JP5588172B2 - プロリンが豊富なペプチドの構造的模倣薬およびその医薬用途 - Google Patents

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Description

本発明は、特にプロリンが豊富なペプチドの構造的模倣薬として使用可能であり、したがってタンパク質のＰＲＭ結合ドメイン（プロリンが豊富なモチーフ結合ドメイン）に結合し得る化合物に関する。本発明はまた、医薬的活性薬剤としての前記化合物の使用、ならびに細菌性疾患、神経変性疾患および腫瘍を治療するためのこれらの医薬的活性薬剤の使用に関する。
ペプチドおよびタンパク質は生物の必須成分であり、広範な機能を有する。タンパク質が特に生体触媒的機能（酵素）を担い、かつ重要な組織成分としても働く場合、ペプチドは生物内で、特にホルモン、神経伝達物質および神経修飾物質の形態で重要な機能を担う。膜受容体への結合およびそれにより媒介される細胞生理学的二次反応の結果として、ペプチドは細胞間伝達に影響を及ぼし、代謝、免疫防御、消化、呼吸、痛覚、生殖、挙動、電解質代謝等の多様な生命過程を調節する。
したがって先行技術に関し、ある生物中の正確な相互作用を明確にし、病的状態の治癒能力についての必要な基準を提供する必要がある。分子レベルでの生物学的過程の理解を深めながら、生物学および化学間の相互連絡もまた、分析的方法およびコンピューター支援された理論的方法の多大な進歩により深まり、支持されている。ドラッグデザインの主要な構造を首尾よく同定するには重要な前提条件が存在する。にもかかわらず、実際的な目的、すなわち有効成分の簡易で効率的なデノボ（ｄｅ ｎｏｖｏ）デザインにはまだほど遠い。それどころか、天然構造から有力な標的物質のライブラリーを合成し、特定の効果に対してそれらを最適化するため、経験的調査における膨大な労力が通常求められている。膨大な時間および多大な費用に加え、コンピューターの使用により開発された有効成分は、実在する高度に複雑な生物系（例えばヒト）において不十分な程度までしか所望の効果を達成できないか、あるいは容認し得ない副作用をもたらすということが頻繁に見られている。
ペプチド模倣化合物およびＲＧＤ配列を含む生物学的活性誘導体の製剤は、先行技術に記載されている。これらの環状ペプチド模倣化合物はアザビシクロアルカン構造を有し、血管形成誘導現象の治療に使用することが可能である。それらは特定のインテグリンの拮抗薬として特に良好な性質を有する（国際公開第２００６／０９２７２２号（特許文献１）、国際公開第２００５／０４２５３１号（特許文献２）、欧州特許第１０７７２１８号（特許文献３））。
国際公開第２００６／０９２７２２号パンフレット 国際公開第２００５／０４２５３１号パンフレット 欧州特許第１０７７２１８号明細書
この背景を考慮すると、有効成分、特にペプチド成分またはペプチド模倣成分の開発は未だ大いなる課題であり、このことはまた合成の観点にも当てはまる。なぜなら、広範囲にわたる学際的な相互影響では、所望の標的分子への接触を判定するのは特に、許容能と限界がある有機化学であるからである。これらの分子は最小限の工程数で、また通常、立体選択的方式で合成しなければならず、そのため実験室においてのみならず工業規模での将来的な使用に対してこの目的を達成するには進歩的かつ向上した合成法が確実に必要となっている。
したがって、本発明の目的はプロリンが豊富なペプチドの模倣薬として使用し得る化合物を、それが特にＰＰＩＩ‐ヘリックス構造を有していればそれを提供することであった。プロリン‐プロリンジペプチド単位、特にＰＰＩＩ‐ヘリックス構造を有するものは、いわゆるＰＲＭ結合ドメインのリガンドとして作用可能であることが好ましい（ＰＲＭ：プロリンが豊富なモチーフ）。
驚くべきことに、本発明に記載の問題は、中央に飽和または不飽和の７員環を有する一般式１に従った化合物を提供することで解決され、
式中、
ＸはＯおよび／またはＳであり；
Ａ、Ｂは架橋環であり；
Ｙ１、Ｙ２はＨ、アルキル、フルオロアルキル、アリールおよび／またはヘテロアリールであり；
Ｚ１、Ｚ２はＨ；カルボニル；ＯＨ；Ｏ‐アルキル；Ｏ‐アシル；ＮＲ１Ｒ２（式中Ｒ１および／またはＲ２がＨ、アルキル、アシル、スルホニルである）；アルキル；アシル；フルオロアルキル；アリールおよび／またはヘテロアリールであり；
Ｒ１はアルキル、アシル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニルおよび／またはアミノカルボニル（ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＲ、ＣＯＮＨ‐ペプチジル、（Ｒを含む））であり；
Ｒ２はＨ、アルキル、アリール、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アリールオキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノアシルおよび／またはペプチジルである。
先行技術の短所を有さない、本発明による化合物を見出したことはまさに驚きであった。上述した先行技術の短所以外にも、現在までの医薬品としてのペプチド有効成分の使用は多数の付加的因子によって制限されてきた：
１）消化管および血清におけるタンパク質分解の結果としての代謝安定性の低さ；
２）経口摂取における、特に高分子量の結果としての吸収の不十分さ；
３）肝臓および腎臓を介した***の速さ；および
４）多様な受容体との相互作用の結果としての選択性の欠如。
驚くべきことに、本発明に従った化合物は、人工的に生産された物質であり、特に受容体リガンドの機能を担い、ペプチドの生物学的効果を模倣（アゴニスト）または遮断（アンタゴニスト）することが可能な模倣薬として、使用可能である。本発明の意味合いにおける模倣薬は、プロリンまたはプロリンが豊富なペプチドの場合と同様に、プロリンまたはプロリンが豊富なペプチドに機能的に類似し、それゆえ対応するドメインと相互に作用する化学物質であり、好ましくはプロリンまたはプロリンが豊富なペプチドと同様の効果を引き起こす、化学物質である。
図１はＮ‐Ｂｏｃ保護トランス‐３‐ビニルプロリン１６６の結晶構造を示している。 図２はジプロリン構成要素８５の１Ｈ‐ＮＭＲスペクトルを示す（５００MHz、ＭｅＯＨ‐ｄ４、ＲＴ）。 図３は、リガンドペプチドＩ（左）およびＩＩ（右）の濃度変化の影響下でのＶＡＳＰ／ＥＶＨ１ドメイン（６００MHz）の重ね合わせた連続の二次元１５Ｎ‐１Ｈ‐ＨＳＱＣ‐ＮＭＲスペクトル、ならびに数個の芳香族側鎖のプロトンと窒素との間にある交差ピークの詳細な説明を示しており、ここではリガンドペプチドＩの濃度の上昇に伴うＷ２３ＮＥ１‐ＨＥ１の変化（矢印の方向）が特に実例となっている。 図４は、結合定数ＫＤを決定する化学シフトΔδ対リガンドペプチドＩ濃度の変化のプロットを示す。 図５はＶＡＳＰ／ＥＶＨ１ドメインと３３２ＳＦＥＦＰｐｐＰＴＥＤＥＬ３４４ペプチドリガンドを表したものである（分子モデル表現）。ＥＶＨ１ドメインは、リガンドペプチドを受けるＶＡＳＰタンパク質の表面にある「溝」として明瞭に認識できる。
用語「機能的類似体」または「模倣薬」は、これらの表現が生物学の分野において一般的に認識されている意味合いを持つため相対語ではない。本発明にしたがって、用語「機能的類似体」または「模倣薬」は同義語であると理解され得ることが好ましい。すなわち、天然構造と比較して模倣薬は、本質的に同じ方法において、本質的に同じ機能を持ち、本質的に同じ結果をもたらす変異型である。
ペプチド模倣薬を生成する原理が周知である一方、これまでＰＰＩＩ構造模倣薬はほんの数例開示されているが、非常に多数の短所が見られる。ＰＰＩＩヘリックスの構造モチーフを合成類似体に完全に、あるいは部分的に置換する多様なアプローチがあるが、周知の構造と多様なタンパク質ドメインとの相互作用を調査できなかったか、あるいは非常に限定的な範囲でしか調査できなかった。また、先行技術によって当業者は、プロリンが豊富なヘリックスと多様なタンパク質ドメインとの相互作用は特定の生物学的重要性を全く持たないことを教えられた。このような相互作用またはその修飾には細菌感染またはウイルス感染、神経変性疾患または腫瘍形成などの多数の疾患が伴うことを示したことは本発明者らの功績である。先行技術で周知の非常に多数の模倣薬は、系からの分離がしばしば困難であるか、あるいは全く達成できない触媒でしか生成できないものである。さらに、周知の生成物は品質保持期限が短いこと、しばしば合成に必要な生成物が混入してしまうことから、特に医薬用途が妨げられるか、あるいは不可能となることに留意されたい。また、これまで公知である模倣薬の結合親和性では不十分である。
ペプチドリガンドとタンパク質受容体との相互作用は生物学的過程の調節において重要な役割を果たし、ペプチド形状に極めて依存している。生理学的条件下では、直鎖ペプチドの構造は単結合をとりまく回転の結果として動的平衡にあり、その平衡はｐＨ値および温度に依存している。その結果として、生物学的に反応性のある構造の割合が低率なものだけが存在する。
ペプチド骨格の構造は通常、３つの角度Φ（ファイ）、Ψ（プサイ）およびω（オメガ）で記述される。部分的二重結合特性のため、ペプチド結合はその回転の妨害を受け、水平配列となり、その結果、２つの好ましい構造ができる：それぞれω＝１８０°およびω＝０°を有するトランスおよびシスペプチド結合であり、このうちトランス構造の方がエネルギー的に好ましく、それゆえ主流である。
したがって、第一近似では、アミノ酸残基のねじれ角ΦおよびΨはペプチド骨格の構造を表すのにふさわしいものである。Ｎ‐Ｃα結合をとりまく回転を表す角度Φは４つの原子Ｃ（＝Ｏ）‐Ｎ‐Ｃα‐Ｃ（＝Ｏ）で決定される。同様にＮ‐Ｃα‐Ｃ（＝Ｏ）‐ＮはＣα‐Ｃ（＝Ｏ）結合をとりまく回転を表す角度Ψを決定している。ΦおよびΨの多数の異なる組み合わせは理論上可能であるが、特定の好ましい構造は一般的にペプチド内に存在し、これは側鎖のサイズ、極性および電荷に依存し、結果としてα‐ヘリックス、β‐プリーツシート、β‐ターン等の周知の二次構造が形成される。
ペプチド成分としてのアミノ酸プロリン
唯一の二次構造アミノ酸であるので、プロリンは２０種の天然アミノ酸の中で別格である。アミド窒素を有するα‐側鎖を環化すると、ペプチドの回転自由度が結果的に低くなるように５員環の要素としてねじれ角Φ＝（−６５°±１５°）が相対的に制限される。一方で窒素を二重アルキル化すると、他の通常の（ペプチド骨格内の）アミドプロトンが消失し、結果的に水素結合供与体としてのプロリンが除外される。他方、カルボニル基は電子が特に豊富であり、したがって他のアミノ酸と比較して水素結合受容体が優れているということになる。これらの幾何学的特性および電子特性の結果として、プロリンはα‐ヘリックスを安定化させることができず（α‐ヘリックスブレーカー）、β‐プリーツシート構造も形成しない（β‐プリーツシートブレーカー）が、むしろ他の典型的な二次構造、いわゆるβ‐ターンおよびポリプロリンヘリックス（ＰＰＩＩヘリックス）中に見られる。
プロリンが豊富なモチーフおよび二次構造としてのＰＰＩＩヘリックス
プロリンが豊富なアミノ酸配列は細胞内シグナル伝達経路に関与するペプチド中に頻繁に見られる。このことには、プロリンが全体を、あるいは大部分を占めている配列が関与している（通常、連続した４つ以上のプロリン単位）。
このことは、ペプチド骨格のねじれ角がΦ＝−７８°およびΨ＝＋１４６°である長鎖の左巻きヘリックスと認識されている特有の二次構造、すなわちポリプロリンヘリックスまたは簡単に言うとＰＰＩＩヘリックスを誘導する。結果として、横断面（図参照）において回転ごとに正確に３つのプロリン残基を有するらせん軸をとりまいて擬似Ｃ３回転対称が存在し、そのためプロリンが豊富な配列にあるプロリン残基は少なくとも３つの周期性（例えばＰｘｘＰｘｘＰまたはＰＰｘＰＰｘＰＰｘ）で繰り返されることが好ましい。
このように、ペプチド骨格のプロリン側鎖およびカルボニル基は規則的な間隔で溶媒にさらされる。分子内水素結合が存在しないため、カルボニル基は受容体タンパク質を有する分子内水素結合を形成するのに特に適している。
しかし、ＰＰＩＩヘリックス構造モチーフは、プロリンが存在しない場合にも誘導し得る。特に、アミノ酸ＧｌｕはＰＰＩＩヘリックスおよびその近傍でしばしば生成されるが、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｓｅｒ、ＡｓｐおよびＨｉｓも見られた。ドメインとリガンドとの間にある好ましい結合形態により、どのプロリン位置が厳重に保存されなければならないか、どれが他のアミノ酸と任意に置換してもよいかが決定される。
本発明の好ましい実施態様では、Ａおよび／またはＢは５および／または６個の環原子であるように選択され、ＡおよびＢで表される環員はＣ、Ｏ、Ｓおよび／またはＮ原子からなる群から選択される。当然、４、５、または６員環が形成され、環員が‐ＣＨ２‐、‐Ｏ‐、‐Ｓ‐および
（ＲがＨ、アルキルまたはアシル）から構成されるような架橋環Ａ、Ｂを選択することも好ましい。
本発明の別の好ましい実施態様では、化合物は一般式２を有する：
Ｚ１、Ｚ２は式１で示したものと同じであり、その立体配置は式２に示され；
Ｒ１、Ｒ２がアルキル、アシル、ヘタリールおよび／またはスルホニルであり、
Ｘが‐ＣＨ２‐、‐Ｏ‐、‐Ｓ‐および／または
である。
本発明の別の好ましい実施態様では、化合物は式３に対応する：
Ｘが‐ＣＨ２‐、‐Ｏ‐および／または‐Ｓ‐であり；
Ｒが‐ＮＨＲ"、‐ＯＲ"であり、Ｒ"＝ペプチジル、置換アルキルおよび／またはヘタリールであり；
Ｒ'＝アシル、ペプチジルおよび／またはスルホニルである。
式３のＲ'がペプチジルであることが特に好ましい。
好ましい態様では、本発明は医薬的活性薬剤として上述の化合物の使用に関する。医薬的活性薬剤としての使用は外科、治療または診断方法における使用に関する。
別の態様では、本発明は、任意に医薬的に許容可能な担体とともに本発明に従った化合物を含む医薬品に関する。
好ましい医薬担体は、例えば充填剤、希釈剤、結合剤、保湿剤、溶解遅延剤、崩壊剤、吸収促進剤、湿潤剤、吸収剤および／または滑剤である。
別の態様では、本発明は、Ｓｒｃ相同性３ドメイン、ＷＷドメイン、Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１ドメイン、ＧＹＦドメイン、ＵＥＶドメインおよび／またはプロフィリンからなる群から選択されるドメインのリガンドとしての本発明に従った化合物の使用に関する。
好ましい態様では、上記のドメインすべては特に親和性が１〜５００μMであるプロリンが豊富な配列と相互に作用し、必要な特異性に到達するように本発明の特定の実施態様における付加的な側面のエピトープを必要とする。好ましくは、特に２つの事前形成された疎水性表面の相互作用を介してリガンド、ペプチドおよびドメイン間で結合が起こる。好都合にも、芳香族アミノ酸はドメインタンパク質の表面に蓄積し、その残基は疎水性の結合ポケットを形成する。ＰＰＩＩヘリックスに硬性特性があるため、プロリンが豊富なペプチドリガンドは、ドメイン表面と接触し、幾何級数的に固定された相補的構造を有する。好都合にも、疎水的接触はコアモチーフの全長には及ばないが、その代わりリガンドペプチドはドメインに及ぶスクリーン様構造を形成する。いくつかのプロリン残基は疎水性結合ポケット内で受け取られ、よってドメインの芳香族残基と相互に作用する。これらの接触が生物学的に関連した結合強度を得るには不十分である場合、付加的な安定化水素結合が有利に形成され、このことはプロリンの電子が豊富なカルボニル基によって極めて可能である。
結合形成中のエントロピーの減少は、比較的に高次である結果として、通常の直鎖ペプチドと比較して小さいため、エネルギー的に分子内結合はＰＰＩＩヘリックスの限定的可撓性のために有利に働いている。エネルギーのこの量を定量化するため、ペプチド骨格をとりまくその他の通常の４つの回転自由度のうち２つのみを有するジペプチドｘＰを考えることになるかもしれない。３００Kでの各回転自由度は約３．５kJ/molに対応し、このため、複合体の形成に際し、ｘＰジペプチドごとに約７kJ/molのエネルギー的利点が生じる。
ＥＶＨ１ドメイン（Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１ドメイン）に結合する単一ペプチド、例えば細菌表面タンパク質ＡｃｔＡにおけるプロリンが豊富な配列の多重反復の結果として、親和性のさらなる増加が見られる。
さらに具体的には、本発明の意味合いにおけるドメインとは、Ｓｒｃ相同性３ドメイン、ＷＷドメイン、Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１ドメイン、ＧＹＦドメイン、ＵＥＶドメインおよび／またはプロフィリンである。
ＥＶＨ１ドメインは約１１５個のアミノ酸から構成され、多様な多ドメインシグナル伝達タンパク質内で生じる。中でもこれらは、分子アダプターとして働き細胞骨格のアクチン動力学を調節するＥｎａ／ＶＡＳＰタンパク質のファミリーを含む。ＥＶＨ１ドメインはそれらのリガンド優先度により３つのクラスに区分される。第一のクラスは、すべての接着斑特にビンキュリンおよびザイキシンなどの接着タンパク質においてみられる、ならびに細胞内細菌リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）のＡｃｔＡタンパク質において見られる、ＦＰＰＰＰコアモチーフを特異的に認識する。
分子レベルでの過程および結果として生じる機能の生物学的形態を調査するため、三次元ドメイン構造を解明し、また、多様なリガンドペプチドとの相互作用を調査した。ＥＶＨ１ドメインは共通コアモチーフ、ＦＰｘΦＰを認識し、ここではフェニルアラニン（Ｆ）および２つの外部プロリン位置（Ｐ）が結合形成に不可欠であり、２つの内部位置が明確に多様性をもたらしている（ｘ＝任意のアミノ酸、Φ＝疎水性アミノ酸）ことが分かった。このことは図２で分かり、ヒトＶＡＳＰタンパク質のクラスＩ ＥＶＨ１ドメインをＡｃｔＡペプチド（３３２ＳＦＥＦＰＰＰＰＴＥＤＥＬ３４４）の短い断片とともに調査した。中心ＦＰＰＰＰモチーフおよび親和性促進ＥＬエピトープはフレーム内にあり、個々の位置と天然アミノ酸とを置換する場合、結合強度に明確に影響を与える（暗色＝良好な結合；明色＝非結合）。
特にＰ０が完全に非特異的である、位置Ｐ０およびＰ１を他のアミノ酸で置換可能であることは、リガンドペプチドが以下の結合形態にあると考えた場合に説明できる：Ｐ１およびＰ２はドメインの疎水性結合ポケットに受け取られ、２つの中心プロリンはドメインの上方のスクリーン様位置に置かれ、ほとんどドメイン表面と接触しない。しかし、Ｐ０のカルボニル基はＥＶＨ１ドメインのトリプトファン残基Ｗ２３のＮＨに対し不可欠である水素結合を形成する。
一連の異なる試験リガンドペプチドを使用して、結合親和性の全概要を理解することも可能であった。観察された結合親和性の最高値（ＫＤ＝４５μM）はリガンド３３２ＳＦＥＦＰＰＰＰＴＥＤＥＬ３４４（ＡｃｔＡタンパク質の４つのプロリンが豊富な反復の３番目）のものである。対照的に、リガンドをコアモチーフＦＰＰＰＰＴに還元する場合は、ＶＡＳＰ／ＥＶＨ１ドメインへの親和性はもはや測定できず、一方、Ｍｅｎａ／ＥＶＨ１ドメインへの結合は非常に弱いが検出可能ではあった（４１７μM）。
本発明の好ましい実施態様では、該化合物はポリプロリン模倣薬として使用する。好都合なことに、プロリンが豊富なアミノ酸配列は、シグナル伝達経路、詳しくは細胞内シグナル伝達経路、に関与するペプチドにおいて、特に見られる。本発明の意味合いでは、用語「模倣薬」は「類似体」と考えることも可能である。本発明に従った化合物はポリプロリンヘリックス構造により媒介される細胞内シグナル伝達経路の修飾に関連した疾患を治療することに使用することが好ましく、前記疾患は細菌感染疾患および／またはウイルス感染疾患、神経変性疾患および／または腫瘍疾患からなる群から選択される。
本発明に従った薬剤で治療可能な本発明の意味合いにおける他の疾患は、サル痘、ＡＩＤＳ、炭疽病（バチルス・アントラシス（Bacillus anthracis）、脾脱疽）、鳥インフルエンザ、ボレリア症、回帰熱ボレリア、ボツリヌス中毒症（クロストリジウム・ボツリナム（Clostridium botulinum））、ブルセラ病、カンピロバクター感染症、クラミジア感染症、コレラ（ビブリオ・コレラエ（Vibrio cholerae））、クロイツフェルト・ヤコブ病、コクシエラ・ブルネッティ（Coxiella burnetii）（Ｑ熱）、クリプトスポリジウム・パルバム（Cryptosporidium parvum）（クリプトスポリジウム症）、デング熱、ジフテリア、エボラウイルス感染症、エキノコックス症（キツネサナダムシ、イヌサナダムシ）、ＥＨＥＣ感染症（ＳＴＥＣ感染症、ＶＴＥＣ感染症）、エンテロウイルス、腸チフス熱、（発疹チフスリケッチア）、野兎病菌（Francisella tularensis）（野兎病）、春夏髄膜脳炎（ＳＳＭＥ）、黄熱病、ジアルジア症、淋病、インフルエンザ感染症（インフルエンザ）、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、ハンタウイルス（hantavirus）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、ヘルペス、ＨＵＳ（溶血性***症候群）、流行性角結膜炎、百日咳、ポリオ（灰白脊髄炎）、アタマジラミ感染症、ヒゼンダニ感染症、クリミア・コンゴ熱、ラッサ熱、食品関連疾患、レジオネラ症、リーシュマニア症、らい病、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病、鼠径リンパ肉芽腫症、マラリア（マラリア原虫感染症）、マールブルグウイルス感染症、麻疹、類鼻疽、髄膜炎菌、ＭＲＳＡ（ブドウ球菌（staphylococci））、流行性耳下腺炎、真菌症（真菌感染症）、発症率が増加している新たな感染症、ノロウイルス、鳥類病（オウム病）、パピローマウイルス、パラチフス熱、ペスト（エルシニア・ペスティス（Yersinia pestis））、肺炎球菌感染症（肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae））、天然痘、旅行関連感染疾患、ヒトの無鉤条虫感染症、ロタウイルス、風疹、ＲＳＶ感染症、サルモネラ症、猩紅熱、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、性伝染性感染症、赤痢菌感染症、梅毒、破傷風、狂犬病、トキソプラズマ症、旋毛虫症、結核、腸チフス熱、水疱瘡（水痘）、異型クロイツフェルト・ヤコブ病、ウイルス性出血熱、西ナイル熱、エルシニア症および／またはダニ伝染性疾患からなる群から選択される。
本発明は、薬品としての本発明に従った薬剤の使用に関する。よって本発明の意味合いにおいて、本発明に従った薬剤は医薬の全領域にわたり、特に医薬品として使用可能である。
好ましい態様において、細菌性疾患は以下の細菌：レジオネラ菌、連鎖球菌、ブドウ球菌、クレブシエラ菌、インフルエンザ菌、リケッチア（腸チフス熱）、マイコバクテリア、マイコプラズマ、ウレアプラズマ、ナイセリア（髄膜炎、ウォーターハウス・フリーデリクセン（Waterhouse-Friderichsen）症候群、淋病）、シュードモナス菌、ボルデテラ（百日咳）、コリネバクテリウム（ジフテリア）、クラミジア、カンピロバクター（campylobacter）（下痢）、大腸菌、プロテウス菌、サルモネラ菌、赤痢菌、エルシニア菌、ビブリオ菌、腸球菌、クロストリジウム、ボレリア、梅毒トレポネーマ、ブルセラ、フランシセラおよび／またはレプトスピラ、特にリステリアを伴った、特にこれらで媒介された疾患である。
特に好ましい疾患は、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ１／２ａ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ｂＦ２３６５、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ｂＨ７８５８，１７８コンティグ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ１／２ａＦ６８５４，１３３コンティグ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ｂ、Ｌ．モノサイトゲネスＳｖ４ａ、Ｌ．イノキュアＳｖ６ａ、Ｌ．ウェルシメリ（welshimeri）Ｓｖ６ｂ、Ｌ．シーリゲリ（seeligeri）Ｓｖ１／２ｂおよび／またはＬ．イワノビ（ivanovii）Ｓｖ５からなる群から選択された、あるいは上述した好ましいリステリアに基本的に基づいているリステリアにより誘発される疾患である。
好ましい神経変性疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病および／または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）からなる群から選択される。
さらに、本発明の意味合いにおける神経変性疾患は、アレキサンダー病、アルパース‐フッテンロッハー症候群、ハンチントン舞踏病、クロイツフェルト・ヤコブ病、錐体外路症候群、フリードライヒ失調症、皮質基底核変性症、クラッベ病、白質ジストロフィー、レビー小体型認知症、仮面顔、ピック病、多発性硬化症、多系統萎縮症、脳への神経変性鉄沈着、進行性核上性注視麻痺、シャイ・ドレーガー症候群、脊髄小脳失調症、シヌクレイン病および／または熱帯性痙性不全対麻痺症である。
好ましい腫瘍疾患は、耳鼻咽喉領域、肺、縦隔、消化管、泌尿生殖器系、婦人科系、乳腺、内分泌系、皮膚、骨の腫瘍疾患、ならびに軟部組織肉腫、中皮腫、メラノーマ、中枢神経系の新生物、乳児期癌性疾患または腫瘍疾患、リンパ腫、白血病、腫瘍随伴症候群、原発不明腫瘍による転移（ＣＵＰ症候群）、腹膜癌症、免疫抑制関連悪性腫瘍および／または腫瘍転移からなる群から選択される。
より具体的には、腫瘍は以下のタイプの癌：乳腺、前立腺および結腸の腺癌；気管支から始まる肺癌の全形態；骨髄の癌、メラノーマ、ヘパトーマ、神経芽細胞腫；パピローマ；アプドーマ、分離腫、鰓腫；悪性カルチノイド症候群；カルチノイド心疾患、癌腫（例えばウォーカー癌腫、基底細胞癌腫、基底扁平細胞癌腫、ブラウン・ピアース癌、腺管癌、エールリッヒ癌、上皮内癌、癌２期癌腫、メルケル細胞癌、粘膜癌、非小細胞気管支癌、燕麦細胞癌、乳頭癌、硬性癌、細気管支肺胞上皮癌、気管支癌、扁平上皮癌および移行上皮癌）；組織球機能障害；白血病（例えばＢ細胞白血病、混合細胞型白血病、ヌル細胞白血病、Ｔ細胞白血病、慢性Ｔ細胞白血病、ＨＴＬＶ‐ＩＩ関連白血病、急性リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、肥満細胞白血病および骨髄性白血病）；悪性組織球増殖症、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、孤立性形質細胞腫；細網内皮症、軟骨芽細胞腫；軟骨腫、軟骨肉腫；線維腫；線維肉腫；巨細胞腫；組織球腫；脂肪腫；脂肪肉腫；白血肉腫；中皮腫；粘液腫；粘液肉腫；骨腫；骨肉腫；ユーイング肉腫；滑膜腫；腺線維腫；腺リンパ腫；癌肉腫、脊索腫、頭蓋咽頭腫、未分化胚細胞腫、過誤腫；間葉腫；中腎腫、筋肉腫、エナメル上皮腫、セメント質腫；歯牙腫；テラトーマ；胸腺腫、絨毛芽細胞腫；腺癌、アデノーマ；胆管腫；コレステリン腫；円柱腫；嚢胞腺癌、嚢胞腺腫；顆粒膜細胞腫；ギナンドロブラストーマ（gynandroblastoma）；汗腺腫；島細胞腫瘍；ライディッヒ細胞腫；パピローマ；セルトリ細胞腫、卵胞膜細胞腫、平滑筋腫；平滑筋肉腫；筋芽細胞腫；筋腫；筋肉腫；横紋筋腫；横紋筋肉腫；上衣腫；神経節腫、グリオーマ；髄芽腫、髄膜腫；神経鞘腫；神経芽細胞腫；神経上皮腫、神経線維腫、神経腫、傍神経節腫、非クロム親和性傍神経節腫、被角血管腫、好酸球性血管リンパ球増殖症；硬化性血管腫；血管腫症；グロムス血管腫；血管内皮腫；血管腫；血管周囲細胞腫、血管肉腫；リンパ管腫、リンパ管筋腫、リンパ管肉腫；松果体腫；葉状嚢胞肉腫（cystosarcoma phyllodes）；血管肉腫；リンパ管肉腫；粘液肉腫、卵巣癌腫；肉腫（例えばユーイング肉腫、実験的にはカポジ肉腫および肥満細胞肉腫）；新生物（例えば骨新生物、***新生物、消化器系の新生物、直腸結腸新生物、肝新生物、膵新生物、下垂体新生物、精巣新生物、眼窩部新生物、頭頚部の新生物、中枢神経系の新生物、聴覚器官、骨盤、気道および尿生殖路の新生物）；神経線維腫症および頸部扁平上皮細胞異形成を含んでよい。
別の好ましい実施態様では、癌性疾患または腫瘍は、内鼻、鼻洞、鼻咽頭、***、口腔、中咽頭、喉頭、下咽頭、耳、唾液腺の腫瘍および傍神経節腫を含む耳鼻咽喉領域の腫瘍；非小細胞気管支癌、小細胞気管支癌、縦隔の腫瘍を含む肺の腫瘍；食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢および胆管の腫瘍、小腸、結腸および直腸癌ならびに肛門癌を含む消化管の腫瘍；腎臓、尿管、膀胱、前立腺、尿道、陰茎および精巣の腫瘍を含む泌尿生殖器腫瘍；子宮頚部、膣、外陰部の腫瘍、子宮癌、悪性栄養芽細胞疾患、卵巣癌、卵管の腫瘍、腹腔の腫瘍、乳癌を含む婦人科系腫瘍；甲状腺、副甲状腺、副腎皮質の腫瘍、膵島腫瘍、カルチノイド腫瘍およびカルチノイド症候群を含む内分泌器の腫瘍；多発性内分泌新生物；骨および軟組織肉腫；中皮腫；皮膚腫瘍；皮膚および眼内メラノーマを含むメラノーマ；中枢神経系の腫瘍；網膜芽細胞腫を含む乳児期腫瘍；ウィルムス腫瘍；神経線維腫症；神経芽細胞腫；ユーイング肉腫腫瘍ファミリー；横紋筋肉腫；非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫；皮膚T細胞リンパ腫；中枢神経系の原発性リンパ腫；ホジキン病；急性白血病、慢性骨髄性およびリンパ性白血病を含む白血病；形質細胞新生物；骨髄形成異常症候群；腫瘍随伴症候群；原発不明腫瘍の転移（ＣＵＰ症候群）；腹膜癌腫症；カポジ肉腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、中枢神経系のＡＩＤＳ関連リンパ腫、ＡＩＤＳ関連ホジキン病およびＡＩＤＳ関連肛門生殖器腫瘍などのＡＩＤＳ関連悪性腫瘍を含む免疫抑制関連悪性腫瘍；移植関連悪性腫瘍；脳転移、肺転移、肝転移、骨転移、胸膜および心膜転移を含む転移腫瘍；ならびに悪性腹水の群から選択される。
別の好ましい実施態様では、癌性疾患または腫瘍は結腸癌腫、胃癌腫、膵癌腫、結腸癌、小腸の癌、卵巣癌腫、子宮頚部癌腫、肺癌、前立腺癌、腎細胞癌腫および／または肝転移癌を含む乳癌、胃腸腫瘍などの癌性疾患または腫瘍性疾患からなる群から選択される。
本発明の意味合いにおけるウイルス性疾患はインフルエンザ、鼻炎、咳、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、伝染性紅斑、三日熱、水痘、パイフェル腺熱、ＳＡＲＳ、巨大細胞、下痢、肝炎、ポリオ、***ヘルペス、疣贅、狂犬病、ラッサ熱、エボラ、マールブルグ熱、ハンタウイルス熱、ＳＳＭＥ、ＲＳＳＥ、跳躍病脳炎、ポワッサン脳炎、キャサヌール森林熱、オムスク出血熱、コロラドダニ熱、黄熱病、デング熱、日本脳炎、西ナイル熱、チクングニア熱、オニョンニョン熱、リフトバレー熱、スナバエ熱、ロスリバー熱、シンドビス熱、マヤロ熱、マレー渓谷脳炎、セントルイス脳炎、ロシオ脳炎、カリフォルニア脳炎、ブニヤムウェラ熱、オロプーシェ熱、ＡＩＤＳ、性器ヘルペスおよび／または単純ヘルペスからなる群から選択され、好ましい態様では、ウイルス性肝炎疾患はＡ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、Ｆ型肝炎、Ｇ型肝炎および／または自己免疫性肝炎および／または無症候性または症候性ＨＩＶ感染症からなる群から選択される。
ＨＩＶ感染症はＡＩＤＳ疾患を引き起こす可能性がある。本発明の意味合いにおいて、ＡＩＤＳは以下からなる群から選択される臨床像により特徴付けまたは分類される
（ａ）無症候性または症候性ＨＩＶ感染症；
（ｂ）細菌性血管腫症、小骨盤の炎症、特に卵管または卵巣膿瘍の合併症の場合、帯状疱疹の長期化または再発、血小板減少性紫斑病、長期的発熱または一ヶ月以上続く下痢、リステリア症、口腔毛状白板症、口腔咽頭カンジダ症、膣カンジダ症、慢性もしくは難治性子宮頚部異形成、上皮内癌、末梢神経障害および／または
（ｃ）気道または食道カンジダ症、サイトメガロウイルス感染、ＣＭＶ網膜炎、ＨＩＶ関連脳障害、慢性潰瘍を伴った単純ヘルペス（一カ月未満）または単純ヘルペス関連気管支炎、肺炎または食道炎、慢性ヒストプラスマ症、腸管イソスポラ症、カポジ肉腫、播種性または肺外の（extrapulmonal）コクシジオイデス真菌症、肺外クリプトコッカス症、慢性腸管クリプトスポリジウム症、免疫芽細胞一次大脳リンパ腫またはバーキットリンパ腫、肺外マイコバクテリア、ニューモシスティック肺炎、再発性細菌性肺炎、進行性多巣性白質脳症、再発性サルモネラ敗血症、結核、脳トキソプラズマ症、消耗性症候群および／または浸潤性子宮頚癌。
本発明の意味合いにおける治療は、疾患の予防、治療、経過観察および／またはアフターケアである。
本発明に従った薬剤は単独で、またはエンベロープを持ったウイルスもしくはエンベロープを持たないウイルスに対する他の薬剤と組み合わせて使用可能である。エンベロープを持つウイルスは以下であることが好ましい：
二重鎖ＤＮＡウイルス＝ｄｓＤＮＡ
ポックスウイルス科（Poxviridae）
コードボックスウイルス亜科（Chordopoxvirinae）
オルトポックスウイルス属（Orthopoxvirus）
オルトポックス痘瘡（Orthopox variola）ウイルス＝天然痘ウイルス‐天然痘
オルトポックスアラストリム（Orthopox alastrim）ウイルス‐白痘
パラポックスウイルス属（Parapoxvirus）
パラポックスオビス（Parapox ovis）ウイルス＝オルフ（Orf）ウイルス‐オルフ＝ヒトに伝染可能な動物の羊痘
モルシポックスウイルス属（Molluscipoxvirus）
伝染性軟属腫（Molluscum contagiosum）ウイルス‐上皮軟属腫（伝染性軟属腫）
ヘルペスウイルス科（Herpesviridae）
アルファヘルペスウイルス亜科（Alphaherpesvirinae）
シンプレックスウイルス属（Simplexvirus）
単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ１）＝ヒトヘルペスウイルス１型（ＨＨＶ１）‐単純ヘルペス、***ヘルペス、アフタ性口内炎
単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ２）＝ヒトヘルペスウイルス２型（ＨＨＶ２）‐単純ヘルペス、性器ヘルペス
ヘルペスBウイルス＝（サルヘルペスウイルス（Herpesvirus simiae））
サルヘルペスウイルス属（Varicellovirus）
水痘帯状疱疹（Varicella zoster）ウイルス（ＶＺＶ）＝ヒトヘルペスウイルス３型（ＨＨＶ３）‐水痘＝水疱瘡（ヘルペス帯状疱疹）、帯状疱疹
仮性狂犬病（pseudorabies）ウイルス‐偽狂犬病＝ヒトに伝染可能なスクラッチングペスト（scratching pest）
ベータヘルペスウイルス亜科（Betaherpesvirinae）
サイトメガロウイルス属（Cytomegalovirus）
ヒト巨大細胞ウイルス＝ヒト巨大細胞ウイルス（ＨＣＭＶ）＝ヒトヘルペスウイルス５型（ＨＨＶ５）‐巨大細胞
ロゼオロウイルス属（Roseolovirus）
ヒトヘルペスウイルス６型（ＨＨＶ６）‐三日熱
ヒトヘルペスウイルス７型（ＨＨＶ７）‐三日熱
ガンマヘルペスウイルス亜科（Gammaherpesvirinae）
リンホクリプトウイルス属（Lymphocryptovirus）
エプスタイン・バー（Epstein-Barr）ウイルス（ＥＢＶ）＝ヒトヘルペスウイルス４型（ＨＨＶ４）パイフェル腺熱、バーキットリンパ腫
ラジノウイルス属（Rhadinovirus）
ヒトヘルペスウイルス８型（ＨＨＶ８）‐カポジ肉腫
ヘパドナウイルス科（Hepadnaviridae）
オルトヘパドナウイルス属（Orthohepadnavirus）
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）‐Ｂ型肝炎
単鎖（＋）ＲＮＡウイルス＝ｓｓ（＋）ＲＮＡ
トガウイルス科（Togaviridae）
アルファウイルス属（Alphaviruses）‐アルボビロシス（arbovirosis）病原体
チクングニア（Chikungunya）ウイルス（ＣＨＩＫＶ）‐チクングニア熱
オニョンニョン（O'nyong-nyong）ウイルス（ＯＮＮＶ）‐オニョンニョン熱
ルビウイルス属（Rubiviruses）
ルビウイルス（Rubivirus）＝風疹ウイルス＝風疹ウイルス‐風疹
フラビウイルス科（Flaviviridae）
ヘパシウイル属（Hepacivirus）
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）‐Ｃ型肝炎
Ｃ型ＧＢウイルス（低罹患率）
フラビウイルス属（Flavivirus）
西ナイルウイルス‐西ナイル熱
デングウイルス‐デング熱
黄熱病ウイルス‐黄熱病
跳躍病ウイルス‐跳躍病脳炎
セントルイス脳炎ウイルス‐セントルイス脳炎
Ｂ型日本脳炎ウイルス‐日本脳炎
ポワッサンウイルス‐ポワッサン脳炎
ＲＳＳＥウイルス‐ＲＳＳＥ＝ロシア春夏脳炎
ＳＳＭＥウイルスＳＳＭＥ＝春夏髄膜脳炎
コロナウイルス科（Coronaviridae）‐胃腸炎
コロナウイルス属
ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（ＳＡＲＳ‐ＣｏＶ）‐ＳＡＲＳ＝非定型肺炎
ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ２２９Ｅ）‐風邪
ヒトコロナウイルスＯＣ４３（ＨＣｏＶＯＣ４３）‐風邪
トロウイルス属（Torovirus）‐胃腸炎
レトロウイルス科（Retroviridae）＝ｄｓＤＮＡ中間体を有する単鎖（＋）ＲＮＡウイルス：
オルソレトロウイルス亜科（Orthoretrovirinae）
デルタレトロウイルス属（Deltaretrovirus）
ヒトＴ細胞白血球ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ Ｉ）‐白血病
ヒトＴ細胞白血球ウイルスＩＩ型（ＨＴＬＶ ＩＩ）‐白血病
レンチウイルス属
ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ‐１）‐ＡＩＤＳ
ヒト免疫不全ウイルス２型（ＨＩＶ‐２）‐ＡＩＤＳ
単鎖（−）ＲＮＡウイルス＝ｓｓ（−）ＲＮＡ
アレナウイルス科（Arenaviridae）
アレナウイルス属（Arenavirus）
ラッサウイルス‐ラッサ熱
リンパ性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）‐脈絡髄膜炎
タカリベ（Tacaribe）ウイルス
フニン（Junin）ウイルス‐フニン熱（アルゼンチン出血熱）
マチュポ（Machupo）ウイルス‐マチュポ熱（ボリビア出血熱）
ボルナウイルス科（Bornaviridae）
ボルナウイルス属
ボマ病のウイルス‐ウマの、ヒトに伝染可能性のある情動障害
ブニヤウイルス科（Bunyaviridae）‐アルボビロシス病原体
オルソブニヤウイルス属（Orthobunyavirus）
ブニヤムウェラウイルス（血清型）
カリフォルニア脳炎ウイルス（血清型）‐脳炎
フレボウイルス属（Phlebovirus）
リフトバレー熱ウイルス‐３サブタイプのリフトバレー熱
サシチョウバエ熱ウイルス‐サシチョウバエ熱
サブタイプのトスカーナウイルス‐パパタシ熱
ナイロウイルス属（Nairovirus）
クリミア・コンゴ熱ウイルス（血清型）：
サブタイプのクリミア・コンゴ（Krim Congo）出血熱ウイルス‐クリミア・コンゴ熱
サブタイプのハザラ（Hazara）ウイルス
サブタイプのハサン（Khasan）ウイルス
ハンタウイルス属（Hantavirus）
ハンタン（Hantaan）ウイルス（４つのサブタイプ）‐出血熱、腎炎
ソウル（Seoul）ウイルス（血清型）‐出血熱
プロスペクトヒル（Prospect-Hill）ウイルス（２つのサブタイプ）‐出血熱
プーマラ（Puumala）ウイルス（血清型）‐出血熱、肺炎、腎炎
ドブラバー・ベルグレド（Dobrava-Belgrade）ウイルス‐出血熱
トゥーラ（Tula）ウイルス‐出血熱
シンノンブレ（Sin-Nombre）ウイルス（血清型）‐重度肺水腫を伴う出血熱
フィロウイルス科（Filoviridae）
マーブルグウイルス属（Marburg virus）
ビクトリア湖‐マーブルグウイルス（血清型）‐マーブルグ熱（出血熱）
エボラウイルス属（Ebolavirus）
ザイールエボラウイルス（血清型）‐エボラ（出血熱）
スーダンエボラウイルス‐エボラ（出血熱）
アイボリーコーストエボラウイルス‐エボラ（出血熱）
オルソミクソウイルス科（Orthomyxoviridae）
Ａ型インフルエンザウイルス属‐インフルエンザ
Ａ型インフルエンザウイルス変異体（Ｈ１Ｎ１）‐インフルエンザ
Ａ型インフルエンザウイルス変異体（Ｈ３Ｎ２）‐インフルエンザ
（鳥類）Ａ型インフルエンザウイルス変異体（Ｈ５Ｎ１）、高病原性鳥インフルエンザウイルス（ＨＰＡＩＶ）‐ヒトに伝染可能性があるが、ヒトからヒトへは伝染しない、動物の鳥インフルエンザ
Ｂ型インフルエンザウイルス属‐インフルエンザ
Ｂ型インフルエンザウイルス／ヴィクトリア系‐インフルエンザ
Ｂ型インフルエンザウイルス／ヤマガタ系‐インフルエンザ
Ｃ型インフルエンザウイルス‐インフルエンザ
パラミクソウイルス科（Paramyxoviridae）
パラミクソウイルス亜科（Paramyxovirinae）
アブラウイルス属（Avulavirus）
パラインフルエンザ（Parainfluenza）ウイルス（１，３）‐パラインフルエンザ
モルビリウイルス属（Morbillivirus）
麻疹ウイルス‐麻疹
ルブラウイルス属（Rubulavirus）
パラインフルエンザウイルス（２，４）‐パラインフルエンザ
ムンプス（Mumps）ウイルス‐流行性耳下腺炎
ニューモウイルス亜科（Pneumovirinae）
ニューモウイルス属
呼吸器合胞体（Respiratory syncytical）ウイルス（ＲＳＶ）‐気道感染
メタニューモウイルス（Metapneumovirus）属
ヒトメタニューモウイルス（ＨＭＰＶ）‐気道感染
ラブドウイルス科（Rhabdoviridae）
ベシクロウイルス属（Vesiculovirus）
水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＶ）‐ヒトに伝染可能性もある、動物の水疱性口内炎（口腔粘膜の膿疱性炎症）
リッサウイルス属（Lyssavirus）
狂犬病ウイルス（ＲＡＢＶ）（元は遺伝子型１）‐ヒトに伝染可能性もある動物の狂犬病
モコラ（Mocola）ウイルス（ＭＯＫＶ）（元は遺伝子型３）‐ヒトに伝染可能性もある、動物の狂犬病
ドーベンハーゲ（Duvenhage）ウイルス（ＤＵＶＶ）（元は遺伝子型４）‐ヒトに伝染可能性もある動物の狂犬病
ヨーロッパコウモリリッサ（European Bat Lyssa）ウイルス１＋２（ＥＢＬＶ１，２）（元は遺伝子型５および６）‐ヒトに伝染可能性もある動物の狂犬病
オーストラリアコウモリリッサ（Australian Bat Lyssa）ウイルス（ＡＢＬＶ）（元は遺伝子型７）‐ヒトに伝染可能性もある動物の狂犬病。
エンベロープを持たないウイルスは特に以下である：
二重鎖ＤＮＡウイルス＝ｄｓＤＮＡ
アデノウイルス科（Adenoviridae）
ヒトＡ型アデノウイルス‐Ｆ（５１個のサブタイプ）‐鼻炎、風邪、下痢
パポバウイルス科（Papovaviridae）
パポバウイルス（Papovavirus）
ヒトパピローマウイルス
種々のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）‐疣贅
コンジローマウイルス６型（ＨＰＶ６）‐フィグワーツ
コンジローマウイルス１１型（ＨＰＶ１１）‐フィグワーツ
ヒトパピローマウイルス、低リスク型（ＨＰＶ ４０、４２、４３、４４、５４、６１、７０、７２、８１）およびＧＰ６１０８；高リスク型（ＨＰＶ１６、１８、３１および３３のみならず、３５、３９、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８、７３および８２）子宮頚癌
パピローマウイルス
単鎖ＤＮＡウイルス＝ｓｓＤＮＡ
パルボウイルス科（Parvoviridae）
パルボウイルス亜科（Parvovirinae）
ディペンドウイルス（Dependovirus）
アデノ関連ウイルス２型（ＡＡＶ２）
アデノ関連ウイルス３型（ＡＡＶ３）
アデノ関連ウイルス５型（ＡＡＶ５）
エリスロウイルス（Erythrovirus）
パルボウイルスＢ１９‐伝染性紅斑
二重鎖ＲＮＡウイルス＝ｄｓＲＮＡ
レオウイルス（Reovirus）
ロタウイルス‐胃腸炎、下痢
オルビウイルス
コロラドダニウイルス‐コロラドダニ熱
流行性出血熱ウイルス（ＥＨＤＶ）‐地方病性シカ出血
単鎖（＋）ＲＮＲウイルス＝ｓｓ（＋）ＲＮＡ
ピコルナウイルス科（Picornaviridae）
ライノウイルス
ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）、１Ａ、１Ｂ‐１００‐鼻炎、風邪
アフトウイルス（Aphthovirus）
***ウイルス‐軽症型でもヒトに伝染可能性がある動物の***
エンテロウイルス
ポリオウイルス（１〜３）‐ポリオ
コクサッキーウイルスＡ１〜２２、２４（ＣＶＡ１〜２２、２４）‐風邪、ウイルス性髄膜炎、心筋炎
コクサッキーウイルスＢ１〜６（ＣＶＢ１〜６）風邪、ウイルス性髄膜炎、心筋炎
エコーウイルス‐風邪、胃腸炎＝下痢、脳髄膜炎
ヒトエンテロウイルス‐風邪、胃腸炎＝下痢
ＳＶＤウイルス（豚水胞症）
カルジオウイルス（Cardiovirus）
脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）‐脳心筋炎
メンゴウイルス‐脳心筋炎
タイラーマウス脳脊髄炎ウイルス（ＴＭＥＶ）‐脳脊髄炎
ビリュイスクヒト脳脊髄炎ウイルス（ＶＨＥＶ）‐脳脊髄炎
ヘパトウイルス
Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）‐Ａ型肝炎
ヘペウイルス科（Hepeviridae）
ヘペウイルス（Hepevirus）
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）‐Ｅ型肝炎
カリシウイルス科（Caliciviridae）
カリシウイルス（Calicivirus）
ＳＲＳＶ＝小型球形ウイルス
ノーウォークウイルス‐胃腸炎、下痢
ノロウイルス‐胃腸炎、下痢
サポウイルス‐胃腸炎、下痢
ベシウイルス
ラゴウイルス
アストロウイルス科（Astroviridae）
アストロウイルス
ヒトアストロウイルス‐胃腸炎、下痢
好ましい実施態様では、本発明に従った薬剤は、アバカビル（abacavir）、アシクロビル（acyclovir）、アデホビル（adefovir）、アマンタジン（amantadine）、アンプレナビル（amprenavir）、アタザナビル（atazanavir）、シドフォビル（cidofovir）、ダルナビル（darunavir）、デラビルジン（delavirdine）、ジダノシン（didanosine）、ドコサノール（docosanol）、エムトリシタビン（emtricitabine）、エファビレンツ（efavirenz）、エンフビルチド（enfuvirtide）、エンテカビル（entecavir）、ファムシクロビル（famciclovir）、ホスカルネット（foscarnet）、ホミビルセン（fomivirsen）、ホスアンプレナビル（fosamprenavir）、ガンシクロビル（ganciclovir）、ガーダシル（gardasil）、イドクスウリジン（idoxuridine）、イミキモド（imiquimod）、インジナビル（indinavir）、インターフェロン（interferon）、ラミブジン（lamivudine）、ロピナビル（lopinavir）、ネビラピン（nevirapine）、ネルフィナビル（nelfinavir）、オセルタミビル（oseltamivir）、ペンシクロビル（penciclovir）、ペラミビル（peramivir）、リバビリン（ribavirin）、リマンタジン（rimantadine）、リトナビル（ritonavir）、サキナビル（saquinavir）、スタブジン（stavudine）、テノホビル（tenofovir）、チプラナビル（tipranavir）、トリフルリジン（trifluridine）、トロマンタジン（tromantadine）、バラシクロビル（valaciclovir）、バルガンシクロビル（valganciclovir）、ビダラビン（vidarabine）、ビラミジン（viramidine）、ザルシタビン（zalcitabine）、ザナミビル（zanamivir）および／またはジドブジン（zidovudine）からなる群から選択される追加薬剤を含んでよい。
本発明はまた、以下の別々のパッケージからなるセット（キット）に関する：
ａ）本発明に従った有効量の組成物および／または医薬的に有用な誘導体、溶媒和物および／またはその立体異性体、ならびに任意の割合の他の薬剤または追加薬剤とのそれらの混合物、ならびに
ｂ）有効量の別の薬品。該セットには箱、単一フラスコ、袋またはアンプルなどの適当な容器が含まれている。例えば、該セットは単一のアンプルを含むことが可能であり、各々は本発明に従った有効量の組成物および／または医薬的に有用な誘導体、溶媒和物および／または立体異性体、任意の割合のそれらの混合物、ならびに溶解または凍結乾燥した形態の有効量の別の薬学的活性薬剤を含む。さらに、該セットは例えば、キットの内容物を組み合わせるための、パッケージに挿入してある情報を含んでいる場合もある。前記情報には、治療計画等を説明している場合もある。
好ましい化合物を含む医薬組成物に関する前記説明において、派生表現「投与」、「〜の投与」、「投与する」および「〜を投与する」はこれらの医薬組成物に関連して使用する。本文脈において、これらの表現は、本発明書に従った医薬組成物を本明細書に記述された任意の投与経路で治療を必要とする患者に提供することを意味するように意図しており、その活性薬剤はこのような患者において、ウイルス感染に媒介された、またはそれに関連した疾患、病的障害、あるいはそのような罹患を治療するのに適した好ましい化合物またはプロドラッグ、その誘導体または代謝産物である。したがって本発明は、患者に投与するときに好ましい化合物を直接に、または間接的に提供することを可能にする任意の他の化合物を包含している。このような化合物はプロドラッグとして公知であり、好ましい化合物のこのようなプロドラッグ形態を製造するためのすでに実施されている手法は多く存在する。
上述の疾患を治療する場合、本発明に従った化合物を含む医薬品はゲル、散剤、粉末、錠剤、徐放錠剤、プレミックス剤、乳剤、茶飲料形態（ｂｒｅｗ−ｕｐ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）、ドロップ、濃縮物、顆粒、シロップ、ペレット、ボーラス、カプセル、エアロゾル、スプレーおよび／または吸入薬の形態で調製および／または使用することが特に好ましい。
好ましい態様では、本発明に従った化合物を含む医薬品は、０．１〜９９．５、好ましくは０．５〜９５．０、より好ましくは２０．０〜８０．０wt.%の濃度で製剤中に存在する。
該製剤は、経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、および／または局所投与することが好ましい。
本発明に従った化合物を含む医薬品は、２４時間ごとに総量０．０５〜５００mg/kg、より好ましくは５〜１００mg/体重kgで使用することが好ましい。
好ましい態様では、接触は経口的に、注射で、局所的に、経膣的に、経直腸的に、および／または経鼻的に達成される。
上述のドメイン（本発明の意味合いにおいて、以下のドメインは特に想定されている：Ｓｒｃ相同性３ドメイン、ＷＷドメイン、Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１ドメイン、ＧＹＦドメイン、ＵＥＶドメインおよび／またはプロフィリン）を含む構造の結合に影響を与える化合物およびそのリガンドには継続して需要がある。したがってインビトロ試験でも試験するための新たな化合物を提供することが望ましく、例えばこの化合物は特定の主要化合物のための薬理学的スクリーニング試験に使用可能である。
別の好ましい実施態様では、本発明に従った薬剤はまた、本発明の薬剤、および直接に、間接的に、あるいは錯体形成を介して該薬剤と共役した検出可能標識を含む診断薬としても提供されている。診断薬は、インビトロまたはインビボの細胞、組織または器官において一般的なタイプまたは特定タイプのＳｒｃ相同性３ドメイン、ＷＷドメイン、Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１ドメイン、ＧＹＦドメイン、ＵＥＶドメインおよび／またはプロフィリンの有無を検出することに使用可能である。インビボでの使用には、診断薬は経腸的に、非経口的に、あるいは特定の用途の要件によって予め規定された別の経路で、好ましくは医薬的に許容される担体と混合して投与する。
特別な実施態様では、融合タンパク質に基づいた試薬を使用し、例えば該試薬は、例えばペプチドに組み込まれた本発明に従った薬剤から成り、上述のドメイン（ＷＷ、Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１、ＧＹＦ、ＵＥＶドメインおよび／またはプロフィリン）以外の任意のドメインを有する、例えば無調整の、または活性化したＳｒｃまたはタンパク質の基質を含む。例えば、特定のウイルスによる感染について試験すべきある試料は患者から採取し、有効量の融合タンパク質とともにインキュベートすることが可能である。基質の変換の程度に関する次の分析によって、個体でのウイルス感染の検出が可能となる。最終的に、例えば無調整の、または活性化したＳｒｃを発現させるウイルスの有無は、例えば多量に変換された基質を介して検出される非常に高レベルのＳｒｃで示され得る。
本発明はまた、本発明に従った化合物の少なくとも１つ、および／または本発明に従った医薬品の１つを含むキットにも関するものであり、場合によりキットの内容物を取り扱うことまたは組み合わせることについての情報とともに、例えば説明書またはさらなる情報等を載せたホームページを参照したインターネットアドレスにも関するものである。例えば、キットの取扱いに関連した情報には上述の疾患、特に好ましい疾患の治療計画が含まれてもよい。また、該情報は、上述の疾患を診断する際の本発明に従った生成物の使用形態を参照する詳細情報を含んでもよい。本発明に従ったキットは基礎研究にも使用してよい。
したがって、本発明はまた、神経変性疾患、細菌感染性疾患もしくは腫瘍性疾患の予防および／または治療におけるキットの使用に関する。
本発明はまた、ペプチド結合剤をスクリーニングするための本発明に従った薬剤の使用に関する。当業者はペプチド模倣薬を使用するスクリーニング法に精通している。
本発明に従った薬剤は、ペプチド、特に、例えば固定化ペプチド中の構成要素として組み込ませることも可能である。特に、このような固定化ペプチドは診断上、良好に使用可能である。例えば固定化ペプチドは、本発明の薬剤を金粒子に固定化することで金に固定化できる。本発明に従った薬剤を構成要素として含む固定化もしくは非固定化ペプチドまたは他の分子は、例えばタンパク質間相互作用またはペプチド間相互作用に関与する物質のスクリーニングに使用可能である。例えば好ましい使用とは、本発明に従った薬剤を含むペプチドの使用、または親和性カラム中で本発明に従った薬剤と炭水化物または脂質とを組み合わせた使用である。当業者であれば固定化を達成する他の可能性ある方法にも精通しているであろう。本発明の意味合いにおける固定化には、特に生物学的、化学的または物理的作用にさらすことによって達成され得る本発明に従った薬剤の多様な固定化法が挙げられる。例えば、本発明に従った薬剤は、担体への結合のみならず架橋、封入またはマイクロカプセルへの組み込みにより固定可能となる。担体へ結合させる場合では、例えばマイクロタイタープレートまたはクロマトグラフィーカラムでは、吸着、イオン結合または共有結合により固定が有効となる。本発明に従った薬剤はスペーサーまたは抗体を介して固定可能である。半透性膜へ封入する場合、ゲル、マイクロカプセルまたは繊維に封入する形態で固定化を行う。
上述の親和性カラムを用い、特定の結合剤として相互作用するタンパク質を測定することで、相互作用している反応物を検出することが可能である。当然ながら、本発明に従った薬剤をエステルもしくはスルホンアミド、糖または他の有機もしくは無機化合物などの非ペプチド構造に組み込むことも可能である。好ましい態様では、これにより特異的な結合剤をスクリーニングするために使用可能な有機構成成分が得られる。
例えば、本発明に従った薬剤を、例えばWO 2007/021661に開示されているような他の物質と組み合わせることが好ましい場合がある。そこに開示された化合物と本発明に従った薬剤とを組み合わせると、驚くべき特性を示す新たな複合分子が得られる。驚くべきことに、その新たな複合分子はスクリーニングアッセイの標的として有用性が高い。上述のドメインの少なくとも１つが関与していれば、このような応用は、例えばＳＨ３ドメインと相互に作用する、あるいはタンパク質相互作用を調節、特に阻害する成分をスクリーニングすることに利用可能である。当業者であれば、本発明に係る薬剤と、特にWO 2007/021661に記載の請求項１〜１１、請求項４１〜４４、またはその他の化合物とを組合わせもしくは関連付ける有望な方法に精通しているであろうし、その結果特にスクリーニングアッセイでの使用が可能となる。例えば、WO 2007/021661の請求項１にはアミノ酸または類似したペプチド模倣薬の位置が開示されている。この位置には本発明に従った薬剤の少なくとも１つで、または本発明に従った化合物を含む化合物で占めることが可能である。好ましい態様では、本発明に従った薬剤は、例えばライブラリーにある物質で、あるいは例えば構造が最適化された標的で骨格として使用可能である。新たな複合分子はＳＨ３またはＦＹＮドメインのリガンドとして使用可能である。本発明に従った薬剤以外に、その複合体およびWO 2007/021661と一致する化合物は、ＳＨ３ドメインからなる、あるいはＥＶＨ１、ＧＹＦ、ＷＷまたはＵＥＦおよび／またはプロフィリンドメインを含むタンパク質の活性に影響を与えるために使用可能である。この文脈において、ＳＨ３ドメインはタンパク質キナーゼの一部であることが好ましく、例えば別の好ましい実施態様では、タンパク質キナーゼはＳｒｃファミリーのメンバーである。
Ｓｒｃファミリーのメンバーは例えば、ＦＹＮ、Ｓｒｃ、Ｆｇｒ、Ｙｅｓ、Ｙｒｋ、Ｌｙｎ、Ｈｃｋ、ＬｃｋまたはＢｌｋである。本発明に従った薬剤ならびにそれを含む複合分子は疾患の治療に使用可能であり、例えば上述のドメインを有するＳｒｃファミリーまたはタンパク質のメンバーが挙げられる。より具体的には、これらには特に、心血管疾患、炎症性疾患、免疫性疾患、骨性疾患、特に癌性疾患、神経性疾患、神経変性疾患、虚血などの増殖性バックグラウンドがある疾患、特段には以下の脳卒中、血管新生の障害、アレルギー、関節炎または感染性疾患が挙げられる。したがって、本発明はライブラリー、特に組み合わせたスクリーニング法に使用可能なライブラリーに関連しており、これは本発明に従った薬剤またはそれを含む分子からなるものである。これらのライブラリーを使用して、例えばＳＨ３ドメインまたは上述のドメイン以外のドメインに結合する候補分子の検出が可能である。
ＳＨ３ドメインはＡｂｌ、Ｓｒｃ、Ｇｒｂ２、ＰＬＣδ、ＰＬＣγ、Ｒａｓ‐ＧＡＰ、Ｎｃｋおよびｐ８５‐ＰＩ‐３'キナーゼなどの多様なタンパク質で検出可能であるが、これらに限定されるわけではない。
本発明はまた、単離形態をとる本発明に従った薬剤の使用、または直接的に物質を輸送するプローブとしての有機もしくは無機化合物と結合した薬剤の使用に関する。このような状況において、それら薬剤は治療薬のみならず診断薬としても使用可能である。本発明に従った薬剤はプローブとして、または目的の化合物を好ましくは上述のドメインに輸送する、もしくは互いの相互作用を高める、ドラッグデリバリーシステムとして使用することも可能である。
本発明に従った薬剤は上述のドメインのリガンドまたは結合剤である。驚くべきことに、本発明に従った薬剤は公知のリガンドまたは結合剤と比較して、上述のドメインに対する親和性がはるかに高レベルである。上述した治療用途とは別に、本発明に従った結合剤または相互作用薬剤は、例えばシグナル伝達経路を特に細胞レベルで調節する方法の提供、発癌性タンパク質もしくは他の疾患関連構造の活性のモデル化する方法の提供、または診断薬を実験室規模で開発することを含めて、上述の薬剤に加え主要化合物の提供といった様々な方法での調査に使用することも可能である。好都合にも、本発明に従った薬剤には多数のタンパク質、特にシグナル伝達に関与するタンパク質に対する調節能がある。上述のドメインを有するのであれば本発明に従った薬剤はまた、タンパク質の広範なクラスならびに高度に特異的なクラスを調節可能にするという利点を有する。したがって通常の試験により、特定のドメインに特異的な本発明に従った薬剤を選択することが可能であり、よって類似または同一のドメインを有する他のタンパク質に影響を及ぼさずに特定のタンパク質の調節をすることが可能である。当然ながら、個々のタンパク質の全体的な活性を調節することでドメインの広範なクラスおよび特異的なクラスが影響を受けるような方法で、本発明に従った薬剤を選択することも可能である。結果として、シグナル伝達経路に、または例えば発癌もしくは神経変性疾患ならびにウイルスおよび細菌感染性疾患に関与するタンパク質の広範なクラスを調節する他の、例えばペプチド模倣活性薬剤の製造において有用な主要クラスとしても本発明に従った薬剤は働く。よって本発明により上述したドメインの結合における選択性または特異性の変化を反映する新たなモチーフが提供される。
したがって、本発明は発明の薬剤と、アミノ酸、糖、炭水化物または無機構造体を含む可能性がある第二の分子または第二の化学基との複合体にも関する。特に、第二の分子は特定のタンパク質のドメインの領域へ投与することを意図する任意の物質であることが可能である。これはまた、前記タンパク質を含む細胞を含んでもよい。有望な標的細胞には、限定されるわけではないが神経細胞、免疫細胞（例えばＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞等）、破骨細胞、血小板、上皮細胞等が含まれ、前記細胞は特に上述したドメインまたは関連のタンパク質を発現する。このようにして、上述したドメインを有するタンパク質の活性を特異的に調節することが可能である。
本発明に従った分子またはそれを含む構造体は、例えばＳｒｃまたはＳｒｃ関連タンパク質の活性を調節する方法に使用可能であり、該方法には、本発明に従った有効量の薬剤を例えば担体とともに含む組成物を投与する工程も含まれる。しかし、活性の調節には、Ｓｒｃのみならず上述したドメイン（Ｓｒｃ相同性３ドメイン、ＷＷドメイン、Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１ドメイン、ＧＹＦドメイン、ＵＥＶドメインおよび／またはプロフィリン）を有する分子すべても関与している。本発明の好ましい実施態様では、考えられている方法により、上述のドメインを含むタンパク質の活性が阻害される。他の好ましい実施態様では、該方法は上述のドメインを有するタンパク質を活性化する場合に有効である。
さらに、本発明に従った薬剤は、上述のドメインを有するタンパク質が発現する細胞、組織および器官を画像化する方法などの他の分野に使用可能であり、前記方法は特に、検出可能マーカーまたは造影剤と共役した本発明の薬剤を含む有効量の本発明の組成物を投与する工程を含む。
したがって、本発明は上述のドメインを含む第１分子とこれらのドメインに結合する第２分子間の結合に影響を与える化合物を同定する試験をも提供している。その第二分子は本発明に従った薬剤であることが好ましく、試験は１種以上の候補化合物のインキュベーションを含み、その中でこのような化合物の選択が必要であり、第一および第二分子は、第１分子と第２分子との結合に影響を与える１種以上の化合物の結合および検出を促進する条件下にある。
本発明に従った薬剤は、このような試験を実行するためのキットの形で提供されてもよく、前記キットには上述のドメインを含む第１分子、およびこれらのドメインに結合する第２分子が入っており、第２分子は本発明に従った薬剤である。
本発明に従った分子は、本発明に従った薬剤の標的分子の天然機能または生物学的機能を（特定のペプチドまたは標的分子の性質に依存して）促進または阻害することを含む広範な生物学的活性を示している。
本発明の別の目的は、本発明の新たな物質を使用する試験を提供することであり、該試験により、候補化合物が上述のドメインとこれらのドメインのリガンド間の結合に影響を与え得るか否かを判定することが可能となる。このような結合への修飾能を有する化合物は、上述のドメインを含む構造体の薬理学的活性を調節する薬剤として有用であろう。本発明は、このような試験で使用するためのこれらのドメインに適したリガンドを提供する。驚くべきことに、本発明に従った薬剤はこのような試験での使用にかなり適していることが分かった。したがって本発明は、上述のドメインを含む分子と、本発明に従った薬剤であるドメインのリガンドとの結合に影響を与える化合物を同定する方法も提供する。全体として、結合への影響は結合親和性を増減させ得る。好ましい態様では、影響は、例えば結合の減少または消失の形態をとる阻害である。
したがって本発明はまた、上述のドメインを含む分子と、本発明に従った少なくとも１種の薬剤を含む第２分子との間の結合の阻害を同定する方法に関する。前記方法は少なくとも１種以上の化合物のインキュベーションをも含み、その中で阻害剤／活性化剤が選択されるものであり、第１分子および本発明に従った分子は結合を促進する条件下にある。該方法は第１分子が本発明に従った分子に結合することを阻害する前記１種以上の化合物の検出をも含む。結果として、本発明に従った試薬は上述のドメインの１つを含む少なくとも１つの分子、例えばペプチドまたは他の構造体に組み込まれている本発明に従った少なくとも１種の薬剤、および第１の分子と本発明に従ったリガンドとの間の結合に影響を与える可能性を有すると推定される１種の候補化合物から構成されている。また、該試験物質は第１の分子と本発明に一致するリガンドとの結合の検出のための薬剤を含んでもよい。例えば、このような薬剤は第１分子、本発明に従ったリガンドまたは候補化合物と連結した検出可能な標識であり得る。好ましい実施態様では、本発明の意味合いにおける試薬を使用する方法は以下の工程を含む：
‐候補化合物の存在下で結合することに適した条件下で、本発明に従った薬剤とドメインを接触させ、ドメインとリガンド間の結合の程度を測定する工程；
‐第１の工程で測定した結合の程度と、既知の結合の程度、または候補化合物の非存在下でドメインと本発明に従った薬剤間に存在すると判定された結合の程度とを比較し、第１の工程で測定した結合の程度と、既知の結合の程度、または候補化合物の非存在下でドメインと本発明に従った薬剤間に存在すると判定された結合の程度との差異により、該候補化合物はドメインからなる分子と本発明に従った薬剤との結合に影響を与える化合物であることが示される工程。
前記方法は、検出された候補分子を薬学的に許容される形態に製剤化することを含む付加的工程を含んでよい。
上述の方法および試験全体において、本発明に従った薬剤は、例えば規定の標的を検出するように意図されたライブラリーの物質成分として使用可能である。
同様に好ましい態様では、本発明に従った薬剤は最適化された標的、特にその構造が最適化された標的を生成するために使用し、その標的は本発明に従った薬剤、および好都合にも試験対象の分子との相互作用を改善する折り畳み構造を有する。
当然のことながら、本発明に従った薬剤は他の模倣薬またはペプチド模倣薬と組み合わせることも可能であり；アミノ酸または有機分子との組み合わせも有利である。
本出願による教示は以下の特徴が顕著である：
‐従来技術からの脱却
‐問題の新たな分野
‐本発明により解決される問題の解決策に関し、長期にわたり未充足で、緊急の必要性が存在すること
‐当技術分野における従来の無益な努力
‐特定の解決策の簡便さによって、特により複雑な教示が置き換えられているため、発明力が示されること
‐科学技術の開発が異なる方向に向かっていること
‐開発の合理化の成就
‐未解決の問題の解決策に関する当技術分野における誤った考え（偏見）
‐技術的進歩、例えば改良、パフォーマンス向上、低費用、時間削減、材料、労働工程、コストまたは入手困難な原材料、信頼性の向上、欠陥の排除、優れた品質、維持管理の不要、高い効率、高い効率、技術範囲の拡大、追加手段の提供、第二アプローチの創造、新たな分野の創造、問題に対する最初の解決策、予備手段、代替手段、合理化の範囲、自動化および小型化または入手可能薬剤の範囲拡大
‐予測できなかった結果を選択したことによる様々な可能性からの幸運な選択、したがって特許性のある幸運な選択となる
‐技術文献の誤り、または本発明の内容についての非常に矛盾した表現
‐萌芽的な技術分野
‐組み合わせ発明、すなわちいくつかの公知の要素を組み合わせ、意外な効果の達成
‐ライセンスの問題
‐当技術分野における賞賛
‐経済的な成功
より具体的には、本発明の有利な実施態様は、少なくとも１つまたは複数の上述の利点を有する。
これに限定するものではないが、ジプロリン模倣薬８５の合成に関して、本発明をより詳細に説明する。
動機は、高親和性でＥＶＨ１ドメインと結合可能であり、これにより結合パートナーとしてリガンドペプチドの未変性のプロリンが豊富な配列と置き換わり得る、分子の調査である。リガンドペプチドとＶＡＳＰ／ＥＶＨ１ドメインとの相互作用に関する分子モデリング研究に基づいて、化合物８５を設計する。これは有望な構成成分（ジペプチド模倣薬）であり、試験ペプチドに組み込まれ、そこでＦＰＰＰＰコアモチーフの２つの隣接したプロリン位置と置き換わる可能性がある。構造的設計のガイドラインは、（１）幾何級数的に固定されたヘリックス構造（３環部分）、（２）（ＰＰＩＩヘリックス構造中の）天然プロリン‐プロリンジペプチドと比較した、結合角度および長さの最大可能な適合性、（３）カルボニル基の形態をとる中心水素結合受容体機能、および（４）系統的に単純なペプチドへの望ましい組み込みを行うＦｍｏｃ保護Ｎ末端および遊離Ｃ末端を有するアミノ酸様全体構造であった。これらの要件は、ＰＰＩＩヘリックス中の２つの連続したプロリンの立体構造的に制限された類似体である下記に示す分子８５で満たされる。Ｚ立体配置のオレフィン架橋を組み込んだ結果、プロリン環は推定された生物学的に活性な構造中で安定化しており、中央の７員環はトランスアミド結合の完全な固定化を確実にする。
この化合物を相当量提供するために、実用的かつ立体選択的な合成経路を開発しなければならなかった。この目的のため、標的分子をタイプ１００および１０１の２つのビニルプロリンに収束的に分断する戦略を選択した（中央の７員環の逆合成分解、スキーム２０参照）。最初にペプチドカップリングにより複数のビニルプロリンを連結し、その後オレフィンメタセシスにより３環部分を閉環する。７員環を形成する閉環メタセシスは文献で周知である。別々に置換された２つのビニルプロリン誘導体１００および１０１の各々は立体選択的に合成しなければならない。いずれにせよ、Ｌ‐ピログルタミン酸は出発物質として使用可能である。
Ｎ‐Ｂｏｃ保護基を有するトランス‐３‐ビニルプロリン１６６をタイプ１０１成分として使用し、Ｌ‐ピログルタミン酸１３３を構成要素１３６へ変換して、その合成を開始した（スキーム３１）。
この目的のため、酸１３３を最初にエチルエステルに変換し、それを水素化ホウ素リチウムで還元すると、定量的収率で高極性アルコール１３４が得られた。後者は、その後の新たな置換基の導入を行う間、分子の「下側」を広く保護する目的の、安定的で立体的に要求の厳しいｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルシリル基（ＴＰＳ）（８７%）により保護され、それにより所望のトランス立体配置の形成が助けられた。その後、１３５中の窒素原子にはＢｏｃ保護基が付加され（８９%）、この場合改変法にしたがって、塩基をさらに化学量論的に添加するのでなく、わずかに触媒量のＤＭＡＰを必要とした。このようにマルチグラムスケールで生成した安定的で良好に結晶化できる中間体１３６を、Herdeisらの合成概念を援用し、トランス‐３‐ビニルプロリン１６６をさらに合成するための出発物質塩基として使用した。文献のプロトコールと同様に１３６は、立体障害の塩基ＬｉＨＭＤＳを用いて−７８℃でカルボニル基に対するα位置で脱プロトン化し、塩化フェニルセレニルと反応させることでセレニルエーテルに変換した。また、粗生成物の精密試験中に該エーテルを過酸化水素（３０%）またはオゾンにより−７８℃で酸化し、室温まで過熱せずにエノン１８を形成するような酸化セレンを形成した（スキーム４１）。
しかし、文献の条件を正確に順守しているにもかかわらず、結果を再現することには問題があった：一方では収率が一定ではなく、不十分に低いことがあり、他方ではエノン１８が純粋なグレードでは得られなかった。（同様に、文献で得られた収率は同じ基質でかなり、すなわち５４〜８６%に変化し、これは実用上の問題を暗示するものと解釈し得る。）
詳細に問題を調査するために広範な試験実験を行った。この目的のため、セレン化した中間体１６０を最初に単離し、クロマトグラフィーで精製し、遊離体１３６（排除後には除去が難しい）および塩化フェニルセレニル（同様に酸化剤を消費する）の残基を除去した（スキーム４２）。得られた中間体１６０の収率は文献の結果と同程度であった（６９〜８２%）
エノン１８を形成するための円滑かつ定量的な除去には、様々な考えられるパラメーター（溶媒、温度、塩基、酸化剤）が変化したため、問題がより多くあることが分かった。異なる溶媒（酢酸エチル、無水または含水ジクロロメタン）、あるいは種々の温度（７８℃、１０℃、０℃、別々に室温または７０℃まで急速に加熱した温度）を使用により、結果として目立った変化をもたらすことはできなかった。とりわけ、酸化剤（濃度１０〜３０%のＨ２Ｏ２、オゾン、ＭＣＰＢＡ、過ヨウ素酸ナトリウム、それぞれ当量を変更する）および塩基（ピリジン、酢酸ナトリウム、当量を変更するか、あるいは塩基は添加しない）の影響を試験した。結果は以下に要約できる：
‐オゾンまたはＨ２Ｏ２（２５〜３０%）は等しく酸化剤として適していることが分かり、またＭＣＰＢＡも使用できたが、過ヨウ素酸ナトリウムはあまり満足のいくものではなかった。しかし、薄層クロマトグラムにおける反応が明らかに円滑であったにもかかわらず、単離収率が非常に低いものがいくつかあり、残留物質に生じた事象を最終的に解明することは不可能であった（過剰な酸化であるか？、分解であるか？）。
‐明らかとなったように、収率をわずかに高める塩基の添加（文献に通常記載されているように）は有利であり得るが、これは様々な量の異性化生成物の形成をも助長し、その構造は推定上、ピロール誘導体１６１に代表され得る（スキーム４３、第７、２、３、１８項の分析データも参照）。同様に、反応混合物で塩基性精密試験を行ったところ、１６１の形成が増加する結果となった。
次いで、初めにタイプＲ２ＣｕＬｉのGilman銅酸化物を使用し、１，４‐付加により、得られたエノン１８へビニル基を導入した（スキーム４４）。この目的に必要なビニルリチウムを、０℃の金属交換反応によりテトラビニルスズおよびｎ‐ブチルリチウムから得た。単離せずに、懸濁液の黒色変色でわかる−２０℃でのヨウ化銅（Ｉ）の添加により、その後−７８℃でジエチルエーテルに１８の溶液を添加してそれをエノンに付加することにより、銅酸化ジビニルへの変換がもたらされた。付加生成物１６２を、文献データの範疇である収率６０%で得た。さらに、文献と一致して、ビニル付加生成物の唯一のジアステレオマーが確認された。副産物がある程度形成されていたが、これは不十分な金属交換反応および結果的なｎ‐ブチル残基の１８への付加の結果として形成されたものである。
毒性があり、しかも高価なテトラビニルチンの使用を避けるため、グリニャール化合物とＣｕＢｒＤＭＳとを反応させることで容易に得られ、同等の収率（６０%）ではあるが純度はやや劣る１，４‐付加生成物１６２が得られるタイプＲ２ＣｕＭｇＢｒＤＭＳのNormant銅酸化物をその後使用した。
ラクタムカルボニル基を除去するには、２段階還元手順が適当と思われた（スキーム４６）。初めに、Ｎ‐アシルラクタム１６２をスーパーヒドリドで還元し、α‐ヒドロキシカルバメート１６４を形成し、次いでこれをトリエチルシラン（または代替的にトリフェニルシラン）および三フッ化ホウ素で脱酸素化し、二次的な、Ｂｏｃで保護されたままのアミン１６３を形成した（２段階で７０%）。
その後、ＴＨＦ中のＴＢＡＦ（９８%）でシリルエーテルを切断し、得られたアルコール１６５を酸化し、カルボン酸を形成した（スキーム４７）。ここではビニル基はSharplessの酸化条件（ＮａＩＯ４／ＲｕＣｌ３）とは適合しないことから、Herdeisらの条件も適用できなかった。Jones試薬を使用した場合、カルボン酸を形成する酸化は７０%の収率で可能となり、よってＮ‐Ｂｏｃ‐トランス‐３‐ビニルプロリン１６６の合成が完了した。Ｘ線での結晶学的分析により正確な構造および相対的な立体配置（トランス）が確認された。
図１はＮ‐Ｂｏｃ保護トランス‐３‐ビニルプロリン１６６の結晶構造を示している。
タイプ１００のシス‐５‐ビニルプロリンエステルである第二構成要素を合成するため、Mulzer およびSchuelzchenの経路を選択したが、但し初めは市販のＬ‐ピログルタミン酸エチルエステルを使用した。後者はＢｏｃ保護基を有し、保護された基質１６７（スキーム４８）をＤＩＢＡＬ‐Ｈにより低温で選択的に還元し、α‐ヒドロキシ‐カルバメートを形成した。Ｎ‐アシルラクタムのカルボニル基が優先的に反応することから、低温で還元剤をゆっくり添加すればエステルは還元されない。酒石酸カリウム‐ナトリウム溶液での中性精密試験を行った後、得られた粗生成物を、触媒量のＰＰＴＳを含むメタノールを使用してα‐メトキシカルバメート１６８（エピマーの混合体、２段階で９０%）に変換した。
第二の置換基を導入するため、１６８を三フッ化ホウ素およびアリルトリメチルシランと反応させ、これによりジアステレオマーの分解不能混合物（シス／トランス＝４：１、全体で７１%）の形態でアリル置換生成物１６９を得た。次いで１６９の二重結合をオゾン分解により切断し、得られたオゾニドを水素化ホウ素ナトリウムで還元し、アルコール１７０を形成した。ここではエチルエステルの還元は見られないか、あるいは微量（７２%）でしかなかった。オレフィン１７２に変換するため、オルト‐ニトロフェニルセレノシアネートおよびトリ‐ｎ‐ブチルホスフィンを使用し、Griecoらにしたがってアルコール１７０を反応させ、それにより最初にセレニルエーテル１７１を得た（８４%）。０℃でＨ２Ｏ２により酸化し、次いで除去をし、ジアステレオマーの混合体という形態でビニルプロリン１７２が得られた（９５%）。
Ｂｏｃ保護基の分離（スキーム４９）はトリフルオロ酢酸（定量）またはＴＭＳＯＴｆ（６９%）による処理で実施した。加水分解の後、これによりクロマトグラフィー処理可能な遊離アミン１７４が純粋形態で得られたが、依然としてジアステレオマーの分解不能混合体（シス生成物の量：８０%）のままであった。
このように得られた物質を使用し、３環ジプロリン模倣薬のさらなる合成法を開発した（ペプチドカップリングおよびその後の閉環メタセシス）。２つのビニル基の結果として立体障害にもかかわらず、標準的条件下、高収率でペプチド結合は生成可能であった（スキーム５２）。この目的のため、塩基としてアミン１７３およびトリエチルアミンを添加する前にカルボン酸１６６をＥＤＡＣ／ＨＯＢｔで事前に活性化した。ジアステレオマーおよび回転異性体の混合体があるにもかかわらず、カップリングした生成物の同一性が１Ｈ‐ＮＭＲスペクトルで確認された。
閉環メタセシスにより３環１８１を生成するため、初めにジペプチド１８０にGrubbsII触媒を添加したが（スキーム５３）（５モル%）変換が不十分であったため、Blechertらが報告した活性的でしかも空気中で安定的なメタセシス触媒８２を使用した（Grubbs II触媒からそれを簡単に合成するため；スキーム５４参照）。後者を使用し、反応は最終的に薄層クロマトグラムによって完璧なものへと近づいていった（単離収率：１０mgスケールで６１%）。１Ｈ‐ＮＭＲスペクトルでのオレフィンシグナルの変化に基づいて閉環メタセシスの成功がはっきりと確認された。
３環生成物１８１の調製を実施し成功したため、純粋なジアステレオマー成分でペプチド模倣薬８５を合成することは利便性があると分かった。Mulzer/Schuelzchenに従ったアリル置換生成物のシス／トランス異性体の分離は分取ＨＰＬＣを利用してｔｅｒｔ‐ブチルエステル４６により可能になるが、実用的な理由から、この場合この選択肢は除外しなければならなかった。しかし、Ｂｏｃ保護基の除去後のカラムクロマトグラフィーによる４６の分離も報告されている。
したがってｔｅｒｔ‐ブチルエステル構成要素１８５の合成を行った。この目的のため、リン酸（６０%）触媒下で再エステル化を行い、ｔｅｒｔ‐酢酸ブチルでピログルタミン酸１３３をｔｅｒｔ‐ブチルエステルに変換した（５８%）。このエステルはＢｏｃ保護基を有していた（８４%、スキーム５５）。従来どおり、これに続きＤＩＢＡＬ‐Ｈによる４４の還元を行い、α‐ヒドロキシカルバメートを形成し、その後対応するα‐エトキシカルバメート４５に変換した（２工程で８９%）。
予想通り、４５をアリルトリメチルシラン／三フッ化ホウ素で置換したところ、カラムクロマトグラフィーで分解できないアリル置換生成物４６のジアステレオマー混合物（７７%、シス／トランス７５：２５）が得られた。マルチグラムスケールでの分解は複雑であり、脱保護‐ジアステレオマーの分解‐保護の手順では遠回りになってしまうことから、この時点でのＮ‐保護基の除去は試みなかった。代わりに、ビニルプロリンエステル１８５の段階でのジアステレオマーの分解を選んだ。なぜならＮ‐保護基はいずれにせよペプチドカップリングのために除去しなければならなかったためである。
４６のオゾン分解およびアルコール１８４を形成するＮａＢＨ４による還元の後、−７８℃でオゾンにより酸化した対応するセレニルエーテルを形成する反応を行い、その後７０℃での酸化セレン排除を行い、５‐ビニルプロリンｔｅｒｔ‐ブチルエステル１８５が得られた（９２%）。濃黄色になったセレニウム含有副産物は除去が困難であることが分かった。溶出剤を様々に組み合わせて複数のクロマトグラフィーを行ったにもかかわらず、完全な除去はできず、無色の生成物は得られなかった。しかし、１８５の１Ｈ‐ＮＭＲスペクトルではニトロフェニルセレニウム類による目立った汚染は見られなかった（すなわち純度＞９５%）。実際、残留している濃黄色の不純物は次の工程で除去できた。
同様に酸不安定なｔｅｒｔ‐ブチルエステルを保持しながらＢｏｃ保護基を除去するため、両保護基を区別することが必要であった。この目的のため、例えばＴＭＳＯＴｆ、ＴＢＳＯＴｆまたはＴＭＳＣｌＯ４が文献に記述されている。（逆に言えば、Ｂｏｃ基を保持しながらエステルを鹸化することも可能であり、この目的のため、例えばＫＯＳｉＭｅ３が使用可能である）
１８５溶液に等モル量のＴＭＳＯＴｆ（１．０１当量）を徐々に添加すると、エステル機能は保持されながら望ましい窒素脱保護が起こる（スキーム５６）。その後、２つのジアステレオマーは、注意深いクロマトグラフィーによりそれらを分離できるほど十分に異なるものとなり、こうして薄黄色の油状のシス‐５‐ビニルプロリンエステル１８６ａが得られた（５１%）。ＮＯＥ実験により２つの置換基の相対的立体化学を確認した。生成物を即時にさらに反応させるか、あるいはベンゼンマトリックス中で凍結保存するように、化合物を段階的にエピマー化した。
立体構造的に固定したジプロリンペプチド模倣薬８５を合成するため、ＥＤＡＣ／ＨＯＢｔ条件下で純粋なジアステレオマーのビニルプロリン１６６および１８６ａのペプチドカップリングを試みたが、低収率の目的生成物１８７（３８%）および相当量の副産物（２４%）しか得られず、それらのＮＭＲスペクトルはエピマー化化合物に分類し得るものであった。異なる文脈で記述されているように、塩基としてトリメチルアミンを使用すると、特定の立体中心がエピマー化する場合があり、そのためこの場合、それはＤＩＰＥＡで置換された。また、カルボン酸を事前に活性化しておく必要のないように、より反応性が高いＰｙＢＯＰをカップリング剤として使用した。この方法ではペプチド１８７の収率は８１%に達し、エピマー化生成物の形成は（除去は簡単ではあるが）抑制された（スキーム５７）。
３環生成物１８８を形成する閉環メタセシスで２つの異なる触媒：Blechertらに従った空気中で安定的な触媒８２およびGrubbs II触媒８１を試験した。両触媒では同様の結果が得られた。一晩反応させる（４０℃）場合、遊離体１８７の完全な変換には個々の触媒は約５モル%必要であった。反応の精密試験の後、できるだけ触媒の残渣すべてを完全に除去するように注意し、９６%もの高収率が達成された。
最終的に、固相ペプチド合成に有用な合成３環生成物１８８を形成するため、両保護基は除去し、アミン官能基にはＦｍｏｃ保護基を付加しなければならなかった。これが穏和な塩基条件下で除去可能な実際的に有意な唯一のＮ保護基であり、この目的のため、ピペリジン、モルフォリン等の二次アミンを通常使用する。この場合、塩の生成を追加しない固相合成の際、非保護アミノ官能基を生成することが可能である。塩基の不安定性が高まると、有機合成の際Ｆｍｏｃ基は使用できず、したがって後工程で保護基を変える必要がある。
Ｂｏｃ保護基およびｔｅｒｔ‐ブチルエステルの同時酸除去では、１８８に過剰なトリフルオロ酢酸（９９%）を含むジクロロメタンを添加し、室温で攪拌した（スキーム５９）。濃縮により黄色がかった個体（Ｄ２Ｏでの対照ＮＭＲスペクトル）の形態で遊離アミノ酸１９２が得られ、これをアセトニトリル／水混合物に溶解し、Schotten‐Baumann条件下でＦｍｏｃ保護最終生成物８５に変換した。生成物は著しく極性であることが分かったが、ｐＨ４で水相からクロロホルムで抽出し、次いでシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製することが可能であった。８５は不定形でやや白色の固体の形態で得られ（８５%）、そのＮＭＲスペクトルは予測どおりであった（５００MHz １Ｈ‐ＮＭＲスペクトル（ＭｅＯＨ‐ｄ４）は図２を参照、６０：４０回転異性体の混合物）。
図２はジプロリン構成要素８５の１Ｈ‐ＮＭＲスペクトルを示す（５００MHz、ＭｅＯＨ‐ｄ４、ＲＴ）。
生物学的結果
総量約３００mgの立体構造的に固定したジプロリン８５を合成し、試験リガンドペプチドへの組み込みおよび生物学的結合の研究を行うためBerlin-BuchのＦＭＰに送った。強く結合するＥＶＨ１ドメインの未変性リガンドペプチドとして公知のリステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）由来ＡｃｔＡペプチドの配列３３２ＳＦＥＦＰＰＰＰＴＥＤＥＬ３４４に基づいて２種の試験ペプチドをこの作業の終了まで合成し、ＶＡＳＰ／ＥＶＨ１受容体、すなわちｐｐが合成ジプロリン構成要素８５を表す３３２ＳＦＥＦＰｐｐＰＴＥＤＥＬ３３４（Ｉ）および３３２ＳＦＥＷＰｐｐＰＴＥＤＥＬ３４４（ＩＩ）への結合親和性について調査した。初期の置換実験では、フェニルアラニン（Ｐ）をトリプトファン（Ｗ）で置換すると、ＶＡＳＰ／ＥＶＨ１ドメインとの結合親和性は、ＷＰＰＰＰコアを含むリガンドペプチドではＫＤ＝１３．７μMであり、ＦＰＰＰＰコアモチーフを含むリガンドのＫＤ＝５５．１μMと比較して有意に高いということが示されている。
図３は、リガンドペプチドＩ（左）およびＩＩ（右）の濃度変化の影響下でのＶＡＳＰ／ＥＶＨ１ドメイン（６００MHz）の重ね合わせた連続の二次元１５Ｎ‐１Ｈ‐ＨＳＱＣ‐ＮＭＲスペクトル、ならびに数個の芳香族側鎖のプロトンと窒素との間にある交差ピークの詳細な説明を示しており、ここではリガンドペプチドＩの濃度の上昇に伴うＷ２３ＮＥ１‐ＨＥ１の変化（矢印の方向）が特に実例となっている。
多次元ＮＭＲ分光法により、完全に１５Ｎ標識したＶＡＳＰタンパク質のＥＶＨ１ドメインとリガンドペプチドＩおよびＩＩとの間の相互作用が明らかになった。この目的のため、リガンドペプチド量を変化させて溶液中のＥＶＨ１ドメインを滴定し、各時点で１５Ｎ‐１Ｈ‐ＨＳＱＣ‐ＮＭＲスペクトルを記録して調査した。陽性の結合相互作用の事象において、リガンド濃度を徐々に（１０、２０、５０、１００、２００、５００および１０００μM）高めると、数個のドメインシグナルが明確に認識できるようになり、これは後の方の時点で、結合定数値を算出することに使用可能である。リガンドペプチドＩおよびＩＩを含む調査結果は図３の個々のＨＳＱＣスペクトルの重ね合わせた詳細から推論できる。それは特に、疎水性結合相互作用の開発に関与するドメインの芳香族アミノ酸残基であり（「芳香族の溝」、第２．４／２．５項参照）、そのためシグナルの変化がはっきりと認識し得る。特にこれは、ＦＰＰＰＰリガンドモチーフのカルボニル基への水素結合を形成することからトリプトファン２３（Ｗ２３ＮＥ１‐ＨＥ１）のＮＨシグナルに応用する。
しかし、図３にある２つのＮＭＲスペクトルの比較は、上述した状態がリガンドＩ（左）でのみ見られることを示している。連続的な平衡、すなわち［ＥＶＨ１］−リガンド（結合）⇔［ＥＶＨ１］＋リガンド（非結合）が溶液に存在し、そのためリガンドの相互作用の割合に依存して（一次元規模の‐ＯＨおよび‐ＮＨのシグナルに対する類似性において）異なるＮＭＲスペクトルが得られる。リガンドＩでは、その２つの状態から時間平均シグナルが観察され、一方、リガンドＩＩでは、両状態からＮＭＲタイムスケールで別々のシグナルのセットが発生する。このことはＷ２３ＮＥ１‐ＨＥＩシグナルに関する２つのＮＭＲスペクトルを比較することで特に明確に分かり、リガンドＩ（左）では、滴定時に交差ピークは徐々に変化し、リガンドＩＩ（右）では、２つの別のシグナルはわずかに変化しただけで、「中間状態」も観察されない。
交差ピークの化学シフトの変化に、ドメインとリガンドペプチド間の結合強度を関連付ける場合、シフトΔδ対リガンドペプチド濃度の変化をプロットすることで結合定数値を算出することが可能となる。これをＩについて行ったところ（図４）、未変性ペプチド配列ＡｃｔＡ（ＫＤ＝４５μM）と比較して、やや高めの結合親和性（ＫＤ＝２０〜３５μM）が得られた。ＩＩでは、これを行うことは上述した状況のために不可能であった。
図４は、結合定数ＫＤを決定する化学シフトΔδ対リガンドペプチドＩ濃度の変化のプロットを示す。
ペプチドとタンパク質間の相互作用をＮＭＲにより解明するための補足として、現在はBiacore法も標準的に利用されている。この方法では、ドメインタンパク質をセンサーチップの表面に固定化する。この時、リガンドペプチド溶液はその表面を流れている。屈折率を変化させる表面プラズモン共鳴を測定することで、会合定数および解離定数も決定できるようにリアルタイムに結合反応速度をモニターすることが可能となる。特に、ＮＭＲ分光法では結合定数を決定できない場合、リガンドペプチドＩＩと同様に、これは選択すべき方法である。初期測定‐未検証‐以下の結合定数が得られた：リガンドペプチドＩではＫＤ＝２９．３〜３３．３μM、リガンドペプチドＩＩではＫＤ＝３．７〜１２．５μM（対応する未変性ペプチド：それぞれＫＤ＝５５．１μM、ＫＤ＝１３．７μM）。
具体的には、ＥＶＨ１ドメインについて未だ報告されていない実験に関係しているという点でこれらの結果は注目に値するものであり、以下に要約でき、今後の研究の基礎を作ることができる多数の重要な知見を導いている。
１）合成３環８５を固相ペプチド合成の標準的カップリング条件（ＤＩＣ／ＨＯＢｔ）下での異なる試験ペプチドへ組み入れることは問題なく進行した。
２）Ｆ／ＷＶＰＰＰＰコアモチーフの２つの中心プロリン位置が置換可能であると述べる事前予測が裏付けられた。
３）ＥＶＨ１受容体へＰＰＩＩヘリックスを結合させる場合の反応性のある構造の予測は、リガンドペプチドＩの結合親和性が良好であること、および／または３環生成物８５の生物学的に必要な構造と実際の構造が良好に一致していたことにより裏付けられた。
４）リガンドを局所的に事前に立体構造的な固定を行った結果としての、予測した望ましいエントロピー効果は、未変性ペプチド配列と比較して結合親和性が高いことが確認されたことによって裏付けられたようである。他方、幾何級数的固定はリガンドおよびドメインタンパク質のアプローチ、ひいては結合形成を妨げる。
図５はＶＡＳＰ／ＥＶＨ１ドメインと３３２ＳＦＥＦＰｐｐＰＴＥＤＥＬ３４４ペプチドリガンドを表したものである（分子モデル表現）。ＥＶＨ１ドメインは、リガンドペプチドを受けるＶＡＳＰタンパク質の表面にある「溝」として明瞭に認識できる。
生物学的結果および結論
合成化合物８５を用いて、部分的に、または完全に置換されたプロリン配列を有するリガンドペプチドを合成し、ＥＶＨ１ドメインとの相互作用について調査した（ｐｐ＝構成要素８５）。模倣薬８５の組み込みはリガンドペプチドのドメインへの結合親和性を高めることが分かった。全プロリンを２つの連結した構成要素８５で置換すると、未変性ペプチドに匹敵する親和性のリガンドペプチドが得られた。このことは下記の表１に要約しており、リガンドペプチドと、基礎となる未変性ペプチドリガンドの結合親和性を一覧にしている。ＮＭＲ滴定、動態学的Ｂｉａｃｏｒｅ法または蛍光滴定により結合親和性を測定した。結果を表１に要約する。
表１：測定した結合親和性の比較（溶液中のリガンドペプチドとＶＡＳＰ／ＥＶＨ１ドメインとの相互作用）
全プロリンを２つの連結した構成要素８５で置換すると、未変性ペプチドに匹敵する親和性を有するリガンドペプチドが得られた。したがって、ＰＲＭ結合ドメインにより結合しているプロリンが豊富な配列を持たないリガンドペプチドの開発ははじめて成功した。標的構造物８５の合成および生物学的使用に関する一般的な概念を首尾よく実行することで、―有望な根拠として―小さい合成分子により、関連したタンパク質ドメインに対処する多数のさらなる選択肢がもたらされ、これらのドメインはポリプロリン含有リガンドに結合する。さまざまな既存の分子構造に加えて、この概念を、他のドメイン（Ｍｅｎａ‐ＥＶＨ１、ＷＷ、ＳＨ３等）のリガンドの合成、ＦＰＰＰＰモチーフ中の２つの中心単位以外のプロリン単位を置換すること、またはＰＰＰもしくは同等のＰＰＰＰモチーフを有機合成で生成された好適な構造体と置換することにまで拡大することも考えられる。
実験セクション
無水条件下で、空気または水感受性成分との全反応を行った。この目的のため、使用のガラス器具をオイルポンプ真空下（最終圧力０．１〜０．５mbar）でブンゼン・バーナー火炎により焼きなまし、冷却後に真空‐アルゴン二栓ガラス器を使用してアルゴンを充填した。試薬および溶媒を移すために使用するシリンジおよびカニューレを８５℃でオーブン乾燥し、使用に先だってアルゴンで洗浄を繰り返した。アルゴンを逆流させながら反応フラスコ中に固体試薬を充填した。４０℃の水浴、１０〜１０１３mbarの圧力にてロータリーエバポレーター内で溶媒を除去した。通常、室温で、オイルポンプ真空下（０．１〜０．５mbar）で物質をさらに乾燥した。使用した化学物質はMerck、Sigma-Aldrich、Fluka、Acros、LancasterおよびStremなどの公知の企業で市販されているものであり、さらに精製することなく通常通り使用した。有機金属試薬の濃度は、Paquetteらにしたがって、指標としてのフェナントロリンによる対メタノールの滴定により測定した。使用に先だって抽出および精製手法に使用する溶媒をすべて蒸留した。適当な方法にしたがって無水溶媒を得た。
シリカゲル（Kieselgel 60、０．０４０〜０．０６３mm、Merck）に通すフラッシュカラムクロマトグラフィーを用いて、やや超過気圧（０．３〜０．５bar）下で物質を精製した。反応をモニターするため、Merck製のシリカゲルプレート（Kieselgel 60F254）を使用し、分析薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を行った。ＵＶ光（λ＝２５４nm）下で、ＫＭｎＯ４溶液（３gのＫＭｎＯ４、２０gのＫ２ＣＯ３、５mlの５%ＮａＯＨ、３００mlのＨ２Ｏ）で染色し、次いでヘアドライヤーで過熱してクロマトグラムを解析した。Knauerシステム（HPLC Pump K-1001、DAD K-2700 Wellchrom、Lamp K-2701 Wellchrom、Solvent Organizer K-1500）、Merck-Hitachiシステム（L-4000 A UV検出器、D 6200A Intelligent Pump、示差屈折計Ri71）、Merck-Hitachiシステム（L-7250A Intelligent Pump、L-7455ＵＶ検出器）またはAgilent 1100 HPLC-MSシステムを使用し、分析高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を行った。それぞれの測定でさらなるデータが存在し得る。
室温で、Bruker製の装置AC 250、DPX 300およびDRX 500を使用し、１Ｈ‐および１３Ｃ‐ＮＭＲスペクトルを記録した。化学シフトは、残留プロトン内容物、または内部標準としての溶媒の共鳴に対して求める。シグナルは好適な２Ｄ実験（ＤＥＰＴ、ＡＰＴ、Ｈ‐Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ、ＮＯＥ）を記録し、類似化合物と比較して分類する。関連した分析機能を有するMestre Cプログラムを使用し、ＮＭＲスペクトルを解析した。シグナル分類に関する分子のナンバリングはＩＵＰＡＣと概ね一致しているが、明瞭性という点では逸脱している場合がある。シグナルの種類は以下のとおりである：ｓ＝一重、ｄ＝二重、ｔ＝三重、ｑ＝四重、ｑｕｉｎｔ＝五重、ｂｒ＝広範囲シグナル、ｍ＝多重。室温でカルバメート保護基の回転が束縛されるため、多くの化合物が回転異性体の混合体であると見られ、そのように記述される（１Ｈ‐および１３Ｃ‐ＮＭＲスペクトルのシグナルの幅広いピークまたは二重のセット）。
試料を溶液の形態で適用するＺｎＳｅ結晶上で、室温で、ＡＴＲ（減衰全反射）として、Perkin-Elmer製のFT-IR Paragon 1000にＩＲスペクトルを記録した。波数（ν~［cm-1］）で吸収帯を表し、以下の相対的強度にしたがって特徴化する：ｖｓ（非常に強い）、ｓ（強い）、ｍ（中間）、ｗ（弱い）、ｂｒ（広範囲シグナル）。
Finnigan製のMAT Incos 50 Galaxy System（EI）およびMAT 900（ESI, HRMS）装置で質量を測定した。インレット法（直接インレットプローブ（ＤＩＰ）またはＧＣ‐ＭＳ）、イオン化のタイプ（ＥＩまたはＥＳＩ）およびｅＶ中のイオン化エネルギーは括弧内に表す。代表的なシグナルはｍ／ｚの比に関連しており、基準ピーク（１００%）に対する強度として表す。
旋光度値をPerkin-Elmer製のPolarimeter 343 plusで測定した。［α］の濃度は［g/１００ml］単位で表し、測定の温度、波長（通常は５８９nm、場合により５４６、４０５、３６５および３３４nm）および溶媒は各時点で記入する。
Elementar Vario ELを使用し、元素分析を行い、元素Ｃ、ＨおよびＮについて質量百分率で組成を分けた。Buechi製のB-545を用いて融点を求めた。これは校正していない。
ＩＵＰＡＣガイドラインにしたがって、電子BeilsteinデータベースのAutonomプログラムを使用し、化合物を命名した。文献で公知の基質または単位として比較的重要な関連の官能基を命名した後に、この命名から多少のずれが生じてしまい、したがって優先順位が相違している場合がある。Cahn-Ingold-Prelogのルールにしたがって立体化学を決定した（文献：R.S. Cahn, C.K. Ingold, V. Prelog, Angew. Chemie 1966, 78,413）。
（２Ｓ）‐５‐オキソピロリジン‐２‐カルボン酸エチルエステル（２０３）
３０．０gのＬ‐ピログルタミン酸１３３（２３２mmol）を含む１００mlの無水エタノールの懸濁液に、０℃で２０mlのＳＯＣｌ２（２７４mmol、１．２eq.）を徐々に添加し、次いで１５時間攪拌し、そのバッチを室温に解凍し、透明な溶液を形成した。精密試験では、真空下で揮発性化合物を完全に除去し、次いで残渣を５００mlの酢酸エチルへ取り入れ、Ｋ２ＣＯ３およびＭｇＳＯ４を添加しながら連続的に攪拌した。各時点では吸引により乾燥剤を除去した。少量のシリカゲルによるろ過、および真空下での溶媒除去を行い、３６．０g（２３０mmol、９９%）のエステル２０３をやや黄色がかった粘性の油の形態で得た。
Ｍ（Ｃ７Ｈ１１ＮＯ３）＝１５７．１６７２
Ｒｆ＝０．４７（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９：１）
１Ｈ‐ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝７．０４（ｂｒ、１Ｈ、ＮＨ）、４．１０〜４．２２（ｍ、３Ｈ、Ｈ‐２、エステルＣＨ２）、２．２２〜２．４８(m、３Ｈ、H‐３α、Ｈ‐４）、２．０７〜２．２２（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐３β）、１．２２（ｔ、３H、Ｊ＝７．１Hz、エステルＣＨ３）
１３Ｃ−ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝１７８．３７（ラクタムＣ＝Ｏ）、１７２．１０（エステルＣ＝Ｏ）、６１．５８（エステルＣＨ２）、５５．５９（ＣＨ）、２９．３３（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２４．７７（ＣＨ２、Ｃ‐３）、１４．１１（エステルＣＨ３）
（５Ｓ）‐５‐ヒドロキシメチルピロリジン‐２‐オン（１３４）
４００mlのＴＨＦ中の３６．０g（２３０mmol）のエステル２０３溶液に１６．０gのＮａＢＨ４（４６０mmol、２eq.）および１９．５gのＬｉＣｌ（４６０mmol、２eq.）を添加した。次に、ここに１００mlのＥｔＯＨを添加し、該混合物を一晩攪拌した。反応が完了したことをＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ９：１）で確認した（場合により数ミリリットルの水を添加し、それによって反応がかなり促進される）。反応が完了したら５００mlの５%クエン酸を添加し（水素の発生）、透明な溶液が形成された。濃縮し、乾燥させた後、白色かつ粘性の残渣を酢酸エチル／メタノールの３：１混合物へ取り入れ、セライトに通してろ過した。任意の残留沈殿物を濃縮により除去し、その残渣を５００mlのＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９：１）へ取り入れ、その後シリカゲルでろ過した。
真空下で濃縮した後、粗生成物をオイルポンプ真空下、１００℃で数時間乾燥し、２５．６gのピログルタミノール１３４（１６９mmol、７３%）を無色ガラス状固体として得た。
Ｍ（Ｃ５Ｈ９ＮＯ２）＝１１５．１３０５
Ｒｆ＝０．１８（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９：１）
１Ｈ ＮＭＲ（２５０MHz、ＤＭＳＯ‐ｄ６）：δ（ppm）＝７．６６（ｂｒ、１Ｈ、ＮＨ）、５．００（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝５．４Hz、ＯＨ）、３．５０（ｍ、１Ｈ、Ｈ-５）、３．２８（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝５．１Hz、Ｈ‐１'）、１．９０〜２．１８（ｍ、３Ｈ、ＣＨ２）、１．６９（ｍ、１Ｈ、ＣＨ２）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（６２．５MHz、ＤＭＳＯ‐ｄ６）：δ（ppm）＝１７６．６４（Ｃ＝Ｏ）、６４．４０（ＣＨ２、Ｃ‐１'）、５５．１６（ＣＨ、Ｃ‐５）、２９．５４（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２２．７３（ＣＨ２、Ｃ‐３）
（５Ｓ）‐５‐（ｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルシラニルオキシメチル）ピロリジン‐２‐オン（１３５）
８．４０gのピログルタミノール１３４（７３mmol）および９．８０gのイミダゾール（１４４mmol、２eq.）を１００mlのＤＭＦ（無水）に溶解し、氷浴で冷却した。次いでこれに１８．８mlのＴＰＳ‐Ｃｌ（７３mmol）を添加し、該混合物をＲＴで一晩攪拌した。精密試験では、バッチを分液漏斗に移し、５００mlのＭＴＢＥおよび１００mlの水で希釈し、相を分割し、有機相はＭｇＳＯ４により乾燥した。カラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ２：１）により２２．５gのシリルエーテル１３５（６４mmol、８７%）が無色油状で得られ、これを徐々に凝固させ、微細な白色結晶を形成した。
Ｍ（Ｃ２１Ｈ２７ＮＯ２Ｓｉ）＝３５３．５３０１
Ｒｆ＝０．１９（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ２：１）
ｍ．ｐ．：７５℃、文献：７７〜７８℃
１Ｈ‐ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝７．６１〜７．６４（ｍ、４Ｈ、ＰｈＨ）、７．３７〜７．４２（ｍ、６Ｈ、ＰｈＨ）、６．１９（ｂｒ、１Ｈ、ＮＨ）、３．７８（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１４．８Hz、Ｊ＝７．６Hz、Ｊ＝４．８Hz、Ｈ‐５)、３．６０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．３Hz、Ｊ＝４．２Hz、H‐１'α）、３．５１（ｄｄ，１Ｈ、Ｊ＝１０．３Hz、Ｊ＝７．２Hz、H‐１'β）、２．２７〜２．３３（ｍ、２Ｈ、Ｈ-３）、２．０４〜２．２０（ｄｔ、１Ｈ、Ｊ＝１２．９Hz、Ｊ＝７．８Hz、Ｈ‐４α）、１．７２（ｄｄｄｄ、1Ｈ、Ｊ＝１３．０Hz、Ｊ＝９．１Hz、Ｊ＝７．４Hz、Ｊ＝５．３Hz、Ｈ‐４β）、Ｈ４ｐ）、１．０３（ｓ、９Ｈ、Ｓｉｔ−Ｂｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝１７７．９６（Ｃ＝Ｏ）、１３５．４４、１３５．４０（ＣＨａｒ）、１３２．９０、１３２．８７（Ｃａｒ，ｑ）、１２９．８１（ＣＨａｒ）、１２７．７５（ＣＨａｒ）、６７．２９（ＣＨ２、Ｃ‐１'）、５５．５７（ＣＨ、Ｃ‐５）、２９．７０（ＣＨ２、Ｃ‐３）、２６．７１（ＣＨ３、Ｓｉｔ‐ＢＵ）、２２．７３（ＣＨ２、Ｃ‐４）、１９．０９（Ｃｑ、Ｓｉｔ‐Ｂｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３２１１（ｂｒ）、３０６９（ｗ）、２９２８（ｍ）、２８５５（ｍ）、１６９７（ｖｓ）、１５８７（ｗ）、１４７１（ｍ）、１４６１（ｍ）、１４２６（ｓ）、１２６１（ｗ）、１１１１（ｖｓ）、１０２９（ｓ）、８６７（ｍ）、８２２（ｓ）、７４０（ｓ）、７０１（ｖｓ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝３５２（［Ｍ＋‐Ｈ］、＜１）、２９６（１００）、２５２（５）、２１８（７２）、１９９（１９）、１８１（１７）、１６２（１１）、１３５（１２）、１０５（１４）、８４（１２）、７７（７）、５５（７）
［α］Ｄ ２０＝＋１５．０°（ｃ＝１．２４５、ＣＨＣｌ３） 文献：＋１５．４°（ｃ＝０．８２５、ＣＨＣｌ３）
（５Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル‐５‐（ｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルシラニルオキシメチル）ピロリジン‐２‐オン（１３６）
７．４７gの１３５（２１．１mmol）を１００mlの無水アセトニトリルに溶解し、０℃に冷却し、１００mgのＤＭＡＰ（０．８１mmol、３．８モル%）および５．０mlのＢｏｃ２Ｏ（２３．４mmol、１．１eq.）を添加した。ＲＴで１５時間攪拌した後、橙黄色溶液を濃縮して乾燥し、シクロヘキサン／酢酸エチル（３：１）の混合物に取り入れ、短いシリカゲルカラムに通してろ過した。再度濃縮し、Ｅｔ２Ｏ／ペンタンから再結晶した黄色がかった固体残渣を得て、無色結晶状で８．５７gの１３６（１８．９mmol、８９%）を得た。
Ｍ（Ｃ２６Ｈ３５ＮＯ４Ｓｉ）＝４５３．６４５９
Ｒｆ＝０．３０（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：３）
ｍ．ｐ．：１０６〜１０８℃ 文献：１１０℃
１Ｈ‐ＮＭＲ（５００MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝７．５８〜７．６３（ｍ、４Ｈ、Ｈａｒ）、７．３４〜７．４２（ｍ、６Ｈ、Ｈａｒ）、４．１９（ｔｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．２Hz、Ｊ＝４．１Hz、Ｊ＝２．２Hz、Ｈ‐５）、３．８７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．５Hz、Ｊ＝４．２Hz、Ｈ‐１'α）、３．６８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．５Hz、Ｊ＝２．４Hz、Ｈ‐１'β）、２．７７（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．６Hz、Ｊ＝１０．４Hz、Ｈ‐３α）、２．４１（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．６Hz、Ｊ＝９．２Hz、Ｊ＝２．８Hz、Ｈ‐３β）、２．０５〜２．１８（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐４）、１．４１（ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．０２（ｓ、９Ｈ、ＳｉｔＢｕ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７４．９３（ラクタムＣ＝Ｏ）、１４９．７２（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、１３５．４８、１３５．４４（ＣＨａｒ）、１３２．９９、１３２．５８（Ｃｑ，ａｒ）、１２９．８２、１２９．８１（ＣＨａｒ）、１２７．８１、１２７．７７（ＣＨａｒ）、８２．６２（Ｃｑ、ＯｔＢｕ）、６４．９０（ＣＨ２、Ｃ−１'）、５８．７４（ＣＨ、Ｃ−５）、３２．２６（ＣＨ２、Ｃ−３）、２７．９４（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、２６．７４（ＣＨ３、ＳｉｔＢｕ）、２１．０５（ＣＨ２、Ｃ‐４）、１９．１２（Ｃｑ、ＳｉｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３０６９（ｗ）、２９５７（ｍ）、２９２９（ｍ）、２８５６（ｍ）、１７８５（ｓ）、１７４７（ｓ）、１７０８（ｓ）、１５８８（ｗ）、１４７１（ｍ）、１４２６（ｍ）、１３６５（ｓ）、１３０８（ｖｓ）、１２８６（ｓ）、１２５４（ｓ）、１１５０（ｖｓ）、１１０６（ｖｓ）、１０７６（ｓ）、１０３１（ｓ）、９９７（ｍ）、８９８（ｍ）、８６０（ｍ）、８４６（ｍ）、８２１（ｓ）、７４２（ｖｓ）、７００（ｖｓ）、６１５（ｓ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝４３８（［Ｍ＋‐ＣＨ３］、＜１）、４０１（＜１）、３８０（１）、３４０（１５）、２９６（３３）、２１８（１００）、１９９（１２）、１８１（１４）、１６２（８）、１３５（１５）、１０５（１２）、８４（１１）、５７（２５）
［α］Ｄ ２０＝−３７．２°（ｃ＝０．９９５、ＣＨＣｌ３） 文献：−３８．４°（ｃ＝１．３０、ＣＨＣｌ３）
（２Ｒ／Ｓ、５Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐（ｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルシラニルオキシメチル）‐２‐ヒドロキシピロリジン（２０４）
１５mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の３．００gの１３６（６．６１mmol）溶液を、焼きなました滴下漏斗付三口フラスコ中で−７８℃に冷却し、１２．５mlのＤＩＢＡＬ‐Ｈ（１２．５mmol、２．２eq.、１M／ヘキサン）を滴下しながら添加した。−７８℃で２時間攪拌した後、１mlのイソプロパノールを添加して反応を終了し、２０mlの酒石酸K‐Ｎａ溶液（１．７７M）を添加し、徐々に室温までもどした。２相を分離した後、３×５０mlのＭＴＢＥで水相をさらに抽出し、混合有機相をＭｇＳＯ４で乾燥した。短いシリカゲルカラム（ＥＥ／ＣＨ１：３で溶出した）によりろ過した後、ろ液を濃縮し、やや黄色がかった油状で２０４を得、これを精製せずにさらに反応させた。収率：２．９２g（６．４１mmol、９７%）。
Ｍ（Ｃ２６Ｈ３７ＮＯ４Ｓｉ）= ４５５．６６１８
Ｒｆ＝０．３７（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：３）
１Ｈ‐ＮＭＲ（２５０MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝７．５７〜７．７０（ｍ、４Ｈ、Ｈａｒ）、７．３０〜７．４５（ｍ、６Ｈ、Ｈａｒ）、５．４６（ｂｒ、１Ｈ、Ｈ‐２）、３．２０〜４．０５（ｍ、４Ｈ、Ｈ‐５、Ｈ‐１'、ＯＨ）、１．４０〜２．５０（ｍ、４Ｈ、Ｈ ３、Ｈ ４）、１５１．４９、１．３２（２ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．０４（ｓ、９Ｈ、ＳｉｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（６２．５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１５４．８５、１５４．５５、１５３．１７（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、１３５．４３（ＣＨａｒ）、１３３．３０、１３３．１６、１３２．９４（Ｃｑ，ａｒ）、１２９．６２（ＣＨａｒ）、１２７．６４（ＣＨａｒ）、８２．７８、８２．４４、８２．１８（ＣＨ、Ｃ‐２）、８０．１９、８０．０５（Ｃｑ、ＯｔＢｕ）、６４．５１、６４．２２、６４．０７、６３．３１（ＣＨ２、Ｃ−１'）、５８．７１、５８．４０（ＣＨ、Ｃ‐５）、３３．００、３１．１９（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）、２８．２４（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、２６．７８（ＣＨ３、ＳｉｔＢｕ）、２５．６７、２５．３１、２４．０３（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）、１９．１７、１８．８１（Ｃｑ、ＳｉｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）=３４４２（ｂｒ）、３０６４（ｗ）、２９５５（ｍ）、２９２８（ｍ）、２８５４（ｍ）、１６７９（ｖｓ）、１５８７（ｗ）、１４７１（ｍ）、１４２５（ｓ）、１３８９（ｖｓ）、１３６４（ｖｓ）、１２５５（ｍ）、１１６３（ｖｓ）、１１０４（ｖｓ）、１０２４（ｓ）、９９６（ｓ）、９６５（ｓ）、９０２（ｓ）、８５１（ｓ）、８２２（ｓ）、８０６（ｓ）、７７５（ｓ）、７３５（ｖｓ）、６９８（ｖｓ）
（２Ｒ／Ｓ，５Ｓ）‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐（ｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルシラニルオキシメチル）‐２‐メトキシピロリジン（５９）
１０mlの無水ＭｅＯＨ中の２．９２gの２０４（６．４１mmol）溶液に１００mgのＰＰＴＳ（０．４０mmol、６．２モル%）を添加し、ＲＴで一晩攪拌した。ＴＬＣ（ＥＥ／ＣＨ１：７）で反応が完了したことを確認した後、溶液を濃縮し、残渣を２５mlの酢酸エチルに取り入れ、少量のシリカゲルに通してろ過した。ろ液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：７）を用いてさらに精製し、それにより無色油状で２．９８gの５９（６．３４mmol、９９%）を得た。
Ｍ（Ｃ２７Ｈ３９ＮＯ４Ｓｉ＝４６９．６８８４
Ｒｆ＝０．２９／０．３３（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：７、ジアステレオマー）
１Ｈ-ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝７．５８〜７．７０（ｍ、４Ｈ、Ｈａｒ）、７．２〜７．４５（ｍ、６Ｈ、Ｈａｒ）、５．２１（ｂｒ、０．７Ｈ、−２）、５．０５（ｄ、０．２H、Ｊ＝４．３Ｈｚ、Ｈ‐２）、４．９３（ｄ、０．１Ｈ、Ｊ＝４．４Hz、Ｈ‐２）、３．４２〜４．０４（ｍ、３Ｈ、Ｈ‐５およびＨ‐１'）、３．３７（ｓ、０．４Ｈ、ＯＣＨ３）、３．３２（ｓ、０．３Ｈ、ＯＣＨ３）、３．２５（ｓ、２．３Ｈ、ＯＣＨ３）、２．００〜２．３０（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐３）、１．６５〜２．００（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐４）、１．４６、１．３２、１．２８（ｓ／ｂｒ／ｓ、全体で９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．０４（ｓ、９Ｈ、ＳｉｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１５５．１４、１５４．１５、１５３．７３（Ｃ＝Ｏ）、１３５．５０（ＣＨａｒ）、１３３．７９、１３３．６７、１３３．４８、１３３．３１（Ｃｑ，ａｒ）、１２９．６４、１２９．５０、１２７．５７（ＣＨａｒ）、９０．１７、８９．７７、８９．６１（ＣＨ、Ｃ‐２）、７９．８５、７９．５９（Ｃｑ，Ｂｏｃ）、６６．５４（ｂｒ、ＣＨ２、Ｃ−１'）、６３．８８、６３．７６（ＣＨ２、Ｃ‐１'）、５９．１５、５８．１８（ＣＨ、Ｃ‐５）、５６．３５、５５．８２、５５．１１（ＣＨ３、ＯＣＨ３）、３１．５９（ｂｒ、ＣＨ２、Ｃ‐３）、２８．２９、２７．３８（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、２６．８０（ＣＨ３、ＳｉｔＢｕ）、２５．６８、２５．４３（ＣＨ２、Ｃ‐４）、１９．２９（Ｃｑ、ＳｉｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３０６９（ｗ）、３０４４（ｗ）、２９５５（ｍ）、２９２７（ｍ）、２８５５（ｍ）、２３４２（ｗ）、１９５９（ｗ）、１８９１（ｗ）、１８０９（ｗ）、１６９６（ｖｓ）、１５８８（ｗ）、１４７１（ｍ）、１４５２（ｍ）、１４２６（ｓ）、１３６４（ｖｓ）、１３２０（ｍ）、１２５５（ｍ）、１１６４（ｓ）、１１０４（ｖｓ）、１０２８（ｍ）、９９６（ｍ）、９１９１（ｍ）、８８５（ｍ）、８４９（ｍ）、８２２（ｓ）、８０５（ｍ）、７７４（ｍ）、７３８（ｓ）、７００（ｖｓ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）=４５４（［Ｍ＋‐ＣＨ３］、＜１）、４１０（＜１）、３９６（＜１）、３２４（２１）、２８０（１００）、２６０（６）、２４８（１３）、２３４（１９）、１９９（１９）、１８４（１３）、１３５（２４）、１１４（２１）、１００（２０）、６８（３５）、５７（８５）
（５Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐（ｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルシラニルオキシメチル）‐２‐オキソ‐３，４‐ジヒドロピロール（１８）
５０mlのＴＨＦ中の１０．０gの１３６（２２．０mmol）溶液を−７８℃に冷却し、２４．０mlのＬｉＨＭＤＳ（２４．０mmol、１M／ＴＨＦ、１．１eq.）を滴下しながら添加し、１時間攪拌した。その後、３０mlのＴＨＦ中の７．３７gのＰｈＳｅＣｌ（３８．５mmol、１．７５eq.）溶液を滴下で添加し、２時間攪拌した。１００mlの飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を添加した後、バッチをＲＴにし、３００mlのＭＴＢＥで希釈し、５０mlの飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液および５０mlの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４により乾燥し、乾燥剤からろ過し、濃縮した。シリカゲルによるカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：８）を行い、黄色がかった油状で１０．５gのセレニルエーテル１６０（１７．３mmol、７８%）を得た。
後者を２５０mlのＣＨ２Ｃｌ２に取り入れ、−７８℃に冷却し、オゾン処理した。青色を呈したら即時に反応を終了させ、酸素浄化により過剰オゾンを除去し、一晩かけて反応物をＲＴにもどした。濃縮して乾燥させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：３）を用いて残渣を精製し、黄色がかった油状で５．２４g（１１．６mmol、６７%）のエノン１８を得、これを徐々に凝固させた。
Ｍ（Ｃ２６Ｈ３３ＮＯ４Ｓｉ）＝４５１．６３０１
Ｒｆ＝０．２３（ＥＥ／ＣＨ１：３）
ｍ．ｐ．：９４℃ 文献：９６℃
１Ｈ-ＮＭＲ（２５０MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝７．５４〜７．６５（ｍ、４Ｈ、Ｈａｒ）、７．３０〜７．４７（ｍ、６Ｈ、Ｈａｒ）、７．２５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．１Hz、２．１Hz、Ｈ‐３）、６．１５（ｄｄ、Ｊ＝６．１Hz、１．７Hz、１Ｈ、Ｈ ４）、４．６３（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Hz、Ｊ＝３．５Hz、Ｊ＝１．８Hz、Ｈ‐５）、４．１０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．７Hz、３．５Hz、Ｈ‐１'α）、３．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．８Hz、６．５Hz、Ｈ‐１'β）、１．４１（ｓ、９Ｈ、Ｏ‐ｔＢｕ）、１．０１（ｓ、９Ｈ、Ｓｉ‐ｔＢｕ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（６２．５MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１６９．４６（Ｃ＝Ｏ、Ｃ‐２）、１４９．２９、１４９．２１（Ｃ＝Ｏ、Ｂｏｃ）、１３５．４５（ＣＨａｒ）、１３２．９０（Ｃｑ，ａｒ）、１３２．６４（ＣＨａｒ）、１２９．６０（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐４）、１２７．８１（ＣＨａｒ）、１２７．３４（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐３）、８２．８８（Ｃｑ，Ｂｏｃ）、６３．４４（ＣＨ、Ｃ‐２）、６２．９８（ＣＨ２、Ｃ‐１'）、２８．１１（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、２６．７０（ＣＨ３、ＳｉｔＢｕ）、１９．２４（Ｃｑ、ＳｉｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３０６９（ｗ）、２９３０（ｍ）、２８５６（ｍ）、１７８０（ｖｓ）、１７４２（ｖｓ）、１７０９（ｖｓ）、１５８８（ｗ）、１４７２（ｗ）、１４２７（ｗ）、１３５３（ｓ）、１３１９（ｖｓ）、１２５５（ｍ）、１１６０（ｓ）、１１１２（ｖｓ）、１０４４（ｍ）、９８１（ｗ）、８２１（ｍ）、７４０（ｍ）、７０２（ｖｓ）、６１６（ｍ）、６０９（ｍ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV)：ｍ／ｚ（%）＝３７８（［Ｍ＋‐ＯｔＢｕ］、２）、３３８（３０）、２９４（１４）、２６３（５）、２１６（１００）、１９９（１４）、１８１（１１）、１３５（２８）、１０５（１０）、９１（５）、７７（４）、５７（２９）
［α］Ｄ ２０＝−１２１．１°（ｃ＝０．６３、ＣＨＣｌ３） 文献：−１２４°（ｃ＝０．２３、ＣＨＣｌ３）
１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐（ｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルシラニルオキシメチル）‐２‐ヒドロキシ‐ピロール（１６１）（酸化セレン除去の副産物）
Ｒｆ＝０．２１（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：３）
１Ｈ‐ＮＭＲ（２５０MHz、ＣＤＣｌ３）：７．５６〜７．６２（ｍ、４Ｈ、Ｈａｒ）、７．３１〜７．４４（ｍ、６Ｈ、Ｈａｒ）、６．８８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．１Hz）、６．１１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．１Hz）、４．５４（ｂｒ、１Ｈ、ＯＨ）、４．２１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．２Hz、Ｈ‐１'α）、３．８４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．２Hz、Ｈ‐１'β）、１．５１（ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．００（ｓ、９Ｈ、ＳｉｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（６２．５MHz、ＣＤＣｌ３）：１６６．９６（Ｃｑ）、１４９．９３（Ｃｑ）、１４９．３０（ＣＨｏｌｅｆ．）、１３５．２２（ＣＨａｒ）、１３５．１６（ＣＨａｒ）、１３２．３５（Ｃｑ，ａｒ）、１２９．６９（ＣＨａｒ）、１２９．６５（ＣＨａｒ）、１２７．５３（ＣＨａｒ）、１２７．２４（ＣＨａｒ）、９１．９７（Ｃｑ）、８３．３０（Ｃｑ）、６４．６２（ＣＨ２、Ｃ‐１'）、２７．８２（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、２６．３５（ＣＨ３、ＳｉｔＢｕ）、１８．８８（Ｃｑ、ＳｉｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３４３３（ｂｒ）、２９５５（ｗ）、２９２８（ｗ）、２８５３（ｗ）、１７７２（ｍ）、１７５３（ｍ）、１７２１（ｍ）、１６９４（ｍ）、１４６９（ｗ）１４２６（ｍ）、１３６７（ｍ）、１３２９（ｓ）、１２５２（ｍ）、１１６４（ｓ）、１１１２（ｖｓ）、１０２１（ｍ）、９１９（ｗ）、８２０（ｓ）、７４１（ｍ）、７００（ｖｓ）
（４Ｒ，５Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐（ｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルシラニルオキシメチル）‐２‐オキソ‐４‐ビニルピロリジン（１６２）
方法Ａ：
２mlの無水Ｅｔ２Ｏ中の０．１４mlのテトラビニルスズ（０．７７mmol、３．５eq.）溶液に０℃で１．９９mlのｎ‐ＢｕＬｉ（３．０８mmol、１．５４M／ヘキサン、１４eq.）を添加し、１時間攪拌した。次にこれに−２０℃で２９３mgの無水Ｃｕｌ（１．５４mmol、７eq.）を添加し、黒色の懸濁液を形成し、これを−７８℃に冷却し、その後、２mlのＥｔ２Ｏ中の１００mgのエノン１８（０．２２mmol）溶液を滴下しながら添加した。２時間後、２mlの飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を滴下しながら添加し、反応混合物をＲＴにした。１５mlのＭＴＢＥおよび５mlの水を添加し、その後、分液漏斗中、セライトに通してろ過し、有機相を２×３mlの飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液および３mlの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：７）により、無色油状で６４mgの付加生成物１６２（０．１３mmol、６０%）が得られた。
方法Ｂ：
８０mlの無水Ｅｔ２Ｏ中の８１．９mlの臭化ビニルマグネシウム（８１．９０mmol、１M／ＴＨＦ、１０eq.）溶液に−２０℃で８．４１gの無水ＣｕＢｒ・ＤＭＳ（４０．９５mmol、５eq.）を添加し、黒色懸濁液を形成した。１５分後、これを−７８℃まで冷却し、３０mlの無水Ｅｔ２Ｏ中の３．７０gのエノン１８（８．１９mmol）溶液および２．０７mlのＴＭＳＣｌ（１６．３８mmol、２eq.）を添加した。２時間後、これに７０mlの飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を添加し、反応混合物をＲＴまで温めた。３００mlのＭＴＢＥおよび２０mlの水を添加した後、バッチを分液漏斗中、セライトに通してろ過し、有機相を３×５０mlの飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液および１０mlの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、それにより青色が完全に消失し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：７）により、黄色がかった油状で２．３０g（４．７９mmol、５９%）のビニル付加生成物１６２を得た。
Ｍ（Ｃ２８Ｈ３７ＮＯ４Ｓｉ）＝４７９．６８３２
Ｒｆ＝０．３２（ＥＥ／ＣＨ１：５）
１Ｈ-ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝７．６０（ｍ、４Ｈ、ＰｈＨ）、７．４０（ｍ、６Ｈ、ＰｈＨ）、５．８５（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．４Hz、Ｊ＝８．８Hz、Ｊ＝４．６Hz、ＣＨｏｌｅｆ．）、５．０６（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝１４．２Hz、Ｊ＝３．０Hz、（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．）、３．９１（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐５、Ｈ‐１'α）、３．７２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．９Hz、３．７Hz、H‐１'β）、２．９７（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐３、Ｈ‐４）、２．３１（ｔｄ、２Ｈ、Ｊ＝１３．６Hz、Ｊ＝６．２Hz、Ｈ‐３）、１．４１（ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．０３（ｓ、９Ｈ、ＳｉｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７３．７３（ラクタムＣ＝Ｏ）、１４９．７２（ＢｏｃＣｑ），１３９．１２（ＣＨｏｌｅｆ．）、１３５．５０（ＣＨａｒ）、１３２．９３、１３２．５６（Ｃｑ，ａｒ）、１２９．８２、１２９．６７（ＣＨａｒ）、１２７．７５、１２７．６２（ＣＨａｒ）、１１５．１６（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．）、８２．７７（ＢｏｃＣｑ）、６４．２５（ＣＨ，Ｃ‐５）１６３．８４（ＣＨ２、Ｃ‐１'）、３７．８４（ＣＨ２、Ｃ‐３）、３６．９４（ＣＨ、Ｃ‐４）、２８．３２、２７．８８（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、２６．７１（ＣＨ３、ＳｉｔＢｕ）、１９．０９（Ｃｑ、ＳｉｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３０７０（ｗ）、２９５５（ｍ）、２９２９（ｍ）、２８５６（ｍ）、１７８７（ｓ）、１７５０（ｖｓ）、１７１１（ｖｓ）、１６４０（ｗ）、１５８８（ｗ）、１４７１（ｍ）、１４２６（ｍ）、１３９１（ｍ）、１３６６（ｓ）、１３０７（ｖｓ）、１２５６（ｓ）、１１５２（ｖｓ）、１１１１（ｖｓ）、１０６２（ｍ）、１０２６（ｍ）、９９７（ｗ）、９７０（ｍ）、９２０（ｍ）、８７２（ｍ）、８４７（ｍ）、８２１（ｍ）、７７８（ｗ）、７４０（ｓ）、７０１（ｖｓ）、６１５（ｍ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝４２０（［Ｍ＋‐ｔＢｕ‐２Ｈ］、＜１）、４０１（２）、３９４（３）、３６６（４０）、３２２（１１）、２７２（４）、２４４（１００）、２２４（４）、１９９（８）、１８１（８）、１６２（６）、１３５（１３）、１０５（７）、５７（４３）
［α］Ｄ ２０＝−２１．９°（ｃ＝０．７１、ＣＨＣｌ３） 文献：−２３°（ｃ＝０．２１、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，３Ｒ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐２‐（ｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルシラニルオキシメチル）‐３‐ビニルピロリジン（１６３）
４．９０gの１６２（１０．２１mmol）を３０mlの無水ＴＨＦに溶解し、−７８℃まで冷却し、その後１２．２０mlのＬｉＥｔ３ＢＨ（１２．２０mmol、１．２eq.、１M／ＴＨＦ）を滴下しながら添加した。１時間後、これに１０mlの酒石酸Ｋ‐Ｎａ溶液（１．７７M）を添加し、バッチをＲＴにした。精密試験では、５０mlのＭＴＢＥを添加し、２×１０mlのＭＴＢＥで水相を抽出し、混合有機相をＭｇＳＯ４で乾燥した。真空下で溶媒を除去し、無色油状で粗１６４を得、これをオイルポンプ真空下で乾燥した。
粗１６４を３０mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２に取り入れ、−７８℃まで冷却し、これに３．２０mlのＥｔ３ＳｉＨ（２０．１４mmol、２eq.）および２．８０mlのＢＦ３・ＯＥｔ２（２２．１０mmol、２．２eq.）を添加し、２時間攪拌した。１０mlの飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加した後、反応混合物をＲＴまで温めた。バッチを１００mlのＭＴＢＥで希釈し、有機相を１０mlの飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：１５）を用いて残渣を精製し、無色油状で３．１０gの１６３（６．６６mmol、６５%）を得た。
Ｍ（Ｃ２８Ｈ３９ＮＯ３Ｓｉ）＝４６５．６９９７
Ｒｆ＝０．２３（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：１５）
１Ｈ-ＮＭＲ（５００MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝７．６１〜７．７１（ｍ、４Ｈ、Ｈａｒ）、７．３０〜７．４５（ｍ、６Ｈ、Ｈａｒ）、５．７９（ｑｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．６Hz、Ｊ＝９．６Hz、（ＣＨｏｌｅｆ．）、５．０７（ｍ、２Ｈ、ＣＨ２，ｏｌｅｆ．）、４．０９（ｄ、０．４Ｈ、Ｊ＝６．４Hz、ＣＨ２、Ｈ‐１'α）、３．５０〜３．５６（ｍ、３．６Ｈ、Ｈ‐２、Ｈ‐５α、Ｈ‐１'β）、３．３５（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．０Hz、Ｊ＝６．９Hz、Ｈ‐５β）、３．１１（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐３）、２．０８（ｑｔ、１Ｈ、Ｊ＝１３．０Hz、Ｊ＝６．５Hz、Ｈ‐４α）、１．７２（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝１３．３Ｈｚ、Ｊ＝７．０Hz、Ｈ‐４β）、１．４５、１．３１（２ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．０４、１．０３（２ｓ、９Ｈ、ＳｉｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（１２５MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１５４．１３（Ｃ＝Ｏ）、１３９．６９、１３９．５４（ＣＨｏｌｅｆ．）、１３５．４０（ＣＨａｒ）、１３３．６１、１３３．３８、１３３．２４（Ｃｑ，ａｒ）、１２９．５２（ＣＨａｒ）、１２７．５３（ＣＨａｒ）、１１４．８０、１１４．５６（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．）、７９．０５、７８．７５（ＢｏｃＣｑ）、６３．４０、６３．２９（ＣＨ、Ｃ‐２）、６３．１４、６１．８４（ＣＨ２、C‐１'）、４６．５８、４５．８７（ＣＨ２、Ｃ‐５）、４４．７４、４３．９８（ＣＨ、Ｃ‐３）、３０．４６、２９．５１（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２８．３０、２８．１５（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、２６．７３（ＣＨ３、ＳｉｔＢｕ）、１９．１６（Ｃｑ、ＳｉｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３０７０（ｗ）、３０４７（ｗ）、２９６０（ｍ）、２９２８（ｍ）、２８５６（ｍ）、１６９３（ｖｓ）、１６４０（ｗ）、１５８８（ｗ）、１４７１（ｍ）、１４２６（ｍ）、１３９１（ｓ）、１３６４（ｓ）、１３４４（ｗ）、１２５５（ｗ）、１１７１（ｓ）、１１１１（ｖｓ）、１０２９（ｗ）、１００６（ｗ）、９８９（ｗ）、９１４（ｍ）、８９９（ｍ）、８５９（ｗ）、８２２（ｍ）、７７２（ｍ）、７４０（ｍ）、７００（ｓ）、６０４（ｍ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝４０８（［Ｍ＋‐ｔＢｕ］、１）、３９２（５）、３８０（３）、３６８（４）、３５２（１００）、３０６（８）、２５３（７）、２３０（５７）、２１１（５）、１９９（６０）、１８１（２４）、１６８（６）、１４０（８１）、１２１（７）、１０５（６）、９６（２４）、７７（２）、５７（２）
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ、Ｃ２８Ｈ３９ＮＮａＯ３Ｓｉ）：ｃａｌｃ．：４８８．２５９７、実測値：４８８．２６０
［α］λ ２０＝−３４．０°（５８９nm）、−４０．４°（５４６nm）、−８３．５°（４０５nm）、−１１０．２°（３６５nm）、−１４２．２°（３３４nm）（ｃ＝０．７２５、ＣＨＣｌ３）
ＣＨＮ分析：ｃａｌｃ．：Ｃ：７２．２１%、Ｈ：８．４４%、Ｎ：３．０１%；
実測値：Ｃ：７１．７８%、Ｈ：８．５０%、Ｎ：２．８８%
（２Ｓ，３Ｒ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐２‐（ヒドロキシメチル）‐３‐ビニルピロリジン（１６５）
２．６７gの１６３（５．７３mmol）を３５mlの無水ＴＨＦに溶解し、０℃に冷却し、８．６０mlのＴＢＡＦ溶液（８．６０mmol、１．５eq.、１M／ＴＨＦ）を添加した。ＲＴで一晩反応させた後、０．５mlの水を添加し、その後３０分間攪拌した。その後、バッチを少量のＭＴＢＥとともに、少量のシリカゲルでろ過し、濃縮した。シリカゲルでカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：３）を行い、無色油状で１．２８gのアルコール１６５（５．６３mmol、９８%）を得た。
Ｍ（Ｃ１２Ｈ２１ＮＯ３）＝２２７．３００１
Ｒｆ＝０．１８（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：３）.
１Ｈ-ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝５．７２（ｍ、１Ｈ、ＣＨｏｌｅｆ．）、５．０６（ｄｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．７Hz、Ｊ＝４．９Hz、Ｊ＝３．８Hz、ＣＨ２，ｏｌｅｆ．）、３．７１（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．９Hz、Ｈ‐１'α）、３．５４（ｍ、３Ｈ、Ｈ‐２、Ｈ‐５α、Ｈ‐１'β）、３．２０（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．９Hz、Ｊ＝９．８Hz、Ｊ＝６．５Hz、Ｈ‐５β）、２．３１（ｂｒ、１Ｈ、Ｈ‐３）、１．９１（ｂｒ、１Ｈ、Ｈ‐４α）、１．６２（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐４β）、１．４２（ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝１５６．５６（Ｃｑ、Ｃ＝Ｏ）、１３７．９３（ＣＨｏｌｅｆ．）、１１６．３２（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．）、８０．０９（ＢｏｃＣｑ）、６５．５４（ＣＨ２、Ｃ‐１'）、６４．９４（ＣＨ、Ｃ‐２）、４６．５２（ＣＨ２、Ｃ‐５）、４５．８７（ＣＨ、Ｃ‐３）、３０．４０（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２８．２５（ＣＨ３ＯｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３４０７（ｂｒ）、３０７８（ｗ）、２９７３（ｓ）、２９３０（ｍ）、２８７９（ｍ）、１６９２（ｖｓ）、１６６９（ｖｓ）、１４７７（ｓ）、１４５３（ｓ）、１４０４（ｖｓ）、１３６５（ｖｓ）、１３４４（ｍ）、１２５３（ｍ）、１１６９（ｖｓ）、１１１７（ｓ）、１０８６（ｍ、１０５４（ｍ）、９９２（ｍ）、９１６（ｍ）、８９４（ｗ）、８６１（ｗ）、７７２（ｍ）、６６８（ｗ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２２７（［Ｍ＋］、＜１）、２０７（＜１）、１９６（１３）、１５４（１０）、１４０（５２）、９６（７１）、８１（４）、６７（１３）、５７（１００）
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ、Ｃ１２Ｈ２７ＮＮａＯ３）：ｃａｌｃ．：２５０．１４１９、実測値：２５０．１４２
［α］λ ２０＝−５２．５°（５８９nm）、−１２３．７°（４０５nm）、−１５９．２°（３６５nm）、−１９９．２°（３３４nm）、−６２．０°（５４６nm）、（ｃ＝１．０８、ＣＨＣｌ３）
ＣＨＮ分析：Ｃ：６３．４１%、Ｈ：９．３１%、Ｎ：６．１６%；
Ｃ：６３．２２%、Ｈ：９．４８%、Ｎ：６．２８%
（２Ｓ，３Ｒ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐３‐ビニルピロリジン‐２‐カルボン酸（１６６）
６００mgのアルコール１６５（２．６４mmol）を１５mlのアセトンに溶解し、０℃に冷却し、５mlのJones試薬（７．４０mmol、２．８eq.）（２gのＣｒＯ３、２．７gの濃縮Ｈ２ＳＯ４、１２mlのＨ２Ｏから新たに調製したもの）を滴下しながら添加し、ＲＴで２時間攪拌し、反応過程はＴＬＣ（ＥＥ／ＣＨ１：１）を用いてモニターした。次いで４mlのイソプロパノールを添加し、このとき橙色の反応混合物は徐々に緑褐色に変わっっていった。セライトでろ過した後、５mlのアセトン／氷酢酸混合液（２０：１）で洗浄し、濃縮して乾燥させた。
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ２０：１）を用いて精製し、白色結晶の形態でＸ線結晶解析に適した４７０mgのビニルプロリン１６６（１．９５mmol、７４%）を得た。
Ｍ（Ｃ１２Ｈ１９ＮＯ４）＝２４１．２８３６
Ｒｆ＝０．２６（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ１９：１）
ｍ．ｐ．：１１６〜１１８℃
１Ｈ-ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１０．７０（ｂｒ、１Ｈ、ＣＯＯＨ）、５．８１（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．３Hz、Ｊ＝１０．３Hz、Ｊ＝７．３Ｈｚ、ＣＨｏｌｅｆ．）、５．１２（ｍ、２Ｈ、ＣＨ２，ｏｌｅｆ．）、４．０９／３．９５（２ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．６Hz、Ｈ‐２）、３．５５（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐５）、２．９８（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐３）、２．０８（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐４α）、１．７７（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐４β）、１．４５、１．３９（２ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７７．８９、１７６．３７（カルボキシＣ＝Ｏ）、１５５．０５、１５３．７３（Ｂｏｃ Ｃ＝Ｏ）、１３７．０９、１３６．８４（ＣＨｏｌｅｆ．）、１１６．３５、１１６．０１（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．）、８０．６５、８０．５５（ＢｏｃＣｑ）、６４．０６、６３．７３（ＣＨ、Ｃ‐２）、４８．１９、４５．７６（ＣＨ、Ｃ‐３）、４５．９３、４５．６４（ＣＨ２、Ｃ‐５）、３０．５３、３０．２４（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２８．２９、２８．１５（ＣＨ３ＯｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３０８５（ｂｒ）、２９７５（ｓ）、２８７３（ｍ）、２５５９（ｂｒ）、２２４５（ｗ）、１７４４（ｖｓ）、１６９６（ｂｒ、ｖｓ）、１４７７（ｓ）、１３９１（ｖｓ）、１３６５（ｖｓ）、１２４２（ｓ）、１１６１（ｖｓ）、１１１９（ｖｓ）、９８９（ｍ）、９１３（ｖｓ）、８５８（ｍ）、７７２（ｍ）、７３０（ｓ）、６８１（ｍ）、６４６（ｗ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２４１（［Ｍ＋］、＜１）、２０７（１）、１９６（５）、１６８（３）、１４０（１００）、１２６（５）、１１０（３）、９６（７７）、８７（３）、７９（４）、６８（１６）、５７（８８）
ＥＳＩ−ＭＳ（Ｃ１２Ｈ１９ＮＮａＯ４）：ｃａｌｃ．：２６４．１２、実測値：２６４．３０
［α］λ ２０＝−３８．５°（５８９nm）、−４５．６°（５４６nm）、−９８．７°（４０５nm）、−１３３．４°（３６５nm）、３３４nmでの吸収（ｃ＝０．７６５、ＣＨＣｌ３）
ＣＨＮ分析：ｃａｌｃ．：Ｃ：５９．７３%、Ｈ：７．９４%、Ｎ：５．８１%；
実測値：Ｃ：５９．６８%、Ｈ：７．８９%、Ｎ：５．６３%
結晶データ：
識別コード：ｊｚ１０１
実験式：Ｃ１２Ｈ１９ＮＯ４
式量：２４１．２８
温度：１００（２）Ｋ
波長：０．７１９７３Å
結晶系、空間群：斜方晶、Ｐ２１２１２１
単位細胞寸法：ａ＝９．２９２６（２）Å α＝９０°
ｂ＝１１．８１００（３）Å β＝９０°
ｃ＝１２．１２５６（２）Å γ＝９０°
体積：１３３０．７３（５）Å３
Ｚ、算出密度：４、１．２０４g/cm3
吸光係数：０．０９０mm
Ｆ（０００）：５２０
結晶サイズ：０．１×０．１×０．２mm
データ収集のシータ帯域：２．４４〜２７．００°
限界指数：−１１≦ｈ≦１１、−１４≦ｋ≦１４、−１５≦ｌ≦１５
集積反射／独自反射：１１０４２／２７９７［Ｒ（ｉｎｔ）＝０．０２６６］
観察された反射［ｌ＞２シグマ（ｌ）］ ２４９４
シータ＝２５．００に対する完全度 １００%
吸光補正：なし
改良法：Ｆ２での密行列最小二乗法
データ／制限／パタメータ：２７９７／０／２３０
Ｆ２への適合度：１．０４３
最終Ｒ指数［ｌ＞２シグマ（ｌ）］：Ｒ１＝０．０３０６、ｗＲ２＝０．０７５１
Ｒ指数（全データ）：Ｒ１＝０．０３６８、ｗＲ２＝０．０７８４
絶対構造パラメータ：−０．２（８）
最大差異 ピーク／ホール：０．１５５および−０．１５８ｅÅ３
（２Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐オキソピロリジン‐２‐カルボン酸エチルエステル（１６７）
６０mlの無水アセトニトリル中の７．００gのピログルタミン酸エチルエステル２０３（４４．５mmol）の溶液を０℃に冷却し、６．３mlのＮＥｔ３（４５．４mmol、１．０２eq.）、微量のＤＭＡＰおよび１０．５mlのＢｏｃ２Ｏ（４９．１mmol、１．１eq.）を添加した。ＲＴで１５時間攪拌した後、溶媒を除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：１）を用いて残渣を精製した。黄色がかった固体生成物をＥｔ２Ｏ／ペンタンから結晶化することでさらに精製し、白色結晶の形態で１１．０gの１６７（４２．９mmol、９６%）を得た。
Ｍ（Ｃ１２Ｈ１９ＮＯ５）＝２５７．２８３０
Ｒｆ＝０．３１（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：１）
ｍ．ｐ．：５３℃ 文献：５０〜５１℃
１Ｈ-ＮＭＲ（５００MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝４．５７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．５Hz、Ｊ＝２．９Hz、Ｈ‐２）、４．２１（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．１Hz、エステルＣＨ２）、２．６０（ｔｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．５Hz、Ｊ＝９．９Hz、Ｈ‐４α）、２．４６（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．５Hz、Ｊ＝９．４Hz、Ｊ＝３．５Hz、Ｈ‐４β）、２．２９（ｑｄ、１Ｈ、Ｊ＝１３．３Hz、Ｊ＝９．７Hz、Ｈ‐３α）、２．００（ｔｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１３．０Hz、Ｊ＝９．６Hz、Ｊ＝３．２Hz、Ｈ‐３β）、１．５１（ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．２７（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．１Hz、エステルＣＨ３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（１２５MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝１７３．３１（Ｃ＝Ｏ）、１７１．３０（Ｃ＝Ｏ）、８３．５４（ＢｏｃＣｑ）、６１．６４（エステルＣＨ２）、５８．９３（ＣＨ、Ｃ‐２）、３１．１４（ＣＨ２、Ｃ‐４）２７．８６（ＣＨ３、ＯｔＢｕ)、２１．５３（ＣＨ２、Ｃ‐３）、１４．１６（ＣＨ３、エステル）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）=２９７７（ｍ）、２９３２（ｗ）、１７８８（ｖｓ）、１７４１（ｖｓ）、１７１３（ｖｓ）、１４７５（ｍ）、１４５７（ｍ）、１３９３（ｍ）、１３６７（ｓ）、１３０６（ｖｓ）、 １２８４（ｖｓ）、１２５４（ｖｓ）、１１８９（ｖｓ）、１１４６（ｖｓ）、１０９５（ｍ）、１０４２（ｓ）、１０１９（ｖｓ）、９５８（ｗ）、９１４（ｗ）、８８３（ｗ）、８４２（ｍ）、８１９（ｍ）、７７７（ｍ）、７４６（ｍ）、６３９（ｗ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２４２（［Ｍ＋−１５］、＜１）、２０２（１）、１８４（１０）、１５８（９）、１５６（８）、１４９（１）、１２８（２）、１１０（８）、８４（８３）、７５（３）、６９（４）、５７（１００）
［α］Ｄ ２０＝−３４．９°（ｃ＝０．８１０、ＣＨＣｌ３） 文献：−３２．３°（ｃ＝２．１、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐ヒドロキシピロリジン‐２‐カルボン酸エチルエステル（２０５）
１００mlの無水ＴＨＦ中の１０．０gの１６７（３８．９mmol）溶液を−７８℃に冷却し、８５．５mlのＤＩＢＡＬ‐Ｈ（８５．５mmol、２．２eq.、１M／ＴＨＦ）を非常にゆっくりと添加した。１時間後、低温で１０mlのイソプロパノールを添加して反応を停止し、その後２４０mlの酒石酸Ｋ‐Ｎａ溶液（１．７７M）を添加し、該混合物を初めは０℃に、その後ＲＴにゆっくりと戻した。得られた相を分離し、３×２００mlのＭＴＢＥで有機相を抽出し、１００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で混合有機相を洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥した後、溶媒を除去し、黄色がかった油状残渣として９．６９gの２０５（３７．４mmol、９６%）を得、これを精製せずにさらに反応させた。分析する目的で、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：１）を用いて少量の試料を精製した。
Ｍ（Ｃ１２Ｈ２１ＮＯ５）＝２５９．２９８９
Ｒｆ＝０．２７（ＳｉＯ２、１：１のＥＥ／ＣＨ）
１Ｈ‐ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝５．４０〜５．７０（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐５）、４．０６〜４．４０（ｍ、３Ｈ、Ｈ‐２およびエステルＣＨ２）、３．４０〜３．７５（ｍ、１Ｈ、ＯＨ）、１．７７〜２．６０（ｍ、４Ｈ、Ｈ‐３、Ｈ−４）、１．３５〜１．５２（ｍ、９Ｈ、ｔＢｕ）、１．１７〜１．３０（ｍ、２Ｈ、エステルＣＨ３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７３．０１、１７２．７５、１７２．４５、１７２．１８（エステルＣ＝Ｏ）、１５４．０３、１５３．８２、１５３．１５（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、８２．１６、８１．９１、８１．６７（ＣＨ、Ｃ‐５）、８０．９６、８０．８７、８０．７１（Ｃｑ、ＯｔＢｕ）、６１．１０、６０．９０、６０．８３（エステルＣＨ２）、５９．４３、５９．１５、５９．００（ＣＨ、Ｃ‐２）、３２．３１、３１．７７、３１．０５（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２８．２７、２８．０８（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、２７．８０、２７．６９、２６．８３、２６．７７（ＣＨ２、Ｃ‐３）、１４．１４、１３．９９（エステルＣＨ３
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３４８０（ｂｒ）、２９７６（ｍ）、１７４１（ｓ）、１６９６（ｖｓ）、１４７６（ｍ）、１４５２（ｍ）、１３６４（ｖｓ）、１３２３（ｍ）、１２５６（ｍ）、１１５６（ｖｓ）、１１２３（ｓ）、１０６１（ｍ）、１０２５（ｖｓ）、９７３（ｍ）、９１４（ｍ）、８４８（ｍ）、７７５（ｍ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２５８（［Ｍ＋‐Ｈ］、＜１）、２４２（１０）、２０８（３）、２０２（４）、１８６（３）、１５８（１８）、１４２（１００）、１３０（６）、１１４（３）、８６（１４）、６８（２８）、５７（３７）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐メトキシピロリジン‐２‐カルボン酸エチルエステル（１６８）
１００mlの無水ＭｅＯＨ中の９．６９gの２０５（３７．４mmol）溶液に２００mgのＰＰＴＳ（０．０８mmol、２．１モル%）を添加し、ＲＴで一晩攪拌した。その後、溶媒を完全に除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：３）を用いて残渣を精製し、無色油状で９．５６gのα‐メトキシカルバメート１６８（３５．０mmol、９４%）を得た（ジアステレオマーの混合体）。
Ｍ（Ｃ１３Ｈ２３ＮＯ５）＝２７３．３２５５
Ｒｆ＝０．２６（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：３）
１Ｈ-ＮＭＲ（５００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ(ppm)＝５．１１〜５．２９（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐５）、４．０５〜４．３８（ｍ、３Ｈ、エステルＣＨ２、Ｈ‐２）、３．３７（ｍ、３Ｈ、ＯＣＨ３）、１．６５〜２．５０（ｍ、４Ｈ、Ｈ‐３、Ｈ‐４）、１．３９、１．４１、１．４６、１．４８（４ｓ、９Ｈ、Ｂｏｃ）、１．２５（ｍ、３Ｈ、エステルＣＨ３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（１２５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７２．６０、１７２．２８（エステルＣ＝Ｏ）、１５４．１５、１５３．９５、１５３．８１、１５３．７４（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、８９．１６、８９．１１、８８．３４、８８．１６（ＣＨ、Ｃ‐５）、８０．５２、８０．３７、８０．３０（ＢｏｃＣｑ，）、６０．７３（エステルＣＨ２）、５９．５０、５９．２１、５８．８８、５８．８１（ＣＨ、Ｃ‐２）、５６．００、５５．７２、５５．１１、５４．７８（ＣＨ３、ＯＣＨ３）、３２．７８、３２．１０、３０．９２、２９．９０（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２８．１５、２７．９９（ＢｏｃＣＨ３）、２７．６４、２６．９３、２６．８３（ＣＨ２、Ｃ‐３）、１４．１０、１３．９６（エステルＣＨ３）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝２９７６（ｍ）、２９３５（ｍ）、１７４６（ｓ）、１７０７（ｖｓ）、１４７６（ｍ）、１４５６（ｍ）、１４４２（ｍ）、１３７５（ｖｓ）、１３２９（ｍ）、１２５５（ｍ）、１１８５（ｖｓ）、１１１６（ｍ）、１０８５（ｖｓ）、１０３５（ｍ）、９３９（ｍ）、９１２（ｍ）、８４４（ｍ）、７７３（ｍ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２４１（［Ｍ＋‐ＭｅＯＨ］、２）、２００（１２）、１７２（８）、１４２（２４）、１００（４８）、６８（１００）、５７（８８）、４１（６３）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐５‐アリル‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）ピロリジン‐２‐カルボン酸エチルエステル（１６９）
１００mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の９．２５gのα‐メトキシカルバメート１６８（３３．８mmol）溶液を−７８℃に冷却し、初めに１３．５０mlのアリルトリメチルシラン（８４．６mmol、２．５eq.）を添加し、次いで８．５８mlのＢＦ３・ＯＥｔ２（６７．７mmol、２eq.）を滴下しながら添加し、１時間攪拌した。その後、１０mlのＨ２Ｏおよび３０mlの飽和ＮａＨＣＯ３溶液を低温で添加し、バッチを０℃にし、３０分間攪拌し、ＲＴに解凍した。相を分離した後、水相を３×５０mlのＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、混合有機相を３０mlの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：６）を用いて残渣を精製し、無色油状で６．８３gのアリル置換生成物１６９（２４．１mmol、７１%）を得た（エピマーの混合体、シス／トランス４：１）。
Ｍ（Ｃ１５Ｈ２５ＮＯ４）＝２８３．３６３３
Ｒｆ＝０．３９（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：３）
１Ｈ‐ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝５．７０（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２'）、４．９５（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐３'）、４．００〜４．２８（ｍ、３Ｈ、Ｈ‐２、エステルＣＨ２）、３．７６、３．８７（２ｂｒ、１Ｈ、Ｈ‐５）、２．３２〜２．７０（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐１'α）、１．６２〜２．２３（ｍ、５Ｈ、Ｈ‐１'β）、Ｈ‐３、Ｈ‐４）、１．３５、１．３６、１．４１、１．４２（４ｓ、９Ｈ、OｔＢｕ）、１．２１（ｍ、３Ｈ、エステルＣＨ３）
１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ(ppm)＝１７３．３１、１７３．１１、１７２．７２（エステルＣ＝Ｏ）、１５３．４９（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、１３５．３４、１３５．０６、１３４．９９（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．、Ｃ‐３'）、１１７．２０、１１７．１２、１１６．７７（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．、Ｃ‐２'）、７９．７８（ＢｏｃＣｑ）、６０．７７、６０．７４（エステルＣＨ２）、６０．１５、５９．９１、５９．８４、５９．５９（ＣＨ、Ｃ‐２）、５８．００、５７．８９、５７．４６、５７．４１（ＣＨ、Ｃ‐５）、３９．０１、３８．９４、３８．１０、３８．０５（ＣＨ２、Ｃ‐１'）、２９．４５、２８．７２、２８．４０（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）、２８．３２、２８．２０ ＯｔＢｕ）、２７．９６、２７．７５、２７．４０、２６．７５（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）、１４．２１、１４．１７（エステルＣＨ３）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３０７４（ｗ）、２９７４（ｓ）、２９３１（ｍ）、１７４６（ｓ）、１６９６（ｖｓ）、１６３９（ｗ）、１４７７（ｍ）、１４５１（ｍ）、１３８８（ｖｓ）、１３６５（ｖｓ）、１３２９（ｍ）、１２７３（ｍ）、１２５６（ｍ）、１１８４（ｖｓ）、１１６５（ｖｓ）、１１２３（ｓ）、１１０５（ｓ）、１０３１（ｍ）、９９５（ｍ）、９４８（ｍ）、９１２（ｍ）、８５９（ｍ）、７７０（ｍ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２４２（［Ｍ＋‐Ｃ３Ｈ５］、６）、２１０（３）、１８２（３）、１５４（６）、１４２（１００）、１１４（５）、１１０（８）、９６（３）、６８（２０）５７（４０）
［α］Ｄ ２０＝−２６．４°（ｃ＝１．０２５、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐（２‐ヒドロキシエチル）ピロリジン‐２‐カルボン酸エチルエステル（１７０）
１２mlのMeOHおよび６mlのＣＨ２Ｃｌ２の混合液中の１．００gの１６９（３．５３mmol）溶液に、−７８℃で、溶液が青色になるまでオゾンを通した。その後反応を停止し、酸素浄化により過剰オゾンを除去した。その後、２７０mgのＮａＢＨ４（７．０６mmol、２eq.）を添加し、混合物を一晩攪拌し、ＲＴに温めた。ＴＬＣ（ＥＥ／ＣＨ１：１）により反応が完了したことを確認した後、バッチを濃縮し、残渣を６０mlのＣＨ２Ｃｌ２および４０mlの半濃縮ＮａＣｌ溶液に取り入れた。水相を３×２０mlのＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、混合有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：１）を用いて残渣を精製し、エピマーの混合体（無色油）として６９１mg（２．４０mmol、６８%）のアルコール１７０を得た。
Ｍ（Ｃ１４Ｈ２５ＮＯ５）＝２８７．３５２０
Ｒｆ＝０．２０（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：１）
１Ｈ-ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝３．９５〜４．３３（ｍ、５Ｈ、Ｈ‐２、Ｈ‐５、エステルＣＨ２、ＯＨ）、３．４２〜３．７８（ｍ、２Ｈ、ＣＨ２）、１．４５〜２．３３（ｍ、６Ｈ、３×ＣＨ２）、１．４３、１．３７（２ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．２２（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝６Ｈｚ、エステルＣＨ３）
１３Ｃ−ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７３．２４（エステルＣ＝Ｏ）、１５５．５４、１５５．３２（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、８０．７５、８０．６０（ＢｏｃCq)、６０．９０（エステルＣＨ２）、５９．９９（ＣＨ、Ｃ‐２）、５９．０１、５８．７４（ＣＨ２）、５４．４７、５４．３０（ＣＨ、Ｃ‐５）、３８．７８、３７．５７（ＣＨ２）、３０．５２（ＣＨ２）、２９．１０、２８．７７、２８．６２（ＣＨ２）、２８．１１（ＣＨ３、Ｂｕ）、１４．１４（エステルＣＨ３）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３４４４（ｂｒ）、２９７５（ｍ）、２８７３（ｍ）、１７４３（ｓ）、１６７４（ｖｓ）、１４７６（ｍ）、１４５１（ｍ）、１３９０（ｖｓ）、１３６４（ｖｓ）、１２９９（ｍ）、１２５６（ｍ）、１１５６（ｖｓ）、１１１６（ｖｓ）、１０６９（ｓ）、１０３４（ｓ）、９９１（ｍ）、９２６（ｗ）、８５４（ｍ）、７７３（ｍ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２８７（［Ｍ＋］、１）、２３１（２）、２１４（８）、１８６（４）、１５８（８）、１４２（２３）、１２８（３）、１１４（１００）、９６（４）、８２（３）、６８（１６）、５７（５４）
［α］Ｄ ２０＝−４８．９°（ｃ＝０．８８５、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５［２‐（２‐ニトロフェニルセラニル）エチル］ピロリジン‐２‐カルボン酸エチルエステル（１７１）
４９７mgのアルコール１７０（１．７３mmol）を溶解し、４３２mgのオルト‐ニトロフェニルセレノシアネート（１．９０mmol、１．１eq.）を、１０mlの無水ＴＨＦおよび３mlの無水ピリジンからなる溶媒混合液に懸濁した。その後、０℃で０．５６mlのトリ‐ｎ‐ブチルホスフィン（２．２５mmol、１．３eq.）を注意深く滴下しながら添加し、暗赤色の溶液を得た。１時間後、３０mlのＭＴＢＥでバッチを希釈し、少量のシリカゲルでろ過し、濃縮した。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：３）を用いて褐色の残渣を精製し、濃黄色の油状で６８５mgのセレニルエーテル１７１（１．４５mmol、８４%）を得た。
Ｍ（Ｃ２０Ｈ２８Ｎ２Ｏ６Ｓｅ）＝４７１．４０６２
Ｒｆ＝０．２６（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：３）
１Ｈ-ＮＭＲ（２５０MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝８．１０〜８．３５（ｍ、１Ｈ、Ｈａｒ）、７．２０〜７．７０（ｍ、３Ｈ、Ｈａｒ）、３．９５〜４．４０（ｍ、４Ｈ、Ｃ‐２、Ｃ‐５、エステルＣＨ２）、２．７５〜３．１２（ｍ、２Ｈ、ＣＨ２）、１．６２〜２．３５（ｍ、６Ｈ、３×ＣＨ２）、１．３７〜１．４５（ｍ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．１９〜１．２８（ｍ、３Ｈ、エステルＣＨ３）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐ビニルピロリジン‐２‐カルボン酸エチルエステル（１７２）
１５mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の５７６mgのセレニルエーテル１７１（１．２２mmol）溶液を０℃に冷却し、０．４mlのピリジンおよび０．８mlのＨ２Ｏ２（３０%）を添加し、一晩攪拌した。次いで濃橙色の溶液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２）を用いて精製し、黄色がかった油状で３１２mgのビニルプロリン１７２（１．１６mmol、９５%）を得た。
Ｍ（Ｃ１４Ｈ２３ＮＯ４）＝２６９．３３６８
Ｒｆ＝０．１０（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２）．
１Ｈ‐ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ(ppm)＝５．６０〜５．９０（ｍ、１Ｈ、ＣＨｏｌｅｆ．、Ｈ‐１'）、４．９２〜５．３８（ｍ、２Ｈ、ＣＨ２，ｏｌｅｆ．、Ｈ‐２'）、４．０２〜４．５５（ｍ、４Ｈ、Ｈ‐２、Ｈ５、エステルＣＨ２）、１．６６〜２．２５（ｍ、４Ｈ、Ｈ‐３、Ｈ‐４）、１．３５、１．３４（２ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．２２（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝９Hz、エステルＣＨ３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７２．９８、１７２．９１、１７２．７９（エステルＣ＝Ｏ）、１５３．４７、１５３．２８、１５３．２７（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、１３８．９０、１３８．３２、１３８．１２、１３７．７９（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐１'）、１１４．９０、１１４．６４、１１３．９０、１１３．６９（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．、Ｃ‐２'）、７９．８６、７９．８１、７９．７０（ＢｏｃＣｑ）、６０．７４（エステルＣＨ２）、６０．５２、６０．２２、５９．９１、５９．６１、５９．５３、５９．３３、５９．１８（２×ＣＨ、Ｃ‐２、Ｃ‐５）、３１．４７、３１．０１、３０．８４、３０．６９、３０．４６、３０．１１、２９．８３、２９．０３、２８．７９、２７．２１（２×ＣＨ２、Ｃ‐３、Ｃ‐４）、２８．１８（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、１４．１７、１４．０７（エステルＣＨ３）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）=３０７８（ｗ）、２９７５（ｍ）、２９２８（ｍ）、１７４４（ｖｓ）、１６９２（ｖｓ）、１６４３（ｗ）、１４７７（ｍ）、１４５４（ｍ）、１３８３（ｖｓ）、１３６４（ｖｓ）、１２８４（ｓ）、１２５４（ｓ）、１１５７（ｖｓ）、１１１０（ｖｓ）、１０６８（ｍ）、１０３１（ｓ）、９９１（ｍ）、９１３（ｓ）、８５９（ｓ）、７６９（ｓ）、６８０（ｗ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２６９（［Ｍ＋］、＜１）、２１３（４）、１９６（１１）、１６８（８）、１４０（６０）、９６（１００）、７９（８）、６７（８）、５７（７７）
［α］Ｄ ２０＝−５６．２°（ｃ＝１．１３、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐５‐ビニルピロリジン‐２‐カルボン酸エチルエステル（１７４）
１３０mgの１７２（０．４６mmol）を３mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、０℃に冷却し、９０μlのＴＭＳＯＴｆ（０．４６６mmol、１．０１eq.）を滴下しながら添加した。１５分後、これに０．５mlの飽和ＮａＨＣＯ３溶液、０．５mlのＨ２Ｏおよび１０mlのＥｔ２Ｏを添加し、バッチをＲＴにした。相を分離した後、有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ２５：１）を用いて精製し、やや黄色がかった油状で５４mgのアミン１７４（０．３２mmol、７０%）を単離した（ジアステレオマーの混合体、シス／トランス＝４：１）。
Ｍ（Ｃ９Ｈ１５ＮＯ２）＝１６９．２２０９
Ｒｆ＝０．１９（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ３／ＭｅＯＨ２５：１）
１Ｈ‐ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマーの混合体）δ（ppm）＝５．６７〜５．８８（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐１'）、５．０７〜５．１８（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２'α）、４．９３〜５．０２（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２'β）、４．０８〜４．１７（ｍ、２Ｈ、エステルＣＨ２）、３．７７〜３．８４（ｍ、０．２Ｈ、Ｈ‐２）、３．６５〜３．７６（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２、Ｈ‐５）、３．５０〜３．６１（ｍ、０．８Ｈ、Ｈ‐５）、２．２２（ｂｒ、１Ｈ、ＮＨ）、１．９８〜２．１８（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐３α，）、１．７５〜１．９６（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐３β）、Ｈ‐４α）、１．３６〜１．５６（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐４β）、１．２２（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．１Hz、エステルＣＨ３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマーの混合体）δ（ppm）＝１７４．９８（エステルＣ＝Ｏ）、１４０．８３、１４０．０７（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐１'）、１１５．０４、１１４．３９（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．、Ｃ‐２'）、６２．１１、６０．７７（ＣＨ、Ｃ‐５）、６０．８８、（エステルＣＨ２）、５９．９３、５９．１５（ＣＨ、Ｃ‐２）、３１．７９（ＣＨ２、Ｃ‐４）、３０．００、２９．３７（ＣＨ２、Ｃ‐３）、１４．１２（エステルＣＨ３）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３３４４（ｂｒ）、３０７８（ｗ）、２９７７（ｍ）、２８６６（ｗ）、１７３０（ｖｓ）、１６３９（ｗ）、１４４６（ｍ）、１３６９（ｍ）、１２７６（ｍ）、１２０８（ｓ）、１１００（ｍ）、１０３５（ｍ）、９９３（ｍ）、９１８（ｍ）、８６１（ｗ）、７５９（ｗ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝１６９（［Ｍ＋］、１）、１４２（１）、９６（１００）、７９（１２）、６８（１１）、５４（３）
ＨＲＭＳ（ＥＩ、Ｃ９Ｈ１５ＮＯ２）： ｃａｌｃ．：１６９．１１０３ 実測値：１６９．１０９
［α］Ｄ ２０＝−３９．８°（ｃ＝１．０６５、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，２'Ｓ，３'Ｒ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐［１'‐（（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐３'‐ビニルピロリジン‐２'‐イル）カルボニル］‐５‐ビニルピロリジン‐２‐カルボン酸エチルエステル（１８０）
２mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の３４mgのカルボン酸１６６（１４１μmol）溶液に２３mgのＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（１７０μmol、１．２eq.）および３３mgのＥＤＡＣ（１７０μmol、１．２eq.）を０℃で添加し、該混合物を１５分間攪拌し、ＨＯＢｔを溶解した。その後、５０mgのアンモニウム塩１７３（１７７μmol、１．２５eq.）および２５μlのＮＥｔ３（１７０μmol、１．２eq.）を添加し、バッチを一晩攪拌した。精密試験では、１０mlのＭＴＢＥで反応混合物を希釈し、少量の飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で洗浄し、有機相をＭｇＳＯ４で乾燥した。濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：１）を用いて残渣を精製し、無色油状で４０mg（１０１μmol、７２%）のジペプチド１８０を得た。
Ｍ（Ｃ２１Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）＝３９２．４８９３
Ｒｆ＝０．３５（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：１）
１Ｈ-ＮＭＲ（２５０MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝５．８２〜６．０３（ｍ、１Ｈ、ＣＨｏｌｅｆ．）、５．６２〜５．８２（ｍ、１Ｈ、ＣＨｏｌｅｆ．）、５．３７〜５．４９（ｍ、１Ｈ、ＣＨ２，ｏｌｅｆ．）、４．８９〜５．２０（ｍ、３Ｈ、ＣＨ２，ｏｌｅｆ．）、４．４２〜４．６３（ｍ、１Ｈ）、４．１０〜４．２８（ｍ、３Ｈ）、３．３２〜３．７３（ｍ、２Ｈ）、２．７６〜２．９３（ｂｒ、１Ｈ）、１．６０〜２．５０（ｍ、７Ｈ）、１．４０、１．３９（２ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．２４（ｄｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．１Hz、Ｊ＝３．１Hz、エステルＣＨ３）
（３ａＳ，５Ｓ，７ａＲ／Ｓ，９ａＲ）‐３‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐４‐オキソ‐１，３ａ，４，５，６，７，７ａ，９ａ‐オクタヒドロ‐２Ｈ‐３，４ａ‐ジアザシクロペンタ［ｆ］アズレン‐５‐カルボン酸エチルエステル（１８１）
１８mgのジペプチド１８０（４５．８μmol）を２mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、２．０mgの［Ｒｕ］ｇｒ（３．０μmol、約６モル%）を添加し、４０℃で一晩還流した。ＴＬＣ（ＥＥ／ＣＨ２：１）により反応が完全に完了したことを確認した後、溶液をＲＴにし、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ２：１）を用いて褐色の残渣を精製し、やや茶色がかった油状で１１mgのメタセシス生成物１８１（３０．２μmol、６６%）を得た。
Ｍ（Ｃ１９Ｈ２８Ｎ２Ｏ５）＝３６４．４３６１
Ｒｆ＝０．１７（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ２：１）
１Ｈ-ＮＭＲ（５００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝５．８０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．２Hz、Ｊ＝１．７Hz、Ｈ‐８）、５．５３（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．２Hz、Ｊ＝１．６Hz、Ｈ‐７）、４．７７（ｄｄ、０．６Ｈ、Ｊ＝７．２Hz、Ｊ＝３．１Hz、Ｈ‐５）、４．６７（ｂｒ、１．４Ｈ、Ｈ‐５、Ｈ‐７ａ）、４．３４（ｄ、０．７Ｈ、Ｊ＝１０．８Hz、Ｈ‐３ａ）、４．２８（ｄ、０．３Ｈ、Ｊ＝１０．７Hz、Ｈ‐３ａ）、４．１０（ｍ、２Ｈ、エステルＣＨ２）、３．７３（ｄｄ、０．４Ｈ、Ｊ＝１０．６Hz、Ｊ＝８．２Hz、Ｈ‐２α）、３．６５（ｄｄ、０．６Ｈ、Ｊ＝１０．６Hz、Ｊ＝８．１Hz、Ｈ‐２α）、３．３６（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１５．５Hz、Ｊ＝１０．６Hz、Ｊ＝４．８Hz、Ｈ‐２β）、２．２８（ｂｒ、１Ｈ、Ｈ‐６／Ｈ‐７）、２．０２（ｍ、３Ｈ、Ｈ‐１α、Ｈ‐６／Ｈ‐７）、１．８６（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐６／Ｈ‐７）、１．６１（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐１β）、１．４４、１．３８（２ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．２１（ｍ、３Ｈ、エステルＣＨ３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（１２５MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝１７１．９８（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４３（Ｃ＝Ｏ）、１４６．９１（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、１２９．４３、１２９．１７（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐９）、１２９．０５、１２８．７０（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐８）、７９．６９（ＢｏｃＣｑ）、６２．３１、６２．０９（ＣＨ、Ｃ‐３ａ）、６１．１７、６１．０３（エステルＣＨ２）、５９．６１、５９．５３（ＣＨ、Ｃ‐５）、５７．２６、５７．１７（ＣＨ、Ｃ‐７ａ）、４６．８７、４６．２７（ＣＨ２、Ｃ‐２）、３３．０９（ＣＨ２、Ｃ‐６／Ｃ‐７）、３１．２９、３０．８１（ＣＨ２、Ｃ‐１）、２８．４４、２８．１５（ＣＨ３、ｔＢｕ）、２７．２１、２７．０６（ＣＨ２、Ｃ‐６／Ｃ‐７）、１４．１０（エステルＣＨ３）
（２Ｓ）‐５‐オキソピロリジン‐２‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（２０６）
３０．０gのＬ‐ピログルタミン酸１３３（２３２mmol）を５００mlのｔｅｒｔ‐酢酸ブチルに懸濁し、１２mlの６０%過塩素酸を添加した。ＲＴで１５時間攪拌した後、得られた透明な溶液を０℃に冷却し、３０．０gの固体ＮａＨＣＯ３を添加することでｐＨ値を４〜５に調整した。ろ過で固体を除去した後、ろ液を濃縮して乾燥し、白色固体状で２５．４g（１３６mmol、５８%）のｔｅｒｔ‐ブチルエステル２０６を得、それをさらに精製することなく反応させた。シリカゲルによるカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ＥＥ）により分析試料を得た。
Ｍ（Ｃ９Ｈ１５ＮＯ３）＝１８５．２２０３
Ｒｆ＝０．２５（ＳｉＯ２、ＥＥ）
ｍ．ｐ．：９７〜９８℃ 文献：９８〜９９℃
１Ｈ-ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝６．１３（ｂｒ、１Ｈ、ＮＨ）、４．０６〜４．１４（ｍ、１Ｈ，Ｈ‐２）、２．２２〜２．４３（ｍ、３Ｈ、Ｈ‐３α、Ｈ‐４）２．０４〜２．２０（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐３β）、１．４４（ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝１７７．９７（ラクタムＣ＝Ｏ）、１７１．０７（エステルＣ＝Ｏ）、８２．１８（ＢｏｃＣｑ）、５６．０７（ＣＨ、Ｃ‐２）、２９．３４（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２７．８７（ＣＨ３ ＯｔＢｕ）、２４．７５（ＣＨ２、Ｃ‐３）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３２３９（ｂｒ）、２９７６（ｓ）、２９３４（ｍ）、１７３１（ｖｓ）、１６９５（ｖｓ）、１４５７（ｓ）、１４１９（ｓ）、１３９２（ｓ）、１３６６（ｖｓ）、１２２７（ｖｓ）、１１４７（ｖｓ）、１０３７（ｍ）、１００９（ｍ）、９７１（ｍ）、９５３（ｍ）、８８５（ｗ）、８４５（ｓ）、８１０（ｓ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ−ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝１８６（［ＭＨ＋］、＜１）、１４２（＜１）、８４（１００）、５７（３８）
（２Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐オキソピロリジン‐２‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（４４）
２００mlの無水アセトニトリル中の２０．０gのラクタム２０６（１０８mmol）溶液に０℃で２５．６mlのＢｏｃ２Ｏ（１２０mmol、１．１eq.）および１００mgのＤＭＡＰ（０．８１mmol、０．７５モル%）を０℃で添加し、次いでＲＴで一晩攪拌した。このとき溶液は濃橙色を呈していた。精密試験のため、溶液を濃縮して乾燥し、残基を２５０mlの酢酸エチル／シクロヘキサンの１：１混合物に取り入れ、短いシリカゲルカラムでろ過した。真空下で溶媒を除去し、黄色がかった油状の残基を得、これをジエチルエーテル／ペンタンから結晶化し、微小な白色結晶の形態で２５．９gのＮ‐Ｂｏｃ‐ラクタム４４（９０．７mmol、８４%）を得た。
Ｍ（Ｃ１４Ｈ２３ＮＯ５）＝２８５．３３６２
Ｒｆ＝０．２０（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：２）
ｍ．ｐ．：５２〜５３℃ 文献：５５〜５６℃
１Ｈ‐ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝４．４５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．３Hz、Ｊ＝２．６Hz、Ｈ‐２）、２．１７〜２．６６（ｍ、３Ｈ、Ｈ‐３α、Ｈ‐４）、１．９〜２．０（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐３β）、１．４８（ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．４６（ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝１７３．２７（ラクタムＣ＝Ｏ）、１７０．０７（エステルＣ＝Ｏ）、１４８．９４（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、８２．８４（Ｃｑ、ｔＢｕ）、８１．８６（Ｃｑ、ｔＢｕ）、５９．２５（ＣＨ、Ｃ‐２）、３０．７８（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２７．５９（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、２１．３０（ＣＨ２、Ｃ‐３）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝２９７７（ｓ）、２９３１（ｍ）、１７９０（ｖｓ）、１７３８（ｖｓ）、１７１５（ｖｓ）、１４７６（ｍ）、１４５７（ｍ）、１３９２（ｍ）、１３６７（ｖｓ）、１３０７（ｖｓ）、１２８５（ｖｓ）、１２５４（ｖｓ）、１２２３（ｓ）、１１４８（ｖｓ）、１０４５（ｍ）、１０２１（ｍ）、９６２（ｗ）、９１２（ｗ）、８４２（ｓ）、７７４（ｍ）、６４３（ｗ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２７０（［Ｍ＋‐ＣＨ３］、６）、２３９（４）、２２７（９）、２０７（４）、１８５（３）、１７１（６）、１５３（２）、１４３（１５）、１２９（５）、１０１（４）、９７（７）、８７（７２）、７４（１００）、５７（１２）、５５（１４）
［α］Ｄ ２０＝−３５．３°（ｃ＝１．１６７、ＣＨＣｌ３） 文献：−３５．７°（ｃ＝０．９、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐ヒドロキシピロリジン‐２‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（２０７）
１５０mlの無水ＴＨＦ中の１３．０g（４５．６mmol）の４４溶液に１００mlのＤＩＢＡＬ‐Ｈ（１M／ヘキサン、１００mmol、２．２eq.）を−７８℃で３０分以上、滴下しながら添加し、添加が完了した後、溶液を２時間以上攪拌した。その後、７mlのイソプロパノールを添加して（水素発生）過剰な試薬を破棄した。これに２００mlの酒石酸Ｋ‐Ｎａ溶液（１．７７M）を添加し、次に一晩ＲＴまで解凍した。次いでバッチを分液漏斗に移し、３００mlのＭＴＢＥおよび１００mlの水で希釈した。相を分離した後、水相を２×１００mlのＭＴＢＥで抽出し、次に混合有機相をＭｇＳＯ４で乾燥した。短いシリカゲルカラムでろ過した後、真空下で溶媒を除去し、無色油状で１２．２gのα‐ヒドロキシカルバメート２０７（４２．３mmol、９３%）を得、これを精製せずさらに反応させた。分析試料をシリカゲルに通すカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：２）により得た。
Ｍ（Ｃ１４Ｈ２５ＮＯ５）＝２８７．３５２０
Ｒｆ＝０．１４／０．２８（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：２）、２ジアステレオマー
１Ｈ-ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝５．３７〜５．６０（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐５）、４．０２〜４．２５（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２）、３．７５（ｂｒ、０．４Ｈ、ＯＨ）、３．５２（ｂｒ、０．４Ｈ、ＯＨ）、３．１４（ｂｒ、０．２Ｈ、ＯＨ）、１．７３〜２．４８（ｍ、４Ｈ、Ｈ‐３、Ｈ‐４）、１．３５〜１．４５（ｍ、１８Ｍ、２×ｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７２．０６、１７１．５３（エステルＣ＝Ｏ）、１５４．２１、１５３８３（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、８２．３８、８２．０９、８１．７８（ＣＨ、Ｃ‐５）、８１．１５、８０．９４、８０．６１、８０．５５（Ｃｑ、２×ｔＢｕ）、５９．９１、５９．８２（ＣＨ、Ｃ‐２）、３３．５１、３２．１７、３１．７４、３０．８７（Ｃ‐４）、２８．３３、２８．１８、２７．８７（ＣＨ３、２×ｔＢｕ）、２７．７７、２６．９９、２６．８１（ＣＨ２、Ｃ‐３）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３４６０（ｂｒ）、２９７４（ｍ）、２９２８（ｗ）、１７４０（ｓ）、１７０１（ｖｓ）、１４７７（ｍ）、１４５４（ｍ）、１３６５（ｖｓ）、１３２５（ｍ）、１２５５（ｍ）、１２２０（ｍ）、１１４９（ｖｓ）、１０８０（ｍ）、１０６１（ｍ）、１０４２（ｍ）、１００９（ｍ）、９７３（ｍ）、９１４（ｍ）、８４３（ｍ）、７７４（ｍ）、７５８（ｍ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝１８６（２）、１５８（２）、１３０（１２）、８６（１８）、６８（７）、５７（４３）、４１（１００）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐エトキシピロリジン‐２‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（４５）
１００mlの無水ＥｔＯＨ中の１２．１gの２０７（４２．１mmol）溶液に、２００mgのＰＰＴＳ（０．８０mmol、１．９モル%）を添加し、ＲＴで一晩攪拌した。その後、溶媒を真空下で完全に除去し、残渣を２５０mlのＥＥ／ＣＨの１：２混合液に取り入れた。短いシリカゲルカラムでろ過した後、溶出液を濃縮し、やや黄色がかった油状で１２．８gのα‐メトキシカルバメート４５（４０．５mmol、９６%）を得た。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：２）により分析試料を得た。
Ｍ（Ｃ１６Ｈ２９ＮＯ５）＝３１５．４０５２
Ｒｆ＝０．３９／０．５２（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：２）、２つのジアステレオマー
１Ｈ-ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝５．３４（ｄ、０．３５Ｈ、Ｊ＝４．７Hz、Ｈ‐５）、５．３０（ｄ、０．３５Ｈ、Ｊ＝４．７Hz、Ｈ‐５）、５．２１（ｄ、０．１Ｈ、Ｊ＝４．４Hz、Ｈ‐５）、５．１４（ｄ、０．２Ｈ、Ｊ＝４．９Hz、Ｈ‐５）、４．０２〜４．２３（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２）、３．３８〜３．８０（ｍ、２Ｈ、エチルＣＨ２）、１．５８〜２．４８（ｍ、４Ｈ、Ｈ‐３、Ｈ‐４）、１．３５〜１．４５（ｍ、１８Ｈ、２×ＯｔＢｕ）、１．０８〜１．１６（ｍ、３Ｈ、エチルＣＨ３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）１７１．７７、１７１．６８、１７１．４９（エステルＣ＝Ｏ）、１５４．４４、１５４．１７、１５３．７９（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、８７．８６、８６．９６、８６．８４（ＣＨ、Ｃ‐５）、８０．８６、８０．５７、８０．２５、８０．１６（Ｃｑ、２×ｔＢｕ）、６４．１０、６３．４７、６２．８３、６２．２７（エチルＣＨ２）、６０．３１、５９．９５、５９．８２（ＣＨ、Ｃ‐２）、３３．０７、３２．３８、３１．３３、３０．３９、２７．０４、２６．９２（ＣＨ２、Ｃ‐３、Ｃ‐４）、２８．２６、２８．１８、２８．１４、２７．９２、２７．８４（ＣＨ３、２×ｔＢｕ）、１５．４１、１５．１８（エチルＣＨ３）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝２９７３（ｓ）、２９２９（ｍ）、２８７３（ｗ）、１７３９（ｓ）、１７００（ｖｓ）、１４７７（ｍ）、１４５５（ｍ）、１３６３（ｖｓ）、１３２６（ｓ）、１２５５（ｓ）、１２１９（ｓ）、１１５０（ｖｓ）、１１２１（ｖｓ）、１０７８（ｖｓ）、１０３１（ｍ）、９９７（ｍ）、９７１（ｓ）、９４５（ｍ）、８９２（ｗ）、８４２（ｓ）、７７２（ｍ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２７０（［Ｍ＋‐ＯＥｔ］、２）、２１４（１２）、１８６（４）、１７０（６）、１５８（１５）、１４２（４）、１１４（１００）、９６（２）、８４（２）、６８（４０）、５７（７９）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐５‐アリル‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）ピロリジン‐２‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（４６）
１００mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の１２．６gのα‐メトキシカルバメート４５（４０．０mmol）および１６．０mlのアリルトリメチルシラン（１００mmol、２．５eq.）溶液を−７８℃に冷却し、１０．１mlのＢＦ３・ＯＥｔ２（８０．０mmol、２eq.）を滴下しながら添加した。添加を完了した後、攪拌を３０分間続け、ＴＬＣ（ＥＥ／ＣＨ１：９）により反応が完了したことを確認した。その後、１０mlの飽和ＮａＯＨ３溶液を添加し、バッチをＲＴにした。２００mlのＭＴＢＥとともに分液ロートに移した後、相を分離し、２×１００mlのＭＴＢＥで水相を抽出した。混合有機相を１００mlの半濃縮ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：９）を用いて残渣を精製し、無色油状で９．６２gのアリル置換生成物４６（３０．９mmol、７７%）を得た（エピマーの混合体、シス／トランス＝７５：２５）。
Ｍ（Ｃ１７Ｈ２９ＮＯ４）＝３１１．４１６５
Ｒｆ＝０．３０（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：９）
１Ｈ‐ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝５．７２（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２'ｏｌｅｆ．）、５．０１（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐３'ｏｌｅｆ．）、４．０８（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２／Ｈ‐５）、３．８２（ｂｒ，１Ｈ、Ｈ‐２／Ｈ‐５）、２．３１〜２．７６（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐１'α）、１．５５〜２．２２（ｍ、５Ｈ、Ｈ‐１'β、Ｈ‐３、Ｈ‐４）、１．４０（ｍ、１８Ｈ、２×ｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７２．３３、１７２．１３、１７２．０４（エステルＣ＝Ｏ）、１５４．２４、１５３．９０、１５３．７５、１５３．６３（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、１３５．４８、１３５．１９、１３５．１２（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ−２'）、１１７．０４、１１６．９９、１１６．６３（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．、Ｃ‐３'）、８０．７２、８０．６６（Ｃｑ、ｔＢｕ）、７９．６２、７９．５０（Ｃｑ、ｔＢｕ）、６０．７４、６０．５８（ＣＨ、Ｃ‐２／Ｃ‐５）、５８．０６、５７．４２（ＣＨ、Ｃ‐２／Ｃ‐５）、３９．１１、３８．９７、３８．１４、３８．１０（ＣＨ２、Ｃ‐１'）、２９．３４、２８．８０、２８．４２（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）、２８．３１、２８．２５（ＣＨ３、ｔＢｕ）、２７．９３、２７．８６（ＣＨ３、ｔＢｕ）、２７．４２、２６．６２（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）=３０７５（ｗ）、２９７３（ｓ）、２９２９（ｍ）、１７３９（ｖｓ）、１６９５（ｖｓ）、１６３９（ｍ）、１４７７（ｓ）、１４５４（ｓ）、１３８７（ｖｓ）、１３６３（ｖｓ）、１２９４（ｓ）、１２５５（ｓ）、１２１６（ｓ）、１１４９（ｖｓ）、１１０３（ｖｓ）、１０３１（ｓ）、９９５（ｓ）、９６９（ｓ）、９４８（ｓ）、９１０（ｖｓ）、８５６（ｓ）、８４２（ｓ）、７７１（ｓ）、６３３（ｍ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２７０（［Ｍ＋‐Ｃ３Ｈ５］、８）、２１０（５）、１８２（８）、１７０（２９）、１５４（６１）、１１４（１００）、１１０（４０）、９６（３）、６８（２１）、５７（８１）
［α］Ｄ ２０＝−３４．６°（ｃ＝０．９８５、ＣＨＣｌ３） 文献：シス：−２４．３°（ｃ＝４．３６、ＣＨＣｌ３）、トランス：−６９．３°（ｃ＝１．０７、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐（２‐ヒドロキシエチル）ピロリジン‐２‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（１８４）
３８mlのＣＨ２Ｃｌ２および７５mlのＭｅＯＨの混合液中の４．５０gの４６（１４．５mmol）溶液に−７８℃で、青色を呈するまでオゾンを通した。次に反応を停止し、酸素浄化により過剰オゾンを除去した。その後、その無色反応溶液に１．１０gのＮａＢＨ４（２８．９mmol、２eq.）を添加し、一晩攪拌し、ＲＴまで解凍した。薄層クロマトグラム（ＥＥ／ＣＨ１：２）により反応が完了したことを確認した後、バッチを濃縮し、乾燥し、２００mlのＭＴＢＥに取り入れ、少量のシリカゲルでろ過した。その濃縮した残渣をシリカゲルでのクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：２）を用いて精製し、無色油状で３．９６gのアルコール１８４（１２．６mmol、８７%）を単離した（エピマーの混合体）。
Ｍ（Ｃ１６Ｈ２９ＮＯ５）＝３１５．４０５２
Ｒｆ＝０．２２（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：２）
１Ｈ-ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ(ppm)＝３．９２〜４．３４（ｍ、３Ｈ、Ｈ‐２、Ｈ‐５、ＯＨ）、３．４５〜３．８０（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐２'）、１．４９〜２．３９（６Ｈ、ｍ、Ｈ‐３、Ｈ‐４、Ｈ‐１'）、１．４０、１．４１、１．４２、１．４３（４ｓ、１８Ｈ、２×ｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７２．２１（エステルＣ＝Ｏ）、１５５．８６、１５５．５４（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、８１．０３、８０．９８、８０．６７、８０．４９（ＢｏｃＣｑ）、６０．７６、６０．６８（ＣＨ、Ｃ‐２）、５９．０５、５８．８５（ＣＨ２、Ｃ‐２'）、５４．５８、５４．２０（ＣＨ、Ｃ‐５）、３９．１１、３７．５４（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）、３０．４１、２９．０７、２８．９４、２８．７７（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）、２８．２３、２７．９６（ＣＨ３、２×ｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）=３４５２（ｂｒ）、２９７３（ｓ）、２９３４（ｍ）、２８７７（ｍ）、１７３７（ｖｓ）、１６７３（ｖｓ）、１４７７（ｓ）、１４５４（ｓ）、１３９０（ｖｓ）、１３６４（ｖｓ）、１３４０（ｓ）、１２９７（ｓ）、１２５５（ｓ）、１２１５（ｓ）、１１５０（ｖｓ）、１１１６（ｖｓ）、１０６９（ｓ）、９８７（ｓ）、９２８（ｍ）、８９９（ｍ）、８８４（ｍ）、８５４（ｍ）、８４０（ｍ）、７７２（ｍ）、７３６（ｍ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝３１５（［Ｍ＋］、＜１）、２１４（１３）、１８６（４）、１５８（１０）、１１４（１００）、６８（８）、５７（４９）。
［α］Ｄ ２０＝−４３．３°（ｃ＝０．９１５、ＣＨＣｌ３） 文献：シス：−４８．２°（ｃ＝０．５１、ＣＨＣｌ３）、トランス：−３１．２°（ｃ＝１．１２、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５［２‐（２‐ニトロフェニルセラニル）エチル］ピロリジン‐２‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（４７）
５０mlの無水ＴＨＦおよび１７mlの無水ピリジン中の４．１８gのアルコール１８４（１３．３mmol）溶液に３．３１gのオルト‐ニトロフェニルセレノシアネート（１４．６mmol、１．１eq.）を添加した。氷浴中で冷却しながら４．３０mlのトリ‐ｎ‐ブチルホスフィン（１７．３mmol、１．３eq.）をゆっくりと滴下で添加したところ、暗赤色の溶液が得られた。ＲＴで３０分間攪拌した後、バッチを２００mlのＭＴＢＥで希釈し、少量のシリカゲルでろ過した。ろ液を濃縮し、褐色に近い黄色残渣を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：４）を用いて精製し、濃黄色油状で６．０６gのセレニルエーテル４７（１２．１mmol、９２%）を単離した。
Ｍ（Ｃ２２Ｈ３２Ｎ２Ｏ６Ｓｅ）＝４９９．４５９４
Ｒｆ＝０．１４（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：４）
１Ｈ‐ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝８．２０〜８．２８(ｍ、１Ｈ、ＰｈＨ)、７．４３〜７．６７（ｍ、２Ｈ、ＰｈＨ）、７．２０〜７．３３（ｍ、１Ｈ、ＰｈＨ）、３．９２〜４．３３（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐２、Ｈ‐５）、２．７３〜３．１２（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐１'／Ｈ‐２'）、１．６０〜２．３２（ｍ、６Ｈ、Ｈ‐３、Ｈ‐４、Ｈ‐１'／Ｈ‐２'）、１．４４、１．４３、１．４２、１．４０（４ｓ、１８Ｈ、２×ｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ （７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７２．２８、１７１．９４（エステルＣ＝Ｏ）、１５４．１９、１５４．１５（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、１４６．６８（Ｃｑ，ａｒ）、１３３．８２（Ｃｑ，ａｒ）、１３３．６０（ＣＨａｒ）、１２９．９５、１２９．８５、１２９．２１、１２８．９９、１２８．６７（ＣＨａｒ）、１２６．２９、１２５．２２、１２５．０６（ＣＨａｒ）、８０．９９、８０．９１（Ｃｑ、ｔＢｕ）、８０．０９、７９．９４、７９．８６（Ｃｑ、ｔＢｕ）、６０．６０、６０．４３（ＣＨ、Ｃ‐２／Ｃ‐５）、５８．６２、５８．２９、５７．８３（ＣＨ、Ｃ‐２／Ｃ‐５）、３４．００、３３．５５、３３．３４（ＣＨ２）、３０．３３、２９．９３（ＣＨ２）、２８．９９、２８．７４（ＣＨ２）、２８．４０、２８．２９（ＣＨ３、ｔＢｕ）、２７．９６（ＣＨ３、ｔＢｕ）、２７．８３、２７．６４（ＣＨ２）、２２．９５、２２．７５、２２．５３（ＣＨ２）
（２Ｓ，５Ｒ／Ｓ）‐１‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐５‐ビニルピロリジン‐２‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（１８５）
１５０mlのＣＨ２Ｃｌ２中の５．８０gのセレニルエーテル４７（１１．６mmol）溶液に−７８℃で、緑色を呈するまでオゾンを通した。次に反応を停止し、１‐ヘキサン（総量３０ml）を添加して過剰オゾンを除去した。このとき溶液の色は緑から黄色に変化した。室温にもどさず、その後バッチを２００mlのヘキサンに５０℃で滴下しながら添加し、次いで加熱し、３０分間還流した。橙色溶液を濃縮し、濃橙色残渣をダブルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ１００：１、その後ＥＥ／ＣＨ１：７）で精製し、黄色油状で３．１４gのオレフィン１８５（１０．６mmol、９０%）を得た（エピマーの混合体）。
Ｍ（Ｃ１６Ｈ２７ＮＯ４）＝２９７．３８９９
Ｒｆ＝０．２４（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：７）
１Ｈ‐ＮＭＲ（３００MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝５．６２〜５．９４（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐１'）、４．９６〜５．４２（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐２'）、４．０５〜４．５５（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐２、Ｈ‐５）、１．６０〜２．２２（ｍ、４Ｈ、Ｈ‐３、Ｈ‐４）、１．４５、１．４３（２ｓ、９Ｈ、ｔＢｕ）、１．４１（ｂｒ、９Ｈ、ｔＢｕ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（ジアステレオマー／回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７２．０５、１７１．９９、１７１．９２（エステルＣ＝Ｏ）、１５４．２４、１５４．０８、１５３．６６、１５３．５４（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、１３９．２１、１３８．６０、１３８．４６、１３８．０３（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐１'）、１１４．８８、１１４．５２、１１３．７７、１１３．６０（ＣＨ２,ｏｌｅｆ．、Ｃ‐２'）、８０．７９、７９．８０、７９．６７（ＢｏｃＣｑ）、６０．９５、６０．４９、６０．３０、６０．１４、５９．５８、５９．３２（ＣＨ、Ｃ‐２、Ｃ‐５）、３１．５１、３０．８１、２９．８８、２８．９５（ＣＨ２ Ｃ‐３／Ｃ‐４）、２８．２８（ＣＨ３、ｔＢｕ）、２７．９４（ＣＨ３、ｔＢｕ）、２７．２９（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）=３０７７（ｗ）、２９７４（ｓ）、２９２８（ｍ）、２８７３（ｗ）、１７３９（ｖｓ）、１６９６（ｖｓ）、１６４３（ｗ）、１４７７（ｍ）、１４５４（ｍ）、１３８７（ｖｓ）、１３６４（ｖｓ）、１３２５（ｍ）、１２９３（ｍ）、１２５５（ｓ）、１２１４（ｓ）、１１５０（ｖｓ）、１０６７（ｍ）、１０２４（ｗ）、９８８（ｍ）、９５７（ｍ）、９１２（ｓ）、８７５（ｗ）、８５６（ｍ）、８４３（ｍ）、７７０（ｍ）、６８５（ｗ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２９７（［Ｍ＋］、＜１）、２４１（２）、２２４（１）、１９６（２８）、１６８（９）、１４０（１００）、１１４（２）、９６（８２）、７９（５）、６７（６）、５７（８３）
［α］Ｄ ２０＝−５４．６°（ｃ＝０．９３５、ＣＨＣｌ３） 文献：シス：−５６．０°（ｃ＝１．１、ＣＨＣｌ３）、トランス：−５０．６°（ｃ＝０．７７、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，５Ｒ）‐５‐ビニルピロリジン‐２‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（１８６ａ）
１０mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の８００mgの１８５（２．６９mmol）溶液に０．５３mlのＴＭＳＯＴｆ（２．７４mmol、１．０１eq.）を０℃で滴下しながら添加した。５分後にＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ２５：１）を使用し反応の完了を確認し、２mlの飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加して反応溶液を失活させた。精密試験では、５０mlのＥｔ２Ｏで有機相を希釈し、水相から分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。シリカゲルで注意深くクロマトグラフィー（２５：１のＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）を行い、残渣を精製し、最初にトランス異性体を溶出し、直後に所望のシス異性体を溶出した。１０４mgの混合画分（０．５３ ５mmol、２０%）および２７０mgの純粋シス異性体（１．３７mmol、５１%）を、各々やや黄色がかった油状の形態で単離した。
Ｍ（Ｃ１１Ｈ１９ＮＯ２）＝１９７．２７４１
Ｒｆ＝０．１６／０．２２（シス／トランス異性体、ＳｉＯ２、ＣＨ２ＣＬ２／ＭｅＯＨ ２５：１）
１Ｈ-ＮＭＲ（５００MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝５．８２（ｄｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．２Hz、Ｊ＝１０．２Hz、Ｊ＝７．１Hz、Ｈ‐１'）、５．１３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．１Hz、Ｈ‐２'α）、４．９９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．０Hz、Ｈ‐２'β）、３．６１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．４Hz、Ｊ＝５．８Hz、Ｈ‐２）、３．５４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１４．０Hz、Ｊ＝７．０Hz、Ｈ‐５）、２．１０（ｓ、１Ｈ、ＮＨ）、１．９８〜２．０８（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐３α）、１．８１〜１．９１（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐３β、Ｈ‐４α）１．４４（ｓ、１０Ｈ、Ｈ‐４β、ｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（１２５MHz、ＣＤＣｌ３）：δ（ppm）＝１７４．４６（Ｃ＝Ｏ）、１４０．２３（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐１'）、１１４．９７（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．、Ｃ‐２'）、８０．９７（Ｃｑ、ｔＢｕ）、６２．２４（ＣＨ、Ｃ‐５）、６０．７６（ＣＨ、Ｃ‐２）、３１．９２（ＣＨ２、Ｃ‐４）、３０．３９（Ｃ‐３）、２８．０３（ＣＨ３ｔＢｕ）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３０７５（ｗ）、２９７４（ｍ）、２８７０（ｗ）、１７２６（ｖｓ）、１６４０（ｗ）、１４７７（ｗ）、１４５７（ｗ）、１４２５（ｗ）、１３９１（ｗ）、１３６７（ｓ）、１２８２（ｗ）、１２２６（ｓ）、１１５６（ｖｓ）、１１０２（ｍ）、１０３４（ｗ）、９９１（ｍ）、９１７（ｍ）、８４８（ｍ）、７５７（ｍ）
ＭＳ（ＧＣＭＳ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝１９７（［Ｍ＋］、＜１）、１１４（１）、９６（１００）、７９（１２）、６８（７）、５７（６）
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ、Ｃ１１Ｈ１９ＮＯ２） ｃａｌｃ．：１９８．１４９４、実測値：１９８．１４９
［α］λ ２０＝−３５．８°（５８９nm）、−４１．６°（５４６nm）、−８１．７°（４０５nm）、−１０４．２°（３６５nm）、−１３０．４°（３３４nm）（ｃ＝１．０２５、ＣＨＣｌ３）
（２Ｓ，２'Ｓ，３'Ｒ，５Ｒ）‐５‐ビニル‐１‐［１'‐（（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐３'‐ビニルピロリジン‐２‐イル）‐カルボニル］ピロリジン‐２‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（１８７）
５mlの無水アセトニトリル中の２００mgのカルボン酸１６６（０．８３mmol、１eq.）および２００mgのアミン１８６ａ（１．０１mmol、１．２４eq.）溶液に、５mlの無水アセトニトリル中の５１２mgのＰｙＢＯＰ（０．９８mmol、１．１９eq.）溶液を０℃で添加し、次にＤＩＰＥＡ（１．０３mmol、１．２４eq.）を添加した。室温で一晩攪拌した後、溶媒を完全に除去し、残渣を２０mlのＭＴＢＥおよび５mlの水に取り入れた。相を分離した後、次に水相をＭＴＢＥ（３×３ml）で抽出し、混合有機相をＭｇＳＯ４で乾燥した。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィーにより、無色油状で２８２mgのジペプチド１８７（０．６７mmol、８１%）を得た。
Ｍ（Ｃ２３Ｈ３６Ｎ２Ｏ５）＝４２０．５４２４
Ｒｆ＝０．１９（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：３）
１Ｈ‐ＮＭＲ（５００MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝５．９１（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐６）、５．７０（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐６'）、５．４０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１７．２Hz、Ｊ＝５．４Hz、Ｈ‐７α）、５．１１（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐７β）、４．９９（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐７'）、４．８７（ｔ、０．６Ｈ、Ｊ＝６．３Hz、Ｈ‐５）、４．５４（ｔ、０．４Ｈ、Ｊ＝６．３Hz、Ｈ‐５）、４．３６（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Hz、Ｈ‐２）、４．２４（ｄ、０．６Ｈ、Ｊ＝２．１Hz、Ｈ‐２'）、４．１５（ｓ、ｂｒ、０．４Ｈ、Ｈ‐２'）、３．６６（ｍ、０．４Ｈ、Ｈ‐５α'）、３．５３（ｍ、０．６Ｈ、Ｈ‐５α'）、３．３７（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐５β'）、２．８２（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐３'）、２．３７（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐４α'）、１．７２〜２．２３（ｍ、４Ｈ、Ｈ‐３、Ｈ‐４）、１．６６（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐４β'）、１．４４、１．４３（２ｓ、９Ｈ、ｔＢｕ）、１．３９、１．３８（２ｓ、９Ｈ、ｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（７５MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７２．２６、１７２．１５（Ｃ＝Ｏ）、１７１．３０、１７１．０５(Ｃ＝Ｏ)、１５４．４５、１５３．６３（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、１３９．０５（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐６）、１３８．６８（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐６'）、１１６．７６／１１６．３７（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．、Ｃ‐７）、１１４．６４、１１４．６１（ＣＨ２，ｏｌｅｆ．、Ｃ‐７'）、８１．１７、８０．８５（Ｃｑ）、７９．５８、７９．３４（Ｃｑ）、６１．７９、６１．５７（ＣＨ、Ｃ‐２'）、６１．０４（ＣＨ、Ｃ‐２）、６０．９１、６０．８０（ＣＨ、Ｃ‐５）、４６．９５、４６．１８（ＣＨ、Ｃ‐３）、４５．９０、４５．５６（ＣＨ２、Ｃ‐５'）、３２．８１、３２．５８（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）、２９．６６（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２８．５２、２８．４７（ＣＨ３ｔＢｕ）、２８．３７（ＣＨ２、Ｃ‐４）、２７．９６（ＣＨ３ｔＢｕ）、２６．９９、２６．９６（ＣＨ２、Ｃ‐３／Ｃ‐４）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）=３０７９（ｗ）、２９７３（ｓ）、２９３０（ｍ）、２８７６（ｍ）、１７３７（ｓ）、１６９０（ｖｓ）、１６５６（ｖｓ）、１４７７（ｍ）、１３９０（ｖｓ）、１３６４（ｖｓ）、１３２０（ｍ）、１３０１（ｍ）、１２５５（ｍ）、１２１２（ｍ）、１１５５（ｖｓ）、１１１６（ｓ）、１０６７（ｍ）、１０３０（ｍ）、９８７（ｍ）、９１１（ｓ）、８６４（ｍ）、８４１（ｍ）、７７０（ｍ）、７３４（ｍ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝４２０（［Ｍ＋］、＜１）、３４７（４）、３０８（３）、２９１（２）、２６３（５）、２２２（５）、１９６（１１）、１６８（６）、１４０（１００）、１２４（３）、９６（９４）、７９（７）、６７（８）、５７（５８）
ＨＲＭＳ（ＥＩ、Ｃ２３Ｈ３６Ｎ２Ｏ５） ｃａｌｃ．：４２０．２６２４、実測値：４２０．２６２
［α］λ ２０＝−６．７°（５８９nm）、−８．３°（５４６nm）、−１８．１°（４０５nm）、−２４．７°（３６５nm）、−３４．０°（３３４nm）（ｃ＝０．７１０、ＣＨＣｌ３）
（３ａＳ，５Ｓ，７ａＲ，９ａＲ）‐３‐（ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル）‐４‐オキソ‐１，２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ，９ａ‐デカヒドロ‐３，４ａ‐ジアザシクロペンタ［ｆ］アズレン‐５‐カルボン酸ｔｅｒｔ‐ブチルエステル（１８８）
８mlの無水ＣＨ２Ｃｌ２中の２５０mgのジペプチド１８７（０．５９mmol）および２５mgの［Ｒｕ］（８１）（２９．４５μmol、５モル%）溶液をアルゴン保護雰囲気下で還流しながら一晩過熱し、ＴＬＣ（ＥＥ／ＣＨ１：１）に準じて反応が完了するまで行った。ＲＴまで冷却した後、最初に１mlのエチルビニルエーテルを反応液に添加し、３０分間攪拌した。その後、３６５mgのトリス‐（ヒドロキシメチル）ホスフィン（触媒に対して２．９４mmol、１００eq.）および２００μlのＤＩＰＥＡを添加し、溶液の色が褐色から濃黄色に変化するのが目視された。精密試験では、５０mlのＭＴＢＥおよび５mlの水を添加し、相を分離し、ＭｇＳＯ４により有機相を乾燥した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥＥ／ＣＨ１：１）を用いて精製し、無色油状で２１０mgの３環１８８（０．５４mmol、９２%）を得て、これを徐々に凝固させ、微小な無色結晶を形成した。
Ｍ（Ｃ２１Ｈ３２Ｎ２Ｏ５）＝３９２．４８９３
Ｒｆ＝０．２０（ＳｉＯ２、ＥＥ／ＣＨ１：１）
ｍ．ｐ．：１４７〜１４９℃
１Ｈ-ＮＭＲ（５００MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝５．８４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．２Hz、Ｈ‐８）、５．５８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１１．１Hz、Ｈ‐９）、４．６８（ｍ、２Ｈ、Ｈ‐５、Ｈ‐７ａ）、４．３７（ｄ、０．６Ｈ、Ｊ＝１０．８Hz、Ｈ‐３ａ）、４．３２（ｄ、０．４Ｈ、Ｊ＝１０．７Hz、Ｈ‐３ａ）、３．６９（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２α）、３．４３（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２β）、２．９８（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐９ａ）、２．３２（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐６／Ｈ‐７）、２．０７（ｍ、３Ｈ、Ｈ１、Ｈ‐６／Ｈ‐７））、１．８８（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐６／Ｈ‐７）、１．６６（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐１β）、１．４８、１．４７（２ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）、１．４４、１．４２（２ｓ、９Ｈ、ＯｔＢｕ）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（１２５MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７１．１１、１７０．９４（Ｃ＝Ｏ）、１６９．４９、１６９．３０（Ｃ＝Ｏ）、１５４．６８、１５４．１８（ＢｏｃＣ＝Ｏ）、１２９．５３、１２９．３２（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐９）、１２８．９５、１２８．６０（ＣＨｏｌｅｆ．、Ｃ‐８）、８１．３４、８１．１３（Ｃｑ、ＯｔＢｕ）、７９．６７、７９．６０（Ｃｑ、ＯｔＢｕ）、６２．２７、６２．０５（ＣＨ、Ｃ‐３ａ）、６０．２２、６０．１５（ＣＨ、Ｃ‐５／Ｃ‐７ａ）、５７．２２、５７．１１（ＣＨ、Ｃ‐５／Ｃ‐７ａ）、４６．９０、４６．２８（ＣＨ２、Ｃ‐２）、４１．９６、４１．３５（ＣＨ、Ｃ‐９ａ）、３３．０１（ＣＨ２、Ｃ‐６／Ｃ‐７）、３１．３２、３０．８５（ＣＨ２、Ｃ‐１）、２８．４３、２８．１４、２７．９０（ＣＨ３、ＯｔＢｕ）、２７．４１、２７．２４（ＣＨ２、Ｃ‐６／Ｃ‐７）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝２９７２（ｍ）、２９２８（ｍ）、２８６６（ｗ）、２２４５（ｗ）、１７３８（ｓ）、１７００（ｖｓ）、１６７７（ｖｓ）、１４７６（ｍ）、１４０８（ｖｓ）、１３８９（ｖｓ）、１３６４（ｖｓ）、１３４０（ｓ）、１３２７（ｓ）、１２５５（ｓ）、１２１８（ｓ）、１１５９（ｖｓ）、１１２１（ｓ）、１０７２（ｍ）、９２０（ｍ）、８３３（ｍ）、７７１（ｍ）、７３０（ｓ）、６５４（ｗ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝３９２（［Ｍ＋］、３）、３３６（４）、３１９（９）、２９１（１３）、２６３（１０）、２３５（８４）、２０７（２５）、１９３（８）、１６３（２８）、１４６（１５）、１３４（７）、１２０（１２）、９４（９）、８２（１２）、６９（９）、５７（１００）
ＨＲ‐ＭＳ（ＥＩ、Ｃ２１Ｈ３２Ｎ２Ｏ５） ｃａｌｃ．：３９２．２３１１、実測値：３９２．２３１
［α］λ ２０＝−２１２．６°（５８９nm）、−２５２．１°（５４６nm）、−５１４．６°（４０５nm）、−６７２．６°（３６５nm）、−８６０．７°（３３４nm）（ｃ＝３０１．０１５、ＣＨＣｌ３）
（３ａＳ，５Ｓ，７ａＲ，９ａＲ）‐３‐（フルオレニル‐９‐メトキシカルボニル）‐４‐オキソ‐１，３ａ，４，５，６，７，７ａ，９ａ‐オクタヒドロ‐２Ｈ‐３，４ａ‐ジアザシクロペンタ［ｆ］アズレン‐５‐カルボン酸（８５）
１５０mgのメタセシス生成物１８８（０．３８mmol）を２mlのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、０℃に冷却し、２mlのＴＦＡ（９９%）を滴下で添加した。その後、バッチをＲＴにし、１時間攪拌した。次に真空下で揮発性成分すべてを除去し、黄色残渣を得、これをオイルポンプ真空下で徐々に凝固させた。
粗生成物を４mlのアセトニトリルおよび３mlの１０%Ｋ２ＣＯ３の混合溶液に取り入れ、氷浴で０℃に冷却し、２mlのアセトニトリル中の２００mgのＦｍｏｃ‐Ｃｌ（０．７７mmol、２eq.）溶液を添加した。一晩攪拌した後、バッチを再度０℃まで冷却し、５０mlのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、１MのＨＣｌでｐＨ４に慎重に調整した。相を分離した後、３×１０mlのＣＨ２Ｃｌ２で水相を抽出し、ＭｇＳＯ４で混合有機相を乾燥し、濃縮した。かなり短いシリカゲルカラムを用いたクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９：１、場合により勾配を８：２にする）により残渣を精製し、黄色がかった固体形態で１５０mgのＦｍｏｃ保護ジプロリン８５（０．３３mmol、８６%）を得た。
Ｍ（Ｃ２７Ｈ２６Ｎ２Ｏ５）＝４５８．５０５８
Ｒｆ＝０．１６（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９：１）.
ｍ．ｐ．： １６３℃（分解）
１Ｈ‐ＮＭＲ（３００５Hz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝７．７６〜７．８２（ｍ、２Ｈ、Ｈａｒ）、７．４８〜７．６５（ｍ、２Ｈ、Ｈａｒ）、７．２５〜７．４３（ｍ、４Ｈ、Ｈａｒ）、５．７５（ｄ、０．４Ｈ、Ｊ＝１１．１Hz、Ｈ‐８）、５．６６（ｄ、０．６Ｈ、Ｊ＝１１．０Hz、Ｈ‐８）、５．５５（ｄ、０．４Ｈ、Ｊ＝１１．０Hz、Ｈ‐９）、５．４７（ｄ、０．６Ｈ、Ｊ＝１１．１Hz、Ｈ‐９）、４．７３（ｄｄ、０．６Ｈ、Ｊ＝１０．８Hz、Ｊ＝５．３Hz、ＣＨ２，Ｆｍｏｃ）、４．６５（ｂｒ、０．４Ｈ、Ｈ‐７ａ）、４．１６〜４．５８（ｍ、３．６Ｈ、ＣＨ２，Ｆｍｏｃ、Ｈ‐５、Ｈ‐３ａ、Ｈ‐７ａ、ＣＨＦｍｏｃ）、４．１２（ｔ、０．７Ｈ、Ｊ＝４．４Hz、ＣＨＦｍｏｃ）、３．８０（ｄ、０．７Ｈ、Ｊ＝１０．４Hz、Ｈ‐３ａ）、３．６１（ｄｄ、０．６Ｈ、Ｊ＝８．１Hz、Ｊ＝１０．１Hz、Ｈ‐２α）、３．５４（ｍ、０．４Ｈ、Ｈ‐２α）、３．１３〜３．３０（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐２β）、２．７５〜２．９５（ｂｒ、１Ｈ、Ｈ‐９ａ）、２．２１〜２．３２（ｍ、１Ｈ、Ｈ‐７α）、１．９０〜２．１４（ｍ、３Ｈ、Ｈ‐６、Ｈ‐１α）、１．７０〜１．９０（ｂｒ、１Ｈ、Ｈ‐７β）、１．４５〜１．５６（ｍ、０．４Ｈ、Ｈ‐１β）、１．２５〜１．４０（ｍ、０．６Ｈ、Ｈ‐１β）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（１２５MHz、ＣＤＣｌ３）：（回転異性体の混合体）δ（ppm）＝１７８．１２、１７８．０１（カルボキシルＣ＝Ｏ）、１７２．６９、１７２．３７（Ｃ＝Ｏ）、１５６．９７、１５６．８０（Ｆｍｏｃ Ｃ＝Ｏ）、１４５．９４、１４５．５１、１４５．１０、１４４．９３、１４２．７８、１４２．７１、１４２．５９（Ｃｑ，ａｒ）、１３０．５６、１３０．３２（ＣＨｏｌｅｆ．）、１２９．４３、１２９．３７（ＣＨｏｌｅｆ．）、１２８．８５、１２８．８１、１２８．７１（ＣＨａｒ）、１２８．２４、１２８．１７、１２８．１０（ＣＨａｒ）、１２６．１９、１２６．１１、１２５．９６、１２５．８１（ＣＨａｒ）、１２０．９９、１２０．９０、１２０．８０（ＣＨａｒ）、６８．５７、６７．２９（ＣＨ２，Ｆｍｏｃ）、６３．６０、６３．３４（ＣＨ、Ｃ‐３ａ）、５９．１６、５９．０５（ＣＨ、Ｃ‐７ａ）、４９．３３、（ＣＨ、ＣＨＦｍｏｃ）、４８．５０（ＣＨ、Ｃ‐５）、４８．２２、４８．１３（ＣＨ２、Ｃ‐２）、４３．０９、４２．４６（ＣＨ、Ｃ‐９ａ）、３４．１３、３３．９７（ＣＨ２、Ｃ‐７）、３２．１７、３１．６２（ＣＨ２、Ｃ‐１）、２８．３１（ＣＨ２、Ｃ‐６）
ＩＲ（ＡＴＲ）：ν~（cm-1）＝３４１９（ｂｒ）、２９５６（ｍ）、２８８０（ｍ）、２３６４（ｗ）、２２３８（ｗ）、１６８１（ｖｓ、ｂｒ）、１４４９（ｖｓ）、１４１６（ｖｓ）、１３５０（ｓ）、１３２７（ｓ）、１３００（ｍ）、１２４０（ｍ）、１２２０（ｍ）、１１６９（ｓ）、１１２０（ｓ）、１０２１（ｍ）、９８５（ｍ）、９０８（ｓ）、８３９（ｍ）、７５９（ｖｓ）、７３６（ｖｓ）
ＭＳ（ＤＩＰ‐ＥＩ、７０eV）：ｍ／ｚ（%）＝２３６（［Ｍ＋‐Ｆｍｏｃ］、＜１）、１７８（フルオレン、１００）、１５２（４２）、１２６（６）、９８（５）、８９（５５）、７６（６７）、６３（１８）、５１（６）
ＨＲ‐ＭＳ（ＥＳＩ、（Ｃ２７Ｈ２６Ｎ２Ｏ５） ｃａｌｃ．：４８１．１７４０、実測値：４８１．１７３
［α］λ ２０＝−１３５．５°（５８９nm）、−１６０．４°（５４６nm）、−３１８．３°（４０５nm）、−４０６．０°（３６５nm）、３３４nmでの吸収（Ｃ＝０．８６、ＭｅＯＨ）
上記の化合物は、Ｓｒｃ相同性３ドメイン、ＷＷドメイン、Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１ドメイン、ＧＹＦドメイン、ＵＥＶドメインおよび／またはプロフィリンを有するタンパク質との驚くほど良好な親和性を示す。この驚くほど良好な親和性は上記のドメインを有するタンパク質が関与するウイルス性または細菌性疾患を診断または治療することに利用可能である。引用した感染性疾患意外に、このようなタンパク質は神経変性疾患および腫瘍性疾患にも関与している。試験対象の生物での実験では、他の分子と組み合わせて使用した場合でも、本発明に従った化合物には良好な耐容性が示されている。
略語
ｅｑ． 当量
Ａｒ アリール
ＡＴＲ 減衰全反射率
９‐ＢＢＮ ９‐ボラビシクロノナン
ｃａｌｃ． 計算値
Ｂｎ ベンジル
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル
Ｂｏｃ２Ｏ ジカルボン酸ジ‐ｔｅｒｔ‐ブチル（Ｂｏｃ無水物）
ＣＨ シクロヘキサン
Ｃｙ シクロヘキシル
ＴＬＣ 薄層クロマトグラム
ＤＣＥ ジクロロエタン（１，２‐）
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＩＢＡＬ‐Ｈ 水素化ジイソブチルアルミニウム
ＤＩＣ ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰ 直接インレットプローブ（質量分析）
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ ４‐Ｎ，Ｎ‐ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ‐ジメチルホルムアミド
ＤＭＰ ２，２‐ジメトキシプロパン
ＤＭＳ ２，２‐ジメチルスルフィド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ｄｒ ジアステレオマー比率
ＥＥ 酢酸エチル
ｅｅ 鏡像体過剰率
ＥＩ 電子衝撃イオン化法
ＥＳＩ 電子スプレーイオン化法
Ｅｔ エチル
Ｅｔ２Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＨ エタノール
ＥＶＨ１ Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１ドメイン
ＦＧＩ 官能基反転
Ｆｍｏｃ フルオロエニル‐９‐メトキシカルボニル
ＦＭＰ Forschungsinstitut fuer Molekulare Pharmakologie（Berlin-Buch）
ＧＣ‐ＭＳ 質量分析に関するガスクロマトグラフィー
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＨＲＭＳ 高分解能質量分析
ＩＲ 赤外線分光法
ｃｏｎｃ． 濃縮
ＬｉＨＭＤＳ リチウムヘキサメチルジシラジドリチウム
M モル質量
ＭＣＰＢＡ メタクロロ過安息香酸
Me メチル
ＭｅＯＨ メタノール
Ｍｓ メシル（メタンスルホニル）
Ｍ 質量分析法
ＭＴＢＥ メチルｔｅｒｔ‐ブチルエーテル
ＮａＨＭＤＳ ナトリウムヘキサメチルジシラジド
ＮＭＥ Ｎ‐メチルフェドリン
ＮＭＲ 核磁気共鳴分光法
ＮＯＥ 核オーバーハウザー効果
ｏ オルト
Ｐｈ フェニル
ＰＰＩＩ ＩＩ型ポリプロリン・ヘリックス
ＰＯＭ‐Ｃｌ ピバル酸クロロメチル
ＰＰＴＳ パラ‐トルエンスルホン酸ピリジニウム
ＲＣＭ 閉環メタセシス
Ｒｆ 保持因子
［Ｒｕ］ＩＩ GrubbsII触媒８１
［Ｒｕ］ｇｒ Blechertに従った改変（緑色）Grubbs-Hoveyda触媒８２
ｓ 二次
ｍ．ｐ． 融点
Ｓｕ スクシンイミド
ＴＢＡＦ フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＢＳ ｔｅｒｔ‐ブチルジメチルシリル
ｔ‐Ｂｕ ｔｅｒｔ‐ブチル
Ｔｆ トリフルオロメタンスルホニル
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＭＥＤＡ テトラメチルエチレンジアミン
ＴＭＳ トリメチルシリル
ＴＭＳＯＴｆ トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホン酸塩
ＴＰＳ ｔｅｒｔ‐ブチルジフェニルシリル
Ｔｓ トシル（パラ‐トルエンスルホニル）
ＴｓＯＨ パラ‐トルエンスルホン酸
Ｚ ベンジルオキシカルボニル（同様にＣｂｚ）
天然タンパク新生アミノ酸の１文字コードおよび３文字コード：

Claims (12)

  1. 中央に不飽和の７員環を有する一般式１に記載の化合物であって、
    式中、
    ＸはＯまたはＳであり；
    Ａ、Ｂは架橋環であり；
    Ｙ１、Ｙ２はＨ、アルキル、フルオロアルキル、アリールおよび／またはヘテロアリールであり；
    Ｚ１、Ｚ２はＨ、カルボニル、ＯＨ、Ｏ‐アルキル、Ｏ‐アシル、Ｒ１および／またはＲ２がＨ、アルキル、アシルから選ばれるＮＲ１Ｒ２、アルキル、アシル、フルオロアルキル、アリールおよび／またはヘテロアリールであり；
    Ｒ１はアルキル、アシル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、またはＣＯＮＨ２もしくはＣＯＮＨ‐ペプチジルであるアミノカルボニルであり；
    Ｒ２はＨ、アルキル、アリール、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アリールオキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アミノアシルまたはペプチジルである、
    化合物。
  2. Ａおよび／またはＢは５および／または６環原子であり、その環員はＣ、Ｏ、Ｓおよび／またはＮ原子からなる群から選択されるＡおよびＢによって表されることを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
  3. 一般式２に従った化合物であって、
    式中、
    Ｚ １ 、Ｚ ２ はＨ、カルボニル、ＯＨ、Ｏ‐アルキル、Ｏ‐アシル、Ｒ １ および／またはＲ ２ がＨ、アルキル、アシルから選ばれるＮＲ １ Ｒ ２ 、アルキル、アシル、フルオロアルキル、アリールおよび／またはヘテロアリールであり、その立体配置は一般式２に示され；
    Ｒ１、Ｒ２がアルキル、アシル、および／またはヘタリールであり、
    Ｘが‐ＣＨ２‐、‐Ｏ‐、‐Ｓ‐または‐ＮＲ‐（ＲがＨ，アルキルまたはアシル）である、
    化合物。
  4. 一般式３に示す構造を有することを特徴とする化合物であって、
    式中、
    Ｘが‐ＣＨ２‐、‐Ｏ‐または‐Ｓ‐であり；
    Ｒが‐ＮＨＲ"、‐ＯＲ"であり、Ｒ"がペプチジル、置換アルキル、又はヘタリールであり；
    Ｒ'がアシルまたはぺプチジルである、
    化合物。
  5. 医薬的活性物質としての請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
  6. 任意で医薬的に許容可能な担体を含む、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物を含む医薬品。
  7. 該医薬担体が、充填剤、希釈剤、結合剤、保湿剤、溶解遅延剤、崩壊剤、吸収促進剤、湿潤剤、吸収剤および／または滑剤からなる群から選択されることを特徴とする、請求項６に記載の医薬品。
  8. Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１ドメインのリガンドである、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
  9. 請求項１〜５のいずれかに記載の化合物が、ポリプロリン模倣薬である、請求項８に記載の医薬組成物。
  10. 請求項８に記載のドメインを含む第１分子と、前記ドメインに結合する請求項１〜５のいずれかに記載の少なくとも１種の化合物（以下第２分子という）との結合の阻害剤を同定する方法であって、第１分子と第２分子の結合に適した条件下で、該結合を阻害する１以上の候補化合物を検出し、所望の阻害剤の選択を行うように、第１分子と第２分子と１以上の候補化合物とのインキュベーションを含む阻害剤の同定方法。
  11. 請求項８に記載のドメインを含む分子（以下第１分子という）と、前記ドメインに結合する請求項１〜５のいずれかに記載の化合物（以下第２分子という）との結合に影響を与える化合物を同定する方法であって、前記方法が以下の工程：
    （ａ）前記結合に影響を与える化合物を同定するための候補となる化合物である候補化合物の存在下において第１分子と第２分子の結合することに適した条件下で、Ｅｎａ／ＶＡＳＰ相同１ドメインを含む分子である第１分子を請求項１〜５のいずれかに記載の化合物である第２分子に、該候補化合物の存在下で、接触させ、該第１分子のドメインと該第２分子間の結合の程度を測定する工程；および
    （ｂ）工程（ａ）で測定した結合の程度と、前記候補化合物の非存在下で第１分子のドメインと第２分子である化合物間に存在すると判定された結合の程度とを比較し、工程（ａ）で測定した結合の程度と、該候補化合物の非存在下でドメインとリガンド間に存在すると判定された結合の程度との差異により、該候補化合物が該第１分子のドメインと請求項１〜５のいずれかに記載の化合物である第２分子との結合に影響を与える化合物であることが示される工程、
    を含む化合物の同定方法。
  12. 請求項１〜４のいずれかに記載の少なくとも１種の化合物および／または請求項６もしくは７に記載の医薬品を含み、任意でキットの内容物を組み合わせるための情報を含む疾患治療用のキット。
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