JP5861182B2 - Flavanol derivative-acetone derivative adduct, production method thereof, amyloid β protein aggregation inhibitor and Alzheimer preventive or therapeutic agent using the same - Google Patents
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Description
本発明は、新規なフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物に関する。詳しくは、優れたアミロイドβ蛋白凝集阻害作用を有するフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物に関するものである。 The present invention relates to a novel flavanol derivative-acetone derivative adduct. Specifically, the present invention relates to a flavanol derivative-acetone derivative adduct having an excellent amyloid β protein aggregation inhibitory action.
アルツハイマー病は、認知機能低下、人格の変化を主な症状とする認知症の一種であり、記憶障害、見当識障害、学習障害、注意障害、空間認知機能や問題解決能力の障害等の認知障害が徐々に進行して生活に支障を来すようなり、重症度が増して高度になると摂食や着替え、意思疎通等もできなくなり最終的には寝たきりになる。 Alzheimer's disease is a type of dementia whose main symptoms are cognitive decline and personality changes, such as memory impairment, disorientation, learning disabilities, attention disabilities, spatial cognitive impairment, and problem-solving disabilities. Gradually progresses and interferes with daily life. When the severity increases and the patient becomes more advanced, they cannot eat, change clothes or communicate, and eventually become bedridden.
現在、アルツハイマー病の治療薬としては、患者の神経細胞障害の軽減を目的とするコリンエステラーゼ阻害薬やＮＭＤＡ受容体拮抗薬が用いられている。また、アルツハイマーの主要な病理変化は老人斑の生成であるが、近年、その構成蛋白質であるアミロイドβ蛋白の生成に関与するβ−及びγ−セクレターゼ等を標的とする薬剤の研究が行われている。 Currently, cholinesterase inhibitors and NMDA receptor antagonists are used as therapeutic agents for Alzheimer's disease for the purpose of reducing neuronal damage in patients. Alzheimer's major pathological change is the formation of senile plaques. In recent years, research has been conducted on drugs targeting β- and γ-secretases involved in the production of amyloid β protein, which is a constituent protein. Yes.
一方、カテキン類は、茶の渋み成分に含まれるフラボノイドの一種であり、血圧上昇抑制作用、血中コレステロール調節作用、血糖値調節作用、抗酸化作用等の様々な生理活性を有していることが知られている。かかるフラボノイド及びその誘導体については、Ｃ−８位にプレニル基が導入されたプレニルフラボノールがセクレターゼやアルドースレダクターゼ等の酵素阻害活性を有することが知られているが（非特許文献１参照）、脳内でのアミロイドβ蛋白の凝集を阻害する作用については知られていない。 On the other hand, catechins are a kind of flavonoids contained in the astringent components of tea and have various physiological activities such as blood pressure elevation inhibiting action, blood cholesterol regulating action, blood sugar level regulating action, antioxidant action, etc. It has been known. Regarding such flavonoids and derivatives thereof, prenyl flavonols having a prenyl group introduced at the C-8 position are known to have enzyme inhibitory activities such as secretase and aldose reductase (see Non-Patent Document 1). It is not known about the action of inhibiting the aggregation of amyloid β protein.
本発明は上記従来技術の有する問題点に鑑みなされたものであり、その目的とするところは、新規なフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物を提供することにある。 The present invention has been made in view of the above-described problems of the prior art, and an object thereof is to provide a novel flavanol derivative-acetone derivative adduct.
本発明の他の目的は、脳内におけるアミロイドβ蛋白の凝集を顕著に阻害し得る新規なアルツハイマー病予防又は治療剤を提供することにある。 Another object of the present invention is to provide a novel agent for preventing or treating Alzheimer's disease that can remarkably inhibit the aggregation of amyloid β protein in the brain.
本発明の上記目的は、下記の手段によって達成される。 The above object of the present invention is achieved by the following means.
（１）即ち、本発明は、一般式（Ｉ）
（２）本発明はまた、前記一般式（Ｉ）のＲ１〜Ｒ８がそれぞれ独立して水素原子又は置換基を有してもよい水酸基であり、Ｒ９及びＲ１０が水素原子であり、結合（ａ）が単結合である、（１）に記載のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物である。 (2) In the present invention, R 1 to R 8 in the general formula (I) are each independently a hydrogen atom or a hydroxyl group which may have a substituent, and R 9 and R 10 are a hydrogen atom. The flavanol derivative-acetone derivative adduct according to (1), wherein the bond (a) is a single bond.
（３）本発明はまた、前記一般式（II）の結合（ｂ）及び（ｄ）が単結合であり、結合（ｃ）が二重結合である、（１）又は（２）に記載のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物である。 (3) The present invention also relates to (1) or (2), wherein the bonds (b) and (d) in the general formula (II) are single bonds and the bond (c) is a double bond. A flavanol derivative-acetone derivative adduct.
（４）本発明はまた、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン及びエピガロカテキンからなる群より選択されるカテキン類又はその誘導体と、プレニルアセトン又はその誘導体とを反応させて得られることを特徴とする、（１）〜（３）の何れか１つに記載のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物である。 (4) The present invention is also obtained by reacting catechins selected from the group consisting of catechin, epicatechin, gallocatechin and epigallocatechin or a derivative thereof with prenylacetone or a derivative thereof, The flavanol derivative-acetone derivative adduct according to any one of (1) to (3).
（５）本発明はまた、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル５−（４−メチル ３−ペンテニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（Ｅ）−４，８−ジメチルノナ−３，７−ジエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ）−４，８，１２−トリメチルトリデカ−３，７，１１−トリエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール又は６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ，１１Ｅ）−４，８，１２，１６−テトラメチルヘプタデカ−３，７，１１，１５−テトラエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロールである、（１）〜（４）の何れか１つに記載のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物である。 (5) The present invention also provides 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5- (4-methyl 3-pentenyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran -2,3,8,10-tetrol, 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((E) -4,8-dimethylnona-3,7-dienyl) [2] Benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol, 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E) -4 , 8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trienyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol or 6aS, 12aR-5,6a , 7, 1 a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E, 11E) -4,8,12,16-tetramethylheptadeca-3,7,11,15-tetraenyl) [2] benzopyrano [4,3- b] [1] The flavanol derivative-acetone derivative adduct according to any one of (1) to (4), which is benzopyran-2,3,8,10-tetrol.
（６）さらに、本発明は、一般式（III）
（７）本発明はまた、前記一般式（III）のＲ１〜Ｒ８がそれぞれ独立して水素原子又は置換基を有してもよい水酸基であり、Ｒ９及びＲ１０が水素原子であり、結合（ａ）が単結合である、（６）に記載のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物の製造方法である。 (7) In the present invention, R 1 to R 8 in the general formula (III) are each independently a hydrogen atom or a hydroxyl group which may have a substituent, and R 9 and R 10 are a hydrogen atom. The method for producing an flavanol derivative-acetone derivative adduct according to (6), wherein the bond (a) is a single bond.
（８）本発明はまた、前記一般式（II）の結合（ｂ）及び（ｄ）が単結合であり、結合（ｃ）が二重結合である、（６）又は（７）に記載のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物の製造方法である。 (8) The present invention also relates to (6) or (7), wherein the bonds (b) and (d) in the general formula (II) are single bonds and the bond (c) is a double bond. It is a manufacturing method of a flavanol derivative-acetone derivative adduct.
（９）本発明はまた、前記フラバノール誘導体は、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン及びエピガロカテキンからなる群より選択されるカテキン類又はその誘導体である、（６）〜（８）の何れか１つに記載のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物の製造方法である。 (9) In the present invention, the flavanol derivative is a catechin selected from the group consisting of catechin, epicatechin, gallocatechin and epigallocatechin, or a derivative thereof, any one of (6) to (8) The flavanol derivative-acetone derivative adduct described in 1. above.
（１０）本発明はまた、前記アセトン誘導体は、プレニルアセトン又はその誘導体である、（６）〜（９）の何れか１つに記載のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物の製造方法である。 (10) The present invention is also the method for producing a flavanol derivative-acetone derivative adduct according to any one of (6) to (9), wherein the acetone derivative is prenylacetone or a derivative thereof.
（１１）さらに、本発明は、一般式（Ｉ）
（１２）本発明はまた、前記フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物は、前記一般式（Ｉ）のＲ１〜Ｒ８がそれぞれ独立して水素原子又は置換基を有してもよい水酸基であり、Ｒ９及びＲ１０が水素原子であり、結合（ａ）が単結合である、（１１）に記載のアミロイドβ蛋白凝集阻害剤である。 (12) In the present invention, the flavanol derivative-acetone derivative adduct is a hydroxyl group in which R 1 to R 8 in the general formula (I) may independently have a hydrogen atom or a substituent, The amyloid β protein aggregation inhibitor according to (11), wherein R 9 and R 10 are hydrogen atoms, and the bond (a) is a single bond.
（１３）本発明はまた、前記フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物は、前記一般式（II）の結合（ｂ）及び（ｄ）が単結合であり、結合（ｃ）が二重結合である、（１１）又は（１２）に記載のアミロイドβ蛋白凝集阻害剤である。 (13) The present invention is also directed to the flavanol derivative-acetone derivative adduct, wherein the bonds (b) and (d) of the general formula (II) are single bonds, and the bond (c) is a double bond. The amyloid β protein aggregation inhibitor according to (11) or (12).
（１４）本発明はまた、前記フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物は、カテキン、エピカテキン、ガロカテキン及びエピガロカテキンからなる群より選択されるカテキン類又はその誘導体と、プレニルアセトン又はその誘導体とを反応させて得られることを特徴とする、（１１）〜（１３）の何れか１つに記載のアミロイドβ蛋白凝集阻害剤である。 (14) In the present invention, the flavanol derivative-acetone derivative adduct is obtained by reacting catechins selected from the group consisting of catechin, epicatechin, gallocatechin, and epigallocatechin or a derivative thereof with prenylacetone or a derivative thereof. It is obtained by making it an amyloid beta protein aggregation inhibitor as described in any one of (11)-(13) characterized by the above-mentioned.
（１５）本発明はまた、前記フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物は、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル５−（４−メチル ３−ペンテニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（Ｅ）−４，８−ジメチルノナ−３，７−ジエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ）−４，８，１２−トリメチルトリデカ−３，７，１１−トリエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール又は６ａＳ，１２ａＲ−５,６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ，１１Ｅ）−４，８，１２，１６−テトラメチルヘプタデカ−３，７，１１，１５−テトラエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロールである、（１１）〜（１４）の何れか１つに記載のアミロイドβ蛋白凝集阻害剤である。 (15) The present invention also provides that the flavanol derivative-acetone derivative adduct is 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5- (4-methyl 3-pentenyl) [2] benzopyrano [ 4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol, 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((E) -4,8-dimethylnona -3,7-dienyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol, 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E) -4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trienyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10 − Trol or 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E, 11E) -4,8,12,16-tetramethylheptadeca-3,7,11,15 -Tetraenyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol, the amyloid β protein aggregation according to any one of (11) to (14) An inhibitor .
（１６）さらに、本発明は、（１１）〜（１５）の何れか１つに記載のアミロイドβ蛋白凝集阻害剤を含むアルツハイマー病予防又は治療剤である。 (16) Furthermore, the present invention is an agent for preventing or treating Alzheimer's disease comprising the amyloid β protein aggregation inhibitor according to any one of (11) to (15).
本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物は、脳内に生成するアミロイドβ蛋白の凝集を阻害するので、アミロイドβ蛋白の凝集による老人斑の生成を顕著に抑制することができる。 Since the flavanol derivative-acetone derivative adduct of the present invention inhibits aggregation of amyloid β protein produced in the brain, it can remarkably suppress the generation of senile plaques due to aggregation of amyloid β protein.
また、本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物は、優れたラジカル消去能を有するので、老人斑から発生する活性酸素をも顕著に消去することができる。 Moreover, since the flavanol derivative-acetone derivative adduct of the present invention has an excellent radical scavenging ability, it can remarkably erase active oxygen generated from senile plaques.
さらに、本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物は、脳血液関門透過性に優れるので、経口剤又は注射剤等による全身投与でも容易に脳内に達することができる。 Furthermore, since the flavanol derivative-acetone derivative adduct of the present invention is excellent in the permeability to the brain blood barrier, it can easily reach the brain even by systemic administration by oral or injection.
従って、発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物をアルツハイマー病予防又は治療剤として利用した場合、アルツハイマー病の発症及び進行を顕著に抑制し又は遅延させることができる。 Therefore, when the flavanol derivative-acetone derivative adduct of the invention is used as an agent for preventing or treating Alzheimer's disease, the onset and progression of Alzheimer's disease can be remarkably suppressed or delayed.
本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（以下「フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）」という）は、下記一般式（Ｉ）
本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）において、Ｒ１〜Ｒ１０の置換基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロプロピル基、シクロブチル基等の炭素数１〜５の直鎖状、分岐状又は環状のアルキル基、置換基を有してもよい水酸基、アミノ基若しくはチオール基等が挙げられる。 In the flavanol derivative-acetone derivative adduct (I) of the present invention, the substituents for R 1 to R 10 include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, sec-butyl, tert- Examples thereof include a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 5 carbon atoms such as a butyl group, a cyclopropyl group and a cyclobutyl group, a hydroxyl group which may have a substituent, an amino group or a thiol group.
また、Ｒ１３及びＲ１４のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロプロピル基、シクロブチル基等の炭素数１〜５の直鎖状、分岐状又は環状のアルキル基が挙げられる。 In addition, examples of the alkyl group of R 13 and R 14 include carbon numbers such as methyl group, ethyl group, propyl group, isopropyl group, n-butyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, cyclopropyl group, and cyclobutyl group. Examples include 1 to 5 linear, branched or cyclic alkyl groups.
本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）は、下記一般式（III）
一般式（IV）
本発明で利用されるフラバノール誘導体（III）は、上記一般式（III）で示されるものであれば特に限定されるものではないが、好ましくは、Ｒ１〜Ｒ８がそれぞれ独立して水素原子又は置換基を有してもよい水酸基であり、Ｒ９及びＲ１０が水素原子であり、結合（ａ）が単結合であるものがよく、更に好ましくは、カテキン類又はその誘導体がよく、特に好ましくは、それぞれ下記式（Ｖ）〜（VIII）で示されるカテキン、エピカテキン、ガロカテキン若しくはエピガロカテキン又はそれらの誘導体がよい。
また、本発明で利用されるアセトン誘導体（IV）は、上記一般式（IV）で示されるものであれば特に限定されるものではないが、好ましくは、上記一般式（II）の結合（ｂ）及び（ｄ）が単結合であり、結合（ｃ）が二重結合であるものがよく、特に好ましくは、ジメチルアリル基（ｎ＝１）、ゲラニル基（ｎ＝２）、ファルネシル基（ｎ＝３）、ゲラニルゲラニル基（ｎ＝４）等のプレニル基を有するプレニルアセトン又はその誘導体がよい。 Further, the acetone derivative (IV) used in the present invention is not particularly limited as long as it is represented by the above general formula (IV), but preferably the bond (b) of the above general formula (II) ) And (d) are single bonds and the bond (c) is preferably a double bond, and particularly preferably a dimethylallyl group (n = 1), a geranyl group (n = 2), a farnesyl group (n = 3), prenylacetone having a prenyl group such as geranylgeranyl group (n = 4) or a derivative thereof is preferable.
本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）の製造方法について具体的に説明すれば、まず、フラバノール誘導体（III）を、例えば、ＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテル等の適切な溶媒に溶解させ、攪拌下-5〜-30℃でアセトン誘導体（IV）を滴下し、1〜24時間反応させた後、例えば、水又は炭酸水素ナトリウム等の弱塩基性物質溶液を添加して反応を停止させる。得られた反応混合物を、酢酸エチル、ジエチルエーテル等の有機溶媒により抽出し、水洗した後溶媒留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー等により精製して目的物を得る。 The production method of the flavanol derivative-acetone derivative adduct (I) of the present invention will be specifically described. First, the flavanol derivative (III) is dissolved in an appropriate solvent such as THF, dioxane, diethyl ether, and the like. Acetone derivative (IV) is added dropwise at −5 to −30 ° C. with stirring and reacted for 1 to 24 hours, and then the reaction is stopped by adding a weakly basic substance solution such as water or sodium hydrogencarbonate. The obtained reaction mixture is extracted with an organic solvent such as ethyl acetate and diethyl ether, washed with water, evaporated to remove the solvent, and purified by silica gel column chromatography to obtain the desired product.
このようにして得られる本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）の具体例としては、例えば、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（４−メチル ３−ペンテニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（Ｅ）−４，８−ジメチルノナ−３，７−ジエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ）−４，８，１２−トリメチルトリデカ−３，７，１１−トリエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ，１１Ｅ）−４，８，１２，１６−テトラメチルヘプタデカ−３，７，１１，１５−テトラエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＲ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（４−メチル ３−ペンテニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＲ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（Ｅ）−４，８−ジメチルノナ−３，７−ジエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＲ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ）−４，８，１２−トリメチルトリデカ−３，７，１１−トリエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＲ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ，１１Ｅ）−４，８，１２，１６−テトラメチルヘプタデカ−３，７，１１，１５−テトラエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，８，１０−テトロール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（４−メチル ３−ペンテニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２,３，４，８，１０−ペントール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（Ｅ）−４，８−ジメチルノナ−３，７−ジエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，４，８，１０−ペントール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ）−４，８，１２−トリメチルトリデカ−３，７，１１−トリエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，４，８，１０−ペントール、６ａＳ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ，１１Ｅ）−４，８，１２，１６−テトラメチルヘプタデカ−３，７，１１，１５−テトラエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，４，８，１０−ペントール、６ａＲ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（４−メチル ３−ペンテニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，４，８，１０−ペントール、６ａＲ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（Ｅ）−４，８−ジメチルノナ−３，７−ジエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，４，８，１０−ペントール、６ａＲ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ）−４，８，１２−トリメチルトリデカ−３，７，１１−トリエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，４，８，１０−ペントール、６ａＲ，１２ａＲ−５，６ａ，７，１２ａ−テトラヒドロ−５−メチル ５−（（３Ｅ，７Ｅ，１１Ｅ）−４，８，１２，１６−テトラメチルヘプタデカ−３，７，１１，１５−テトラエニル）［２］ベンゾピラノ［４，３−ｂ］［１］ベンゾピラン−２，３，４，８，１０−ペントール等が挙げられる。 Specific examples of the thus obtained flavanol derivative-acetone derivative adduct (I) of the present invention include, for example, 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5- (4-methyl) 3-pentenyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol, 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5- ( (E) -4,8-dimethylnona-3,7-dienyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol, 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E) -4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trienyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [ Benzopyran-2,3,8,10-tetrol, 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E, 11E) -4,8,12,16-tetra Methylheptadeca-3,7,11,15-tetraenyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol, 6aR, 12aR-5, 6a, 7, 12a-tetrahydro-5-methyl 5- (4-methyl 3-pentenyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol, 6aR, 12aR-5,6a , 7,12a-Tetrahydro-5-methyl 5-((E) -4,8-dimethylnona-3,7-dienyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8 , 0-tetrol, 6aR, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E) -4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trienyl) [2 Benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol, 6aR, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E, 11E ) -4,8,12,16-tetramethylheptadeca-3,7,11,15-tetraenyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,8,10-tetrol 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5- (4-methyl 3-pentenyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,4, 8 10-pentol, 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((E) -4,8-dimethylnona-3,7-dienyl) [2] benzopyrano [4,3-b ] [1] Benzopyran-2,3,4,8,10-pentol, 6aS, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E) -4,8,12- Trimethyltrideca-3,7,11-trienyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,4,8,10-pentol, 6aS, 12aR-5,6a, 7, 12a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E, 11E) -4,8,12,16-tetramethylheptadeca-3,7,11,15-tetraenyl) [2] benzopyrano [4,3- b] [1 Benzopyran-2,3,4,8,10-pentol, 6aR, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5- (4-methyl 3-pentenyl) [2] benzopyrano [4,3 -B] [1] benzopyran-2,3,4,8,10-pentol, 6aR, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5-methyl 5-((E) -4,8-dimethylnon- 3,7-dienyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,4,8,10-pentol, 6aR, 12aR-5,6a, 7,12a-tetrahydro-5 Methyl 5-((3E, 7E) -4,8,12-trimethyltrideca-3,7,11-trienyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,4 8,10-pen 6aR, 12aR-5, 6a, 7, 12a-tetrahydro-5-methyl 5-((3E, 7E, 11E) -4,8,12,16-tetramethylheptadeca-3,7,11, 15-tetraenyl) [2] benzopyrano [4,3-b] [1] benzopyran-2,3,4,8,10-pentol and the like.
本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）は、脳内に生成するアミロイドβ蛋白の凝集を阻害し、アミロイドβ蛋白の凝集による老人斑の生成を顕著に抑制するとともに、老人斑から発生する活性酸素をも消去するので、アミロイドβ蛋白凝集阻害剤及びアルツハイマー病予防又は治療剤として利用することができる。 The flavanol derivative-acetone derivative adduct (I) of the present invention inhibits the aggregation of amyloid β protein produced in the brain, remarkably suppresses the production of senile plaques due to the aggregation of amyloid β protein, and is generated from senile plaques Since the active oxygen is also eliminated, it can be used as an amyloid β protein aggregation inhibitor and an Alzheimer's disease preventive or therapeutic agent.
本発明のアミロイドβ蛋白凝集阻害剤等は、上記フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）の有効量を単体で、または錠剤、丸剤、散剤、粉剤、顆粒剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤、乳剤、カプセル剤等として患者に経口投与することができる。また、注射剤として静脈内、筋肉内、皮内、皮下、腹腔内、動脈内、脊髄腔内等に投与することができる。上述したうち、好ましい製剤形態や投与形態等は、患者の年齢、性別、体質、症状、処置時期等に応じて、医師によって適宜選択される。 The amyloid β protein aggregation inhibitor of the present invention is an effective amount of the above flavanol derivative-acetone derivative adduct (I) alone, or a tablet, pill, powder, powder, granule, syrup, liquid, suspension. It can be orally administered to a patient as an agent, emulsion, capsule or the like. Moreover, it can be administered as an injection intravenously, intramuscularly, intradermally, subcutaneously, intraperitoneally, intraarterially, intrathecally, or the like. Among the above-mentioned, a preferable formulation form, administration form, and the like are appropriately selected by a doctor according to the patient's age, sex, constitution, symptoms, treatment timing, and the like.
本剤を錠剤、丸剤、散剤、粉剤、顆粒剤等の固形製剤とする場合には、上記フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）を、常法に従って適当な添加剤、例えば、乳糖、ショ糖、マンニット、トウモロコシデンプン、合成もしくは天然ガム、結晶セルロース等の賦形剤、デンプン、セルロース誘導体、アラビアゴム、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボシキメチルセルーロースカルシウム、カルボシキメチルセルーロースナトリウム、デンプン、コーンスターチ、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム等の滑沢剤、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム等の充填剤または希釈剤等と適宜混合して製造することができる。錠剤等は、必要に応じて適当な被覆用基剤を用いて、糖衣、ゼラチン、腸溶被覆、フイルムコーティング等を施しても良い。 When this preparation is made into a solid preparation such as tablets, pills, powders, powders, granules, etc., the above flavanol derivative-acetone derivative adduct (I) is added to an appropriate additive such as lactose, sucrose according to a conventional method. Sugar, mannitol, corn starch, synthetic or natural gums, excipients such as crystalline cellulose, starch, cellulose derivatives, binders such as gum arabic, gelatin, polyvinylpyrrolidone, carboxymethyl cellulose calcium, carboxymethyl cellulose Mix appropriately with disintegrants such as sodium, starch, corn starch, sodium alginate, lubricants such as talc, magnesium stearate, sodium stearate, fillers or diluents such as calcium carbonate, sodium carbonate, calcium phosphate, sodium phosphate Can be manufactured. Tablets and the like may be coated with sugar coating, gelatin, enteric coating, film coating, etc. using an appropriate coating base as necessary.
本剤を注射剤、点眼剤、点鼻剤、吸入剤、噴霧剤、ローション剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の液状製剤とする場合には、上記フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）を、精製水、リン酸緩衝液等の適当な緩衝液、生理的食塩水、リンゲル溶液、ロック溶液等の生理的塩類溶液、カカオバター、ゴマ油、オリーブ油等の植物油、鉱油、高級アルコール、高級脂肪酸、エタノール等の有機溶媒等に溶解して、必要に応じてコレステロール等の乳化剤、アラビアゴム等の懸濁剤、分散助剤、浸潤剤、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油系、ポリエチレングリコール系等の界面活性剤、リン酸ナトリウム等の溶解補助剤、糖、糖アルコール、アルブミン等の安定化剤、パラベン等の保存剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖、グリセリン等の等張化剤、緩衝剤、無痛化剤、吸着防止剤、保湿剤、酸化防止剤、着色剤、甘味料、フレーバー、芳香物質等を適宜添加することにより、滅菌された水溶液、非水溶液、懸濁液、リポソームまたはエマルジョン等として調整できる。この際、注射剤は、生理学的なｐＨ、好ましくは６〜８の範囲内のｐＨを有することが好ましい。 When the preparation is a liquid preparation such as injection, eye drop, nasal drop, inhalant, spray, lotion, syrup, solution, suspension, emulsion, etc., the above flavanol derivative-acetone derivative adduct (I) purified water, suitable buffer solution such as phosphate buffer, physiological saline solution, physiological salt solution such as Ringer solution, lock solution, vegetable oil such as cacao butter, sesame oil, olive oil, mineral oil, higher alcohol , Dissolved in organic solvents such as higher fatty acids and ethanol, emulsifiers such as cholesterol, suspending agents such as gum arabic, dispersion aids, wetting agents, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polyethylene glycol Surfactants such as sodium phosphate, solubilizers such as sodium phosphate, stabilizers such as sugar, sugar alcohol, albumin, preservatives such as parabens, sodium chloride, glucose, glycerin Isotonic agent, buffer, soothing agent, anti-adsorption agent, moisturizer, antioxidant, colorant, sweetener, flavor, fragrance, etc. It can be prepared as a suspension, liposome or emulsion. At this time, the injection preferably has a physiological pH, preferably in the range of 6-8.
本剤を、ローション剤、クリーム剤、軟膏等の半固形製剤とするには、上記フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）を脂肪、脂肪油、ラノリン、ワセリン、パラフィン、蝋、硬膏剤、樹脂、プラスチック、グリコール類、高級アルコール、グリセリン、水、乳化剤、懸濁化剤等と適宜混和することにより製造することができる。 In order to make this preparation into a semi-solid preparation such as a lotion, cream or ointment, the above flavanol derivative-acetone derivative adduct (I) is added to fat, fatty oil, lanolin, petrolatum, paraffin, wax, plaster, resin. It can be produced by appropriately mixing with plastics, glycols, higher alcohols, glycerin, water, emulsifiers, suspending agents and the like.
本発明のアミロイドβ蛋白凝集阻害剤等に含まれる上記フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）の含有量は、投与形態、重篤度や目的とする投与量などによって様々であるが、一般的には、製剤の全重量に対して10〜80・重量％、好ましくは20〜40重量％である。 The content of the flavanol derivative-acetone derivative adduct (I) contained in the amyloid β protein aggregation inhibitor of the present invention varies depending on the dosage form, severity, target dose, etc. Is 10 to 80% by weight, preferably 20 to 40% by weight, based on the total weight of the preparation.
また、本発明のアミロイドβ蛋白凝集阻害剤等の投与量は、患者の年齢、体重及び症状、目的とする投与形態や方法、治療効果、および処置期間等によって異なり、正確な量は医師により決定されるものであるが、通常、上記フラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物（Ｉ）の投与量換算で、成人に対し１日当り、経口投与の場合は10〜500ｍｇを、静脈内投与の場合は0.5〜100ｍｇを、１回または数回に分けて投与する。 The dosage of the amyloid β protein aggregation inhibitor of the present invention varies depending on the age, weight and symptoms of the patient, the intended dosage form and method, therapeutic effect, treatment period, etc., and the exact amount is determined by a doctor. However, in general, the above flavanol derivative-acetone derivative adduct (I) in terms of dose is 10 to 500 mg for adults per day for oral administration, and 0.5 to 0.5 for intravenous administration. 100 mg is administered in one or several divided doses.
次に、本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物及びそれを利用したアミロイドβ蛋白凝集阻害剤等について、実施例を示して更に詳細に説明するが、本発明はかかる実施例に限定されるものではない。 Next, the flavanol derivative-acetone derivative adduct of the present invention and the amyloid β protein aggregation inhibitor using the same will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is limited to such examples. is not.
カテキンゲラニルアセトン付加物の合成Synthesis of catechin geranylacetone adducts
（＋）−カテキン５．００ｇ（１７．２ｍｍｏｌ）を３時間真空ポンプで乾燥後アルゴン置換し、ドライ・テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）１３０ｍｌをゆっくり加え攪拌した。反応容器を−３０℃に冷却し、反応溶液にゲラニルアセトン５．７８ｍｌ（２５．８ｍｍｏｌ）とトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ）３．７４ｍｌ（２０．７ｍｍｏｌ）を添加し、−３０℃で反応を行った。３時間１５分後に薄層クロマトグラフィー（Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ Ｆ２５４，０．２５ｍｍ，ＭＥＲＣＫ，トルエン：アセトン：メタノール＝７：３：１）をしたところ原料が残っていた為、ＴＭＳＯＴｆ１．８７ｍｌ（１０．３ｍｍｏｌ）を追加し、さらに１６時間１５分攪拌した（全反応時間１９時間３０分）。 (+)-Catechin 5.00 g (17.2 mmol) was dried with a vacuum pump for 3 hours and then purged with argon, and 130 ml of dry tetrahydrofuran (THF) was slowly added and stirred. The reaction vessel was cooled to −30 ° C., 5.78 ml (25.8 mmol) of geranyl acetone and 3.74 ml (20.7 mmol) of trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (TMSOTf) were added to the reaction solution, and the reaction was conducted at −30 ° C. went. After 3 hours and 15 minutes, thin layer chromatography (Silica Gel F254, 0.25 mm, MERCK, toluene: acetone: methanol = 7: 3: 1) was followed by TMSOTf 1.87 ml (10.3 mmol) The mixture was further stirred for 16 hours and 15 minutes (total reaction time 19 hours and 30 minutes).
反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止し、氷水にあけて酢酸エチルで３回抽出後、有機層を飽和食塩水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水、溶媒留去後、反応混合物９．４４ｇを得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０，ｓｐｈｅｒｉｃａｌ，６３−２００μＭ，ＭＥＲＣＫ）７００ｇで精製し、トルエン：アセトン：メタノール（７：３：０．２５）溶出部よりカテキンゲラニルアセトン付加物６．８９ｇ（収率８５．７％）を得た。 The reaction mixture was quenched with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, poured into ice water, extracted three times with ethyl acetate, the organic layer was washed three times with saturated brine, dehydrated with anhydrous sodium sulfate, and evaporated. , 9.44 g of reaction mixture was obtained. The residue was purified with 700 g of silica gel column chromatography (Silica Gel 60, chemical, 63-200 μM, MERCK), and 6.89 g of catechingeranyl acetone adduct was added from the eluate of toluene: acetone: methanol (7: 3: 0.25) ( Yield 85.7%) was obtained.
得られたカテキンゲラニルアセトン付加物のＮＭＲスペクトル（Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ ＡＳ−４００）及びＭａｓｓスペクトル（ＪＥＯＬ ＪＭＳ−ＳＸ１０２Ａ，Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｍｏｄｅ，ＥＩ＋）を以下に示した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ） δ：１．３５〜１．６３（ｓ，１２Ｈ），１．８３〜２．１０（ｍ，８Ｈ），２．２９〜２．３５（ｍ，１Ｈ），２．７９〜２．８２（ｍ，１Ｈ），３．６５〜３．７４（ｍ，１Ｈ），４．３４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３６（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０１（ｍ，１Ｈ），５．０３（ｍ，１Ｈ），５．０３（ｍ，１Ｈ），５．１６（ｍ，１Ｈ），５．７９（ｍ，１Ｈ），５．９４（ｍ，１Ｈ），６．４８〜６．５１（ｓ，１Ｈ），６．９１〜６．９２（ｓ，１Ｈ），８．７８〜８．８０（ｓ，１Ｈ），９．０２〜９．０３（ｓ，１Ｈ），９．０３〜９．０５（ｓ，１Ｈ），９．２９〜９．３１（ｓ，１Ｈ）
ＨＲ−ＭＳ ｍ／ｚ：ｃａｌｄ ｆｏｒ Ｃ２８Ｈ３４Ｏ６
［Ｍ＋］：４６６．２３５５ ｆｏｕｎｄ ４６６．２３５３
The NMR spectrum (Varian Mercury AS-400) and Mass spectrum (JEOL JMS-SX102A, Operating Mode, EI +) of the obtained catechin geranylacetone adduct are shown below.
1H NMR (DMSO) δ: 1.35 to 1.63 (s, 12H), 1.83 to 2.10 (m, 8H), 2.29 to 2.35 (m, 1H), 2.79 to 2.82 (m, 1H), 3.65 to 3.74 (m, 1H), 4.34 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.36 (d, J = 9.0 Hz, 1H) ), 4.42 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 5.01 (m, 1H), 5.03 (m, 1H), 5.03 (m, 1H), 5.16 (m, 1H), 5.79 (m, 1H), 5.94 (m, 1H), 6.48 to 6.51 (s, 1H), 6 .91 to 6.92 (s, 1H), 8.78 to 8.80 (s, 1H), 9.02 to 9.03 (s, 1H), 9.03 to 9.05 (s, 1H) , 9.29 to 9.31 (s, 1H)
HR-MS m / z: cald for C 28 H 34 O 6
[M +]: 466.2355 found 466.2353
カテキンゲラニルゲラニルアセトン付加物の合成Synthesis of catechingeranylgeranylacetone adducts
（＋）−カテキン３．６５ｇ（１２．６ｍｍｏｌ）を２時間真空ポンプで乾燥後、アルゴン置換し、ドライＴＨＦ（１００ｍｌ）をゆっくり加え攪拌した。反応容器を−５０℃に冷却し、反応溶液にゲラニルゲラニルアセトン（テプレノン）５．６１ｍｌ（１５．１ｍｍｏｌ）とＴＭＳＯＴｆ２．７３ｍｌ（１５．１ｍｍｏｌ）を添加し、−５０℃で反応を行った。１６時間後に薄層クロマトグラフィー（Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ Ｆ２５４，０．２５ｍｍ，ＭＥＲＣＫ，トルエン：アセトン：メタノール＝７：３：１）をしたところ原料の消失を確認した。 3.65 g (12.6 mmol) of (+)-catechin was dried with a vacuum pump for 2 hours, purged with argon, and slowly added dry THF (100 ml) and stirred. The reaction vessel was cooled to −50 ° C., 5.61 ml (15.1 mmol) of geranylgeranylacetone (teprenone) and 2.73 ml (15.1 mmol) of TMSOTf were added to the reaction solution, and the reaction was performed at −50 ° C. After 16 hours, thin layer chromatography (Silica Gel F254, 0.25 mm, MERCK, toluene: acetone: methanol = 7: 3: 1) was confirmed to confirm the disappearance of the raw materials.
反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて反応を停止し、氷水にあけて酢酸エチルで３回抽出後、有機層を飽和食塩水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水して、溶媒留去後、反応混合物を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０，ｓｐｈｅｒｉｃａｌ，６３−２００μＭ，ＭＥＲＣＫ）６００ｇで精製し、ジクロロメタン：ヘキサン：メｒタノール（７：３：０．６）溶出部よりカテキンゲラニルゲラニルアセトン付加物１２．３ｇ８収率６７．５％）を得た。 The reaction mixture was quenched with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, poured into ice water, extracted three times with ethyl acetate, the organic layer was washed three times with saturated brine, dehydrated with anhydrous sodium sulfate, and the solvent was removed. After leaving, a reaction mixture was obtained. The residue was purified by 600 g of silica gel column chromatography (Silica Gel 60, chemical, 63-200 μM, MERCK), and catechingeranylgeranylacetone adduct from the eluate of dichloromethane: hexane: mertanol (7: 3: 0.6) 12. 3g8 yield 67.5%) was obtained.
得られたカテキンゲラニルゲラニルアセトン付加物のＮＭＲスペクトル（Ｖａｒｉａｎ Ｍｅｒｃｕｒｙ ＡＳ−４００）及びＭａｓｓスペクトル（ＳＨＩＭＡＺＵ ＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｍｏｄｅ， ＥＩ−）を以下に示した。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：１．４３〜２．１７（ｍ，３４Ｈ），２．４５（ｄｄ，Ｊ＝８．０ａｎｄ１５．２Ｈｚ，１Ｈ），２．９６（ｄｄ，Ｊ＝６．０ａｎｄ１５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７９（ｍ，１Ｈ），４．４１（ｍ，１Ｈ），５．０６（ｍ，４Ｈ），５．９４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），５．９６（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），６．５３（ｓ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ）
ＨＲ−ＭＳｍ／ｚ：ｃａｌｄｆｏｒＣ２８Ｈ３４Ｏ６［Ｍ＋］：６０２．３６０７ｆｏｕｎｄ６０１．３５７４
The NMR spectrum (Varian Mercury AS-400) and Mass spectrum (SHIMAZU LCMS-IT-TOF Operating Mode, EI-) of the obtained catechingeranylgeranylacetone adduct were shown below.
1H NMR (CD3OD) δ: 1.43 to 2.17 (m, 34H), 2.45 (dd, J = 8.0 and 15.2 Hz, 1 H), 2.96 (dd, J = 6.0 and 15.6 Hz) , 1H), 3.79 (m, 1H), 4.41 (m, 1H), 5.06 (m, 4H), 5.94 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.96 ( d, J = 1.6 Hz, 1H), 6.53 (s, 1H), 7.04 (s, 1H)
HR-MS m / z: caldfor C28H34O6 [M +]: 602.3607 found 601.3574
チオフラビンＴアッセイ（ＴｈＴ）法によるアミロイドβ（１−４２）に対する凝集阻害活性の評価Evaluation of aggregation inhibitory activity against amyloid β (1-42) by thioflavin T assay (ThT) method
実施例１及び２で得られたカテキンゲラニルアセトン付加物及びカテキンゲラニルゲラニルアセトン付加物のＴｈＴ法によるＡβ４２に対する凝集阻害活性を下記文献に従って評価した。 Aggregation inhibitory activity against Aβ42 by the ThT method of the catechingeranylacetone adducts and catechingeranylgeranylacetone adducts obtained in Examples 1 and 2 was evaluated according to the following literature.
Hironobu Naiki, et al., "Fluorometric determination of amyloid fibrils in vitro using the fluorescent dye, thioflavine T", Analytical Biochemistry, Vol. 177, Issue 2, Pages 244-249, 1989 Hironobu Naiki, et al., "Fluorometric determination of amyloid fibrils in vitro using the fluorescent dye, thioflavine T", Analytical Biochemistry, Vol. 177, Issue 2, Pages 244-249, 1989
Kazuma Murakami, et al., "Neurotoxicity and Physicochemical Properties of Aβ Mutant Peptides from Cerebral Amyloid Angiopathy", THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, Vol. 278, No. 46, Pages 46179-46187, 2003 Kazuma Murakami, et al., "Neurotoxicity and Physicochemical Properties of Aβ Mutant Peptides from Cerebral Amyloid Angiopathy", THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, Vol. 278, No. 46, Pages 46179-46187, 2003
被験化合物を５０％ＤＭＳＯ／０．０２％ＮＨ４ＯＨに溶解させ、２．５ｍＭストック溶液を調製した。Ａβ４２ １ｍｇを０．０２％ＮＨ４ＯＨ ２２１．５μｌに溶解させ、１．０ｍＭストック溶液を調製し、１００ｍＭＮａＣｌを含んだ５０ｍＭＰＢ（ｐＨ７．４）で希釈し、Ａβ４２のみを含む２５μＭ Ａβ４２溶液５００μｌ，ＤＭＳＯ１％（ｖ／ｖ）と、被験化合物を１０μＭ又は５０μＭ含んだ２５μＭ Ａβ４２溶液５００μｌ，ＤＭＳＯ１％（ｖ／ｖ）を２本ずつ調製した。ブランクはＡμ４２を０．０２％ＮＨ４ＯＨで置き換えたものとした。 A test compound was dissolved in 50% DMSO / 0.02% NH4OH to prepare a 2.5 mM stock solution. 1 mg of Aβ42 was dissolved in 221.5 μl of 0.02% NH 4 OH to prepare a 1.0 mM stock solution, diluted with 50 mM MPB (pH 7.4) containing 100 mM NaCl, 500 μl of 25 μM Aβ42 solution containing only Aβ42, 1% DMSO ( v / v) and 25 μM Aβ42 solution 500 μl containing 10 μM or 50 μM of the test compound and DMSO 1% (v / v) were prepared in duplicate. The blank was Aμ42 replaced with 0.02% NH4OH.
調製したサンプルを３７℃でインキュベートし、０、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、２４、４８ｈｒにおいて１０μｌ採取し、あらかじめ調整した５μＭＴｈ−Ｔ／５０ｍＭＧｌｙ−ＮａＯＨ（ｐＨ８．９）１ｍｌに加え攪拌、蛍光光度計（島津分光蛍光光度計 ＲＦ−５３００ＰＣ ｓｅｒｉｅｓ、島津製作所社製）で４３５ｎｍの励起光による４８７ｎｍの蛍光強度を測定した。 The prepared sample was incubated at 37 ° C., and 10 μl was taken at 0, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 24, 48 hr, and 5 μM Th-T / 50 mM Gly-NaOH prepared in advance. (PH 8.9) In addition to 1 ml, stirring, and the fluorescence intensity of 487 nm by excitation light of 435 nm was measured with a fluorometer (Shimadzu spectrofluorometer RF-5300PC series, manufactured by Shimadzu Corporation).
被験化合物の凝集阻害活性の測定結果を表１に示す。なお、比較のため、カテキンゲラニルアセトン付加物、カテキン類原体であるカテキン、エピカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキン及びエピガロカテキンガレート、並びに代表的な抗酸化剤であるミリセチン、ピロガロール、エラグ酸及びα−トコフェロールの測定結果も併せて表１に示した。また、これらの化合物の脳血液関門透過性を下記文献を参考にして算出し、併せて表１に示した。 Table 1 shows the measurement results of the aggregation inhibitory activity of the test compound. For comparison, catechin geranylacetone adducts, catechins, catechins, epicatechin, epicatechin gallate, epigallocatechin and epigallocatechin gallate, and typical antioxidants myricetin, pyrogallol, ellag The measurement results of acid and α-tocopherol are also shown in Table 1. Further, the brain blood barrier permeability of these compounds was calculated with reference to the following literature, and is also shown in Table 1.
Hou.TJ et al., "ADME Evaluation in Drug Discovery. 3. Modeling Blood-Brain Barrier Partitioning Using Simple Molecular Descriptors", J. Chem. Inf. Comput. Sci., 2003, 43, 2137-2152
表１から明らかなとおり、本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物であるカテキンゲラニルアセトン付加物及びカテキンゲラニルゲラニルアセトン付加物は、極めて優れたアミロイドβ蛋白凝集阻害活性を有するとともに、高いラジカル消去活性も備えていることがわかった。また、本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物は、優れた脳血液関門透過性を有しているので、経口剤又は注射剤等による全身投与で脳内に達し、アルツハイマー病に対して優れた予防又は治療効果を奏することが期待される。 As is apparent from Table 1, the catechingeranylacetone adduct and the catechingeranylgeranylacetone adduct, which are the flavanol derivative-acetone derivative adducts of the present invention, have extremely excellent amyloid β protein aggregation inhibitory activity and also have high radical scavenging activity. I found out that I have it. In addition, since the flavanol derivative-acetone derivative adduct of the present invention has excellent cerebral blood barrier permeability, it reaches the brain by systemic administration by oral or injection, and is excellent for Alzheimer's disease. Expected to have a preventive or therapeutic effect.
上述したように、本発明のフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物は、脳内に生成するアミロイドβ蛋白の凝集を阻害し、アミロイドβ蛋白の凝集による老人斑の生成を顕著に抑制するとともに、老人斑から発生する活性酸素をも消去するので、アミロイドβ蛋白凝集阻害剤並びにアルツハイマー病予防又は治療剤として利用した場合極めて有用である。 As described above, the flavanol derivative-acetone derivative adduct of the present invention inhibits the aggregation of amyloid β protein produced in the brain, remarkably suppresses the formation of senile plaques due to the aggregation of amyloid β protein, and Since it also eliminates active oxygen generated from water, it is extremely useful when used as an inhibitor of amyloid β protein aggregation and as a preventive or therapeutic agent for Alzheimer's disease.
Claims (16)
一般式（IV）
を反応させることを特徴とする、一般式（Ｉ）
で示されるフラバノール誘導体−アセトン誘導体付加物の製造方法。 General formula (III)
Formula (IV)
In which general formula (I) is reacted
The manufacturing method of the flavanol derivative-acetone derivative adduct shown by these.
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