JP5808054B2 - Nog樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデルを用いた抗癌剤ターゲット探索及びスクリーニング法 - Google Patents
Nog樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデルを用いた抗癌剤ターゲット探索及びスクリーニング法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5808054B2 JP5808054B2 JP2011547619A JP2011547619A JP5808054B2 JP 5808054 B2 JP5808054 B2 JP 5808054B2 JP 2011547619 A JP2011547619 A JP 2011547619A JP 2011547619 A JP2011547619 A JP 2011547619A JP 5808054 B2 JP5808054 B2 JP 5808054B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cancer
- nog
- cells
- established
- human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 526
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims description 490
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 211
- 238000010171 animal model Methods 0.000 title claims description 92
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 title claims description 50
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 title claims description 28
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims description 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 331
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 153
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 92
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 91
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 78
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 44
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 38
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 29
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 28
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 28
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 26
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 claims description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 24
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 23
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 19
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 16
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 15
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 15
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 claims description 12
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 claims description 10
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 7
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 7
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 6
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 111
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 47
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 22
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 18
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 16
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 15
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 15
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 14
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 13
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 11
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 10
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 9
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 7
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 6
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 6
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 6
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 6
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 6
- 101150017554 LGR5 gene Proteins 0.000 description 5
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 4
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 4
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 4
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 3
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 3
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 3
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 3
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 3
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 2
- 102000015736 beta 2-Microglobulin Human genes 0.000 description 2
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 2
- 230000029578 entry into host Effects 0.000 description 2
- 230000010429 evolutionary process Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001001 laser micro-dissection Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 2
- 230000033458 reproduction Effects 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 2
- YVSHCKXUFJPXCX-ZWOKJYBLSA-N 2-[(1r,2r,3s,4r,5r,6s)-3-(diaminomethylideneamino)-4-[(2r,3r,4r,5s)-3-[(2s,3s,4s,5r,6s)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy-4-formyl-4-hydroxy-5-methyloxolan-2-yl]oxy-2,5,6-trihydroxycyclohexyl]guanidine;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7- Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O YVSHCKXUFJPXCX-ZWOKJYBLSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000693922 Bos taurus Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 101150021185 FGF gene Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102100023915 Insulin Human genes 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 1
- 238000011789 NOD SCID mouse Methods 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 102000055536 human HMC Human genes 0.000 description 1
- 108700013236 human HMC Proteins 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000001145 hydrido group Chemical group *[H] 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035752 proliferative phase Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000016691 refractory malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 1
- 229940082569 selenite Drugs 0.000 description 1
- MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L selenite(2-) Chemical compound [O-][Se]([O-])=O MCAHWIHFGHIESP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 238000010396 two-hybrid screening Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0271—Chimeric vertebrates, e.g. comprising exogenous cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
- G01N33/5088—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms of vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/12—Animals modified by administration of exogenous cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/0331—Animal model for proliferative diseases
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明者らは、高度免疫不全動物NOGマウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株を、NOGマウスに移植した後に、その組織構築を形態学的に観察すれば、その階層構造の形成過程とそこへの癌幹細胞の関与、又はその生物学的特性について解明できるものと考え、以下の研究を行った。
また近年、幹細胞が多分化能を獲得する、reprogrammingという現象には、P53などの蛋白質発現の減少が関与することが明らかになっている。そこでP53蛋白に対する免疫染色を行ったところ、同モデルで見出される癌幹細胞においてもこの、P53蛋白発現が減少していることが示された(図10)。以上から、本モデルでは、reprogrammingという癌幹細胞の生物学的特性が、忠実に再現されていることが明らかになった。
〔1〕高度免疫不全NOD/SCID/gamma(c)(null) (NOG)マウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株を、同一又は異なる種に属する非ヒト動物に移植することによって得られる非ヒト動物モデル。
〔2〕ヒト癌組織の階層構造及び癌進展プロセスが再現されていることを特徴とする、〔1〕に記載の非ヒト動物モデル。
〔3〕ヒト癌組織の階層構造及び癌進展プロセスを再現する性質を具備する固有の癌幹細胞が見出せ、その生物学的特性を検討できることを特徴とする、〔1〕に記載の非ヒト動物モデル。
〔4〕ヒト癌組織の階層構造の再現過程で、完全上皮間葉転換(Complete-EMT)により癌細胞が腫瘍間質を形成する線維芽細胞へと転換する過程を見出せることを特徴とする、〔1〕に記載の非ヒト動物モデル。
〔5〕〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載の非ヒト動物モデルに抗癌剤が投与され、癌細胞の階層構造、その癌進展プロセス、その生物学的特性、又はそれが示す完全上皮間葉転換(Complete-EMT)の変動を指標として評価することで、抗癌剤抵抗性の成因を検討することができる非ヒト動物モデル。
〔6〕前記ヒト腫瘍組織が、大腸癌、胃癌、乳癌、肺癌、又は膵臓癌由来の腫瘍組織であることを特徴とする、〔1〕〜〔4〕のいずれかに記載の非ヒト動物モデル。
〔7〕NOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、抗癌剤ターゲット探索方法。
〔8〕下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔7〕に記載の抗癌剤ターゲット探索方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(3)(2)において採取した組織片についてDNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(4)組織片中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程
〔9〕下記(1)〜(3)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔7〕に記載の抗癌剤ターゲット探索方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)特徴構造を再現した培養細胞の、DNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程
〔10〕NOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、抗癌剤のスクリーニング方法。
〔11〕下記(1)〜(5)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔10〕に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス及びその生物学的特性を同定する工程
〔12〕下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔10〕に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
〔13〕下記(1)〜(5)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔10〕に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程
〔14〕下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔10〕に記載の抗癌剤スクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程
〔15〕NOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、ヒト癌疾患を治療又は予防するための医薬品の評価方法。
〔16〕下記(1)〜(5)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔15〕に記載の医薬品の評価方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
〔17〕下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、〔15〕に記載のヒト癌疾患を治療又は予防するための医薬品の評価方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
〔18〕NOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物又はNOG樹立癌細胞株を、癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性が再現された癌モデル動物又は細胞株として使用する方法。
本発明の動物モデルは、ドナー動物である高度免疫不全NOD/SCID/gamma(c)(null) (NOG)マウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株を、レシピエント動物に皮下、諸体腔あるいは諸臓器への移植によって作製することができる。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(3)(2)において採取した組織片についてDNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(4)組織片中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)特徴構造を再現した培養細胞の、DNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
再現とは、該モデルの使用の目的に応じて、所定の目的を達成できる程度に実現されていればよいことを意味し、必ずしも生体内で起きていることがそのままそっくり実現されていることを要しない。
なお本明細書において引用されたすべての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
〔実施例1〕NOG樹立癌細胞株はヒト癌組織の階層構造を再現する。
(1)NOG樹立癌細胞株及び染色法
NOGマウスに、ヒト大腸癌、胃癌、肺癌、乳癌および膵臓癌を3代以上移植・継代可能な事を樹立の条件とて作製したNOG樹立癌細胞株を用いた(Fujii E. et al., Pathol Int. 2008; 58: 559-567)。本実施例では、NOG樹立癌細胞株を、NOGマウスへ皮下移植後28日後に剖検し、移植片を摘出して4% paraformaldehydeにて、4℃ 、16から24 時間の条件で固定後、AMeX法にて包埋して薄切組織標本を作製した(Fujii E. et al., Pathol Int. 2008; 58: 559-567)。組織はHE染色及び免疫組織化学染色(IHC)を実施し、一次抗体には抗E-cadherin抗体(DakoCytomation社製)ならびに抗Fibronectin抗体(DakoCytomation社製)を使用し、LSAB法を用いDABにより発色した(DAB Mapキット;ロシュ・ダイアグノスティック社製)。
ヒト大腸癌組織の上皮様腺腔領域では、細胞全周にE-カドヘリンが発現することが特徴といわれているが(Kirchner T. et al., Am J Pathol. 2000; 157: 1113-1121)、この特徴がNOG樹立癌細胞株において認められた(図1)。また上記in vitro条件下では、スフェロイド形成細胞が腺腔構造を再現することが示された(図2)。
以上の結果より、NOG樹立癌細胞株はヒト癌組織の階層構造を再現することが明らかとなった。
(1)NOG樹立癌細胞株及び染色法
移植元ヒト大腸癌組織の組織形が、(1)高分化型腺癌、(2)中分化型腺癌、(3)低分化型腺癌であったNOG樹立癌細胞株を、NOGマウスへ皮下移植後3、7、14、17あるいは21日後に剖検し、上記同様にHE染色及びIHCを施して、上皮様領域と浸潤部領域の比率を形態学的に求めた。
また、胃癌、大腸癌、肺癌において、その組織構築の繰り返し再現性を確認する目的で、移植元癌組織及びNOG樹立癌細胞株のHE染色標本の観察を行った。
移植元ヒト大腸癌組織の階層構造を呈するにいたる、固有の癌進展プロセスを、高分化腺癌の場合、上皮様増殖プロセス(Epithelial duct forming pattern)を主体に、中分化腺癌の場合、上皮様増殖を含みながら浸潤増殖プロセス(Invasive EMT pattern)を主体に、低分化腺癌の場合、もっぱら浸潤増殖プロセスを、それぞれ経ることが明らかになった。
またこの各株に固有の階層分化は、複数回の移植継代によっても、繰り返し再現可能であった(図5)。
(1)NOG樹立癌細胞株及び染色法
癌幹細胞は一般に、細胞回転が非常に遅い低増殖細胞である事が知られている(Li L, Neaves WB. Cancer res. 2006; 66: 4553-4557)。この性質に注目し、NOG樹立癌細胞株をNOGマウスへの皮下移植時に同時に細胞***期に取り込まれるBrdUの持続ラベルを開始し、14日間ラベル後、剖検し組織処理した。同組織を上記同様にHE染色による形態観察に加え、BrdU取り込み細胞のIHC染色による検出(抗体:Beckton Dickinson社製)、ならびに細胞***期マーカーとしてKi67抗体(DakoCytomation社製)を用いたIHC染色を行い、増殖細胞と低増殖細胞を同定した。さらにこれと隣接する標本に、癌幹細胞マーカーとして知られるLgr5に対する抗体(MBL社製)を使用したIHC染色を施した(McDonald SAC, et al., Virchows Arch. 2009;455:1-13)。
BrdU持続ラベルを実施した組織において、一部ラベルされない細胞が上皮様増殖および浸潤増殖の両領域に認められ、同細胞はKi67陰性であった。これより両領域に癌幹細胞の特徴として知られる、細胞回転の非常に遅い低増殖細胞が存在するものと考えられ、この標本と隣接する標本を、癌幹細胞マーカーであるLgr5にて染色すると、低増殖細胞の存在部と一致する染色像を得た(図6)。これらの低増殖細胞は、上皮様増殖部と浸潤増殖部のそれぞれに見出された(図7)。以上と実施例2の階層構造を取る過程を考え合わせると、癌幹細胞の存在部の推移とその階層構造形成は、図8のようになる事が示された。
(1)NOG樹立癌幹細胞株及び染色法
NOG樹立癌細胞株をNOGマウスへの皮下移植時に同時にIdU持続ラベルを開始し、28日間ラベル後に剖検し、次世代へのIdU標識済み移植細胞株を調整した。この細胞株の、次世代への移植と同時に、BrdU持続ラベルを開始し、これを移植後3日に解剖して、組織処理を行った。以上から得た連続組織標本を、IdUならびにBrdUを検出する抗体(Beckton Dickinson社製)と、BrdUのみを検出する抗体(Serotec社製)により、IHC染色により検出し、増殖細胞と低増殖細胞の、世代をまたいだ変動を検出した。
図9に示すごとく、2世代目、移植後3日の標本を、IdUならびにBrdUを検出する抗体にてIHC染色をした場合、陽性染色が得られるが、BrdUのみを検出する抗体で染色した場合、陰性となる細胞が見出された。以上の染色結果から、これらの細胞は1世代目でIdUを取り込んだが、2世代目ではBrdUを取り込んでいないことが示され、これは1世代目では細胞***を行った分化細胞が、2世代目では増殖を止め、低・非増殖細胞化(幹細胞化)したものと考えられた。
(1)NOG樹立癌幹細胞株及び染色法
近年、いわゆるinduced pluripotent stem (iPS)細胞を作製する際、P53蛋白の発現を減弱させると、その作製効率が飛躍的に向上することから、体細胞のreprogrammingによる幹細胞化には、同蛋白が関与する事が示され、またこの機構の癌幹細胞における重要性が指摘されている(Krizhanovsky V and Lowe SW, Nature 2009; 460: 1085-6)。
多くの癌でP53の過剰発現が報告されているが(Toledo F and Wahl GM., Nature rev cancer 2006; 6: 909-923)、今回NOG樹立癌細胞の多くにおいても、同蛋白の過剰発現が観察された。一方で、BrdU弱陽性及び陰性細胞に一致して、P53の発現が減弱あるいは消失していた(図10)。
(1)NOG樹立癌細胞株及び染色法
NOG樹立癌細胞株のNOGマウスへの皮下移植後14日に各動物を剖検して得た腫瘍塊に、ヒト特異的なβ2 microglobulinに対するIHC染色を施して種の由来を検討した。
また、in vitro培養前に、播種する細胞の種の由来をヒト特異的なAnti-Human HLA-ABC Antigen/RPE(DAKO, Cat. No. R7000)抗体と、マウス特異Anti-mMuse MHC classI(Abcam, Cat. No. ab15680-50)抗体を使用したフローサイトメトリーにて確認した後、これを培地1で培養して線維芽細胞様細胞の出現を追跡した。
腫瘍間質に、ヒト由来の線維芽細胞が観察された(図11)。
また、培養前に90割程度がヒト細胞であることを確認した細胞を実施例1で用いた培地1で培養し、線維芽細胞の出現が確認された(図12)。
(1)NOG樹立癌細胞株由来の抗がん剤抵抗性細胞の検出
高分化型腺癌ならびに中分化型腺癌を、各3例のNOGマウスに移植後7日、10日、14日の計3回、5-fluorouracil (5-FU;Mayne Pharma)の100 mg/kgを腹腔内投与し、最終投与の翌日(移植後15日)に腫瘍塊を採集した。これを上記と同様の方法でHE染色標本を作製し、溶媒を投与した対象群(3例)より作製した標本と病理組織学的に比較した。
表2および図13に示す通り、対象群と比較して、高分化型腺癌では高度に分化した管腔構造部が減少し、管腔構造の不明瞭な低分化腺管が顕著に観察された。中分化腺癌では簇出像が減少し低分化腺管を主体とした組織像を呈した。以上の結果から、高分化型腺癌で増殖が活発な上皮様増殖プロセスにより形成される管腔構造部、ならびに中分化型腺癌の浸潤増殖プロセスでみられる簇出部が、抗がん剤に感受性であり、低分化な腺管が抗がん剤に抵抗性であることを示された。
以上のように、抗がん剤抵抗性を示す特徴的な細胞群・組織構造が認められたことから、これらが選択されるプロセス、長期間の薬剤処置に抵抗性を獲得するプロセス、ならびに抗がん剤治療後の再発プロセスなどを、本モデルにより検討できることを示しているものと考えられる。従って、本モデルを使用すると、これらのプロセスに関与する因子の探索や、それをターゲットとした薬剤探索ならびにスクリーニングが、可能であることが示された。
Claims (16)
- 高度免疫不全NOD/SCID/gamma(c)(null) (NOG)マウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株を、同一又は異なる種に属する非ヒト動物に移植することによって得られる非ヒト動物モデルであって、ヒト癌組織の階層構造及び癌進展プロセスが再現されている非ヒト動物モデル。
- ヒト癌組織の階層構造及び癌進展プロセスを再現する性質を具備する固有の癌幹細胞が見出せ、その生物学的特性を検討できることを特徴とする、請求項1に記載の非ヒト動物モデル。
- ヒト癌組織の階層構造の再現過程で、完全上皮間葉転換(Complete-EMT)により癌細胞が腫瘍間質を形成する線維芽細胞へと転換する過程を見出せることを特徴とする、請求項1に記載の非ヒト動物モデル。
- 請求項1〜3のいずれかに記載の非ヒト動物モデルに抗癌剤が投与され、癌細胞の階層構造、その癌進展プロセス、その生物学的特性、又はそれが示す完全上皮間葉転換(Complete-EMT)の変動を指標として評価することで、抗癌剤抵抗性の成因を検討することができる非ヒト動物モデル。
- 前記ヒト腫瘍組織が、大腸癌、胃癌、乳癌、肺癌、又は膵臓癌由来の腫瘍組織であることを特徴とする、請求項1〜3のいずれかに記載の非ヒト動物モデル。
- NOGマウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、再現されたヒト癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、抗癌剤ターゲット探索方法。
- 下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項6に記載の抗癌剤ターゲット探索方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(3)(2)において採取した組織片についてDNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(4)組織片中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程 - 下記(1)〜(3)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項6に記載の抗癌剤ターゲット探索方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)特徴構造を再現した培養細胞の、DNA、RNA、及びたんぱく質発現を調べる工程、及び
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性に依存的に変動する遺伝子・たんぱく質を同定する工程 - NOGマウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、再現されたヒト癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、抗癌剤のスクリーニング方法。
- 下記(1)〜(5)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項9に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス又はその生物学的特性を同定する工程 - 下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項9に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程 - 下記(1)〜(5)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項9に記載の抗癌剤のスクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程 - 下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項9に記載の抗癌剤スクリーニング方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)特定の癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を阻害する被験物質を同定する工程 - NOGマウスにヒト腫瘍組織を移植し樹立したNOG樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデル又はNOG樹立癌細胞株のin vitro条件下での培養系において、再現されたヒト癌細胞の階層構造、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を指標として評価を行うことを特徴とする、ヒト癌疾患を治療又は予防するための医薬品の評価方法。
- 下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項14に記載の医薬品の評価方法。
(1)NOG樹立癌細胞株を非ヒト動物に移植することにより非ヒト動物モデルを作製する工程、
(2)被験物質を(1)の非ヒト動物モデルに投与する工程、
(3)NOG樹立癌細胞株の同一株の各領域の癌進展プロセスにおいて特徴的に認められる組織構造、又はその生物学的特性を示す組織片を採取する工程、
(4)組織片中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(5)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程 - 下記(1)〜(4)に記載された工程を含むことを特徴とする、請求項14に記載のヒト癌疾患を治療又は予防するための医薬品の評価方法。
(1)NOG樹立癌細胞株をin vitro条件下で培養し、各癌進展プロセスの特徴構造、又はその生物学的特性を再現する工程、
(2)被験物質で(1)の培養細胞を処理する工程、
(3)培養細胞中の癌細胞の階層構造の経時変化、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を観察する工程、及び
(4)被験物質により阻害された癌細胞の階層構造形成、癌進展プロセス、又はその生物学的特性を同定する工程
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011547619A JP5808054B2 (ja) | 2009-12-25 | 2010-12-24 | Nog樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデルを用いた抗癌剤ターゲット探索及びスクリーニング法 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009295426 | 2009-12-25 | ||
JP2009295426 | 2009-12-25 | ||
PCT/JP2010/073266 WO2011078301A1 (ja) | 2009-12-25 | 2010-12-24 | Nog樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデルを用いた抗癌剤ターゲット探索及びスクリーニング法 |
JP2011547619A JP5808054B2 (ja) | 2009-12-25 | 2010-12-24 | Nog樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデルを用いた抗癌剤ターゲット探索及びスクリーニング法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2011078301A1 JPWO2011078301A1 (ja) | 2013-05-09 |
JP5808054B2 true JP5808054B2 (ja) | 2015-11-10 |
Family
ID=44195826
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011547619A Active JP5808054B2 (ja) | 2009-12-25 | 2010-12-24 | Nog樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデルを用いた抗癌剤ターゲット探索及びスクリーニング法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11536713B2 (ja) |
EP (2) | EP2517555A4 (ja) |
JP (1) | JP5808054B2 (ja) |
CN (1) | CN102821600B (ja) |
HK (1) | HK1177664A1 (ja) |
SG (2) | SG10201908987VA (ja) |
WO (1) | WO2011078301A1 (ja) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102821600B (zh) | 2009-12-25 | 2016-01-20 | 中外制药株式会社 | 使用移植了nog确立癌细胞株的非人动物模型进行的抗癌药靶探索以及筛选方法 |
US9778264B2 (en) | 2010-09-03 | 2017-10-03 | Abbvie Stemcentrx Llc | Identification and enrichment of cell subpopulations |
CA2809864A1 (en) | 2010-09-03 | 2012-03-08 | Stem Centrx, Inc. | Identification and enrichment of cell subpopulations |
EP2626414B1 (en) | 2010-10-06 | 2020-07-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cancer stem cell mass and process for production thereof |
US10018630B2 (en) | 2011-09-07 | 2018-07-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cancer stem cell isolation |
US20140302511A1 (en) | 2011-10-28 | 2014-10-09 | Pharmalogicals Research Pte. Ltd. | Cancer stem cell-specific molecule |
JP2014033626A (ja) * | 2012-08-08 | 2014-02-24 | Juntendo | ヒト癌上皮細胞の遠隔転移のモデルマウス作出方法 |
JP2015057974A (ja) * | 2013-09-18 | 2015-03-30 | 学校法人順天堂 | 患者原発性大腸癌の個別化転移モデルマウスの作製方法 |
EP3310159A4 (en) * | 2015-06-16 | 2019-02-20 | The Jackson Laboratory | GENETICALLY MODIFIED NON-MENTAL ANIMALS AND METHOD FOR COMPLEMENTARY CYTOTOXICITY |
JP6710211B2 (ja) * | 2015-08-03 | 2020-06-17 | 富士フイルム株式会社 | 細胞構造体、非ヒトモデル動物、非ヒトモデル動物の製造方法、及び被験物質の評価方法 |
CN105296430B (zh) * | 2015-09-29 | 2018-08-17 | 浙江大学 | 一种人类结肠癌细胞系dxh-1及其应用 |
WO2019039452A1 (ja) * | 2017-08-21 | 2019-02-28 | 凸版印刷株式会社 | 抗がん効果の評価方法、及びがん免疫療法の奏効性予測方法 |
WO2019111998A1 (ja) * | 2017-12-08 | 2019-06-13 | 京ダイアグノスティクス株式会社 | 癌スフェロイドの製造方法および大腸癌患者の選択方法 |
CN108977410B (zh) * | 2018-08-02 | 2023-04-25 | 郭世伟 | 中国人胰腺癌原位癌细胞系 |
CN112544567B (zh) * | 2019-09-10 | 2022-11-01 | 上海交通大学医学院附属仁济医院 | 髓母细胞瘤动物模型及其建立与应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006051984A1 (ja) * | 2004-11-15 | 2006-05-18 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 癌細胞の転移抑制方法およびそのために使用する医薬組成物 |
WO2007064945A2 (en) * | 2005-12-01 | 2007-06-07 | Pronai Therapeutics, Inc. | Cancer therapies and pharmaceutical compositions used therein |
WO2007132883A1 (ja) * | 2006-05-17 | 2007-11-22 | Yokohama City University | 肝臓癌の鑑別、疾患ステージの判定又は予後の予測方法及びキット |
JP2008500838A (ja) * | 2004-06-01 | 2008-01-17 | プロネイ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 遺伝子発現の阻害に関する方法および組成物 |
JP2008102012A (ja) * | 2006-10-19 | 2008-05-01 | Kanazawa Univ | 癌幹細胞の同定および単離方法 |
JP2008514205A (ja) * | 2004-09-29 | 2008-05-08 | 財団法人実験動物中央研究所 | Nogマウスを用いた高転移性細胞株の樹立 |
Family Cites Families (51)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5573924A (en) | 1992-09-08 | 1996-11-12 | Immunex Corporation | CD27 ligand |
US8044259B2 (en) | 2000-08-03 | 2011-10-25 | The Regents Of The University Of Michigan | Determining the capability of a test compound to affect solid tumor stem cells |
US6984522B2 (en) | 2000-08-03 | 2006-01-10 | Regents Of The University Of Michigan | Isolation and use of solid tumor stem cells |
DE60131676T2 (de) * | 2000-12-01 | 2008-10-30 | Central Institute For Experimental Animals | Verfahren zur herstellung einer maus, die für die aufnahme, differenzierung und proliferation von heterogenen zellen geeignet ist, die hierdurch hergestellte maus und ihre verwendung |
AU2003238897A1 (en) | 2002-06-05 | 2003-12-22 | Avalon Pharmaceuticals, Inc. | Cancer-linked gene as target for chemotherapy |
US20070053884A1 (en) | 2003-05-16 | 2007-03-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd | Novel adult tissue-derived stem cell and use thereof |
CA2447400A1 (en) | 2003-09-12 | 2005-03-12 | The Hospital For Sick Children | Brain tumor stem cells |
CA2542121A1 (en) | 2003-10-09 | 2005-04-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Genomically modified cell neutralized to serum-free system |
JP2005206508A (ja) | 2004-01-22 | 2005-08-04 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 悪性腫瘍細胞増殖抑制抗体 |
CA2560742A1 (en) | 2004-03-23 | 2005-10-06 | Biogen Idec Ma Inc. | Receptor coupling agents and therapeutic uses thereof |
US20080268476A1 (en) | 2004-05-12 | 2008-10-30 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Nectin 4 (N4) as a Marker for Cancer Prognosis |
WO2006014999A2 (en) | 2004-07-27 | 2006-02-09 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of use for modulators of nectin 4, semaphorin 4b, igsf9, and kiaa0152 in treating disease |
US10538742B2 (en) | 2004-11-12 | 2020-01-21 | Cambridge Enterprise Limited | Methods and means related to cancer stem cells |
AU2006236225C1 (en) | 2005-04-19 | 2013-05-02 | Seagen Inc. | Humanized anti-CD70 binding agents and uses thereof |
CA2612021A1 (en) | 2005-06-13 | 2006-12-28 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for treating and diagnosing cancer |
US20090012024A1 (en) | 2005-07-26 | 2009-01-08 | Procure Therapeutics Limited | Stem Cell Markers |
NZ566395A (en) | 2005-09-26 | 2012-03-30 | Medarex Inc | Human monoclonal antibodies to CD70 |
JP5129149B2 (ja) | 2005-10-31 | 2013-01-23 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | 癌を処置および診断するための組成物および方法 |
US20070220621A1 (en) | 2005-10-31 | 2007-09-20 | Clarke Michael F | Genetic characterization and prognostic significance of cancer stem cells in cancer |
EP1792979A1 (en) | 2005-12-01 | 2007-06-06 | Stiftung Caesar Center of Advanced European Studies and Research | Cell culture system for the enrichment and expansion of stem cells |
MX2008015492A (es) | 2006-06-06 | 2009-02-12 | Univ Tennessee Res Foundation | Composiciones enriquecidas en celulas madre neoplasicas y metodos que las contienen. |
WO2008017171A1 (en) | 2006-08-11 | 2008-02-14 | Ao-Forschungsinstitut Davos | Identification and selection of stem cells being committed to differentiate to a specific type for obtaining a homogeneous population of stem cells |
JP2010502220A (ja) | 2006-09-05 | 2010-01-28 | メダレックス インコーポレーティッド | 骨形態形成タンパク質およびその受容体に対する抗体ならびにその使用方法 |
WO2008033393A2 (en) | 2006-09-11 | 2008-03-20 | University Of Florida | Isolation, expansion and uses of tumor stem cells |
GB2442059A (en) | 2006-09-19 | 2008-03-26 | Ist Superiore Sanita | Test for cancer of the gastrointestinal tract |
JP5687822B2 (ja) | 2006-10-12 | 2015-03-25 | 中外製薬株式会社 | 抗ereg抗体を用いる癌の診断および治療 |
US8309354B2 (en) | 2007-01-22 | 2012-11-13 | Macrogenics West, Inc. | Human cancer stem cells |
JP2008182912A (ja) | 2007-01-29 | 2008-08-14 | Nippon Kayaku Co Ltd | 癌幹細胞の培養方法、および癌幹細胞 |
WO2008143954A2 (en) | 2007-05-14 | 2008-11-27 | Biogen Idec Ma Inc. | Single-chain fc (scfc) regions, binding polypeptides comprising same, and methods related thereto |
WO2008149803A1 (ja) | 2007-06-06 | 2008-12-11 | The University Of Tokyo | 表面抗原マーカーを用いた急性リンパ性白血病における癌幹細胞の分離同定方法 |
EP3424529A1 (en) | 2007-07-02 | 2019-01-09 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating and diagnosing cancer |
EP2188367A4 (en) | 2007-08-10 | 2010-10-27 | Whitehead Biomedical Inst | HORMONE REACTIVE TISSUE CULTURE SYSTEM, AND USES THEREOF |
EP2022848A1 (en) | 2007-08-10 | 2009-02-11 | Hubrecht Institut | A method for identifying, expanding, and removing adult stem cells and cancer stem cells |
GB2465940A (en) | 2007-10-01 | 2010-06-09 | Hospital For Sick Children | Neural tumor stem cells and methods of use thereof |
WO2009064301A1 (en) | 2007-11-15 | 2009-05-22 | The Johns Hopkins University | Methods for detecting and monitoring circulating cancer stem cells |
WO2009111067A2 (en) * | 2008-03-07 | 2009-09-11 | Osi Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the identification of agents that inhibit mesenchymal -like tumor cells or their formation |
AU2009242453B2 (en) | 2008-05-02 | 2014-12-04 | Seagen Inc. | Methods and compositions for making antibodies and antibody derivatives with reduced core fucosylation |
US20110111434A1 (en) | 2008-07-15 | 2011-05-12 | Huang Emina H | Colon stem cells associated with colitisand colorectal cancer and methods of use |
WO2010016766A2 (en) | 2008-08-08 | 2010-02-11 | Koninklijke Nederlandse Akademie Van Wetenschappen | Antibodies recognizing endogenous human lgr5 and/or lgr6 |
WO2010067487A1 (en) | 2008-12-12 | 2010-06-17 | Oncotherapy Science, Inc. | Nectin-4 for target genes of cancer therapy and diagnosis |
AU2010221159B2 (en) | 2009-03-06 | 2015-11-26 | Humanigen, Inc. | Treatment of leukemias and chronic myeloproliferative diseases with antibodies to EphA3 |
CN102448991B (zh) | 2009-03-30 | 2016-09-14 | 安迪穆生物科技有限公司 | 分离的激动剂型抗edar单克隆抗体的制备 |
WO2010123891A1 (en) | 2009-04-20 | 2010-10-28 | Genentech, Inc. | Adjuvant cancer therapy |
TW201105347A (en) | 2009-04-28 | 2011-02-16 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Pharmaceutical compositions for maintenance therapy containing HLA class I-recognizing antibody as the active ingredient |
US20120141501A1 (en) | 2009-05-29 | 2012-06-07 | Forerunner Pharma Research Co. Ltd | Pharmaceutical Composition Containing Antagonist of EGF Family Ligand as Component |
WO2011027308A1 (en) | 2009-09-03 | 2011-03-10 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Novel tumor markers |
CN102821600B (zh) | 2009-12-25 | 2016-01-20 | 中外制药株式会社 | 使用移植了nog确立癌细胞株的非人动物模型进行的抗癌药靶探索以及筛选方法 |
US9217032B2 (en) | 2010-01-08 | 2015-12-22 | Les Laboratoires Servier | Methods for treating colorectal cancer |
EP2626414B1 (en) | 2010-10-06 | 2020-07-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cancer stem cell mass and process for production thereof |
US10018630B2 (en) | 2011-09-07 | 2018-07-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cancer stem cell isolation |
US20140302511A1 (en) | 2011-10-28 | 2014-10-09 | Pharmalogicals Research Pte. Ltd. | Cancer stem cell-specific molecule |
-
2010
- 2010-12-24 CN CN201080064764.7A patent/CN102821600B/zh active Active
- 2010-12-24 JP JP2011547619A patent/JP5808054B2/ja active Active
- 2010-12-24 EP EP10839531.0A patent/EP2517555A4/en active Pending
- 2010-12-24 SG SG10201908987V patent/SG10201908987VA/en unknown
- 2010-12-24 EP EP23152521.3A patent/EP4190149A1/en active Pending
- 2010-12-24 WO PCT/JP2010/073266 patent/WO2011078301A1/ja active Application Filing
- 2010-12-24 SG SG2012047213A patent/SG181938A1/en unknown
- 2010-12-24 US US13/519,059 patent/US11536713B2/en active Active
-
2013
- 2013-04-18 HK HK13104740.0A patent/HK1177664A1/zh unknown
-
2022
- 2022-11-22 US US17/992,032 patent/US20230085803A1/en active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008500838A (ja) * | 2004-06-01 | 2008-01-17 | プロネイ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 遺伝子発現の阻害に関する方法および組成物 |
JP2008514205A (ja) * | 2004-09-29 | 2008-05-08 | 財団法人実験動物中央研究所 | Nogマウスを用いた高転移性細胞株の樹立 |
WO2006051984A1 (ja) * | 2004-11-15 | 2006-05-18 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | 癌細胞の転移抑制方法およびそのために使用する医薬組成物 |
WO2007064945A2 (en) * | 2005-12-01 | 2007-06-07 | Pronai Therapeutics, Inc. | Cancer therapies and pharmaceutical compositions used therein |
WO2007132883A1 (ja) * | 2006-05-17 | 2007-11-22 | Yokohama City University | 肝臓癌の鑑別、疾患ステージの判定又は予後の予測方法及びキット |
JP2008102012A (ja) * | 2006-10-19 | 2008-05-01 | Kanazawa Univ | 癌幹細胞の同定および単離方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2011078301A1 (ja) | 2011-06-30 |
US20230085803A1 (en) | 2023-03-23 |
HK1177664A1 (zh) | 2013-08-30 |
CN102821600A (zh) | 2012-12-12 |
SG181938A1 (en) | 2012-07-30 |
JPWO2011078301A1 (ja) | 2013-05-09 |
US20130019327A1 (en) | 2013-01-17 |
US11536713B2 (en) | 2022-12-27 |
CN102821600B (zh) | 2016-01-20 |
SG10201908987VA (en) | 2019-11-28 |
EP4190149A1 (en) | 2023-06-07 |
EP2517555A1 (en) | 2012-10-31 |
EP2517555A4 (en) | 2014-09-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5808054B2 (ja) | Nog樹立癌細胞株が移植された非ヒト動物モデルを用いた抗癌剤ターゲット探索及びスクリーニング法 | |
US20200385686A1 (en) | Cancer stem cell population and method for production thereof | |
Porter et al. | Current concepts in tumour-derived organoids | |
US11180734B2 (en) | Single cell-derived organoids | |
Krempley et al. | Preclinical models of pancreatic ductal adenocarcinoma | |
Moorefield et al. | Generation of renewable mouse intestinal epithelial cell monolayers and organoids for functional analyses | |
Ciucci et al. | Preclinical models of epithelial ovarian cancer: practical considerations and challenges for a meaningful application | |
Villadsen | In search of a stem cell hierarchy in the human breast and its relevance to breast cancer evolution | |
Rallabandi et al. | Evaluation of intestinal epithelial barrier function in inflammatory bowel diseases using murine intestinal organoids | |
Hebert et al. | Dissecting metastasis using preclinical models and methods | |
CN105102614A (zh) | 获得包含癌症干细胞的细胞群的方法 | |
Boecker et al. | K5/K14-positive cells contribute to salivary gland-like breast tumors with myoepithelial differentiation | |
CN114075539A (zh) | 构建原位原发膀胱癌动物模型的方法 | |
JP2014207883A (ja) | がん幹細胞及びその用途 | |
Wang et al. | Establishment of a patient-derived organoid model and living biobank for nasopharyngeal carcinoma | |
Quadri et al. | Investigating cutaneous squamous cell carcinoma in vitro and in vivo: novel 3D tools and animal models | |
Varani et al. | Organoid culture to study epithelial cell differentiation and barrier formation in the colon: bridging the gap between monolayer cell culture and human subject research | |
JP5527573B2 (ja) | Mcf7由来細胞 | |
US20200063108A1 (en) | Three-dimensional tissue structures | |
Martignani et al. | Whole transcriptome analysis of bovine mammary progenitor cells by P-Cadherin enrichment as a marker in the mammary cell hierarchy | |
JP5954775B2 (ja) | denovo発癌性膵臓癌細胞株 | |
Croagh et al. | Reconstitution of stratified murine and human oesophageal epithelia in an in vivo transplant culture system | |
JP6551855B2 (ja) | 微乳頭構造を有する肺腺癌の原発巣から直接作製されたヒト細胞株及びその利用 | |
Elbadawy et al. | Experimental Methods for Establishing and Maintaining Canine Bladder Cancer Organoids | |
Davidson et al. | The SWI/SNF chromatin remodelling complex regulates pancreatic endocrine cell expansion and differentiation in mice in vivo |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20130306 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20131220 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20140912 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20140912 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150218 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150331 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20150414 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150902 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150907 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5808054 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |