JP5507244B2 - 細胞培養容器及び細胞培養方法 - Google Patents
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Description
11 マイクロ容器
12 側壁
121 第1の側壁
122 第2の側壁
13 開口部
実施の形態に係る細胞培養容器の構成について図1、2を用いて説明する。図1は、本実施の形態に係る細胞培養容器の構成を示す平面図であり、図2は図1のII−II断面図である。図1に示すように、細胞培養容器10はマイクロ容器11、側壁12、開口部13を備える。細胞培養容器10の培養面には、複数の側壁12が網目状に形成されており、この側壁12に四方を囲われた空間がマイクロ容器11となる。また、矩形状の各マイクロ容器11の四辺に形成された側壁12の各辺の中央部に、開口部13が形成されている。
培養に用いる初代ラット肝細胞は以下のように調製した。6週齢のウィスター系ラットの門脈にサーフロー留置針を挿入し、EDTA含有溶液を流して脱血液を行った後、コラゲナーゼ溶液を灌流した。その後、コラゲナーゼ溶液で処理された肝臓を培養液へ入れ、メスピペットによるピペッティングで細胞を分散させた。細胞懸濁液を3回洗浄し、細胞以外の細胞を除去し、単離した細胞を培養に用いた。
培養に用いる培養液は以下のように調製した。
DMEM/F12培地に10% ウシ胎児血清、1μg/ml インシュリン、1×10−7M デキサメタゾン、10mM ニコチンアミド、2mM L−グルタミン、50μm β−メルカプトエタノール、5mM HEPES、59μg/ml ペニシリン、100μg/ml ストレプトマイシン、25ng/ml HGF、20ng/ml EGFを添加した。
凹凸パターン基材上に、1.0×105細胞/cm2の濃度で肝細胞を播種し、5%CO2、37℃で所定時間培養した。また、同組成の新鮮培地0.5mLを用い、1日から2日毎に培地交換を行った。
図3に示す凹凸パターン形状であって、a=100um、b=10um、c=50umのパターンをフォトリソグラフィにより作製し、Ni電解メッキを行い、対応する凹凸形状を有する金型を得た。その金型を用い、ホットエンボス成形によりポリスチレン上にパターン転写を行い、前記寸法の樹脂基材を作製した。その樹脂基材表面へ真空蒸着により二酸化ケイ素膜を100nm形成させ、γ線滅菌を行い、凹凸パターン基材を得た。その凹凸基材上で肝細胞を培養した。
図3に示す凹凸パターン形状であって、a=100um、b=20um、c=50umのパターンをフォトリソグラフィにより作製し、Ni電解メッキを行い、対応する凹凸形状を有する金型を得た。その金型を用い、ホットエンボス成形によりポリスチレン上にパターン転写を行い、前記寸法の樹脂基材を作製した。その樹脂基材表面へ真空蒸着により二酸化ケイ素膜を100nm形成させ、γ線滅菌を行い、凹凸パターン基材を得た。その凹凸基材上で肝細胞を培養した。
図11、12に示す凹凸パターン形状であって、a=80um、b=15um、c=50umのパターンをフォトリソグラフィにより作製し、Ni電解メッキを行い、対応する凹凸形状を有する金型を得た。その金型を用い、ホットエンボス成形によりポリスチレン上にパターン転写を行い、前記寸法の樹脂基材を作製した。その樹脂基材表面へ真空蒸着により二酸化ケイ素膜を100nm形成させ、γ線滅菌を行い、凹凸パターン基材を得た。その凹凸基材上で肝細胞を培養した。
Claims (13)
- 表面に複数のマイクロ容器を有する細胞培養容器であって、
隣接する前記マイクロ容器同士を区画する凸部が形成されており、
細胞が前記マイクロ容器に播種されたときに前記凸部の上面に前記細胞が接着しないように、前記凸部の上面の短辺幅が0.5〜15μmであって、前記凸部の高さが前記短辺幅の3倍より大きく、
前記凸部の高さが30〜300μmであることを特徴とする細胞培養容器。 - 前記凸部は多段階構造であり、各段階の上面に細胞が接着しないようにしたことを特徴とする請求項1に記載の細胞培養容器。
- 前記細胞が肝細胞であることを特徴とする請求項1又は2に記載の細胞培養容器。
- 前記マイクロ容器の底面を基準面とした前記凸部の高さ方向の上部50%以上において、前記底面と前記凸部各側面のなす角度が80°〜90°であることを特徴とする請求項1〜3いずれか一項に記載の細胞培養容器。
- 前記マイクロ容器の底面面積が6.25×10−4mm2〜0.563mm2であることを特徴とする請求項1〜4いずれか一項に記載の細胞培養容器。
- 前記マイクロ容器の底面の長径が短径の1〜1.5倍であることを特徴とする請求項1〜5いずれか一項に記載の細胞培養容器。
- 前記マイクロ容器の底面の長径が短径の1.5〜50倍であり、細胞の遊走性を評価することを特徴とする請求項1〜5いずれか一項に記載の細胞培養容器。
- 前記マイクロ容器が隣接するマイクロ容器の少なくとも1つと連通していることを特徴とする請求項1〜7いずれか一項に記載の細胞培養容器。
- 前記マイクロ容器が隣接するマイクロ容器の少なくとも1つと連通するための開口部の幅が1〜25μmであることを特徴とする請求項8に記載の細胞培養容器。
- 前記マイクロ容器が設けられた領域に表面処理が行われていることを特徴とする請求項1〜9いずれか一項に記載の細胞培養容器。
- 前記表面処理により形成される積層膜が2層以上であり、すくなくとも1層が無機膜であり、少なくとも1層が有機膜であることを特徴とする請求項10に記載の細胞培養容器。
- 前記マイクロ容器が設けられた領域が透明であることを特徴とする請求項1〜11いずれか一項に記載の細胞培養容器。
- 請求項1〜12のいずれか一項に記載の細胞培養容器に設けられた前記マイクロ容器に細胞を注入して、前記細胞を培養する細胞培養方法。
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