JP5801572B2

JP5801572B2 - PPARγ activator

Info

Publication number: JP5801572B2
Application number: JP2011046966A
Authority: JP
Inventors: 博宣村瀬; 一貴森田
Original assignee: Shishiai KK
Current assignee: Shishiai KK
Priority date: 2011-03-03
Filing date: 2011-03-03
Publication date: 2015-10-28
Anticipated expiration: 2031-03-03
Also published as: JP2012184176A

Description

本発明は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）活性化剤に関する。 The present invention relates to a peroxisome proliferator activated receptor γ (PPARγ) activator.

国際糖尿病連合（ＩＤＦ）の発表によると、世界の２００７年現在の糖尿病人口は２億４，６００万人であり、２０２５年には３億８，０００万人に増加すると予測されている。糖尿病は、未治療の状態、または血糖値管理が不十分の状態で放置すると、三大合併症である神経障害、網膜症及び腎症に加えて、脳梗塞、脳卒中、心筋梗塞、皮膚合併症や下肢合併症など、様々な病気を引き起こすことが知られている。そして、現在、世界中で年間約３８０万人が、糖尿病に起因して命を落としている。 According to an announcement by the International Diabetes Federation (IDF), the world's diabetes population as of 2007 is 246 million and is expected to increase to 380 million by 2025. If diabetes is left untreated or inadequate blood glucose level control, in addition to neuropathy, retinopathy and nephropathy, which are three major complications, cerebral infarction, stroke, myocardial infarction, skin complications It is known to cause various diseases such as lower limb complications. Currently, about 3.8 million people worldwide die every year due to diabetes.

糖尿病の原因の一つに、インスリン抵抗性（グルコース代謝の異常）が挙げられる。インスリン抵抗性とは、インスリンの作用効果が低下している状態であり、場合によっては、血糖を調節しようとして体内のインスリン分泌が過剰になり、高インスリン血症に至る。インスリン抵抗性は、肥満体の人に比較的多く見られる。基礎代謝を上回る栄養分が継続的に細胞に取り込まれると脂肪細胞が肥大化し、これにより、インスリンの働きを向上させる物質（アディポネクチン）の分泌量が減る一方、インスリンの働きを阻害する物質（ＴＮＡ−αや遊離脂肪酸）が多く分泌されるようになる。そのため、インスリンの作用効果が低下していき、やがて糖尿病を疾患しうる。 One cause of diabetes is insulin resistance (abnormal glucose metabolism). Insulin resistance is a state in which the action effect of insulin is reduced. In some cases, insulin secretion in the body becomes excessive in an attempt to regulate blood sugar, leading to hyperinsulinemia. Insulin resistance is relatively common in obese people. When nutrients exceeding the basal metabolism are continuously taken up by cells, fat cells are enlarged, thereby reducing the secretion amount of a substance that improves the action of insulin (adiponectin) and a substance that inhibits the action of insulin (TNA- A lot of α and free fatty acids are secreted. Therefore, the action effect of insulin decreases, and diabetes may eventually be caused.

さらに、インスリン抵抗性は、遺伝的影響、並びに特定の栄養素の欠乏、過剰なカロリー摂取及び運動不足などの環境の影響によって生じるものとされている。インスリン抵抗性は、メタボリックシンドロームの主要な因子の１つであることも分かっている。メタボリックシンドロームとは、空腹時の血糖値が高く、糖尿病、高血圧、異常脂血症、腹部肥満、痛風やアテローム性の動脈硬化などを発症させうる総合的な代謝異常をいう。米国では、約４，７００万人もの人間（成人の約４人に１人）がメタボリックシンドロームに罹患していると報告されている（非特許文献１）。 In addition, insulin resistance has been attributed to genetic effects and environmental effects such as specific nutrient deficiencies, excessive caloric intake and lack of exercise. Insulin resistance has also been found to be one of the major factors in metabolic syndrome. Metabolic syndrome refers to a comprehensive metabolic abnormality that has a high fasting blood glucose level and can cause diabetes, hypertension, dyslipidemia, abdominal obesity, gout, atherosclerosis, and the like. In the United States, about 47 million people (about 1 in 4 adults) are reported to suffer from metabolic syndrome (Non-patent Document 1).

インスリン抵抗性を改善する治療薬の成分として、チアゾリジン誘導体が知られている。該治療薬の作用機序について説明すると、該誘導体が受容体であるＰＰＡＲγに結合し、ＰＰＡＲγの活性を向上させる。ＰＰＡＲとは、ステロイド受容体スーパーファミリーに属する核内受容体タンパク質であり、現在までにα，γ，δの三つのサブタイプが報告されている。このうち、ＰＰＡＲαは、肝臓、膵臓、骨格筋に多く発現し、脂肪酸燃焼を調節し、ＰＰＡＲδは、骨格筋をはじめとする各組織に普遍的に存在し、ＰＰＡＲγは、脂肪細胞の分化に重要な役割を果たしている。活性化されたＰＰＡＲγは、前駆脂肪細胞を肥大化していない正常な脂肪細胞に分化誘導すると同時に、肥大化した脂肪細胞のアポトーシスを誘導する。分化した脂肪細胞は、アディポネクチンを積極的に分泌するため、糖や脂質の代謝が活発になり、血液中からの糖の取り込みが促進され、インスリン抵抗性を改善する。このような脂肪細胞の働きは、糖尿病のみならず、高脂血症の予防や治療に繋がる。しかし、上記治療薬は、肝機能障害、浮腫、心肥大の副作用を引き起こす問題点があった。 Thiazolidine derivatives are known as components of therapeutic agents that improve insulin resistance. Describing the mechanism of action of the therapeutic agent, the derivative binds to the receptor PPARγ and improves the activity of PPARγ. PPAR is a nuclear receptor protein belonging to the steroid receptor superfamily, and three subtypes of α, γ, and δ have been reported so far. Of these, PPARα is highly expressed in the liver, pancreas, and skeletal muscle, regulates fatty acid burning, PPARδ is universally present in each tissue including skeletal muscle, and PPARγ is important for adipocyte differentiation Plays an important role. Activated PPARγ induces differentiation of preadipocytes into non-hypertrophic normal adipocytes and at the same time induces apoptosis of enlarged adipocytes. Differentiated adipocytes actively secrete adiponectin, so that sugar and lipid metabolism are activated, sugar uptake is promoted from the blood, and insulin resistance is improved. Such a function of fat cells leads to prevention and treatment of hyperlipidemia as well as diabetes. However, the above therapeutic agents have problems that cause side effects such as liver dysfunction, edema, and cardiac hypertrophy.

ＪＡＭＡ，２８７，ｐ．３５６−３５９，２００２JAMA, 287, p. 356-359, 2002

本発明が解決しようとする課題は、チアゾリジン誘導体とは異なる構造を有する、ＰＰＡＲγのアゴニスト活性を向上させる安全性の高い物質を提供することにある。 The problem to be solved by the present invention is to provide a highly safe substance that improves the agonist activity of PPARγ, which has a structure different from that of a thiazolidine derivative.

上記課題を解決するための本発明は、下記式（１）： The present invention for solving the above-mentioned problems is represented by the following formula (1)

上記式（１）中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基または炭素数１〜４のアシル基であり、
Ｒ^３は、水素原子、ヒドロキシル基または炭素数１〜４のアルキル基である、
物質である、ＰＰＡＲγ活性化剤である。 In the above formula (1),
R ¹ and R ² are each independently a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or an acyl group having 1 to 4 carbon atoms,
R ³ is a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms,
It is a substance, PPARγ activator.

本発明によれば、チアゾリジン誘導体とは異なる構造を有する、ＰＰＡＲγのアゴニスト活性を向上させる安全性の高い物質を提供することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the highly safe substance which improves the agonist activity of PPAR (gamma) which has a structure different from a thiazolidine derivative can be provided.

図１は、ＰＰＡＲγ活性化能の結果を示すグラフである。FIG. 1 is a graph showing the results of PPARγ activation ability.

＜本発明の第１＞
本発明の第１は、下記式（１）： <First of the present invention>
The first of the present invention is the following formula (1):

（Ｒ^１およびＲ^２）
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基または炭素数１〜４のアシル基である。ここで、炭素数１〜４のアルキル基としては、直鎖状、分枝状、環状のいずれであってもよく、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基などが挙げられる。中でも、ＰＰＡＲγ活性を高くするという観点で、ブチル基、プロピル基、エチル基、メチル基が好ましく、より好ましくは、エチル基またはメチル基である。また、炭素数１〜４のアシル基としては、直鎖状、分枝状、環状のいずれであってもよく、例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基等が挙げられる。中でも、ＰＰＡＲγ活性を高くするという観点で、ブチリル基、プロピオニル基またはアセチル基が好ましい。 (R ¹ and R ² )
R ¹ and R ² are each independently a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or an acyl group having 1 to 4 carbon atoms. Here, the alkyl group having 1 to 4 carbon atoms may be linear, branched, or cyclic, for example, methyl group, ethyl group, propyl group, isopropyl group, cyclopropyl group, butyl Group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, cyclobutyl group and the like. Among these, from the viewpoint of increasing the PPARγ activity, a butyl group, a propyl group, an ethyl group, and a methyl group are preferable, and an ethyl group or a methyl group is more preferable. Further, the acyl group having 1 to 4 carbon atoms may be linear, branched or cyclic, and examples thereof include an acetyl group, a propionyl group, a butyryl group, and an isobutyryl group. Of these, a butyryl group, a propionyl group or an acetyl group is preferable from the viewpoint of increasing the PPARγ activity.

Ｒ^１およびＲ^２としては、ＰＰＡＲγ活性を高くするという観点で、好ましくは、それぞれ独立して、水素原子、ブチル基、プロピル基、エチル基、メチル基である。より好ましくは、Ｒ^１およびＲ^２は、水素原子、水素原子の組み合せ；水素原子、メチル基の組み合せ；メチル基、メチル基の組み合せ；メチル基、プロピル基の組み合せである。特に好ましくは、Ｒ^１およびＲ^２いずれとも、水素原子の組み合わせである。 R ¹ and R ² are preferably each independently a hydrogen atom, a butyl group, a propyl group, an ethyl group or a methyl group from the viewpoint of increasing the PPARγ activity. More preferably, R ¹ and R ² are a combination of a hydrogen atom and a hydrogen atom; a combination of a hydrogen atom and a methyl group; a combination of a methyl group and a methyl group; and a combination of a methyl group and a propyl group. Particularly preferably, both R ¹ and R ² are a combination of hydrogen atoms.

（Ｒ^３）
Ｒ^３は、水素原子、ヒドロキシル基または炭素数１〜４のアルキル基である。ここで、炭素数１〜４のアルキル基の具体例は、（Ｒ^１およびＲ^２）で述べた通りである。中でも、Ｒ^３は、ＰＰＡＲγ活性を高くするという観点で、水素原子、メチル基またはエチル基が好ましく、特に好ましくは、メチル基である。 (R ³ )
R ³ is a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms. Here, specific examples of the alkyl group having 1 to 4 carbon atoms are as described in (R ¹ and R ² ). Among them, R ³ is preferably a hydrogen atom, a methyl group, or an ethyl group, and particularly preferably a methyl group, from the viewpoint of increasing PPARγ activity.

以上より、Ｒ^１〜Ｒ^３の好ましい組み合わせは、ＰＰＡＲγ活性を高くするという観点で、好ましくは、Ｒ^１およびＲ^２が、水素原子であり、Ｒ^３が、水素原子、メチル基またはエチル基である組み合せであり；さらに好ましくは、Ｒ^１およびＲ^２が、水素原子であり、Ｒ^３が、メチル基である組み合せである。 From the above, a preferable combination of R ^{1 to} R ³ is preferably a group in which R ¹ and R ² are a hydrogen atom, and R ³ is a hydrogen atom, a methyl group, or an ethyl group from the viewpoint of increasing PPARγ activity. More preferably, R ¹ and R ² are a hydrogen atom, and R ³ is a methyl group.

なお、上記式（１）で示される物質がＰＰＡＲγ活性を示すメカニズムは以下の通りと推測される。ただし、本発明の技術的範囲が、かかるメカニズムによって制限されないのは言うまでもない。すなわち、上記式（１）で示される物質が、ＰＰＡＲγのアゴニスト（作動薬）となって作用し、ＰＰＡＲγが核内受容体転写因子であるレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）とヘテロダイマーを形成し、標的遺伝子のプロモーター領域にあるＰＰＡＲ応答配列（ＰＰＲＥ）にリガンド依存的に結合し、標的遺伝子の転写を促進させることにある。 The mechanism by which the substance represented by the above formula (1) exhibits PPARγ activity is assumed as follows. However, it goes without saying that the technical scope of the present invention is not limited by such a mechanism. That is, the substance represented by the above formula (1) acts as an agonist (agonist) of PPARγ, and PPARγ forms a heterodimer with a retinoid X receptor (RXR) that is a nuclear receptor transcription factor, It is intended to promote the transcription of the target gene by binding to the PPAR response element (PPRE) in the promoter region of the target gene in a ligand-dependent manner.

なお、前記式（１）で示される物質は、様々な立体異性体が考えられるが、特に好ましくは、以下（２）の構造を有する。 The substance represented by the formula (1) may have various stereoisomers, and particularly preferably has the following structure (2).

ここで、２’、３’、４’が、それぞれ独立して、逆の立体配置もありうる。 Here, 2 ', 3', and 4 'can each independently have an opposite configuration.

前記式（１）で示される物質を準備する方法としては、従来公知の知見を参照し、あるいは組み合わせることによって、合成することができる。あるいは、市販品を購入することによって準備してもよい。市販品としては、シグマ社が型番Ｄ５０１１で市販している、５’−デオキシ−５’−メチルチオアデノシンがある。 As a method for preparing the substance represented by the formula (1), it can be synthesized by referring to or combining conventionally known knowledge. Or you may prepare by purchasing a commercial item. An example of a commercially available product is 5'-deoxy-5'-methylthioadenosine marketed by Sigma under model number D5011.

ここで、前記式（１）で示される物質を準備するための合成方法について説明すると、アデノシンの無水ジメチルホルムアミド溶液に、２，２−ジメトキシプロパン及び無水ｐ−トルエンスルホン酸を加え撹拌し、２’，３’−イソプロピリデンアデノシン（化合物１）を得；ついで、化合物１の無水ピリジン溶液に、ｐ−トルエンスルホニルクロリドを加え撹拌し、２’，３’−イソプロピリデンー５’−（ｐ−トルエンスルホニル）アデノシン（化合物２）を得；ついで、ナトリウムチオメトキシドのジメチルホルムアミド−メタノール溶液に化合物２を加え撹拌し、２’，３’−イソプロピリデンー５’−メチルチオアデノシン（化合物３）を得；最後に、化合物３のテトラヒドロフラン溶液に、０．１Ｎの塩酸を加えることにより、５’−メチルチオアデノシンを合成することができる。（例えば、特表２００７−５３１７２４Ｐ２３−２６に記載の方法を参照し、本明細書に参考として引用される）。 Here, the synthesis method for preparing the substance represented by the formula (1) will be described. To the anhydrous dimethylformamide solution of adenosine, 2,2-dimethoxypropane and anhydrous p-toluenesulfonic acid are added and stirred. ', 3'-isopropylidene adenosine (compound 1) was obtained; then, p-toluenesulfonyl chloride was added to the anhydrous pyridine solution of compound 1 and stirred, and 2', 3'-isopropylidene-5 '-(p- Toluenesulfonyl) adenosine (compound 2) is obtained; then, compound 2 is added to a dimethylformamide-methanol solution of sodium thiomethoxide and stirred to give 2 ′, 3′-isopropylidene-5′-methylthioadenosine (compound 3). Finally, by adding 0.1N hydrochloric acid to the tetrahydrofuran solution of compound 3, '- it can be synthesized methylthioadenosine. (For example, refer to the method described in JP-T-2007-531724 P23-26, which is incorporated herein by reference).

特に、前記式（１）中、Ｒ^１およびＲ^２が水素原子であり、Ｒ^３がメチル基である物質；は、例えば、食品（貴醸酒、清酒）などに含まれる成分であるので、それを抽出して、適宜精製をすることによって、準備してもよい。言い換えれば、前記式（１）で示される物質は、食品（貴醸酒、清酒）などに含まれる成分であり、ＰＰＡＲγ活性化剤として使用する際に、安全性が高いと言える（参考文献：日本醸造協会雑誌 Vol.71, No.6, Page.469-475、日本醸造協会雑誌 Vol.70, No.8, Page.585-587 (1975)、参考文献：生化学辞典、第３版、東京化学同人Ｐ１４０２）。 In particular, in the formula (1), a substance in which R ¹ and R ² are hydrogen atoms and R ³ is a methyl group; is a component contained in, for example, food (precious sake, sake), May be prepared by extracting and appropriately purifying. In other words, the substance represented by the formula (1) is a component contained in foods (precious sake, sake), and can be said to be highly safe when used as a PPARγ activator (reference: Japan). Japan Brewing Association Magazine Vol.71, No.6, Page.469-475, Japan Brewing Association Magazine Vol.70, No.8, Page.585-587 (1975), Reference: Biochemical Dictionary, 3rd edition, Tokyo Chemical coterie P1402).

この安全性の高いＰＰＡＲγ活性化剤は、前駆脂肪細胞から成熟脂肪細胞への細胞分化促進活性を有し、肥大化脂肪細胞のアポトーシスを誘導するため、本発明の第２で後述もするが、糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化症、肥満症、アルツハイマーなどの予防または治療に用いることができる。 This highly safe PPARγ activator has a cell differentiation promoting activity from preadipocytes to mature adipocytes, and induces apoptosis of hypertrophic adipocytes. It can be used for prevention or treatment of diabetes, hypertension, hyperlipidemia, arteriosclerosis, obesity, Alzheimer and the like.

＜本発明の第２＞
本発明の第２は、本発明の第１のＰＰＡＲγ活性化剤を有効成分として含有する、医薬品である。本発明の第２の医薬品としては、インスリン抵抗性に起因する疾病に対する予防剤若しくは治療剤であれば特に制限させることはなく、例えば、糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化症、肥満症、アルツハイマー（特開２００８−２８５４３８号公報参照）などに対する予防剤または治療剤などが挙げられる。 <Second of the present invention>
The second of the present invention is a pharmaceutical product containing the first PPARγ activator of the present invention as an active ingredient. The second pharmaceutical of the present invention is not particularly limited as long as it is a prophylactic or therapeutic agent for diseases caused by insulin resistance. For example, diabetes, hypertension, hyperlipidemia, arteriosclerosis, obesity And prophylactic or therapeutic agents for Alzheimer (see JP 2008-285438 A) and the like.

本発明の第２の医薬品としては、前記本発明の第１のＰＰＡＲγ活性化剤を単体で、または製薬上許容される担体と配合した、または製薬上許容される溶剤に溶解もしくは懸濁した組成物として、治療の施行前または施行中、または施行後に、経口的または非経口的に患者に投与される。 As the second pharmaceutical product of the present invention, the first PPARγ activator of the present invention is used alone, in combination with a pharmaceutically acceptable carrier, or dissolved or suspended in a pharmaceutically acceptable solvent. As a product, it is administered to patients orally or parenterally before, during or after treatment.

本剤を経口投与用とする場合には、前記本発明の第１のＰＰＡＲγ活性化剤を単体で、または適当な添加剤、例えば、乳糖、ショ糖、マンニット、トウモロコシデンプン、合成もしくは天然ガム、結晶セルロース等の賦形剤、デンプン、セルロース誘導体、アラビアゴム、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボシキメチルセルロースカルシウム、カルボシキメチルセルロースナトリウム、デンプン、コーンスターチ、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム等の滑沢剤、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム等の充填剤または希釈剤等と適宜混合して、錠剤、粉剤、乳剤、懸濁剤、液剤、散剤（粉末）、丸剤、および顆粒剤等の固形製剤にすることができる。また、硬質または軟質のゼラチンカプセル等を用いてカプセル剤としてもよい。これらの固形製剤には、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、セルロースアセテートフタレート、メタアクリレートコポリマー等の被覆用基剤（コーティング剤）を用いて腸溶性被覆（腸溶性コーティング）を施してもよい。さらに、前記本発明の第１のＰＰＡＲγ活性化剤を、精製水、生理食塩水等の一般的に用いられる不活性希釈剤に溶解して、必要に応じて、この溶液に浸潤剤、乳化剤、分散助剤、界面活性剤、甘味料、フレーバー、芳香物質等を適宜添加することにより、シロップ剤、エリキシル剤等の液状製剤とすることもできる。 When the agent is used for oral administration, the first PPARγ activator of the present invention alone or an appropriate additive such as lactose, sucrose, mannitol, corn starch, synthetic or natural gum , Excipients such as crystalline cellulose, starch, cellulose derivatives, binders such as gum arabic, gelatin, polyvinylpyrrolidone, carboxymethyl cellulose calcium, sodium carboxymethyl cellulose, disintegrants such as starch, corn starch, sodium alginate, talc, stearin Tablets, powders, emulsions, suspensions, liquids, powders, mixed as appropriate with lubricants such as magnesium oxide and sodium stearate, fillers or diluents such as calcium carbonate, sodium carbonate, calcium phosphate, and sodium phosphate (Powder), pills, and solids such as granules It can be agents. Moreover, it is good also as a capsule using a hard or soft gelatin capsule. These solid preparations are provided with an enteric coating (enteric coating) using a coating base (coating agent) such as hydroxypropyl methylcellulose phthalate, hydroxypropyl methylcellulose acetate succinate, cellulose acetate phthalate, and methacrylate copolymer. May be. Furthermore, the first PPARγ activator of the present invention is dissolved in a generally used inert diluent such as purified water or physiological saline, and an infiltrant, emulsifier, Liquid preparations such as syrups and elixirs can be prepared by appropriately adding a dispersion aid, surfactant, sweetener, flavor, fragrance and the like.

また、非経口投与用とする場合には、前記本発明の第１のＰＰＡＲγ活性化剤を精製水、リン酸緩衝液等の適当な緩衝液、生理的食塩水、リンガー溶液（リンゲル液）、ロック溶液等の生理的塩類溶液、エタノール、グリセリン及び慣用される界面活性剤等と適当に組み合わせた滅菌された水溶液、非水溶液、懸濁液、リポソームまたはエマルジョンとして、好ましくは注射用滅菌水溶液として、静脈内、皮下、筋肉内等に投与される。この際、液状製剤は、生理学的なｐＨ、好ましくは６〜８の範囲内のｐＨを有することが好ましい。また、ローション剤、懸濁剤、乳剤等の液状製剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏等の半固形製剤、散剤、粉剤（粉状）もしくは用時溶解（液状）して塗布するための顆粒剤等の固形製剤として、または貼付剤などの外用剤として、標的部位およびその周辺部位に経皮的に投与してもよい。さらに、ペレットによる埋め込み、または坐薬用基剤を用いた坐薬として投与されることも可能である。上述したうち、好ましい製剤や投与形態等は、担当の医師によって選択される。前記医薬品のローション剤、クリーム剤及び軟膏などの半固形製剤は、前記医薬品を、脂肪、脂肪油、ラノリン、ワセリン、パラフィン、蝋、硬膏剤、樹脂、プラスチック、グリコール類、高級アルコール、グリセリン、水、乳化剤及び懸濁化剤などよりなる群から選択される一種以上と適宜混和することにより得られる。 For parenteral administration, the first PPARγ activator of the present invention may be purified water, an appropriate buffer solution such as a phosphate buffer, physiological saline, Ringer solution (Ringer solution), lock As a sterilized aqueous solution, non-aqueous solution, suspension, liposome or emulsion suitably combined with physiological salt solution such as solution, ethanol, glycerin and commonly used surfactants, preferably as a sterile aqueous solution for injection, intravenous It is administered internally, subcutaneously or intramuscularly. In this case, the liquid preparation preferably has a physiological pH, preferably a pH in the range of 6-8. In addition, liquid preparations such as lotions, suspensions and emulsions, semi-solid preparations such as gels, creams and ointments, powders, powders (powder) or granules for application after dissolution (liquid) And the like, or as an external preparation such as a patch, may be transdermally administered to the target site and its peripheral site. Furthermore, it can be administered as a suppository using a pellet or an suppository base. Among the above-mentioned, a preferable formulation, dosage form, etc. are selected by the doctor in charge. Semi-solid preparations such as lotions, creams and ointments of the above-mentioned pharmaceuticals include the above-mentioned pharmaceuticals, fat, fatty oil, lanolin, petrolatum, paraffin, wax, plaster, resin, plastic, glycols, higher alcohol, glycerin, water It is obtained by appropriately mixing with one or more selected from the group consisting of emulsifiers and suspending agents.

本発明の第２の医薬品に含まれる、本発明の第１のＰＰＡＲγ活性化剤の濃度は、投与形態、疾病の種類や重篤度や目的とする投与量などによって様々であるが、一般的には、医薬品の原料の全質量に対して０．０１〜８０質量％、好ましくは０．１〜６０質量％である。特に、本発明の製剤が経口投与される場合には、医薬品の原料の全質量に対して０．００１〜１００質量％、好ましくは０．０１〜１００質量％であり、非経口投与される場合には、医薬品の原料の全質量に対して０．０１〜８０質量％、好ましくは０．１〜６０質量％であることが好ましい。 The concentration of the first PPARγ activator of the present invention contained in the second pharmaceutical agent of the present invention varies depending on the dosage form, the type and severity of the disease, the target dose, etc. Is 0.01 to 80% by mass, preferably 0.1 to 60% by mass, based on the total mass of the raw material of the pharmaceutical. In particular, when the preparation of the present invention is orally administered, it is 0.001 to 100% by mass, preferably 0.01 to 100% by mass, based on the total mass of the raw material of the pharmaceutical, and is administered parenterally Is preferably from 0.01 to 80% by mass, and preferably from 0.1 to 60% by mass, based on the total mass of the raw material of the pharmaceutical.

本発明の第２の医薬品に含まれる、本発明の第１のＰＰＡＲγ活性化剤の用量は、患者の年齢、体重及び症状、目的とする投与形態や方法、治療効果、および処置期間等によって異なり、正確な量は医師により決定されるものであるが、通常、経口、非経口投与ともに、ＰＰＡＲγ活性化剤の投与量換算で、毎回０．１〜２０００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量の範囲である。より好ましくは、ＰＰＡＲγ活性化剤の投与量換算で、毎回０．５〜５００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量の範囲である。 The dose of the first PPARγ activator of the present invention contained in the second pharmaceutical agent of the present invention varies depending on the age, weight and symptoms of the patient, the intended dosage form and method, therapeutic effect, treatment period, etc. The exact amount is determined by the doctor, but is usually within the range of 0.1 to 2000 mg / kg body weight for each oral and parenteral administration in terms of the dose of the PPARγ activator. . More preferably, it is a dose range of 0.5 to 500 mg / kg body weight each time in terms of the dose of the PPARγ activator.

＜本発明の第３＞
本発明の第３は、下記式（１）： <Third invention>
The third of the present invention is the following formula (1):

上記式（１）中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基または炭素数１〜４のアシル基であり、
Ｒ^３は、水素原子、ヒドロキシル基または炭素数１〜４のアルキル基である、
物質を含む、食品である。 In the above formula (1),
R ¹ and R ² are each independently a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or an acyl group having 1 to 4 carbon atoms,
R ³ is a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms,
It is a food containing substance.

本発明の第３において、「食品」は、医薬以外のものであって、哺乳動物が経口摂取可能な形態のものであれば特に制限はなく、その形態も液状物（溶液、懸濁液、乳濁液など）、半液体状物、粉末、または固体成形物のいずれのものであってもよい。このため食品は、例えば飲料の形態であってもよく、また、サプリメントのような栄養補助食品の錠剤形態であってもよい。 In the third aspect of the present invention, the “food” is not a pharmaceutical and is not particularly limited as long as it is in a form that can be taken orally by mammals, and the form is also a liquid (solution, suspension, Emulsions, etc.), semi-liquids, powders, or solid moldings. Therefore, the food may be in the form of a beverage, for example, or in the form of a dietary supplement tablet such as a supplement.

食品として具体的には、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類；清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、ジュース、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料などの飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、唐揚げ粉、パン粉などの小麦粉製品；飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、ようかん、和菓子、デザート菓子などの菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類などの調味料；加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズなどの油脂類；乳飲料、牛乳、乳清飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、プリン、アイスクリーム類、クリーム類などの乳製品；魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品などの水産加工品；畜肉ハム・ソーセージなどの畜産加工品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアルなどの農産加工品；冷凍食品；栄養食品などが挙げられる。 Specific examples of foods include instant noodles, retort foods, canned foods, microwave oven foods, instant soups and miso soups, freeze-dried foods, etc .; soft drinks, fruit juice drinks, vegetable drinks, soy milk drinks, coffee drinks Beverages such as juices, tea beverages, powdered beverages, concentrated beverages, nutritional beverages, alcoholic beverages; flour products such as bread, pasta, noodles, cake mixes, fried flour, bread crumbs; rice cakes, caramel, chewing gum, chocolate, cookies , Biscuits, cakes, pie, snacks, crackers, yokan, Japanese confectionery, dessert confectionery, etc .; sauce, processed tomato seasoning, flavor seasoning, cooking mix, sauce, dressing, soup, curry and stew Seasonings such as processed oils; processed fats and oils, butter, margarine, mayonnaise, etc .; milk beverages, milk Milk products such as whey beverages, yogurts, lactic acid bacteria beverages, pudding, ice creams and creams; processed fishery products such as fish ham and sausages and fish paste products; processed livestock products such as livestock ham and sausages; canned agricultural products and jams -Processed agricultural products such as marmalades, pickles, boiled beans, cereals; frozen foods; nutritional foods.

また、通常の食品原料として使用されているもの、すなわち、デキストリン、セルロース、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料及び保存剤よりなる群から選択される１種以上を適宜配合してもよい。 In addition, those used as normal food ingredients, i.e., dextrin, cellulose, glucose, fructose, sucrose, maltose, sorbitol, stevioside, rubusoside, corn syrup, lactose, citric acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, Lactic acid, L-ascorbic acid, dl-α-tocopherol, sodium erythorbate, glycerin, propylene glycol, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, gum arabic, carrageenan, Selected from the group consisting of casein, gelatin, pectin, agar, vitamin Bs, nicotinamide, calcium pantothenate, amino acids, calcium salts, pigments, fragrances and preservatives The may be appropriately blended or more species.

本発明の第３の食品は、糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化症、肥満症に罹患しているか、または罹患していることが疑われる者、あるいは糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化症、肥満症への罹患のリスクが高い者に対して好適に使用することができる。ここで、糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化症、肥満症への罹患のリスクが高い者としては、例えば、体組成や食生活をはじめとする各種の指標を考慮して、または、健康診断等の診断・診察から、当該リスクが高いと判断された者や、そのようなリスクが高いと本人または周囲の者から認識されるに至った者が含まれる。 The third food of the present invention is a person suffering from or suspected of having diabetes, hypertension, hyperlipidemia, arteriosclerosis, obesity, or diabetes, hypertension, hyperlipidemia. It can be suitably used for those who have a high risk of suffering from arteriosclerosis and obesity. Here, as a person having a high risk of suffering from diabetes, hypertension, hyperlipidemia, arteriosclerosis, obesity, for example, considering various indicators including body composition and dietary life, or This includes persons who have been judged to be at high risk from diagnosis / diagnosis such as medical examinations, and those who have been recognized by the person or those around him as having such high risk.

本発明において「食品」には、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、疾病リスク低減表示が付された食品、栄養機能食品、または、病者用食品のような分類のものも包含される。さらに「食品」という用語は、ヒト以外の哺乳動物を対象として使用される場合には、飼料を含む意味で用いられうる。ここでいう特定保健用食品とは、体の生理学的機能などに影響を与える保健機能成分を含む食品で、血圧、血中のコレステロールなどを正常に保つことを助けたり、おなかの調子を整えるのに役立つなどの特定の保健の用途に資する旨を表示するものをいう。このような食品は、食品が疾病リスクを低減する可能性があること表示した食品、すなわち、疾病リスク低減表示を付した食品であってもよい。ここで、疾病リスク低減表示とは、疾病リスクを低減する可能性のある食品の表示であって、ＦＡＯ／ＷＨＯ合同食品規格委員会（コーデックス委員会）の定める規格に基づいて、またはその規格を参考にして、定められた表示または認められた表示でありうる。 In the present invention, “food” is classified as health food, functional food, food for specified health use, dietary supplement, food with a disease risk reduction label, functional food for nutrition, or food for the sick. Are also included. Furthermore, the term “food” can be used to include feed when used for mammals other than humans. Specified health foods here are foods that contain health functional ingredients that affect the body's physiological functions, etc., and help maintain normal blood pressure and cholesterol in the blood, and adjust the stomach. It means that it is useful for a specific health purpose, such as useful. Such a food may be a food that indicates that the food may reduce the risk of disease, that is, a food with a disease risk reduction label. Here, the disease risk reduction label is a label for foods that may reduce the disease risk, and is based on or based on the standard established by the FAO / WHO Joint Food Standards Committee (Codex Committee). The display may be a prescribed display or an approved display with reference to FIG.

本発明の他の形態によれば、前記式（１）で示される物質を有効量含有する食品であって、糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化症、肥満症を予防および／または改善する機能を有し、その機能表示が付された食品が提供される。ここで食品に付される機能表示は、例えば、製品の本体、容器、包装、説明書、添付文書、または宣伝物のいずれかに付することができる。 According to another aspect of the present invention, there is provided a food containing an effective amount of the substance represented by the formula (1) for preventing and / or improving diabetes, hypertension, hyperlipidemia, arteriosclerosis and obesity. The food which has the function to perform and to which the function indication was attached is provided. Here, the function indication attached to the food can be attached to, for example, the main body of the product, the container, the packaging, the instruction, the attached document, or the promotional material.

本発明の第３の食品の製造にあたっては、通常の食品の処方設計に用いられている糖類、香料、果汁、食品添加剤、安定剤などを適宜添加することができる。食品の製造は、当該技術分野に公知の製造技術を参照して実施することができる。 In the production of the third food of the present invention, sugars, fragrances, fruit juices, food additives, stabilizers, and the like used in normal food formulation design can be added as appropriate. The production of food can be performed with reference to production techniques known in the art.

本発明の第３の食品に含まれる、前記式（１）で示される物質の含有量は、各食品の組成などによって様々であるため特に限定されることはないが、前記食品の全質量に対して０．０００１〜５０質量％であることが好ましく、０．０００１〜１０質量％であることがより好ましい。上記した範囲内の場合、食事療法などの効果が有意に向上しうる。 The content of the substance represented by the formula (1) contained in the third food of the present invention is not particularly limited because it varies depending on the composition of each food, but the total mass of the food. It is preferable that it is 0.0001-50 mass% with respect to it, and it is more preferable that it is 0.0001-10 mass%. When it is within the above-mentioned range, the effects such as diet therapy can be significantly improved.

上記、本発明の第１〜第３で述べたように、上記式（１）で示される物質が、ＰＰＡＲγ活性を示し、インスリン抵抗性を改善する治療薬の成分として用いられることによって、つまり、本発明の第２の医薬品または本発明の第３の食品として用いられることによって、以下の機構を有する。すなわち、上記式（１）で示される物質がペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）に結合し、核内受容体転写因子であるレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）とヘテロダイマーを形成し、標的遺伝子のプロモーター領域にあるＰＰＡＲ応答配列（ＰＰＲＥ）にリガンド依存的に結合し、標的遺伝子の転写を促進させ、前駆脂肪細胞を肥大化していない正常な脂肪細胞（成熟脂肪細胞（小型脂肪細胞））に分化促進する。また、肥大化した脂肪細胞（肥大化脂肪細胞）のアポトーシスを誘導する。分化した脂肪細胞は、アディポネクチンを積極的に分泌するため、糖や脂質の代謝が活発になり、血液中からの糖の取り込みが促進され、インスリン抵抗性を改善する。 As described above in the first to third aspects of the present invention, the substance represented by the formula (1) is used as a component of a therapeutic agent that exhibits PPARγ activity and improves insulin resistance. When used as the second pharmaceutical product of the present invention or the third food product of the present invention, it has the following mechanism. That is, the substance represented by the above formula (1) binds to peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ), forms a heterodimer with retinoid X receptor (RXR), which is a nuclear receptor transcription factor, and targets Normal adipocytes (mature adipocytes (small adipocytes)) that bind to the PPAR response element (PPRE) in the promoter region of the gene in a ligand-dependent manner, promote transcription of the target gene, and do not enlarge preadipocytes To promote differentiation. It also induces apoptosis of enlarged fat cells (hypertrophic fat cells). Differentiated adipocytes actively secrete adiponectin, so that sugar and lipid metabolism are activated, sugar uptake is promoted from the blood, and insulin resistance is improved.

なお、本発明の範囲は、上記した実施態様に限定されるものではなく、当業者であれば、本発明の要旨を逸脱しない範囲内において種々の変更を加えることができる。 It should be noted that the scope of the present invention is not limited to the above-described embodiments, and those skilled in the art can make various modifications without departing from the spirit of the present invention.

本発明について、下記の実施例によりさらに詳細に説明するが、当該実施例はあくまで例示にすぎず、本発明は以下に限定されることはない。 The present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, the examples are merely illustrative, and the present invention is not limited to the following.

＜実施例１＞
１．１
５’−デオキシ−５’−メチルチオアデノシン（ＭＴＡ；シグマ社型番Ｄ５０１１）をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で１０００μｇ/ｍＬになるように、溶解させた。 <Example 1>
1.1
5′-deoxy-5′-methylthioadenosine (MTA; Sigma model number D5011) was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) so as to be 1000 μg / mL.

１．２ＣＯＳ−１細胞の形質転換および被検試料の添加
ＣＯＳ−１細胞をトリプシン処理により回収し、１０００ｒｐｍ、４℃で、３分間遠心分離した後、上清を除去した。得られた細胞を、２ｍｌの培地（ＤＭＥＭ培地）に分散して、６０ｍｍ培養シャーレ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に５×１０^５ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌの密度で播いた後、３７℃、５％ＣＯ_２存在下にて、２４時間、培養した。 1.2 Transformation of COS-1 cells and addition of test sample COS-1 cells were collected by trypsin treatment, centrifuged at 1000 rpm and 4 ° C for 3 minutes, and then the supernatant was removed. The obtained cells were dispersed in 2 ml of medium (DMEM medium) and seeded at a density of 5 × 10 ⁵ cells / well in a 60 mm culture dish (Corning), and then in the presence of 37 ° C. and 5% CO _2. For 24 hours.

形質転換には、ＥｆｆｅｃｔｅｎｅＴｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を使用した。即ち、１．５ｍｌのチューブに、ＢｕｆｆｅｒＥＣ１５０μｌ、ｐＭ−ｈＰＰＡＲγ−ＧＡＬ４１μｇ、ｐＵＡＳｇ−ｔｋ−Ｌｕｃ１μｇ、ｐＳＥＡＰ−ｃｏｎｔｒｏｌｖｅｃｔｏｒ１μｇ、及び最後にＥｎｈａｎｃｅｒ２４μｌを入れ、ボルテックス（ｖｏｒｔｅｘ）で１秒間攪拌した。２５℃で３分間放置した後、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅを２５μｌ加え、ボルテックス（ｖｏｒｔｅｘ）で１０秒間攪拌した後、２５℃で７分間放置した。この間に、６０ｍｍ培養シャーレの培地（ＤＭＥＭ培地）を除去し、新しく培地（ＤＭＥＭ培地）を４ｍｌ入れて培地交換をした。７分後、１．５ｍｌのチューブに培地を１ｍｌ加え、２回、ピペッティングにより懸濁して６０ｍｍ培養シャーレに全量を滴下し、３７℃、５％ＣＯ_２存在下にて、１６時間、培養した。 For transformation, Effectene Transfection Reagent (QIAGEN) was used. Specifically, 150 μl of Buffer EC, 1 μg of pM-hPPARγ-GAL4, 1 μg of pUASg-tk-Luc, 1 μg of pSEAP-control vector, and finally 24 μl of Enhancer were placed in a 1.5 ml tube and vortexed for 1 second. . After leaving at 25 ° C. for 3 minutes, 25 μl of Effectene was added, stirred for 10 seconds with vortex, and then left at 25 ° C. for 7 minutes. During this time, the medium (DMEM medium) of the 60 mm culture dish was removed, and 4 ml of a new medium (DMEM medium) was newly added to exchange the medium. After 7 minutes, 1 ml of the medium was added to a 1.5 ml tube, suspended twice by pipetting, the whole amount was dropped into a 60 mm culture dish, and cultured for 16 hours in the presence of 37 ° C. and 5% CO ₂ . .

形質転換した細胞をトリプシン処理により回収し、１０００ｒｐｍ、４℃で、３分間、遠心分離した後、上清を除去した。得られた細胞を、１０ｍｌの培地（ＤＭＥＭ培地）に懸濁して９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅ（ＮＵＮＣ）に１２５μｌ／ｗｅｌｌ播き、３７℃、５％ＣＯ_２存在下にて、１〜２時間、培養した。その後、１．２で調製した被検試料を最終濃度２５０μｇ/ｍＬとなるように添加し、穏やかに攪拌して、３７℃、５％ＣＯ_２存在下にて、２４時間培養した。 The transformed cells were collected by trypsin treatment, centrifuged at 1000 rpm and 4 ° C. for 3 minutes, and then the supernatant was removed. The obtained cells were suspended in 10 ml of medium (DMEM medium), seeded on 96-well plate (NUNC) at 125 μl / well, and cultured at 37 ° C. in the presence of 5% CO _{2 for} 1-2 hours. Thereafter, the test sample prepared in 1.2 was added to a final concentration of 250 μg / mL, gently stirred, and cultured for 24 hours in the presence of 37 ° C. and 5% CO ₂ .

１．３Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定
１．２における、被検試料添加から２４時間後、９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅから培地を２５μｌ／ｗｅｌｌ回収し、９６ｗｅｌｌｗｈｉｔｅｐｌａｔｅに移した。その後、残りの１００μｌ／ｗｅｌｌに、３７℃にて融解したルシフェラーゼ（Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）活性測定用溶液を１００μｌ／ｗｅｌｌ添加し、暗所にて３５分間反応させた後、それぞれのＬｕｃｉｆｅｒａｓｅの発光強度（下記式中の、「被検試料のＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ発光強度」）を測定した。なお、上記方法において、比較対照として、被検試料を添加する代わりにＤＭＳＯを添加する以外は、同様の実験を行った（下記式中の、「ＤＭＳＯのＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ発光強度」）。また、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定用溶液は、下記に従って調製された。 1.3 Measurement of Luciferase Activity 24 hours after addition of the test sample in 1.2, 25 μl / well of the medium was collected from the 96-well plate and transferred to a 96-well white plate. Thereafter, 100 μl / well of a luciferase activity measurement solution melted at 37 ° C. was added to the remaining 100 μl / well, reacted for 35 minutes in the dark, and then the luminescence intensity of each Luciferase (the following formula) Among them, “Luciferase emission intensity of test sample”) was measured. In the above method, as a comparative control, a similar experiment was performed except that DMSO was added instead of adding the test sample (“Luciferase emission intensity of DMSO” in the following formula). Moreover, the solution for measuring Luciferase activity was prepared according to the following.

１．４Ｓｅｃｒｅｔｅｄａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＳＥＡＰ）活性の測定
１．２における、被検試料添加から２４時間後、９６ｗｅｌｌｐｌａｔｅから回収した培地２５μｌ／ｗｅｌｌに、１×ＤｉｌｌｕｔｉｏｎＢｕｆｆｅｒ２５μｌ／ｗｅｌｌを添加した。セロハンテープで蓋をした後、穏やかに攪拌し、６５℃で３０分間、放置した。その後、４℃に冷却し、２５℃に戻してから、ＡｓｓａｙＢｕｆｆｅｒ９０μｌ／ｗｅｌｌを添加して、穏やかに攪拌した。２５℃で５分間放置し、ＭＵＰｓｏｌｕｔｉｏｎ１０μｌ／ｗｅｌｌを添加して、穏やかに攪拌した。暗所にて２５℃で６０分間反応させた後、４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅに基づくＳＥＡＰの蛍光強度（Ｅｘ＝３６０ｎｍ、Ｅｍ＝４６０ｎｍ）（下記式中の、「被検試料のＳＥＡＰ蛍光強度」）を測定した。なお、上記方法において、比較対照として、被検試料を添加する代わりにＤＭＳＯを添加する以外は、同様の実験を行った（下記式中の、「ＤＭＳＯのＳＥＡＰ蛍光強度」）。また、１×ＤｉｌｌｕｔｉｏｎＢｕｆｆｅｒ、ＡｓｓａｙＢｕｆｆｅｒ及びＭＵＰｓｏｌｕｔｉｏｎは、１．５に従って調製された。 1.4 Measurement of Secreted Alkaline Phosphatase (SEAP) Activity In 1.2, 24 hours after addition of the test sample, 1 × Dilution Buffer 25 μl / well was added to 25 μl / well of the medium collected from the 96-well plate. After capping with cellophane tape, the mixture was gently stirred and left at 65 ° C. for 30 minutes. Then, after cooling to 4 degreeC and returning to 25 degreeC, Assay Buffer 90microliter / well was added and it stirred gently. The mixture was left at 25 ° C. for 5 minutes, 10 μl / well of MUP solution was added, and the mixture was gently stirred. After reacting in the dark at 25 ° C. for 60 minutes, the fluorescence intensity of SEAP based on 4-methyl umbelliferone (Ex = 360 nm, Em = 460 nm) (“SEAP fluorescence intensity of test sample” in the following formula) It was measured. In the above method, a similar experiment was performed except that DMSO was added instead of adding the test sample as a comparative control (“SNAP fluorescence intensity of DMSO” in the following formula). In addition, 1 × Dilution Buffer, Assay Buffer, and MUP solution were prepared according to 1.5.

１．５試薬の調製法
１．３で使用されるＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定用溶液は、以下のようにして調製した。すなわち、６０ｍＭＴｒｉｃｉｎｅ−ＮａＯＨ（ｐＨ７．８）、１６ｍＭ（ＭｇＣＯ_３）_４Ｍｇ（ＯＨ）_２・５Ｈ_２Ｏ（塩基性ＭｇＣＯ_３）、０．４ｍＭＥＤＴＡ、１０％Ｓｕｒｆａｃｔ−ＡｍｐｓＸ−１００（Ｔｈｅｒｍｏ）、０．５ｍＭＤ−Ｌｕｃｉｆｅｒｉｎｐｏｔａｓｓｉｕｍｓａｌｔ（ナカライテスク）、１．５ｍＭＡｄｅｎｏｓｉｎｅ５’−ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＳＩＧＭＡ）、０．５ｍＭＣｏｅｎｚｙｍｅＡ（ＳＩＧＭＡ）、及び０．１ｍＭ β−Ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌを超純水で調製し、１０ｍｌ程度ずつ分注して使用直前まで−２０℃に保存した。 1.5 Reagent Preparation Method The solution for measuring Luciferase activity used in 1.3 was prepared as follows. That is, 60 mM Tricine-NaOH (pH 7.8), 16 mM (MgCO ₃ ) ₄ Mg (OH) ₂ .5H ₂ O (basic MgCO ₃ ), 0.4 mM EDTA, 10% Surfact-Amps X-100 (Thermo) , 0.5 mM D-Luciferin potassium salt (Nacalai Tesque), 1.5 mM Adenosine 5′-triphosphate (SIGMA), 0.5 mM Coenzyme A (SIGMA), and 0.1 mM β-Mercapto ethanol with ultrapure water About 10 ml was dispensed and stored at −20 ° C. until just before use.

また、１．４で使用される１×ＤｉｌｌｕｔｉｏｎＢｕｆｆｅｒは、以下のようにして調製した。すなわち、使用直前に、５×ＤｉｌｌｕｔｉｏｎＢｕｆｆｅｒをＨ_２Ｏで希釈した。ここで、５×ＤｉｌｌｕｔｉｏｎＢｕｆｆｅｒは、ＮａＣｌ４．３８ｇ、Ｔｒｉｓ２．４２ｇを９０ｍｌの超純水で溶解することによって調製した。１２ＮＨＣｌを加えてｐＨ７．２に調整し、使用直前まで４℃で保存した。 Further, 1 × Dilution Buffer used in 1.4 was prepared as follows. That is, immediately before use, 5 × Dilution Buffer was diluted with H ₂ O. Here, 5 × Dilution Buffer was prepared by dissolving 4.38 g of NaCl and 2.42 g of Tris in 90 ml of ultrapure water. 12N HCl was added to adjust to pH 7.2 and stored at 4 ° C. until just before use.

また、１．４で使用されるＡｓｓａｙＢｕｆｆｅｒは、以下のようにして調製した。すなわち、Ｌ−ｈｏｍｏａｒｇｉｎｉｎｅ０．９ｇ、ＭｇＣｌ_２０．０４ｇを超純水１５８ｍｌに溶解し、ｄｉｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ４２ｍｌを加えた。１２ＮＨＣｌを加えてｐＨ９．８に調整し、使用直前まで４℃で保存した。 Moreover, Assay Buffer used in 1.4 was prepared as follows. That is, 0.9 g of L-homoargine and 0.04 g of MgCl ₂ were dissolved in 158 ml of ultrapure water, and 42 ml of diethylamine were added. 12N HCl was added to adjust to pH 9.8 and stored at 4 ° C. until just before use.

また、１．４で使用されるＭＵＰｓｏｌｕｔｉｏｎは、以下のようにして調製した。すなわち、１×ＤｉｌｌｕｔｉｏｎＢｕｆｆｅｒ２．７μｌ／ｗｅｌｌ、ＡｓｓａｙＢｕｆｆｅｒ７μｌ／ｗｅｌｌ、１０×ＭＵＰ０．３μｌ／ｗｅｌｌを混ぜた。１０×ＭＵＰ、４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＭＵＰ）２．５６ｍｇを超純水１０００μｌで溶解し、使用直前まで−２０℃にて保存した。 The MUP solution used in 1.4 was prepared as follows. That is, 1 × Dilution Buffer 2.7 μl / well, Assay Buffer 7 μl / well, and 10 × MUP 0.3 μl / well were mixed. 10 × MUP, 4-methylbelliferous phosphate (MUP) 2.56 mg was dissolved in 1000 μl of ultrapure water and stored at −20 ° C. until just before use.

１．６ＰＰＡＲγ活性化能の評価
１．３で測定されたＬｕｃｉｆｅｒａｓｅの発光強度、および１．４で測定されたＳＥＡＰの蛍光強度から、下記数式１に従いＰＰＡＲγ活性化能を算出した。結果、９３７３であった。ＰＰＡＲγ活性化能の結果を図１に示す。 1.6 Evaluation of PPARγ activation ability PPARγ activation ability was calculated from the Luciferase luminescence intensity measured in 1.3 and the SEAP fluorescence intensity measured in 1.4 according to the following formula 1. As a result, it was 9373. The results of PPARγ activation ability are shown in FIG.

＜実施例２＞
最終濃度を１２５μｇ/ｍＬとなるように添加した以外は、実施例１と同様に実験を行い、ＰＰＡＲγ活性化能を算出した。結果、６０８０であった。ＰＰＡＲγ活性化能の結果を図１に示す。 <Example 2>
The experiment was performed in the same manner as in Example 1 except that the final concentration was 125 μg / mL, and the PPARγ activation ability was calculated. As a result, it was 6080. The results of PPARγ activation ability are shown in FIG.

＜実施例３＞
最終濃度を６３μｇ/ｍＬとなるように添加した以外は、実施例１と同様に実験を行い、ＰＰＡＲγ活性化能を算出した。結果、３３４８であった。ＰＰＡＲγ活性化能の結果を図１に示す。 <Example 3>
An experiment was performed in the same manner as in Example 1 except that the final concentration was 63 μg / mL, and the PPARγ activation ability was calculated. As a result, it was 3348. The results of PPARγ activation ability are shown in FIG.

Claims

下記式（１）：
上記式（１）中、
Ｒ^１およびＲ^２は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜４のアルキル基または炭素数１〜４のアシル基であり、
Ｒ^３は、水素原子、ヒドロキシル基または炭素数１〜４のアルキル基である、
物質である、ＰＰＡＲγ活性化剤。 Following formula (1):
In the above formula (1),
R ¹ and R ² are each independently a hydrogen atom, an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or an acyl group having 1 to 4 carbon atoms,
R ³ is a hydrogen atom, a hydroxyl group or an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms,
A PPARγ activator which is a substance.

Ｒ^１およびＲ^２が、水素原子であり、
Ｒ^３が、水素原子、メチル基またはエチル基である、請求項１に記載のＰＰＡＲγ活性化剤。 R ¹ and R ² are hydrogen atoms,
The PPARγ activator according to claim 1, wherein R ³ is a hydrogen atom, a methyl group or an ethyl group.

Ｒ^１およびＲ^２が、水素原子であり、
Ｒ^３が、メチル基である、請求項２に記載のＰＰＡＲγ活性化剤。 R ¹ and R ² are hydrogen atoms,
The PPARγ activator according to claim 2, wherein R ³ is a methyl group.

前駆脂肪細胞から成熟脂肪細胞への細胞分化促進活性を有し、肥大化脂肪細胞のアポトーシスを誘導する、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＰＰＡＲγ活性化剤。 The PPARγ activator according to any one of claims 1 to 3, which has an activity of promoting cell differentiation from preadipocytes to mature adipocytes and induces apoptosis of hypertrophic adipocytes.

インスリン抵抗性に起因する疾病に対する予防若しくは治療のための請求項１〜４のいずれか１項に記載のＰＰＡＲγ活性化剤。The PPARγ activator according to any one of claims 1 to 4, for preventing or treating a disease caused by insulin resistance.

糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化症、肥満症またはアルツハイマーの予防または治療に用いられる、請求項５に記載のＰＰＡＲγ活性化剤。 The PPARγ activator according to claim 5 , which is used for prevention or treatment of diabetes, hypertension, hyperlipidemia, arteriosclerosis, obesity or Alzheimer.

請求項１〜６のいずれか１項に記載のＰＰＡＲγ活性化剤を有効成分として含有する、インスリン抵抗性に起因する疾病に対する予防剤若しくは治療剤。 A preventive or therapeutic agent for a disease caused by insulin resistance , comprising the PPARγ activator according to any one of claims 1 to 6 as an active ingredient.

糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化症、肥満症またはアルツハイマーの予防または治療に用いられる、請求項７に記載の予防剤若しくは治療剤。 The prophylactic or therapeutic agent according to claim 7 , which is used for the prophylaxis or treatment of diabetes, hypertension, hyperlipidemia, arteriosclerosis, obesity or Alzheimer.