JP5615285B2 - 貧血の予防又は治療用組成物 - Google Patents
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Description
属する細菌の使用、である。第2の発明において、ビフィドバクテリウム属に属する細菌の好ましい種及び株、貧血の予防又は治療の好ましい対象、予防又は治療の対象として好ましい貧血、並びに好ましい組成物の種類は、第1の発明と同様である。
特に、妊産婦に、ビフィドバクテリウム属に属する細菌を投与することにより、又はビフィドバクテリウム属に属する細菌を含む飲食品を摂取させることにより、赤血球数及びヘモグロビン濃度を改善させることができる。
また、特に、乳幼児に、ビフィドバクテリウム属に属する細菌を投与することにより、又はビフィドバクテリウム属に属する細菌を含む飲食品を摂取させることにより、赤血球数、ヘモグロビン濃度、及び平均赤血球ヘモグロビン濃度を改善させることができる。
したがって、本発明により、妊産婦又は乳幼児における貧血、特に鉄欠乏性貧血の予防又は治療が可能となる。
貧血の予防又は治療効果とは、貧血の程度に依存して変化する生体パラメータについて、1以上のパラメータを維持、改善、及び正常化する効果を含む。上記生体パラメータとしては、例えば、平均赤血球容積(MCV)、平均赤血球ヘモグロビン量(MCH)、平均赤血球ヘモグロビン濃度(MCHC)が挙げられる。平均赤血球容積(MCV)とは、赤血球の1個あたりの容積の平均値であり、値が低い場合には鉄欠乏性貧血が疑われる。また、平均赤血球ヘモグロビン量(MCH)とは、赤血球の1個あたりのヘモグロビン量の平均値であり、鉄欠乏性貧血時には値が低下する。また、平均赤血球ヘモグロビン濃度(MCHC)とは、赤血球単位容積中のヘモグロビン量の平均値であり、鉄欠乏性貧血時には値が低下する。
また、上記生体パラメータとしては、単位容積の血液当たりの赤血球数が挙げられ、鉄欠乏性貧血時には値が低下する。なお、赤血球数と平均赤血球ヘモグロビン濃度の両方が低下すれば、当然、血液中のヘモグロビン濃度も低下している。
また、上記生体パラメータとしては、さらに貯蔵鉄量が挙げられ、鉄欠乏時には、一般的に、赤血球及びヘモグロビンに関連する上記パラメータ群の低下前に貯蔵鉄量の減少が認められる。
維持とは、任意の上記生体パラメータについて、正常時の値からの差が広がるのを防ぐことをいう。改善とは、任意の上記生体パラメータについて、正常時の値に近づくことをいう。正常化とは、任意の上記生体パラメータについて、正常時の値と有意差がなくなることをいう。正常時とは、貧血の症状を呈しない状態、特に鉄欠乏性貧血の症状を呈しない状態をいう。
ビフィドバクテリウム・ロンガムに属する細菌としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム BB536(例えば、ATCC BAA−999株)、ビフィドバクテリウム・ロンガム ATCC 51870株、又はビフィドバクテリウム・ロンガム ATCC 15707株が好ましい。
ビフィドバクテリウム・ブレーベに属する細菌としては、ビフィドバクテリウム・ブレーベ M−16V株、ビフィドバクテリウム・ブレーベ MCC−1274株、又はビフィドバクテリウム・ブレーベ ATCC 15700株が好ましい。
M−16V株は、ベルギーの保存機関であるBelgian Coordinated Collections of Microorganisms(BCCM)(ベルギー、B−1000 ブリュッセル シアンス通り(ウェーテンスカップ通り)8)に、BCCM LMG23729の受託番号で寄託されている。
MCC−1274株は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター(日本国 〒305−8566 茨城県つくば市東1−1−1 中央第6)に、平成21年8月25日より、FERM BP−11175の受託番号で寄託されている。これらの菌株は、上記保存機関より一般に入手可能である。
このような変異株は、上記株に非人為的に変異が導入されることで構築されてもよい。また、UV等の変異原を用いた処理により上記株に変異を導入して変異株を構築してもよく、種々の遺伝子操作法により上記株に変異を導入して変異株を構築してもよい。
例えば、培養温度は25〜50℃でよく、35〜42℃であることが好ましい。また培養は嫌気条件下で行うことが好ましく、例えば、炭酸ガス等の嫌気ガスを通気しながら培養することができる。また、液体静置培養等の微好気条件下で培養してもよい。
すなわち、炭素源としては、例えば、グルコース、ガラクトース、ラクトース、アラビノース、マンノース、スクロース、デンプン、デンプン加水分解物、廃糖蜜等の糖類を資化性に応じて使用できる。窒素源としては、例えば、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウムなどのアンモニウム塩類や硝酸塩類を使用できる。また、無機塩類としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、塩化マンガン、硫酸第一鉄等を用いることができる。また、ペプトン、大豆粉、脱脂大豆粕、肉エキス、酵母エキス等の有機成分を用いてもよい。
調製乳類としては、乳児用調製乳、低出生体重児用調製乳、フォローアップミルク、アレルギー疾患用調製乳、無乳糖乳、先天性代謝異常症用の特殊乳等が挙げられる。
また、妊産婦に対しては、妊娠開始から産後1年までの期間を通じて投与を継続してもよく、特に、周産期を通じて投与を継続してもよい。また、乳幼児に対しては、乳幼児期を通じて投与を継続してもよく、特に、離乳期を通じて投与を継続してもよい。また、上記期間の内、一部の期間にのみ投与してもよい。また、上記期間以外の期間に投与してもよい。
なお、投与すること及び摂取させることを総称して、単に「投与する」と記載する場合がある。すなわち、「投与すること」には、「摂取させること」が含まれる。摂取は、例えば、自由摂取であってよい。自由摂取とは、餌等の摂取を対象に強制せず、対象の意に任せて餌等を摂取させることをいう。自由摂取の一例として、例えば、本発明に用いられるビフィドバクテリウム属に属する細菌を餌等に添加して哺乳動物に摂取させることができる。
また、「本発明に用いられるビフィドバクテリウム属に属する細菌を哺乳動物に投与すること」には、当該細菌自体を哺乳動物に投与することに加えて、本発明の貧血の予防又は治療用医薬組成物及び飲食品組成物等の当該細菌を含む組成物を哺乳動物に投与すること又は摂取させることが含まれる。
本発明に用いられるビフィドバクテリウム属に属する細菌の哺乳動物への投与量等は、上述した本発明の貧血の予防又は治療用医薬組成物及び飲食品組成物におけるビフィドバクテリウム属に属する細菌の投与量等に基づいて適宜設定すればよい。
当該組成物は、医薬組成物や飲食品組成物として製造することが可能である。また、飲食品組成物としては、乳製品を例示することができる。当該飲食品組成物は、本発明に用いられるビフィドバクテリウム属に属する細菌が投与された哺乳動物から得られた乳を原料として用いる以外は、通常の飲食品を製造する場合と同様に製造できる。なお、当該飲食品組成物は、乳自体であってもよい。
前記組成物を適用対象に投与することで、対象の貧血を予防又は治療することができる。当該組成物の投与対象は特に制限されず、例えば、当該組成物は上述した本発明の医薬組成物や飲食品組成物の投与対象に投与することができる。すなわち、前記乳は、例えば、妊娠期又は周産期の女性や乳幼児等に好適に投与することができ、それによって、妊娠期又は周産期の女性や乳幼児等の貧血を予防することや貧血の症状を改善することができる。なお、当該組成物の投与量は特に制限されず、例えば、妊娠期又は周産期の女性や乳幼児等が乳製品を通常摂取する量とすることができる。
本発明に従い、離乳期ラットについてビフィドバクテリウム試料投与の効果を試験した。
ビフィドバクテリウム属に属する細菌として、ビフィドバクテリウム・ブレーベ M−16V株を用いた。澱粉に倍散したビフィドバクテリウム・ブレーベ M−16V株の菌体粉末(2.1×1011cfu/g、森永乳業社製)をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に懸濁して48mg/400μl(1×1010cfu/400μl)に調整し、ビフィドバクテリウム試料とした。
母獣ラットとして、F344/N系統妊娠ラットを日本SLCより購入した。母獣ラットには、飼料としてMR STOCKを給餌し、自由摂取させた。母獣ラットより出産された仔ラットを、出生後21日齢で離乳させ、体重、親、及び性別に各群間で偏りがないよう、2群に分けた。各群について表1に示す。
またヘモグロビン濃度について、図2に示す。その結果、試験群は対照群に対し、危険率5%で有意に高いヘモグロビン濃度を示した。
また平均赤血球ヘモグロビン濃度について、図3に示す。その結果、試験群は対照群に対し、危険率5%で有意に高い平均赤血球ヘモグロビン濃度を示した。
次に、本発明に従い、離乳期ラットについて、ビフィドバクテリウム属細菌菌末試料、発酵乳試料、およびビフィドバクテリウム含有発酵乳試料のそれぞれを投与した際の、鉄欠乏貧血からの回復効果について比較試験した。
ビフィドバクテリウム属に属する細菌として、ビフィドバクテリウム・ブレーベ M−16V株およびビフィドバクテリウム・ロンガム BB536株を用いた。澱粉に倍散したビフィドバクテリウム・ブレーベ M−16V株の菌体粉末(2.1×1011cfu/g、森永乳業社製)およびビフィドバクテリウム・ロンガム BB536株の菌体粉末(1.0×1011cfu/g、森永乳業社製)をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)に懸濁して2.5×109cfu/400μlに調整し、ビフィドバクテリウム試料(M−16V菌末、BB536菌末)とした。
無脂乳固形分11重量%の脱脂乳に酵母エキス0.3重量%添加し原料を調製した。この原料を90℃で10分間殺菌し、38℃まで冷却し、これに乳酸菌スターターとしてラクトバチルス・アシドフィラス(Lactobacillus acidophilus)LAC−361株を約3質量%添加し、37℃で18時間発酵させて発酵乳(L.A)を調製した。
また、発酵乳(L.A)にビフィドバクテリウム・ロンガム BB536株の菌体粉末を2.5×109cfu/2mlとなるように添加して発酵乳(BB536)を調製した。
母獣ラットとして、F344/N系統妊娠ラットを日本SLCより購入した。母獣ラットには、飼料としてAIN−93G((株)オリエンタル酵母工業)を給餌し、自由摂取させた。
各群について、投与試料、検体数、および投与量を表2に示す。なお、鉄欠乏食と標準食の鉄含量はそれぞれ0.2mg/100gと4.01mg/100gであった。AIN−93Gとは、繁殖期を含めラットの栄養研究に標準的に用いられる飼料である。
また、赤血球数の増加量について、図7に示す。その結果、M−16V菌末、BB536菌末、発酵乳(BB536)それぞれの投与群は、発酵乳(L.A)投与群と比較して赤血球数の増加量が高い傾向が認められた。
したがって、離乳期のラットにおいて、ビフィドバクテリウム属に属する細菌の投与による貧血の予防又は治療効果が認められた。また、BB536菌末を発酵乳へ添加して投与することでも、M−16V菌末またはBB536菌末を投与する場合と同等の効果が認められた。
次に、本発明に従い、妊娠期及び授乳期ラットについてビフィドバクテリウム試料投与の効果を試験した。
ビフィドバクテリウム属に属する細菌としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム BB536株を用いた。澱粉に倍散したビフィドバクテリウム・ロンガム BB536株の菌体粉末(1.1×1011cfu/g、森永乳業社製)をPBSに懸濁して9mg/ml(1×109cfu/ml)に調整し、ビフィドバクテリウム試料とした。
Brown Norway系統の妊娠ラット及び非妊娠ラットを日本チャールズリバー社より購入した。妊娠ラットを2群に分け、対照群及び試験群とした。また、非妊娠ラットを非妊娠群とした。各群について表3に示す。
なお、F−2に含まれる鉄量は30mg/100gであり、標準飼料AIN−93Gに含まれる鉄量は4.01mg/100gであることから、F−2には、標準飼料AIN−93Gに比して約7.5倍量の鉄が含まれており、F−2中の鉄量は十分量であった。
またヘモグロビン濃度について、図9に示す。その結果、対照群では、非妊娠群に対し有意に低いヘモグロビン濃度を示した。一方、ビフィドバクテリウム試料の投与により、試験群は対照群に対し危険率5%で有意に高いヘモグロビン濃度を示し、ヘモグロビン濃度は非妊娠群との間に有意差が認められない程度まで改善された。
したがって、妊娠期及び授乳期のラットにおいて、ビフィドバクテリウム属に属する細菌の投与による貧血の予防又は治療効果が認められた。ここで、生体内の鉄量と関連する赤血球数及びヘモグロビン濃度について改善が見られる一方、鉄量と関連しない白血球数は有意な差が認められなかった。
次に、本発明に従い、妊娠した母獣ラットへビフィドバクテリウム試料を投与し、出産した新生仔ラットを、授乳期の段階においても引き続きビフィドバクテリウム試料を投与した母獣ラットから哺乳させて飼育した際の、新生仔ラットにおける貧血予防効果について試験した。
ビフィドバクテリウム属に属する細菌としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム BB536株を用いた。澱粉に倍散したビフィドバクテリウム・ロンガム BB536株の菌体粉末(1.0×1011cfu/g、森永乳業社製)をPBSに懸濁して2.5×109cfu/400μlに調整し、ビフィドバクテリウム試料とした。
F344/N系統妊娠ラットを日本SLC社より購入した。妊娠ラットを4群に分け、鉄欠乏食(対照群及び試験群)と鉄標準食(対照群及び試験群)とした。各群について表4に示す。
その結果、試験群は、対照群と比較して赤血球数(図12)、ヘモグロビン濃度(図13)、およびヘマトクリット値(図14)が増大する傾向が見られた。
その結果、試験群は対照群に対して、危険率1%で有意に高い赤血球数を示した(図15)。また、試験群は対照群に対して、危険率1%で有意に高いヘモグロビン濃度を示した(図16)。また、試験群は対照群に対して、危険率1%で有意に高いヘマトクリット値を示した(図17)。
一方、鉄標準食が与えられた母獣群から生まれた仔ラットにおいては、妊娠期及び授乳期の母獣へのビフィドバクテリウム試料の投与により、澱粉が投与された対照群と比較して、上記の貧血に関連する生体パラメータの有意な改善が認められた。
したがって、妊娠期及び授乳期における母獣ラットへのビフィドバクテリウム試料投与により、新生仔ラットでの貧血予防効果が認められた。
脱塩牛乳乳清蛋白質粉末(ニュージーランド・デーリーボード社製)10kg、牛乳カゼイン粉末(ニュージーランド・デーリーボード社製)6kg、乳糖(ミライ社製)48kg、ミネラル混合物(富田製薬社製)920g(鉄として93gを含む)、及びビタミン混合物(田辺製薬社製)32gを温水300kgに溶解し、さらに90℃で10分間加熱溶解し、調製脂肪(太陽油脂社製)28kgを添加して均質化した。その後、殺菌、濃縮の工程を行って噴霧乾燥し、調製粉乳約93kgを調製した。これに、ビフィズス菌として、澱粉に倍散したビフィドバクテリウム・ブレーベ M−16V株の菌体粉末(1.8×1011cfu/g、森永乳業社製)を100g加えてビフィズス菌配合調製粉乳約93kgを調製した。得られた調製粉乳を水に溶解して、標準調乳濃度である総固形分濃度14%(w/V)の調乳液としたとき、調乳液中の鉄含量は1.4mg/100mlであり、ビフィズス菌数は2.7×109cfu/100mlであった。この調製粉乳を、貧血の予防又は治療に用いることができる。
脱脂粉乳(森永乳業社製)26.3kg、トウモロコシ澱粉(松谷化学工業社製)9kg、デキストリン(松谷化学社製)51.3kg、ミネラル混合物(メルク社製)7.5kg(鉄として17.6gを含む)、及びビタミン混合物(DSM社製)400gを温水450kgに溶解し、さらに90℃で10分間加熱溶解し、調製脂肪(太陽油脂社製)5.5kgを添加して均質化した。その後、殺菌、濃縮の工程を行なって噴霧乾燥し、粉乳約100kgを調製した。これに、ビフィズス菌として、澱粉に倍散したビフィドバクテリウム・ロンガム BB536株の菌体粉末(1×1011cfu/g、森永乳業社製)を200g加えてビフィズス菌配合粉乳約100kgを調製した。得られた粉乳を水に溶解し、総固形濃度分13%(w/V)の調乳液としたとき、調乳液中の鉄含量は2.3mg/100mlであり、ビフィズス菌数は2.6×109cfu/100mlであった。この粉乳を、貧血の予防又は治療に用いることができる。
ホエー蛋白酵素分解物(森永乳業社製)10.8kg、デキストリン(昭和産業社製)36kg、及び少量の水溶性ビタミンとミネラル(鉄として2.4gを含む)を水200kgに溶解し、水相をタンク内に調製した。これとは別に、大豆サラダ油(太陽油脂社製)3kg、パーム油(太陽油脂社製)8.5kg、サフラワー油(太陽油脂社製)2.5kg、レシチン(味の素社製)0.2kg、脂肪酸モノグリセリド(花王社製)0.2kg、及び少量の脂溶性ビタミンを混合溶解し、油相を調製した。タンク内の水相に油相を添加し、攪拌して混合した後、70℃に加温し、更にホモゲナイザーにより14.7MPaの圧力で均質化した。次いで、90℃で10分間殺菌した後に、濃縮し、噴霧乾燥して、中間製品粉末約59kgを調製した。この中間製品粉末50kgに、蔗糖(ホクレン社製)6.8kg、アミノ酸混合粉末(味の素社製)167g、及び、ビフィズス菌として、スターチに倍散したビフィドバクテリウム・ロンガム BB536株の菌体粉末(1×1011cfu/g、森永乳業社製)110gを添加し、均一に混合して、経腸栄養食粉末約57kgを製造した。粉末中の鉄含量は3.7mg/100gであり、ビフィズス菌数は1.9×1010cfu/100gであった。この流動食を、貧血の予防又は治療に用いることができる。
乳糖(和光純薬工業社製)400g、トウモロコシ澱粉(日清製粉社製)160g、結晶セルロース(和光純薬工業社製)200g、ミネラル混合物(富田製薬社製)40g(鉄として4gを含む)、ラクトフェリン(森永乳業社製)600g、及び、ビフィズス菌として、スターチに倍散したビフィドバクテリウム・ロンガム BB536株の菌体粉末(1×1011cfu/g、森永乳業社製)600gを、それぞれ50メッシュふるいによりふるい分けして均一に混合した。全自動カプセル充填機(Cesere Pedini社製)を用い、粉末をカプセル(日本エランコ社製。1号ゼラチンカプセル、Op. Yellow No.6 Body, 空重量75mg)に内容量275mgで充填し、鉄0.55mg、及びビフィズス菌末82mg(8×109cfu)を含有するカプセル剤7000個を作製した。このカプセル剤を、貧血の予防又は治療に用いることができる。
Claims (4)
- ビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum)
ATCC BAA−999株、およびビフィドバクテリウム・ブレーベ(Bifidobacterium breve) BCCM LMG23729株からなるビフィドバクテリウム属に属する細菌から選択される一又は複数を有効成分とする妊産婦用の貧血の予防又は治療用医薬組成物。 - 前記貧血が鉄欠乏性貧血である請求項1に記載の貧血の予防又は治療用医薬組成物。
- 妊産婦用の貧血の予防又は治療用医薬組成物の製造におけるビフィドバクテリウム・ロンガム ATCC BAA−999株、およびビフィドバクテリウム・ブレーベ BCCM LMG23729株からなるビフィドバクテリウム属に属する細菌から選択される一又は複数の使用。
- 前記貧血が鉄欠乏性貧血である請求項3に記載の使用。
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