JP5725598B2 - Method for producing antioxidant composition - Google Patents
Method for producing antioxidant composition Download PDFInfo
- Publication number
- JP5725598B2 JP5725598B2 JP2010100943A JP2010100943A JP5725598B2 JP 5725598 B2 JP5725598 B2 JP 5725598B2 JP 2010100943 A JP2010100943 A JP 2010100943A JP 2010100943 A JP2010100943 A JP 2010100943A JP 5725598 B2 JP5725598 B2 JP 5725598B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- rhizopus
- medium
- antioxidant
- antioxidant composition
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
本発明は、リゾプス(Rhizopus)属に属する菌を、トリプトファンを添加した培地で培養することにより、培養物中に3−ヒドロキシアントラニル酸を産生させることを特徴とする抗酸化性組成物の製造方法に関する。
さらに、本発明は、その製造方法により得られる抗酸化性組成物を含有する食品、化粧品、医薬品等に関する。
The present invention relates to a method for producing an antioxidant composition characterized by producing 3-hydroxyanthranilic acid in a culture by culturing a bacterium belonging to the genus Rhizopus in a medium to which tryptophan is added. About.
Furthermore, this invention relates to the foodstuff, cosmetics, pharmaceuticals, etc. containing the antioxidant composition obtained by the manufacturing method.
微生物の産生する抗酸化性物質については、例えば、アスペルギルス グラカウス、アスペルギルス オチラセウス、アスペルギルス ルーバー、アスペルギルス テレウス、ペニシリウム グラウカム又はリゾプス オリゴスポラスを培養し、菌体外に産生された水溶性抗酸化性物質を採取することを特徴とする抗酸化性物質の製造方法が開示されている(例えば、特許文献1参照)。 For antioxidant substances produced by microorganisms, for example, culture Aspergillus glacaus, Aspergillus otraceus, Aspergillus louver, Aspergillus tereus, Penicillium graucum or Rhizopus oligospora, and collect water-soluble antioxidant substances produced outside the cell The manufacturing method of the antioxidant substance characterized by this is disclosed (for example, refer patent document 1).
テンペ菌による大豆発酵物の抗酸化性については、例えば、テンペ菌のリゾプス属により大豆を嫌気的に発酵することによりγ−アミノ酪酸を高濃度に含有し、かつ、大豆及び大豆発酵産物由来の蛋白質、アミノ酸、抗酸化成分等の有効成分も利用できるγ−アミノ酪酸高含有大豆発酵食品の製造方法が開示されている(例えば、特許文献2参照)が、大豆発酵物そのものを食することにより付随的に抗酸化成分等の有効成分を利用するものであり、抗酸化性組成物を得ることを意図したものではない。
また、例えば、大豆にリゾプス オリゴスポラスIFO32002又はリゾプス オリゴスポラスIFO32003を用いて発酵させたテンペから抗酸化性物質である3−ヒドロキシアントラニル酸を単離同定したこと、及び、3−ヒドロキシアントラニル酸の含有量は発酵2日目のテンペの凍結乾燥品について最大(約50mg/固形物100g)であったことが報告されている(例えば、非特許文献1参照)が、3−ヒドロキシアントラニル酸の含量が少ないという問題がある。
As for the antioxidant property of soybean fermented products by tempeh bacteria, for example, it contains γ-aminobutyric acid at a high concentration by anaerobically fermenting soybeans with the genus Rhizopus tempeh, and derived from soybeans and soybean fermentation products. A method for producing a fermented soybean fermented food with a high content of γ-aminobutyric acid that can also use active ingredients such as proteins, amino acids, and antioxidant components is disclosed (for example, see Patent Document 2). Incidently, an active ingredient such as an antioxidant ingredient is used, and it is not intended to obtain an antioxidant composition.
In addition, for example, 3-hydroxyanthranilic acid, which is an antioxidant substance, was isolated and identified from tempeh fermented with soybean using Rhizopus oligospora IFO32002 or Rhizopus oligospora IFO32003, and the content of 3-hydroxyanthranilic acid is It is reported that the lyophilized product of Tempe on the second day of fermentation was the maximum (about 50 mg / 100 g of solids) (for example, see Non-Patent Document 1), but the content of 3-hydroxyanthranilic acid is low. There's a problem.
摂取されたアミノ酸は生体内で代謝されるが、例えば、生体内におけるトリプトファンの代謝経路での代謝産物であるDL−キヌレニン酸、キヌレニン酸、アントラニル酸、DL−α−アラニン、5−ハイドロキシアントラニル酸、3−ハイドロキシアントラニル酸、キサンツレン酸及びトリプトファンについて、豚脂によるAOM試験及び約60℃でのオーブン試験による酸化防止試験が行われ、3−ハイドロキシアントラニル酸が最も抗酸化性が高いものであったことが報告されている(例えば、非特許文献2参照)。
また、例えば、3−ヒドロキシアントラニル酸及びトコフェロールを豚脂に添加し180℃で5時間加熱後のAOM試験では、3−ヒドロキシアントラニル酸がトコフェロールよりも熱安定性が高いことが報告されている(例えば、非特許文献3参照)。
また、例えば、3−ヒドロキシアントラニル酸のチロシナーゼ活性の阻害が報告されており(例えば、非特許文献4参照)、3−ヒドロキシアントラニル酸の美白作用が期待されている。
Ingested amino acids are metabolized in vivo. For example, DL-kynurenic acid, kynurenic acid, anthranilic acid, DL-α-alanine, 5-hydroxyanthranilic acid, which are metabolites in the metabolic pathway of tryptophan in vivo 3-hydroxyanthranilic acid, xanthurenic acid, and tryptophan were subjected to anti-oxidation test by AOM test with pork fat and oven test at about 60 ° C., and 3-hydroxyanthranilic acid had the highest antioxidant property (For example, refer nonpatent literature 2).
In addition, for example, in an AOM test after adding 3-hydroxyanthranilic acid and tocopherol to pork fat and heating at 180 ° C. for 5 hours, it is reported that 3-hydroxyanthranilic acid has higher thermal stability than tocopherol ( For example, refer nonpatent literature 3).
In addition, for example, inhibition of tyrosinase activity of 3-hydroxyanthranilic acid has been reported (see, for example, Non-Patent Document 4), and whitening action of 3-hydroxyanthranilic acid is expected.
3−ヒドロキシアントラニル酸の製造方法については、例えば、ストレプトマイセス アウレオファシエンスの変異株から生合成した2,3−ジヒドロ−3−ヒドロキシアントラニル酸を触媒の存在下、脱水素させることを含む3−ヒドロキシアントラニル酸の製造方法が開示されている(例えば、特許文献3参照)が、化学的合成によるものである。 The method for producing 3-hydroxyanthranilic acid includes, for example, dehydrogenating 2,3-dihydro-3-hydroxyanthranilic acid biosynthesized from a mutant of Streptomyces aureofaciens in the presence of a catalyst. -A method for producing hydroxyanthranilic acid is disclosed (for example, see Patent Document 3), but by chemical synthesis.
上記のように、微生物の産生する抗酸化性物質については、従来知られているが、必ずしも十分な抗酸化性能を有するものではなく、より優れた抗酸化性能を有する抗酸化性組成物が望まれている。
また、大豆発酵物による抗酸化性については、大豆発酵食品そのものを食することにより付随的に抗酸化成分等の有効成分を利用するものであり、必ずしも十分な抗酸化性能を有するものではない。
また、3−ヒドロキシアントラニル酸は、強い抗酸化活性、チロシナーゼ阻害活性を有し、抗酸化物質、美白化粧品原料として注目されており、化学的合成によらない3−ヒドロキシアントラニル酸の製造方法が望まれている。
As described above, antioxidant substances produced by microorganisms have been conventionally known, but they do not necessarily have sufficient antioxidant performance, and an antioxidant composition having better antioxidant performance is desired. It is rare.
Moreover, about the antioxidant property by a soybean fermented product, it uses an active ingredient, such as an antioxidant component incidentally by eating soybean fermented food itself, and does not necessarily have sufficient antioxidant performance.
In addition, 3-hydroxyanthranilic acid has strong antioxidant activity and tyrosinase inhibitory activity, and has attracted attention as an antioxidant and a whitening cosmetic raw material. A method for producing 3-hydroxyanthranilic acid that does not involve chemical synthesis is desired. It is rare.
本発明は、微生物を培養することにより、優れた抗酸化性物質である3−ヒドロキシアントラニル酸を産生させ、その3−ヒドロキシアントラニル酸を含有する抗酸化性組成物の新規な製造方法を提供することを目的とする。 The present invention provides a novel method for producing an antioxidant composition containing 3-hydroxyanthranilic acid by producing 3-hydroxyanthranilic acid, which is an excellent antioxidant substance, by culturing microorganisms. For the purpose.
本発明者らは、微生物の培養による抗酸化性物質の生成に着目して鋭意研究の結果、特定の微生物を、トリプトファンを添加した培地で培養することにより、抗酸化性組成物を有効的に製造できることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、リゾプス(Rhizopus)属に属する菌を、トリプトファンを添加した培地に接種し、培養して得られる培養物中に3−ヒドロキシアントラニル酸を産生させ、その3−ヒドロキシアントラニル酸を含有する抗酸化性組成物の新規な製造方法を提供するものである。
さらに、本発明は、当該製造方法により得られる抗酸化性組成物を含有する、食品、化粧品、医薬品等を提供するものである。
As a result of intensive studies focusing on the production of antioxidant substances by culturing microorganisms, the present inventors have effectively cultivated an antioxidant composition by culturing specific microorganisms in a medium supplemented with tryptophan. The present invention was completed by finding that it can be produced.
That is, the present invention inoculates a bacterium belonging to the genus Rhizopus on a medium supplemented with tryptophan, and produces 3-hydroxyanthranilic acid in the culture obtained by culturing the bacterium, The present invention provides a novel method for producing an antioxidant composition.
Furthermore, the present invention provides foods, cosmetics, pharmaceuticals and the like containing the antioxidant composition obtained by the production method.
本発明には、下記の態様が含まれる。
項(1)
リゾプス(Rhizopus)属に属する菌を、トリプトファンを添加した培地で培養することにより、3−ヒドロキシアントラニル酸を産生させることを特徴とする抗酸化性組成物の製造方法。
項(2)
リゾプス(Rhizopus)属に属する菌が、リゾプス オリゴスポラス(Rhizopus oligosporus)、リゾプス オリゼ(Rhizopus oryzae)、リゾプス キネンシス(Rhizopus chinensis)、リゾプス ストロニファー(Rhizopus stolonifer)、リゾプス ニベウス(Rhizopus niveus)のうちから選ばれる1種以上であることを特徴とする項(1)に記載の抗酸化性組成物の製造方法。
項(3)
培地に添加するトリプトファンの量が、少なくとも0.01重量%であることを特徴とする項(1)に記載の抗酸化性組成物の製造方法。
項(4)
培地が、少なくとも有機窒素成分を含有する素材と炭水化物若しくは炭水化物を含有する素材とを配合した培地、又は、少なくとも有機窒素成分を含有する素材と油脂若しくは油脂を含有する素材とを配合した培地、のいずれかであることを特徴とする項(1)に記載の抗酸化性組成物の製造方法。
項(5)
項(1)〜(4)のいずれか1項に記載の抗酸化性組成物の製造方法により得られることを特徴とする抗酸化性組成物。
項(6)
項(5)に記載の抗酸化性組成物を含有することを特徴とする食品。
項(7)
項(5)に記載の抗酸化性組成物を含有することを特徴とする化粧品。
The present invention includes the following aspects.
Item (1)
A method for producing an antioxidant composition, characterized in that 3-hydroxyanthranilic acid is produced by culturing a bacterium belonging to the genus Rhizopus in a medium supplemented with tryptophan.
Item (2)
Rhizopus (Rhizopus), Rhizopus oligosporus, Rhizopus oryzae, Rhizopus chinensis, Rhizopus stolonifer (Rhizopus stolonifer), Rhizopus pus The method for producing an antioxidant composition according to item (1), wherein the composition is one or more.
Item (3)
The method for producing an antioxidant composition according to item (1), wherein the amount of tryptophan added to the medium is at least 0.01% by weight.
Item (4)
A medium in which a medium containing a material containing at least an organic nitrogen component and a carbohydrate or a material containing a carbohydrate, or a medium in which a material containing at least an organic nitrogen component and a material containing fats or oils are mixed, The method for producing an antioxidant composition according to item (1), which is any one of the above.
Item (5)
An antioxidant composition obtained by the method for producing an antioxidant composition according to any one of items (1) to (4).
Item (6)
A food comprising the antioxidant composition according to item (5).
Item (7)
A cosmetic comprising the antioxidant composition according to item (5).
本発明によれば、リゾプス(Rhizopus)属に属する菌を、トリプトファンを添加した培地で培養することにより、優れた抗酸化性物質である3−ヒドロキシアントラニル酸を効率的に産生させ、その3−ヒドロキシアントラニル酸を含有する抗酸化性能に優れた抗酸化性組成物を製造することができる。
さらに、本発明による抗酸化性組成物は、優れた抗酸化性能と美白作用等の機能性とを有し、食品、化粧品、医薬品等において極めて有効に用いることができる。
According to the present invention, by culturing a bacterium belonging to the genus Rhizopus in a medium supplemented with tryptophan, 3-hydroxyanthranilic acid, which is an excellent antioxidant substance, can be efficiently produced. The antioxidant composition excellent in the antioxidant performance containing a hydroxyanthranilic acid can be manufactured.
Furthermore, the antioxidant composition according to the present invention has excellent antioxidant performance and functionality such as whitening, and can be used very effectively in foods, cosmetics, pharmaceuticals and the like.
本発明は、リゾプス(Rhizopus)属に属する菌を、トリプトファンを添加した培地で培養することにより、培養物中に3−ヒドロキシアントラニル酸を産生せしめ、その3−ヒドロキシアントラニル酸を含有する抗酸化性組成物の製造方法を提供するものである。
本発明において、トリプトファンを培地に添加することにより、リゾプス(Rhizopus)属に属する菌が遊離アミノ酸としてのトリプトファンを資化し、培養物中に3−ヒドロキシアントラニル酸を産生せしめる。
In the present invention, by culturing a bacterium belonging to the genus Rhizopus in a medium supplemented with tryptophan, 3-hydroxyanthranilic acid is produced in the culture, and the antioxidant property containing 3-hydroxyanthranilic acid is obtained. A method for producing the composition is provided.
In the present invention, by adding tryptophan to the medium, bacteria belonging to the genus Rhizopus assimilate tryptophan as a free amino acid and produce 3-hydroxyanthranilic acid in the culture.
本発明において、用いるリゾプス(Rhizopus)属に属する菌は、接合菌類、ケカビ目クモノスカビ属(Rhizopus)に属する菌であり、リゾプス(Rhizopus)属に属する菌であればよく、
リゾプス アジゴスポルス(Rhizopus azygosporus)、
リゾプス オリゴスポラス(Rhizopus oligosporus)、
リゾプス オリゼ(Rhizopus oryzae)、
リゾプス カエスピトサス(Rhizopus caespitosus)、
リゾプス キネンシス(Rhizopus chinensis)
リゾプス サーシナンス(Rhizopus circinans)、
リゾプス ジャバニカス(Rhizopus javanicus)、
リゾプス ジャポニカス(Rhizopus japonicus)、
リゾプス ストロニファー(Rhizopus stolonifer)、
リゾプス ニグリカンス(Rhizopus nigricans)、
リゾプス ニベウス(Rhizopus niveus)、
リゾプス ミクロスポラス(Rhizopus microsporus)、
リゾプス リゾポジホルミス(Rhizopus rhizopodiformis)、
等が挙げられ、好ましくは、リゾプス オリゴスポラス(Rhizopus oligosporus)、リゾプス オリゼ(Rhizopus oryzae)、リゾプス キネンシス(Rhizopus chinensis)、リゾプス ストロニファー(Rhizopus stolonifer)、リゾプス ニベウス(Rhizopus niveus)のうちから選ばれる1種以上である。
In the present invention, the bacterium belonging to the genus Rhizopus to be used is a zygomycete, a bacterium belonging to the genus Rhizopus, and any bacterium belonging to the genus Rhizopus,
Rhizopus azygosporus,
Rhizopus oligosporus,
Rhizopus oryzae,
Rhizopus caespitosus,
Rhizopus chinensis
Rhizopus circinans,
Rhizopus javanicus,
Rhizopus japonicus,
Rhizopus stolonifer,
Rhizopus nigricans,
Rhizopus niveus,
Rhizopus microsporus,
Rhizopus rhizopodiformis,
Preferably, Rhizopus oligosporus, Rhizopus oryzae, Rhizopus chinensis, Rhizopus stolonifer, Rhizopus niveus (Rhizopus nive) is selected from the species Rhizopus nive. That's it.
本発明に係る微生物については、独立行政法人製品評価技術基盤機構、又は、独立行政法人理化学研究所バイオリソースセンター等から入手することができる。
具体的には、リゾプス オリゴスポラス(Rhizopus oligosporus)NBRC32003、リゾプス オリゼ(Rhizopus oryzae)NBRC4706、リゾプス キネンシス(Rhizopus chinensis)NBRC4737、リゾプス ストロニファー(Rhizopus stolonifer)NBRC6188、リゾプス ニベウス(Rhizopus niveus)NBRC4759、等が挙げられる。
The microorganism according to the present invention can be obtained from the National Institute of Technology and Evaluation, the RIKEN BioResource Center, or the like.
Specifically, Rhizopus oligosporus NBRC32003, Rhizopus oryzae NBRC4706, Rhizopus chinensis NBRC4737, Rhizopus stolonifer NBRC6188, Riveus R .
本発明において、用いるトリプトファンは、DL−トリプトファン、L−トリプトファンが挙げられ、好ましくは、食品添加物公定書、日本薬局方、医薬部外品原料規格、飼料添加物規格等の公的規格に適合した品質を有するものであり、より好ましくは食品添加物公定書に適合した食用グレードのトリプトファンである。
また、本発明において、用いるトリプトファンは、各種タンパク質加水分解物に含まれるトリプトファンであってもよい。
本発明において、培地に添加するトリプトファンの量は、少なくとも0.01重量%であり、好ましくは、0.02〜5.0重量%、より好ましくは、0.05〜3.0重量%、特に好ましくは、0.1〜1.0重量%である。なお、培地へのトリプトファンの添加量が多量となると、トリプトファンが培地に溶けにくい、資化効率が低下する、コスト高となる等の不都合が生じることもある。
In the present invention, the tryptophan used includes DL-tryptophan and L-tryptophan, and preferably conforms to official standards such as the Food Additives Standard, Japanese Pharmacopoeia, Quasi-drug Raw Material Standard, Feed Additive Standard, etc. More preferably, it is an edible grade tryptophan that complies with the official food additive regulations.
In the present invention, the tryptophan used may be tryptophan contained in various protein hydrolysates.
In the present invention, the amount of tryptophan added to the medium is at least 0.01% by weight, preferably 0.02 to 5.0% by weight, more preferably 0.05 to 3.0% by weight, particularly Preferably, it is 0.1 to 1.0% by weight. In addition, when the amount of tryptophan added to the medium becomes large, inconveniences such as difficulty in dissolving tryptophan in the medium, reduction in utilization efficiency, and high cost may occur.
本発明において、用いる培地は、微生物が生育でき、3−ヒドロキシアントラニル酸を産生せしめる栄養培地であればよく、固体培地、液体培地のいずれでもよい。
本発明において、用いる培地は、窒素源、炭素源、無機物質、及び必要に応じてビタミン等を含む常法で用いられるものであればよい。
In the present invention, the medium to be used may be any nutrient medium that can grow microorganisms and produce 3-hydroxyanthranilic acid, and may be either a solid medium or a liquid medium.
In the present invention, the medium to be used may be any medium that can be used in a conventional manner containing a nitrogen source, a carbon source, an inorganic substance, and vitamins as necessary.
本発明において、培地に用いる窒素源として、有機窒素成分を含有する素材を挙げることができ、すなわち、有機窒素成分を含有する素材としては、各種タンパク質分解物、又は、動植物タンパク質を含有する素材を挙げることができる。具体的には、酵母エキスやペプトンやコーンスティープリカー、大豆等の豆類、トウモロコシや米や麦等の穀類、小麦フスマや米ヌカ等の糠類、ごま等の種実類、緑茶等の茶類、海苔等の藻類、粉乳等が挙げられる。
本発明において、培地中に配合する有機窒素成分を含有する素材の量は、0.01〜80重量%、好ましくは、0.05〜60重量%、より好ましくは、0.5〜50重量%、である。
In the present invention, the nitrogen source used in the medium can include a material containing an organic nitrogen component, that is, the material containing the organic nitrogen component includes various protein degradation products or materials containing animal and plant proteins. Can be mentioned. Specifically, yeast extract, peptone, corn steep liquor, beans such as soybeans, cereals such as corn, rice and wheat, potatoes such as wheat bran and rice bran, seeds such as sesame, teas such as green tea, Examples include algae such as seaweed, milk powder, and the like.
In this invention, the quantity of the raw material containing the organic nitrogen component mix | blended in a culture medium is 0.01 to 80 weight%, Preferably, it is 0.05 to 60 weight%, More preferably, it is 0.5 to 50 weight% .
本発明において、培地に用いる炭素源として、炭水化物若しくは炭水化物を含有する素材、又は、油脂若しくは油脂を含有する素材を挙げることができる。具体的には、炭水化物若しくは炭水化物を含有する素材としては、グルコース、砂糖、デキストリン、澱粉加水分解物、澱粉、トウモロコシや米や麦等の穀類、大豆等の豆類、ジャガイモ等のいも類等が挙げられる。また、油脂若しくは油脂を含有する素材としては、牛脂や魚油等の動物性油脂、大豆油や菜種油等の植物性油脂、リノール酸等の脂肪酸、シュートニング等の油脂加工品、トウモロコシや米や麦等の穀類、小麦フスマや米ヌカ等の糠類、大豆等の豆類、ごまや落花生等の種実類等が挙げられる。
本発明において、培地中に配合する炭水化物若しくは炭水化物を含有する素材の量は、0.1〜80重量%、好ましくは、0.5〜60重量%、より好ましくは、2〜50重量%、である。
また、本発明において、培地中に配合する油脂若しくは油脂を含有する素材の量は、0.1〜80重量%、好ましくは、0.5〜60重量%、より好ましくは、2〜50重量%、である。
In the present invention, examples of the carbon source used in the culture medium include carbohydrates, materials containing carbohydrates, fats and oils or materials containing fats and oils. Specific examples of carbohydrates or carbohydrate-containing materials include glucose, sugar, dextrin, starch hydrolysate, starch, corn, grains such as rice and wheat, beans such as soybeans, and potatoes such as potatoes. It is done. In addition, fats and oil-containing materials include animal fats such as beef tallow and fish oil, vegetable fats such as soybean oil and rapeseed oil, fatty acids such as linoleic acid, processed fats and oils such as shooting, corn, rice and wheat Cereals such as wheat bran and rice bran, beans such as soybeans, and seeds such as sesame and peanuts.
In the present invention, the amount of carbohydrate or carbohydrate-containing material mixed in the medium is 0.1 to 80% by weight, preferably 0.5 to 60% by weight, more preferably 2 to 50% by weight. is there.
Moreover, in this invention, the quantity of the raw material containing fats and oils or fats mix | blended in a culture medium is 0.1 to 80 weight%, Preferably, it is 0.5 to 60 weight%, More preferably, it is 2 to 50 weight% .
培地に用いるこれらの素材は、そのまま用いてもよく、細切、粉砕、ペレット状、フレーク状として用いてもよく、乾燥、加熱、酵素処理等の処理をして用いてもよい。また、いくつかの素材を組み合わせて用いてもよい。 These materials used for the culture medium may be used as they are, or may be used in the form of shredded, crushed, pellets, flakes, or may be used after treatments such as drying, heating, and enzyme treatment. Also, some materials may be used in combination.
本発明において、有機窒素成分と炭水化物との両方を含有する素材について、大豆、米ヌカや小麦フスマ等の糠類、海苔、緑茶等を挙げることができ、これらを用いてもよい。
また、本発明において、有機窒素成分と油脂との両方を含有する素材について、大豆、トウモロコシ、ごま等の種実類、小麦フスマや米ヌカ等の糠類、油糧素材等が挙げることができ、これらを用いてもよい。
In the present invention, examples of the material containing both the organic nitrogen component and the carbohydrate include potatoes such as soybean, rice bran and wheat bran, laver, and green tea, and these may be used.
Moreover, in the present invention, for materials containing both organic nitrogen components and fats and oils, seeds such as soybeans, corn, sesame, potatoes such as wheat bran and rice bran, oil materials, etc. can be mentioned, These may be used.
本発明において、用いる培地は、少なくとも有機窒素成分を含有する素材と炭水化物若しくは炭水化物を含有する素材とを配合した培地、又は、少なくとも有機窒素成分を含有する素材と油脂若しくは油脂を含有する素材とを配合した培地のいずれかである。具体的には、少なくとも酵母エキスとブドウ糖とを配合した培地、少なくとも酵母エキスと大豆とを配合した培地、少なくとも大豆を配合した培地、少なくとも小麦フスマを配合した培地、少なくとも米ヌカを配合した培地、少なくとも海苔を配合した培地、少なくとも緑茶を配合した培地、少なくとも酵母エキスと植物性油脂とを配合した培地、少なくとも酵母エキスと大豆とを配合した培地、少なくともトウモロコシを配合した培地、少なくともごまを配合した培地等が挙げられる。 In the present invention, a medium to be used is a medium in which a material containing at least an organic nitrogen component and a carbohydrate or a material containing a carbohydrate are blended, or a material containing at least an organic nitrogen component and a material containing oil or fat. Any of the formulated media. Specifically, a medium containing at least a yeast extract and glucose, a medium containing at least a yeast extract and soybeans, a medium containing at least soybeans, a medium containing at least wheat bran, a medium containing at least rice bran, Medium containing at least laver, medium containing at least green tea, medium containing at least yeast extract and vegetable oil, medium containing at least yeast extract and soybeans, medium containing at least corn, and at least sesame Examples include a medium.
本発明において、培地に用いる無機物質として、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、鉄、カルシウム等を含む、リン酸塩、硫酸塩、硝酸塩等が挙げられ、これらの無機物質を培地中に適宜配合するとよい。 In the present invention, examples of the inorganic substance used in the medium include phosphates, sulfates, nitrates, and the like containing sodium, potassium, magnesium, iron, calcium, and the like. These inorganic substances may be appropriately mixed in the medium.
本発明において、培地に用いる溶媒としての水は、特に限定されず、水道水、イオン交換水、蒸留水、精密ろ過水等が挙げられ、適宜設定することができる。 In the present invention, water as a solvent used in the medium is not particularly limited, and examples thereof include tap water, ion-exchanged water, distilled water, and microfiltration water, and can be set as appropriate.
本発明において、用いる培地のpHは、酸又はアルカリで調整するとよく、pH4.5〜9.0、好ましくは、pH5.5〜8.0である。 In the present invention, the pH of the medium to be used may be adjusted with acid or alkali, and is pH 4.5 to 9.0, preferably pH 5.5 to 8.0.
本発明において、培養方法は通常の微生物の培養方法であればよく、好気的条件下での培養であり、固体培養、液体培養のいずれでもよい。 In the present invention, the culture method may be any normal microorganism culture method, is culture under aerobic conditions, and may be either solid culture or liquid culture.
本発明において、培養の温度及び時間については、通常の糸状菌を培養する条件であればよく、15〜40℃で1〜10日間が挙げられ、3−ヒドロキシアントラニル酸の生成量を高めるためには、好ましくは、20〜40℃で1〜7日間、より好ましくは、25〜35℃で1〜4日間である。 In this invention, about the temperature and time of culture | cultivation, what is necessary is just the conditions which culture | cultivate a normal filamentous fungus, 1-10 days are mentioned at 15-40 degreeC, In order to raise the production amount of 3-hydroxyanthranilic acid Is preferably 20 to 40 ° C. for 1 to 7 days, more preferably 25 to 35 ° C. for 1 to 4 days.
本発明において、3−ヒドロキシアントラニル酸を含有する抗酸化性組成物は、培養工程に次いで、通常、殺菌工程を行う。殺菌工程における殺菌条件は、培養に用いる菌に対して有効である常法の温度・時間であればよい。得られた抗酸化性組成物は、そのまま用いてもよいし、又は、常法により濃縮機等で処理して濃縮物として用いてもよく、後述するように乾燥して用いてもよい。 In the present invention, the antioxidant composition containing 3-hydroxyanthranilic acid is usually subjected to a sterilization step after the culturing step. The sterilization conditions in the sterilization process may be any conventional temperature and time effective for the bacteria used for the culture. The obtained antioxidant composition may be used as it is, or may be used as a concentrate after being processed with a concentrator or the like by a conventional method, or may be used after drying as described later.
さらに、本発明において、3−ヒドロキシアントラニル酸を含有する抗酸化性組成物は、培養工程、に次いで、殺菌工程を経た後、固液分離工程を行うことにより得られる。
固液分離工程としては、遠心分離やろ過等が挙げられ、適宜設定することができ、液部として得られた抗酸化性組成物は、そのまま用いてもよいし、常法により濃縮機等で処理して濃縮物として用いてもよいし、後述するように乾燥して用いてもよい。
Furthermore, in this invention, the antioxidant composition containing 3-hydroxyanthranilic acid is obtained by performing a solid-liquid separation process after passing through a sterilization process following a culture | cultivation process.
Examples of the solid-liquid separation step include centrifugation and filtration, and can be set as appropriate. The antioxidant composition obtained as the liquid part may be used as it is, or by a concentrator or the like by a conventional method. It may be processed and used as a concentrate, or may be dried and used as described later.
本発明において、優れた抗酸化力等の有効性を有し、色、におい等の官能面に優れた高品質の抗酸化性組成物を得るために、前述の培養工程、殺菌工程、固液分離工程に加えて、色とにおいを良くするために、精製工程を行うとよく、精製処理工程として、活性炭や吸着樹脂等による精製が挙げられ、好ましくは、活性炭による精製である。
活性炭による精製処理は、処理原料に活性炭を加え、その後固液分離して活性炭を除去することにより行う。活性炭の使用量は処理原料重量に対して、0.1〜10重量%であり、好ましくは、0.5〜5重量%である。
In the present invention, in order to obtain a high-quality antioxidant composition having an excellent anti-oxidant power and the like, and an excellent functional surface such as color and odor, the above-described culture step, sterilization step, solid-liquid In order to improve the color and odor in addition to the separation step, a purification step may be performed, and examples of the purification treatment step include purification with activated carbon, an adsorption resin, and the like, preferably purification with activated carbon.
The purification treatment with activated carbon is performed by adding activated carbon to the treated raw material and then separating the solid and liquid to remove the activated carbon. The amount of activated carbon used is 0.1 to 10% by weight, preferably 0.5 to 5% by weight, based on the weight of the processing raw material.
本発明において、上記の培養工程、殺菌工程を経た抗酸化性組成物をそのまま、又は、常法により濃縮機等で処理して濃縮物として用いてもよく、乾燥して用いてもよい。
また、本発明において、上記の培養工程、殺菌工程、固液分離工程を経た抗酸化性組成物をそのまま、又は、常法により濃縮機等で処理して濃縮物として用いてもよく、乾燥して用いてもよい。
また、上記の培養工程、殺菌工程、固液分離工程、精製処理工程を経た抗酸化性組成物を用いてもよく、さらに、これを常法により濃縮機等で処理して濃縮物として用いてもよく、乾燥して用いてもよい。
また、抗酸化性組成物の安定化等のために溶剤を適宜用いてもよく、デキストリン等の賦形剤を適宜用いてもよい。
In the present invention, the antioxidant composition that has undergone the above-described culture step and sterilization step may be used as it is, or may be used as a concentrate after being processed by a concentrator or the like by a conventional method.
Further, in the present invention, the antioxidant composition that has undergone the above-described culture process, sterilization process, and solid-liquid separation process may be used as a concentrate as it is or after being processed with a concentrator or the like by a conventional method. May be used.
Moreover, you may use the antioxidant composition which passed through said culture | cultivation process, sterilization process, a solid-liquid separation process, and a refinement | purification process process, Furthermore, this is processed with a concentrator etc. by a conventional method, and is used as a concentrate. It may also be used after drying.
In addition, a solvent may be appropriately used for stabilizing the antioxidant composition, and an excipient such as dextrin may be appropriately used.
さらに、本発明において、培養して得られる培養物を、常法によりメタノール、エタノール等の有機溶媒又はイオン交換樹脂で適宜処理してもよい。溶媒抽出処理又はイオン交換樹脂処理することにより、抗酸化性組成物中の3−ヒドロキシアントラニル酸含有濃度を相対的に高めることができる。 Furthermore, in the present invention, the culture obtained by culturing may be appropriately treated with an organic solvent such as methanol or ethanol or an ion exchange resin by a conventional method. By carrying out solvent extraction treatment or ion exchange resin treatment, the concentration of 3-hydroxyanthranilic acid in the antioxidant composition can be relatively increased.
本発明において、抗酸化性組成物を乾燥して用いてもよく、その際デキストリン等の賦形剤を適宜用いてもよい。乾燥方法としては、常法による噴霧乾燥、凍結乾燥、ドラムドライ乾燥、熱風乾燥等から適宜採用することができる。 In the present invention, the antioxidant composition may be used after drying, and an excipient such as dextrin may be used as appropriate. As a drying method, spray drying, freeze drying, drum dry drying, hot air drying, and the like can be appropriately employed.
本発明において、抗酸化性組成物は、トリプトファンを添加した培地に、微生物を接種し、培養して得られる培養物が、少なくとも、3−ヒドロキシアントラニル酸を含有するものであればよく、濃縮等により抗酸化性組成物中の3−ヒドロキシアントラニル酸含有濃度を相対的に高めることができるが、培養物中に含有される3−ヒドロキシアントラニル酸の絶対量値が高いほど、抗酸化力を有効的に発揮させることができる。
本発明において、抗酸化性組成物の固形物当たりの3−ヒドロキシアントラニル酸の含有量は、好ましくは、0.05重量%(500μg/g)以上であり、より好ましくは、0.1重量%(1000μg/g)以上であり、さらに好ましくは、0.3重量%(3000μg/g)以上であり、特に好ましくは、0.5重量%(5000μg/g)以上である。
In the present invention, the antioxidant composition only needs to contain 3-hydroxyanthranilic acid as long as the culture obtained by inoculating and culturing a microorganism in a medium to which tryptophan has been added and culturing the microorganism. Can relatively increase the concentration of 3-hydroxyanthranilic acid in the antioxidant composition, but the higher the absolute amount of 3-hydroxyanthranilic acid contained in the culture, the more effective the antioxidant power Can be demonstrated.
In the present invention, the content of 3-hydroxyanthranilic acid per solid of the antioxidant composition is preferably 0.05% by weight (500 μg / g) or more, more preferably 0.1% by weight. (1000 μg / g) or more, more preferably 0.3% by weight (3000 μg / g) or more, and particularly preferably 0.5% by weight (5000 μg / g) or more.
本発明の3−ヒドロキシアントラニル酸を含有する抗酸化性組成物は、抗酸化力や美白作用等の機能性を利用して、食品、化粧品、医薬品等において効果的に利用することができる。その場合において、トコフェロール、アスコルビン酸等の抗酸化剤やアルブチン等の美白効果を有する成分と併用することで、効果を高めることもできる。 The antioxidant composition containing 3-hydroxyanthranilic acid of the present invention can be effectively used in foods, cosmetics, pharmaceuticals, and the like by utilizing functions such as antioxidant power and whitening action. In that case, an effect can also be heightened by using together with components which have whitening effects, such as antioxidants, such as tocopherol and ascorbic acid, and arbutin.
本発明において、食品、化粧品、医薬品等における抗酸化性組成物の配合量は、特に規定するものではないが、3−ヒドロキシアントラニル酸の含有量、被配合品の形態、剤形等を考慮して適宜定めるとよく、そのまま用いてもよく、適宜量を配合して用いてもよく、配合量として0.001〜50重量%を挙げることができる。 In the present invention, the blending amount of the antioxidant composition in foods, cosmetics, pharmaceuticals, etc. is not particularly specified, but considering the content of 3-hydroxyanthranilic acid, the form of the blended product, the dosage form, etc. The amount may be determined as appropriate, may be used as it is, may be used in an appropriate amount, and may be 0.001 to 50% by weight.
以下、実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の例によって限定されるものではない。なお、本発明において、培地に用いる各原料及び素材の配合%はすべて、重量%である。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example is shown and this invention is demonstrated concretely, this invention is not limited by the following examples. In addition, in this invention, all the mixing | blending% of each raw material and raw material used for a culture medium is weight%.
培地へのトリプトファンの添加有無が3−ヒドロキシアントラニル酸(以下、「3−HAA」とする。)の産生に与える影響をみるために、表1に示す糸状菌(いずれも、独立行政法人製品評価技術基盤機構から入手したもの)を、下記に示す[培地A(対照区)]、[培地Aのトリプトファン添加区]、[培地B(対照区)]、[培地Bのトリプトファン添加区]について調製した各培地50gに、それぞれ接種して、200ml三角フラスコにて、30℃、3日間振とう培養した。培養物を80℃、10分殺菌した後、遠心分離して上清液を得た。それぞれの培養物上清液について、3−HAA量を、高速液体クロマトグラフィー(以下、「HPLC」とする。)にて測定した。分析結果を、表1に示す。HPLCの測定条件は、下記に示す。
[培地A(対照区)]
有機窒素成分として酵母エキス(ベクトン&ディッキンソン社製)0.5g(1.0%)と、油脂成分として大豆油(加藤製油株式会社製「大豆白絞油」)1g(2.0%)と、無機物質としてリン酸一カリウム0.05g(0.1%)と、リン酸二カリウム0.1g(0.2%)と、硫酸マグネシウム0.025g(0.05%)と、硫酸第一鉄0.0025g(0.005%)と、水とを配合して、全体を50g(100%)とし、121℃、15分加熱滅菌した培地。
[培地Aのトリプトファン添加区]
有機窒素成分として酵母エキス(ベクトン&ディッキンソン社製)0.5g(1.0%)と、油脂成分として大豆油(加藤製油株式会社製「大豆白絞油」)1g(2.0%)と、無機物質としてリン酸一カリウム0.05g(0.1%)と、リン酸二カリウム0.1g(0.2%)と、硫酸マグネシウム0.025g(0.05%)と、硫酸第一鉄0.0025g(0.005%)と、L−トリプトファン0.2g(0.4%)と、水とを配合して、全体を50g(100%)とし、121℃、15分加熱滅菌した培地。
[培地B(対照区)]
有機窒素成分として酵母エキス(アサヒフードアンドヘルスケア社製)0.025g(0.05%)と、大豆粉5g(10.0%)と、水とを配合して、全体を50g(100%)とし、121℃、15分加熱滅菌した培地。
[培地Bのトリプトファン添加区]
有機窒素成分として酵母エキス(アサヒフードアンドヘルスケア社製)0.025g(0.05%)と、大豆粉5g(10.0%)と、L−トリプトファン0.1g(0.2%)と、水とを配合して、全体を50g(100%)とし、121℃、15分加熱滅菌した培地。
In order to examine the effect of the presence or absence of tryptophan on the medium on the production of 3-hydroxyanthranilic acid (hereinafter referred to as “3-HAA”), the filamentous fungi shown in Table 1 (both are independent administrative corporation product evaluations) Prepared for [Medium A (control group)], [Medium A tryptophan addition group], [Medium B (control group)], and [Medium B tryptophan addition group] shown below. 50 g of each medium was inoculated and cultured with shaking in a 200 ml Erlenmeyer flask at 30 ° C. for 3 days. The culture was sterilized at 80 ° C. for 10 minutes, and then centrifuged to obtain a supernatant. About each culture supernatant liquid, the amount of 3-HAA was measured by the high performance liquid chromatography (henceforth "HPLC"). The analysis results are shown in Table 1. The measurement conditions of HPLC are shown below.
[Medium A (control group)]
As an organic nitrogen component, 0.5 g (1.0%) of yeast extract (Becton & Dickinson), and 1 g (2.0%) of soybean oil (“Soya White Oil” manufactured by Kato Oil Co., Ltd.) as an oil and fat component As an inorganic substance, 0.05 g (0.1%) of monopotassium phosphate, 0.1 g (0.2%) of dipotassium phosphate, 0.025 g (0.05%) of magnesium sulfate, and sulfuric acid first A medium in which 0.0025 g (0.005%) of iron and water are blended to make the whole 50 g (100%) and sterilized by heating at 121 ° C. for 15 minutes.
[Medium A tryptophan addition group]
As an organic nitrogen component, 0.5 g (1.0%) of yeast extract (Becton & Dickinson), and 1 g (2.0%) of soybean oil (“Soya White Oil” manufactured by Kato Oil Co., Ltd.) as an oil and fat component As an inorganic substance, 0.05 g (0.1%) of monopotassium phosphate, 0.1 g (0.2%) of dipotassium phosphate, 0.025 g (0.05%) of magnesium sulfate, and sulfuric acid first 0.0025 g (0.005%) of iron, 0.2 g (0.4%) of L-tryptophan, and water were blended to make 50 g (100%) as a whole, and sterilized by heating at 121 ° C. for 15 minutes. Culture medium.
[Medium B (control group)]
Yeast extract (made by Asahi Food and Healthcare) 0.025g (0.05%), soybean powder 5g (10.0%), and water are blended as organic nitrogen components, and the total is 50g (100% ) And sterilized by heating at 121 ° C. for 15 minutes.
[Medium B tryptophan addition group]
Yeast extract (manufactured by Asahi Food and Healthcare) 0.025 g (0.05%), soybean powder 5 g (10.0%), and L-tryptophan 0.1 g (0.2%) as organic nitrogen components , And water to make 50 g (100%) as a whole and sterilized by heating at 121 ° C. for 15 minutes.
[HPLCの測定条件]
検出器:蛍光検出器(励起波長325nm、蛍光波長420nm)
カラム:Inertsil C18(内径4.6mm、長さ25cm)
移動相:5mmol 臭化ブチルテトラアンモニウム、0.1mmol EDTA、30mmol リン酸カリウム緩衝液(pH6.0):アセトニトリル=1000:70
流速:0.9ml/分
カラム温度:40℃
標品:試薬の3−HAA(東京化成工業株式会社製)を30mmol リン酸カリウム緩衝液(pH6.0)に溶解して、検量線を作成した。
検液:30mmol リン酸カリウム緩衝液(pH6.0)で希釈した。
[HPLC measurement conditions]
Detector: Fluorescence detector (excitation wavelength 325 nm, fluorescence wavelength 420 nm)
Column: Inertsil C18 (inner diameter 4.6 mm, length 25 cm)
Mobile phase: 5 mmol Butyltetraammonium bromide, 0.1 mmol EDTA, 30 mmol Potassium phosphate buffer (pH 6.0): Acetonitrile = 1000: 70
Flow rate: 0.9 ml / min Column temperature: 40 ° C
Standard: Reagent 3-HAA (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) was dissolved in 30 mmol potassium phosphate buffer (pH 6.0) to prepare a calibration curve.
Test solution: diluted with 30 mmol potassium phosphate buffer (pH 6.0).
実施例1について、リゾプス属に属する菌はいずれについても、トリプトファンを培地に添加することにより、3−HAAの顕著な産生が確認され、3−HAAを含有する抗酸化性組成物が得られた。 Regarding Example 1, all the bacteria belonging to the genus Rhizopus were confirmed to have significant production of 3-HAA by adding tryptophan to the medium, and an antioxidant composition containing 3-HAA was obtained. .
培地へのトリプトファン添加量が3−HAAの産生量に与える影響をみるために、リゾプス属に属する菌としてリゾプス オリゴスポラス(Rhizopus oligosporus)NBRC32003を、実施例1で用いた培地Aについて、表2のようにL−トリプトファンの添加量を調整して添加した培地各50gに、接種して、200ml三角フラスコにて、30℃、3日間振とう培養した。各培養物を80℃、10分殺菌した後、遠心分離により固液分離し、培養物上清液を得た。それぞれの上清液について、3−HAA量を、HPLCにて測定した。分析結果を、表2に示す。HPLCの測定条件は、実施例1と同様とした。 In order to examine the effect of the amount of tryptophan added to the medium on the production amount of 3-HAA, Rhizopus oligosporus NBRC32003 is used as a bacterium belonging to the genus Rhizopus, and the medium A used in Example 1 is as shown in Table 2. 50 g of each medium added by adjusting the amount of L-tryptophan added to the above was inoculated and cultured with shaking in a 200 ml Erlenmeyer flask at 30 ° C. for 3 days. Each culture was sterilized at 80 ° C. for 10 minutes and then subjected to solid-liquid separation by centrifugation to obtain a culture supernatant. About each supernatant liquid, the amount of 3-HAA was measured by HPLC. The analysis results are shown in Table 2. The HPLC measurement conditions were the same as in Example 1.
実施例2について、トリプトファン添加0.01重量%において、3−HAAの産生能向上を示し、添加効果がみられた。さらに、培地へのトリプトファン添加0.05重量%以上において、3−HAAの顕著な産生能を示し、培地へのトリプトファン添加量0.10重量%以上において、3−HAAは特に顕著な産生能を示し、トリプトファン添加量0.40重量%で最大値を示した。トリプトファン添加量0.40重量%における培養物上清液当たりの3−HAA量は539μg/gであった。また、この培養物上清液の固形分は0.98%であり、固形物当たりの3−HAA含有量は、55000μg/gであった。 About Example 2, the tryptophan addition 0.01 weight% showed improvement in the production ability of 3-HAA, and the addition effect was seen. Further, when HA added 0.05% by weight or more of tryptophan to the medium, 3-HAA showed a remarkable productivity, and when HA added to the medium was 0.10% by weight or more, 3-HAA showed particularly remarkable productivity. The maximum value was shown at a tryptophan addition amount of 0.40% by weight. The amount of 3-HAA per culture supernatant when the amount of tryptophan added was 0.40% by weight was 539 μg / g. Further, the solid content of this culture supernatant was 0.98%, and the 3-HAA content per solid was 55000 μg / g.
リゾプス オリゴスポラス(Rhizopus oligosporus)NBRC32003を、実施例1で用いた培地Aにおいて油脂(大豆油)を炭水化物の一つであるデキストリン(松谷化学工業株式会社製「パインデックス#1」)に置き替えたものにL−トリプトファンを0.45g(0.3%)添加し、水を配合して全体を150g(100%)とし、121℃、15分加熱滅菌した培地に、接種して、500ml三角フラスコにて、30℃、3日間振とう培養した。培養物を80℃、10分殺菌した後、遠心分離による固液分離工程を経て、上清を回収し、抗酸化性組成物を得た。さらに、活性炭による精製処理を行い、ろ過による固液分離を行った後、ろ液を回収し、抗酸化性組成物を21g(固形分6.5%)得た。このものについて、実施例1と同様の測定条件でHPLC測定したところ、3−HAA含有量は1859μg/gであり、固形物当たり3−HAA含有量は28600μg/g(2.86%)であった。
さらに、この液重量に対して3.5重量%のデキストリンを加えて、凍結乾燥し、本発明の抗酸化性組成物1.7gを得た。実施例1と同様の測定条件でHPLC測定したところ、3−HAA含有量は20300μg/g(2.03%)であった。得られた本発明品は、色は淡黄色であり、また、異味異臭がなく、官能面において良好なものであった。
Rhizopus oligosporus NBRC32003 replaced with dextrin (Matsutani Chemical Industry Co., Ltd. “Paindex # 1”) in which fat and oil (soybean oil) is replaced with one of carbohydrates in medium A used in Example 1 0.45 g (0.3%) of L-tryptophan was added to the mixture, and the whole was mixed with water to 150 g (100%). And cultured with shaking at 30 ° C. for 3 days. The culture was sterilized at 80 ° C. for 10 minutes, followed by a solid-liquid separation step by centrifugation, and the supernatant was collected to obtain an antioxidant composition. Further, after purification with activated carbon and solid-liquid separation by filtration, the filtrate was recovered to obtain 21 g (6.5% solids) of an antioxidant composition. When this product was subjected to HPLC measurement under the same measurement conditions as in Example 1, the 3-HAA content was 1859 μg / g, and the 3-HAA content per solid was 28600 μg / g (2.86%). It was.
Furthermore, 3.5% by weight of dextrin was added to the weight of the solution and freeze-dried to obtain 1.7 g of the antioxidant composition of the present invention. When HPLC measurement was performed under the same measurement conditions as in Example 1, the 3-HAA content was 20300 μg / g (2.03%). The obtained product of the present invention had a light yellow color, had no off-flavor, and had a good sensory surface.
リゾプス キネンシス(Rhizopus chinensis)NBRC4737を、大豆100g(50%)に、L−トリプトファンを0.4g(0.2%)添加し、水を配合して全体を200g(100%)とし、121℃、15分加熱滅菌した培地に、接種して、1L三角フラスコにて、30℃、3日間培養した。培養物に水800mlを加えて均質化した後、80℃、10分殺菌した後、遠心分離して上清を回収し、抗酸化性組成物を720g(固形分3.2%)得た。このものについて、実施例1と同様の測定条件でHPLC測定したところ、3−HAA含有量は662μg/gであり、固形物当たり3−HAA含有量は20700μg/g(2.07%)であった。
さらに、ろ過による固液分離を行った後、ろ液を減圧濃縮して濃縮液90g(固形分24.5%)を得た。この濃縮液重量に対して5重量%のデキストリンを加えて、凍結乾燥し、本発明の抗酸化性組成物25gを得た。このものについて、実施例1と同様の測定条件でHPLC測定したところ、3−HAA含有量は17200μg/g(1.72%)であった。
Rhizopus chinensis NBRC4737 was added to 100 g (50%) of soybean, 0.4 g (0.2%) of L-tryptophan, and water was added to make a total of 200 g (100%) at 121 ° C. The medium was inoculated into a medium sterilized by heating for 15 minutes and cultured in a 1 L Erlenmeyer flask at 30 ° C. for 3 days. The culture was homogenized by adding 800 ml of water, sterilized at 80 ° C. for 10 minutes, and then centrifuged to collect the supernatant to obtain 720 g of an antioxidant composition (solid content: 3.2%). When this product was subjected to HPLC measurement under the same measurement conditions as in Example 1, the 3-HAA content was 662 μg / g, and the 3-HAA content per solid was 20700 μg / g (2.07%). It was.
Furthermore, after performing solid-liquid separation by filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain 90 g of concentrated liquid (solid content: 24.5%). 5% by weight of dextrin with respect to the weight of the concentrated liquid was added and freeze-dried to obtain 25 g of the antioxidant composition of the present invention. This was subjected to HPLC measurement under the same measurement conditions as in Example 1. As a result, the 3-HAA content was 17200 μg / g (1.72%).
〔参考例〕
市販テンペ(固形分42.0%)及びテンペ菌により大豆を発酵した大豆発酵物(固形分36.6%)について、3−HAAの含有量を測定した。検体に30mmol リン酸カリウム緩衝液(pH6.0)を加え、粉砕後遠心分離し、上清液を得た。それぞれの上清液について、固形物当たりの3−HAA含有量を求めた。HPLCの測定条件は、実施例1と同様とした。分析結果を、表3に示す。比較として実施例3及び実施例4の固形物当たりの3−HAA含有量を示す。
なお、テンペ菌により大豆を発酵した大豆発酵物は、下記に示す国際公開第01/093696号公報(発明の名称「γ−アミノ酪酸及び遊離アミノ酸高含有発酵食品の製造方法」)<実施例8>記載の方法に従って、調製した。
※国際公開01/093696号公報<実施例8>記載の方法:脱皮大豆100gを0.2%酢酸溶液300mlに12時間浸漬し、120℃、5分間蒸煮し、蒸煮大豆を調製した。続いて蒸煮大豆にリゾプス オリゴスポラス(Rhizopus oligosporus)NBRC32003の菌株の胞子懸濁液1重量%を添加し、混合した。これを、表面に穴をあけたポリ袋に蒸煮大豆が厚さ1.5cm程度となるように充填した後に、30℃にて20〜22時間発酵後、20時間嫌気処理を行い、大豆発酵物を調製した。
[Reference example]
The content of 3-HAA was measured for commercial tempeh (solid content 42.0%) and fermented soybeans (solid content 36.6%) fermented with tempeh bacteria. A 30 mmol potassium phosphate buffer solution (pH 6.0) was added to the specimen, and the mixture was pulverized and then centrifuged to obtain a supernatant. For each supernatant, the 3-HAA content per solid was determined. The HPLC measurement conditions were the same as in Example 1. The analysis results are shown in Table 3. As a comparison, the 3-HAA content per solid in Example 3 and Example 4 is shown.
In addition, fermented soybeans fermented soybeans with Tempe fungus are shown in the following International Publication No. 01/093696 (Title of Invention “Method for Producing Fermented Foods Containing Gamma-Aminobutyric Acid and Free Amino Acid”) <Example 8 > Prepared according to the method described.
* Method described in International Publication No. 01/093696 <Example 8>: 100 g of moulted soybeans were immersed in 300 ml of 0.2% acetic acid solution for 12 hours, and steamed at 120 ° C. for 5 minutes to prepare steamed soybeans. Subsequently, 1% by weight of a spore suspension of Rhizopus oligosporus NBRC32003 strain was added to the steamed soybean and mixed. This was filled in a plastic bag with a hole in the surface so that the steamed soybean had a thickness of about 1.5 cm, and then fermented at 30 ° C. for 20 to 22 hours and then anaerobically treated for 20 hours. Was prepared.
参考例について、市販テンペ及びテンペ菌により大豆を発酵した大豆発酵物についての3−HAA含有量は100μg/g以下と小さく、本発明の実施例3及び実施例4の3−HAA含有量は、これらの200倍以上であり、顕著に多いものであった。また、本発明品による3−HAA含有量は、本明細書の段落[0003]に記載している非特許文献1のテンペの凍結乾燥品の3−HAA含有量約50mg/固形物100g(500μg/g)よりも、顕著に多いものであった。 About a reference example, 3-HAA content about the soybean fermented material which fermented soybean with commercially available tempeh and tempeh bacteria is as small as 100 micrograms / g or less, and 3-HAA content of Example 3 and Example 4 of the present invention is as follows. These were 200 times or more of these, and were remarkably many. In addition, the 3-HAA content of the product of the present invention is about 50 mg of 3-HAA content of the freeze-dried product of Tempe of Non-Patent Document 1 described in paragraph [0003] of this specification / 100 g of solid (500 μg). / G) was significantly more.
実施例3及び実施例4で得た本発明品について、β−カロテン退色法による抗酸化性の測定を行った。測定方法は、「津志田藤二郎、“食品機能性マニュアル:β−カロテン退色法による抗酸化性の測定”、[online]、2003年1月30日、独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構食品総合研究所、[2010年2月25日検索]、インターネット<URL:http://www.nfri.affrc.go.jp/yakudachi/manual/2-6.html>」に従った。
なお、溶媒は80%メタノールとし、抗酸化物質としてブチルヒドロキシアニソール(以下、「BHA」とする。)を用い、ブランクとして試料溶液の代わりに80%メタノールを用い、試料の処理前(0分)、50℃加熱処理45分、50℃加熱処理60分、のそれぞれについて、470nmの吸光度を測定し、次式から各試験溶液の退色抑制率を求めた。その結果を表4に示す。
The products of the present invention obtained in Example 3 and Example 4 were measured for antioxidant properties by β-carotene fading method. Measurement method is “Toshida Tojiro,“ Food Functionality Manual: Measurement of Antioxidation by β-Carotene Fading Method ”, [online], January 30, 2003, National Institute of Agricultural Sciences Research Institute, [Search February 25, 2010], Internet <URL: http://www.nfri.affrc.go.jp/yakudachi/manual/2-6.html>
The solvent is 80% methanol, butylhydroxyanisole (hereinafter referred to as “BHA”) is used as an antioxidant, 80% methanol is used as a blank instead of the sample solution, and the sample is processed (0 minutes). The absorbance at 470 nm was measured for each of the 50 ° C. heat treatment for 45 minutes and the 50 ° C. heat treatment for 60 minutes, and the fading inhibition rate of each test solution was determined from the following formula. The results are shown in Table 4.
(45分経過)退色抑制率(%)=100×[1−(Abs45−Abs0)/B0]
(60分経過)退色抑制率(%)=100×[1−(Abs60−Abs0)/B0]
B0 :ブランクの0分の吸光度
Abs0 :試料の処理前(0分)の吸光度
Abs45:処理45分後の吸光度
Abs60:処理60分後の吸光度
(45 minutes elapsed) fading suppression rate (%) = 100 × [1- (Abs45−Abs0) / B0]
(60 minutes elapsed) fading suppression rate (%) = 100 × [1- (Abs60−Abs0) / B0]
B0: Absorbance at 0 minutes of blank
Abs0: Absorbance before sample processing (0 min)
Abs45: Absorbance after 45 minutes of treatment
Abs60: Absorbance after 60 minutes of treatment
実施例5について、退色抑制率は、本発明品のいずれもブランクと比較して顕著に優れ、抗酸化物質としてのBHAとほぼ同等の値を示し、本発明品が顕著な抗酸化活性を有していた。 As for Example 5, the color fading inhibition rate of all of the products of the present invention is remarkably superior to that of the blank, shows almost the same value as BHA as an antioxidant, and the products of the present invention have a remarkable antioxidant activity. Was.
ドコサヘキサエン酸(以下、「DHA」とする。)を28%含有する魚油に対して、本発明品(実施例3)0.15重量%、ビタミンE0.3重量%、アスコルビン酸パルミテート0.3重量%、をそれぞれ添加した添加区を調製し、それぞれについて、油脂の酸化加速試験を行った。酸化加速試験は、油を入れた試験管を85〜90℃に設定したDRY THERMO UNIT(大洋科学工業株式会社製)に入れ、試験管1本当たり150ml/分通気しながら、加熱した。その後、一定の間隔で、過酸化物価(POV)測定を行った。なお、本発明品及びビタミンE、アスコルビン酸パルミテート、をそれぞれ油脂に溶解させるために、エタノール、水を配合して魚油に添加した。また、対照区としてこれらに替えてデキストリンを添加したものを調製し、他の試験区と同様に操作した。その結果を表5に示す。 For fish oil containing 28% docosahexaenoic acid (hereinafter referred to as “DHA”), the product of the present invention (Example 3) 0.15% by weight, vitamin E 0.3% by weight, ascorbyl palmitate 0.3% by weight % Were added, and an oxidation acceleration test for fats and oils was performed for each. In the oxidation acceleration test, a test tube containing oil was placed in a DRY THERMO UNIT (manufactured by Taiyo Kagaku Kogyo Co., Ltd.) set at 85 to 90 ° C., and heated while aeration of 150 ml / min per test tube. Thereafter, the peroxide value (POV) was measured at regular intervals. In addition, in order to dissolve this invention product, vitamin E, and ascorbyl palmitate in fats and oils, ethanol and water were blended and added to fish oil. Moreover, what added dextrin instead of these as a control group was prepared, and it operated similarly to other test groups. The results are shown in Table 5.
実施例6について、DHAを28%含有する魚油に対する抗酸化性については、本発明品(実施例3)添加区は、1.5時間経過及び2.5時間経過においてのいずれも、POV値がビタミンE添加区より小さな値であり、本発明品が顕著な抗酸化性能を有することを示した。 About Example 6, about the antioxidant property with respect to the fish oil containing 28% of DHA, this invention (Example 3) addition section has POV value in both 1.5-hour progress and 2.5-hour progress. The value was smaller than that of the vitamin E addition group, indicating that the product of the present invention has a remarkable antioxidant performance.
魚油を比較的多く含有するイワシのつみれについて、以下の配合例1の処方を用いて、本発明品(実施例3)を0.15重量%添加した添加区と、本発明品の替わりに、加工食品全般の消臭・抗酸化・日持向上を用途とする市販茶抽出物(三菱化学フーズ株式会社製「サンフードCD」)を0.15重量%添加した試験区を各100g調製し、それぞれについて、調製直後の官能風味、POV測定、冷蔵保存後のPOV測定を行い、酸化抑制効果の試験をした。なお、本発明品又は市販茶抽出物を添加しないものを100g調製し、対照区とした。その結果を表6に示す。
[配合例1]
次の処方で、イワシをミキサーで粉砕後、食塩、残余の配合成分を加えてすり鉢にて十分擂った後、沸騰浴中で3〜4分間加熱してイワシのつみれを調製し、透明パウチに入れて冷蔵保管した。
(材料) (重量%)
イワシ 61.8
馬鈴薯澱粉 12.4
砂糖 3.1
食塩 1.8
グリシン 1.5
グルタミン酸ナトリウム 0.4
水 18.85
本発明品(実施例3) 0.15
About the sardine pickle containing a relatively large amount of fish oil, using the formulation of the following formulation example 1, the addition of 0.15% by weight of the product of the present invention (Example 3), instead of the product of the present invention, 100 g of test sections each containing 0.15% by weight of a commercially available tea extract (“Sun Food CD” manufactured by Mitsubishi Chemical Foods Co., Ltd.) for the purpose of deodorizing, anti-oxidation and improving shelf life of processed foods in general are prepared. About each, the sensory flavor immediately after preparation, POV measurement, POV measurement after refrigerated storage were performed, and the oxidation inhibitory effect was tested. In addition, 100 g of the product to which the product of the present invention or the commercial tea extract was not added was prepared as a control group. The results are shown in Table 6.
[Formulation Example 1]
In the following formulation, sardines are ground with a mixer, added with salt and the remaining ingredients and thoroughly sown in a mortar, then heated in a boiling bath for 3-4 minutes to prepare sardine tsunami, and transparent pouch Refrigerated storage.
(Material) (wt%)
Sardine 61.8
Potato starch 12.4
Sugar 3.1
Salt 1.8
Glycine 1.5
Sodium glutamate 0.4
Water 18.85
Product of the present invention (Example 3) 0.15
実施例7について、イワシのつみれに対する酸化抑制効果については、本発明品(実施例3)添加区は、対照区(無添加)及び市販茶抽出物添加区に比べ、調製直後、冷蔵保存7日後のいずれもPOV値が低く、酸化が抑制された。官能風味については、本発明品(実施例3)添加品は、対照区(無添加)及び市販茶抽出物添加区に比べ、イワシらしい好ましい風味を有し、魚油の劣化が抑制されたものであり、本発明品が顕著な抗酸化性能を有することを示した。 About Example 7, about the oxidation inhibitory effect with respect to a sardine tsunami, this invention (Example 3) addition group compared with a control group (no addition) and a commercial tea extract addition group immediately after preparation, 7 days after refrigerated storage Both of them had low POV values and suppressed oxidation. As for the sensory flavor, the product of the present invention (Example 3) has a preferred flavor that seems to be sardine compared to the control group (no additive) and the commercially available tea extract added group, and the deterioration of fish oil is suppressed. It was shown that the product of the present invention has remarkable antioxidant performance.
本発明の抗酸化性組成物を食品、化粧品に用いた例を示す。 The example which used the antioxidant composition of this invention for foodstuffs and cosmetics is shown.
[配合例2]
ゼラチンカプセルに本発明品(実施例4)200mgを充填し、キャップ部を結合し、抗酸化性組成物を含有するカプセル食品を調製した。
[Formulation Example 2]
A gelatin capsule was filled with 200 mg of the product of the present invention (Example 4), the cap portion was bound, and a capsule food containing an antioxidant composition was prepared.
[配合例3]
次の処方で常法により、湿式造粒し、打錠して錠剤を得た。
(成分) (重量%)
本発明品(実施例4) 35.0
乳糖 47.0
結晶セルロース 14.0
ヒドロキシプロピルセルロース 3.0
ステアリン酸マグネシウム 0.1
タルク 0.9
[Composition Example 3]
The following formulation was wet granulated by a conventional method and tableted to obtain tablets.
(Ingredient) (wt%)
Product of the present invention (Example 4) 35.0
Lactose 47.0
Crystalline cellulose 14.0
Hydroxypropyl cellulose 3.0
Magnesium stearate 0.1
Talc 0.9
[配合例4]
次の処方で常法により、化粧水を製造した。
(成分) (重量%)
本発明品(実施例3) 0.2
グリセリン 5.0
オレイルアルコール 0.1
ポリエキシエチレン(20)
ソルビタンモノラウリル酸エステル 0.5
エチルアルコール 10.0
香料 0.2
精製水 84.0
[Formulation Example 4]
A skin lotion was produced according to a conventional method with the following formulation.
(Ingredient) (wt%)
Product of the present invention (Example 3) 0.2
Glycerin 5.0
Oleyl alcohol 0.1
Polyethylene (20)
Sorbitan monolaurate ester 0.5
Ethyl alcohol 10.0
Fragrance 0.2
Purified water 84.0
[配合例5]
次の処方で常法により、クリームを製造した。
(成分) (重量%)
本発明品(実施例3) 3.0
ステアリン酸 8.0
ステアリルアルコール 4.0
ステアリン酸ブチル 6.0
プロピレングリコール 5.0
モノステアリン酸グリセリン 2.0
水酸化カリウム 0.4
防腐剤 適 量
酸化防止剤 適 量
香料 適 量
精製水 71.6
[Formulation Example 5]
The cream was manufactured by the following method with the conventional method.
(Ingredient) (wt%)
Product of the present invention (Example 3) 3.0
Stearic acid 8.0
Stearyl alcohol 4.0
Butyl stearate 6.0
Propylene glycol 5.0
Glycerol monostearate 2.0
Potassium hydroxide 0.4
Antiseptic appropriate amount Antioxidant appropriate amount Fragrance appropriate amount Purified water 71.6
[配合例6]
次の処方で常法により、ローションを製造した。
(成分) (重量%)
本発明品(実施例3) 3.0
エチルアルコール 15.0
ヒドロキシエチルセルロース 0.1
防腐剤 0.1
精製水 81.8
[Composition Example 6]
A lotion was produced according to a conventional method with the following formulation.
(Ingredient) (wt%)
Product of the present invention (Example 3) 3.0
Ethyl alcohol 15.0
Hydroxyethyl cellulose 0.1
Preservative 0.1
Purified water 81.8
Claims (4)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010100943A JP5725598B2 (en) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Method for producing antioxidant composition |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010100943A JP5725598B2 (en) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Method for producing antioxidant composition |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011229427A JP2011229427A (en) | 2011-11-17 |
JP5725598B2 true JP5725598B2 (en) | 2015-05-27 |
Family
ID=45319442
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010100943A Active JP5725598B2 (en) | 2010-04-26 | 2010-04-26 | Method for producing antioxidant composition |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5725598B2 (en) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101608271B1 (en) | 2013-02-28 | 2016-04-01 | 목포대학교산학협력단 | A strain of rhizopus stolonifer from fermented tea and uses thereof |
JP2018170957A (en) * | 2015-08-31 | 2018-11-08 | 池田食研株式会社 | Method for producing soybean fermented product |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4472399B2 (en) * | 2004-03-26 | 2010-06-02 | 一丸ファルコス株式会社 | Novel 3-hydroxyanthranilic acid derivatives |
JP4641150B2 (en) * | 2004-04-20 | 2011-03-02 | 伯東株式会社 | Antioxidant secretion promoter and method for producing antioxidant substance |
-
2010
- 2010-04-26 JP JP2010100943A patent/JP5725598B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2011229427A (en) | 2011-11-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Panesar et al. | Production of microbial pigments utilizing agro-industrial waste: a review | |
Kosseva | Processing of food wastes | |
JP6008983B2 (en) | Method for producing ketooctadecadienoic acid | |
AU2013316906B2 (en) | Oil enriched with arachidonic acid of microorganisms (unicellular fungus Mortierella alpina) and method for the production | |
Ibarruri et al. | Valorisation of fruit and vegetable discards by fungal submerged and solid-state fermentation for alternative feed ingredients production | |
JP2004313032A (en) | Method for producing functional raw material | |
JP2008017703A (en) | METHOD FOR PRODUCING FOOD COMPRISING gamma-AMINOBUTYRIC ACID AND ORNITHINE | |
JP4968869B2 (en) | Method for producing γ-aminobutyric acid | |
JP2006199624A (en) | Acetobacter-containing in vivo antioxidative composition | |
Bekatorou et al. | Biotechnological Exploitation of Brewery Solid Wastes for Recovery or Production of Value‐Added Products | |
JP2023530926A (en) | novel food | |
JP5725598B2 (en) | Method for producing antioxidant composition | |
US4769243A (en) | Method for preparing green aroma compounds | |
Awulachew | Food additives and food processing aids: the role, function and future research need of industrial food biotechnology | |
JP5725599B2 (en) | Method for producing antioxidant composition | |
JP6429162B1 (en) | Labyrinthula culture method | |
JP4068103B2 (en) | Production method of vitamin K by culture of Yunnan SL-001 | |
Rajauria et al. | Novel fermented marine-based products | |
JP2021138676A (en) | Functional composite lipid | |
JP6846694B2 (en) | Body weight or visceral fat increase inhibitor or body weight or visceral fat increase suppression food composition or body weight or visceral fat increase suppression feed composition | |
Pereira | Otimização da Produção de Biomassa de Um Pediococcus Parvulus Degradador de OTA | |
Garofalo et al. | Fermentation of Microalgal Biomass for Innovative Food Production. Microorganisms 2022, 10, 2069 | |
JP2020502993A (en) | Food or drink based on marine microalgae | |
JP2007267662A (en) | Method for producing discolored laver processed food material and laver processed food material | |
JP2009045008A (en) | Method for producing tetrahydrocurcumins |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130410 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130924 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140902 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140912 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150303 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150327 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5725598 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |