JP5616565B2

JP5616565B2 - 抗炎症剤を適用するための製剤

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Publication number: JP5616565B2
Application number: JP2000620935A
Authority: JP
Inventors: フライシャー、ヴォルフガング; ライマー、カーレン
Original assignee: ユーロ−セルティックエス．ア．
Priority date: 1999-05-27
Filing date: 2000-05-25
Publication date: 2014-10-29
Anticipated expiration: 2020-05-25
Also published as: HK1046242A1; CA2368192A1; CN1197552C; JP2003500436A; EP1502586B1; RU2264827C2; ATE289805T1; DE20022718U1; MXPA01012170A; HU229598B1; DE60018409D1; ES2235891T3; ES2274372T3; HUP0201038A3; US7468194B1; HK1073252A1; DK1502586T3; ATE340561T1; KR100687781B1; WO2000072823A1

Description

本発明は、ヒトまたは動物の身体の内部における、感染症の予防または治療用ならびに機能的な組織の再構築および修復治療用の少なくとも一方の医薬製剤における、粒子担体と組み合わせた少なくとも１種の防腐剤の使用方法およびそれらの防腐剤および粒子担体を含有する医薬製剤に関する。

感染症の局所治療用には、多くの異なる抗生物質および防腐剤（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ
ａｇｅｎｔｓ）が公知である。抗生物質の決定的な欠点は、感染性細菌が、これらの物質に対し一次耐性を示し、かつ二次耐性を獲得し得ることである。さらに、抗生物質は、患者の感作を引き起こす場合がかなり多い。例えば、ポリビドンヨードまたはＰＶＰヨード、すなわち、ポリ（１−ビニル−２−ピロリジン−２−オン）ヨウ素複合体としても知られているポビドンヨードなどのハロゲン遊離防腐剤を用いると、耐性を防止することができる。防腐剤はまた、抗生物質に比べてアレルゲン性であることははるかに稀である。

感染症の局所治療用には、多くの異なる抗生物質および防腐剤が公知である。抗生物質の決定的な欠点は、感染性細菌が、これらの薬剤に対し一次耐性を示し、かつ二次耐性を獲得し得ることである。さらに、抗生物質は、患者の感作を引き起こす場合がかなり多い。例えば、ポリビドンヨードまたはＰＶＰヨード、すなわち、ポリ（１−ビニル−２−ピロリジン−２−オン）ヨウ素複合体としても知られているポビドンヨードなどのハロゲン遊離防腐剤を用いると、耐性を防止することができる。防腐剤はまた、抗生物質に比べてアレルゲン性であることははるかに稀である。

現在、身体内部の感染症は、一般に、抗生物質を用いて治療している。これは、当業者には周知の合併症を引き起こす。例えば、膝や肘などの関節に慢性炎症を有する患者は、症状を軽減させるために抗生物質を用いた治療を受けることが多い。しかし、これは、多くの場合、単にその症状に関与する細菌に耐性を与えるだけである。多くの疾患はウイルスによって引き起こされ、抗生物質はこれらのウイルスには無効である。そのような患者の感染症は治らない。

ヒトおよび動物に対する外用防腐剤および／または創傷治癒促進剤の使用方法が、本出願人の以前の特許ＥＰ０６３９３７３に開示されている。特に、この特許には、目の外部にＰＶＰヨードリポソーム製剤を局所適用し得ることが示されている。これらの製剤は、一般に、クリーム、軟膏、ローション、ゲルまたは点眼配合物の形態をとる。

リポソームは周知の薬剤担体であり、したがって、リポソーム形態で薬剤を適用することは、かなり長い間の研究課題であった。（喘息療法における）リポソーム被包薬剤の（肺）デリバリーに関する概観が、概説“Ｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆｌｉｐｏｓｏｍｅｓ”（Ｈ．Ｓｃｈｒｅｉｅｒ，“ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ”，第２４巻，２０９−２２３ページ，１９９３年）によって提供されている。この概説には、リポソームエアゾール剤の生理化学的キャラクタリゼーションおよびそれらの気道への治療的適用が示されている。リポソームを介した肺デリバリーに関して研究された薬剤には、例えば、抗ガン剤、ペプチド、酵素、抗喘息および抗アレルギー化合物の他に上述のような抗生物質も含まれる。また、例えば乾燥粉末吸入器を用いた、リポソームエアゾールまたはリポソーム粉末エアゾールの配合も、Ｈ．Ｓｃｈｒｅｉｅｒにより、“Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｌｉｐｏｓｏｍｅｐｏｗｄｅｒａｅｒｏｓｏｌｓ”（Ｓ．Ｔ．Ｐ．ＰｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅ，第４巻，３８−４４ページ，１９９４年）に記載されている。

特に下気道においてまたは外用には、薬剤担体としてのリポソームはかなり長い間注目を集めているが、身体の内部、特に関節に適用するための防腐剤または創傷治癒促進剤の担体としてのリポソームおよび他の粒子に関する従来技術は存在していないようである。

実際、当該技術分野においては、恐らく命にかかわる敗血性合併症といった極端なケースを除いては、身体の内部に消毒剤を適用するのは著しく気の進まないことのようである。一般に、上記の欠点を考慮しても、抗生物質製剤が好ましいようである。

本発明の目的は、十分に許容される、適用し易い防腐かつ／または創傷治癒促進製剤を提供することであり、そのような製剤は、身体の内部、特に、膝、股関節、肘、肩関節などの関節における活性薬剤の遅延放出および遅延局所効果を提供する。

本発明によれば、この目的は、独立請求項１および１９に記載されているように、本発明の製剤が、粒状担体製剤の形態で、少なくとも１種の防腐剤を含むからなることにおいて達成される。

それらの独立請求項には、本発明のさらに有利な実施態様を定義する。

本発明は、粒状担体、特にリポソームが、身体の内部、特に関節に適用するための、防腐剤、特にポビドンヨード用、および創傷治癒促進剤用の担体として極めて適しているという驚くべき事実を前提としている。

本発明の製剤により、１種または複数種の前記物質の遅延放出が可能になり、かつ細胞表面との相互作用により所望の作用位置において長期的かつ局所的な活性が提供される。

本発明の文脈において、身体内部とは、外部から自由にアクセスできる外皮領域および腔、基本的には、口から胃腸管を通って***器官に至る腔、および鼻から肺に至る腔を除く、皮膚に取り囲まれた身体部分を広く包含するものとみなされる。

本発明の文脈において、抗炎症剤とは、以下に定義されているような、防腐剤、抗生物質、コルチコステロイド、および創傷治癒剤を包含するものとみなされる。

本発明の文脈において、防腐剤とは、医薬として許容可能であり、かつ本発明に従って配合し得る範囲内でヒトまたは動物の身体内部の治療に適している消毒剤を包含するものとみなされる。

より具体的に言えば、防腐剤には、特に、酸素およびハロゲン遊離化合物；金属化合物、例えば、銀および水銀化合物；特に、ホルムアルデヒド遊離化合物、アルコール類、アルキルおよびアリルフェノールに加えてハロゲン化フェノールを含めたフェノール類、キノリンおよびアクリジン、ヘキサヒドロピリミジン、第四級アンモニウム化合物およびイミニウム塩、ならびにグアニジンを含めた有機消毒剤（ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔｓ）がある。

創傷治癒剤は、デクスパンテノール、アラントイン、アズレン、タンニンおよびビタミンＢ型化合物などの顆粒化および上皮化を促進する物質を包含する。
本発明の別の態様は、さらなる驚くべきかつ予測しなかった事実に基づいている。新たな身体組織の形成が問題を引き起こし得ることは当該技術分野では周知である。例えば、身体組織の修復が瘢痕組織の形成を伴うことがあり、これが機能的かつ／または美容的に有害であったり、または少なくとも望ましくないことがあるのは公知である。角化症および組織の異常増殖は重大な害の原因となり、機能不全を引き起こすことがあるばかりか、当然美容上望ましくない。感染および炎症の後の再生長または治癒組織は、腫瘍や合生の原因となり得る。したがって、疾患の治癒時に組織を適切に再構築することが望ましいだけでなく実際に必要でもあることは当業では周知である。

驚くべきことには、抗炎症剤を単独でまたは他の上記の薬剤と組み合わせて用いると、組織の修復や他の組織生長プロセスの間の望ましくない身体組織の形成が著しく減少することが判明した。したがって、皮膚だけでなく、粘膜や筋肉または器官内組織などの他の組織においても瘢痕組織の形成が減少する。角化症は完全に抑制されるであろうし、感染性疾患治癒時の合生または腫瘍の形成も著しく減少する。

従って、本発明により達成される１つの目的は身体の組織修復の改善に関する。本発明は、独立請求項に記載されているように粒状担体製剤の形態で抗炎症剤を適用することにより上記目的を達成する。

防腐または創傷治癒製剤は、一般に、侵襲的方法、特に、粒状担体製剤を注入するか、または治療位置へのアクセスを提供する手術ステップ後に個々の製剤を適用することにより、治療すべき身体内部に投与される。例えば、リポソーム製剤は、慣用手順でリポソームにＰＶＰヨードを装填して製造し得る。リポソームの性質または組成は重要ではない。例えば、ＥＰ０６３９３７３に記載されているようなリポソーム製剤は注入により投与し得る。ＥＰ０６３９３７３の開示は本明細書に文献援用される。

本発明の製剤が、粒状担体（特にリポソーム）内に被包されたポビドンヨードなどの活性薬剤のみを含有しているのでないことは明らかである。担体内には含有されていない物質もいくらか存在するようである。本発明の製剤は、担体から活性薬剤をゆっくり遅延放出することに加えて認められる顕著な初期効果を示すことがよくある。この効果は、担体がリポソームからなる場合に特に認められる。理論的な説明に束縛されるのは本意ではないが、今のところ、リポソーム内に被包されている活性薬剤の他に、リポソームの外になんらかの活性薬剤が存在し、恐らく、リポソームの外面にゆるく結合していると考えられる。これは、活性薬剤分子とリポソーム膜との会合によるか、または、リポソーム表面上でリポソームの外面を部分的もしくは完全にコートする１つの層を形成する活性薬剤分子による可能性がある。この初期薬剤効果のタイプおよび量は、例えば、濃度パラメーターの選択によって左右され得る。

それゆえに、本発明の抗炎症製剤は、慣用製剤では得られない効果を達成することができる。
好ましい防腐剤は、迅速な効果、広範囲の活性、低い全身毒性および良好な組織適合性を提供する周知の医薬物質を包含する。好ましい防腐剤は、例えば、金属化合物、フェノール化合物、洗剤、ヨウ素およびヨウ素複合体からなる群から選択される。特に好ましい防腐剤はポビドンヨードである。

好ましい創傷治癒促進剤は、そのような用途に関して文献に記載されている物質を包含する。好ましいそのような物質には、上皮化を促進することが知られている物質がある。これらの物質には、ビタミン類、特にビタミンＢ群、アラントイン、ある種のアズレンなどが含まれる。

好ましい実施態様において、防腐剤および／または創傷治癒促進剤を含有する本発明の製剤は、麻酔剤などの他の物質を含んでいてよい。本発明の製剤は、賦形剤や添加剤、酸化防止剤、保存剤または粘度調節添加剤などの粘稠性形成剤、乳化剤（ｅｍｕｌｇａｔｏｒ）なども含んでいてよい。

一般に従来技術においてリポソーム膜を形成することが知られている両親媒性物質は、それらが目的とする用途に関して医薬として許容し得るものである限り本発明に関して用いることができる。今のところ、レシチンを包含するリポソーム形成系が好ましい。そのような系は、水素化ダイズレシチンの他に、コレステロールやコハク酸二ナトリウム六水和物を包含し得、今のところ、水素化ダイズレシチンを単独の膜形成剤として用いるのが特に好ましい。

本発明に関して、リポソーム構造の形成には、一般に、公知従来法を用い得る。概して、これらの方法は、膜形成物質と水を含有する適当な混合物または水溶液を機械的に攪拌するステップを含む。実質的に均一サイズのリポソームを形成するためには、適当なメンブランを介して濾過するのが好ましい。

リポソームのサイズは、広範囲に異なっていてよいが、一般的には、約１〜約２０，０００ｎｍである。５０〜４，０００ｎｍの直径を有するリポソームが好ましく、直径が約１，０００ｎｍまでのリポソームが現在最も好ましい。溶液用には、もっと平均直径が小さいものの方が適当であろう。

代替粒状担体を使用する場合、それらの担体は、一般に、当業で公知のように製造される。一例として、多岐にわたる治療剤または化粧剤のデリバリーに用いられるミクロスフェアは、例えばＷＯ９５／１５１１８に記載のように製造される。

場合により、十分量の活性薬剤を充填し得ると共に本発明に従って投与し得るならば、ナノパーティクルを用いてもよい。ナノパーティクルは、当業で公知の方法に従って、例えば、Ｈｅｙｄｅｒ（ＧＳＦＭｕｎｃｈｅｎ）により“Ｄｒｕｇｓｄｅｌｉｖｅｒｅｄｔｏｔｈｅｌｕｎｇ”，ＡｂｓｔｒａｃｔｓＩＶ，ＨｉｌｔｏｎＨｅａｄＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，１９９８年５月、に記載のように製造し得る。

パルスレーザーデポジション（ＰＬＤ）装置およびポリマーターゲットを用いて短い非水性プロセスで薬剤粉末にコーティングを施す方法も本発明の粒状製剤の形成に適している。これらは、例えば、Ｔａｌｔｏｎらにより“ＮｏｖｅｌＣｏａｔｉｎｇＭｅｔｈｏｄｆｏｒＩｍｐｒｏｖｅｄＤｒｙＤｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｕｎｉｖ．ｏｆＦｌｏｒｉｄａＵＦ，１８８７（１９９８年）に記載されている。

他の適当なデリバリーシステムは、ＤａｖｉｄＡ．Ｅｄｗａｒｄｓらにより、“ＬａｒｇｅＰｏｒｏｕｓＰａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｒＰｕｌｍｏｎａｒｙＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ”（Ｓｉｅｎｃｅ，第２７６巻，１８６８−１８７１ページ，１９９７年６月２０日）に開示されているような「多孔質大型粒子」（ＬａｒｇｅＰｏｒｏｕｓＰａｒｔｉｃｌｅｓ）を用いている。

そのような代替担体の場合、製剤中の濃度、粒径、活性薬剤の添加量などは、リポソーム製剤に関して本明細書に記載されているパラメーターに基本的に一致するように選択される。特に簡単な実験に基づいたそのようなパラメーターの選択および提供は、当業者の技術の範囲内であろう。

本発明のリポソーム製剤の極めて好ましい用途は、特にリポソーム製剤がポビドンヨードを含んでいる場合、膝関節、股関節、肘関節および肩関節などの関節の感染症の局所治療用である。また、この用途において、本発明の防腐製剤、特にＰＶＰヨードを含むものは、耐性をもたらさず、かつアレルギー反応を起こすことが少ないにもかかわらず、広範な効果を有する非常に費用効率の高い療法を可能にするという大きな利点を有している。本発明のポビドンヨードリポソーム製剤は、例えばウイルスに対して有効である。この効果は抗生物質によっては得られない。さらに、ポビドンヨードなどの殺菌剤のリポソーム製剤は、殺菌剤をリポソームから遅延放出させる。これが抗菌物質の効果の延長をもたらし、それゆえ、慣用の防腐液製剤に比べて適用回数が少なくてすむ。

本発明は、感染性疾患の治療または日和見感染を伴うＨＩＶ感染症などの疾患の軽減にも有用である。また、例えば、臓器移植後に抑制された免疫系を有する患者を本発明により治療することができる。特に、急性および慢性の気管支炎、肺炎、気管支拡張症、嚢胞性線維症、ジフテリア、結核は、本発明のポビドンヨード製剤で治療し得る。

別の特に好ましい用途は、組織の修復、特に機能的かつ美容的な組織の再構築である。
本発明の製剤は、溶液、分散液、スプレーおよびゲルを含めた多様な形態をとることができる。固体形態が有用であったり、有利でさえあることもあるが、一般的には液体形態の方が好ましい。

通常、本発明の製剤中の活性薬剤の量は、一方では所望の効果により、他方では担体製剤の物質保持容量によって決められる。
概して、本発明の担体製剤中の活性薬剤の溶液または分散液は、活性薬剤の有効性下限と、個々の溶媒、分散媒、スプレーまたはゲル中の活性薬剤の溶解度または分散度限界との間の濃度範囲であってよい。

より具体的に言えば、ポビドンヨードなどの防腐剤に関して、本発明の担体製剤中の溶液または分散液は、特に担体がリポソーム製剤である場合、製剤１００ｇ中０．１〜１０ｇの活性薬剤を含有し得る。その場合、そのような製剤は、通常、製剤１００ｇ当たり、１〜５ｇのリポソーム膜形成物質、特にレシチンを含んでいるであろう。

特に好ましいのは、生理食塩水リポソーム分散液中に最大１０％のポビドンヨード（ヨウ素含量１０％）を含有する注射可能製剤である。
本発明の特徴および利点は、後述の好ましい実施態様の説明からより詳細に明らかになるであろう。最上の態様を包含するこれらの実施態様においては、防腐剤としてボビドンヨードが例示され、担体としてリポソームが選択されている。しかし、これは、本発明を防腐剤に限定したり、防腐剤をポビドンヨードに、かつ／または担体をリポソームに限定するものと解釈してはならないが、そのような製剤が特に好ましい。

本発明のリポソームの１つの好ましい製造法は、一般に、以下のように説明し得る。
脂質膜形成成分、例えばレシチンを、クロロホルムまたはメタノールとクロロホルムの２：１混合物などの適当な溶媒に溶かし、滅菌条件下に濾過する。次いで、ガラスビーズなどの滅菌した大きな表面の支持体上で、溶媒を制御蒸発させて脂質膜を生成する。場合により、表面を増大させる特定の支持体を用いなくても、溶媒蒸発時に用いられる容器の内面上で膜を形成するだけで十分なことがある。

電解質成分とリポソーム製剤に組込む（１種以上の）活性薬剤とから水性系を調製する。そのような水性系は、例えば、１０ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸水素ナトリウムと、０．９％の塩化ナトリウムとをｐＨ７．４で含んでいてよい。水性系は、さらに、少なくとも所望量の活性薬剤（実施例ではポビドンヨード）を含むであろう。多くの場合、水性系は過剰量の１種または複数種の薬剤を含むであろう。

リポソームは、一般に、脂質成分によって形成された膜の存在下に水性系を攪拌して形成する。この段階で、リポソームの形成を促進するために他の添加剤を加えてもよい。例えば、コール酸ナトリウムを添加し得る。リポソームの形成は、例えば、ポリカーボネートメンブランを介した加圧濾過または遠心などの機械的作用によって促進することもできる。一般に、原（ｒａｗ）リポソーム分散液は、例えば、上記の活性薬剤溶液の調製時に用いられるような電解質溶液で洗浄する。

要求サイズ分布を有するリポソームを得て洗浄したら、それらを、多くの場合サッカロースなどの糖または適当な糖代替物をさらに含む上述のような電解質溶液に再分散し得る。分散液はフリーズドライしたり、凍結乾燥したりできる。分散液は、使用前に、水を添加し、水素化ダイズレシチンの場合には例えば５５℃の脂質成分転移温度で適当な機械的攪拌を行うことにより再構成することができる。

以下の実施例では、水素化ダイズレシチン〔ドイツのルーカス・マイヤー社（ＬｕｋａｓＭｅｙｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から得られるＥＰＩＫＵＲＯＮ（登録商標）２００ＳＨまたはドイツのナッターマン・ホスホリピド社（ＮａｔｔｅｒｍａｎｎＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄＧｍｂＨ）から得られるＰＨＯＳＰＯＬＩＰＯＮ（登録商標）９０Ｈ〕を用いた。しかし、その代わりに、他の医薬として許容し得るリポソーム膜形成物質を用いてもよく、当業者が、従来技術に記載されているものから適当な代替リポソーム形成系を選択するのは容易であろう。

実施例１
表面を増大させるためにガラスビーズを入れた１０００ｍｌガラスフラスコ中で、５１．９ｍｇのコレステロールと２１３ｍｇの水素化ダイズレシチンを、十分量の２：１メタノール／クロロホルム混合物に溶かした。次いで、フラスコの内面上とガラスビーズ上に膜が形成されるまで、溶媒を真空下に蒸発させた。

それとは別に、２．４ｇの（約１０％の有効ヨウ素を含有する）ＰＶＰヨードを１２ｍｌの水に溶かした。
やはり別の容器中で、８．７７ｇの塩化ナトリウムと１．７８ｇのＮａ₂ＨＰＯ₄・２Ｈ₂Ｏを４００ｍｌの水に溶かした。全量が９８０ｍｌになるまでさらに水をつぎ足し、次いで、およそ１２ｍｌの１Ｎ塩酸を加えてｐＨを７．４に調整した。次いで、正確に１，０００ｍｌになるまで、この溶液に水をつぎ足した。

第４の容器中で、９００ｍｇのサッカロースと５７ｍｇのコハク酸二ナトリウムを１２ｍｌの水に溶かした。
次いで、フラスコ中の脂質膜にＰＶＰヨード溶液を添加し、膜が溶解するまで混合物を振とうした。得られたリポソーム配合物をフラスコ中の水和脂質から分離した。生成物を遠心し、上清脂質を廃棄した。サッカロース溶液を１２ｍｌまで加え、生成物を再度遠心した。その後、上清脂質を再度廃棄した。この段階で、サッカロース溶液または塩化ナトリウム緩衝溶液を用いたさらなる洗浄ステップを用いることができる。

最終遠心ステップおよび上清廃棄の後、塩化ナトリウム緩衝溶液を１２ｍｌまで加え、そこにリポソームを均一分布させた。次いで、生成物を、それぞれ２ｍｌのリポソーム分散液を含有する複数のバイアルに分配し、次いで、バイアルをフリーズドライステップにかけた。

フリーズドライの後、各バイアルは約４０ｍｇの固体を含んでいた。
実施例１の方法は、固体比率が高いために、用いたＰＶＰヨード溶液が、かなり粘性であり、それゆえ取扱いが難しくなるという軽微な欠点を有している。

実施例２
表面を増大させるためにガラスビーズを入れた２０００ｍｌガラスフラスコ中で、１７３ｍｇの水素化ダイズレシチンと９０ｍｇのコハク酸二ナトリウムを、およそ６０ｍｌの２：１メタノール／クロロホルム混合物に溶かした。膜が形成されるまで、溶媒を真空下に蒸発させた。

４ｇのＰＶＰヨード（有効ヨウ素１０％）を、実施例１に記載の塩化ナトリウム緩衝溶液４０ｍｌに溶かし、フラスコ中の脂質膜に添加した。次いで、膜が溶解してリポソームが形成されるまで、フラスコを振とうした。

生成物を遠心し、上清脂質を廃棄した。
このようにして生成したリポソームペレットに、さらに塩化ナトリウム緩衝溶液を４０ｍｌまで加え、遠心ステップを繰り返した。再度上清を廃棄した。この段階で、必要なら、この洗浄ステップを繰り返してよい。

最終遠心およびデカントステップの後、再度、沈殿したリポソームに塩化ナトリウム緩衝溶液を４０ｍｌまで加えた。次いで、均質分散液を、それぞれ約２ｍｌのリポソーム分散液を含有する複数のバイアルに分配し、次いで、バイアルをフリーズドライステップにかけた。これによって、１バイアル当たり、およそ２００ｍｇのフリーズドライ固体が生成した。

実施例１および２のフリーズドライ固体から、後述の実施例および試験報告に記載のような他の製剤を製造した。
上述の方法は、実施例１の方法と同様に、有機溶媒の存在下に膜形成した後で水和ステップを用い、５〜１５％の包接率を目指す。これらの方法では、一般に、かなり大きくかつ多くの場合多重層のリポソームが生成する。

上述の方法は、原リポソームを形成した後、または後続の洗浄ステップのいずれかの後に、ポリカーボネートメンブランなどの適当なメンブランを介した高圧濾過ステップを用いるか、または直接、高圧ホモジナイゼーションを用いて、改変することができる。これによって、はるかに小さい１枚膜リポソームが生成し、被包される薬剤の量が増大する。

高圧ホモジナイゼーションの代わりに、小さい均一サイズのリポソームを生成することが知られている他の従来法を用いてもよい。
実施例３
実施例２に記載のような水素化ダイズレシチン／ＰＶＰヨードリポソーム１０ｇに生理食塩水を１００ｇになるまで混合して、注射可能分散液を調製した。

上述の実施態様のさらなる改変も想定される。
例えば、実施例３の分散液は、アラントインなどの創傷の治癒を促進することが知られている物質をさらに含んでいてよい。そのような物質は、医薬として有用な濃度で添加され、アラントインの場合、分散液１００ｇ当たり０．１〜０．５ｇの範囲である。創傷治癒剤は、生理食塩水中に混和するが、その場合、創傷治癒剤は大部分がリポソームの外に存在するであろう。しかし、創傷治癒剤を、一部分または大部分をリポソーム内に取り込ませることができ、その場合、創傷治癒剤は、リポソーム製造法の適切な対応段階で添加する。

また、創傷の治癒を促進し得る薬剤を、例えば上記実施例に開示されているポビドンヨードなどの防腐剤に加えるのではなく、そのような防腐剤の代わりに含む、上述のものと類似の実施態様を調製することも可能である。しかし、今のところ、創傷治癒促進剤（含まれる場合）は防腐剤に加えて用いるのが好ましい。

試験１
これは、本発明のポビドンヨードリポソーム製剤が提供する殺菌効果についての試験管内試験であった。この試験は、“ＲｉｃｈｔｌｉｎｉｅｎｄｅｒＤｅｕｔｓｃｈｅｎＧｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔｆｕｒＨｙｇｉｅｎｅｕｎｄＭｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ”，１９８９年に記載されているような定量的懸濁液試験（ｑｕａｎｔｉｔａｔｌｖｅｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｔｅｓｔ）に基づくものであった。この試験では、殺菌剤を、病院衛生における重要問題である黄色ぶどう球菌〔ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（ＡＴＣＣ２９２１３）〕を死滅させるために用いる。

用いたリポソーム製剤は実施例１のものであった。１〜１２０分間の異なる接触時間で、ぶどう球菌を死滅させ得る水中の最低製剤濃度を測定した。
結果を表１に示す。
表１
接触時間（分）殺菌剤濃度
１、２、３、４ ≧０．０６０％
５、３０、６０ ≧０．０１５％
１２０ ≧０．００７％
この結果は、短い接触時間（１〜４分）では、殺菌剤濃度は０．０６％程度の低さであり、長い接触時間（１２０分）では、殺菌剤濃度は０．００７％程度の低さであってよいことを示している。

試験２
Ｗｕｔｚｌｅｒら，９ｔｈＥｕｒｏｐｅａｎＣｏｎｇｒｅｓｓｆｏｒＣｌｉｎｉｃＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｎｆｅｃｔｉｏｎＤｉｓｅａｓｅｓ，Ｂｅｒｌｉｎ，１９９９年３月、により、培養細胞におけるリポソームＰＶＰヨードの殺ウイルスおよび殺クラミジア活性が検討された。培養細胞において、リポソームＰＶＰヨードは、単純ヘルペスウイルス１型およびアデノウイルス８型に対しては極めて有効であるにもかかわらず、長期細胞毒性実験により、試験した細胞系の大部分で、水性ＰＶＰヨードよりリポソーム形態の方が許容度が高いことが示された。リポソーム形態のＰＶＰヨードは遺伝子毒性ではない。

試験３
３％ＰＶＰヨードヒドロゲルリポソーム製剤を、活性薬剤がリポソーム形態中に存在しない３％ＰＶＰヨード軟膏と比較した。薬剤は、皮膚の組織適合性および創傷抗感染性に関するスクリーニングとして、ラットの皮膚および腹膜外植片の標準化試験管内培養細胞に適用した。

培養した外殖片を試験物質に３０分間暴露してインキュベートした後にその成長率を調べた。
この場合も、腹膜成長率および皮膚成長率に関して、リポソーム製剤の方が実質的に許容度が高いことが結果において明らかに示された。

軟膏の場合、腹膜成長率は８５％に達し、皮膚成長率は９０％に達した。リポソームヒドロゲル製剤の場合、腹膜成長率は９６％であり、皮膚成長率は１０８％であった。これらの値は、薬剤としてリンゲル液を用いたコントロール試験における１００％値と比較される。

試験４
非公開研究において、成体の関節軟骨についての、非リポソーム形態のポビドンヨードの効果を調べた。
成ウシを無菌条件下に屠殺してから２〜４時間内にウシ中手指節関節から種子骨を切断した。特定の動物の種子骨軟骨は、グリコサミノグリカン合成、グリコサミノグリカン含量およびプロテオグリカン組成に関して同様である。各実験グループは、同一動物由来の８つの種子骨から構成した。種子骨を１０ｍｌの滅菌冷リンゲル液で１０分間洗浄し、それぞれ、１０ｍｌの滅菌リンゲル液（コントロール）、ＰＶＰヨード、またはリンゲル液を用いたＰＶＰヨード希釈液（１：１０、１：１００または１：１０００）中、３７℃で１０分間、空気中５％ＣＯ₂の湿潤雰囲気下にインキュベートし、次いで、再び、それぞれ１０ｍｌのリンゲル液中で５×５分洗浄した。前処理した各種子骨を、抗生物質を補った１０ｍｌのＨａｍＦ−１２培地中３７℃で２４時間インキュベートした後、直径２．８ｍｍの軟骨栓を慎重に取り出し、段階的に抽出した。種子骨培地および軟骨栓抽出物をプロテオグリカンおよびＣＯＭＰ（軟骨オリゴマー基質タンパク質）の定量および定性特性決定に用いた。というのは、これらの軟骨基質成分断片の遊離が増えることは、異化経路に等しいからである。

種子骨を、希釈していないかまたは希釈したＰＶＰヨードで１０分間処理しても、リンゲル液中でのコントロール実験に比べて、調べた軟骨基質成分のタンパク分解断片化の増大は誘発されない。これは、ＰＶＰヨードに暴露した後、軟骨に破壊的活性が存在しなかったことを意味している。

これは、非リポソーム形態においても、関節軟骨材料がＰＶＰヨードに対して所望の許容度を有することを示している。上記に報告した他の試験から分るように、リポソーム製剤は、非リポソームＰＶＰヨード製剤よりさらに許容度が高い。したがって、本発明のリポソームまたは他の「担持型」薬剤製剤は、対応する「非担持型」薬剤製剤に比べて一様に許容度が高いものと予想される。

Claims

医薬製剤の製造における、少なくともＰＶＰヨードが充填されたリポソーム製剤の使用であって、
前記医薬製剤は、ヒトまたは動物の身体の内部における、骨、器官、および関節のうちのいずれか一つの、
ｉ）感染症の予防または治療用、ならびに
ｉｉ）機能的な組織の再構築および修復治療用、
の少なくとも一方のための医薬製剤である、使用。
製剤が、少なくとも１つの創傷治癒促進剤をさらに含む、請求項１に記載の使用。
リポソームが、２０〜２０，０００ｎｍの範囲のサイズを有する、請求項１または２に記載の使用。
リポソームが、５０〜４，０００ｎｍの範囲のサイズを有する、請求項３に記載の使用。
リポソームが、５００〜２，５００ｎｍの範囲のサイズを有する、請求項３に記載の使用。
リポソームが、１，０００ｎｍまでのサイズを有する、請求項３に記載の使用。
リポソーム製剤が、長時間にわたって前記薬剤を放出する、請求項１から６のいずれか１項に記載の使用。
リポソーム製剤が、数時間の長時間にわたって前記薬剤を放出する、請求項７に記載の使用。
リポソーム製剤が、放出時間全体にわたってほぼ同じ放出速度で前記薬剤を放出する、
請求項７に記載の使用。
製剤が、少なくとも１種の麻酔として有効な薬剤をさらに含有する、請求項１から９のいずれか１項に記載の使用。
製剤が、保存剤、酸化防止剤および粘稠性形成添加剤から選択された添加剤および賦形剤を含有する、請求項１から１０のいずれか１項に記載の使用。
製剤が、溶液または分散液の形態である、請求項１から１１のいずれか１項に記載の使用。
製剤が、ＰＶＰヨードを装填したリポソームを含む溶液または分散液の形態である、請求項１２に記載の使用。
製剤が、注射可能な生理食塩水医薬製剤の形態である請求項１２に記載の使用。
製剤が、
（ａ）１〜５重量％の医薬として許容し得るリポソーム膜形成物質を含有するリポソームと、
（ｂ）前記リポソームに充填された０．１〜１０重量％のＰＶＰヨードと
を含有する医薬溶液または分散液配合物の形態である、請求項１から１３のいずれか１項に記載の使用。
前記膜形成物質はレシチンである請求項１５に記載の使用。
製剤が、感染性疾患の治療、日和見感染を伴う疾患の軽減、または抑制された免疫系の治療に適している、請求項１から１６のいずれか１項に記載の使用。
製剤が、関節の急性および慢性感染症の治療に適している、請求項１から１６のいずれか１項に記載の使用。
前記関節は膝関節、股関節、肘関節および肩関節から選択される請求項１８に記載の使用。
ヒトまたは動物の身体の内部における、骨、器官、および関節のうちのいずれか一つの、
ｉ）感染症の予防または治療用、ならびに
ｉｉ）機能的な組織の再構築および修復治療用、
の少なくとも一方のための医薬製剤であって、
前記医薬製剤は少なくともＰＶＰヨードが充填されたリポソームを含有する、医薬製剤。