JP5518223B1 - Liquid composition and method for producing the same - Google Patents
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Abstract
【課題】 副作用を生じる可能性が低く、且つ、血栓形成や炎症反応の抑制効果に優れる液状組成物、及びその製造方法を提供することである。さらに、高血圧症、肥満症の予防・改善効果についても、従来の液状組成物よりも優れた液状組成物を提供することを目的とする。
【解決手段】 野菜、果物、海草、および／または穀物に糖類を添加し寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８５４０の酵母により発酵させた酵母発酵物に、マンネンタケまたはカワラタケの子実体を添加し熟成させて得られることを特徴とする液状組成物。
【選択図】 図１
PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a liquid composition having a low possibility of causing a side effect and having an excellent effect of suppressing thrombus formation and inflammatory reaction, and a method for producing the same. Furthermore, it aims at providing the liquid composition superior to the conventional liquid composition also about the prevention and improvement effect of hypertension and obesity.
SOLUTION: It is obtained by adding a sugar bean to a vegetable, fruit, seaweed, and / or cereal and fermenting it with a yeast having a deposit number of FERM P-18540, and adding and ripening the fruit body of Mannentake or Kawaratake. A liquid composition characterized by the above.
[Selection] Figure 1
Description
本発明は、液状組成物とその製造方法に関し、特に詳しくは、酵母発酵物にマンネンタケまたはカワラタケの子実体を添加し熟成させることで得られ、血小板凝集抑制、ケモカイン遺伝子発現抑制、アンジオテンシン変換酵素阻害、およびリパーゼ阻害効果に優れる液状組成物に関する。 The present invention relates to a liquid composition and a method for producing the same, and more particularly, obtained by adding and maturation of a fruit body of Mannentake or Kawaratake to a yeast fermented product, inhibiting platelet aggregation, inhibiting chemokine gene expression, inhibiting angiotensin converting enzyme And a liquid composition having an excellent lipase inhibitory effect.
近年、食生活および生活習慣の多様化やストレス過多から、心筋梗塞や脳梗塞などの血栓症、アトピー性皮膚炎や炎症性腸疾患などの慢性炎症性疾患、高血圧症、および肥満などが急増している。そして、それぞれの疾患に対して種々の薬剤が開発・使用されているが、副作用が問題となるものも少なくない。 In recent years, diversification of eating habits and lifestyles and excessive stress have led to a rapid increase in thrombosis such as myocardial infarction and cerebral infarction, chronic inflammatory diseases such as atopic dermatitis and inflammatory bowel disease, hypertension, and obesity. ing. Various drugs have been developed and used for each disease, but there are many cases in which side effects are problematic.
例えば、血栓症の原因である血栓形成においては、血小板活性化物質（血小板活性化因子（ＰＡＦ）、アデノシン２リン酸（ＡＤＰ）等）が血小板膜上の受容体に結合することで惹起される血小板凝集反応が中心的な役割を担う。そのため、血栓症の治療には、ＡＤＰ受容体であるＰ２Ｙ１２受容体の特異的阻害剤であるチクロピジン（登録商標）やクロピドグレル（登録商標）等が汎用されているが、これらの薬剤の使用は出血性合併症のリスクを増加させるだけでなく、日本人に対しては肝機能障害を引き起こすことが知られている（非特許文献１）。 For example, thrombus formation, which is the cause of thrombosis, is caused by binding of platelet activating substances (platelet activating factor (PAF), adenosine diphosphate (ADP), etc.) to receptors on the platelet membrane. Platelet aggregation plays a central role. Therefore, the treatment of thrombosis, is a specific inhibitor of the P2Y 12 receptor is ADP receptor ticlopidine (registered trademark) or clopidogrel (registered trademark) is widely, use of these agents In addition to increasing the risk of bleeding complications, it is known to cause liver dysfunction in Japanese (Non-patent Document 1).
また、炎症性腸疾患では、腸管免疫をつかさどる腸管上皮細胞のケモカイン産生によって好中球が浸潤・集積し、それゆえ腸管上皮が障害されると考えられている（非特許文献２）。そのため、炎症性腸疾患の治療には、通常アミノサリチル酸製剤や副腎皮質ステロイド剤といった抗炎症剤、および／または免疫抑制剤が用いられるが、これらの薬剤は副作用が強く継続的投与ができないため、患者は発症と寛解を繰り返すことになる。 In inflammatory bowel disease, it is considered that neutrophils infiltrate and accumulate due to the production of chemokines of intestinal epithelial cells that control intestinal immunity, and thus the intestinal epithelium is impaired (Non-patent Document 2). Therefore, anti-inflammatory agents such as aminosalicylic acid preparations and corticosteroids and / or immunosuppressants are usually used for the treatment of inflammatory bowel disease, but these drugs have strong side effects and cannot be administered continuously. Patients will repeat onset and remission.
そして、高血圧症患者に対しては、通常、カルシウム拮抗薬、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ、ＡＣＥと略記）阻害薬が用いられるが、やはり副作用の問題が指摘されている。 For patients with hypertension, calcium antagonists, angiotensin II receptor antagonists, angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitors are usually used, but problems of side effects have been pointed out. ing.
また、肥満に対する治療薬としては、国内では、食欲抑制剤のマジンドール（登録商標）が唯一承認されているが、口渇、便秘、胃部不快感、悪心・嘔吐等の副作用が報告されている。そして、海外においては、リパーゼの活性阻害により腸管からの脂肪吸収を抑制し得るゼニカル（登録商標）が肥満改善薬として市販されているが、脂肪便、排便数の増加、軟便、下痢、腹痛等の副作用が報告され、必ずしも安全とは言いがたい（非特許文献３）。 In addition, the appetite suppressant Mazindol (registered trademark) is the only approved treatment for obesity in Japan, but side effects such as dry mouth, constipation, stomach discomfort, nausea and vomiting have been reported. . Overseas, Xenical (registered trademark) that can suppress fat absorption from the intestinal tract by inhibiting lipase activity is marketed as an obesity-improving drug, but fat stool, increased number of defecation, loose stool, diarrhea, abdominal pain, etc. Side effects have been reported and are not necessarily safe (Non-patent Document 3).
このような事情から、患者においては、前記疾患に対する改善効果を、副作用を生じる可能性が低い自然食品や健康食品（機能性食品を含む）に求める声が非常に高まっている。さらに、前記疾患を患っていない人においても、予防意識の高まりから、当該疾患の予防効果に優れる自然食品や健康食品を望む声が強く聞かれる。 Under such circumstances, there is a great increase in the demand for patients on natural foods and health foods (including functional foods) that have a low possibility of causing side effects. Furthermore, even people who do not suffer from the above-mentioned diseases are strongly demanded for natural foods and health foods that are excellent in the preventive effect of the diseases because of the increased awareness of prevention.
このような要望に応えるために、本発明者は、野菜、果物、海草、および／または穀物に糖類を添加して作製した酵母発酵物でありながら、高血圧症、高脂血症、肥満症改善予防効果に優れる液状組成物を開発した（特許文献１）。現在、この液状組成物は、「暁酵素」の商品名（商標登録番号１５０２４１２号）で提供している。
そして、この液状組成物に対し、さらに血栓症や慢性炎症疾患に対する予防・改善効果を期待して、血小板凝集やケモカイン遺伝子発現に対する効果を解析した。しかしながら、これらについては十分な抑制効果があるとはいえず、改良の余地があることが明らかとなった。
In order to respond to such a demand, the present inventor has improved yeast, hyperlipidemia, obesity while being a yeast fermented product prepared by adding sugar to vegetables, fruits, seaweed and / or cereal grains. A liquid composition having an excellent preventive effect has been developed (Patent Document 1). At present, this liquid composition is provided under the trade name “Trade Enzyme” (trademark registration number 1502412).
The liquid composition was analyzed for effects on platelet aggregation and chemokine gene expression in anticipation of further prevention and improvement effects on thrombosis and chronic inflammatory diseases. However, it cannot be said that these have sufficient suppression effects, and it has become clear that there is room for improvement.
本発明は、上記従来技術の課題に鑑みなされたものであり、その目的は、副作用を生じる可能性が低く、且つ、血栓形成や炎症反応の抑制効果に優れる液状組成物、及びその製造方法を提供することである。さらに、高血圧症、肥満症の予防・改善効果についても、従来の液状組成物よりも優れた液状組成物を提供することを目的とする。 The present invention has been made in view of the above-mentioned problems of the prior art, and its object is to provide a liquid composition that has a low possibility of causing side effects and is excellent in the effect of inhibiting thrombus formation and inflammatory reaction, and a method for producing the same. Is to provide. Furthermore, it aims at providing the liquid composition superior to the conventional liquid composition also about the prevention and improvement effect of hypertension and obesity.
前記目的を達成するために本発明者らが鋭意検討を行った結果、野菜、果物、海草、および／または穀物に糖類を添加して作製した酵母発酵物（すなわち、暁酵素）に、さらに特定のキノコの子実体を添加し熟成させることによって、血小板凝集抑制、ケモカイン遺伝子発現抑制、ＡＣＥ阻害、およびリパーゼ阻害効果に非常に優れる液状組成物が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。 As a result of intensive studies by the present inventors in order to achieve the above object, the present invention further specifies a yeast fermented product (ie, koji enzyme) produced by adding sugar to vegetables, fruits, seaweed, and / or grains. It was found that by adding and maturating the fruit bodies of mushrooms, a liquid composition having excellent effects of inhibiting platelet aggregation, chemokine gene expression, ACE inhibition, and lipase inhibition can be obtained, and the present invention has been completed. It was.
すなわち、本発明によって、野菜、果物、海草、および／または穀物に糖類を添加し寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８５４０の酵母により発酵させた酵母発酵物に、マンネンタケまたはカワラタケの子実体を添加し熟成させて得られることを特徴とする液状組成物が提供される。
そして、前記液状組成物においては、前記酵母発酵物１０００ｍｌに、前記子実体を乾燥重量にして４５〜５５ｇ添加することが好適である。
That is, according to the present invention, a fruit body of Mannentake or Kawaratake is added and matured to a yeast fermented product obtained by adding saccharides to vegetables, fruits, seaweed, and / or cereals and fermenting them with the yeast of deposit number FERM P-18540. A liquid composition is provided that is obtained.
And in the said liquid composition, it is suitable to add 45-55g of the said fruit bodies to the dry weight of 1000 ml of said yeast fermented products.
さらに、本発明により、前記液状組成物からなる血小板凝集抑制剤が提供される。
また、前記液状組成物からなるケモカイン遺伝子発現抑制剤が提供される。
そして、前記液状組成物からなるアンジオテンシン変換酵素阻害剤、および、前記液状組成物からなるリパーゼ阻害剤が提供される。
Furthermore, the present invention provides a platelet aggregation inhibitor comprising the liquid composition.
In addition, a chemokine gene expression inhibitor comprising the liquid composition is provided.
And the angiotensin converting enzyme inhibitor which consists of the said liquid composition, and the lipase inhibitor which consists of the said liquid composition are provided.
さらに、本発明により、下記（Ａ）〜（Ｄ）工程を含むことを特徴とする液状組成物の製造方法が提供される。
（Ａ）野菜、果物、海草、および／または穀物に寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８５４０の酵母を添加する工程
（Ｂ）前記（Ａ）工程後、糖類を添加し、原液を抽出する工程
（Ｃ）前記（Ｂ）工程後、糖類を添加し、原液を発酵・熟成させる工程
（Ｄ）前記（Ｃ）工程後、濾過した濾液に、マンネンタケまたはカワラタケの乾燥子実体を添加して、室温で５日間熟成させる工程
Furthermore, the present invention provides a method for producing a liquid composition comprising the following steps (A) to (D).
(A) Step of adding yeast of deposit number FERM P-18540 to vegetables, fruits, seaweed and / or cereals (B) Step (C) After step (A), adding saccharides and extracting stock solution (C) (B) After the step, sugar is added and the stock solution is fermented and matured. (D) After the step (C), the dried fruit body of Mannentake or Kawaratake is added to the filtered filtrate and aged at room temperature for 5 days. Process
本発明により、副作用を生じる可能性が低く、且つ、血小板凝集抑制、ケモカイン遺伝子発現抑制、ＡＣＥ阻害、およびリパーゼ阻害効果に非常に優れる液状組成物、及びその製造方法を提供することができる。 According to the present invention, it is possible to provide a liquid composition that has a low possibility of causing a side effect and is extremely excellent in platelet aggregation suppression, chemokine gene expression suppression, ACE inhibition, and lipase inhibition, and a method for producing the same.
以下に、本発明の好適な実施形態を詳細に説明する。まず、本発明にかかる液状組成物の材料について説明する。 Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail. First, the material of the liquid composition concerning this invention is demonstrated.
＜材料＞
・原材料
本発明の液状組成物の原材料としては、特許文献１に記載した従来の液状組成物の原材料を用いることができる。具体的には、旬の物を中心とした野菜、果物、海草、および穀物等である。
例えば、キャベツ、ホウレンソウ、ニンジン、パセリ、ナス、ピーマン、トマト、キュウリ、カブ、大根、春菊、小松菜、モロヘイヤ、蓮根、サツマイモ、ジャガイモ、ショウガ、リンゴ、ミカン、レモン、カキ、モモ、スイカ、ブドウ、ナシ、イチゴ、パイナップル、キウイ、バナナ、米、麦等を好適に用いることができる。
<Material>
-Raw material As a raw material of the liquid composition of this invention, the raw material of the conventional liquid composition described in patent document 1 can be used. Specific examples include vegetables, fruits, seaweeds, and grains, mainly seasonal items.
For example, cabbage, spinach, carrot, parsley, eggplant, pepper, tomato, cucumber, turnip, radish, spring chrysanthemum, komatsuna, morohaya, lotus root, sweet potato, potato, ginger, apple, mandarin, lemon, oyster, peach, watermelon, grape, Pear, strawberry, pineapple, kiwi, banana, rice, wheat and the like can be suitably used.
本発明に用いるキノコ子実体は、硬質菌キノコの子実体であり、特に好ましくはマンネンタケまたはカワラタケの子実体である。子実体は、生または乾燥させた子実体のいずれも使用できるが、取扱いと保存性の良さから乾燥子実体を用いることが好ましい。 The mushroom fruit body used in the present invention is a fruit body of a hard fungus mushroom, and particularly preferably a fruit body of Mannentake or Kawaratake. As the fruiting body, either a raw fruit body or a dried fruiting body can be used, but it is preferable to use a dried fruiting body because of good handling and storage stability.
・マンネンタケ子実体
マンネンタケ（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ lｕｃｉｄｕｍ（Ｌｅｙｓｓ．：Ｆｒ．）Ｋａｒｓｔ．，）は、マンネンタケ科マンネンタケ属に属するキノコで、霊芝（レイシ）とも呼ばれ、古来より漢方薬として用いられてきたものである。その効果効能としては、肝機能改善作用、抗炎症作用、抗高血圧作用、抗腫瘍作用、抗高脂血症作用などが知られている。
本発明に用いるマンネンタケとしては、野生のもの、栽培されたもののいずれも用いることができる。
-Mannentake fruiting body Mannentake (scientific name: Ganoderma lucidum (Leyss :: Fr.) Karst.,) Is a mushroom belonging to the genus Mannenaceae, which is also called Ganoderma, and has been used as a traditional Chinese medicine since ancient times. It is. As its effects, liver function improving action, anti-inflammatory action, antihypertensive action, antitumor action, antihyperlipidemic action and the like are known.
As the banyan mushroom used in the present invention, either wild or cultivated can be used.
・カワラタケ子実体
カワラタケ（学名：Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ（Ｌ．：Ｆｒ．）Ｐｉｌａｔ）は、サルノコシカケ科カワラタケ属に属するキノコで、雲芝（ウンシ）とも呼ばれ、古来より漢方薬として用いられてきたものである。その効果効能としては、抗腫瘍作用、抗高血圧作用、免疫賦活作用などが知られている。
本発明に用いるカワラタケとしては、野生のもの、栽培されたもののいずれを用いてもよいが、最も好適には、本発明者の一人である江口文陽によって独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託された、受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６３３のカワラタケ株である（特許文献３）。
・ Kawaratake fruit body Kawaratake (scientific name: Trametes versicolor (L.:Fr.) Pilat) is a mushroom belonging to the genus Kawaratake, and has been used as a traditional Chinese medicine since ancient times. . As its effect, antitumor action, antihypertensive action, immunostimulatory action and the like are known.
As the bamboo shoot used in the present invention, either wild or cultivated ones may be used, but most preferably, the patent organism of the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (AIST) by Fumiyo Eguchi, one of the present inventors. This is the Kawaratake strain deposited at the Deposit Center with the deposit number FERM BP-10633 (Patent Document 3).
＜製造方法＞
次に、本発明にかかる液状組成物の製造方法について説明する。
図１に示したように、本発明の液状組成物は、濾液を得る工程までは特許文献１に記載した従来の液状組成物と同じ工程を経ることができる。以下、全工程について詳しく説明する。
<Manufacturing method>
Next, the manufacturing method of the liquid composition concerning this invention is demonstrated.
As shown in FIG. 1, the liquid composition of the present invention can go through the same steps as the conventional liquid composition described in Patent Document 1 until the step of obtaining a filtrate. Hereinafter, all steps will be described in detail.
・洗浄・水切り
初めに原材料となる野菜、果物、海草、及び穀物等を水で洗浄し、水切りする。この時使用する水は、清浄なものであれば特に限定されないが、塩素の含有量の少ない地下水等を使用することが好ましい。また、洗浄時には洗剤等を使用しないことが好ましい。
・ Washing and draining First, the vegetables, fruits, seaweed, and grains that are raw materials are washed with water and drained. The water used at this time is not particularly limited as long as it is clean, but it is preferable to use groundwater having a low chlorine content. Moreover, it is preferable not to use a detergent etc. at the time of washing.
・仕込み・酵母添加
次に、水切りした原材料を適当な大きさに刻んで容器に入れ、酵母を添加する。容器は、発酵に適するものであれば特に制限されないが、木桶を使用することが好適である。また、原材料を刻む方法は、特に限定されないが、栄養素の破壊を防止するために刃物の使用を最小限にすることが好ましい。そして、加熱に強い抽出物を得るために、寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８５４０の酵母（平成１３年９月２０日付で、ＦＥＲＭ Ｐ−１８５４０として工業技術院生命工学工業技術研究所に受託）を使用する。酵母の添加量は、原材料１ｇ当たり１０６〜１０７個程度であることが好適である。
-Preparation and yeast addition Next, the drained raw material is chopped into an appropriate size and put into a container, and yeast is added. Although a container will not be restrict | limited especially if it is suitable for fermentation, It is suitable to use a koji. The method of carving the raw material is not particularly limited, but it is preferable to minimize the use of the blade in order to prevent the destruction of nutrients. Then, in order to obtain an extract that is resistant to heating, the yeast of deposit number FERM P-18540 (consigned to the Institute of Biotechnology, Institute of Industrial Science and Technology as FERM P-18540, dated September 20, 2001) is used. . The amount of yeast added is preferably about 10 6 to 10 7 per gram of raw material.
本発明にかかる酵母（ＦＥＲＭ Ｐ−１８５４０）は、識別のための表示をＦＣＥ Ｓｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．といい、科学的性質等は以下の通りである。
（１）科学的性質：炭素源と窒素源を含む栄養培地下において、白色〜クリーム色のコロニーを形成する。光学顕微鏡下において、細胞の中央に隔壁を生じて***する形態が観察される。母細胞と娘細胞の区別はできない。
（２）分類学上の位置：酵母菌、食用酵母
（３）培養条件
・培地名：ＳＭＹＡ培地（Ｓ：サッカロース、Ｍ：マルトエキストラクト、Ｙ：イーストエキストラクト、Ａ：寒天）
・培地の組成：培地１０００ｍｌ当たり、１％サッカロース １０ｇ、１％マルトエキストラクト １０ｇ、０．４％イーストエキストラクト ４ｇ、２％寒天 ２０ｇ
・培地のｐＨ：５．０〜７．０（最適ｐＨ５．５）
・培地の殺菌条件：１２１℃で２０分間
・培地温度：３２℃
・培養期間：１０日間
・酸素要求性：好気性
（４）保管条件
凍結法にて保管できる。
・凍結条件：−８０℃
・保護剤：１０〜２０％グリセリン水溶液（最適は２０％）
・凍結後の復元率：１年で１００％、３年で９９％
（５）生存試験の条件
・微生物の復元：４０℃
・接種・培養・確認方法：培養条件と同一条件による。
The yeast according to the present invention (FERM P-18540) displays FCE Shizosaccharomyces sp. The scientific properties are as follows.
(1) Scientific properties: white to cream-colored colonies are formed under a nutrient medium containing a carbon source and a nitrogen source. Under the light microscope, a form in which a partition wall is formed in the center of the cell and is divided is observed. There is no distinction between mother cells and daughter cells.
(2) Taxonomic position: Yeast, edible yeast (3) Culture conditions-Medium name: SMYA medium (S: saccharose, M: malt extract, Y: yeast extract, A: agar)
Medium composition: 1% saccharose 10 g, 1% malt extract 10 g, 0.4% yeast extract 4 g, 2% agar 20 g per 1000 ml of medium
Medium pH: 5.0 to 7.0 (optimum pH 5.5)
-Sterilization conditions of medium: 20 minutes at 121 ° C-Medium temperature: 32 ° C
・ Culture period: 10 days ・ Oxygen requirement: Aerobic (4) Storage conditions Can be stored by freezing method.
-Freezing conditions: -80 ° C
Protective agent: 10-20% glycerin aqueous solution (optimum 20%)
-Restoration rate after freezing: 100% in 1 year, 99% in 3 years
(5) Conditions for survival test ・ Restoration of microorganisms: 40 ° C
・ Inoculation / culture / confirmation method: Same as culture conditions.
・糖添加および原液抽出
次に、糖を添加し、浸透圧による細胞膨圧作用によって、細胞内の栄養素を破壊することなく抽出する。この抽出工程によって得られる液状組成物を原液と呼ぶ。原液の抽出操作は常温・常圧下で行うことが好ましいが、１〜５気圧、６０〜１５０℃の加圧、加熱下で抽出してもよい。添加する糖は、ブドウ糖、果糖、麦芽糖、乳糖、ショ糖、蜂蜜、エリスリトール等が好適である。添加量は、糖度が３０〜４０％となるようにすることが好適である。糖度が３０％より少ないと腐敗する恐れがあり、４０％より多いと酵母の発酵を妨げてしまうからである。
-Sugar addition and stock solution extraction Next, sugar is added and extracted without destroying intracellular nutrients by cell swell pressure action by osmotic pressure. The liquid composition obtained by this extraction process is called a stock solution. The extraction operation of the stock solution is preferably performed at normal temperature and normal pressure, but may be performed under 1-5 atm, 60-150 ° C. pressure and heating. As the sugar to be added, glucose, fructose, maltose, lactose, sucrose, honey, erythritol and the like are suitable. The addition amount is preferably such that the sugar content is 30 to 40%. This is because if the sugar content is less than 30%, there is a risk of spoilage, and if it exceeds 40%, fermentation of the yeast is hindered.
・糖添加
原液にさらに糖を添加する。加える糖は、ブドウ糖、果糖、麦芽糖、乳糖、ショ糖、蜂蜜、エリスリトール等が好適である。添加量は、抽出物に対して５０〜６０質量％であることが好適である。５０質量％より少ないと腐敗する恐れがあり、６０質量％より多いと糖度が高すぎて本発明の効果が損なわれてしまう恐れがある。
以下の工程においては、糖度が５０％未満とならないように調製することが好ましい。
・ Add sugar Add sugar to the stock solution. The sugar to be added is preferably glucose, fructose, maltose, lactose, sucrose, honey, erythritol, or the like. The addition amount is preferably 50 to 60% by mass with respect to the extract. If it is less than 50% by mass, it may be spoiled. If it is more than 60% by mass, the sugar content is too high and the effect of the present invention may be impaired.
In the following steps, it is preferable to prepare so that the sugar content does not become less than 50%.
・発酵
前記工程を経た原液を、１５〜４０℃、特に好ましくは２０〜３５℃の温度範囲で処理することで発酵させる。発酵に要する時間は、１〜７時間、特に好ましくは２〜５時間である。１５℃より低い温度、あるいは１時間より発酵期間が短いと本発明の効果が十分に得られず、４０℃を越える温度、あるいは５時間より長く発酵させても、本発明の効果がより向上することは期待できない。
-Fermentation The undiluted | stock solution which passed through the said process is fermented by processing in the temperature range of 15-40 degreeC, Most preferably, 20-35 degreeC. The time required for fermentation is 1 to 7 hours, particularly preferably 2 to 5 hours. If the temperature is lower than 15 ° C., or if the fermentation period is shorter than 1 hour, the effect of the present invention cannot be sufficiently obtained. I can't expect that.
・熟成
さらに原液を熟成させる。熟成の条件としては、２〜２０℃、特に好ましくは５〜１２℃の温度範囲で、１５〜３０時間、特に好ましくは１８〜２５時間処理することが好ましい。熟成にかける時間が１５時間より短いと本発明の効果が十分に発揮されず、２５時間より長くしても本発明の効果がより向上することは期待されない。また、２０℃を越える温度で熟成させると品質を損なう恐れがある。
・ Aging The stock solution is further aged. As aging conditions, it is preferable to perform the treatment in a temperature range of 2 to 20 ° C., particularly preferably 5 to 12 ° C. for 15 to 30 hours, particularly preferably 18 to 25 hours. If the time for aging is shorter than 15 hours, the effect of the present invention is not sufficiently exhibited, and even if it is longer than 25 hours, the effect of the present invention is not expected to be further improved. In addition, aging at a temperature exceeding 20 ° C may impair the quality.
・濾過
原液を濾過して濾液を得る。従来の液状組成物（＝暁酵素）の製造方法では濾過後直ちに滅菌工程を行うが、本願組成物の製造方法では、次の熟成工程を行う。
-Filtration The stock solution is filtered to obtain a filtrate. In the conventional method for producing a liquid composition (= enzyme), a sterilization step is performed immediately after filtration. In the method for producing the composition of the present application, the following aging step is carried out.
・マンネンタケまたはカワラタケの子実体を添加して熟成
前記工程で得られた濾液１０００ｍｌに、マンネンタケまたはカワラタケの子実体を乾燥重量にして４５〜５５ｇ分（＝液状組成物全体に対して約４．８質量％）を添加・浸漬させ、熟成させる。前記子実体は、生のもの、乾燥したもののいずれでもよく、いずれの場合にも５ｍｍ角程度に細片化することが好ましい。６時間ごとに５分間程度攪拌を行い、室温で５日間熟成させる。
この熟成工程により、子実体から浸出した成分が濾液中の成分と化学反応を起こして種々の有益な成分が生成する。
Add ripening mushrooms or fruit bodies of mushrooms and mature for 1000 ml of the filtrate obtained in the above step, and dry mushrooms or mushroom fruit bodies in a dry weight of 45 to 55 g (= about 4.8 to the total liquid composition) (Mass%) is added and immersed and aged. The fruiting body may be either raw or dried, and in any case, it is preferable that the fruiting body is cut into about 5 mm square. Stir every 6 hours for about 5 minutes and age at room temperature for 5 days.
By this aging process, the components leached from the fruit body undergo chemical reactions with the components in the filtrate to produce various useful components.
・滅菌
最後の工程として滅菌を行う。滅菌の条件は、温度９０〜１３０℃で１秒間〜５分間処理することが好適である。９０℃未満または１秒間未満であると雑菌の死滅が不完全である場合があり、１３０℃を越える温度または５分より長時間処理すると、本発明の効果が薄れてしまう恐れがある。
滅菌には通常の滅菌機を用いることができ、例えばプレート式滅菌機、チューブラー式滅菌機、ジャケット付きタンク等を使用することができる。
滅菌後は、通常の冷却機を用いて液状組成物の冷却を行うことが好ましい。このような冷却器としては、例えば、熱交換プレート、チューブラー式冷却機、ジャケット付きタンク等を使用することができる。
・ Sterilization As a final step, sterilization is performed. The sterilization condition is preferably a treatment at a temperature of 90 to 130 ° C. for 1 second to 5 minutes. If it is less than 90 ° C. or less than 1 second, killing of germs may be incomplete, and if the treatment is performed at a temperature exceeding 130 ° C. or longer than 5 minutes, the effect of the present invention may be diminished.
A normal sterilizer can be used for sterilization. For example, a plate sterilizer, a tubular sterilizer, a jacketed tank, or the like can be used.
After sterilization, it is preferable to cool the liquid composition using an ordinary cooling machine. As such a cooler, for example, a heat exchange plate, a tubular cooler, a jacketed tank, or the like can be used.
上記工程を経た液状組成物は、殺菌処理した瓶等の容器に充填・打栓し、再度殺菌を行うことで長期保存が可能である。 The liquid composition that has undergone the above steps can be stored for a long period of time by filling and plugging into a sterilized container such as a bottle and sterilizing again.
本発明の液状組成物には、本発明の趣旨に反しない公知の賦形剤や添加剤を必要に応じて適宜加えることができる。さらに、常法により加工して錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等の製剤とすることができる。
また、必要に応じて着色剤、芳香剤、矯味剤等を加えてもよい。
To the liquid composition of the present invention, known excipients and additives that do not contradict the gist of the present invention can be appropriately added as necessary. Furthermore, it can be processed into conventional preparations such as tablets, capsules, granules, powders, and liquids.
Moreover, you may add a coloring agent, a fragrance | flavor, a corrigent, etc. as needed.
本発明の液状組成物からなる血小板凝集抑制剤、ケモカイン遺伝子発現抑制剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、およびリパーゼ阻害剤は、成人（体重６０ｋｇ）１日当たり１〜１５ｍｌ、好適には６〜９ｍｌ摂取することが好ましい。１ｍｌより少ないと所望の効果を奏することが難しくなり、１５ｍｌを越えて摂取してもさらなる効果は認められない場合がある。 The platelet aggregation inhibitor, chemokine gene expression inhibitor, angiotensin converting enzyme inhibitor and lipase inhibitor comprising the liquid composition of the present invention are ingested in an amount of 1 to 15 ml, preferably 6 to 9 ml per day for an adult (body weight 60 kg). It is preferable. If it is less than 1 ml, it will be difficult to achieve the desired effect, and even if it exceeds 15 ml, no further effect may be observed.
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
試験例１：液状組成物の製造例
原材料（キャベツ、ホウレンソウ、ニンジン、大根、イモ、ショウガ、リンゴ、ミカン、パイナップル、キウイ、バナナ、米、麦等）５ｋｇを洗浄し、水切りした。水切りした原材料を適当な大きさに刻み、木桶に入れ、酵母（寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８５４０の酵母）を添加した。次に、ショ糖および麦芽糖を糖度３０〜４０％となるよう添加し、常温・常圧下で原液を抽出した。さらに、麦芽糖を糖度５０％となるよう添加し、１５℃で５時間発酵させた後、さらに１２℃で２５時間熟成させた。これを濾過した濾液（１０００ｍｌ）に対し、マンネンタケまたはカワラタケの乾燥子実体（５０ｇ）を５ｍｍ角に細片化したものを添加して、室温で５日間熟成させた（６時間ごとに５分間程度攪拌）。熟成後に滅菌を行い、「本願の液状組成物」とした。
なお、前記濾過工程の後直ちに滅菌を行った液状組成物を、「従来の液状組成物（＝暁酵素）」とした。さらに、前記「本願の液状組成物」の製造工程において、マンネンタケまたはカワラタケの代わりに、シイタケまたはブナシメジの乾燥子実体（５０ｇ）を添加して得られた液状組成物を、比較例として用いた。
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.
Test Example 1: Production Example of Liquid Composition 5 kg of raw materials (cabbage, spinach, carrot, radish, potato, ginger, apple, mandarin, pineapple, kiwi, banana, rice, wheat, etc.) were washed and drained. The drained raw material was chopped to an appropriate size, put into a mallet, and yeast (yeast with deposit number FERM P-18540) was added. Next, sucrose and maltose were added to a sugar content of 30 to 40%, and the stock solution was extracted under normal temperature and normal pressure. Further, maltose was added so as to have a sugar content of 50%, fermented at 15 ° C. for 5 hours, and further aged at 12 ° C. for 25 hours. To this filtrate (1000 ml), the dried fruit body (50 g) of Manntake or Kawaratake was chopped into 5 mm squares and aged at room temperature for 5 days (about 6 minutes every 6 hours) Stirring). After aging, sterilization was performed to obtain a “liquid composition of the present application”.
The liquid composition sterilized immediately after the filtration step was referred to as “conventional liquid composition (= enzyme enzyme)”. Furthermore, in the manufacturing process of the “liquid composition of the present application”, a liquid composition obtained by adding dried fruit bodies (50 g) of shiitake mushrooms or bunashimeji instead of garlic mushrooms or kawaratake was used as a comparative example.
試験例２：本願液状組成物の成分分析
試験例１で得られた本願の液状組成物の成分分析を行った。結果を表１〜３に示す。
一般成分分析（表１）の結果より、本願の液状組成物は、従来の液状組成物に比べて、タンパク質の含有量が１１．５倍（マンネンタケ添加）、または９．０倍（カワラタケ添加）と大幅に増加していることがわかる。この増加量は、本願組成物の製造工程において濾液に添加された子実体（わずか４．８質量％相当）に含まれていたタンパク質量をはるかに超えるものである。
よって、マンネンタケまたはカワラタケの子実体を添加して熟成させることにより、子実体成分と濾液成分との間で種々の化学反応が起こってタンパク質が生成されて、タンパク質含有量が増加したと考えられる。
Therefore, it is considered that by adding and ripening the fruit bodies of Mannambo or Kawaratake, various chemical reactions occur between the fruit body components and the filtrate components to produce proteins, and the protein content is increased.
同様に、本願の液状組成物は、従来の液状組成物よりも、カリウム（４．７〜６．１倍増）、リン（１５．２〜１４．３倍増）、鉄（１７．８〜２１．８倍増）、カルシウム（１０．５〜１５．８倍増）等の有益なミネラルが大幅に増加していることがわかる（表２）。
また、アミノ酸の総量も６．５倍（マンネンタケ添加）または５．８倍（カワラタケ添加）と増加しており、中でも、アルギニン（３３．２〜３６．１倍増）やヒスチジン（１１．６〜１４．３倍増）に加えて、疲労回復に効果的とされる分岐鎖アミノ酸のロイシン（１６．４〜３２．８倍増）、イソロイシン（１３．９〜１１．４倍増）、バリン（１５．４〜１８．７倍増）の増加が顕著である（表３）。さらに、脳の血流改善や高血圧の改善に有効とされるγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡと略記）については、１２４．８倍増（マンネンタケ添加）と１０１．９倍増（カワラタケ添加）、肝機能障害の改善効果が知られるオルニチンについては、３３．６倍増（マンネンタケ添加）と２２．０倍増（カワラタケ添加）と飛躍的に増加していることがわかる（表３）。
Similarly, the liquid composition of the present application has potassium (4.7 to 6.1 times increase), phosphorus (15.2 to 14.3 times increase), iron (17.8 to 21.2 times) than the conventional liquid composition. It can be seen that beneficial minerals such as 8 times increase and calcium (10.5 to 15.8 times increase) are greatly increased (Table 2).
In addition, the total amount of amino acids has increased by 6.5 times (addition of bamboo shoots) or 5.8 times (addition of bamboo shoots), among which arginine (33.2 to 36.1 times increase) and histidine (11.6 to 14). In addition to the branched chain amino acids leucine (16.4-32.8 fold), isoleucine (13.9-11.4 fold), valine (15.4- The increase of 18.7 times is significant (Table 3). Furthermore, for γ-aminobutyric acid (abbreviated as GABA), which is effective for improving blood flow in the brain and hypertension, 124.8-fold increase (addition of mushrooms) and 101.9-fold increase (addition of bamboo shoots), It can be seen that ornithine, which is known to have an improving effect, has increased dramatically by 33.6 times (addition of mannentake) and 22.0 times (addition of bamboo shoots) (Table 3).
従って、前記植物性の食材と糖類より特許製法（特許文献１）に従って作製した酵母発酵物に、マンネンタケまたはカワラタケの子実体を添加して熟成させることで、カリウム、リン、鉄、カルシウムといったミネラル、アルギニン、ヒスチジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、ＧＡＢＡ、オルニチンといったアミノ酸、およびタンパク質等が顕著に生成され、これらの有益な成分に富んだ液状組成物が得られることが明らかとなった。 Therefore, minerals such as potassium, phosphorus, iron and calcium are added to the yeast fermented product prepared from the plant food and sugar according to the patented manufacturing method (Patent Document 1) by adding and ripening the fruit bodies of Mannentake or Kawaratake. It has been revealed that amino acids such as arginine, histidine, leucine, isoleucine, valine, GABA, ornithine, and proteins are prominently produced, and a liquid composition rich in these beneficial components can be obtained.
次に、本願の液状組成物の生理活性について評価した。試験例３〜６では、各試験物質について独立した３回の実験／測定を行い、従来の液状組成物（＝暁酵素）について得られた値との有意性をＳｔｕｄｅｎｔ ｔ−ｔｅｓｔを用いて検定した。なお、危険率５％未満を有意性あり（図１〜６ではアスタリスクで表示）とした。
試験例３：血小板凝集抑制効果
前述したように、血小板凝集による血栓形成は、心筋梗塞や脳梗塞などの血栓症を発症させる直接的な要因である。そこで、本願の液状組成物の血小板凝集に対する効果について、以下の方法を用いて解析した。
Next, the physiological activity of the liquid composition of the present application was evaluated. In Test Examples 3 to 6, three independent experiments / measurements were performed for each test substance, and the significance of the value obtained for the conventional liquid composition (= enzyme enzyme) was tested using Student t-test. did. The risk rate of less than 5% was considered significant (indicated by an asterisk in FIGS. 1 to 6).
Test Example 3: Inhibition Effect on Platelet Aggregation As described above, thrombus formation due to platelet aggregation is a direct factor causing thrombosis such as myocardial infarction and cerebral infarction. Therefore, the effect of the liquid composition of the present application on platelet aggregation was analyzed using the following method.
＜試験方法＞
・ヒト多血小板血漿（ＰＲＰ）および乏血小板血漿（ＰＰＰ）の調整
ヒト血液を遠心（１１００ｒｐｍ、２０分間、室温）し、上清を多血小板血漿（Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｒｉｃｈ Ｐｌａｓｍａ、ＰＲＰと略記）として採取した。ＰＲＰの一部に対してさらに遠心（３０００ｒｐｍ、５分間、室温）を行い、当該上清を乏血小板血漿（Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｐｏｏｒ Ｐｌａｓｍａ、ＰＰＰと略記）として採取した。
・血小板凝集率の測定方法
前記方法で調整したＰＲＰ（各２２３μｌ）を３７℃で予備加温した後、下記試験物質を２μｌ添加し、さらに３７℃で３分間保温した。その後、ＡＤＰまたは血小板活性化因子（ＰＡＦ）を終濃度がそれぞれ１μＭ、５０ｎＭとなるように添加し、血小板凝集を惹起した。血小板が凝集するとＰＲＰの濁度が低下して透過率が上昇するため、アグリゴメーター（ＭＣＭヘマトレーサー ＭＣＭメディカル株式会社製）を用いて透過率を測定した。凝集物質添加前のＰＲＰの透過率を０％、ＰＰＰの透過率を１００％に設定して、凝集物質添加後のＰＲＰの透過率の最大値を最大凝集率（％）、すなわち、血小板凝集率（％）とした。
・試験物質
１）従来の液状組成物（＝暁酵素）
２）暁酵素にマンネンタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物（試験例１）
３）暁酵素にカワラタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物（試験例１）
４）暁酵素にシイタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物
５）暁酵素にブナシメジ子実体を添加し熟成させた液状組成物
・血小板凝集抑制効果の評価
前記試験物質の血小板凝集抑制効果は、当該試験物質を添加したＰＲＰにおいて得られた血小板凝集率を、試験物質非添加ＰＲＰにおいて得られた血小板凝集率（＝１００％とする）と比較することで評価した（図１）。
<Test method>
-Preparation of human platelet rich plasma (PRP) and platelet poor plasma (PPP) Human blood was centrifuged (1100 rpm, 20 minutes, room temperature), and the supernatant was collected as platelet rich plasma (Platelet Rich Plasma, abbreviated as PRP). A part of PRP was further centrifuged (3000 rpm, 5 minutes, room temperature), and the supernatant was collected as platelet poor plasma (abbreviated as Platelet Poor Plasma, PPP).
-Method for measuring platelet aggregation rate PRP (223 µl of each) prepared by the above method was pre-warmed at 37 ° C, then 2 µl of the following test substance was added, and further incubated at 37 ° C for 3 minutes. Thereafter, ADP or platelet activating factor (PAF) was added to a final concentration of 1 μM and 50 nM, respectively, to induce platelet aggregation. When platelets aggregate, the turbidity of PRP decreases and the transmittance increases. Therefore, the transmittance was measured using an aggregometer (manufactured by MCM Hematracer MCM Medical Co., Ltd.). The PRP transmittance before addition of the aggregating substance is set to 0% and the transmittance of PPP is set to 100%, and the maximum value of the PRP transmittance after the addition of the aggregating substance is set to the maximum aggregation rate (%), that is, the platelet aggregation rate (%).
Test substance 1) Conventional liquid composition (= 暁 enzyme)
2) Liquid composition obtained by adding mannentake fruiting body to koji enzyme and ripening (Test Example 1)
3) A liquid composition obtained by ripening and adding agaric fruiting body to koji enzyme (Test Example 1)
4) Liquid composition obtained by adding shiitake fruiting body to strawberry enzyme and aging 5) Liquid composition obtained by adding bunashimeji fruiting body to strawberry enzyme and aging Evaluation of platelet aggregation inhibitory effect of the test substance The platelet aggregation rate obtained in the PRP to which the test substance was added was evaluated by comparing it with the platelet aggregation rate obtained in the test substance-free PRP (= 100%) (FIG. 1).
＜結果＞
表４および図２より、本願の液状組成物は、従来の液状組成物よりも高い血小板凝集抑制効果を有することがわかる。特に、ＡＤＰによって惹起される血小板凝集に対しては、マンネンタケ子実体を用いて作製した液状組成物では９１．５％（従来の液状組成物よりも１８．９％増）、カワラタケ子実体を用いて作製した液状組成物では９６．２％（従来の液状組成物よりも２３．６％増）という非常に高い凝集抑制効果が得られており、血栓症に対する予防改善効果を大いに期待させる結果である。
マンネンタケ、カワラタケ子実体の抽出物には血小板凝集抑制効果があることが知られているが（特許文献２、３）、従来の液状組成物に対する本願液状組成物の当該効果の増加分は、これらの子実体の持ち込みによるものではない。なぜならば、マンネンタケ、カワラタケのような硬質菌の固い子実体から血小板凝集抑制効果を担う成分を抽出するにはミキサーを用いた粉砕（粉末化）が必須であり（特許文献２、３）、本願の細片化・浸漬ではほとんど抽出されず、濾液中には回収されないと考えられるからである。このことは、軟質菌（＝子実体中の成分が浸出しやすい）で且つ血小板凝集抑制効果を有するシイタケおよびブナシメジを用いて作製した液状組成物では、従来の液状組成物に対して血小板凝集抑制効果がほとんど増加しないことからも明らかである。
従って、本願の原液にマンネンタケまたはカワラタケの子実体を添加して熟成させることにより、血小板凝集抑制作用を有する物質が新たに生成されて、血小板凝集抑制効果が非常に高い液状組成物が得られることが明らかとなった。
From Table 4 and FIG. 2, it can be seen that the liquid composition of the present application has a higher platelet aggregation inhibitory effect than the conventional liquid composition. In particular, for platelet aggregation induced by ADP, the liquid composition prepared using Mannentake fruiting body was 91.5% (18.9% increase over the conventional liquid composition), and Kawaratake fruiting body was used. In the liquid composition prepared in this way, a very high aggregation suppressing effect of 96.2% (23.6% increase over the conventional liquid composition) was obtained. is there.
It is known that the extract of Mannentake and Kawaratake fruiting bodies has a platelet aggregation inhibitory effect (Patent Documents 2 and 3). However, the increase in the effect of the present liquid composition relative to the conventional liquid composition is It is not due to bringing in a child entity. This is because pulverization (pulverization) using a mixer is indispensable to extract components responsible for the platelet aggregation inhibitory effect from hard fruit bodies of hard fungi such as Mannentake and Kawaratake (Patent Documents 2 and 3). It is because it is considered that it is hardly extracted by the fragmentation / immersion of the material and is not recovered in the filtrate. This is because the liquid composition produced by using shiitake mushrooms and buna shimeji which are soft bacteria (= the components in the fruit body are liable to leach out) and have the effect of inhibiting platelet aggregation, inhibits platelet aggregation compared to conventional liquid compositions. It is clear from the fact that the effect hardly increases.
Therefore, by adding and maturating the fruit body of Mannentake or Kawaratake to the stock solution of the present application, a substance having a platelet aggregation inhibitory action is newly generated, and a liquid composition having a very high platelet aggregation inhibitory effect can be obtained. Became clear.
試験例４：ケモカイン遺伝子発現抑制効果
続いて、本願液状組成物のケモカイン遺伝子発現に及ぼす効果を解析した。
ケモカインは、白血球を自身の濃度勾配の方向に遊走させる活性を有するサイトカインの総称で、炎症の形成に重要な役割を果たしている。例えば、接触性皮膚炎やアトピー性皮膚炎などの炎症性皮膚疾患、潰瘍性大腸炎やクローン病などの炎症性腸疾患では、炎症部位で炎症性サイトカイン（腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ−α、ＴＮＦ‐αと略記）等）が産生され、インターロイキン−８（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−８、ＩＬ−８と略記）等のケモカインの発現が誘導されるために、好中球やＴ細胞などが炎症部位に浸潤・集積して組織破壊が引き起こされる。よって、ＩＬ−８等のケモカインの発現を抑制することは、これらの炎症性疾患の症状改善や予防に有効と考えられている。
ケモカインは構造上の特徴から４群に分類されており、ほとんどのメンバーはこのうちの２群（ＣＸＣケモカイン、ＣＣケモカイン）に属している。そこで、本願の液状組成物について、ＩＬ−８（ＣＸＣケモカイン）およびＲＡＮＴＥＳ（Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｏｎ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ Ａａｎｄ Ｓｅｃｒｅｔｅｄ、ＣＣケモカイン）のＴＮＦ−αによる発現誘導に及ぼす効果を解析した。
Test Example 4: Chemokine gene expression inhibitory effect Subsequently, the effect of the present liquid composition on chemokine gene expression was analyzed.
Chemokine is a general term for cytokines having an activity of causing leukocytes to migrate in the direction of their concentration gradient, and plays an important role in the formation of inflammation. For example, in inflammatory skin diseases such as contact dermatitis and atopic dermatitis, and inflammatory bowel diseases such as ulcerative colitis and Crohn's disease, inflammatory cytokines (Tumor Necrosis Factor-α, Tumor Necrosis Factor-α, Abbreviated as TNF-α) and the like, and the expression of chemokines such as interleukin-8 (abbreviated as Interleukin-8 and IL-8) is induced. Infiltrate and accumulate to cause tissue destruction. Therefore, suppressing the expression of chemokines such as IL-8 is considered effective for improving or preventing symptoms of these inflammatory diseases.
Chemokines are classified into 4 groups based on structural characteristics, and most members belong to 2 groups (CXC chemokine, CC chemokine). Therefore, the effect of IL-8 (CXC chemokine) and RANTES (Regulated on Activation Normal T Cell Expressed and Secluded, CC chemokine) on expression induction by TNF-α was analyzed.
＜試験方法＞
ヒト皮膚線維芽細胞（倉敷紡績株式会社より購入）を１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地（ダルベッコ変法イーグル培地）を用いてコンフルエントになるまで培養した（培地量１０ｍｌ／６ｃｍ培養皿）。下記試験物質を５０μｌ添加した後、ＴＮＦ‐α（終濃度１ｎｇ／ｍｌ）を添加して３７℃で６時間培養した。
その後、常法に従って細胞からＲＮＡ抽出・ｃＤＮＡ合成を行った。得られたｃＤＮＡを用いて定量的ＰＣＲ法（ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法）を行い、ＩＬ−８およびＲＡＮＴＥＳ遺伝子の発現量を解析した。当該遺伝子の発現量は、ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素）を内部標準遺伝子として発現量の補正を行った。
・試験物質
１）従来の液状組成物（＝暁酵素）
２）暁酵素にマンネンタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物（試験例１）
３）暁酵素にカワラタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物（試験例１）
４）暁酵素にシイタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物
５）暁酵素にブナシメジ子実体を添加し熟成させた液状組成物
６）ハイドロコルチゾン（＝陽性コントロール）、終濃度は１０−７Ｍ
<Test method>
Human skin fibroblasts (purchased from Kurashiki Boseki Co., Ltd.) were cultured until they became confluent using DMEM medium (Dulbecco's modified Eagle medium) containing 10% fetal bovine serum (medium amount: 10 ml / 6 cm culture dish). After adding 50 μl of the following test substance, TNF-α (final concentration 1 ng / ml) was added, and the mixture was cultured at 37 ° C. for 6 hours.
Thereafter, RNA extraction and cDNA synthesis were performed from the cells according to conventional methods. Quantitative PCR (TaqMan PCR) was performed using the obtained cDNA, and the expression levels of IL-8 and RANTES genes were analyzed. The expression level of the gene was corrected using GAPDH (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase) as an internal standard gene.
Test substance 1) Conventional liquid composition (= 暁 enzyme)
2) Liquid composition obtained by adding mannentake fruiting body to koji enzyme and ripening (Test Example 1)
3) A liquid composition obtained by ripening and adding agaric fruiting body to koji enzyme (Test Example 1)
4) Liquid composition obtained by adding shiitake fruiting body to strawberry enzyme and ripening 5) Liquid composition obtained by adding bunashimeji fruiting body to strawberry enzyme and aging 6) Hydrocortisone (= positive control), final concentration of 10 −7 M
＜結果＞
表５および図３に示されるように、試験物質を添加しなかった場合の発現量（＝ａ、すなわち、ＴＮＦ−αによって誘導された発現量）に対し、従来の液状組成物を添加した場合には、ＩＬ−８およびＲＡＮＴＥＳがそれぞれ７６．６％、４６．７％も発現していた。これに対し、マンネンタケ子実体またはカワラタケ子実体を用いた本願の液状組成物を添加した場合には、ＩＬ−８の発現量がそれぞれ５１．１％、４６．８％、ＲＡＮＴＥＳの発現量がそれぞれ３２．８％、３５．２％にまで低下していた。よって、本願の液状組成物は、従来の液状組成物よりも、ＴＮＦ−α等によるケモカイン遺伝子の発現誘導に対して高い抑制効果を有することが示された。また、本願の液状組成物は、ハイドロコルチゾン（＝臨床で用いられている強力な抗炎症剤だが副作用が強い）には及ばないものの、十分なケモカイン遺伝子発現抑制効果があることが明らかとなった。
なお、マンネンタケ、カワラタケ子実体の抽出物にはケモカイン遺伝子発現抑制効果があることが知られているが（特許文献２、３）、試験例３で説明したように、本願の液状組成物の製造工程において当該子実体からケモカイン遺伝子発現抑制効果を担う物質が十分量浸出するとは考えられない。よって、本願の原液にマンネンタケまたはカワラタケの子実体を添加して熟成させることにより、ケモカイン遺伝子の発現を抑制し得る物質が新たに生成されて、当該抑制効果に優れる液状組成物が得られることが示された。
<Result>
As shown in Table 5 and FIG. 3, when the conventional liquid composition is added to the expression level when the test substance is not added (= a, ie, the expression level induced by TNF-α) Expressed 76.6% and 46.7% of IL-8 and RANTES, respectively. On the other hand, when the liquid composition of the present application using Mannentake fruiting bodies or Kawaratake fruiting bodies was added, the expression levels of IL-8 were 51.1% and 46.8%, respectively, and the expression levels of RANTES were respectively It decreased to 32.8% and 35.2%. Therefore, it was shown that the liquid composition of the present application has a higher inhibitory effect on the induction of chemokine gene expression by TNF-α or the like than the conventional liquid composition. In addition, the liquid composition of the present application has been shown to have a sufficient chemokine gene expression suppression effect, although it does not reach hydrocortisone (= a powerful anti-inflammatory agent used in clinical practice but has strong side effects). .
In addition, although it is known that the extract of a bamboo shoot and a bamboo shoot fruit body has a chemokine gene expression inhibitory effect (patent documents 2, 3), as demonstrated in the test example 3, manufacture of the liquid composition of this application It is unlikely that a sufficient amount of the substance responsible for the chemokine gene expression suppression effect will leach out from the fruiting body in the process. Therefore, by adding and maturating the fruit body of Mannentake or Kawaratake to the stock solution of the present application, a substance capable of suppressing the expression of the chemokine gene is newly generated, and a liquid composition excellent in the suppression effect can be obtained. Indicated.
試験例５：アンジオテンシン変換酵素阻害効果
アンジオテンシン変換酵素（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ、ＡＣＥと略記）は、不活性体であるアンジオテンシンＩを、生理活性を有するアンジオテンシンIIに変換する反応を触媒する酵素（プロテアーゼ）である。アンジオテンシンIIには非常に強い血圧上昇活性があるため、ＡＣＥの阻害剤は高血圧症の治療薬として汎用されているが、種々の副作用が知られている。
そこで、本願の液状組成物について、ＡＣＥ活性に及ぼす効果を解析した。
Test Example 5: Angiotensin-converting enzyme inhibitory effect Angiotensin-converting enzyme (abbreviated as ACE) is an enzyme (protease) that catalyzes a reaction for converting angiotensin I, which is an inactive substance, into angiotensin II having physiological activity. It is. Since angiotensin II has a very strong blood pressure-increasing activity, inhibitors of ACE are widely used as therapeutic agents for hypertension, but various side effects are known.
Therefore, the effect of the liquid composition of the present application on the ACE activity was analyzed.
＜測定方法＞
定法（非特許文献４）に従い、ＡＣＥの合成基質である“馬尿酸‐ヒスチジン‐ロイシン”、ＡＣＥ、および下記試験物質の存在下で、当該合成基質から切り出される馬尿酸の量を測定することによりＡＣＥ活性を評価した。
・試験物質
１）従来の液状組成物（＝暁酵素）
２）暁酵素にマンネンタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物（試験例１）
３）暁酵素にカワラタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物（試験例１）
４）暁酵素にシイタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物
５）暁酵素にブナシメジ子実体を添加し熟成させた液状組成物
<Measurement method>
By measuring the amount of hippuric acid excised from the synthetic substrate in the presence of “hippuric acid-histidine-leucine”, which is a synthetic substrate of ACE, ACE, and the following test substance, according to a conventional method (Non-patent Document 4) ACE activity was evaluated.
Test substance 1) Conventional liquid composition (= 暁 enzyme)
2) Liquid composition obtained by adding mannentake fruiting body to koji enzyme and ripening (Test Example 1)
3) A liquid composition obtained by ripening and adding agaric fruiting body to koji enzyme (Test Example 1)
4) Liquid composition obtained by adding shiitake fruiting body to strawberry enzyme and ripening 5) Liquid composition obtained by adding bunashimeji fruiting body to strawberry enzyme and aging
＜結果＞
表６および図４より、本願の液状組成物は、従来の液状組成物よりも、ＡＣＥ阻害活性が非常に高いことがわかる。
なお、マンネンタケ子実体の抽出物にはＡＣＥ阻害活性があることが知られているが（特許文献２）、試験例３で説明したように、添加した子実体から当該活性物質が十分量浸出するとは考えられない。よって、本願の原液にマンネンタケまたはカワラタケの子実体を添加して熟成させることにより、ＡＣＥ活性を阻害し得る物質が新たに生成されて、当該阻害効果に優れる液状組成物が得られることが示された。
From Table 6 and FIG. 4, it can be seen that the liquid composition of the present application has a much higher ACE inhibitory activity than the conventional liquid composition.
In addition, although it is known that the extract of a Mannambo fruit fruit body has ACE inhibitory activity (patent document 2), when the said active substance leaches out sufficient amount from the added fruit body as demonstrated in Test Example 3 Is unthinkable. Therefore, it is shown that a substance capable of inhibiting the ACE activity is newly generated by adding and maturating the fruit body of Mannentake or Kawaratake to the stock solution of the present application, and a liquid composition excellent in the inhibitory effect can be obtained. It was.
試験例６：リパーゼ阻害効果
前述したように、食事由来の脂肪の体内吸収阻害を目的として、膵液中に含まれるリパーゼの阻害剤が肥満の治療薬として用いられている。しかしながら、このような治療薬には様々な副作用が知られており、副作用の少ないリパーゼ阻害剤を求める声が高まっている。
そこで、本願の液状組成物について、リパーゼ活性に及ぼす効果を解析した。
Test Example 6: Lipase inhibitory effect As described above, an inhibitor of lipase contained in pancreatic juice is used as a therapeutic agent for obesity for the purpose of inhibiting the absorption of fat derived from meals. However, various side effects are known for such therapeutic agents, and there is an increasing demand for lipase inhibitors with few side effects.
Therefore, the effect on the lipase activity was analyzed for the liquid composition of the present application.
＜試験方法＞
トリオレイン（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製）８０ｍｇ、レシチン（和光純薬工業株式会社製）１０ｍｇ、胆汁酸（ＳＩＧＭＡ社製）５ｍｇを９ｍｌの０．１Ｍ トリス緩衝液（ｐＨ７．０）に添加し、１０分間撹拌を行って均一の懸濁液（＝基質）を得た。当該懸濁液０．１ｍｌに２％リパーゼ溶液（和光純薬工業株式会社製）０．０５ｍｌと下記試験物質を０．１ｍｌ加え、３７℃で１０分間反応させた。反応後、ＮＥＦＡ Ｃ−テストワコー（和光純薬工業株式会社製）を用いて遊離脂肪酸量を測定し、試験物質非添加で得られた値（＝リパーゼ活性１００％）に対する相対値で表した。
・試験物質
１）従来の液状組成物（＝暁酵素）
２）暁酵素にマンネンタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物（試験例１）
３）暁酵素にカワラタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物（試験例１）
４）暁酵素にシイタケ子実体を添加し熟成させた液状組成物
５）暁酵素にブナシメジ子実体を添加し熟成させた液状組成物
<Test method>
Triolein (manufactured by MP Biomedicals) 80 mg, lecithin (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 10 mg, and bile acid (manufactured by SIGMA) 5 mg were added to 9 ml of 0.1 M Tris buffer (pH 7.0) for 10 minutes. Stirring was performed to obtain a uniform suspension (= substrate). To 0.1 ml of the suspension, 0.05 ml of a 2% lipase solution (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and 0.1 ml of the following test substance were added and reacted at 37 ° C. for 10 minutes. After the reaction, the amount of free fatty acid was measured using NEFA C-Test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), and expressed as a relative value to the value obtained by adding no test substance (= lipase activity 100%).
Test substance 1) Conventional liquid composition (= 暁 enzyme)
2) Liquid composition obtained by adding mannentake fruiting body to koji enzyme and ripening (Test Example 1)
3) A liquid composition obtained by ripening and adding agaric fruiting body to koji enzyme (Test Example 1)
4) Liquid composition obtained by adding shiitake fruiting body to strawberry enzyme and ripening 5) Liquid composition obtained by adding bunashimeji fruiting body to strawberry enzyme and aging
＜結果＞
図５より、本願の液状組成物は、従来の液状組成物よりも、リパーゼ活性を阻害する効果が非常に高いことがわかる。よって、本願の液状組成物を摂取することにより、肥満症に対する改善および／または予防効果が期待されることが明らかとなった。 FIG. 5 shows that the liquid composition of the present application has a much higher effect of inhibiting the lipase activity than the conventional liquid composition. Therefore, it has been clarified that by taking the liquid composition of the present application, an improvement and / or prevention effect against obesity is expected.
本発明にかかる製造方法により、副作用を生じる可能性が低く、且つ、血小板凝集抑制、ケモカイン遺伝子発現抑制、ＡＣＥ阻害、およびリパーゼ阻害効果に非常に優れる液状組成物を作製できることが明らかとなった。
前述したように、本発明に用いたマンネンタケおよび／またはカワラタケの子実体には血小板凝集抑制、ケモカイン遺伝子発現抑制、ＡＣＥ阻害活性があることが知られていたが（特許文献２、３）、子実体からの抽出物は苦味が非常に強く、当該効果が得られる量摂取するのは困難であった。これに対し、本発明の液状組成物は適度な甘みがあり風味に優れるので、十分量を長期に渡って摂取することが可能である。
よって、本願の液状組成物を継続摂取することにより、血栓症、炎症性疾患、高血圧症、および肥満症の予防改善効果が大いに期待される。
It has been clarified that the production method according to the present invention can produce a liquid composition that has a low possibility of causing side effects and is extremely excellent in platelet aggregation suppression, chemokine gene expression suppression, ACE inhibition, and lipase inhibition.
As described above, it has been known that the fruit bodies of Mannentake and / or Kawaratake used in the present invention have platelet aggregation suppression, chemokine gene expression suppression, and ACE inhibitory activity (Patent Documents 2 and 3). The extract from the entity has a very strong bitter taste, and it has been difficult to ingest it in such an amount that the effect is obtained. On the other hand, since the liquid composition of the present invention has a moderate sweetness and excellent flavor, a sufficient amount can be ingested over a long period of time.
Therefore, by continuously ingesting the liquid composition of the present application, the effect of preventing and improving thrombosis, inflammatory diseases, hypertension, and obesity is greatly expected.
Claims (6)
（Ａ）野菜、果物、海草、および／または穀物に寄託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１８５４０の酵母を添加する工程
（Ｂ）前記（Ａ）工程後、糖類を添加し、原液を抽出する工程
（Ｃ）前記（Ｂ）工程後、糖類を添加し、原液を発酵・熟成させる工程
（Ｄ）前記（Ｃ）工程後、濾過した濾液に、マンネンタケまたはカワラタケの乾燥子実体を、前記酵母発酵物１０００ｍｌに対し、乾燥重量にして４５〜５５ｇの割合で添加して、室温で５日間熟成させる工程。 The manufacturing method of the liquid composition characterized by including the following (A)-(D) process.
(A) Step of adding yeast of deposit number FERM P-18540 to vegetables, fruits, seaweed and / or cereals (B) Step (C) After step (A), adding saccharides and extracting stock solution (C) (B) After the step, sugar is added and the stock solution is fermented and matured (D) After the step (C), the dried fruit body of Mannentake or Kawaratake is added to the filtered filtrate , A step of adding 45 to 55 g in dry weight and aging at room temperature for 5 days.
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07155136A (en) * | 1993-12-03 | 1995-06-20 | Nippon Mektron Ltd | Preparation of fermented vegetable extract powder |
| JP2003040795A (en) * | 2001-07-26 | 2003-02-13 | Tadashi Goino | Antihyperlipidaemic composition and method for manufacturing the same |
| JP2003095962A (en) * | 2001-09-27 | 2003-04-03 | Akatsuki Koso Sangyo Kk | Liquid composition for amelioration and prophylaxis of disease and method for producing the same |
| JP2003104904A (en) * | 2001-09-28 | 2003-04-09 | Nonogawa Shoji Kk | Hypotensive agent |
| JP2004075640A (en) * | 2002-08-22 | 2004-03-11 | Fancl Corp | Agent for inhibiting differentiation of lipocyte |
| JP2004290050A (en) * | 2003-03-26 | 2004-10-21 | Akatsuki Koso Sangyo Kk | Sweetener and method for producing the same |
| WO2007013588A1 (en) * | 2005-07-28 | 2007-02-01 | Nikken Sohonsha Corporation | Strain of turkey tail mushroom, extract from the same, and use of the same |
-
2013
- 2013-02-20 JP JP2013030555A patent/JP5518223B1/en active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07155136A (en) * | 1993-12-03 | 1995-06-20 | Nippon Mektron Ltd | Preparation of fermented vegetable extract powder |
| JP2003040795A (en) * | 2001-07-26 | 2003-02-13 | Tadashi Goino | Antihyperlipidaemic composition and method for manufacturing the same |
| JP2003095962A (en) * | 2001-09-27 | 2003-04-03 | Akatsuki Koso Sangyo Kk | Liquid composition for amelioration and prophylaxis of disease and method for producing the same |
| JP2003104904A (en) * | 2001-09-28 | 2003-04-09 | Nonogawa Shoji Kk | Hypotensive agent |
| JP2004075640A (en) * | 2002-08-22 | 2004-03-11 | Fancl Corp | Agent for inhibiting differentiation of lipocyte |
| JP2004290050A (en) * | 2003-03-26 | 2004-10-21 | Akatsuki Koso Sangyo Kk | Sweetener and method for producing the same |
| WO2007013588A1 (en) * | 2005-07-28 | 2007-02-01 | Nikken Sohonsha Corporation | Strain of turkey tail mushroom, extract from the same, and use of the same |
Also Published As
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