JP5707317B2 - 液体クロマトグラフ,液体クロマトグラフ用カラム、および液体クロマトグラフ用カラムのフィルタ - Google Patents
液体クロマトグラフ,液体クロマトグラフ用カラム、および液体クロマトグラフ用カラムのフィルタ Download PDFInfo
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Description
図1は、液体クロマトグラフの概略構成を示す構成図である。一般に、液体クロマトグラフをアミノ酸の分析に使用する場合は、アミノ酸分析計と呼ばれる。各構成機器をつなぐ線分は、配管等の流路を表す。分析対象試料を運搬する第1緩衝液が容器1に、第2緩衝液が容器2に、第3緩衝液が容器3に、第4緩衝液が容器4に保管されている。また、分離カラムを洗浄し再生するためのカラム再生液が容器5に保管されている。図示しない制御装置により、電磁弁6A,6B,6C,6D,6Eの開閉が制御され、緩衝液ポンプ7により選ばれた緩衝液が流路へ送液される。緩衝液は、緩衝液中のアンモニアを除去するアンモニアフィルタ8を通過し、オートサンプラ9で分析対象試料が注入され、分離カラム10へ達する。分離カラム10では、分析対象試料、たとえばアミノ酸が分離し、ミキサ13へ送られる。一方、ニンヒドリン試薬が容器11に保管されており、ニンヒドリン試薬ポンプ12により、ニンヒドリン試薬がミキサ13へ送られる。ミキサ13で分離したアミノ酸とニンヒドリン試薬とが混合し、反応カラム14で加熱されて両者が反応し、反応により発色したアミノ酸のルーエマンパープル色が検出器15で検出され、データ処理装置16にデータが送られる。データ処理装置16では、クロマトグラムが作成され、画面表示およびデータの保存が行われる。
図2は、分離カラムの構成を示す縦断面図である。分離カラム10は、管形状のカラムボディ17の内部に充填剤18が充填され、両端部をカラムフィルタ19で封止したものである。また、カラムフィルタ19の周囲をパッキン20で押さえて漏れ止めとするとともに、フィッティングキャップ21をカラムボディ17にねじ込む等で、カラムフィルタ19を充填剤18に押し付けて封止するようにしている。
アミノ酸分析計では、アミノ酸成分を分離カラム10で分離した後に、ニンヒドリン反応試薬と混合し、反応カラム14で摂氏135度に加温することによりルーエマンパープル色が生成されるので、検出器15で可視光570ナノメートルの吸光度を検出する。この混合から発色反応までを行うデバイスとして、柱状リアクタを反応カラム14に使用する。反応カラム14の構造は、図2に示した分離カラム10と同様であり、カラムボディの内径は3から6ミリメートル、長さ40から80ミリメートルである。この内部に、粒径100マイクロメートル程度で、化学反応上不活性な球形あるいは破砕型のセラミックス系ビーズなどが充填剤として充填されている。反応カラム14からのこのビーズの流出を防止する目的で、両端部にフィルタを設けている。
6A,6B,6C,6D,6E 電磁弁
7 緩衝液ポンプ
8 アンモニアフィルタ
9 オートサンプラ
10 分離カラム
12 ニンヒドリン試薬ポンプ
13 ミキサ
14 反応カラム
15 検出器
16 データ処理装置
17 カラムボディ
18 充填剤
19 カラムフィルタ
20 パッキン
21 フィッティングキャップ
Claims (4)
- 移動相を送液する第1のポンプと、
前記第1のポンプから送液された移動相流路中に液体試料を注入する試料注入部と、
前記試料が注入された移動相から試料成分を分離する分離カラムと、
前記分離カラムよりも下流側に配置され、前記分離カラムにより分離された試料成分に反応試薬を送り出す第2のポンプと、
前記分離カラムにより分離された試料成分と、前記第2のポンプにより送り出された反応試薬との合流部よりも下流側に配置され、前記試料成分と、前記第2のポンプにより送り出された反応試薬とを加熱反応させることにより、前記試料成分を化学的に修飾する反応カラムと、
前記反応カラムにより修飾された試料成分を検出する検出器と、を備え、
前記液体試料中の少なくともジサルファイド系アミノ酸を含む試料成分を分析する液体クロマトグラフ用の前記反応カラムであって、
中空管状のカラムボディと、
該カラムボディの中空部に充填されたビーズ状の充填剤と、
該充填剤の粒径よりも小さい寸法のメッシュを備えたフィルタと、
該フィルタを前記充填剤へ押し付けて前記充填剤を前記カラムボディ内に封止するキャップとを備え、
前記フィルタがハステロイ(登録商標)であることを特徴とする液体クロマトグラフ用の反応カラム。 - 移動相を送液する第1のポンプと、
前記第1のポンプから送液された移動相流路中に液体試料を注入する試料注入部と、
前記試料が注入された移動相から試料成分を分離する分離カラムと、
前記分離カラムよりも下流側に配置され、前記分離カラムにより分離された試料成分に反応試薬を送り出す第2のポンプと、
前記分離カラムにより分離された試料成分と、前記第2のポンプにより送り出された反応試薬との合流部よりも下流側に配置され、前記試料成分と、前記第2のポンプにより送り出された反応試薬とを加熱反応させることにより、前記試料成分を化学的に修飾する反応カラムと、
前記反応カラムにより修飾された試料成分を検出する検出器と、を備え、
前記液体試料中の少なくともジサルファイド系アミノ酸を含む試料成分を分析する液体クロマトグラフ用の前記反応カラムのフィルタであって、
前記反応カラムに充填された充填剤の粒径よりも小さいメッシュを有し、材質がハステロイ(登録商標)であることを特徴とする液体クロマトグラフ用の反応カラムのフィルタ。 - 液体試料中の少なくともジサルファイド系アミノ酸を含む試料成分を分析する液体クロマトグラフであって、
移動相を送液する第1のポンプと、
前記第1のポンプから送液された移動相流路中に前記液体試料を注入する試料注入部と、
前記試料が注入された移動相から試料成分を分離する分離カラムと、
前記分離カラムよりも下流側に配置され、前記分離カラムにより分離された試料成分に反応試薬を送り出す第2のポンプと、
前記分離カラムにより分離された試料成分と、前記第2のポンプにより送り出された反応試薬との合流部よりも下流側に配置され、前記試料成分と、前記第2のポンプにより送り出された反応試薬とを加熱反応させることにより、前記試料成分を化学的に修飾する反応カラムと、
前記反応カラムにより修飾された試料成分を検出する検出器と、を備え、
前記反応カラムは、
中空管状のカラムボディと、
該カラムボディの中空部に充填されたビーズ状の充填剤と、
該充填剤の粒径よりも小さい寸法のメッシュを備えたフィルタと、
該フィルタを前記充填剤へ押し付けて前記充填剤を前記カラムボディ内に封止するキャップとを備え、
前記フィルタがハステロイ(登録商標)であることを特徴とする液体クロマトグラフ。 - 請求項3に記載された液体クロマトグラフであって、
当該第2のポンプにより送り出される反応試薬は、ニンヒドリンを含む試薬であることを特徴とする液体クロマトグラフ。
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