JP5848938B2 - 口腔用組成物の製造方法 - Google Patents
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Description
なお、以下では、上記本発明にかかる口腔用組成物の製造方法により製造される口腔用組成物を「本発明にかかる口腔用組成物」または「本発明の口腔用組成物」ということがある。
35%濃度の過酸化水素水17%、ホスリン(大道製薬社製の有機リン酸系キレート剤)0.06%、マクロゴール(三洋化成工業社製の増粘剤)5%、コスメライク(ショ糖脂肪酸エステル、第一工業製薬社製の界面活性剤)5%、イオン交換水72.94%の混合液を原料液とした。
市販の35%濃度の過酸化水素水を水で10倍に希釈することにより、比較例1にかかる組成物を得た。
過炭酸ナトリウム1gを水で100倍に希釈したところ、直ちに発泡することはないが、徐々に発泡し軽微な発熱反応が起こった。
発泡が収まり反応が停止したことを確認し、これを、比較例2にかかる組成物とした。
上述の実施例、比較例の各組成物を検体として、以下の殺菌効果試験、ウィルス不活性化試験、脱臭効果試験を行い、その性能を評価した。
(歯周病菌)
試験液をSCDLP培地で10倍に希釈することにより、検体の影響を受けずに生菌数が測定できることを、予備試験により確認した。
ジンジバリス菌(Porphyromonas gingivalis JCM 8525)を用いた。
菌数測定用培地としては5%馬脱繊維血液加Brucella Agar(BBL製)を用い、その培養条件としては平板塗抹培養法により、35±1℃で5〜7日間の嫌気培養とした。
試験菌株を5%馬脱繊維血液加Brucella Agarで35±1℃、4〜7日間嫌気培養した後、生理食塩水に浮遊させ、菌数が108〜109/mLとなるように調製し、これを試験菌液とした。
実施例1および比較例1,2にかかる各検体10mLに、上記試験菌液0.1mLを接種し、試験液とした。各試験液は、室温で保存して、1,3および5分後にSCDLP培地(日本製薬社製)で直ちに10倍に希釈し、菌数測定用培地を用いて試験液中の生菌数を測定した。
試験液を0.75%チオ硫酸ナトリウム加SCDLP培地で100倍に希釈することにより、検体の影響を受けずに生菌数が測定できることを、予備試験により確認した。
ピロリ菌(Helicobacter pylori JCM 12093)を用いた。
菌数測定用培地としては5%馬脱繊維血液加Blood Agar Base No.2(OXOID製)を用い、その培養条件としては平板塗抹培養法により、37±1℃で7日間の微好気培養とした。
試験菌株を5%馬脱繊維血液加Blood Agar Base No.2で37±1℃、3〜4日間微好気培養した後、生理食塩水に浮遊させ、菌数が108〜109/mLとなるように調製し、これを試験菌液とした。
実施例1にかかる検体10mLに、上記試験菌液0.1mLを接種し、試験液とした。試験液は、36±1℃で保存して、5,10および20分後に0.75%チオ硫酸ナトリウム加SCDLP培地(日本製薬社製)で直ちに100倍に希釈し、菌数測定用培地を用いて試験液中の生菌数を測定した。
(ネコカリシウィルス)
細胞維持培地で作用液を1000倍に希釈することにより、検体の影響を受けずにウィルス感染価が測定できることを、予備試験により確認した。
ネコカリシウィルス(Feline Calicivirus F−9 ATCC VR−782)
CRFK細胞(大日本製薬社製)
(ア)細胞増殖培地
イーグルMEM培地「ニッスイ」(日水製薬社製)に牛胎仔血清を10%加えたものを使用した。
イーグルMEM培地「ニッスイ」(日水製薬社製)に牛胎仔血清を2%加えたものを使用した。
(ア)細胞の培養
細胞増殖培地を用い、使用細胞を組織培養用フラスコ内に単層培養した。
単層培養後にフラスコ内から細胞増殖培地を除き、試験ウィルスを接種した。次に、細胞維持培地を加えて37±1℃の炭酸ガスインキュベーター(CO2濃度5%)内で1〜5日間培養した。
培養後、倒立位相差顕微鏡を用いて細胞の形態を観察し、細胞に形態変化(細胞変性効果)が起こっていることを確認した。次に、培養液を遠心分離(3000r/min、10分間)し、得られた上澄み液をウィルス浮遊液とした。
検体1mlにウィルス浮遊液0.1mlを添加、混合し、作用液とした。室温で作用させ、1,5,15および30分後に細胞維持培地を用いて1000倍に希釈した。
なお、精製水を対照として同様に試験し、開始時および30分後について測定を行った。
細胞増殖培地を用い、使用細胞を組織培養用マイクロプレート(96穴)内で単層培養した後、細胞増殖培地を除き細胞維持培地を0.1mlずつ加えた。次に、作用液の希釈液0.1mlを4穴ずつに接種し、37±1℃の炭酸ガスインキュベーター(CO2濃度5%)内で4〜7日間培養した。培養後、倒立位相差顕微鏡を用いて細胞の形態変化(細胞変性効果)の有無を観察し、Reed−Muench法により50%組織培養感染量(TClD50)を算出して作用液1ml当たりのウィルス感染価に換算した。
細胞維持培地で作用液を10000倍に希釈することにより、検体の影響を受けずにウィルス感染価が測定できることを、予備試験により確認した。
インフルエンザウィルスA型(H1N1)
MDCK(NBL−2)細胞 ATCC CCL−34株(大日本製薬社製)
(ア)細胞増殖培地
イーグルMEM培地「ニッスイ」(日水製薬社製)に牛胎仔血清を10%加えたものを使用した。
以下の組成の培地を使用した。
イーグルMEM培地「ニッスイ」(日水製薬社製) 1000ml
10%NaHCO3 14ml
L−グルタミン(30g/l) 9.8ml
100×MEM用ビタミン液 30ml
10%アルブミン 20ml
0.25%トリプシン 20ml
ネコカリシウィルスにおける試験と共通であるので記載を省略する。
検体1mlにウィルス浮遊液0.1mlを添加、混合し、作用液とした。室温で作用させ、30,60および300秒後に細胞維持培地を用いて10000倍に希釈した。
なお、精製水を対照として同様に試験し、開始時および300秒後について測定を行った。
ネコカリシウィルスにおける試験と共通であるので記載を省略する。
細胞維持培地で作用液を100倍に希釈することにより、検体の影響を受けずにウィルス感染価が測定できることを、予備試験により確認した。
ヒトヘルペスウィルスI(Human herpesvirus I KOS ATCC VR−1493)。
HEp−2細胞:HEp−2 03−108(大日本製薬社製)
ネコカリシウィルスにおける試験と共通であるので記載を省略する。
ネコカリシウィルスにおける試験と共通であるので記載を省略する。
精製水を用いて検体希釈液(10倍希釈液)を調製し、試験液とした。試験液1mlにウィルス浮遊液0.1mlを添加、混合し、作用液とした。室温で作用させ、3,5および10分後に細胞維持培地を用いて100倍に希釈した。
なお、精製水を対照として同様に試験し、開始時および10分後について測定を行った。
ネコカリシウィルスにおける試験と共通であるので記載を省略する。
(硫化水素)
実施例1にかかる組成物5mLを、25cm×40cmのにおい袋(ミヤコビニル加工所製)に入れ、ヒートシールを施した後、空気3Lを封入し、初期ガス濃度20ppmとなるように硫化水素を添加した。これを室温下で静置し、経過時間ごとに袋内のガス濃度をガス検知管(ガステック社製)を用いて測定した。比較のため、実施例1にかかる組成物に代えて精製水を用いた対照(水)についても同様に測定した。また、実施例1にかかる組成物および精製水のいずれも用いなかった空試験も行った。
初期ガス濃度20ppmの硫化水素に代えて初期ガス濃度8ppmのメチルメルカプタンを用いた以外は上記硫化水素の試験と同様にして試験を行った。
7週齢のHartley系雌モルモットを日本エスエルシー社から購入し、1週間予備飼育を行って一般状態に異常のないことを確認した。試験用モルモットは、FRP製ケージに各5匹収容し、室温22±2℃、照明時間12時間/日に設定した飼育室において飼育した。飼料はモルモット用固形飼料「ラボGスタンダード」(日本農産工業社製)を給与し、飲料水は水道水を自由摂取させた。
実施例1の組成物を用いて、発泡性液剤を調製した。
実施例1の組成物を用いて、バッカル剤を調製した。
上述の実施例3のバッカル剤を用いて、抗歯周病効果に関する臨床試験を行い、その性能を評価した。この臨床試験は、株式会社ジージー オーラルチェックセンターに依頼して行った「歯周病原細菌検査(唾液)」である。実験法および実験結果の評価は歯科領域において、口腔細菌評価に用いられている方法で実施された。
1)P.gingivalis:強い悪臭を放つ歯周病菌。
2)T.denticola:歯周ポケットが深くなると増殖が活発になり、歯周病が進行すると歯肉に入り、歯周病の症状を悪化させる。
3)T.forsythensis:歯周ポケットに生息し歯周病を進行させる。
4)P.intermedia:歯を支える骨(歯槽骨)を溶かす毒素(内毒素)をもつ。女性ホルモンと関係する。
1)口腔内の食前1時間程度の唾液を採取する(口腔内の口腔内細菌が一番多くなるのは食事前であることから、この時間帯で採取する)。
2)5分間ガム噛みを行わせ、この間の唾液を採取する。
3)次の5分間にバッカルタブレットを口腔上顎歯肉頬移行部のポケットに置き、流出してたまった唾液を採取する。
20 口腔
21 上唇
22 歯
23 歯茎
24 歯肉頬移行部
25 上唇小帯
26 頬小帯
27 口蓋垂
Claims (4)
- 過酸化水素5.5〜6.0重量%、分散剤0.005〜0.1重量%、増粘剤4.5〜6.0重量%および界面活性剤4.5〜6.0重量%を含む水溶液100重量部に対し、過炭酸ナトリウム25〜35重量%を含む水溶液19〜20重量部を混合して、発熱反応を起こさせる工程と、前記発熱反応が停止して得られる反応混合液を、10倍以上の希釈倍率で希釈する工程を含む、口腔用組成物の製造方法。
- 口腔用組成物を口腔内に残留可能な剤形として製造する、請求項1に記載の口腔用組成物の製造方法。
- 口腔内に残留可能な剤形が泡状またはバッカル剤である、請求項2に記載の口腔用組成物の製造方法。
- 前記バッカル剤がラクビーボール様の形状を有するものである、請求項3に記載の口腔用組成物の製造方法。
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