JP5929915B2 - 細胞平面展開デバイスおよびこれを用いた細胞展開方法 - Google Patents
細胞平面展開デバイスおよびこれを用いた細胞展開方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5929915B2 JP5929915B2 JP2013529006A JP2013529006A JP5929915B2 JP 5929915 B2 JP5929915 B2 JP 5929915B2 JP 2013529006 A JP2013529006 A JP 2013529006A JP 2013529006 A JP2013529006 A JP 2013529006A JP 5929915 B2 JP5929915 B2 JP 5929915B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell
- groove
- cells
- deployment device
- width
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 43
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 110
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 24
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000007480 spreading Effects 0.000 claims description 6
- 238000003892 spreading Methods 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 465
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 34
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 33
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 23
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 23
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 18
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 16
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 8
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 7
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 7
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 7
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 2
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N Ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 2
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 2
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 description 2
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 238000005299 abrasion Methods 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 1
- 238000000879 optical micrograph Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
- B01L3/502753—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by bulk separation arrangements on lab-on-a-chip devices, e.g. for filtration or centrifugation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
- C12M25/06—Plates; Walls; Drawers; Multilayer plates
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
- B01L2300/0816—Cards, e.g. flat sample carriers usually with flow in two horizontal directions
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2400/00—Moving or stopping fluids
- B01L2400/08—Regulating or influencing the flow resistance
- B01L2400/084—Passive control of flow resistance
- B01L2400/086—Passive control of flow resistance using baffles or other fixed flow obstructions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明の細胞平面展開デバイスは、
細胞懸濁液に含まれる目的細胞を平面状に展開することができる細胞平面展開デバイスであって、
前記細胞平面展開デバイスが、
上面に細胞展開部を有する板状の本体部から構成されており、
前記本体部の細胞展開部には、
前記本体部の一方側から他方側に向かって複数の溝が列状に並設されるとともに、前記複数の溝は、溝幅が異なる複数の溝群からなり、
前記複数の溝群のうちの少なくとも1つの溝群において、
溝の開口部上面の最大幅は、前記目的細胞の直径と等しいか、または前記目的細胞の直径より大きく、かつ、
溝は、その深さ方向の途中で前記目的細胞を保持し得るように、その深さ方向において前記目的細胞の直径よりも小さい幅を有し、
溝の底部に、幅1μm以下のスリットもしくは直径1μm以下の孔を有するか、または、それらを有さないことを特徴とする。
さらには、前記本体部の一方側から他方側に向かって複数の前記溝が列状に並設されるとともに、前記複数の溝が溝幅の異なる複数の溝群からなっているので、細胞平面展開デバイスの細胞展開部に細胞懸濁液を流入させた際に、細胞懸濁液中の種々の大きさの細胞を、細胞の大きさに合った大きさの溝内に整列して展開させることができる。
前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝は、その底部に、0.4μm以上1μm以下の幅のスリットを有することを特徴とする。
前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝の底部は、閉口であることを特徴とする。
前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝が傾斜面を有するテーパード型である場合、傾斜角度は、45度以下であることを特徴とする。
前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝の深さは、目的細胞の直径の2倍より小さいことを特徴とする。
前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝の表面は、水に対する接触角が、20度以下であることを特徴とする。
前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝の開口部上面から20μm以上100μm以下の高さに天井構造を有することを特徴とする。
前記複数の溝群が、
前記溝群ごとに同じ溝幅の溝が並設されてなることを特徴とする。
前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群以外の他の溝群は、溝の開口部上面の最大幅が、前記目的細胞の直径よりも小さいことを特徴とする。
このように構成すれば、目的細胞よりも直径が小さい非目的細胞を、複数の溝群のうちの少なくとも1つの溝群以外の他の溝群に整列して展開できるので、目的細胞と非目的細胞とをより分離しやすくなる。
また、本発明の細胞平面展開デバイスは、
前記複数の溝群が、
前記本体部の一方側から他方側に向かうにしたがって、前記溝群ごとに溝幅が漸次大きくなるように設定されていることを特徴とする。
前記複数の溝群が、
前記溝幅が大きくなるに従って、漸次溝深さが深くなるよう構成されていることを特徴とする。
前記溝幅が1〜100μmの範囲内であるとともに、前記溝深さが1〜100μmの範囲内であることを特徴とする。
前記溝が、断面V字状であることを特徴とする。
前記本体部が、複数の分割板状体を並設してなることを特徴とする。
前記複数の分割板状体が、
前記分割板状体ごとに、同じ溝幅及び同じ溝深さの複数の溝からなる1種類の溝群が並設されてなることを特徴とする。
前記細胞懸濁液が、生体試料であることを特徴とする。
上記のいずれかに記載の細胞平面展開デバイスの溝に、前記細胞懸濁液を添加する工程を含むことを特徴とする。
前記細胞懸濁液を接触させる工程において、
前記細胞平面展開デバイスの前記本体部の一方側から他方側に向かって前記複数の溝群を横切るように前記細胞懸濁液を前記複数の溝群の溝内に供給し、前記細胞懸濁液中の細胞を小さい細胞から大きい細胞の順に前記複数の溝群の溝内に整列させて展開する工程と、
を少なくとも有することを特徴とする。
前記細胞懸濁液中の細胞を小さい細胞から大きい細胞の順に前記複数の溝群の溝内に整列させて展開する工程の後、
さらに前記平面状に展開された細胞を観察手段で観察する工程と、
を有することを特徴とする。
なお、本明細書中で「溝群」とは、同じ溝幅の溝の群のことであるが、溝群が1本の溝のみからなる場合も含むものである。
本発明の細胞平面展開デバイスを利用した細胞展開装置としては、図1に示したような細胞平面展開デバイス10と、この細胞平面展開デバイス10上に細胞懸濁液30を供給する液供給手段(図示せず)と、を少なくとも有するものである。
このような細胞平面展開デバイス10の好ましい構造、および溝の好ましい構造について以下、詳細に説明する。
図1に示した本発明の細胞平面展開デバイス10は、板状の本体部12から構成されており、この本体部12の上面が、細胞懸濁液30を展開するための細胞展開部14となっている。
次いで細胞平面展開デバイス10に設けられる溝16の構造について詳しく説明する。
図5(a)に示したように、溝16は、開口部50から底部52全体にかけて、または少なくとも開口部50近傍において、テーパード型であることが好ましいが、テーパード型でなくても任意の形状にすることができる。
溝16の開口部50の最大幅Tは、通常、目的細胞60の直径と等しいか、または目的細胞60の直径より大きい。
目的細胞60が、溝16のより開口部50に近い部位において保持され、かつ、
非目的細胞70が、溝16のより底部に近い部位において保持される、または、非目的細胞70が溝16の底部(谷)に接する状態で保持されるようにすることが好ましい。
このとき、目的細胞60の下端と非目的細胞70の上端とが接触しない距離となるような溝形状にすることが好ましい。
溝16が傾斜面を有するテーパード型(図6(a))である場合、その傾斜角度θは45度以下であることが好ましい。傾斜角度θがこのような範囲にあると、目的細胞60および非目的細胞70の整列および保持が適切に行われる溝16を形成しやすくなる。
本発明の細胞平面展開デバイス10が有する溝16の表面は、親水化処理を施すなどして、その水に対する接触角を20度以下とすることが好ましい。
細胞懸濁液30は、60を1種含むものであり、目的細胞60以外の種類の非目的細胞70をさらに1種以上含むものであってもよい。
スリットとは、溝16の長手方向に沿って底部52(谷近傍)に長く延びている孔をいい、細胞観察にとって不要な物質を排出することのできるものをいう。
本発明の細胞平面展開デバイス10において、溝16の上部に天井構造がなく開放された状態であっても、溝16の壁面との間に働く力により、細胞懸濁液30はポンプ等を使用して送液することなく溝16の中に展開し、細胞平面展開デバイス10の表面上に目的細胞60を整列させることができる。
上記した細胞平面展開デバイス10を用いた細胞展開方法について下記に説明する。
本発明の細胞展開方法は、本発明の細胞平面展開デバイス10の溝16に、細胞懸濁液30を接触させる工程を含むことを特徴とする。
山54と山54との間の幅(ピッチ=開口部50の最大幅T)24μmかつ傾斜角度θが45度のプリズムシート(有機光学株式会社(株)製の「プリズムシート(先端角度90度、ピッチ0.02、幅(ピッチ方向)300×長さ300、標準板厚2ミリ)」;テーパード型)の表面を、UVオゾンクリーナーを用いて親水化処理を施した。シート表面の水に対する接触角は20度であった。
実施例1で用いたプリズムシート表面を、実施例1と同様にして表面処理を行った。
実施例1において、プリズムシートとして山54と山54との間の幅(ピッチ)15μmかつ傾斜角度θが70度のプリズムシート(有機光学株式会社(株)製の「プリズムシート 先端角度140度、ピッチ0.015、幅(ピッチ方向)300×長さ300、標準板厚2ミリ」;テーパード型)を用いた以外は実施例1と同様にして細胞を展開した。顕微鏡下で取得した細胞展開画像を図9(c)に示す。
実施例1において、プリズムシートの代わりに、溝のないスライドガラス(松浪硝子(株)製の「大型スライド白縁磨 No.1」)を用いた以外は実施例1と同様にして細胞を展開した。顕微鏡下で取得した細胞展開画像を図9(d)に示す。
これに対して比較例1に相当する図9(d)では、細胞が一部に偏っており、また細胞同士が密になってしまっていることが確認された。
がん患者から採血された末梢血を用い、これを本発明の細胞平面展開デバイス10上に展開し、末梢血中の種々の細胞の検出、特には血液循環がん細胞(CTC)の検出を行った。
12・・・本体部
12A〜12D・・・分割板状体
14・・・細胞展開部
16・・・溝
16a〜16d・・・溝
18・・・溝群
18A〜18D・・・溝群
20・・・一方側
22・・・他方側
30・・・細胞懸濁液
30A〜30C・・・細胞
40・・・傾斜面
50・・・開口部
52・・・底部
54・・・山
60・・・目的細胞
70・・・非目的細胞
T・・・溝の最大幅
H・・・溝深さ
100・・・細胞処理デバイス
102・・・流路部材
104・・・溝
106・・・底面
110・・・一方側
112・・・他方側
150・・・細胞懸濁液
150A・・赤血球
150B・・組織由来幹細胞
200・・・細胞処理デバイス
202・・・柱
204・・・部材
206・・・部材
208・・・容器
210・・・一方側
212・・・他方側
214・・・入口
250A〜250C・・・細胞
300・・・スリット部材
301・・・第1面
302・・・第2面
310・・・貫通孔
312・・・テーパー部
g・・・がん細胞
t・・・厚み
dt・・・深さ
Wte・・・幅
Claims (19)
- 細胞懸濁液に含まれる目的細胞を平面状に展開することができる細胞平面展開デバイスであって、
前記細胞平面展開デバイスが、
上面に細胞展開部を有する板状の本体部から構成されており、
前記本体部の細胞展開部には、
前記本体部の一方側から他方側に向かって複数の溝が列状に並設されるとともに、前記複数の溝は、溝幅が異なる複数の溝群からなり、
前記複数の溝群のうちの少なくとも1つの溝群において、
溝の開口部上面の最大幅は、前記目的細胞の直径と等しいか、または前記目的細胞の直径より大きく、かつ、
溝は、その深さ方向の途中で前記目的細胞を保持し得るように、その深さ方向において前記目的細胞の直径よりも小さい幅を有し、
溝の底部に、幅1μm以下のスリットもしくは直径1μm以下の孔を有するか、または、それらを有さないことを特徴とする細胞平面展開デバイス。 - 前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝が、その底部に、0.4μm以上1μm以下の幅のスリットを有することを特徴とする請求項1に記載の細胞平面展開デバイス。
- 前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝の底部は、閉口であることを特徴とする請求項1に記載の細胞平面展開デバイス。
- 前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝が傾斜面を有するテーパード型であり、傾斜角度が45度以下であることを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の細胞平面展開デバイス。
- 前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝の深さが目的細胞の直径の2倍より小さいことを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載の細胞平面展開デバイス。
- 前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝の表面は、水に対する接触角が、20度以下であることを特徴とする請求項1〜5のいずれかに記載の細胞平面展開デバイス。
- 前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群において、溝の開口部上面から20μm以上100μm以下の高さに天井構造を有することを特徴とする請求項1〜6のいずれかに記載の細胞平面展開デバイス。
- 前記複数の溝群が、
前記溝群ごとに同じ溝幅の溝が並設されてなることを特徴とする請求項1〜7に記載の細胞平面展開デバイス。 - 前記複数の溝群のうちの前記少なくとも1つの溝群以外の他の溝群は、溝の開口部上面の最大幅が、前記目的細胞の直径よりも小さいことを特徴とする請求項1〜8に記載の細胞平面展開デバイス。
- 前記複数の溝群が、
前記本体部の一方側から他方側に向かうにしたがって、前記溝群ごとに溝幅が漸次大きくなるように設定されていることを特徴とする請求項1〜9に記載の細胞平面展開デバイス。 - 前記複数の溝群が、
前記溝幅が大きくなるに従って、漸次溝深さが深くなるよう構成されていることを特徴とする請求項1〜10のいずれかに記載の細胞平面展開デバイス。 - 前記溝幅が1〜100μmの範囲内であるとともに、前記溝深さが1〜100μmの範囲内であることを特徴とする請求項11に記載の細胞平面展開デバイス。
- 前記溝が、断面V字状であることを特徴とする請求項1〜12のいずれかに記載の細胞平面展開デバイス。
- 前記本体部が、複数の分割板状体を並設してなることを特徴とする請求項1〜13のいずれかに記載の細胞平面展開デバイス。
- 前記複数の分割板状体が、
前記分割板状体ごとに、同じ溝幅及び同じ溝深さの複数の溝からなる1種類の溝群が並設されてなることを特徴とする請求項14に記載の細胞平面展開デバイス。 - 前記細胞懸濁液が、生体試料であることを特徴とする請求項1〜15のいずれかに記載の細胞平面展開デバイス。
- 請求項1〜16のいずれかに記載の細胞平面展開デバイスの溝に、前記細胞懸濁液を接触させる工程を含むことを特徴とする細胞展開方法。
- 前記細胞懸濁液を接触させる工程において、
前記細胞平面展開デバイスの前記本体部の一方側から他方側に向かって前記複数の溝群を横切るように前記細胞懸濁液を前記複数の溝群の溝内に供給し、前記細胞懸濁液中の細胞を小さい細胞から大きい細胞の順に前記複数の溝群の溝内に整列させて展開する工程と、
を少なくとも有することを特徴とする請求項17に記載の細胞展開方法。 - 前記細胞懸濁液中の細胞を小さい細胞から大きい細胞の順に前記複数の溝群の溝内に整列させて展開する工程の後、
さらに前記平面状に展開された細胞を観察手段で観察する工程と、
を有することを特徴とする請求項18に記載の細胞展開方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011178897 | 2011-08-18 | ||
JP2011178897 | 2011-08-18 | ||
JP2011182664 | 2011-08-24 | ||
JP2011182664 | 2011-08-24 | ||
PCT/JP2012/070497 WO2013024817A1 (ja) | 2011-08-18 | 2012-08-10 | 細胞平面展開デバイスおよびこれを用いた細胞展開方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2013024817A1 JPWO2013024817A1 (ja) | 2015-03-05 |
JP5929915B2 true JP5929915B2 (ja) | 2016-06-08 |
Family
ID=47715135
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013529006A Expired - Fee Related JP5929915B2 (ja) | 2011-08-18 | 2012-08-10 | 細胞平面展開デバイスおよびこれを用いた細胞展開方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5929915B2 (ja) |
WO (1) | WO2013024817A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015093420A1 (ja) * | 2013-12-16 | 2015-06-25 | コニカミノルタ株式会社 | 細胞検出方法および細胞検出装置 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060051265A1 (en) * | 2004-09-08 | 2006-03-09 | Health Research, Inc. | Apparatus and method for sorting microstructures in a fluid medium |
JP2008212022A (ja) * | 2007-03-01 | 2008-09-18 | Olympus Corp | 組織由来幹細胞の分離装置および分離方法 |
JP4849278B2 (ja) * | 2009-03-27 | 2012-01-11 | セイコーエプソン株式会社 | 細胞処理デバイス、細胞処理カートリッジおよび体液処理システム |
JP5141919B2 (ja) * | 2009-09-08 | 2013-02-13 | セイコーエプソン株式会社 | 細胞処理デバイス、細胞処理カートリッジおよび体液処理システム |
US9448163B2 (en) * | 2010-03-05 | 2016-09-20 | Konica Minolta Holdings, Inc. | Method for detecting rare cell on observation region |
-
2012
- 2012-08-10 WO PCT/JP2012/070497 patent/WO2013024817A1/ja active Application Filing
- 2012-08-10 JP JP2013529006A patent/JP5929915B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2013024817A1 (ja) | 2015-03-05 |
WO2013024817A1 (ja) | 2013-02-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6138874B2 (ja) | 細胞を検出および単離するためのマイクロ流体分取装置 | |
JP7453653B2 (ja) | 粒子分離システムおよび方法 | |
KR100746431B1 (ko) | 셀 소터 칩 | |
US20200238286A1 (en) | Chip for separating and capturing cell and application of chip in tumor cell sorting thereof | |
EP2710139B2 (en) | Analysis and sorting of motile cells | |
US20180299425A1 (en) | Methods and Apparatus for Segregation of Particles | |
US11666915B2 (en) | Cell classification chip | |
US8693762B2 (en) | Inertial particle focusing flow cytometer | |
CN105960463A (zh) | 用于***分选的***和方法 | |
US10697964B2 (en) | Liquid biopsy detection of leukemia using closed-loop microfluidics | |
JP5580117B2 (ja) | 細胞分析装置 | |
US20150337355A1 (en) | Cell-spreading device and method for detecting rare cell | |
AU2010246381A1 (en) | Methods and apparatus for segregation of particles | |
US20220011296A1 (en) | Determining treatment response in single cells | |
JP6582486B2 (ja) | 血液中の稀少細胞検出方法 | |
JP5929915B2 (ja) | 細胞平面展開デバイスおよびこれを用いた細胞展開方法 | |
US9975125B2 (en) | Microsieve diagnostic device in the isolation and analysis of single cells | |
TWM583456U (zh) | 具有珠體繫留結構的微流道晶片及微流道結構 | |
JP2014226065A (ja) | 微粒子分離用マイクロ流路チップ、移流集積ユニット、微粒子分離用システム及び微粒子分離方法 | |
TWM583455U (zh) | 具有增阻區段的微流道晶片及微流道結構 | |
JP5861370B2 (ja) | 細胞展開デバイスおよび細胞展開方法、ならびに細胞観察システム | |
TWM581591U (zh) | 具有小孔徑緩流區段的微流道晶片及微流道結構 | |
TWM583855U (zh) | 具有不平整結構的微流道晶片及微流道結構 | |
JP2014183854A (ja) | 細胞分析装置 | |
Li et al. | NOVEL METHODS FOR CHARACTERIZING AND SORTING SINGLE STEM CELLS FROM THEIR TISSUE NICHES |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20141211 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20151215 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160210 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160405 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160418 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5929915 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |