JP5747444B2 - βアミロイドに関連する病的状態の診断補助方法 - Google Patents
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Description
前記液性検体と可溶化剤を混合して混合液を調製した後、当該混合液においてAβの量を測定して、第2のAβ測定値を得る第2の測定工程と、
前記第1のAβ測定値と前記第2のAβ測定値との関係値を算出する算出工程と、
前記関係値に基づき、前記被験者中Aβ量を推定する推定工程と、
を包含する、Aβに関連する病的状態の診断を補助する方法に関する。
図1は、本発明の一実施形態であるAβ測定フローを示す。本実施形態は、第1の測定工程11及び第2の測定工程12からなる。
液性サンプル中における可溶化剤の効果
図3は、実証例における測定フローを示す。
市販のAβ(42)合成ペプチド((株)ペプチド研究所製;商品番号4349−V)をDMSO(ジメチルスルフォキサイド)に溶解して100umol/Lとした。次いで濃度10mMのリン酸緩衝液pH7.4を加えて1000倍に希釈してサンプル41を調製した。
測定は、和光純薬(株)製の、Aβを測定するELISAの測定キット(Human/Rat βAmyloid42 ELISA Kit wako、High−Sensitive;商品番号292−64501)を用い、製造元の説明書に従って行った。
血清サンプルを用いた実施例
図4は、実施例1における測定フローを示す。
月齢の異なるAPPsweマウスの21検体から血液を採取した。該21検体は異なった日に測定を行った。まず、APPsweマウスより採血を行い、採取した血液を氷上にて1−4時間インキュベートし、3,000×rpm、4度、15分間の遠心処理をした後、上澄みである血清サンプル71を採取した。
サンプルAとサンプルBのAβ濃度を、和光純薬(株)製の、Aβを測定するELISAの測定キット(Human/Rat βAmyloid42 ELISA Kit wako、 High−Sensitive;商品番号292−64501)を用い、製造元の説明書に従って測定した。
(表2)より、Aβ(42)濃度は、サンプルAに比べサンプルBが1.2から2.9倍高い値を示すことが分かる。従って、血清中のAβ(42)についても、前記(表1)に示した結果と同様、サンプルAとサンプルBの測定値を比較することにより、液性サンプル中に存在する凝集体や吸着Aβなどの「存在がマスクされたAβ」の量を推測できることが確認された。
前記測定により得られたサンプルAとサンプルBの測定値の比率を算出した。ここで、サンプルAの測定値が液性サンプル中で存在がマスクされていないAβ量(A)であり、サンプルBの測定値が液性サンプル中の総Aβ量(B)であり、総Aβ量(B)からAβ量(A)を差し引いた値が存在がマスクされたAβ量(C)である。次いで、存在がマスクされたAβ量(C)と存在がマスクされていないAβ量(A)との比率(C/A)を算出し、これを指標として用いた。
12 第2の測定工程
21 Aβモノマー
22 Aβ凝集体
23 Aβ以外の物質と結合若しくは吸着しているが液相中にあるAβ
24 容器表面や細胞表面等の固体に結合又は吸着(沈着)し、液相にないAβ
25 可溶化されたAβモノマー
41 市販Aβペプチド
42 1%BSA・TBSpH8.2
43 70%ギ酸
71 血清
72 希釈
73 95%ギ酸
Claims (5)
- 被験者から採取された血液検体においてβアミロイド(以下Aβという)の量を測定して、第1のAβ測定値を得る第1の測定工程と、
前記血液検体と可溶化剤を混合して混合液を調製した後、当該混合液においてAβの量を測定して、第2のAβ測定値を得る第2の測定工程と、
前記第1のAβ測定値と前記第2のAβ測定値との差を、第1の算出値として求め、前記第1のAβ測定値に対する前記第1の算出値の比率を、関係値として求める算出工程と、
前記関係値に基づき、前記被験者の脳内あるいはCSF中のAβ量を推定する推定工程と、
を包含する、Aβに関連する病的状態の診断を補助する方法。 - 前記可溶化剤がギ酸である、請求項1に記載のAβに関連する病的状態の診断を補助する方法。
- 前記可溶化剤がグアニジン塩酸である、請求項1に記載のAβに関連する病的状態の診断を補助する方法。
- 前記血液検体は、血清検体である、請求項1〜3のいずれかに記載のAβに関連する病的状態の診断を補助する方法。
- 前記第1の測定工程及び前記第2の測定工程において測定される前記Aβは、42個のアミノ酸残基からなるAβ、及びそのアミノ基末端が切断又は修飾されたAβである、請求項1〜4のいずれかに記載のAβに関連する病的状態の診断を補助する方法。
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