る。

従って、例えば、ウイルスによって引き起こされるか、又は、ウイルスに関連する疾患の治療には、感染性病原体の破壊、その成長又は成熟化の阻害又は妨害、及び、その病理学的影響の中和が含まれ得る。細胞又は動物に投与され得るイミノ糖の量は好ましくは、その投与に付随する利点を上回る毒性影響を何ら誘導しない量である。
医薬組成物における有効成分の実際の投薬量レベルは、特定の患者のための所望される治療応答を達成するために効果的である量の活性な化合物（１つ又はそれ以上）を投与するように変化し得る。

選択された用量レベルは、イミノ糖の活性、投与経路、治療されている状態の重篤度、並びに、治療されている患者の状態及び以前の病歴に依存し得る。しかしながら、化合物の用量を、所望される治療的効果を達成するために要求されるよりも低いレベルで開始し、投薬量を、所望される効果が達成されるまで徐々に増大することは、当業者の範囲内である。所望される場合、効果的な１日用量を投与目的のために多数回の用量に分割することができ、例えば、１日あたり２回〜４回の用量に分割することができる。しかしながら、いずれかの特定の患者のための具体的な用量レベルは、体重、全身の健康状態、食事、投与時間及び投与経路、並び、他の治療剤との組合せ、並びに、治療されている状態又は疾患の重篤度を含めて、様々な要因に依存し得ることが理解される。ヒト成人の１日投薬量は、１０キログラムの体重あたりイミノ糖が約１マイクログラムから約１グラムにまで及び得るか、又は、約１０ｍｇから１００ｍｇにまで及び得る。当然のことながら、細胞又は動物に投与されるべきイミノ糖の量は、当業者によって十分に理解される数多くの要因（例えば、イミノ糖の分子量及び投与経路など）に依存し得る。

本発明の方法において有用である医薬組成物は、経口固体配合物、眼用配合物、坐薬配合物、エアロゾル配合物、局所用配合物又は他の類似する配合物で全身に投与することができる。例えば、配合物は、粉末、錠剤、カプセル、ロゼンジ、ゲル、溶液、懸濁物又はシロップなどの物理的形態であり得る。イミノ糖に加えて、そのような医薬組成物は、薬物の投与を高め、かつ、容易にすることが公知である医薬的に許容され得るキャリア及び他の成分を含有することができる。他の可能な配合物、例えば、ナノ粒子、リポソーム、再封赤血球（resealed erythrocyte）、及び、免疫学的に基づくシステムなどもまた、イミノ糖を投与するために使用することができる。そのような医薬組成物は数多くの経路によって投与することができる。本明細書中で使用される用語「腸管外」は、皮下、静脈内、動脈内、クモ膜下、並びに、様々な注射技術及び注入技術を包含するが、これらに限定されない。例として、医薬組成物は、経口投与、局所投与、腸管外投与、全身投与によって、又は、肺経路によって投与することができる。

これらの組成物は単回服用で投与することができ、又は、種々の時間で投与される多回服用で投与することができる。アレナウイルス科に属するウイルスに対する組成物の阻害効果が持続し得るので、服用法は、ウイルス伝播が妨げられ、一方、宿主細胞が最小限の影響を受けるように調節することができる。例として、動物に対して、本発明の組成物の服用を、１週間に１回、施すことができ、それにより、ウイルス伝播がまる１週間にわたって妨げられ、一方、宿主細胞の機能が、１週間に１回、短期間だけ阻害される。

本明細書中に記載される実施形態が下記の実施例によってさらに例示されるが、、本明細書中に記載される実施形態は下記の実施例に決して限定されない。

１．Ｎ−ノニルＤＮＪの合成

手順：磁石式撹拌装置を備える５０ｍＬの一口丸底フラスコに、ＤＮＪ（５００ｍｇ）、エタノール（１００ｍＬ）、ノナナール（５３０ｍｇ）及び酢酸（０．５ｍＬ）を室温で装入した。反応混合物を窒素下において４０℃〜５０℃に加熱し、３０分間〜４０分間撹拌した。反応混合物を周囲温度に冷却し、Ｐｄ／Ｃを加えた。反応フラスコを排気し、風船内の水素ガスによって置き換えた。このプロセスを３回繰り返した。最後に、反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターした（備考１）。反応混合物をセライトのパッドでろ過し、エタノールにより洗浄した。ろ液を真空下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（２３０メッシュ〜４００メッシュのシリカゲル）によって精製した。ジクロロメタンにおけるメタノールの溶媒グラジエント（１０％〜２５％）を使用して、生成物をカラムから溶出した。所望される生成物を含有するすべての分画物を一緒にし、真空下で濃縮して、純粋な生成物を得た（４２０ｍｇ）。反応の完了を、薄層シリカゲルプレートを使用する薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターした；溶離液、メタノール：ジクロロメタン＝１：２。

２．Ｎ−７−オキサデシルＤＮＪの合成
２ａ．６−プロピルオキシ−１−ヘキサノールの合成

手順：磁石式撹拌装置を備える５００ｍＬの一口丸底フラスコに、１，６−ヘキサンジオール（６．００ｇ）、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５．４１３ｇ）を室温で装入した。反応混合物を１時間撹拌し、その後、１−ヨードプロパン（８．６３ｇ）を加えた。反応混合物を７０℃〜８０℃に加熱し、一晩撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターした（備考１）。反応が完了した後、水を反応混合物に加え、酢酸エチルにより抽出した（１００ｍＬで２回）。一緒にした有機層を真空下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をジクロロメタンに溶解し、水、次いで、ブラインにより洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を真空下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、２３０〜４００メッシュのシリカゲルを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した。ヘキサン（hexanes）における酢酸エチルの溶媒グラジエント（１０％〜４５％）を使用して、生成物をカラムから溶出した。所望される純粋な生成物を含有するすべての分画物を一緒にし、真空下で濃縮して、純粋な６−プロピルオキシ−１−ヘキサノールを得た（ロットＤ−１０２９−０４８、１．９ｇ、２５％）。反応の完了を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターした（溶離液：ヘキサン（hexanes）おける６０％酢酸エチル）。

２ｂ．６−プロピルオキシ−１−ヘキサナールの調製

手順：磁石式撹拌装置を備える５０ｍＬの一口丸底フラスコに、６−プロピルオキシ−１−ヘキサノール（１．０ｇ）、ＰＤＣ（４．７ｇ）、ジクロロメタン（１０ｍＬ）、セライト（１．０ｇ）及び酢酸ナトリウム（１００ｍｇ）を装入した。反応混合物を窒素下において室温で５分間撹拌した。ＰＤＣ（４．７０ｇ）を反応混合物に加え、一晩撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターした（備考１）。反応が完了した後、反応混合物をカラム（２３０〜４００メッシュのシリカゲル）にそのまま負荷した。酢酸エチルにおけるジクロロメタンの溶媒グラジエント（１０％〜２０％）を使用して、生成物をカラムから溶出した。所望される純粋な生成物を含有するすべての分画物を一緒にし、真空下で濃縮して、純粋な６−プロピルオキシ−１−ヘキサナールを得た（ロットＤ−１０２９−０５０、７１０ｍｇ、７１％）。反応の完了を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターした（溶離液：ヘキサン（hexanes）おける６０％酢酸エチル）。

２ｃ．Ｎ−７−オキサデシル−ＤＮＪの合成

手順：磁石式撹拌装置を備える５０ｍＬの一口丸底フラスコに、ＤＮＪ（５００ｍｇ）、エタノール（１５ｍＬ）、６−プロピルオキシ−１−ヘキサナール（５８５ｍｇ）及び酢酸（０．１ｍＬ）を室温で装入した。反応混合物を窒素下において４０℃〜４５℃に加熱し、３０分間〜４０分間撹拌した。反応混合物を周囲温度に冷却し、Ｐｄ／Ｃを加えた。反応フラスコを排気し、風船内の水素ガスによって置き換えた。このプロセスを３回繰り返した。最後に、反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターした（備考１）。反応混合物をセライトのパッドでろ過し、エタノールにより洗浄した。ろ液を真空下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をカラムクロマトグラフィー（２３０〜４００メッシュのシリカゲル）によって精製した。ジクロロメタンにおけるメタノールの溶媒グラジエント（１０％〜４０％）を使用して、生成物をカラムから溶出した。所望される生成物を含有するすべての分画物を一緒にし、真空下で濃縮して、純粋な生成物を得た（ロット：Ｄ−１０２９−０５２、８４０ｍｇ）。反応の完了を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターした（溶離液：ジクロロメタンおける５０％メタノール）。

３．Ｎ−（９−メトキシ）−ノニルＤＮＪの合成
３ａ．９−メトキシ−１−ノナノールの調製

手順：磁石式撹拌装置及び撹拌子を備える５００ｍＬの一口丸底フラスコに、ジメチルスルホキシド（１００ｍＬ）中の１，９−ノナンジオール（１０．００ｇ、６２．３ｍｍｏｌ）及びＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）を装入した。これに、Ｈ_２Ｏ（１０ｍＬ）における水酸化ナトリウム（５．０ｇ、１２５．０ｍｍｏｌ）の溶液を室温でゆっくり加えた。水酸化ナトリウムの添加期間中、反応混合物は発熱し、温度が約４０℃に上昇した。混合物を１時間撹拌し、その後、反応混合物の温度を約４０℃で維持しながら、硫酸ジメチル（１６．５２ｇ、１３１ｍｍｏｌ）を４回に分けて加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターした（備考１）。ＴＬＣモニタリングは、反応が２５％の転換であることを示した。この段階で、さらなる硫酸ジメチル（２４．７８ｇ、１９６．４４ｍｍｏｌ）を加え、生じた混合物を室温でさらに２４時間撹拌した。反応が完了した後、水酸化ナトリウム（１０％水溶液）を反応混合物に加えて、溶液のｐＨを１１〜１３に調節した。混合物を室温で２時間撹拌し、ジクロロメタンにより抽出した（１００ｍＬで３回）。一緒にした有機層を、Ｈ_２Ｏ（２００ｍＬ）、ブライン（１５０ｍＬ）により洗浄し、無水硫酸ナトリウム（２０ｇ）で乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮して、粗生成物を得た（１４ｇ）。粗生成物を、２５０〜４００メッシュのシリカゲルを使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した。ヘキサン（hexanes）における酢酸エチルの溶媒グラジエント（１０％〜５０％）を使用して、生成物をカラムから溶出した。所望される純粋な生成物を含有するすべての分画物を一緒にし、真空下で濃縮して、純粋な９−メトキシ−１−ノナノールを得た（ロットＤ−１０２７−１５５、２．３８ｇ、２１．９％）。反応の完了を、薄層シリカゲルプレートを使用する薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターした（溶離液：ヘキサン（hexanes）おける６０％酢酸エチル）。

３ｂ ９−メトキシ−１−ノナナールの調製

手順：磁石式撹拌装置及び撹拌子を備える５０ｍＬの一口丸底フラスコに、９−メトキシ−ノナノール（１．０ｇ、５．９ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１０ｍＬ）、モレキュラーシーブ（１．０ｇ、３Ａ）、酢酸ナトリウム（０．１ｇ）を室温で装入した。反応混合物を窒素下において室温で５分間撹拌した。反応混合物に二クロム酸ピリジニウム（４．７ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターした（備考１）。反応が完了した後、反応混合物をシリカゲル（約１５ｇ）の層でろ過した。ろ液を真空下でエバポレーションして、粗化合物を得た。これを、シリカゲルカラム（２５０〜４００メッシュ、４０ｇ）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した。ヘキサンにおける酢酸エチルの溶媒グラジエント（１０％〜５０％）を使用して、生成物をカラムから溶出した。所望される純粋な生成物を含有するすべての分画物を一緒にし、真空下で濃縮して、純粋な９−メトキシ−ノナナールを得た（ロットＤ−１０２７−１５６、５５３ｍｇ、５４．４％）。反応の完了を、薄層シリカゲルプレートを使用する薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターした（溶離液：ヘキサン（hexanes）おける６０％酢酸エチル）。

３ｃ Ｎ−（９−メトキシ）−ノニルＤＮＪの合成

手順：磁石式撹拌装置及び撹拌子を備える５０ｍＬの二口丸底フラスコに、ＤＮＪ（３００ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）、エタノール（２０ｍＬ）、９−メトキシ−１−ノナナール（４７６ｍｇ、２．７６ｍｍｏｌ）を室温で装入した。反応混合物を窒素下において５分間〜１０分間撹拌し、Ｐｄ／Ｃを室温で加えた。反応フラスコを排気し、風船を使用して水素ガスによって置き換えた。このプロセスを３回繰り返し、その後、反応混合物を、大気圧水素のもと、室温で撹拌した。反応の進行をＴＬＣによってモニターした（備考１）。反応混合物をセライトの層でろ過し、エタノール（２０ｍＬ）により洗浄した。ろ液を真空下で濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を、２５０〜４００メッシュのシリカゲル（２０ｇ）を使用するカラムクロマトグラフィーによって精製した。酢酸エチルにおけるメタノールの溶媒グラジエント（５％〜２５％）を使用して、生成物をカラムから溶出した。所望される純粋な生成物を含有するすべての分画物を一緒にし、真空下で濃縮して、灰白色の固体を得た。この固体を酢酸エチル（２０ｍＬ）中で粉砕し、ろ過し、高真空下で乾燥して、白色の固体を得た［ロット：Ｄ−１０２７−１５８（１６５．３ｍｇ、２８．１％）］。反応の完了を、薄層シリカゲルプレートを使用する薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターした（溶離液：ジクロロメタンにおける５０％メタノール）。

４．ピチンデウイルスに対するイミノ糖の影響
図５は、下記のＵＶイミノ糖化合物によるピチンデウイルス放出の阻害に関するデータを示す：ＮＢ−ＤＮＪ（ＵＶ−１）、ＮＮ−ＤＮＪ（ＵＶ−２）、Ｎ７−Ｏ−ＤＮＪ（ＵＶ−３）、Ｎ９−ＤＮＪ（ＵＶ−４）、ＮＡＰ−ＤＮＪ（ＵＶ−５）。コントロールのＶｅｒｏ細胞培養物、及び、１００μＭの化合物により処理されるＶｅｒｏ細胞培養物にウイルスを感染させ、培養物を５％ＣＯ２インキュベーターにおいて３７℃で７日間培養した。化合物により処理されるウイルス感染細胞培養物からの感染性ウイルス粒子の産生の阻害をプラークアッセイによって求めた。
ウイルスプラークアッセイを、２％のウシ胎児血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンが補充された１×改変イーグル培地（Ｇｉｂｃｏ）においてウェルあたり５×１０^５個の細胞で６ウェルプレートに置床されるＶｅｒｏ細胞において行った。化合物により処理される感染細胞培養物からの回収上清から力価測定されることになるウイルスを細胞培養培地で希釈し、１００μｌの体積で細胞に接種し、３７℃で１時間吸着させた。細胞に、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンが補充された１×改変イーグル培地（Ｇｉｂｃｏ）における０．６％アガロースを重層した。
プラーク（これは、感染し、細胞を殺している個々の感染性ウイルス粒子を表す死細胞からなる）を、５％ＣＯ２インキュベーターにおいて３７℃で発達させ、細胞単層をニュートラルレッドで生染色することによって可視化した。実験により、感染性ピチンデウイルスの放出がＵＶイミノ糖化合物による処理の後では著しく低下することが明らかにされる。

５．ピチンデウイルス及びフニンウイルスに対するイミノ糖の影響
図６は、下記のＵＶイミノ糖化合物によるピチンデウイルス放出及びフニンウイルス放出の阻害に関するデータを示す：ＮＢ−ＤＮＪ（ＵＶ−１）、ＮＮ−ＤＮＪ（ＵＶ−２）、Ｎ７−Ｏ−ＤＮＪ（ＵＶ−３）、Ｎ９−ＤＮＪ（ＵＶ−４）、ＮＡＰ−ＤＮＪ（ＵＶ−５）。
化合物。下記化合物の基本ストック液をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）において、０．５％の最終的な最大ＤＭＳＯ濃度に調製した：ＵＶ−１、ＵＶ−２、ＵＶ−３、ＵＶ−４及びＵＶ−５。すべての化合物を基本ストック液からそれらの実験濃度に希釈した。

ウイルス。化合物をピチンデウイルス（アレナウイルス）ＣｏＡｎ３７３９株及びフニン（アレナウイルス）Ｃａｎｄｉｄ＃１株に対する阻害についてスクリーニングした。ウイルストック液を、２％のウシ胎児血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンが補充された改変イーグル培地（ＭＥＭ、Ｓｉｇｍａ）を使用してＶｅｒｏ細胞における伝播によって作製し、標準的プラークアッセイ（下記に示される方法）を使用して力価測定した。ウイルスストック液は、使用されるまで−８０℃で貯蔵された。

ウイルス収量低下アッセイ。ウイルス収量アッセイを、種々の濃度のイミノ糖とインキュベーションされるウイルス感染細胞から生じる上清サンプルに対する標準的プラークアッセイによって行った。２４ウェルの細胞培養プレートに、細胞を、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン及び２％の熱不活化ウシ胎児血清が補充されたアール塩を含むＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）における１０％のウシ胎児血清Ｖｅｒｏ細胞（ＡＴＣＣ、Ｍａｎｎａｓｓａｓ、ＶＡ；ＡＴＣＣ番号ＣＣＬ−８１）を含む１ｍＬのＭＥＭにおいて播種し、細胞培養プレートを２４時間、又は、約８０％のコンフルエンシーになるまで３７℃でインキュベーションした。培地を、２％のウシ胎児血清と、５００μＭ、２５０μＭ又は１２５μＭから開始され、８個の希釈物を使用して三連で試験される使用されるべき化合物濃度とが補充された培地により取り替えた。

化合物が適切なウェルに加えられ、３７℃、５％ＣＯ_２において３７℃で１時間インキュベーションされる。１時間のインキュベーションの後、ウイルスがそれぞれのウェルに加えられる。４日がＰＩＣＶウイルス感染のために要求され、５日がＪＵＮＶウイルス感染のために要求される。感染が完了したとき、上清を力価測定のために集めた。ＰＩＣＶ及びＪＵＮＶを力価測定するために、成長培地における８０％コンフルエントなＶｅｒｏ細胞を含む１２ウェルプレートを使用した。ウイルス上清を１０^−３から１０^−８にまで希釈し、細胞に加え（１００ｕＬ）、振とうを５〜１０分毎に行いながら３７℃で１時間インキュベーションした。ウイルス感染培地（１００ｕＬ）を吸引し、２×ＭＥＭ（５％ウシ胎児血清）と１：１で混合された１ｍＬの予め加温された２％の低融点アガロースにより取り替え、３７℃、５％ＣＯ_２で６日間インキュベーションし、その後、ニュートラルレッド染色によるプラーク可視化を行った。ＩＣ５０を、５０％のウイルス阻害を生じさせる化合物の濃度として求めた。

図７は、コントロール、ＵＶ−１、ＵＶ−３及びＵＶ−４について、ピチンデウイルスの阻害を比較する。
化合物。下記化合物の基本ストック液をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）において、０．５％の最終的な最大ＤＭＳＯ濃度に調製した：ＵＶ−１、ＵＶ−２、ＵＶ−３、ＵＶ−４、ＵＶ−５。すべての化合物を基本ストック液からそれらの実験濃度に希釈した。
ウイルス。化合物をピチンデウイルスＣｏＡｎ３７３９株に対する阻害についてスクリーニングした。

結果：ウイルス収量アッセイを、上記で記載されたように行った。ＰＩＣＶ ＣｏＡｎ３７３９株のウイルス阻害が、ＮＢ−ＤＮＪ、Ｎ７−Ｏ−ＤＮＪ及びＮ９−ＤＮＪの化合物について見出された。ＰＩＣＶのインビトロ阻害は、ＮＢ−ＤＮＪによる５０％を超える阻害、Ｎ７−Ｏ−ＤＮＪによる７０％の阻害、及び、Ｎ９−ＤＮＪによる９９％を超える阻害を１００μＭのイミノ糖濃度においてもたらした。
図８は、イミノ糖化合物の濃度に対してコントロールと比較して、ウイルス感染性の百分率として、ＵＶ−１、ＵＶ−２、ＵＶ−３、ＵＶ−４及びＵＶ−５のイミノ糖によるフニンウイルスについての阻害プロットを示す。

化合物。下記化合物の基本ストック液をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）において、０．５％の最終的な最大ＤＭＳＯ濃度に調製した：ＵＶ−１、ＵＶ−２、ＵＶ−３、ＵＶ−４、ＵＶ−５。すべての化合物を基本ストック液からそれらの実験濃度に希釈した。
ウイルス。化合物をフニンウイルスＣａｎｄｉｄ＃１株に対してスクリーニングした。
結果：ウイルス収量アッセイを、上記で記載されたように行った。フニンウイルスの阻害が、３５０μＭのＥＣ５０により化合物ＮＢ−ＤＮＪについて見出された。ＥＣ５０が６０μＭである化合物ＮＮ−ＤＮＪ、及び、ＥＣ５０が１０μＭである化合物ＮＡＰ−ＤＮＪは保護を示した。Ｎ７−Ｏ−ＤＮＪ及びＮ９−ＤＮＪの化合物はＥＣ５０が５００μＭを超えていた。

上記は特定の好ましい実施形態を示すが、本発明はそのように限定されないことが理解される。様々な改変が、開示された実施形態に対して行われ得ること、及び、そのような改変は本発明の範囲内であることが意図されることが当業者には想起される。
本明細書において引用される刊行物、特許出願及び特許のすべてが、それらの全体での参照によって本明細書中に組み込まれる。

以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］ アレナウイルス科に属するウイルスによって引き起こされるか、又は、アレナウイルス科に属するウイルスに関連する疾患又は状態を治療又は予防する方法であって、その必要性のある対象に下記の式の化合物又はその医薬的に許容され得る塩の効果的な量を投与することを含む方法。

［式中、Ｒは、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のシクロアルキル基、置換又は非置換のアリール基、或いは、置換又は非置換のオキサアルキル基から選択されるか、または、Ｒは、

（Ｒ _１ は置換又は非置換のアルキル基である；
Ｘ _１〜５ は独立して、Ｈ、ＮＯ _２ 、Ｎ _３ 又はＮＨ _２ から選択される；
Ｙは非存在であるか、或いは、カルボニル以外の、置換又は非置換のＣ _１ −アルキル基である；及び
Ｚは結合叉はＮＨから選択される；但し、Ｚが結合であるときは、Ｙは非存在であり、ＺがＮＨであるときは、Ｙは、カルボニル以外の、置換又は非置換のＣ _１ −アルキル基である）である；及び
Ｗ _１〜４ は独立して、水素、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のハロアルキル基、置換又は非置換のアルカノイル基、置換又は非置換のアロイル基、或いは、置換又は非置換のハロアルカノイル基から選択される。］
［２］ Ｗ _１ 、Ｗ _２ 、Ｗ _３ 及びＷ _４ のそれぞれが水素である、［１］に記載の方法。
［３］ Ｒが、置換又は非置換のアルキル基、置換又は非置換のシクロアルキル基、置換又は非置換のアリール基、或いは、置換又は非置換のオキサアルキル基から選択される、［１］に記載の方法。
［４］ ＲがＣ２−Ｃ１２アルキル基である、［１］に記載の方法。
［５］ ＲがＣ３−Ｃ６アルキル基である、［１］に記載の方法。
［６］ 前記投与することが、Ｂ−ブチルデオキシノジリマイシン又はその医薬的に許容され得る塩を投与することを含む、［１］に記載の方法。
［７］ Ｒがオキサアルキル基である、［１］に記載の方法。
［８］ Ｒが、１個〜３個の酸素原子を含有するＣ２−Ｃ１６オキサアルキル基である、［１］に記載の方法。
［９］ Ｒが、１個〜２個の酸素原子を含有するＣ６−Ｃ１２オキサアルキル基である、［１］に記載の方法。
［１０］ 前記投与することが、Ｎ−（７−オキサデシル）デオキシノジリマイシン又はその医薬的に許容され得る塩を投与することを含む、［１］に記載の方法。
［１１］ 前記投与することが、Ｎ−（９−メトキシノニル）デオキシノジリマイシン又はその医薬的に許容され得る塩を投与することを含む、［１］に記載の方法。
［１２］ Ｒが

である、［１］に記載の方法。
［１３］ Ｘ _１ がＮＯ _２ であり、Ｘ _３ がＮ _３ である、［１２］に記載の方法。
［１４］ Ｘ _２ 、Ｘ _４ 及びＸ _５ のそれぞれが水素である、［１２］に記載の方法。
［１５］ 前記投与することが、Ｎ−（Ｎ−｛４’−アジド−２’−ニトロフェニル｝−６−アミノヘキシル）デオキシノジリマイシン又はその医薬的に許容され得る塩を投与することを含む、［１］に記載の方法。
［１６］ 前記対象が哺乳動物である、［１］に記載の方法。
［１７］ 前記対象がヒトである、［１］に記載の方法。
［１８］ 前記ウイルスが、イッピーウイルス、ラッサウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、モバラウイルス、モペイアウイルス、アマパリウイルス、フレクサルウイルス、グアナリトウイルス、フニンウイルス、ラチノウイルス、マチュポウイルス、オリベロスウイルス、パラナウイルス、ピチンデウイルス、ピリタルウイルス、サビアウイルス、タカリベウイルス、タミアミウイルス、ホワイトウォーターアロヨ（Whiterwater arroyo）ウイルス及びチャパレ（Chapare）ウイルスから選択される、［１］に記載の方法。
［１９］ 前記ウイルスがピチンデウイルスである、［１］に記載の方法。
［２０］ 前記ウイルスがフニンウイルスである、［１］に記載の方法。
［２１］ 前記疾患又は状態が、リンパ球性脈絡髄膜炎、ラッサ熱、アルゼンチン出血熱、ボリビア出血熱、ブラジル出血熱、タカリベ熱、ベネズエラ出血熱、フレクサルウイルスに関連するインフルエンザ様疾患、及び、ホワイトウォーターアロヨ（Whiterwater arroyo）ウイルスに関連する出血熱から選択される、［１］に記載の方法。
［２２］ 前記疾患又は状態がアルゼンチン出血熱である、［１］に記載の方法。
［２３］ 前記疾患又は状態がラッサ熱である、［１］に記載の方法。

Claims (4)

1. 下記の式の化合物又はその医薬的に許容され得る塩の効果的な量を含む、アレナウイルス科に属するウイルスによって引き起こされるか、又は、アレナウイルス科に属するウイルスに関連する疾患又は状態を、対象において治療又は予防するための医薬組成物であって、
   
   ［式中、Ｒは、Ｃ_１〜Ｃ_１６アルキル基、もしくはＣ_１〜Ｃ_１６オキサアルキル基から選択されるか、または、Ｒは、
   
   （Ｒ_１−Ｙは、Ｃ_２〜Ｃ_２０アルキル基である；
   Ｘ_１〜５は独立して、Ｈ、ＮＯ_２、Ｎ_３又はＮＨ_２から選択される；
   ＺはＮＨである）である；及び
   Ｗ_１〜４は、それぞれ水素である。］
   前記化合物は、Ｎ−ブチルデオキシノジリマイシン、Ｎ−（７−オキサデシル）デオキシノジリマイシン、Ｎ−（９−メトキシノニル）デオキシノジリマイシン、およびそれらの医薬的に許容され得る塩からなる群より選択される、
   医薬組成物。
2. 前記化合物が、Ｎ−ブチルデオキシノジリマイシン又はその医薬的に許容され得る塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記化合物が、Ｎ−（７−オキサデシル）デオキシノジリマイシン又はその医薬的に許容され得る塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
4. 前記化合物が、Ｎ−（９−メトキシノニル）デオキシノジリマイシン又はその医薬的に許容され得る塩である、請求項１に記載の医薬組成物。