JP5690467B2 - 嗅覚感度抑制剤のスクリーニング法 - Google Patents
嗅覚感度抑制剤のスクリーニング法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5690467B2 JP5690467B2 JP2008103750A JP2008103750A JP5690467B2 JP 5690467 B2 JP5690467 B2 JP 5690467B2 JP 2008103750 A JP2008103750 A JP 2008103750A JP 2008103750 A JP2008103750 A JP 2008103750A JP 5690467 B2 JP5690467 B2 JP 5690467B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- olfactory
- voltage
- cation channel
- electrical activity
- test substance
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
(I)電位依存性カチオンチャネルを有する基質に被験物質を添加し、当該カチオンチャネルにより生じる電気的活動を抑制する物質を評価又は選択することを特徴とする、嗅覚感度抑制剤の評価又はスクリーニング方法。
(II)以下の(1)〜(4)の工程を含むことを特徴とする、嗅覚感度抑制剤の評価又はスクリーニング方法:
(1)電位依存性カチオンチャネルを有する基質に被験物質を添加する工程
(2)前記電位依存性カチオンチャネルにより生じる電気的活動を測定する工程
(3)(2)で測定された電気的活動を、対照群における電気的活動と比較する工程
(4)(3)の結果に基づいて、電気的活動を抑制する被験物質を嗅覚感度抑制剤として評価又は選択する工程。
(III)電位依存性カチオンチャネルが、嗅細胞由来電位依存性カチオンチャネルである、(I)記載の方法。
本発明の嗅覚感度抑制剤の評価又はスクリーニング方法は、電位依存性カチオンチャネルを有する基質を用い、ここに嗅覚感度抑制剤の候補物質である被験物質を添加し、当該カチオンチャネルにより生じる電気的活動を抑制する物質を評価又は選択するものである。後述の実施例に示すように、アカハライモリ嗅細胞の電位依存性カチオンチャネルにより生じる電気的活動に対する試験物質の影響を測定する一方で、それらの試験物質の嗅覚マスキング効果を、官能試験によって評価したところ、電位依存性カチオンチャネル抑制効果の高い物質ほど、より高い嗅覚マスキング効果を発揮することがわかった。この結果は、電位依存性カチオンチャネルによる電気的活動を抑制する物質が嗅覚感度抑制剤として有用であり、且つ電位依存性カチオンチャネルの抑制率を指標として、嗅覚感度抑制剤を評価又はスクリーニングできることを示している。
(1)電位依存性カチオンチャネルを有する基質に被験物質を添加する工程
(2)前記電位依存性カチオンチャネルにより生じる電気的活動を測定する工程
(3)(2)で測定された電気的活動を、対照群における電気的活動と比較する工程
(4)(3)の結果に基づいて、電気的活動を抑制する被験物質を嗅覚感度抑制剤として評価又は選択する工程。
上記工程において、電位依存性カチオンチャネルを有する基質は、当該チャネルが活性を維持し、且つ電気的活動を引き起こし得る条件下に保持される。保持条件は、使用される基質の種類や電気的活動の測定方法等によって異なるが、定法に従って当業者が適宜選択することができる。
(1.嗅細胞の単離)
アカハライモリより公知の方法(Kurahashiら, J. Physiol. (1989), 419: 177-192)に従って嗅細胞を単離し、正常リンガー液に浸した。単離方法を簡単に示すと、氷水中で冬眠状態にしたイモリにダブルピスを施し、頭蓋を切開し嗅粘膜を取り出す。取り出した嗅粘膜を0.1%コラゲナーゼ溶液中で37℃にて5分間インキュベートし、コラゲナーゼを洗い流したあと、ガラスピペットにて組織を粉砕し細胞を単離した。正常リンガー液としては、NaCl 110 mM、KCl 3.7 mM、CaCl2 3 mM、MgCl2 1 mM、グルコース 15 mM、ピルビン酸ナトリウム 1 mM、HEPES 2 mM、フェノールレッド 0.001%(w/v)、pH 7.4(NaOHで調整)を用いた。
(A.設定) 単離した嗅細胞を全細胞記録法により膜電位を固定し、膜電流の計測を行った(Kawaiら, J. Gen. Physiol. (1997), vol.109: 265-272)。電極は、ホウケイ酸ガラスキャピラリー(直径1.2mm)を用い、電極作成用プラー(PP-830, 成茂科学器械)にて作製した(電極抵抗10-30MΩ)。電極内には、電極内溶液と銀塩化銀線を挿入し、銀塩化銀線はパッチクランプアンプ(Axopatch 1D, 200B, Axon Instrument)と接続し、膜電位の固定、脱分極刺激を行った。電極内溶液としては、KCl 120 mM、HEPES 2 mM、phenol red 0.001%(w/v)、pH7.4(KOHで調整)を用いた。膜電流の記録は、パッチクランプアンプとA/D変換装置(Digidata 1320,Axon Instrument)を介して接続されたコンピューターを用いて行った。試験物質の細胞への刺激(吹きかけ)には、圧力制御装置を用いた。圧力制御装置とは、エアーコンプレッサーより送り込まれた圧縮空気を、コンピューター制御にて任意の圧力まで減圧し、設定した時間、その圧縮空気を試験物質を充填したガラスピペット尾部へ送り込む装置である(Itoら、日本生理学雑誌, 1995,vol.57,127-133)。
内向き電流抑制率 =(1−b/a)×100(%)
各試験物質の内向き電流抑制率を表1に併せて示す。一部の試験物質では、嗅細胞における脱分極に伴う内向き電流の発生が完全に抑制されていた。
(A.手順) 官能評価の嗅覚マスキング試験をパネラー20名に対して実施した。悪臭物質として1 %イソ吉草酸を用い、表2で示した物質をマスキング素材として選択した。悪臭2 μlと試験物質4 μlを別々の綿球(直径1 cm)にしみこませ、別々の50 ml注射筒内で12時間、室温で揮発させた。注射筒内で気化した悪臭と試験物質をフタ付きのPP容器(容積500 ml)内へ注入し、混和させた。評価は、パネラー自身がPP容器のフタをわずかに開け、容器内の匂いを嗅ぎ、マスキング強度を判定した。マスキング強度の評価は、悪臭のみを注入したPP容器内の臭気強度と比較し、以下のとおり6段階で行った。
0:マスキングされていない
1:マスキング効果がごくわずかに認められる
2:マスキング効果がやや認められる
3:マスキング効果が十分認められる
4:ほとんどマスキングされている
5:完全にマスキングされている
Claims (5)
- 電位依存性カチオンチャネルを有する基質に被験物質を添加し、電位固定した当該カチオンチャネルを有する基質を脱分極させることにより生じる該カチオンチャネルの電気的活動をパッチクランプ法により測定し、次いで当該電気的活動を抑制する物質を評価又は選択することを特徴とする、嗅覚感度抑制剤の評価又はスクリーニング方法。
- 以下の(1)〜(4)の工程を含むことを特徴とする、嗅覚感度抑制剤の評価又はスクリーニング方法:
(1)電位依存性カチオンチャネルを有する基質に被験物質を添加する工程
(2)電位固定した前記電位依存性カチオンチャネルを有する基質を脱分極させることにより生じる該カチオンチャネルの電気的活動をパッチクランプ法により測定する工程
(3)(2)で測定された電気的活動を、対照群における電気的活動と比較する工程
(4)(3)の結果に基づいて、電気的活動を抑制する被験物質を嗅覚感度抑制剤として評価又は選択する工程。 - 以下の(1)〜(6)の工程を含むことを特徴とする、嗅覚感度抑制剤の評価又はスクリーニング方法:
(1)電位依存性カチオンチャネルを有する基質に被験物質を添加する工程
(2)電位固定した前記電位依存性カチオンチャネルを有する基質を脱分極させることにより生じる該カチオンチャネルの電気的活動をパッチクランプ法により測定する工程
(3)(2)で測定された電気的活動を、対照群における電気的活動と比較する工程
(4)(3)の結果に基づいて、電気的活動を抑制する被験物質を選択する工程
(5)(4)で選択された物質を、官能評価による嗅覚マスキング試験に付す工程
(6)(5)で嗅覚マスキング効果を発揮したと評価された物質を、嗅覚感度抑制剤として選択する工程。 - 被験物質が神経伝達物質を含まない、請求項1〜3のいずれか1項記載の方法。
- 電位依存性カチオンチャネルが、嗅細胞由来電位依存性カチオンチャネルである、請求項1〜4のいずれか1項記載の方法。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008103750A JP5690467B2 (ja) | 2008-04-11 | 2008-04-11 | 嗅覚感度抑制剤のスクリーニング法 |
CN200980108210.XA CN101960306B (zh) | 2008-04-11 | 2009-04-10 | 嗅觉灵敏度抑制剂的筛选方法 |
US12/936,978 US9012153B2 (en) | 2008-04-11 | 2009-04-10 | Method for screening olfactory sensibility inhibitor |
EP09730226.9A EP2270493B1 (en) | 2008-04-11 | 2009-04-10 | Method for screening olfactory sensibility inhibitor |
PCT/JP2009/001677 WO2009125604A1 (ja) | 2008-04-11 | 2009-04-10 | 嗅覚感度抑制剤のスクリーニング法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008103750A JP5690467B2 (ja) | 2008-04-11 | 2008-04-11 | 嗅覚感度抑制剤のスクリーニング法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009257776A JP2009257776A (ja) | 2009-11-05 |
JP5690467B2 true JP5690467B2 (ja) | 2015-03-25 |
Family
ID=41161740
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008103750A Active JP5690467B2 (ja) | 2008-04-11 | 2008-04-11 | 嗅覚感度抑制剤のスクリーニング法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9012153B2 (ja) |
EP (1) | EP2270493B1 (ja) |
JP (1) | JP5690467B2 (ja) |
CN (1) | CN101960306B (ja) |
WO (1) | WO2009125604A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5733909B2 (ja) * | 2010-05-12 | 2015-06-10 | 花王株式会社 | 電位依存性カチオンチャネル抑制剤 |
US20130210775A1 (en) | 2012-02-09 | 2013-08-15 | Kao Corporation | Agent for inhibiting odor of pyrazine derivatives |
ES2768338T3 (es) | 2013-06-29 | 2020-06-22 | Firmenich & Cie | Procedimientos para identificar, aislar y utilizar receptores de odorantes y aromas |
JP6831674B2 (ja) * | 2015-11-24 | 2021-02-17 | 花王株式会社 | 尿臭抑制剤 |
WO2017090518A1 (ja) * | 2015-11-24 | 2017-06-01 | 花王株式会社 | 尿臭抑制剤 |
BR112020007987A2 (pt) * | 2017-11-22 | 2020-10-20 | Firmenich S.A. | compostos espiro como ingredientes neutralizantes de mau odor |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH04174674A (ja) * | 1990-11-06 | 1992-06-22 | Naizu Saat:Kk | 消臭方法及び装置 |
US5525329A (en) | 1992-05-21 | 1996-06-11 | The Johns Hopkins University | Inhibition of phosphodiesterase in olfactory mucosa |
US6150409A (en) | 1998-10-23 | 2000-11-21 | Monell Chemical Senses Center | Adjuvants and methods for raising intracellular calcium ion concentration |
JP2001128695A (ja) * | 1999-08-24 | 2001-05-15 | Takeda Chem Ind Ltd | スクリーニング方法 |
CN1309736C (zh) | 2001-07-06 | 2007-04-11 | 塞诺米克斯公司 | 人类嗅觉cng亚基多肽、核酸序列及相关的检定法 |
AU2002318229B2 (en) | 2001-07-10 | 2008-03-13 | Senomyx, Inc. | Use of specific T2R taste receptors to identify compounds that block bitter taste |
US7138107B2 (en) | 2003-02-18 | 2006-11-21 | Compellis Pharmaceuticals | Inhibition of olfactory neurosensory function to treat eating disorders and obesity |
JP2005053887A (ja) | 2003-08-07 | 2005-03-03 | Kao Corp | 体臭に対する嗅覚の感度を低下させる方法 |
AU2004292536A1 (en) | 2003-11-21 | 2005-06-09 | Arena Pharmaceuticals, Inc. | Methods for producing olfactory GPCRS |
WO2006002161A2 (en) | 2004-06-18 | 2006-01-05 | Duke University | Modulators of odorant receptors |
-
2008
- 2008-04-11 JP JP2008103750A patent/JP5690467B2/ja active Active
-
2009
- 2009-04-10 EP EP09730226.9A patent/EP2270493B1/en active Active
- 2009-04-10 CN CN200980108210.XA patent/CN101960306B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2009-04-10 WO PCT/JP2009/001677 patent/WO2009125604A1/ja active Application Filing
- 2009-04-10 US US12/936,978 patent/US9012153B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101960306B (zh) | 2014-07-09 |
US20110050246A1 (en) | 2011-03-03 |
WO2009125604A1 (ja) | 2009-10-15 |
EP2270493B1 (en) | 2020-03-18 |
US9012153B2 (en) | 2015-04-21 |
JP2009257776A (ja) | 2009-11-05 |
EP2270493A4 (en) | 2011-10-05 |
CN101960306A (zh) | 2011-01-26 |
EP2270493A1 (en) | 2011-01-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Scott et al. | The electroolfactogram: a review of its history and uses | |
Steinert et al. | Nitric oxide is a volume transmitter regulating postsynaptic excitability at a glutamatergic synapse | |
JP5690467B2 (ja) | 嗅覚感度抑制剤のスクリーニング法 | |
Inserra et al. | Multiple sodium channel isoforms mediate the pathological effects of Pacific ciguatoxin-1 | |
Fuchs et al. | Sensitized peripheral nociception in experimental diabetes of the rat | |
Fiumelli et al. | Modulation of GABAergic transmission by activity via postsynaptic Ca2+-dependent regulation of KCC2 function | |
Brown et al. | Convergent excitation of dorsal raphe serotonin neurons by multiple arousal systems (orexin/hypocretin, histamine and noradrenaline) | |
Fioretti et al. | Trigeminal ganglion neuron subtype‐specific alterations of CaV2. 1 calcium current and excitability in a Cacna1a mouse model of migraine | |
Pignatelli et al. | Functional properties of dopaminergic neurones in the mouse olfactory bulb | |
McLean | Do substance P and the NK1 receptor have a role in depression and anxiety? | |
Huitron-Resendiz et al. | Urotensin II modulates rapid eye movement sleep through activation of brainstem cholinergic neurons | |
Forsberg et al. | Ionized calcium in human cerebrospinal fluid and its influence on intrinsic and synaptic excitability of hippocampal pyramidal neurons in the rat | |
JP2012249614A (ja) | 悪臭抑制剤の探索方法 | |
Allison et al. | Connexin‐36 gap junctions mediate electrical coupling between ventral tegmental area GABA neurons | |
del Olmo et al. | Taurine-induced synaptic potentiation: role of calcium and interaction with LTP | |
Zhong et al. | Chronic antidepressant treatment alters serotonergic regulation of GABA transmission in prefrontal cortical pyramidal neurons | |
Ptak et al. | Cellular and synaptic effect of substance P on neonatal phrenic motoneurons | |
Olpe et al. | Contribution of presynaptic GABA-B receptors to paired-pulse depression of GABA responses in the hippocampus | |
JP7197298B2 (ja) | メチルメルカプタン臭抑制剤の評価及び/又は選択方法 | |
Remy et al. | Modulation of voltage-dependent sodium channels by the δ-agonist SNC80 in acutely isolated rat hippocampal neurons | |
Sun et al. | Substance P inhibits potassium and calcium currents in inner ear spiral ganglion neurons | |
Adachi et al. | Substance P modulation of hypoglossal motoneuron excitability during development: changing balance between conductances | |
Eilers et al. | Mechanosensitivity of primary afferent nociceptors in the pain pathway | |
Hsu et al. | A requirement of low-threshold calcium spike for induction of spike-timing-dependent plasticity at corticothalamic synapses on relay neurons in the ventrobasal nucleus of rat thalamus | |
Davis et al. | Calretinin-expressing islet cells are a source of pre-and post-synaptic inhibition of non-peptidergic nociceptor input to the mouse spinal cord |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110317 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130910 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131023 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140701 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140821 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150127 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150202 |
|
R151 | Written notification of patent or utility model registration |
Ref document number: 5690467 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R151 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |