JP5634844B2 - Bitter taste inhibitor - Google Patents
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Description
本発明は、医薬品や食品等に含まれる苦味物質の苦味を抑制するための苦味抑制剤に関する。 The present invention relates to a bitterness inhibitor for suppressing the bitterness of bitter substances contained in pharmaceuticals and foods.
苦味物質を含有する食品、医薬品、あるいは化粧品は数多く存在する。特に、医薬品においては、その殆どが苦味物質を有しており、経口摂取に際して苦痛を伴うものである。従って、苦味の低減は製剤上の大きな課題となっている。 There are many foods, pharmaceuticals, and cosmetics that contain bitter substances. In particular, most pharmaceuticals have bitter substances, and are painful when taken orally. Therefore, reduction of bitterness has become a major issue in formulation.
現在行われている製剤における苦味低減化法としては、例えば、甘味剤及び香料剤を添加する方法（特許文献１）、マイクロカプセル化、及び胃溶性コーティング剤による粉末コーティング剤を用いる方法、薬物を化学修飾する方法、包接化合物を添加する方法（特許文献２）など様々な方法が挙げられる。しかし、いずれの方法でも、苦味を充分に抑制することが難しく、また限られた薬物にしか用いることができないなどの問題がある。 Current methods for reducing bitterness in formulations include, for example, a method of adding sweeteners and fragrances (Patent Document 1), a method of microencapsulation, a method of using a powder coating agent with a gastric coating agent, and a drug. Various methods such as a method of chemically modifying and a method of adding an inclusion compound (Patent Document 2) can be mentioned. However, any method has problems that it is difficult to sufficiently suppress bitterness and that it can be used only for limited drugs.
さらに、上記の方法の他に、苦味を有する薬物に、油脂成分を添加する方法、特にレシチン（ホスファチジルコリン）又はケファリンの単独又は混合物を添加する方法（特許文献３）やレシチン（ホスファチジルコリン）を添加する方法（特許文献４）も提案されている。しかしながら、これらの方法でも依然として充分な苦味低減化には至らない。特に、幼児及び高齢者においては、薬剤の服用に際して固形製剤での服用が困難な場合が多く、そのような場合には、シロップ剤等の液状形態での服用が利用される。しかし、シロップ剤などの液状である薬物の苦味を除去する有効な方法がないのが現状である。 Furthermore, in addition to the above method, a method of adding an oil and fat component to a drug having a bitter taste, particularly a method of adding lecithin (phosphatidylcholine) or kephalin alone or a mixture (Patent Document 3) or lecithin (phosphatidylcholine) is added. A method (Patent Document 4) has also been proposed. However, these methods still do not lead to a sufficient bitterness reduction. In particular, infants and the elderly often find it difficult to take a solid preparation when taking a drug. In such a case, taking a liquid form such as a syrup is used. However, at present, there is no effective method for removing the bitter taste of liquid drugs such as syrups.
食品においても、蛋白質分解物から得られるアミノ酸、ペプチドの有する苦味や、果汁中に存在する苦味、添加フレーバーに由来する苦味などの様々な苦味物質が含まれる場合があり、これらの苦味物質の存在は、食品の品質を低下させることが多い。食品中における苦味を除去する方法としては、例えば、吸着体を用いる方法（特許文献５）、包接化合物を用いる方法（特許文献６）、及び甘味剤を添加する方法（特許文献７）などが知られている。しかしながら、これらの方法では苦味を充分に抑えられないことが多く、また食品の味の質を変化させやすいなどの問題点は多い。 Foods may also contain various bitter substances such as the bitter taste of amino acids and peptides obtained from proteolysates, the bitter taste present in fruit juice, and the bitter taste derived from added flavors. Often reduce the quality of food. Examples of methods for removing bitterness in food include a method using an adsorbent (Patent Document 5), a method using an inclusion compound (Patent Document 6), and a method of adding a sweetener (Patent Document 7). Are known. However, these methods often do not sufficiently suppress the bitterness, and there are many problems such as the tendency to change the quality of food taste.
更に、顔面に用いられる化粧水、口腔内で用いられるマウスウォッシュ、あるいは歯磨き等の化粧品類は通常は苦味を呈さないことが好ましい。しかしながらその成分である界面活性剤や香料（フレーバー）には苦味を呈するものがあり、使用に際してその苦味のためにその種類や量が限定されることがある。従来、苦味の除去には、甘味剤や特定の香料を添加して苦味の緩和を行っているが、このような手段が不適当な場合も多く、また強い苦味を呈する成分については充分な効果が得られないことが多い。 Furthermore, it is preferable that cosmetics such as lotion used on the face, mouthwash used in the oral cavity, or toothpaste do not usually have a bitter taste. However, some surfactants and fragrances (flavours) which are components thereof have a bitter taste, and the kind and amount thereof may be limited due to the bitter taste in use. Conventionally, bitterness has been removed by adding sweeteners and specific fragrances to alleviate bitterness, but such means are often inappropriate, and for ingredients that exhibit strong bitterness, sufficient effects are obtained. Is often not obtained.
一方、ナツメグは香辛料として、ゴマ、ニラ及びバジルは食用として、セッコツボク、ホルトソウ、ヒヨドリジョウゴ、エゾウコギ、イヌナズナは薬用として、シソは薬用又は食用として、スオウ、ベニコウジ、マグワ、ホウセンカ、サンブンサンは着色料として使用されている。 On the other hand, nutmeg is used as a spice, sesame, leek and basil are used as edible foods, gypsophila, holtso, chickweed, sorghum, inuazuna are used as medicinal products, perilla is used as medicinal products or food products, and Suou, Benikouji, Magwa, Hosenka and Sanbunsan are used as coloring agents. It is used.
しかしながら、これらの植物等に苦味物質の苦味を抑制する作用があることは全く知られていない。 However, it is not known at all that these plants have an action of suppressing the bitter taste of bitter substances.
本発明は、苦味物質の苦味の低減に有効であり、食品や医薬品に配合可能な、苦味抑制剤を提供することに関する。 The present invention relates to providing a bitterness inhibitor that is effective in reducing the bitterness of a bitter substance and that can be incorporated into foods and pharmaceuticals.
本発明者は、苦味物質、特にカテキン由来の苦味を抑制する物質について検討を行ったところ、特定の植物若しくは微生物又はこれらの抽出物に苦味抑制作用があり、苦味抑制剤として使用できることを見出した。 The present inventor examined bitterness substances, particularly substances that suppress catechin-derived bitterness, and found that specific plants or microorganisms or extracts thereof have a bitterness-inhibiting action and can be used as a bitterness-inhibiting agent. .
すなわち、本発明は、以下の１）〜５）に係るものである。
１） ナツメグ、サンブンサン、ホルトソウ、ヒヨドリジョウゴ、セッコツボク、エゾウコギ、ゴマ、マグワ、スオウ、ベニコウジ、シソ、ニラ、バジル、イヌナズナ、ホウセンカ及びこれらの抽出物から選ばれる１種以上を有効成分とする苦味抑制剤。
２）カテキン類に基づく苦味を抑制する、上記１）の苦味抑制剤。
３）上記１）の苦味抑制剤を用いることを特徴とする、苦味物質含有組成物の苦味抑制方法。
４）苦味物質含有組成物が、カテキン類を含有する医薬品、口腔用組成物、化粧品又は食品である上記３）の苦味抑制方法。
５）苦味抑制剤を苦味物質含有組成物に添加する、上記３）又は４）の苦味抑制方法。
That is, the present invention relates to the following 1) to 5).
1) Bitterness control comprising at least one selected from nutmeg, sanbunsan, holtsoh, hyodosorigo, sekkotsuboku, ezokogi, sesame, mugwa, suou, benikouji, perilla, leek, basil, innazuna, spinach and an extract thereof as active ingredients Agent.
2) The bitterness inhibitor of the above 1), which suppresses bitterness based on catechins.
3) A method for inhibiting bitterness of a bitter substance-containing composition, comprising using the bitterness inhibitor of 1) above.
4) The bitterness suppressing method of 3) above, wherein the bitter substance-containing composition is a pharmaceutical, oral composition, cosmetic or food containing catechins.
5) The bitterness suppressing method of 3) or 4) above, wherein a bitterness inhibitor is added to the bitter substance-containing composition.
本発明の苦味抑制剤は、苦味物質を含有した医薬品、口腔用組成物、化粧品又は食品等に使用することにより、安全性を害することなく、苦味を低減できることから、当該医薬品等の服用を容易にする、食品の味を向上させる等の効果を発揮し、それらの製品価値を高めることができる。 The bitterness suppressant of the present invention can be used in pharmaceuticals, oral compositions, cosmetics, foods, and the like containing bitter substances, so that bitterness can be reduced without harming safety. The effect of improving the taste of food, etc. can be exhibited, and the product value can be increased.
本発明において、ナツメグとは、ニクズク科のニクズク（Myristica fragrans）を、サンブンサンとは、ナス科のサンブンサン（Scopolia acutangula）を、ホルトソウとは、トウダイグサ科のホルトソウ（Euphorbia lathyris LINN.）を、ヒヨドリジョウゴとは、ナス科のヒヨドリジョウゴ（Solanum lyratum）を、セッコツボク（接骨木）とは、スイカズラ科のニワトコ（Sambucus williamsii）を、エゾウコギとは、ウコギ科のエゾウコギ（Eleutherococcus senticosus）を、ゴマとは、ゴマ科のゴマ（Sesamum indicum）を、マグワとは、クワ科のカラヤマグワ（Morus alba）を、スオウとは、マメ科のスオウ（Caesalpinia sappan L.）を、ベニコウジとは、ベニコウジ菌（Monascus purpureus）を、シソとは、シソ科のシソ（Perilla frutescens var. crispa）を、ニラとは、ユリ科のニラ（Allium tuberosum Rottler ex Spreng）を、バジルとは、シソ科のメボウキ（Ocimum basilicum）を、イヌナズナとは、アブラナ科のイヌナズナ（Draba nemorosa）を、ホウセンカとはツリフネソウ科のホウセンカ（Impatiens balsamina）を意味する。 In the present invention, nutmeg refers to myristica fragrans, sambunsan refers to sanbunsan (Scopolia acutangula), sombuns refers to euphorbia latinris linn. Is the Solanum lyratum of the solanaceae, the elephant of the honeysuckle family (Sambucus williamsii), the elephant is the Ezotherococcus senticosus, Sesame sesame (Sesamum indicum), mugwa, mulberry mulberry (Morus alba), suu, legumes (Caesalpinia sappan L.), becouge, monascus purpureus Perilla frutescens var. Crispa, leek means leek (Allium tuberosum Rottler ex S) preng), Basil means Ocimum basilicum, Inazuna refers to Draba nemorosa, and Dendrobium refers to Impatiens balsamina.
上記のうち、ナツメグについてはその種子を、サンブンサンについては根を、ホルトソウについては種子を、ヒヨドリジョウゴについては全草を、セッコツボクについては全株を、エゾウコギについては根を、ゴマについては種子を、マグワについては葉を、スオウについては心材を、シソについては葉を、ニラについては種子を、バジルについては葉を、イヌナズナについては種子を、ホウセンカについては種子を用いることができる。また、ベニコウジについては菌体又は菌体が産生する色素を用いることができる。 Of these, the seeds for nutmeg, the roots for sanbunsan, the seeds for hortsou, the seeds for chickweed, the whole plant for sequoia, the roots for sorghum, the seeds for sesame, Leaves can be used for Magwa, heartwood for Suou, leaves for Perilla, seeds for Japanese leek, leaves for Basil, seeds for Inudazuna, and seeds for spinach. In addition, with respect to bemoji, fungus bodies or pigments produced by fungus bodies can be used.
本発明の抽出物としては、前記植物又は菌体の用部を、そのままあるいは乾燥した後に適当な大きさに切断したり、粉砕加工したりしたものを抽出して得られる抽出エキスの他、さらに分離精製して得られるより活性の高い画分（成分）が包含される。 As the extract of the present invention, in addition to an extract obtained by extracting a part of the plant or fungus as it is or after being dried and then cut into an appropriate size or pulverized, A more active fraction (component) obtained by separation and purification is included.
抽出は、室温又は加熱した状態で溶剤に含浸させるか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて行われる溶剤抽出の他に、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて抽出する方法、炭酸ガスを超臨界状態にして行う超臨界抽出法、あるいは圧搾して抽出物を得る圧搾法等を用いることができる。 The extraction is performed by impregnation with a solvent at room temperature or in a heated state or by using a distillation method such as steam distillation in addition to solvent extraction performed using an extraction device such as a Soxhlet extractor. A supercritical extraction method performed in a critical state or a pressing method for obtaining an extract by pressing can be used.
溶剤抽出に用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル等が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用でき、溶剤を変えて繰り返し行うことも可能である。このうち、水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等を用いるのが好ましく、特に水・エタノール混液、例えば５０〜９５％エタノールを用いるのが好ましい。また、抽出手段として、固液抽出、液液抽出、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超音波抽出、マイクロ波抽出、攪拌、水蒸気蒸留、超臨界抽出等の手段を用いることができる。 As the extraction solvent used for solvent extraction, either a polar solvent or a nonpolar solvent can be used, and these can also be mixed and used. For example, water; alcohols such as methanol, ethanol, propanol and butanol; polyhydric alcohols such as ethylene glycol, propylene glycol and butylene glycol; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; esters such as methyl acetate and ethyl acetate; tetrahydrofuran Linear and cyclic ethers such as diethyl ether; polyethers such as polyethylene glycol; halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, chloroform and carbon tetrachloride; hydrocarbons such as hexane, cyclohexane and petroleum ether; benzene and toluene Aromatic hydrocarbons such as; pyridines; supercritical carbon dioxide; oils, waxes, other oils, and the like. These can be used alone or in combination of two or more, and can be repeated by changing the solvent. In . Among these, it is preferable to use water, ethanol, propylene glycol, butylene glycol and the like, and it is particularly preferable to use a water / ethanol mixed solution such as 50 to 95% ethanol. As the extraction means, solid-liquid extraction, liquid-liquid extraction, immersion, decoction, leaching, reflux extraction, ultrasonic extraction, microwave extraction, stirring, steam distillation, supercritical extraction, and the like can be used.
抽出は、例えば植物又は菌体１質量部に対して１〜５０質量部の溶剤を用い、３〜１００℃、好ましくは１０〜７０℃で数時間〜数週間、好ましくは３０分〜５０日間、浸漬又は加熱還流することにより行うことができる。なお、水蒸気蒸留によって得ることもできる。 Extraction uses, for example, 1 to 50 parts by weight of a solvent with respect to 1 part by weight of a plant or fungus, and 3 to 100 ° C., preferably 10 to 70 ° C. for several hours to several weeks, preferably 30 minutes to 50 days, It can be performed by dipping or heating under reflux. It can also be obtained by steam distillation.
当該溶剤抽出のより好適な態様としては、植物又は菌体１質量部に対して５〜１５質量部の５０〜９５％エタノールを用い、室温（１０〜４０℃）で、１〜７日間、浸漬することが挙げられる。 As a more preferable aspect of the solvent extraction, 5 to 15 parts by mass of 50 to 95% ethanol is used with respect to 1 part by mass of the plant or fungus body, and immersed at room temperature (10 to 40 ° C.) for 1 to 7 days. To do.
また、抽出物の分離精製手段としては、例えば、抽出物を、濾過、活性炭処理、液液分配、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、ゲル濾過、精密蒸留等を挙げることができる。 Examples of the means for separating and purifying the extract include filtration, activated carbon treatment, liquid-liquid distribution, column chromatography, liquid chromatography, gel filtration, and precision distillation.
本発明の抽出物は、斯くして得られる植物又は菌体の抽出液や画分をそのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、或いは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、水・エタノール混液、水・プロピレングリコール混液、水・ブチレングリコール混液等の溶剤で希釈して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。 The extract of the present invention may be used as it is as an extract or fraction of the plant or fungus body thus obtained, or may be used as a diluted solution diluted with an appropriate solvent, or as a concentrated extract or dry powder. Or it may be prepared as a paste. Also, freeze-dry and dilute with a solvent usually used for extraction, such as water, ethanol, propylene glycol, butylene glycol, water / ethanol mixture, water / propylene glycol mixture, water / butylene glycol mixture, etc. It can also be used. It can also be used by encapsulating in vesicles such as liposomes or microcapsules.
本発明の植物若しくは微生物又はこれらの抽出物は、後記実施例に示すように、ラット膵臓癌細胞AR42Jのカテキンに対する応答を抑制する。
AR42J細胞は、味細胞の膜表面に発現している苦味受容体T2R（Taste type 2 receptor）を発現し、シクロヘキシミド(CYX)、フェニルチオカルバミド(PTC)、安息香酸デナトニウム（DB）などの苦味物質に対し応答することが報告されている細胞である（S. Vincent Wu, Monica C. Physiol Genomics 22: 139-149, 2005.）。本発明者等は、参考例に示すとおり、当該AR42J細胞が、カテキン類に対して応答し、AR42J細胞のカテキン類に対する応答性がヒト官能評価の苦味スコアと相関することを見出した。従って、AR42J細胞のカテキンに対する応答を抑制する物質は、カテキン類を含めた苦味物質の苦味抑制物質となり得る。
The plant or microorganism of the present invention or an extract thereof suppresses the response of rat pancreatic cancer cell AR42J to catechin as shown in Examples below.
AR42J cells express the bitter taste receptor T2R (
斯くして、本発明の植物若しくは微生物又はこれらの抽出物は、苦味抑制剤となり得、苦味を呈する組成物、すなわち、苦味物質を含有する組成物、例えば医薬品、化粧品、口腔用組成物、食品等に対して、苦味を抑制するために使用できる。
ここで、「苦味抑制」とは、苦味物質とT2Rとの結合抑制、苦味物質によるT2Rの活性化の抑制、または、活性化したT2Rにより誘導される細胞内シグナル伝達の抑制を意味し、例えばカテキン類によるT2Rの活性化を抑制することを意味する。従って、苦味をマスキングすることとは相違する。
Thus, the plant or microorganism of the present invention or an extract thereof can be a bitter taste suppressant and exhibits a bitter taste, that is, a composition containing a bitter substance, such as a pharmaceutical, a cosmetic, an oral composition, a food. For example, it can be used to suppress bitterness.
Here, “bitter taste suppression” means suppression of binding between a bitter substance and T2R, suppression of activation of T2R by a bitter substance, or suppression of intracellular signal transduction induced by activated T2R, for example, It means to suppress the activation of T2R by catechins. Therefore, it is different from masking bitterness.
苦味物質としては、苦味を呈する天然物質、薬物、化学物質等の何れでもよいが、T2Rを活性化することにより苦味を呈する物質であるのが好ましく、例えば、シクロヘキシミド(CYX)、フェニルチオカルバミド、安息香酸デナトニウム等の薬物、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート等のカテキン類などが挙げられる。このうち、本発明の苦味抑制剤は、カテキン類による苦味に対して特に有効である。 The bitter substance may be any natural substance, drug, chemical substance, or the like that exhibits a bitter taste, but is preferably a substance that exhibits a bitter taste by activating T2R, for example, cycloheximide (CYX), phenylthiocarbamide, Examples thereof include drugs such as denatonium benzoate, catechins such as catechin, gallocatechin, catechin gallate, gallocatechin gallate, epicatechin, epigallocatechin, epicatechin gallate, epigallocatechin gallate and the like. Among these, the bitterness inhibitor of the present invention is particularly effective for bitterness caused by catechins.
本発明の苦味抑制剤の使用態様は、当該苦味抑制剤を、苦味物質含有組成物に配合すること、苦味物質含有組成物と併用すること等が主として挙げられる。
苦味物質含有組成物との併用には、例えば、当該苦味抑制剤の水溶液を調製し、これを予め口腔に含み、その後に苦味を有する食品等を経口摂取等する方法、又は当該苦味抑制剤の水溶液と苦味を有する食品等を同時に経口摂取等する方法が挙げられる。
The usage mode of the bitterness inhibitor of the present invention mainly includes blending the bitterness inhibitor into a bitter substance-containing composition, using it together with the bitter substance-containing composition, and the like.
For the combined use with a bitter substance-containing composition, for example, an aqueous solution of the bitterness inhibitor is prepared, and this is preliminarily contained in the oral cavity, and then a food having a bitter taste is orally ingested, or the bitterness inhibitor A method of orally ingesting an aqueous solution and a food having a bitter taste at the same time is mentioned.
本発明の苦味抑制剤は、上記植物若しくは微生物又はこれらの抽出物のみを単独又は２種以上で含むものでものよく、例えば、水、澱粉質、蛋白質、繊維質、糖質、脂質、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、着香料、着色料、甘味料、調味料、防腐剤、保存料、酸化防止剤のごとき医薬品や食品に通常用いられる原料及び／又は素材の１又は複数を配合するものでもよい。また、その形態は、任意であり、溶液状、懸濁状、シロップ状、粉末状、顆粒状、粒子状等の何れもでもよく、所望の形状に成形することができる。 The bitterness suppressant of the present invention may contain only the above plant or microorganism or an extract thereof alone or in combination of two or more thereof, for example, water, starch, protein, fiber, saccharide, lipid, fatty acid, Vitamin, mineral, flavoring agent, coloring agent, sweetener, seasoning, preservative, preservative, antioxidant, and other ingredients and / or ingredients that are usually used in foods and foods may be blended. Moreover, the form is arbitrary and any of solution form, suspension form, syrup form, powder form, granule form, particle form, etc. may be sufficient, and it can shape | mold into a desired shape.
上記苦味物質含有組成物（例えば、医薬品、口腔用組成物、化粧品、食品等）の形態は、水溶液、懸濁物、乳化物等の液状又はペースト状、あるいは粉末状、顆粒状、粒子状等の固形物のいずれでもよいが、好適には、カテキン類を含有する食品（飲料）、歯磨剤、洗口液等が挙げられる。適用に際しては、これらの形態が、水溶液、懸濁物、乳化物等の液状又はペースト状の場合には、本発明の苦味抑制剤を添加し、充分に攪拌、分散する方法を適用することができる。苦味を有する対象物の形態が、粉末等の固形物の場合には、本発明の苦味抑制剤を単に添加、混合する方法を適用することができる。 The bitter substance-containing composition (eg, pharmaceutical, oral composition, cosmetic, food, etc.) is in the form of a liquid or paste such as an aqueous solution, suspension or emulsion, or powder, granule, particle, etc. Any of these solid materials may be used, but preferred examples include foods (beverages) containing catechins, dentifrices, mouthwashes, and the like. When these forms are in the form of a liquid or paste such as an aqueous solution, suspension, emulsion, etc., the method of adding the bitterness inhibitor of the present invention and sufficiently stirring and dispersing can be applied. it can. When the form of the object having a bitter taste is a solid such as a powder, a method of simply adding and mixing the bitter taste inhibitor of the present invention can be applied.
本発明の苦味抑制剤を、苦味物質含有組成物に添加して使用する場合、苦味抑制剤は、苦味物質１質量部に対して、本発明の植物若しくは微生物又はこれらの抽出物（乾燥物換算）を、１０-4〜１質量部用いるのが好ましく、１０-2〜１０-1質量部用いるのがより好ましい。 When the bitterness inhibitor of the present invention is used by adding it to a bitter substance-containing composition, the bitterness suppressant is a plant or microorganism of the present invention or an extract thereof (in terms of dry matter) with respect to 1 part by mass of the bitter substance. 10 -4 to 1 part by mass, preferably 10 -2 to 10 -1 part by mass.
参考例１ AR42J細胞のカテキン応答性
細胞を6×104 cells/cm2で96穴プレート（BD）に播き3日間培養した。培養液を除いた後、細胞内カルシウム感受性蛍光指示薬を含むクエンチャー溶液（1mM Fura 2-AM 50μl、Quenching Buffer 5ml、Hank's HEPES Buffer(10×) 0.5ｍｌ （Calcium Kit II-Fura 2,triral 同仁化学）、Ringer液10mlを全量が20mlになるように蒸留水を加え混合した。）を200μlずつ、各ウェルへ添加した。
※Ringer液組成は以下の通りである。
5mM HEPES、140mM NaCl、5.6mM KCl、2mM ピルビン酸Na、2mM MgCl2、
1.5mM EGTA、9.4mM Glucose、1.25mM KH2PO4、pH7.4
Reference Example 1 Catechin responsiveness of AR42J cells Cells were seeded at 6 × 10 4 cells / cm 2 in 96-well plates (BD) and cultured for 3 days. After removing the culture solution, quencher solution containing intracellular calcium-sensitive fluorescent indicator (1 mM Fura 2-AM 50 μl,
* Ringer liquid composition is as follows.
5 mM HEPES, 140 mM NaCl, 5.6 mM KCl, 2 mM Na pyruvate, 2 mM MgCl 2 ,
1.5 mM EGTA, 9.4 mM Glucose, 1.25 mM KH 2 PO 4 , pH 7.4
クエンチャー溶液添加後、1時間37℃でインキュベートした後、ハイスループット蛍光プレートリーダー（FDSS3000；Functional Drug Screening System、浜松ホトニクス）を用いて励起波長340nm、380nmにおける検出波長510nmの蛍光強度を4分間（2秒ごとに記録）測定することにより、細胞内カルシウム濃度の変化を測定した。測定開始から75秒後に、10mM EGCg 50μｌ（最終濃度：2mM）を細胞に添加した。測定は37℃で行った。
その結果、図１に示すように、AR42J細胞がEGCgに応答することが示された。
After adding the quencher solution and incubating at 37 ° C for 1 hour, using a high-throughput fluorescent plate reader (FDSS3000; Functional Drug Screening System, Hamamatsu Photonics), the fluorescence intensity at an excitation wavelength of 340 nm and a detection wavelength of 510 nm at 380 nm is 4 minutes ( The change in intracellular calcium concentration was measured by measuring (recording every 2 seconds). 75 seconds after the start of measurement, 50 μl of 10 mM EGCg (final concentration: 2 mM) was added to the cells. The measurement was performed at 37 ° C.
As a result, as shown in FIG. 1, it was shown that AR42J cells respond to EGCg.
参考例２ AR42J細胞のカテキン応答性とヒト官能評価の相関性
（１）参考例１と同様にして、8種のカテキン類（カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキンガレート）について、AR42J細胞の応答を測定した。
（２）8種のカテキン（カテキン、エピカテキン、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキンガレート）の苦味スコアをパネラー5名により評価した。硫酸キニーネを表１のような苦味強度の異なる10段階に調製し、各種カテキン（評価濃度：2 mM）の苦味強度と同等の苦味強度を示す硫酸キニーネの苦味スコアを、そのカテキンの苦味スコアと判定し、5名の平均値を求めた。評価は被験サンプル5mlを口に含む方法で行った。
Reference Example 2 Correlation between catechin responsiveness of AR42J cells and human sensory evaluation (1) In the same manner as in Reference Example 1, eight catechins (catechin, epicatechin, gallocatechin, epigallocatechin, catechin gallate, epicatechin gallate) , Gallocatechin gallate, epigallocatechin gallate), the response of AR42J cells was measured.
(2) The bitterness score of eight types of catechins (catechin, epicatechin, gallocatechin, epigallocatechin, catechin gallate, epicatechin gallate, gallocatechin gallate, epigallocatechin gallate) was evaluated by five panelists. Quinine sulfate was prepared in 10 stages with different bitterness intensity as shown in Table 1, and the bitterness score of quinine sulfate showing bitterness intensity equivalent to the bitterness intensity of various catechins (evaluation concentration: 2 mM) was determined as the bitterness score of the catechin. Judgment was made and the average value of 5 persons was obtained. Evaluation was performed by a method including 5 ml of a test sample in the mouth.
図２に示すように、AR42J細胞のカテキン類に対する応答（Ratio）と苦味スコアとの間に相関関係が認められたことから、AR42J細胞のカテキンに対する応答はヒトの苦味を反映することが示唆された。 As shown in FIG. 2, a correlation was found between the response (Ratio) of AR42J cells to catechins and the bitterness score, suggesting that the response of AR42J cells to catechin reflects human bitterness. It was.
実施例１ 抽出物の製造
（１）ナツメグ抽出物の調製
ナツメグリキッド SP-77543（商品名、三栄源エフエフアイ）を試験用試料として使用した。
Example 1 Production of Extract (1) Preparation of Nutmeg Extract Nutmegurikid SP-77543 (trade name, San-Eigen FFI) was used as a test sample.
（２）サンブンサン抽出物の製造
サンブンサン（Scopolia acutangula）の根（新和物産）40gに50体積％エタノール水溶液を400ml加え、室温で21日間浸漬後、ろ過してサンブンサン抽出物を得た（固形分 0.96質量％、抽出液量 313mL）。
(2) Manufacture of sanbunsan extract 400ml of 50% ethanol aqueous solution was added to 40g of root of Scopolia acutangula (Shinpolitan), immersed for 21 days at room temperature and filtered to obtain sanbunsan extract (solid content) 0.96 mass%, extract volume 313 mL).
（３）ホルトソウ抽出物の製造
ホルトソウ（Euphorbia lathyris L）の種子（新和物産）40gに95体積％エタノール水溶液を400ml加え、室温で26日間浸漬後、ろ過してホルトソウ抽出物を得た（固形分 0.63質量％、抽出液量 358mL）。
(3) Manufacture of Forsythia Extract 400 ml of 95 vol% ethanol aqueous solution was added to 40 g of seed of Horthosaw (Euphorbia lathyris L), and immersed for 26 days at room temperature. Min. 0.63 mass%, extract volume 358mL).
（４）ヒヨドリジョウゴ抽出物の製造
ヒヨドリジョウゴ（Solanum lyratum）の全草（新和物産）40gに50体積％エタノール水溶液を400ml加え、室温で42日間浸漬後、ろ過してヒヨドリジョウゴ抽出物を得た（固形分 0.66質量％、抽出液量 329mL）。
(4) Manufacture of Chrysanthemum extract 400 ml of 50% by volume ethanol solution is added to 40 g of Solanum lyratum whole plant (Shinnum product), soaked at room temperature for 42 days, and filtered to obtain Chrysanthemum extract (Solid content 0.66% by mass, extract volume 329 mL).
（５）セッコツボク抽出物の製造
セッコツボク（Sambucus williamsii）の全株（新和物産）40gに50体積％エタノール水溶液を400ml加え、室温で43日間浸漬後、ろ過し、濃縮してセッコツボク抽出物を得た（固形分 0.69質量％、抽出液量 310mL）。
(5) Manufacture of Sekkotsuboku extract 400 ml of 50 vol% ethanol aqueous solution is added to 40 g of all stocks of Sambucus williamsii (Shinwa product), soaked at room temperature for 43 days, filtered and concentrated to obtain Sekkotsuboku extract. (Solid content: 0.69% by mass, extract volume: 310 mL).
（６）エゾウコギ抽出物の製造
エゾウコギパウダー（商品名、日本粉末薬品）を50体積％のエタノール水溶液に1質量％の濃度で溶解し、試験用試料を調製した。
(6) Manufacture of Ekokogi Extract Ekokogi powder (trade name, Nippon Powder Chemical Co., Ltd.) was dissolved in 50% by volume ethanol aqueous solution at a concentration of 1% by mass to prepare a test sample.
（７）ゴマ抽出物の製造
ゴマ（Sesamum indicum）の種子（新和物産）40gに95体積％エタノール水溶液を400ml加え、室温で16日間浸漬後、ろ過してゴマ抽出物を得た（固形分 0.60質量％、抽出液量 384mL）。
(7) Manufacture of sesame extract 400 ml of 95% ethanol aqueous solution was added to 40 g of seeds of Sesamum indicum (produced by Shinwa), soaked at room temperature for 16 days and filtered to obtain a sesame extract (solid content 0.60 mass%, extract volume 384 mL).
（８）マグワ抽出物の製造
マグワ（Morus alba）の葉（新和物産社）40gに95体積％エタノール水溶液を400ml加え、室温で15日間浸漬後、ろ過し、濃縮して和名抽出物を得た（固形分0.60質量％、抽出液量334mL）。
(8) Manufacture of Magwa extract 400ml of 95% ethanol aqueous solution was added to 40g of leaves of Morus alba (Shinwa Bussan), soaked at room temperature for 15 days, filtered and concentrated to extract the Japanese name extract. Obtained (solid content 0.60% by mass, amount of extract 334 mL).
（９）スオウ抽出物の製造
スオウ（Caesalpinia sappan）の心材（新和物産）40gに50体積％エタノール水溶液を400ml加え、室温で23日間浸漬後、ろ過してスオウ抽出物を得た（固形分 1.07質量％、抽出液量 353mL）。
(9) Manufacture of Suo Extract 400ml of 50% ethanol aqueous solution was added to 40g of heartwood of Caesalpinia sappan (Shinwa product), soaked at room temperature for 23 days and filtered to obtain Suo extract (solid content 1.07 mass%, extract volume 353mL).
（１０）ベニコウジ抽出物の製造
ベニコウジ黄色素（三栄源エフエフアイより入手）を50体積％のエタノール水溶液に1質量％の濃度で溶解し、試験用試料を調製した。
(10) Manufacture of Benikouji extract An extract of Benikouji yellow (obtained from Saneigen FFI) was dissolved in a 50% by volume ethanol aqueous solution at a concentration of 1% by mass to prepare a test sample.
（１１）シソ抽出物の調製
シソSP-61509（商品名、三栄源エフエフアイ）を試験用試料として使用した。
(11) Preparation of perilla extract Perilla SP-61509 (trade name, Saneigen FFI) was used as a test sample.
（１２）ニラ抽出物の製造
ニラ（Allium tuberosum）の種子（新和物産）40gに95体積％エタノール水溶液を400ml加え、室温で23日間浸漬後、ろ過してニラ抽出物を得た（固形分 0.20質量％、抽出液量 376mL）。
(12) Production of leek extract 400 ml of 95% ethanol aqueous solution was added to 40g leek (Allium tuberosum) seeds (produced by Shinwa), soaked at room temperature for 23 days, and filtered to obtain leek extract (solid content 0.20 mass%, extract volume 376 mL).
（１３）バジル抽出物の調製
バジルSP71887（商品名、三栄源エフエフアイ）を試験用試料として使用した。
(13) Preparation of basil extract Basil SP71887 (trade name, San-Eigen FFI) was used as a test sample.
（１４）イヌナズナ抽出物の製造
イヌナズナ（Draba nemorosa）の種子（新和物産）40gに50体積％エタノール水溶液を400ml加え、室温で27日間浸漬後、ろ過してイヌナズナ抽出物を得た（固形分 0.50質量％、抽出液量 361mL）。
(14) Manufacture of Inuazuna Extract 400 ml of 50 vol% ethanol aqueous solution was added to 40 g of Inabazuna (Draba nemorosa) seeds (Shinwa product), soaked at room temperature for 27 days, and filtered to obtain Inuazuna extract (solid content) 0.50 mass%, extract volume 361 mL).
（１５）ホウセンカ抽出物の製造
ホウセンカ（Impatiens balsamina）の種子（新和物産社）40gに50体積％エタノール水溶液を400ml加え、室温で35日間浸漬後、ろ過し、濃縮して和名抽出物を得た（固形分0.60質量％、抽出液量337mL）。
(15) Manufacture of extract of spinach Add 400 ml of 50 vol% ethanol aqueous solution to 40 g of seeds of Impatiens balsamina (Shinwa Bussan), soak for 35 days at room temperature, filter and concentrate to extract Japanese name extract Obtained (solid content: 0.60 mass%, extract volume: 337 mL).
実施例３ ＡＲ４２Ｊ細胞を用いた苦味抑制評価
細胞を6×104 cells/cm2で96穴プレート（BD）に播き3日間培養した。培養液を除いた後、細胞内カルシウム感受性蛍光指示薬を含むクエンチャー溶液（1mM Fura 2-AM 50μl、Quenching Buffer 5ml、Hank's HEPES Buffer(10×) 0.5ml （Calcium Kit II-Fura 2,triral 同仁化学）、Ringer液10mlを全量が20mlになるように蒸留水を加え混合した。）を200μlずつ、各ウェルへ添加した。
※Ringer液組成は以下の通りである。
5mM HEPES、140mM NaCl、5.6mM KCl、2mM ピルビン酸Na、2mM MgCl2、
1.5mM EGTA、9.4mM Glucose、1.25mM KH2PO4、pH7.4
Example 3 Bitter taste suppression evaluation using AR42J cells Cells were seeded in 96-well plates (BD) at 6 × 10 4 cells / cm 2 and cultured for 3 days. After removing the culture solution, quencher solution containing intracellular calcium-sensitive fluorescent indicator (1 mM Fura 2-AM 50 μl,
* Ringer liquid composition is as follows.
5 mM HEPES, 140 mM NaCl, 5.6 mM KCl, 2 mM Na pyruvate, 2 mM MgCl 2 ,
1.5 mM EGTA, 9.4 mM Glucose, 1.25 mM KH 2 PO 4 , pH 7.4
クエンチャー溶液添加後、1時間37℃でインキュベートした後、ハイスループット蛍光プレートリーダー（FDSS3000；Functional Drug Screening System、浜松ホトニクス）を用いて励起波長340nm、380nmにおける検出波長510nmの蛍光強度を4分間（2秒ごとに記録）測定することにより、細胞内カルシウム濃度の変化を測定した。測定開始から75秒後に、10mM EGCg、もしくは実施例１及び２で調製した各サンプル（最終濃度：0.01質量％）を混合した10mM EGCgを50μl（最終濃度：2mM）添加した。測定は37℃で行った。 After adding the quencher solution and incubating at 37 ° C for 1 hour, using a high-throughput fluorescence plate reader (FDSS3000; Functional Drug Screening System, Hamamatsu Photonics), the fluorescence intensity at the detection wavelength of 510 nm and excitation wavelength of 380 nm for 4 minutes ( The change in intracellular calcium concentration was measured by measuring (recording every 2 seconds). 75 seconds after the start of measurement, 50 mM (final concentration: 2 mM) of 10 mM EGCg or 10 mM EGCg mixed with each sample (final concentration: 0.01% by mass) prepared in Examples 1 and 2 was added. The measurement was performed at 37 ° C.
＜EGCgに対する苦味抑制率の算出方法＞
細胞内カルシウム濃度変化は、励起波長340nmおよび380nmに対する510nmにおける蛍光強度の比（Ratio340/380）で示した。
（数１）
各ウェルにおけるEGCgに対する応答強度は、以下の通りに算出した。
EGCg細胞応答強度= (EGCg添加後のRatio340/380最大値)−（EGCg添加後のRatio340/380最小値）
各被験物質によるEGCg応答抑制効果（苦味抑制率）は、
（数２）
苦味抑制率（％）＝[１−（被験物質存在下EGCg応答強度）／（被験物質非存在下EGCg応答強度）]×100
とし、データは3ウェルの平均値±標準偏差で示した。
結果を図３に示す。本発明の植物抽出物は、EGCgの細胞応答に対する抑制活性が示された。
<Calculation method of bitterness suppression rate against EGCg>
The change in intracellular calcium concentration was indicated by the ratio of the fluorescence intensity at 510 nm to the excitation wavelengths of 340 nm and 380 nm (Ratio 340/380 ).
(Equation 1)
The response intensity to EGCg in each well was calculated as follows.
EGCg cell response intensity = (Maximum ratio 340/380 after adding EGCg)-(Minimum ratio 340/380 after adding EGCg)
The EGCg response suppression effect (bitterness suppression rate) by each test substance is
(Equation 2)
Bitterness inhibition rate (%) = [1- (EGCg response intensity in the presence of test substance) / (EGCg response intensity in the absence of test substance)] × 100
The data are shown as the mean value of 3 wells ± standard deviation.
The results are shown in FIG. The plant extract of the present invention showed an inhibitory activity on the cellular response of EGCg.
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